RS58971B1 - Kompozicija za okularno zdravlje - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak predlaže nutraceutičnu oftalmičku kompoziciju posebno za poboljšanje zdravlja očiju i prevenciju očnih bolesti. Takva kompozicija sadrži vitamine, mikroelemente, karotenoide, omega-3 masne kiseline i resveratrol u količini već oj od 20 mg.

[0002] Iznenađujuć e, ova aplikacija pokazuje bolju efikasnost i sinergistiki efekat resveratrola u takvoj asocijaciji, kako u lečenju patoloških ć elija retine, tako i u održavanju i poboljšanju zdravlja zdravih ć elija.

STANJE TEHNIKE

[0003] Makularna degeneracija povezana sa starenjem (AMD) je primarni uzrok ošteć enja vida kod osoba starijih od 50 godina. Kada se svi oblici spoje, ova bolest pogađa oko 8% populacije francuske, ali se učestalost znatno poveć ava sa staroš ć u: poga đa 1% ljudi od 50 do 55 godina, oko 10% od 65 do 75 godina i 25% do 30% preko 75 godina. Ako se uzmu u obzir samo kasni oblici bolesti, povezani sa gubitkom centralnog vida, ove brojke se dele na oko dva. Ali u narednim godinama, iako je produžen životni vek, učestalost AMD-a neć e prestati da raste.

[0004] Ova patologija selektivno pogađa makularni region, tj. centralni deo retine, uzrokujuć i progresivni gubitak centralnog vida koji je vidno polje koje se koristi za čitanje, prepoznavanje lica ili vožnju. To je primarni uzrok ošteć enja vida kod starijih osoba.

[0005] Bolest počinje u ranoj fazi, bez degeneracije, koja se naziva makulopatija povezana sa starenjem (ARM ili "suva rana"). Ovu fazu karakteriše akumulacija malih beličastih naslaga (ili “mekih drusena”) unutar i oko makule. Ove naslage su vidljive tokom jednostavnog pregleda oka. Ova faza je najčešć e asimptomatska, ali pacijent može da opazi deformacije ravnih linija ("metamorfopsija") i mutne tačke.

[0006] Zaista, nakon pregleda očnog dna, oftalmolog primeti bele tačke (drusen) ili nepravilnosti najdubljeg sloja mrežnjače, karakteristične znake AMD-a kod nekoga ko je stariji od 50 godina. Kada je pregled očnog dna izveden u naprednijoj fazi, postoje dokazi o evoluiranim lezijama, kao što su promene pigmentnog epitela, krvarenja ili taloženja tečnosti, koje se nazivaju i eksudati.

[0007] U naprednijim fazama pojavljuju se simptomi koji variraju u zavisnosti od ozbiljnosti bolesti:

•Gubitak oštrine vida, sa potrebom za boljim osvetljenjem za čitanje ili za bilo koji precizan rad;

•Centralna vizija je sve više i više mutna, promena percepcije boja, distorzija ravnih linija, koje izgledaju deformisano i talasasto;

•Pojava tamne tačke u centru vidnog polja koja se zove skotom, teškoć e u prepoznavanju lica, vizuelne halucinacije ili nagli gubitak vidne oštrine;

•Ozbiljan uticaj na drugo oko se veoma razlikuje od osobe do osobe: može se dogoditi brzo, u roku od godinu dana, u roku od 10 godina, ili nikada. Ako je eksudativni AMD prisutan na jednom oku, postoji rizik da se razvije u drugom oku.

[0008] ARM može ostati stabilan do kraja života. Međutim, u oko polovini slučajeva, i pod uticajem različitih faktora, ARM se razvija u kasne degenerativne oblike:

- Atrofična forma, koja je suva forma, takođe nazvana atrofična forma, pri čemu makula atrofira tokom starenja i progresivno se zamenjuje tkivom ožiljaka; ili

- Mokra forma, koja je eksudativna forma u kojoj se ispod makule razvijaju mali sudovi ispunjeni krvlju. Lako krvare, pa su ovi novi krvni sudovi odgovorni za eksudate i krvarenja očnog dna.

[0009] Ova dva kasna oblika imaju manje-više jednaku učestalost. Oni dovode do nepovratnog pogoršanja makule i do gubitka centralnog vida koji pogađa jedno ili oba oka. Mogu se primetiti mešoviti oblici.

[0010] Vlažni oblik AMD-a, nazvan neovaskularni ili eksudativni, kao i dijabetička retinopatija, makularni edem, okluzija venske retine ili akutna mijopija, dovodi do proliferacije neuobičajenih novih krvnih sudova ispod mrežnjače. Ovi krhki sudovi omoguć avaju difuziju seruma, koja je odgovorna za podizanje retine i/ili krv koja uzrokuje pojavu retinalnih krvarenja. Ovaj oblik se brzo razvija ako se ne brine o njemu, sa gubitkom vida u roku od nekoliko nedelja ili čak nekoliko dana. Ovaj proces se može usporiti lekovima tipa anti-VEGF.

[0011] Tako se od 2006. godine vlažni oblik AMD tretira sa VEGF inhibitorima. Progresivno se ovim tretmanima tretiraju i druge neovaskularne patologije (makularni edem, okluzija venske retine ili akutna mijopija). VEGF je faktor rasta koji omoguć ava formiranje novih krvnih sudova. Njihova blokada ponovljenim ubrizgavanjem anti-VEGF, direktno u oko intravitrijalnom administracijom u proseku od sedam injekcija godišnje, omoguć ava da se zaustavi napredovanje bolesti. Trenutno postoje tri inhibitora VEGF:

-pegaptanib od 2006, smatra se da ima mali efekat;

-ranibizumab od 2007, sa oko 30% koji nereaguju ili više nereaguju na tretman; i

-aflibercept od 2012.

[0012] Ovi anti-VEGF su u velikoj meri zamenili dosadašnje tehnike koje su imale za cilj uništenje novih krvnih sudova, naročito fotokoagulacija (termalno uništavanje abnormalnih sudova) i fotodinamika. Ova potonja tehnika, koja datira iz ranih 2000-ih, se sastoji od intravenske injekcije fotoosetljivog proizvoda (verteporfin) koji postaje toksičan pod dejstvom crvenog svetla koje se primenjuje lokalno pomoć u lasera.

[0013]Pre ovih ozbiljnih farmaceutskih tretmana, koji su se odvijali u uznapredovalim fazama patologije, izvođena su istraživanja u pokušaju da se pronađu raniji i "lakši" pristupi, u cilju sprečavanja napredovanja bolesti.

[0014] Tako su sprovedene studije zvane AREDS 1 i 2 (Studija bolesti oka povezane sa starenjem) kako bi se pokazao koristan efekat dodataka ishrani na bolesti oka.

[0015] Ove studije su otkrile da antioksidantski dodaci hrani potencijalno mogu da spreče razvoj očnih bolesti, posebno onih koje su povezane sa starenjem, a posebno AMD.

[0016] U praksi, AREDS 1 studija preporučuje administriranje antioksidanata dnevno u obliku mikroelemenata i vitamina, kao što sledi:

[0017] Štaviše, AREDS 2 studija je preporučila uklanjanje vitamina A i prijavila korist od svakodnevnog uzimanja karotenoidskih suplemenata (makularnih pigmenata) i omega-3 masnih kiselina, kao što sledi:

[0018] Na osnovu rezultata AREDS studija, stoga se preporučuje da ljudi sa visokim rizikom za razvoj AMD-a svakodnevno uzimaju dodatke ishrani, posebno kod pacijenata koji imaju ARM u jednom ili oba oka, kao i kod pacijenata sa naprednim AMD-om koji još uvek uključuje samo jedno oko.

[0019] Članak «Uticaj dugolančanih ω-3 masnih kiselina i lutein zeaksantin suplemenata na kardiovaskularne ishode» iz istraživačke grupe AREDS 2 (JAMA Intern Med. 2014; 174(5):763-771) opisuje odsustvo efekata ovog tipa dodatka ishrani na kardiovaskularne patologije, kada se administriraju pacijentima sa AMD. U svakom slučaju, ova studija ni na koji način ne opisuje efekat administriranih suplemenata na AMD ili na zdravlje očiju uopšte.

[0020] Postoji očigledna potreba da se razviju rešenja za obezbeđivanje bolje nege, naročito AMD-a, kako u pogledu prevencije, tako i kod tretmana.

OPIS PRONALASKA

[0021] U skladu sa prvim aspektom, predmetni pronalazak traži nutraceutičnu oftalmičku kompoziciju koja sadrži:

-vitamine;

-mikroelemente;

-karotenoide;

-omega-3 masne kiseline; i

-resveratrol u količini već oj od 20 mg.

[0022] U kontekstu pronalaska, ono što se naziva «nutraceutična kompozicija» je kompozicija čija je svrha da dopuni normalni režim ishrane i da predstavlja koncentrovani izvor hranljivih materija ili drugih supstanci koje imaju nutritivni ili fiziološki efekat, sami ili u kombinaciji. Pogodno je da uključuje dodatak ishrani.

[0023] U kontekstu pronalaska, ono što se naziva «oftalmička kompozicija» je kompozicija koja ima korisna svojstva za zdravlje očiju. Međutim, to ne isključuje moguć nost da takva kompozicija blagotvorno deluje na druge organe kod ljudi ili životinja.

[0024] U predmetnoj prijavi, pokazano je da kombinacija različitih navedenih jedinjenja ima povoljno dejstvo u modulaciji nivoa ekspresije (kvantitativne modifikacije) kao i fosforilacije/aktivnosti (kvalitativne modifikacije) receptora za «faktor rasta vaskularnog endotela VEGF», u daljem tekstu označen kao VEGFR.

[0025] Prema prvoj varijanti, kompozicija prema pronalasku se sastoji od gore navedenih sastojaka.

[0026] Pogodno je da su vitamini, mikroelementi, omega-3 masne kiseline i sastojci karotenoida, poznati po svojim antioksidativnim osobinama, odabrani prema preporukama AREDS studija.

[0027] Prema posebnoj realizaciji, kompozicija prema pronalasku sadrži najmanje jedan vitamin, pogodno kombinaciju vitamina. Pogodno je da uključuje vitamin C i/ili vitamin E.

[0028] Može da uključi i sledeć e vitamine:

-nikotinamid ili niacinamid ili vitamin B3 ili PP;

-piridoksin, na primer u obliku piridoksina HCl, ili vitamina B6;

-riboflavin ili vitamin B2;

-tiamin, na primer u obliku tiamin nitrata, ili vitamin B1;

-cijanokobalamin ili vitamin B12;

-folna kiselina ili vitamin B9;

-vitamin B5;

-vitamin B8;

-vitamin D.

[0029] Vitamin C, dostupan u formi askorbinske kiseline ili kalcijum askorbata, pognodno je dostupan u količini (dnevna doza) između 50 i 500 mg, na primer jednako 240 mg ili 120 mg.

[0030] Vitamini E ili alfa-tokoferol, dostupni u naftnoj formi, na primer, od 67%, pogodno su dostupni u količini (dnevnoj dozi) između 10 i 500 mg, na primer jednako 30 mg.

[0031] Prema sledeć oj realizaciji, slede ć e dnevne količine izražene u miligramima se mogu predvideti za sledeć e vitamine:

-vitamin B3 ili PP: 1 do 100, na primer 18;

-vitamin B6; 1 do 10, na primer 2;

-vitamin B2; 1 do 10, na primer 1.6;

-vitamin B1; 1 do 10, na primer 1.4;

-vitamin B12; 0.0005 do 0.01, na primer 0.001;

-vitamin B9; 0.1 do 1, na primer 0.2.

[0032] Prema posebnoj realizaciji, kompozicija prema pronalasku ne sadrži vitamin A ili beta-karoten.

[0033] Prema posebnoj realizaciji, kompozicija prema pronalasku sadrži najmanje jedan mikroelement, pogodno kombinaciju mikroelemenata. Poželjno je da sadrži cink (Zn) i/ili bakar (Cu). Takođe može da uključi sledeć e mikroelemente:

-mangan, na primer anhidrovani manganov sulfat;

-selen, na primer natrijum selenit;

-magnezijum, na primer magnezijum oksid.

[0034] Cink (Zn), dostupan u obliku cinkovog oksida ili cinkovog sulfata (monohidrata), poželjno je prisutan u količini (dnevna doza) između 5 i 100 mg, na primer jednak 12,5 mg.

[0035] Bakar (Cu), dostupan u obliku bakar sulfata, monohidrata ili bezvodnog, poželjno se nalazi u količini (dnevna doza) između 0,2 i 10 mg, na primer jednak 1 mg.

[0036] Prema još jednoj realizaciji, sledeć e dnevne količine izražene u miligramima se mogu predvideti za sledeć e mikroelemente:

-mangan: između 1 i 10 mg, na primer 1 mg;

-selen: između 0.01 i 0.1 mg, na primer 0.025 mg;

-magnezium: između 1 i 50 mg, na primer 10 mg.

[0037] Prema određenom izvođenju, kompozicija prema pronalasku sadrži najmanje jedan karotenoid, poželjno kombinaciju karotenoida. Ona pogodno uključuje lutein i/ili zeaksantin. Može takođe da uključi sledeć e karotenoide:

-mezo-zeaksantin;

-likopen;

-astaksantin.

[0038] Lutein, dostupan u obliku od 20% masenog udela luteina, pogodno je prisutan u količini (dnevna doza) između 2 i 50 mg, od na primer 10 mg.

[0039] Zeaksantin, dostupan u obliku od 5% ili 14% masenog udela zeaksantina, pogodno je prisutan u količini (dnevna doza) između 0.5 i 10 mg, na primer jednak 2 mg.

[0040] Prema određenom izvođenju, kompozicija prema pronalasku sadrži najmanje jednu polinezasić enu masnu kiselinu omega-3 tipa, pogodno kombinaciju omega-3 masnih kiselina. Pogodno je da uključuje eikozapentaensku kiselinu (EPA) i/ili dokozaheksaensku kiselinu (DHA). Može takođe da uključuje sledeć e omega-3 masne kiseline:

-alfa linolenska kiselina (ALA);

-dokozapentaenska kiselina (DPA).

[0041] Omega-3 masne kiseline koje se koriste u okviru kompozicije prema pronalasku mogu biti u obliku ribljeg ulja, na primer riblje ulje od 70% po masi omega-3 masnih kiselina, ili biljnih ulja, na primer lan. Ove masne kiseline su poželjno prisutne u količini (dnevnoj dozi) između 500 i 1000 mg, na primer jednako 665 mg, što predstavlja 950 mg ribljeg ulja. Opštije, riblje ulje može biti prisutno u dnevnoj količini između 500 i 1000 mg.

[0042] U ovom kontekstu, EPA je pogodno prisutna u količini (dnevna doza) između 100 i 1000 mg, na primer jednaka je 380 mg ili 172 mg.

[0043] U ovom kontekstu, DHA je poželjno prisutna u količini (dnevna doza) između 100 i 1000 mg, na primer jednaka je 190 mg ili 366 mg.

[0044] U ovom kontekstu, DPA je pogodno prisutna u količini (dnevnoj dozi) manjoj od 100 mg, čak 50 mg.

[0045] Karakteristično, kompozicija prema pronalasku dalje sadrži resveratrol u količini već oj od 20 mg.

[0046] Naravno, resveratrol je opisan u članku Nagineni et al. (Aging and Disease, 2014; 5 (2): 88-100) kao inhibiranje in vitro prekomerne ekspresije VEGF indukovane citokinima u humanim retinalnim pigmentnim epitelnim ć elijama (HRPE ć elije). Međutim, nije opisan efekat na receptore VEGF faktora rasta (VEGFR). Iako se u članku aludira na potencijalni nutritivni interes ovog jedinjenja u odnosu na AMD, ni na koji način se ne uči da se sinergistički efekat na ekspresiju VEGFR može dobiti kada se resveratrol kombinuje sa drugim jedinjenjima.

[0047] Resveratrol je polifenolno jedinjenje, izvedeno iz stilbena, formule:

[0048] Postoje dva izomera, ali trans oblik je pretežno aktivan. U opisu koji sledi, termin «resveratrol» se stoga može koristiti i umesto trans-resveratrola.

[0048] Resveratrol je polifenol koji se nalazi u obilnim količinama u određenim plodovima, posebno u grožđu i uljima semena, i u vinu. Trenutno postoje različiti komercijalni izvori resveratrola koji se mogu koristiti za dobijanje jedinjenja prema pronalasku:

-Vitis vinifera:

○Koža grožđa

○Seme grožđa

-Polygonum Cuspidatum

-Proizvod fermentacijom

[0050] Preferirani izvori su naročito:

-Resveratrol 5% izvor Vitis vinifera, koža grožđa (PHARMANAGER INGREDIENT);

-Resveratrol 98% izvor Vitis vinifera, koža grožđa (CAMBRIDGE COMMODITIES; CAS broj: 501-36-0).

[0051] Resveratrol je prisutan u količini (dnevnoj dozi) već oj od 20 mg ili čak ve ć oj od 30 mg, 50 mg, 60 mg i čak 100 mg ili 200 mg. Prema određenom izvođenju, dnevna količina je jednaka ili već a od 30 mg ili čak ve ć a od 30 mg,

čak jednaka ili već a od 50 mg, čak jednaka ili ve ć a od 60 mg, čak jednaka ili ve ć a od 100 mg. Pogodno je da je manja ili jednaka 1 g, poželjno manja ili jednaka 500 mg, i na naročito poželjan način, manja ili jednaka 200 mg. Prema posebnom izvođenju, kompozicija prema pronalasku sadrži dnevnu dozu resveratrola jednaku 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 150 mg ili 200 mg.

[0052] Prema saznanjima podnosioca zahteva, već je preporučeno da se koristi resveratrol u kompozicijama, uključujuć i i za oftalmolo ške svrhe, zbog njihovih prethodno opisanih svojstava: antioksidans, anti-apoptotski, anti-tumorigeni, anti-inflamatorni, anti-angiogeni i vazo-relaksant.

[0053] Tako, prijava US 2005/0163873 predlaže tretiranje neurodegenerativne komponente glaukoma preparatima koji imaju zaštitno dejstvo u odnosu na ošteć enje nervnih ć elija. Ovaj dokument uspostavlja listu jedinjenja koja se mogu koristiti u ovom kontekstu, od kojih je jedan resveratrol. Neuroprotektivne kompozicije mogu da sadrže resveratrol u kombinaciji sa raznim drugim jedinjenjima. Dnevna doza resveratrola koja se može primeniti nije eksplicitno naznačena.

[0054] Međutim, ova prijava pruža dokaze o sledeć im novim efektima:

-blagotvoran ili barem ne-štetan efekat na zdrave ć elije;

-Anti-VEGF aktivnost, i kvantitativna i kvalitativna, kod obolelih ć elija, pojačana u prisustvu drugih sastojaka kompozicije prema pronalasku, naročito u kontekstu AREDS formulacije.

[0055] Prema još jednom izvođenju, kompozicija prema pronalasku može da sadrži druge aktivne sastojke kao što su:

-jedan ili više polifenola, kao što je epigalokatehin-3-galat (EGCG);

-glutation, u količini od 1 do 10 mg dnevno, čak 2 mg dnevno;

-jedan ili više antocijanozida;

-hidroksitirosol.

[0056] Sadržaj svakog od ovih sastojaka se lako određuje i podešava od strane stručnjaka iz oblasti.

[0057] Prema tome, i prema jednoj varijanti, kompozicija sadrži ili je sastavljena od sledeć ih sastojaka:

-vitamin C;

-vitamin E;

-cink;

-bakar;

-lutein;

-zeaksantin;

-omega-3 masne kiseline iz ribljeg ulja, posebno EPA i DHA;

-resveratrol u količini većoj od 20 mg.

[0058] Prema drugoj varijanti, kompozicija sadrži ili je sastavljena od sledeć ih sastojaka, na osnovu dnevne doze:

-50 mg do 500 mg vitamina C, poželjno 240 mg, i naročito poželjno 120 mg;

-10 mg do 500 mg vitamina E, poželjno 30 mg;

-5 mg do 100 mg cinka, poželjno 12,5 mg;

-0.2 mg do 10 mg bakra, poželjno 1 mg;

-2 mg do 50 mg luteina, poželjno 10 mg;

-0.5 mg do 10 mg zeaksantina, poželjno 2 mg;

-100 mg do 1000 mg EPA, poželjno 380 mg, posebno poželjno 172 mg;

-100 mg do 1000 mg DHA, poželjno 190 mg, naročito poželjno 366 mg;

-resveratrol u količini već oj od 20 mg, po željno više od 30 mg, naročito poželjno više od 50 mg, veoma poželjno u količini koja je jednaka ili već a od 60 mg.

[0059] Prema poželjnom izvođenju, kompozicija pronalaska sadrži ili je sastavljena od sledeć ih sastojaka, zasnovanih na dnevnoj dozi:

-120 mg vitamina C;

-30 mg vitamina E;

-12.5 mg cinka;

-1 mg bakra;

-10 mg luteina;

-2 mg zeaksantina;

-172 mg EPA;

-366 mg DHA;

-resveratrol, poželjno u količini od 50 mg, veoma poželjno u količini koja je jednaka ili veća od 60 mg.

[0060] Prema poželjnoj realizaciji, navedena kompozicija je formulisana u 2 kapsule, od kojih svaka sadrži gore navedene sastojke, ali u jednoj polovini količine.

[0061] Prema prvoj alternativi, svi navedeni sastojci su pomešani i administrirani u jednoj kompoziciji. Alternativno, navedeni sastojci se mogu kombinovati na različite načine kako bi se formulisali i/ili administrirali simultano ili raspoređivali tokom vremena.

[0062] Prema određenom izvođenju, kompoziciji prema pronalasku nedostaje bar jedan od sastojaka sa sledeć e liste:

-šafran;

-agens za helaciju metala, kao što je EDTA ili fitička kiselina;

-nukleotid;

-piknogenol;

-ginkgo biloba ekstrakt.

[0063] Prema ovom izvođenju, korišćena kompozicija ne kombinuje resveratrol sa šafranom, ili resveratrol sa agensom za helaciju metala i jednim ili više nukleotida, ili resveratrol i piknogenol i/ili ekstrakt ginkgo bilobe.

[0064] Dokument GP 2483121 opisuje kompozicije koje sistematski obuhvataju kombinaciju resveratrola i šafrana, i uči da ova dva jedinjenja imaju povoljan sinergistički efekat na napredovanje patologija povezanih sa starenjem, posebno AMD. U ovom dokumentu, šafran je označen kao poznat, u izolaciji, zbog uticaja na AMD. Što se tiče resveratrola, on je predstavljen kao opšte sredstvo protiv starenja, koje potiče od njegovih antioksidativnih i antiinflamatornih svojstava.

[0065] U skladu sa određenim aspektom, pronalazak se odnosi na nutraceutičnu oftalmičku kompoziciju koja sadrži:

-vitamine;

-mikroelemente;

-karotenoide;

-omega-3 masne kiseline; i

-resveratrol u količini većoj od 20 mg;

pomenuta kompozicija ne sadrži šafran, i upotreba takve kompozicije kao dodatak ishrani u oftalmologiji.

[0066] Kompozicija prema pronalasku je pogodno namenjena za oralnu administraciju.

[0067] Može biti u obliku tečnosti, rastvora, suspenzije, paste ili gela.

[0068] Pogodno je da je u čvrstom obliku, kao što je prah, tablete koje uključuju šumeć e tablete, kapsule, gel kapice, tablete ili pilule, pripremljene konvencionalno uz pomo ć prihvatljivih aditiva kao što su vezivna sredstva, punila, lubrikanti, agensi za razbijanje ili agensi za vlaženje. Tablete mogu opciono biti «obložene» na način koji je stručnjaku poznat, sa šeć erima, filmovima ili enteričkim prevlakama.

[0069] Alternativno, mogu se koristiti drugi sistemi za isporuku, kao što su preparati u mekim želatinskim ili želatinoznim kapsulama ili formulacije pripremljene na osnovu nanotehnologija, kao što su nano-disperzije, nano-emulzije ili nano-enkapsulacije.

[0070] Štaviše, kompozicija prema pronalasku može da sadrži jedan ili više aditiva kao što su boje, pigmenti, mirisi itd.

[0071] U skladu sa jednom posebnom realizacijom, kompozicija je u obliku kapsula, definišuć i zadatu zapreminu u kojoj je kompozicija sadržana. Kapsula se razgrađuje u digestivnom sistemu kako bi se oslobodili aktivni sastojci i omoguć ila njihova asimilacija od strane tela.

[0072] Na način koji je stručnjaku poznat, distribucija u ovoj vrsti ambalaže zahteva kompromis između:

-ograničen broj doza, kako bi se osigurala dobra usklađenost sa tretmanom;

-volumen prilagođen dozama, omoguć avaju ć i formulaciju svih sastojaka i lako gutanje.

[0073] U ovom slučaju, kompozicija prema pronalasku je poželjno u obliku jedne ili više kapsula, poželjno 2 kapsule. Prema tome, navedene kapsule se mogu uzimati sa malo vode pre ili tokom glavnog obroka. Poželjno, kompozicija prema pronalasku se primenjuje dnevno, na primer jednom dnevno.

[0074] U ovom kontekstu, konvencionalni aditivi su:

-glicerol, na primer glicerol monostearat; i/ili

-sojino ulje; i/ili

-pčelinji vosak; i/ili

-sojin lecitin.

Odgovarajuć e, pomenuti aditivi se dodaju kompoziciji prema pronalasku ukoliko su sposobni da poboljšaju, na primer, svojstva protoka ili homogenizacije.

[0075] Štaviše, i na način koji je poznat stručnjaku, opna kapsula može biti pripremljena iz sledeć ih sastojaka:

-želatina; i/ili

-crveni oksid gvožđa; i/ili

-crni oksid gvožđa; i/ili

-sorbitol; i/ili

-glicerol.

[0076] U okviru ovog pronalaska, utvrđeno je da se anti-VEGF aktivnost resveratrola može poboljšati, kako za inhibiciju ekspresije receptora, tako i za njihovo fosforilovanje, prisustvom drugih sastojaka, u ovom slučaju vitamina, mikroelemenata, karotenoida i omega-3 masnih kiselina, koje nisu poznate po ovom svojstvu. Značajno je da ovaj efekat zavisi od doze.

[0077] Prema tome, kompozicija prema pronalasku je od očiglednog interesa za upotrebu u lečenju patoloških oboljenja oka koja su povezana sa prekomernom ekspresijom ili prekomernom proizvodnjom VEGF/VEGFR putanje (VEGF receptori), kao što je AMD, posebno eksudativni, retinalna venska okluzija, makularni edem, makularni edem dijabetesa, miopija, dijabetička retinopatija, neovaskularni glaukom ili neovaskularizacija rožnjače.

[0078] Prema drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na kompoziciju kako je gore definisana za upotrebu u:

-održavanju ili poboljšanju zdravlja očiju; i/ili

-prevenciji bolesti oka; i/ili

-modulacija ekspresije i/ili aktivnosti VEGF receptora (VEGFR) očnih ć elija, kao što su ć elije retine ili one iz prednjeg segmenta (rožnjače).

[0079] Iako je anti-VEGF efekat resveratrola na ć elijama retine bio poznat, strahovalo se da bi njegova upotreba na zdravim ć elijama mogla imati uporediv efekat, mogu ć e štetan za zdravlje očiju ( Pournaras et al., Napredak u retinalnom i istraživanju oka 27 (2008) ) 284-330). Sada, u kontekstu ove prijave, pokazano je da kompozicija prema pronalasku koja sadrži resveratrol nije samo imala anti-VEGF efekat na patološke ć elije, vec suprotno onome što bi očekivao stručnja iz ove oblasti, imala je neškodljiv i čak blagotvoran efekat na neošteć ene ć elije.

[0080] Prema tome, i naročito, kompozicija prema pronalasku može biti korisno administrirana subjektu koji pokazuje bar neke simptome patologije gore navedene samo na jednom oku. Neočekivano, kompozicija prema pronalasku omoguć ava tretiranje ne samo bolesnog oka, ali ne predstavlja nikakav rizik za neošteć eno oko, pa čak i omogu ć ava da se osigura ili produži njegovo dobro zdravlje.

[0081] Prema tome, pronalazak se prvenstveno odnosi na kompoziciju prema pronalasku za gore pomenute upotrebe, naznačen time što se koristi kod subjekta koji je pogođen simptomima patologije samo na jednom oku, zdravog subjekta ili mladog subjekta u riziku.

[0082] Prema drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na metod za održavanje i/ili poboljšanje zdravlja očiju kod subjekta, koji se sastoji od oralnog administriranja kompozicije prema pronalasku.

[0083] U kontekstu pronalaska, izrazi «subjekat» i «pacijent» se mogu koristiti naizmenično.

[0084] Povoljno, subjekat je zdrav subjekat, za koga oftalmološki pregled ne otkriva karakteristične znake patoloških promena oka, posebno AMD ili ARM. Ponovo, povoljnije je da se radi o subjektu koji se naziva "mlad", tj. mlađi od 50 godina, čak i mlađi od 45 godina. Prema određenom izvođenju, on uključuje mladog subjekta koji se naziva "u riziku", tj. predstavlja karakteristike ili istoriju povezanu sa poveć anim rizikom od razvoja patologije oka, posebno AMD ili ARM. Trenutno identifikovani faktori rizika su naročito:

-pušač;

-nasledni genetski rizik;

-visok krvni pritisak;

-gojaznost;

-operacija katarakte;

-miopija;

-dijabetes.

[0085] Prema drugom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na metod za sprečavanje bolesti oka kod subjekta, koji se sastoji od davanja oralne kompozicije prema pronalasku.

[0086] Pogodno je da su bolesti oka o kojima se radi bolesti vezane sa starenjem, naročito ošteć enja retine, i specifičnije neovaskularne patologije retine kao što je eksudativna AMD.

[0087] Poželjno, subjekat je zdrav subjekat kao što je gore definisano, ili subjekat koji je pogođen nekim od ovih znakova samo u jednom oku.

[0088] Prema drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na metodu za modulaciju ekspresije i/ili aktivnosti VEGFR receptora očnih ć elija kod subjekta, koja se sastoji od oralnog administriranja kompozicije prema pronalasku. Kao što je prikazano u ovoj prijavi, modulacija odgovara inhibiciji u prisustvu obolelih ć elija, naročito u kontekstu ošteć enja retine, dok ona odgovara očuvanju i čak stimulaciji ili aktivaciji u prisustvu zdravih ć elija. Prema posebnoj realizaciji, subjekat je onaj koji pati od oftalmološke patologije, posebno neovaskularne, na primer AMD (pogodno eksudativno), okluzija venske retine, makularni edem, dijabetski makularni edem, miopija, dijabetička retinopatija, neovaskularni glaukom ili neovaskularizacija rožnjače.

[0089] Prema poželjnoj realizaciji, kompozicija koja sadrži resveratrol prema pronalasku je AREDS tipska formulacija koja povezuje druge aktivne sastojke, kao što je gore opisano.

[0090] Kao što je već pomenuto, prema istra živanjima koje je izvršio podnosilac prijave, kompozicija prema pronalasku može da podstakne održavanje zdravih ć elija retine da ostanu zdrave, dok doprinosi eliminisanju patoloških ć elija retine. Prema tome, takva kompozicija se može preporučiti u slučaju pacijenata koji pate od oftalmološke patologije, posebno neovaskularne, kao što je gore navedeno, ili koje pate od takve patologije u samo jednom oku.

[0091] Pored ovog povoljnog efekta u slučaju detektabilne ili prijavljene patologije, kompozicija prema pronalasku se može koristiti za održavanje ili stimulisanje ekspresije i/ili aktivnosti (fosforilacije) VEGF receptora (VEGFR) zdravih očnih ć elija, posebno ć elija retine. Ovo rezultira dobrom neovaskularizacijom, i na taj način može obezbediti dobru irigaciju krvi sa poveć anim doprinosom esencijalnih hranljivih materija za ć elije, kako bi ih održali u dobrom zdravlju i sprečili bolesti, naročito bolesti povezane sa starenjem.

[0092] Ciljna populacija je stoga sastavljena od subjekata za koje oftalmološki pregled ne otkriva karakteristične znakove neovaskularne patologije oka. Kao što je već pomenuto, može uključivati tzv. «mlade» pojedince, odnosno 50 godina i mlađe, čak i mlađe od 45 godina. Konkretno, može uključivati tzv. «rizične» pojedince, koji imaju najmanje jednu od sledeć ih karakteristika:

-pušač;

-nasledni genetski rizik;

-visok krvni pritisak;

-gojaznost;

-operacija katarakte;

-miopija;

-dijabetes.

IZVOĐENJA PRONALASKA

[0093] Pronalazak i prednosti koje iz njega proističu ć e biti bolje razumljive iz slede ć ih slika i primera kako bi se obezbedila neograničavajuć a ilustracija pronalaska.

OPIS SLIKA

[0094]

Slika 1 upoređuje, u nediferenciranim (patološkim) ć elijama retine inkubirane (A) u prisustvu kompozicije prema pronalasku (formula A) ili (B), i u prisustvu kompozicije slične onoj iz pronalaska ali bez resveratrola (formula B), ekspresija VEGFR receptora (VEGFR1 i VEGFR2) i njihovo stanje fosforilacije (p-VEGF2 Y1054 i Y951), kao i VEGF, vestern blot-om (slika) i normalizacija sa β -aktinom (dijagram).

Slika 2 upoređuje, u diferenciranim (zdravim) retinalnim ć elijama inkubiranim (A) u prisustvu kompozicije prema pronalasku (formula A) ili (B) i u prisustvu kompozicije slične onoj iz pronalaska ali bez resveratrola (formula B), ekspresiju VEGFR receptora (VEGFR1 i VEGFR2) i njihovo stanje fosforilacije (p-VEGF2 Y1054 i Y951), kao i VEGF, vestern blot-om (slika) i normalizaciju sa β-aktinom (dijagram).

Slika 3 se upoređuje vestern blot-om (A) i dijagramom nakon normalizacije sa β-aktinom (B) ekspresijom VEGFR receptora (VEGFR1 i VEGFR2) i njihovo stanje fosforilacije (p-VEFG2 I951) u mišjem oku koje je (Co) primilo ili nije injekciju LPS (LPS), kada se tretiraju sa kompozicijom prema pronalasku (A), sa resveratrolom (R) ili sa kompozicijom bez resveratrola (B).

Slika 4 se upoređuje vestern blot-om (A) i dijagramom nakon normalizacije sa β-aktinom (B) ekspresijom VEGFR receptora (VEGFR1 i VEGFR2) i njihovo stanje fosforilacije (p-VEFG2 Y951) u oku Kontrolnog miša (Co) ili nakon primiljene injekcije LPS (LPS), kada se tretiraju sa kompozicijom prema pronalasku (A), sa resveratrolom (R) ili sa kompozicijom bez resveratrola (B).

I/ Kompozicija prema pronalasku

I-1/ Formula kompozicije (A)

[0095]

Tabela 1: formula kompozicije prema pronalasku (A)

I-2/ Proizvodnja kompozicije u obliku kapsula

[0096] Količine prikazane u tabeli 1 odgovaraju dnevnoj dozi. U praksi, kompozicija prema pronalasku se proizvodi u obliku 2 kapsule.

[0097] Za svaku kapsulu, u glavnu količinu se dodaju:

-glicerol monostearat;

-pčelinji vosak;

-sojin lecitin.

[0098] Sastav omotača kapsule je slede ć i:

-goveđi želatin

-crveni oksid gvožđa;

-crni oksid gvožđa.

[0099] Zatim su kapsule prekrivene PVC/PVDC ljuskom i aluminijumskom folijom. Alternativno, mogu se pakovati u organizatoru pilula.

[0100] Preporučuje se da se ove dve kapsule uzmu sa malo vode pre ili tokom glavnog obroka.

II/ In vitro ispitivanje kompozicije prema pronalasku (Formula A):

II-1/ Priprema rastvora u različitim koncentracijama resveratrola

[0101] Osnovni rastvor je pripremljen u DMSO (Dimetil Sulfoksid), u količini od 0,115 g formule A u 1 mL DMSO, što odgovara 10 mM resveratrola.

[0102] Rastvori 1, 5, 10 i 20 µM ekvivalenta resveratrola, označeni kao A1, A5, A10 i A20, su dobijeni iz ovog osnovnog rastvora. Razblaženja se izvode u medijumu kulture koji se sastoji od DMEM/F12 1% FBS (fetalni goveđi serum bez fenol crvenog).

II-2/ Efekat kompozicije prema pronalasku o patološkim ć elijama

A/ Protokol:

- Ispitivane ć elije: kultura nediferenciranih ć elija ARPE-19 (ATCC® CRL-2302 ™) ( «humani retinalni pigmentni epitel»).

[0103] Ove ć elije se mogu izjednačiti sa o šteć enim ili patolo škim ć elijama retine.

- Eksperimentalni protokol:

a) Kulturać elija:

[0104] Ć elije su održavane na 37°C, i u prisustvu 5% CO2 u medijumu DMEM/F12 (GIBCO; 31331), kompletirane sa 10% FBS (Lonza) i 15 mM HEPES (pH 7.4; GIBCO).

b) Inkubacija između kompozicija (formula A ili B) i ć elija: 1, 5, 10 ili 20 µM. 10 µM resveratrola odgovara 0.115 mg/mL formule A u DMEM/F12 1% FBS w/o fenol crvenog.

[0105] 1, 5, 10 ili 20µM. 10 µM resveratrola odgovara sa 0,115 mg/ml Formule A u DMEM/F12 1% FBS w/o crvenog fenola ekvivalentno 10 µM iz formule B takođe odgovara 0.115 mg/mL formule B u DMEM/F12 1% FBS w/o bez fenol crvenog. Dan pre tretmana, medijum je eliminisan i zamenjen sa DMEM/F12 bez fenol crvenog (GIBCO; 21041), kompletiran sa 1% FBS (Lonza) i 15 mM HEPES (pH 7.4; GIBCO). Posle 24 sata,ć elije su obrađivane 24 h sa različitim formulama (Formula A, Formula B i resveratrol) u medijumu DMEM/F12 bez fenol crvenog (GIBCO; 21041), kompletiran sa 1% FBS (Lonza) i 15 mM HEPES (pH 7.4; GIBCO).

c) Vestern blot:

[0106] Posle 24 h stimulacije, medijumi su eliminisani, ć elije su isprane sa PBS 1X, a zatim isprane u PBS 1X. Ć elije su centrifugirane i ostatak je resuspendiran u RIPA puferu zajedno sa koktelom inhibitora proteaze (Roche) i inhibitora fosfataze. Ć elije su lizirane u ledu 30 minuta, zatim centrifugirane. Koncentracija proteina je određena pomoć u kvantifikacionog kompleta proteina (Lovri kit, biorad). 45 µg proteina je pomešano sa jednakom zapreminom koncentrovanog Laemmli 5k, denaturirano zatim utovareno na akrilamidni gel. Nakon elektroforeze, proteini su prebačeni na nitroceluloznu membranu (Amersham). Mrlje su zatim blokirane sa mlekom pri 5% PBS-T 0.1% tokom 1 sata na temperaturi okoline. Posle blokiranja, membrane su inkubirane sa primarnim antitelima koji signalizuju ć elije (VEGFR-1, VEGFR-2 (55B11) ili Fosfo-VEGF receptor 2 (Tir951) (15D2)) ili Abcam (Anti-VEGF antitelo [VG-1]). Membrane su isprane 3 puta sa 0.1% PBS-T, a zatim inkubirane sa odgovarajuć im HRP konjugovanim antitelima tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Membrane su ponovo isprane 3 puta u 0.1% PBS-T i signal je detektovan pomoć u ECL (Tebu bio). Slike su snimljene sa ChemiDoc imaging sistemom i analizirane pomoć u softvera Quantity One Software (Biorad).

d) Kvantifikacija nivoa ekspresije i aktivnosti receptora:

[0107] β-aktin je takođe kvantifikovan da bi relativizovao nivoe ekspresije.

e) Kontrole:

[0108]

-Co = kontrolni uzorak koji odgovara DMSO (korišć en za solubilizaciju formula) u medijumu kulture

-R20 = Sam resveratrol od 20 µM razblažen u medijumu kulture (= DMEM/F12 1% FBS (fetalni goveđi serum bez fenol crvenog).

B/ Rezultati:

1) Dokaz o efektu resveratrola

[0109] Da bi se obezbedio dokaz efekta resveratrola na ekspresiju VEGFR receptora, kompozicija prema pronalasku (formula A) je upoređena sa kompozicijom koja je karakterisana odsustvom resveratrola, formulom B datom u tabeli 2 ispod:

T l 2 k m zi i f rm l B z r r r l

[0110] Razređenja ove kompozicije, označena sa B1, B5, B10 i B20, su proizvedena pod uslovima sličnim onima opisanim u tački II-1: 0,115 grama formule B u 1 mL DMSO, zatim ekvivalentnim razblaženjima u medijumu kulture.

[0111] Slika 1 ilustruje rezultate dobijene na patološkim ć elijama, tretiranim sa kompozicijom prema pronalasku (A) ili njenim ekvivalentom bez resveratrola (B).

[0112] Iz ove slike može se videti da na ovom tipu ć elije prisustvo resveratrola uzrokuje smanjenje ekspresije receptora (VEGFR1 i VEGFR2), kao i njihovo fosforilovanje:

-kompozicija prema pronalasku (A) omoguć ava suzbijanje ekspresije VEGF i VEGF receptora, i na način koji je zavisan od doze;

-fosforilacija prisutnih receptora se takođe smanjuje, i na način koji je zavisan od doze, što ukazuje na smanjenje aktivacije ovih receptora.

[0113] Kompozicija prema pronalasku tako izaziva kvantitativno smanjenje, ali takođe i kvalitativno smanjenje aktivacije VEGF receptora u patološkimć elijama, a time i neovaskularizacije.

[0114] Ukoliko kompozicija bez resveratrola (formula B) ne omoguć ava smanjenje ekspresije VEGF receptora, niti njihovo fosforilovanje (slika 1B), ovaj efekat bi stoga bio povezan sa prisustvom resveratrola.

2) Dokaz o sinergiji u kompoziciji prema pronalasku

[0115] Efekat koji zavisi od doze kompozicije prema pronalasku je upoređen sa efektom R20 rastvora, koji sadrži samo 20 µM resveratrola.

[0116] Slika 1A pokazuje da sam resveratrol omoguć ava smanjenje ekspresije VEGF receptora. Međutim, ovaj efekat se pojačava u prisustvu drugih sastojaka kompozicije prema pronalasku (uporediti A20 i R20).

II-3/ Uticaj kompozicije prema pronalasku na zdraveć elije

A/ Protokol:

[0117] Protokol koji se koristi je isti kao i onaj opisan u primeru II-2, osim za proučene ć elije:

- Ispitivane ć elije : kultura diferenciranih ć elija ARPE-19 (humani retinalni pigmentni epitel).

- Protokol za dobijanje diferenciranih ć elija:

[0118] Nediferenciraneć elije su zasađene u T75 bocama. Ć elije su održavane na 37°C, i u prisustvu od 5% CO2 u medijumu DMEM/F12 (GIBCO; 31331), kompletirane sa 10% FBS (Lonza) i 15 mM HEPES (pH 7.4; GIBCO). Kada ć elije dostignu konfluenciju, medijum je zamenjen sa DMEM/F12 (GIBCO; 31331), kompletiran sa 1% FBS (Lonza) i HEPES (15 mM pH 7.4; GIBCO). Mediji su menjani 2 puta nedeljno tokom 8 nedelja.

[0119] Navedene ć elije se mogu izjednačiti sa neošte ć enim ili zdravim ć elijama retine.

B/ Rezultati:

1) Dokaz o aktivnosti resveratrola

[0120] Slika 2 ilustruje efekat kompozicije prema pronalasku (A), ili njenog ekvivalenta bez resveratrola (B), na zdraveć elije.

[0121] Nasuprot onome što je uočeno kod patoloških ć elija, kompozicija prema pronalasku (A) pove ć ava ekspresiju VEGF receptora na način koji je zavisan od doze. Štaviše, fosforilacija receptora takođe pokazuje poveć anje. Stoga postoji kvantitativno i kvalitativno pove ć anje aktivacije, a samim tim i neovaskularizacije zdravih ć elija.

[0122] Međutim, nije uočen efekat sa formulacijom bez resveratrola (vidi sliku 2: uporedi sl.2A i sl. 2B). Može se videti sa sl. 2 da je ovo poveć anje zavisno od doze i da je značajno za najve ć e koncentracije resveratrola.

2) Dokaz o sinergiji u kompoziciji prema pronalasku

[0123] Efekat na zdrave ć elije koji zavisi od doze kompozicije prema pronalasku je upoređen sa efektom rastvora koji sadrži samo resveratrol u količini od 20 µM (slika 2, R20): ovo otkriva da sam resveratrol u testiranoj koncentraciji nema efekat na zdrave ć elije, kao i formula bez resveratrola (sl. 2B).

III / Učinak kompozicije prema pronalasku u mišu in vivo

[0124] Da bi se potvrdili prethodni rezultati dobijeni in vitro na ć elijskom modelu, eksperimenti su izvedeni u životinji, koristeć i C57BL/6 miševe kao model. Da bi se reprodukovali simptomi AMD-a, miševi su (osim «kontrolne» grupe miševa) primili injekciju od 0.5 µg lipopolisaharida (LPS) u jedno od dva oka (desno oko).

[0125] AMD karakteriše hronična upala. Lipopolisaharidi su dobro poznati po indukovanju lokalne upale, što rezultira stimulacijom ekspresije citokina u ošteć enim tkivima. Po što je primena LPS injekcijom i ograničena na oko, očekuje se da LPS deluje samo lokalno u injektovanom (desnom) oku i ne difundira u druga tkiva, posebno u levo oko. Pre injekcije LPS-a i testiranja efikasnosti različitih kompozicija, miševi su primili oralno, jednom dnevno tokom 15 dana, bilo sam resveratrol (R), ili kompoziciju A prema pronalasku opisanu u tabeli 1 (A) ili komparativnu kompoziciju B bez resveratrola kao što je opisano u tabeli 2 (B).

[0126] Po završetku tretmana, uklonjene su retine očiju miševa i nivoi ekspresije VEGF, VEGF-R1 i VEGF-R2, i aktiviranog oblika (fosforilovani na tirozinu 951) VEGF-R2 su analizirani.

A / Protokol:

[0127] C57BL/6 miševi su podeljeni u 5 grupa:

-1 kontrolna grupa (Co) je primila samo nosioca;

-1 grupa (LPS) je primila retro-orbitalnu injekciju 0,5 µg LPS (E. Coli) na desno oko 12og dana; -1 grupa (R) je primila, oralnom administracijom, sam resveratrol u dozi od 35 mg/kg/dan tokom 15 dana, i 0,5 µg LPS je administrirano u desno oko retro-orbitalnom injekcijom 12og dana, ili 72 h pre kraja eksperimenta;

-1 grupa (A) je primila, oralnom administracijom, kompoziciju A iz tabele 1 u dozi od 314,5 mg/kg/dan tokom 15 dana, i 0,5 µg LPS je administrirana u desno oko putem retro-orbitalne injekcije 12og dana, ili 72 h pre kraja eksperimenta;

-1 grupa (B) je primila, oralnom administracijom, kompoziciju B iz tabele 2 u dozi od 314,5 mg/kg/dan tokom 15 dana, i 0,5 µg LPS je administrirano u desno oko retro-orbitalnom injekcijom 12og dana 72 h pre kraja eksperimenta.

[0128] Na kraju eksperimenta, miševi su anestezirani i eutanazirani da bi se uklonile retine iz desnog oka (nakon primanja LPS injekcije i imitacije obolelog oka) i levog oka (imitirajuć i zdravo oko). Retine se zatim liziraju da bi se proučavala ekspresija proteina putanje VEGF Vestern-blot-om.

[0129] Paralelno su uklonjeni različiti organi da bi se proverila netoksičnost testiranih kompozicija.

B / Rezultati:

[0130] Rezultati dobijeni za retine desnog oka (imitirajuć i ošte ć eno oko) prikazani su na slici 3. Rezultati dobijeni za retine levog oka (imitirajuć i zdravo oko) prikazani su na slici 4.

1 / Oko tretirano LPS injekcijom (desno):

[0131] U desnom oku, očekuje se da LPS injekcija uzrokuje inflamatorni odgovor, naročito prekomernu ekspresiju citokina i stoga aktivaciju VEGF putanje, kao što je opisano u Nagineni et al. (Starenje i Bolest, 2014; 5 (2): 88-100). Može se videti sa sl.3 da su nivoi ekspresije VEGF-R1, VEGF-R2, prisustvo VEGF-R2 u fosforilovanom obliku, pa čak i nivo VEGF veoma niski kod miševa obeleženih LPS-om, dok je već a ekspresija ovih proteina (u pore đenju sa netretiranom kontrolnom Co) očekivana je zbog indukovane upale. Ovi rezultati pokazuju da je tretman sa 0.5 µg LPS (LPS uzorak sa slike 3) veoma toksičan i veoma slabo podržan retinama miševa. Mala količina proteina se stoga objašnjava toksičnoš ć u LPS-a koja uzrokuje

ćelijsku smrt, pa stoga ćelije ne mogu eksprimirati VEGF receptore ili izlučivati VEGF.

[0132] U poređenju sa tim, retine desnog oka miševa koje su primile injekciju LPS, ali su konzumirale ili resveratrol (R), kompoziciju A ili kompoziciju B, pokazuju veoma visoke nivoe proteina, što izgleda da ukazuje na to da je potrošnja ovih proizvoda omoguć ila, bar do izvesnog stepena, za štituć elija retine od toksičnog efekta LPS-a.

[0133]Štaviše, treba napomenuti da uzimanje kompozicije A dnevno tokom 15 dana uzrokuje značajno smanjenje ekspresije VEGF receptora kao što je VEGF-R1, VEGF-R2 i aktivirani oblik fosfo-VEGF-R2 Y951 u poređenju sa kontrolnim miševima, i to je značajnije od onoga što je uočeno kod kompozicije B bez resveratrola ili sa samim resveratrolom (R). Ovi rezultati su, prema tome, koherentni sa onim što je uočeno in vitro na sl. 1, prikazuju vrednost kompozicije prema pronalasku za efikasniju inhibiciju putanje aktivacije VEGF receptora u patološkom, inflamatornom kontekstu.

2 / Kontralateralno oko koje nije lečeno injekcijom LPS (levo):

[0134] Rezultati dobijeni retinama levog oka, koje nisu imale kontakt sa LPS i imitiraju zdravo oko, prikazani su na slike 4.

[0135] Dobijeni podaci pokazuju da efekat samog resveratrola (R), kao što se i očekuje, smanjuje ekspresiju VEGF-R1 i VEGF-R2. Značajno je da kompozicija A prema pronalasku omoguć ava odr žavanje nivoa VEGF-R1, VEGF-R2 i aktiviranog fosfo-VEGF-R2 Y951 oblika, uporedivog sa kontrolnim miševima (Co). Postoji manji efekat za sastav B bez resveratrola. Drugim rečima, i kako je uočeno in vitro (slika 2), kombinacija resveratrola i vitamina, mikroelemenata, karotenoida i omega-3 masnih kiselina kompozicije prema pronalasku ima sinergistički efekat u poređenju sa samim resveratrolom i sastavom B.

[0136] Iz gore navedenih rezultata se može videti da je kompozicija A sposobna da smanji putanju aktivacije VEGF-R kod obolelih ć elija retine, ali je tako đe sposobna da održava normalan nivo funkcionisanja pomenute putanje u normalnim retinama, koji je neophodan za održavanje dovoljne količine protoka krvi u retinu i izbegavanje degenerativnih procesa.

[0137] Prema tome, i suprotno samom resveratrolu, kompozicija A se može pogodno administrirati subjektima kod kojih je samo jedno od dva oka ošteć eno, i ima korist za o šteć eno oko, bez uticaja na zdravo oko.

ZAKLJUČCI:

[0138] Iznenađujuć e je i po prvi put u oblasti oftalmologije je pokazano, u odnosu na retinalne ć elije, da kompozicija prema pronalasku koja sadrži resveratrol u količini već oj od 20 mg, ima diferencijalno dejstvo na VEGFR receptore neophodne za neovaskularizaciju u zavisnosti od vrste ć elija: sa represijom u patolo škim ć elijama i bez represije, pa čak i obrnutog efekta, u zdravim ć elijama.

[0139] Prema tome, resveratrol bi u kontekstu kompozicije prema pronalasku omoguć io ponovno uspostavljanje ravnoteže unutar "deficijentnih" ć elija, ali ne bi ih ni na koji način modifikovao, i čak bi zdrave ć elije "odr žao fit" pomoć u suplementskog doprinosa esencijalnih elemenata koje obezbeđuje cirkulacija krvi.

[0140] Na isti način, kod pacijenata pod rizikom, administracija kompozicije A bi omoguć ila sprečavanje pojave simptoma, dozvoljavajuć i da se prve "anomalije" tretiraju očuvanjem zdravstvenog potencijala dok se čeka pojavljivanje anomalija. U stvari, ć elije retine ć e i dalje primati potrebnu količinu kiseonika, hranljivih materija i vitamina kroz fiziološki protok krvi koji podržava fiziološki nivo VEGF-a, koji se ne ć e smanjiti kao što je slučaj sa resveratrolom.

Claims (14)

Patentni zahtevi:

1. Oftalmološka nutraceutična kompozicija koja sadrži:

- vitamine;

- mikroelemente;

- karotenoide;

- omega-3 masne kiseline; i

- resveratrol u količini već oj od 20 mg,

i pomenuta kompozicija ne sadrži šafran.

2. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1, pri čemu ona sadrži količinu resveratrola koja je jednaka ili već a od 30 mg, poželjno već a od 30 mg, poželjnije jednaka ili ve ć a od 50 mg.

3. Kompozicija prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu su:

- vitamini, sami ili u kombinaciji, izabrani iz grupe koja sadrži vitamin C i vitamin E;

- mikroelementi, sami ili u kombinaciji, izabrani iz grupe koja sadrži cink i bakar;

- karotenoidi, sami ili u kombinaciji, izabrani iz grupe koja sadrži zeaksantin i lutein;

- omega-3 masne kiseline, same ili u kombinaciji, dolaze iz ribljeg ulja i poželjno su izabrane iz grupe koja sadrži eikozapentaensku kiselinu (EPA) i dokosaheksaensku kiselinu (DHA).

4. Kompozicija prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu sadrži:

- vitamin C;

- vitamin E;

- cink;

- bakar;

- lutein;

- zeaksantin; i

- omega-3 masne kiseline iz ribljeg ulja, posebno EPA i DHA.

5. Kompozicija prema bilo kojem od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu kompozicija sadrži:

- 50 mg do 500 mg vitamina C, poželjno 240 mg ili 120 mg;

- 10 mg do 500 mg vitamina E, poželjno 30 mg;

- 5 mg do 100 mg cinka, poželjno 12.5 mg;

- 0.2 mg do 10 mg bakra, poželjno 1 mg;

- 2 mg do 50 mg luteina, poželjno 10 mg;

- 0.5 mg do 10 mg zeaksantina, poželjno 2 mg;

- 100 mg do 1000 mg EPA, poželjno 380 mg ili 172 mg; i

- 100 mg do 1000 mg DHA, poželjno 190 mg ili 366 mg.

6. Kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, za upotrebu u oftamologiji, kao dodatak ishrani.

7. Kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, za upotrebu u lečenju patologije oka koja je povezana sa prekomernom ekspresijom VEGF putanje, poželjno sa prekomernom proizvodnjom VEGFR receptora.

8. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, pri čemu je patologija oka odabrana iz eksudativne AMD, okluzije venske retine, makularnog edema, dijabetičkog makularnog edema, miopije, dijabetičke retinopatije, neovaskularnog glaukoma ili neovaskularizacije rožnjače.

9. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 7 ili 8, pri čemu se primenjuje na subjektu koji pati od simptoma navedene patologije samo na jednom oku.

10. Kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, sa upotrebom za:

- održavanje ili poboljšanje zdravlja očiju; i/ili

- prevenciju bolesti oka; i/ili

- modulaciju ekspresije i/ili aktivnosti VEGFR receptora očnih ć elija.

11. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu se koristi na zdravom subjektu, poželjno mladom subjektu kod koga je prisutan rizik.

12. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 6 do 11, pri čemu se kompozicija administrira oralno.

13. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 6 do 12, pri čemu se kompozicija administrira dnevno.

14. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 6 do 13, pri čemu je kompozicija u obliku jedne ili više kapsula, poželjno 2 kapsule.