[go: up one dir, main page]

RS58712B1 - Derivati policikličnih amida kao cdk9 inhibitori - Google Patents

Derivati policikličnih amida kao cdk9 inhibitori

Info

Publication number
RS58712B1
RS58712B1 RS20190564A RSP20190564A RS58712B1 RS 58712 B1 RS58712 B1 RS 58712B1 RS 20190564 A RS20190564 A RS 20190564A RS P20190564 A RSP20190564 A RS P20190564A RS 58712 B1 RS58712 B1 RS 58712B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
pyridin
chloro
cyclohexanecarboxamide
dihydro
acetamido
Prior art date
Application number
RS20190564A
Other languages
English (en)
Inventor
Kurt Gordon Pike
Bernard Christophe Barlaam
Janet Hawkins
Savi Christopher De
Melissa Marie Vasbinder
Alexander Hird
Michelle Lamb
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of RS58712B1 publication Critical patent/RS58712B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na određene derivate piridina ili pirimidina za upotrebu u lečenju određenih bolesti, posebno proliferativnih bolesti kao što je kancer i u pripremi lekova za upotrebu u lečenju proliferativnih bolesti, novim derivatima piridina ili pirimidina i na procese za njihovo dobijanje, kao i farmaceutske sastave koji ih sadrže kao aktivni sastojak.
Proteinske kinaze zavisne od ciklina (CDKs) predstavljaju porodicu serin/treonin proteinskih kinaza koje postaju aktivne nakon vezivanja za regulatornog partnera ciklina. CDK/ciklinski kompleksi su prvo identifikovani kao regulatori napredovanja ćelijskog ciklusa. U skorije vreme, međutim, CDK/ciklinski kompleksi su takođe uključeni u procese transkripcije i mRNK. CDK9/PTEFb (faktor elongacije pozitivne transkripcije b) fosforiliše karboksilterminalni domen (CTD) velike podjedinice RNK polimeraze II (RNAP II), pretežno Ser-2, regulišući elongaciju transkripcije. Inhibicija CDK9 i transkripciona represija rezultira u brzom osiromašenju kratkotrajnih mRNK transkripata i povezanih proteina uključujući Mcl1 i c-mic, što dovodi do indukcije apoptoze u tumorskim ćelijama hiper-zavisnim od ovih proteina preživljavanja. Ciljanje transkripcionih CDK, uključujući CDK9, stoga predstavlja terapeutsku strategiju za lečenje tumorskih tipova hiper-zavisnih od ovih labilnih proteina koji produžavaju preživljavanje uključujući, ali ne ograničavajući se na, hematološke malignitete kao što su akutna mijeloidna leukemija, multiple mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni veliki B ćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što su kancer dojke, kancer pluća, neuroblastom i kancer debelog creva. Inhibitori CDK9 mogu takođe imati terapeutsku primenu u drugim indikacijama bolesti uključujući kardiologiju, virologiju, inflamaciju i bol.
[0002] Ovde su obelodanjeni nizovi novih piridinskih ili pirimidinskih derivata koji inhibiraju CDK9 i mogu biti korisni za lečenje hiperproliferativnih bolesti. Posebno, jedinjenja su korisna u tretmanu proliferativne bolesti kao što je kancer uključujući hematološke malignitete kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni veliki B-limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što je kancer dojke kancer pluća, neuroblastoma i kancer debelog creva.
Slika 1 je reprezentativni rendgenski difraktogram praha Oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Primer 14).
Slika 2 je reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Primer 14).
Slika 3 je reprezentativni rendgenski difraktogram praha Oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Primer 25).
Slika 4 je reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika A (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Primer 25).
Slika 5 je reprezentativni rendgenski difraktogram praha Oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cyclohexane-1-carboxamide (Primer 86).
Slika 6 je reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cyclohexane-1-carboxamide (Primer 86).
Slika 7 je reprezentativni rendgenski difraktogram praha Oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahydropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Primer 2).
Slika 8 je reprezentativni DSC/TGA termogram Oblika B (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahydropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Primer 2).
OPIS PRONALASKA
[0003] Prema jednom aspektu predmetnog pronalaska data su jedinjenja Formule I:
Gde:
A je C(R<5>) ili N;
R<5>je H, C1-3alkil, CN ili halogen;
R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil ili 3-7-člani cikloalkil;
opciono supstituisan sa jednim do tri supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koju čine R<10>, OR<10>, SR<10>, S(O)R<10>, S(O)2R<10>, C(O) R<10>, C(O)O R<10>, OC(O) R<10>, OC(O)OR<10>, NH2, NH R<10>, N(R<10>)2, NHC(O)H, NHC(O) R<10>, N R<10>C(O)H, N R<10>C(O)R<10>, NHS(O)2R<10>, NR<10>S(O)2R<10>, NHC(O)OR<10>, NR<10>C(O)OR<10>, NHC(O)NH2, NHC(O)NHR<10>, NHC(O)N(R<10>)2, NR<10>C(O)NH2, NR<10>C(O)NHR<10>, NR<10>C(O)N(R<10>)2, C(O)NH2, C(O)NH R<10>, C(O)N(R<10>)2, C(O)NHOH, C(O)NHOR<10>, C(O)NHS(O)2R<10>, C(O)N R<10>S(O)2R<10>, S(O)2NH2, S(O)2NHR<10>, S(O)2N(R<10>)2, S(O)2NHC(O)OR<10>, S(O)2NR<10>C(O)O R<10>, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; gde jedna ili više CH2grupa u prstenu može opciono biti zamenjena odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota u prstenu mogu biti opciono oksidovani da formiraju S-okside ili N-okside;
R<10>, pri svakom pojavljivanju, je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji od 3 do 6-članova cikloalkilne ili heterocikloalkilne grupe, C1-6alkil, -O-C1-6alkil, C1-6alkil-O-C1-6alkil, NH2, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; gde dve R<10>grupe zajedno sa atomima na koje su vezane mogu da formiraju 3 do 6-članu cikloalkil ili heterocikloalkil grupu; i svaka gore pomenuta R<10>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa može biti dalje supstituisana sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koju čine CN, OH, halogen, C1-3alkil, -O-C1-3alkil, NH2, NH-C1-3alkil i NHC(O)-C1-3alkil.
R<4>je
gde X i Y zajedno sa atomima na koje su vezani, formiraju 5-do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji, pored azota za mostove, može da sadrži jedan ili dva heteroatoma izabrana od N, O i S koji prsten može biti zasićen ili delimično zasićen; gde jedna ili dve prstenaste CH2grupe mogu opciono biti zamenjene odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota u prstenu koji mogu biti opciono oksidovani da formiraju S-okside ili Nokside i gde prsten može biti supstituisan na ugljeniku prstena sa jednim ili dva R<10>supstituenta ili na azotu prstena sa supstituentom R<12>;
J je Nor CR<11>;
R<11>je H, C1-3alkil; i
R<12>pri svakom pojavljivanju se nezavisno bira iz grupe koja se sastoji iz 3 do 6-člane cikloalkilne ili heterocikloalkilne grupe, C1-6alkil, C1-6alkil-O-C1-6alkil, C(O)NH2, C(O)H; gde R<12>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa mogu biti dalje supstituisane sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz CN, OH, i halogena, C1-3alkil, NH2i NH-C1-3alkil, NHC(O)-C1-3alkil ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli.
[0004] Jedinjenja Formule (I) su korisna zbog njihove sposobnosti da inhibiraju aktivnost CDK9 i prema tome su takođe korisna u lečenju bolesti ili medicinskih stanja koja su posredovana ili delimično CDK9.
[0005] Jedinjenja formule (I) mogu biti korisna za lečenje hiperproliferativnih bolesti.
Posebno, jedinjenja su korisna u tretmanu proliferativne bolesti kao što je kancer, uključujući hematološke malignitete kao što su, ali nisu ograničeni na akutnu mijeloidnu leukemiju, multiple mijelom, hroničnu limfocitnu leukemiju, difuzni veliki B-limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što su, ali nisu ograničeni na, kancer dojke, kancer pluća (uključujući, ali ne ograničavajući se na, ne-male ćelije kancera pluća (NSCLC)) uključujući ne-skvamozne i skvamozne podtipove, neuroblastom i kancer debelog creva. Pronalazak se takođe odnosi na postupke za proizvodnju pomenutih jedinjenja, na farmaceutske sastave koje ih sadrže i na njihovu upotrebu u proizvodnji lekova za upotrebu u proizvodnji anti-proliferativnog efekta kod toplokrvnih životinja kao što je čovek. Takođe, u skladu sa ovim pronalaskom, obezbeđena su navedena jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu u lečenju kancera.
[0006] Da bi se ovaj pronalazak lakše razumeo, prvo se definišu određeni termini. Dodatne definicije su izložene u detaljnom opisu.
[0007] Smatra se da je gore navedena pisana specifikacija dovoljna da omogući stručnjaku da praktikuje otelotvorenja. Prethodni opis i Primeri detaljno opisuju određena otelotvorenja i opisuju najbolji način koji su razmatrali pronalazači. Međutim, treba imati na umu da, bez obzira na to koliko detaljno iznad navedeno može da se pojavi u tekstu, otelotvorenja se mogu praktikovati na mnogo načina, a patentni zahtevi obuhvataju sve njihove ekvivalente.
[0008] Pre nego što se detaljno opiše predmetni pronalazak, treba razumeti da ovaj pronalazak nije ograničen na specifične sastave ili korake procesa, kao takvi mogu da variraju.
[0009] Dalje, "i/ili" gde se ovde koristi treba uzeti kao specifično obelodanjivanje svake od dve specifične karakteristike ili komponente sa ili bez druge. Prema tome, termin "i/ili" kako se koristi u frazi kao što su "A i/ili B" ovde treba da uključi "A i B", "A ili B", "A" (samo), i "B" "(samo). Isto tako, termin "i/ili" kako se koristi u izrazu kao što su "A, B i/ili C" treba da obuhvati svaki od sledećih aspekata: A, B i C; A, B ili C; A ili C; A ili B; B ili C; A i C; A i B; B i C; A (samo); B (samo); i C (samo).
[0010] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što se uobičajeno shvata onaj koji je uobičajeno upoznat sa stanjem tehnike koje je povezano sa ovim obelodanjivanjem. Na primer, Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2. izdanje., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3. izdanje., 1999, Academic Press; i Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, pružiti stručnjaku sa opštim rečnikom mnogih termina koji se koriste u ovom obelodanjivanju. Jedinice, prefiksi i simboli su označeni u prihvaćenom obliku njihovog međunarodnog sistema jedinica (SI). Numerički opsezi obuhvataju brojeve koji definišu opseg.
[0011] Podrazumeva se da gde god su aspekti ovde opisani sa jezikom "koji sadrži", inače su obezbeđeni analogni aspekti opisani u terminima "koji se sastoje iz" i/ili "koji se suštinski sastoje iz".
[0012] Termini "inhibiraju," "blokiraju" i "potiskuju" se ovde koriste naizmenično i odnose se na bilo koje statistički značajno smanjenje biološke aktivnosti, uključujući potpuno blokiranje aktivnosti. Na primer, "inhibicija" može se odnositi na smanjenje od oko 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 100% u biološkoj aktivnosti.
[0013] Ćelijska proliferacija se može testirati korišćenjem tehnika koje su poznate u struci i koje mere brzinu deobe ćelija, i/ili frakciju ćelija unutar ćelijske populacije koja se podeli ćelijskoj podeli, i/ili brzina gubitka ćelija iz ćelijske populacije usled terminalne diferencijacije ili smrti ćelije (npr. ugradnja timidina).
[0014] Termin "ispitanik" se odnosi na bilo koju životinju (npr., sisara), uključujući, ali ne ograničavajući se na ljude, ne-humane primate, glodare i slično, koji treba da bude primalac određenog tretmana. Tipično, termini "ispitanik" i "pacijent" se ovde koriste naizmenično u odnosu na humanog subjekta.
[0015] Termin "farmaceutski sastav" se odnosi na preparat koji je u takvom obliku da dozvoljava biološku aktivnost aktivnog sastojka i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za ispitanike kojima će se dati preparat. Takav sastav može biti sterilan.
[0016] Termini kao što su "lečenje" ili "tretman" ili "lečiti" ili "ublažavanje" ili "ublažiti" odnose se na (1) terapeutske mere koje leče, usporavaju, ublažavaju simptome i/ili zaustavljaju progresiju dijagnostifikovanog patološkog stanja ili poremećaja i (2) profilaktičke ili preventivne mere koje sprečavaju i/ili usporavaju razvoj ciljanog patološkog stanja ili poremećaja. Prema tome, oni kojima je potreban tretman uključuju one koji već imaju poremećaj; oni koji su skloni da imaju poremećaj; i onima u kojima se ovaj poremećaj treba sprečiti. U određenim aspektima, ispitanik se uspešno "leči" za kancer prema postupcima iz ovog pronalaska ako pacijent pokazuje, na primer, totalnu, delimičnu ili prolaznu remisiju određenog tipa kancera.
[0017] Termini "kancer", "tumor", "kancerogeni" i "maligni" odnose se ili opisuju fiziološko stanje kod sisara koje se tipično karakterišu neregulisanim rastom ćelija. Primeri raka uključuju, ali nisu ograničeni na, hematološke malignitete kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni veliki B-limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što je kancer dojke kancer pluća, neuroblastoma i kancer debelog creva.
[0018] Termin "citotoksično sredstvo" kako je ovde korišćen definisan je široko i odnosi se na supstancu koja inhibira ili sprečava funkciju ćelija i/ili izaziva uništenje ćelija (ćelijska smrt), i/ili vrši anti-neoplastične/antiproliferativne efekte. Na primer, citotoksično sredstvo sprečava direktno ili indirektno razvoj, sazrevanje ili širenje neoplastičnih tumorskih ćelija. Termin uključuje i sredstva koja izazivaju samo citostatički efekat, a ne samo citotoksični efekat. Termin uključuje hemoterapeutska sredstva kao što je niže navedeno, kao i drugi HER2 antagonisti, anti-angiogena sredstva, inhibitori tirozin kinaze, inhibitori protein kinaze A, članovi porodice citokina, radioaktivni izotopi i toksini kao što su enzimski aktivni toksini bakterijskih, gljivičnih biljnog ili životinjskog porekla.
Termin "hemoterapeutsko sredstvo" je podgrupa termina "citotoksično sredstvo" koje sadrži prirodna ili sintetička hemijska jedinjenja.
[0019] U skladu sa postupcima iz ovog pronalaska, jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se davati pacijentu da bi se promovisao pozitivan terapijski odgovor u odnosu na kancer. Termin "pozitivan terapeutski odgovor" u odnosu na tretman karcinoma odnosi se na poboljšanje simptoma povezanih sa bolešću.
[0020] Na primer, poboljšanje bolesti može se okarakterisati kao kompletan odgovor. Termin "potpuni odgovor" odnosi se na odsustvo klinički detektabilne bolesti sa normalizacijom bilo kojih prethodnih rezultata testa. Alternativno, poboljšanje bolesti može se kategorizirati kao delimični odgovor. "Pozitivni terapijski odgovor" obuhvata smanjenje ili inhibiciju napredovanja i/ili trajanja kancera, smanjenje ili ublažavanje ozbiljnosti kancera, i/ili ublažavanje jednog ili više simptoma koji nastaju primenom jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja.
[0021] U specifičnim aspektima, takvi termini se odnose na jedan, dva ili tri ili više rezultata nakon primene jedinjenja ovog pronalaska:
(1) stabilizaciju, redukciju ili eliminaciju populacije ćelija kancera;
(2) stabilizacija ili smanjenje rasta kancera;
(3) oštećenje u formiranju kancera;
(4) iskorenjivanje, uklanjanje ili kontrola primarnog, regionalnog i/ili metastatskog kancera;
(5) smanjenje smrtnosti;
(6) povećanje preživljavanja, bez oporavka, bez progresije i/ili ukupnog preživljavanja, trajanja ili brzine bez bolesti;
(7) povećanje stope odgovora, trajnost odgovora ili broj pacijenata koji reaguju ili su u remisiji;
(8) smanjenje stope hospitalizacije,
(9) smanjenje dužine hospitalizacije,
(10) veličina kancera se održava i ne povećava ili povećava za manje od 10%, poželjno manje od 5%, poželjno manje od 4%, poželjno manje od 2%, i
(11) povećanje broja pacijenata u remisiji.
(12) smanjenje broja adjuvant terapija (npr., hemoterapija ili hormonska terapija) koje bi inače bile potrebne za lečenje kancera.
[0022] Klinički odgovor se može proceniti korišćenjem tehnika skrininga kao što su PET, skeniranje magnetnom rezonancom (MRI), rendgensko snimanje, kompjuterizovano tomografsko (CT) skeniranje, protočna citometrija ili fluorescentno-aktivirani stanični sorter (FACS) analiza, histologija, bruto patologija i hemija krvi, uključujući ali ne ograničavajući se na promene koje se mogu detektovati ELISA, RIA, hromatografija i slično. Pored ovih pozitivnih terapijskih odgovora, ispitanik koji se leči može da doživi blagotvoran efekat poboljšanja simptoma povezanih sa bolešću.
[0023] U ovoj specifikaciji prefiks Cx-ykoji se koristi u terminima kao što su Cx-yalkil i slično (gde su x i x celi brojevi) označava numerički opseg atoma ugljenika koji su prisutni u grupi; na primer, C1-4alkil obuhvata C1alkil (metil), C2alkil (etil), C3alkil (propil i izopropil) i C4alkil (butil, 1-metilpropil, 2-metilpropil, i t-butil).
[0024] Ukoliko nije izričito navedeno, vezujući atom grupe može biti bilo koji pogodan atom te grupe; na primer, propil uključuje prop-1-il i prop-2-il.
[0025] Kako se ovde koristi, termin "opciono supstituisan" označava da je supstitucija neobavezna i da je moguće da označena grupa bude ili supstituisana ili nesupstituisana. U slučaju da je željena supstitucija, bilo koji broj vodonika na označenoj grupi može biti zamenjen selekcijom iz naznačenih supstituenata, pod uslovom da normalna valenca atoma na određenom supstituentu nije prekoračena i da supstitucija rezultira u stabilno jedinjenje.
[0026] U jednom aspektu, kada je određena grupa označena kao opciono supstituisana sa "jednim ili više" supstituenata, određena grupa može biti nesupstituisana. U drugom aspektu, određena grupa može da nosi jedan supstituent. U drugom aspektu, određeni supstituent može da nosi dva supstituenta. U još jednom aspektu, određena grupa može da nosi tri supstituenta. U još jednom aspektu, određena grupa može da nosi četiri supstituenta. U drugom aspektu, određena grupa može da nosi jedan ili dva supstituenta. U još jednom aspektu, određena grupa može biti nesupstituisana ili može da nosi jedan ili dva supstituenta.
[0027] Kao što je ovde korišćen, termin "alkil" se odnosi na zasićene ugljovodonične radikale ravnog i razgranatog lanca koji imaju određeni broj atoma ugljenika. Reference za pojedinačne alkil grupe kao što je "propil" su specifične samo za verziju ravnog lanca i reference na pojedinačne razgranate alkilne grupe kao što je "izopropil" su specifične samo za razgranatu verziju lanca. U jednom aspektu, "alkil" može biti "C1-4alkil." U drugom aspektu, "alkil" i "C1-4alkil" može biti "C1-3alkil." U drugom aspektu, "alkil" "C1-4alkil" i "C1-3alkil," može biti metil. Analogna konvencija se primenjuje na druge generičke termine, na primer "alkenil" i "alkinil".
[0028] "Cikloalkil" je monociklični, zasićeni ili delimično nezasićeni alkil prsten koji sadrži 3 do 7 atoma ugljenika. Ilustrativni primeri cikloalkila uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil.
[0029] "Heterocikloalkil" je zasićeni ili delimično zasićeni monociklični prsten koji sadrži 3 do 7 atoma u prstenu, od kojih su 1, 2, 3 ili 4 atoma u prstenu izabrani iz azota, sumpora ili kiseonika, koji prsten može biti ugljenik ili azot, pri čemu -CH2-grupa može opciono biti zamenjena sa -C(O)-; gde je atom azota ili sumpora u prstenu opciono oksidisan da bi se formirao N-oksid ili S-oksid(e) (tj. sulfoksid i sulfon); gde je prsten -NH opciono supstituisan sa acetil, formil, metil ili mesil; i gde je prsten opciono supstituisan sa jednim ili više halo. Ilustrativni primeri za "5-ili 6-člani heterocikloalkil" uključuju, imidazolinil, pirazolidinil, piperazinil, piperidinil, pirolidinil, oksazinil, morfolinil, heksahidropirimidinil i tiomorfolinil.
[0030] Pogodne vrednosti za bilo koju R grupu (R<1>do R<12>) ili bilo koji deo ili supstituent za takve grupe uključuju:
1
[0031] Treba napomenut da dati primeri termina upotrebljenih u opisu nisu ograničavajući.
[0032] Kako se ovde koristi, termin "efikasna količina" označava količinu jedinjenja ili sastava koji je dovoljan da značajno i pozitivno modifikuje simptome i/ili stanja koja se tretiraju (npr., daju pozitivan klinički odgovor). Efikasna količina aktivnog sastojka za upotrebu u farmaceutskom sastavu će varirati u zavisnosti od određenog stanja koje se tretira, ozbiljnosti stanja, trajanja tretmana, prirode paralelne terapije, određenog aktivnog sastojka koji se koristi, primenjeni određeni farmaceutski prihvatljivi ekscipijens(i)/nosač(i) i slični faktori u okviru znanja i stručnosti lekara.
[0033] Posebno, efikasna količina jedinjenja Formule (I) za upotrebu u lečenju kancera je količina dovoljna da se simptomatski oslobodi kod toplokrvne životinje, kao što je čovek, simptomi kancera i mijeloproliferativnih bolesti, da se uspori napredovanje od kancera i mijeloproliferativnih bolesti, ili smanjiti kod pacijenata sa simptomima kancera i mijeloproliferativnih bolesti rizik od pogoršanja.
[0034] Kako se ovde koristi, termin "odlazeća grupa" treba da se odnosi na grupe koje se lako mogu zameniti nukleofilom kao što je aminski nukleofil, i alkoholni nukleofil ili tiolni nukleofil. Primeri pogodnih odlazećih grupa uključuju halo, kao što je hloro i bromo, i sulfoniloksi grupa, kao što je metansulfoniloksi i toluen-4-sulfoniloksi.
[0035] Kako se ovde koristi, termin "farmaceutski prihvatljiv" se odnosi na ona jedinjenja, materijale, sastave i/ili oblike doziranja koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez preterane toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugog problema ili komplikacije, srazmerni razumnom odnosu korist/rizik.
[0036] Kako se ovde koristi, termin "zaštitna grupa" treba da se odnosi na one grupe koje se koriste za sprečavanje izabranih reaktivnih grupa (kao što su karboksi, amino, hidroksi i merkapto grupe) da prođu nepoželjne reakcije.
[0037] Ilustrativni primeri pogodnih zaštitnih grupa za hidroksi grupu uključuju, ali nisu ograničeni na acil grupe; alkanoilne grupe kao što je acetil; aroilne grupe, kao što je benzoil; sililne grupe, kao što je trimetilsilil; i arilmetilne grupe, kao što je benzil. Uslovi uklanjanja zaštite za iznad navedene hidroksi zaštitne grupe će nužno varirati sa izborom zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa kao što je alkanoilna ili aroilna grupa može biti uklonjena, na primer, hidrolizom sa pogodnom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, sililna grupa kao što je trimetilsilil može se ukloniti, na primer, fluoridom ili vodenom kiselinom; ili arilmetilna grupa kao što je benzil grupa može biti uklonjena, na primer, hidrogenacijom u prisustvu katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku.
[0038] Ilustrativni primeri pogodnih zaštitnih grupa za amino grupu uključuju, ali nisu ograničeni na acil grupe; alkanoilne grupe kao što je acetil; alkoksikarbonilne grupe, kao što su metoksikarbonil, etoksikarbonil i t-butoksikarbonil; arilmetoksikarbonilne grupe, kao što je benziloksikarbonil; i aroilne grupe, kao što je benzoil. Uslovi uklanjanja zaštite za iznad navedene amino zaštitne grupe će nužno varirati sa izborom zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa kao što je alkanoil ili alkoksikarbonilna grupa ili aroilna grupa može biti uklonjena, na primer, hidrolizom sa pogodnom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, acil grupa kao što je t-butoksikarbonil grupa može da se ukloni, na primer, tretiranjem sa pogodnom kiselinom kao što je hlorovodonična, sumporna, fosforna kiselina ili trifluorosirćetna kiselina i arilmetoksikarbonil grupa kao što je benziloksikarbonilna grupa može biti uklonjena, na primer, hidrogenacijom preko katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku, ili tretiranjem sa Luisovom kiselinom, na primer bor trihloridom. Pogodna alternativna zaštitna grupa za primarnu amino grupu je, na primer, ftaloil grupa, koja se može ukloniti tretmanom sa alkilaminom, na primer dimetilaminopropilaminom ili 2-hidroksietaminom, ili sa hidrazinom.
[0039] Zaštitne grupe mogu da se uklone u bilo kojoj pogodnoj fazi u sintezi korišćenjem konvencionalnih tehnika koje su dobro poznate u hemijskoj struci, ili se mogu ukloniti tokom kasnijeg koraka reakcije ili obrade.
[0040] U vezi sa supstituentom "R" za ilustrativne svrhe, sledeće definicije supstituenata se odnose na naznačenu strukturu:
[0041] U okviru predmetnog pronalaska podrazumeva se da jedinjenje formule (I) ili njegova so može da ispoljava fenomen tautomerizma i da crteži formule u ovoj specifikaciji mogu da predstavljaju samo jedan od mogućih tautomernih oblika. Podrazumeva se da pronalazak obuhvata bilo koji tautomerni oblik koji ima CDK9 inhibitornu aktivnost i nije ograničen samo na bilo koji tautomerni oblik koji se koristi u crtežima formule.
[0042] Takođe se podrazumeva da određena jedinjenja formule (I) i njihove soli mogu postojati u solvatnim kao i u nerastvorenim oblicima kao što su, na primer, hidratizovani oblici. Podrazumeva se da pronalazak obuhvata sve takve solvatne oblike koji imaju CDK9 inhibitornu aktivnost.
[0043] Jedinjenja formule (I) mogu takođe biti obezbeđena kao in vivo hidrolizabilni estri. In vivo hidrolizujući estar jedinjenja formule (I) koji sadrži karboksi ili hidroksi grupu je, na primer, farmaceutski prihvatljiv estar koji se cepa u ljudskom ili životinjskom telu da bi se proizvela matična kiselina ili alkohol. Takvi estri se mogu identifikovati davanjem, na
1
primer, intravenozno testiranoj životinji, jedinjenje koje se testira i zatim ispitivanje telesne tečnosti testirane životinje.
[0044] Pogodni farmaceutski prihvatljivi estri za karboksi obuhvataju C1-6alkoksimetil estre, na primer metoksimetil, C1-6alkanoiloksimetil estre, na primer pivaloiloksimetil, ftalidil estre, C3-8cikloalkkarboniloksiC1-6alkil estre, na primer 1-cikloheksilkarboniloksietil, (1,3-dioksolen-2-on)ilmetil estri, na primer (5-metil-l, 3-dioksolen-2-on)ilmetil i C1-
6alkoksikarboniloksietil estre, na primer 1-metoksikarboniloksietil; i mogu biti formirani u bilo kojoj karboksi grupi u jedinjenjima ovog pronalaska.
[0045] Pogodni farmaceutski prihvatljivi estri za hidroksi uključuju neorganske estre kao što su fosfatni estri (uključujući fosforamidne ciklične estre) i α-aciloksialkil etre i srodna jedinjenja koja kao rezultat in vivo hidrolize razlaganja estara daju osnovne hidroksilne grupe. Primeri α-aciloksialkil etara obuhvataju acetoksimetoksi i 2,2-dimetilpropioniloksimetoksi. Termin in vivo hidrolizujućih grupa koje formiraju estere za hidroksi uključuju C1-10alkanoil, na primer acetil, benzoil, fenilacetil, supstituisani benzoil i fenilacetil; C1-10alkoksikarbonil (kako bi se dobili karbonatni esteri), na primer etoksikarbonil; di-C1-4alkilkarbamoil i N-(di-C1-4alkilaminoetil)-N-C1-4alkilkarbamoil (kako bi se dobili karbamati); di-C1-4alkilaminoacetil i karboksiacetil. Primeri supstituenata u prstenu na fenilacetilu i benzoilu uključuju aminometil, C1-4alkilaminometil i di-(C1-
4alkil)aminometil i morfolino ili piperazino povezani od atoma prstena azota preko metilenske grupe za vezivanje do 3-ili 4-položaja prstena benzoila. Drugi interesantni in vivo estri koji se mogu hidrolizovati uključuju, na primer, R<A>C(O)OC1-6alkiyl-CO-, gde je R<A>na primer, benziloksi-C1-4alkil ili fenil. Pogodni supstituenti na fenil grupi u takvim estrima uključuju, na primer, 4-C1-4alkilpiperazino-C1-4alkil, piperazino-C1-4alkil i morfolino-C1-4alkil.
[0046] Jedinjenja Formule (I) mogu da formiraju stabilne farmaceutski prihvatljive kiselinske ili bazne soli i u takvim slučajevima primena jedinjenja kao soli može biti odgovarajuća. Primeri kiselinskih adicionih soli uključuju acetat, adipat, askorbat, benzoat, benzensulfonat, bikarbonat, bisulfat, butirat, kamforat, kamfor sulfonat, holin, citrat, cikloheksil sulfamat, dietilendiamin, etansulfonat, fumarat, glutamat, glikolat, hemisulfat, 2-hidroksietil sulfonat heptanoat, heksanoat, hidrohlorid, hidrobromid, hidrojodid, hidroksimaleat, laktat, malat, maleat, metansulfonat, meglumin, 2-naftalensulfonat, nitrat, oksalat, pamoat, persulfat, fenilacetat, fosfat, difosfat, pikrat, pivalat, propionat, kinat, stearat, sukcinat, sulfamat, sulfanilat, sulfat, tartarat, tosilat (p-toluensulfonat), trifluoracetat i undekanoat. Primeri baznih soli obuhvataju amonijum soli; alkalne metalne soli kao što je natrijum, litijum i kalijum soli; soli zemnoalkalnih metala kao što su soli aluminijuma, kalcijuma i magnezijuma; soli sa organskim bazama kao što su soli dicikloheksilamina i N-metil-D-glukamin; i soli sa aminokiselinama kao što su arginin, lizin, ornitin i tako dalje. Takođe, bazne grupe koje sadrže azot mogu biti kvaternizovane sa takvim sredstvima kao što su: niži alkil halidi, kao što su metil, etil, propil i butil halidi; dialkil sulfati kao što su dimetil, dietil, dibutil; diamil sulfati; halidi dugog lanca kao što su decil, lauril, miristil i stearil halidi; arilalkil halidi kao što su benzil bromid i drugi. Poželjne su netoksične fiziološki prihvatljive soli, iako druge soli mogu biti korisne, kao što je izolovanje ili prečišćavanje proizvoda.
[0047] Soli se mogu formirati na konvencionalan način, kao što je reakcija slobodnog baznog oblika proizvoda sa jednim ili više ekvivalenata odgovarajuće kiseline u rastvaraču ili medijumu u kome je so nerastvorena, ili u rastvaraču kao što je voda, koji Uklanja se in vacuo ili liofilizacijom ili zamenom anjona postojeće soli za drugi anjon na pogodnoj smoli za jonsku izmenu.
[0048] Jedinjenja Formule (I) imaju hiralne centre i tako postoje kao stereoizomeri.
Podrazumeva se da pronalazak obuhvata sve takve stereoizomere, uključujući enantiomere i dijastereoizomere. Ukoliko jedinjenja Formule (I) mogu da postoje u optički aktivnim ili racemskim oblicima, pronalazak uključuje u svoju definiciju bilo koju optički aktivnu ili racemsku formu koja poseduje iznad pomenutu aktivnost. Predmetni pronalazak obuhvata sve takve stereoizomere koji imaju aktivnost kao što je ovde definisano.
[0049] Sinteza optički aktivnih oblika može se izvesti standardnim tehnikama organske hemije koje su dobro poznate u tehnici, na primer sintezom iz optički aktivnih početnih materijala ili rezolucijom racemskog oblika. Racemati se mogu razdvojiti na pojedinačne enantiomere koristeći poznate procedure (videti, na primer, Advanced Organic Chemistry: 3. izdanje: autor J March, p104-107). Pogodna procedura uključuje formiranje dijastereomernih derivata reakcijom racemskog materijala sa hiralnim pomoćnim sredstvom, nakon čega sledi separacija, na primer hromatografijom, dijastereomera i zatim odvajanje pomoćnih vrsta. Slično tome, gore pomenuta aktivnost može se proceniti korišćenjem standardnih laboratorijskih tehnika koje se ovde navode.
1
[0050] Tako, u celoj specifikaciji, gde se upućuje na jedinjenje Formule (I), treba razumeti da termin "jedinjenje" uključuje stereoizomere, smeše stereoizomera i polimorfe koji inhibiraju aktivnost CDK9 kod ljudi ili životinja.
[0051] Stereoizomeri se mogu razdvojiti pomoću konvencionalnih tehnika, npr. hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. Enantiomeri se mogu izolovati razdvajanjem racemata, na primer frakcionom kristalizacijom, rezolucijom ili HPLC. Diastereoizomeri se mogu izolovati razdvajanjem na osnovu različitih fizičkih svojstava diastereoizomera, na primer, frakcionom kristalizacijom, HPLC ili fleš hromatografijom. Alternativno, određeni stereoizomeri mogu biti napravljeni hiralnom sintezom iz hiralnih polaznih materijala pod uslovima koji neće prouzrokovati racemizaciju ili epimerizaciju ili derivatizacijom, sa hiralnim reagensom.
[0052] Kada je obezbeđen specifični stereoizomer (bilo da je obezbeđen separacijom, hiralnom sintezom, ili drugim metodama), povoljno je da se obezbedi u suštini izolovan od drugih stereoizomera istog jedinjenja. U jednom aspektu, smeša koja sadrži određeni stereoizomer jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 30%, naročito manje od 20%, a naročito manje od 10% težine drugog stereoizomera istog jedinjenja. U drugom aspektu, smeša koja sadrži određeni stereoizomer jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 6%, naročito manje od 3%, a naročito manje od 2% težine drugog stereoizomera jedinjenja. U drugom aspektu, smeša koja sadrži određeni stereoizomer jedinjenja Formule (I) može da sadrži manje od 1%, naročito manje od 0.5%, a naročito manje od 0.3%, i još naročito manje od 0.1% po težini drugi stereoizomer jedinjenja. Tamo gde apsolutna konfiguracija izolovanih stereoizomera nije određena, stereoizomeri se mogu razlikovati metodom pripreme ili razdvajanja. Na primer, izolovani stereoizomeri mogu se razlikovati po vremenu eluiranja i označeni su, na primer, izomer 1, izomer 2, itd.
[0053] U skladu sa predmetnim pronalaskom, jedinjenja pronalaska se javljaju u brojnim strukturno različitim oblicima. Cilj ovog pronalaska je da obezbedi suštinski čiste kristalne oblike u nekim aspektima pronalaska.
[0054] Neki strukturni oblici pronalaska mogu dati prednosti. Na primer, neki oblici pronalaska mogu biti lakši za upravljanje i za čuvanje. Drugi oblici jedinjenja prema
1
pronalasku mogu biti lakši za karakterizaciju zato što postoje u dobro definisanim stanjima. Dodatno, jedinjenja prema pronalasku može biti lakše za sintezu u smislu reprodukcije i stoga lakše za upravljanje u proizvodnju punog kapaciteta.
[0055] Kada se obezbedi specifični polimorfni oblik, on je povoljno obezbeđen u suštini izolovan od drugih polimorfnih oblika istog jedinjenja. U jednom aspektu, smeša koja sadrži određeni polimorfni oblik jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 30%, naročito manje od 20%, a naročito manje od 10% težine drugog stereoizomera istog jedinjenja. U jednom aspektu, smeša koja sadrži određeni polimorfni oblik jedinjenja formule (I) može da sadrži manje od 6%, naročito manje od 3%, a naročito manje od 2% težine drugog stereoizomera istog jedinjenja. U drugom aspektu, smeša koja sadrži određeni polimorfni oblik jedinjenja Formule (I) može da sadrži manje od 1%, naročito manje od 0.5%, a naročito manje od 0.3%, i još naročito manje od 0.1% po težini drugi poliformni oblik jedinjenja.
[0056] Jedinjenja prema pronalasku mogu biti karakterisana pozicijama i intenzitetom glavnih maksimuma na difraktogramu praha rendgenskog zračenja, ali se takođe mogu naznačiti konvencionalnom FT-IR spektroskopijom. Oni se mogu koristiti za razlikovanje jednog kristalnog oblika od drugih kristalnih oblika jedinjenja. Jedinjenja pronalaska su karakterisana time što su visoko kristalna, tj. imaju veću kristalnost od drugih oblika. Pod terminom "bilo koji drugi oblik" podrazumevaju se anhidrati, hidrati, solvati i polimorfi ili njihovi amorfni oblici obelodanjenim u prethodnom stanju tehnike. Primeri bilo kojih drugih oblika jedinjenja uključuju, ali nisu ograničeni na, anhidrate, monohidrate, dihidrate, seskvihidrate, trihidrate, alkoholate, kao što su metanolati i etanolati, i njihovi polimorfi ili amorfne forme.
[0057] Jedinjenja prema pronalasku može takođe biti naznačeno preko svog broja ćelije. Jedinjenje prema pronalasku pripremljeno prema predmetnom pronalasku može se analizirati pomoću XRPD, tehnike koja je poznata sama po sebi.
[0058] Količina vode u jedinjenju može se odrediti termogravimetrijskom analizom, tehnikom koja je poznata sama po sebi.
[0059] Dodatna otelotvorenja ovog pronalaska su sledeća. Ova dodatna otelotvorenja se odnose na jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Takvi specifični
1
supstituenti mogu da se koriste, gde je to prikladno, sa bilo kojom od definicija, patentnih zahteva ili otelotvorenja koje su definisane ranije ili u daljem tekstu.
A
[0060] U jednom aspektu, A je C(R<5>).
R<5>
[0061] U jednom aspektu predmetnog pronalaska R<5>je halogen.
[0062] U jednom aspektu predmetnog pronalaska R<5>je hloro.
[0063] U jednom aspektu predmetnog pronalaska R<5>je fluoro.
[0064] U jednom aspektu predmetnog pronalaska R<5>je cijano.
R<2>
[0065] U jednom aspektu R<2>je 3-7-člani cikloalkil.
[0066] U drugom aspektu R<2>je 3-7-člani cikloalkil supstituisan sa NHCOR<10>ili R<10>.
[0067] U drugom aspektu R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHCOR<10>.
[0068] U drugom aspektu R<2>je ciklopropil supstituisan sa R<10>.
[0069] U drugom aspektu R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil.
[0070] U drugom aspektu R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil supstituisan sa NHCOR<10>.
[0071] U drugom aspektu R<2>je piperidinil.
[0072] U drugom aspektu R<2>je ciklobutil.
[0073] U drugom aspektu R<2>je ciklobutil supstituisan sa R<10>.
R<4>
[0074] U jednom aspektu R<4>je
1
[0075] U drugom aspektu R<4>je
J
[0076] U jednom aspektu J je C(R<11>) i R<11>je H.
X i Y
[0077] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0078] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži dodatni heteroatom koji je kiseonik.
[0079] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten koji sadrži dodatni heteroatom koji je azot.
[0080] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten u kojem jedan CH2je supstituisan sa dve metil grupe.
[0081] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
[0082] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten u kojem jedan CH2je supstituisan sa dve metil grupe.
[0083] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0084] U jednom aspektu X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten u kojem jedan CH2je supstituisan sa dve metil grupe.
1
[0085] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0086] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je halogen;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0087] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0088] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
2
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0089] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0090] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H;
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 6-člani heterocikloalkilni prsten.
[0091] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
A je C(R<5>);
R<5>je halogen;
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
[0092] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
[0093] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<4>je
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
[0094] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H;
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
[0095] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju piperidinilski prsten.
[0096] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
2
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H
i
X i Y zajedno sa atomima na koje su vezani formiraju piperidinilski prsten gde jedan ugljenik u prstenu može biti supstituisan sa jednim ili dva R<10>supstituenta.
[0097] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R5) i R5je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju piperazinilski prsten.
[0098] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R5) i R5je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju morfolinilski prsten.
[0099] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R5) i R5je H
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju pirolidinil gde je jedan CH2supstituisan sa dve metil grupe.
A je C(R<5>);
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0100] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je halogen;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0101] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
2
R<5>je hloro;
R<2>je 3-7-člani cikloalkil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0102] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0103] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
R<4>je
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0104] U jednom aspektu
A je C(R<5>);
R<5>je hloro;
R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>;
2
R<10>je C1-6alkil;
R<4>je
J je C(R<11>) i R<11>je H;
i
X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 7-člani heterocikloalkilni prsten.
[0105] U drugom aspektu pronalaska, dato je jedinjenje odabrano iz:
(R)-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Cis-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
(R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamida;
cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;(1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
2
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida;
N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
cis-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamida;
trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamida;
2
(1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-cijanoacetamido)cikloheksankarboksamida;
terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat;
(1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
2
(R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3 -(3 -hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3 -(cis-3 -hidroksiciklobutankarboksamido)cikloheksankarboksamid
(1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida;
(1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3 -(1 -hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
cis-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida;
Izomera 1 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 1 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksankarboksamida;
N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
1
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1R,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida;
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida;
(1R,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida; i
(1S,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida.
[0106] Jedinjenja formule (I) su korisna za njihovu sposobnost da inhibiraju aktivnost CDK9. Jedinjenja su takođe korisna za lečenje kancera kod pacijenta. U skladu sa tim aspektima pronalaska, jedinjenja Formule I ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu da se daju pacijentu koji boluje od kancera kao što su hematološke malignosti, uključujući akutnu mijeloidnu leukemiju, multipli mijelom, hroničnu limfocitnu leukemiju, difuznu veliku B-ćeliju limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što su kancer dojke, kancer pluća, neuroblastom i kancer debelog creva.
[0107] Pokazano je da jedinjenja formule (I) inhibiraju aktivnost CDK9 kao što je pokazano analizom zasnovanom na opisu testa u daljem tekstu. Iako farmakološka svojstva jedinjenja sa Formulom (I) mogu da variraju sa strukturnom promenom, tipična jedinjenja Formule (I) poseduju CDK9 inhibitornu aktivnost na IC50koncentracijama (koncentracije da se postigne 50% inhibicije) ili doze na nivou ispod 10 µM.
CDK9 test kinaze
TP koncentracija na Km
[0108] Aktivnost CDK9 je određena in vitro korišćenjem testa pomeranja mobilnosti na Caliper LC3000 čitaču (Caliper/PerkinElmer), koji meri fluorescenciju fosforilisanog i
2
nefosforilisanog fluorescentnog peptidnog supstrata i izračunava relativnu vrednost za određivanje procenta prometa. Određena je fosforilacija peptida u prisustvu i odsustvu jedinjenja od interesa. Mešavina enzima/supstrata/adenozin trifosfata (ATP) miks (3 nM CDK9/CycT1, 6 µM ATP, 1,5 µM CDK9 peptidni supstrat (FITC-X-GSRTPMI-NH2 (X: epsilon aminokaprinska kiselina)), 50 mM HEPES (pH 7.2), 1 mM ditiotreitol, 0.01% Tween 20, 50 µg/mL albumina goveđeg seruma, (konačna koncentracija testa)) (5 µl) je prethodno inkubirana sa 2 µl jedinjenja za 15 minuta na 25 °C. Reakcije su započete sa 5 µl 24 mM MgCl2(10 mM konačna koncentracija testa) u puferu (50 mM HEPES (pH 7.2), 1 mM ditiotreitola, 0.01% Tween 20, 50 µg/mL albumina goveđeg seruma, (konačna koncentracija testa) i inkubiraju na 25 °C tokom 90 minuta i reakcije su zaustavljene dodavanjem 5 µl zaustavne mešavine koja se sastoji od 65 mM HEPES (pH 7.2), 35.5 mM EDTA, 0.227% koatinskog reagensa 3 (Caliper/PerkinElmer) i 0.003 % Tween. Fosforilisani i nefosforilisani supstrat detektovan je Caliper LC3000 čitačem (Caliper/PerkinElmer) u prisustvu pufera za odvajanje koji se sastoji od 100 mM HEPES (pH 7.2), 15.8 mM EDTA, 0.1% koatinskog reagensa 3 (Caliper/PerkinElmer), 0.015% Brij-35, 5% DMSO i 5.6 mM MgCl2. CDK9 enzim je nabavljen od Carna Biosciences (Kataloški broj 04-110), CDK9 peptidni supstrat je nabavljen od Intonation (Boston, MA; napravljen po narudžbini).
[0109] IC50vrednosti su izračunate korišćenjem standardnih metoda prilagođavanja krivulji, pri čemu je maksimalni signal definisan kao promet iz inhibirane reakcije na 83.3 mM EDTA i minimalni signal je definisan kao promet iz reakcije na 0.83% DMSO.
Visoka ATP koncentracija
[0110] Testovi visokog ATP-a su izvedeni na isti način sa sledećim modifikacijama: konačna koncentracija testa CDK9 bila je 1.5 nM, a konačna koncentracija testa ATP bila je 5 mM.
MCF7 pSer2 RNAPII MOA test
[0111] Ovo je imunofluorescentni test za određivanje efekta inhibitora CDK9 na fosforilaciju RNK polimeraze II (RNAPII) na mestu Ser2 u ćelijskoj liniji karcinoma dojke, MCF7. Prvog dana, 2500 MCF7 ćelija/udubljenje je zasejano u 30 µl podloge za rast (RPMI 10% FBS 1% L-Glu P/S) u pločama sa 384 udubljenja sa čistim dnom na crnom zidu, inkubiraju se ploče preko noći na 37 °C inkubatora. Drugog dana, ćelije su tretirane sa inhibitorima CDK9 (odgovor od 7 tačaka doza u rasponu od 3 µM do 0.004 uM) korišćenjem ECHO tečnosti za rukovanje (Labcite). Posle 6-časovnog tretmana na 37 °C u inkubatoru, ćelije su fiksirane sa 30 µl/udubljenju 7.4% paraformaldehida tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi; ćelije su isprane dva puta sa PBS, zatim permeabilizovane sa 0.3% Triton X/PBS tokom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Posle ispiranja ćelija sa PBS, ćelije su inkubirane sa 1:2000 razblaženim Anti-Ser2 Phospho-RNA pol II antitelom (Covance MMS-129R) u 3% FBS/0.1% PBST preko noći na 4 °C. Sledećeg dana, ćelije su isprane dva puta sa 0.1% PBST, zatim inkubirane sa 1:1000 razblaženim Alexa Fluor 488 kozjim-antimišjim antitelom (Life Technologies A-11001) i 1:4000 razblaženim DAPI na sobnoj temperaturi u mraku. Posle 1 h inkubacije, ćelije su isprane dva puta sa 0.1% PBST, i jednom sa PBS. Ploče su zapečaćene i čitane na Acumen eX3 mikroploče citometru (TTP Labtech) da bi se procenio nivo fosforilacije u svakom udubljenju. IC50vrednosti su izračunate korišćenjem GeneData softvera za analizu (DMSO kontrola kao maksimalna i 11µM Dinaciclib kontrole kao minimum).
MV411 test aktivnosti kapsaze
[0112] Ovo je test ćelije za merenje indukcije aktivnosti kaspaze u ćelijskoj liniji akutne mijeloidne leukemije, MV411 nakon 6-časovnog tretmana sa inhibitorima CDK9. Prvog dana, 3000 MV411 ćelija/bunarić je zasijano u 50µl medijuma za rast (IMDM 10% FBS 2% L-Glu P/S) u 384 udubljenja belih ploča, inkubirane ploče u 37 °C inkubatoru preko noći. Drugog dana, ćelije su tretirane sa CDK9 inhibitorima pomoću ECHO (10 tačaka doza odgovora u rasponu od 31.5 µM do 0.001 µM). Posle 6 sati inkubacije u inkubatoru od 37 °C, dodato je po 25 µl reagensa Caspase-Glo 3/7 (Promega) po otvoru u svako udubljenje i ploče su inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta u mraku. Ploče su očitane na Infinite M200 čitaču mikroploče (Tecan) sa integracionim vremenom od 100 ms. EC50vrednosti su izračunate korišćenjem GeneData softvera za analizu (DMSO kontrola kao Min i 11 µM Dinaciclib kontrole kao Max).
Tabela I pruža podatke za testove.
Tabela I
4
[0113] U jednom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
[0114] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje ili profilaksu najmanje jednog od: hematoloških maligniteta kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni veliki B-limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što je kancer dojke, kancer pluća, neuroblastoma i kancer debelog creva.
[0115] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za lečenje kancera.
[0116] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za proizvodnju anti-proliferativnog i/ili proapoptičnog efekta kod toplokrvne životinje kao što je čovek.
[0117] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u proizvodnji leka za proizvodnju inhibitornog efekta CDK9 kod toplokrvne životinje kao što je čovek.
[0118] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za lečenje ili profilaksu najmanje jedne od hematoloških maligniteta kao što je akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni veliki B ćelijski limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što je kancer dojke, kancer pluća, neuroblastoma i kancer debelog creva.
[0119] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za proizvodnju anti-proliferativnog i/ili pro-apoptičnog efekta kod toplokrvne životinje kao što je čovek, a navedeni postupak se sastoji od davanja navedenoj životinji efikasne količine jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljiva soli.
[0120] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za proizvodnju inhibitornog efekta CDK9 kod toplokrvne životinje kao što je čovek, a navedeni postupak se sastoji od davanja navedenoj životinji efikasne količine jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0121] U drugom aspektu, obezbeđen je postupak za lečenje kancera u toplokrvnoj životinji kao što je čovek, a navedeni postupak se sastoji od davanja navedenoj životinji efikasne količine jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0122] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju barem jednog od: hematoloških maligniteta kao što su akutna mijeloidna leukemija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, difuzni veliki B-limfom, Burkitov limfom, folikularni limfom i čvrsti tumori kao što je kancer dojke, kancer pluća, neuroblastoma i kancer debelog creva.
[0123] U drugom aspektu, obezbeđen je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens.
[0124] Sastavi prema pronalasku mogu biti u obliku pogodnom za oralnu upotrebu (na primer kao tablete, lozenge, tvrde ili meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, praškovi ili granule za disperziju, sirupi ili eliksiri), za lokalnu upotrebu (na primer kao kreme, masti, gelovi, ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za davanje inhalacijom (na primer kao fino usitnjeni prašak ili tečni aerosol), za davanje insuflacijom (na primer kao fino usitnjeni prah) ili za parenteralnu upotrebu primenu (na primer kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravensko, subkutano, intramuskularno ili intramuskularno doziranje ili kao supozitorij za rektalno doziranje).
[0125] Sastavi prema pronalasku mogu se dobiti konvencionalnim postupcima koristeći konvencionalne farmaceutske ekscipijense koji su dobro poznati u tehnici. Prema tome, sastavi namenjeni za oralnu upotrebu mogu da sadrže, na primer, jedno ili više sredstava za bojenje, zaslađivanje, arome i/ili konzervanse.
[0126] Pogodni farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi za formulaciju tablete uključuju, na primer, inertne razblaživače kao što su laktoza, natrijum karbonat, kalcijum fosfat ili kalcijum karbonat; sredstva za granulaciju i dezintegraciju, kao što je kukuruzni skrob ili algenska kiselina; vezujuća sredstva kao što je skrob; sredstva za podmazivanje kao što su magnezijum stearat, stearinska kiselina ili talk; konzervansi kao što su etil ili propil p-hidroksibenzoat; i antioksidanti, kao što je askorbinska kiselina. Formulacije tableta mogu biti neobložene ili
4
obložene bilo da modifikuju njihovu dezintegraciju i naknadnu apsorpciju aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu, ili da poboljšaju njihovu stabilnost i/ili izgled, u oba slučaja, koristeći konvencionalna sredstva za oblaganje i postupke koji su dobro poznati u tehnici.
[0127] Sastavi za oralnu upotrebu mogu biti u obliku tvrdih želatinskih kapsula u kojima je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim razblaživačem, na primer, kalcijum karbonatom, kalcijum fosfatom ili kaolinom ili kao meke želatinske kapsule u kojima je aktivni sastojak pomešan sa vode ili ulja kao što je ulje kikirikija, tečni parafin ili maslinovo ulje.
[0128] Vodene suspenzije obično sadrže aktivni sastojak u finoj praškastoj formi ili u obliku nano ili mikronizovanih čestica zajedno sa jednim ili više sredstava za suspendovanje, kao što su natrijum karboksimetilceluloza, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum alginat, polivinil-pirolidon, tragakant gume i akacija gume; sredstva za dispergovanje ili vlaženje, kao što su lecitin ili proizvodi kondenzacije alkilen oksida sa masnim kiselinama (na primer polioksietil stearat), ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa dugim lancem alifatskih alkohola, na primer heptadecaetilenoksietanol, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima iz masnih kiselina i heksitola kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholima dugog lanca, na primer heptadecaetilenoksietanol, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima izvedenim iz masnih kiselina i heksitola kao što je polioksietilen sorbitol monooleat, ili proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima izvedenim iz masnih kiselina i heksitol anhidrida, na primer polietilen sorbitan monooleat. Vodene suspenzije mogu takođe da sadrže jedan ili više konzervansa kao što su etil ili propil p-hidroksibenzoat; anti-oksidanti kao što je askorbinska kiselina; sredstva za bojenje; sredstva za poboljšanje ukusa; i/ili sredstva za zaslađivanje kao što je sukroza, saharin ili aspartam.
[0129] Uljane suspenzije mogu biti formulisane suspendovanjem aktivnog sastojka u biljnom ulju kao što je ulje kikirikija, maslinovo ulje, susamovo ulje ili kokosovo ulje ili u mineralnom ulju kao što je tečni parafin. Uljane suspenzije mogu takođe sadržati sredstvo za zgušnjavanje kao što je pčelinji vosak, tvrdi parafin ili cetil alkohol. Sredstva za zaslađivanje kao što su ona koja su navedena gore, i sredstva za poboljšanje ukusa mogu se dodati da bi se obezbedio ukusan oralni preparat. Ovi sastavi mogu da se konzerviraju dodavanjem antioksidanta kao što je askorbinska kiselina.
[0130] Disperzivni praškovi i granule pogodne za pripremu vodene suspenzije dodavanjem vode obično sadrže aktivni sastojak zajedno sa sredstvom za dispergovanje ili vlaženje, agensom za suspendovanje i jednim ili više konzervansa. Prikladna sredstva za dispergovanje ili vlaženje i sredstva za suspendovanje su ilustrovana iznad. Dodatni ekscipijensi kao što su zaslađivači, sredstva za poboljšanje ukusa i boje, takođe mogu biti prisutni.
[0131] Farmaceutski sastavi pronalaska mogu takođe biti u obliku emulzija ulja u vodi. Uljana faza može biti biljno ulje, kao što je maslinovo ulje ili ulje kikirikija, ili mineralno ulje, kao što je na primer tečni parafin ili mešavina bilo kog od ovih. Pogodna emulziona sredstva mogu biti, na primer, gume koje se javljaju u prirodi, kao što su gumi akacija ili tragakant guma, prirodni fosfatidi kao što su soja, lecitin, estri ili parcijalni esteri dobijeni iz masnih kiselina i heksitol anhidrida (na primer sorbitan monooleat) i proizvodi kondenzacije navedenih parcijalnih estara sa etilen oksidom kao što je polioksietilen sorbitan monooleat. Emulzije mogu takođe da sadrže zaslađivače, arome i konzervanse.
[0132] Sirupi i eliksiri mogu biti formulisani sa agensima za zaslađivanje kao što su glicerol, propilen glikol, sorbitol, aspartam ili saharoza, i mogu takođe da sadrže sredstvo za ublažavanje, konzervans, aromu i/ili boju.
[0133] Farmaceutski sastavi mogu takođe biti u obliku sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije, koja može biti formulisana u skladu sa poznatim procedurama koristeći jedan ili više odgovarajućih disperzivnih ili vlažnih sredstava i suspendujućih sredstava, koji su pomenuti iznad. Sterilni injektabilni preparat može takođe biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer rastvor u 1,3-butandiolu.
[0134] Sastavi za davanje inhalacijom mogu biti u obliku konvencionalnog aerosola pod pritiskom, koji je raspoređen tako da raspodeli aktivni sastojak ili kao aerosol koji sadrži fino usitnjene čvrste ili tečne kapljice. Konvencionalni aerosolni potisni gasovi kao što su isparljivi fluorisani ugljovodonici ili ugljovodonici mogu da se koriste i aerosolna naprava je pogodno raspoređena tako da raspodeli određenu količinu aktivnog sastojka.
[0135] Za više informacije u vezi formulacije čitalac se upućuje na Poglavlje 25.2 u Sveska 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
[0136] Količina aktivnog sastojka koji se kombinuje sa jednim ili više ekscipijenasa da bi se proizveo jedan oblik doziranja će nužno varirati u zavisnosti od tretiranog domaćina i određenog način davanja. Na primer, formulacija namenjena za oralno davanje ljudima će generalno sadržati, na primer, od 0.5 mg do 4 g aktivnog sredstva kombinovanog sa odgovarajućom i pogodnom količinom ekscipijenasa koji može varirati od oko 5 do oko 98 procenata po težini ukupni sastav. Oblici jedinične doze će obično sadržati oko 1 mg do oko 500 mg aktivnog sastojka. Za više informacija o načinima davanja i režimima doziranja čitalac se upućuje na Poglavlje 25.3 u Sveska 5 od Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
[0137] Kao što je iznad navedeno, veličina doze koja je potrebna za terapeutsko ili profilaktičko lečenje određenog stanja bolesti će nužno varirati u zavisnosti od tretiranog domaćina, načina primene i ozbiljnosti bolesti koja se leči. Može se koristiti dnevna doza u rasponu od 0.1-50 mg/kg. Shodno tome, optimalna doza može biti određena od strane lekara koji leči određenog pacijenta.
[0138] Jedinjenja pronalaska mogu se dalje davati u kombinaciji sa terapeutski efikasnom količinom jednog ili više sredstava za lečenje kancera, gde primeri sredstava uključuju, kao što su radijacija, alkilirajući sredstva, inhibitori angiogeneze, antitela, antimetaboliti, antimitotici, antiproliferati, antivirusna sredstva, inhibitori aurora kinaze, aktivatori smrti ćelije (na primer, inhibitori Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Bfl-1 ili Mcl-1), aktivatori receptora smrti, inhibitori Bcr-Abl kinaze, BET (bromodomain) inhibitori, BiTE (Bi-Specifični T-ćelijski angažmani) antitela, konjugati leka za antitela, modifikatori biološkog odgovora, inhibitori ciklin-zavisne kinaze, inhibitori ćelijskog ciklusa, inhibitori ciklooksigenaze-2, DVD (antitela sa dvostrukom varijabilnom domenom), inhibitori receptora za leukemijski virusni onkogen (ErbB2), inhibitori faktora rasta, inhibitori proteina toplotnog šoka (HSP)-90, inhibitori histon deacetilaze (HDAC), hormonske terapije, imunološki, inhibitori inhibitora apoptoznih proteina (IAPs), interkalirajući antibiotici, inhibitori kinaze, inhibitori kinezina, inhibitori Jak2, meta sisarskih inhibitora rapamicina, mikroRNK inhibitori, multivalentni vezujući proteini, nesteroidni antiinflamatorni lekovi (NSAID), inhibitori poli ADP (adenozin
4
difosfat)-riboza-polimeraza (PARP), hemoterapeutici platine, inhibitori polo-slične kinaze (Plk), inhibitori fosfoinozitid-3 kinaze, inhibitori proteozoma, analozi purina, analozi pirimidina, inhibitori receptora tirozin kinaze, etinoidi/deltoidi biljni alkaloidi, male inhibitorne ribonukleinske kiseline (siRNK), inhibitori topoizomeraze, inhibitori ubikvitin ligaze i slično, i u kombinaciji sa jednim ili više ovih sredstava.
[0139] Alkilirajuća sredstva uključuju altretamin, AMD-473, AP-5280, apazikuone, bendamustin, brostalicin, busulfan, cisplatin, karboplatin, karbokun, karmustin (BCNU), hlorambucil, CLORETAZINE® (laromustin, VNP 40101M), ciklofosfamid, dakarbazin, estramustin, fotemustin, glufosfamid, ifosfamid, KW-2170, lomustin (CCNU), mafosfamid, melfalan, mitobronitol, mitolaktol, nimustin, azotni senf N-oksid, nitrozoureje, oksaliplatin, ranimustin, temozolomid, tiotepa, TREANDA® (bendamustin), treosulfan, trofosfamid slično.
[0140] Inhibitori angiogeneze obuhvataju endotelni-specifični receptor, (Tie-2) inhibitori, inhibitori receptora epidermalnog faktora (EGFR), inhibitori receptora za rast insulina (2), inhibitore matrične metaloproteinaze-2 (MMP-2), matrične metaloproteinaze-9 (MMP-9) inhibitori, inhibitori receptora faktora rasta (PDGFR), trombospondinski analozi, inhibitori tirozin kinaze (VEGFR) vaskularnog endotelnog faktora rasta, inhibitori ALK i slično.
[0141] Antimetaboliti uključuju ALIMTA® (pemetreksed dinatrijum, LI231514, MTA), 5-azacitidin, KSELODA® (kapecitabin), karmofur, LEUSTAT® (kladribin), klofarabin, citarabin, citarabin ocfosfat, citosin arabinozid, decitabin, deferoksamin, doksifluridin, elfornitin, EIKAR (5-etinil-1-β-D-ribofuranosilimidazol-4-karboksamid), enocitabin, etenilcitidin, fludarabin, 5-fluorouracil sam ili u kombinaciji sa leukovorinom, GEMZAR® (gemcitabin), hidroksiureom, ALKERAN® (melfalan), merkaptopurinom, 6-merkaptopurin ribozid, metotreksat, mikofenolna kiselina, nelarabin, nolatreksed, ocfosfat, pelitreksol, pentostatin, pemekstred, raltitreksed, ribavirin, triapin, trimetreksat, S-1, tiazofurin, tegafur, TS-1, vidarabin, UFT i slično.
[0142] Bcl-2 proteinski inhibitori obuhvataju ABT-199, AT-101 ((-)gosipol), GENASENSE® (G3139 ili oblimersen (Bcl-2-ciljani antisens oligonukleotid)), IPI-194, IPI-565, N-(4-(4-((4'-hloro(1,1'-bifenil)-2-il)metil)piperazin-1-il)benzoil)-4-(((1R)-3-(dimetilamino)-1-((fenilsulfanil)metil)propil)amino)-3-nitrobenzenesulfonamid) (ABT-737), N-(4-(4-((2-(4-hlorofenil)-5,5-dimetil-1-cikloheks-1-en-1-il)metil)piperazin-1-il)benzoil)-4-(((1R)-3-(morfolin-4-il)-1-((fenilsulfanil)metil)propil)amino)-3-((trifluorometil)sulfonil)benzenesulfonamid (ABT-263), GX-070 (obatoklaks) i slično.
[0143] Bromodomenski inhibitori obuhvataju I-BET 762, OTX-015, CPI-203, LY294002 i slično.
[0144] CDK inhibitori obuhvataju BMI-1040, BMS-032, BMS-387, CVT-2584, flavopiridol, GPC-286199, MCS-5A, PD0332991, PHA-690509, seliciklib (CYC-202, R-roskovitin), ZK-304709 i slično.
[0145] EGFR inhibitori obuhvataju EGFR antitela , ABX-EGF, anti-EGFR imunolipozome, EGF-vakcinu, EMD-7200, ERBITUX® (cetuksimab), HR3, IgA antitela, IRESSA® (gefitinib), TARCEVA® (erlotinib ili OSI-774), TP-38, EGFR fuzioni protein, TYKERB® (lapatinib), AZD9291, i slično.
[0146] ALK inhibitori obuhvataju crizotinib, ceritinib i slično.
[0147] ErbB2 receptor inhibitora obuhvata CP-724-714, CI-1033 (canertinib), HERCEPTIN® (trastuzumab), TYKERB® (lapatinib), OMNITARG® (2C4, petuzumab), TAK-165, GW-572016 (jonafarnib), GW-282974, EKB-569, PI-166, dHER2 (HER2 vakcina), APC-8024 (HER-2 vakcina), anti-HER/2neu bispecifično antitelo, B7.her2IgG3, kao HER2 bifunkcionalna bispecifična antitela, mAB AR-209, mAB 2B-1 i slično.
[0148] Konjugati lekova antitela anti-CD22-MC-MMAF, anti-CD22-MC-MMAE, anti-CD22-MCC-DM1, CR-011-vcMMAE, PSMA-ADC, MEDI-547, SGN-19Am SGN-35, SGN-75 i slično.
[0149] Kinazni inhibitori obuhvataju Eg5 inhibitore kao što su AZD4877, ARRY-520;
CENPE inhibitori kao što su GSK923295Ai slično.
[0150] MEK inhibitori obuhvataju ARRY-142886, ARRY-438162, PD-325901, PD-98059, selumitinib, i slično.
4
[0151] Hemoterapeutici platine uključuju cisplatin, ELOXATIN® (oksaliplatin) eptaplatin, lobaplatin, nedaplatin, PARAPLATIN® (karboplatin), satraplatin, pikoplatin i slično.
[0152] VEGFR inhibitori obuhvataju AVASTIN (bevacizumab), ABT-869, AEE-788, ANGIOZYME™ (ribozom koji inhibira angiogenezu (Ribozyme Pharmaceuticals (Boulder, Colo.) i Chiron, (Emeryville, Calif.)), aksitinib (AG-13736), AZD-2171, CP-547,632, IM-862, MACUGEN (pegaptamib), NEXAVAR® (sorafenib, BAY43-9006), pazopanib (GW-786034), vatalanib (PTK-787, ZK-222584), SUTENT® (sunitinib, SU-11248), VEGF trap, ZACTIMA™ (vandetanib, ZD-6474), GA101, ofatumumab, ABT-806 (mAb-806), ErbB3 specifična antitela, BSG2 specifična antitela, DLL4 specifična antitela i C-met specifična antitela i slično.
[0153] Antitumorski antibiotici uključuju interkalirajuće antibiotike aklarubicin, aktinomicin D, amrubicin, anamicin, adriamicin, BLENOXANE® (bleomicin), daunorubicin, CAELYX® ili MYOCET® (liposomalni doksorubicin), elsamitrucin, epirbucin, glarbuicin, ZAVEDOS® (idarubicin), mitomicin C, nemorubicin , neokarzinostatin, peplomicin, pirarubicin, rebekkamicin, stimaler, streptozocin, VALSTAR® (va1Rubicin), zinostatin i slično.
[0154] DNK inhibitori popravljaju mehanizam kao što je CHK kinaza; DNK-zavisni inhibitori proteinske kinaze; inhibitori poli (ADP-riboza) polimeraza (PARP inhibitori) obuhvataju ABT-888 (veliparib), olaparib, KU-59436, AZD-2281, AG-014699, BSI-201, BGP-15, INO-1001, ONO-2231 i slično; i Hsp90 inhibitori kao što su tanespimicin i retaspimicin.
[0155] Proteazomski inhibitori uključuju VELCADE® (bortezomib), karfilzomib, MG132, NPI-0052, PR-171 i slično.
[0156] Primeri imunoloških sredstava uključuju interferone i druga sredstva za poboljšanje imunog sistema. Interferoni uključuju interferon alfa, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, interferon beta, interferon gama-la, ACTIMMUNE® (interferon gama-lb) ili interferon gamanl, njihove kombinacije i slično. Druga sredstva obuhvataju ALFAFERONE®, (IFN-α), BAM-002 (oksidovani glutation), BEROMUN® (tasonermin), BEXXAR® (tositumomab), CAMPATH® (alemtuzumab), CTLA4 (citotoksični limfocitni antigen 4), dekarbazin, denileukin, epratuzumab, GRANOCYTE® (lenograstim), lentinan, leukocitni alfa interferon,
4
imikuimod, MDX-010 (anti-CTLA-4), melanoma vakcina, mitumomab, molgramostim, MYLOTARG™ (gemtuzumab ozogamicin), NEUPOGEN® (filgrastim), OncoVAC-CL, OVAREX® (oregovomab), pemtumomab (Y-muHMFG1), PROYENGE® (sipuleucel-T), sargaramostim, sizofilan, teceleukin, THERACYS® (Bacillus Calmette-Guerin), ubenimeks, VIRULIZIN® (imunoterapeutic, Lorus Pharmaceuticals), Z-100 (Specifična supstanca Maruyama
(SSM)), WF-10 (Tetrahlorodekaokside (TCDO)), PROLEUKIN® (aldesleukin), ZADAXIN® (timalfasin), ZENAPAX® (daklizumab), ZEVALIN® (90Y-Ibritumomab tiuksetan) i slično.
[0157] Analozi pirimidina uključuju citarabin (ara C ili Arabinoside C), citozin arabinosid, doksifluridin, FLUDARA® (fludarabin), 5-FU (5-fluorouracil), floksuridin, GEMZAR® (gemcitabine), TOMUDEX® (ratitreksed), TROXATYL™ (triacetiluridin troksacitabin) i slično.
[0158] Antimitotička sredstva uključuju batabulin, epotilon D (KOS-862), N-(2-((4-hidroksifenil)amino)piridin-3-il)-4-metoksibenzenesulfonamid, iksabepilon (BMS 247550), paclitaksel, TAXOTERE® (doketaksel), PNU100940 (109881), patupilon, XRP-9881 (larotaxksel), vinflunin, ZK-EPO (sintetički epotilon) i slično.
[0159] Dodatno, jedinjenja formule (I) mogu da se kombinuju sa drugim hemoterapeutskim sredstvima kao što su ABRAXANE™ (ABI-007), ABT-100 (inhibitor farnesil transferaze), ADVEXIN® (Ad5CMV-p53 vakcina), ALTOCOR® ili MEVACOR® (lovastatin), AMPLIGEN® (poli I:poli C12U, sintetička RNK), APTOSYN® (eksisulind), AREDIA® (pamidronična kiselina, arglabin, L-asparaginaza, atamestan (1-metil-3,17-dion-androsta-1,4-dien), AVAGE® (tazaroten), AVE-8062 (derivat kombreastatin) BEC2 (mitumomab), kahektin ili kaheksin (faktor nekroze tumora), canvaksin (vakcina), CEAVAC® (vakcina kancera), CELEUK® (celmoleukin), CEPLENE® (histamin dihidrohlorid), CERVARIX® (vakcina protiv humanog papiloma virusa), CHOP® (C: CYTOXAN® (ciklofosfamid); H: ADRIAMYCIN® (hidroksidoksorubicin); O: Vinkristin (ONCOVIN®); P: prednizon), CYPAT™ (ciproteron acetat), kombrestatin A4P, DAB(389)EGF (katalitički i translokacijski domeni difterijskog toksina fuzionisani preko a His-Ala veznik na humani epidermalni faktor rasta) ili TransMID-107R™ (toksini difterije), dakarbazin, daktinomicin, 5,6-
4
dimetilksantenon-4-sirćetna kiselina (DMXAA), eniluracil, EVIZON™ (skualamine laktat), DIMERICINE® (T4N5 lipozomski losion), diskodermolid, DX-8951f (ekatecan mesilat), enzastaurin, EPO906 (epitilon B), GARDASIL® (kuadrivalent humani papilomavirusi (Tipovi 6, 11, 16, 18) rekombinantna vakcina), GASTRIMMUNE®, GENASENSE®, GMK (konjugat vakcina gangliozida), GVAX® (vakcina protiv kancera prostate), halofuginon, histerelin, hidroksikarbamid, ibandronska kiselina, IGN-101, IL-13-PE38, IL-13-PE38QQR (cintredekin besudotoks), IL-13-pseudomoni eksotoksin, interferon-a, interferon-y, JUNOVAN™ ili MEPACT™ (mifamurtide), lonafarnib, 5,10-metilenetetrahidrofolat, miltefosin (heksadecilfosfoholin), NEOVASTAT® (AE-941), NEUTREXIN® (trimetreksat glucuronat), NIPENT® (pentostatin), ONCONASE® (enzim ribonukleaze), ONCOPHAGE® (vakcina protiv melanoma), ONCOVAX® (IL-2 Vakcina), ORATHECIN™ (rubitekan), OSIDEM® (ćelijski lek na bazi antitela), OVAREX® MAb (mišje monoklonsko antitelo), paklitaksel, PANDIMEX™ (aglikon saponini iz ginsenga koji sadrže 20 (S) protopanaksadiol (aPPD) i 20(S)protopanaksatriol (aPPT)), panitumumab, PANVAC®-VF (istraživačka vakcina protiv raka), pegaspargaza, PEG Interferon A, fenoksodiol, prokarbazin, rebimastat, REMOVAB® (catumaksomab), REVLIMID® (lenalidomid), RSR13 (efaproksiral), SOMATULINE® LA (lanreotid), SORIATANE® (acitretin), staurosporin (Streptomyces staurospores), talabostat (PT100), TARGRETIN® (beksarotene), TAXOPREXIN® (DHA-paclitaksel), TELCYTA® (kanfosfamid, TLK286), temilifen, TEMODAR® (temozolomid), tesmilifen, talidomid, THERATOPE® (STn-KLH), timitak (2-amino-3,4-dihidro-6-metil-4-okso-5-(4-piridiltio)kuinazolin dihidrohlorid), TNFERADE™ (adenovektor: DNK nosač koji sadrži gen nekroze tumora faktor -a), TRACLEER® ili ZAVESCA® (bosentan), tretinoin (Retin-A), tetrandrin, TRISENOX® (arsenični trioksid), VIRULIZIN®, ukrain (derivat alkaloida iz veće biljke kelandin), vitakin (anti-alphavbeta3 antitelo), XCYTRIN® (moteksafin gadolinium), XINLAY™ (atrasentan), XYOTAX™ (paclitaksel poliglumeks), YONDELIS® (trabectedin), ZD-6126, ZINECARD® (deksrazoksane), ZOMETA® (zolendronična kiselina), zorubicin i slično.
[0160] Ovde, gde se koristi termin "kombinacija", podrazumeva se da se ovo odnosi na istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno davanje. U jednom otelotvorenju pronalaska "kombinacija" se odnosi na simultano davanje. U drugom otelotvorenju pronalaska "kombinacija" se odnosi na odvojeno davanje. U daljem otelotvorenju pronalaska "kombinacija" se odnosi na uzastopno davanje. Kada je davanje sekvencijalno ili odvojeno, odlaganje primene druge komponente ne bi trebalo da bude takvo da izgubi blagotvorni
4
efekat kombinacije. Takvi kombinovani proizvodi koriste jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, u okviru opsega doza koji je ovde opisan i drugog farmaceutski aktivnog sredstva u okviru njegovog odobrenog opsega doza. Kombinovana terapija može da obezbedi "sinergiju" i dokaže "sinergetsko", tj. efekat postignut kada su aktivni sastojci koji se koriste zajedno veći od sume efekata koji proizilaze iz upotrebe jedinjenja odvojeno. Sinergistički efekat se može postići kada su aktivni sastojci: (1) zajednički formulisan i administriran ili dostavljen istovremeno u kombinovanoj formulaciji jedinične doze; (2) isporučuje se naizmenično ili paralelno kao odvojene formulacije; ili (3) nekim drugim režimom. Kada se dostavljaju u alternativnoj terapiji, sinergistički efekat se može postići kada se jedinjenja primenjuju ili isporučuju sekvencijalno, npr., različitim injekcijama u odvojenim špricevima. Generalno, tokom alternativne terapije, efektivna doza svakog aktivnog sastojka se daje sekvencijalno, tj., serijski, dok se u kombinovanoj terapiji efektivne doze dva ili više aktivna sastojaka daju zajedno.
[0161] U bilo kojem od gore pomenutih farmaceutskih sastava, postupaka, metoda, upotreba, medikamenta i proizvodnih karakteristika ovog pronalaska, primenjuju se bilo koja alternativna otelotvorenja jedinjenja pronalaska opisanih ovde.
[0162] U drugom aspektu ovog pronalaska, jedinjenja formule (I) su pripremljena u skladu sa sledećim opštim načinima.
Način A
[0163] Neka jedinjenja formule (I) mogu se dobiti iz drugog jedinjenja formule (I); na primer, ako sadrži amino grupu, acilovanjem (uslovi dobro poznati u tehnici), gde su A, R2 i R4 definisani za formulu (I).
[0164] Treba primetiti da se pogodne zaštitne grupe mogu koristiti na bilo kom putu kao što su oni dobro poznati u tehnici: na primer, za amino: t-butoksikarbonil ili (trimetilsilil)etoksimetil (SEM); za hidroksil: tert-butildimetilsilil ili tetrahidropiran-2-il. Uslovi za deprotekciju su dobro poznati u tehnici.
Način B
4
[0165] Druga jedinjenja formule (I) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (II):
gde je L atom halogena (na primer hloro) ili triflatna grupa sa jedinjenjem formule (III):
[0166] Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima dobro poznatim stručnjacima, na primer u prisustvu paladijumskog izvora (na primer tetrakis (trifenilfosfin)paladijum(0) ili paladijum(II) acetata), opciono fosfinski ligand (na primer Xantphos), i pogodna baza (na primer cezijum karbonat).
[0167] Jedinjenje formule (II) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (IV):
i jedinjenje Formule (V):
R<4>-L
Y je grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer borna kiselina, estar borne kiseline pinakola ili kalijum trifluoroborat), a L je atom halogena (na primer hloro ili bromo) ili triflatna grupa. Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima dobro poznatim stručnjacima, na primer u prisustvu izvora paladijuma i fosfin liganda (na primer tetrakis (trifenilfosfin)paladijum(0),[l,l'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), takođe poznat kao Pd(dppf)Cl2i pogodna baza (na primer cezijum karbonat ili kalijum fosfat)).
[0168] Alternativno, jedinjenje formule (II) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (XIV):
i jedinjenje Formule (IX):
R<4>-Y
Y je boronska kiselina, boronski estar ili kalijum trifluoroboratna grupa (na primer borna kiselina, pinakol estar boronske kiseline, ili kalijum trifluoroborat), L<1>i L<2>su atom halogena ili triflat grupa, gde je L<1>manje reaktivan nego L<2>tokom spajanja reakcija, na primer gde je L<1>hloro i L<2>je jodo. Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjacima, na primer u prisustvu izvora paladijuma i fosfinskog liganda (na primer, XPhos prekatalizator druge generacije, i pogodna baza, na primer kalijum fosfat).
[0169] Alternativno, jedinjenje formule (II) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (XIV) i jedinjenje Formule (XII): R<4>-H, gde su L<1>i L<2>atom halogena ili triflat grupa, gde je L<1>manje reaktivan nego L<2>tokom reakcije pridruživanja, na primer gde je L<1>hloro i L<2>je jod, reakcijom "CH aktivacije", na primer kao što je opisano u Primeru Međujedinjenje 50.
Način C
[0170] Neka jedinjenja formule (I) mogu, na primer, biti pripremljena reakcijom jedinjenja formule (VI)
sa jedinjenjem Formule (VII):
[0171] Pogodni agensi za združivanje za ovu reakciju uključuju, na primer, 1-hloro-N, N, 2-trimetilprop-l-en-1-amin, 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N, N, N', N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat, takođe poznat kao HATU, TBTU (2-(lH-benzo[d][l, 2,3] triazol-l-il)-
1
1,1,3,3-tetrametilizounium tetrafluoroborat), 1-(3)-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohloridni jon ili 1-propanfosfonski anhidrid (T3P), poželjno 1-hloro-N, N, 2-trimetilpropl-en-1-amin ili 1-propanfosfonski anhidrid (T3P).
[0172] Reakcija se pogodno izvodi u prisustvu pogodne baze. Pogodna baza je, na primer, organska aminska baza kao što je, na primer, piridin, 2,6-lutidin, kolidin, 4-dimetilaminopiridin, trietilamin, N-metilmorfolin, diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en, diizopropiletil amin, ili, na primer, karbonat ili hidroksid alkalnih ili zemnoalkalnih metala, na primer natrijum karbonat, kalijum karbonat, kalcijum karbonat, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid;
[0173] Jedinjenje formule (VI) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (VII):
i jedinjenje Formule (IX):
R<4>-Y
L je atom halogena (na primer joda ili broma) ili triflatna grupa.
Y je grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer borna kiselina, estar borne kiseline pinakola ili kalijum trifluoroborat)
[0174] Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima dobro poznatim stručnjacima, na primer u prisustvu izvora paladijuma i fosfin liganda (na primer tetrakis (trifenilfosfin)paladijum(0),[l,l'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), takođe poznat kao Pd(dppf)Cl2i pogodna baza (na primer cezijum karbonat ili kalijum karbonat).
[0175] Jedinjenje formule (VIII) može se dobiti reakcijom jedinjenja formule (X) reakcijom sa amonijakom (kao što je opisano u Primerima 2 i 86).
2
L je atom halogena (na primer joda ili broma) ili triflatna grupa.
[0176] Podrazumeva se da jedinjenje Formule (VIII) može biti transformisano u drugo jedinjenje Formule (VIII), na primer, kao što je ilustrovano u Primeru 39 (priprema 6-amino-4-hlornikotinonitrila).
Način D
[0177] Druga jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (IX) R4-Y:
L je atom halogena (na primer joda, broma ili hlora) ili triflatna grupa.
Y je grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer borna kiselina, estar borne kiseline pinakola ili kalijum trifluoroborat)
[0178] Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjacima, na primer u prisustvu izvora paladijuma i fosfin liganda (na primer: XPhos prekatalizator druge generacije takođe poznat kao hlor (2-dicikloheksilfosfino-2', 4', 6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II), ili[l, l'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II)) i pogodna baza (na primer kalijum fosfat ili cezijum karbonat).
[0179] Alternativno, jedinjenja formule (I) mogu se, na primer, pripremiti reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (XII) R4-H, reakcijom "CH aktivacije", kao što je opisano u primeru 7 ili 22.
[0180] Jedinjenje formule (XI) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (VIII)
L je atom halogena (na primer joda, broma ili hlora) ili triflatna grupa.
sa jedinjenjem Formule (VII):
[0181] Pogodna sredstva za pridruživanje za ovu reakciju uključuju, na primer, O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, N', N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat, HATU, TBTU (2-(lH-benzo[d][1] 2,3,3-triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilizounium tetrafluoroborat) ili 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid jon, poželjno 1-hloro-N, N, 2-trimetilprop-1-en-1-amin i 1-propanfosfonski anhidrid (T3P).
[0182] Reakcija se pogodno izvodi u prisustvu pogodne baze. Pogodna baza je, na primer, organska aminska baza kao što je, na primer, piridin, 2,6-lutidin, kolidin, 4-dimetilaminopiridin, trietilamin, N-metilmorfolin, diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en, diizopropiletil amin, ili, na primer, karbonat ili hidroksid alkalnih ili zemnoalkalnih metala, na primer natrijum karbonat, kalijum karbonat, kalcijum karbonat, natrijum hidroksid ili kalijum hidroksid. Podrazumeva se da bilo koje jedinjenje Formule (XI) može da se transformiše u drugo jedinjenje Formule (XI), na primer, acilovanjem amino grupe kao u Primeru 39 ili 75.
Način E
[0183] Neka jedinjenja formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XIII) sa jedinjenjem formule (V) R4-L:
Y je grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer borna kiselina, estar borne kiseline pinakola ili kalijum trifluoroborat)
L je atom halogena (na primer joda ili broma) ili triflatna grupa.
[0184] Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima dobro poznatim stručnjacima, na primer u prisustvu izvora paladijuma i fosfin liganda (na primer tetrakis (trifenilfosfin)paladijum(0),[l,l'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II), takođe poznat kao Pd(dppf)Cl2i pogodna baza (na primer cezijum karbonat ili kalijum fosfat).
4
[0185] Jedinjenja formule (XIII) mogu, na primer, biti pripremljena reakcijom jedinjenja formule (XI) kao što je opisano u Formuli 16.
Način F
[0186] Neka jedinjenja formule (I) mogu, na primer, biti pripremljena reakcijom "ciklizacije" jedinjenja formule (XV):
gde R<40>je
gde su X<1>i Y<1>definisani kao što je (XV) je prekursor u reakciji ciklizacije, pod uslovom da X<1>i Y<1>zajedno sa atomima na koje su vezani ne formiraju prsten. Na primer, X<1>ili Y<1>mogu biti vodonik.
[0187] Reakcija "ciklizacije" može se izvesti pod standardnim uslovima dobro poznatim stručnjacima. Kao ilustracija, Primeri 78 i 82 opisuju poseban primer takve reakcije "ciklizacije".
[0188] Jedinjenja formule (XV) mogu da se dobiju analognim putevima puteva od A do E, koji su opisani za dobijanje jedinjenja formule (I). Kao primer, analogno sa putom D, jedinjenja formule (XV) mogu se dobiti reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (XVI): R<40>-Y:
L je atom halogena (na primer joda, broma ili hlora) ili triflatna grupa.
Y je grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer borna kiselina, estar borne kiseline pinakola ili kalijum trifluoroborat)
[0189] Alternativno, jedinjenja formule (XV) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja formule (XI) sa jedinjenjem formule (XVII) R<40>-H, reakcijom "C-H aktivacije".
[0190] Reakcija se može izvesti pod standardnim uslovima dobro poznatim stručnjacima, kao što je opisano u Načinu D.
[0191] Jedinjenja formule (IX) R4-Y, gde je Y grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer borna kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluoroborat), su ključna međujedinjenja u nekim sintetskim putevima prema jedinjenju formula (I).
[0192] Postupci za sintezu jedinjenja formule (IX) iz jedinjenja formule (V) R4-L, gde L je atom halogena (na primer jod, brom ili hlor) ili triflatna grupa, uključuju reakcije metalacije/borilacije, kao što je ilustrovano sa Primeri 23 i 85, i paladijum-katalizovane veze, kao što je ilustrovano u Primeru 14.
[0193] Jedinjenje formule (V) R4-L se obično pristupa iz jedinjenja formule (XII) R4-H, reakcijom halogeniranja.
[0194] Jedinjenja formule (IX) R4-Y, gde je Y grupa organoborne kiseline, organobornog estra ili kalijum trifluoroborata (na primer, borna kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluoroborat) mogu se takođe direktno pristupiti iz jedinjenja formule (XII) R4-H, reakcijom "CH aktivacije", kao što je ilustrovano u Primeru 49. Tipični uslovi koriste iridijumski katalizator (tipično metoksi (ciklooktadien)iridijum(I)dimer) i ligand (obično 4,4'-di-terc-butil-2,2'-dipiridil ili 3,4,7,8-tetrametil-1,10-fenantrolina) sa izvorom bora (tipično 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan) u inertnom rastvaraču (tipično THF ili dioksan) na oko 50 °C do 90 °C.
[0195] Podrazumeva se da se određeni različiti supstituenti u prstenu u jedinjenjima prema predmetnom pronalasku mogu uvesti standardnim reakcijama aromatične supstitucije ili generisati konvencionalnim modifikacijama funkcionalne grupe bilo pre ili neposredno nakon gore pomenutih procesa, i kao takve su uključene u procesni aspekt pronalaska. Takve reakcije i modifikacije uključuju, na primer, uvođenje supstituenta pomoću reakcije aromatične supstitucije, redukcije supstituenata, alkilacije supstituenata i oksidacije supstituenata. Reagensi i uslovi reakcije za takve postupke su dobro poznati u hemijskoj struci. Posebni primeri reakcija aromatične supstitucije obuhvataju uvođenje nitro grupe korišćenjem koncentrovane azotne kiseline, uvođenje acil grupe koristeći, na primer, acil halid i Luisovu kiselinu (kao što je aluminijum trihlorid) pod Friedelovim Craftovim uslovima; uvođenje alkil grupe koristeći alkil halid i Luisovu kiselinu (kao što je aluminijum trihlorid) pod Friedel Craftovim uslovima; i uvođenje halogene grupe. Posebni primeri modifikacija uključuju redukciju nitro grupe u amino grupu, na primer, katalitičkom hidrogenacijom sa nikal katalizatorom ili tretmanom gvožđem u prisustvu hlorovodonične kiseline uz zagrevanje; oksidacija alkiltio do alkilsulfinila ili alkilsulfonila.
[0196] Takođe će biti jasno da u nekim od ovde pomenutih reakcija može biti neophodno/poželjno da se zaštite bilo koje osetljive grupe u jedinjenjima. Slučajevi u kojima je zaštita neophodna ili poželjna i pogodne metode za zaštitu su poznate stručnjacima u ovoj oblasti. Konvencionalne zaštitne grupe se mogu koristiti u skladu sa standardnom praksom (za ilustraciju vidi Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Prema tome, ako reaktanti uključuju grupe kao što su amino, karboksi ili hidroksi, može biti poželjno zaštititi grupu u nekim od gore pomenutih reakcija.
[0197] Pogodna zaštitna grupa za amino ili alkilamino grupu je, na primer, acil grupa, na primer alkanoil grupa kao što je acetil, alkoksikarbonil grupa, na primer metoksikarbonil, etoksikarbonil ili terc-butoksikarbonil grupa, arilmetoksikarbonil grupa, na primer benziloksikarbonil, ili aroilna grupa, na primer benzoil. Uslovi uklanjanja zaštite za iznad navedene zaštitne grupe će nužno varirati sa izborom zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa kao što je alkanoil ili alkoksikarbonilna grupa ili aroilna grupa može biti uklonjena, na primer, hidrolizom sa pogodnom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, acil grupa kao što je terc-butoksikarbonil grupa može da se ukloni, na primer, tretiranjem sa pogodnom kiselinom kao što je hlorovodonična, sumporna ili fosforna kiselina ili trifluorosirćetna kiselina i arilmetoksikarbonil grupa kao što je benziloksikarbonilna grupa može biti uklonjena, na primer, hidrogenacijom preko katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku, ili tretiranjem sa Luisovom kiselinom, na primer bor trihloridom. Pogodna alternativna zaštitna grupa za primarnu amino grupu je, na primer, ftaloil grupa, koja se može ukloniti tretmanom sa alkilaminom, na primer dimetilaminopropilaminom ili hidroksietaminom, ili sa hidrazinom.
[0198] Pogodna zaštitna grupa za hidroksi grupu je, na primer, acil grupa, na primer alkanoil grupa kao što je acetil, aroilna grupa, na primer benzoil, ili arilmetilna grupa, na primer benzil. Uslovi uklanjanja zaštite za iznad navedene zaštitne grupe će nužno varirati sa izborom zaštitne grupe. Tako, na primer, acilna grupa kao što je alkanoil ili aroilna grupa može biti uklonjena, na primer, hidrolizom sa pogodnom bazom kao što je hidroksid alkalnog metala, na primer litijum ili natrijum hidroksid. Alternativno, arilmetilna grupa kao što je benzil grupa može biti uklonjena, na primer, hidrogenacijom preko katalizatora kao što je paladijum na ugljeniku.
[0199] Pogodna zaštitna grupa za karboksi grupu je, na primer, grupa za esterifikaciju, na primer metil ili etil grupa koja se može ukloniti, na primer, hidrolizom sa bazom kao što je natrijum hidroksid, ili na primer terc-butil grupa koja se može ukloniti, na primer, tretmanom sa kiselinom, na primer organskom kiselinom kao što je trifluorosirćetna kiselina, ili na primer benzil grupom koja se može ukloniti, na primer, hidrogenacijom preko katalizatora kao što je paladijum na ugljenik.
[0200] Zaštitne grupe mogu da se uklone u bilo kojoj pogodnoj fazi u sintezi korišćenjem konvencionalnih tehnika koje su dobro poznate u hemijskoj struci.
[0201] Prema daljem aspektu pronalaska obezbeđen je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je ovde definisano, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosačem.
[0202] Podrazumeva se da se jedinjenje Formule (I) može dobiti razdvajanjem (npr. hiralnom separacijom) iz smeše jedinjenja Formule (I); za Primere i 2, 41 i 42, 43 i 14, 59 i 60, 61 i 62, 64 i 65, 68 i 69, 70 i 71, 72 i 73, 79 i 80, 83 i 84.
[0203] Neka jedinjenja Formula (II), (V), (VI), (IX), (XI), (XII), (XIII), (XV),
(XVI) i (XVII) su novija.
[0204] (1S,3R)-3-(acetamino)cikloheksankarboksilna kiselina je ključni intermedijer u sintezi nekih jedinjenja formule (I). Sledeći put (šematski prikazan u primeru 85), koji daje pristup ovom ključnom međujedinjenju u enantiomerno čistom obliku, je nov i koristan.
Ovaj put se zasniva na enzimatskoj enantioselektivnoj acilaciji izopropil 3-aminocikloheksilkarboksilata (koristeći Novozim 435) kako je ilustrovano ispod:
PRIMERI
[0205] Aspekti ovog obelodanjivanja a mogu se dalje definisati upućivanjem na sledeće neograničavajuće primere, koji detaljno opisuju pripremu određenih jedinjenja i intermedijera iz ovog pronalaska i postupke za korišćenje jedinjenja iz ovog pronalaska. Stručnjacima u ovoj oblasti biće očigledno da se mnoge modifikacije, kako materijala tako i metoda, mogu praktikovati bez odstupanja od obima ovog obelodanjivanja.
[0206] Ukoliko nije drugačije navedeno:
(i) operacije su izvršene na temperaturi okoline, tj. u opsegu od 17 do 25 °C i pod atmosferom inertnog gasa kao što je azot, ako nije drugačije navedeno;
(ii) isparavanja su izvedena rotacionim isparavanjem ili upotrebom Genevac opreme ili Biotage v10 isparivača in vacuo i postupci obrade su izvedeni nakon uklanjanja zaostalih čvrstih materija filtriranjem;
(iii) pročišćavanje fleš hromatografijom je izvedeno na automatizovanoj Teledyne Isco CombiFlash® Rf ili Teledine Isco CombiFlash® Companion® koristeći prethodno upakovane RediSep Rf Gold ™ Silica kolone (20-40 µm, sferne čestice), GraceResolv ™ kertridže (Davisil® silika) ili Kertridži sa siliciklom (40 -63 µm).
(iv) preparativna hromatografija je izvedena na Gilson prep HPLC instrumentu sa UV kolekcijom; alternativno, preparativna hromatografija je izvedena na Waters AutoPurification HPLC-MS instrumentu sa MS-i UV-aktiviranim sakupljanjem;
(v) hiralna preparativna hromatografija je izvedena na Gilson instrumentu sa UV kolekcijom (233 injektor/frakcijski sakupljač, 333 & 334 pumpe, 155 UV detektor) ili Varian Prep Star instrument (2 x SD1 pumpe, 325 UV detektor, 701 skupljač frakcija ) pumpa koja radi sa ubrizgavanjem Gilson 305; alternativno, hiralna preparativna hromatografija je izvedena na Waters Prep 100 SFC-MS instrumentu sa MS-i UV-aktiviranim sakupljanjem ili Thar MultiGram III SFC instrument sa UV kolekcijom.
(vi) prinosi, ako su prisutni, nisu nužno maksimalno dostižni;
(vii) generalno, strukture krajnjih produkata Formule I su potvrđene spektroskopijom nuklearne magnetne rezonance (NMR); Vrednosti NMR hemijskog pomaka su merene na delta skali[spektri protonske magnetne rezonance su određeni pomoću instrumenta Bruker Avance 500 (500 MHz) ili Bruker Avance 400 (400 MHz)]; merenja su vršena na temperaturi okoline, ako nije drugačije naznačeno; korišćene su sledeće skraćenice: s, singlet; d, duplet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, duplet dupleta; ddd, duplet dupleta; dq, dupleta kvarteta; dt, dupleta tripleta; tt, triplet tripleta; p, pentet; br, široki signal.
(viii) generalno, krajnji proizvodi Formule I su takođe karakterisani masenom spektroskopijom nakon tečne hromatografije (LCMS ili UPLC); UPLC je sproveden korišćenjem Waters UPLC opremljenog sa Waters SQ masenim spektrometrom (kolona temp 40, UV = 220-300 nm, Maseni Spek = ESI sa pozitivnim/negativnim prebacivanjem) pri brzini protoka od 1 mL/min korišćenjem sistema rastvarača 97% A+3% B do 3% A do 97% B preko 1.50 min (ukupno vreme rada sa ekvilibracijom nazad na početne uslove itd.1.70 min), gde je A = 0.1% mravlja kiselina u vodi (za rad sa kiselinom) ili 0.1% amonijaka u vodi (za osnovni rad) B = acetonitril. Za analizu kiseline, korišćena kolona je bila Waters Acquity HSS T31.8 µm 2.1 x 50 mm, za osnovnu analizu korišćena kolona je bila Waters Acquity BEH 1.7 µm 2.1 x 50 mm. Alternativno, UPLC je izveden upotrebom Waters UPLC opremljenog sa Waters SQ masenim spektrometrom (kolona temp 30, UV = 210-400 nm, Maseni Spek = ESI sa pozitivnim/negativnim prebacivanjem) pri brzini protoka od 1 mL/min korišćenjem gradijent rastvarača od 2 do 98% B preko 1.5 minuta (ukupno vreme rada sa ekvilibracijom nazad na početne uslove: 2 minuta), gde je A = 0.1% mravlja kiselina u vodi i B = 0.1% mravlja kiselina u acetonitrilu (za rad sa kiselinom) ili A = 0.1% amonijum hidroksida u vodi i B = acetonitril (za osnovni rad). Za analizu kiseline upotrebljena kolona je Waters Acquity HSS T31.8 µm 2.1 x30 mm, za baznu analizu korišćena kolona je Waters Acquity BEH C181.7 µm 2.1x30 mm; LCMS je izveden upotrebom Waters Alliance HT (2795) opremljen sa Waters ZQ ESCi masenim spektrometrom i Phenomenex Gemini -NX (5 µm x 2.1 mm) kolonom pri protoku od 1.1 mL/min 95% A do 95% B preko 4 minuta sa zastojem od 0.5 minuta Modifikator je držan na konstantnoj 5% C (50:50 acetonitril: voda 0.1% mravlja kiselina) ili D (50:50 acetonitril: voda 0.1% amonijum hidroksid u zavisnosti od toga da li je bio kiselinski ili bazni postupak. Podrazumeva se da, ukoliko nije drugačije naznačeno, prikazan je samo najkarakterističniji maseni maksimum, zaokružen na donju jedinicu. Tipično, kada postoji nekoliko izotopa jednog atoma, prijavljuje se samo najniži najčešći izotop (npr.<35>Cl,<79>Br,<12>C...)
(ix) prečišćavanje jonske izmene se generalno izvodi pomoću SCX-2 (Biotage) patrone. (x) srednja čistoća je procenjena tankoslojnom hromatografijom, masenim spektrom, HPLC (tečna hromatografija visoke performanse) i/ili NMR analizom;
(xi) Optička rotacija se meri u stepenima;
(kii) XRPD analiza je izvedena upotrebom Bruker D4 difraktometra, koji je komercijalno dostupan od Bruker AXS Inc. ™ (Madison, Wisconsin). XRPD spektri su dobijeni montažom uzorka (približno 20 mg) materijala za analizu na jednom silicijumskom kristalnom držaču (npr. držač uzorka rendgenskog difraktograma nulte pozadine Bruker) i širenje uzorka u tanki sloj pomoću mikroskopskog slajda. Uzorak je centrifugiran na 30 obrtaja u minuti (da bi se poboljšala statistika brojanja) i ozračena rendgenskim zracima generisanim bakarnom dugom finom fokusnom cevi koja radi na 40 kV i 40 mA sa talasnom dužinom od 1.5406 angstroma (tj. oko 1.54 angstroma) Uzorak je izložen tokom 1 sekunde na 0.02 stepeni 2-teta inkrementa (kontinualni režim skeniranja) u opsegu od 2 stepena do 40 stepeni 2-theta u tetateta modu. Vreme rada je bilo 31 minuta, 41 s. Stručnjak procenjuje da vrednosti XRPD 2θ mogu da variraju u razumnom opsegu, npr. U opsegu ± 0.1°2θ . Stručnjak procenjuje da intenzitet XRPD može varirati kada se meri u suštini istom kristalnom obliku iz više razloga, uključujući, na primer, poželjnu orijentaciju. Principi XRPD su opisani u publikacijama, kao što su, na primer, Giacovazzo, C. i dr. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; i Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York. Pošto su relativni intenziteti manje pouzdani i umesto numeričkih, koriste se sledeće definicije.
1
Neki dodatni veoma slabi maksimumi nađeni na difraktogramu su izostavljeni.
(xiii) DSC je izveden upotrebom modela TA Instruments Q1000. Uzorak (približno 2 mg) je izvađen u aluminijumsku posudu za uzorke i prebačen u DSC. Instrument je pročišćen azotom na 50 mL/min i podaci su sakupljeni između 25 °C i 300 °C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10 °C/min. DSC analiza je izvedena na uzorcima pripremljenim prema standardnim metodama koristeći Q SERIES ™ Q1000 DSC kalorimetar dostupan od strane TA INSTRUMENTS® (New Castle, Delaware). Instrument je pročišćen azotom na 50 mL/min i podaci su sakupljeni između 25 °C i 300 °C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10 °C/min. Termički podaci su analizirani pomoću standardnog softvera, npr. Universal v.4.5A iz TA INSTRUMENTS®.
(xiv) Termogravimetrijska analiza (TGA): TGA je izveden upotrebom modela TA Instruments Q5000. Uzorak (približno 5 mg) je stavljen u aluminijumsku posudu za uzorke i ubačen u TGA peć. Instrument je pročišćen azotom na 50 mL/min i podaci su sakupljeni između 25 °C i 300 °C, koristeći dinamičku brzinu zagrevanja od 10 °C/min. Termički podaci su analizirani pomoću standardnog softvera, npr. Universal v.4.5A iz TA INSTRUMENTS®.
(xv) Korišćene su sledeće skraćenice:
druga generacija XPhos (ili X-Phos) Prekatalizator hloro(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifeniyl)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II)
treća generacija RuPhos Prekatalizator (2-dicikloheksilfosfino-2',6'-diizopropoksi-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II) metansulfonat
aq.
vodeni
atm
atmosferski
BuLi
2
n-butil litijum
CDCl3
deutero-hloroform
CD3OD
deutero-metanol
CDI
karbonil diimidazol
Konc.
koncentrovan
DCM
dihlorometan
DIPEA
N,N-diizopropiletilamin
DMA
N,N-dimetilacetamid
DMF
N,N-dimetilformamid
DMSO
dimetil sulfoksid
DMSO-d6
deutero-dimetil sulfoksid
dppf
1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen
DSC
diferencijalna skenirajuća kalorimetrija
EtOH
etanol
EtOAc
etil acetat
HATU
1-[bis(dimetilamin)metile]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat
h
sat(i)
IPA/iPrOH
izopropil alkohol
MeCN
acetonitril
MeOH
metanol
MTBE
metil-tert-butil eter
NBS
N-bromosukcinimid
NIS
N-jodosukcinimid
NMP
N-metilpirolidin
PdCl2(dppf)
[1,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen]-dihloropaladijum(II) Pd(P(Cy)3)2Cl2
Bis(tricikloheksilfosfin)dihloropaladijum(II)
r.t.
sobna temperatura
SCX/SCX-2
jaka katjonizmenjivačka hromatografija
SEM-Cl
2-(trimetilsilil)etoksimetil hlorid
SFC
superkritična tečna hromatografija
T3P®
propan fosfonična kiselina anhidrid
TBS/TBDMS
terc-butildimetilsilil
TBS-Cl
terc-butildimetilsilil hlorid
TEA
trietilamin
4
TFA
trifluorosirćetna kiselina
TGA
termogravimetrijska analiza
THF
tetrahidrofuran
TMEDA
tetrametiletilendiamin
Xantphos
4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten
XRPD
Difrakcija praška rendgenskim zračenjem
Primer 1: (R)-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid
[0207]
[0208] TFA (2 mL, 26.0 mmol) je dodat u kapima (R)-terc-butil 3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilatu (0.40 g, 0.52 mmol) u DCM (5 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µm silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 0.1% amonijum karbonata) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane do suvoće da bi se dobio (R)-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid (22.0 mg, 11.7%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 22 °C) 1.41 -1.52 (1H, m), 1.57 -1.68 (2H, m), 1.85 -1.94 (5H, m), 2.48 -2.57 (2H, m), 2.68 -2.76 (1H, m), 2.80 -2.89 (3H, m), 2.97 -3.03 (1H, m), 3.78 -3.84 (2H, m), 7.04 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.29 (1H, s), amid i piperidin NH nisu posmatrani. m/z: ES+[M+H]+ 360.
[0209] Procedure za pripremu polaznog materijala (R)-terc-butil 3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata kao što je opisane ispod:
Pripremanje 3-(2,5-dihloropiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridina [0210]
[0211] Cezijum karbonat (3.24 g, 9.95 mmol) je dodat 3-bromo-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridinu (500 mg, 2.49 mmol), (2,5-dihloropiridin-4-il)bornoj kiselini (3.34 g, 17.4 mmol) Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(203 mg, 0.25 mmol), dioksanu (10 mL) i vodi (1 mL) pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 90 °C 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do suvoće i ponovo rastvorena u EtOAc (50 mL) pre nego što je redom isprana sa vodom (2x 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 25% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su koncentrovane do suvoće da bi se dobio 3-(2,5-dihloropiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (500 mg, 75.0%) kao braon čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 268.
Pripremanje (R)-terc-butil 3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata
[0212]
[0213] 3-(2,5-Dihloropiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (460 mg, 1.72 mmol) je dodat (R)-terc-butil 3-karbamoilpiperidin-1-karboksilat (470 mg, 2.06 mmol), Pd(PPh3)4(198 mg, 0.17 mmol), cezijum karbonat (1.68 g, 5.15 mmol), Xantphos (199 mg, 0.34 mmol) i dioksan (8 mL) pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 120 °C 2 h.
Reakciona smeša je zatim filtrirana i dobijeni filtrat je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 50% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (R)-terc-butil-3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilat (400 mg, 50.7%) kao žuto ulje. m/z: ES+[M+H]+ 460.
Primer 2: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0214]
[0215] Acetil hlorid (1.0 mL, 14.5 mmol) je dodavan u kapima u smešu (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklloheksankarboksamida (2.46 g, 6.59 mmol) i piridina (6.40 mL, 79.1 mmol) u DCM (58.5 mL) na 0 °C. Posle 45 minuta smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida pre nego što je osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeno ulje tamnog ćilibara je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 10% metanola u DCM. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piyridin-2-il)cikloheksankarboksxamid (2.6 g, 93% prinos preko tri koraka) kao svetlo bež čvrsta pena.
[0216] Analiza (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksami preko analitičkih SFC uslova (videti ispod), odredila je da ovaj materijal sadrži 98% (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piyridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Rt= 1.42 min) i 2% (1R, 3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (Rt= 2.42 min). Ovaj materijal je prečišćen preparativnim SFC uslovima (Chiralpak IA kolona, 5µm, 30 mm prečnik, 250 mm dužina, 40 °C temperatura kolone, izlazni pritisak 100 bara, brzina protoka 120 mL/min), eluiranje sa 40% metanola koji sadrži 0.1% dimetiletilamina u CO2, da se ukloni (1R, 3S) enantiomer. Frakcije proizvoda za brže eluiranje enantiomera su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 2.3 g ćilibara ružičaste boje. Ova čvrsta supstanca je prečišćena fleš hromatografijom na silicijum dioksidu (čep), gradijent eluacije 0 do 10% MeOH u etil acetatu, kako bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (2.25 g) kao bela čvrsta pena. Proizvod je tretiran sa 20 mL acetonitrila i dobijena smeša je zagrejana do uslova refluksa pre nego što je ostavljena da se ohladi do sobne temperature. Dodatni acetonitril (∼5 mL) je dodat i proces je ponovljen dok se nije potpuno rastvorila čvrsta supstanca. Dobijeni bledo žuti rastvor je ohlađen do sobne temperature i formiran je talog. Posle 1 h talog je filtriran i ispran sa acetonitrilom pre nego što je sušen pod vakuumom na 65 °C tokom 1 h. Čvrsta supstanca je ohlađena do sobne temperature kako bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksenkarboksamid(1.76 g).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.97 -1.17 (1H, m), 1.20 -1.38 (3H, m), 1.68 -1.94 (9H, m), 1.96 -2.07 (2H, m), 2.54 -2.68 (1H, m), 2.80 (2H, t), 3.46 -3.65 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.73 (1H, d), 7.76 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.38 (1H, s), 10.57 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 416.
Analitički SFC uslovi:
[0217] Kristali iz Primera 2 su analizirani pomoću XRPD i rezultati su prikazani u tabeli ispod i prikazani su na Slici 7. XRPD čvrste supstance potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži Primer 2 Oblik B.
[0218] Primer 2 Oblika B glavnih maksimuma su prikazani u Tabeli 1 ispod:
[0219] U skladu sa ovim pronalaskom, obezbeđen je kristalni oblik, Oblik B, koji ima rendgenski difraktogram praha sa specifičnim maksimumima na oko 2-teta
= 5.5, 6.8, 13.6, 16.1, 20.5, 21.2, 21.6, 22.8, 26.7, 27.4°.
[0220] Kristali dobijeni iz Primera 2 (Forma B) su analizirani toplotnim tehnikama. DSC analiza je pokazala da Forma B ima nekoliko termičkih događaja, uključujući egzotermni događaj sa početnom tačkom na 150 °C i maksimum na 153 °C, nakon čega sledi topljenje sa početnom tačkom na 201 °C i maksimum na 202 °C. TGA pokazuje da forma B pokazuje gubitak mase od oko 4.5% posle zagrevanja od 22 °C do 150 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na Slici 8.
[0221] Procedure za pripremanje početnog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisane ispod:
Pripremanje 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina
[0222]
[0223] Reakcija je podeljena u 4 odvojene zatvorene posude za mikrotalasnu reakciju, od kojih svaka sadrži 750 mg (2.95 mmol) 5-hloro-2-fluoro-4-jodopiridina, 8.4 mL koncentrovanog vodenog amonijum hidroksida i 7.5 mL NMP. Reakcioni sudovi su zagrevani na 100 °C na 17 h. Kombinovane serije u razblažene sa vodom (50 mL) i izvađene sa EtOAc (3 x 120 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo bledo žuto ulje. Ulje je stavljeno na 20 g SCX-2 kolone i eluirano uzastopno sa DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Osnovne frakcije su koncentrovane da bi se dobio željeni proizvod kao bezbojna čvrsta supstanca (2.9 g, 99%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 6.21 (2H, s), 7.05 (1H, s), 7.93 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 255.
Pripremanje 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina [0224]
[0225] Cezijum karbonat (13.4 g, 41.2 mmol) i PdCl2(dppf) · CH2Cl2(0.94 g, 1.2 mmol) se dodaju sekvencijalno u degasiranu smešu 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina (4.19 g, 16.5 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-iyl)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo-[1,5-a]piridina (5.72 g, 23.1 mmol), 1,4-dioksana(141 mL) i vode (23.5 mL). Dobijena crvena smeša je zagrejana do 95 °C i postala bistra. Uz snažno mešanje nastao je neki talog koji se postepeno uglavnom ponovo rastvorio. Posle 4 h, dodato je još 800 mg estra borne kiseline; posle sledećih 40 minuta reakcija se ohladi do sobne temperature i meša u ovim uslovima tokom 18 h. Smeša je zatim razblažena sa etil acetatom i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 10% metanola u etil acetatu. Frakcije proizvoda su kombinovane, koncentrovane pod redukovanim pritiskom, i dobijeni ostatak je snažno mešan u 1:1 DCM:heksanu tokom 20 minuta. Smeša je zatim razblažena heksanom i filtrirana sa ispiranjem heksanom. Dobijena čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom kako bi se dobio 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (2.79 g, 68.1%) kao svetlo narandžasto-bež iglice.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.74 -1.88 (2H, m), 1.96 -2.06 (2H, m), 2.76 (2H, t), 4.12 (2H, t), 6.03 (2H, br. s), 6.43 (1H, s), 7.63 (1H, s), 7.94 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 249.
Pripremanje cis-3-(terc-butoksikarbonilamino)cikloheksankarboksilna kiseline [0226]
1
[0227] U fiksiranoj posudi od 5 litara napunjena je sa cis-3-aminocikloheksankarboksilnom kiselinom (100 g, 698 mmol; kupljena od TCI), vodom (900 mL), 1,4-dioksanom (900 mL) i N-etil-N-izopropilpropan-2-aminom (487 mL, 2793 mmol). Posle mešanja na r.t.5 minuta, smeša je ohlađena na 0 °C. Di-terc-butil dikarbonat (168 g, 768 mmol) je zatim dodavan u porcijama u reakcionu smešu, koja je ostavljena da se zagreje na r.t. nakon što je dodat konačni deo. Reakciona smeša je zatim ponovo ohlađena na 0 °C i dodata je 2 M vodena HCl da bi se pH podesio na 2. Uočena je mala (<5 °C) egzoterma između dodavanja svakog 50 mL porcija 2 M vodene HCl. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 500 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (400 mL) i osušeni preko natrijum sulfata. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se, posle sušenja preko noći, cis-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (170 g, 100%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.95 -1.33 (4H, m), 1.37 (9H, s), 1.64 -1.75 (2H, m), 1.79 (1H, d), 1.94 (1H, d), 2.22 (1H, tt), 3.13 -3.26 (1H, m), 6.72 (1H, d), 12.01 (1H, s). m/z: ES+[M+Na]+ 266.
Pripremanje (S)-1-feniletanaminijuma (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata
[0228]
[0229] Koristeći proceduru sličnu onoj opisanoj u WO2011/1106112, cis-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (49.9 g, 166 mmol) dodata je u 1L flašicu sa okruglim dnom i rastvorena u etanolu (400 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi dok se mešani materijal nije rastvorio. (S)-1-feniletanamin (23.6 mL, 183 mmol) je dodat; smeša je mešana na sobnoj temperaturi dok se ne formira beli talog. Reakciona smeša je zatim zagrevana do 80 °C sve dok nije dobijen bistar rastvor Reakcioni grejač je zatim isključen i reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na r.t. Posle mešanja na r.t. još 16 h, dobijena smeša je filtrirana da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca je ponovo rastvorena u etanolu (150 mL) i zagrejana do 80 °C sve dok nije dobijen bistar rastvor. Reakcioni grejač je zatim isključen i reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na r.t. Filtriranje je dalo belu čvrstu supstancu (14.6 g), koja je ponovo rekristalizovana iz etanola (100 mL) koristeći istu proceduru da bi se dobio (S)-1-feniletanaminijum (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (12.5 g, 20.7%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H
2
NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.98 -1.23 (4H, m), 1.26 (3H, d), 1.38 (9H, s), 1.66 -1.84 (3H, m), 1.95 (1H, m), 2.21 (1H, m), 3.21 (1H, m), 4.00 (1H, q), 6.72 (1H, m), 7.16 -7.23 (1H, m), 7.30 (2H, m), 7.34 -7.4 (2H, m), NH3<+>nije posmatran.
Pripremanje (1S,3R)-3-(terc-butoksikarbonilamino)cikloheksankarboksilna kiseline [0230]
[0231] (S)-1-feniletanaminijum (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (9.85 g, 27.0 mmol) je suspendovan u 250 mL EtOAc, i organski sloj je ispran sa 0.5 M HCl (2 x 125 mL). Organski sloj je sakupljen i kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc (300 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2 x 500 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (500 mL) pre nego što su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je zatim osušena u vakuumu da bi se dobila (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (5.5 g, 84%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.99 -1.35 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.68 -1.85 (3H, m), 1.96 (1H, d), 2.23 (1H, tt), 3.15 -3.30 (1H, m, delimično posmatran pomoću vodenog maksimuma), 6.72 (1H, d), 12.01 (1H, s).
Reprezentativno određivanje enantiomerne čistoće
[0232] HATU (0.413 g, 1.09 mmol) je dodat u rastvor (4-metoksifenil)metanamina (0.142 mL, 1.09 mmol), (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (0.240 g, 0.99 mmol), DIPEA (0.345 mL, 1.97 mmol) i DMF (1.980 mL). Svetlo žuti rastvor je postao smeša tokom 30 minuta i zatim je razblažen etil acetatom i sekvencijalno ispran vodom, zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu, eluiranjem sa izokratnim 5% metanolom u DCM, da se dobije terc-butil((1R,3S)-3-((4-metoksibenzil)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.30 g, 84%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.97 -1.14 (1H, m), 1.15 -1.32 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.56 -1.84 (4H, m), 2.12 -2.29 (1H, m), 3.14 -3.28 (1H, m), 3.73 (3H, s), 4.17 (2H, br. d), 6.70 -6.77 (1H, m), 6.87 (2H, d), 7.14 (2H, d), 8.16 (1H, t). m/z: ES+[M+H]+ 363.
[0233] Uzorci pripremani na ovaj način su posle toga analizirani pomoću analitičkih SFC uslova kao što sledi:
Vreme zadržavanja:
[0234]
3.33 minuta, terc-butil ((1R,3S)-3-((4-metoksibenzil)karbamoil)ciklloheksil)karbamat 5.21 minuta, terc-butil ((1S,3R)-3-((4-metoksibenzil)karbamoil)ciklloheksil)karbamat
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (takođe poznatog kao Primer 31a) [0235]
[0236] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (1.12 mL, 8.44 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline. (2.01 g, 8.24 mmol) u DCM (50 mL) na 0 °C. Reakcija se održava u ovim uslovima tokom 100 minuta. Za to vreme, 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (1.64 g, 6.59 mmol), piridin (2.1 mL, 26.4 mmol) i DCM (20 mL) su kombinovani u odvojenoj posudi. Dobijena smeša je polako zagrejana (∼40 °C) dok se čvrste supstance nisu rastvorile.
4
Dobijeni rastvor se zatim ohladi na 0 °C, nakon čega nastaje homogena svetlo žuta smeša. Ova smeša je brzo dodata preko kanile u prethodno pripremljeni rastvor (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline i 1-hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amina, što dovodi do tamnije žutog rastvora. Reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. preko noći i zatim je uparena do suvoće. Siva smeša se zatim prebaci u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 474.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksanekarboksamid dihidrohlorida (takođe poznatog kao Primer 31b)
[0237]
[0238] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 10 mL, 40 mmol) se doda u smešu sirovog terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil) karbamat (3.12 g, 6.59 mmol) u DCM (5 mL) i metanolu (5 mL) na 0 °C. Smeša je postala žućkasti rastvor. Posle 1 h, žućkasti rastvor je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, i dobijeni i ostatak je osušen pod vakuumom do čvrste bež/sive pene. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 374.
Primer 3: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0239]
[0240] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.016 mL, 0.17 mmol) u (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (47 mg, 0.14 mmol) i trietilamin (0.023 mL, 0.17 mmol) u DCM (1 mL) na 21 °C pod azotom.
Dobijena smeša je mešana pod ovim uslovima 60 h. Reakciona smeša je direktno napunjena na silicijum dioksid i prečišćena fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 1 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (43 mg, 81%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d3, 30 °C) 1.07 -1.23 (1H, m), 1.37 -1.53 (3H, m), 1.87 -2.03 (8H, m), 2.03-2.11 (2H, m), 2.39 -2.51 (1H, m), 3.06 (2H, t), 3.88 -4.20 (1H, m), 5.40 (2H, t), 7.10 (1H, d), 7.80 (1H, s), 8.17 (1H, s), 8.32 (1H, s), 8.35 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 382.
[0241] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-bromopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0242]
[0243] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (0.574 ml, 4.33 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1.01 g, 4.16 mmol; pripremljene prema Primeru 2) u DCM (40 ml) na 0 °C. Posle 1.5 h, dodata je smeša 4-bromopiridin-2-amina (0.6 g, 3.47 mmol) i piridina (1.12 ml, 13.9 mmol) u DCM (33.0 ml) preko kanile. Dobijena žuta smeša se ostavi da se zagreje na r.t. i mešana pod ovim uslovima 72 h. Sada bela mešavina je filtrirana, isprana hladnim DCM ispiranjem, i beli talog je sušen pod vakuumom na 70 °C tokom 30 minuta da se dobije terc-butil ((1R, 3S)-3 -((4-bromopiridin-2)-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1.38 g, 100%) čistoće 95% kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 -1.35 (4H, m) 1.38 (9H, s) 1.68 -1.80 (3H, m) 1.88 (1H, d) 2.53 -2.64 (1H, m) 3.15 -3.35 (1H, m) 6.76 (1H, d) 7.34 (1H, dd) 8.21 (1H, d) 8.33 (1H, d) 10.63 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 398.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0245] Druga generacija XPhos prekatalizatora (9.88 mg, 0.01 mmol) je dodata u jednom delu u degasiranu smešu terc-butil ((1R,3S)-3-((4-bromopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (100) mg, 0.25 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (93 mg, 0.38 mmol), kalijum fosfata (160 mg, 0.75 mmol), 1,4-dioksana (2 mL) i vode (0.2 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 100 °C 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (10 mL) i isprana uzastopno zasićenim NaHCO3(10 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 10 mL), i kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 20 do 80% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (70.0 mg, 63.4%) kao beli prašak.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.12 (1H, d), 1.21 -1.33 (3H, m), 1.39 (9H, s), 1.76 (3H, s), 1.82 -1.95 (3H, m), 2.00 (2H, d), 2.59 (1H, s), 2.97 (2H, t), 3.89 (1H, s), 4.12 (2H, t), 6.75 (1H, s), 7.19 (1H, dd), 7.85 (1H, s), 8.22 (2H, d), 10.32 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 440.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0246]
[0247] HCl u dioksanu (4 M; 0.199 mL, 0.80 mmol) je dodat u kapima u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2
il)karbamoil)cikloheksil)karbamatu (70 mg, 0.16 mmol) u DCM (2 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 21 °C 16 h. Dodat je MeOH (1 mL) i smeša je prečišćena direktno jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije (1S,3R)-3-amino-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5]piridin-3-il]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (47 mg, 87%) kao bela kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 30°C) 0.95 -1.08 (1H, m), 1.2 -1.4 (3H, m), 1.76 -1.91 (5H, m), 1.99 (3H, dtt), 2.44 (1H, ddd), 2.61 (1H, tt), 2.95 (2H, t), 3.25 (1H, s), 4.07 (2H, t), 7.11 (1H, dd), 7.74 (1H, s), 8.07 -8.16 (2H, m), NH2maksimum nije posmatran. m/z: ES+[M+H]+ 340.
Primer 4: Cis-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutanecarboksamid
[0248]
[0249] HCl u dioksanu (4 M; 0.388 mL, 1.55 mmol) je dodat cis-3-((tercbutildimeilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamidu (143 mg, 0.31 mmol) u DCM (3 mL) na 21 °C pod azotom.
Dobijena suspenzija je mešana na 21 °C 30 minuta. MeOH (1 mL) je dodat i smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Smeša je koncentrovana i zatim razblažena sa EtOAc (25 mL) i zasićenim vodenim NaHCO3(25 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa EtOAc (25 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 50 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio cis-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamid (24.0 mg, 22.3%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.88 -1.94 (2H, m), 2.05 -2.15 (3H, m), 2.2 -2.31 (2H, m), 2.62 -2.73 (3H, m), 2.93 (2H, t), 4.18 -4.31 (3H, m), 7.81 (1H, s), 7.88 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.26 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 347.
[0250] Procedure za pripremanje početnog materijala cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamid kao što je opisano ispod:
Pripremanje cis-terc-butildimetilsilil 3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilata
[0251]
[0252] Cis-3-hidroksiciklobutankarboksilična kiselina (300 mg, 2.58 mmol) je rastvorena u DCM (17.2 mL). Sekvencijalno se dodaju terc-butilhlorodimetilsilan (818 mg, 5,43 mmol) i 1H-imidazol (369 mg, 5.43 mmol) i rastvor se stavi pod azot. Reakcija je ostavljena da se meša 16 h na r.t. Smeša je razblažena sa etil acetatom (100 mL) i isprana sa 1N vodenim HCl (30 mL), vodom (30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (40 mL) pre nego što je osušena iznad magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim rastvorom. da se dobije cis-terc-butildimetilsilil 3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilat (802 mg, 90%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 0.03 (6H, s), 0.26 (6H, s), 0.88 (9H, s), 0.94 (9H, d), 2.11 -2.21 (2H, m), 2.43 -2.63 (3H, m), 4.07 -4.17 (1H, m).
Pripremanje cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilične kiseline [0253]
[0254] Kalijum karbonat (644 mg, 4.66 mmol) je dodat u rastvor cis-terc-butildimetilsilil 3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilata (803 mg, 2.33 mmol) u THF (15 mL) i vode (3 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 20 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i isprana sa EtOAc. Vodeni sloj je zakiseljen sa 0.1 N vodenom HCI i ekstrahovan sa EtOAc (x2). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani da bi se dobio sirovi proizvod koji je korišćen bez prečišćavanja u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 0.00 (6H, s), 0.84 (9H, s), 2.09 -2.29 (2H, m), 2.36 -2.66 (3H, m), 3.97 -4.23 (1H, m), CO2H nije posmatran.
Pripremanje 3-(-2-fluoropiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0256] 3-(4,4,5,5-Tetrametil-l,2,3-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (500 mg, 2.02 mmol) 5-hloro-2-fluoro-4-jodopiridin (432 mg, 1.68 mmol), XPhos prekatalizator druge generacije (132 mg, 0.17 mmol) i kalijum fosfat (1069 mg, 5.03 mmol) su suspendovani u dioksanu (5 mL) i voda (0.50 mL). Reakcija je degasirana propuštanjem azota kroz reakcionu smešu tokom 5 minuta pre nego što se zagreje na 90 °C. Reakcija je održavana pod ovim uslovima tokom 20 h i zatim razblažena sa vodom (20 mL) i EtOAc (20 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (20 mL), osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 20 do 80% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-(5-hloro-2-fluoropiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (440 mg, 104%) kao kristalna čvrsta masa krem boje. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.87 -1.96 (2H, m), 2.08 -2.16 (2H, m), 2.83 (2H, t), 4.23 (2H, t), 6.82 (1H, d), 7.80 (1H, s), 8.23 (1H, s). m/z: ES<+>[M+H]<+>252.
Pripremanje 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina [0257]
[0258] 3-(5-hloro-2-fluoropiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (440 mg, 1.49 mmol) i amonijum hidroksid (2.0 mL, 51 mmol) kombinovani su i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Reakcija se zagreva na 150 °C tokom 2 h u mikrotalasnom reaktoru i ohladi na r.t. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (25 mL) i vodom (25 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa EtOAc (3 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (25 mL), osušeno preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen pomoću blic hromatografije sa silika gelom, eluiran sa 50% EtOAc u heptanu i zatim 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (80 mg, 22%) kao bela čvrsta supstanca, koja je već naznačena (videti Primer 3, Međujedinjenja)
Pripremanje cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutanekarboksamida
[0259]
[0260] N-Etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.167 mL, 0.94 mmol) je dodat cis-3-((tertbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksiličnoj kiselini (79 mg, 0.34 mmol) i 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouranijum heksafluorofosfatu (V) (179 mg, 0.47 mmol) u DMF (1 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na 21 °C 10 minuta. Rastvor 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina (78 mg, 0.31 mmol) u DMF (1 mL) je dodat i dobijena smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Mešanje je nastavljeno 72 h i dodatna cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilna kiselina (79 mg, 0.34 mmol), 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouranijum heksafluorofosfat (V) (179 mg, 0.47 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.167 mL, 0.94 mmol) je dodat. Smeša je mešana još 24 h pre dodavanja EtOAc (20 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum hidrogenkarbonata (20 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi ostatak je odmah uzet na sledeći korak i pretpostavljeno je da je regeneracija kvantitativna. m/z: ES+[M+H]+ 461.
Primer 5: (R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid
[0261]
1
[0262] TFA (1 mL, 13 mmol) je dodat (R)-terc-butil 3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilatu (90 mg, 0.20 mmol) u DCM (2 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µm silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 150 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 0.05 % NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće da bi se dobio (R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamid (18.0 mg, 25.6%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6, 23 °C) 1.30 -1.47 (1H, m), 1.52 -1.62 (2H, m),1.76 -1.90 (3H, m), 1.97 -2.07 (2H, m), 2.52 -2.62 (2H, m), 2.69 (1H, t), 2.75 -2.87 (3H, m), 2.91 -3.01 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.77 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.37 (1H, s), 10.84 (1H, s), piperidin NH nije posmatran. m/z: ES+[M+H]+ 360.
[0263] Procedure za pripremu polaznog materijala (R)-terc-butil 3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata kao što je opisane ispod:
Pripremanje terc-butil 3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilata
[0264]
[0265] Piridin (0.10 mL, 1.3 mmol) je dodat u 1-(terc-butoksikarbonil)piperidin-3-karboksilnu kiselinu (74 mg, 0.32 mmol) i 1-hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amina (0.050 mL, 0.64 mmol) u DCM (2 mL) na 20 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi
2
20 minuta. Zatim 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amin (80 mg, 0.32 mmol; pripremljen prema Primeru 4) je dodat u smešu. Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i razblažena sa DCM (100 mL) pre nego što je isprana sekvencijalno sa 0.1 M HCl (2 x 25 mL), zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (25 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (2 x 25 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen pomoću preparativne TLC (petroleum eter: EtOAc = 10:1) da se dobije terc-butil 3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)piperidin-1-karboksilat (100 mg, 67.6%) kao žuta čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 460.
Primer 6: cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutanekarboksamid
[0266]
[0267] HCl u dioksanu (4 M; 0.388 mL, 1.55 mmol) je dodat cis-3-((tercbutildimeilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamidu (132 mg, 0.31 mmol) u DCM (3 mL) i MeOH (1 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na 21 °C 3 h pre nego što je smeša koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa EtOAc (25 mL) i zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom (25 mL). Slojevi su zatim odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa EtOAc (25 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena sirova čvrsta supstanca je zdrobljena sa Et2O i osušena pod vakuumom da se dobije cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamid (35.0 mg, 36.1%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.89 -2.01 (2H, m), 2.08 (3H, ddd), 2.28 (2H, ddd), 2.67 (3H, tq), 3.08 (2H, t), 4.23 (3H, dt), 7.10 (1H, dd), 7.81 (1H, s), 7.83 (1H, s), 8.19 (1H, dd), 8.33 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 313.
[0268] Procedure za pripremanje početnog materijala cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida kao što je opisano ispod:
Pripremanje cis-N-(4-bromopiridin-2-il)-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutanekarboksamid
[0269]
[0270] N-Etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.461 mL, 2.60 mmol) je dodat u cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilnu kiselinu (220 mg, 0.95 mmol; pripremljene kao u Primeru 4) i 2-(3H-[l, 2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-l, l,3,3-tetrametilizounium heksafluorofosfat (V) (494 mg, 1.30 mmol) u DMF (3 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na 21 °C 10 minuta pre nego što je dodat 4-bromopiridin-2-amin (150 mg, 0.87 mmol) i dobijena smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h. Mešanje je nastavljeno 72 h i dodatna cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilna kiselina (79 mg, 0.34 mmol), 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilizouranijum heksafluorofosfat (V) (179 mg, 0.47 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (0.167 mL, 0.94 mmol) je dodat. Smeša je mešana još 24 h i zatim je dodat EtOAc (25 mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum hidrogenkarbonata (25 mL). Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (2 x 25 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 25 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće da se dobije cis-N-(4-bromopiridin-2-il)-3 -((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksamid (96 mg, 29%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.11 -1.18 (1H, m), 2.23 -2.31 (2H, m), 2.54 -2.58 (2H, m), 4.15 -4.26 (1H, m), 7.18 (1H, dd), 7.82 (1H, s), 8.06 (1H, dd), 8.49 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 385 (<79>Br izotop), 387 (<81>Br izotop).
Pripremanje cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutanekarboksamida
[0271]
4
[0272] Druga generacija XPhos prekatalizatora (19.40 mg, 0.02 mmol) je dodata u degasiranu smešu cis-N-(4-bromopiridin-2-il)-3-((terc-butildimetilsilil) oksi)ciklobutankarboksamida (95 mg, 0.25 mmol). 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (73.4 mg, 0.30 mmol) i kalijum fosfat (157 mg, 0.74 mmol) u dioksanu (2 mL) i vodi (0.2 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 100 °C 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (25 mL) i isprana sekvencijalno zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom (10 mL), vodom (10 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 30 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (60.0 mg, 57.1%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 0.05 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.9 -2.01 (2H, m), 2.02 -2.12 (2H, m), 2.25 -2.33 (2H, m), 2.5 -2.62 (3H, m), 3.08 (2H, t), 4.21 (3H, t), 7.09 (1H, dd), 7.76 (1H, s), 7.80 (1H, s), 8.18 (1H, dd), 8.33 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 427.
Primer 7: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid;
[0273]
[0274] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.20 g, 0.53 mmol), 5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin (47 mg, 0.38 mmol), cezijum karbonat (0.14 g, 0.42 mmol), trietilamin (0.11 mL, 0.76 mmol), trifenilfosfin (0.02 g, 0.06 mmol) i diacetoksapaladijum (6.85 mg, 0.0300 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksan (5 mL) i zapečaćen u mikrotalasnoj cevi. Reakcija se zagreva na 100°C tokom 16 h u mikrotalasnom reaktoru i zatim ohladi na r.t. Reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su isparene do suvoće. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 50 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.069 g, 44%) kao žuta guma.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 0.95 -1.16 (1H, m), 1.19 -1.39 (3H, m), 1.78 (3H, s), 1.83 -1.97 (2H, m), 2.55 -2.68 (1H, m), 2.84 (2H, s), 3.18 (2H, dd), 3.31 (3H, s), 3.57 (1H, dt), 3.83 (2H, s), 4.08 (1H, q), 7.13 (1H, s), 7.75 (1H, d), 8.16 (1H, s), 8.47 (1H, s), 10.70 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 417 (<13>C,<35>Cl sekundarni maksimum izotopa).
[0275] Postupci za dobijanje polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 4-bromo-3-hloropiridin-2-amina
[0276]
[0277] N-Hloro-sukcinimid (3.70 g, 27.7 mmol) rastvoren u DMF (20 mL) je dodat u kapima u 4-bromopiridin-2-amin (4.40 g, 25.4 mmol) u DMF (50 mL) na -78 °C preko period od 30 minuta pod azotom. Dobijena suspenzija je zatim ostavljena da se zagreje na r.t. Posle mešanja pod ovim uslovima tokom 24 h, reakciona smeša je razblažena sa Et2O (50 mL) i isprana sekvencijalno sa 1 M vodenim NaOH (2 x 50 mL), vodom (50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 25% EtOAc u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 4-bromo-5-hloropiridin-2-amin (2.30 g, 43.7%) u vidu čvrsti krem.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 6.35 (2H, s), 6.82 (1H, s), 8.01 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 209 (<35>Cl<81>Br i<37>Cl<79>Br izotopi).
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-bromo-5-hloropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0278]
[0279] Rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1.50 g, 6.15 mmol; dobijene prema Primeru 2) rastvorene u DCM (20 mL) na 0 °C tretirane sa 1-hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-aminom (0.976 mL, 7.38 mmol). Smeša je mešana na r.t. 1.5 h pre dodavanja 4-bromo-5-hloropiridin-2-amina (1.02 g, 4.92 mmol) i piridina (0.594 mL, 7.38 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (25 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2x 25 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone upotrebom metanola da se dobije terc-butil ((1R, S)-3-((4-bromo-5-hloropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (2.34 g, 110%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.12 (1H, dd), 1.22 -1.32 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.72 (3H, dd), 1.83 -1.94 (2H, m), 2.11 (1H, dt), 8.48 (1H, s), 8.50 (1H, s), 10.77 (1H, s), jedan proton nije posmatran. m/z: ES-[M-H]-430.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid
[0280]
[0281] HCl u dioksanu (4 M; 5.89 mL, 23.6 mmol) je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-bromo-5-hloropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1.20 g, 2.77 mmol) u MeOH (7.01 mL) pod vazduhom. Dobijeni rastvor je mešan na temperaturi okoline tokom 16 h.
Reakciona smeša je uparena da se dobije (1S,3R)-3-amino-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid kao bela čvrsta supstanca. Ovo je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 332 (<35>Cl<79>Br izotop), 334 (<35>Cl<81>Br i<37>Cl<79>Br izotopi).
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0282]
[0283] Dodat je u kapima anhidrid sirćetne kiseline (0.259 mL, 2.74 mmol) u (1S,3R)-3-amino-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.760 g, 2.28 mmol), 4-dimetilaminopiridin (0.014 g, 0.11 mmol) i trietilamina (0.987 mL, 7.08 mmol) u DCM (8.44 mL) na s.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na r.t. preko noći pre nego što je ugašena sa zasićenim vodenim NH4CI (50 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.96 g, 95%) kao bela čvrsta supstanca. Proizvod je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.23 -1.41 (4H, m), 1.67 -1.85 (4H, m), 2.39 (3H, tt), 2.75 -2.92 (1H, m), 3.53 (1H, dtd), 7.59 -7.83 (1H, m), 8.50 (2H, dd), 10.80 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 374 (<35>Cl<79>Br izotop), 376 (<35>Cl<81>Br i<37>Cl<79>Br izotopi).
Primer 8: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0284]
[0285] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-bromo-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.100 g, 0.27 mmol; pripremljen kao u Primeru 7) dodat je u jednoj porciji u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin (0.067 g, 0,27 mmol), 2. generacija X-Phos prekatalizator (0.021 g, 0,03 mmol), kalijum fosfat (0.170 g, 0.80 mmol), 1,4-dioksana (2.270 mL) i vode (0.454 mL) na s.t. Dobijena smeša je mešana na r.t.16 h, a zatim upari do suva pre nego što se prečisti jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 punjenje. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio sirovi (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1 -b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao žuta guma. Dobijeni polu-čisti proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5, l-b][1, 3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.017 g, 16%) kao bela guma.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.21 -1.32 (1H, m), 1.4 -1.53 (3H, m), 1.95 (1H, s), 1.96 (3H, s), 2.06 (1H, d), 2.39 -2.48 (2H, m), 2.7 -2.85 (3H, m), 3.74 (1H, dt), 4.34 (2H, t), 4.53 -4.68 (2H, m), 7.93 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.48 (1H, d), 8.58 (1H, s), 10.62 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 418 (<12>C,<35>Cl izotop), 419 (<13>C,<35>Cl sekundarni maksimum izotopa).
[0286] Postupci za pripremanje polaznog materijala 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin su opisani u nastavku:
Pripremanje 1,2-dihidropirazol-3-ona
[0287]
[0288] U rastvor metil prop-2-inata (150 g, 1785.7 mmol) u MeOH (1500 mL) dodat je hidrazin hidrat (89.2 g, 1784.0 mmol) kap po kap na 0 °C. Reakcija je mešana na r.t.30 minuta. Dodaje se zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida (400 mL), a zatim se metanol ukloni pod vakuumom. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 500 mL) i kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio 1,2-dihidropirazol-3-on (99.5 g, 66%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 85.
Pripremanje 6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin
[0289]
[0290] U rastvor 1,2-dihidropirazol-3-ona (99.5 g, 1184 mmol) u DMF (4000 mL) je dodat K2CO3(560.0 g, 4057 mmol), i smeša je zagrevana na 130 °C tokom 1 h. Zatim je dodat 1,3-dibromopropan (143.4 mL, 1421 mmol) i smeša je mešana na 130 °C tokom 2 h i zatim koncentrovana. Dobijeni ostatak je podeljen između DCM (2000 mL) i vode (2000 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3 x 1000 mL). Kombinovani organski ekstrakti su sušeni preko Na2SO4i koncentrovani da bi se dobio 6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin (83.0 g, 56.8%) kao žuto ulje.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.18 -2.11 (2H, m), 4.13 -4.05 (2H, m), 4.19 -4.16 (2H, m), 5.37 -5.37 (1H, m), 7.21 -7.20 (1H, m).
Pripremanje 3-jodo-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin
[0291]
[0292] U rastvor 6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina (83,0 g, 669,3 mmol) u CH3CN (1500 ml) dodat je N-jodosukcinimid (155.0 g, 688.8 mmol). Smeša je mešana na r.t.1 h pre nego što se polako izlije u snažno mešanu vodu (1000 mL). Dodaje se zasićeni vodeni natrijum tiosulfat (500 mL) i dobijena smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 800 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom, osušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa silika gelom (petrol etar: EtOAc = 1 : 1) da bi se dobio 3-jodo-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin (105.0 g, 62.2%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.19 -2.12 (2H, m), 4.10 -3.98 (2H, m), 4.34 -4.31 (2H, m), 7.28 (1H, m). m/z:
ES+[M+H]+ 251.
Pripremanje 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin
[0293]
[0294] U rastvor 3-jodo-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazina (105 g, 420 mmol) u THF (1000 mL) dodat je 2-izopropoksi-4 4,5,5-tetrametil-l, 3,2-dioksaborolan (126 mL, 630 mmol). Smeša je ohlađena do 5 °C. Zatim se doda izopropil magnezijum litijum hlorid (410 mL, 420 mmol) i smeša se meša na 5 °C 3 h. Reakcija je ugašena dodavanjem MeOH (500 mL) i zatim koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa izokratnim 50% etil acetatom u petrol etru, da bi se dobilo bledo žuto ulje. Kristalizacija iz heptana (100 mL) daje 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,l-b][1,3]oksazin (38.6 g, 36.7%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.21 (12H, s), 2.15 -2.12 (2H, m), 4.06 -4.03 (2H, m), 4.31 -4.29 (2H, m), 7.32 (1H, m). m/z: ES+[M+H]+ 251.
Primer 9: (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid i
(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (Primer 2)
[0295]
[0296] Acetil hlorid (0.280 mL, 3.93 mmol) je dodat u rastvor cis-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid (0.639 g, 1.71 mmol; odnos nepoznatih enantiomera, pripremljen kao u Primeru 2 iz 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina i cis-3(tercbutoksikarbonilamino)cikloheksankarboksilna kiselina, odnos nepoznatih enantiomera) u DCM (14.1 mL) i piridinu (2.77 mL, 34.2 mmol) na 0 °C. Posle 30 minuta svetlo žuta reakcija je sipana u DCM i zasićeni vodeni natrijum bikarbonat. Slojevi su odvojeni i organski slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran vodom (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 20% metanola u EtOAc. Frakcije proizvoda su koncentrovane
1
pod redukovanim pritiskom da bi se dobio poluproizvod kao bela čvrsta supstanca. Ovaj materijal je dalje prečišćen preparativnom HPLC (kolona Waters XBridge Prep C18, 5 µm, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), eluiranjem sa 60 do 80% metanola u vodi (koja sadrži 0.2% amonijum hidroksida pri pH 10) kao eluent. Frakcije proizvoda su koncentrovane do suva pod sniženim pritiskom da bi se dobio cis-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin -2-il)cikloheksankarboksamid, odnos nepoznatih enantiomera, kao bela čvrsta supstanca (403 mg).
[0297] Ovaj materijal je prebačen u posudu sa okruglim dnom pomoću DCM i koncentrovan pod sniženim pritiskom do bele čvrste supstance. Čvrsta supstanca je preuzeta u približno 10 mL MeCN i zagrejana do uslova refluksa. Rastvor je ohlađen i talog je brzo počeo da se formira. Posle 10 minuta smeša je stavljena u zamrzivač. Posle 2 h, smeša je zagrejana na r.t. i snažno meša preko noći. Bela mešavina je zatim filtrirana, prvo isprana sa MeCN, a zatim sa heksanom. Dobijeni talog je sušen pod vakuumom na 60 °C tokom 30 minuta da bi se dobilo 159 mg kristalne čvrste supstance (pahuljice).
[0298] Analiza ove čvrste supstance pomoću analitičkih SFC uslova (videti uslove u Primeru 2), odredila je da iznosi 60.5% e.e. (glavna komponenta = Primer 2). Deo ovog materijala (112 mg) je prečišćen preparativnim SFC uslovima (Chiralpak IA kolona, 5 µm, 21.2 mm prečnik, 250 mm dužina, 40 °C temperatura kolone, izlazni pritisak 100 bara, brzina protoka od 75 mL/min), eluiranje sa 40% metanola koji sadrži 0.1% dimetiletilamina u CO2, da se dobije (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksami (70 mg, 67%, Primer 2) kao bela čvrsta pena i (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksami (13.2 mg, 11.8%, Primer 9) kao bela čvrsta pena.
(1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid:
[0299]<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 -1.17 (1H, m), 1.19 -1.37 (3H, m), 1.70 -1.90 (9H, m), 1.96 -2.08 (2H, m), 2.54 -2.68 (1H, m), 2.80 (2H, t), 3.46 -3.68 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.73 (1H, d), 7.76 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.38 (1H, s), 10.57 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 416.
Analitički SFC uslovi:
2
Optičke rotacije:
Primer 10: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0300]
[0301] (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.093 g, 0.26 mmol) u DCM (2 mL) je tretiran sa trietilaminom (0.079 mL, 0.57 mmol) praćeno anhidridom sirćetne kiseline (0.029 mL, 0.31 mmol).
Reakciona smeša je mešana na r.t.0.5 h, a zatim je isprana vodom. Organski sloj se prečisti fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.075 g, 72%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.09 -1.22 (1H, m), 1.38 -1.58 (2H, m), 1.88 -2.03 (6H, m), 2.26 (1H, d), 2.43 -2.56 (1H, m), 2.69 (2H, p), 3.14 -3.21 (2H, m), 3.49 (1H, s), 3.87 (1H, dtt), 4.21 (2H, t), 5.59 (1H, d), 8.14 (1H, s), 8.22 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.43 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 402.
[0302] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 3-jodo-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0303]
[0304] 5,6-Dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-karboksilna kiselina (0.75 g, 4.93 mmol) rastvorena u DMF (4 mL) je tretirana sa N-jodosukcinimidom (1.331 g, 5.92 mmol) i natrijum bikarbonat (0.497 g, 5.92 mmol) na r.t. Smeša je mešana na r.t. u trajanju od 15 h. Reakcija je mešana na 60 °C 16 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (50 mL) i ispran vodom (2 x 50 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-jodo-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (0.88 g, 76%) kao bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.53 -2.6 (2H, m), 2.69 -2.79 (2H, m), 4.04 -4.19 (2H, m), 7.46 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 235.
Pripremanje 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b][1,2-b]pirazol
[0305]
4
[0306] 3-jodo-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.800 g, 3.42 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.954 g, 5.13 mmol) su rastvoreni u THF (8 mL) na 4 °C i zatim tretirani u kapima kompleksom izopropilmagnezijum hlorida litijum hlorida u THF (1.3 M; 2.63 mL, 3.42 mmol). Smeša je mešana na 4 °C 2 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.67 g, 84%) kao bela čvrsta supstanca<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 2.60 (2H, p), 2.91 -3.02 (2H, m), 4.05 -4.19 (2H, m), 7.77 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 235.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0307]
[0308] 1-Hloro-N,N,2-trimetilpropenilamin (1.149 mL, 8.68 mmol) je dodat u mešani rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1.41 g, 5.79 mmol; pripremljene prema Primeru 2) u DCM (25 mL), ohlađene u ledenom kupatilu u atmosferi azota. Dobijeni smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 1 h.5-Hloro-4-jodopiridin-2-amin (1.47 g, 5.79 mmol; Pripremljeni prema Primeru 2) i piridin (0.702 mL, 8.68 mmol) su dodati, i dobijena smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 16 h. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4CI (50 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (3 x 75 mL), i kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijena bledo žuta čvrsta supstanca je suspendovana sa Et2O (10 mL) i filtrirana da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1.79 g, 3.73 mmol, 64.4%) u vidu čvrste mase krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.04 -1.18 (1H, m), 1.24 -1.41 (2H, m), 1.44 (9H, s), 1.92 (2H, dq), 2.00 (1H, d), 2.28 (1H, d), 2.31 -2.41 (1H, m), 3.27 -3.62 (2H, m), 4.44 (1H, s), 7.80 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.81 (1H, s). m/z: ES-[M-H]-478.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0309]
[0310] 3-(4,4,5,5-Tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.14 g, 0.58 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.18 g, 0.38 mmol), 2. generacija C-Phos prekatalizatora (0.03 g, 0.04 mmol) i kalijum fosfata, dvobazni (0.200 g, 1.15 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (0.8 mL) na 21 °C. Smeša je mešana na 21 °C 18 h. Smeša je zagrevana na 40 °C tokom 17 h zatim na 50 °C tokom 2 h. Smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL) i isprana sa vodom (200 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće kako bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazo1-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.119 g, 67.5%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.04 -1.17 (1H, m), 1.34 -1.41 (2H, m), 1.44 (9H, s), 1.89 -2.03 (4H, m), 2.29 (1H, d), 2.33 -2.44 (1H, m), 2.69 (2H, p), 3.14 -3.21 (2H, m), 3.45 -3.59 (1H, m), 4.17 -4.24 (2H, m), 4.44 (1H, s), 7.93 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.33 (1H, s). m/z:ES+[M+H]+ 460.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid
[0311]
[0312] U rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.12 g, 0.26 mmol) rastvorenog u DCM (3 mL) dodata je HCl (4 M u dioksanu; 1.294 mL, 5.17 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je upotrebljen neposredno u sledećem koraku. m/z: ES+[M+H]+ 360.
Primer 11: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0313]
[0314] U smešu terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.072 g, 0.15 mmol) rastvorenog u DCM (3 mL) na r.t. dodata je HCl (4 M u dioksanu; 0.756 mL, 3.03 mmol). Smeša je postala rastvor koji je mešan na sobnoj temperaturi 30 minuta. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4] ]oksazin-3-il) piridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid kao čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je rastvoren u DCM (2 mL), i dobijeni rastvor je tretiran sekvencijalno sa trietilaminom (0.047 mL, 0.33 mmol) i anhidridom sirćetne kiseline (0.017 mL, 0.18 mmol) na r.t. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10 % MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.056 g, 88%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.08 (1H, d), 1.29 (4H, q), 1.78 (1H, s), 1.91 (3H, s), 2.61 (2H, s), 3.57 (1H, dt), 4.08 -4.27 (4H, m), 4.89 (2H, s), 7.74 (1H, d), 7.88 (1H, s), 8.01 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.59 (1H, s), 11.90 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 418.
[0315] Postupci za pripremanje polaznog materijala terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 3-jodo-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin
[0316]
[0317] 6,7-Dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin -3-karboksilna kiselina (0.750 g, 4.46 mmol) rastvorena u DMF (4 mL) je tretirana sa N-jodosukcinimidom (1.204 g, 5.35 mmol) i natrijum bikarbonat (0.450 g, 5.35 mmol) na r.t. Smeša je mešana na 70 °C 4 h i zatim ohlađena do r.t. Posle 60 h, smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, i dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (70 mL) i ispran vodom (2 x 70 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isprane do suvoće kako bi se dobio 3-jodo-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0.90 g, 81%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 3.98 -4.06 (2H, m), 4.07 -4.15 (2H, m), 4.65 (2H, s), 7.53 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 251.
Pripremanje 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin
[0318]
[0319] 3-Jodo-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0.850 g, 3.40 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan (0.949 g, 5.10 mmol) je rastvoren u THF (8 mL) na 4 °C. Dobijeni rastvor je tretiran u kapima sa izopropilmagnezijum hlorid litijum hloridnim kompleksom u THF-u (1.3 M; 2.61 mL, 3.40 mmol). Reakciona smeša je mešana na 4 °C tokom 5 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksborolan-2-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4] oksazin (0.80 g, 95%) kao bezbojna guma.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 4.08 (2H, dd), 4.17 -4.23 (2H, m), 4.96 (2H, s), 7.74 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 251.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0320]
[0321] 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin (0.094) g, 0.38 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.120 g, 0.25 mmol; kao što je pripremljeno u Primeru 10), 2. generacija X-Phos prekatalizator (0.020 g, 0.03 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (0.131 g, 0.75 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (0.800 mL) na 50 °C. Smeša je mešana na 50 °C tokom 1 h i zatim razblažena sa EtOAc (30 mL). Dobijena smeša je isprana vodom (10 mL), a organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće kako bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]pirazo1-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.081 g, 68%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.22 -1.35 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.75 (3H, s), 1.90 (1H, d), 2.54 -2.63 (1H, m), 4.12 -4.26 (4H, m), 4.90 (2H, s), 5.75 (1H, s), 6.76 (1H, d), 7.89 (1H, s), 8.01 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.58 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 476.
Primer 12: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol -3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0322]
[0323] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (130 mg, 0.31 mmol), (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)hidrohlorid boronske kiseline (145 mg, 0.77 mmol), barijum hidroksid (211 mg, 1.23 mmol) i PdCl2(dppf) (22 mg, 0.030 mmol) su suspendovani u dioksanu (2 mL) i vodi (0.4 mL) i zapečaćene u mikrotalasnu cev.
Reakcija je zagrevana do 75 °C u mikrotalasnom reaktoru i održavana pod ovim uslovima 2 h pre nego što je ohlađena na r.t. Reakciona smeša je filtrirana uz ispiranje metanolom, a filtrat je zatim koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5 µm silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (21.3 mg, 17.2%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.09 (1H, d), 1.30 (3H, q), 1.78 (5H, s), 1.91 (1H, d), 2.57 -2.73 (4H, m), 2.85 (2H, t), 3.58 (1H, dd), 4.16 (2H, t), 7.55 (1H, s), 7.75 (1H, d), 8.35 (1H, s), 8.42 (1H, s), 10.67 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 402.
[0324] Postupci za pripremanje polaznih materijala (1S,3R)-3-Acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid i (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]hidrohlorid imidazol-3-il)boronske kiseline su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 5-metoksi-3,4-dihidro-2H-pirol
[0325]
[0326] Pirolidin-2-on (85 g, 1000 mmol) i Me2SO4(126 g, 1000 mmol) su mešani na r.t.30 minuta, a zatim je smeša mešana na 60 °C tokom 6 h. Smeša je polako sipana u rastvor trietilamina (140 mL) u DCM na 0 °C i mešana pod ovim uslovima 15 minuta. Dodaje se voda i slojevi se razdvoje. Organski sloj je osušen preko MgSO4i koncentrovan pod redukovanim pritiskom na r.t. da bi se dobio 5-metoksi-3,4-dihidro-2H-pirol, koji je upotrebljen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.03 -1.95 (2H, m), 2.43 -2.39 (2H, m), 3.64 -3.60 (2H, m), 3.76 (3H, s).
Pripremanje 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol
[0327]
1
[0328] U rastvor 5-metoksi-3,4-dihidro-2H-pirol (sirovi) u DCM (200 mL) je dodat MeOH (800 mL) i aminoacetaldehid dimetil acetal (105 g, 1000 mmol). Smeša je mešana na 60 °C tokom 6 h pre nego što je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio N-(2,2-dimetoksietil)-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin (82 g, 48%). Sirovi proizvod je rastvoren u mravljoj kiselini (400 mL) i mešan na refluksu 17 h pre nego što je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 6,7-dihidro-5H-pirolo[l, 2-a]imidazol (46 g, 90%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 2.51 -2.44 (2H, m), 2.69 -2.65 (2H, m), 3.91 -3.88 (2H, m), 6.84 (1H, s), 7.02 (1H, s).
Pripremanje (6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)borna kiselina hidrohlorid [0329]
[0330] U mešani rastvor 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola (60 g, 560 mmol) u anhidrovanom THF (700 mL) na -78 °C dodat je n-BuLi (250 mL, 625 mmol), i smeša je mešana tokom 1 h na ovoj temperaturi. Dodat je triizopropil borat (115 g, 610 mmol) na -78 °C, a zatim je smeša ostavljena da se zagreje na r.t. preko noći. Reakcija je ohlađena na 0 °C, i vodena HCl (1M; 1000 mL) je dodata. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio tetrahidrofuran. Ph vrednost preostalog vodenog sloja je podešena na 2 pažljivim dodavanjem koncentrovane HCI, a talog je sakupljen i osušen da bi se dobio (6,7-dihidro-5H-pirolo[l, 2-a]imidazol-3-il)hidrohlorid boronske kiseline (42 g, 40%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6,30 °C) 2.64 -2.49 (2H, m), 3.08 (2H, t), 4.19 (2H, t), 7.92 (1H, s), 8.84 (2H, s), 14.34 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 153.
Pripremanje 3-amino-N-(5-hloro-4-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid [0331]
1 1
[0332] Terc-butil(3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1 g, 2.08 mmol; je pripremljen kao u Primeru 10) je suspendovan u DCM (15 mL) na temperaturi okoline. HCl (4M) u dioksana (2.61 mL, 10.42 mmol) je dodata i dobijena smeša mešana u trajanju od 16 h. Reakciona smeša je zatim stavljena u 50 g SCX kolonu i eluirana sekvencijalno sa DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Bazne frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio 3-amino-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao bezbojna amorfna čvrsta supstanca (782 mg, 99%). m/z: ES+[M+H]+ 380.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro -4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0333]
[0334] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.214 mL, 2.27 mmol) u mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (782 mg, 2.06 mmol) i trietilamina (0.632 mL, 4.53 mmol) u DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana 5 dana pre nego što je filtrirana i isprana sa DCM da se dobije (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (480 mg, 55%) kao bezbojna čvrsta supstanca. Tečnosti su koncentrovane i prečišćene fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 20 do 60% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (193 mg, 22%) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca (kombinovani prinos: 77%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.01 -1.17 (1H, m), 1.18 -1.39 (3H, m), 1.68 -1.84 (2H, m), 1.78 (3H, s), 1.89 (1H, m), 2.51 (2H, m), 3.48 -3.65 (1H, m), 7.74 (1H, d), 8.38 (1H, s), 8.71 (1H, s), 10.66 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 422.
Primer 13: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0335]
1 2
[0336] U rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.042 g, 0.090 mmol) rastvoren u DCM (2 mL) je dodat HCl (4 M u dioksanu; 0.429 mL, 1.72 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom kako bi se dobila sirova čvrsta supstanca (33 mg). Ova čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (2 mL) i trietilaminu (0.026 mL, 0.19 mmol). Zatim je dodat anhidrid sirćetne kiseline (9.6 µL, 0.10 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u (10% MeOH u DCM). Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.027 g, 74%) kao bezbojni suvi film.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.09 -1.24 (1H, m), 1.41 -1.56 (3H, m), 1.87 -2.04 (6H, m), 2.25 (1H, d), 2.51 (4H, s), 2.9 -2.98 (2H, m), 3.73 (2H, s), 3.87 (1H, dtd), 4.26 (2H, t), 5.60 (1H, d), 7.84 (1H, s), 8.11 (1H, s), 8.25 (1H, d), 8.30 (1H,
s). m/z: ES+[M+H]+ 431.
[0337] Postupci za pripremanje polaznog materijala terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat su opisani u nastavku:
Pripremanje 3-bromo-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin
[0338]
[0339] HCl (4 M u dioksanu; 3.31 mL, 13.24 mmol) je dodat u jednom delu u terc-butil 3-bromo-6,7-dihidropirazolo[l,5-a]pirazin-5(4H)-karboksilat (0.400 g, 1.32 mmol) u DCM (6) mL) na 20 °C. Dobijena smeša je mešana na 20 °C 60 minuta. Formirana je bela čvrsta supstanca. Smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je ponovo
1
rastvoren u mravljoj kiselini (12.7 mL, 331 mmol) i tretiran formaldehidom (0.64 mL, 8.6 mmol). Ova nova smeša je mešana na 100 °C tokom 8 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u EtOAc (25 mL) i zatim ispran zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom (2 x 25 mL); kombinovani vodeni slojevi su izvađeni sa EtOAc (2 × 25 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod redukovanim pritiskom i dobijeni sirovi ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-bromo-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirazin (0.185 g, 64.7%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.45 (3H, s), 2.75 -2.85 (2H, m), 3.48 (2H, s), 4.05 -4.15 (2H, m), 7.35 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 218 (<81>Br izotop).
Pripremanje 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin
[0340]
[0341] 3-Bromo-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin (0.185 g, 0.860 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.435 g, 1.71 mmol), kalijum acetat (0.294 g, 3.00 mmol) i Pd(P(Cy)3)2Cl2(0.063 g, 0.090 mmol) su suspendovani u DMA (3 mL). Reakcija je zagrevana do 80 °C tokom 5 h, zatim 90 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i zatim razblažena sa vodom (20 mL) i izvađena sa EtOAc (20 mL).
Kombinovane organske materije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 100% DCM u heptanu, a zatim 0 do 10% MeOH u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin (0.20 g, 89%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 2.52 (3H, s), 2.88 -2.92 (2H, m), 3.80 (2H, s), 4.22 (2H, t), 7.72 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 264.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat
[0342]
1 4
[0343] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.200 g, 0.42 mmol; kao što je pripremljeno u Primeru 10), 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5]-a]pirazin (0.197 g, 0.750 mmol), 2. generacija X-Phos Prekatalizator (0.033 g, 0.040 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (0.218 g, 1.25 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (0.800 mL) na 45 °C. Smeša je mešana na 45 °C 18 h. Dodaje se još druge generacije X-Phos Prekatalizator(0.033 g, 0.04 mmol), a temperatura se podigne na 60 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je ohlađena i propuštena kroz SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu, zatim 0 do 10% MeOH u DCM). Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije terc-butil((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)karbamoil) cikloheksil)karbamat (0.054 g, 27%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.04 -1.19 (1H, m), 1.44 (12H, s), 1.87 -2.02 (3H, m), 2.29 (1H, d), 2.33 -2.46 (1H, m), 2.53 (3H, s), 2.95 -3 (2H, m), 3.50 (1H, s), 3.76 (2H, s), 4.28 (2H, t), 4.52 (1H, s), 7.85 (1H, s), 8.12 (2H, s), 8.26 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 489.
Primer 14: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0344]
[0345] U mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (111 mg, 0.290 mmol), trietilamina (0.084 mL, 0.60 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amina (1.748 mg, 0.01 mmol) u
1
DCM (10 mL) dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.032 mL, 0.34 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t.4 h, i zatim prečisti jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i frakcije koje su sadržale proizvod su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimeti-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (86 mg, 70%) kao bela čvrsta supstanca (Oblik A).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.09 (1H, d), 1.28 (9H, s), 1.78 (6H, s), 1.90 (1H, d), 2.62 (1H, s), 2.89 (2H, s), 3.57 (1H, dt), 3.95 (2H, s), 7.73 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.33 -8.36 (1H, m), 10.53 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Optička rotacija
[0346] Postupak 1: Naslovni materijal (10 mg) je rastvoren u 1 mL acetonitrila i bistri rastvor je polako uparen na r.t. tokom 3 dana. Dobijena čvrsta supstanca je nađena kao Primer 14 u kristalnom Obliku A.
[0347] Postupak 2: Naslovni materijal (10 mg) se doda u 0.1 mL acetonitrila i dobijena suspenzija se meša na sobnoj temperaturi 18 h i zatim se suši na vazduhu tokom 3 dana. Dobijena čvrsta supstanca je nađena kao Primer 14 u kristalnom Obliku A.
[0348] Kristali Oblika A su analizirani pomoću XRPD i rezultati su prikazani u tabeli ispod i prikazani su na Slici 1. XRPD čvrste supstance potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži
1
isključivo Oblik A koji ima rendgenski difraktogram praškastog uzorka sa specifičnim maksimumima na oko 2-teta = 5.9, 7.0, 9.4, 10.5, 11.5, 11.7, 17.6, 18.0, 20.2 i 21.0°.
Primer 14 Oblik A glavni maksimumi
[0349]
[0350] Kristali (Oblik A) dobijeni prema Primeru 14 su analizirani toplotnim tehnikama. DSC analiza je pokazala da se Oblik A topi sa početnom tačkom na 191° i maksimum na 193°. TGA pokazuje da Oblik A pokazuje gubitak mase od oko 1.6% posle zagrevanja od 22 do 200 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na Slici 2.
[0351] Alternativna procedura za pravljenje Primera 14 kao što je opisano u Primeru 85.
[0352] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetik-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje etil 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-il)propanoat
[0353]
1
[0354] 1H-pirazol (20 g, 293.78 mmol), etil 3-bromo-2,2-dimetilpropanoat (61.4 g, 293.78 mmol) i cezijum karbonat (144 g, 440.68 mmol) u DMA (200 mL) su mešani na 80 °C 16 h. Smeša je zatim sipana u vodu (400 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (150 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobilo bezbojno ulje. Ovo ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 10 do 40% etil acetata u heptanu). Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio etil 2,2-dimetil-3-(lH-pirazol-l-il)propanoat (46.0 g, 80.0%), kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 0.97 (6H, s), 1.02 (3H, t), 3.93 (2H, q), 4.10 (2H, s), 6.00 (1H, t), 7.16 (1H, d), 7.26 (1H, d). m/z:(ES+)[M+H]+ = 197.
Pripremanje 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-1-il)propionske kiseline
[0355]
[0356] Vodeni natrijum hidroksid (5 M; 94 mL, 46 mmol) je u porcijama dodavan rastvoru etil 2,2-dimetil-3-(lH-pirazol-l-il)propanoata (46 g, 234 mmol) rastvoren u metanolu (250 mL) na r.t. Smeša je ostavljena da joj temperatura poraste do 37 °C tokom dodavanja.
Dobijeni rastvor je mešan pod ovim uslovima 30 minuta i zatim ohlađen do sobne temperature pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom do 1/3 zapremine. Ovaj novi rastvor je zakiseljen do ∼pH 3 sa koncentrovanom HCl. Bezbojno ulje je odvojeno iz smeše. Flašica je mešana u ledenoj kupki i bezbojna čvrsta supstanca je kristalizovana. Smeša je ostavljena da stoji preko noći na r.t., i čvrsta supstanca je izolovana filtracijom i osušena pod redukovanim pritiskom da bi se dobila 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-l-il)propionska kiselina (30.0 g, 76%) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 (6H, s), 4.23 (2H, s), 6.21 (1H, t), 7.35 -7.44 (1H, m), 7.54 -7.67 (1H, m), 12.41 (1H, br s). m/z: (ES+)[M+H]+ = 169.
Pripremanje 5,5-dimetil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-on
[0357]
1
[0358] n-BuLi u heksanu (9.03 mL, 24.38 mmol) je dodavan u kapima u 2,2-dimetil-3-(lH-pirazol-l-il)propansku kiselinu (2 g, 11.89 mmol) u 2-metil tetrahidrofuranu (40 mL). ) na -78 °C tokom perioda od 20 minuta pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na -78 °C tokom 15 minuta, a zatim je reakcija mešana na približno -45 °C tokom 1 h, a zatim je ostavljena da se zagreje na 15 °C pre nego što je reakcija polako prekinuta na ledeno hladnom zasićenom amonijum hloridu (100 ml). Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (100 mL) i sloj amonijum hlorida je odvojen i ekstrahovan još jednom sa EtOAc (50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL). Organski sloj se suši preko MgSO4, filtrira i ispari da se dobije 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-on (0.970 g, 54.3%) kao bledo žuto ulje koje se kristalizovalo pri stajanju.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.29 (6H, s), 4.36 (2H, s), 6.77 (1H, d), 7.89 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 151.
Pripremanje 5,5-dimetil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0359]
[0360] Hidrazin hidrat (4.13 mL, 85.23 mmol) je dodat u mešani rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona (2.56 g, 17.1 mmol). rastvoren u 2,2'-oksietanolu (48.5 mL, 511 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 180 °C 1 h. U smešu je pažljivo dodat kalijum hidroksid (3.35 mL, 59.7 mmol) i dobijena suspenzija je mešana na 150 °C tokom 2 h. Nakon hlađenja na r.t., reakciona smeša je razblažena vodom (50 mL), i pH je podešen na 4.5 sa razblaženom vodenom HCI (2N). Nakon ekstrakcije sa Et2O (5 x 50 mL), kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (2 x 20 mL) i zatim sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.922 g, 39.7%) kao bistro žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.21 (6H, s), 2.61 (2H, s), 3.80 (2H, s), 5.82 -5.93 (1H, m), 7.41 (1H, d).
Pripremanje 3-bromo-5,5-dimetil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
1
[0362] N-Bromosukcinimid (1166 mg, 6.55 mmol) je dodat u mešani rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (892 mg, 6.55 mmol) rastvorenog u DCM (10) mL) na 23 °C. Dobijena smeša je mešana na 23 °C 16 h pre nego što je razblažena sa DCM (20 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2 x 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-bromo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (1394 mg, 99%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.23 (6H, s), 2.58 (2H, s), 3.83 (2H, s), 7.35 (1H, s).
Pripremanje 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b][1,2-b]pirazol
[0363]
[0364] Pd(P(Cy)3)2Cl2(0.247 g, 0.33 mmol) je dodat 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (1.70 g, 6.69 mmol), 3-bromo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.720 g, 3.35 mmol) i kalijum acetat (1.150 g, 11.72 mmol) u DMA (7 mL). Dobijena suspenzija je degasirana i mešana na 85 °C tokom 5 h. Dihloro[l,l'-bis (difenilfosfino) ferocen]paladijum DCM adukt (0.273 g, 0.33 mmol) je zatim dodat u reakcionu smešu i mešanje je nastavljeno pod ovim uslovima 18 h pre nego što je reakciona smeša ohlađena do r.t. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2 x 15 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (15 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.458 g, 52.2%) kao
11
čvrsta supstanca krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.24 (6H, s), 1.27 (12H, s), 2.79 (2H, s), 3.87 (2H, s), 7.76 (1H, s).
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0365]
[0366] 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (433 mg, 0.83 mmol), terc-butil ((1R, 3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (360 mg, 0.75 mmol; kao što je pripremljeno u Primeru 10), 2. generacija X-Phos Prekatalizator (59.0 mg, 0.08 mmol) i dvobazni kalijum fosfat (392 mg, 2.25 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (0.8 mL) i se meša na 50 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće kako bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (188 mg, 51.3%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 23 °C) 1.25 (12H, d), 1.37 (7H, s), 1.74 (3H, s), 1.87 (1H, d), 2.52 -2.62 (1H, m), 2.88 (2H, s), 3.18 -3.29 (1H, m), 3.93 (2H, s), 6.80 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.32 -8.35 (1H, m), 10.56 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 488.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0367]
[0368] Tert-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (186 mg, 0.380 mmol) je rastvoren u HCl u dioksanu (4 M; 0.810 mL, 3.24 mmol) i MeOH (5 mL) je mešano na r.t. tokom 18 h.
Reakciona smeša je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni produkt je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3in MeOH, i čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5)-6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (114 mg, 77%) kao bela čvrsta supstanca koja je direktno upotrebljena u sledećem koraku m/z: ES+[M+H]+ 388.
Primer 15: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid:
[0369]
[0370] Dodat je u kapima anhidrida sirćetne kiseline (0.021 mL, 0.22 mmol) u (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin)-3-il) piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.066 g, 0.18 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1.141 mg, 9.34 umol) i trietilamin (0.081 mL, 0.58 mmol) u DCM (1 mL) na r.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na r.t.2 h pre nego što se ugasi zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (10 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (2 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena bela čvrsta supstanca je prečišćena blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu. Frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio poluproizvod koji je dalje prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5 µm silika, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) koristeći manje polarne smeše vode (koje sadrže 1% NH3) i MeCN kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid (9.80 mg, 12.6%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.13 (1H, dd), 1.31 -1.52 (4H, m), 1.87 -1.95 (2H, m), 1.96 (4H, s), 2.20 (3H, dd), 2.39 2.5 (1H, m), 3.39 -3.45 (2H, m), 4.16 (2H, t), 4.81 (1H, s), 5.49 (1H, d), 7.79 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.30 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 417.
[0371] Procedure za pripremanje početnog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisane ispod:
Pripremanje 3-jodo-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina
[0372]
[0373] N-Jodosukcinimid (0.581 g, 2.58 mmol) je dodat u 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (0.265 g, 2.15 mmol) u acetonitrilu (5 mL) na r.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na r.t.1 h pre dodavanja vode (20 mL). Mešanje je nastavljeno 1.5 h, a zatim je reakciona smeša ekstrahovana sa MTBE (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sekvencijalno sa 2 M vodenim NaOH (20 mL), rastvorom Na2S2O3(20 mL, 10% w/v) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL) pre nego što su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-jodo-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirimidin (0,155 g, 28,9%) kao bela kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.16 (2H, q), 3.32 -3.44 (2H, m), 3.98 (1H, s), 4.12 (2H, t), 7.24 (1H,
s). m/z: ES+[M+H]+ 250.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0374]
[0375] 3-jodo-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirimidin (0.150 g, 0.600 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.184 mL, 0.9 mmol) su rastvoreni u THF (4 mL) na 4 °C. Zatim izopropilmagnezijum hlorid kompleks litijum hlorida u THF (1.3
11
M; 2.78 mL, 3.61 mmol) dodat je u kapima. Dobijena smeša je mešana na 4 °C tokom 16 h, zatim dalje kompleks izopropilmagnezijum hlorida litijum hlorida u THF (1.3 M; 2.78 mL, 3.61 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.184 mL, 0.90 mmol). Reakcija je mešana pod ovim uslovima tokom 1 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (20 mL) i ispran redom sa zasićenim vodenim NH4CI (25 mL), vodom (20 mL) i zasićenim natrijum hloridom (20 mL). Kombinovani vodeni slojevi su isprani sa DCM (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6 7-tetrahidropirazolo[l,5-a]pirimidin koji je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.160 g, 0.33 mmol; kao što je pripremljeno u Primeru 10), 2. generacija X-Phos Prekatalizator (0.026 g, 0.03 mmol) i trobazni kalijum fosfat (0.175 g, 1.00 mmol) su rastvoreni u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (0.8 mL) na 50 °C. Dobijena smeša je mešana na 50 °C tokom 2 h i zatim na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u DCM (20 mL) i ispran sa vodom (20 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 30% EtOAc u heptanu. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 30% EtOAc u heptanu.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.44 (12H, s), 1.82 -2.46 (8H, m), 3.27 -3.36 (3H, m), 4.12 (3H, t), 5.33 (1H, d), 7.80 (1H, s), 8.13 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.20 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 475.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid trihidrohlorida
[0376]
[0377] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.086 g, 0.18 mmol) i HCl u dioksanu (4 M; 0.362 mL, 1.45 mmol) su rastvoreni u metanolu (2 mL) na r.t. pod vazduhom. Dobijeni rastvor je mešana na sobnoj temperaturi 3 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Dobijeni materijal (66 mg) je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 375.
Primer 16: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0378]
[0379] U mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (65 mg, 0.18 mmol), trietilamina (0.054 mL, 0.39 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amina (1.123 mg, 9.19 µmol) u DCM (5 mL) dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.021 mL, 0.22 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i frakcije su isparene da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (60.0 mg, 82.0%) kao bezbojno ulje koje je kristalizovano iz smeše etar/heptana da bi se dobila bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.10 (1H, t), 1.29 (9H, s), 1.79 (6H, s), 1.85 -1.94 (1H, m), 2.57 -2.66 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.58 (1H, dt), 3.90 (2H, s), 7.21 (1H, dd), 7.74 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.18 -8.24 (2H, m), 10.32 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 396.
[0380] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetik-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0381]
11
[0382] Terc-butil ((1R,3S)-3-((4-bromopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1.50 g, 3.77 mmol; kao što je pripremljeno u Primeru 3), kalijum acetat (1.11 g, 11.3 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (1.44 g, 5.65 mmol), i PdCl2(dppf) (0.276 g, 0.380 mmol) su napunjeni u flašicu. Dodaje se 1,4-dioksan (30 ml) i smeša se 3 h zagreva na 90 °C pod azotom. Smeša je ostavljena da se ohladi i čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Dodati su etil acetat (100 mL) i voda (50 mL) i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 mL), a kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod, terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (2.76 g), kao tamno braon ulje. Ovo ulje je upotrebljeno direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja m/z:ES+[M+H]+ 446.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0383]
[0384] Dihlor[l,l'-bis(di-t-butilfosfino)ferocen]paladijum(II) (45.5 mg, 0.07 mmol) je dodat u degasirani rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (518 mg, 0.70 mmol), 3-bromo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (150 mg, 0.70 mmol; kao što je pripremljeno u Primeru 14) i trobazni kalijum fosfat (444 mg, 2.09 mmol) u 1,4-dioksanu (5 mL) i vodi (0.5 mL). Dobijena smeša je mešana na 90 °C tokom 18 h, i zatim prečisti jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom kako bi se
11
dobio sirovi proizvod kao braon ulje. Ovo ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanu). Čiste frakcije su isparene do suvoće kako bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (100 mg, 31.6%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 454.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0385]
[0386] Tert-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (93 mg, 0.21 mmol) je rastvoren u HCl u dioksanu (4 M; 0.436 mL, 1.74 mmol) i MeOH (5 mL) i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom 18 h.
Reakciona smeša je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX-2 kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Sirovi proizvod je dalje prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 10% (7N amonijak u metanolu) u DCM. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimeti-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (68,0 mg, 94 %) kao bela čvrsta supstanca. m/z ES+[M+H]+ 354.
Primer 17: (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid
[0387]
11
[0388] HATU (108 mg, 0.28 mmol) je dodat u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (35 mg, 0.34 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.28 mmol; dobijene prema Primeru 16), i trietilamin (0.12 mL, 0.85 mmol) u DMF (1 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 50 °C 4 h i zatim ohlađena do r.t. Reakciona smeša je prečišćena direktno preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid (92 mg, 74%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.74 (2H, m), 0.85 -1.01 (2H, m), 1.15 -1.27 (9H, m), 1.44 (1H, q), 1.61 -1.77 (3H, m), 1.79 -1.87 (1H, br. d), 2.52 -2.59 (1H, m), 2.86 (2H, s), 3.54 -3.63 (1H, m), 3.83 (2H, s), 6.10 (1H, s), 7.12 -7.16 (1H, m), 7.57 (1H, d), 7.90 (1H, s), 8.13 -8.16 (2H, m), 10.27 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 438.
Primer 18: N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0389]
[0390] HATU (77 mg, 0.20 mmol) je dodat u rastvor oksetan-3-karboksilne kiseline (25 mg, 0.24 mmol), (1S,3R)-3-amino-N(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (72 mg, 0.20 mmol; dobijene prema Primeru 16), i trietilamin (0.085 mL, 0.61 mmol) u DMF (1 mL). Smeša je mešana na r.t. tokom 4 h i zatim prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b])pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (17 mg, 19%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.06 -1.17 (1H, m), 1.26 -1.39 (9H, m), 1.77 -1.86 (3H, m), 1.91 -1.94 (1H, br d), 2.57 -2.7 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.54 -3.76 (2H,
11
m), 3.90 (2H, s), 4.4 -4.71 (4H, m), 7.21 (1H, dd), 7.82 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.21 -8.24 (2H, m), 10.33 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 438.
Primer 19: N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0391]
[0392] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor oksetan-3-karboksilne kiseline (32 mg, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.26 mmol; dobijene prema Primeru 14), i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Smeša je mešana na r.t.16 h pre nego što se ugasi sa vodom (20 mL). Smeša je zatim ekstrahovana sa DCM (50 mL), i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL) pre nego što je propušten kroz uložak za separaciju faza. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b])pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (39 mg, 32%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.06 -1.14 (1H, m), 1.62 -1.75 (9H, m), 1.72 -1.81 (3H, m), 1.92 (1H, br. d), 2.59 -2.7 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.56 -3.73 (2H, m), 3.95 (2H, s), 4.53 -4.66 (4H, m), 7.80 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.56 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Primer 20: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamid
[0393]
11
[0394] HATU (78 mg, 0.21 mmol) je dodat u rastvor (S)-2-hidroksipropanoične kiseline (19 mg, 0.21 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksanecarboksamida (80 mg, 0.21 mmol; dobijene prema Primeru 14), i trietilamin (0.086 mL, 0.62 mmol) u DMF (1 mL). Smeša je mešana na r.t. tokom 1 h i zatim prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamid (56 mg, 59%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.14 -1.21 (3H, m), 1.23 -1.54 (10H, m), 1.66 -1.91 (4H, m), 2.56 -2.70 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.53 -3.72 (1H, m), 3.87 -3.97 (3H, m), 5.37 (1H, d), 7.49 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 460.
Primer 21: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid [0395]
[0396] HATU (78 mg, 0.21 mmol) je dodat u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (25 mg, 0.25 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (80 mg, 0.21 mmol; dobijene prema Primeru 14), i trietilamin (0.086 mL, 0.62 mmol) u DMF (1 mL). Smeša je zagrevana na 50 °C 3 h i zatim ohlađena do r.t. Reakciona smeša je prečišćena direktno preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100
12
mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid (25 mg, 26%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.72 -0.85 (2H, m), 0.94 -1.08 (2H, m), 1.23 -1.49 (9H, m), 1.47 -1.58 (1H, m), 1.67 -1.84 (3H, m), 1.87 (1H, br. d), 2.57 -2.66 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.60 -3.71 (1H, m), 3.95 (2H, s), 6.16 (1H, s), 7.62 (1H, d), 8.01 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Primer 22: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0397]
[0398] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (800 mg, 1.90 mmol; pripremljeni prema Primeru 12), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (825 mg, 5.69 mmol), paladijum acetat (171 mg, 0,76 mmol) i kalijum acetat (372 mg, 3.79 mmol) su suspendovani u DMA (15 mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Cev je degasirana i pročišćena azotom (3x). Reakcija se zatim podvrgne mikrotalasnim uslovima (150 °C, 16 h) i ohladi na r.t. Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijena svetlo smeđa čvrsta supstanca je rekristalizovana korišćenjem EtOAc/heptana i osušena pod vakuumom da se dobije (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksanekarboksamid (180 mg, 22%) kao bela čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobila druga serija (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (118 mg, 14%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 -1.16 (1H, m), 1.19 -1.41 (9H, m), 1.72 -1.81 (6H, m), 1.91 (1H, br. d), 2.57 -2.68 (1H, m), 2.71 (2H, s), 3.50 -3.62 (1H, m), 3.91 (2H, s), 7.51 (1H, s), 7.75 (1H, d), 8.28 (1H, s), 8.42 (1H, s), 10.66 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Pripremanje 4,4-dimetilpirolidin-2-tiona
[0399]
[0400] Lavesonov reagens (9.83 g, 24.30 mmol) je dodat u mešani rastvor 4,4-dimetilpirolidin-2-ona (5.0 g, 44.19 mmol) u toluenu (100 mL). Dobijena smeša je zagrevana pod refluksom pod azotom tokom 4.5 h. Smeša je zatim ohlađena na r.t. i održava se pod ovim uslovima 18 h pre nego što se koncentruje pod redukovanim pritiskom da se dobije žuta čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je rastvorena u DCM, dodat je silicijum dioksid, i smeša je filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobilo žuto ulje. Ovo ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa DCM, da bi se dobio 4,4-dimetilpirolidin-2-tion (2.8 g, 48%) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca. Nečiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobila druga serija 4,4-dimetilpirolidin-2-tiona kao krem/bledo žuti kristali (3.1 g, 55%). Uprkos nešto manjoj čistoći, ova druga serija materijala je takođe pogodna za upotrebu u narednim koracima.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.19 (6H, s), 2.70 (2H, s), 3.36 (2H, s), 7.75 (1H, br. s). Pripremanje 3,3-dimetil-5-(metiltio)-3,4-dihidro-2H-pirol hidrojodida
[0401]
[0402] Jodometan u MTBE (2 M; 2.7 mL, 85.4 mmol) je dodat u mešani rastvor 4,4-dimetilpirolidin-2-tiona (2.76 g, 21.3 mmol) u iPrOH (45 mL) na r.t. Tokom vremena formiran je beli talog. Reakcija je mešana na r.t.18 h i zatim filtrirana. Sakupljena čvrsta supstanca je isprana sa Et20 i zatim osušena da bi se dobio 3,3-dimetil-5-(metiltio)-3,4-dihidro-2H-pirol kao hidrojodid so (4.3 g, 75%). Ovaj materijal je prenesen u sledeću fazu bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.17 (6H, s), 2.74 (3H, s), 3.10 (2H, s), 3.72 (2H, s), 12.3 (1H, br. s).
Pripremanje N-(2,2-dimetoksietil)-3,3-dimetil-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin hidrojodida [0403]
[0404] 2,2-dimetoksietanamin (1.82 mL, 16.7 mmol) je dodat u mešanu suspenziju 3,3-dimetil-5-(metiltio)-3,4-dihidro-2H-pirol hidrojodida (4.32 g, 15.9 mmol) u etanolu. (40 mL) na r.t. Hidrojodidna so se rastvorila posle dodavanja amina. Dobijena smeša je zagrevana pod refluksom (korišćenjem sredstva za beljenje) tokom 4.5 h i zatim uklonjena iz toplote. Nakon još 18 h reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi N-(2,2-dimetoksietil)-3,3-dimetil-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin hidrojodid (5.35 g, 102). %) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.12 (6H, s), 2.58 -2.7 (2H, m), 3.34 (8H, s), 3.37 (2H, d), 4.51 (1H, m), 9.35 (2H, br. s).
Pripremanje 6,6-dimetil -6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazola
[0405]
[0406] Hlorovodonična kiselina (4 M; 5 mL, 20 mmol) je dodat u mešani rastvor N-(2,2-dimetoksietil)-3,3-dimetil-3,4-dihidro-2H-pirol-5-amin hidrojodida (5.35 g, 16.3 mmol) u 1,4-dioksanu (50 mL) na r.t. Dobijena smeša je zagrevana na 90 °C 3 h. Smeša je zatim ohlađena na r.t. i mešana pod ovim uslovima 2,5 dana pre nego što se koncentruje pod redukovanim pritiskom da se dobije tamno braon katran. Ova smeša je rastvorena u DCM i razblažena sa Et2O. Vodeni amonijak (28-30%; 2.8 mL) je dodat u mešanu smešu. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[l,2-a]imidazol (2.32 g, 100%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21 °C) 1.28 (6H, s), 2.70 (2H, s), 3.69 (2H, s), 6.84 (1H, d), 7.03 (1H, d).
Primer 23: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
12
[0408] (R)-Tetrahidrofuran-3-karboksilna kiselina (0.036 g, 0.31 mmol), HATU (0.118 g, 0.31 mmol) i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) su mešani zajedno u DMF (2 mL) pod azotom tokom 20 minuta. Zatim se (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin -2-il)cikloheksankarboksamid (0.100 g, 0.26 mmol; dobijen prema Primeru 14 korišćenjem 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol, pripremljen kao što je opisano u daljem tekstu) u DMF (1 mL) je dodat, i smeša je mešana još 30 minuta. Reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i smeša je prečišćena fleš C18 hromatografijom, eluiranjem gradijentom 20 do 60% MeCN u vodi koja sadrži 1% vodeni NH4OH. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (R)-N -((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b] pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (0.113 g, 90%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 -1.2 (1H, m), 1.20 -1.38 (9H, sm), 1.79 (3H, br. d), 1.86 -2.03 (3H, m), 2.56 -2.63 (1H, m), 2.81 -2.91 (3H, m), 3.52 -3.78 (4H, m), 3.83 (1H, t), 3.95 (2H, s), 7.83 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.34 (1H, s), 10.53 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 486.
[0409] Alternativni postupak koji se koristi za dobijanje 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b] pirazol (koji je već opisan u Primeru 14, Međujedinjenja) je opisan u daljem tekstu:
Pripremanje 3-jodo-5,5-dimetil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0410]
[0411] NIS (1.646 g, 7.32 mmol) je dodat u porcijama u 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (0.906 g, 6.65 mmol; pripremljene prema Primeru 14) u acetonitrilu (40 mL) na r.t. pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 23 °C 18 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (50 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (40 mL), vodenim natrijum tiosulfatom (10 g u 30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL).
Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod (1.59 g, 91%) kao narandžasto ulje. Ovo ulje je prečišćeno destilacijom pod redukovanim pritiskom (0.12 mbar), sa sakupljanjem na početnoj temperaturi od 140 °C. Na ovaj način sakupljen destilat daje 3-jodo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1.38 g, 79%) kao bezbojnu tečnost. Alternativno, jodid je prenesen u sledeći korak bez destilacije.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.30 (6H, s), 2.63 (2H, s), 3.94 (2H, s), 7.47 (1H, s).
Pripremanje 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b][1,2-b]pirazol
[0412]
[0413] Kompleks litijum hlorida izopropilmagnezijum hlorida u THF (1.3 M; 1.69 mL, 2.20 mmol) je dodavan u kapima tokom 10 minuta u 3-jodo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (0.444 g, 1.69 mmol) u THF (5 mL) na -78 °C pod azotom. Dobijena smeša je mešana na -78 °C 45 minuta. Zatim je u reakcionu smešu u kapima dodavan 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.473 g, 2.54 mmol), održavajući unutrašnju temperaturu na -78 °C. Po završetku dodavanja, reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na r.t. preko 18 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom i razblažena sa EtOAc (40 mL). Dobijena smeša je isprana sekvencijalno zasićenim vodenim amonijum hloridom (20 mL), vodom (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.41 g, 93%) kontaminiran sa ∼13 mol% des-jodo polaznog materijala na osnovu NMR analize kao čvrste supstance nalik vosku. Trituracija sa heptanom daje čist 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.24 g, 55%) kao bela čvrsta supstanca.
12
Primer 24: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid [0414]
[0415] Rastvor (S)-tetrahidrofuran-3-karboksilne kiseline (0.036 g, 0.31 mmol), HATU (0.12 g, 0.31 mmol) i trietilamina (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMF (2 mL) je mešan pod azotom za 20 minuta. Zatim se (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin -2-il)cikloheksankarboksamid (0.10 g, 0.26 mmol; dobijeno prema Primeru 14 korišćenjem 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol, pripremljen kako je opisano u Primeru 23) u DMF (1 mL) je dodat, i dobijena smeša je mešana pod ovim uslovima 30 minuta. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i dobijeni ostatak je prečišćen fleš C18 hromatografijom, eluiranjem gradijentom 20 do 60% MeCN u vodi koja sadrži 1% NH4OH. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b] pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (0.10 g, 81%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 -1.16 (1H, m), 1.21 -1.41 (9H, m), 1.72 -1.83 (3H, m), 1.87 -2.04 (3H, m), 2.57 -2.66 (1H, m), 2.82 -2.91 (3H, m), 3.54 -3.77 (4H, m), 3.83 (1H, t), 3.95 (2H, s), 7.83 (1H, d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.54 (1H, s). m/z: ES+[M+H+] 486.
Primer 25: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0416]
12
[0417] Tetrakis(trifenilfosfin paladijum(0) (0.13 g, 0.12 mmol) i Xantphos (0.13 g, 0.23 mmol) se dodaju zajedno u jednom delu u degasiranu smešu terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata (0.670 g, 2.76 mmol), 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0.61 g, 2.3 mmol), cezijum-karbonata (1,88 g, 5,76 mmol) i 1,4-dioksana (26 ml). Dobijena svetlo žuta smeša je održavana pod uslovima refluksa potapanjem u uljanu kupku koja je prethodno zagrejana na 120 °C. Nakon 20 h reakcija je ohlađena, razblažena sa 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil) cikloheksil)karbamat kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 10 mL, 40 mmol) i DCM (5 mL) su dodati, što je rezultiralo u bistrom narandžastom rastvoru koji je ubrzo postao mutan i žut. Metanol (∼3 mL) je titrisan u reakciju dok smeša ne postane uglavnom bistra. Posle 15 minuta narandžasta smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobila narandžasta čvrsta materija.
Piridin (3.7 ml, 46 mmol) je dodat u ovu čvrstu supstancu zajedno sa DCM (19 mL).
Zabeležena je blaga egzoterma i reakcija je uronjena u vodenu kupku. Zatim je u kapima dodat anhidrid sirćetne kiseline (0.43 mL, 4.6 mmol). Posle još 10 minuta, dodato je još 200 µL anhidrida sirćetne kiseline. Posle još 30 minuta, dodato je još 600 µL anhidrida i 6 mL piridina. Reakcija je održavana pod ovim uslovima još 45 minuta i zatim je sipana u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata i etil acetat. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak narandže je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 50 do 100% EtOAc u heksanu, a zatim 0 do 20% metanol u etil acetatu, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido -N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.89 g, 94) %) kao čvrsta žuta pena. H NMR (DMSO-d6, 27 °C): 1.00 -1.16 (1H, m), 1.22 -1.40 (9H, m), 1.74 -1.81 (6H, m), 1.83 -1.94 (1H, m), 2.55 -2.68 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.49 -3.65 (1H, m), 3.94 (s, 2H), 7.75 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.28 (1H, d), 8.30 (1H, d), 10.46 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 414.
[0418] Postupak 1: Suspenzija iz Primera 25 (381 mg) u EtOAc je mešana na r.t.18 h, zatim filtrirana i isprana hladnim EtOAc da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-
12
dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (149 mg) kao kristalna bela čvrsta supstanca poznata kao Primer 25 Oblika A.
[0419] Postupak 2: Približno 5 g Primera 25 preuzeto je u 1:1:1 heksan:DCM:aceton (∼20 mL) i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio blago providni gel. Ovaj gel je zatim tretiran sa malom količinom istog rastvarača (∼5 mL) i snažno mešan 10 minuta dok se ne formira homogena bela smeša i ne vidi se gel. Ova smeša se filtrira sa 30% acetona u heksanu, i talog se osuši pod vakuumom na 50 °C da se dobije Primer 25 Oblika A kao bela čvrsta supstanca.
[0420] Kristali Primera 25 (Oblika A) su analizirani pomoću XRPD i rezultati su prikazani u tabeli ispod i prikazani su na Slici 3. XRPD čvrste supstance potvrđuje da čvrsta supstanca sadrži Oblik B.
[0421] Primer 25 Oblika A glavnih maksimuma su prikazani u Tabeli 2 ispod:
[0422] U skladu sa ovim pronalaskom, obezbeđen je kristalni oblik, Oblik A, koji ima rendgenski difraktogram praha sa specifičnim maksimumima na oko 2-teta
12
= 8.8, 10.1, 11.5, 18.9, 20.0, 20.5, 21.8, 22.8, 23.9 i 25.2°.
[0423] Kristali dobijeni Postupcima 1 i 2 (Oblik A) su analizirani toplotnim tehnikama, DSC analiza je pokazala da se Oblik A topi sa početnom tačkom na 194° i maksimum na 197°. TGA pokazuje da Oblik A pokazuje gubitak mase od oko 1.4% posle zagrevanja od 22 do 100 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na Slici 4.
[0424] Alternativni postupak za dobijanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid je opisan u Primeru 86
[0425] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznih materijala terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat i 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0426]
[0427] 2-hloro-5-fluoro-4-jodopiridin (1.00 g, 3.88 mmol), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (1.53 g, 5.83 mmol; pripremljeni u skladu sa primerom 23), druga generacija XPhos prekatalizatora (0.31 g, 0.39 mmol) i dibazni kalijum fosfat (2.03 g, 11.65 mmol) su rastvoreni u degasiranom dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL) na 21 °C. Reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 3 h, a zatim je smeša ohlađena, razblažena sa EtOAc (30 mL), i isprana vodom (10 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1.00 g, 97%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H
12
NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.36 (6H, s), 2.95 (2H, d), 3.97 (2H, s), 7.31 (1H, d), 7.94 (1H, d), 8.20 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 266.
Pripremanje (cis)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata [0428]
[0429] Benzil bromid (12.4 mL, 104 mmol) je dodat u kapima kao rastvor u DMF (10 mL) u degasiranu smešu cis-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (19.5 g, 80.0 mmol, pripremljen prema Primer 2 Međujedinjenja), cezijum karbonata (33.9 g, 104 mmol) i DMF (80 mL) na 0 °C. Ledena kupka je uklonjena i reakcija je mešana pod ovim uslovima tokom 18 h. Smeša je zatim razblažena sa jednakom zapreminom etil acetata i filtrirana pomoću ispiranja etil acetatom. Organski sloj je ispran sa 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3x) i zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida.
Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeno svetlo žuto ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 0 do 30% etil acetata u heksanima, da bi se dobio cisbenzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (25.4 g, 95%) kao bistra bezbojna ulje koje se stvrdnjava do bele čvrste mase.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.98 -1.34 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.67 -1.78 (2H, m), 1.84 (1H, d), 1.99 (1H, d), 2.35 -2.49 (1H, m), 3.17 -3.31 (1H, s), 5.09 (2H, s), 6.76 (1H, d), 7.30 -7.42 (5H, m). m/z: ES+[M+Na]+ 356.
Pripremanje (1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil) amino)cikloheksankarboksilata i (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata
[0430]
[0431] Cis-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (25.4 g, 76.2 mmol) je rastvoren preparativnim SFC uslovima (Kolona: Lux Amiloza-2, 5 µm, prečnik 21.2 mm, dužina 250 mm, temperatura kolone 40 °C, brzina protoka 80 ml/min), eluiranje sa 10% izopropanola u CO2, da bi se dobio (1S,3R)-benzil 3-((terc-
1
butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat (11.5 g, 45%) kao bela čvrsta supstanca i (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil) amino)cikloheksankarboksilat (11.5 g, 45%) kao bela čvrsta supstanca.
(1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata
[0432]<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.96 -1.34 (4H, m), 1.37 (9H, s), 1.68 -1.88 (3H, m), 1.98 (1H, d), 2.37 -2.48 (1H, m), 3.16 -3.32 (1H, m), 5.09 (2H, s), 6.59 -6.84 (1H, m), 7.26 -7.50 (5H, m). m/z: ES+[M+Na]+ 356.
Optičke rotacije:
(1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata
[0433]<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.95 -1.34 (4H, m), 1.37 (9H, s), 1.68 -1.78 (2H, m), 1.84 (1H, d), 1.98 (1H, d), 2.36 -2.48 (1H, m), 3.17 -3.34 (1H, m), 5.09 (2H, s), 6.76 (1H, d), 7.30 -7.41 (5H, m). m/z: ES+[M+Na]+ 356.
Optičke rotacije:
1 1
Analitički SFC uslovi:
Vreme zadržavanja:
[0434]
0.66 min, (1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata 0.96 min, (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata e.e.
> 98%, (1S,3R)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata 97.5%, (1R,3S)-benzil 3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata
Alternativni postupak za dobijanje (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (već opisan u Primeru 2, Međujedinjenja) je opisan u nastavku:
[0435]
[0436] Degasirana smeša (1S,3R)-benzil 3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata (11.5 g, 34.6 mmol), paladijum na ugljeniku (10 wt.%; 3.68 g, 34.5 mmol), i metanol (86 mL) je podvrgnut atmosferi vodonika (1 atm,
1 2
balon). Posle 18 h, smeša je filtrirana pomoću ispiranja metanolom. Filtrat je koncentrovan do blago mutnog, sivog ulja. Ovo ulje je stavljeno u etil acetat, osušeno preko natrijum sulfata, filtrirano i koncentrovano pod redukovanim pritiskom. Dobijena bela uljasta čvrsta supstanca se zagreva pod vakuumom dok se ne zaustavi svo isparavanje isparavanjem rastvarača. Hlađenje na r.t. dobija se (1S,3R)-3-((tertbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (8.4 g, 99%) kao bela čvrsta supstanca (vidi Primer 2, Međujedinjenja, za karakterizaciju).
Optičke rotacije:
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata
[0437]
[0438] Karbonil diimidazol (6.44 g, 39.74 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3 -((tertbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (3.22 g, 13.3 mmol) u DMF (30 mL) na 40 °C. Dobijena smeša je mešana na 40 °C 4 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do 0 °C, i amonijum acetat (7.15 g, 92.7 mmol) je dodat u jednom delu uz snažno mešanje. Ovo je praćeno razvojem gasa i stvaranjem pene. Mala količina (∼2 mL) DCM je dodavan duž strana flašice da bi se pena razdvojila i sprečilo da dođe do otvaranja boce. Postepeno se ova pena reapsorbuje u reakcionoj smeši, koja se ostavi da se zagreje na r.t. preko noći. Posle
1
ukupno 18 h pod ovim uslovima, reakciona smeša se sipa u ledenu vodu i dobijena smeša se meša u ovim uslovima 5 minuta pre nego što se filtrira vodom. Dobijeni talog se suši pod vakuumom na 80 °C 2 h pre nego što se ohladi na r.t. Vakuumsko sušenje je nastavljeno 18 h da se dobije terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (2.76 g, 86%) kao bela pahuljasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.99 -1.31 (4H, m), 1.38 (9H, s), 1.58 -1.85 (4H, m), 2.06 -2.19 (1H, m), 3.14 -3.26 (1H, m), 6.63 (1H, br s), 6.73 (1H, d), 7.17 (1H, br s). m/z: ES+[M+Na]+ 265.
Optičke rotacije:
Primer 26: cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida
[0439]
[0440] Tetrabutilamonijum fluorid u THF (1 M; 0.154 mL, 0.15 mmol) je dodat u mešani rastvor cis-3-((terc-butildimetilsilil) oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamid (68 mg, 0.15 mmol) u THF (3 mL) na r.t. u atmosferi azota. Reakciona smeša je mešana pod ovim uslovima tokom 2 h i zatim prečišćena pomoću SCX kolone, eluiranjem uzastopno sa DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen
1 4
preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 1% NH3) i MeCN kao eluente da bi se dobio cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamid (43 mg, 85%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.30 (6H, s), 2.05 (2H, qd), 2.28 -2.43 (2H, m), 2.71 -2.85 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.91 (2H, s), 3.98 (1H, q), 5.13 (1H, d), 7.17 -7.26 (1H, m), 7.98 (1H, s), 8.21 (1H, dd), 8.25 (1H, s), 10.30 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 327.
[0441] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridina -2-il)ciklobutankarboksamida
[0442]
[0443] Cis-N-(4-bromopiridin-2-il)-3-((terc-butildimetilsilil) oksi)ciklobutankarboksamid (365 mg, 0.800 mmol; pripremljeni prema Primeru 6), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3-dioksolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (185 mg, 0.700 mmol; pripremljeni prema Primeru 23), kalijum fosfat (446 mg, 2.10 mmol) i XPhos prekatalizator druge generacije (55 mg, 0.070 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (0.80 mL) na r.t. Dobijena smeša je degasirana, pročišćena azotom, i zatim zagrevana na 85 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je ohlađena na r.t. i razdeljena između EtOAc (50 mL) i vode (25 mL). Slojevi su razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 mL) i DCM (50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena narandžasta guma je prečišćena fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b] pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida (68 mg, 22%) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) 0.06 (6H, s),
1
0.89 (9H, s), 1.36 (6H, s), 2.22 -2.38 (2H, m), 2.49 -2.67 (3H, m), 3.02 (2H, s), 3.93 (2H, s), 4.15 -4.35 (1H, m), 7.11 (1H, dd), 7.82 (1H, s), 7.92 (1H, s), 8.17 (1H, d), 8.30 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 441.
Primer 27: cis-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida
[0444]
[0445] Tetrabutilamonijak fluorid u THF (1 M; 0.21 mL, 0.21 mmol) je dodat u mešani rastvor cis-3-((terc-butildimetilsilil) oksi)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamid (101 mg, 0.210 mmol) u THF (3 mL) na r.t. u atmosferi azota. Dobijena smeša je mešana pod ovim uslovima 18 h. Reakciona smeša je prečišćena korišćenjem SCX kolone, eluiranjem uzastopno sa DCM, MeOH i 1% NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom, a rezultirajući ostatak je dalje prečišćen preparativnom HPLC (kolona Waters SunFire, 5µ silika, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 0.1% mravlje kiseline) i MeCN kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio cis-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutan karboksamid (35 mg, 45%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.29 (6H, s), 2.04 (2H, qd), 2.37 (2H, qd), 2.77 (1H, ddd), 2.92 (2H, s), 3.96 (2H, s), 3.96 -4.02 (1H, m), 5.14 (1H, d), 8.02 (1H, s), 8.29 (1H, s), 8.34 (1H, d), 10.51 (1H,
s). m/z: ES+[M+H]+ 361.
[0446] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
1
Pripremanje cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)ciklobutankarboksamida
[0447]
[0448] T3P u etil acetatu (50 wt%; 2.85 mL, 4.79 mmol) dodaje se u mešani rastvor 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina (610 mg, 2.40 mmol; dobijene prema Primeru 2), cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilna kiselina (552 mg, 2.40 mmol; pripremljene prema Primeru 4) i piridina (0.78 mL, 9.6 mmol) u EtOAc (10 mL) na sr.t. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 18 h. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora amonijak hlorida (30 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)ciklobutan karboksamid (1.07g, 96%) u vidu kristalne čvrste mase krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21 °C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 2.23 -2.35 (2H, m), 2.47 -2.64 (3H, m), 4.17-4.32 (1H, m), 7.95 (1H, bs), 8.18 (1H, s), 8.86 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 467.
Pripremanje cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridina -2-il)ciklobutankarboksamida
[0449]
[0450] Cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)ciklobutankarboksamid (461 mg, 0.840 mmol), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (200 mg, 0.76 mmol; pripremljeni prema Primeru 23), kalijum fosfat (486 mg, 2.29 mmol) i XPhos prekatalizator druge generacije (60,0 mg, 0.08 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksanu i vodi na r.t. Dobijena smeša je degasirana, pročišćena azotom, i zatim zagrevana na 85 °C tokom noći. Reakcija je
1
ohlađena na r.t. i razdeljena između EtOAc (50 mL) i vode (25 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena narandžasta guma je prečišćena fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0 do 40% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su isparene do suvoće da bi se dobilo cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b] pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida (101 mg, 28%) kao bezbojna kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21 °C) 0.06 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.35 (6H, s), 2.24 -2.45 (2H, m), 2.5 -2.74 (3H, m), 2.98 (2H, s), 3.96 (2H, s), 4.18 -4.24 (1H, m), 7.77 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.29 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 475.
Primer 28: (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)mirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid
[0451]
[0452] Flašica napunjena sa (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hloropirimidin-4-il)cikloheksankarboksamidom (100 mg, 0.34 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinom (84 mg, 0.34 mmol), dihloro[1,1'-bis(di-tertbutilfosfino)ferocen]paladijum(II) (11 mg, 0.020 mmol) i kalijum fosfatom (215 mg, 1.01 mmol) je evakuisana i napunjena azotom (3x). Doda se degasirani 1,4-dioksan (1 mL), a zatim voda (0.2 mL), i smeša se zagreva do 90 °C i održava pod ovim uslovima 18 h. Reakcija je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je podeljen između zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (20 mL) i etil acetata (20 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa etil acetatom (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni sa baznim aluminijum oksidom, gradijentom elucije od 0 do 100% (10% MeOH u EtOAc) u heptanu da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid (55 mg, 43%) kao žućkasto smeđa čvrsta supstanca.<1>H NMR
1
(400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.01 -1.38 (4H, m), 1.76 -2.02 (11H, m), 2.62 -2.69 (1H, m), 3.10 (2H, t), 3.52 -3.61 (1H, m), 4.13 (2H, t), 7.74 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.21 (1H, d), 8.75 (1H, d), 10.72 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 383.
[0453] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hloropirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid su opisani u nastavku:
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((6-hloropirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0454]
[0455] 1-Hloro-N,N,2-trimetilpropenilamin (3.26 mL, 24.7 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (5.00 g, 20.6 mmol; pripremljene kao u primeru 2) u DCM (50 mL) i dobijena smeša je mešana 90 minuta na r.t. Zatim se dodaju 6-hloropirimidin-4-amin (2.66 g, 20.6 mmol) i piridin (2.0 ml, 25 mmol) i dobijena smeša se meša u ovim uslovima tokom 18 h. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (50 mL), i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x 50 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0 do 100% (10% metanol u etil acetatu) u heptanu. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane pod redukovanim pritiskom da se dobije terc-butil ((1R,3S)-3-((6-hloropirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1.0 g, 14%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES-[M-H]-353.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(6-hloropirimidin-4-il)cikloheksankarbosamid dihidrohlorida
[0456]
1
[0457] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0.655 mL, 21.6 mmol) je dodat u rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((6-hloropirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (900 mg, 2.54 mmol) u metanolu (5 mL), i dobijena smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je zatim razblažena toluenom (10 mL) i koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(6-hloropirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (880 mg, 106%) kao bela čvrsta supstanca koja je upotrebljena direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hloropirimidin-4-il)cikloheksankarbosamida [0458]
[0459] Acetil hlorid (0.11 mL, 1.5 mmol) je dodat u smešu (1S,3R)-3-amino-N-(6-hloropirimidin-4-il) cikloheksankarboksamida (0.217 g, 0.85 mmol), piridina (0.69 mL, 8.5 mmol), i DCM (7.7 mL) na 0 °C. Posle 30 minuta, dodato je još 200 µL acetil hlorida. Ovo je ponovo ponovljeno posle još 30 minuta. Reakcija je zatim ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 10 do 100% etil acetata u heksanu, zatim 0 do 15% metanola u etil acetatu) da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-hloropirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid (0.22 g, 87%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 0.99 -1.16 (1H, m), 1.18 -1.38 (3H, m), 1.72 -1.84 (6H, m), 1.85 -1.97 (m, 1 H), 2.58 -2.73 (1H, m) 3.50 -3.64 (1H, m) 7.76 (1H, d) 8.12 (1H, d) 8.74 (1H, d) 11.18 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 297.
Primer 29: trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutanekarboksamid
[0460]
14
[0461] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0.085 mL, 0.34 mmol) je dodat u rastvor trans-3-((terc-butildimetilsilil) oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid (29 mg, 0.070 mmol) u MeOH (1 mL) i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silika gel, prečnik 50 mm, dužina 100 mm), korišćenjem polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid (10 mg, 47%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 30 °C) 1.93 -2.05 (2H, m), 2.07 -2.18 (2H, m), 2.26 (2H, m), 2.60 (2H, m), 3.17 -3.28 (3H, m), 4.21 (2H, t), 4.49 (1H, p), 8.06 (1H, s), 8.33 (1H, d), 8.71 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 314.
[0462] Procedure za pripremanje početnog materijala trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid kao što je opisano ispod:
Pripremanje trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-hloropirimidin-4-il)ciklobutankarboksamida
[0463]
[0464] 1-hloro-N,N,2-trimetilpropenilamin (0.383 mL, 2.89 mmol) je dodat u rastvor trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (0.667 g, 2.89 mmol; dobijene prema Primeru 4, zamenom trans-3-hidroksiciklobutankarboksilne kiseline za cis-3-hidroksiciklobutankarboksilnu kiselinu) u DCM (10 mL) i dobijena smeša je mešana na r.t.
1.5 h. Zatim se dodaju 6-hloropirimidin-4-amin (0.25 g, 1.93 mmol) i piridin (0.23 mL, 2.9 mmol) i smeša se meša na r.t. preko noći. Reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL) i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 100% etil acetata u heptanu. Frakcije koje sadrže proizvod su kombinovane, koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-hloropirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid (0.230 g, 35%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.00 (6H, s), 0.84 (9H, s), 2.10 (2H, m), 2.38 -2.45 (2H, m), 3.21 (1H, t), 4.44 (1H, p), 8.14 (1H, s), 8.71 (1H, s), 11.13 (1H, s br). m/z: ES+[M+H]+ 342.
Pripremanje trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutanekarboksamida
[0465]
[0466] Trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6-hloropirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid (100 mg, 0.29 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (73 mg, 0.29 mmol), dihloro-[1,1'-bis(ditertbutilfosfino)ferocen]paladijum(II) (9.5 mg, 0.01 mmol) i kalijum fosfat (186 mg, 0.88 mmol) su napunjeni u bocu, i boca je evakuisana i natrag napunjena azotom (3x). Zatim se dodaje degasirani 1,4-dioksan (1 mL), i smeša se zagreva do 90 °C i održava pod ovim uslovima 2 h. Reakcija je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je podeljen između zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (20 mL) i etil acetata (20 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa etil acetatom (2 x 20 mL).
Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 100% EtOAc u heptanu da bi se dobio trans-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(6(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamid (29 mg, 23%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 0.00 (6H, s), 0.89 (9H, s), 1.91 -1.99 (2H, m), 2.08 (2H, m), 2.29 (2H, m), 2.63 (2H, m), 3.01 -3.10 (1H, m), 3.23 (2H, t), 4.21 (2H, t), 4.52 -4.63 (1H, m), 8.08 (1H, s), 8.31 (1H, d), 8.43 (1H, s br), 8.73 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 428.
Primer 30: (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid
[0467]
[0468] Anhidrid sirćetne kiseline (0.038 mL, 0.41 mmol) dodat je u kapima u sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid hidrohlorid (0.120 g, 0.308 mmol), 4-dimetilaminopiridin (2.07 mg, 0.02 mmol) i trietilamin (0.15 mL, 1.1 mmol) u DCM (2 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 4 h. Reakciona smeša je zatim ugašena zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (10 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 10 mL), a kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetoamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid (0.066 g, 55%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.02 -1.12 (1H, m), 1.25 -1.37 (9H, m), 1.76 -1.88 (6H, m), 1.90 -1.96 (1H, m), 2.61 -2.67 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.54 -3.61 (1H, m), 3.92 (2H, s), 7.76 (1H, br d), 8.03 (1H, d), 8.15 (1H, d), 8.73 (1H, dd), 10.75 (1H, s br). m/z: ES+[M+H]+ 397.
[0469] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetik-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid hidrohlorid su opisani u daljem tekstu:
14
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((6-bromopirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0470]
[0471] 1-Hloro-N,N,2-trimetilpropenilamin (0.46 mL, 3.5 mmol) je dodat u kapima u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (699 mg, 2.87 mmol; pripremljene prema Primeru 2) u DCM (10 mL) na 0°C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na 0 °C 1,5 h. Zatim se dodaju 6-Bromopirimidin-4-amin (400 mg, 2.30 mmol) i piridin (0.28 mL, 3.5 mmol) i reakciona smeša se meša na r.t. preko noći. Sirova reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijenoj čvrstoj supstanci, dodat je DCM. Dobijena smeša je zatim filtrirana i dobijeni talog je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 2% MeOH u DCM. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da se dobije terc-butil ((1R,3S)-3-((6-bromopirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (605 mg, 66%) kao bela čvrsta supstanca. m/z:ES+[M+H]+ 399
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)pirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0472]
[0473] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.039 g, 0.050 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0.18 g, 0.60 mmol; pripremljeni prema Primeru 23), terc-butil ((1R,3S)-3-((6-bromopirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.20 g, 0.50 mmol) i kalijum fosfat, tribazični, (0.262 g) 1.50 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL). Smeša je degasirana i mešana na 90 °C 2 h pod azotom. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a dobijeni ostatak je stavljen u vodu (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sekvencijalno sa EtOAc (2 x 20 mL) i DCM (20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio tercbutil((1R,3S)-3-((6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.18 g, 79 %) kao čvrsta supstanca krem boje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.06 -1.13 (1H, m), 1.35 (6H, s), 1.41 -1.50 (12H, m), 1.87-1.96 (3H, m), 2.26 -2.37 (1H, d), 2.38 -2.44 (1H, m), 3.04 (2H, s), 3.44 -3.58 (1H, m) 3.93 (2H, s), 4.44 -4.52 (1H, m), 8.00 (1H, br s), 8.13 (1H, s), 8.18 (1H, d), 8.72 (1H, dm/z: ES+[M+H]+ 455.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid hidrohlorid
[0474]
[0475] Terc-butil ((1R,3S)-3-((6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.160 g, 0.35 mmol) i hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0.71 mL, 2.8 mmol) su rastvoreni u metanolu (2 mL) na r.t. pod vazduhom. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 16 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a dobijeni sirovi (1S,3R)-3-amino-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamid hidrohlorid (0.120 g, 88%) je prenesen u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
m/z: ES+[M+H]+ 355.
Primer 31: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-cijanoacetamido)cikloheksankarboksamid:
[0476]
14
[0477] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 2), 2-cijanoacetatne kiseline (31.4 mg, 0.37 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-cijanoacetamido)cikloheksankarboksamid (51 mg, 35%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.04 -1.19 (1H, m), 1.21 -1.39 (3H, m), 1.73 -1.88 (5H, m), 1.93 (1H, br d), 1.99-2.10 (2H, m), 2.56 -2.68 (1H, m), 2.80 (2H, t), 3.52 -3.64 (3H, m), 4.14 (2H, t), 7.76 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.19 (1H, d), 8.38 (1H, s), 10.59 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 441.
Optičke rotacije:
Primer 31a: terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
14
[0479] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (0.344 ml, 2.57 mmol) je dodat u kapima u mešani rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (0.611 g, 2.51 mmol; pripremljene prema Primeru 2) u DCM (12 ml) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C 1,5 h. Zatim je smeša 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina (0,50 g, 2.0 mmol; pripremljena prema Primeru 2) i piridina (0.65 mL, 8.0 mmol) u DCM (18 mL) dodata u kapima. Bezbojna reakciona smeša je postala žuta. Ledena kupka je uklonjena i reakcija je držana pod ovim uslovima tokom 18 h.
[0480] Ova ista reakcija je zatim ponovljena kao što sledi: 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (1.032 g, 7.72 mmol) je dodavan u kapima u mešani rastvor (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilna kiselina (1.8 g, 7.5 mmol) u DCM (30 mL) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C 1,5 h. Zatim se dodaje rastvor 5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-amina (1.5 g, 6.0 mmol) i piridina (2.0 ml, 24 mmol) u DCM (50 mL). Bezbojna reakciona smeša je postala žuta. Ledena kupka je uklonjena i reakcija je držana pod ovim uslovima tokom 18 h.
[0481] Obe reakcije su zatim kombinovane i razblažene sa MeOH (10 mL) da bi se rastvorili talozi. Dobijeni rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom do minimalne zapremine. Dobijeni rastvor je fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirajući gradijent 50 do 80% etil acetata u heksanima, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (2.6 g, 68%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.04 -1.21 (1H, m), 1.38 -1.52 (12H, m), 1.87 -2.19 (7H, m), 2.31 (1H, br d), 2.36 -2.49 (m, 1H), 2.95 (2H, t), 3.45 -3.61 (m, 1H), 4.24 (2H, t), 4.34 -4.52 (1H, m), 7.92 (s, 1H). m/z (ES+),[M+H]+ = 474.
Primer 31b: (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
14
[0483] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 3.2 mL, 13 mmol) je dodata u mešanu suspenziju terc-butil((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (1 g, 2.11 mmol) u MeOH (4 mL) i DCM (4 mL). Reakciona suspenzija se pretvara u bistri rastvor. Reakcija je mešana na r.t.2 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom na (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il )piridin-2-il cikloheksankarboksamid izolovan kao dihidrohloridna so (0.91 g, 97%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.12 -1.39 (3H, m), 1.50 (1H, q), 1.77 -1.90 (4H, m), 1.90 -2.10 (4H, m), 2.57 -2.69 (1H, m), 2.81 (2H, t), 2.95 -3.09 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.77 (1H, s), 7.99 -8.21 (4H, m), 8.39 (1H, s), 10.67 (1H, s). Dodatni HCl protoni pod širokim singletom na 5.61 ppm. m/z (ES+),[M+H]+ = 374.
Primer 32: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid:
[0484]
[0485] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), 1-hidroksiciklopropankarboksilna kiselina (34 mg, 0.34 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim
14
pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, sa gradijentom eluiranja 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-cijanoacetamido)cikloheksankarboksamid (61 mg, 40%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.00 -1.09 (m, 2H), 1.19 -1.31 (1H, m), 1.34 -1.40 (2H, m), 1.42 -1.59 (3H, m), 1.88 -2.17 (7H, m), 2.30 (1H, br d), 2.44 -2.58 (1H, m), 2.83 (1H, s), 2.90 -2.99 (2H, m), 3.83 -3.95 (1H, m), 4.24 (2H, t), 6.83 (1H, d), 7.94 (1H, s), 8.19 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.46 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 458.
Optičke rotacije:
Primer 33: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
[0486]
[0487] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), (R)-tetrahidrofuran-3-karboksilna kiselina (43 mg, 0.37 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana
14
zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (77 mg, 49%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.10 -1.29 (1H, m), 1.36 -1.58 (3H, m), 1.84 -2.04 (5H, m), 1.85 -2.05 (5H, m), 2.06 -2.21 (4H, m), 2.25 (1H, br d), 2.41-2.55 (1H, m), 2.82 -2.97 (4H, m), 3.76 -3.99 (4H, m), 4.23 (2H, t), 5.66 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.13 (1H, s), 8.21 -8.33 (2H, m). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Optičke rotacije:
Primer 34: N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamid
[0488]
[0489] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), 3-metiloksetan-3-
1
karboksilna kiselina (43 mg, 0.37 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamid (71 mg, 45%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.17 -1.33 (1H, m), 1.42 -1.62 (6H, m), 1.86 -2.16 (7H, m), 2.21 -2.34 (1H, m), 2.44 -2.57 (1H, m), 2.90 -2.99 (1H, m), 3.89 -4.02 (1H, m), 4.24 (2H, t), 4.46 (2H, d), 4.84 -4.89 (2H, m), 5.86 (1H, d), 7.91 (1H, s), 8.09 (1H, br s), 8.19 (1H, s), 8.28 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Optičke rotacije:
Primer 35: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid
[0490]
1 1
[0491] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), (S)-tetrahidrofuran-2-karboksilna kiselina (43 mg, 0.37 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (41 mg, 26%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.12 -1.26 (1H, m), 1.35 -1.57 (3H, m), 1.79 -2.15 (10H, m), 2.20 -2.35 (2H, m), 2.41 -2.53 (1H, m), 2.94 (2H, t), 3.81 -3.96 (3H, m), 4.23 (2H, t), 4.33 (1H, dd), 6.60 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.26 (2H, s), 8.36 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Optičke rotacije:
Primer 36: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid
[0492]
1 2
[0493] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), (R)-tetrahidrofuran-2-karboksilna kiselina (43 mg, 0.37 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (55 mg, 35%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.13 -1.37 (1H, m), 1.37 -1.58 (3H, m), 1.82 -2.17 (11H, m), 2.20 -2.36 (2H, m), 2.51 (1H, br s), 2.90 -3.00 (1H, m), 3.81 -3.98 (3H, m), 4.25 (2H, t), 4.33 (1H, dd), 6.62 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.27 -8.31 (1H, s), 8.78 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Optičke rotacije:
Primer 37: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamid:
[0494]
1
[0495] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), (S)-2-hidroksipropanoična kiselina (0.033 g, 0.37 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 150 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 0.2 % amonijak hidroksid, pH 10) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamid (0.066 g, 44%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.15 -1.31 (1H, m), 1.39 -1.59 (6H, m), 1.87 -2.17 (8H, m), 2.28 (1H, br d), 2.48 -2.61 (1H, m), 2.96 (2H, t), 3.84 -3.98 (1H, m), 4.20 -4.28 (3H, m), 6.43 (1H, d), 7.95 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.33 (1H, s), 8.96 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Optičke rotacije:
1 4
Primer 38: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid
[0496]
[0497] HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b), (S)-tetrahidrofuran-3-karboksilna kiselina (43 mg, 0.37 mmol) DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim vodenim natrijum hidrogenkarbonatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamid (70 mg, 44%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.09 -1.26 (m, 1H), 1.38 -1.59 (m, 3H), 1.87 -2.05 (m, 5H), 2.07 -2.21 (m, 4H), 2.29 (1H, d), 2.38 -2.58 (1H, m), 2.82 -2.99 (4H, m), 3.78 -4.00 (4H, m), 4.24 (2H, t), 5.63 (1H, d), 7.92 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.40 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Optičke rotacije:
1
Primer 39: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0498]
[0499] 5,5-Dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (195 mg, 0.57 mmol; pripremljeni prema Primeru 14), (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hloro-5-cijanopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (184 mg, 0.57 mmol), cezijum karbonat (561 mg, 1.72 mmol), dioksan (4.3 mL) i voda (1.4 mL) su kombinovani u tikvici sa okruglim dnom od 100 mL da bi se dobio bezbojni rastvor. Rastvor je pročišćen azotom tokom 15 minuta, i dodata je druga generacija X-Phos prekatalizatora (33 mg, 0.04 mmol). Reakcija se 1 sat zagreva na 95 °C pod azotom, zatim ohladi i razblaži sa DCM (50 mL). Organski sloj je ispran sa vodom (2 x 25 mL) pre nego što je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom na koloni, eluirani gradijent 0 do 10% metanola u DCM. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom, a rezultujući ostatak je ponovo prečišćen HPLC reverzne faze (15 g kolone sa reverznom fazom HP C18 RediSep Rf Gold(R) pomoću Teledine Isco, 10-40µ silika), gradijent ispiranja 0 do 80% acetonitrila u vodi. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (59 mg, 24%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 -1.19 (1H, m), 1.21 -1.40 (9H. m), 1.73 -1.84 (6H, m), 1.90 (1H, br s), 2.60 -2.73 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.49 -3.67 (1H, m), 3.97 (2H, s), 7.74 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.31 (1H, s), 8.72 (1H, s), 10.90 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 421.
[0500] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hloro-5-cijanopiridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje 6-amino-4-hloronikotinitrila
1
[0502] Degasirana smeša dicijanocinka (0.57 g, 4.8 mmol), 5-bromo-4-hloropiridin-2-amina (1.00 g, 4.82 mmol), tetrakisa (trifenilfosfin) paladijuma(0) (0.28 g, 0.24 mmol) i DMF (12 mL) je podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (170 °C, 2 minuta). Reakcija je ohlađena i prečišćena direktno fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja od 0 do 70% etil acetata u heksanima. Frakcije proizvoda su kombinovane i koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeno žuto ulje je prečišćeno upotrebom istih opisanih uslova da se dobije 6-amino-4-hlornikotinonitril (0.47 g, 64%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 6.63 (1H, s), 7.34 (2H, br s), 8.38 (1H, s).<13>C NMR (75 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 95.59 (1C, s) 107.12 (1C, s) 116.17 (1C, s) 143.41 (1C, s) 154.87 (1C, s) 162.32 (1C, s). m/z: ES+[M+H]+ 154.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-hloro-5-cijanopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0503]
[0504] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (0.23 mL, 1.7 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (310 mg, 1.27 mmol; pripremljene prema Primeru 2) u DCM (5.5 mL) na r.t. što je rezultiralo bezbojnim rastvorom. Reakcija se održava pod ovim uslovima 2 h, i ova reakcija se direktno dodaje u rastvor 6-amino-4-hloronikotinonitrila (178 mg, 1.16 mmol) i piridina (0.37 ml, 4.6 mmol) u DCM (11 mL) na 0 °C. Reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. i održava se pod ovim uslovima 18 h. Reakcija je zatim razblažena sa DCM i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom, eluirani gradijent 0 do 10% metanola u DCM. Dobijeni materijal se prečisti fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 100% etil acetata u
1
heksanima, dajući terc-butil ((1R,3S)-3-((4-hloro-5-cijanopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (330 mg, 75%) kao bela čvrsta supstanca.
m/z: ES+[M+Na<+>]+ 401.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hloro -5-cijanopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0505]
[0506] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 1.5 mL, 44 mmol) se dodaje u rastvor tercbutil ((1R,3S)-3-((4-hloro-5-cijanopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (330 mg, 0.87 mmol) u MeOH (2.9 mL) pod azotom da se dobije bezbojni rastvor. Posle 2 h, reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca (302 mg). Ova čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (4.8 mL) i dodat je trietilamin (0.61 mL, 4.4 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (123 µL, 1.31 mmol). Reakcija je mešana na r.t.2 h i zatim razblažena sa DCM. Reakciona smeša je isprana vodom (30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 10% etil acetata u heksanu, zatim 0 do 10% metanola u etil acetatu) da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-hloropirimidin-5-il)cikloheksankarboksamid (184 mg, 66%) kao beličasta čvrsta supstanca. ES+[M+H]+ 321.
Primer 40: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0507]
[0508] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.20 mL, 2.2 mmol) u mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-
1
il)cikloheksankarboksamida (670 mg, 1.79 mmol), trietilamina (0.52 mL, 3.8 mmol) i N, N-dimetilpiridin-4-amina (11 mg, 0.09 mmol) u DCM (10 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 18 h. Smeša je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu, a željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, koristeći gradijent ispiranja od 0 do 100% EtOAc u heptanu, a zatim izokratski 10% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (693 mg, 93%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 -1.11 (1H, m), 1.23 (3H, d), 1.27 -1.38 (3H, m), 1.72 -1.81 (6H, m), 1.89 (1H, br d), 2.52 -2.63 (1H, m), 2.67 (1H, dd), 3.13 -3.19 (1H, m), 3.20 -3.28 (1H, m), 3.50 -3.63 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.27 -4.37 (1H, m), 7.75 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 416.
[0509] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 5-metil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-on
[0510]
[0511] n-Butil litijum u heksanu (1.6 M; 49.9 mL, 79.8 mmol) je dodat u vidu kapi 2-metil-3-(1H-pirazol-1-il)propionskoj kiselini (4.92 g, 31.9 mmol) u THF (150 mL) na -78 °C tokom 20 minuta pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na -78 °C 15 minuta. Reakciona smeša je zatim zagrejana do -45 °C i održavana pod ovim uslovima 30 minuta pre nego što je ostavljena da se zagreje na 15 °C. Reakcija se zatim polako sipa u ledeno hladan zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (100 mL). Smeša je razblažena sa Et2O (100 mL), faze su razdvojene, i vodeni sloj je ekstrahovan sa Et2O (50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom (50 mL), osušeni sa MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do
1
suvoće da bi se dobio 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-on (1.3 g, 30%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21°C) 1.45 (3H, d), 3.27 -3.38 (1H, m), 4.09 (1H, dd), 4.74 (1H, dd), 6.65 (1H, d), 7.79 (1H, d).
Pripremanje 5-metil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0512]
[0513] Hidrazin hidrat (2.28 mL, 47.0 mmol) je dodat u mešani rastvor 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ona (1.28 g, 9.40 mmol) u dietilen glikolu (26.8 mL, 282 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 180 °C 1 h. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se malo ohladi. U smešu je pažljivo dodat kalijum hidroksid (1.85 g, 32.9 mmol) i dobijena suspenzija je mešana na 150 °C tokom 2 h. Smeša je zatim ostavljena da se ohladi pre nego što je razblažena sa vodom, zakiseljena sa razblaženom 2 M HCl do pH 4.5, i ekstrahovana sa Et2O (5 × 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (3 × 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL), osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirol[1,2-b]pirazol (0.98 g, 86%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.28 (3H, d), 2.39 -2.54 (1H, m), 2.99 -3.16 (2H, m), 3.66 -3.76 (1H, m), 4.23 -4.33 (1H, m), 5.92 (1H, d), 7.48 (1H, d).
Pripremanje 3-jodo-5-metil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0514]
[0515] NIS (1.81 g, 8.04 mmol) je dodat u porcijama u 5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.89 g, 7.31 mmol) u acetonitrilu (15 mL) na r.t. pod azotom. Reakciona smeša je mešana na 23 °C 18 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2 x 15 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-jodo-5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (1,8 g, 99 %) kao narandžasto ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.28 (3H, d), 2.43 (1H, dd), 3.00 (1H, dd), 3.06 -3.14 (1H, m), 3.79 (1H, dd), 4.36 (1H, dd), 7.46 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 249.
1
Pripremanje 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b][1,2-b]pirazol
[0516]
[0517] Kompleks litijum hlorida izopropilmagnezijum hlorida u THF (1.3 M; 6.85 mL, 8.91 mmol) u kapima se doda u 3-jodo-5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol (1.7 g, 6.9 mmol) u THF (20 mL) na 0 °C tokom perioda od 5 minuta pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 0 °C 30 minuta.2-Izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2.10 mL, 10.3 mmol) je zatim dodavan u kapima u smešu uz održavanje unutrašnje temperature na 0 °C. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se zagreje na s.t. preko noći pre nego što se razblaži sa EtOAc (50 mL) i ispere redom sa zasićenim vodenim NH4Cl (50 mL), vodom (50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL). Organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i isparen da bi se dobio 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1.5 g, 87%) kao bledo braon ulje koje je kristalizovalo.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) 1.26 (3H, d), 1.29 (12H, s), 2.57 (1H, dd), 3.01 -3.22 (2H, m), 3.64 -3.75 (1H, m), 4.27 (1H, ddd), 7.76 (1H, s).
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0518]
[0519] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.25 g, 0.31 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (1.03 g, 3.75 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil )cikloheksil)karbamat (1.5 g, 3.13 mmol; dobijene prema Primeru 10) i dibazni kalijum fosfat (1.63 g, 9.38 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i vodi (3 mL). Dobijena smeša je degasirana i
1 1
mešana na 90 °C tokom 18 h pod azotom. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se ohladi na r.t., razblažena sa EtOAc (100 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (100 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL). Organski sloj je izvađen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobilo terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1.0 g, 69%) kao žuta pena.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1.07 -1.12 (1H, m), 1.70 -1.82 (3H, m), 1.85 -1.93 (1H, m), 2.53 -2.62 (1H, m), 2.66 (1H, dd), 3.11-3.18 (1H, m), 3.19-3.29 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.32 (1H, dd), 6.76 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.34 (1H, s), 10.52 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 474.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0520]
[0521] Tert-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,11 g, 2.34 mmol) je rastvoren u DCM (20 M). Trifluoroacetatna kiselina (1.8 mL, 23 mmol) je dodata i reakciona smeša je mešana na r.t. 18 h. Reakcija je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni produkt je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.68 g, 77%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 374.
Primeri 41 i 42: Izomer 1 i izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0522]
1 2
[0523] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (670 mg, 1.79 mmol; Primer 40) je rastavljen preparativnom HPLC (Chiral Technologies IA kolona, 20 µm silika gel, prečnik 100 mm, dužina 250 mm), koristeći 70/15/15 smešu heptan/EtOH/MeOH kao eluente i brzinu protoka od 450 mL/min, frakcije koje sadrže željena jedinjenja su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio brže eluirajući izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (356 mg, 48%) i sporije eluirajući izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (348 mg, 47%).
Primer 41: Izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0524]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 -1.15 (1H, m), 1.25 (3H, d), 1.26-1.39 (3H, m), 1.72-1.83 (6H, m), 1.90 (1H, br d), 2.55 -2.62 (1H, m), 2.67 (1H, dd), 3.11 -3.19 (1H, m), 3.21 -3.28 (1H, m), 3.51 -3.62 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.27 -4.37 (1H, m), 7.75 (1H, d br), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 416.
Primer 42: Izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0525]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.08 -1.13 (1H, m), 1.24 (3H, d), 1.25 -1.36 (3H, m), 1.62-1.85 (6H, m), 1.91 (1H, br d), 2.52-2.61 (1H, m), 2.67 (1H, dd), 3.13-3.19 (1H, m), 3.21-3.29 (1H, m), 3.51-3.60 (1H, m), 3.76 (1H, dd), 4.32 (1H, dd), 7.74 (1H, d), 7.98 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.34 (1H, s), 10.54 (1H, s).
Analitički hiralni uslovi reverzne faze:
1
Primer 43: (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid i (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (Primer 14)
[0526]
[0527] Druga generacija XPhos prekatalizator (0.019 g, 0.02 mmol) i cezijum karbonata (0.464 g, 1.42 mmol) su dodati u degasirani rastvor 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (1.6 mL, 0.50 mmol, kao 0.106 g/mL rastvor u dioksanu; pripremljen prema Primeru 14), cis-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.20 g, 0.47 mmol; pripremljeni prema Primerima 10 i 12, zamenjujući cis-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu (dobijenu u Primeru 2, Međujedinjenja) za (1S,3R)-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilnu kiselinu i acetil hlorid za anhidrid sirćetne kiseline), 1,4-dioksan (2,6 mL) i vodu (0.52 mL). Dobijena smeša je uronjena u prethodno zagrejanu uljanu kupku podešeno na 85 °C. Posle 3 h, drugih 300 µL rastvora 5,5-dimetil-3-
1 4
(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirol[1,2-b]pirazola (0.106 g/mL u dioksanu) je dodat u sada svetlo narandžastu reakciju. Reakcija se održava na ovoj temperaturi još 45 minuta i zatim ohladi na r.t. Reakcija je razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (x2). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni žuti ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 10 do 100% etil acetata u heksanima, zatim 0 do 20% metanola u etil acetatu, da bi se dobio cis-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.147 g, 72%) kontaminiran malom količinom pinakol diola kao beličasta čvrsta supstanca.
[0528] Ovaj materijal je rastvoren u svoje enantiomere korišćenjem SFC uslova (Kolona: (S,S) Whelk-O1, 5 µm, 21.2 mm prečnik, 250 mm dužina, 40 °C temperatura kolone, izlazni pritisak 100 bara, brzina protoka 75 ml/min), eluiranje sa 30% izopropanola u CO2, da bi se dobio Primer 14, (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.053 g, 26%), kao bela čvrsta pena i Primer 43, (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.061 g, 30%), kao bela čvrsta pena. (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (Primer 43):
[0529]<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.05 (1H, d), 1.22 -1.40 (9H, m), 1.78 (6H, s), 1.90 (1H, d), 2.56 -2.69 (1H, m), 2.89 (2H, s), 3.47 -3.65 (1H, m), 3.95 (2H, s), 7.74 (1H, br d), 7.99 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.54 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Analitički SFC uslovi:
1
[0530] Optička rotacija za (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (Primer 43)
Primer 44: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0531]
[0532] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.022 mL, 0.23 mmol) u mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (70 mg, 0.19 mmol), trietilamin (0.056 mL, 0.40 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amin (1.2 mg, 9.5 µmol) u DCM (10 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t.
4 h, i sirova reakcija se prečisti jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu.
1
Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH i frakcije koje su sadržale proizvod su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je dalje prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (44 mg, 56%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.04 (6H, s), 1.06 -1.15 (1H, m), 1.32 -1.38 (3H, m), 1.66 -1.82 (6H, m), 1.83 -1.94 (3H, m), 2.58 -2.64 (1H, m), 2.78 (2H, s), 3.54 -3.62 (1H, m), 4.14 (2H, t), 7.16 (1H, dd), 7.76 (1H, d), 7.84 (1H, s), 8.18 (1H, s), 8.24 (1H, d), 10.34 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 410.
[0533] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-5-karboksilata
[0534]
[0535] Etil 4-brombutanoat (10 mL, 71 mmol) je dodat u mešanu smešu etil 1H-pirazol-5-karboksilata (9.9 g, 71 mmol) i kalijum karbonata (11.7 g, 84.8 mmol) u DMF (70 mL). Smeša je mešana na r.t. u trajanju od 24 h. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (2x), osušeni preko MgSO4, i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 20% etil acetatom u pentanu da bi se dobio željeni etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-5-karboksilat (9.0 g, 50%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.24 (3H, t), 1.38 (3H, t), 2.11 -2.25 (2H, m), 2.25 -2.38 (2H, m), 4.12 (2H, q), 4.34 (2H, q), 4.63 (2H, t), 6.83 (1H, d), 7.47 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 255. Takođe je izolovan etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-1H-pirazol-3-karboksilat (8 g, 44.5 %).
1
Pripremanje etil 4-okso-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-5-karboksilata [0536]
[0537] Kalijum terc-butoksid (1.39 g, 12.4 mmol) je dodat u mešani rastvor etil 1-(4-etoksi-4-oksobutil)-lH-pirazol-5-karboksilata (2.1 g, 8.3 mmol) u toluenu (20 mL). Smeša je mešana na r.t.10 minuta i zatim je zagrejana do 110 °C, što je rezultiralo formiranjem gustog taloga. Smeša je zagrevana pod ovim uslovima 30 minuta i zatim ohlađena na s.t. pre nego što je zakišeljena sa razblaženom HCl i ekstrahovana sa etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio etil 4-okso-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a] piridin-5-karboksilat (1.7 g, 99%) kao čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 209.
Pripremanje 6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona
[0538]
[0539] Dodat je litijum hlorid (0.458 g, 10.8 mmol) u mešani rastvor etil 4-okso-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-5-karboksilata (1.5 g, 7.2 mmol) u DMSO (15 mL). Smeša je zagrevana na 120 °C 24 h i zatim ohlađena do r.t. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su kombinovani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 50% etil acetatom u heptanu da bi se dobio 6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-on (0.90 g, 92%) kao čvrsta supstanca .<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 2.26 -2.45 (2H, m), 2.65 -2.75 (2H, m), 4.35 -4.45 (2H, m), 6.87 (1H, d), 7.55 (1H, d).
Pripremanje 5,5-dimetil-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona
[0540]
1
[0541] Natrijum hidrid (60 wt% u mineralnom ulju; 705 mg, 17.6 mmol) je dodat u rastvor 6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-ona (800 mg, 5.88 mmol) u DMF (5.0 mL) na 0 °C. Smeša je mešana 10 minuta pod ovim uslovima i zatim je dodat jodometan (1.10 mL, 17.6 mmol). Ledena kupka je uklonjena i reakcija je držana pod ovim uslovima tokom 18 h.
Dodaje se voda i smeša se zakiseli sa razblaženom vodenom hlorovodoničnom kiselinom do pH 7. Reakcija je zatim ekstrahovana etrom (3x), a kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 30% etil acetatom u heptanu da bi se dobio 5,5-dimetil-6,7-dihidropirazolo[1,5-a]piridin-4(5H)-on (800 mg, 83%) kao bela čvrsta supstanca .<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.27 (6H, s), 2.06 -2.26 (2H, m), 4.32 -4.5 (2H, m), 6.86 (1H, d), 7.54 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 165.
Pripremanje 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0542]
[0543] Hidrazin hidrat (1.18 mL, 24.4 mmol) je dodat u mešani rastvor 5,5-dimetil-6,7-dihidropirazolo[l,5-a]piridin-4(5H)-ona (800 mg, 4.87 mmol) rastvorenog rastvora. u dietilen glikolu (10 mL, 105 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 180 °C 1 h. Reakcija je zatim uklonjena sa toplote, i pažljivo je dodat kalijum hidroksid (957 mg, 17.1 mmol) u smešu. Dobijena suspenzija je mešana na 170 °C 2 h. Nakon hlađenja, reakciona smeša je razblažena vodom, zakišeljena do pH 5 sa razblaženom vodenom hlorovodoničnom kiselinom (2N), i ekstrahovana sa Et2O (5 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (2 x 20 mL) i zatim osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin (650 mg, 89%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.05 (6H, s), 1.66 -1.97 (2H, m), 2.57 (2H, s), 4.15 (2H, t), 5.92 -5.94 (1H, m), 7.44 (1H, d).
Pripremanje 3-jodo-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0544]
1
[0545] NIS (1.07 g mg, 4.76 mmol) dodaje se u mešani rastvor 5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridina (650 mg, 4.33 mmol) rastvorenog u acetonitrilu (10 ml) na 23 °C. Dobijena smeša je mešana na 23 °C 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (20 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2 x 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi 3-jodo-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (1.1 g, 92 %) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.07 (6H, s), 1.80 (2H, t), 2.43 (2H, s), 4.24 (2H, t), 7.48 (1H, s).
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0546]
[0547] Dihlor[l,l'-bis(di-t-butilfosfino)ferocen]paladijum(II) (44 mg, 0.070 mmol) je dodat u degasirani rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (300 mg, 0.67 mmol; pripremljeni prema Primeru 16), 3-jodo-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (242 mg, 0,88 mmol) i kalijum fosfat, tribazični (429 mg, 2.02 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (1 mL).
Dobijena smeša je mešana na 90 °C 18 h. Sirova reakcija je ohlađena i prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i frakcije koje su sadržale proizvod su koncentrovane pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirovi proizvod kao braon ulje. Sirovi proizvod je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 100% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (170 mg, 54%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.03 (6H, s), 1.04 -1.15 (1H, m), 1.21 -1.41 (12H, m), 1.72 -1.81 (3H, m), 1.83 -1.92 (3H, m), 2.53 -2.62 (1H, m), 2.65 -2.69 (2H, m), 4.16 (2H, t), 6.76 (1H, br d), 7.76 (1H, d), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, d), 10.43 (1H, s). Širok (1H) multiplet ispod baze HOD maksimum pri 3.3 ppm. m/z: ES+[M+H]+ 468.
1
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0548]
[0549] Trifluoroacetična kiselina (1 mL) je dodata u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (170 mg, 0.36 mmol) u DCM (10 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 6 h.
Reakcija je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a rezultujući ostatak je podvrgnut jonoizmenjivačkoj hromatografiji koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 2 M NH3u MeOH. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom, i rezultirajući ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 7% (1% amonijak u metanolu) u DCM da se dobije (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (70 mg, 52%) kao čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 368.
Primer 45: (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid [0550]
[0551] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor (S)-tetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (0.03 mL, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.26 mmol; dobijene prema Primeru 14) i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t.16 h, a zatim je ugašena sa vodom (20 mL). Smeša je izvađena sa DCM (50 mL) i organski sloj je ispran sa slanim rastvorom (50 mL). Organski sloj je osušen preko
1 1
MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod pritiskom da bi se dobio N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b])pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (59 mg, 47%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR(500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.19 -1.36 (9H, s), 1.49 (1H, q), 1.70 (1H, d), 1.74 -1.89 (6H, m), 2.02 -2.16 (1H, m), 2.58 -2.68 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.63 (1H, dd), 3.75 (1H, q), 3.89 (1H, q), 3.95 (2H, s), 4.17 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.31 -8.38 (1H, m), 10.55 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 486.
Primer 46: (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid [0552]
[0553] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor (R)-tetrahidrofuran-2-karboksilne kiseline (0.03 mL, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.26 mmol; dobijene prema Primeru 14) i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t.16 h, a zatim je ugašena sa vodom (20 mL). Smeša je ekstrahovana sa DCM (50 mL), i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće da bi se dobio (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b])pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamid (61 mg, 49%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.20 -1.37 (9H, s), 1.49 (1H, q), 1.70 (1H, d), 1.75 -1.9 (6H, m), 2.04 -2.16 (1H, m), 2.58 -2.68 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.58 -3.67 (1H,
1 2
m), 3.75 (1H, q), 3.89 (1H, q), 3.95 (2H, s), 4.17 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.55 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 486.
Primer 47: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0554]
[0555] 5,5-Dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (94 mg, 0.26 mmol; pripremljen prema Primeru 23) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (100 mg, 0.25 mmol) u 1,4-dioksana (2.1 mL) i vode (0.4 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Rastvor je pročišćen azotom 10 minuta, a zatim su dodatni cezijum karbonat (244 mg, 0.75 mmol) i 2. generacija XPhos Prekatalizator(19.6 mg, 0.02 mmol). Reakcija je zagrevana na 85 °C 7 h i zatim ohlađena do r.t. Reakcija je razblažena sa EtAOc (50 mL) i zatim isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH u DCM, da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (37 mg, 36%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.00 -1.16 (1H, m), 1.27 (9H, s), 1.78 (6H, s), 1.85 -1.96 (1H, m), 2.33 (3H, s), 2.55 -2.65 (1H, m), 2.86 (2H, s), 3.88 -3.97 (2H, m), 7.75 (1H, d), 7.82 (1H, s), 7.98 (1H, s), 8.13 (1H, s), 10.45 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 410.
Optičke rotacije:
1
[0556] Postupci su korišćeni za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje 4-jodo-5-metilpiridin-2-amina
[0557]
[0558] Bela suspenzija 2-fluoro-4-jodo-5-metilpiridina (3.00 g, 12.7 mmol) i koncentrovanog vodenog amonijum hidroksida (3.5 mL, 90 mmol) u DMSO (17 mL) je podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (140 °C, 4 h) i zatim ohladi. Reakcija je razblažena sa EtOAc i vodom, i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL), i kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 10% MeOH u DCM, da bi se dobio 4-jodo-5-metilpiridin-2-amin (800 mg, 27%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 2.13 (s, 3 H) 5.81 (s, 2 H) 6.99 (s, 1 H) 7.75 (s, 1 H). m/z: ES+[M+H]+ 235.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0559]
[0560] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (0.24 mL, 1.8 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (321 mg, 1.32 mmol; pripremljen prema Primeru 2) u DCM (2.8 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor.
Rastvor je mešan na r.t.2 h i zatim je dodat rastvor 4-jodo-5-metilpiridin-2-amina (281 mg,
1 4
1.2 mmol) i piridina (0.24 mL, 3.0 mmol) u DCM (2.8 mL) na 0 °C. Reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. i mešana pod ovim uslovima 3 h pre nego što je razblažena sa DCM i isprana zasićenim vodenim NaHCO3, vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 10% MeOH u DCM, da se dobije terc-butil ((1R, 3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (530 mg, 96%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.02 -1.13 (1H, m), 1.44-1.53 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.65 -1.80 (3H, m), 1.87 (1H, br d), 2.29 (3H, s), 2.52 -2.61 (1H, m), 3.19 -3.34 (1H, m), 6.78 (1H, br d), 8.16 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.43 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 460.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0561]
[0562] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2.1 mL, 8.6 mmol) je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (393 mg, 0.86 mmol) u MeOH (4.3 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Reakcija je mešana na r.t.4 h, što daje belu smešu. Reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Dodati su TEA (0.60 mL, 4.3 mmol) i sirćetni anhidrid (0.16 mL, 1.7 mmol) i reakcija je mešana na r.t.1 sat. Smeša je zatim razblažena sa DCM, i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 10% MeOH u DCM da se dobije (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 29%) kao bistro ulje.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.04 -1.13 (1H, m), 1.19 -1.39 (3H, m), 1.69 -1.81 (6H, m), 1.86 (1H, br d), 2.29 (3H, s), 2.55 -2.61 (1H, m), 3.41 -3.62 (1H, m), 7.75 (1H, br d), 8.16 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.45 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 402.
Primer 48: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamid
1
Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.25 mL, 2.67 mmol) u (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamid (500 mg, 1.34 mmol) i TEA (0.64 mL, 4.6 mmol) u DCM (10 mL) i MeOH (2 mL) pod azotom. Reakciona suspenzija je mešana na r.t. u trajanju od 6 h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa DCM i isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim amonijum hloridom i vodom pre nego što je osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (Waters SunFire kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 0.1% mravlje kiseline) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamid (340 mg, 61%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO, 30°C) 1.28 (6H, s), 1.45 -1.51 (1H, m), 1.62 (1H, dt), 1.79 (3H, s), 1.81 -1.89 (3H, m), 2.15 (1H, dt), 2.90 (2H, s), 3.00 (1H, dq), 3.95 (2H, s), 4.04 (1H, dq), 7.90 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.35 (1H, s), 10.58 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 416.
[0564] Postupci su korišćeni za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamida su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamata
[0565]
[0566] T3P (≥50 wt% u etil acetatu; 2.60 mL, 4.36 mmol) dodaje se u rastvor 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina (694 mg, 2.18 mmol; dobijene prema Primeru 2), (1S,3R)-3-((terc-
1
butoksikarbonil)amino)ciklopentankarboksilna kiselina (500 mg, 2.18 mmol) i piridin (0.71 mL, 8.7 mmol) u EtOAc (10 mL). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 24 h. Reakciona smeša je razblažena zasićenim vodenim amonijum hloridom (25 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (50 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (650 mg, 64%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.39 (9H, s), 1.46 -1.63 (2H, m), 1.74 -183 (3H, m), 2.04 -2.17 (1H, m), 2.90 -3.00 (1H, m), 3.70 -3.84 (1H, m), 6.73 -6.82 (1H, m), 8.39 (1H, s), 8.73 (1H, s), 10.68 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 466.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamata
[0567]
[0568] 5,5-Dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (665 mg, 1.95 mmol; pripremljen prema Primeru 23) je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (650 mg, 1.40 mmol), 2. generacija XPhos prekatalizator (110 mg, 0.14 mmol) i kalijum fosfat, dvobazni (729 mg, 4.19 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (4 mL) pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na 85 °C 20 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (50 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2 x 25 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 25 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće kako bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamat (600 mg, 91%) kao bela čvrsta supstanca. m/z:
ES+[M+H]+ 474.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamida
[0569]
1
[0570] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 1.6 mL, 6.3 mmol) je polako dodavan u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)ciklopentil)karbamata (600 mg, 1.27 mmol) u DCM (10 mL) pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na r.t.4 h i zatim uskladišten u frižideru u periodu od 72 sata. Reakciona smeša se zatim razblaži sa DCM (10 mL) i MeOH (2 mL), i hlorovodoničnom kiselinom u dioksanu (4 M; 1.6 mL, 6.3 mmol) je dodato pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi dodatnih 18 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamid (473 mg, 99%) kao žuto ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.28 (6H, s), 1.49 (1H, dd), 1.59 (1H, dd), 1.73 (1H, dd), 1.91 (2H, q), 2.04 (1H, td), 2.89 -2.93 (3H, m), 3.78 -3.83 (1H, m), 3.95 (2H, s), 8.00 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.34 (1H, s). Amid NH je posmatran; NH2pretpostavlja se da je signal pod širokim vodenim maksimumom. m/z: ES+[M+H]+ 374.
Primer 49: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3] triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0571]
[0572] Metoksi(ciklooktadien)iridijum(I) dimer (54 mg, 0.08 mmol) je dodat 4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridinu (100 mg, 0.81 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanu (312 mg, 2.44 mmol), i 4,4'-di-terc-butil-2,2'-dipiridilu (44 mg, 0.16 mmol) u
1
THF (2 mL) pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 90 °C 3 h. Posle hlađenja, približno 2.3 mL reakcione smeše koja sadrži sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-[1, 2,3]triazolo[l,5-a]piridin je dobijen kao suspenzija. m/z: ES+[M+3H-(C(CH3)2)2]+168.
[0573] Sirovi 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin (približno 0.3 mL iznad navedene reakcione suspenzije) je dodat u smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il) cikloheksankarboksamida (10 mg, 0.02). mmol; pripremljeni prema Primeru 12), Cs2CO3(15 mg, 0.05 mmol) i XPhos prekatalizator druge generacije (1,9 mg, 2.4 µmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) i vodi (0.5 mL) pod azotom. Dobijena smeša je zagrejana do 60 °C i održavana pod ovim uslovima 45 minuta. Ova reakcija je zatim ostavljena da se ohladi na r.t.
[0574] U odvojenoj bočici preostala smeša suspenzije sadrži sirovu 3-(4,4,5,5-tetrametil-l, 3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[l,5-a]piridin (približno 2.0 mL) je dodat u smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (70 mg, 0.17 mmol; pripremljeni prema Primeru 12), Cs2CO3(325 mg, 1.00 mmol) i XPhos prekatalizator druge generacije (26 mg, 0.03 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL) i vodi (4 mL) pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 60 °C 45 minuta. Ova reakcija je zatim ostavljena da se ohladi na r.t.
[0575] Obe hlađene reakcione smeše su kombinovane i zatim razblažene sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 100 mL), i kombinovani organski slojevi su sušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, koristeći gradijent ispiranja od 0 do 100% EtOAc u naftnom etru, a zatim gradijent eluiranja od 0 do 20% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je dalje prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 0.8% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (20 mg, 25%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz, 21 °C) 1.00 -1.14 (1H, m), 1.19 -1.37 (3H, m), 1.68 -1.81 (6H, m), 1.81 -1.92 (3H,
1
m), 1.99 -2.10 (2H, m), 2.56 -2.70 (1H, m), 2.82 (2H, t), 3.51 -3.63 (1H, m), 4.42 (2H, t), 7.80 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.48 (1H, s), 10.73 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 417.
Primer 50: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-i)cikloheksankarboksamid
[0576]
[0577] Anhidrid sirćetne kiseline (0.024 mL, 0.26 mmol) dodat je u kapima u (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.080 g, 0.22 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1 mg, 11 µmol) i trietilamin (0.093 mL, 0.67 mmol) u DCM (2 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom.
Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 4 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim amonijak hloridom (10 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 10 mL), a kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.070 g, 79%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.02 -1.21 (1H, m), 1.22 -1.38 (9H, m), 1.70 -1.82 (6H, m), 1.91 (1H, br d), 2.54 -2.65 (1H, m), 2.71 (2H, s), 3.58 (1H, dt), 4.00 (2H, s), 7.44 (1H, d), 7.76 (1H, d), 8.34 (1H, d), 8.38 (1H, d), 10.56 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 414.
[0578] Postupci koji se koriste za pripremu polaznog materijala za (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[l,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-alimidazol
[0579]
1
[0580] 6,6-Dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (0.180 g, 1.32 mmol; pripremljeni prema Primeru 22), 2-hloro-5-fluoro-4-jodopiridin (0.476 g, 1.85 mmol), cezijum karbonat (0.474 g, 1.45 mmol), trietilamin (0.368 mL, 2.64 mmol), trifenilfosfin (0.055 g, 0.21 mmol) i diacetoksapaladijum (0.024 g, 0.11 mmol) su suspendovani u 1,4-dioksanu (5 mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Reakcija se podvrgne mikrotalasnim uslovima (100 °C, 16 h) i ohladi na r.t. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (20 mL) i isprana vodom (3 x 25 mL). Organski sloj je zatim osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (0.185 g, 53%) kao narandžasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.34 (6H, s), 2.80 (2H, s), 3.93 (2H, s), 7.32 (1H, d), 7.59 (1H, d), 8.26 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 266.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol -3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0581]
[0582] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum (0) (43 mg, 0.04 mmol) je dodat u 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol (100 mg, 0.38 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (109 mg, 0.45 mmol; pripremljeni prema Primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (44 mg, 0.08 mmol) i cezijum karbonat (368 mg, 1.13 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL). Smeša je degaskupatiirana 5 minuta pod azotom, a dobijena suspenzija je podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (120 °C, 3 h). Reakciona smeša je podeljena između vode (20 mL) i DCM (40 mL). Slojevi su razdvojeni
1 1
korišćenjem kasete za fazno razdvajanje, a organski sloj je adsorbovan na silicijum dioksid i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 60% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cyikloheksil)karbamat (142 mg, 80%). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-alimidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-i)ciklohesankarboksamida
[0583]
[0584] Terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.100 g, 0.21 mmol) je rastvoren u DCM (5 mL) i dodata je trifluorosirćetna kiselina (0.16 mL, 2.1 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t.30 minuta, i zatim prečisti jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni produkt je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobila polučisti (1S,3R)-3-amino-N-(4-(6,6-dimetil-6, 7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao bezbojna guma (100 mg). Ova guma je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 372.
Primer 51: (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0585]
[0586] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0,088 mL, 0,93 mmol) u mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-
1 2
il)cikloheksankarboksamid (300 mg, 0.78 mmol; opisan u Primeru 51a), trietilamin (0.23 mL, 1.6 mmol) i DCM (10 mL). Reakciona smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 4 h. Dodat je silicijum dioksid i isparljive materije su uklonjene koncentrisanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0.5% metanola u etil acetatu, da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (300 mg, 90%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 (6H, s), 1.02 -1.14 (1H, m), 1.24 -1.38 (3H, m), 1.72 -1.81 (6H, m), 1.86 -1.91 (3H, m), 2.55 -2.64 (1H, m), 2.69 (2H, s), 3.52 -3.64 (1H, m), 4.16 (2H, t), 7.64 -7.81 (2H, m), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, d), 10.45 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 428.
Primer 51a: (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0587]
[0588] TFA (2 mL) je dodat rastvoru terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5 -fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamatu (1.1g, 2.27 mmol) u DCM (20 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 24 h, a zatim je reakcija koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 7N NH3u MeOH. Čiste frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.87 g, 100%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 22 °C) 1.01 -1.12 (7H, m), 1.31 -1.49 (3H, m), 1.83 -1.99 (5H, m), 2.14 (1H, d), 2.35 (1H, td), 2.66 -2.85 (3H, m), 4.23 (2H, t), 7.85 (1H, d), 7.99 -8.18 (2H, m), 8.29 (1H, d). NH2signal se ne posmatra i pretpostavlja se da je ispod širokog maksimuma vode na 1.66 ppm. m/z: ES+[M+H]+ 386.
1
[0589] Postupci za pripremanje polaznog materijala terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a] piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat opisani su u nastavku:
Pripremanje 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0590]
[0591] Kompleks litijum hlorida izopropilmagnezijum hlorida u THF (1.3 M; 9.1 mL, 12 mmol) u kapima se dodaje u 3-jodo-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (2.5 g, 9.1 mmol; pripremljene prema Primeru 44) u THF (20 mL) pod azotom na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C 30 minuta. Zatim je u kapima dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2.8 mL, 14 mmol) i ledena kupka je uklonjena. Reakcija je održavana pod ovim uslovima tokom 18 h i zatim razblažena sa Et2O (20 mL). Dobijena smeša je isprana sekvencijalno zasićenim vodenim amonijum hloridom (20 mL), vodom (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (2.5 g, 100%) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.06 (6H, s), 1.29 (12H, s), 1.79 (2H, t), 2.74 (2H, s), 4.16 (2H, t), 7.72 (1H, s).
Pripremanje 3-(2-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0592]
[0593] 2-Hloro-5-fluoro-4-jodopiridin (1.55 g, 6.03 mmol), 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (2.0 g, 7.2 mmol), XPhos prekatalizator druge generacije (0.48 g, 0.60 mmol) i kalijum fosfat, dvobazni (3.15 g, 18.1
1 4
mmol) su rastvoren u degasiranom dioksanu (20 mL) i vodi (1 mL) na 21 °C. Smeša je mešana na 90 °C 24 h i zatim je ostavljena da se ohladi do r.t. Smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL), isprana vodom (10 mL), i organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1.3 g, 77%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.10 (6H, s), 1.89 (2H, m), 2.68 (2H, s), 4.26 (2H, t), 7.27 (1H, d), 7.80 (1H, d), 8.23 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 280.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0594]
[0595] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0.496 g, 0.43 mmol) je dodat u 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a] piridin (1.2 g, 4.29 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (1.04 g, 4.29 mmol; pripremljeni prema Primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (0,496 g, 0.86 mmol) i cezijum karbonat (4,19 g, 12.9 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL). Dobijena smeša je degasirana 5 minuta pod azotom i zatim podvrgnuta mikrotalasnim uslovima (120 °C; 17 h). Reakciona smeša je razblažena vodom (20 mL) i etil acetatom (100 mL) pre nego što je filtrirana.
Slojevi su razdvojeni, a organski sloj je adsorbovan na silicijum dioksid i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa izokratnim 50% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,1 g, 53%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 (6H, s), 1.02 -1.14 (1H, m), 1.20 -1.35 (3H, m), 1.39 (9H, s), 1.70 -1.79 (3H, br m), 1.82 -1.92 (3H, m), 2.54 -2.63 (1H, m), 2.68 (2H, s), 4.16 (2H, t), 6.76 (1H, br d), 7.76 (1H, d), 8.19 (1H, d), 8.29 (1H, d), 10.43 (1H, s).1H multiplet ispod maksimuma vode. m/z: ES+[M+H]+ 486.
1
Primer 52: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamid
[0596]
[0597] Trifluorosirćetna kiselina (6.5 uL, 0.080 mmol) je dodata u (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksankarboksamid (0.046 g, 0.080 mmol) u DCM (2 mL) na r.t. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamid (0.032 g, 82%) kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.08 -1.21 (1H, m), 1.34 (6H, s), 1.35 -1.49 (3H, m), 1.88 -1.93 (3H, m), 2.10 -2.37 (2H, m), 2.36 -2.49 (2H, m), 2.48 -2.57 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.79 -3.92 (3H, m), 3.95 (2H, s), 6.56 (1H, br d), 8.09 (1H, s), 8.21 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.89 (1H, s).m/z: ES+[M+H]+ 460.
[0598] Postupci za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje metil 3-hidroksipropanoata
[0599]
[0600] Oksetan-2-on (22 mL, 350 mmol) je dodavan u kapima u mešani rastvor MeOH (300 mL) i sumporne kiseline (5.6 mL, 104 mmol) na 0 °C. Posle 18 h, reakcija je ponovo ohlađena na 10 °C, i u porcijama je dodat natrijum bikarbonat (18.1 g, 215 mmol) (pH = 7 nakon dodatka). Dobijena suspenzija je ostavljena da se meša na r.t.30 minuta. Smeša je
1
zatim filtrirana i filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa DCM i filtriran drugi put. Novi filtrat je uparen do suvoće da bi se dobio metil 3-hidroksipropanoat (35 g, 97%) kao bezbojna tečnost.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 24 °C) 2.41 -2.45 (1H, m), 2.58 (2H, t), 3.72 (3H, s), 3.89 (2H, t).
Pripremanje metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanoata
[0601]
[0602] Piridin 4-metilbenzensulfonat (4.22 g, 16.8 mmol) je dodat u rastvor metil 3-hidroksipropanoata (35 g, 336 mmol) i 3,4-dihidro-2H-pirana (43 mL, 470 mmol) u DCM (500 mL) pod azotom. Rastvor je mešan na r.t.2.5 dana. Smeša je zatim isprana zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom, a organski sloj je osušen iznad magnezijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silicijum dioksidom, eluiranjem sa izokratnim 15% etil acetatom u heptanu, da se dobije metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi) propanoat (26 g, 41%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 24 °C) 1.37 -1.46 (4H, m), 1.54 -1.59 (2H, m), 2.56 (2H, t), 3.39 -3.42 (1H, m), 3.53 -3.63 (4H, m), 3.68 -3.75 (1H, m), 3.81 -3.87 (1H, m), 4.57 (1H, t).
Pripremanje 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propionske kiseline
[0603]
[0604] Vodeni natrijum hidroksid (2N; 134 mL, 268 mmol) je dodat u rastvor metil 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi) propanoata (26 g, 138 mmol) u THF (300 mL). Smeša je mešana na r.t.5 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Doda se etil acetat (100 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj je ohlađen na 0 °C, i vodeni rastvor HCl (IN) je oprezno dodavan u kapima dok se ne postigne pH od 3.5. Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa etil acetatom (2 x 250 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobila 3-(tetrahidro-2H-piran-2-iloksi)propanska kiselina (24 g, 98%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3,
1
24 °C) 1.45 -1.62 (4H, m), 1.63 -1.85 (2H, m), 2.64 -2.68 (2H, m), 3.52 -3.56, (1H, m), 3.70 -3.74, (1H, m), 3.85 -3.89 (1H, m), 3.99 -4.03 (1H, m), 4.62 -4.66 (1H, m), 11.2 (1H, br s). Pripremanje (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)iridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksankarboksamida
[0605]
[0606] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat rastvoru 3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propionske kiseline (54 mg, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (100 mg, 0.26 mmol; dobijene prema Primeru 14), i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16 h pre HCl u dioksanu (4 M; 0.52 mL, 2.1 mmol) je dodata. Ova nova smeša je mešana na r.t.2 h pre bazifikacije zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3. Dobijena smeša je razblažena sa vodom (20 mL) i izvađena sa DCM (50 mL). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL) pre nego što je propušten kroz uložak za fazno razdvajanje. Organske frakcije su osušene preko MgSO4i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)propanamido)cikloheksankarboksamid (46 mg, 33%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.05 -1.2 (1H, m), 1.24 -1.51 (13H, m), 1.52 -1.63 (1H, m), 1.64 -1.71 (1H, m), 1.72 -1.83 (3H, m), 1.88 -1.93 (1H, m), 2.25 -2.35 (2H, m), 2.57 -2.7 (1H, m), 2.90 (2H, s), 3.38 -3.44 (1H, m), 3.48 -3.58 (1H, m), 3.59 -3.64 (1H, m), 3.74 (1H, ddd), 3.81 (1H, ddt), 3.95 (2H, s), 4.55 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.00 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.36 (1H, s), 10.56 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 544.
1
Primer 53: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(cis-3-hidroksiciklobutankarbosamido)cikloheksankarboksamid [0607]
[0608] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor cis-3-((tercbutildimetilsilil)oksi)ciklobutankarboksilne kiseline (71 mg, 0.31 mmol; pripremljeni prema Primeru 4), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol)-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.26 mmol; dobijene prema Primeru 14), i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Dobijena smeša je mešana na r.t.16 h pre rastvora tetrabutilamonijak fluorida u THF (1 M; 1.0 mL, 1.0 mmol) je dodata. Smeša je mešana na r.t.2 h pre nego što se ugasi sa vodom (20 mL). Smeša je ekstrahovana sa DCM (50 mL), i isprana je zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL) pre nego što je propušten kroz uložak za separaciju faza. Organske frakcije su osušene preko MgSO4i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod sniženim pritiskom, a rezultujući ostatak je dalje prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijentom eluiranja od 0 do 10% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((cis)-3-hidroksiciklobutankarboksamido)cikloheksankarboksamid (0.037 g, 53%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.34 (6H, s), 1.47 -1.49 (3H, m), 1.85 -1.99 (5H, m), 2.10 -2.30 (4H, m), 2.39 -2.62 (4H, m), 2.96 (2H, s), 3.79 -3.86 (1H, m), 3.95 (2H, s), 5.90 (1H, br d), 8.09 (1H, s), 8.22 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.69 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 486.
Primer 54: (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid
[0609]
1
[0610] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 3.2 mL, 13 mmol) je dodat u rastvor tercbutil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (600 mg, 1.27 mmol) u DCM (9.5 mL) da bi se dobila žuta suspenzija. Metanol (∼5 mL) je dodat, čime se dobio bistar žuti rastvor. Reakcija je mešana 18 h na r.t. i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il) cikloheksan-l-karboksamid kao dihidrohloridna so (488 mg, 87%) i beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.23 -1.36 (9H, m), 1.50 (1H, q), 1.77 -1.89 (2H, m), 1.89 -2.01 (1H, m), 2.01 -2.09 (1H, m), 2.56 -2.68 (1H, m), 2.94 (2H, s), 2.97 -3.09 (1H, m), 3.95 (2H, s), 7.85 -7.93 (1H, m), 7.98 -8.14 (3H, m), 8.26 -8.32 (2H, m), 10.56 (1H, s).1 ekvivalent HCl za koji se pretpostavlja da je ugrađen u široki singlet pri 5.4 ppm. m/z: ES+[M+H]+ 372.
[0611] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat su opisani u nastavku:
Pripremanje 5-fluoro-4-jodopiridin-2-amina
[0612]
[0613] Koncentrovani vodeni amonijum hidroksid (26 wt.%; 7.0 mL, 45 mmol) je dodavan u kapima (lagana egzoterma) u rastvor 2,5-difluoro-4-jodopiridina (2.0 g, 8.30 mmol) u DMSO (2 mL) da bi se dobila bela suspenzija. Suspenzija je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 140 °C tokom 4 h. Reakcija je podeljena između EtOAc i vode, i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL). Kombinovane organske materije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom, i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu pre nego što je prečišćen fleš
1
hromatografijom sa silika gelom (0 do 10% metanola u DCM) da bi se dobio 5-fluoro-4-jodopiridin-2-amin (1.3 g, 66%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6,, 27 °C) 5.96 (1H, br s) 5.96 (1H, s) 6.92 (1H, d) 7.77 -7.84 (1H, m). m/z: ES+[M+H]+ 239. Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata [0614]
[0615] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (0.62 mL, 4.7 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (843 mg, 3.47 mmol; pripremljene prema Primeru 2) u DCM (15 ml). Bezbojni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1.5 h. Zatim se dodaje rastvor 5-fluoro-4-jodopiridin-2-amina (750 mg, 3.15 mmol) i piridina (0.51 mL, 6.3 mmol) u DCM (15 mL). Rezultujuća reakcija je mešana na r.t.
18 h pre nego što je razblažena sa DCM (200 mL) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 10% metanola u DCM, da se dobije terc-butil ((1R, 3S)-3-((5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (827 mg, 57%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.01 -1.19 (1H, m), 1.18 -1.31 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.61 -1.81 (m, 3H), 1.87 (1H, d), 2.53 -2.62 (1H, m), 3.16 -3.26 (1H, m), 6.78 (1H, br d), 8.26 (1H, s), 8.60 (1H, d), 10.61 (1H, s). m/z: ES+[M+Na+]+ 486.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0616]
1 1
[0617] Cezijum karbonat (2.81 g, 8.61 mmol) druga generacija XPhos prekatalizatora (0.090 g, 0.11 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0.828 g, 3.16 mmol; dobijene prema Primeru 23), terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1.33 g, 2.87 mmol), dioksan (24 mL) ), i vodu (5 mL). Reakcija je zagrevana do 95 °C i održavana pod ovim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (250 mL) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida pre nego što je osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 100% etil acetata u heksanima, da se dobije terc-butil ((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il) karbamoil)cikloheksil)karbamat (600 mg, 44%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.03 -1.15 (1H, obsc. m), 1.22 -1.32 (9H, m), 1.38 (9H, s), 1.69 -1.82 (3H, m), 1.89 (1H, br d) 2.53 -2.64 (1H, m), 2.93 (2H, s), 3.21 -3.32 (1H, m), 3.96 (2H, s), 6.78 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.27 (1H, d), 8.31 (1H, d), 10.45 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
Primer 55: (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid [0618]
[0619] HATU (98 mg, 0.26 mmol) je dodat u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (32 mg, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (96 mg, 0.22 mmol; dobijene prema Primeru 54), i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMF (1,5 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 50 °C 1,75 h i zatim ostavljena da se ohladi do r.t. Nakon 18 h, dobijena mešavina je prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su isparene do suvoće da bi se dobio (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-
1 2
pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido) cikloheksankarboksamid (33 mg, 33%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.76 -0.84 (2H, m), 0.98 -1.04 (2H, m), 1.29 (6H, s), 1.30 -1.37 (3H, m), 1.52 (1H, q), 1.7 -1.84 (3H, m), 1.88 (1H, d), 2.58 -2.67 (1H, m), 2.94 (2H, s), 3.63 -3.73 (1H, m), 3.95 (2H, s), 6.14 (1H, br s), 7.65 (1H, d), 7.89 (1H, d), 8.28 (1H, d), 8.32 (1H, d), 10.46 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 456.
Primer 56: (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-imidazo-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid [0620]
[0621] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor 1-hidroksiciklopropankarboksilne kiseline (31.6 mg, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.26 mmol) i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Reakcija je mešana preko noći na r.t. i zatim je prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamid (27 mg, 22%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 0.75 -0.82 (2H, m), 0.93 -1.09 (2H, m), 1.25 (6H, s), 1.27 -1.38 (3H, m), 1.52 (1H, q), 1.65 -1.93 (4H, m), 2.53 -2.70 (1H, m), 2.71 (2H, s), 3.60 -3.71 (1H, m), 3.91 (2H, s), 6.15 (1H, s), 7.51 (1H, s), 7.65 (1H, d), 8.29 (1H, s), 8.42 (1H, s), 10.65 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 472.
[0622] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[l,2-a]imidazol)3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
1
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0623]
[0624] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.40 g, 0.83 mmol; pripremljen prema Primeru 10), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[l,2-a]imidazol (0.200 g, 1.25 mmol; pripremljeni prema Primeru 22), kalijum acetat (0.163 g, 1.66 mmol) i paladijum acetat (0.337 g, 0.33 mmol) su suspendovani u DMA (10 mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Cev je ispražnjena i pročišćena azotom (3x) i zatim zagrevana na 150 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3 u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 100% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio tert-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a] midazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.20 g, 49%) kao narandžasta guma.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 21°C) 1.05 -1.19 (1H, m), 1.33 (6H, s), 1.40 -1.46 (12H, m), 1.9 -2.05 (3H, m), 2.20 -2.47 (2H, m), 2.78 (2H, s), 3.46 -3.52 (1H, m), 3.93 (2H, s), 4.44 -4.52 (1H, m), 7.67 (1H, s), 8.06 (1H, br s), 8.28 (1H, s), 8.29 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 488.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0625]
1 4
[0626] Terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,25 g, 0.51 mmol) je rastvoren u DCM (5 M). Trifluoroacetatna kiselina (0.39 mL, 5,1 mmol) je dodata i reakciona smeša je mešana na r.t. 30 minuta. Reakciona smeša je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il) piridin-2-il) cikloheksankarboksamid (0.19 g, 96%) kao narandžasta guma. Ova guma je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 388.
Primer 57: N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0627]
[0628] HATU (118 mg, 0.31 mmol) je dodat u rastvor oksetan-3-karboksilne kiseline (32 mg, 0.31 mmol), (1S,3R)-3-amino-N(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.26 mmol; dobijene prema Primeru 56) i trietilamin (0.11 mL, 0.77 mmol) u DMA (2 mL). Reakciona smeša je prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio polučist proizvod. Ovaj materijal je dalje prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 10% MeOH u EtOAc. Čiste frakcije su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a] imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (13 mg, 11%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.11 -1.29 (1H, m), 1.32 (6H, s), 1.36 -1.6 (3H, m), 1.9 -2.02 (3H, m), 2.22 -2.31 (1H, br d), 2.41 -2.55 (1H, m), 2.78 (2H, s), 3.67 (1H, ddd), 3.82 -3.96 (3H, m), 4.74 -4.9 (4H, m), 5.75 (1H, d), 7.64 (1H, s), 8.27 (3H, d). m/z: ES+[M+H]+ 472.
1
Primer 58: cis-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida
[0629]
[0630] Cis-3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)ciklobutankarboksamida (0.194 g,0.42 mmol; pripremljen prema Primeru 27), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[l,2-a]imidazol (0.100 g, 0.62 mmol; pripremljeni prema Primeru 22), kalijum acetat (0.082 g, 0.83 mmol) i paladijum acetat (0.168 g, 0.17 mmol) su suspendovani u DMA (10 mL) i zatvoreni u mikrotalasnu cev. Cev je ispražnjena i pročišćena azotom (3x) i zatim zagrevana na 150 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa vodom (20 mL) i isprana DCM (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1 % NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom, a rezultirajući ostatak je ponovo prečišćen preparativnom HPLC (kolona Waters SunFire, 5µ silika, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 0.1% mravlje kiseline) i MeCN kao eluenti. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio cis-I-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamid (0.016 g, 11%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.26 (6H, s), 1.98 -2.09 (2H, m), 2.30 -2.40 (2H, m), 2.72 (2H, s), 2.74 -2.83 (1H, m), 3.93 (2H, s), 3.95 -4.00 (1H, m), 5.15 (1H, s), 7.53 (1H, s), 8.32 (1H, s), 8.41 (1H, s), 10.61 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 361. Primer 59 i 60: Izomer 1 i izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0631]
1
[0632] Anhidrid sirćetne kiseline (0.049 mL, 0.52 mmol) dodat je u kapima u sirovi trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.167 g, 0.43 mmol), 4-dimetilaminopiridin (2.6 mg, 0.02 mmol) i trietilamin (0.19 mL, 1.3 mmol) u DCM (2 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 4 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim amonijak hloridom (10 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 10 mL), a kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (Chiral Technologies IE kolona, 20 µm silicijum dioksid, prečnik 50 mm, dužina 250 mm) eluiranjem sa izokratnim 30% heptanom u acetonu pri 120 mL/min uz detekciju na 210 nm. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio brži eluirajući izomer 1 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.059 g, 32%) i sporije eluirajući izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.052 g, 28%) kao bele čvrste supstance.
Primer 59, Izomer 1:
[0633]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.34 (6H, s), 1.56 -2.00 (8H, m), 2.01 (3H, s), 2.48 -2.56 (1H, m), 2.96 (2H, s), 3.95 (2H, s), 4.17 -4.24 (1H, m), 5.42 -5.49 (1H, m), 7.96 (1H, br s), 8.10 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.26 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Primer 60, Izomer 2:
[0634]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.34 (6H, s), 1.48 -1.55 (1H, m), 1.62 -1.78 (4H, m), 1.82-1.90 (1H, m), 1.94 -1.98 (2H, m), 2.01 (3H, s), 2.46 -2.58 (1H, m), 2.96 (2H, s), 3.95 (2H, s), 4.17 -4.26 (1H, m), 5.45 -5.54 (1H, br d), 8.01 (1H, s), 8.10 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.26 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Analitički hiralni uslovi reverzne faze:
1
[0635] Postupci su korišćeni za pripremanje polaznog materijala trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje terc-butil trans-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0636]
[0637] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (1.1 mL, 8.2 mmol) je dodat u rastvor trans-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline. (1.34 g, 5.50 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na 20 °C tokom 1.5 h, a zatim 5-hloro-4-jodopiridin-2-amin (1.40 g, 5.50 mmol; pripremljeni prema Primeru 2) i piridin (0.67 mL, 8.2 mmol) je dodavan u kapima tokom 2 minuta. Dobijeni rastvor je mešan 70 h.
Reakciona smeša je zatim ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata (300 mL), ekstrahovana sa DCM (3 x 30 mL), i kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobila čvrsta supstanca krem boje. Ova čvrsta supstanca je prečišćena preparativnom HPLC (XBridge Prep
1
C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio tercbutil (trans-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.99 g, 37%) kao ružičasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.46 (9H, s), 1.49 -1.55 (1H, m), 1.61 -1.72 (4H, m), 1.82 -1.93 (3H, m), 2.47 -2.52 (1H, m), 3.89 -3.99 (1H, br s), 4.55 -4.59 (1H, br s), 7.84 (1H, br s), 8.19 (1H, s), 8.83 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 480.
Pripremanje terc-butil trans-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0638]
[0639] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.049 g, 0.06 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (0.219 g, 0.75 mmol; pripremljeni prema Primeru 23), terc-butil (trans-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.30 g, 0.63 mmol) i kalijum fosfat, tribazični, (0.327 g) 1.88 mmol) u 1,4-dioksanu (8 mL) i vodi (1,6 mL). Dobijena smeša je degasirana i mešana na 90 °C tokom 2 h pod azotom. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom i stavljena je u vodu (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sekvencijalno sa EtOAc (2 x 20 mL) i DCM (20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom.
Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 70% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil (trans-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il) piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.26 g, 86%) kao čvrsta supstanca krem boje. m/z: ES+[M+H]+ 488.
Pripremanje trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
1
[0641] Terc-butil (trans-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,263 g, 0.54 mmol) je rastvoren u DCM (5 M). Trifluoroacetatna kiselina (0.41 mL, 5,4 mmol) je dodata i reakciona smeša je mešana na r.t. 18 h. Reakcija je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 388.
Primeri 61 i 62: Izomer 1 i Izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0642]
[0643] Dodat je u kapima anhidrida sirćetne kiseline (0.036 mL, 0.38 mmol) u trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin)-3-il) piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.119 g, 0.32 mmol), 4-dimetilaminopiridin (1.9 mg, 0.02 umol) i trietilamin (0.14 mL, 1.0 mmol) u DCM (2 mL) na r.t. pod azotom. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 4 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim amonijak
2
hloridom (10 mL), ekstrahovana sa DCM (2 x 10 mL), kombinovani organski slojevi su sušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (Chiral Technologies IE kolona, silicijum dioksid od 20 µm, prečnik 50 mm, dužina 250 mm), koristeći mešavinu 30/70 heptan/aceton kao eluente, brzinu protoka od 120 mL/min, i okidač za detekciju na 210 nm. Frakcije koje sadrže željena jedinjenja su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio brži eluirajući izomer 1 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.076 g, 57%) i sporo eluirajući izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (0.056 g, 42%).
Primer 61, Izomer 1:
[0644]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 31 °C) 1.57 -1.96 (7H, m), 2.01 (3H, s), 2.04 -2.16 (2H, m), 2.49 -2.56 (1H, m), 2.92 (2H, t), 4.16 -4.23 (3H, m), 5.46 -5.52 (1H, m), 7.87 (1H, s), 8.05 (1H, br s), 8.21 (1H, s), 8.27 (1H, s).3H na 1.50 do 1.62 ppm zaklonjen signalom vode. m/z: ES+[M+H]+ 416.
Primer 62, Izomer 2:
[0645]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.45 -1.96 (10H, m), 2.01 (3H, s), 2.04 -2.13 (2H, m), 2.49 -2.58 (1H, m), 2.92 (2H, t), 4.16 -4.24 (3H, m), 5.52 -5.57 (1H, m), 7.87 (1H, s), 8.12 (1H, br s), 8.21 (1H, s), 8.26 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 416.
Analitički hiralni uslovi reverzne faze:
2 1
[0646] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u nastavku:
Pripremanje terc-butil (trans-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il]piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0647]
Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.049 g, 0.06 mmol) je dodata degasiranoj mešavini 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0.186 g, 0.75 mmol), tert-butil (trans-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.30 g, 0.63 mmol; pripremljeni prema Primerima 59 i 60, Međujedinjenja) i tribazični kalijum fosfat (0.327 g, 1.88 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL). Reakciona smeša je degasirana i mešana na 90 °C tokom 2 h pod azotom.
Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i stavljena je u vodu (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana sekvencijalno sa EtOAc (2 x 20 mL) i DCM (20 mL).
Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 70% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio tert-butil(trans-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.163 g, 55%) u vidu čvrste mase krem boje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.46 (9H, s), 1.48 -1.54 (1H, m), 1.61 -1.74 (4H, m), 1.82 -1.97 (5H, m), 2.05 -2.13 (2H, m), 2.46 -2.57 (1H, m), 2.92 (2H, t), 3.98 (1H, br s), 4.21 (2H, t), 4.60 (1H, br s), 7.87 (2H, s), 8.21 (1H, s), 8.27 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 474.
Pripremanje trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0648]
2 2
[0649] Terc-butil (trans-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.16 g, 0.34 mmol) je rastvoren u DCM (5 mL).
Trifluoroacetatna kiselina (0.26 mL, 3,4 mmol) je dodata i reakciona smeša je mešana na r.t.
18 h. Reakciona smeša je zatim prečišćena jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio trans-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao žuta guma. m/z: ES+[M+H]+ 374.
Primer 63: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0650]
[0651] Anhidrid sirćetne kiseline (0.032 mL, 0.34 mmol) je dodat u (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.10 g, 0.28 mmol), trietilamin (0.12 mL, 0.84 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amin (2 mg, 0.01 mmol) u DCM (5 mL)na r.t. pod vazduhom. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 2 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim amonijum hloridom (20 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 1% NH3) i MeCN kao eluenata. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim
2
pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.047 g, 42%) kao žuta guma.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 -1.15 (1H, m), 1.23 -1.37 (3H, m), 1.74 -1.82 (6H, m), 1.83 -1.94 (3H, m), 2.00 -2.08 (2H, m), 2.56 -2.68 (1H, m), 2.91 (2H, t), 3.58 -3.61 (1H, m), 4.15 (2H, t), 7.73 -7.78 (2H, m), 8.26 (1H, d), 8.30 (1H, d), 10.48 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 400.
[0652] Procedure za pripremanje početnog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisane ispod:
Pripremanje 3-(2-fluoropiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina [0653]
[0654] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.092 g, 0.12 mmol) je dodata u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridina (0.347 g, 1.40 mmol), 2-hloro-5-fluoro-4-jodopiridina (0.300 g, 1.17 mmol) i kalijum fosfata, tribaznog (0.609 g, 3.50 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (2 mL). Dobijena smeša je degasirana i mešana na 90 °C tokom 2 h pod azotom. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a dobijeni ostatak je stavljen u vodu (20 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana uzastopno sa DCM (3 x 20 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 60% EtOAc u heptanu. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (200 mg, 68%) kao žuta guma. m/z: ES+[M+H]+ 252.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0655]
2 4
[0656] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0.092 g, 0.080 mmol) je dodat u smešu 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0.20 g, 0.79 mmol), tercbutil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata (0.231 g, 0.95 mmol; pripremljeni prema Primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (0,092 g, 0.16 mmol) i cezijum karbonat (0,777 g, 2.38 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL). Smeša je degasirana (vakuum), ispunjena azotom, i dobijena suspenzija je mešana na 120 °C tokom 2 h u mikrotalasnom reaktoru. Reakciona smeša je podeljena između vode (20 mL) i DCM (40 mL) i razdvojena korišćenjem kasete za razdvajanje faza. Organske materije su adsorbovane na silicijum dioksid i prečišćene fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 0 do 60% EtOAc u heptanu. Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (136 mg). Ovaj materijal je upotrebljen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja m/z: ES+[M+H]+ 458. Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0657]
[0658] Trifluoroacetična kiselina (0.17 mL, 2.2 mmol) je dodata u terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,10 g, 0.22 mmol) u DCM (5 mL). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1 h. Sirovi proizvod je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom, koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1 M NH3u MeOH, i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-
2
il)cikloheksankarboksamid kao žuta guma. Ovaj materijal je upotrebljen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja m/z: ES+[M+H]+ 358.
Primer 64 i 65: Pripremanje izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0659]
[0660] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.056 g, 0.07 mmol) je dodata u smešu 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5 6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridina (0.56 g, 0.85 mmol), (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.30 g, 0.71 mmol; pripremljena prema Primeru 12) i Cs2CO3(0.695 g, 2.13 mmol) u dioksanu (10 mL) i vodi (2.0 mL) pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 100 °C 30 minuta. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom, i rezultujući ostatak je razblažen sa DCM (100 mL) pre nego što je ispran redom sa vodom (100 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (100 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 10% MeOH u DCM. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silika gel, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), korišćenjem polarnih smeša vode (koja sadrži 0,1% NH4) i MeCN kao eluenti. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.120 g, 39%; smeša primera 64 i 65, nepoznat odnos) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 430.
2
[0661] Ovaj materijal je razdvojen preparativnom HPLC (Chiralpak® IA-3 kolona, 5 µm silika, prečnik 20 mm, dužina 250 mm), koristeći izokratsku smešu 30% izopropanola u heksanu (koji sadrži 0.1% dietilamina) kao eluente tokom 23 minuta na brzina protoka od 20 mL/min. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio brži eluirajući izomer 1 (14.3 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (0.045 g, 38%, Primer 64) kao bela čvrsta supstanca i sporije eluirajući izomer 2 (18,8 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (0.045 g, 38%, Primer 65) kao bela čvrsta supstanca.
Primer 64, Izomer 1:
[0662]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 1.00 -1.14 (4H, m), 1.19 -1.36 (3H, m), 1.69 -1.84 (7H, m), 1.85 -2.10 (3H, m), 2.37 -2.49 (1H, m), 2.56 -2.66 (1H, m), 2.79 -2.90 (1H, m), 3.49 -3.63 (1H, m), 4.01 -4.13 (1H, m), 4.19 -4.30 (1H, m), 7.75 (1H, s), 7.79 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.61 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Primer 65, Izomer 2:
[0663]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21 °C) 1.01 -1.14 (4H, m), 1.21 -1.35 (3H, m), 1.70 -1.83 (7H, m), 1.83 -2.09 (3H, m), 2.37 -2.49 (1H, m), 2.56 -2.63 (1H, m), 2.79 -2.89 (1H, m), 3.49 -3.62 (1H, m), 4.01 -4.14 (1H, m), 4.19 -4.30 (1H, m), 7.74 (1H, s), 7.78 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.61 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Analitički hiralni uslovi reverzne faze:
2
[0664] Postupci za pripremanje polaznog materijala 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina su opisani u daljem tekstu: Pripremanje 5-metilpirazolo[1,5-a]piridina
[0665]
[0666] Paladijum(II)acetat (0.114 g, 0.51 mmol) je dodat u 5-bromopirazolo[l,5-a]piridin (1.00 g, 5.08 mmol), 2,4,6-trimetil-1,3,5,2, 4,6-trioksatriborinan (0.765 g, 6.09 mmol), kalijum karbonat (2.10 g, 15.2 mmol), 1,4-dioksan (10 mL) i vodu (1 mL) pod azotom.
Dobijena smeša je mešana na 80 °C 1 h. Ova reakcija je ponovljena u odvojenoj posudi, i obe reakcije su zatim kombinovane, razblažene sa EtOAc (100 mL), i isprane uzastopno sa vodom (75 mL) i zasićenim vodenim natrijum hloridom (75 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 20% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5-metilpirazolo[l,5-a]piridin (1.1 g, 82%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20 °C) 2.33 (3H, s), 6.45 (1H, d), 6.71 (1H, dd), 7.44 (1H, s), 7.92 (1H, d), 8.55 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 133.
Pripremanje 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0667]
[0668] 5-metilpirazolo[l,5-a]piridin (500 mg, 3.78 mmol), paladijum na ugljeniku (10 wt.%; 250 mg) i sirćetna kiselina (0.217 mL, 3.78 mmol) u MeOH (20 mL) su mešani u atmosferi vodonika pri 20 atm i 80 °C tokom 50 h. Ova reakcija je zatim ponovljena u odvojenoj posudi. Posle hlađenja, obe reakcije su filtrirane kroz Celite®, a filtrati su koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1.05 g, 98%) kao smeđe ulje. Ovaj proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20°C) 1.06 (3H, d), 1.57 -1.72(1H, m), 1.84 -2.04 (2H, m), 2.24 -2.36 (1H, mf), 2.81 -2.93 (1H, m), 3.90 -4.07 (1H, m), 4.11 -4.19 (1H, m), 5.95 (1H, s), 7.33 (1H, s).
2
Pripremanje 3-jodo-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0669]
[0670] NIS (1.98 g, 8.81 mmol) dodaje se u 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a] piridin (1.05 g, 7.34 mmol) u acetonitrilu (2 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 h pre koncentrovanja pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je zatim razblažen sa EtOAc (100 mL) i ispran redom sa vodom (75 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 75 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-jodo-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (1.0 g, 52%) kao braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20 °C) 1.08 (3H, d), 1.58 -1.72 (1H, m), 1.87 -2.01 (2H, m), 2.07 -2.22 (1H, m), 2.64 -2.71 (1H, m), 3.93 -4.06 (1H, m), 4.10 -4.22 (1H, m), 7.47 (1H, s).
Pripremanje 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0671]
[0672] n-BuLi u heksanu (2.5 M; 0.916 mL, 2.29 mmol) je dodat u kapima u 3-jodo-5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridinu (0.50 g, 1.91 mmol), 2-izopropoksi-4,45,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanu (0.532 g, 2.86 mmol) i TMEDA (0.40 mL, 2.7 mmol) u THF (20 mL) na -78 °C pod azotom. Dobijena smeša je mešana na -78 °C 1 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim amonijum hloridom (5 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0.60 g, 79%) kontaminiran sa ∼23 mol% 5-metil-4,5,6,7-
2
tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinom bazirano na NMR analizi kao žuta
guma. m/z: ES+[M+CH3CN+H]+ 304.
Primer 66: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]piridin-3-il)azepin-2-il)cikloheksankarboksamid;
[0673]
[0674] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.13 mL, 1.4 mmol) u mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (450 mg, 1.16 mmol), trietilamin (0.34 mL, 2.4 mmol) i DCM (10 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 4 h. Silicijum dioksid je dodat i smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0.5% metanolom u etil acetatu, da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro)-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (260 mg, 52%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.05 -1.12 (1H, m), 1.17 -1.37 (3H, m), 1.57 -1.66 (2H, m), 1.69 -1.95 (11H, m), 2.56 -2.65 (1H, m), 2.70 -2.77 (2H, m), 3.50 -3.61 (1H, m), 4.21 -4.45 (2H, m), 7.48 (1H, s), 7.73 (1H, d), 8.05 (1H, s), 8.40 (1H, s), 10.58 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
[0675] Procedure za pripremanje početnog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)azepin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisane ispod:
Pripremanje etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-5-karboksilata
[0676]
21
[0677] Etil 1H-pirazol-5-karboksilat (9.9 g, 71 mmol) i kalijum karbonat (12 g, 85 mmol) su mešani u DMF (70 mL), i dodat je metil 5-bromopentanoat (14 g, 71 mmol). Smeša je mešana na temperaturi okoline tokom 24 h. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa etrom (3x). Kombinovani organski slojevi su kombinovani i isprani vodom (2x), osušeni preko magnezijum sulfata i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 20% etil acetatom u pentanu da bi se dobio etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-5-karboksilat (9 g, 50.1%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.38 (3H, t), 1.54 -1.75 (2H, m), 1.8 -1.95 (2H, m), 2.34 (2H, t), 3.65 (3H, s), 4.34 (2H, q), 4.58 (2H, t), 6.83 (1H, d), 7.46 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 255. Takođe je izolovan etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-3-karboksilat (7,70 g, 43%).
Pripremanje metil 4-okso-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-5-karboksilata [0678]
[0679] Kalijum terc-butoksid (6.29 g, 56.0 mmol) je dodat u etil 1-(5-metoksi-5-oksopentil)-1H-pirazol-5-karboksilat (9.5 g, 37 mmol) u toluenu (200 mL). Smeša je mešana 10 minuta, a zatim je zagrejana do 110 °C, što je rezultiralo gustim talogom. Smeša je zagrevana 30 minuta i zatim ostavljena da se ohladi na r.t. Smeša je neutralizovana do pH 7 sa razblaženom vodenom HCl (2N) i ekstrahovana sa etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio metil 4-okso-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-5-karboksilat (8.00 g, 103%) kontaminiran sa etil esterom analog ovaj materijal je upotrebljen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 209 (Me ester) & 223 (Et ester).
Pripremanje 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-4-ona
[0680]
[0681] Dodat je litijum hlorid (2.60 g, 61.2 mmol) u rastvor metil 4-okso-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-5-karboksilata (8.50 g, 40.8 mmol, kontaminiran analogom etil estra) u DMSO (50 mL). Smeša je zagrevana na 120 °C 24 h i zatim ohlađena do r.t. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3x). Kombinovane organski slojevi su koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 30% etil acetatom u heptanu da bi se dobio 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-4-on (3.50 g, 57%) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.91 -2.08 (2H, m), 2.08 -2.28 (2H, m), 2.76 -2.93 (2H, m), 4.49 -4.64 (2H, m), 6.86 (1H, d), 7.44 (1H, d).
Pripremanje 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0682]
[0683] Hidrazin hidrat (5.65 mL, 117 mmol) je dodat u mešani rastvor 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-4-ona (3.5 g, 23 mmol) rastvorenog u dietilen glikol (66 mL). Dobijeni rastvor je mešan na 170 °C 1 h. Reakcija je zatim uklonjena sa toplote, i pažljivo je dodat kalijum hidroksid (4,58 g, 81.6 mmol) u smešu. Dobijena suspenzija je mešana na 170 °C 2 h i zatim ohlađena do r.t. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom, zakišeljena do pH 5 sa razblaženom vodenom hlorovodoničnom kiselinom (2N), i ekstrahovana sa Et2O (5 x 50 mL). Kombinovani etarski slojevi su isprani vodom (2 x 20 mL), osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (2.10 g, 66%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.61 -1.67 (2H, m), 1.71 -1.79 (2H, m), 1.80 -1.87 (2H, m), 2.62 -2.83 (2H, m), 4.17 -4.3 (2H, m), 5.98 (1H, d), 7.26 (1H, d).
Pripremanje 3-jodo-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0684]
[0685] NIS (3.47 g, 15.4 mmol) je dodat u mešani rastvor 5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepina (2.10 g, 15.4 mmol) rastvorenog u acetonitrilu (30 mL) na r.t. Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 16 h. Reakciona smeša je razblažena sa etrom (50 mL) i isprana sekvencijalno sa vodom (2 x 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-jodo-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin (3.3 g, 82%) kao narandžasto ulje koje se očvrsnulo pri stajanju. Ovaj materijal je upotrebljen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.6 -1.72 (2H, m), 1.73 -1.82 (2H, m), 1.82 -1.92 (2H, m), 2.74 -2.83 (2H, m), 4.25 -4.35 (2H, m), 7.32 (1H, s).
Pripremanje 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0686]
[0687] Kompleks litijum hlorida izopropilmagnezijum hlorida u THF (1.3 M; 12.6 mL, 16.4 mmol) u kapima se dodaje u toku 5 minuta u 3-jodo-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin (3.30 g, 12.6 mmol) u THF (20 mL) na 0 °C pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 0 °C 30 minuta. 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (3.85 mL, 18.9 mmol) se dodaje kap po kap na 0 °C i reakciona smeša se zatim ostavi da se zagreje na r.t. preko noći. Reakciona smeša je razblažena etrom (20 mL) i isprana sekvencijalno zasićenim vodenim amonijum hloridom (20 mL), vodom (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeno ulje je preuzeto u heptan, što je rezultiralo formiranjem bele smeše. Ova smeša je filtrirana da bi se dobio 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (2.00 g, 61%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.29 (12H, s), 1.63 -1.72 (2H, m), 1.72 -1.8 (2H, m), 1.80 -1.87 (2H, m), 2.88 -3.09 (2H, m), 4.20 -4.33 (2H, m), 7.56 (1H, s).
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0688]
21
[0689] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.16 g, 0.21 mmol) je dodata degasiranoj mešavini 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina (0.656 g, 2.50 mmol), terc-butil (1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-ilkarbamoil)cikloheksil)karbamata (1.00 g, 2.08 mmol; dobijen prema Primeru 10) i kalijum fosfat, tribazični, (1.09 g, 6.25 mmol) u 1,4-dioksanu (20 mL) i vodi (2 mL). Smeša je opet degasirana i mešana na 85 °C 24 h pod azotom. Reakciona smeša se ostavi da se ohladi i dodaje se silicijum dioksid. Ova nova smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, i rezultujući ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 50% etil acetatom u heptanu da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.70 g, 69%) kao čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. m/z: ES+[M+H]+ 488.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]piridin-3-il)azepin-2-il)cikloheksankarboksamid;
[0690]
[0691] TFA (2 mL) je dodat u mešani rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (700 mg, 1.43 mmol) u DCM (10 mL). Reakcija je mešana na r.t.24 h, isparljivi sastojci su uklonjeni pod vakuumom, a rezultirajući ostatak je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom korišćenjem SCX kolone, eluiranjem sa 7N amonijakom u metanolu.
Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (550 mg, 99%) kao čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 388. Primer 67: N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid
[0692]
[0693] HATU (166 mg, 0.44 mmol) i DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) su uzastopno dodati u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il) cikloheksankarboksamid dihidrohlorida (150 mg, 0.34 mmol; dobijene prema Primeru 31b) i oksetan-3-karboksilna kiselina (45 mg, 0.44 mmol) u DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t.3 h pre nego što se razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i ekstrahuje sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena sirova guma je prečišćena preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep Fenil OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 150 mm) korišćenjem smanjenih polarnih smeša vode (koja sadrži 0.2% amonijum hidroksida, pH 10) i d MeCN kao eluenti kako bi se dobio N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-oksetan-3-karboksamid (20 mg).
[0694] Druga reakcija je postavljena kao što sledi: HATU (140 mg, 0.37 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorid (150 mg, 0.34 mmol), oksetan-3-karboksilna kiselina (45 mg, 0.44 mmol), DIPEA (0.18 mL, 1.0 mmol) i DMF (1.2 mL). Reakcija je mešana na r.t. u trajanju od 3 h. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana zasićenim NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja sa 80 do 100% EtOAc u heksanu, da bi se dobio (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-oksetan-3-karboksamid (50 mg) kao bela čvrsta supstanca. Ovaj ostatak je kombinovan sa proizvodom iz prve reakcije i prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep Fenil OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 150 mm) da bi se dobio N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (54 mg, 17%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C)
21
1.10 -1.26 (1H, m), 1.37 -1.68 (3H, m), 2.17 -1.84 (7H, m), 2.37 -2.22 (1H, m), 2.57 -2.43 (1H, m), 2.95 (2H, t), 3.67 (1H, tt), 3.85 -4.00 (1H, m), 4.24 (2H, t), 4.89 -4.78 (4H, m), 5.52 (1H, br d), 7.93 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.60 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 458. Primeri 68 i 69: Izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0696] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (163 g, 0.379 mmol; smeša primera 68 i 69, nepoznatog odnosa) odvojena je korišćenjem SFC uslova (Kolona: Chiralpak AS, 5 µm, prečnik 21.2 mm, dužina 250 mm, brzina protoka 20 ml/min tokom 7 min), eluiranje sa 25% metanola u CO2, kako bi se dobio Izomer 1 (3.10 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (65 mg, 28%, Primer 68) i Izomer 2 (4.09 min) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (68, 29%, Primer 69) kao bele čvrste supstance.
Primer 68, Izomer 1:
[0697]<1>H NMR (300MHz, CDCl3, 27 °C) 1.05 -1.25 (4H, m), 1.65 -1.33 (4H, m), 1.85 -2.09 (7H, m), 2.15 -2.32 (2H, m), 2.38 -2.53 (1H, m), 2.86 -3.03 (2H, m), 3.70 (1H, dd), 3.82 -3.97 (1H, m), 4.33 (1H, dd), 5.47 (1H, br d), 7.89 (1H, s), 8.12 (1H, br s), 8.22 (1H, s), 8.27 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Primer 69, Izomer 2:
[0698]<1>H NMR (300MHz, CDCl3, 27 °C) 1.09 -1.24 (4H, d), 1.34 -1.58 (4H, m), 1.86 -2.08 (7H, m), 2.15 -2.32 (1H, m), 2.41 -2.51 (1H, m), 2.86 -3.03 (1H, m), 3.64 -3.75 (1H, m), 3.81 -3.95 (1H, m), 4.33 (1H, dd), 5.52 (1H, br d), 7.88 (1H, s), 8.15 -8.21 (2H, m), 8.27 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
21
Analitički SFC uslovi:
[0699] Postupci koji se koriste za pripremu polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3)-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje 6-metilpirazolo[1,5-a]piridina
[0700]
[0701] Dioksan (32 mL) i voda (6.0 mL) su dodati u kalijum karbonat (1.82 g, 13.2 mmol), 2,4,6-trimetil-1,3,5,2,4,6-trioksatriborinan (1.9 mL, 13 mmol) i 6-bromopirazolo[l,5-a]piridin (1.3 g, 6.60 mmol). Reakciona suspenzija je degasirana sa azotom. Dodat je RuPhos prekatalizator treće generacije (0.27 g, 0.33 mmol) i reakcija je uronjena u uljanu kupku koja je prethodno zagrejana na 100 °C. Reakcija je održavana pod ovim uslovima tokom 4 h i zatim ohlađena do sobne temperature. Dobijena smeša je filtrirana i filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeno ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 5 do 40% etil acetata u heksanu da bi se dobio 6-metilpirazolo[1,5-a]piridin (0.680 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz,
21
CDCl3, 27 °C) 2.29 (3H, s), 6.53 (1H, dd), 7.07 (1H, dd), 7.60 (1H, d), 7.90 (1H, d), 8.49 -8.52 (1H, m). m/z: ES+[M+H]+ 133.
Pripremanje 6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0702]
[0703] Metanol (45 mL) i sirćetna kiselina (0.5 mL) su dodati u posudu napunjenu sa 6-metilpirazolo[l,5-a]piridinom (0.71 g, 5.4 mmol) i platina(IV) oksidom (0.12 g, 0.54 mmol). Flašica je pročišćena sa azotom, evakuisana, i zatim podvrgnuta atmosferi vodonika (balon). Reakcija je mešana na 35 °C tokom 18 h i zatim filtrirana kroz sloj Celita®. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom i zatim razblažen dietil etrom. Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi 6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (0.71 g, 97%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.1 (3H, d), 1.50 (1H, dtd), 1.92 -2.01 (1H, m), 2.08 -2.27 (1H, m), 2.64 -2.80 (1H, m), 2.87 -2.96 (1H, m), 3.64 (1H, dd), 4.27 (1H, ddd), 5.99 (1H, s), 7.39 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 137.
Pripremanje 3-jodo-6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0704]
[0705] NIS (1.16 g, 5.14 mmol) dodaje se u rastvor 6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a] piridina (0.70 g, 5.14 mmol) u acetonitrilu (12 mL) na r.t. Reakcija je mešana pod ovim uslovima tokom 18 h i zatim razblažena sa EtOAc. Dobijena smeša je isprana vodom i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (4 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijena sirova guma je prečišćena fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 5 do 50% etil acetata u heksanima, da bi se dobio 3-jodo-6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (1.10 g, 82%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, 27 °C) 1.15 (3H, d), 1.42 -1.61 (1H, m), 1.90 -2.07 (1H, m), 2.08 -2.22 (1H, m), 2.52
21
-2.60 (1H, m), 2.75 -2.86 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 4.26 (1H, dd), 7.49 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 263.
Pripremanje 6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0706]
[0707] Tetrahidrofuran (3 mL) je dodat u posudu napunjenu sa 3-jodo-6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinom (0.40 g, 1.53 mmol). Reakcija je uronjena u ledenu kupku, i izopropil-magnezijum hlorid kompleks litijum hlorida u THF (1.3 M; 1.5 mL, 2.0 mmol) dodat je u kapima. Reakcija je održavana između 0 i 3 °C tokom 30 minuta. Zatim se 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-l, 2,3-dioksaborolan (0.426 g, 2.29 mmol) dodaje špricom i ledena kupka se ukloni. Reakcija je održavana pod ovim uslovima tokom 18 h i zatim razblažena zasićenim vodenim amonijum hloridom. Smeša je ekstrahovana u EtOAc (3x), a kombinovani organski slojevi su sušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0.186 g). Ovaj materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja m/z: ES+[M+H]+ 263.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0708]
[0709] 1,4-dioksan (5 mL) i voda (0.63 mL) su dodati u posudu napunjenu sa (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamidom (0.23 g, 0.55 mmol; pripremljen prema Primeru 12) i 6-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-
21
4,5,6,7-tetrahidropirazol[1,5-a]piridin (0.19 g, 0.71 mmol). Reakciona smeša je evakuisana i prečišćena azotom. Zatim se dodaju cezijum karbonat (0.444 g, 1.36 mmol) i PdCl2(dppf) (0.040 g, 0.05 mmol). Reakcija je postavljena u uljanu kupku prethodno zagrejano na 95 °C, i reakcija je održavana pod ovim uslovima tokom 2 h. Reakcija se zatim ohladi na s.t. i filtrirana kroz Celite® uz ispiranje sa etil acetatom. Filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, a organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena siva čvrsta supstanca je prečišćena fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 1 do 10% metanola u etil acetatu, da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.16 g, 69%).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99-1.15 (4H, m), 1.20 -1.33 (3H, m), 1.37 -1.48 (1H, m), 1.68 -1.77 (6H, m), 1.81 -1.92 (2H, m), 2.10 -2.20 (1H, m), 2.54-2.62 (1H, m), 2.79 -2.87 (2H, m), 3.48 -3.61 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 4.26 (1H, dd), 7.73 (1H, br d), 7.76 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.38 (1H, s), 10.58 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430.
Primer 70 i Primer 71: Pripremanje izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0710]
[0711] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (100 mg, 0.22 mmol) je razdvojen pomoću preparativnih HPLC uslova (Chiralpak IA kolona, 5 µm, 20 mm prečnik, 250 mm dužina, 25 °C temperatura kolone, 15 mL/min brzina protoka), eluiranje sa izokratnim 50% etanolom u heksanu tokom 22 minuta da bi se dobilo brže eluiranje (10.8 min) Izomera 1(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.030 g, 30 %) i sporo eluirajući (17.9 min) izomer 2 (1S,3R)-3-
22
acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.030 g, 30%) kao bele čvrste supstance.
Primer 70, Izomer 1:
[0712]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) 1.00 -1.14 (1H, m), 1.20 -1.34 (3H, m), 1.72 -1.80 (6H, m), 1.84 -1.97 (2H, m), 2.07 -2.19 (1H, m), 2.56 -2.66 (1H, m), 2.70 -2.92 (2H, m), 3.36 (3H, s), 3.48 -3.63 (1H, m), 3.93 -4.02 (1H, m), 4.23 (2H, d), 7.76 -7.83 (2H, m), 8.15 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Primer 71, Izomer 2:
[0713]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) 1.00 -1.17 (1H, m), 1.19 -1.35 (3H, m), 1.72 -1.80 (6H, m), 1.85 -1.97 (2H, m), 2.06 -2.19 (1H, m), 2.55 -2.63 (1H, m), 2.71 -2.92 (2H, m), 3.36 (3H, s), 3.50 -3.62 (1H, m), 3.93 -4.02 (1H, m), 4.23 (2H, d), 7.76 -7.83 (2H, m), 8.16 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Analitički SFC uslovi:
[0714] Postupci koji se koriste za pripremu polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3)-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje 6-metoksipirazolo[1,5-a]piridina
[0715]
[0716] Cezij karbonat (3.31 g, 10.2 mmol) je dodat u 6-bromopirazolo[l,5-a]piridin (1.00 g, 5.08 mmol), MeOH (0.41 mL, 10 mmol), paladijum acetat (0.057 g, 0.25 mmol) i 2-(di-ladamantilfosfino)-3,6-dimetoksi-2',4'6'-triizopropil-l,l'-bifenil (AdBrettPhos; 0.14 g, 0.25 mmol) u toluenu (10 mL). Dobijena smeša je mešana na 90 °C 2 h. Gornja reakcija je ponovljena u odvojenoj reakciji. Kada su se obe reakcije ohladile, one su kombinovane, filtrirane i koncentrovane pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 20% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 6-metoksipirazolo[l,5-a]piridin (0.83 g, 55%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 3.82 (3 H, s), 6.54 (1 H, s), 7.01 (1 H, d), 7.61 (1 H, d), 7.87 (1 H, s), 8.38 (1 H, s).
Pripremanje 6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0717]
[0718] 6-metoksipirazolo[l,5-a]piridin (0,36 g, 2.4 mmol) i paladijum na ugljeniku (10 wt%; 0.078 g, 0.73 mmol) in MeOH (50 mL) je mešana pod atmosferom vodonika pri 20 atm i 80 °C tokom 16 h. Smeša je filtrirana kroz Celite® jastučić, a filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa EtOAc (25 mL) i ispran redom sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hidrogenkarbonata (25 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 mL). Organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (0.30 g, 81%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 20 °C) 1.85 -1.94 (1H, m), 1.98 -2.09 (1H, m), 2.71 -2.78 (2H, m), 3.32 (3H, s), 3.89 (1H, m), 4.02 -4.18 (2H, m), 5.97 (1H, d), 7.34 (1H, d).
Pripremanje 3-jodo-5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0719]
[0720] NIS (0.559 g, 2.48 mmol) dodaje se u 5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a] piridin (0.27 g, 1.77 mmol) u acetonitrilu (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Reakciona smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom, a dobijeni ostatak je razblažen sa EtOAc (25 mL). Dobijena smeša je uzastopno isprana vodom (25 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (25 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 30% EtOAc u petroleum etru. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 3-jodo-5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin (0.40 g, 81%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 21°C) 1.78 -1.99 (1H, m), 2.02 -2.23 (1H, m), 2.53 -2.60 (2H, m), 3.34 (3H, s), 3.82 -3.96 (1H, m), 4.07 -4.26 (2H, m), 7.48 (1H, s).
Pripremanje 6-metoksi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina
[0721]
[0722] n-BuLi (0.805 mL, 2.01 mmol) je dodat u 3-jodo-6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridinu (0.4 g, 1.44 mmol), 2-izopropoksi-4,45,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolanu (0.401 g, 2.16 mmol) i TMEDA (0.30 mL, 2.0 mmol) u THF (20 mL) ohlađen do -78°C pod azotom. Dobijena smeša je održavana na -78 °C 1 h. Reakciona smeša je zatim ugašena zasićenim vodenim amonijum hloridom (200 mL), ekstrahovana sa EtOAc (3 x 150 mL), organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 6-metoksi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin (0.400 g, 100%) kao bezbojni guma, kontaminirana sa 14 wt.% des-jodo početnog materijala (NMR analiza). Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0723]
22
[0724] Druga generacija XPhos prekatalizatora (0.049 g, 0.06 mmol) je dodata 6-metoksi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (0.387 g, 1.25 mmol), tert-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.3 g, 0.63 mmol; pripremljena prema Primeru 10) i cezijum karbonat (0.611 g, 1.88 mmol) u dioksanu (10 mL) i vodi (1 mL) pod azotom. Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 1 sata, a reakciona smeša je zatim ohlađena i razblažena sa EtOAc (200 mL). Dobijena smeša je uzastopno isprana vodom (200 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (200 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen blic hromatografijom sa silika gelom, gradijent eluiranja 0 do 60% EtOAc u petroleum etru. Čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0,14 g, 44%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 504.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0725]
[0726] TFA (4 mL, 51.92 mmol) je dodat terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamatu (0.14 g, 0.28 mmol) u DCM (10 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi (1S,3R)-3amino-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao sol di-trifluorosirćetne kiseline (0.15 g, 98%) i žuta guma. m/z: ES+[M+H]+ 404.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0727]
[0728] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.023 mL, 0.25 mmol) u (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (sol di-trifluorosirćetne kiseline; 0.15 g, 0.25 mmol) i TEA (0.17 mL, 1.2 mmol) u DCM (5 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 16 h.
Reakcija je zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom, i sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC (XBridge Prep C18 OBD kolona, prečnika 21.2 mm, dužine 250 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 0.1% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.100 g, 91%; smeša primera 70 i 71) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 446.
Primer 72 i Primer 73: Pripremanje izomera 1 i izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0729]
22
[0730] (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (120 mg, 0.270 mmol; pripremljene prema procedurama iz Primera 70 i 71 zamenjujući 5-bromopirazolo[l,5-a]piridin za 6-bromopirazolo[l,5-a]piridin) rastavljen je pomoću preparativnih HPLC uslova (Chiralpak ID kolona, 5 µm, 20 mm prečnik, 250 mm dužina, 25 °C temperatura kolone, 15 mL/min brzina protoka), eluiranje sa izokratnim 50% etanolom u heksanu tokom 31 minuta da bi se dobilo brže eluiranje (16.0 min) Izomera 1(1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.040 g, 33.3 %) i sporo eluirajući (24.8 min) izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (0.040 g, 33.3 %) kao bele čvrste supstance.
Primer 72, Izomer 1:
[0731]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) δ 1.03 -1.14 (1H, m), 1.19 -1.35 (3H, m), 1.65 -1.84 (6H, m), 1.84 -1.94 (1H, m), 2.16 -2.25 (2H, m), 2.56 -2.66 (1H, m), 2.83 -2.94 (1H, m), 2.97 -3.08 (1H, m), 3.29 (3H, s), 3.50 -3.63 (1H, m), 3.82 -3.91 (1H, m), 4.06 -4.24 (2H, m), 7.77 (1H, s), 7.80 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Primer 73, Izomer 2:
[0732]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 19 °C) δ 1.00 -1.14 (1H, m), 1.19 -1.35 (3H, m), 1.72 -1.81 (6H, m), 1.84 -1.92 (1H, m), 2.16 -2.25 (2H, m), 2.56 -2.66 (1H, m), 2.83 -2.93 (1H, m), 3.03 (1H, m), 3.29 (3H, s), 3.48 -3.62 (1H, m), 3.82 -3.91 (1H, m), 4.06 -4.24 (2H, m), 7.77 (1H, s), 7.80 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Analitički SFC uslovi:
22
Primer 74: Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]piridin-3-il)azepin-2-il)cikloheksankarboksamid;
[0733]
[0734] Dodat je anhidrid sirćetne kiseline (0.11 mL, 1.1 mmol) u mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (350 mg, 0.94 mmol), trietilamin (0.28 mL, 2.0 mmol) i DCM (10 mL). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 4 h. Silicijum dioksid je dodat i dobijena smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni adsorbovani ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0.5% metanolom u etil acetatu, da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro)-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (200 mg, 51%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.03 -1.07 (1H, m), 1.30 (3H, m), 1.57 -1.96 (13H, m), 2.56 -2.62 (1H, m), 2.68 -2.93(2H, m), 3.47 -3.66 (1H, m), 4.19 -4.4
22
(2H, m), 7.49 (1H, d), 7.73 (1H, d), 8.09 (1H, d), 8.32 (1H, d), 10.48 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 414.
[0735] Procedure za pripremanje početnog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)azepin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisane ispod:
Pripremanje 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina
[0736]
[0737] 2-Hloro-5-fluoro-4-jodopiridin (1.064 g, 4.13 mmol), 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin (1.30 g, 4.96 mmol; pripremljeni u skladu sa primerom 66), druga generacija XPhos prekatalizatora (0.325 g, 0.41 mmol) i dibazni kalijum fosfat (2.16 g, 12.4 mmol) su rastvoreni u degasiranom dioksanu (20 mL) i vodi (1 mL) na 21 °C. Smeša je mešana na 90 °C 24 h. i zatim ohlađena. Smeša je razblažena sa EtOAc (30 mL), isprana vodom (10 mL), i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 50% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su isparene do suvoće sa ciljem da se dobije 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin (0.650 g, 59 %) kao ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.62 -1.94 (6H, m), 2.77 -2.88 (2H, m), 4.29 -4.4 (2H, m), 7.22 (1H, d), 7.50 (1H, d), 8.25 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 266.
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0738]
22
[0739] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0.30 g, 0.26 mmol) je dodat u degasiranu smešu 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepina (0.700 g, 2.63 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-karbamoilcikloheksil)karbamata (0.638 g, 2.63 mmol; pripremljeni prema Primeru 25), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)ksanten (0,305 g, 0.53 mmol) i cezijum karbonat (2,58 g, 7.90 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL). Dobijena smeša se prečisti 5 minuta pod azotom i dobijena suspenzija se podvrgne mikrotalasnim uslovima (120 °C, 17 h). Reakciona smeša je ohlađena i podeljena između vode (20 mL) i etil acetata (100 mL) pre nego što je filtrirana. Slojevi su razdvojeni, a organski sloj koncentrovan pod redukovanim pritiskom, adsorbovan na silika gelu, i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 50% EtOAc u heptanu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio sirovi terc-butil ((1R,3S) 3-((5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.90 g, 72%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 472.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]piridin-3-il)azepin-2-il)cikloheksankarboksamid;
[0740]
[0741] TFA (1 mL) je dodat u rastvor terc-butil ((1R,3S)-3-((5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (600 mg, 1.27 mmol) u DCM (10 mL). Smeša je mešana na r.t.24 h, a zatim je reakcija koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu i eluiranje sa 7N amonijak u metanolu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[l,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (350 mg, 74%) kao bela čvrsta supstanca. m/z: ES+[M+H]+ 372.
Primer 75: Pripremanje (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksankarboksamida
[0742]
22
[0743] Cezijum karbonat (436 mg, 1.34 mmol) druga generacija XPhos prekatalizatora (35 mg, 0.04 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (168 mg, 0.470 mmol; pripremljen prema Primeru 23) i (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (186 mg, 0.45 mmol) u 1,4-dioksana (3.7 mL) i vode (0.7 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Reakcija je mešana na 85 °C tokom 18 h i zatim ohlađena i razblažena sa EtOAc (50 mL). Ova nova smeša je isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc (2 x 50 mL).
Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 10% MeOH u DCM, da bi se dobio (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksankarboksamid (78 mg, 41%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.18 -1.38 (9H, m), 1.46 (1H, q), 1.65 -1.92 (4H, m), 2.32 (3H, s), 2.57 -2.67 (1H, m), 2.85 (2H, s), 3.58 -3.72 (1H, m), 3.78 (1H, d), 3.93 (2H, s), 5.36 (1H, t), 7.54 (1H, d), 7.77 (1H, s), 8.07 (1H, s), 8.13 (1H, 2), 10.27 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 426.
Optičke rotacije:
2
[0744] Postupci su korišćeni za pripremanje polaznog materijala (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid [0745]
[0746] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4M; 2 mL, 8 mmol) je dodat u terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (530 mg, 1.15 mmol; pripremljen prema Primeru 47) u MeOH (11 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Reakcija je mešana 2 h na r.t. i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (550 mg) kao dihidrohloridna so, bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.11 -1.36 (3H, m), 1.49 (1H, q), 1.76 -1.88 (2H, m), 1.88 -1.89 (1H, m) 2.04 (1H, d), 2.30 (3H, s), 2.54 -2.67 (1H, m), 2.94 -3.07 (1H, m), 8.03 (3H, br. s), 8.17 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.58 (1H, br. s). Uočen je jedan HCl ekvivalent, drugi je pretpostavljen da je zakopan pod širokim HOD maksimumom na 5.9 ppm. m/z: ES+[M+H]+ 360.
Pripremanje (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0747]
[0748] HATU (328 mg, 0.86 mmol) je dodat u smešu (1S,3R)-3-amino-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorida (228 mg, 0.53 mmol), 2-hidroksi
2 1
sirćetna kiselina (66 mg, 0.86 mmol), TEA (0.24 mL, 1.7 mmol), DMF (2.8 mL) i DCM (2.8 mL). Reakcija je mešana na r.t. u atmosferi azota tokom 5 h i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je stavljen u DCM i ispran vodom (4 x 25 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan sa silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0 do 10% metanola u DCM, da bi se dobio (1S,3R)-3-(2-hidroksiacetamido)-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (186 mg, 52%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.17 -1.34 (3H, m) 1.43 (1H, q) 1.60 -1.91 (4H, m) 2.28 (3H, s), 2.54 -2.69 (1H, m), 3.56 -3.72 (1H, m), 3.78 (2H, d), 5.36 (1H, t) 7.55 (1H, d) 8.16 (1H, s) 8.61 (1H, s) 10.45 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 418.
Primer 76: Pripremanje N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikcloheksil)oksetan-3-karboksamida [0749]
[0750] Cezijum karbonat (247 mg, 0.76 mmol) druga generacija XPhos prekatalizatora (20 mg, 0.03 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (90 mg, 0.25 mmol; pripremljene prema Primeru 23) i N-((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il) karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (112 mg, 0.25 mmol) u 1,4-dioksan (2.1 mL) i voda (0.4 mL). Reakcija se 18 h meša na 85 °C, ohladi na sobnu temperaturu i zatim razblaži sa EtOAc (50 mL). Smeša je isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc (2 x 50 mL), i kombinovani organski slojevi su sušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 10% MeOH u DCM, da bi se dobila beličasta čvrsta supstanca (72 mg). Ovaj materijal je ponovo prečišćen fleš hromatografijom na silicijum dioksidu, 0 do 10% metanola u DCM, da bi se dobio N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid
2 2
(50 mg, 44%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.00 -1.17 (1H, m), 1.21 -1.37 (9H, m) 1.68 -1.84 (3H, m), 1.89 (1H, br d), 2.33 (3H, s), 2.55 -2.67 (1H, m), 2.84 (2H, s), 3.53 -3.74 (2H, m), 3.93 (2H, s), 4.54 -4.65 (4H, m), 7.73 -7.84 (2H, m), 8.07 (1H, s), 8.14 (1H, s), 10.28 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 452.
Optičke rotacije:
[0751] Postupci za pripremu polaznog materijala N-((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje N-((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida
[0752]
[0753] HATU (219 mg, 0.58 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(4-jodo-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamid dihidrohlorida (228 mg, 0.53 mmol; dobijene prema Primeru 75), oksetan-3-karboksilna kiselina (59 mg, 0.58 mmol), TEA (0.24 mL, 1.7 mmol), DCM (2.8 mL) i DMF (2.8 mL) da bi se dobio bezbojni rastvor. Reakcija je tokom vremena postala žuta; posle 4 h na sobnoj temperaturi, reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i zatim razblažena sa DCM. Smeša je isprana vodom (3 x 50 mL), osušena iznad natrijum sulfata, filtrirana, koncentrovana pod redukovanim pritiskom.
2
Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom na koloni, eluiranjem sa 0 do 10% MeOH i DCM da se dobije N-((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamid (112 mg, 47%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.99 -1.17 (1H, m), 1.20 -1.37 (3H, m), 1.70 -1.83 (3H, m), 1.84 -1.94 (1H, m), 2.29 (3H, s), 2.54 -2.64 (1H, m), 3.55 -3.73 (2H, m), 4.54 -4.64 (4H, m), 7.81 (1H, d), 8.16 (1H, s), 8.61 (1H, s), 10.45 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 444.
Primer 77: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid:
[0754]
[0755] U mešani rastvor (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2 -il)cikloheksankarboksamid (150 mg, 0.42 mmol), trietilamin (0.12 mL, 0.89 mmol) u DCM (10 mL) je dodat anhidrid sirćetne kiseline (0.048 mL, 0.51 mmol). Reakciona smeša je mešana na r.t. u trajanju od 4 h. Dodat je silicijum dioksid i isparljive komponente su uklonjene pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 0.5% metanolom u etil acetatu da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (140 mg, 83%) kao beličasta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.04 -1.11 (1H, m), 1.22 -1.35 (3H, m), 1.7 -1.94 (9H, m), 1.99 -2.08 (2H, m), 2.23 (3H, s), 2.55 -2.63 (1H, m), 2.75 (2H, t), 3.51 -3.61 (1H, m), 4.13 (2H, t), 7.62 (1H, s), 7.72 (1H, d), 7.96 (1H, s), 8.16 (1H, s), 10.27 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 396.
[0756] Procedure za pripremanje početnog materijala (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisane ispod:
Pripremanje terc-butil ((1R,3S)-3-((5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0757]
2 4
[0758] Druga generacija XPhos prekatalizatora (86 mg, 0.11 mmol) je dodata u degasiranu smešu 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-4,5,6, 7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridina (324 mg, 1,31 mmol), terc-butil ((1R,3S)-3-((4-jodo-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (500 mg, 1.09 mmol, pripremljen prema Primeru 47, Međujedinjenja) i kalijum fosfat, tribazični, (569 mg, 3.27 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i vodi (1 mL). Smeša je degasirana i mešana na 85 °C 24 h pod azotom. Reakciona smeša se ohladi i dodaje se silicijum dioksid. Smeša je koncentrovana pod redukovanim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem sa 60% etil acetata u heptanu, da bi se dobio terc-butil ((1R,3S)-3-((5-metil-4 -(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (220 mg, 45%) kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO, 30 °C) 1.05-1.14 (1H, m), 1.21 -1.31 (3H, m), 1.38 (9H, s), 1.69 -1.94 (7H, m), 1.96 -2.08 (2H, m), 2.23 (3H, s), 2.54 -2.61 (1H, m), 2.75 (2H, t), 4.13 (2H, t), 6.75 (1H, br d), 7.62 (1H, s), 7.96 (1H, s), 8.16 (1H, s), 10.25 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 454.
Pripremanje (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0759]
[0760] TFA (1 mL) je dodat terc-butil ((1R,3S)-3-((5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamatu (200 mg, 0.44 mmol) u DCM (10 mL). Smeša je mešana na r.t.24 h, i isparljive materije su uklonjene pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu i eluiranje sa 7N amonijak u metanolu. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod
2
redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-amino-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[l,5-a]piridin-3-il )piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (150 mg, 96%) kao bela čvrsta supstanca. Ovaj materijal je upotrebljen direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja m/z: ES+[M+H]+ 354.
Primer 78: (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid:
[0761]
[0762] Piridin sumpor trioksid (40 mg, 0.25 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida (100 mg, 0.23 mmol, pripremljen u Primeru 78a) u 2:1 DCM:DMSO (4 mL) na 0 °C. Posle 2 h na 0 °C, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom sa silika gelom, eluira gradijent 0 do 15% MeOH u DCM koji sadrži 0.2% trietilamina, dajući belu čvrstu supstancu. Ova čvrsta supstanca je zdrobljena sa 10% DCM u heksanima da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (74 mg, 74%) kao čvrsta supstanca bela čvrsta pena.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.98 -1.11 (1H, m), 1.18 -1.41 (3H, m), 1.70 -1.81 (6H, m), 1.85 -2.18 (4H, m), 2.56 -2.66 (1H, m), 2.67 -2.91 (2H, m), 3.49 -3.67 (1H, m), 4.23 -4.40 (1H, m), 5.54 -5.73 (1H, m), 6.87 (1H, d), 7.75 (1H, d), 7.81 (1H, s), 8.15 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.59 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 432.
Primer 78a: Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida
[0763]
2
[0764] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2.2 mL, 8.8 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4 -((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (300 mg, 0.44 mmol) u metanolu (3 mL). Reakcija je mešana 2 h na r.t. i zatim koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je razblažen sa vodom (40 mL) i bazifikovan sa natrijum bikarbonatom. Smeša je zatim zasićena sa natrijum hloridom i ekstrahovana etil acetatom (5x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 30% metanola u DCM, da bi se dobio sirovi (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid (163 mg, 83%) kao guma.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.02 -1.23 (1H, m), 1.24 -1.47 (5H, m), 1.52 -1.66 (2H, m), 1.75 -1.88 (6H, m), 1.88 -1.97 (1H, m), 2.59 -2.76 (3H, m), 3.35 -3.43 (2H, m), 3.54 -3.68 (1H, m), 4.25 -4.39 (1H, m), 7.66 (0.6H, s), 7.79 (1H, d), 7.92-8.02 (0.4H, m), 8.12-8.21 (1H, m), 8.43 (1H, s), 10.62 (1H, s), 12.91 (0.4H, br s), 12.98 (0.6H, br s)-2:3 odnos pirazol tautomera. m/z: ES+[M+H]+ 434.
[0765] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4 -((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid korišćen kao početni materijal je pripremljen kao što sledi:
Pripremanje 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0766]
[0767] NaH (60% wt u mineralnom ulju; 1.85 g, 46.3 mmol) u porcijama se dodaje 1H-pirazol (3.0 g, 44.1 mmol) u THF (30 mL) na 5 °C tokom perioda od 10 minuta pod azotom.
2
Dobijena smeša je mešana na 5 °C 30 minuta. Zatim je u reakciju dodat kap po kap SEM-Cl (8.2 mL, 46 mmol). Dobijena smeša je mešana na 5 °C 1 h. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom (50 mL) i isprana sekvencijalno sa Et2O (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (6.5 g, 78%) kao slabo žuto ulje.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (s, 9 H), 0.79 -0.95 (2H, m), 3.48 -3.62 (2H, m), 5.45 (2H, s), 6.36 (1H, t), 7.56 (1H, d), 7.91 (1H, d).
Pripremanje 5-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0768]
[0769] Litijum magnezijum 2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-ide dihlorid (25.2 mL, 27.7 mmol) je dodavan u kapima u 1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (5 g, 25 mmol) u THF (30 mL) na 21 °C pod azotom. Dobijena suspenzija je mešana na 21 °C 1 h. Posle 1.5 h reakcija je ohlađena do 0 °C, a zatim je dodat 1,2-dibromo-1,1,2,2-tetrakloroetan (8.21 g, 25.2 mmol). Ledena kupka je uklonjena i smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature; posle 18 h, reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 40% etil acetata u heksanima, da bi se dobio 5-bromo-l-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (4.2 g, 60%) kao smeđe ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.88 -0.96 (2H, m), 3.61 (2H, t), 5.49 (2H, s), 6.58 (1H, d), 7.67 (1H, d).
Pripremanje 5-(pent-4-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0770]
2
[0771] RuPhos prekatalizator treće generacije (0.247 g, 0.30 mmol) je dodat u degasiranu smešu 5-bromo-l-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (4.1 g, 15 mmol), pent-4 en-lilboronske kiseline (2.19 g, 19.2 mmol) i cezijum karbonata (9.64 g, 29.6 mmol) u 1,4-dioksanu (120 mL), i reakcija je mešana na 90 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je ohlađena na s.t. i zatim razblažiti vodom. Dodaje se vodeni natrijum bikarbonat i dobijena smeša se ekstrahuje sa etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 50% etil acetata u heksanima, da bi se dobio 5-(pent-4-en-1-il)-l-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (2.2 g, 55%) kao svetlo žuto ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.75 -0.93 (2H, m), 1.66 -1.88 (2H, m), 2.15 (2H, q), 2.61 -2.85 (2H, m), 3.44 -3.61 (2H, m), 4.92 -5.22 (2H, m), 5.43 (2H, s), 5.89 (1H, ddt), 6.18 (1H, d), 7.42 (1H, d).
Pripremanje 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butanala
[0772]
[0773] 5-(Pent-4-en-1-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (2.14 g, 8.03 mmol) je rastvoren u DCM (40 mL) i ohlađen do -78 °C. Ozon je propuštan kroz rastvor 12 minuta. Reakcija je zatim očišćena od ozona pomoću struje azota, i dodat je trifenilfosfin (2.11 g, 8.03 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. i održava se pod ovim uslovima 18 h pre nego što se koncentriše pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 50% etil acetata u heksanu, da bi se dobio 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butanal (1.34 g, 62%) u obliku ulja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.76 -0.94 (2H, m), 1.81 -2.01 (2H, m), 2.57 -2.60 (2H, m), 2.73 (2H, t), 3.42 -3.64 (2H, m), 5.43 (2H, s), 6.20 (1H, d), 7.43 (1H, d), 9.74 (1H, t).
Pripremanje 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butan-1-ol
[0774]
2
[0775] Natrijum borohidrid (0.372 g, 9.84 mmol) je dodat u mešani rastvor 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butanala (1.32 g, 4.92 mmol) u metanolu (20 mL) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana tokom 1 h pod ovim uslovima. Reakcija je zatim razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni sirovi ostatak je filtriran kroz čep od silicijum dioksida eluiranjem sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobio 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)butan-1-ol (1.1 g, 85%) kao svetlo braon ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.86 (2H, t), 1.43 -1.59 (2H, m), 1.61 -1.79 (2H, m), 2.72 (2H, t), 3.39 -3.64 (4H, m), 4.43 (1H, t), 5.42 (2H, s), 6.16 (1H, d), 7.42 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 271.
Pripremanje 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0776]
[0777] TBS-Cl (0.94 g, 6.2 mmol) je dodat u mešani rastvor 4-(1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-pirazol-5-il)butan-1-ola (1.1 g, 4,1 mmol) i imidazol (0.85 g, 12 mmol) u DCM (20 mL) na 0 °C, i reakcija je mešana na r.t.18 h. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj kao osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 40% etil acetata u heksanu, dajući 5-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (1.5 g, 96%) kao ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.09 (6H, s), 0.81 -0.89 (2H, m), 0.92 (9H, s), 1.49 -1.62 (2H, m), 1.65 -1.80 (2H, m), 2.73 (2H, t), 3.47 -3.61 (2H, m), 3.67 (2H, t), 5.43 (2H, s), 6.15 (1H, d), 7.42 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 385.
24
Pripremanje 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0778]
[0779] NIS (0.89 g, 4.0 mmol) je dodat u mešani rastvor 5-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (1.5 g, 4,0 mmol) u DCM (25 mL) na 0 °C. Ledena kupka je uklonjena i reakcija je mešana 18 h pod ovim uslovima. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 50% etil acetata u heksanu, dajući 5-(4-((tercbutildimetilsilil)oksi)butil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (1.7 g, 85%) kao guma.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (9H, s), 0.07 (6H, s), 0.82 -0.88 (2H, m), 0.91 (9H, s), 1.45 -1.74 (4H, m), 2.75 (2H, t), 3.48 -3.60 (2H, m), 3.64 (2H, t), 5.48 (2H, s), 7.55 (1H, s).
Pripremanje 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0780]
[0781] THF (16 mL) je dodat u 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (800 mg, 1.57 mmol). Reakcija je ohlađena na 0 °C i izopropilmagnezijum hlorid litijum hloridni kompleks u THF (1.3 M; 1.57 mL, 2.04 mmol) dodat je u kapima. Reakcija se održava u ovim uslovima tokom 30 minuta. Zatim je u kapima dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.48 mL, 2.3 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. i zatim mešana pod ovim uslovima 18 h. Reakcija je razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom (2x). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prenesen u sledeći korak bez prečišćavanja.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 0.00 (9H, s), 0.05 (6H, s), 0.83 -0.91 (11H, m), 1.30 (12H, s), 1.45 -1.55 (2H, m), 1.55 -1.69 (2H, m), 2.89 (2H, t), 3.48 -3.69 (4H, m), 5.44 (2H, s), 7.54 (1H, s).
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida [0782]
[0783] Druga generacija XPhos prekatalizatora (28 mg, 0.04 mmol) je dodata u degasiranu smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamida (300 mg, 0.71 mmol) ; pripremljene prema Primeru 12), 5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (472 mg, 0.92 mmol) i Cs2CO3(695 mg, 2.13 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) i vodi (1 mL).
Reakciona smeša je mešana na 90 °C tokom 3 h i zatim ohlađena i razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (2x) i kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 0 do 10% metanola u DCM, da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)butil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (423 mg, 88%) kao svetlo žuta guma (HPLC čistoća: 91%).<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C)-0.08 (6H, s), -0.05 --0.02 (9H, m), 0.75 -0.79 (9H, m), 0.80 -0.88 (2H, m), 1.04-1.16 (1H, m), 1.20 -1.40 (5H, m), 1.42 -1.62 (2H, m), 1.76 (6H, s), 1.90 (1H, d), 2.54 -2.67 (1H, m), 2.76 (2H, t), 3.40 -3.48 (2H, m), 3.51 -3.62 (3H, m), 5.48 (2H, s), 7.62 (1H, s), 7.74 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.40 (1H, s), 10.62 (1H, s). Multiplet na 1.04-1.16 ppm delimično je zaklonjen nečistoćama pinakola. m/z: ES+[M+H]+ 678.
Primeri 79 i 80: Izomer 1 i izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida [0784]
[0785] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (180 mg, 0.32 mmol) je rastvoren u diastereomerne komponente upotrebom SFC uslova (Kolona: Chiralpak AS, 5 µm, prečnik 21.2 mm, dužina 250 mm, brzina protoka 75 ml/min tokom 8 minuta), eluiranje sa 20% izopropanola u CO2, da se dobije brži eluirajući izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il -5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (49 mg, 27%) kao bistri film i sporije eluirajući izomer 2 koji daje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il -5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (42 mg, 22%) kao bistri film.
[0786] Svakom izomeru je zatim uklonjena zaštita kao što sledi: Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 0.500 mL, 14.40 mmol) je dodavan u kapima rastvoru bilo izomera 1 (49 mg) ili izomera 2 (42 mg) (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((tert-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida u THF (2 mL). Dobijeni bezbojni rastvor je mešan na r.t.18 h i zatim razblažen sa EtOAc (10 mL). Dobijena smeša je isprana zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod redukovanim pritiskom, i dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu pre nego što je prečišćen fleš hromatografijom
24
sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 10% metanola u DCM, da bi se dobio ili izomer 1 (26 mg, 67%) ili izomer 2 (16 mg, 48%) (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid kao bela čvrsta supstanca.
Primer 79, Izomer 1:
[0787]<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.01 -1.20 (7H, m), 1.20 -1.34 (3H, m), 1.67 -1.85 (6H, m), 1.90 (1H, d), 2.58 -2.66 (1H, m), 3.51 -3.63 (1H, m), 3.88 (1H, d), 4.00 (1H, d), 4.68 (1H, d), 5.53 (1H, d) 7.75 (1H, d), 7.93 (1H, s), 8.37 (2H, d), 10.52 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 446.
Primer 80, Izomer 2:
[0788]<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 1.16 (7H, m), 1.22 -1.38 (3H, m), 1.72 -1.83 (6H, m), 1.89 (1H, br d), 2.56 -2.68 (1H, m), 3.47 -3.66 (1H, m), 3.88 (1H, d), 4.00 (1H, d), 4.68 (1H, d) 5.53 (1H, d) 7.75 (1H, br d), 7.93 (1H, s), 8.37 (2H, s), 10.52 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Analitički SFC uslovi:
[0789] Postupci koji se koriste za pripremu polaznog materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 5,5-dimetil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ol
[0790]
[0791] NaBH4(202 mg, 5.33 mmol) dodaje se u rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazol-4-ona (400 mg, 2.66 mmol; pripremljen prema Primeru 14) u MeOH (12 mL) da bi se dobila bela smeša. Reakcija je mešana pod ovim uslovima 1 h i zatim je ugašena vodom. Dobijena smeša je ekstrahovana sa DCM (25 mL) i zatim dalje ekstrahovana sa 25% IPA u hloroformu (50 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani pod redukovanim pritiskom (405 mg, kvantitativno) da bi se dobilo bistro ulje.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.11 (6H, s), 3.75 (1H, d), 3.91 (1H, d), 4.48 (1H, d), 5.49 (1H, d), 6.11 (1H, d), 7.42 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 153.
Pripremanje 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0792]
[0793] TBS-Cl (501 mg, 3.33 mmol) je dodat u rastvor 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-4-ola (405 mg, 2.66 mmol). imidazol (362 mg, 5.32 mmol) i DCM (12 mL) da bi se dobila bela suspenzija. Reakcija je mešana na r.t.18 h, a zatim razblažen sa DCM (100 mL) i ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom pre nego što je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 10% MeOH u DCM da se dobije 4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (391 mg, 55%) kao bistro ulje. m/z: ES+[M+H]+ 267.
24
Pripremanje 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-jodo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0794]
[0795] NIS (330 mg, 1.47 mmol) je dodat u rastvor 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (391 mg, 1.47 mmol) u DCM (3 mL) da se dobije crveni rastvor. Reakcija je mešana na r.t. pod azotom tokom 18 h. Reakcija je zatim razblažena sa DCM (50 mL) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 10% metanola u DCM, da bi se dobio 4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-3-jodo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H -pirolo[1,2-b]pirazol (350 mg, 61%) kao crvena pena<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.19 (3H, s), 0.23 (3H, s) 0.87 (9H, s) 1.03 (3H, s) 1.12 (3H, s) 3.81 (1H, d) 3.96 (1H, d) 4.52 -4.63(1H, s) 7.47 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 393.
Pripremanje 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola
[0796]
[0797] Kompleks litijum hlorida izopropilmagnezijum hlorida u THF (1.3 M; 0.89 mL, 1.2 mmol) je dodavan u kapima rastvoru 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3-jodo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (350 mg, 0.89 mmol) u THF (2.2 mL) na 0 °C. Zatim je u kapima dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (0.273 mL, 1.34 mmol). Reakcija je ostavljena da se zagreje na r.t. i održava se pod ovim uslovima 18 h. Reakcija je zatim razblažena sa EtOAc (25 mL) i isprana zasićenim vodenim amonijum hloridom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen iznad natrijum
24
sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 4-((tercbutildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (290 mg, 83%) kao čvrsta penasta supstanca žute boje.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (3H, s), 0.19 (3H, s), 0.81 (9H, s), 0.92 (3H, s), 1.17 (3H, s), 1.22 (6H, s), 1.24 (6H, s), 3.70 (1H, d), 3.91 (1H, d), 4.47 (1H, s), 7.55 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 393.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida [0798]
[0799] Cezijum karbonat (641 mg, 1.97 mmol) i druga generacija XPhos prekatalizatora (52 mg, 0.07 mmol) su dodati u degasiranu smešu 4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (270 mg, 0,69 mmol) i (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (276 mg, 0.66 mmol; pripremljene prema Primeru 12) u 1,4-dioksanu (5.4 mL) i vodi (1.1 mL). Reakcija je zatim zagrejana do 85 °C i održavana pod ovim uslovima 18 h pre nego što je razblažena sa EtOAc, isprana vodom, slanim rastvorom i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 10% MeOH u DCM da se dobije (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4-((terc-butildimetilsilil)oksi)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (180 mg, 49%) kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C)-0.38 (3H, d), 0.00 (3H, s), 0.71 (9H, s), 1.03 -1.47 (10H, m), 1.76 -2.01 (7H, m), 2.61 -2.75 (1H, m), 3.51-3.72 (1H, m), 3.96 (1H, d), 4.06 (1H, d), 4.87 (1H, s), 7.79 -7.87 (2H, m), 8.32 (1H, s), 8.46 (1H, s), 10.67 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 560.
Primer 81: (1R,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0800]
24
[0801] Cezijum karbonat (482 mg, 1.48 mmol) druga generacija XPhos prekatalizatora (15 mg, 0.02 mmol) je dodata u degasiranu smešu 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (142 mg, 0.54 mmol; pripremljeni prema Primeru 23), (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (200 mg, 0.49 mmol), dioksan (4.1 mL) i voda (0.8 mL). Reakcija je održavana na 95 °C; posle 4 h, dodatni 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (100 mg) je dodat. Reakcija je održavana pod ovim uslovima još 18 h, ohlađena i zatim razblažena sa EtOAc (150 mL) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 100% etil acetata u heksanu, a zatim 0 do 10% MeOH u EtOAc, da bi se dobila bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 0.98 -1.19 (1H, t), 1.19 -1.41 (9H, m), 1.73 -1.83 (6H, m), 1.90 (1H, br d), 2.56 -2.69 (1H, m), 2.93 (3H, s), 3.50 -3.64 (1H, m), 3.94 (2H, s), 7.75 (1H, d), 7.88 (1H, d), 8.28 (1H, d)), 8.30 (1H, d), 10.46 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 414.
Optičke rotacije:
24
[0802] Postupci su korišćeni za pripremanje polaznog materijala (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamida su opisani u nastavku:
Pripremanje terc-butil ((1S,3R)-3-((5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0803]
[0804] 1-Hloro-N,N,2-trimetilprop-l-en-1-amin (489 mL, 3.70 mmol) je dodat u kapima u rastvor (1R,3S)-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (660 mg, 2.7 mmol; pripremljen prema Primeru 25 zamenom (1R,3S)-benzil 3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilata za (1S,3R)-benzil 3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilat) u DCM (6.3 mL). Posle 1 h, rastvor 5-fluoro-4-jodopiridin-2-amina (587 mg, 2.47 mmol; pripremljena prema Primeru 54) i piridina (400 mL, 4.9 mmol) u DCM (6 mL) je dodat. Posle 18 h, reakcija je razblažena sa DCM (200 mL) i isprana vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 10% metanola u DCM, da se dobije terc-butil ((1S,3R)-3-((5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (1,10 g, 96%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.02 -1.18 (1H, m), 1.19 -1.35 (3H, m), 1.38 (10H, s), 1.62 -1.81 (3H, m), 1.82 -1.94 (1H, m), 2.56 -2.71 (1H, m), 3.48 -3.59 (1H, m), 6.78 (1H, d), 8.25 (1H, s), 8.60 (1H, d), 10.59 (1H, s). m/z: ES+[M+Na]+ 486.
Pripremanje (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluoro -4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid
[0805]
24
[0806] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M; 2.7 mL, 11 mmol) je dodat u rastvor tercbutil ((1S,3R)-3-((5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil karbamata (500 mg, 1.08 mmol) u metanolu (8.97 mL) na r.t. Posle mešanja pod ovim uslovima tokom 19 h, reakcija je koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Trietilamin (750 µL, 5.4 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (200 µL, 2.2 mmol) se dodaju u dobijeni ostatak. Reakcija je mešana pod ovim uslovima 1 sat i zatim razblažena sa DCM (100 mL). Dobijena smeša je isprana sa IN vodenom HCl, vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je adsorbovan na silika gelu i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluirani gradijent 0 do 100% etil acetat u heksanu, a zatim 0 do 10% metanol u etil acetatu, da bi se dobio (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksankarboksamid (200 mg, 46%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 27 °C) 1.00 -1.17 (1H, m), 1.20 -1.40 (3H, m), 1.71 -1.82 (6H, m), 1.83 -1.92 (1H, m) 2.54 -2.64 (1H, m) 3.48 -3.58 (1H, m) 7.76 (1H, d) 8.25 (1H, s) 8.61 (1H, d) 10.61 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 406.
Primer 82a: Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0807]
[0808] Hlorovodonična kiselina u dioksanu (4 M, 0.27 mL, 1.09 mmol) je dodata u rastvor koji sadrži odnos 7:3 neidentifikovanih pirazol izomera (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((terc-butildimetilsilil) oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.75 g, 1.1 mmol) u metanolu (2 mL). Posle 4 h reakcija se čuva u zamrzivaču 6 dana, a zatim koncentruje pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je bazifikovan zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (x2). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti fleš
2
hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 40% metanola u etil acetatu, dajući (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.48 g, 98%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.49-0.66 (m, 6H), 0.97-1.13 (1H, m), 1.27 (3H, d), 1.71 -1.83 (6H, m), 1.89 (1H, d), 2.54 -2.70 (3H, m), 2.93-3.06 (2H, m), 3.45 -3.66 (1H, m), 4.34 (0.3H, br s), 4.45 -4.64 (0.7H, m), 7.54 (0.7H, br s), 7.74 (1H, d), 7.87 (0.3H, br s), 8.08 (1H, s), 8.39 (1H, s), 10.55 (1H, s), 12.77 (0.7H, br s), 12.89 (0.3H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 448.
Optičke rotacije:
[0809] Postupci za pripremu početne mešavine materijala (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((terc-butildimetilsilil) oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid kao što je opisano ispod:
Pripremanje etil 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilata
[0810]
2 1
[0811] Natrijum hidrid (60 wt% u mineralnom ulju; 3.14 g, 78.5 mmol) se doda u rastvor etil 1H-pirazol-3-karboksilata (10 g, 71.4 mmol), benzil bromida (12.7 mL, 107 mmol) i DMF (100 mL) na 0 °C u porcijama iznad 3 minuta uz snažno mešanje. Smeša se ostavi da se zagreje na r.t. tokom 18 h i zatim razblažena sa etil acetatom. Dobijena smeša je isprana vodom (x3) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni, eluiranjem gradijentom od 0 do 50% etil acetata u heksanima, da bi se dobio etil 1-benzil-lH-pirazol-3-karboksilat (11.3 g, 69%) kao sporije eluirajuće ulje boje ćilibara. Takođe je izolovan etil l-benzil-lH-pirazol-5-karboksilat (2.69 g, 16.4%) kao ulje boje svetlog ćilibara.
[0812] Etil 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilat:
<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 1.28 (3H, t), 4.25 (2H, q), 5.43 (2H, s), 6.77 (1H, d), 7.23 -7.42 (5H, m), 7.97 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 231.
Pripremanje 1-benzil-1H-pirazol-3-karboksilne kiseline
[0813]
[0814] Dodat je litijum hidroksid (1.3 g, 56 mmol) u rastvor etil l-benzil-lH-pirazol-3-karboksilata (11.3 g, 49.1 mmol) u tetrahidrofuranu (55 mL), vodi (19 mL) i metanolu (19 mL). Posle mešanja pod ovim uslovima tokom 1.5 h, reakcija je sipana u etil acetat i ugašena vodenom hlorovodoničnom kiselinom (IN; 57 mL, 57 mmol). Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobila uljasta bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca je stavljena u minimalni DCM i zatim razblažena sa 50% etra u heksanima. Nakon snažnog mešanja tokom 15 minuta, smeša je filtrirana da bi se dobila l-benzil-lH-pirazol-3-karboksilna kiselina (3.78 g, 38%) kao bela kristalna čvrsta supstanca.
[0815] Dodatni vodeni rastvor hlorovodonične kiseline (IN) je dodat u kombinovane vodene slojeve sve dok smeša nije bila na pH 5. Zatim su kombinovani vodeni slojevi ekstrahovani etil acetatom (x3), a kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijena čvrsta supstanca je otopljena u
2 2
heksanima i snažno mešana 10 minuta. Nakon filtracije, dobijena kristalna bela čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom da se dobije dodatna l-benzil-lH-pirazol-3-karboksilna kiselina (5.3 g, 53%) kao bela kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 5.40 (2H, s), 6.69 (1H, d), 7.22 -7.41 (5H, m), 7.92 (1H, d), 12.07 -13.22 (1H, br s). m/z:
ES+[M+H]+ 203.
Pripremanje 1-bromo-3-metilbut-2-en litijum hlorida
[0816]
[0817] Prateći procedure Samann & Knochel (Synthesis, 2013, 45, 1870), litijum hlorid (1.78 g, 42.0 mmol) u posudi osušenoj plamenom je sušen pod vakuumom sa toplotnim pištoljem u trajanju od 5 minuta. Posle hlađenja, dodat je cink prah (5.0 g, 77 mmol), a zatim THF (37 mL). Nakon snažnog mešanja tokom 5 minuta, doda se 1,2-dibromoetan (0.19 mL, 2.2 mmol) i zatim TMS-Cl (0.39 mL, 3.1 mmol). Dobijena smeša je ostavljena da se meša na r.t.2 minuta i zatim uronjen u vodenu kupku. Svetlo braon rastvor 1-bromo-3-metilbut-2-en (4 mL, 35 mmol) u THF (37 mL) je dodavan u kapima tokom 30 min, i vodena kupka je uklonjena. Crna smeša je održavana u ovim uslovima tokom 1.5 h i zatim je mešanje zaustavljeno. Smeša je ostavljena da se slegne tokom 18 h i zatim direktno upotrebljena bez daljeg prečišćavanja.
Pripremanje 1-benzil-1H-pirazol-3-karbonil hlorida
[0818]
[0819] Dve kapi DMF se dodaju u smešu l-benzil-lH-pirazol-3-karboksilne kiseline (5.26 g, 26.0 mmol) i oksalil hlorida (3.4 mL, 39 mmol) u DCM (100 mL). Posle 4 h, sada bistri svetložuti rastvor je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, i dobijeno žuto-narandžasto ulje je osušeno pod vakuumom uz zagrevanje (toplotni pištolj) da bi se uklonio višak oksalil hlorida. Sada tamno narandžasto/ćilibar ulje je upotrebljeno direktno bez daljeg prečišćavanja.
Pripremanje 1-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-ona
[0820]
2
[0821] (3-Metilbut-2-en-l-il)cink (II) bromid litijum hlorid (77 mL, 32.5 mmol) u THF (kao što je opisano iznad) dodat je kap po kap u žuti rastvor 1-benzil-1H-pirazol-3-karbonil hlorid (5.74 g, 26.0 mmol) u tetrahidrofuranu (53 mL) na -78 °C. Posle 45 minuta reakcija je ugašena sa 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni, eluiranjem gradijentom od 0 do 50% etil acetata u heksanima, da bi se dobio l-(l-benzil-lH-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-on (5.2 g, 79%) kao bistro ulje boje ćilibara. Nečiste frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom i prečišćene korišćenjem istih uslova da bi se dobio dodatni l-(l-benzil-lH-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-on (0.81 g, 12%) kao ulje boje svetlog ćilibara.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 1.40 (6H, s), 5.02 (1H, dd), 5.07 (1H, dd), 5.43 (2H, s), 6.44 (1H, dd), 6.71 (1H, d), 7.25 -7.40 (5H, m), 7.89 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 255.
Pripremanje 1-benzil-3-(2,2-dimetilbut-3-en-1-il)-1H-pirazola
[0822]
[0823] Hidrazin monohidrat (5.1 mL, 67 mmol) je dodat u rastvor 1-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilbut-3-en-1-ona (3.42 g, 13.45 mmol) i 2,2'-oksibis(etan-1-ol) (35 mL, 369 mmol) na 120 °C. Reakcija je zatim zagrejana do 180 °C i pažljivo je dodata vodena otopina kalijum hidroksida (3.8 ml, 67 mmol) i praćena sa 8 KOH komadića. Posle 1 sata, dodata su još 4 komadića KOH. Reakcija je održavana pod ovim uslovima tokom 2 h i zatim ohlađena do sobne temperature i razblažena sa vodom. Smeša je izvađena sa eterom (x3).
Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni, gradijent eluacije od 0 do 30% etil acetata u heksanima, da bi se dobio 1-benzil-3-(2,2-dimetilbut-3-en-1-il)-1H-pirazol (2.72 g, 84%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.96
2 4
(6H, s), 4.85 (1H, s), 4.88 -4.93 (1H, m), 5.26 (2H, s), 5.83 -5.94 (1H, m), 6.02 (1H, d), 7.12 -7.17 (2H, m), 7.22 -7.35 (3H, m), 7.64 (1H, d).2H multiplet je zakopan pod DMSO signalom. m/z: ES+[M+H]+ 241.
Pripremanje 3-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilpropan-1-ol
[0824]
[0825] Ozon je propuštan kroz rastvor 1-benzil-3-(2,2-dimetilbut-3-en-1-il)-1H-pirazola (2.7 g, 11 mmol) u metanolu (45 mL) na -78 ° C 30 minuta, što je rezultiralo u svetlo žuto-zeleni rastvor. Zatim se doda natrijum borohidrid (1.1 g, 28 mmol) i reakcija se ostavi da se zagreje na r.t. Posle 15 minuta, dodato je još 200 mg natrijum borohidrida i reakcija je održavana pod ovim uslovima još 20 minuta. Zatim je reakcija koncentrovana pod redukovanim pritiskom i ugašena koncentrovanim vodenim rastvorom HCl (4.5 mL). Dobijena bela smeša je razblažena vodom i etil acetatom i bazifikovana sa kalijum karbonatom do pH 8. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa etil acetatom (x3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom, i osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je stavljen u DCM i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 100% etil acetata u heksanima) da bi se dobio 3-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilpropan-1-ol (2.14 g, 78%) kao bistro bezbojno ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.78 (6H, s), 2.42 (2H, s), 3.11 (2H, d), 4.44 (1H, t), 5.26 (2H, s), 6.04 (1H, d), 7.12 -7.19 (2H, m), 7.23 -7.36 (3H, m), 7.65 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 245.
Pripremanje 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-3-il)propan-1-ola
[0826]
[0827] Degasirana smeša 3-(1-benzil-1H-pirazol-3-il)-2,2-dimetilpropan-1-ola (2.10 g, 8.59 mmol), vodena hlorovodonična kiselina (IN; 3.9 mL, 3.9 mmol), i 20 wt% Pd (OH) 2 na ugljeniku (0.151 g, 0.21 mmol) je podvrgnut atmosferi vodonika i zagrejan do 50 °C. Posle 2 h, reakcija je filtrirana dok je još bila topla sa ispiranjem metanolom. Čisti bezbojni filtrat je
2
koncentrovan pod redukovanim pritiskom do svetlo žutog ulja, koje je zatim ponovo koncentrovano iz toluena (x3). Ovo je dalo svetlo žutu gumu (0.45 ekv. HCl soli) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.79 (6H, s), 2.55 (2H, s), 3.11 (2H, s), 6.18 (1H, d), 7.70 (1H, d), 9.63 (1H, br s). OH i HCl signali nisu posmatrani. m/z: ES+[M+H]+ 155.
Pripremanje 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazola
[0828]
[0829] TBS-Cl (50 wt% u toluenu; 4.5 mL, 13 mmol) je dodavan u kapima rastvoru sirovog 2,2-dimetil-3-(1H-pirazol-3-il)propan-l-ola (0.45 molarne HCl soli; 1.47 g, 8.59 mmol) i imidazol (1.75 g, 25.8 mmol) u DCM (81 mL) na r.t. Posle 15 minuta, dodato je još 1 mL TBS-Cl u toluenu. Bela mešavina je održavana pod ovim uslovima tokom 1.5 h i zatim izlivena u zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Organski slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa DCM (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum hloridom, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeno bistro bezbojno ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 60% etil acetata u heksanu, da bi se dobio 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol (2.13 g, 92%) kao bistro, bledo žuto ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.00 (s, 6H), 0.75 (6H, s), 0.86 (9H, s), 3.22 (2H, s), 5.92 (1H, br s), 7.08 -7.67 (1H, m), 12.35 (1H, br s). m/z: ES+[M+H]+ 269.
Pripremanje 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenja i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0830]
2
[0831] Natrijum hidrid (60 wt% u mineralnom ulju; 0.381 g, 9.52 mmol) je dodat u jednom delu rastvoru 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazola (2.13 g, 7.93 mmol) u DMF (11 mL) na 0 °C. Posle 5 minuta, (2-(hlorometoksi)etil)trimetilsilan (SEM-Cl; 1.8 mL, 9.5 mmol) je dodavan u kapima. Posle 10 minuta, dodato je još 100 µL SEM-Cl zajedno sa 20 mg NaH (60 wt.% suspenzije u mineralnom ulju). Posle završnih 15 minuta, reakcija je ugašena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i razblažena etil acetatom. Slojevi su razdvojeni, a organski sloj je ispran sa 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (x2) i zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj se suši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod redukovanim pritiskom do bistrog bezbojnog ulja. Ovo ulje je prečišćeno fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 20% etil acetata u heksanima, da bi se dobila nerazdvojena smeša 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenja i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2.58 g, 81.6%) kao 2:3 odnos neidentifikovanih SEM-zaštićenih izomera i bistrog bezbojnog ulja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C)-0.09 -(-0.05) (9H, m), 0.02 -0.07 (6H, m), 0.77-0.84 (8H, m), 0.89 (9H, s), 2.44 (1.2H, s), 2.65 (0.8H, s), 3.23 (0.8H, m), 3.27 (1.2H, m), 3.48 (2H, t), 5.31 (1.2H, s), 5.40 (0.8H, s), 6.05 (0.6H, d), 6.09 (0.4H, d), 7.40 (0.4H, d), 7.71 (0.6H, d). m/z: ES+[M+H]+ 399
Pripremanje 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenja i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0832]
[0833] PNIS (1.78 g, 7.91 mmol) je dodat u rastvor neidentifikovane 2: 3 smeše 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenje i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (2.58 g, 6.48 mmol) u acetonitrilu (34 mL). Posle 18 h,
2
dodato je još 1.8 g NIS i reakcija je zagrejana do 50 °C. Posle 4 h, dodato je još 400 mg NIS. Posle još 4 h, reakcija je ostavljena da se ohladi na r.t. i održava se pod ovim uslovima 18 h. Reakcija je zatim sipana u 50% zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida i titrirana sa natrijum tiosulfatom sve dok nije nestala sva boja tamnocrvenog ćilibara. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni, uz eluiranje gradijentom od 0 do 15% etil acetata u heksanima, da bi se dobila 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenja i 5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2.93 g, 86%) kao 2:3 smeša neidentifikovanih SEM-zaštićenih izomera i svetlo žutog ulja.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C)-0.09 -(-0.05) (9H, m), 0.02 -0.06 (6H, m), 0.76 -0.92 (17H, m), 2.45 (1.2H, s), 2.71 (0.8H, s), 3.29 -3.32 (0.8H, m), 3.34 -3.37 (1.2H, m), 3.50 (2H, td), 5.33 (1.2H, s), 5.47 (0.8H, s), 7.56 (s, 0.4H), 7.96 (0.6H, s). m/z: ES+[M+H]+ 525.
Pripremanje 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenja i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola
[0834]
[0835] Kompleks litijum hlorida izopropilmagnezijum hlorida u THF (1.3 M; 6.45 mL, 8.39 mmol) je dodavan u kapima u rastvor 2:3 neidentifikovane smeše 3-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol jedinjenje i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-jodo-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-lH-pirazol (2.93 g, 5.59 mmol) u THF (40 mL) na -78 °C. Posle 1 h, u kapima je dodat 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (1.8 mL, 8.9 mmol) i reakcija je ostavljena da se meša u ovim uslovima tokom 2 h. Zatim je reakcija
2
uronjena u ledenu kupku (0 °C). Posle još 2 h, reakcija je sipana u zasićeni vodeni amonijum hlorid. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (3x) i kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do 10% etil acetata u heksanima tokom 20 minuta) da bi se dobila identifikovana smeša 3:23-(3-((tertbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-iyl)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((tert-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (2.37 g, 80%) kao bisto bezbojno ulje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C)-0.09 -(-0.05) (9H, m), 0.01 -0.06 (6H, m), 0.73 -0.84 (8H, m), 0.87 -0.92 (9H, m), 1.24 (12H, s), 2.63 (1.2H, s), 2.85 (0.6H, s), 3.26 (0.8H, s), 3.33 (1.2H, s), 3.50 (2H, t), 5.33 (1.2H, s), 5.43 (8H, s), 7.54 (4H, s), 7.91 (0.6H, s). m/z: ES+[M+H]+ 525.
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((terc-butildimetilsilil) oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0836]
[0837] PdCl2(dppf) (DCM adukt; 0.061 g, 0.07 mmol) i cezijum karbonat (1.45 g, 4.46 mmol) su dodati u degasiranu smešu (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-jodopiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.74 g, 1.49 mmol; pripremljeni prema Primeru 12), 3:2 odnos 3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola i 5-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola (0.813 g, 1.55 mmol), 1,4-dioksana (12 mL) i vode (2.5 mL). Smeša je zagrevana do 93 °C i održavana pod ovim uslovima tokom 18 h. Reakcija je zatim ohlađena,
2
razblažena etil acetatom i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni crno-zeleni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom 50 do 100% etil acetata u heksanu, a zatim 0 do 10% metanola u etil acetatu, da bi se dobio spoj (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(3-(3-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida i (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5-(3-((tercbutildimetilsilil)oksi)-2,2-dimetilpropil)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-4-il)-5-hloropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0.75 g, 73%) u 3:7 odnosu neidentifikovanih SEM-zaštićenih izomera kao svetlo staklo boje ćilibara.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C)-0.06 -0.02 (15H, m), 0.61 (1.7H, s), 0.72 (4.3H, s), 0.81 (6.3H, s), 0.84 -0.93 (4.7H, m), 1.04 -1.22 (1H, m), 1.22 -1.40 (3H, m), 1.71 -1.87 (6H, m), 1.88 -1.98 (1H, m), 2.58 -2.73 (2.4H, m), 2.91 (0.6H, s), 3.12 (0.6H, s), 3.19 (1.4H, s), 3.55 -3.67 (3H, m), 5.46 (1.3H, s), 5.57 (0.7H, s), 7.66 (0.3H, s), 7.78 (1H, d), 8.09 (0.7H, s), 8.12 -8.15 (0.3H, s), 8.15-8.17 (0.7H, s), 8.42-8.44 (0.7H, s), 8.46 (0.3H, s), 10.64 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 692.
Primer 82: Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida [0838]
[0839] Piridin sumpor trioksid (0.30 g, 1.9 mmol) je dodat u rastvor (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida (0.48 g, 1.1 mmol, pripremljen u Primeru 82a) u DCM (6.8 mL) i dimetilsulfoksida (3.4 mL) na 0 °C. Dobijeni rastvor je održavan pod ovim uslovima 15 minuta i zatim izliven u etil acetat i zasićeni vodeni amonijum hlorid. Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran sa 50% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i zatim sa 100% zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Nastali mutni ostatak je stavljen u DCM i prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, eluiranjem gradijentom od 0 do
2
40% metanola u etil acetatu, da bi se dobila čvrsta pena bele boje (460 mg). Ova čvrsta supstanca se dalje prečišćava preparativnom HPLC (kolona Waters XBridge Phenil Prep, 5µ silicijum dioksid, prečnik 19 mm, dužina 100 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 0.2% NH4OH, pH 10) i metanola kao eluente. Frakcije koje sadrže željeno jedinjenje su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (255 mg, 53%) kao čvrsta pena bele boje.<1>H NMR (DMSO-d6, 27 °C) 0.99 -1.16 (4H, m), 1.20 (3H, s), 1.23 -1.40 (3H, m), 1.73 -1.83 (6H, m), 1.89 (1H, d), 2.56 -2.68 (1H, m), 2.75 (1H, d), 2.95 (1H, d), 3.50 -3.63 (1H, m), 5.25 (1H, s), 6.92 (1H, br s), 7.75 (1H, d), 8.04 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.36 (1H, s), 10.56 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 446.
Primeri 83 i 84: Pripremanje (1R,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida i (1S,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida
[0840]
[0841] Trietilamin (0.29 mL, 2.1 mmol) i anhidrid sirćetne kiseline (0.066 mL, 0.70 mmol) su dodati u racemski trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.24 g, 0.64 mmol) u DCM (4 mL). Posle mešanja na r.t.1 sat, smeša je isprana vodom i koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz eluiranje gradijentom od 0 do 10% MeOH u DCM, da bi se dobio racemski trans-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.270 g) kao bezbojno ulje. Racemski materijal je razdvojen preparativnom HPLC (kolona Phenomonek Lux C4, silika-dioksid 20 µm, prečnik 50 mm, dužina 250 mm), korišćenjem smeše heptan/IPA 70/30 kao eluenta na 120 mL/min. Frakcije koje sadrže izomer 1 (brže eluiranje) i izomer 2 (sporije eluiranje) su isparene do suvoće. Izomer 1 (114 mg) je ponovo
2 1
prečišćen preparativnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silicijum dioksid, prečnik 30 mm, dužina 100 mm), koristeći smanjene polarne smeše vode (koje sadrže 1% NH3) i MeCN kao eluente da bi se dobio izomer 1 trans-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.081 g, 31%).
[0842] Izomer 2 trans-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-l-karboksamid (0.090 g, 34%) je izolovan iz prvog hiralnog preparativnog prečišćavanja.
Primer 83, Izomer 1:
[0843]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.29 (6H, s), 1.45 -1.83 (9H, m), 1.86 (3H, s), 2.71 -2.84 (1H, m), 2.94 (2H, s), 3.94 (2H, s), 7.54 (1H, d), 7.89 (1H, d), 8.22 -8.34 (2H, m), 10.30 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 414.
Primer 84, Izomer 2:
[0844]<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30 °C) 1.35 (6H, s), 1.44 -1.92 (7H, m), 1.95 -2.04 (4H, m), 2.54 (1H, s), 3.02 (2H, s), 3.94 (2H, s), 4.17 -4.35 (1H, m), 5.57 (1H, d), 8.01 (1H, d), 8.08 (2H, d), 8.34 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 414.
Analitički hiralni uslovi:
2 2
[0845] Postupci koji se koriste za dobijanje racemskog trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje racemskog trans-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan-1-karboksilna kiselina
[0846]
[0847] Rastvor hidrohlorida racemske trans-3-aminocikloheksankarboksilne kiseline (2.00 g, 11.1 mmol) i N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (7.9 mL, 44 mmol) u 1,4-dioksanu (16 mL) i vodi (16 mL) je ohlađen na 0 °C. Di-terc-butil dikarbonat (2,67 g, 12,25 mmol) je zatim dodavan u porcijama u reakcionu smešu, koja je ostavljena da se zagreje na r.t. nakon što je dodat konačni deo. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0 °C i dodato je 2 M vodene hlorovodonične kiseline da bi se pH podesio na 2. Reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 200 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (100 mL) i osušeni preko Na2SO4. Dobijena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijena bela čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom tokom 18 h da se dobije racemska trans-3-((terc-butoksikarbonil)amino)cikloheksan-l-karboksilna kiselina (2.73 g, 101%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30 °C) 1.25 -1.33 (1H, m), 1.39 (9H, s), 1.45 -1.61 (6H, m), 1.71 -1.81 (1H, m), 2.58 -2.69 (1H, m), 3.55 (1H, br s), 6.71 (1H, br s), 12.03 (1H, br s).
Pripremanje racemskog terc-butil trans-(-3-karbamoilcikloheksil)karbamata [0848]
[0849] CDI (3.14 g, 19.39 mmol) je dodat u rastvor racemske trans-3-((tercbutoksikarbonil)amino)cikloheksankarboksilne kiseline (1.73 g, 7.11 mmol) u DMF (15 mL) na 40 °C. Dobijena smeša je održavana pod ovim uslovima tokom 4 h. Reakciona smeša je zatim ohlađena do 0 °C i dodata je amonijumova so sirćetne kiseline (3.49 g, 45.3 mmol).
2
Reakciona smeša se ostavi da se zagreje na r.t. i meša još 60 h. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu i dobijena smeša je filtrirana. Sakupljeni talog je osušen pod vakuumom da se dobije racemski terc-butil trans-(3-karbamoilcikloheksil)karbamat (0.95 g, 61%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 30°C) 1.45 (9H, s), 1.48 -1.56 (2H, m), 1.62 -1.78 (4H, m), 1.79 -1.92 (2H, m), 2.45 (1H, dt), 3.84 (1H, s), 4.57 (1H, s), 5.35 (1H, br s), 5.66 (1H, br s).
Pripremanje racemski terc-butil (trans-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata
[0850]
[0851] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (0.094 g, 0.08 mmol) je dodat u racemski tercbutil (trans-3-karbamoilcikloheksil)karbamat (0.235 g, 0.97 mmol), 3-(2-hloro-5-fluoropiridin-4-il)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (0.215 g, 0.81 mmol, pripremljen prema Primeru 25), (9,9-dimetil-9H-ksanten-4,5-diil)bis(difenilfosfan) (0.094 g, 0.16 mmol) i cezijum karbonat (0.791 g, 2.43 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL) i vodi (1.2 mL). Dobijena suspenzija je degasirana 10 minuta pod azotom i zatim mešana na 100 °C tokom 48 h. Kombinovane serije u razblažene sa vodom (40 mL) i izvađene sa EtOAc (3 x 20 mL). Kombinovane organske materije su uparene do sirovog materijala. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom sa silika gelom, uz gradijent eluiranja od 0 do 60% etil acetata u heptanu. Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio racemski terc-butil (trans-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat (0.322 g, 84%) kao čvrsta pena bele boje. m/z:
ES+[M+H]+ 472.
Pripremanje racemskog trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid
[0852]
2 4
[0853] Trifluorosirćetna kiselina (2.3 g, 20 mmol) je dodata u rastvor racemskog terc-butil (trans-3 -((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamata (0.322 g, 0.68 mmol) u DCM (10 mL). Posle 15 minuta, reakcija se prečisti jonoizmenjivačkom hromatografijom koristeći SCX kolonu. Željeni proizvod je eluiran iz kolone korišćenjem 1M NH3u MeOH i čiste frakcije su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobio racemski trans-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid (0.237 g, 93%) kao beli suvi film. m/z: ES+[M+H]+ 372.
Primer 85: Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida [0854]
[0855] 5-Hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amin (56.7 g, 215.7 mmol) i piridin (0.073 L, 863 mmol) se dodaju finoj suspenziji (1S,3R)-3-acetamidocikloheksan-1-karboksilne kiseline (49.9 g, 84% w/w, 227 mmol) u EtOAc (1 L) u atmosferi azota. Zatim 1-propanfosfonski anhidrid (T3P,> 50 wt.% U EtOAc; 206 g, 324 mmol) se dodaje polako tokom 1 sata. Posle dodatnih 20 h mešanja, dodata je voda (400 mL) i bifazna smeša je mešana još 10 minuta. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim natrijum karbonatom (300 mL) i vodom (300 mL). Organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom, i dobijena čvrsta supstanca je preuzeta u acetonitril (300 mL) i ponovo koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Ponovo je dodat acetonitril (450 mL) i dobijena suspenzija je zagrejana do 70 °C. Dodati su kristali semena i gusta suspenzija je mešana na 50 °C tokom 3 h. Smeša je zatim ohlađena do 20 °C i održavana pod ovim uslovima tokom 3
2
dana. Suspenzija je filtrirana i izolovani talog je ispran sa acetonitrilom (3 x 100 mL) i zatim osušen pod redukovanim pritiskom na 45 °C. Ovo je dalo (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-l-karboksamid kao beličasta kristalna čvrsta supstanca (83.2 g, 90%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 23 °C) 1.08 -1.23 (1H, m), 1.33 (6H, s), 1.37 -1.57 (3H, m), 1.86 -2.04 (6H, m), 2.26 (1H, d), 2.38 -2.52 (1H, m), 2.95 (2H, s), 3.79 -3.92 (1H, m), 3.94 (2H, s), 5.51 (1H, d), 8.09 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.22 (1H, s), 8.24 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 430. Karakterizacija je u skladu sa Primerom 14.
[0856] Kristali dobijeni iz Primera 85 su analizirani pomoću XRPD, potvrđujući da čvrsta supstanca sadrži isključivo Oblik A, prethodno okarakterisanu u Primeru 14.
[0857] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznih materijala 5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amin i (1S,3R)-3-acetamidocikloheksan-1-karboksilna kiselina opisani su u nastavku:
Pripremanje cis-3-(izopropoksikarbonil)cikloheksanaminijum hlorida
[0858]
[0859] Hlorovodonična kiselina (5 do 6 M u 2-propanolu; 16 mL) se doda suspenziji 3-aminobenzojeve kiseline (10 g, 73 mmol) u 2-propanolu (100 mL). Zatim rodijum (5% na Al2O3; 0.75 g, 0.36 mmol) i smeša je podvrgnuta atmosferi vodonika (8 bara) na 100 °C tokom 3 dana. Dodatna hlorovodonična kiselina (5 do 6 M u 2-propanolu; 5 mL) i smeša je mešana na 70 °C u zatvorenoj čeličnoj posudi još 2 dana. Smeša je zatim filtrirana kroz Celite® koristeći 2-propanol (2 k 10 mL) i ispiranje vodom (2 k 20 mL). Filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca je tretirana sa 2-propanolom (50 mL) i ponovo koncentrovana pod redukovanim pritiskom pre nego što je suspendovana u 100 mL vrućeg (70 °C) izopropil acetata. Smeša je polako ohlađena do 20 °C i zatim mešana dodatnih 15 minuta. Smeša je filtrirana i sakupljena čvrsta supstanca je isprana izopropil acetatom (3 x 30 mL) i osušena pod redukovanim pritiskom da bi se dobio cis-3-(izopropoksikarbonil)cikloheksanaminijum hlorid (7.5 g, 46%)
2
kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, D2O, 23 °C) 1.27 (6H, d), 1.30 -1.57 (4H, m), 1.90 -2.14 (3H, m), 2.28 (1H, d), 2.52 (1H, tt), 3.20 -3.36 (1H, m), 5.01 (1H, hept).
Pripremanje cis-izopropil 3-aminocikloheksankarboksilata
[0860]
[0861] Rastvor natrijum hidroksida (2.72 g, 68.1 mmol) u vodi (20 mL) je polako dodavan u smešu cis-3-(izopropoksikarbonil)cikloheksanaminijum hlorida (14.0 g, 62 mmol) u vodi (50 mL) i-Pr acetatu (150 mL) na 20 °C do dobijanja pH od 10.9. Vodeni sloj je ekstrahovan sa i-Pr acetatom (2 x 50 mL) i sakupljeni organski sloj je koncentrovan pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je ponovo koncentrisan iz izopropil acetata (2 x 20 mL) da se dobije cis-izopropil 3-aminocikloheksankarboksilat kao bezbojno ne-viskozno ulje (11.86 g, 100% prinos).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 0.83 -0.97 (1H, m), 0.82 -1.27 (5H, m), 1.11 (6H, d), 1.67 -1.82 (3H, m), 1.93 -2.02 (1H, m), 2.18 (1H, tt), 2.56 (1H, tt), 4.88 (1H, hept).
Pripremanje (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilata
[0862]
[0863] NOVOZIM 435 (3 g, kupljen od Novozymes A/S Danska (aktivnost 10000 PLU/g)) je dodat u bistri rastvor cis-izopropil 3-aminocikloheksankarboksilata (59.4 g, 298 mmol) u izopropil acetatu (480 mL). Smeša je mešana na 20 °C 12 h i zatim filtrirana. Sakupljeni talog je ispran izopropil acetatom (150 mL), a filtrat je ispran vodenom hlorovodoničnom kiselinom (2 M; 200 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan izopropil acetatom (3 x 150 mL), i kombinovani organski slojevi su ponovo filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom do bele čvrste supstance (43 g). Ova čvrsta supstanca je preuzeta u izopropil acetat (2 x 200 mL) i ponovo koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u izopropil acetatu (400 mL) i ispran zasićenim vodenim natrijum karbonatom (50
2
mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa izopropil acetatom (100 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (50 mL) i koncentrovani pod redukovanim pritiskom do bele čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je preuzeta u izopropil acetat (2 x 100 mL) i ponovo koncentrovana pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je tretiran sa ciklopentilmetiletrom (70 mL) i cikloheksanom (140 mL). Ovo je dalo suspenziju, koja je zagrevana do 70 °C. Dobijen je homogeni rastvor, koji je, nakon hlađenja na 20 °C, postao smeša. Dodati su kristali semena na 50 °C. Dobijena suspenzija je mešana tokom 2 dana, nakon čega je filtrirana i isprana je sa 33% ciklopentilmetil etra u cikloheksanu (2 x 30 mL). Nakon sušenja pod redukovanim pritiskom, (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilat (26.8 g, 40%) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.01 -1.13 (1H, m), 1.20 (6H, d), 1.22 -1.45 (3H, m), 1.77 -1.93 (3H, m), 1.94 (3H, s), 2.12 -2.26 (1H, m), 2.37 (1H, tt), 3.70 -3.91 (1H, m), 4.96 (1H, p), 5.67 (1H, d).
Analitički SFC uslovi:
Vreme zadržavanja:
[0864]
1. 1.9 minuta (1R,3S)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilata
2. 2.7 minuta (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilata
e.e.
99.9% (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilata
Pripremanje (1S,3R)-3-acetamidocikloheksankarboksilične kiseline
2
[0866] Rastvor vodenog natrijum hidroksida (3.8 M; 3.9 mL, 14.8 mmol) je dodato pod atmosferom azota u rastvor (1S,3R)-izopropil 3-acetamidocikloheksankarboksilata (1.71 g, 7.37 mmol) u MeOH (3 mL). Smeša je mešana na 20 °C u trajanju od 1 časa i zatim sa rastvorom vodene hlorovodonične kiseline (3.8 M; 4.5 mL) se dodaje u smešu dok se ne postigne pH 1. Doda se etil acetat (10 mL) i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom (4 x 10 mL). Kombinovane organski slojevi su koncentrovani pod redukovanim pritiskom na 40 °C. Dobijeni ostatak je ponovo koncentrovan iz etil acetata (2 x 10 mL) da bi se dobila (1S,3R)-3-acetamidocikloheksankarboksilna kiselina (1.4 g, 94%; 92 wt%) kontaminirano natrijum hloridom kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD, 20 °C) 1.08 -1.47 (4H, m), 1.78 -1.99 (6H, m), 2.12 (1H, d), 2.3 -2.45 (1H, m), 3.58 -3.74 (1H, m). m/z: ES+[M+H]+ 186.
3-Bromo-5,5-dimetil -5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol
[0867]
[0868] Reaktor je napunjen sa 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[l,2-b]pirazolom (79.5 g, 525 mmol; pripremljene prema Primeru 14) i CH2C2(800 mL) u atmosferi azota. NBS (95.4 g, 533 mmol) je dodat u porcijama tokom 15 minuta. Reakciona temperatura je održavana između 20 i 23 °C tokom dodavanja. Posle 0.5 h mešanja na 20 °C, doda se rastvor vodenog rastvora 8% Na2SO3(250 mL), i bifazna smeša se meša u ovim uslovima 45 minuta.
Organski sloj je ispran zasićenim vodenim natrijum karbonatom (1 x 250 mL, 1 x 200 mL) i vodom (100 mL). Organski sloj je zatim koncentrovan pod redukovanim pritiskom na 30 °C i 400 mbar. Dobijeni ostatak je ponovo koncentrovan iz THF (3 x 100 mL) da bi se dobio 3-bromo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (138 g, 99%; 81 wt.% NMR analizom snage) kao bledo smeđe ulje. Ovaj materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg
2
prečišćavanja<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.29 (6H, s), 2.64 (2H, s), 3.89 (2H, s), 7.41 (1H, s).
Pripremanje 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b][1,2-b]pirazol
[0869]
[0870] Rastvor butil litijuma (2.5 M u heksanima; 0.309 L, 774 mmol) je polako dodavan u rastvor 3-bromo-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazola (137 g, 516 mmol; 81 wt%) i triizopropil borata (0.21 L, 929 mmol) u THF (0.7 L) i toluena (0.7 L) na -70 °C u atmosferi azota u 3 L 3 boci sa grlom opremljenoj sa termometrom. Reakciona temperatura je održavana između 65 do 70 °C tokom dodavanja. Po završetku dodavanja, u toku 10 minuta je dodat rastvor 2,3-dimetilbutan-2,3-diola (91 g, 774 mmol) u toluenu (0.5 L). Smeša je polako ostavljena da dostigne r.t. u ledenom kupatilu i zatim se meša još 18 h. Reakciona smeša je prebačena u reaktor od 5L koji sadrži hladnu 10 °C rastvor zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida (2.5 L). Dvofazna smeša je mešana 15 minuta na 20 °C i organski sloj je ispran vodom (2 x 500 mL) praćeno koncentracijom na 35 °C da bi se dobio 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol kao svetlo žuta čvrsta supstanca (194 g, 92%; 64 wt.% pomoću NMR analize snage). Ovaj materijal je upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.21 (6H, s), 1.26 (12H, s), 2.77 (2H, s), 3.84 (2H, s), 7.74 (1H, s). m/z:
ES+[M+H]+ 263.
Pripremanje 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina
[0871]
[0872] 5-hloro-2-fluoro-4-jodopiridin (90 g, 350 mmol) rastvoren u NMP (200 mL) je dodat u 10 °C rastvor koncentrovanog vodenog amonijum hidroksida (aq.26%; 298 g, 4.54 mol).
2
Reakciona temperatura je održavana ispod 10 °C tokom dodavanja. Posuda je zapečaćena i zatim zagrejana do 100 °C. Posle 18 h, smeša je ohlađena na r.t., nakon čega je dobijena suspenzija. Sirova smeša je kombinovana sa onim dobijenim u malom eksperimentu u istim uslovima počevši od 8 g (31 mmol) 5-hloro-2-fluoro-4-jodopiridina. Dodati su MTBE (500 mL) i voda (200 mL). Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa MTBE (2 x 250 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (100 mL) i zatim koncentrovani pod redukovanim pritiskom do bež čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je ponovo koncentrovana pod redukovanim pritiskom iz MTBE (2 x 200 mL) da bi se uklonila preostala voda. Zatim je sirova smeša rastvorena u toplom (65 °C) toluenu (400 mL) korišćenjem rotacionog isparivača. Smeša je zatim polako ostavljena da dostigne 45 °C nakon čega su dodata semena kristala. Dobijena suspenzija je polako ostavljena da se ohladi na 10 °C i zatim je mešana dodatnih 18 h pod ovim uslovima. Suspenzija je filtrirana i sakupljena čvrsta supstanca je isprana ledeno hladnim toluenom (2 x 70 mL). Dobijeno je 5-hloro-4-jodopiridin-2-amin (63.8 g, 65.9%) kao bezbojna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 20 °C) 6.23 (2H, s), 7.04 (1H, s), 7.92 (1H, s).
Pripremanje 5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amina
[0873]
[0874] Kalijum karbonat (81 g, 582.6 mmol) i Pd(dppf)Cl2(3.41 g, 4.66 mmol) su dodavani uzastopno u degasiranu smešu 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina (59.9 g, 233 mmol) i 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (64) wt%; 110 g, 268 mmol) u acetonitrilu (500 mL) i vodi (500 mL). Bistra bledo crvena bifazna smeša je zagrejana do 50 °C. Posle snažnog mešanja tokom 2 h, dodato je još Pd(dppf)Cl2(1.0 g, 1.4 mmol), i smeša je mešana dodatnih 20 h pod ovim uslovima. Smeša je zatim ohlađena na 20 °C i dodat je etil acetat (450 mL). Slojevi su razdvojeni, a organski sloj je ispran vodom (200 mL). Silicikl Pd-sakupljač (SilaMetS)-tiol, (kat# R51030B; 20 g) je zatim dodato organskom sloju, i smeša je dalje mešana 2 h na 20 °C. Smeša je zatim filtrirana i koncentrovana pod redukovanim pritiskom do smeđe čvrste supstance. Ova čvrsta supstanca je rastvorena u DCM (100 mL), i rastvor je zatim filtriran kroz kratku podlogu od silika gela,
2 1
eluiranjem sa 5% 2-propanolom u CH2Cl2. Frakcije proizvoda su koncentrovane pod redukovanim pritiskom da bi se dobila braon čvrsta supstanca. Dodaje se metilizobutilketon (MIBK, 250 mL) i dobijena suspenzija se zagreva do 70 °C i zatim polako ohladi na 20 °C. Dobijena suspenzija je mešana pod ovim uslovima tokom 18 h i zatim filtrirana isprana sa metil izobutilketonom (5 x 30 mL) da bi se dobio 5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-amin kao bledo roza čvrsta supstanca (50.7 g, 193 mmol).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.28 (6H, s), 2.81 (2H, s), 3.91 (2H, s), 4.56 (2H, br s), 6.41 (1H, s), 7.83 (1H, s), 8.03 (1H, s). m/z: ES+[M+H]+ 263.
Primer 86: Pripremanje (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida [0875]
[0876] 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-amin (31.8 g, 129 mmol) i piridin (43.9) mL, 517 mmol) se dodaju pod atmosferom azota na 20 °C u suspenziju (1S,3R)-3-acetamidocikloheksan-1-karboksilne kiseline (29.9 g, 136 mmol; 84 wt.%, pripremljeno prema primeru 85) u EtOAc (800 mL). T3P (≥50 wt% u EtOAc; 123 g, 194 mmol) se dodaje tokom 40 minuta, a dobijena smeša se meša tokom 21 h pod ovim uslovima. Zatim je dodata voda (400 mL). Dvofazna smeša je mešana 10 minuta i slojevi su odvojeni. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim natrijum karbonatom (300 mL) i vodom (300 mL) pre nego što je filtriran i koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobila tamno braon polučvrsta supstanca. Dodat je acetonitril (250 mL) i smeša je zagrejana do 70 °C nakon čega je dobijen homogeni braon rastvor. Smeša se ostavi da dostigne 60 °C, doda se još acetonitrila (200 mL) i suspenzija se meša još 2 h pod ovim uslovima pre nego što se ostavi da se polako ohladi na 20 °C. Dobijena suspenzija je mešana 3 dana, nakon čega je usledilo filtriranje i ispiranje čvrste supstance sa CH3CN (250 mL). Nakon sušenja pod sniženim pritiskom na 48 ° C tokom 20 h, (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-l-karboksamid (49.2 g, 119 mmol) je dobijen kao beličasta kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.08 -1.23 (1H, m), 1.33 (6H, s), 1.37 -1.58 (3H, m), 1.88 -1.94 (1H, m), 1.96 -2.01
2 2
(5H, m), 2.26 (1H, d), 2.38 -2.42 (1H, m), 3.00 (2H, s), 3.80 -3.91 (1H, m), 3.93 (2H, s), 5.47 (1H, d), 8.00 (1H, d), 8.09 -8.17 (2H, m), 8.31 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 414. U skladu sa karakterizacijom u Primeru 25
[0877] Kristali (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-l-karboksamid dobijen postupkom opisanim u Primeru 86 su analizirani pomoću XRPD. Rezultati su prikazani u tabeli ispod i prikazani su na Slici 5, potvrđujući da čvrsta supstanca sadrži isključivo Oblik B.
[0878] (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2 -il)cikloheksan-1-karboksamid, glavni maksimumi Oblika B su prikazani u Tabeli 3 ispod:
[0879] U skladu sa ovim pronalaskom, obezbeđen je kristalni oblik, Oblik B, koji ima rendgenski difraktogram praha sa specifičnim maksimumima na oko 2-teta = 8.3, 11.0, 13.1, 16.6, 19.4, 20.4, 22.3, 27.0, 27.2 i 28.6 °. DSC analiza je pokazala da se Oblik B topi sa početnom tačkom na 191 °C i maksimumom na 193 °C. TGA pokazuje da forma B pokazuje gubitak mase od oko 1.6% posle zagrevanja od 22 °C do 210 °C. Reprezentativni DSC/TGA termogram je prikazan na Slici 6.
2
Konverzija Oblika A u Oblik B
[0880] 100 mg (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida, Oblika A (izolovanog iz Primera 25) je dodato u bočicu od 20 mL. U bočicu je dodato 2.0 mL acetona da bi se dobila suspenzija. Dobijena suspenzija je mešana na temperaturi okoline tokom vikenda i zatim je osušena na vazduhu isparavanjem. Dobijena bela čvrsta supstanca je okarakterisana i identifikovana kao (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamid, Oblik B.
[0881] Postupci koji se koriste za dobijanje polaznog materijala 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-amina su opisani u daljem tekstu:
Pripremanje 5-fluoro-4-jodopiridin-2-amina
[0882]
[0883] Posuda za hidrogenaciju od 5L čelika je napunjena vodenim rastvorom amonijaka (26%; 777 g, 11.9 mol) i 2,5-difluoro-4-jodopiridin (220 g, 913 mmol). Smeša je ohlađena na 5 °C, i polako je dodavan NMP (500 mL) tokom nekoliko minuta (razvijanje gasa). Posuda je zapečaćena i reakciona smeša je zatim zagrejana do 100 °C. Posle 36 h, reakciona temperatura je smanjena na 90 °C, i reakcija je održavana pod ovim uslovima 3.5 dana. Smeša je zatim ohlađena na 5 °C, i dodati su MTBE (1 L) i voda (500 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa MTBE (2 x 500 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (200 mL), filtrirani i koncentrovani pod redukovanim pritiskom. Dobijena bledo žuta čvrsta supstanca je ponovo koncentrovana iz MTBE (2 x 500 mL), a zatim je dodat toluen (400 mL). Dobijena smeša je zagrevana do 70 °C, i dobijen je homogeni braon rastvor. Polako je dodavan heptan (500 mL). Homogeni rastvor se zatim polako ostavi da dostigne 18 °C u vodenom kupatilu sa kristalima semena koji se dodaju kada smeša postigne 42 °C. Smeša je mešana preko noći pod ovim uslovima. Suspenzija je filtrirana i sakupljena čvrsta supstanca je isprana sa 45% toluena u heptanu (200 mL) nakon čega je sušeno pod sniženim pritiskom na 40 °C da bi se dobio 5-fluoro-4-jodopiridin-2-amin (111 g, 51%) kao bledo siva čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 4.52 (2H, br s), 6.89 (1H, d), 7.79 (1H, s).
2 4
Pripremanje 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-amina
[0884]
[0885] Kalijum karbonat (63,1 g, 457 mmol) i Pd(dppf)Cl2(2.67 g, 3.66 mmol) su dodavani uzastopno pod azotom u degasiranu smešu 5-hloro-4-jodopiridin-2-amina (43.5 g, 182,8 mmol) i 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol (86 g, 210 mmol; 64 wt%, pripremljene prema Primeru 85) u acetonitrilu (400 mL) i vodi (400 mL). Bledo crvena bifazna smeša se zagreva do 50 °C i snažno meša 5 h. Reakcija se ohladi i zatim se doda etil acetat (400 mL). Slojevi su razdvojeni i organski sloj je ispran vodom (200 mL). Silicikl Pd-sakupljač (SilaMetS)-tiol, (kat# R51030B, 10 g) je dodat organskom sloju, i smeša je zatim mešana preko noći na 20 °C. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod redukovanim pritiskom da bi se dobila braon čvrsta supstanca. Dodat je izopropanol (200 mL) i smeša je zagrevana do 70 °C što je dalo homogeni tamno braon rastvor. Smeša je zatim polako ostavljena da se ohladi do 20 °C i zatim je mešana 15 h. Dobijena suspenzija je filtrirana i sakupljena čvrsta supstanca je isprana hladnim (4 °C) izopropanolom (3 x 30 mL) da bi se dobio 4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-amin (32 g, 71%) kao bledo braon čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 20 °C) 1.34 (6H, s), 2.91 (2H, s), 3.95 (2H, s), 4.30 (2H, s), 6.51 (1H, d), 7.89 (1H, s), 7.93 (1H, d). m/z: ES+[M+H]+ 247.
2

Claims (16)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I:
    gde: A je C(R<5>) ili N; R<5>je H, C1-3alkil, CN ili halogen; R<2>je 3-7-člani heterocikloalkil ili 3-7-člani cikloalkil; opciono supstituisan sa jednim do tri supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koja se sastoji iz R<10>, OR<10>, SR<10>, S(O)R<10>, S(O)2R<10>, C(O) R<10>, C(O)OR<10>, OC(O) R<10>, OC(O)O R<10>, NH2, NH R<10>, N(R<10>)2, NHC(O)H, NHC(O) R<10>, N R<10>C(O)H, N R<10>C(O)R<10>, NHS(O)2R<10>, NR<10>S(O)2R<10>, NHC(O)OR<10>, NR<10>C(O)OR<10>, NHC(O)NH2, NHC(O)NHR<10>, NHC(O)N(R<10>)2, NR<10>C(O)NH2, NR<10>C(O)NHR<10>, NR<10>C(O)N(R<10>)2, C(O)NH2, C(O)NH R<10>, C(O)N(R<10>)2, C(O)NHOH, C(O)NHOR<10>, C(O)NHS(O)2R<10>, C(O)NR<10>S(O)2R<10>, S(O)2NH2, S(O)2NHR<10>, S(O)2N(R<10>)2, S(O)2NHC(O)OR<10>, S(O)2NR<10>C(O)OR<10>, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I;, pri čemu jedna ili više CH2grupa u prstenu može opciono biti zamenjena odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota u prstenu mogu biti opciono oksidovani da formiraju S-okside ili N-okside; R<10>, pri svakom pojavljivanju, je nezavisno izabran iz grupe koja se sastoji iz 3 do 6-članova cikloalkilne ili heterocikloalkilne grupe, C1-6alkil, -O-C1-6alkil, C1-6alkil-O-C1-6alkil, NH2, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, OH, CN, NO2, F, Cl, Br i I; gde dve R10 grupe zajedno sa atomima na koje su vezane mogu da formiraju 3 do 6-članu cikloalkil ili heterocikloalkil grupu; i svaka gore pomenuta R<10>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa može biti dalje supstituisana sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz grupe koju čine CN, OH, halogen, C1-3alkil, -O-C1-3alkil, NH2, NH-C1-3alkil i NHC(O)-C1-3alkil. R<4>je
    2 gde X i Y zajedno sa atomima na koje su vezani, formiraju 5-do 7-člani heterocikloalkilni prsten koji, pored azota za mostove, može da sadrži jedan ili dva heteroatoma izabrana od N, O i S koji prsten može biti zasićen ili delimično zasićen; gde jedna ili dve prstenaste CH2grupe mogu opciono biti zamenjene odgovarajućim brojem -C(O) grupa, jedan ili više atoma sumpora ili azota u prstenu koji mogu biti opciono oksidovani da formiraju S-okside ili N-okside i gde prsten može biti supstituisan na ugljeniku prstena sa jednim ili dva R<10>supstituenta ili na azotu prstena sa supstituentom R<12>; J je N ili CR<11>; i R<11>je H, C1-3alkil; R<12>pri svakom pojavljivanju se nezavisno bira iz grupe koja se sastoji iz 3 do 6-člane cikloalkilne ili heterocikloalkilne grupe, C1-6alkil, C1-6alkil-O-C1-6alkil, C(O)NH2, C(O)H; gde R<12>alkil, cikloalkil i heterocikloalkil grupa mogu biti dalje supstituisane sa jednim ili dva supstituenta nezavisno izabrana iz CN, OH, i halogena, C1-3alkil, NH2i NH-C1-3alkil, NHC(O)-C1-3alkil, ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je A C(R<5>), opciono gde je R<5>hloro ili fluoro.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je R<2>3-7-člani cikloalkil opciono supstituisan sa NHCOR<10>ili R<10>, pri čemu je R<2>opciono izabran iz grupe koju čine ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil ili iz grupe ciklopentila i cikloheksila.
  4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3, gde je R<2>supstituisan sa NHCOR<10>.
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je R<2>3-7-člani heterocikloalkil ili 3-7-člani heterocikloalkil supstituisan sa NHCOR<10>.
  6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je R<4>
    opciono J je C(R<11>), u tom slučaju R<11>je opciono H.
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde su X i Y zajedno sa atomima na koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten, opciono gde je jedan CH2u 5-članom heterocikloalkilnom prstenu supstituisan sa dve metil grupe.
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde A je C(R<5>); R<5>je halogen; R<2>je 3-7-člani cikloalkil, opciono cikloheksil, u tom slučaju R<5>može biti Cl; R<4>je
    i X i Y zajedno sa atomima za koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten.
  9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde A je C(R<5>); R<5>je hloro; R<2>je cikloheksil supstituisan sa NHC(O)R<10>; R<10>je C1-6alkil; J je CH; R<4>je
    i X i Y zajedno sa atomima na koje su vezani formiraju 5-člani heterocikloalkilni prsten, opciono pirolidinil gde je jedan CH2supstituisan sa dve metil grupe.
  10. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje je izabrano iz 1 (R)-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; cis-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida; (R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)piperidin-3-karboksamida; cis-3-hidroksi-N-(4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)ciklobutankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirazolo[5,1-b][1,3]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida; N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida; N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida; 2 (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida; (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida; cis-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida; cis-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamida; trans-3-hidroksi-N-(6-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)pirimidin-4-il)ciklobutankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(6-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)pirimidin-4-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(2-cijanoacetamido)cikloheksankarboksamida; terc-butil ((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)karbamat; (1S,3R)-3-amino-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida; (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida; N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)-3-metiloksetan-3-karboksamida; 2 (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida; (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida; (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)-3-((S)-2-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamida; (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-3-karboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-cijano-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1R,3S)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (S)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida; (R)-N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)tetrahidrofuran-2-karboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)ciklopentankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidro-[1,2,3]triazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida; 2 1 (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(3-hidroksipropanamido)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)-3-(cis-3-hidroksiciklobutankarboksamido)cikloheksankarboksamide (1S,3R)-3-amino-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida; (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-(1-hidroksiciklopropankarboksamido)cikloheksankarboksamida; N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida; cis-N-(5-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-a]imidazol-3-il)piridin-2-il)-3-hidroksiciklobutankarboksamida; Izomer 1 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 1 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 2 trans-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomera 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; N-((1R,3S)-3-((5-hloro-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida; Izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; 2 2 Izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-metoksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-fluoro-4-(5,6,7,8-tetrahidro-4H-pirazolo[1,5-a]azepin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)-3-(2-hidroksiacetamido)cikloheksankarboksamida; N-((1R,3S)-3-((4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-metilpiridin-2-il)karbamoil)cikloheksil)oksetan-3-karboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-metil-4-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(7-hidroksi-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridin-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(4-hidroksibutil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomer 1 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; Izomera 2 (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(4-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1R,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksankarboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5-(3-hidroksi-2,2-dimetilpropil)-1H-pirazol-4-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida; (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(6-hidroksi-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida; (1R,3R)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida; i 2 (1S,3S)-3-acetamido-N-(4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)-5-fluoropiridin-2-il)cikloheksan-1-karboksamida, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je kristalni oblik (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamida, opciono u suštini čistom kristalnom obliku koji je naznačen specifičnim maksimumima 2-teta = 5.9, 7.0, 9.4, 10.5, 11.5, 11.7, 17.6, 18.0, 20.2 i 21.0° u svom rendgenskom difraktogramu praha.
  12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol -3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarboksamid.
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je farmaceutski prihvatljiva so (1S,3R)-3-acetamido-N-(5-hloro-4-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazol-3-il)piridin-2-il)cikloheksankarbosamida.
  15. 15. Farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14 za upotrebu u lečenju kancera. 2 4
RS20190564A 2015-06-29 2016-06-27 Derivati policikličnih amida kao cdk9 inhibitori RS58712B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562185852P 2015-06-29 2015-06-29
PCT/EP2016/064899 WO2017001354A1 (en) 2015-06-29 2016-06-27 Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
EP16733459.8A EP3313838B1 (en) 2015-06-29 2016-06-27 Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58712B1 true RS58712B1 (sr) 2019-06-28

Family

ID=56292699

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190564A RS58712B1 (sr) 2015-06-29 2016-06-27 Derivati policikličnih amida kao cdk9 inhibitori
RS20220005A RS62781B1 (sr) 2015-06-29 2016-06-27 Policiklični amidni derivati kao inhibitori cdk9

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220005A RS62781B1 (sr) 2015-06-29 2016-06-27 Policiklični amidni derivati kao inhibitori cdk9

Country Status (38)

Country Link
US (4) US9845331B2 (sr)
EP (2) EP3539961B1 (sr)
JP (1) JP6997627B2 (sr)
KR (1) KR102663113B1 (sr)
CN (1) CN107873028B (sr)
AR (1) AR105179A1 (sr)
AU (1) AU2016286200B2 (sr)
BR (1) BR122019013677B1 (sr)
CA (1) CA2989499C (sr)
CL (1) CL2017003306A1 (sr)
CO (1) CO2017013713A2 (sr)
CR (2) CR20170596A (sr)
CY (2) CY1122111T1 (sr)
DK (2) DK3539961T3 (sr)
DO (2) DOP2017000295A (sr)
EA (1) EA035383B1 (sr)
ES (2) ES2902148T3 (sr)
HR (2) HRP20211970T1 (sr)
HU (2) HUE043440T2 (sr)
IL (1) IL256393B (sr)
LT (2) LT3313838T (sr)
ME (1) ME03404B (sr)
MX (1) MX371034B (sr)
MY (1) MY201673A (sr)
NI (1) NI201700174A (sr)
PE (1) PE20180530A1 (sr)
PH (1) PH12017502334B1 (sr)
PL (2) PL3539961T3 (sr)
PT (2) PT3539961T (sr)
RS (2) RS58712B1 (sr)
SI (2) SI3539961T1 (sr)
SM (2) SMT202200005T1 (sr)
SV (1) SV2017005598A (sr)
TN (1) TN2017000486A1 (sr)
TR (1) TR201909286T4 (sr)
TW (1) TWI723028B (sr)
WO (1) WO2017001354A1 (sr)
ZA (1) ZA201800563B (sr)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019058348A1 (en) 2017-09-25 2019-03-28 Astrazeneca Ab COMBINATION OF A BTK INHIBITOR AND A CDK9 INHIBITOR TO TREAT CANCER
EP3694506B1 (en) * 2017-10-09 2023-08-02 Merck Sharp & Dohme LLC Novel substituted phenyloxetane and phenyltetrahydrofuran compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
CN108129288B (zh) * 2017-12-27 2021-01-22 上海毕得医药科技股份有限公司 一种反式-3-羟基环丁基甲酸的合成方法
TWI810397B (zh) 2018-11-14 2023-08-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 治療癌症之方法
US20220267321A1 (en) * 2019-06-27 2022-08-25 Medshine Discovery Inc. Azaindole pyrazole compounds as cdk9 inhibitors
CN114786673A (zh) 2019-09-11 2022-07-22 普莱鲁德疗法有限公司 Cdk抑制剂及其作为药物的用途
CN114787142B (zh) * 2019-12-09 2024-08-02 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 作为周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的化合物及其应用
US20230192703A1 (en) * 2020-05-12 2023-06-22 Suzhou Alphama Biotechnology Co., Ltd. Polycyclic amide derivative as CDK9 inhibitor, preparation method therefor and use thereof
JP7451765B2 (ja) * 2020-05-12 2024-03-18 蘇州阿尓脈生物科技有限公司 Ｃｄｋ阻害剤としてのピリジンアセトアミド系誘導体、その調製方法及び用途
US20230233540A1 (en) * 2020-06-24 2023-07-27 Astrazeneca Uk Limited Combination of antibody-drug conjugate and cdk9 inhibitor
CN115843296B (zh) 2020-08-07 2024-03-08 南京迈晟科技有限责任公司 Cdk9抑制剂及其用途
TWI809330B (zh) * 2020-11-20 2023-07-21 大陸商勁方醫藥科技(上海)有限公司 Cdk9抑制劑的多晶型物及其製法和用途
CN115381824B (zh) * 2021-05-24 2024-11-05 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的用途
CN115381823B (zh) * 2021-05-24 2024-11-05 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种周期蛋白依赖性激酶9抑制剂的用途
CN117813289A (zh) * 2021-07-14 2024-04-02 上海海雁医药科技有限公司 吡唑衍生物及其中间体和制备方法
CN115703738B (zh) * 2021-08-16 2024-06-21 中国科学院上海药物研究所 含2-芳杂环取代的脲类化合物、其制备方法和用途
TW202333679A (zh) * 2021-12-23 2023-09-01 比利時魯汶大學 用於抑制ｙａｐ／ｔａｚ－ｔｅａｄ之四氫吡唑并嘧啶及相關類似物
WO2024039210A1 (ko) 2022-08-17 2024-02-22 한국화학연구원 Cdk2 및/또는 cdk9의 억제 또는 분해용 화합물 및 이들의 의약 용도
CN117659022A (zh) * 2022-09-06 2024-03-08 苏州阿尔脉生物科技有限公司 脲基取代吡啶类化合物、包含其的药物组合物及其医药用途
CN121311462A (zh) * 2023-04-19 2026-01-09 爱尔康公司 N-取代的c6环基甲酰胺化合物及其用途
WO2025076115A1 (en) * 2023-10-02 2025-04-10 Prelude Therapeutics Incorporated Cdk inhibitors and their use as pharmaceuticals

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008133192A1 (ja) 2007-04-19 2008-11-06 Takeda Pharmaceutical Company Limited 縮合イミダゾール化合物およびその用途
ES2539518T3 (es) 2007-04-24 2015-07-01 Astrazeneca Ab Inhibidores de proteínas quinasas
JP5379787B2 (ja) 2007-04-24 2013-12-25 インゲニウム ファーマシューティカルズ ジーエムビーエイチ プロテインキナーゼの阻害剤
WO2008129069A1 (en) 2007-04-24 2008-10-30 Ingenium Pharmaceuticals Gmbh Inhibitors of protein kinases
US8507498B2 (en) 2007-04-24 2013-08-13 Ingenium Pharmaceuticals Gmbh 4, 6-disubstituted aminopyrimidine derivatives as inhibitors of protein kinases
WO2008132138A1 (en) 2007-04-25 2008-11-06 Ingenium Pharmaceuticals Gmbh Derivatives of 4,6-disubstituted aminopyrimidines
SI2212297T1 (sl) 2007-10-12 2011-09-30 Ingenium Pharmaceuticals Gmbh Inhibitorji protein kinaz
BR112012008147A2 (pt) 2009-09-04 2016-03-01 Novartis Ag compostos heteroarílicos como inibidores da quinase
US20110113038A1 (en) 2009-11-12 2011-05-12 International Business Machines Corporation Search term security
GB201002911D0 (en) 2010-02-19 2010-04-07 Medical Res Council Compound
KR20130016244A (ko) 2010-03-10 2013-02-14 인게니움 파르마코이티칼스 게엠베하 단백질 키나아제의 억제제
AR081810A1 (es) 2010-04-07 2012-10-24 Bayer Cropscience Ag Piridinilpirazoles biciclicos
WO2012066065A1 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Novartis Ag Phenyl-heteroaryl amine compounds and their uses
US20130303507A1 (en) * 2011-01-28 2013-11-14 Novartis Ag Substituted hetero-biaryl compounds and their uses
WO2012101063A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Novartis Ag N-acyl pyridine biaryl compounds and their uses
WO2012101064A1 (en) * 2011-01-28 2012-08-02 Novartis Ag N-acyl pyrimidine biaryl compounds as protein kinase inhibitors
DK2763993T3 (en) 2011-10-06 2017-07-24 Bayer Ip Gmbh HETEROCYCLYLPYRI (MI) DINYLPYRAZOL
WO2014159999A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Abbvie Inc. Cdk9 kinase inhibitors
CA2901334A1 (en) * 2013-03-13 2014-10-02 Abbvie Inc. Pyridine cdk9 kinase inhibitors
CN105189512A (zh) 2013-03-14 2015-12-23 艾伯维公司 吡咯并嘧啶cdk9激酶抑制剂
WO2014139328A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Pyrrolo[2,3-b]pyridine cdk9 kinase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
ES2902148T3 (es) 2022-03-25
EP3539961A1 (en) 2019-09-18
MY201673A (en) 2024-03-12
CY1125066T1 (el) 2023-03-24
SMT202200005T1 (it) 2022-03-21
EA035383B1 (ru) 2020-06-04
EP3313838A1 (en) 2018-05-02
IL256393B (en) 2021-12-01
EP3313838B1 (en) 2019-04-03
HUE043440T2 (hu) 2019-08-28
PH12017502334B1 (en) 2023-05-26
MX371034B (es) 2020-01-13
TWI723028B (zh) 2021-04-01
PE20180530A1 (es) 2018-03-19
SMT201900298T1 (it) 2019-07-11
US11352369B2 (en) 2022-06-07
EA201890094A1 (ru) 2018-07-31
DK3539961T3 (da) 2022-01-03
US20160376287A1 (en) 2016-12-29
PL3539961T3 (pl) 2022-02-14
SI3313838T1 (sl) 2019-06-28
CA2989499A1 (en) 2017-01-05
CL2017003306A1 (es) 2018-06-29
DOP2018000207A (es) 2018-10-15
WO2017001354A1 (en) 2017-01-05
CR20170596A (es) 2018-07-04
AU2016286200B2 (en) 2018-10-04
EP3539961B1 (en) 2021-10-06
US20220340592A1 (en) 2022-10-27
NI201700174A (es) 2018-10-19
LT3539961T (lt) 2021-12-27
KR20180021830A (ko) 2018-03-05
PL3313838T3 (pl) 2019-08-30
CY1122111T1 (el) 2020-11-25
DOP2017000295A (es) 2017-12-31
HUE057343T2 (hu) 2022-05-28
MX2017016244A (es) 2018-04-20
ME03404B (me) 2020-01-20
RS62781B1 (sr) 2022-01-31
PT3313838T (pt) 2019-06-24
IL256393A (en) 2018-02-28
AR105179A1 (es) 2017-09-13
HRP20211970T1 (hr) 2022-03-18
HRP20190748T1 (hr) 2019-06-14
BR122019013677B1 (pt) 2024-01-02
SI3539961T1 (sl) 2022-02-28
CN107873028B (zh) 2021-02-02
TR201909286T4 (tr) 2019-07-22
JP6997627B2 (ja) 2022-01-17
ES2728356T3 (es) 2019-10-23
SV2017005598A (es) 2018-02-23
CA2989499C (en) 2023-10-31
LT3313838T (lt) 2019-06-10
PH12017502334A1 (en) 2018-06-25
CR20210297A (es) 2021-09-29
CO2017013713A2 (es) 2018-03-28
US9845331B2 (en) 2017-12-19
KR102663113B1 (ko) 2024-05-02
CN107873028A (zh) 2018-04-03
US20180093998A1 (en) 2018-04-05
US10717746B2 (en) 2020-07-21
AU2016286200A1 (en) 2018-02-08
PT3539961T (pt) 2021-12-20
TN2017000486A1 (en) 2019-04-12
BR112017027394A2 (pt) 2018-11-06
JP2018522869A (ja) 2018-08-16
US20210171541A1 (en) 2021-06-10
ZA201800563B (en) 2022-08-31
DK3313838T3 (da) 2019-06-11
TW201718573A (zh) 2017-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11352369B2 (en) Pyridine and pyrimidine derivatives
KR102388208B1 (ko) 암을 치료하기 위한 거대 환형 mcl1 억제제
US9051327B2 (en) Pyridazino[4,5-D]pyrimidin-5(6H)-one inhibitors of kinases
EP3288931B2 (en) Certain protein kinase inhibitor
JP2021102619A (ja) ブロモドメイン阻害剤
HK40014442B (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
HK40014442A (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
HK1250985B (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
HK1250985A1 (en) Polycyclic amide derivatives as cdk9 inhibitors
BR112017027394B1 (pt) Composto, forma cristalina, composição farmacêutica e uso do mesmo
CA3020378C (en) Macrocyclic mcl1 inhibitors for treating cancer