RS56785B1 - Makrociklični inhibitori faktora xia kondenzovani sa heterociklusima - Google Patents

Description

OBLAST TEHNIKE NA KOJU SE PREDMETNI PRONALAZAK ODNOSI

[0001] Predmetni pronalazak odnosi se generalno na nova makrociklična jedinjenja, koja su inhibitori faktora Xia ili dvostruki inhibitori faktora Xia i kalikreina plazme, kompozicije koje ih sadrže, i metode njihove primene, na primer, za lečenje ili profilaksu tromboembolijskih poremećaja, ili za lečenje retinalne vaskularne propustljivosti povezane sa dijabetičnom nefropatijom i dijabetičnim makularnim edemom.

STANJE TEHNIKE PREDMETNOG PRONALASKA

[0002] Tromboembolijske bolesti ostaju vodeći uzrok smrti u razvijenim zemljama uprkos dostupnosti antikoagulanata kao što su varfarin (COUMADIN®), heparin, heparini male molekulske mase (LMWH), i sintetički pentasaharidi i agensi protiv zgrušavanja kao što su aspirin i klopidogrel (PLAVIX®). Oralni antikoagulans varfarin, inhibira post-translaciono sazrevanje faktora koagulacije VII, IX, X i protrombina, i dokazano je da efikasan i u venskoj i u arterijskoj trombozi. Međutim, njegova upotreba je ograničena zbog njegovog uskog terapijskog indeksa, sporog početka terapijskog efekta, brojnih interakcija u ishrani i lekovima, i potrebe za praćenjem prilagođavanja doze. Na taj način otkrivanje i razvoj sigurnih i efikasnih oralnih antikoagulanasa za prevenciju i lečenje širokog opsega tromboembolijskih poremećaja je postalo sve važnije.

[0003] Jedan pristup je inhibirati stvaranje trombina ciljanjem inhibicije faktora koagulacije XIa (FXIa). Faktor XIa je serin proteaza plazme uključena u regulaciju koagulacije krvi, koja je započeta in vivo vezivanjem tkivnog faktora (TF) za faktor VII (FVII) da se generiše faktor VIIa (FVIIa). Dobijeni TF:FVIIa kompleks aktivira faktor IX (FIX) i faktor X (FX) koji vodi ka proizvodnji faktora Xa (FXa). Dobijeni FXa katališe transformaciju protrombina u male kolilčine trombina pre nego što je ovaj put ugašen pomoću inhibitora puta tkivnog faktora (TFPI). Proces koagulacije je zatim dalje propagiran putem povratne aktivacije Faktora V, VIII i XI katalitičkim količinama trombina. (Gailani, D. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 27:2507-2513 (2007).) Rezultujući nalet trombina pretvara fibrinogen u fibrin koji polimerizuje da bi se formirao strukturni okvir krvnog ugruška, i aktivira trombocite, koji su ključna ćelijska komponenta koagulacije (Hoffinan, M., Blood Reviews, 17:S1-S5 (2003)). Stoga, faktor XIa igra glavnu ulogu u propagiranju ove amplifikacione petlje i prema tome je atraktivna meta za anti-trombotičku terapiju.

[0004] Alternativni put inicijacije koagulacije je operativan kada je krv izložena veštačkim površinama. Ovaj proces je takođe nazvan kontaktna aktivacija. Površinska apsorpcija faktora XII vodi konformacionoj promeni u molekulu faktora XII, čime se olakšava aktivacija za molekule proteolitičkog aktivnog faktora XII (faktor XIIa i faktor XIIf). Faktor XIIa (ili XIIf) ima nekoliko ciljnih proteina, uklučujući prekalikrein plazme i faktor XI.

[0005] Prekalikrein plazme je zimogen tripsinu-slične serin proteaze i prisutan je u plazmi pri 35 do 50 µg/mL. Struktura gena je slična onoj od faktora XI. Sveukupno, aminokiselinska sekvenca kalikreina plazma ima 58% homologije sa faktorom XI. Smatra se da kalikrein plazme igra ulogu u nekolicini inflamatornih poremećaja. Glavni inhibitor kalikreina plazme je serpin C 1 esterazni inhibitor. Pacijenti koji imaju genetski nedostatak u inhibitoru C1 esteraze pate od naslednog angioedema (HAE) što dovodi do povremenog oticanja lica, ruku, grla, gastrointestinalnog trakta i genitalija. Plikovi formirani tokom akutnih epizoda sadrže visok nivo kalikreina plazme koji cepa kininogen velike molekulske mase koji oslobađa bradikinin što dovodi do povećane vaskularne propustljivosti. Pokazano je da tretman sa velikim proteinskim inhibitorom kalikreina plazme efikasno tretira HAE tako što sprečava oslobađanje bradikinina koji uzrokuje povećanu vaskularnu propustljivost (Lehmann, "Ecallantide (DX-88), a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditary angioedema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery", Expect Opin. Biol. Ther., 8:1187-1199 (2008)).

[0006] Sistem kalikrein plazme-kinin je abnormalno obilan kod pacijenata sa uznapredovalim dijabetičnim makularnim edemom. Nedavno je objavljeno da kalikrein plazme doprinosi retinalnim vaskularnim disfunkcijama kod dijabetičkih pacova (Clermont, A. et al., "Plasma kallikrein mediates retinal vascular dysfunction and induces retinal thickening in diabetic rats", Diabetes, 60:1590-1598 (2011)). Pored toga, administracija inhibitora kalikreina plazme ASP-440 poboljšava i retinalnu vaskularnu propustljivost i abnormalnosti krvnog toga mrežnjače kod dijabetičnih pacova. Stoga, inhibitor kalikreina plazme treba da ima uticaj kao tretman kako bi se smanjila retinalna vaskularna propustljivost povezana sa dijabetičnom retinopatijom i dijabetičnim makularnim edemom. Druge komplikacije dijabetesa kao što su cerebralna hemoragija, nefropatija, kardiomiopatija i neuropatija, od kojih sve imaju asocijacije sa kalikreinom plazme, takođe mogu biti razmatrane kao mete za inhibitor kalikreina plazme.

[0007] Do danas nije odobren ni jedan mali molekulski sintetički inhibitor kalikreina plazme za medicinsku upotrebu. Veliki proteinski inhibitori kalikreina plazme predstavljaju rizike od anafilaktičkih reakcija, kako je prijavljeno za Ekalantid. Tako ostaje potreba za jedinjenjima koja inhibiraju kalikrein plazme, koja ne indukuju anafilaksu i koja su oralno dostupna. Pored toga, molekuli poznati u oblasti karakterišu veoma polarnu i jonizabilnu funkcija guanidina ili amidina. Veoma je dobro poznato u oblasti da takve funkcionalnosti mogu biti ograničene na propustljivost creva i stoga na oralnu dostupnost.

REZIME PREDMETNOG PRONALASKA

[0008] Predmetni pronalazak obezbeđuje nova makrociklična jedinjenja, njihove stereoizomere, tautomere, ili njihove farmaceutski privatljive soli, koji su korisni kao selektivni faktor XIa inhibitori ili dvostruki inhibitori faktora XIa i kalikreina plazme.

[0009] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje procese i intermedijere za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0010] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski privatljive soli.

[0011] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskih poremećaja.

[0012] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena u lečenju retinalne vaskularne propustljivosti povezane sa dijabetičnom retinopatijom i dijabetičnim makularnim edemom.

[0013] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena u terapiji.

[0014] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena za proizvodnju medikamenta za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0015] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti korišćena sama, u kombinaciji sa drugim jedinjenjima predmetnog pronalaska, ili u kombinaciji sa jednim ili više, poželjno jednim do dva druga agensa(agenasa).

[0016] Ove i druge karakteristike predmetnog pronalaska će biti predstavljene u proširenom obliku kako se objava nastavlja.

DETALJAN OPIS PREDMETNOG PRONALASKA

I. JEDINJENJA PREDMETNOG PRONALASKA

[0017] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (Ia):

ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

--- je opciona veza;

prsten A je nezavisno odabran od

R<1>je nezavisno odabrano od H, F, OH, i C1-4alkil;

R<2>je nezavisno odabrano od H, F, i OH;

R<3>je nezavisno odabrano od H, C1-4alkil,

C1-4haloalkil, -(CH2)n-OR<5>, -(CH2)n-C(O)OR<5>, C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa halogenom, i 5- do 6-očlani heteroaril koji sadrži ugljenikove atome i 1-2 azotova atoma i po izboru supstituisan sa R<1>; pod uslovom da je samo jedna R<3>grupa prisutna na prstenu;

R<4>je nezavisno odabrano od H, OH, F, OC1-4alkil, C1-4alkil, i CN;

R<5>je nezavisno odabrano od H i C1-4alkil;

R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, OCH3, CH3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2, NHC(O)C1-4alkil, C3-6cikloalkil, i 5-očlani heterociklus supstituisan sa R<9>; R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3;

R<9>je nezavisno odabrano od H, cijano, C1-4alkil, haloalkil, i halogen; i

n, u svakom slučaju, je ceo broj izabran od 1 i 2.

[0018] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (IIa):

ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

prsten A je nezavisno odabran od

R<1>je nezavisno odabrano od H i C1-3alkil;

R<2>je nezavisno odabrano od H i F;

R<3>je nezavisno odabrano od H, C1-3alkil,

C1-3haloalkil, -(CH2)n-OR<5>, -(CH2)n-C(O)OR<5>, i C3-4cikloalkil po izboru supstituisan sa halogenom;

R<4>je nezavisno odabrano od H i F;

R<5>je nezavisno odabrano od H i C1-4alkil;

R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3;

R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3;

R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3; i

n, u svakom slučaju, je ceo broj izabran od 1 i 2.

[0019] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (IIa) ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski privatljive soli, gde:

R<1>je nezavisno odabrano od H, CH3, i CH(CH3)2;

R<2>je nezavisno odabrano od H i F;

R<3>je nezavisno odabrano od H, CH3, CD3,

CH2CH3, -CHF2, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2OH CH2CH2OC(CH3)3, -CH2C(O)OH, ciklopropil po izboru supstituisan sa F, i ciklobutil;

R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3;

R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i

R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3.

[0020] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (IIIa):

ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

prsten A je nezavisno odabran od

R<1>je nezavisno odabrano od H, CH3, i CH(CH3)2;

R<2>je nezavisno odabrano od H i F;

R<3>je nezavisno odabrano od H, CH2C(=O)OH, CH2C(=O)OCH2CH3,

R<4>je nezavisno odabrano od H i F;

R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3;

R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i

R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3.

[0021] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (Ia), ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski privatljive soli, gde:

R<3>je nezavisno odabrano od H, CH3, CD3, CH2CH3, CHF2, CH2CHF2, CH2CF3, CH2CH2OH CH2CH2OC(CH3)3, CH2C(O)OH, CH2C(=O)OH, CH2C(=O)OCH2CH3, ciklopropil po izboru supstituisan sa F, i ciklobutil,

R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je Cl;

R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i

R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3; i

Druge promenljive su kao što je definisano u Formuli (Ia).

[0022] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (IV):

ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

prsten A je nezavisno odabran od

R<1>je nezavisno odabrano od H i C1-3alkil;

R<2>je nezavisno odabrano od H i F;

R<3>je nezavisno odabrano od H, CD3, CHF2, i CH3;

R<4>je nezavisno odabrano od H i halogen;

R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; i

R<9>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, i CF3.

[0023] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (V):

ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde:

prsten A je nezavisno odabran od

R<1>je nezavisno odabrano od H i C1-3alkil;

R<2>je nezavisno odabrano od H i F;

R<3>je nezavisno odabrano od H, CD3, CHF2, i CH3;

R<4>je nezavisno odabrano od H i halogen;

R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

R<7>je nezavisno odabrano od H i F;

R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3;

R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i

R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3.

[0024] U još jednom tehničkom rešenju, R<1>je nezavisno odabrano od grupe koja se sastoji od H, OH, i C1-4alkil; R<2>je, nezavisno u svakom slučaju, odabrano od grupe koja se sastoji od H i F.

[0025] U još jednom tehničkom rešenju, R<1>je nezavisno odabrano iz grupe koja se sastoji od H i metil, etil, i izopropil; R<2>je H ili F.

[0026] U još jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje odabrano od bilo koje liste podgrupa jedinjenja prikazanih u predmetnoj prijavi.

[0027] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje odabrano od

Ċ

ili stereoizomere, tautomere, njihove farmaceutski prihvatljive soli.

II. DRUGA TEHNIČKA REŠENJA PREDMETNOG PRONALASKA

[0028] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0029] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0030] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži: farmaceutski prihvatljiv nosač i terapijski efikasnu količinu najmanje jednog od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0031] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje proces za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0032] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje intermedijer za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0033] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e). U poželjnom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde dodatni terapijski agens(i) su agens protiv zgrušavanja ili njihova kombinacija. Poželjno, agens(i) protiv zgrušavanja su klopidogrel i/ili aspirin, ili njihova kombinacija.

[0034] U još jednom tehničkom rešenju, predmetna objava obezbeđuje metodu za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja koja sadrži administriranje pacijentu kod koga postoji potreba za takvim tretmanom i/ili profilaksu terapijski efikasne količine najmanje jednog od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0035] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za primenu u lečenju.

[0036] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za primenu u terapiji za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0037] U još jednom tehničkom rešenju, predmetna objava takođe obezbeđuje primenu jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomera, tautomera, njegove farmaceutski prihvatljive soli, za proizvodnju medikamenta za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0038] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje prvi i drugi terapijski agens za primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde prvi agens je jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, i drugi terapijski agens je najmanje jedan agens koji je odabran od inhibitora faktora Xa kao što je apiksaban, rivaroksaban, betriksaban, edoksaban, antikoagulantni agens, agens protiv zgrušavanja, trombin inhibirajući agensi kao što su dabigatran, trombolitički agens, i fibrinolitički agent. Poželjno, drugi terapijski agens je najmanje jedan agens odabran od varfarina, nefrakcionisanog heparina, heparina male molekulske mase, sintetičkog pentasaharida, hirudina, argatrobana, aspirina, ibuprofena, naproksena, sulindaka, indometacina, mefenamata, droksikama, diklofenaka, sulfinpirazona, piroksikama, tiklopidina, klopidogrela, tirofibana, eptifibatida, abciksimaba, melagatrana, desulfatohirudina, tkivnog plazminogenskog aktivatora, modifikovanog tkivnog plazminogenskog aktivatora, anistreplaze, urokinaze, i streptokinaze. Poželjno, drugi terapijski agens je najmanje jedan agens protiv zgrušavanja. Poželjno, agens(i) protiv zgrušavanja su klopidogrel i/ili aspirin, ili njihova kombinacija.

[0039] Tromboembolijski poremećaj uključuje arterijske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, venske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, arterijske cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje, i venske cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje. Primeri tromboembolijskih poremećaja uključuju, ali nisu ograničeni na, nestabilnu anginu, akutni koronarni sindrom, atrijalnu fibrilaciju, prvi miokardijalni infarkt, rekurentni miokardijalni infarkt, ishemijsku iznenadnu smrt, prolazni ishemijski napad, moždani udar, aterosklerozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, vensku trombozu, duboku vensku trombozu, tromboflebitis, koronarnu arterijsku trombozu, cerebralnu arterijsku trombozu, cerebralnu emboliju, bubrežnu emboliju, plućnu emboliju, i trombozu koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja izaziva trombozu.

[0040] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so za primenu u lečenju i/ili profilaksi inflamatornog poremećaja. Primeri inflamatornog poremećaja uključuju, ali nisu ograničeni na, sepsu, akutni respiratorni distres sindrom, i sindrom sistemskog inflamatornog odgovora.

[0041] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, njegovu farmaceutski prihvatljivu so za primenu u profilaksi bolesti ili stanja u kome je aktivnost kalikreina plazme implicirana.

[0042] Bolest ili stanje u kome je aktivnost kalikreina plazme implicirana uključuje, ali bez ograničenja na, oštećenu vidnu oštrinu, dijabetičku retinopatiju, dijabetični makularni edem, nasledni angioedem, dijabetes, pankreatitis, nefropatiju, kardio miopatiju, neuropatiju, inflamatornu bolest creva, artritis, inflamaciju, septički šok, hipotenziju, kancer, adultni respiratorni distres sindrom, diseminovanu intravaskularnu koagulaciju, i kardioplućnu bajpas operaciju.

[0043] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovano pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatni terapijski agens(agense) za simultanu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u terapiji.

[0044] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovano pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatni terapijski agens(agense) za simultanu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja.

III. HEMIJA

[0045] Kroz specifikaciju i priložene patentne zahteve, data hemijska formula ili ime bi trebalo da obuhvate sve stero i optičke izomere i njihove racemate gde takvi izomeri postoje. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i diastereomerni) i racemski oblici su u sklopu obima predmetnog pronalaska. Mnogi geometrijski izomeri C=C dvostrukih veza, C=N dvostrukih veza, sistema prstena, i slično mogu takođe biti prisutni u jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su razmotreni u predmetnom pronalasku. Cis- i trans- (ili E- i Z-) geometrijski izomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su opisani i mogu biti izolovani kao smeša izomera ili odvojeni izomerni oblici. Predmetna jedinjenja mogu biti izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Optički aktivni oblici mogu biti pripremljeni rastvaljanjem racemskih oblika ili sintezom od optički aktivnih početnih materijala. Svi procesi koji se koriste za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska i intermedijere napravljene u njima smatraju se delom predmetnog pronalaska. Kada su pripremljeni enantiomerni ili diastereomerni proizvodi, oni se mogu odvojiti konvencionalnim metodama, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. U zavisnosti od uslova procesa, krajnji proizvodi predmetnog pronalaska se dobijaju ili u slobodnom (neutralnom) ili obliku soli. I slobodan oblik i soli ovih krajnjih proizvoda su u okviru obima predmetnog pronalaska. Ako je tako poželjno, jedan oblik jedinjenja može biti pretvoren u drugi oblik. Slobodna baza ili kiselina mogu biti pretvorene u so; so se može pretvoriti u slobodno jedinjenje ili drugu so; smeša izomernih jedinjenja predmetnog pronalaska može biti razdvojena u pojedinačne izomere. Jedinjenja predmetnog pronalaska, slobodni oblik i njihove soli, mogu postojati u više tautomernih oblika, u kojima se atomi vodonika premeštaju u druge delove molekula, pa su hemijske veze između atoma molekula posledično preuređene. Treba shvatiti da su svi tautomerni oblici, u meri u kojoj mogu postojati, uključeni u pronalazak.

[0046] Izraz "stereoizomer" odnosi se na izomere identičnog sastava koji se razlikuju u rasporedu njihovih atoma u prostoru. Enantiomeri i diastereomeri su primeri stereoizomera. Termin "enantiomer" odnosi se na jedan od par molekularnih vrsta koji se odnose kao predmet i lik u ogledalu i koji se ne mogu međusobno preklopiti. Termin "diastereomer" se odnosi na stereoizomere koji se ne odnose kao predmet i njegov lik u ogledalu. Termin "racemat" ili "racemska smeša" odnosi se na kompoziciju sastavljenu od ekvimolarnih količina dve enantiomerne vrste, gde je kompozicija lišena optičke aktivnosti.

[0047] Simboli "R" i "S" predstavljaju konfiguraciju supstituenata oko hiralnog(ih) atoma ugljenika. Izomerni deskriptori "R" i "S" su korišćeni kao što je opisano ovde za označavanje konfiguracije(a) atoma u odnosu na molekul jezgra i trebalo bi da budu korišćeni kao što je definisano u literaturi (IUPAC Recommendations 1996, Pure and Applied Chemistry, 68:2193-2222 (1996)).

[0048] Termin"hiralni" odnosi se na strukturne karakteristike molekula tako da ga čini nemogućim da se preklopi sa svojim likom u ogledalu. Termin "homohiralni" odnosi se na stanje enantiomerne čistoće. Termin "optička aktivnost" odnosi se na stepen do koga homohiralni molekul ili neracemska smeša hiralnih molekula rotora ravan polarizovane svetlosti.

[0049] Kao što je ovde korišćeno, termin "alkil" ili "alkilen" bi trebalo da obuhvati grupe zasićenih alifatičnih ugljovodonika i sa razgranatim i ravnim lancem koji imaju određen broj ugljenikovih atoma. Na primer, "C1do C10alkil" ili "C1-10alkil" (ili alkilen), bi trebalo da uključi C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, i C10alkil grupe. Dodatno, na primer, "C1do C6alkil" ili "C1-C6alkil" označava alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma. Alkil grupe kao primer uključuju, ali nisu ograničene na, metil (Me), etil (Et), propil (npr., n-propil i izopropil), butil (npr., n-butil, izobutil, t-butil), i pentil (npr., n-pentil, izopentil, neopentil). Kada je "C0alkil" ili "C0alkilen" korišćen, to bi trebalo da označi direktnu vezu. "Alkil" takođe uključuje deuteroalkil kao što je CD3.

[0050] Termin"alkoksi" ili "alkiloksi" odnosi se na -O-alkil grupu. "C1do C6alkoksi" ili "C1-6alkoksi" (ili alkiloksi), bi trebalo da obuhvati C1, C2, C3, C4, C5, i C6alkoksi grupe. Alkoksi grupe primera uključuju, ali nisu ograničene na, metoksi, etoksi, propoksi (npr., n-propoksi i izopropoksi), i t-butoksi. Alkoksi takođe uključuje deuteroalkioksi kao što je OCD3. Slično, "alikiltio" ili "tioalkoksi" predstavlja alkil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem ugljenikovih atoma prikačenih preko sumpornog mosta; na primer metil-S- i etil-S-.

[0051] "Halo" ili "halogen" uključuje fluoro, hloro, bromo, i jodo. "Haloalkil" bi trebalo da uključi grupe zasićenih alifatičnih ugljovodonika i sa razgranatim i ravnim lancem koji imaju određen broj ugljenikovih atoma, koji su supstituisani sa 1 ili više halogena. Primeri haloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, pentahloroetil, 2,2,2-trifluoroetil, heptafluoropropil, i heptahloropropil. Primeri haloalkila takođe uključuju "fluoroalkil" koji bi trebalo da uključi grupe zasićenih alifatičnih ugljovodonika i sa razgranatim i ravnim lancem koji imaju određen broj ugljenikovih atoma, koji su supstituisani sa 1 ili više atoma fluora.

[0052] Termin "karbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -C(O)-.

[0053] Termin "cijano", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -CN.

[0054] Termin "haloalkil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na alkil grupu supstituisanu sa jednim, dva, tri ili četiri atoma halogena.

[0055] Termin "karbonil" odnosi se na C(=O).

[0056] Termin "karboksi" odnosi se na C(=O)OH.

[0057] Termin "hidroksi" ili "hidroksil" odnosi se na OH.

[0058] Termin "cikloalkil" odnosi se na ciklizovane alkil grupe, uključujući mono-, bi- ili poli-ciklične sisteme prstenova. "C3do C7cikloalkil" ili "C3-7cikloalkil" bi trebalo da uključi C3, C4, C5, C6, i C7cikloalkil grupe. Cikloalkil grupe kao primer uključuju, ali nisu ograničene na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i norbornil. Razgranate cikloalkil grupe kao što su 1-metilciklopropil i 2-metilciklopropil su obuhvaćene definicijom "cikloalkila".

[0059] Kao što je ovde korišćeno, termin "heterociklus" ili "heterociklični prsten" bi trebalo da označava stabilni 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-očlani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, ili 14-očlani policiklični heterociklični prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili potpuno nezasićen, i koji sadrži ugljenikove atome i 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma nezavisno odabranih od grupe koja se sastoje od N, O i S; i koji uključuje bilo koju policikličnu grupu u kojoj bilo koji od gore-definisanih heterocikličnih prstenova je fuzionisan za benzenov prsten. Azotovi i sumporni heteroatomi mogu po izboru biti oksidovani (tj., N→O i S(O)p, gde p je 0, 1 ili 2). Azotov atom može biti supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR gde R je H ili drugi supstituent, ako je definisano). Heterociklični prsten može biti prikačen za njegovu viseću grupu na bilo kom heteroatomu ili ugljenikovom atomu što rezultuje stabilnom strukturom. Heterociklični prstenovi opisani ovde mogu biti supstituisani na ugljenikovom ili azotovom atomu ako je dobijeno jedinjenje stabilno. Azot u heterociklusu može biti kvaternizovan. Poželjno je da kada ukupan broj S i O atoma u heterociklusu prevazilazi 1, tada ovi atomi nisu u blizi jedan drugom. Poželjno je da ukupan broj S i O atoma u heterociklusu nije veći od 1. Kada je korišćen termin "heterociklus", trebalo bi da obuhvati heteroaril.

[0060] Primeri heterociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, akridinil, azetidinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzizoksazolil, benzizotiazolil, benzimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrohinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, imidazolopiridinil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izatinoil, izobenzofuranil, izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izohinolinil, izotiazolil, izotiazolopiridinil, izoksazolil, izoksazolopiridinil, metilendioksifenil, morfolinil, naftiridinil, octahidroisohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolopiridinil, oksazolidinilperimidinil, oksindolil, pirimidinil, fenantridinil, fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksatiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolopiridinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazolil, piridoimidazolil, piridotiazolil, piridinil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2-pirolidonil, 2H-pirolil, pirolil, hinazolinil, hinolinil, 4H-hinolizinil, hinoksalinil, hinuklidinil, tetrazolil, tetrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tiazolopiridinil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, i ksantenil. Takođe obuhvaćena su i fuzionisana prstenasta i spiro jedinjenja koja sadrže, na primer, gornje heterocikluse.

[0061] Primeri 5- do 10-članog heterociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, pirazinil, piperazinil, piperidinil, imidazolil, imidazolidinil, indolil, tetrazolil, isoksazolil, morfolinil, oksazolil, oksadiazolil, oksazolidinil, tetrahidrofuranil, tiadiazinil, tiadiazolil, tiazolil, triazinil, triazolil, benzimidazolil, 1H-indazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benztetrazolil, benzotriazolil, benzizoksazolil, benzoksazolil, oksindolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benzizotiazolil, izatinoil, izohinolinil, oktahidroizohinolinil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, izoksazolopiridinil, hinazolinil, hinolinil, izotiazolopiridinil, tiazolopiridinil, oksazolopiridinil, imidazolopiridinil, i pirazolopiridinil.

[0062] Primeri 5- do 6- članog heterociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, pirazinil, piperazinil, piperidinil, imidazolil, imidazolidinil, indolil, tetrazolil, izoksazolil, morfolinil, oksazolil, oksadiazolil, oksazolidinil, tetrahidrofuranil, tiadiazinil, tiadiazolil, tiazolil, triazinil, i triazolil.

[0063] Kao što je ovde korišćeno, termin "aromatična heterociklična grupa" ili "heteroaril" bi trebalo da označava monociklične i policiklične aromatične ugljovodonike koji uključuju najmanje jedan član heteroatomskog prstena kao što je sumpor, kiseonik, ili azot. Heteroarilne grupe uključuju, bez ograničenja, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, hinolil, izohinolil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, piroil, oksazolil, benzofuril, benzotienil, benztiazolil, izoksazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, izotiazolil, purinil, karbazolil, benzimidazolil, indolinil, benzodioksolanil, i benzodioksan. Heteroaril grupe su supstituisane ili nesupstituisane. Azotov atom je supstituisan ili nesupstituisan (tj., N ili NR gde R je H ili drugi supstituent, ako je definisano). Azotni i sumporni heteroatomi mogu po izboru biti oksidovani (tj., N→O i S(O)p, gde p je 0, 1 ili 2).

[0064] Termin "kontra jon" je korišćen ad predstavu netivno naelektrisane vrste kao što su hlorid, bromid, hidroksid, acetat, i sulfat.

[0065] Kada je tačkasti prsten korišćen u sklopu strukture prstena, to označava da struktura prsteba može biti zasićena, delimično zasićena ili nezasićena.

[0066] Kao što je pomenuto ovde, termin"supstituisan" znači da je najmanje jedan vodonikov atom zamenjen sa ne-vodoničnom grupom, pod uslovom da se održe normalne valence i da supstitucija rezultuje stabilnim jedinjenjem. Kada je supstituent keto (tj., =O), tada su 2 vodonika na atomu zamenjena. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatičnim segmentima. Kada se kaže da je prstenasti sistem (npr., karbociklični ili heterociklični) supstituisan sa karbonil grupom ili dvostrukom vezom, trebalo bi da je karbonil grupa ili dvostruka veza deo (tj., unutar) prstena. Dvostruke veze u prstenu, kao što je ovde korišćeno, su dvostruke veze koje su formirane između dva susedna atoma u prstenu (npr., C=C, C=N, ili N=N).

[0067] U slučajevima gde su azotovi atomi (npr., amini) na jedinjenjima predmetnog pronalaska, ovi mogu biti konvertovani u N-okside tretmanom sa oksidujućim agensom (npr., mCPBA i/ili vodonik peroksidi) da se dobiju jedinjenja ovog pronalaska. Prema tome, smatra se da prikazani i azotovi atomi za koje je tražena zaštita pokrivaju i prikazuju azot i njegove N-oksid (N→O) derivate.

[0068] Kada se neka promenljiva javlja više od jednog puta u bilo kom konstituentu ili formuli za jedinjenje, njegova definicija u svakom slučaju je nezavisna od njegove definicije u svakom drugom slučaju. Tako, na primer, ako je grupa pokazana da je supstituisana sa 0-3 R grupe, onda se navedena grupa može po izboru supstituisati sa do tri R grupe, i u svakom slučaju R je odabrano nezavisno od definicije za R. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultiraju stabilnim jedinjenjima.

[0069] Kada je pokazano da veza sa supstituentom prelazi vezu koja povezuje dva atoma u prstenu, onda takav supstituent može biti vezan za bilo koji atom na prstenu. Kada je supstituent naveden bez naznačavanja atoma u kojem je takav supstituent vezan za ostatak jedinjenja date formule, onda takav supstituent može biti vezan preko bilo kojeg atoma u takvom supstituentu. Kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultiraju stabilnim jedinjenjima.

[0070] Fraza "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da se odnosi na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru ispravnog medicinskog procenjivanja, pogodni za primenu u kontaktu sa tkivima ljudskih bića i životinja bez prekomerne toksičnost, iritacije, alergijskog odgovora, i/ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno razumnom odnosu korist/rizik.

[0071] Kao što je ovde korišćeno, "farmaceutski prihvatljive soli" odnose se na derivate jedinjenja stavljenih na uvid javnosti gde je parentalno jedinjenje modifikovano pravljenjem njegovih kiselih ili baznih soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralne ili organske kisele soli bazinih grupa kao što su amini; i alkalne ili organske soli kiselih grupa kao što su karboksilne kiseline. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijum soli parentalnog jedinjenja formiranog, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju one izvedene od neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfaminska, fosforna, i azotna; i soli pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, sukcinska, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, tartarična, limunska, askorbinska, pamoična, maleinska, hidroksimaleinska, fenilsirćetna, glutaminska, benzoeva, salicilna, sulfanilna, 2-acetoksibenzoeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna, i izetionska.

[0072] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu se sintetisati iz parentalnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli segment pomoću konvencionalnih hemijskih metoda. Generalno, takve soli mogu biti pripremljene reakcijom slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva; generalno, poželjni su nevodeni medijumi poput etra, etil acetata, etanola, izopropanola, ili acetonitrila. Pronađene su liste pogodnih soli u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izdanje, Mack Publishing Company, Easton, PA (1990), čija objava je ovim uključena pomoću reference.

[0073] Dodatno, jedinjenja mogu imati oblike prolekova. Bilo koje jedinjenje koje će biti konvertovano in vivo da obezbedi bioaktivni agens je prolek kao što je stavljeno ovde na uvid javnosti. Razni oblici prolekova su dobro poznati u oblasti. Za primere takvih prolekova, videti:

a) Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), i Widder, K. et al., urednici., Metods in Enzymology, 112:309-396, Academic Press (1985);

b) Bundgaard, H., Poglavlje 5: "Design and Application of Prodrugs", A Textbook of Drug Design and Development, str. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., urednici, Harwood Academic Publishers (1991);

c) Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);

d) Bundgaard, H. et al., J. Pharm. Sci., 77:285 (1988); i

e) Kakeya, N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984).

[0074] Jedinjenja koja sadrže karbooksi grupu mogu formirati fiziološki hidrolizabilne estre koji služe kao prolekovi tako što se hidrolizuju u organizmu kako bi se dobila karboksi jedinjenja per se. Ovakvi prolekovi se poželjno administriraju oralno pošto se hidroliza u mnogim slučajevima uglavnom javlja pod uticajem digestivnih enzima. Parenteralna administracija može biti korišćena tamo gde je estar per se aktivan, ili u onim slučajevima kada se u krvi javlja hidroliza. Primeri fiziološki hidrolizabilnih estara karboksi jedinjenja uključuje C1-6alkil, C1-6alkilbenzil, 4-metoksibenzil, indanil, ftalil, metoksimetil, C1-6alkanoiloksi-C1-6alkil (npr., acetoksimetil, pivaloiloksimetil ili propioniloksimetil), C1-

6alkoksikarboniloksi-C1-6alkil (npr., metoksikarbonil-oksimetil ili etoksikarboniloksimetil, gliciloksimetil, fenilgliciloksimetil, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)-metil), i drugi dobro poznati fiziološki hidrolizabilni estri korišćeni, na primer, u oblastima penicilina i cefalosporina. Takvi estri mogu biti pripremljeni konvencionalnim tehnikama koje su poznate u oblasti.

[0075] Pripremanje prolekova je dobro poznato u oblasti i opisano u, na primer, King, F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK (1994); Testa, B. et al., Hidrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry i Enzymology, VCHA i Wiley-VCH, Cirih, Švajcarska (2003); Wermuth, C.G., ed., The Practice of Medicinal Chemistry, Academic Press, San Dijego, CA (1999).

[0076] Predmetni pronalazak bi trebalo da obuhvati sve izotope atoma koji se javljaju u predmetnim jedinjenjima. Izotopi obuhvataju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Putem opšteg primera i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum i tricijum. Deuterijum ima jedan proton i jedan neutron u njegovom nukleusu i ima dva puta masu običnog vodonika. Deuterijum može biti predstavljen simbolima kao što su "<2>H" ili "D". Termin"deuterisan" ovde, sam po sebi ili korišćen da modifikuje jedinjenje ili grupu, odnosi se na zamenu jednog ili više atoma vodonika, koji je prikačen za ugljenik(e), sa atomom deuterijuma. Izotopi ugljenika obuhvataju<13>C i<14>C.

[0077] Izotopski-obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se generalno pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim prosečnim poznavaocima oblasti ili procesima analognim onima opisanim ovde, koristeći odgovarajući izotopski-obeležene reagense umesto neobeleženih reagenasa koji se inače koriste. Takva jedinjenja imaju različite potencijalne primene, npr. kao standardi i reagensi u određivanju sposobnosti potencijalnog farmaceutskog jedinjenja da se veže na ciljne proteine ili receptore, ili za imidžing (snimanje) jedinjenja iz ovog pronalaska vezanih za biološke receptore in vivo ili in vitro.

[0078] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" trebaju da označe jedinjenje koje je dovoljno snažno da preživi izolaciju do korisnog stepena čistoće iz reakcione smeše, i formulaciju u efikasan terapijski agens. Poželjno je da jedinjenja predmetnog pronalaska ne sadrže N-halo, S(O)2H, ili S(O)H grupu.

[0079] Termin "solvat" označava fizičku povezivanje jedinjenja sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskih ili neorganskih. Ovo fizičko povezivanje uključuje vezivanje vodonika. U određenim slučajevima solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer kada jedan ili više molekula rastvarača budu inkorporirani u kristalnu mrežu kristalne čvrste supstance. Molekuli rastvarača u solvatu mogu biti prisutni u regularnom aranžmanu i/ili ne-određenom aranžmanu. Solvat može sadržati ili stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu molekula rastvarača. "Solvat" obuhvata i solvate u fazi rastvora i solvate koji se mogu izolovati. Solvati koji služe kao primer uključuju, ali nisu ograničeni na, hidrate, etanolate, metanolate, i izopropanolate. Metode solvacije su opšte poznate u oblasti.

[0080] Skraćenice kao što je ovde korišćeno, su definisane kao što sledi: "1 x" za jednom, "2 x" za dva puta, "3 x" za tri puta, "°C" za stepene Celzijusa, "eks" za ekvivalent ili ekvivalente, "g" za gram ili grame, "mg" za miligram ili miligrame, "L" za litar ili litre, "mL" za mililitar ili mililitre, "µL" za mikrolitar ili mikrolitre, "N" za normalni, "M" za molarni, "mmol" za milimol ili milimole, "min" za minut ili minute, "h" za sat ili sate, "rt" za sobnu temperaturu, "RT" za vreme retencije, "RBF" za sud sa okruglim dnom (round bottom flask), "atm" za atmosferu, "psi" za funte po kvadratnom inču, "konc." za koncentrat, "RCM" za metatezu zatvaranja prstena, "zas" ili "zasić" za zasićeni, "SFC" za superktiričnu fluidnu hromatografiju "MW" za molekulsku masu, "mp" za tačku topljenja, "ee" za enantiomerni višak, "MS" ili "Mas Spek" za masenu spektrometriju, "ESI" za elektrosprej jonizacionu masenu spektroskopiju, "HR" za visoku rezoluciju, "HRMS" za masenu spektrometriju visoke rezolucije, "LCMS" tečna hromatografija sa masenom spektrometrijom, "HPLC" za tečnu hromatografiju pod visokim pritiskom, "RP HPLC" za HPLC na reverznoj fazi, "TLC" ili "tlc" za tankoslojnu hromatografiju, "NMR" za nuklearnu magnetnu rezonantnu spektroskopiju, "nOe" za spektroskopiju nuklearnog Overhauser-ovog efekta, "<1>H" za proton, "δ" za delta, "s" za singlet, "d" za dublet, "t" za triplet, "q" za kvartet, "m" za multiplet, "br" za širok, "Hz" za herc, i "α", "β", "R", "S", "E", i "Z" su stereohemijske oznake poznate prosečnom poznavaocu oblasti.

Me metil

Et etil

Pr propil

i-Pr izopropil

Bu butil

i-Bu izobutil

t-Bu terc-butil

Ph fenil

Bn benzil

Boc ili BOC terc-butiloksikarbonil

Boc2O di-terc-butil dikarbonat

AcOH ili HOAc sirćetna kiselina

AlCl3aluminijum hlorid

AIBN azobisizobutironitril

BBr3bor tribromid

vod vodeni

BCl3bor trihlorid

BEMP 2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilperhidro-1,3,2-diazafosforin

BOP reagens benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat

Burgess-ov reagens 1-metoksi-N-trietilammoniosulfonil-metanimidate Cbz karbobenziloksi

DCM ili CH2Cl2dihlorometan

CH3CN ili CAN acetonitril

CDCl3deutero-hloroform

CHCl3hloroform

mCPBA ili m-CPBA meta-hloroperbenzoeva kiselina

Cs2CO3cezijum karbonat

Cu(OAc)2bakar (II) acetat

Cy2NMe N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamin

CuI bakar(I) jodid

CuSO4bakar(II) sulfat

DBU 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en

DCE 1,2 dihloroetan

DEA dietilamin

Dess-Martin 1,1,1-tris(acetiloksi)-1,1-dihidro-1,2-beniziodoksol-3-(1H)-on

DIC ili DIPCDI diizopropilkarbodiimid

DIEA, DIPEA ili Hunig-ova baza diizopropiletilamin

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DME 1,2-dimetoksietan

DMF dimetil formamid

DMSO dimetil sulfoksid

cDNK komplementarna DNK

Dppp (R)-(+)-1,2-bis(difenilfosfino)propan

DuPhos (+)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dietilfosfolano)benzen EDC N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid EDCI N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimidehidrohlorid

EDTA etilendiaminetetrasirćetna kiselina

(S,S)-EtDuPhosRh(I) (+)-1,2-bis((2S,SS)-2,5-dietilfosfolano)benzen(1,5-ciklooktadiene)rodijum(I) trifluorometansulfonat Et3N ili TEA trietilamin

EtOAc etil acetat

Et2O dietil etar

EtOH etanol

GMF filter od staklenih mikrovlakana

Grubbs II (1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden)dihloro (fenilmetilen)(triicikloheksilfosfin)rutenijum

HCl hlorovodonična kiselina

HAUT O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

HEPES 4-(2-hidroksietil)piperazin-1-etansulfonska kiselina Heks heksan

HOBt ili HOBT 1-hidroksibenzotriazol

H2O2vodonik peroksid

H2SO4sumporna kiselina

IBX 2-jodoksibenzoeva kiselina

InCl3Indijum(III) hlorid

Jones reagens CrO3u vodenoj H2SO4, 2 M

K2CO3kalijum karbonat

K2HPO4kalijum fosfat dibazni

K3PO4kalijum fosfat tribazni

KOAc kalijum acetat

K3PO4kalijum fosfat

LAH litijum aluminjum hidrid

LG odlazeća grupa

LiOH litijum hidroksid

MeOH metanol

MgSO4magnezijum sulfat

MsOH ili MSA metilsulfonska kiselina

NaCl natrijum hlorid

NaH natrijum hidrid

NaHCO3natrijum bikarbonat

Na2CO3natrijum karbonat

NaOH natrijum hidroksid

Na2SO3natrijum sulfit

Na2SO4natrijum sulfat

NBS N-bromosukcinimid

NCS N-hlorosukcinimid

NH3amonijak

NH4Cl amonijum hlorid

NH4OH amonijum hidroksid

NH4COOH amonijum format

NMM N-metilmorfolin

OTf triflat ili trifluorometansulfonat

Pd2(dba)3tris(dibenzilideneaceton)dipaladijum(0) Pd(OAc)2paladijum(II) acetat

Pd/C paladijum na ugjleniku

Pd(dppf)Cl2[1,1'-bis(difenilfosfino)-ferocen]dihloropaladijum(II) Ph3PCl2trifenilfosfin dihlorid

PG zaštitna grupa

POCl3fosfor oksihlorid

i-PrOH ili IPA izopropanol

PS Polistiren

rt sobna temperatura

SEM-Cl 2-(trimetisilil)etoksimetil hlorid

SiO2silicijum dioksid

SnCl2kalaj(II) hlorid

TBAI tetra-n-butilamonijum jodid

TBN t-butil nitrit

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TMSCHN2trimetilsilildiazometan

T3P® anhidrid propan fosfonske kiseline

TRIS tris (hidroksimetil) aminometan

pTsOH p-toluensulfonska kiselina

[0081] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena na nekoliko načina poznatih prosečnom poznavaocu oblasti organske sinteze, koji su opisani u više detalja u Odeljku VI.

IV. BIOLOGIJA

[0082] Dok je krvna koagulacija neophodna za regulisanje hemostaze organizma, ona je takođe uključena u mnoga patološka stanja. Kod tromboze, krvni ugrušak, ili tromb, može da se formira i ometa cirkulaciju lokalno, što uzrokuje ishemiju i oštećenje organa. Alternativno, u procesu poznatom kao embolija, ugrušak se može ukloniti, a kasnije postati zarobljen u distalnom sudu, gde ponovo izaziva ishemiju i oštećenje organa. Bolesti nastale zbog formiranja patološkog tromba se kolektivno nazivaju tromboembolijski poremećaji i uključuju akutni koronarni sindrom, nestabilnu anginu, miokardijalni infarkt, atrijalnu fibrilaciju, trombozu u šupljini srca, ishemijski moždani udar, duboku vensku trombozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, prolazni ishemijski napad, i plućnu emboliju. Pored toga, tromboza se javlja na veštačkim površinama u kontaktu sa krvlju, uključujući katetere, stentove, veštačke srčane zaliske, i membrane za hemodijalizu.

[0083] Neka stanja doprinose riziku od razvijanja tromboze. Na primer, promene zida suda, promene u toku krvi, i izmene kompozicije vaskularnog odeljka. Ovi faktori rizika su kolektivno poznati kao trijada Virhova (Colman, R.W. et al., urednici, Hemostasis and Thrombosis, Basic Principles and Clinical Practice, Peto izdanje, str. 853, Lippincott Williams & Wilkins (2006)).

[0084] Antitrombotički agensi se često daju pacijentima sa rizikom od razvoja tromboembolijske bolesti zbog prisustva jednog ili više predispozicionih faktora rizika iz trijade Virhova da bi se sprečilo stvaranje okluzivnog tromba (primarna prevencija). Na primer, u ortopedskim operacijama (npr. zamena kuka i kolena), antitrombotički agens se često primenjuje pre hirurške procedure. Antitrombotički agens izjednačava protrombotički stimulus koji je izvršen promenama vaskularnog toka (staza), potencijalnu hiruršku povredu zida suda, kao i promene u kompoziciji krvi zbog akutnog faznog odgovora koji se odnosi na operaciju. Još jedan primer upotrebe antitrombotičkog agensa za primarnu prevenciju je doziranje sa aspirinom, inhibitorom aktivacije trombocita, kod pacijenata sa rizikom za nastanak trombotičkog kardiovaskularnog oboljenja. Dobro prepoznati faktori rizika u ovim okolnostima uključuju starost, muški pol, hipertenziju, dijabetes melitus, lipidne promene, i gojaznost.

[0085] Antitrombotički agensi su takođe indikovani za sekundarnu prevenciju, nakon inicijalne trombotičke epizode. Na primer, pacijenti sa mutacijama u faktoru V (poznatiji i kao faktor V Leiden) i dodatni faktori rizika (npr., trudnoća), su dozirani sa antikoagulansima kako bi se sprečilo ponovno pojavljivanje venske tromboze. Drugi primer zahteva sekundarnu prevenciju kardiovaskularnih događaja kod pacijenata sa istorijom akutnog miokardijalnog infarkta ili akutnog koronarnog sindroma. U kliničkom okruženju, kombinacija aspirina i klopidogrela (ili drugih tienopiridina) može biti upotrebljena da spreči drugi trombotički događaj.

[0086] Antitrombotički agensi su takođe dati da se tretira stanje bolesti (tj., zaustavljanjem njenog razvoja) nakon što je već započela. Na primer, pacijenti koji imaju duboku vensku trombozu su tretirani sa antikoagulansima (tj., heparin, varfarin, ili LMVH) kako bi se sprečio dalji rast venske okluzije. Tokom vremena, ovi agensi takođe uzrokuju regresiju stanja bolesti jer se ravnoteža između protrombotičkih faktora i antikoagulantnih/ profibrinolitičkih puteva menja u korist drugog. Primeri arterijskog vaskularnog kreveta uključuju lečenje pacijenata sa akutnim miokardijalnim infarktom ili akutnim koronarnim sindromom sa aspirinom i klopidogrelom kako bi se sprečio dalje rast vaskularnih okluzija i na kraju vođenje do regresije trombotičkih okluzija.

[0087] Tako se antitrombotički agensi široko koriste za primarnu i sekundarnu prevenciju (tj., profilaksu ili smanjenje rizika) tromboembolijskih poremećaja, kao i lečenje već postojećeg trombotičkog procesa. Lekovi koji inhibiraju krvnu koagulaciju, ili antikoagulansi, su "ključni agensi za prevenciju i lečenje tromboembolijskih poremećaja" (Hirsh, J. et al., Blood, 105:453-463 (2005)).

[0088] Alternativni put inicijacije koagulacije je operativan kada je krv izložena veštačkim površinama (npr., tokom hemodijalize, "on-pump" („na pumpi“ - prisustvo mašine koja menja funkciju srca) kardiovaskularne operacije, graftova sudova, bakterijske sepse), na ćelijskim površinama, ćelijskim receptorima, ćelijskom debriju, DNK, RNK i esktraćelijskim matriksima. Ovak proces je takođe nazvan kontaktna aktivacija. Površinska apsorpcija faktora XII vodi ka konformacionoj promeni u molekulu faktora XII, time olakšavajući aktivaciju za proteolitički aktivne molekule faktora XII (faktor XIIa i faktor XIIf). Faktor XIIa (ili XIIf) ima nekoliko ciljnih proteina, uključujući prekalikrein plazme i faktor XI. Aktivni kalikrein plazme dalje aktivira faktor XII, vodeći ka amplifikaciji kontaktne aktivacije. Alternativno, prolilkarboksilpeptidaza serin proteaze može da aktivira kalikrein plazme koji je u kompleksu sa kininogen velike molekulske mase u multiproteinskom kompleksu koji je formiran na površini ćelija i matriksima (Shariat-Madar et al., Blood, 108:192-199 (2006)). Kontaktna aktivacija je površinski posredovan proces odgovoran delom za regulaciju tromboze i inflamacije, i posredovan je, barem delom, pomoću fibrinolitičkih-, komplementarnih-, kininogen/kinin-, i drugih humoralnih i ćelijskih puteva (za pregled, Coleman, R., "Contact Activation Pathway", Hemostasis and Thrombosis, str. 103-122, Lippincott Williams & Wilkins (2001); Schmaier, A.H., "Contact Activation", Thrombosis and Hemorrhage, str.105-128 (1998)). Biološka relevantnost sistema kontaktne aktivacije za tromboembolijske bolesti je podržana fenotipom miševa koji su deficijenti za faktor XI. Specifičnije, miševi koji su deficijenti za faktor XII su zaštićeni od trombotičke vaskularne okluzije u nekoliko modela tromboze kao i u modelima moždanog udara i fenotip miševa koji su deficijenti za faktor XII je identičan sa miševima koji su deficijenti za XI (Renne et al., J.

Exp. Med., 202:271-281 (2005); Kleinschmitz et al., J. Exp. Med., 203:513-518 (2006)). Činjenica da je XI nizvodno od faktora XIIa, kombinovano sa identičnim fenotipom miševa deficijentnih za XII i XI ukazuje na to da sistem kontaktne aktivacije igra glavnu ulogu u aktivaciji faktora XI in vivo.

[0089] Faktor XI je zimogen tripsinu slične serin proteaze i prisutan je u plazmi u relativno niskoj koncentraciji. Proteolitička aktivacija kod unutrašnje R369-I370 veze daje teški lanac (369 amino kiselina) i laki lanac (238 amino kiselina). Ovaj drugi sadrži tipičnu tripsinu sličnu katalitičku trijadu (H413, D464, i S557). Veruje se da se aktivacija faktora XI trombinom javlja na negativno naelektrisanim površinama, najverovatnije na površini aktiviranih trombocita. Trombociti sadrže specifične lokacije visokog afiniteta (0,8 nM) (130-500/trombocita) za aktivirani faktor XI. Nakon aktivacije, faktor XIa ostaje površinski vezan i prepoznaje faktor IX kao njegov normalan makromolekularni supstrat. (Galiani, D., Trends Cardiovasc. Med., 10:198-204 (2000)).

[0090] Pored povratnih aktivacionih mehanizama opisanih iznad, trombin aktivira inhibitor fibrinolize aktiviran trombinom (TAFI), karboksipeptidazu plazme koja cepa C-terminalne lizisnke i argininske ostatke na fibrinu, smanjujući sposobnost fibrina da poboljša aktivaciju plazminogena zavisnu od aktivatora plazminogena tkivnog tipa (tPA). U prisustvu antitela na FXIa, liza ugruška se može javiti brže nezavisno od koncentracije TAFI u plazmi. (Bouma, B.N. et al., Thromb. Res., 101:329-354 (2001).) Prema tome, očekivano je da inhibitori faktora XIa budu antikoagulantni i profibrinolitički.

[0091] Dodatni dokaz za anti-tromboembolijske efekte ciljanja faktora XI je izveden iz miševa koji su deficijenti za faktor XI. Pokazano je da su kompletni fXI deficijentni miševi zaštićeni od feri hloridom (FeCl3)-indukovane karotidne arterijske tromboze (Rosen et al., Thromb. Haemost., 87:774-777 (2002); Wang et al., J. Thromb. Haemost., 3:695-702 (2005)). Takođe, deficijentnost u faktoru XI spašava perinatalni letalni fenotip kompletne protein C deficijencije (Chan et al., Amer. J. Pathology, 158:469-479 (2001)). Pored toga, unakrsno reaktivna antitela babuna koja blokiraju funkciju za humani faktor XI štite protiv tromboze arterijsko-venskog šanta (Gruber et al., Blood, 102:953-955 (2003)). Dokaz za antitrombotički efekat malih molekulskih inhibitora faktora XIa je takođe stavljen an uvid javnosti u objavljenoj Američkoj patentnoj publikaciji br. 2004/0180855 A1. Uzete zajedno ove studije ukazuju da će ciljanje faktora XI smanjiti sklonost ka trombotičkim i tromboembolijskim bolestima.

[0092] Genetski dokazi pokazuju da faktor XI nije potreban za normalnu homeostazu, što implicira superiorni sigurnosni profil mehanizma faktora XI u poređenju sa konkurentskim antitrombotičkim mehanizmima. Za razliku od hemofilije A (deficijentnost faktora VIII) ili hemofilije B (deficijentnost faktora IX), mutacije gena faktora XI koji uzrokuju deficijentnost faktora XI (hemofilija C) rezultiraju samo blagom do umerenom dijatezom krvarenja koja se primarno karakteriše postoperativnim ili posttraumatskim, ali retko spontanim krvarenjem. Postoperativno krvarenje se javlja uglavnom u tkivu sa visokim koncentracijama endogene fibrinolitičke aktivnosti (npr., usna šupljina, i urogenitalni sistem). Većina slučajeva se slučajno identifikuje preoperativnim produžavanjem aPTT (unutrašnji sistem) bez prethodne istorije krvarenja.

[0093] Povećana sigurnost inhibicije XIa kao antikoagulantne terapije je dodatno podržana činjenicom da Faktor XI nokaut („knock-out“) miševi, koji nemaju detektabilni protein faktora XI, prolaze kroz normalan razvoj, i imam normalan životni vek. Nisu zabeleženi dokazi o spontanom krvarenju. aPTT (unutrašnji sistem) se produžava na način koji zavisi od doze. Interesantno, čak i nakon teške stimulacije sistema koagulacije (transekcija repa), vreme krvarenja nije značajno produženo u poređenju sa srodnicima (članovima legla) divljeg tipa i heterozigotnim. (Gailani, D., Frontiers in Bioscience, 6:201-207 (2001); Gailani, D. et al., Blood Koagulacija i Fibrinolysis, 8:134-144 (1997).) Uzeta zajedno, ova zapažanja ukazuju na to da visoke nivoe inhibicije faktora XIa treba dobro tolerisati. Ovo je u suprotnosti sa eksperimentima ciljanja gena sa drugim faktorima koagulacije, izuzimajući faktor XII.

[0094] In vivo aktivacija faktora XI može biti određena formacijom kompleksa sa ili C1 inhibitorom ili alfa 1 antitripsinom. U studiji od 50 pacijenata sa akutnim miokardijalnim infarktom (AMI), približno 25% pacijenata je imalo vrednosti iznad gornjeg normalnog opsega ELISA kompleksa. Ova studija se može videti kao dokaz da barem u pod populaciji pacijenata sa AMI, aktivacija faktora XI doprinosi formaciji trombina (Minnema, M.C. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 20:2489-2493 (2000)). Druga studija uspostavlja pozitivnu korelaciju između stepena koronarne ateroskleroze i faktora XIa u kompleksu sa alfa 1 antitripsinom (Murakami, T. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 15:1107-1113 (1995)). U drugoj studiji, nivoi Faktora XI iznad 90. percentila kod pacijenata su povezani sa 2.2-strukim povećanjem rizika za vensku trombozu (Meijers, J.C.M. et al., N. Engl. J. Med., 342:696-701 (2000)).

[0095] Takođe, poželjno je naći nova jedinjenja sa poboljšanom aktivnošću u in vitro esejima zgrušavanja, u poređenju sa poznatim inhibitorima serin proteaze, kao što su esej aktiviranog delimičnog tromboplastinskog vremena (aPTT) ili protrombinskog vremena (PT). (za opis aPTT i PT eseja pogledati, Goodnight, S.H. et al., "Screening Tests of Hemostasis", Disorders of Thrombosis and Hemostasis: A Clinical Guide, Drugo izdanje, str. 41-51, McGraw-Hill, Njujork (2001)).

[0096] Takođe je poželjno i bolje da se pronalaze jedinjenja sa povoljnim i poboljšanim karakteristikama u poređenju sa poznatim inhibitorima serin proteaze u jednoj ili više od sledećih kategorija koje su date kao primeri, i nisu namenjeni da budu ograničavajući: (a) farmakokinetičke osobine, uključujući oralnu biodostupnost, polu život, klirens; (b) farmaceutske osobine; (c) zahtevi za doziranje; (d) faktori koji smanjuju odnos najveće prema najmanjoj (peak-to-trough) koncentraciji u krvi; (e) faktori koji povećavaju koncentraciju aktivnog leka na receptoru; (f) faktori koji smanjuju odgovornost za kliničku interakciju leka sa lekom; (g) faktori koji smanjuju potencijal za štetne neželjene efekte, uključujući selektivnost u odnosu na druge biološke ciljeve; i (h) faktori koji poboljšavaju troškove proizvodnje ili izvodljivost.

[0097] Pre-kliničke studije pokazale su značajne antitrombotičke efekte malih molekulskih inhibitora faktora XIa u modelima zeca i pacova arterijske i venske tromboze, u dozama koje su očuvale hemostazu. Wong P.C. et al., Journal of Trombosis and Thrombolysis, 32(2):129-137 (Avg. 2011); Schumacher, W.A. et al., Eur. J. Pharmacol., 167-174 (2007)). Pored toga, opaženo je da in vitro produžavanje aPTT pomoću specifičnih XIa inhibitora je dobar predskazivač efikasnosti u našim modleima tromboze. Tako, in vitro aPTT test može biti korišćen kao surogat za efikasnost in vivo. Pre-kliničke i kliničke studije koje koriste FXI antisens (ASO) su pokazane kao efikasne u raznim modelima venske i arterijske tromboze, uporedivo sa varfarinom ili enoksaparinom betz povećanog krvarenja (Bueller et al., DOI: 10.1056/NEJMoa1405760 (2014)).

[0098] Kao što je ovde korišćeno, termin "pacijent" obuhvata sve vrste sisara.

[0099] Kao što je ovde korišćeno, "lečenje" ili "tretman" pokriva lečenje stanja bolesti kod sisara, naročito čoveka, i obuhvata: (a) inhibiciju stanja bolesti, tj., zaustavljanje njenog razvoja; i/ili (b) slabljenje stanja bolesti, tj., uzrokovanje regresije stanja bolesti.

[0100] Kao što je ovde korišćeno, "profilaksa" ili "prevencija" pokriva preventivni tretman subkliničkog stanja bolesti kod sisara, naročito kod čoveka, usmereno na smanjivanje verovatnoće javljanja kliničkog stanja bolesti. Pacijenti su izabrani za preventivnu terapiju zasnovanu na faktorima za koje je poznato da povećavaju rizik od podleganja kliničkom stanju bolesti u poređenju sa opštom populacijom. Terapije "profilakse" mogu se podeliti na (a) primarnu prevenciju i (b) sekundarnu prevenciju. Primarna prevencija se definiše kao tretman kod subjekta koji još uvek nije predstavljen sa kliničkim stanjem bolesti, dok je sekundarna prevencija definisana kao sprečavanje druge pojave istog ili sličnog kliničkog stanja bolesti.

[0101] Kao što je ovde korišćeno, "smanjenje rizika" pokriva terapije koje snižavaju incidencu razvoja kliničkog stanja bolesti. Kao takve, primarne i sekundarne terapije su primeri smanjenja rizika.

[0102] "Terapijski efikasna količina" bi trebala uključiti količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja je efikasna kada se daje samostalno ili u kombinaciji da inhibira faktor XIa i ili kalikrein plazme i/ili da spreči ili tretira poremećaje navedene ovde. Kada se primeni na kombinaciju, termin se odnosi na kombinovane količine aktivnih sastojaka koji rezultiraju u preventivnom ili terapijskom efektu, bilo da se administriraju u kombinaciji, serijski ili istovremeno.

[0102] Termin "tromboza", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na nastanak ili prisustvo tromba (množ. trombova); zgrušavanje unutar krvnog suda koje može izazvati ishemiju ili infarkt tkiva koje snabdeva sud. Termin "embolija", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na iznenadno blokiranje arterije ugruškom ili stranim materijalom koji je doveden na njegovo mesto na kojem se nalazi krvna struja. Termin "tromboembolija", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na opstrukciju krvnog suda sa trombotičkim materijalom koji nosi struja krvi sa mesta porekla da začepi drugi sud. Termin "tromboembolijski poremećaji" podrazumeva i "trombotične" i "embolijske" poremećaje (definisane gore).

[0104] Termin"tromboembolijski poremećaji" kao što je ovde korišćeno uključuje arterijske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, venske kardiovaskularne ili cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje, i tromboembolijske poremećaje u komorama srca ili u perifernoj cirkulaciji. Termin "tromboembolijski poremećaji" kao što je ovde korišćeno takođe uključuje specifične poremećaje odabrane od, ali bez ograničenja na, nestabilnu anginu ili druge akutne koronarne sindrome, atrijalnu fibrilaciju, prvi ili rekurentni miokardijalni infarkt, ishemijsku iznenadnu smrt, prolazni ishemijski napad, moždani udar, aterosklerozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, vensku trombozu, duboku vensku trombozu, tromboflebitis, koronarnu arterijsku trombozu, cerebralnu arterijsku trombozu, cerebralnu emboliju, bubrežnu emboliju, plućnu emboliju, i trombozu koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja izaziva trombozu. Medicinski implanti ili uređaji uključuju, ali nisu ograničeni na: protične zaliske, veštačke zaliske, zatvorene katetere, stentove, krvne oksigenatore, šantove, vaskularne pristupne portove, ventrikularne pomoćne uređaje i veštačka srca ili komore srca, i graftove sudova. Procedure uključuju, ali nisu ograničene na: kardioplućni bajpas, perkutanu koronarnu intervenciju, i hemodijalizu. U još jednom tehničkom rešenju, termin "tromboembolijski poremećaji" uključuje akutni koronarni sindrom, moždani udar, duboku vensku trombozu, i plućnu emboliju.

[0105] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za lečenje tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, miokardijalnog infarkta, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, duboke venske tromboze, tromboflebitisa, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja izaziva trombozu. U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za lečenje tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, venske tromboze, atrijalne fibrilacije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata i uređaja.

[0106] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za primarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, miokardijalnog infarkta, ishemijske iznenadne smrti, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, duboke venske tromboze, tromboflebitisa, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja izaziva trombozu. U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za primarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, venske tromboze, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata i uređaja.

[0107] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za sekundarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, rekurentnog miokardijalnog infarkta, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, duboke venske tromboze, tromboflebitisa, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja izaziva trombozu. U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje metodu za sekundarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, atrijalne fibrilacije i venske tromboze.

[0108] Termin"moždani udar", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na embolijski moždani udar ili aterotrombotički moždani udar koji nastaje od okluzivne tromboze u zajedničkoj karotidnoj arteriji (carotis communis), unutrašnjoj karotidnoj arteriji (carotis interna) ili intracerebralnim arterijama.

[0109] Primećeno je da tromboza uključuje okluziju krvnih sudova (npr., nakon bajpasa) i ponovnu okluziju (npr. tokom ili posle perkutane transluminalne koronarne angioplastike). Tromboembolijski poremećaji mogu biti rezultat stanja koja uključuju ali bez ograničenja na aterosklerozu, operaciju ili hirurške komplikacije, produženu imobilizaciju, arterijsku fibrilaciju, urođenu trombofiliju, kancer, dijabetes, efekte lekova ili hormona, i komplikacije trudnoće.

[0110] Tromboembolijski poremećaji su često povezani sa pacijentima sa aterosklerozom. Faktori rizika za aterosklerozu uključuju ali nisu ograničeni na muški pol, starost, hipertenziju, lipidne poremećaje, i dijabetes melitus. Faktori rizika za aterosklerozu su istovremeno i faktori rizika za komplikacije ateroskleroze, tj. tromboembolijske poremećaje.

[0111] Slično, arterijska fibrilacija je često povezana sa tromboembolijskim poremećajima. Faktori rizika za arterijsku fibrilaciju i naknadne tromboembolijske poremećaje uključuju kardiovaskularni bolest, reumatsku srčana bolest, nereumatsku bolest mitralnog zaliska, hipertenzivnu kardiovaskularnu bolest, hroničnu bolest pluća, i razne ostale srčane abnormalnosti kao i tireotoksikozu.

[0112] Dijabetes melitus je često povezan sa aterosklerozom i tromboembolijskim poremećajima. Faktori rizika za češći tip 2 uključuju ali nisu ograničeni na porodičnu istoriju, gojaznost, fizičku neaktivnost, rasu / etničku pripadnost, prethodno poremećenu glukozu nakon posta ili testa tolerancije na glukozu, istoriju gestacionog dijabetes melitusa ili rađanje "velike bebe", hipertenziju , nizak HDL holesterol, i sindrom policističnih jajnika.

[0113] Faktori rizika za kongenitalnu trombofiliju uključuju dobijanje funkcionalnih mutacija u faktorima koagulacije ili gubitak funkcionalnih mutacija u antikoagulantnim ili fibrinolitičkim patevima.

[0114] Tromboza je povezana sa raznim vrstama tumora, npr. tumorom pankreasa, kancerom dojke, tumorima mozga, kancerom pluća, kancerom ovarijuma, kancerom prostate, gastrointestinalnim malignitetima, i Hočkinovim ili ne-Hočkinovim limfomom. Nedavne studije ukazuju na to da učestalost kancera kod pacijenata sa trombozom reflektuje učestalost posebne vrste kanceta u opštoj populaciji Levitan, N. et al., Medicine (Baltimore), 78(5):285-291 (1999); Levine M. et al., N. Engl. J. Med., 334(11):677-681 (1996); Blom, J.W. et al., JAMA, 293(6):715-722 (2005)). Prema tome, najčešći kanceri povezani sa trombozom kod muškaraca su kancer prostate, debelog creva, mozga, i pluća, i kod žena su kancer dojke, jajnika, i pluća. Zapažena stopa venske tromboembolije (VTE) kod pacijenata sa kancerom je značajna. Različite stope VTE između različitih tipova tumora su najverovatnije povezane sa selekcijom populacije pacijenata. Pacijenti sa kancerom kod kojih postoji rizik od tromboze mogu posedovati bilo koji ili sve sledeće faktore rizika: (i) stadijum kancera (tj. prisustvo metastaza), (ii) prisustvo centralnih venskih katetera, (iii) operacija i antikancerske terapije uključujući hemoterapiju, i (iv) hormoni i antiangiogeni lekovi. Prema tome, uobičajena je klinička praksa da se pacijenti koji imaju uznapredovale tumore doziraju sa heparinom ili heparinom male molekulske mase da se spreče tromboembolijski poremećaji. FDA za ove indikacije je odobrila niz preparata heparina male molekulske mase.

[0115] Postoje tri glavne kliničke sitaucije kada se razmatara prevencija VTE kod medicinskih kancerskih pacijenata: (i) pacijent je prikovan za krevet tokom produženim perioda vremena (ii) ambulantni pacijent prima hemoterapiju ili zračenje; i (iii) pacijentima zatvorene centralne venske katetere. Nefrakcionisan heparin (UFH) i heparin male molekulske mase (LMWH) su efikasni antitrombotički agensi kod kancerskih pacijenata koji se podvrgavaju operaciji. (Mismetti, P. et al., British Journal of Surgery, 88:913-930 (2001).) A. In Vitro Eseji

[0116] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao inhibitora faktora koagulacije XIa, VIIa, IXa, Xa, XIIa, kalikreina plazme ili trombina, može se odrediti korišćenjem relevantne prečišćene serinske proteaze, redom, i odgovarajućeg sintetičkog supstrata. Stopa hidrolize hromogenog ili fluorogenog supstrata od strane relevantne serinske proteaze je izmerena i bez prisustva i u prisustvu jedinjenja predmetnog pronalaska. Hidroliza supstrata rezultovala je oslobađanjem pNA (para nitroanilin), koji je praćen spektrofotometrijski merenjem povećanja apsorbance na 405 nm, ili oslobađanjem AMC (amino metilkumarina), koji je praćen spektrofluorometrijski merenjem povećanja emisije na 460 nm sa ekscitacijom na 380 nm. Smanjenje stope apsorbancije ili fluorescencije u prisustvu inhibitora ukazuje na inhibiciju enzima. Takve metode su poznate prosečnom poznavaocu oblasti. Rezultati ovog testa su izraženi kao konstanta inhibicije, Ki.

[0117] Određivanja faktora XIa su načinjena u 50 mM HEPES pufera na pH 7.4 koji sadrži 145 mM NaCl, 5 mM KCl, i 0.1% PEG 8000 (polietilen glikol; JT Baker ili Fisher Scientific). Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora XIa pri finalnoj koncentraciji od 25-200 pM (Haematologic Technologies) i sintetičkog supstrata S-2366 (piroGlu-Pro-Arg-pNA; Chromogenix ili AnaSpec) pri koncentraciji od 0.0002-0.001 M.

[0118] Određivanja faktora VIIa su načinjena u 0.005 M kalcijum hlorida, 0.15 M natrijum hlorida, 0.05 M HEPES pufera koji sadrži 0.1% PEG 8000 pri pH od 7.5. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora VIIa (Haematologic Technologies) ili rekombinantnog humanog Faktora VIIa (Novo Nordisk) pri finalnoj koncentraciji testa od 0.5-10 nM, rekombinantnog solubilnog tkivnog faktora pri koncentraciji od 10-40 nM i sintetičkog supstrata H-D-Ile-Pro-Arg-pNA (S-2288; Chromogenix ili BMPM-2; AnaSpec) pri koncentraciji od 0.001-0.0075 M.

[0119] Određivanja faktora IXa su načinjena u 0.005 M kalcijum hlorida, 0.1 M natrijum hlorida, 0.0000001 M Refludan (Berlex), 0.05 M TRIS baze i 0.5% PEG 8000 pri pH od 7.4. Refludan je dodat da inhibira male količine trombina u komercijalnim preparatima humanog Faktora IXa. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora IXa (Haematologic Technologies) u finalnoj koncentraciji testa od 20-100 nM i i sintetičkog supstrata PCIXA2100-B (CenterChem) ili Pefafluor IXa 3688 (H-D-Leu-Ph'Gly-Arg-AMC; CenterChem) pri koncentraciji od 0.0004-0.0005 M.

[0120] Određivanja faktora Xa su načinjena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH od 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijum hlorid i 0.5% PEG 8000. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora Xa (Haematologic Technologies) u finalnoj koncentraciji testa od 150-1000 pM i i sintetičkog supstrata S-2222 (Bz-Ile-Glu (gamma-OMe, 50%)-Gly-ArgpNA; Chromogenix) pri koncentraciji od 0.0002-0.00035 M.

[0121] Određivanja faktora XIIa su načinjena u 0.05 M HEPES puferu pri pH 7.4 koji sadrži 0.145 M NaCl, 0.05 M KCl, i 0.1% PEG 8000. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora XIIa pri finalnoj koncentraciji od 4 nM (American Diagnostica) i sintetičkog supstrata SPECTROZYME® #312 (H-D-CHT-Gly-L-ArgpNA.2AcOH; American Diagnostica) pri koncentraciji od 0.00015 M.

[0122] Određivanja kalikreina plazme su načinjena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH od 7.5 koji sadrži 0.1-0.2 M natrijum hlorida i 0.5% PEG 8000. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog kalikrein plazme (Enzyme Research Laboratories) u finalnoj koncentraciji testa od 200 pM i i sintetičkog supstrata S-2302 (H-(D)-Pro-Phe-ArgpNA; Chromogenix) pri koncentraciji od 0.00008-0.0004 M.

[0123] Određivanja trombina su načinjena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH od 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijuma hlorid i 0.5% PEG 8000. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog alfa trombina (Haematologic Technologies ili Enzyme Research Laboratories) u finalnoj koncentraciji testa od 200-250 pM i i sintetičkog supstrata S-2366 (pyroGlu-Pro-Arg-pNA; Chromogenix ili AnaSpec) pri koncentraciji od 0.0002-0.0004 M.

[0124] Mihaelisova konstanta, Km, za hidrolizu supstrata pomoću svake proteaze, je određena na 25 °C ili 37 °C u odsustvu inhibitora. Vrednosti Kisu određene dozvoljavanjem proteaze da reaguje sa supstratom u prisustvu inhibitora. Reakcije su puštene da se odigravaju tokom perioda od 20-180 minuta (u zavisnosti od proteaze) i brzine (stope promene apsorbance ili fluorescencije u odnosu na vreme) su izmerene. Sledeći odnosi su korišćeni da se izračunaju Kivrednosti:

za kompetitivni inhibitor sa jednim mestom vezivanja; ili

za kompetitivni inhibitor

gde:

voje brzina kontrole u odsustvu inhibitora;

vsje brzina u prisustvu inhibitora;

Vmaksje maksimalna brzina reakcije;

I je koncentracija inhibitora;

A je minimalna preostala aktivnost (obično zaključana na nuli);

B je maksimalna preostala aktivnost (obično zaključana na 1.0);

n je Hilov koeficijent, mera broja i kooperativnosti potencijalnih mesta vezivanja inhibitora;

IC50je koncentracija inhibitora koja proizvodi 50% inhibicije u uslovima eseja;

Kije konstanta disocijacije enzima: kompleks inhibitora;

S je koncentracija supstrata; i

Kmje Mihaelisova konstanta za supstrat.

[0125] Selektivnost jedinjenja može biti procenjena uzimanjem odnosa Kivrednosti za datu proteazu sa Kivrednošću za proteazu od interesa (tj., selektivnost za FXIa prema proteazi P = Kiza proteazu P/ Kiza FXIa). Jedinjenja sa odnosima selektivnosti >20 se smatraju selektivnim.

[0126] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao inhibitora koagulacije može se odrediti korišćenjem standardnog ili modifikovanog testa zgrušavanja. Povećanje vremena zgrušavanja plazme u prisustvu inhibitora ukazuje na antikoagulaciju. Relativno vreme zgrušavanja je vreme zgrušavanja u prisustvu inhibitora podeljeno sa vremenom zgrušavanja u odsustvu inhibitora. Rezultati ovog testa mogu biti izraženi kao IC1.5x ili IC2x, koncentracija inhibitora potrebna za povećanje vremena zgrušavanja za 1.5 puta ili 2 puta, u zavisnosti od vremena zgrušavanja u odsustvu inhibitora.

[0127] IC1.5x ili IC2x je pronađena linearnom interpolacijom iz grafičkih podataka relativnog vremena zgrušavanja prema koncentraciji inhibitora korišćenjem koncentracije inhibitora koja obuhvata IC1.5x ili IC2x.

[0128] Vremena zgrušavanja se određuju korišćenjem citrirane normalne humane plazme kao i plazme dobijene iz nekoliko laboratorijskih životinjskih vrsta (npr., pacova ili zeca). Jedinjenje je razblaženo u plazmi počevši sa 10 mM DMSO štok (osnovnog) rastvora. Konačna koncentracija DMSO je manja od 2%. Testiranja zgrušavanja plazme vrše se u automatizovanom analizatoru koagulacije (Sysmex, Dade-Behring, Ilinois). Slično, vremena zgrušavanja mogu se odrediti od laboratorijskih životinjskih vrsta ili ljudi doziranih sa jedinjenjem predmetnog pronalaska.

[0129] Aktivirano parcijalno tromboplastinsko vreme (aPTT) je određeno korišćenjem ACTIN® (Dade-Behring, Ilinois) praćenjem smernica koje se nalaze u dodatku u pakovanju. Plazma (0.05 mL) je zagrejana do 37 °C tokom 1 minuta. ACTIN® (0.05 mL) je dodat u plazmu i inkubiran tokom dodatnih 2 do 5 minuta. Kalcijum hlorid (25 mM, 0.05 mL) je dodat u reakciju da se započne koagulacija. Vreme zgrušavanja je vreme u sekundama od momenta kada je dodat kalcijum hlorid dok nije ugrušak detektovan.

[0130] Protrombinsko vreme (PT) je određeno korišćenjem tromboplastina (Tromboplastin C Plus ili Innovin, Dade-Behring, Ilinois) praćenjem smernica koje se nalaze u dodatku pakovanja. Plazma (0.05 mL) je zagrejana do 37 °C tokom 1 minuta. Tromboplastin (0.1 mL) je dodat u plazmu da se započne koagulacija. Vreme zgrušavanja je vreme u sekundama od momenta kada je dodat tromboplastin dok nije ugrušak detektovan.

[0131] Određivanja himotripsina su načinjena u 50 mM HEPES pufera na pH 7.4 koji sadrži 145 mM NaCl, 5 mM KCl, i 0.1% PEG 8000 (polietilen glikol; JT Baker ili Fisher Scientific). Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog himotripsina pri finalnoj koncentraciji od 0.2-2 nM (Calbiochem) i i sintetičkog supstrata S-2586 (Metoksi-Succinil-Arg-Pro-Tyr-pNA; Chromogenix) pri koncentraciji od 0.0005-0.005 M.

[0132] Određivanja tripsina su načinjena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu na pH od 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijum hlorida i 0.5% PEG 8000. Određivanja su načinjena korišćenjem prečišćenog humanog tripsina (Sigma) u finalnoj koncentraciji testa od 0.1-1 nM i sintetičkog supstrata S-2222 (Bz-Ile-Glu (gama-OMe, 50%)-Gly-Arg-pNA; Chromogenix) pri koncentraciji od 0.0005-0.005 M.

[0133] Primeri koji služe kao primer koji su stavljeni ispod na uvid javnosti su testirani u eseju Faktora XIa opisanom iznad i pronađeno je da imaju Faktor XIa inhibitornu aktivnost. Opseg inhibitorne aktivnosti Faktora (Ki vrednosti) od ≤ 10 µM (10000 nM) je opažen.

[0134] Primeri koji služe kao primer koji su stavljeni ispod na uvid javnosti su testirani u testu kalikreina plazme opisanom iznad, sa nekim Primerima koji imaju i inhibitornu aktivnost Faktora XIa i inhibitornu aktivnost kalikreina plazme. Za one Primere gde je inhibitorna aktivnost kalikreina plazme opažena kao (Ki vrednosti) od ≤ 10 µM (10000 nM), prijavljena je inhibitorna aktivnost.

[0135] Jedinjenja predmetnog pronalaska ispoljavaju neočekivanu FXIa inhibitornu aktivnost u poređenju sa jedinjenjem sa Formulom (X) u WO 2014/022767 A1 gde prsten B je pirazol povezan preko njegovih ugljenikovih atoma za makrociklus. Na primer, WO 2014/022767 stavlja na uvid javnosti Primer 221 na strani 319 sa sledećom hemijskom strukturom

i sa Ki vrednošću faktora XIa > 416.70 nM (Tabeka 1, strana . 84). Suprotno, Ki vrednosti faktora XIa jedinjenja predmetnog pronalaska kao što je prikazano na kraju svakog primera su manje od 20 nM. Ovi podaci ilustruju da jedinjenja predmetnog pronalaska ovde, npr., jedinjenja sa Formulama (Ia), (IIa), (IIIa), (IV), i (V) su iznenađujuće povoljna u inhibiranju faktora XIa.

B. In Vivo Eseji

[0136] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao antitrombotičkih agenasa može se odrediti korišćenjem relevantnih in vivo modela tromboze, uključujući In Vivo modele električno-indukovane tromboze karotidne arterije i In Vivo zečje modele tromboze arteriovenskog šanta.

a. In Vivo model električno-indukovane tromboze karotidne arterije (ECAT)

[0137] Zečji ECAT model, opisan od strane Wong et al. (J. Pharmacol. Exp. Ther., 295:212-218 (2000)), može biti korišćen u ovoj studiji. Muški New Zealand beli zečevi su anestezirani sa ketaminom (50 mg/kg 50 mg/kg/h IM) i ksilazinom (10 mg/kg 10 mg/kg/h IM). Ovi anestetici su dopunjvanai po potrebi. Elektromagnetna protočna sonda je postavljena na segment izolovane karotidne arterije da se prati protok krvi. Testni agensi ili nosač će biti dati (i.v., i.p., s.k., ili oralno) pre ili nakon inicijacije tromboze. Tretman lekom pre inicijacije tromboze se koristi za modeliranje sposobnosti testnih agenasa kako bi se sprečio i smanjio rizik formiranja tromba, dok se doziranje nakon inicijacije koristi za modeliranje sposobnosti lečenja postojeće trombotičke bolesti. Formiranje tromba je indukovano električnom stimulacijom karotidne arterije tokom 3 min na 4 mA pomoću spoljašnje bipolarne elektrode od nerđajućeg čelika. Karotidni protok krvi se kontinuirano meri tokom perioda od 90 minuta da bi se nadgledala okluzija izazvana trombom. Ukupan protok karotidne krvi preko 90 min izračunava se po trapezoidalnom pravilu. Prosečan karotidni protok preko 90 min određuje se pretvaranjem ukupnog protoka karotidne krvi preko 90 min do procenta ukupnog protoka karotidne krvi, do čega bi došlo da je kontinuirano održavana kontrola krvotoka tokom 90 minuta. ED50(doza koja je povećala prosečni karotdini krvni tok preko 90 min do 50% kontrole) jedinjenja se procenjuju pomoću programa nelinearne progresije najmanjih kvadrata korišćenjem Hilove sigmoidne Emaksjednačine (DeltaGraph; SPSS Inc., Čikago, IL). b. In Vivo zečji model tromboze arteriovenskog (AV) šanta

[0138] Zečji model AV šanta opisan od strane Wong et al. (Wong, P.C. et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 292:351-357 (2000)), može da se koristi u ovoj studiji. Muški New Zealand beli zečevi su anestezirani sa ketaminom (50 mg/kg 50 mg/kg/h IM) i ksilazinom (10 mg/kg 10 mg/kg/h IM). Ovi anestetici su dopunjavani ako je potrebno. Femoralna arterija, jugularna vena i femoralna vena su izolovane i kateterizovane. Slanim rastvorom napunjen AV šant uređaj je vezan između femorale arterijske i femoralne venske kanile. AV šant uređaj se sastoji od spoljašnjeg dela tigon (tygon) creva (dužina = 8 cm; unutrašnji prečnik = 7.9 mm) i unutrašnjeg dela creva (dužina = 2.5 cm; unutrašnji prečnik = 4.8 mm). AV šant takođe sadrži 8-cm-dug 2-0 svilen konac (Ethicon, Somerville, NJ). Krv protiče od femoralne arterije putem AV-šanta u femoralnu venu. Izloženost tekuće krvi svilenom koncu indukuje formiranje značajnog tromba. Četrdeset minuta kasnije, šant je isključen i svileni konac pokriven trombom je izmeren. Testni agensi ili nosač će biti dati (i.v., i.p., s.k., ili oralno) pre otvaranja AV šanta. Procentualna inhibicija tromba je određena za svaku grupu tretmana. ID50vrednosti (doza koja proizvodi 50% inhibicije formiranja tromba) su procenjene pomoću programa nelinearne regresije najmanjih kvadrata korišćenjem Hilove sigmoidalne Emaksjednačine (DeltaGraph; SPSS Inc., Čikago, IL).

[0139] Antiinflamatorni efekat ovih jedinjenja može se prikazati u testu ektravazacije Evans plavom bojom korišćenjem miševa deficijentnim za C1-esterazni inhibitor. U ovom modelu, miševi se doziraju sa jedinjenjem predmetnog pronalaska, Evans plava boja se ubrizgava preko repne vene, i ekstravazacija plave boje se određuje spektrofotometrijskim načinima iz ekstrakata tkiva.

[0140] Sposobnost jedinjenja predmetnog pronalaska da smanji ili spreči sindrom sistemskog inflamatornog odgovora, na primer, kao što je primećeno tokom kardiovaskularnih procedura „na pumpi“, može se testirati u in vitro perfuzionim sistemima, ili putem hirurških procedura „na pumpi“ kod većih sisara, uključujući pse i babune. Čitanja za procenu koristi jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju na primer smanjeni gubitak trombocita, smanjeni kompleksi trombocita/belih krvnih ćelija, smanjene nivoe neutrofilne elastaze u plazmi, smanjenu aktivacija faktora komplementa, i smanjenu aktivaciju i/ili konzumaciju kontaktnih aktivacionih proteina (kalikrein plazme, faktor XII, faktor XI, kininogen velike molekulske mase, C1-esterazni inhibitori).

[0141] Jedinjenja predmetnog pronalaska takođe mogu biti korisna kao inhibitori dodatnih serinskih proteaza, naročito humanog trombina, humanog kalikreina plazme i humanog plazmina. Zbog svog inhibitornog dejstva, ova jedinjenja su naznačena za primenu u prevenciji ili lečenju fizioloških reakcija, uključujući koagulaciju krvi, fibrinolizu, regulaciju krvnog pritiska i inflamaciju, i zarastanje rane katalizovano prethodno navedenom klasom enzima. Konkretno, jedinjenja imaju korisnost kao lekovi za lečenje bolesti koje proističu iz povećane aktivnosti trombina ranije pomenutih serinskih proteaza, kao što je miokardijalni infarkt, i kao reagensi koji se koriste kao antikoagulanti u prerađivanju krvi u plazmu za dijagnostičke i druge komercijalne svrhe.

V. FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE, FORMULACIJE i KOMBINACIJE

[0142] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana u takvom oralnom doznom obliku kao što su tablete, kapsule (od kojih svaki uključuje formulacije sa produženim oslobađanjem ili vremenskim oslobađanjem), pilule, praškove, granule, eliksiri, tinkture, suspenzije, sirupi, i emulzije. Oni takođe mogu biti administrirani u intravenskom (bolus ili infuzija), intraperitonealnom, subkutanom, ili intramuskularnom obliku, svi koristeći dozne oblike dobro poznate prosečnim poznavaocima farmaceutske oblasti. Oni mogu biti administrirani samostalno, ali generalno će biti administrirani sa farmaceutskim nosačem odabranim na osnovu izabranog puta administracije i standardne farmaceutske prakse.

[0143] Termin"farmaceutska kompozicija" označava kompoziciju koji sadrži jedinjenje predmetnog pronalaska u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim farmaceutski prihvatljivim nosačem. "Farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na medijume široko prihvaćene u oblasti za isporuku biološki aktivnih agenasa životinjama, posebno sisarima, uključujući, tj., adjuvans, ekscipijens ili nosač, kao što su razblaživači, sredstva za konzerviranje, punila, sredstva za regulisanje protoka, sredstva za dezintegraciju, sredstva za vlaženje, sredstva za emulzifikaciju, sredstva za suspendovanje, sredstva za zaslađivanje, arome, sredstva za parfimisanje, antibakterijska sredstva, antigljivična sredstva, sredstva za vlaženje i dispenzovanje, zavisno od prirode načina administracije i doznih oblika. Farmaceutski prihvatljivi nosači su formulisani prema nekoliko faktora koji su u okviru opsega prosečnih poznavaoca oblasti. Ovi uključuju, bez ograničenja: vrstu i prirodu aktivnog agensa koja se formuliše; subjekat na koji treba da se primeni kompozicija koja sadrži agens; nameravan način administracije kompozicije; i terapijsku indikaciju koja se cilja. Farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju i vodene i ne-vodene tečne medijume, kao i različite čvrste i polučvrste dozne oblike. Takvi nosači mogu uključivati i više različitih sastojaka i aditiva pored aktivnih sredstava, takvi dodatni sastojci su uključeni u formulaciju iz različitih razloga, npr., stabilizacija aktivnih sredstava, veziva itd., dobro poznatih prosečnim poznavaocima oblasti. Opisi odgovarajućih farmaceutski prihvatljivih nosača, i faktora uključenih u njihov izbor, nalaze se u različitim lako dostupnim izvorima kao što su, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. izdanje (1990).

[0144] Režim doziranja za jedinjenja predmetnog pronalaska će, naravno, varirati u zavisnosti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamičke karakteristike određenog agensa i njegovog načina i putanje administracije; vrste, starosti, pola zdravlja, zdravstvenog stanja, i težine primaoca; prirode i obima simptoma; vrste istovremenog tretmana; učestalosti tretmana; puta administracije, renalne i hepatične funkcije pacijenta, i željenog efekta. Lekar ili veterinar može utvrditi i prepisati efektivnu količinu leka neophodnog za sprečavanje, odbijanje, ili zaustavljanje napretka tromboembolijskog poremećaja.

[0145] Kao opšte uputstvo, dnevna oralna doza svakog aktivnog sastojka, kada je korišćen za naznačene efekte, će biti u opsegu između oko 0.001 do oko 1000 mg/kg telesne mase, poželjno između oko 0.01 do oko 100 mg/kg telesne mase po danu, i najpoželjnije između oko 0.1 do oko 20 mg/kg/dan. Intravenski, najpoženjije doze će biti u opsegu od oko 0.001 do oko 10 mg/kg/minute tokom infuzije pri konstantnoj brzini. Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana u jednoj dnevnoj dozi, ili ukupna dnevna doza može biti adminsitrirana u podeljenim dozama od dva, tri, ili četiri puta dnevno.

[0146] Jedinjenja ovog pronalaska takođe mogu biti adminsitrirana parenteralnom administracijom (npr., intra-venski, intra-arterijski, intramuskularno, ili subkutano. Kada je administrirana intra-venski ili intra-arterijski, doza može biti data kontinualno ili povremeno. Pored toga, formulacija se može razviti za intramuskularnu i subkutanu isporuku koja obezbeđuje postepeno oslobađanje aktivnog farmaceutskog sastojka. U jednom tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija je čvrsta formulacija, npr., suva kompozicija u spreju, koja može biti korišćena takva kakva je, ili kojoj lekar ili pacijent dodaju rastvarače, i/ili razblaživače pre upotrebe.

[0147] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se administrirati u intranazalnom obliku putem topikalne primene odgovarajućih intranazalnih nosača, ili preko transdermalnih puteva, koristeći transdermalne kožne flastere. Kada se administrira u obliku transdermalnog sistema za isporuku, dozna administracija će, naravno, biti kontinuirana, a ne povremena tokom režima doziranja.

[0148] Jedinjenja se tipično primenjuju u smeši sa odgovarajućim farmaceutskim razblaživačima, ekscipijensima, ili nosačima (kolektivno ovde nazvani kao farmaceutski nosači) pogodno odabrani u odnosu na nameravan oblik administracije, npr. oralne tablete, kapsule, eliksiri, i sirupi, i konzistentni sa konvencionalnim farmaceutskim praksama.

[0149] Na primer, za oralnu administraciju u obliku tablete ili kapsule, aktivna komponenta leka može biti kombinovana sa oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim, inertnim nosačem kao što je laktoza, skrob, sukroza, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, dikalcijum fosfat, kalcijum sulfat, manitol, sorbitol i slično; za oralnu administraciju u tečnom obliku, oralne komponente leka mogu biti kombinovane sa bilo kojim oralnim, netoksičnim farmaceutski inertnim nosačem kao su etanol, glicerol, voda, i slično. Pored toga, kada je poželjno ili potrebno, pogodna veziva, lubrikanti, agensi za dezintegraciju, i agensi za bojenje mogu takođe biti inkorporirani u smešu. Pogodna veziva uključuju skrob, želatin, prirodne šećere kao što su glukoza ili beta-laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetičke gume kao što su akacija, tragakant, ili natrijum alginat, karboksimetilceluloza, polietilen glikol, voskovi, i slično. Lubrikanti korišćeni u ovim doznim oblicima oključuju natrijum oleate, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid, i slično. Dezintegrušući agensi uključuju, bez ograničenja, skrob, metil celulozu, agar, bentonit, ksantan gumu, i slično.

[0150] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti administrirana u obliku lipozomskih sistema isporuke, kao što su male unilamelarne vezikule, velike unilamelarne vezikule, i multilamelarne vezikule. Lipozomi mogu biti formirani od različitih fosfolipida, kao što su holesterol, stearilamin, ili fosfatidilholini.

[0151] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti vezana sa solubilnim polimerima kao što su nosači lekova koji mogu biti ciljani. Takvi polimeri mogu da uključe polivinilpirolidon, piran kopolimer, polihidroksipropilmetakrilamid-fenol, polihidroksietilaspartamidfenol, ili polietileneoksid-polilizin supstituisan sa palmitoil ostacima. Pored toga, jedinjenja predmetnog pronalaska može biti vezana za klasu biodegradabilnih polimera korisnih u dostizanju kontrolisanog oslobađanja leka, na primer, polimlečne kiseline, poliglikolne kiseline, kopolimera polimlečne i poliglikolne kiseline, poliepsilon kaprolaktona, polihidroksi buterne kiseline, poliortoestara, poliacetala, polihidropirana, policijanoacilata, i unakrsno povezanih ili amfipatičnih blok polimera hidrogelova. Čvrste disperzije se takođe nazivaju disperzije u čvrstom stanju. U nekim tehničkim rešenjima, bilo koje jedinjenje opisano ovde je formulisano kao suva disperzija u spreju (SDD). SDD je pojedinačna fazna amorfna molekularna disperzija leka u polimernom matriksu. To je čvrsti rastvor pripremljen pomoću rastvaranja leka i polimera u rastvaraču (npr., aceton, metanol ili slično) i sprej sušenja rastvora. Rastvarač brzo uparava iz kapi koje brzo očvršćavaju polimer i smeša leka zaustavlja lek u amorfnom obliku kao amorfnu molekularnu disperziju.

[0152] Dozni oblici (farmaceutske kompozicije) pogodne za administraciju mogu da sadrže od oko 1 miligram do oko 1000 miligrama aktivnog sastojka po doznoj jedinici. U ovim farmaceutskim kompozicijana aktivni sastojak će uobičajeno će biti prisutan u količini od oko 0.1-95% po masi na osnovu ukupne mase kompozicije.

[0153] Želatinske kapsule mogu sadržati aktivni sastojak i praškaste nosače, kao što su laktoza, škrob, derivati celuloze, magnezijum stearat, stearinska kiselina, i slično. Slični razblaživači mogua se koristiti za proizvodnju komprimovanih tableta. I tablete i kapsule mogu se proizvoditi kao proizvodi sa produženim oslobađanjem kako bi se obezbedilo kontinuirano oslobađanje leka tokom perioda od nekoliko sati. Komprimovane tablete mogu biti obložene šećerom ili obložene filmom kako bi se maskirao bilo kakav neprijatan ukus i zaštitila tableta od atmosfere, ili enterično obložene za selektivnu dezintegraciju u gastrointestinalnom traktu.

[0154] Tečni dozni oblici za oralnu administraciju mogu sadržati boju i ukus za povećanje prihvatljivosti od strane pacijenta.

[0155] Generalno, voda, pogodno ulje, fiziološki rastvor, vodeni rastvor dekstroze (glukoza), i slični rastvori šećera kao što su propilen glikol ili polietilen gikoli su pogodni nosači za parenteralne rastvore. Rastvori za parenteralnu administraciju poželjno sadrže so aktivnog sastojka rastvornu u vodi, pogodna sredstva za stabilizaciju, i ako je potrebno, puferske supstance. Antioksidacioni agensi kao što su natrijum bisulfit, natrijum sulfit, ili askorbinska kiselina, samostalno ili kombinovano, pogodni su agensi za stabilizaciju. Takođe se koriste limunska kiselina i njene soli i natrijum EDTA. Pored toga, parenteralni rastvori mogu sadržati konzervanse, kao što su benzalkonijum hlorid, metil ili propil-paraben, i hlorobutanol.

[0156] Pogodni farmaceutski nosači su opisani u Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, standardni referentni tekst u ovoj oblasti.

[0157] Kada se jedinjenja ovog pronalaska kombinuju sa drugim antikoagulantnim agensima, dnevna doza može biti oko 0.1 do oko 100 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 0.1 do oko 100 miligrama po kilogramu telesne mase pacijenta. Za dozni oblik tablete, jedinjenja ovog pronalaska obično mogu biti prisutna u količini od oko 5 do oko 300 miligrama po doznoj jedinici, i drugi antikoagulant u količini od oko 1 do oko 500 miligrama po doznoj jedinici.

[0158] Kada se jedinjenja predmetnog pronalaska administriraju u kombinaciji sa agensom protiv zgrušavanja, putem opšte smernice, obično dnevna doza može biti oko 0.01 do oko 300 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 50 do oko 150 miligrama agensa protiv zgrušavanja, poželjno oko 0.1 do oko 4 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 1 do oko 3 miligrama agensa protiv zgrušavanja, po kilogramu telesne mase pacijenta.

[0159] Kada se jedinjenja predmetnog pronalaska administriraju u kombinaciji sa trombolitičkim agensom, obično dnevna doza može biti oko 0.1 do oko 100 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska, po kilogramu telesne mase pacijenta, a u slučaju trombolitičkih agenasa, uobičajena doza trombolitičkog agensa kada se primenjuje samostalno može biti smanjena za oko 50-80% kada se administrira sa jedinjenjem predmetnog pronalaska.

[0160] Posebno kada se obezbeđuje kao pojedinačna dozna jedinica, potencijal postoji za hemijsku interakciju između kombinovanih aktivnih sastojaka. Iz tog razloga, kada se jedinjenje predmetnog pronalaska i drugi terapijski agens kombinuju u pojedinačnoj doznoj jedinici, oni se formulišu tako da iako su aktivni sastojci kombinovani u pojedinačnoj doznoj jedinici, fizički kontakt između aktivnih sastojaka je minimiziran (to jest, smanjen). Na primer, jedan aktivni sastojak može biti enterično obložen. Enteričnim oblaganjem jednog od aktivnih sastojaka, moguće je ne samo da se minimizira kontakt između kombinovanih aktivnih sastojaka, već je takođe, moguće kontrolisati oslobađanje jedne od ovih komponenata u gastrointestinalnom traktu, tako da jedna od ovih komponenti nije oslobođena u stomak, nego je oslobođena u crevima. Jedan od aktivnih sastojaka takođe može biti obložen materijalom koji utiče na produženo oslobađanje tokom čitavog gastrointestinalnog trakta i takođe služi za minimiziranje fizičkog kontakta između kombinovanih aktivnih sastojaka. Pored toga, komponenta sa produženim oslobađanjem može biti dodatno enterično obložena tako da se oslobađanje ove komponente dešava samo u crevima. Još jedan pristup bi uključivao formulaciju kombinovanog proizvoda u kojem je jedna komponenta obložena polimerom sa produženim i/ili enteričnim oslobađanjem, i druga komponenta je takođe obložena polimerom kao što je hidroksipropil metilceluloza (HPMC) stepena niske viskoznosti ili drugi odgovarajući materijali poznati u oblasti, kako bi se dalje razdvojile aktivne komponente. Polimerna prevlaka služi za formiranje dodatne barijere za interakciju sa drugom komponentom.

[0161] Ovi, kao i drugi načini minimiziranja kontakta između komponenata kombinovanih proizvoda predmetnog pronalaska, bilo da se administriraju u pojedinačnom doznom obliku ili administriraju u odvojenim oblicima, ali istovremeno na isti način, biće očigledni prosečnim poznavaocima oblasti, jednom kada se naoružaju predmetnom objavom.

[0162] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju dalje koja sadrži dodatni terapijski agens(e) odabran od otvarača kalijumovog kanala, blokatora kalijumovog kanala, blokatora kalcijumovog kanala, inhibitora razmene natrijuma sa vodonikom, antiaritmičkih agenasa, antiaterosklerotičkih agenasa, antikoagulanata, antitrombotičkih agenasa, protrombolitičkih agenasa, fibrinogenskih antagonista, diuretika, antihipertenzivnih agenasa, inhibitora ATPaze, antagonista mineralokortikoidnih receptora, inhibitora fosfodisteraze, antidijabetičkih agenasa, antiinflamatornih agenasa, antioksidanasa, modulatora angiogeneze, agenasa za antiosteoporozu, terapija hormonske zamene, modulatora hormonskih receptora, oralnih kontraceptiva, agenasa protiv gojaznosti, antidepresiva, agenasa protiv anksioznosti, antipsihotika, antiproliferativnih agenasa, antitumorskih agenasa, agenasa protiv čira i agenasa bolesti gastroezofagealnog refluksa, agenasa hormona rasta i/ili sekretagoga hormona rasta, mimetika štitne žlezde, antiinfektivnih agenasa, antivirusnih agenasa, antibakterijskih agenasa, agenasa protiv gljivica, hagenasa koji snižavaju holesterol/masti i terapiaj lipidnog profila, i agenasa koji imitiraju ishemijsko predkondicioniranje i/ili miokardijalni „stunning“ (sindrom „okamenjenog“ miokarda), ili njihovu kombinaciju.

[0163] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabran(e) od anti-aritmičkog agensa, anti-hipertenzivnog agensa, antikoagulantnog agensa, agensa protiv zgrušavanja, trombin inhibirajućeg agensa, trombolitičkog agensa, fibrinolitičkog agensa, blokatora kalcijumovog kanala, blokatora kalijumovog kanala, agensa koji snižava holesterol/masti, ili njihove kombinacije.

[0164] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabran(e) od varfarina, nefrakcionisanog heparina, heparina male molekulske mase, sintetičkog pentasaharida, hirudina, argatrobana, aspirina, ibuprofena, naproksena, sulindaka, indometacina, mefenamata, dipiridamola, droksikama, diklofenaka, sulfinpirazona, piroksikama, tiklopidina, klopidogrela, tirofibana, eptifibatida, abciksimaba, melagatrana, ksimelagatrana, disulfatohirudina, tkivnog plazminogenskog aktivatora, modifikovanog tkivnog plazminogenskog aktivatora, antistplaze, urokinaze, i streptokinaze, ili njihove kombinacija.

[0165] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju gde dodatni terapijski agens je antihipertenzivni agens odabran od ACE inhibitora, antagonista AT-1 receptora, antagonista beta-adrenergičkih receptora, antagonista ETA receptora, antagonista dvostrukih ETA/AT-1 receptora, renin inhibitora (aliskerin) i vazopeptidaznih inhibitora, antiaritmičkog agensa odabranog od IKurinhibitora, antikoagulanta koji je odabran od inhibitora trombina, antitrombin-III aktivatora, heparin kofaktor II aktivatora, drugih inhibitora faktora Xia, drugih inhibitora kalikreina, antagonista inhibitora plazminogen aaktivatora (PAI-1), inhibitori inhibitora fibrinolize koja se može aktivirati (TAFI), inhibitori faktora VIIa, inhibitori faktora IXa, i inhibitori faktora Xa, ili agens protiv zgrušavanja koji je odabran od GPIIb/IIIa blokatora, GP Ib/IX blokatora, antagonista proteaza aktiviranog receptora 1 (PAR-1), antagonista proteaza aktiviranog receptora 4 (PAR-4), antagonista prostaglandin E2 receptora EP3, antagonista kolagenskog receptora, fosfodiesteraza-III inhibitora, antagonista P2Y1receptora, P2Y12antagonista, antagonista tromboksanskog receptora, inhibitora ciklooksigenaze-1, i aspirina, ili njihove kombinacije.

[0166] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde dodatni terapijski agens(i) su agens protiv zgrušavanja ili njihova kombinacija.

[0167] U još jednom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde dodatni terapijski agens je agens protiv zgrušavanja klopidogrel.

[0168] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se primenjivati samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapijskih agenasa. Pod "administriranjem u kombinaciji" ili "kombinovanom terapijom" podrazumeva se da se jedinjenje predmetnog pronalaska i jedan ili više dodatnih terapijskih sredstava administriraju istovremeno sisaru koji se tretira. Kada se administriraju u kombinaciji, svaka komponenta može se administrirati istovremeno ili sekvencijalno u bilo kojem redosledu u različitim vremenskim tačkama. Prema tome, svaka komponenta može biti administrirana odvojeno, ali dovoljno blizu u vremenu, kako bi se postigao željeni terapijski efekat.

[0169] Jedinjenja koja se mogu administrirati u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska uključuju, ali nisu ograničena na, antikoagulante, anti-trombinske agense, sredstva protiv zgrušavanja, fibrinolitike, hipolipidemične agense, antihipertenzivne agense, i antiishemijske agense.

[0170] Drugi antikoagulansni agensi (ili inhibitorni agensi koagulacije) koji mogu biti korišćeni u kombinaciji sa jedinjenjem ovog pronalaska uključuju varfarin, heparin (ili nefrakcionisan heparin ili bilokoji komercijalno dostupni heparin male molekulske mase, na primer LOVENOX®), sintetički pentasaharid, direktno delujući trombinski inhibitori koji uključuju hirudin i argatroban, kao i drugi faktor VIIa inhibitori, faktor IXa inhibitori, faktor Xa inhibitori (npr., ARIXTRA®, apiksaban, rivaroksaban, LY-517717, DU-176b, DX-9065a, i oni stavljeni na uvid javnosti u WO 98/57951, WO 03/026652, WO 01/047919, i WO 00/076970), faktor XIa inhibitori, i inhibitori aktiviranog TAFI i PAI-1 poznati u oblasti.

[0171] Termin agensi protiv zgrušavanja (ili agensi inhibicije trombocita), kao što je ovde upotrebljeno, označavaju sredstva koja inhibiraju funkciju trombocita, na primer, inhibiranjem agregacije, adhezije ili sekrecije granularnog sadržaja trombocita. Takvi agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, različite poznate nesteroidne antiinflamatorne lekove (NSAID) kao što su acetaminofen, aspirin, kodein, diklofenak, droksikam, fentainl, ibuprofen, indometacin, ketorolak, mefenamat, morfin, naproksen, fenacetin, piroksikama, sufentanil, sulfinpirazon, sulindak, i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili prolekovi. Od NSAIDs, poželjni su aspirin (acetilsalicilna kiselina ili ASA) i piroksikam. Ostali pogodni inhibitori trombocita uključuju antagoniste glikoproteina IIb/IIIa (npr. tirofiban, eptifibatid, abciksimab, i integrelin), antagonisti tromboksan-A2-receptora (npr. Ifetroban), inhibitori tromboksan-A-sintetaze, fosfodiesteraza-III (PDE-III) inhibitori (npr., dipiridamol, cilostazol), i PDE-V inhibitori (kao što su sildenafil), antagonisti aktiviranog proteazaaktiviranog receptora 1 (PAR-1) (npr., E-5555, SCH-530348, SCH-203099, SCH-529153 i SCH-205831), i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili prolekovi.

[0172] Drugi primeri pogodnih anti-trombocitnih sredstava za primenu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, sa ili bez aspirina, su ADP (adenozin difosfat) receptorski antagonisti, poželjno antagonisti purinergičkih receptora P2Y1i P2Y12,pri čemu je P2Y12još poželjniji. Poželjni antagonisti receptora P2Y12uključuju klopidogrel, tiklopidin, prasugrel, tikagrelor, i kangrelor, i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili prolekovi. Tiklopidin i klopidogrel su takodje poželjna jedinjenja, jer su poznati kao blaži od aspirina za gastrointestinalni trakt pri upotrebi. Klopidogrel je još poželjniji agens.

[0173] Poželjan primer je trostruka kombinacija jedinjenja predmetnog pronalaska, aspirina, i još jednog agensa protiv zgrušavanja. Poželjno, agens protiv zgrušavanja je klopidogrel ili prasugrel, poželjnije klopidogrel.

[0174] Termin trombinski inhibitori (ili anti-trombinski agensi), kao što je ovde korišćeno, označavaju inhibitore serin proteaznog trombina. Inhibiranjem trombina, razni trombinom posredovani procesi, kao što su trombinom posredovana aktovacija trombocita (to jest, na primer, agregacija trombocita, i/ili sekrecija sadržaja granula trombocita uključujući serotonin) i/ili formiranje fibrina su narušene. Nekoliko trombinskih inhibitora je poznato prosečnom poznavaocu oblasti i ovi inhibitori su razmotreni za korišćenje u kombinaciji sa predmetnim jedinjenjem. Takvi inhibitori uključuju, ali nisu ograničeni na, boroargininske derivate, boropeptide, heparine, hirudin, argatroban, dabigatran, AZD-0837, i one koji su stavljeni na uvid javnosti u WO 98/37075 i WO 02/044145, i njihove farmaceustki prihvatljive soli ili prolekove. Boroargininski derivati i boropeptidi obuhvataju N-acetil i peptid ne derivate boronske kiseline, kao što su C-terminalni derivati a-aminoboronske kiseline lizina, ornitina, arginina, homoarginina i njihovih odgovarajućih izotiouronijum analoga. Terminhirudin, kao što je ovde korišćeno, uključuje pogodne derivate ili analoge hirudina, ovde nazvanih hirulozi, kao što su disulfatohirudin.

[0175] Termin trombolički (ili fibrinolitički) agensi (ili trombolitici ili fibrinolitici), kao što je ovde korišćeno, označavaju agense koji liziraju krvne grudve (trombovi). Takvi agensi uključuju tkivni aktivator plazminogena (TPA, prirodni ili rekombinantni) i njegove modifikovane oblike, anistreplaza, urokinaza, streptokinaza, tenekteplaza (TNK), lanoteplaza (nPA), faktor VIIa inhibitori, inhibitori trombina, inhibitori faktora IXa, Xa, i XIa, PAI-I inhibitori (tj., inaktivatori inhibitora aktivatora tkivnog plazminogena), inhibitori aktiviranog TAFI, inhibitori alfa-2-antiplazmina, i anizoilovani streptokinaza plazminogen aktivatorski kompleks, uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli ili prolekove. Termin anistreplaza, kao što je ovde korišćeno, odnosi se na anizoilovani plazminogen streptokinaza aktivatorski kompleks, kao što je opisano, na primer, u Evropskoj patentnoj prijavi br.

028,489, čija je objava ovim ovde uključena referencom. Termin urokinaza, kao što je ovde korišćeno, treba da označava i dvo i jednolančanu urokinazu, a druga se ovde naziva prourokinaza.

[0176] Primeri pogodnih agenasa koji snižavaju holesterol/masti i terapija lipidnog profila za primenu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska uključuju sledeće - inhibitori HMG-CoA reduktaze (npr. pravastatin, lovastatin, simvastatin, fluvastatin, atorvastatin, rosuvastatin, i drugi statini), modulatori aktivnosti receptora lipoproteina niske gustine (LDL) (npr., HOE-402, PCSK9 inhibitori), sekvestranti žučne kiseline (npr., holestiramin i kolestipol), nikotinska kiselina ili njeni derivati (npr., NIASPAN®), GPR109B (receptor nikotinske kiseline) modulatori, derivati fenofibrinske kiseline (npr., gemfibrozil, klofibrat, fenofibrat i benzafibrat) i drugi alfa modulatori peroksizom proliferator-aktiviranih receptora (PPAR), PPARdelta modulatori (npr., GW-501516), PPARgama modulatori (npr., rosiglitazon), jedinjenja koja imaju više funkcionalnosti za modulaciju aktivnosti različitih kombinacija PPARalfa, PPARgama i PPARdelta, probukol ili njegovi derivati (npr., AGI-1067), inhibitori apsorpcije holesterola i/ili Niemann-Pick C1-slični transporter inhibitori (npr., ezetimib), inhibitori proteina holesterol estar trasfera (npr., CP-529414), inhibitori skvalen sintaze i/ili inhibitori skvalen epoksidaze ili njihove smeše, acil koenzim A: holesteril aciltransferaza (ACAT) 1 inhibitori, inhibitori ACAT2, dvostruki inhibitori ACAT1/2, inhibitori transporta ilealne žučne kiseline (ili apikalni natrijum ko-zavisni inhibitori transporta žučne kiseline), inhibitori proteinskog transfera mikrozomalnog triglicerida, alfa modulatori jetrinih-X receptora (LXR), LXRbeta modulatori, LXR dvostruki alfa/beta modulatori, FXR modulatori, omega 3 masne kiseline (npr., 3-PUFA), biljni stanoli i/ili estri masnih kiselina biljnih stanola (npr., sitostanol estar koji se koristi u BENECOL® margarinu), endotelni lipazni inhibitori, i HDL funkcionalni mimetici koji aktiviraju reverzni transport holesterola (npr. apoAI derivati ili apoAI peptidni mimetici).

[0177] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe ad se kombinuju sa solubilnim guanilat ciklaza inhibitorima, Himaza inhibitorima, ROMK inhibitorima, ACE inhibitorima, ATII inhibitorima, ATR inhibitorima, NEP inhibitorima i drugim jedinjenjima za lečenje srčane insuficijencije.

[0178] Jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe korisna kao standardna ili referentna jedinjenja, na primer kao standard kvaliteta ili kontrola, u testovima ili esejima koji uključuju inhibiciju trombina, Faktora VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikreina plazme. Takva jedinjenja mogu biti obezbeđena u komercijalnom kompletu, na primer, za primenu u farmaceustkom istraživanju koje uključuje trombin, Faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikrein plazme. XIa. Na primer, jedinjenje predmetnog pronalaska bi moglo biti korišćeno kao referenca u eseju da se poredi njegova poznata aktivnost sa jedinjenjem koje ima nepoznatu aktivnost. Ovo bi osiguralo eksperimentatoru da je esej izveden pravilno i obezbedilo bi osnovu za poređenje, naročito ako je testno jedinejnje derivat referentnoog jedinjenja. Pri razvijanju novih eseja ili protokola, jedinjenja u skladu sa predmetnim pronalaskom bi bila korišćena za testiranje njhihove efikasnosti.

[0179] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti korišćena u dijagnostičkim esejima koji uključuju trombin, Faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikrein plazme. Na primer, prisustvo trombina, Faktora VIIa, IXa, Xa XIa, i/ili kalikreina plazme u nepoznatom uzorku bi moglo biti određen dodavanjem relevantnog hromogenog supstrata, na primer S2366 za Faktor XIa, u seriju arstvora koji sadrže testni uzorak i po izboru jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska. Ako je opažena proizvodnja pNA u rastvorima koji sadrže testni uzorak, ali ne u prisustvu jedinjenja predmetnog pronalaska, tada bi se moglo zaključiti da je prisutan Faktor XIa.

[0180] Ekstremno potentna i selektivna jedinjenja predmetnog pronalaska, ona koja imaju Kivrednosti manje od ili jednake 0.001 µM za ciljnu proteazu i veći od ili jednak 0.1 µM za druge proteaze, mogu takođe biti korišćena u dijagnostičkim esejima koji uključuju kvantitativnost trombina, Faktora VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili kalikreina plazme u uzorcima seruma. Na primer, količina Faktora XIa u uzorcima seruma bi mogla biti određena pažljivom titracijom proteazne aktivnosti u prisustvu relevantnog hromogenom supstrata, S2366, sa potentnim inhibitorom Faktora Xia predmetnog pronalaska.

[0181] Predmetni pronalazak takođe obuhvata proizvedeni artikal. Kao što je ovde korišćeno, proizvedeni artikal bi trebao uključivati, ali ne i biti ograničen na, komplete i pakovanja. Artikal proizvodnje predmetnog pronalaska, sadrži: (a) prvu kutiju; (b) farmaceutsku kompoziciju koja se nalazi u okviru prvog kontejnera, gde kompozicija sadrži: prvi terapijski agens, koji sadrži: jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; i, (c) dodatak pakovanju koji navodi da se farmaceutska kompozicija može koristiti za lečenje tromboembolijskog i/ili inflamatornog poremećaja (kao što je prethodno definisano). U još jednom tehničkom rešenju, dodatak u pakovanju navodi da se farmaceutska kompozicija može koristiti u kombinaciji (kao što je prethodno definisano) sa drugim terapijskim agensom za lečenje tromboembolijskog i/ili inflamatornog poremećaja. Artikal proizvodnje može dalje da sadrži: (d) drugi kontejner, gde se komponente (a) i (b) nalaze unutar drugog kontejnera i komponenta (c) nalazi se unutar ili izvan drugog kontejnera. Nalazi se unutar prvog i drugog kontejnera znači da odgovarajući kontejner sadrži predmet u okviru svojih granica.

[0182] Prvi kontejner je posuda koja se koristi za držanje farmaceutske kompozicije. Ovaj kontejner može biti za proizvodnju, skladištenje, isporuku, i/ili pojedinačnu/masovnu prodaju. Prvi kontejner bi trebalo da pokrije bocu, teglu, bočicu, flask, špric, cev (npr. za kremasti preparat), ili bilo koji drugi kontejner koji se koristi za proizvodnju, držanje, skladištenje ili distribuciju farmaceutskog proizvoda

[0183] Drugi kontejner se koristi da drži prvi kontejner i, po izboru, dodatak pakovanju. Primeri drugog kontejnera uključuju, ali nisu ograničeni na, kutije (npr. kartonske ili plastične), sanduke, kartone, kese (npr. papirne ili plastične), kesice, i vrećice. Dodatak pakovanju može biti fizički pričvršćen sa spoljne strane prvog kontejnera preko trake, lepka, spajalica ili drugog načina kačenja, ili može da se nalazi unutar drugog kontejnera bez bilo kakvih fizičkih sredstava za pričvršćivanje na prvi kontejner. Alternativno, dodatak pakovanju se nalazi na spoljašnjoj strani drugog kontejnera. Kada se nalazi na spoljnoj strani drugog kontejnera, poželjno je da je dodatak pakovanju fizički pričvršćen trakom, lepkom, spajalicom ili drugom metodom pričvršćivanja. Alternativno, može biti u blizini ili dodirivati spoljašnjost drugog kontejnera a da nije fizičkog prikačen.

[0184] Dodatak pakovanju je etiketa, oznaka, marker itd. koji pruža informacije koje se odnose na farmaceutsku kompoziciju koja se nalazi u okviru prvog kontejnera. Navedene informacije obično će biti utvrđene od strane regulatorne agencije koja reguliše područje u kojem se artikal proizvodnje prodaje (npr., Američka administracija za hranu i lekove). Poželjno, dodatak za pakovanje specifično opisuje indikacije za koje je farmaceutska kompozicija odobrena. Dodatak pakovanju može biti napravljen od bilo kog materijala na kojem osoba može da pročita informacije sadržane u njemu ili na njemu. Poželjno, dodatak pakovanju je materijal koji se može odštampati (npr. papir, plastika, karton, folija, lepljivi papir ili plastika itd.) na kojem se formiraju željene informacije (npr., štampane ili stavljene).

[0185] Druge karakteristike predmetnog pronalaska postaće očigledne tokom sledećih opisa tehničkih rešenja koja služe kao primeri koja su data za ilustraciju predmetnog pronalaska i nisu namenjena njihovom ograničavanju. Pripremljeni su sledeći Primeri, izolovani i okarakterisani korišćenjem metoda koje su ovde stavljene na uvid javnosti.

VI. OPŠTE SINTEZE KOJE UKLJUČUJU SHEME

[0186] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti sintetisana pomoću mnogih metoda dostupnih prosečnim poznavaocima oblasti organske hemije (Maffrand, J.P. et al., Heterocycles, 16(1):35-37 (1981)). Opšte sintetičke sheme za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska su opisane u nastavku. Ove sheme su ilustrativne i nisu namenjene ograničavanju mogućih tehnika koje prosečan poznavalac oblasti može da koristi za pripremanje jedinjenja koja su ovde stavljena na uvid javnosti. Različite metode za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska biće evidentne prosečnim poznavaocima oblasti. Dodatno, različiti koraci u sintezi mogu biti izvedeni po alternativnom redu kako bi se dobilo željeno jedinjenje ili jedinjenja.

[0187] Primeri jedinjenja predmetnog pronalaska koja su pripremljena metodama opisanim u opštim shemama dati su u odeljku koji se odnosi na intermedijere i primere koji je izložen u daljem tekstu. Pripremanje homohiralnih primera može biti izvedeno tehnikama koje su poznate prosečnom poznavaocu oblasti. Na primer, homohiralna jedinjenja mogu biti pripremljena separacijom racemskih proizvoda pomoću hiralne fazne preparativne HPLC.

Alternativno, primer jedinjenja može biti pripremljen metodama za koje se zna da daju enantiomerno obogaćene proizvode. Ove uključuju, ali nisu ograničeni na, inkorporiranje hiralne pomoćne funkcionalnosti u racemske intermedijere koji služe za kontrolu diastereoselektivnosti transformacija, obezbeđujući enantio-obogaćene proizvode nakon cepanja hiralnog pomoćnog sredstva.

[0188] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se pripremiti na više načina poznatih prosečnom poznavaocu oblasti organske sinteze. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se sintetisati korišćenjem dole navedenih metoda, zajedno sa sintetičkim metodama poznatim u oblasti organske hemije, ili varijacijama na njima, koje su cenili stručnjaci u ovoj oblasti. Preferirane metode uključuju, ali nisu ograničene na, one opisane u nastavku. Reakcije se izvode u rastvaraču ili mešavini rastvarača koji odgovaraju reagensima i materijalima koji su upotrebljeni i pogodni za transformacije koje se izvršavaju. Biće razumljivo od strane prosečnog poznavaoca oblasti organske sinteze da funkcionalnost prisutna na molekulu treba da bude u skladu sa predloženim transformacijama. Ovo će ponekad zahtevati procenu da se modifikuje redosled sintetičkog koraka ili da se odabere jedna posebna shema procesa nad drugom kako bi dobilo željeno jedinjenje predmetnog pronalaska.

[0189] Takođe će biti prepoznato da je još jedno veliko razmatranje u planiranju bilo kog sintetičkog puta u ovoj oblasti razumni izbor zaštitne grupe koja se koristi za zaštitu reaktivnih funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima koja su opisana u ovom pronalasku. Merodavni iskaz koji opisuje mnoge alternative za obučenog praktičara jeste u Greene et al. (Protective Groups in Organic Synthesis, Četvrto izdanje, Wiley-Interscience (2006)).

[0190] Reprezentativna jedinjenja ovog pronalaska gde prsten A je 6-očlani heterociklus (primer - piridin) mogu biti izvedena od intermedijera 1h, čija sinteza j eopisana u Shemi 1. Kondenzacija aldehida 1a pripremljenog u skladu sa modifikovanom procedurom opisanom od strane Negi (Synthesis, 991 (1996)), sa (S)-2-metilpropan-2-sulfinamidom u prisustvu anhidrovanog bakar sulfata ili cezijum karbonata u rastvaraču kao što je DCM dala je sulfinimin 1b (Ellman, J., J. Org. Chem., 64:1278 (1999)). Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Kuduk (Tetrahedron Letters, 45:6641 (2004)), pogodno supstituisani Granjarovi reagensi, na primer alilmagnezijum bromid, mgu biti dodati u sulfinimin 1b da se dobije sulfinamid 1c, kao smeša diastereomera koji mogu biti razdvojeni u raznim fazama niza. Diastereoselektivnost za dodavanje alilmagnezijum bromida u sulfinimin 1b može biti poboljšana korišćenjem indijum(III) hlorida u skladu sa modifikovanom procedurom od strane Xu (Xu, M.-H., Organic Letters, 10(6):1259 (2008)). Interkonverzija zaštitne grupe može biti postignuta u dva koraka da se dobije 1d. Ovaj hloropiridin može biti kuplovan sa 4-nitropirazolima po hlađenju sa Pd II solju kao što je Pd(OAc)2u prisustvu fosfinskog liganda i baze kao što je kalijum karbonat u rastvaraču kao što je DMF ili DMA u mikrotalasnom reaktoru, kao što je opisano od strane Sames (Goikhman, R. et al., J. Am. Chem. Soc., 131:3042 (2009)). Cink/HOAc redukcija nitropirazola praćena amidacijom sa odgovarajuće supstituisanom karboksilnom kiselinom obezbeđuje 1f. Makrociklizacija je zatim postignuta putem metateze zatvaranja prstena korišćenjem Grubb-sovog rutenijumskog katalizatora druge generacije da se dobije 1g. Hidrogenizacija dobijenog olefina i cepanje zaštitne grupe dalo je amin 1h. Jedinjenja sa formulama 1h mogu biti konvertovana u jedinjenja u ovompronalasku u skladu sa Shemama 2 i 3.

[0191] Reprezentativna jedinjenja ovog pronalaska mogu biti pripremljena kao što je prikazano na Shemi 2. Počevši od aldehida 2a, vinil Grinjarova adicija (koja daje alilni (allylic) alkohol 2b) praćeno sa oksidacijom dala je vinil keton 2c. Michael-ova adicija amina iz Sheme 1 praćena acilacijom sa 2d dala je jedinjenja 2e, koje nakon ciklizacije sa bazom obezbeđuje dihidropiridon 2f.

[0192] Jedinjenja u ovom pronalasku koja nose alternativnu regiohemijsku supstituciju pirazola mogu se sintetisati kao što je prikazano na Shemi 3. Kada je R odgovarajuća zaštitna grupa (primer-trimetilsililetoksimetil), hidrazin 3a do 3b može se pratiti sa alkilacijom sa alkil halidom u baznim uslovima ili posle reakcije sa boronskom kiselinom u prisustvu Cu(II) soli kao što je Cu(OAc)2. U većini slučajeva, alkilacija nastavlja da daje samo proizvod prikazan u 3c. U odabranim slučajevima, proizvodi tipa prikazanog na Shemi 2 su formirani kao manja komponenta.

[0193] Reprezentativna piridazinon jedinjenja ovog pronalaska mogu biti pripremljena kao što je prikazano na Shemi 4. Korišćenjem modifikovane procedure opisane od strane Vidal (Chem. Eur. J., 3(10):1691 (1997)), amin 1h može da reaguje sa oksaziridinom 4a da se dobije Boc-zaštićeni hidrazin derivat. Deprotekcija sa ili TFA u dihlormetanu ili 4M HCl u dioksanu daje hidrazin 4b. Kondenzacija hidrazina 4b i pogodno supstituisanog hidroksi furanon 4c u metanolu na povišenim temperaturama obezbeđuje piridazinon 4d. Pogodno supstituisan hidroksi furanon derivati 4c mogu biti pripremljen u dva koraka od stirena 4f u skladu sa modifikovanom procedurom opisan od strane van Niel (J. Med. Chem., 48:6004 (2005)). Stiren 4f može biti oksidovan sa olovo tetraacetatom u TFA da se dobije odgovarajući acetaldehid derivat praćeno sa kondenzacijom sa glioksilnom kiselinom u prisustvu morfolins i hlorovodonične kiseline na povišenim temperaturama će obezbediti 4c.

[0194] Intermedijeri za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska gde R<2>je -F može biti pripremljen prema Shemi 5. Olefin 1g može biti podvrgnut hidrofluorinaciji, dajući čak četiri izomerna alkil fluorida. Nakon separacije izomera, deprotekcija aminske zaštitne grupe je postignuta delovanjem ili TFA ili HCl, kao što je prethodno prikazano na Shemi 1. Intermedijer 5a može biti razrađen do jedinjenja ovog pronalaska u skladu sa procedurom opisanom na Shemi 2.

[0195] Intermedijeri za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska gde R<2>je -F može biti pripremljen prema Shemi 5. Olefin 1g može biti podvrgnut hidrofluorinaciji, dajući čak četiri izomerna alkil fluorida. Nakon separacije izomera, deprotekcija aminske zaštitne grupe je postignuta delovanjem ili TFA ili HCl, kao što je prethodno prikazano na Shemi 1. Intermedijer 5a može biti razrađen do jedinjenja ovog pronalaska u skladu sa procedurom opisanom na Shemi 2.

[0196] Jedinjenja u ovom pronalasku sa piridonom vezanim za makrociklus (6a) mogu biti sintetisana oksidacijom jedinjenja 2f sa raznim oksidacionim uslovima kao što je CuI u DMSO, ili kumen hidroperoksid / Pealman-ov katalizator kao što je prikazano na Shemi 6.

[0197] Alternativno, jedinjenja u ovom pronalasku (6a) sa piridonom vezanim za makrociklus mogu biti sintetisana kao što je prikazano na Shemi 7. Tretman 1-etoksiprop-1-ena sa malonil dihloridom praćeno kvenčovanjem sa etanolom obezbeđuje jedinjenje 7a, koje može biti hidrolizovano do 7b sa KOH/EtOH. 7b može biti podvrgnut koncentrovan H2SO4na visokoj temperaturi da obezbedi 7c, koje može reagovati sa 1h da se dobije 7d. 7d može biti konvertovan u njegov triflat 7e, i po Suzuki kuplovanju sa različitom boronskom kiselinom, jedinjenja ovog pronalaska 6a mogu biti pripremljena.

Intermedijer 1

Pripremanje 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ona

[0198]

1A. Pripremanje 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ola

[0200] U suvi RBL od 100 mL koji sadrži 1 M vinilmagnezijum bromid u THF (24 mL, 24.0 mmol) pod Ar na 0 °C je dodat 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehid (3.2 g, 18.13 mmol) u THF (10 mL) u kapima. Reakcija je mešana tokom 1 h i kvenčovan sa 1 N HCl do pH 2. Smeša je ekstrahovan sa Et2O (3 x). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan da se dobije 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ol (3.71 g, 100%) kao bledo žuto ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.34 (ddd, J = 8.9, 8.1, 5.8 Hz, 1H), 6.90 (td, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 6.23 (dddt, J = 17.2, 10.4, 5.8, 1.2 Hz, 1H), 5.60 (dd, J = 7.6, 6.7 Hz, 1H), 5.40 - 5.31 (m, 1H), 5.28 (dt, J = 10.2, 1.2 Hz, 1H), 2.38 (dt, J = 8.3, 1.9 Hz, 1H).

1B. Pripremanje 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ona

[0201] U rastvor 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ol (3.7 g, 18.08 mmol) u acetonu (90 mL) na 0 °C je dodat Jones reagens (8.77 ml, 23.51 mmol) u kapima. Nakon završetka dodavanja Jones reagensa, reakcija je kvenčovana sa iPrOH. Smeša je koncentrovana. Ostatak je suspendovan u vodi i ekstrahovan sa DCM (3x). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran, i koncentrovan. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom da se dobije 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-on kao žuto ulje (3.45 g, 94%) koje je očvrslo u zamrzivaču.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.48 (ddd, J = 9.0, 8.0, 5.5 Hz, 1H), 7.05 - 6.91 (m, 1H), 6.70 (ddt, J = 17.5, 10.5, 1.1 Hz, 1H), 6.29 - 6.11 (m, 2H).

Intermedijer 2

Pripremanje 1-(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona

[0202]

[0203] 1-(3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-on je pripremljen korišćenjem procedure analogne onoj koja je korišćena za pripremanje Intermedijera 1 zamenjivanjem 3hloro-2,6-difluorobenzaldehida sa 3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil) benzaldehidom.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.64 (ddd, J=8.0, 7.4, 0.8 Hz, 1H), 7.50 (dd, J=8.5, 0.6 Hz, 1H), 6.69 (dd, J=17.6, 10.7 Hz, 1H), 6.27 (d, J=10.7 Hz, 1H), 6.01 (dd, J=17.7, 0.7 Hz, 1H).

Intermedijer 3

Pripremanje 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona

[0204]

3A. Pripremanje 5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida

[0205]

[0206] Bočica sa septumom zaptivena čepom je napunjena sa 5-hloro-2-fluorobenzaldehidom (1.0 g, 6.31 mmol), 1H-1,2,3-triazole (3.0 g, 43.4 mmol), i Cs2CO3(2.260 g, 6.94 mmol). Gust rastvor je zagrejan na 90 °C tokom 1 h. Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je smešu željenog proizvoda i neizreagovani triazol početni materijal. Nakon dodavanja ∼5-10 mL vode, proizvod je precipitirao. Filtracija i sušenje u vakuumu dalo je 5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehid kao belu čvrstu supstancu (0.52 g, 40%). MS(ESI) m/z: 208.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 9.85 (s, 1H), 8.09 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.97 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.94 (d, J=0.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J=8.4, 2.3 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.3 Hz, 1H).

3B. Pripremanje 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona

[0207] 1-(5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on je pripremljen korišćenjem procedure analogne onoj koja je korišćena za pripremanje Intermedijera 1 korišćenjem 5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida. MS(ESI) m/z: 234.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.82 - 7.78 (m, 2H), 7.66 - 7.59 (m, 2H), 7.56 - 7.51 (m, 1H), 6.25 (dd, J=17.6, 10.7 Hz, 1H), 5.93 (dd, J=17.3, 0.6 Hz, 1H), 5.82 (dd, J=10.7, 0.6 Hz, 1H).

Intermedijer 4

Pripremanje 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona

[0208]

4A. Pripremanje 2-azido-5-hlorobenzaldehida

[0209] Rastvor 5-hloro-2-fluorobenzaldehida (1.38 g, 8.70 mmol) i NaN3(0.58 g, 8.92 mmol) u DMF (4 mL) je mešan na 55 °C tokom 8 h zatim ohlađen do rt. Reakciona smeša je razblažena sa Et2O i vodom koja je zatim zakiseljena sa 1 N HCl do pH 4. Organski sloj je ispran sa vodom (3x) praćeno slanim rastvorom (3x), zatim osušen preko MgSO4i filtriran. Organski slojevi su zatim koncentrovani da se dobije 1.47 g 2-azido-5-hlorobenzaldehida (93%) kao bledo žute čvrste supstance.<1>H NMR (400MHz, CDCl3-d) δ 10.30 (s, 1H), 7.86 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.58 (dd, J=8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.24 (d, J=8.6 Hz, 1H).

4B. Pripremanje 5-hloro-2-(4-(tributilstanil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida

[0210] Rastvor 2-azido-5-hlorobenzaldehida (386 mg, 2.126 mmol) i tributilstanilacetilena (0.646 mL, 2.126 mmol) u toluenu (5 mL) je zagrejan na 100 °C 5 h zatim ohlađen do rt. Posle 5 h, reakciona smeša je koncentrovana i direktno prečišćena korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 495 mg 5-hloro-2-(4-(tributilstanil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida (43%) kao bledo žutog ulja. MS(ESI) m/z: 498.1 (M+H)<+>.

4C. Pripremanje 5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida

[0211] U rastvor 5-hloro-2-(4-(tributilstanil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida (459 mg, 0.924 mmol) u ACN (5 mL) je dodat NCS (185 mg, 1.386 mmol) i reakcija je zatim zagrejana na 60 °C tokom 15 h. Posle 15 h, reakciona smeša je koncentrovana i direktno prečišćena korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 117 mg 5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida (52%) kao bele čvrste supstance. MS(ESI) m/z: 242.0 (M+H, izotopski pik hlorina)<+>.

4D. Pripremanje 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona [0212] 1-(5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on je pripremljen korišćenjem procedure analogne onoj koja je korišćena za pripremanje Intermedijera 1 zamenjivanjem 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehida sa 5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1il)benzaldehidom. MS(ESI) m/z: 268.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 2H), 7.44 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.29 (dd, J=17.6, 10.6 Hz, 1H), 5.98 -5.79 (m, 2H).

Intermedijer 5

Pripremanje dietil (2-hloro-2-oksoetil)fosfonata

[0213]

[0214] U rastvor 2-(dietoksifosforil)sirćetne kiseline (0.1 mL, 0.622 mmol) u CH2Cl2(1 mL) je dodat 2 M (CO)2Cl2u DCM (0.6 mL, 1.24 mmol), praćeno sa kapi DMF. Reakcija je mešana na rt tokom 2.5 h i koncentrovana u vakuumu da se dobije dietil (2-hloro-2-oksoetil)fosfonat kao žuto ulje.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 4.24 (dq, J = 8.4, 7.1 Hz, 4H), 3.55 - 3.47 (d, J = 21.46 Hz, 2H), 1.42 - 1.38 (t, J = 7.4 Hz, 6H).

Intermedijer 6

Pripremanje (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline

[0215]

6A. Pripremanje (R)-4-benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-ona

[0216] U rastvor od 2-metilbut-3-enoinske kiseline (5.59 g, 55.9 mmol) i NMM (6.14 ml, 55.9 mmol) u THF (62 mL) na 0 °C je dodat pivaloil hlorid (6.87 ml, 55.9 mmol) u kapima. Reakciona smeša je ohlađena do -78 °C, i mešana tokom ∼2 h. U odvojenom sudu: U rastvor od (R)-4-benziloksazolidin-2-ona (8.25 g, 46.6 mmol) u THF (126 mL) na -78 °C je dodat 2.5 M nBuLi u heksanu (20.49 mL, 51.2 mmol) u kapima. Posle 35 min, ova reakcija je prebačena pomoću kanile u prvu reakciju. Reakciona smeša je mešana na -78 °C 2 h, zatim je uklonjeno hladno kupatilo, i reakcija je kvenčovana sa zas NH4Cl. Reakcija je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije žuto ulje (15 g). Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je (R)-4-benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-on (6.59 g, 55%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 282.1 (M+Na)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.36 - 7.19 (m, 5H), 6.03 - 5.93 (m, 1H), 5.23 - 5.10 (m, 2H), 4.69 - 4.63 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.23 - 4.15 (m, 2H), 3.29 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 2.79 (dd, J = 13.5, 9.6 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 6.9 Hz, 3H) ppm. Drugi diastereomer (R)-4-benzil-3-((S)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-on (4.6 g, 38%) takođe je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 260.1 (M+H)<+>.

6B. Pripremanje (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline

[0217] U bistar bezbojan rastvor (R)-4-benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil) oksazolidin-2-ona (6.05 g, 23.33 mmol) u THF (146 mL) na 0 °C je dodat sa CHCl3(3x). Vodeni sloj je zakiseljen sa konc. HCl do pH∼3 i zatim je ekstrahovan sa EtOAc (3x). EtOAc slojevi su kombinovani, isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina (2.15 g, 92%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.84 (br. s., 1H), 5.94 (ddd, J = 17.4, 10.1, 7.4 Hz, 1H), 5.22 - 5.13 (m, 2H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 3H).

Intermedijer 7

Pripremanje 1-ciklopropil-4-nitro-1H-pirazola

[0218]

[0219] DCE (66 ml) je dodat u 4-nitro-1H-pirazol (1.5 g, 13.3 mmol), ciklopropilboronsku kiselinu (2.28 g, 26.5 mmol), 2,2'-bipiridin (2.1 g, 13.3 mmol), i Na2CO3(2.81 g, 26.5 mmol) u 250 mL RBF. Pročišćen je sa Ar (3x). Cu(OAc)2(2.41 g, 13.3 mmol) je dodat praćeno pročišćavanjem sa Ar. Reakcija je zatim zagrejana pod Ar tokom 6 h. Po završetku reakcije, smeša je filtriraan kroz CELITE® i koncentrovana. Prečišćavanje silika gel hromatografijom dalo je 1-ciklopropil-4-nitro-1H-pirazol (0.965 g, 47.5%) kao belu čvrstu supstancu.

Intermedijer 8

Pripremanje 1-etil-4-nitro-1H-pirazola

[0220]

[0221] 1-Etil-4-nitro-1H-pirazol je pripremljen na isti način kao onaj korišćen za pripremanje 1-metil-4-nitro-1H-pirazola opisanog u Primeru 1D, supstituisanjem EtI za MeI.

Intermedijer 9

Pripremanje 1-(2,2-difluoroetil)-4-nitro-1H-pirazola

[0222]

[0223] 1-(2,2-Difluoroetil)-4-nitro-1H-pirazol je pripremljen na isti način kao onaj korišćen za pripremanje 1-metil-4-nitro-1H-pirazola koji je opisan u Primeru 1D supstituisanjem 2,2-difluoroetil trifluorometanesulfonata za MeI.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 6.34 - 5.97 (m, 1H), 4.52 (td, J=13.5, 4.1 Hz, 2H).

Intermedijer 10

Pripremanje 4-nitro-1-(2,2,2-trifluoroetil)-1H-pirazola

[0224]

[0225] 4-Nitro-1-(2,2,2-trifluoroetil)-1H-pirazol je pripremljen na isti način kao onaj korišćen za pripremanje 1-metil-4-nitro-1H-pirazola koji je opisan u Primeru 1D zamenjivanjem 1,1,1-trifluoro-3-jodopropana za MeI.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 4.77 (q, J=8.1 Hz, 2H).

Intermedijer 11

Pripremanje 4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola

[0226]

[0227] 4-Nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol je pripremljen na isti način kao onaj korišćen za pripremanje 1-metil-4-nitro-1H-pirazola koji je opisan u Primeru 1D supstituisanjem SEM-Cl za MeI.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.63 (dd, J=8.9, 7.8 Hz, 3H), 0.98 - 0.90 (m, 3H), 0.02--0.02 (m, 10H).

Intermedijer 12

Pripremanje 1-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona

[0228]

[0229] 1-(6-Bromo-3-hloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on je pripremljen korišćenjem procedure koja je analogna sa intermedijerom 1 zamenjivanjem 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehida sa 6-bromo-3-hloro-2-fluorobenzaldehidom.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.33 - 7.41 (m, 2H), 6.64 (dd, J = 17.6, 10.2 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 17.6 Hz, 1H).

Intermedijer 13

Pripremanje 1-(2-bromo-5-hlorofenil)prop-2-en-1-ona

[0230]

[0231] Intermedijer 13 je pripremljen od 2-bromo-5-hlorobenzaldehida korišćenjem metoda opisanih za sintezu Intermedijera 1 od 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehida da se dobije 1-(2-bromo-5-hlorofenil)prop-2-en-1-on (1.4 g, 97%) kao bistro, bezbojno ulje.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.97 (dd, J=8.5, 1.4 Hz, 1H), 7.79 - 7.65 (m, 2H), 7.19 - 7.06 (m, 1H), 6.61 - 6.48 (m, 2H).

Intermedijer 14

Pripremanje 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazola

[0232]

[0233] Cs2CO3(14.41 g, 44.2 mmol) je suspendovan u rastvoru 4-nitro-1H-pirazola (5.00 g, 44.2 mmol) i DMF (40 mL). Posle zagrevanja do 120 °C tokom 5 min, čvrst natrijum 2-hloro-2,2-difluoroacetat (13.48 g, 88 mmol) je dodat u 10 jednakih porcija tokom 20 min. Reakcija je kompletna posle 10 min dodatnog zagrevanja. Smeša je dodata u levak za separaciju koji sadrži 100 mL vode i ekstrahovan sa Et2O (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc dalo je 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol (6.99 g, 42.9 mmol, 97% prinos) kao bistro, bezbojno ulje.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.39 - 7.05 (t, J = 60 Hz, 1H).

Intermedijer 15

Pripremanje 1-(2,2-difluorociklopropil)-4-nitro-1H-pirazola

[0234]

15A. Pripremanje 4-nitro-1-vinil-1H-pirazola

[0235] 4-Nitro-1H-pirazol (1 g, 8.84 mmol) i BTEAC (0.20 g, 0.884 mmol) su dodati u bočicu koja sadrži DCE (5 mL) i 50% vod NaOH (3.5 g, 44.2 mmol). Reakcija je zagrejana do 80 °C tokom 6 h. Reakcija je filtriran, filtrat je koncentrovan do suva u vakuumu, i ostatak je prečišćen sa hromatografijom na normalnoj fazi (heksani-EtOAc gradijent). 4-Nitro-1-vinil-1H-pirazol (0.87 g, 71% prinos) je izolovan kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.02 (dd, J=15.6, 8.8 Hz, 1H), 5.80 (dd, J=15.5, 1.9 Hz, 1H), 5.17 (dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1H).

15B. Pripremanje 1-(2,2-difluorociklopropil)-4-nitro-1H-pirazola

[0236] Trimetilsilil 2,2-difluoro-2-(fluorosulfonil)acetat (0.57 mL, 2.88 mmol) je polako izručen (over 20 min) u smešu 4-nitro-1-vinil-1H-pirazola (0.2 g, 1.44 mmol) i NaF (6 mg, 0.144 mmol) u metil benzoatu (1 mL), i rastvor je zagrejan do 105 °C. Nakon završetka dodavanja, reakcija je završena. Smeša je ohlađena do rt i podvrgnuta direktno hromatografiji na normalnoj fazi (heksani-EtOAc gradijent) da se dobije 1-(2,2-difluorociklopropil)-4-nitro-1H-pirazol (0.084 g, 30.9% prinos) kao žuta, kristalna čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.26 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 4.18 (dddd, J=10.4, 8.4, 6.2, 2.3 Hz, 1H), 2.40 - 2.10 (m, 2H).

Intermedijer 16

Pripremanje 1-(3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona

[0237]

16A. Pripremanje 3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzaldehida

[0238] U rastvor 1-hloro-4-(difluorometoksi)-2-fluorobenzena (400 mg, 2.04 mmol) u THF (8 mL) na -78 °C je dodat LDA u THF/heptan/etilbenzenu (1.4 mL, 2.4 mmol) u kapima. Nakon što je nastavljeno mešanje na istoj temperaturi tokom 20 min, DMF (0.2 mL, 2.44 mmol) je dodat u jednoj porciji i mešanej je nastavljeno na istoj temperaturi tokom 10 min. HOAc (0.47 mL, 8.14 mmol) je dodat praćeno sa vodom (30 mL). Vodeni sloj je zatim ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentrovani u vakuumu. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije 3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzaldehid (120 mg, 21%) kao bistro, bezbojno ulje.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.35 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.63 (dd, J=8.9, 8.0 Hz, 1H), 7.07 (dd, J=8.9, 1.2 Hz, 1H), 6.87 - 6.39 (t, J = 72 Hz, 1H).

16B. Pripremanje 1-(3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona

[0239] 1-(3-Hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on je pripremljen od 3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzaldehida korišćenjem metoda opisanih za sintezu Intermedijera 1 od 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehid da se dobije 3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorobenzaldehid (0.04 g, 67% prinos) kao bistro, bezbojno ulje.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.48 (dd, J=8.9, 8.1 Hz, 1H), 7.08 - 7.01 (m, 1H), 6.69 - 6.63 (m, 1H), 6.63 - 6.30 (t, J = 73Hz, 1H), 6.18 (d, J=10.5 Hz, 1H), 6.10 (d, J=17.6 Hz, 1H).

Intermedijer 17

Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] octadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

17A. Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0241]

[0242] 13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazolom, Intermedijer 11.

17B. Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0243] 13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je odmah tretiran sa HCl da se dobije 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.69 - 8.64 (m, 1H), 8.36 - 8.32 (m, 1H), 7.94 - 7.90 (m, 2H), 7.82 - 7.77 (m, 2H), 7.65 (s, 2H), 7.62 - 7.58 (m, 1H), 5.87 - 5.82 (m, 1H), 5.56 - 5.50 (m, 1H), 3.44 - 3.39 (m, 2H), 2.69 - 2.60 (m, 1H), 2.30 - 2.11 (m, 3H), 2.10 - 1.93 (m, 2H), 1.74 - 1.65 (m, 1H), 1.42 -1.28 (m, 2H), 1.20 - 1.14 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 543.6 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 4.71 min, čistoća = >99.5%.

Intermedijer 18

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0244]

[0245] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen na način koji je sličan sa 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, Intermedijer 17, supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-onom da se dobije (0.5 mg, 11%) MS(ESI) m/z: 512.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.68 -8.59 (m, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.78 - 7.70 (m, 1H), 7.59 - 7.50 (m, 2H), 7.18 - 7.05 (m, 1H), 6.19 - 6.09 (m, 1H), 5.75 - 5.61 (m, 1H), 3.83 - 3.73 (m, 1H), 3.73 - 3.56 (m, 2H), 2.82 - 2.59 (m, 3H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.76 - 1.63 (m, 1H), 1.45 -1.26 (m, 2H), 1.25 - 1.18 (m, 2H), 1.14 (d, J=6.9 Hz, 5H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 5.67 min, čistoća = 100%.

Intermedijer 19

Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0246]

19A. Pripremanje 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazola

[0247] Cs2CO3(14.41 g, 44.2 mmol) je suspendovan u rastvoru 4-nitro-1H-pirazola (5.00 g, 44.2 mmol) i DMF (40 mL). Posle zagrevanja do 120 °C tokom 5 min, čvrst natrijum 2-hloro-2,2-difluoroacetat (13.48 g, 88 mmol) je dodat u 10 jednakih porcija tokom 20 min. Reakcija je kompletna posle 10 min dodatnog zagrevanja. Smeša je dodata u levak za separaciju koji sadrži 100 mL vode i ekstrahovana je sa Et2O (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc dalo je 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol (6.99 g, 42.9 mmol, 97% prinos) kao bistro, bezbojno ulje.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.39 - 7.05 (t, J = 60 Hz, 1H).

19B. Pripremanje (S)-terc-butil (1-(4-(1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0248] U RBF od 500 mL ispran sa N2je dodat (S)-terc-butil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat, pripremljen kao što je opisano u Primeru 1C, (10 g, 35.4 mmol), 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol, Intermedijer 14, (6.34 g, 38.9 mmol) i dioksan (100 mL). N2je u mehurićima ubačen u rastvor tokom 5 min. i Pd(OAc)2(0.40 g, 1.7 mmol), di(adamantan-1-il)(butil)fosfin (1.27 g, 3.5 mmol), K2CO3(14.7 g, 106 mmol) i PvOH (1.08 g, 10.61 mmol) su dodat. N2je u mehurićima uveden u reakcionu smešu tokom 5 min. Zatim je zagrejana do 100 °C tokom 3 h. Voda (200 mL) je dodata. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc (2 x 200 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom (200 mL), slanim rastvorom (200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc dalo je (S)-terc-butil (1-(4-(1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (12.91 g, 31.5 mmol, 89% prinos) kao blago žuto ulje. MS(ESI) m/z: 410.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.80 (dd, J=5.1, 0.7 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.31 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.27 - 6.91 (t, J=58 Hz, 1H), 5.79 - 5.63 (m, 1H), 5.16 - 5.03 (m, 2H), 4.92 (d, J=5.9 Hz, 1H), 2.67 (t, J=6.4 Hz, 2H), 1.46 (br. s., 9H).

19C. Pripremanje (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-(difluorometil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0249] U RFB sa 3 grla od 100 mL je dodat rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (0.78 g, 1.90 mmol) u MeOH (12 mL) i rastvor NH4Cl (1.02 g, 19 mmol) u vodi (3 mL). U rastvor je dodat Fe (0.53 g, 9.49 mmol). Reakciona smeša je zagrejana do 65 °C tokom 3 h. Voda (50 mL) je dodata. Posle hlađenja do rt, smeša je filtrirana kroz CELITE® uložak i isprana sa MeOH (200 mL). Filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je podeljen između EtOAc (100 mL) i vode (100 mL). Organska faza je razdvojena, isprana sa vodom (100 mL), slanim rastvorom (100 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od DCM/MeOH dalo je (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-(difluorometil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.585 g, 1.54 mmol, 81% prinos) kao ulje. MS(ESI) m/z: 380.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.70 (dd, J=5.0, 0.7 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.32 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.28 -6.97 (t, J=58 Hz, 1H), 5.80 - 5.66 (m, 1H), 5.65 - 5.53 (m, 1H), 5.13 - 5.03 (m, 2H), 4.87 (br. s., 1H), 3.22 (br. s., 2H), 2.65 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.52 - 1.37 (m, 9H).

19D. Pripremanje terc-butil ((S)-1-(4-(1-(difluorometil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0250] U RBF sa 3 grla od 250 mL ispran sa N2je dodat rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-(difluorometil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (5 g, 13.18 mmol) i EtOAc (50 mL). Rastvor je ohlađen do -10 °C i (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina, Intermedijer 6, (1.72 g, 17.13 mmol), piridin (4.26 mL, 52.7 mmol) i T3P® (23.54 mL, 39.5 mmol) su dodati. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i rastvor ostavljen da se ugreje do rt i zatim meša tokom perioda od 20 h. Voda (30 mL) i EtOAc (30 mL) su dodati i smeša je mešana tokom 30 min. Organska faza je razdvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (30 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc dalo je terc-butil ((S)-1-(4-(1-(difluorometil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (5.69 g, 12.33 mmol, 94% prinos). MS(ESI) m/z: 462.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.75 (dd, J=5.0, 0.6 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.32 (t, J=59 Hz, 1H), 7.28 (br. s., 1H), 7.20 (s, 1H), 5.97 - 5.85 (m, 1H), 5.78 - 5.65 (m, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 1H), 5.28 5.19 (m, 2H), 5.12 (d, J=2.0 Hz, 2H), 4.91 - 4.82 (m, 1H), 3.20 - 3.11 (m, 1H), 2.72 - 2.62 (m, 2H), 1.48 - 1.43 (s, 9H), 1.33 (d, J=6.8 Hz, 3H).

19E. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0251] U RBF sa 3 grla od 2 L ispran sa N2je dodat rastvor terc-butil ((S)-1-(4-(1-(difluorometil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (3 g, 6.50 mmol) u EtOAc (1300 mL). Rastvor je poprskan sa Ar tokom 15 min. Grubbs-ov katalizator druge generacije (1.38 g, 1.63 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana do refluksa tokom 24 h. Posle hlađenja do rt, rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od DCM/MeOH da se dobije terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (2.13 g, 4.91 mmol, 76% prinos) kao mrko žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 434.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.71 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.36 (br. s., 1H), 7.27 (t, J=58 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.49 - 6.39 (m, 1H), 5.78 (s, 1H), 4.80 (br. s., 2H), 3.18 - 3.08 (m, 1H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.06 - 1.93 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.19 (d, J=6.6 Hz, 3H).

19F. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0252] Pd na ugljeniku (0.60 g, 0.570 mmol) je dodat u Parr sud za hidrogenizaciju od 250 mL koji sadrži rastvor terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (2.46 g, 5.68 mmol) u EtOH (100 mL). Sud je pročišćen sa N2i stavljen pod pritisak do 55 psi H2ostavljen da se meša tokom 18 h. Reakcija je filtrirana kroz CELITE® i koncentrovana da se dobije terc-butil N-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (2.17 g, 88% prinos) kao mrko-žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 436.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.32 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.96 (t, J=58 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.32 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.22 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.66 (d, J=8.3 Hz, 1H), 2.62 (br. s., 1H), 1.88 (d, J=12.8 Hz, 1H), 1.77 - 1.59 (m, 2H), 1.42 - 1.28 (m, 9H), 1.15 (d, J=18.2 Hz, 2H), 0.83 (d, J=7.0 Hz, 3H).

19G. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0253] 4 N HCl u dioksanu (3.88 mL, 15.5 mmol) je dodat u rastvor terc-butil N-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (2.25 g, 5.2 mmol) u MeOH (10 mL). Reakcija je ostavljena da se meša na rt tokom 2 h. Reakcija je ohlađena u ledenom kupatilu, i 7 N NH3u MeOH (13.3 mL, 93.0 mmol) je dodat. Posle 5 min, reakcija je razblažena sa CH2Cl2(80 mL) i čvrsta supstanca koja je formirana je filtrirana. Filtrat je koncentrovan da se dobije (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (1.3 g, 3.88 mmol, 75% prinos). MS(ESI) m/z: 336.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.94 (t, J=58 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.32 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.01 (dd, J=10.2, 5.1 Hz, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 2H), 1.53 - 1.36 (m, 2H), 1.16 - 1.00 (m, 1H), 0.85 (d, J=7.0 Hz, 3H).

Primer 1

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0254]

1A. Pripremanje (S,E)-N-((4-hloropiridin-2-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamida [0255] U rastvor S-(-)-t-butil-sulfinamida (0.856 g, 7.06 mmol) u DCM (14.13 mL) je dodat sekvencijalno CuSO4(2.481 g, 15.54 mmol) i 4-hloropikolinaldehid (1.0 g, 7.06 mmol) Bela suspenzija je mešana na rt. Posle 3 h, braon suspenzija je filtrirana kroz CELITE®, eluiranjem sa DCM, da se dobije čist braon filtrat. Koncentraciija je dala braon ulje koje teži 1.85 g. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi dalo je 1.31 g (S,E)-N-((4hloropiridin-2-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamida kao bistro, žuto ulje. MS(ESI) m/z: 245.0 (M+H)<+>.

1B. Pripremanje (S)-N-((S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0256] U ohlađenu (0-5 °C) smešu InCl3(13.56 g, 61.3 mmol) u THF (170 mL) je dodat u kapima tokom 30 min rastvor 1 M alilmagnezijum bromida u Et2O (62 mL, 61.3 mmol). Reakcija je ostavljena da se ugreje do rt. Posle 1 h na rt, rastvor (S,E)-N-((4-hloropiridin-2-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamida (10 g, 40.9 mmol) u EtOH (170 mL) je dodat. Posle 2-3 h, reakcija je koncentrovana pod vakuumom na 50-55 °C. Sirov materijal je podeljen između EtOAc (200ml) i vode (50ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom (100ml), osušen preko Na2SO4, filtriran i koncentrovan da se dobije (S)-N-((S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (13.5 g, 106%) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 287.2 (M+H)<+>.

1C. Pripremanje (S)-terc-butil 1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-enilkarbamata

[0257] (S)-N-((S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-enil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (75 g, 261 mmol) je rastvoren u MeOH (1500 mL). Vod 6 N HCl (750 ml, 4.5 mol) je dodat. Reakcija je mešana na rt 2-3 h i zatim je koncentrovana. Ostatak je razblažen sa vodom (2 L), ispran sa EtOAc (500 ml). Vodeni sloj je bazifikovan sa zas NaHCO3, ekstrahovan u EtOAc (3 x 1 L). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (1 L) i slanim rastvorom (1 L), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom na 50-55 °C da se dobije sirov proizvod (43 g, 90%). MS(ESI) m/z: 183.2 (M+H)<+>. Sirov proizvod (42 g, 230 mmol) je rastvoren u DCM (420 mL), i Et3N (32.1 mL, 230 mmol) je dodat praćeno sa dodavanjem u kapima BOC2O (53.4 mL, 230 mmol). Reakcija je mešana na rt tokom 2-3 h. Reakcija je razblažena sa viškom DCM (1 L), isprana sa vodom (500ml) i slanim rastvorom (500ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije (S)-terc-butil 1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-enilkarbamat (61 g, 86%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 283.2 (M+H)<+>.

1D. Pripremanje 1-metil-4-nitro-1H-pirazola

[0258] U rastvor 4-nitro-1H-pirazolа (2.5 g, 22.11 mmol) u THF (50 mL) je dodat NaH (0.973 g, 24.32 mmol) i smeša je mešanа na rt tokom 5 min. U ovu suspenziju je zatim dodat MeI (1.382 mL, 22.11 mmol) i mešan na rt preko noći. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc i isprana slanim rastvorom. Organski sloj je koncentrovan, praćeno sa prečišćavanje korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 1-metil-4-nitro-1H-pirazol kao bela čvrsta supstanca (1.9 g, 80%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.12 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 3.97 (s, 3H).

1E. Pripremanje (S)-terc-butil (1-(4-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0259] U bočicu pod pritiskom je dodat (S)-terc-butil 1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-enilkarbamat (3.0 g, 10.61 mmol), 1-metil-4-nitro-1H-pirazol, (1.348 g, 10.61 mmol), di(adamant-1-il)(butil)fosfin (1.141 g, 3.18 mmol), pivalinska kiselina (0.369 ml, 3.18 mmol) i K2CO3(4.40 g, 31.8 mmol). U reakcionu smešu je zatim dodat DMF (21 mL) i bočica je pročišćena sa Ar (3x). U ovu smešu je zatim dodat Pd(OAc)2(0.476 g, 2.122 mmol). Bočica je zatvorena i zagrejana u uljanom kupatilu na 120 °C preko noći. Reakciona smeša je filtrirana i podeljena između vod 10% LiCl (15 mL) i EtOAc (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15 mL) i osušen preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 1.2 g (S)-terc-butil (1-(4-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (29%) kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 374.4 (M+H)<+>.

1F. Pripremanje (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0260] Rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (1.2 g, 3.21 mmol) u MeOH (10 mL) i AcOH (1 mL) je zagrejan u uljanom kupatilu do 60 °C. U gornji bistar rastvor je zatim polako dodat Zn (0.420 g, 6.43 mmol) i ostavljen da se meša na istoj temperaturi tokom 15 min. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz CELITE® i koncentrovana da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 0.88 g (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (76%) kao bledo braon ulja. MS(ESI) m/z: 344.4 (M+H)<+>.

1G. Pripremanje terc-butil ((S)-1-(4-(1-metil-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0261] U rastvor (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline, Intermedijer 6, (385 mg, 3.84 mmol), (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (880 mg, 2.56 mmol) i piridina (0.620 mL, 7.69 mmol) u EtOAc (40 mL) na -10 °C pod Ar je dodat T3P® (50% mas u EtOAc) (3.05 mL, 5.12 mmol) u kapima. Reakciona smeša je mešana na -10 °C kojoj je dozvoljeno da se postepeno zagreje do rt. Reakciona smeša je zatim ostavljena da se meša na rt tokom 2h. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc praćeno ispiranjem sa zas vod NaHCO3i slanim rastvorom. Organski slojevi su udruženi zajedno, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 0.6 g terc-butil ((S)-1-(4-(1-metil-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (52%) kao žutog ulja. MS(ESI) m/z: 426.5 (M+H)<+>.

1H. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0262] Rastvor terc-butil ((S)-1-(4-(1-metil-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (600 mg, 1.410 mmol) u DCE (18 mL) je pročišćen ubacivanjem mehurića Ar u reakcionu smešu. Grubbs-ov katalizator druge generacije (480 mg, 0.564 mmol) je zatim dodat. Reakciona smeša je pročišćena sa Ar i ispražnjena ponovo (3x). Reakciona smeša je zatim zagrejana na 120 °C u bočici za mikrotalasnu tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana i sirov ostatak je prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije 118 mg terc-butil N-[(9R,10E,13 S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (20%) kao braon ulja. MS(ESI) m/z: 398.5 (M+H)<+>.

1I. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0263] U degaziran rastvor terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (118 mg, 0.297 mmol) u EtOH (12 mL) je dodat Pd na ugljeniku (31.6 mg, 0.030 mmol) i reakciona smeša je zatim mešana pod H2na 55 psi tokom 5 h. Reakciona smeša je zatim filtrirana kroz CELITE® i koncentrovana da se dobije terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (92 mg, 72%) kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 400.4 (M+H)<+>.

1J. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0264] U rastvor terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (92 mg, 0.230 mmol) u MeOH (3 mL) je dodat 4 M HCl u dioksanu (3 mL, 12.00 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 1.5 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana u vakuumu da se dobije 86 mg (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona kao žute čvrste supstance. MS(ESI) m/z: 300.4 (M+H)<+>.

1K. Pripremanje (9R,13S)-13-({3-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-3-oksopropil}amino)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0265] U rastvor (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (34 mg, 0.091 mmol) i 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona (21.34 mg, 0.091 mmol) u DCM (2 mL) je dodat DIEA (16 µL, 0.092 mmol). Reakcija je zatim mešana na rt tokom 15 min. Po završetku tih 15 min, sirova reakciona smeša je korišćena u sledećem koraku. MS(ESI) m/z: 533.4 (M+H)<+>.

1L. Pripremanje [({3-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-3-oksopropil} [(9R,13 S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamoil)metil]fosfonata

[0266] U sirovu reakcionu smešu, (9R,13S)-13-({3-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-3-oksopropil}amino)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (49 mg, 0.092 mmol) na 0 °C je dodat dietil (2-hloro-2-oksoetil)fosfonat (276 µl, 0.276 mmol) i reakciona smeša je postepeno zagrejana do rt i mešana je na rt tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim kvenčovana korišćenjem 0.2 mL H2O praćeno sa prečišćavanjem korišćenjem HPLC na reverznoj fazi. Željene frakcije su zatim koncentrovane korišćenjem BIOTAGE® V10 da se dobije 43 mg [({3-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-3-oksopropil}[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamoil)metil]fosfonata kao bistrog ulja. MS(ESI) m/z: 711.4 (M+H)<+>.

1M. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0267] U rastvor [({3-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-3-oksopropil} [(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamoil)metil]fosfonat (43 mg, 0.060 mmol) u MeOH (1.5 mL) na 0 °C je dodat NaOMe (52.3 mg, 0.242 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno i mešanje je nastavljeno na rt tokom 10 min. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa 1 N HCl (0.05 mL) i koncentrovana da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem HPLC na reverznoj fazi da se dobije 21 mg (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata kao bledo žute čvrste supstance.<1>H NMR (400MHz, CD3OD-d4) δ 8.76 (d, J=6.4 Hz, 1H), 8.27 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.85 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.81 - 7.77 (m, 2H), 7.62 - 7.48 (m, 4H), 5.77 (s, 1H), 5.39 (dd, J=12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.42 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.57 - 2.45 (m, 1H), 2.23 - 2.06 (m, 3H), 1.95 - 1.82 (m, 2H), 1.61 - 1.48 (m, 1H), 1.34 - 1.24 (m, 1H), 1.13 (d, J=6.8 Hz, 2H), 1.07 - 1.02 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 557.4 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 5.82 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 1.8 nM, Kalikrein plazme Ki = 24 nM.

Primer 2

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0268]

[0269] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem, 1-(5-hloro-2(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 1.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.84 - 7.73 (m, 2H), 7.59 - 7.48 (m, 2H), 7.10 (td, J=9.2, 2.0 Hz, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.70 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.79 - 2.68 (m, 2H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 2.33 - 2.19 (m, 1H), 2.07 - 1.90 (m, 2H), 1.69 - 1.56 (m, 1H), 1.21 (br. s., 2H), 1.10 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 526.4 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.97 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 10 nM, Kalikrein plazme Ki = 30 nM.

Primer 3

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0270]

[0271] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona, sa 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 4.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.77 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.71 - 7.57 (m, 4H), 7.54 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.55 (dd, J=12.8, 3.7 Hz, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.60 - 3.49 (m, 2H), 2.60 (d, J=5.7 Hz, 1H), 2.26 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.18 (d, J=11.2 Hz, 1H), 2.04 - 1.84 (m, 2H), 1.68 - 1.52 (m, 1H), 1.45 - 1.31 (m, 2H), 1.20 (d, J=6.6 Hz, 2H), 1.13 - 1.08 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 591.3 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.69 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 0.12 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 4

Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il}benzonitrila

[0272]

4A. Pripremanje (9R,13S)-3-(difluorometil)-13-(4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona [0273]

[0274] U rastvor (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (0.060 g, 0.178 mmol), Intermedijer 19, 4-hidroksi-2H-piran-2-ona, u bočici je dodat nBuOH (0.8 mL) i voda (0.2 mL). Sud je zatvoren i zagrejan na 110 °C tokom 15 h zatim ohlađen do rt. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije (9R,13S)-3-(difluorometil)-13-(4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.0055 g, 7.2%) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 430.0 (M+H).

4B. Pripremanje 1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il trifluorometanesulfonata

[0275]

[0276] U bočicu koja sadrži (9R,13S)-3-(difluorometil)-13-(4-hidroksi-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (5.5 mg, 0.013 mmol), 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-((trifluorometil)sulfonil)metanesulfonamid (5.49 mg, 0.015 mmol) je dodat Et3N (5.36 µl, 0.038 mmol) u DMF (0.3 mL). Posle 1 h na rt, reakciona smeša je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije 1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il trifluorometanesulfonat (1.8 mg, 25.03% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 562.08 (M+H).

4C. Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il}benzonitrile trifluoroacetata

[0277] U rastvor dioksana (0.15 mL) 1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il trifluorometanesulfonata (1.8 mg, 3.21 µmol), (5-hloro-2-cijanofenil)boronske kiseline (0.698 mg, 3.85 µmol) je dodat vod 2 M Na2CO3(3.21 µl, 6.41 µmol). Rastvor je pročišćen sa Ar, i Pd(PPh3)4(0.370 mg, 0.321 µmol) je dodat. Reakcija je pročišćena sa Ar tokom nekoliko minuta zatim je poklopljena i zagrejana na 100 °C tokom 3 h, zatim ohlađena do rt. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi da se dobije 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-2-okso-1,2-dihidropiridin-4-il}benzonitril trifluoroacetat (1.62 mg, 2.370 µmol, 73.9% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 549.4 (M+H).<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.74 (d, J=5.0 Hz, 1H), 8.36 (d, J=6.9 Hz, 1H), 7.87 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 1H), 7.71 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.68 - 7.64 (m, 2H), 7.52 (d, J=4.1 Hz, 1H), 6.73 (d, J=1.9 Hz, 1H), 6.64 (dd, J=7.3, 2.1 Hz, 1H), 6.19 (dd, J=13.1, 4.3 Hz, 1H), 2.76 - 2.67 (m, 1H), 2.38 - 2.27 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 2H), 1.70 - 1.57 (m, 1H), 1.55 - 1.41 (m, 1H), 1.38 - 1.29 (m, 1H), 1.02 (d, J=6.9 Hz, 3H), 0.70 (br. s., 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.66 min, čistoća = >99%; Faktor XIa Ki = 3.2 nM, Kalikrein plazme Ki = 19 nM.

Primer 5

Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklopropil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0278]

[0279] 13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklopropil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola, Primer 1D, sa 1-ciklopropil-4-nitro-1H-pirazolom, Intermedijer 7.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.75 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.33 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.92 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.89 - 7.85 (m, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 3H), 7.59 (dd, J=8.1, 0.7 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 5.84 (t, J=1.2 Hz, 1H), 5.56 - 5.48 (m, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.55 - 3.46 (m, 1H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 2.27-2.11 (m, 3H), 2.03 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.67 - 1.53 (m, 1H), 1.39 - 1.28 (m, 1H), 1.28 - 1.18 (m, 1H), 1.16 - 1.03 (m, 8H). MS(ESI) m/z: 583.5 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.11 min, čistoća = 98%; Faktor XIa Ki = 1.4 nM, Kalikrein plazme Ki = 52 nM.

Primer 6

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0280]

[0281] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama koje su opisane u Primeru 1 supstituisanjem, 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 2.<1>H NMR (400MHz, CD3OD-d4) δ 8.74 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.72 (dd, J=5.6, 1.2 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.56 - 7.51 (m, 1H), 7.47 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 5.47 (dd, J=12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.65 (br. s., 2H), 2.55 - 2.44 (m, 2H), 2.25 - 2.12 (m, 1H), 1.98 - 1.84 (m, 2H), 1.60 -1.48 (m, 1H), 1.13 (br. s., 2H), 1.02 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 576.1 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.27 min, čistoća = 97%; Faktor XIa Ki = 1.7 nM, Kalikrein plazme Ki = 7 nM.

Primer 7

Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-etil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1 (18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0282]

[0283] 13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-etil-9-metil-3,4,7,15 tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-etil-4-nitro-1H-pirazolom, Intermedijer 8.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.35 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.92 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.73 (dd, J=5.5, 1.5 Hz, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 5.84 (s, 1H), 5.48 (dd, J=12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.42 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.51 (dd, J=7.9, 6.2 Hz, 2H), 2.66 - 2.51 (m, 1H), 2.30 - 2.10 (m, 3H), 2.02 - 1.83 (m, 2H), 1.68 - 1.54 (m, 1H), 1.52 (t, J=7.3 Hz, 3H), 1.17 (br. s., 2H), 1.10 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 571.2 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 9.150 min, čistoća = 97%; Faktor XIa Ki = 1.3 nM, Kalikrein plazme Ki = 41 nM.

Primer 8

Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2,2-difluoroetil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0284]

[0285] 13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2,2-difluoroetil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-(2,2-difluoroetil)-4-nitro-1H-pirazolom, Intermedijer 9.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.82 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.33 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.91 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (dd, J=5.5, 1.3 Hz, 1H), 7.68 - 7.63 (m, 3H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 6.48 - 6.15 (m, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.49 (dd, J=12.5, 4.0 Hz, 1H), 4.85 - 4.72 (m, 2H), 3.59 -3.45 (m, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.26 - 2.12 (m, 3H), 1.99 - 1.84 (m, 2H), 1.59 (td, J=13.8, 8.3 Hz, 1H), 1.43 - 1.31 (m, 1H), 1.23 - 1.14 (m, 1H), 1.09 (d, J=7.0 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 607.2 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.521 min, čistoća = 97%; Faktor XIa Ki = 11 nM, Kalikrein plazme Ki = 90 nM.

Primer 9

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il] -4-(2-hidroksipiridin-4-il)-9-metil-3,4, 7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-ona

[0286]

9A. Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-4-(2-metoksipiridin-4-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-ona

[0287] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-9-metil-3, 4, 7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.045 g, 0.088 mmol), (1R,2R)-N1,N2-dimetilcikloheksan-1,2-diamin (0.013 g, 0.088 mmol), 4-iodo-2-metoksipiridina (0.041 g, 0.176 mmol), CuI (3.4 mg, 0.018 mmol), Cs2CO3(0.057 g, 0.176 mmol), i DMF (2 mL) su dodati u bočicu za mikrotalasnu. Smeša je zatim degazirana i povratno napunjena sa Ar (3x). Nakon zaptivanja poklopca za mikrotalasnu, reakcija je zatim zagrejana do 125 °C tokom 30 min u mikrotalasnu. Smeša je prečišćen hromatografijom na reverznoj fazi da se dobije (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-4-(2-metoksipiridin-4-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on (5.9 mg, 11%). MS(ESI) m/z: 619.4 (M+H).<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (s, 1H), 8.68 (d, J=4.9 Hz, 1H), 8.29 (d, J=5.8 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.68 (d, J=5.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J=4.9 Hz, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.74 - 5.62 (m, 1H), 3.93 (s, 4H), 2.77 - 2.61 (m, 3H), 2.20 -1.98 (m, 2H), 1.83 - 1.71 (m, 1H), 1.64 - 1.50 (m, 1H), 1.42 - 1.27 (m, 1H), 0.98 (d, J=6.7 Hz, 3H), 0.85 - 0.65 (m, 1H). Analitička HPLC (Metod C): RT = 1.64 min, čistoća = 100%.

9B. Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-4-(2-hidroksipiridin-4-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-ona

[0288] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-4-(2-metoksipiridin-4-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on (30 mg, 0.048 mmol) je rastvoren u THF (2 mL) i konc. HC1 (500 µl, 6.00 mmol) je dodata. Rastvor je zagrejan do 70 °C tokom 8 h. Reakcija je zatim ohlađena do rt i koncentrovana do suva u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na reverznoj fazi da se dobije (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-4-(2-hidroksipiridin-4-il)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on (12 mg, 32%). MS(ESI) m/z: 605.4 (M+H).<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.80 - 8.71 (m, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.09 - 8.03 (m, 1H), 8.01 - 7.95 (m, 1H), 7.69 - 7.62 (m, 1H), 7.61 - 7.52 (m, 1H), 7.17 - 7.08 (m, 2H), 7.05 - 6.99 (m, 1H), 6.18 - 6.12 (m, 1H), 5.68 -5.60 (m, 1H), 3.79 - 3.65 (m, 2H), 2.89 - 2.79 (m, 1H), 2.79 - 2.67 (m, 2H), 2.33 - 2.21 (m, 1H), 2.19 - 2.05 (m,2H), 1.83 - 1.69 (m, 1H), 1.50- 1.29 (m, 3H), 1.19 (d, J=6.9 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.22 min, čistoća = 96%. Faktor XIa Ki = 14 nM, Kalikrein plazme Ki = 14 nM.

Primer 10

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-etil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0289]

[0290] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-etil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 1, i supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-etil-4-nitro-1H-pirazolom, Intermedijer 8.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.84 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.76 (dd, J=5.7, 1.5 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (td, J=8.7, 5.5 Hz, 1H), 7.12 (td, J=9.2, 1.8 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.5, 4.0 Hz, 1H), 4.43 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.74 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.85 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 2.38 - 2.20 (m, 1H), 2.10 - 1.88 (m, 2H), 1.71 - 1.58 (m, 1H), 1.53 (t, J=7.3 Hz, 3H), 1.22 (br. s., 2H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 540.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 11.04 min, čistoća = 97%. Faktor XIa Ki = 14 nM, Kalikrein plazme Ki = 50 nM.

Primer 11

Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2-hidroksietil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0291]

11A. Pripremanje 3-{2-[(terc-butildimetilsilil)oksi]etil}-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0292]

[0293] DMF (0.7 ml) je dodat u bočicu koja sadrži 4-nitro-1-(2,2,2-trifluoroetil)-1H-pirazol, 4-nitro-1-(2,2,2-trifluoroetil)-1H-pirazoe, Intermedijer 10, (0.02 g, 0.037 mmol), Cs2CO3(0.024 g, 0.074 mmol), i (2-bromoetoksi)(terc-butil)dimetilsilan (0.026 g, 0.110 mmol). Suspenzija je zagrejana do 75 °C tokom 25 min zatim koncentrovana na rt. Sirov proizvod je korišćen u sledećem koraku.

11B. Pripremanje 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2-hidroksietil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0294] U 3-{2-[(terc-butildimetilsilil)oksi]etil}-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je dodat MeOH (0.7 ml) i konc. HCl (0.05 ml, 0.60 mmol) i reakcija je mešana tokom 10 min. Sirov proizvod je prečišćen preparativnom HPLC na reverznoj fazi da se dobije 13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2-hidroksietil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on kao bela čvrsta supstanca (6 mg, 8.22 µmol, 22.2% prinos).<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.76 - 8.70 (m, 1H), 8.34 - 8.30 (m, 1H), 7.93 - 7.88 (m, 1H), 7.84 - 7.78 (m, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 3H), 7.60 (s, 3H), 5.89 - 5.81 (m, 1H), 5.59 - 5.50 (m, 1H), 4.44 - 4.38 (m, 2H), 4.05 - 3.97 (m, 3H), 3.51 - 3.45 (m, 2H), 2.61 - 2.51 (m, 1H), 2.23 - 2.09 (m, 3H), 1.99 - 1.81 (m, 2H), 1.65 - 1.53 (m, 1H), 1.39 - 1.28 (m, 2H), 1.19 - 1.12 (m, 2H), 1.12 - 1.08 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 587.5 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 5.33 min, čistoća = 96%; Faktor XIa Ki = 5.5 nM, Kalikrein plazme Ki = 140 nM.

Primer 12

Pripremanje 2-(13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-4-il)sirćetne kiseline

[0295]

12A. Pripremanje 2-(13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-4-il)acetata

[0296]

[0297] 2-(13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-4-il)acetat je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 11 supstituisanjem (2-bromoetoksi)(terc-butil)dimetilsilana sa etil 2-bromoacetatom.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.69 - 8.62 (m, 1H), 8.37 - 8.34 (m, 1H), 8.31 - 8.26 (m, 1H), 8.03 - 7.98 (m, 1H), 7.96 -7.91 (m, 1H), 7.89 - 7.84 (m, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 2H), 7.63 - 7.58 (m, 1H), 5.89 - 5.82 (m, 1H), 5.48 - 5.38 (m, 1H), 5.17 - 5.13 (m, 2H), 4.34 - 4.23 (m, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.41 -2.28 (m, 1H), 2.25 - 2.16 (m, 2H), 2.03 - 1.87 (m, 2H), 1.76 - 1.64 (m, 1H), 1.61 - 1.49 (m, 1H), 1.32 (s, 4H), 1.26 - 1.20 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 629.4 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 5.33 min, čistoća = 96%.

12B. Pripremanje 2-(13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-4-il)sirćetne kiseline

[0298] U rastvor 2-(13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-l-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadekal(18),2,5,14,16-pentaen-4-il)acetata (16 mg, 0.025 mmol) u THF (1 mL) je dodat LiOH (0.216 mL, 0.432 mmol) i reakcija je mešana na rt tokom 1 h. Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana i ostatak prečišćen pomoću HPLC na reverznoj fazi prečišćavanje da se dobije 9.5 mg 2-(13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-4-il)sirćetne kiseline (50%) kao bele čvrste supstance.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.71 (d, J=6.2 Hz, 1H), 8.34 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.09 (dd, J=5.9, 1.5 Hz, 1H), 7.92 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.90 - 7.89 (m, 1H), 7.69 - 7.56 (m, 3H), 5.82 (s, 1H), 5.42 (dd, J=11.2, 3.3 Hz, 1H), 5.11 (d, J=0.9 Hz, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 1H), 3.42 - 3.40 (m, 1H), 2.67 - 2.54 (m, 1H), 2.34 - 1.94 (m, 5H), 1.79 - 1.64 (m, 1H), 1.63 - 1.49 (m, 1H), 1.31 (d, J=7.0 Hz, 1H), 1.19 (d, J=7.0 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 601.4 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 4.99 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 14 nM, Kalikrein plazme Ki = 480 nM.

Primer 13

Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata, izomer A

[0299]

13A. Pripremanje terc butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0300] U RFB od 250 ml, Fe2(C2O4)3·6H2O (449 mg, 0.928 mmol) u vodi (20 mL) je mešan u toplom vodenom kupatilu dok nije rastvoren u bistar žuti rastvor. SELECTFLUOR® (329 mg, 0.928 mmol) je dodat, praćeno sa dodavanjem terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (123 mg, 0.309 mmol), koji je pripremljen kao u Primeru 1, u ACN (20 mL), praćeno sa dodavanjem NaBH4(94 mg, 2.476 mmol) u porcijama i mešan na rt tokom 1 h. Reakciona smeša je kvenčovana sa 28%-30% vod NH4OH (10 ml), ekstrahovana sa 10% MeOH u DCM (200 ml, 3x). Kombinovana organska faza je ispran slanim rastvorom, osušen preko MgSO4filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi, praćeno sa neutralizacijom dalo je terc-butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (35.4 mg, 27%), kao belu čvrstu supstancu i kao smešu stereo- i regio-diastereomera. MS(ESI) m/z: 418.1 (M+H).

13B1 i 13B2. Pripremanje terc-butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il] karbamata, izomer A (13B1), i terc-butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il] karbamata, izomer B (13B2)

[0301] terc-Butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (35.4 mg), smeša diastereomera, je razdvojena hiralnom SFC separacijom. Kolona: Lux 5µ Celuloza-4, 21 x 250 mm, 5 µ. Mobilna faza: 15%MeOH-0.1%DEA / 85% CO2, Uslovi protoka: 45 mL/min, 150 Bar, 40 °C. Frakcija 1. pika dala je 20 mg 13B1 kao belu čvrstu supstancu koja je obeležena kao pojedinačni izomer A; i frakcija 2. pika je koncentrovana da se dobije 10 mg 13B2 kao bele čvrste supstance koja je obeležena kao pojedinačni izomer B.

13C. Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata, izomer A

[0302] (9S,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat, izomer A (0.0150 g, 61%) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1, korišćenjem 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona i terc-butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata. MS(ESI) m/z: 609.1 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.72 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.63 - 7.59 (m, 2H), 7.57 - 7.50 (m, 2H), 7.47 - 7.44 (m, 2H), 5.78 (s, 1H), 5.67 (dd, J=12.7, 5.4 Hz, 1H), 5.27 - 5.09 (m, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.70 (ddd, J=12.5, 9.7, 5.1 Hz, 1H), 3.12 - 3.01 (m, 1H), 2.43 - 2.32 (m, 1H), 2.31 - 2.21 (m, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 1H), 2.03 - 1.92 (m, 1H), 1.71 - 1.55 (m, 1H), 0.93 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.62 - 0.40 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.16 min, čistoća = >99%; Faktor XIa Ki = 0.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 14

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0303]

[0304] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (25 mg, 53%). je pripremljen na sličan način kao Primer 1 korišćenjem 1-(difluorometil)-4-nitro-1H pirazola, Intermedijer 14, i -(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 2. MS(ESI) m/z: 612.3 (M+H).

<1>H NMR (400MHz, CD3CN) δ 8.87 - 8.73 (m, 1H), 7.82 - 7.36 (m, 7H), 5.93 (s, 1H), 5.66 -5.52 (m, 1H), 4.23 - 4.03 (m, 1H), 3.97 - 3.83 (m, 1H), 3.82 - 3.66 (m, 1H), 2.73 - 2.46 (m, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 1.38 - 1.18 (m, 3H), 1.01 (d, J=6.8 Hz, 4H), 0.85 - 0.71 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 9.88 min, čistoća = 94%; Faktor XIa Ki = 1 nM, Kalikrein plazme Ki = 110 nM.

Primer 15

Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata, izomer B

[0305]

[0306] (9S,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat, izomer B (0.0081 g, 62%) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 13, zamenjivanjem terc-butil N-[(9S,13 S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata sa terc-butil N-[(9S,13S)-10-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamatom, izomer B, koji je pripremljen kao intermedijer 13B2. MS(ESI) m/z: 609.1 (M+H).<1>H NMR (500MHz, metanol-d4) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.72 (dd, J=5.5, 1.4 Hz, 1H), 7.65 - 7.61 (m, 2H), 7.59 - 7.57 (m, 2H), 7.56 - 7.54 (m, 2H), 5.84 (d, J=1.4 Hz, 1H), 5.67 (dd, J=12.9, 2.8 Hz, 1H), 4.50 - 4.30 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.47 - 3.36 (m, 1H), 3.20 - 3.05 (m, 1H), 2.82 -2.53 (m, 2H), 2.33 - 1.86 (m, 4H), 1.22(d, J=6.6 Hz, 3H) Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.29 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 19 nM, Kalikrein plazme Ki = 450 nM.

Primer 16

Pripremanje 2-[(9R, 13S)-13- {4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-3-il]sirćetne kiseline

[0307]

[0308] Rastvor (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2-hidroksietil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata (0.025 g, 0.040 mmol), pripremljen kao što je opisano u Primeru 35, u acetonu (2 mL) je ohlađen do 0 °C. U ovu ohlađenu smešu je zatim dodat 2.86 molarni rastvor Jones reagensa (0.028 mL, 0.080 mmol) i dobijena reakciona smeša ostavljena da se ugreje do rt tokom perioda od 2 h. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa 0.5 mL IPA i koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen prečišćavanjem preparativnom HPLC da se dobije 2-[(9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-3-il]sirćetna kiselina trifluoroacetat (4.5 mg, 5.70 µmol, 14% prinos) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.74 - 8.65 (m, 1H), 8.47 - 8.44 (m, 1H), 7.68 - 7.47 (m, 6H), 5.82 (s, 1H), 5.54 (dd, J=12.8, 3.7 Hz, 1H), 5.20 - 5.06 (m, 2H), 4.21 - 4.07 (m, 1H), 3.61 - 3.43 (m, 2H), 2.62 - 2.49 (m, 2H), 2.30 - 2.05 (m, 3H), 1.99 - 1.77 (m, 2H), 1.66 - 1.50 (m, 1H), 1.43 1.16 (m, 3H). MS(ESI) m/z: 635.4 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.74 min, čistoća = >95.0%; Faktor XIa Ki = 0.19 nM, Kalikrein plazme Ki = 17 nM.

Primer 17

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0309]

17A. Pripremanje 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazola

[0310] DIAD (5.59 mL, 28.7 mmol) je dodat u rastvor 4-nitro-1H-pirazola (2.5 g, 22.11 mmol), CD3OD (0.898 mL, 22.11 mmol), i Ph3P (vezan za smolu) (8.84 g, 26.5 mmol) u THF (40 mL) i mešano je preko noći. Reakcija je kvenčovana sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Sirov proizvod je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od DCM/MeOH da se dobije 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol (1.92 g, 14.76 mmol, 66.7% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 131.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J=0.4 Hz,1H), 8.05 (s, 1H).

17B. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0311] U veliku bočicu za mikrotalasnu su dodati (S)-terc-butil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (2.61 g, 9.22 mmol), 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol (1.0 g, 7.69 mmol), di(adamantan-1-il)(butil)fosfin (0.413 g, 1.15 mmol), K2CO3(3.19 g, 23.06 mmol), pivalinska kiselina (0.268 ml, 2.306 mmol) i DMF (15.37 ml). Reakcija je pročišćena sa Ar tokom 10 min, zatim Pd(OAc)2(0.173 g, 0.769 mmol) je dodat, bočica je zatvorena, i mešana na 115 °C preko noći. Reakcija je zatim podeljena između EtOAc i H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko MgSO4filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (1.49 g, 3.96 mmol, 51.5% prinos) kao pena boje lavande. MS(ESI) m/z: 377.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.77 (d, J=4.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.23 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 5.78 - 5.65 (m, 1H), 5.55 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.14 - 5.03 (m, 2H), 4.89 (d, J=6.8 Hz, 1H), 2.66 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

17C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{4-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0312] terc-Butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (1.45 g, 3.85 mmol) je rastvoren u acetonu (15mL) / vodi (3 mL), ohlađen do 0 °C, i NH4Cl (1.030 g, 19.26 mmol) i Zn (2.52 g, 38.5 mmol) su dodati i reakcija ostavljena da se ugreje do rt. Posle 1 h, reakcija je filtrirana i filtrat je podeljen sa vodom (30 mL) i EtOAc (50 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (20 ml), osušen (MgSO4filtriran, i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-{4-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (0.62 g, 46.5%). MS(ESI) m/z: 347.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.67 (dd, J=5.1, 0.7 Hz, 1H), 7.26 - 7.23 (m, 2H), 7.21 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 5.79 - 5.66 (m, 1H), 5.58 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.11 - 5.05 (m, 2H), 4.86 (q, J=6.6 Hz, 1H), 2.64 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

17D. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0313] (R)-2-Metilbut-3-enoinska kiselina (233 mg, 2.327 mmol), terc-butil N-[(1S)-1-{4-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (620 mg, 1.79 mmol), piridine (0.433 ml, 5.37 mmol) u EtOAc (17.900 mL) je ohlađen do -10 °C pod Ar praćeno sa u kapima dodavanjem T3P® (50%mas u EtOAc) (2.131 ml, 3.58 mmol i zatim reakciona smeša je postepeno zagrejana do rt. Posle 3.5 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sa 1.5 M K2HPO4praćeno slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Sirov proizvod je zatim prečišćen pomoću hromatografije na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1il]karbamat. (529 mg, 1.234 mmol, 69.0% prinos) kao žuta pena. MS(ESI) m/z: 429.2 (M+H)<+>.

17E. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2>,<6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0314] Pet velikih bočica za mikrotalasnu su napunjene u jednakim količinama sa sledećim: terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (0.51 g, 1.190 mmol) u degaziranom DCE (90 mL) je ozračen 120 °C tokom 30 min u prisustvu Grubbs-ov katalizatora druge generacije (0.404 g, 0.476 mmol). Reakcije su kombinovane, koncentrovane, i ostatak prečišćen pomoću hromatografije na koloni na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc da se dobije tercbutil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (0.124 g, 26.0%) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 401.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.66 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.19 (d, J=4.8 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.37 (d, J=7.5 Hz, 1H), 5.68 (t, J=11.2 Hz, 1H), 4.82 - 4.63 (m, 2H), 3.12 - 2.93 (m, 2H), 1.93 (q, J=11.1 Hz, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.15 (d, J=5.9 Hz, 3H).

17F. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0315] PtO2(6.80 mg, 0.030 mmol) je dodat u rastvor koji se meša od terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (0.120 g, 0.300 mmol) u EtOH (10 mL). Suspenzija je podvrgnuta H2atmosferi (55 psi) tokom 1 h. Katalizator je izfiltriran čep od CELITE® i filtrat je koncentrovan. Proizvod (0.104 g, 86%) je prenešen dalje u sledeću reakciju kakav jeste bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 403.2 (M+H)<+>.

17G. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2>,<6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0316] 4 M HCl u dioksanu (1.6 ml) je dodat u rastvor koji se meša terc-butil N-[(9R,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (0.100 g, 0.248 mmol) u MeOH (3 mL). Posle mešanja preko noći, reakciona smeša je koncentrovana do suva i postavljena pod visoki vakuum. Hlorovodonična so je slobodna na osnovu rastvaranja u MeOH, prolaskom kroz vezanog za smolu NaHCO3kertridža (StratoSpheres SPE; 500 mg, 0.90 mmol punjenje) i filtrat je koncentrovan. Materijal je prenešen dalje kakav jeste u sledeću reakciju. MS(ESI) m/z: 303.4 (M+H)<+>.

17H. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0317] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (14 mg, 33% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona i 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 4. MS(ESI) m/z: 594.1 (M+H)<+>.<1>H NMR: (500MHz, metanol-d4) δ 8.78 (br. s., 1H), 8.48 (s, 1H), 7.73 - 7.52 (m, 7H), 5.85 (s, 1H), 5.60 - 5.55 (m, 1H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 2.61 - 2.56 (m, 1H), 2.25 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.20 - 2.15 (m, 1H), 2.00 - 1.86 (m, 3H), 1.61 (dd, J=13.3, 5.9 Hz, 1H), 1.23 - 1.19 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.9 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 5.94 min, čistoća = 92%; Faktor XIa Ki = 0.15 nM, Kalikrein plazme Ki = 10 nM.

Primer 18

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0318]

[0319] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo-[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (17.6 mg, 39%) je pripremljen slično procedurama koje su opisane u Primeru 1 korišćenjem (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, pripremljenog kako je opisano za primer 17G i 1-(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-on, Intermedijer 2. MS(ESI) m/z: 579.1 (M+H)<+>.<1>H NMR: (500MHz, CD3OD) δ 8.78 (br. s., 1H), 8.48 (s, 1H), 7.73 - 7.52 (m, 7H), 5.85 (s, 1H), 5.60 -5.55 (m, 1H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 2.61 - 2.56 (m, 1H), 2.25 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.20 - 2.15 (m, 1H), 2.00 - 1.86 (m, 3H), 1.61 (dd, J=13.3, 5.9 Hz, 1H), 1.23 - 1.19 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.9 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.26 min, čistoća = 95%; Faktor XIa Ki = 2.8 nM, Kalikrein plazme Ki = 30 nM.

Primer 19

Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-l(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}benzonitrila

[0320]

19A. Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(2-bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0321] (9R,13S)-13-[4-(2-Bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.10<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (35 mg, 47%) je pripremljen na sličan način kao Primer 1 korišćenjem 1-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona i 1-(difluorometil)-4-nitro-1H pirazola. MS(ESI) m/z: 604.2 (M+H) i 606.2 (M+2+H).

19B. Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}benzonitrila

[0322] 4-Hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}benzonitril je pripremljen od (9R,13S)-13-[4-(2-bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on na sličan način kao procedure koje su opisane u Primeru 1 da se dobije 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}benzonitril (9 mg, 26%). MS(ESI) m/z: 551.3 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3CN) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.85 - 7.71 (m, 4H), 7.71 - 7.36 (m, 4H), 6.20 (s, 1H), 5.53 (dd, J=2.7, 4.3 Hz, 1H), 3.95 - 3.83 (m, 1H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 2.81 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.56 (td, J=7.2, 3.1 Hz, 1H), 2.28 (dd, J=6.4, 3.5 Hz, 1H), 1.95 - 1.85 (m, 2H), 1.65 - 1.51 (m, 1H), 1.41 - 1.21 (m, 2H), 1.06 - 0.98 (m, 3H), 0.96 - 0.74 (m, 2H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.24 min, čistoća = 96%; Faktor XIa Ki = 1.4 nM, Kalikrein plazme Ki = 10 nM.

Primer 20

Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0323]

[0324] (9S,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.0144 g, 66%) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 13, zamenjivanjem 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-onom, intermedijer 2. MS(ESI) m/z: 594.2 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.76 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.73 - 7.66 (m, 1H), 7.60 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 3H), 5.93 (s, 1H), 5.79 (dd, J=12.7, 5.4 Hz, 1H), 5.33 - 5.14 (m, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.97 - 3.87 (m, 1H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 2.90 - 2.49 (m, 2H), 2.30 - 2.19 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.77 - 1.59 (m, 1H), 0.96 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.67 - 0.45 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.39 min, čistoća = >98%; Faktor XIa Ki = 1.4 nM, Kalikrein plazme Ki = 40 nM.

Primer 21

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0325]

[0326] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (28 mg, 79%) je pripremljen na sličan način kao Primer 1 korišćenjem 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazola, Intermedijer 14, i 1-(3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 16. MS(ESI) m/z: 610.3 (M+H).<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.85 - 8.74 (m, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.69 (s, 2H), 7.65 -7.51 (m, 2H), 7.16 - 7.09 (m, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.03 (s, 1H), 5.69 - 5.60 (m, 1H), 3.93 - 3.81 (m, 1H), 3.80 - 3.69 (m, 1H), 2.75 - 2.57 (m, 3H), 2.33 - 2.16 (m, 1H), 2.06 - 1.87 (m, 2H), 1.72 - 1.53 (m, 1H), 1.41 - 1.19 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.9 Hz, 3H), 0.95 - 0.83 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 9.60 min, čistoća = 99%; Faktor XIa Ki = 0.69 nM, Kalikrein plazme Ki = 40 nM.

Primer 22

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0327]

[0328] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (22 mg, 54%). je pripremljen na sličan način kao Primer 1 korišćenjem 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazola, Intermedijer 14, i 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 1. MS(ESI) m/z: 562.3 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3CN) δ 8.78 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.53 (s, 2H), 7.15 - 7.01 (m, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.67 - 5.55 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.80 - 3.66 (m, 1H), 2.67 (s, 2H), 2.62 - 2.47 (m, 2H), 2.30 - 2.17 (m, 1H), 1.66 - 1.47 (m, 1H), 1.41 - 1.16 (m, 2H), 1.02 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.91 -0.69 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 9.03 min, čistoća = 98%; Faktor XIa Ki = 8 nM, Kalikrein plazme Ki = 50 nM.

Primer 23

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0329]

[0330] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (21 mg, 0.025 mmol, 31% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]prop-2-en-1-onom, Intermedijer 16.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.79 (dd, J=5.6, 1.4 Hz, 1H), 7.57 - 7.48 (m, 2H), 7.13 - 7.05 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.53 (dd, J=12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.67 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.76 - 2.50 (m, 3H), 2.34 - 2.18 (m, 1H), 2.08 - 1.88 (m, 2H), 1.69 - 1.53 (m, 1H), 1.21 (br. s., 2H), 1.09 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 574.3 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.63 min, čistoća = >95.0%; Faktor XIa Ki = 0.92 nM, Kalikrein plazme Ki = 7 nM.

Primer 24

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0331]

[0332] (9R,13S)-13-[4-(3,6-Dihloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.016 g, 61% prinos) je pripremljen na sličan način kao procedura opisana u Primeru 2, zamenjivanjem 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-onom (0.032 g, 0.039 mmol), pripremljenim kao što je opisano u Primeru 31A. MS(ESI) m/z: 542.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) d 8.79 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.71 (dd, J=5.4, 1.7 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.34 (dd, J=8.7, 1.7 Hz, 1H), 5.98 (t, J=1.3 Hz, 1H), 5.58 (dd, J=12.5, 4.0 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.74 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.73 - 2.53 (m, 3H), 2.31 - 2.19 (m, 1H), 2.04 - 1.91 (m, 2H), 1.67 - 1.55 (m, 1H), 1.28 - 1.14 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.36 min, 99.5% čistoća; Faktor XIa Ki = 2.7 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 25

Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0333]

25A. Pripremanje 2-izopropilbut-3-enoinske kiseline

[0334]

[0335] U RBF osušenom na plamenu je dodat 2 M DIA u THF (3.64 ml, 25.6 mmol) i THF (58.1 ml). Reakcija je ohlađena do -78 °C i 1.6 M nBuLi u heksanima (15.97 ml, 25.6 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na -78 °C tokom 30 min i but-3-enoinska kiselina (0.990 ml, 11.62 mmol) je dodata i reakcija je mešana tokom dodatnih 30 min. Zatim na -78 °C iPrI (1.739 ml, 17.42 mmol) je dodat i reakcija je polako zagrejana do rt tokom 2 h i zatim mešana na rt preko noći. Reakcija je kvenčovana sa zas vod NH4Cl (15 ml) i zatim pH rastvora je podešen do <4 korišćenjem 1 N HCl. Reakcija je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani EtOAc sloj je ispran slanim rastvorom (40 mL) i osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem ISCO sistema (0-50% EtOAc/Heks gradijent) da se dobije 2-izopropilbut-3-enoinska kiselina (800 mg, 6.24 mmol, 53.7% prinos) kao bistra tečnost.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.98 - 5.65 (m, 1H), 5.33 - 5.05 (m, 2H), 2.73 (t, J=8.8 Hz, 1H), 2.08 - 1.95 (m, 1H), 1.09 - 0.74 (m, 6H).

25B. Pripremanje terc-butil ((1S-[1-(4-{1-metil-4-[2-(propan-2-il)but-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamata

[0336]

[0337] U RBF je dodat (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat, pripremljen kako je opisano u Primeru 1F, (765 mg, 2.228 mmol), EtOAc (20 mL), 2-izopropilbut-3-enoinska kiselina (286 mg, 2.228 mmol), i piridin (0.540 mL, 6.68 mmol). Rastvor je ohlađen u slanom rastvoru/ledenom kupatilu i 50% T3P® (1.989 mL, 3.34 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 10 min i zatim na rt tokom 60 min. Reakcija je razblažen sa EtOAc (30 mL) i ispran sa sat NaHCO3(20 mL), voda (30 mL) i slanim rastvorom (30 mL). Organski sloj je izdvojen, osušen preko MgSO4filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem ISCO sistema (0-100% EtOAc/Heks gradijent) da se dobije terc-butil ((1S)-1-(4-(4-(2-izopropilbut-3-enamido)-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (850 mg, 1.874 mmol, 84% prinos) kao smeša diastereomera kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 454.2 (M+H)<+>.

25C1 i 25C2. Pripremanje terc-butil N-[(9S,10E,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata, i terc-Butil N-[(9R,10E,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15 tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata

[0338]

[0339] U bočicu za mikrotalasnu je dodat terc-butil ((1S)-1-(4-(4-(2-izopropilbut-3-enamido)-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (250 mg, 0.551 mmol) i DCE (15 mL). Reakcija je pročišćena sa Ar tokom 1 min, zatim Grubbs-ov katalizator druge generacije (187 mg, 0.220 mmol) je dodat. Reakcija je zatvorena i zagrejana u mikrotalasnoj na 120 °C tokom 60 min. Reakcija je zatim koncentrovana i ostatak je prečišćen korišćenjem preparativne HPLC na reverznoj fazi da se dobije terc-butil N-[(9S,10E,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat trifluoroacetate, 25C1, (50 mg, 0.093 mmol, 16.8% prinos), (ESI) m/z: 426.2 (M+H)<+>'koji ima kraće vreme retencije i terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat trifluoroacetat 25C2, (50 mg, 0.093 mmol, 16.8% prinos), MS(ESI) m/z: 426.2 (M+H)<+>koji ima duže vreme retencije.

25D. Pripremanje terc-butil N-[(9S,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0341] U 3-grli RFB je dodat terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat trifluoroacetat (25C2) (15 mg, 0.028 mmol), EtOH (3 mL) i PtO2(3.16 mg, 0.014 mmol). Reakcija je mešana pod H2atmosferom (protisak balona) tokom 1 h. Reakcija je filtrirana kroz CELTTE® i filtrat je koncentrovan da se dobije terc-butil N-[(9S,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (10 mg, 0.023 mmol, 84% prinos) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 618.2 (M+H)<+>.

25E. Pripremanje (9S,13S)-13-amino-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3 1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2 (6),4,14,16-pentaen-8 -ona

[0342]

[0343] U RBF je dodat terc-butil N-[(9S,13S)-3-metil-8-okso-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (20 mg, 0.047 mmol), dioksane(3 mL), 4 N HCl u dioksanu (0.142 mL, 4.68 mmol) i MeOH (0.5 mL). Reakcija je mešana na rt tokom 5 min. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen korišćenjem preparativne HPLC na reverznoj fazi da se dobije (9S,13S)-13-amino-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on hidrohlorid. Proizvod je dodat u prethodno-ispran Agilent StratoSpheres SPE PL-HCO3MP Resin kertridž. Gravitaciona filtracija, eluiranje sa MeOH, dalo je bistar, blago braon filtrat. Koncentrovanje je dalo (9S,13S)-13-amino-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (1.5 mg, 3.43 µmol, 7.34% prinos) kao bež čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 328.2 (M+H)<+>.

25F. Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0344] (9S,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 4, i (9R,13S)-13-amino-3-metil-9-(propan-2-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.79 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.74 (dd, J=5.4, 1.2 Hz, 1H), 7.68 - 7.57 (m, 3H), 7.53 (s, 1H), 5.85 (s, 1H), 5.50 (dd, J=12.5, 3.5 Hz, 1H), 4.10 (s, 3H), 3.55 - 3.40 (m, 2H), 2.30 - 2.13 (m, 3H), 2.10 - 1.90 (m, 3H), 1.79 (dt, J=9.2, 6.6 Hz, 1H), 1.61 (d, J=6.6 Hz, 1H), 1.35 (d, J=3.1 Hz, 1H), 1.19 - 1.09 (m, 1H), 0.99 (dd, J=6.6,4.2 Hz, 6H). MS(ESI) m/z: 619.2 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.67 min, čistoća = 98%; Faktor XIa Ki = 0.47 nM, Kalikrein plazme Ki = 16 nM.

Primer 26

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0345]

26A. Pripremanje 3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorobenzaldehida

[0346]

[0347] U rastvor 1-hloro-4-(difluorometil)-2-fluorobenzena (373 mg, 2.066 mmol) u THF (6 mL) na -78 °C je dodat LDA u THF/heptan/etilbenzen (1.240 mL, 2.479 mmol) u kapima. Rastvor je postao taman. Nakon što je mešanje nastavljeno na istoj temperaturi tokom 20 min, DMF (0.191 mL, 2.479 mmol) je dodat i mešano je na istoj temperaturi tokom 10 min. AcOH (0.473 mL, 8.26 mmol) je dodat praćeno sa vodom (30 mL). Reakcija je ekstrahovana sa EtOAc (30 ml). EtOAc sloj je ispran sa vodom (15 ml) i slanim rastvorom (15 ml), osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem ISCO sistema (0-30% EtOAc/Heks gradijent) da se dobije 3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorobenzaldehid (400 mg, 1.918 mmol, 93% prinos) kao svetlo žuta tečnost.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 10.48 (s, 1H), 7.80 - 7.72 (m, 1H), 7.62 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.27 (t, 1H).

26B. Pripremanje 1-(3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona [0348]

[0349] 1-(3-Hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on je pripremljen korišćenjem procedure analogne onoj koja je korišćena za pripremanje Intermedijera 1 zamenjivanjem 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehida sa 3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorobenzaldehidom.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.64 - 7.55 (m, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.95 - 6.57 (m, 2H), 6.24 - 6.05 (m, 2H).

26C. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0350] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem, 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-onom.<1>H NMR (400MHz, CD3OD-d4) δ 8.81 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.72 (dd, J=5.3, 1.5 Hz, 1H), 7.68 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.03 - 6.70 (m, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.61 (dd, J=12.7, 3.9 Hz, 1H), 4.10 (s, 3H), 3.75 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.72 - 2.54 (m, 3H), 2.32 - 2.19 (m, 1H), 2.08 - 1.92 (m, 2H), 1.64 (dd, J=14.5, 8.8 Hz, 1H), 1.23 (br. s., 2H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 558.1 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.13 min, čistoća = 98%; Faktor XIa Ki = 0.48 nM, Kalikrein plazme Ki = 5 nM.

Primer 27

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0351]

[0352] U zatvorenu epruvetu koja sadrži (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, pripremljen kao što je opisao u Primeru 23, (21 mg, 0.037 mmol), CuI (6.97 mg, 0.037 mmol) u DMSO (1 mL) je dodat 3-jodopiridin (15.00 mg, 0.073 mmol) i Cs2CO3(47.7 mg, 0.146 mmol). Reakciona smeša je pročišćena sa Ar (3x), zatim mešana na 95 °C preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena korišćenjem prep-HPLC da se dobije (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (1.4 mg, 1.898 µmol, 5.19% prinos) kao čist film.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.75 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 2H), 7.50 (dd, J=8.4, 2.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.09 - 6.68 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.48 (d, J=7.7 Hz, 1H), 6.18 (dd, J=12.9, 4.3 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 2.79 - 2.66 (m, 1H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.18 - 2.01 (m, 2H), 1.71 -1.60 (m, 1H), 1.47 (br. s., 1H), 1.06 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.83 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 572.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 11.21 min, čistoća = 93%; Faktor XIa Ki = 4.9 nM, Kalikrein plazme Ki = 40 nM.

Primer 28

Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il{-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0353]

[0354] Bočica za reakciju koja sadrži (9S,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil) fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat, pripremljen kako je opisano u Primeru 20, (0.010 g, 0.014 mmol), 3-jodopiridin (0.020 g, 0.098 mmol), CuI (0.008 g, 0.042 mmol), Cs2CO3(0.023 g, 0.071 mmol) u DMSO (2 mL) je poklopljena i zagrejana na 100 °C tokom 16 h. Posle ovog vremena, reakcija je ohlađena do rt. Reakciona smeša je filtrirana, i koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi dalo je (9S,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il{-10-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.0012 g, 11%) kao bež čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 592.4 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.81 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.66 (br. s., 1H), 7.85 - 7.77 (m, 1H), 7.70 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.50 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.51 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.49 - 5.29 (m, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.25 - 3.13 (m, 1H), 2.44 - 2.19 (m, 2H), 1.91 - 1.70 (m, 1H), 1.43 - 1.28 (m, 1H), 1.02 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.76 - 0.52 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.26 min, čistoća = >92%; Faktor XIa Ki = 3 nM, Kalikrein plazme Ki = 25 nM.

Primer 29

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0355]

[0356] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1,0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (18 mg, 43%) je pripremljen slično procedurama koje su opisane u Primeru 1 korišćenjem (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, pripremljenog kao što je opisano u Primeru 17G i 1-(3-hloro-6-(difluorometil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on, pripremljenog kao što je opisano za Primeru 26. MS(ESI) m/z: 561.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.82 (br. s., 1H), 7.76 (br. s., 1H), 7.71 - 7.66 (m, 2H), 7.56 - 7.52 (m, 2H), 7.04 - 6.82 (m, 1H), 6.00 (s, 1H), 5.63 (d, J=10.3 Hz, 1H), 3.76 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.69 - 2.59 (m, 3H), 2.29 - 2.22 (m, 1H), 2.03 - 1.97 (m, 2H), 1.69 - 1.61 (m, 1H), 1.24 (d, J=4.2 Hz, 1H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.93 min, čistoća = 95%; Faktor XIa Ki = 0.6 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 30

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0357]

[0358] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1,0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (2.1 mg, 18%) je pripremljen slično procedurama koje su opisane u Primeru 1 korišćenjem (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, pripremljen kao što je opisano za primer 17G i 1-(3-hloro-6-(difluorometoksi)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on, Intermedijer 16. MS(ESI) m/z: 577.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) d 7.61 - 7.54 (m, 2H), 7.15 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.10 - 6.78 (m, 2H), 6.06 (s, 1H), 5.71 (br. s., 1H), 3.85 - 3.73 (m, 2H), 2.71 - 2.60 (m, 3H), 2.27 - 2.21 (m, 1H), 2.04 -1.95 (m, 2H), 1.65 (td, J=13.5, 8.3 Hz, 1H), 1.28 (d, J=9.9 Hz, 1H), 1.22 - 1.15 (m, 1H), 1.16 - 1.07 (m, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 9.98 min, čistoća = 95%; Faktor XIa Ki = 1 nM, Kalikrein plazme Ki = 7 nM.

Primer 31

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0359]

31A. Pripremanje 1-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona

[0360] 1-(3,6-Dihloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on je pripremljen na sličan način kao procedura koja je opisana za pripremanje 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil) prop-2-en-1-ona, Intermedijer 1, zamenjivanjem 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehida, sa 3,6-dihloro-2-fluorobenzaldehidom. MS(ESI) m/z: 219.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.42 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.20 (dd, J=8.7, 1.4 Hz, 1H), 6.63 (dd, J=17.6, 10.6 Hz, 1H), 6.23 (d, J=10.3 Hz, 1H), 6.06 (d, J=17.6 Hz, 1H).

31B. Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0361] (9R,13S)-13-[4-(3,6-Dihloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.014 g, 81% prinos) je pripremljen na sličan način kao procedura opisana u Primeru 22, zamenjivanjem 1-(3-hloro-2,6-difluorofenil) prop-2-en-1-on sa 1-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on (8.94 mg, 0.041 mmol). MS(ESI) m/z: 578.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.79 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.83 - 7.67 (m, 3H), 7.61 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.55 - 7.46 (m, 1H), 7.34 (dd, J=8.7, 1.7 Hz, 1H), 5.97 (s, 1H), 5.62 (dd, J=12.7, 3.9 Hz, 1H), 3.93 - 3.73 (m, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 3H), 2.30 - 2.18 (m, 1H), 2.01 - 1.87 (m, 2H), 1.66 - 1.54 (m, 1H), 1.30 - 1.18 (m, 1H), 1.10 - 0.94 (m, 4H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.75 min, 100% čistoća; Faktor XIa Ki = 1.9 nM, Kalikrein plazme Ki = 11 nM.

Primer 32

Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il} benzonitrila

[0362]

[0363] 4-Hloro-2-{1-[(9R,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il{benzonitril trifluoroacetata (2.1 mg, 18%) je pripremljen slično procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, pripremljenog kao što je opisano u Primeru 17G, i 2-akriloil-4-hlorobenzonitrila, pripremljenog kao što je opisano u Primeru 19. MS(ESI) m/z: 518(M+H)<+>.<1>H NMR: (400MHz, CD3OD) δ 8.80 (br. s., 1H), 7.84 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 2H), 7.62 (dd, J=8.3, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.63 (dd, J=12.4, 3.2 Hz, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 2H), 2.89 - 2.82 (m, 2H), 2.65 - 2.57 (m, 1H), 2.32 - 2.21 (m, 1H), 2.06 - 1.96 (m, 2H), 1.69 - 1.60 (m, 1H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.22 min, čistoća = 98%; Faktor XIa Ki = 2.4 nM, Kalikrein plazme Ki = 4 nM.

Primer 33

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0364]

33A. Pripremanje 1-hloro-4-(1,1-difluoroetil)-2-fluorobenzena

[0365] U epruvetu je dodat 1-(4-hloro-3-fluorofenil)etanon (1 g, 5.79 mmol), CH2Cl2(10 mL) i DAST (2.297 mL, 17.38 mmol). Reakcija je zatim zatvorena i mešana na 45 °C tokom 8 h. Reakcija je pažljivo kvenčovana sa hladnim zas vod NaHCO3tokom 30 min dok pH nije bio > 7. Organski sloj je razdvojen, ispran sa vodom (10 ml), osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem ISCO sistema (0-10% EtOAc/Heks gradijent) da se dobije 1-hloro-4-(1,1-difluoroetil)-2-fluorobenzen (30 mg, 0.154 mmol, 2.66% prinos) kao svetlo braon tečnost.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 1.90 (t, J=18.2 Hz, 3H).

33B. Pripremanje 3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorobenzaldehida

[0366]

[0367] U rastvor 1-hloro-4-(1,1-difluoroetil)-2-fluorobenzena (110 mg, 0.565 mmol) u THF (2 mL) na -78 °C je dodat LDA u THF/heptan/etilbenzen (0.339 mL, 0.678 mmol) u kapima. Rastvor je postao taman. Nakon što je nastavljeno mešanje na istoj temperaturi tokom 20 min, DMF (0.052 mL, 0.678 mmol) je dodat i zatim reakcija je mešana na istoj temperaturi tokom 10 min. AcOH (0.129 mL, 2.261 mmol) je dodat praćeno sa vodom (30 mL). Reakcija je ekstrahovana sa EtOAc (30 ml). EtOAc sloj je ispran sa vodom (15 ml) i slanim rastvorom (15 ml), osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem ISCO sistema (0-30% EtOAc/Heks) da se dobije 3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2fluorobenzaldehid (100 mg, 0.449 mmol, 79% prinos) kao svetlo žuta tečnost.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 10.45 (s, 1H), 7.63 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.45 - 7.31 (m, 1H), 2.08 - 2.00 (m, 3H).

33C. Pripremanje 1-(3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-ona [0368]

[0369] 1-(3-Hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-on je pripremljen korišćenjem procedure analogne onoj koja je korišćena za pripremanje Intermedijera 1 zamenjivanjem 3-hloro-2,6-difluorobenzaldehida sa 3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorobenzaldehidom.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.52 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.29 (dd, J=8.4, 0.7 Hz, 1H), 6.64 (dd, J=17.6, 10.6 Hz, 1H), 6.22 - 6.16 (m, 1H), 6.03 - 5.94 (m, 1H), 1.91 (t, J=18.5 Hz, 3H).

33D. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0370] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-6-(1,-difluoroetil)-2-fluorofenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-6-(1,1-difluoroetil)-2-fluorofenil)prop-2-en-1-onom.<1>H NMR (400MHz, CD3OD-d4) 8.81 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.71 (br. s., 1H), 7.65 - 7.58 (m, 1H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 7.45 (d, J=8.6 Hz, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.61 (d, J=9.5 Hz, 1H), 4.10 (s, 3H), 3.79 - 3.67 (m, 2H), 2.71 - 2.58 (m, 3H), 2.25 (br. s., 1H), 2.06 - 1.87 (m, 5H), 1.71 - 1.56 (m, 1H), 1.22(br. s., 2H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 572.2 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 10.48 min, čistoća = 96%; Faktor XIa Ki = 5.7 nM, Kalikrein plazme Ki = 50 nM.

Primer 34

Pripremanje (9R,13S)-3-[2-(terc-butoksi)etil]-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0371]

34A. Pripremanje 1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-nitro-1H-pirazola

[0372] DIAD (8.60 mL, 44.2 mmol) je dodat u rastvor 4-nitro-1H-pirazola (5 g, 44.2 mmol), 2-(terc-butoksi)etanola (5.23 g, 44.2 mmol), i PPh3(11.60 g, 44.2 mmol) u THF (40 mL) i mešan na rt tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim kvenčovana sa vodom i prečišćena korišćenjem silika gel hromatografije da se dobije 1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-nitro-1H-pirazol (10.45 g, 44.1 mmol, 95% prinos).<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 4.26 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.76 - 3.63 (m, 2H), 1.10 (s, 9H).

34B. Pripremanje (S)-benzil (1-(4-(1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0373] U bočicu pot pritiskom koja je isprana pomoću N2je dodat (S)-benzil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (3.0 g, 9.47 mmol) pripremljen kao (S)-terc-butil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat, opisan u Primeru 1C, zamenjivanjem Boc2O sa Cbz-Cl, i 1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-nitro-1H-pirazolom (1.34 g, 6.31 mmol), di(adamant-1-il)(butil)fosfinom (0.679 g, 1.894 mmol), PvOH (0.193 ml, 1.894 mmol) i K2CO3(2.62 g, 18.94 mmol). U reakcionu smešu je zatim dodat DMF (18 mL) i bočica je pročišćena sa N2tokom 5 min. U ovu smešu je zatim dodat Pd(OAc)2(0.283 g, 1.263 mmol). Reakciona smeša je ponovo kratko pročišćena sa N2. Bočica je zatvorena i zagrejana u uljanom kupatilu na 120 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je ohlađena do rt i podeljena između 10% vodenog LiCl (15 mL) i EtOAc (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15 mL), osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije (S)-benzil (1-(4-(1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2il)but-3-en-1-il)karbamat (2.2 g, 4.23 mmol, 67% prinos) kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 494.2 (M+H)<+>.

34C. Pripremanje (S)-benzil (1-(4-(4-amino-1-(2-(terc-butoksi)etil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0374] Rastvor (S)-benzil (1-(4-(1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (0.95 g, 1.925 mmol) u MeOH (10 mL) i AcOH (1.0 mL) je zagrejan u uljanom kupatilu na 40 °C. U gornji bistar rastvor je zatim polako dodat Zn (0.252 g, 3.85 mmol, u 3 porcije (50:25:25%) i ostavljen da se meša na istoj temperaturi tokom 5 min. Reakciona smeša je praćena pomoću LCMS i jednom kada je reakcija završena, u ohlađenu reakcionu smešu je zatim dodat 1.0 g K2CO3(1 g za 1 mL AcOH) i 1.0 mL vode, i zatim je mešana tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim filtrirana preko uloška od CELITE® i koncentrovana u vakuumu da se dobije sirov proizvod. Sirov proizvod je podeljen između EtOAc (40 mL) i sat aq NaHCO3(20 mL). Organski sloj je razdvojen, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije (S)-benzil (1-(4-(4-amino-1-(2-(terc-butoksi)etil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.49 g, 1.004 mmol, 52% prinos) kao bledo braon ulje. MS(ESI) m/z: 464.5 (M+H)<+>.

34D. Pripremanje benzil ((S)-1-(4-(1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0375] U RFB od 250 mL sa 3 grla koji je ispran sa N2je dodat (S)-benzil (1-(4-(4-amino-1-(2-(terc-butoksi)etil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.49 g, 1.057 mmol) i EtOAc (15 mL). Rastvor je ohlađen do -10 °C i (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina, kao što je pripremljena u Intermedijeru 6 (106 mg, 1.057 mmol), piridin (0.171 mL, 2.114 mmol) i T3P® (0.944 mL, 1.586 mmol) su dodat. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i rastvor ostavljen da se ugreje do rt i zatim meša tokom perioda od 20 h. Voda (20 mL) i EtOAc (20 mL) su dodati i smeša je mešana tokom 30 min. Organska faza je razdvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (20 mL). Kombinovani organski ekstrakti isprani slanim rastvorom (15 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirain i koncentrovani u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od heksana/EtOAc dalo je benzil ((S)-1-(4-(1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.35 g, 0.609 mmol, 58% prinos). MS(ESI) m/z: 546.6 [M+H]<+>.

34E. Pripremanje benzil N-[(9R,10E,13S)-3-[2-(terc-butoksi)etil]-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0376] U RFB od 250 mL sa 3 grla koji je ispran sa N2je dodat rastvor benzil ((S)-1-(4-(1-(2-(terc-butoksi)etil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (350 mg, 0.641 mmol) u DCE (18 mL). Rastvor je poprskan sa Ar tokom 15 min. Grubbs-ov katalizator druge generacije (218 mg, 0.257 mmol) je dodat u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrejana u mikrotalasnoj do 120 °C tokom 30 min. Posle hlađenja do rt, rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom od DCM/MeOH da se dobije benzil N-[(9R,10E,13S)-3-[2-(terc-butoksi)etil]-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (140 mg, 0.243 mmol, 38% prinos) kao mrko žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 518.5 [M+H]<+>.

34F. Pripremanje (9R,13,S)-13-amino-3-[2-(terc-butoksi)etil]-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo 12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0377] Pd na ugljeniku (0.033 g, 0.031 mmol) je dodat u Parr sud za hidrogenizaciju od 250 mL koji sadrži rastvor benzil N-[(9R,10E,13S)-3-[2-(terc-butoksi)etil]-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (160 mg, 0.309 mmol) u EtOH (10 mL). Sud je pročišćen sa N2i stavljen pod pritisak od 55 psi H2i ostavljeno je da se meša tokom 4 h. Reakcija je filtrirana kroz uložak od CELITE® i koncentrovana da se dobije (9R,13S)-13-amino-3-[2-(terc-butoksi)etil]-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (81 mg, 0.210 mmol, 68% prinos) kao mrko žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 386.5 [M+H]<+>.

34G. Pripremanje (9R,13S-3-[2-(terc-Butoksi)etil]-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0378] (9R,13S)-3-[2-(terc-Butoksi)etil]-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 4, da se dobije (9R,13S)-3-[2-(terc-butoksi)etil]-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-9-metil-3,4,7,15tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (48 mg, 0.058 mmol, 27% prinos).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.49 - 8.44 (m, 1H), 8.23 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.68 - 7.53 (m, 4H), 5.86 - 5.79 (m, 1H), 5.48 (dd, J=12.8, 3.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 2H), 3.94 - 3.78 (m, 2H), 3.53 - 3.34 (m, 2H), 2.58 -2.46 (m, 1H), 2.26 - 2.14 (m, 3H), 2.02 - 1.83 (m, 2H), 1.66 - 1.51 (m, 1H), 1.30 (br. s., 1H), 1.10 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.08 - 1.03 (m, 9H). MS(ESI) m/z: 677.5 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.93 min, čistoća = >95.0%; Faktor XIa Ki = 1.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 50 nM.

Primer 35

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-3-(2-hidroksietil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0379]

[0380] U rastvor (9R,13S)-3-[2-(terc-butoksi)etil]-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (3 2 mg, 0.047 mmol)) u DCM je dodat TFA (2 mL) i reakcija je mešana na rt tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana u vakuumu i prečišćena korišćenjem prečišćavanja preparativnom HPLC da se dobije (9R,13S-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2-hidroksietil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (28.4 mg, 0.037 mmol, 78% prinos).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.77 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.89 (dd, J=5.3, 1.3 Hz, 1H), 7.70 - 7.58 (m, 6H), 5.86 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.8, 3.5 Hz, 1H), 4.47 - 4.40 (m, 2H), 4.07 - 3.98 (m, 3H), 3.52 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.49 - 2.36 (m, 1H), 2.34 - 2.11 (m, 2H), 2.01 - 1.82 (m, 2H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.18 (br. s., 1H), 1.12 (d, J=7.0 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 621.5 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.42 min, čistoća = >95.0%; Faktor XIa Ki = 0.82 nM, Kalikrein plazme Ki = 32 nM.

Primer 36

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona.

[0381]

[0382] (9R,13S)-13-[4-(6-Bromo-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem, 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 12.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) d 8.72 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.52 - 7.37 (m, 4H), 5.93 (s, 1H), 5.65 (dd, J=12.7, 3.9 Hz, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.91 - 3.69 (m, 2H), 2.65 - 2.53 (m, 3H), 2.27 - 2.13 (m, 1H), 2.04 - 1.80 (m, 2H), 1.66 - 1.51 (m, 1H), 1.37 - 1.17 (m, 1H), 1.05 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.02 - 0.93 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 586.0 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.46 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 1.7 nM, Kalikrein plazme Ki = 5 nM.

Primer 37

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(2-bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0383]

[0384] (9R,13S)-13-[4-(2-Bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.085 g, 20% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1M zamenjivanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on sa 1-(2-bromo-5-hlorofenil)prop-2-en-1-on (0.15 g, 0.611 mmol), Intermedijer 13. MS(ESI) m/z: 570.4 (M+2+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.79 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.75 (dd, J=5.5, 1.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.34 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.30 (dd, J=8.5, 2.5 Hz, 1H), 5.91 (t, J=1.2 Hz, 1H), 5.56 (dd, J=12.7, 3.9 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.72 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.73 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.04 -1.91 (m, 2H), 1.67 - 1.56 (m, 1H), 1.27 - 1.16 (m, 2H), 1.10 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.44 min, 96.5% čistoća; Faktor XIa Ki = 4.7 nM, Kalikrein plazme Ki = 16 nM.

Primer 38

Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0385]

[0386] U eprivetu koja se može zatvoriti je dodat (9R,13S)-13-[4-(2-bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.02 g, 0.029 mmol), pripremljen kao što je opisano u Primeru 37, 1-(difluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol (7.86 mg, 0.032 mmol), 3 M vod K3PO4(0.039 ml, 0.117 mmol) i THF (1 ml). Ar je u mehurićima ubačen kroz reakcionu smešu tokom nekoliko min i (DtBPF)PdCl2(0.95 mg, 1.464 µmol) je dodat. Reakcija je zatvorena i zagrejana na 90 °C. Posle 18 h, reakcija je ohlađena do rt i koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi dalo je (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (6.5 mg, 30% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 606.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.77 (br. s., 1H), 8.22 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.78 - 7.66 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.50 (t, J=59.6 Hz, 1H), 7.45 -7.43 (m, 2H), 7.35 (t, J=1.2 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.54 (d, J=9.4 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.49 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.60 - 2.52 (m, 1H), 2.37 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.22 - 2.13 (m, 1H), 1.99 - 1.88 (m, 2H), 1.63 - 1.54 (m, 1H), 1.23 - 1.14 (m, 2H), 1.09 (d, J=6.9 Hz, 3H).<19>F NMR (376MHz, CD3OD) δ -77.60 (s), -96.03 (s). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.39 min, 98.5% čistoća; Faktor XIa Ki = 1.8 nM, Kalikrein plazme Ki = 120 nM.

Primer 39

Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}-3-fluorobenzonitrila

[0387]

[0388] 4-Hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}-3-fluorobenzonitril je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 19 supstituisanjem, (9R,13S)-13-[4-(2-bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on sa (9R,13S)-13-[4-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, Primer 36.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.75 - 7.63 (m, 3H), 7.54 (s, 1H), 6.19 (t, J=1.2 Hz, 1H), 5.59 (dd, J=12.5, 4.0 Hz, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.81 - 3.71 (m, 2H), 2.84 - 2.69 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.31 - 2.18 (m, 1H), 2.05 - 1.91 (m, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 1H), 1.21 (d, J=4.2 Hz, 2H), 1.09 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 533.1 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.62 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 1.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 120 nM.

Primer 40

Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0389]

40A. Pripremanje 5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida [0390] 3,3,3-Trifluoroprop-1-in gas je nežno u mehurićima propušten tokom 3 min u suspenziju od 2-azido-5-hlorobenzaldehida (160 mg, 0.881 mmol) i Cu2O (14 mg, 0.098 mmol) u CH3CN (6 ml). Reakcioni sud je poklopljen i reakcija je mešana na rt preko noći. Reakcija je razblažena sa EtOAc i isprana sa zas NH4Cl i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije 5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehid (241 mg, 99% prinos) kao bež čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 276.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.88 (s, 1H), 8.26 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.10 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.78 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J=8.4 Hz, 1H).

40B. Pripremanje 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil) prop-2-en-1-ol

[0391] U rastvor 5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)benzaldehida (241 mg, 0.874 mmol) i THF (10 mL) na 0 °C je dodat u kapima 1.6 M vinilmagnezijum hlorid u THF (1.137 mL, 1.137 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim na rt tokom 1 h. Reakcija je zatim kvenčovana sa 1 N HCl. Reakcija je podeljena između EtOAc i vode i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, koncentrovan prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ol (224 mg, 84% prinos) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 304.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.18 (d, J=0.7 Hz, 1H), 7.72 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.47 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.87 (ddd, J=17.3, 10.3, 5.4 Hz, 1H), 5.20 (dt, J=6.0, 1.2 Hz, 1H), 5.18 - 5.14 (m, 1H), 5.11 (d, J=4.0 Hz, 1H), 2.82 (br. s., 1H).

40C. Pripremanje 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil) prop-2-en-1-ona

[0392] U rastvor 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil) prop-2-en-1-ol (124 mg, 0.408 mmol) u acetonu (5 mL) na 0 °C je dodat u kapima Jones reagens (0.16 mL, 0.408 mmol) dokle god je braon boja postojala. Reakciona smeša je kvenčovana sa IPA, razblažena sa EtOAc i bazifikovana sa zas NaHCO3do pH 8. Organski sloj je razdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, koncentrovani, i zatim prečišćeni hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on (112 mg, 91% prinos) kao žuto ulje.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.11 (s, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.65 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.41 (dd, J=17.5, 10.7 Hz, 1H), 6.10 - 5.91 (m, 2H). MS(ESI) m/z: 302.3 (M+H)<+>.

40D. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} -6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0393] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (14 mg, 36% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 zamenjivanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on sa 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.93 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.72 (br. s., 1H), 7.69 - 7.55 (m, 5H), 7.50 (s, 1H), 5.80 (s, 1H), 5.52 (d, J=11.9 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.56 - 3.42 (m, 2H), 2.60 - 2.48 (m, 1H), 2.24 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.13 (m, 1H), 2.03 - 1.78 (m, 2H), 1.62 - 1.51 (m, 1H), 1.18 (m., 1H), 1.07 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 625.1 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT =7.44 min, čistoća = 97%; Faktor XIa Ki = 0.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 41

Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{3-hloro-6-[1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il]-2-fluorofenil{-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0394]

[0395] (9R,13S)-13-(4-{3-Hloro-6-[1-(difluorometil)-1H-pirazol-4-il]-2-fluorofenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (9.5 mg, 38% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurom opisanom u Primeru 38 zamenjivanjem (9R,13S)-13-[4-(2-bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata sa (9R,13S)-13-[4-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.02 g, 0.034 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 36. MS(ESI) m/z: 624.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.73 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.49 (t, J=59.0 Hz, 1H), 7.30 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 1H), 5.96 (s, 1H), 5.59 (dd, J=12.8, 3.7 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.64 - 3.49 (m, 2H), 2.62 -2.51 (m, 1H), 2.42 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.01 - 1.83 (m, 2H), 1.64 - 1.53 (m, 1H), 1.27 - 1.03 (m, 5H).<19>F NMR (376MHz, CD3OD) δ -77.45 (s), -96.21 (s), -117.57 (s). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.47 min, 100% čistoća. Faktor XIa Ki = 1 nM, Kalikrein plazme Ki = 34 nM.

Primer 42

Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0396]

[0397] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (21mg, 41% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem 1-(5-hloro-2-(4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona, pripremljenog kako je opisano u Primeru 40C, i (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, pripremljenog kako je opisano u Primeru 18.<1>H NMR (400MHz, CD3OD-d4) δ 8.94 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.77 (br. s., 1H), 7.75 (br. s., 2H), 7.69 - 7.59 (m, 4H), 7.52 (s, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.47 (d, J=10.3 Hz, 1H), 3.50 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.55 (ddd, J=9.3, 6.5, 3.3 Hz, 1H), 2.27 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 1.99 - 1.83 (m, 2H), 1.64 - 1.52 (m, 1H), 1.17 (br. s., 2H), 1.08 (d, J=6.8 Hz, 3H) MS(ESI) m/z: 628.2 (M+H). Analitička HPLC (Metoda A): RT =7.43 min, čistoća = 99%; Faktor XIa Ki = 0.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 7 nM.

Primer 43

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0398]

43A. Pripremanje (S)-N-[(1E)-(6-hloropiridin-2-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0399] U rastvor (S)-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.712 g, 14.13 mmol) u DCM (61.4 mL) je dodat sekvencijalno Cs2CO3(6.91 g, 21.19 mmol) i 6-hloropikolinaldehid (2.0 g, 14.13 mmol). Dobijena bela suspenzija je mešana na rt. Posle 17 h, reakcija je stopirana i filtrirana. Filtrat je razblažen sa EtOAc (100 ml) i ispran slanim rastvorom (50 mL x 3). Organski sloj je osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan da se dobije (S)-N-[(1E)-(6-hloropiridin-2-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamid (3.58g, 104%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1H), 7.99 - 7.94 (m, 1H), 7.79 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=7.9, 0.7 Hz, 1H), 1.28 (s, 10H).

43B. Pripremanje(S)-N-[(1S)-1-(6-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida, i

43C. Pripremanje (S)-N-[(1R)-1-(6-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0400] U smešu od (S)-N-[(1E)-(6-hloropiridin-2-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.73 g, 7.07 mmol) i In (0.92 g, 10.60 mmol) u THF (17.7 ml) je polako dodat 3-bromoprop-1-en (0.92 g, 10.60 mmol). Reakcija je zagrejana na 60 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađen do rt, filtrirana kroz CELITE® i filtrat je koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi, korišćenjem heksana i EtOAc, koja je dala 5.6:1 (S)-N-[(1S)-1-(6-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamid:(S)-N-[(1R)-1-(6-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamid (2.42 g, 58%) kao glavni proizvod i kao braon polu-čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 287.4 (M+H)<+>.

43D. Pripremanje (S)-2-metil-N-[(1R)-1-[6-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]propan-2-sulfinamida (Diastereomer A), i

43E. Pripremanje (S)-2-metil-N-[(1S)-l-[6-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]propan-2-sulfinamida (Diastereomer B)

[0401] U bočicu pod pritiskom koja je isprana sa N2je dodat 5.6:1 (S)-N-[(1S)-1-(6-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamid: (S)-N-[(1R)-1-(6-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamid (2.18 g, 7.60 mmol), 1-metil-4-nitro-1H-pirazol (0.966 g, 7.60 mmol), pripremljeni kao što je opisano u Primeru 1D, di(adamant-1-il)(butil)fosfin (0.954 g, 2.66 mmol), PvOH (0.300 ml, 2.58 mmol), K2CO3(3.62 g, 26.2 mmol), Pd(OAc)2(0.341 g, 1.52 mmol) i DMF (15.2 mL). Bočica je pročišćena sa Ar. Bočica je zatvorena i zagrejana u uljanom kupatilu na 120 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do rt, podeljena između vode i EtOAc, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3x) i organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Sirov proizvod je prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi praćeno drugim prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi da se dobije (S)-2-metil-N-[(1R)-1-[6-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]propan-2-sulfinamid (Diastereomer A) (0.275 g, 13%) MS(ESI) m/z:274.4 (M+H)<+>. i (S)-2-metil-N-[(1S)-1-[6-(1-metil-4-nitro-1Hpirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]propan-2-sulfinamid (Diastereomer B) (1.2 g, 57%) MS(ESI) m/z: 274.4 (M+H)<+>.

43F. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-[6-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]karbamata

[0402] (1S)-1-(6-(1-Metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-amine (Diastereomer B) (1.2 g, 3.18 mmol) je rastvoren u MeOH (5 mL) i dioksanu (25 ml). 4 N HCl u dioksanu (4.8 ml, 19.1 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na rt tokom 3 h i zatim reakcija je koncentrovana. Ostatak je koevaporisao sa toluenom, rastvoren u DCM (40 mL), i ohlađen do 0 °C. TEA (4.43 mL, 31.8 mmol) je dodat praćeno sa BOC2O (0.738 mL, 3.18 mmol). Reakcija je mešan na 0 °C 15 min i zatim reakcija ostavljen da se ugreje do rt. Posle 2 h, reakcija je razblažena sa DCM, isprana sa zas NaHCO3, slanim rastvorom, i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi dalo je terc-butil N-[(1S)-1-[6-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]karbamat (393 mg, 33% prinos) kao narandžasto ulje. MS(ESI) m/z: 374.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.19 (s, 1H), 7.84 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.38 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.77 - 5.58 (m, 1H), 5.40 (br. s., 1H), 5.13 - 5.01 (m, 2H), 4.92 (d, J=6.8 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.71 - 2.51 (m, 2H), 1.43 (s, 9H).

43G. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-[6-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]karbamata

[0403] U rastvor terc-butil N-[(1S)-1-[6-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il) piridin-2-il]but-3-en-1-il]karbamata (393 mg, 1.05 mmol) u MeOH (6.4 mL) je dodat AcOH (0.64 mL). Reakcioni sud je stavljen u prethodno zagrejano kupatilo na 45 °C zatim cinkov prah (206 mg, 3.16 mmol) je dodat u porcijama. Posle 1 h, dodatni Zn (198 mg) je dodat. Nakon završetak reakcije, smeša je ohlađena do rt, podeljena između DCM i zas NaHCO3, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2x). Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije tercbutil N-[(1S)-1-[6-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il) piridin-2-il]but-3-en-1-il]karbamat (343 mg, 95% prinos) kao žuta pena. MS(ESI) m/z: 344.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.74 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=7.8, 0.8 Hz, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 7.14 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.70 (ddt, J=17.1, 10.2, 7.0 Hz, 1H), 5.46 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.13 - 4.99 (m, 2H), 4.89 (d, J=6.8 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 2.71 - 2.53 (m, 2H), 1.49 - 1.30 (m, 9H).

43H. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(6-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il{piridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamata

[0404] U terc-butil N-[(1S)-1-[6-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il]but-3-en-1-il]karbamat (343 mg, 0.999 mmol) u EtOAc (3.33 ml) je dodat rastvor (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline (0.150 g, 1.498 mmol), Intermedijer 6, u EtOAc (1 ml). Smeša je ohlađena do 0 °C i piridine(0.24 ml, 3.0 mmol) je dodat, praćeno sa dodavanjem rastvora 50% T3P® u EtOAc (1.19 ml, 1.50 mmol). Posle 2 h, reakcija je podeljena između zas NaHCO3i EtOAc, i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x). Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom i zatim koncentrovani. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi dalo je terc-butil N-[(1S)-1-(6-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamat (360 mg, 85%) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 426.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.35 (br. s., 1H), 8.30 (s, 1H), 7.82 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.40 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.32 - 7.19 (m, 1H), 6.01 (ddd, J=17.4, 10.0, 7.6 Hz, 1H), 5.78 - 5.57 (m, 1H), 5.35 - 5.04 (m, 5H), 4.91 (br. s., 1H), 4.06 (s, 3H), 3.26 - 3.06 (m, 1H), 2.81 - 2.54 (m, 2H), 1.54 - 1.30 (m, 12H).

43I. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0405] Rastvor terc-butil N-[(1S)-1-(6-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-2-il) but-3-en-1-il]karbamata (140 mg, 0.329 mmol) u EtOAc (25 ml) je pročišćen sa Ar tokom 20 min. Grubbs-ov katalizator druge generacije (0.112 g, 0.132 mmol) je dodat i reakciona smeša zagrejana na 80 °C preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do rt i koncentrovana. Izvedeno je prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi i zatim hromatografijom na reverznoj fazi je. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su načinjene baznim (pH ∼8) sa zas NaHCO3i zatim koncentrovane. Ostatak je podeljen između vode i EtOAc i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3x) i EtOAc (3x). Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom, osušeni MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (96 mg, 66% prinos). MS(ESI) m/z: 398.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 11.12 (br. s., 1H), 8.08 (s, 1H), 7.84 (t, J=7.9 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=7.9, 0.7 Hz, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 1H), 5.98 -5.83 (m, 1H), 5.55 (dd, J=15.7, 7.4 Hz, 1H), 5.41 (d, J=6.6 Hz, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 3H), 3.15 (quin, J=7.3 Hz, 1H), 2.84 - 2.56 (m, 2H), 1.51 - 1.32 (m, 12H).

43J. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata, i

43K. Pripremanje terc-Butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-2(6),4-dien-13-il]karbamata

[0406] Rastvor terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (0.096 g, 0.024 mmol) u EtOH (4 ml) je hidrogenizovan na 20 psi H2u prisustvu PtO2(20 mg) tokom 20 h. Smeša je filtrirana, isprana sa MeOH i EtOAc. Filtrat je koncentrovan i zatim prečišćen hromatografijom na reverznoj fazi da se dobije, nakon neutralizacije frakcija i ekstrakcije, terc-butil-N- [(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-2(6),4-dien-13-il]karbamat (20 mg, 20.4% prinos), MS(ESI) mlz: 406.2 (M+H)<+>; i terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (68 mg, 70.5% prinos), MS(ESI) m/z: 400.2 (M+H)<+>.

43L. Pripremanje (9R, 13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0407] U rastvor terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (0.035 g, 0.088 mmol) u DCM (0.5 ml) je dodat TFA (0.2 mL, 2.60 mmol). Nakon mešanja tokom 1 h, reakciona smeša je koncentrovana do suva, i koevaporisana sa CH3CN. Ostatak je neutralisan rastvaranjem u MeOH, propuštanjem kroz NaHCO3kertridž (StratoSpheres SPE; 500 mg, 0.90 mmol punjenje), i koncentrisanjem filtrata da se dobije (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (15mg, 57% prinos) kao providno staklo koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 300.5 (M+H)<+>.

43M. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,18-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0408] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (7 mg, 32% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2en-1-ona, pripremljenog kao što je opisano u Intermedijeru 4, i (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,18-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on.

MS(ESI) m/z: 591.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.43 (s, 1H), 7.95 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.66 - 7.60 (m, 3H), 7.58 - 7.53 (m, 2H), 7.34 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.83 (s, 1H), 5.68 (dd, J=11.1, 1.9 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.93 (ddd, J=13.1, 7.8, 5.5 Hz, 1H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.51 - 2.39 (m, 1H), 2.19 - 2.09 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H), 1.83 - 1.64 (m, 3H), 1.60 - 1.49 (m, 1H), 1.32 - 1.19 (m, 1H), 1.16 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.46 min, čistoća = 99.6%; Faktor XIa Ki = 4.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 110 nM.

Primer 44

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0409]

[0410] U epruvetu koja se može zatvoriti koja sadrži (9R,13S)-13-[4-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,155-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on), pripremljen kao što je opisano u Primeru 24, CuI (0.368 mg, 1.935 µmol) u DMSO (1 ml) je dodat 3-jodopiridin (7.93 mg, 0.039 mmol) i Cs2CO3(0.025 g, 0.077 mmol). Reakciona smeša je pročišćen sa Ar (3x), zatim zagrejana do 80 °C. Posle 44 h, reakcija je ohlađena do rt. Prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi dalo je (9R,13S)-13-[4-(3,6-dihloro-2-fluorofenil)-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (1.91 mg, 15% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 540.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.74 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.59 - 7.50 (m, 3H), 7.39 (dd, J=8.8, 1.5 Hz, 1H), 6.55 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.42 (dd, J=7.0, 1.5 Hz, 1H), 6.17 (dd, J=12.8, 4.2 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.74 - 2.64 (m, 1H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.15 - 1.99 (m, 2H), 1.70 - 1.58 (m, 1H), 1.52 1.39 (m, 1H), 1.03 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.89 - 0.72 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.43 min, 97.9% čistoća; Faktor XIa Ki = 2.2 nM, Kalikrein plazme Ki = 5.7 nM.

Primer 45

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-etil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1,0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0411]

[0412] (9R,13S)-13-[4-(3-Hloro-2,6-difluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3-etil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem1-(3-hloro-2,6-difluorofenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 1, i 1-etil-4-nitro-1H-pirazola, Intermedijer 8.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.84 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.76 (dd, J=5.7, 1.5 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (td, J=8.7, 5.5 Hz, 1H), 7.12 (td, J=9.2, 1.8 Hz, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.56 (dd, J=12.5, 4.0 Hz, 1H), 4.43 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.74 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.85 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 2.38 - 2.20 (m, 1H), 2.10 - 1.88 (m, 2H), 1.71 - 1.58 (m, 1H), 1.53 (t, J=7.3 Hz, 3H), 1.22 (br. s., 2H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 540.2 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 11.04 min, čistoća = 97%; Faktor XIa Ki = 13 nM, Kalikrein plazme Ki = 54 nM.

Primer 46

Pripremanje (9R,13S)-13-[4-(6-acetil-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0413]

[0414] Smeša (9R,13S)-13-[4-(6-bromo-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (18 mg, 0.031 mmol), tributil(1-etoksivinil)stanana (20.72 µl, 0.061 mmol) i Pd(PPh3)2Cl2(2.153 mg, 3.07 µmol) u toluenu (767 µl) je degazirana i zagrejana na 110 °C preko noći. Rastvarač je uklonjen i 2 ml 1:1 smeše 1 N HCl i THF je dodato. Smeša je mešana na rt tokom 0.5 h i koncentrovana je. Sirov proizvod je zatim prečišćen korišćenjem HPLC na reverznoj fazi da se dobije (9R,13S)-13-[4-(6-acetil-3-hloro-2-fluorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (9.6 mg, 46%).<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.24 (s, 1H), 8.74 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.85 - 7.73 (m, 2H), 7.59 - 7.44 (m, 3H), 7.27 - 7.00 (m, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.60 (d, J=8.9 Hz, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.88 (br. s., 1H), 3.70 (d, J=5.5 Hz, 1H), 3.51 - 3.38 (m, 5H), 2.17 - 1.93 (m, 2H), 1.69 (br. s., 1H), 1.48 (br. s., 1H), 1.28 - 1.10 (m, 1H), 0.93 (d, J=6.7 Hz, 3H), 0.66 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 550.4 (M+H). Analitička HPLC (Metod C): RT = 1.40 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 3.5 nM, Kalikrein plazme Ki = 46 nM.

Primer 47

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-9-metil-4-(pirimidin-5-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-ona

[0415]

47A. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0416] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (262 mg, 0.387 mmol, 65% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem, 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-onom, Intermedijer 2.<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.25 (s, 1H), 8.59 (d, J=4.3 Hz, 1H), 7.91 - 7.79 (m, 2H), 7.74 - 7.65 (m, 2H), 7.44 (d, J=4.9 Hz, 1H), 7.26 - 6.96 (m, 1H), 5.91 (s, 1H), 5.65 (d, J=8.9 Hz, 1H), 3.91 - 3.81 (m, 1H), 3.60 (br. s., 1H), 2.65 (br. s., 2H), 2.20 - 1.97 (m, 2H), 1.76 (br. s., 1H), 1.51 (br. s., 1H), 1.31 (br. s., 1H), 0.95 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.81 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 562.3 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metod B): RT = 1.72 min, čistoća = 100.0%.

47B. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-9-metil-4-(pirimidin-5-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0417] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-9-metil-4-(pirimidin-5-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (7.5 mg, 9.85 µmol, 18% prinos) je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 11 supstituisanjem (2-bromoetoksi)(terc-butil)dimetilsilana sa 5-jodopirimidinom.<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.58 (s, 1H), 9.39 (s, 2H), 9.19 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.68 (d, J=4.9 Hz, 1H), 7.85 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.60 (d, J=4.3 Hz, 1H), 7.26 - 6.97 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 5.71 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.97 (br. s., 1H), 3.67 (br. s., 1H), 3.44 - 3.36 (m, 1H), 2.73 (br. s., 1H), 2.19 (br. s., 1H), 2.06 (br. s., 1H), 1.76 (br. s., 1H), 1.56 (br. s., 1H), 1.34 (br. s., 1H), 0.97 (d, J=6.7 Hz, 3H), 0.69 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 640.1 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metod B): RT = 1.84 min, čistoća = 99.0%; Faktor XIa Ki = 5.4 nM, Kalikrein plazme Ki = 13 nM.

Primer 48

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0418]

48A. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-[3-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)fenil] but-3-en-1-il]karbamata

[0419] U terc-butil N-[(1S)-1-(3-bromofenil)but-3-en-1-il]karbamat (2 g, 6.13 mmol), 1-metil-4-nitro-1H-pirazol (0.779 g, 6.13 mmol), di(adamantan-1-il)(butil) fosfin (0.659 g, 1.839 mmol), pivalinsku kiselinu (0.213 ml, 1.839 mmol), K2CO3(2.54 g, 18.39 mmol) je dodat DMF (9 ml). Smeša je degazirana sa Ar tokom 10 min. Pd(OAc)2(0.275 g, 1.226 mmol) je dodat i reakcija je zagrejana u uljanom kupatilu na 120 °C tokom 15 h. Reakcija je podeljena između vode (50 ml) i EtOAc (50 ml) i rastvor je filtriran kroz papir i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 ml), osušeni preko MgSO4filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (S)-terc-butil (1-(3-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)fenil)but-3-en-1-il)karbamat (1.186 g, 3.18 mmol, 51.9% prinos) kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 371.1 (M-H)<+>.

48B. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-[3-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)fenil] but-3-en-1-il]karbamata

[0420] U terc-butil N-[(1S)-1-[3-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)fenil]but-3-en-1-il]karbamat (0.097 g, 0.260 mmol) u acetonu (5ml) / vodi (1 ml), ohlađen do 0 °C, je dodat NH4Cl (0.070 g, 1.302 mmol) i Zn (0.170 g, 2.60 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno. Posle 3 h, reakcija je filtrirana i filtrat je podeljen između vode (10 ml) i EtOAc (30 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (10 ml), osušeni preko MgSO4filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem DCM i 0-10% MeOH kao eluenata da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-[3-(4-amino-1-metil- 1H-pirazol-5-il)fenil]but-3-en-1-il]karbamat (76.6 mg, 86%). MS(ESI) m/z: 343.2 (M+H)<+>.

48C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(3-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}fenil)but-3-en-1-il]karbamata

[0421] U terc-butil N-[(1S)-1-[3-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)fenil]but-3-en-1-il]karbamat (0.076 g, 0.222 mmol) u EtOAc (0.58 ml) je dodata (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina (0.027 g, 0.266 mmol), Intermedijer 6, u 0.3 ml EtOAc. Smeša je ohlađena do 0 °C i Hunig-ova baza (0.116 ml, 0.666 mmol) praćeno sa rastvorom 50% T3P® u EtOAc (0.264 ml, 0.444 mmol) su dodati. Posle 3 h, reakcija je podeljen sa zas NaHCO3(5 ml) i EtOAc (5 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (5 ml), osušeni preko MgSO4filtrirani i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (69mg, 73%) terc-butil N-[(1S)-1-(3-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il{fenil)but-3-en-1-il]karbamat kao žuto ulje. MS(ESI) m/z: 425.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.04 (s, 1H), 7.52 - 7.45 (m, 1H), 7.37 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.26 -7.18 (m, 2H), 7.05 (br. s., 1H), 5.96 - 5.85 (m, 1H), 5.69 (ddt, J=17.0, 10.1, 7.0 Hz, 1H), 5.21 - 5.09 (m, 4H), 4.95 (br. s., 1H), 4.77 (br. s., 1H), 3.76 (s, 3H), 3.07 (quin, J=7.2 Hz, 1H), 2.61 - 2.48 (m, 2H), 1.45 - 1.38 (m, 9H), 1.30 (d, J=7.0 Hz, 3H).

48D. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata

[0422] Rastvor terc-butil N-[(1S)-1-(3-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}fenil)but-3-en-1-il]karbamata (0.069 g, 0.163 mmol) u degaziranom DCE (10 ml) je zagrejan do 120 °C tokom 30 min u mikrotalasnoj u prisustvu Grubbs-ov katalizatora druge generacije (0.055 g, 0.065 mmol). Reakciona smeša je direktno prečišćena pomoću hromatografije na normalnoj fazi dva puta korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije željeni terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (33 mg, 51.2%) kao tamna čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 397.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.61 -7.52 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 1H), 7.20 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.93 (br. s., 1H), 6.83 (s, 1H), 5.63 (ddd, J=15.1, 9.4, 5.6 Hz, 1H), 5.18 (br. s., 1H), 4.89 (dd, J=15.2, 8.8 Hz, 1H), 4.69 (br. s., 1H), 3.93 - 3.86 (m, 3H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.69 - 2.58 (m, 1H), 2.17 - 2.08 (m, 1H), 1.53 - 1.32 (m, 9H), 1.18 (d, J=6.8 Hz, 3H).

48E. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0423] Rastvor terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (0.089 g, 0.224 mmol) u EtOH (5 ml) je hidrognizovan u H2atmosferi na 55 psi tokom 3 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz mali čep od CELITE® i isprana sa EtOH/MeOH/DCM da se dobije terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (89 mg, 99%) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 399.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz CDCl3) δ 7.53 - 7.43 (m, 2H), 7.43 - 7.36 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 4.90 (br. s., 1H), 4.68 (br. s., 1H), 3.98 (s, 3H), 2.44 (br. s., 1H), 1.93 (d, J=7.7 Hz, 1H), 1.85 - 1.63 (m, 2H), 1.42 (br. s., 9H), 1.28 - 1.19 (m, 2H), 1.07 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.96 (br. s., 1H).

48F. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, hidrohlorida

[0424]

[0425] terc-Butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (88 mg, 0.221 mmol) je deprotektovan sa 4 N HCl u dioksanu (3 ml) tokom 5 h. Reakcija je koncentrovna da se dobije (70 mg, 95%) (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, hidrohlorid kao tamna čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 299.08 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 7.81 (s, 1H), 7.77 - 7.70 (m, 1H), 7.70 - 7.58 (m, 3H), 4.46 (dd, J=12.0, 4.5 Hz, 1H), 4.19 - 4.07 (m, 3H), 3.45 - 3.26 (m, 1H), 2.75 - 2.59 (m, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 2H), 1.58 (td, J=14.3, 8.3 Hz, 1H), 1.29 - 1.17 (m, 1H), 1.03 (d, J=6.9 Hz, 3H), 0.94 - 0.82 (m, 1H).

48G. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0426] (9R, 13 S)-13 - {4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (23 mg, 86%), bela čvrsta supstanca, je pripremljen na sličan način kao Primer 1 korišćenjem 1-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]prop-2-en-1-on i 13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona. MS(ESI) m/z: 590.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.33 (s, 1H), 7.58 - 7.51 (m, 2H), 7.51 - 7.35 (m, 6H), 7.25 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.46 (dd, J=12.8, 3.1 Hz, 1H), 3.97 - 3.85 (m, 3H), 2.94 - 2.81 (m, 1H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 2H), 1.98 -1.86 (m, 1H), 1.79 - 1.63 (m, 2H), 1.57 - 1.40 (m, 2H), 1.05 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.93 (t, J=12.7 Hz, 1H). Analitička HPLC (Metoda A) RT = 8.52 min, čistoća = 97%; Faktor XIa Ki = 0.13 nM, Kalikrein plazme Ki = 5.5 nM.

Primer 49

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1 (18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0427]

[0428] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (10.3 mg, 59.1%), bela čvrsta supstanca, je pripremljena na sličan način kao Primer 48, korišćenjem 1-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]prop-2-en-1-ona i 13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona. MS(ESI) m/z: 575.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.78 - 7.69 (m, 1H), 7.65 - 7.58 (m, 3H), 7.56 - 7.51 (m, 2H), 7.46 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.68 (dd, J=13.0, 3.1 Hz, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.60 - 3.47 (m, 1H), 3.23 - 3.14 (m, 1H), 2.66 - 2.39 (m, 3H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 1H), 1.89 - 1.81 (m, 1H), 1.73 - 1.66 (m, 1H), 1.66 - 1.56 (m, 1H), 1.19 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.09 (t, J=12.8 Hz, 1H). Analitička HPLC (Metoda A) RT = 9.56 min, čistoća = 95%; Faktor XIa Ki = 3.2 nM, Kalikrein plazme Ki = 69 nM.

Primer 50

Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10,16-difluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0429]

50A. Pripremanje N-[(9S,13S)-10,16-difluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0430] Fe2(C2O4)3·6H2O (2.16 g, 4.46 mmol) je dodat u RBF koji sadrži H2O (30 ml). Suspenzija je zagrejana pomoću vodenog kupatila (50 °C) da pomogne rastvaranju. Posle 3 h, bistar žuti rastvor je ohlađen do 0 °C i pročišćen sa Ar. Posle 20 min, SELECTFLUOR® (1.58 g, 4.46 mmol) u ACN (5 ml) je dodat praćeno sa u kapima dodatkom terc-butil N-[(9R,10E,13S)-16-fluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (0.370 g, 0.893 mmol) u ACN (10 ml). Posle 5 min, NaBH4(0.270 g, 7.14 mmol) je dodat u dve odvojene porcije tokom perioda od 5 minuta. Posle 15 min, reakciona smeša je ostavljena da dođe do rt. Posle 1 h, reakciona smeša je kvenčovana sa vod 28-30% NH4OH (15 mL). Posle 30 min, reakciona smeša je filtrirana, čvrste supstance su isprane sa EtOAc, organske supstance su isprane slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4, filtrirane, i koncentrovane da se dobije sirova smeša izomera. Materijal je podvrgnut hiralnom prečišćavannju korišćenjem CHIRALPAK® IC, 21 x 250 mm, 5 µ, korišćenjem 10% EtOH / 90% CO2na 45 ml/min, 150 Bar, 40 °C. Rani eluirajući izomer je označen terc-butil N-[(9S,13S)-10,16-difluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (99.5% ee; 68 mg, 17.50%) i drugi eluirajući izomer, terc-butil N-[(9R,13S)-11,16-difluoro-3,9-dimetil-8okso-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (99.5% ee; 32 mg, 8.3%).435 (M+H)<+>.

50B. Pripremanje (9S,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-10,16-difluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0431] (9S,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-10,16-difluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (10 mg, 6%) je pripremljen sličnim metodama opisanim u Primeru 1 korišćenjem Boc-deprotektovanog terc-butil N-[(9R,13S)-11,16-difluoro-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (rano eluirajući izomer) i 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-on, pripremljen kao što je opisano za Intermedijer 4. Glavni diastereomer je izolovan hiralnim prečišćavanjem korišćenjem CHIRALPAK® IC, 21 x 250 mm, 5 µ, korišćenjem 15% MeOH / 85% CO2na 45 ml/min, 150 Bar, 40 °C i zatim hromatografijom na reverznoj fazi (FENOMENEX® Luna Axia C185µ 30 x 100mm kolona, 10-minutni gradijent; Rastvarač A: 20% MeOH - 80% H2O-0.1% TFA; Rastvarač B: 90% MeOH - 10% H2O- 0.1% TFA). MS(ESI) m/z: 626 (M+H)<+>.<1>H NMR: (400MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1H), 8.62 - 8.56 (m, 1H), 8.12 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.75 - 7.67 (m, 3H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 6.88 (d, J=9.9 Hz, 1H), 6.30 - 6.23 (m, 1H), 5.97 - 5.82 (m, 2H), 5.43 -5.24 (m, 1H), 3.93 - 3.88 (m, 3H), 3.00 (ddd, J=10.8, 6.9, 4.1 Hz, 1H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 1H), 1.65 - 1.49 (m, 1H), 1.25 - 1.10 (m, 1H), 0.81 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.66 -0.44 (m, 1H). Analitička HPLC (metod X): RT = 6.25 min, čistoća = 100%; Faktor XIa Ki = 0.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 8 nM.

Primer 51

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il} -3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0432]

51A. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0433]

[0434] (9R,13S)-13-Amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.28 g, 98%), siva čvrsta supstanca, je pripremljena na isti način kao (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, opisan u Primeru 48F, supstituisanjem 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazola za 1-metil-4-nitro-1H-pirazol. MS(ESI) m/z: 302.5 (M+H)<+>.

51B. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0435] (9R, 13 S)-13 - {4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (3 mg, 56.7%) je napravljen na sličan način kao (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, opisan u Primeru 48, supstituisanjem (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona za (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on.

MS(ESI) m/z: 593.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.49 - 8.44 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 2H), 7.60 - 7.56 (m, 2H), 7.56 - 7.49 (m, 3H), 7.38 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.92 - 5.82 (m, 1H), 5.59 (dd, J=12.7, 3.0 Hz, 1H), 3.07 - 2.94 (m, 1H), 2.51 - 2.38 (m, 1H), 2.25 - 2.11 (m, 2H), 2.12 - 2.00 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 2H), 1.72 - 1.53 (m, 2H), 1.41 - 1.32 (m, 1H), 1.18 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.10 - 1.00 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A) RT = 8.17 min, čistoća = 90%; Faktor XIa Ki = 0.18 nM, Kalikrein plazme Ki = 5 nM.

Primer 52

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il{-3-(2,2-difluoroetil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0436]

[0437] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2,2-difluoroetil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 korišćenjem 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona, Intermedijer 4, i 1-(2,2-difluoroetil)-4-nitro-1H-pirazola, Intermedijer 9.<1>H NMR (400MHz, CD3CN) δ 8.81 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.71 - 7.63 (m, 4H), 7.62 - 7.55 (m, 1H), 6.50 - 6.15 (m, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.52 (dd, J=12.7, 4.1 Hz, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 2H), 3.63 - 3.49 (m, 2H), 2.64 - 2.53 (m, 1H), 2.32 - 2.13 (m, 3H), 1.99 - 1.84 (m, 2H), 1.66 - 1.52 (m, 1H), 1.41 - 1.29 (m, 1H), 1.24 - 1.14 (m, 1H), 1.09 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 641.1 (M+H)<+>.

Analitička HPLC (Metoda A): RT = 11.43 min, čistoća = 95%; Faktor XIa Ki = 0.76 nM, Kalikrein plazme Ki = 22 nM.

Primer 53

Pripremanje (9R)-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0438]

[0439] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (6 mg, 9%), kao bela čvrsta supstanca, je pripremljen na način koji je sličan Primeru 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazolom MS(ESI) m/z: 593.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.93 - 8.64 (m, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.77 (s, 2H), 7.72 - 7.50 (m, 6H), 5.83 (s, 1H), 5.67 - 5.49 (m, 1H), 4.34 - 4.08 (m, 1H), 3.75 - 3.62 (m, 1H), 3.60 - 3.48 (m, 1H), 2.67 - 2.54 (m, 1H), 2.27 - 2.09 (m, 3H), 1.96 (s, 2H), 1.90 - 1.76 (m, 1H), 1.67 - 1.52 (m, 1H), 1.50 - 1.29 (m, 1H), 1.28 - 1.15 (m, 1H), 1.06 (d, J=7.0 Hz, 3H), 1.01 - 0.86 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.19 min, čistoća = 100%; Faktor XIa Ki = 0.87 nM, Kalikrein plazme Ki = 37 nM.

Primer 54

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklobutil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1,0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0440]

85A. Pripremanje 1-ciklobutil-4-nitro-1H-pirazola

[0441]

[0442] U suv RBF je dodat 4-nitro-1H-pirazol (2 g, 17.69 mmol) i DMF (40 mL). Reakcija je ohlađena do 0 °C i NaH (1.415 g, 35.4 mmol) je dodat u reakciju praćeno sa bromociklobutanom (3.58 g, 26.5 mmol). Reakcija je polako zagrejana do rt i mešana na rt preko noći. HPLC je pokazala većinom još početni materijal. Zatim još jedan ekv. NaH i bromociklobutana su dodati i reakcija je mešana na 65 °C tokom dodatnih 4 h. Reakcija je pažljivo kvenčovana sa vodom (5 ml) i reakcija je zatim podeljena između vode (50 ml) i EtOAc (50 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 ml). Kombinovani EtOAc sloj je ispran sa vodom (2 x 40 ml) i slanim rastvorom (40 ml), osušen preko MgSO4filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem ISCO sistema (0-50% EtOAc/Heks gradijent) da se dobije 1-ciklobutil-4-nitro-1H-pirazol (640 mg, 3.83 mmol, 21.65% prinos) kao bistro ulje.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 88.16 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 4.78 (quin, J=8.3 Hz, 1H), 2.65 - 2.39 (m, 4H), 2.04 - 1.79 (m, 2H). MS(ESI) m/z: 167.1 (M+H)<+>.

54B. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklobutil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0443] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklobutil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen u skladu sa procedurama opisanim u Primeru 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-ciklobutil-4-nitro-1H-pirazolom.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.59 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.58 - 7.43 (m, 4H), 7.39 (s, 1H), 7.29 - 7.17 (m, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.44 (dd, J=12.5, 3.7 Hz, 1H), 4.99 (t, J=8.3 Hz, 1H), 3.45 (br. s., 1H), 3.42 - 3.30 (m, 1H), 2.74 - 2.57 (m, 2H), 2.51 - 2.41 (m, 1H), 2.35 (dd, J=7.7, 5.7 Hz, 2H), 2.07 - 1.93 (m, 3H), 1.87 - 1.75 (m, 3H), 1.73 - 1.61 (m, 1H), 1.52 -1.39 (m, 1H), 1.25 - 1.17 (m, 2H), 1.07 (d, J=5.3 Hz, 1H), 0.94 (d, J=6.8 Hz, 3H). MS(ESI) m/z: 597.1 (M+H)<+>. Analitička HPLC (Metod B): RT = 1.87 min, čistoća = 96%; Faktor XIa Ki = 7.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 150 nM.

Primer 55

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0444]

[0445] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (45 mg, 66%). je pripremljen na sličan način kao Primer 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazolom i supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil) prop-2-en-1-onom. MS(ESI) m/z: 627.3 (M+H).<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.77 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 - 7.62 (m, 4H), 7.62 - 7.55 (m, 2H), 5.88 - 5.78 (m, 1H), 5.63 - 5.50 (m, 1H), 3.76 - 3.64 (m, 1H), 3.63 - 3.51 (m, 1H), 2.67 - 2.53 (m, 1H), 2.27 (d, J=6.1 Hz, 2H), 2.24 - 2.11 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.65 - 1.53 (m, 1H), 1.40 - 1.29 (m, 1H), 1.28 -1.18 (m, 1H), 1.07 (d, J=6.9 Hz, 3H), 1.03 - 0.86 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.36 min, čistoća = 98.8%; Faktor XIa Ki = 0.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 56

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2,2-difluorociklopropil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0446]

[0447] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-(2,2-difluorociklopropil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (26 mg, 49%) je pripremljen je na sličan način kao Primer 1 korišćenjem 1-(2,2-difluorociklopropil)-4-nitro-1H-pirazola, Intermedijer 15, i 1-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil) prop-2-en-1-ona. MS(ESI) m/z: 653.3 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3CN) δ 8.79 (d, J=5.5 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.80 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.77 - 7.68 (m, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.58 - 7.52 (m, 2H), 5.87 (d, J=9.7 Hz, 1H), 5.40 - 5.24 (m, 1H), 4.63 - 4.43 (m, 1H), 3.72 - 3.42 (m, 2H), 2.64 -2.50 (m, 1H), 2.44 - 2.07 (m, 5H), 1.31 (br. s., 3H), 1.01 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.10 min, čistoća = 99%; Faktor XIa Ki = 0.36 nM, Kalikrein plazme Ki = 30 nM.

Primer 57

Pripremanje 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}benzonitrila

[0448]

[0449] (9R,13S)-13-[4-(2-Bromo-5-hlorofenil)-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il]-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat, pripremljen kao Primer 37, (0.0094 g, 0.012 mmol), Zn(CN)2(0.0007 g, 5.90 µmol), Pd(P(t-Bu)3)2(0.0012 g, 2.36 µmol) u DMF (0.5 mL) je ispran sa Ar, zatvoren i zagrejan na 80 °C tokom 3 dana. Reakciona smeša je ohlađena do rt, filtrirana i koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi dalo je 4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}benzonitril trifluoroacetat (0.0015 g, 17%) kao beli čvrsti proizvod. MS(ESI) m/z: 515.3 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.79 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.88 - 7.81 (m, 1H), 7.75 - 7.59 (m, 4H), 7.55 (s, 1H), 6.26 (s, 1H), 5.65 (dd, J=12.4, 3.4 Hz, 1H), 4.12 - 4.08 (m, 3H), 3.88 - 3.70 (m, 2H), 2.85 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.67 - 2.56 (m, 1H), 2.32 - 2.17 (m, 1H), 2.09 - 1.90 (m, 2H), 1.71 - 1.58 (m, 1H), 1.40 - 1.21 (m, 2H), 1.12 (d, J=6.8 Hz, 3H) Analitička HPLC (Metoda A): RT = 6.41 min, čistoća = >95%; Faktor XIa Ki = 4.0 nM, Kalikrein plazme Ki = 14 nM. Primer 58

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0450]

[0451] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (140 mg, 0.174 mmol, 73% prinos) je pripremljen na sličan nalin kako je opisano u Primeru 10 zamenjivanjem 1-[5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]prop-2-en-1-ona sa 1-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]prop-2-en-1-onom, Intermedijer 4.<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.60 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.78 - 7.63 (m, 5H), 7.56 (d, J=4.6 Hz, 1H), 7.27 - 6.99 (m, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.48 (d, J=11.3 Hz, 1H), 3.54 (br. s., 1H), 3.38 (br. s., 1H), 2.61 (br. s., 1H), 1.72 (br. s., 1H), 1.51 (d, J=6.4 Hz, 1H), 1.24 (br. s., 1H), 0.96 (d, J=6.7 Hz, 3H), 0.88 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 577.1 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metod B): RT = 1.431 min, čistoća = 96.0%; Faktor XIa Ki = 2.4 nM, Kalikrein plazme Ki = 46 nM.

Primer 59

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-16-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0452]

59A. Pripremanje (R)-N-[(1E)-(3-bromo-5-fluorofenil)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0453] U 3-bromo-5-fluorobenzaldehid (25g, 123 mol) rastvoren u DCM (200 mL) je dodat (R)-2-metilpropan-2-sulfinamid (14.96 g, 123 mol) i Cs2CO3(40.2 g, 123 mol). Reakciona smeša je mešana na rt preko noći. Posle ovog vremena, reakciona smeša je filtrirana i koncentrovana da se dobije žuto ulje. Žuto ulje je prečišćeno korišćenjem 120 g silika gel ISCO kolone eluirane sa heksanima i EtOAc da se dobije (R)-N-[(1E)-(3-bromo-5-fluorofenil)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamid (35 g, 93%) kao žuto ulje.<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8.58 - 8.55 (m, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.84 - 7.76 (m, 2H), 1.20 (s, 9H). LCMS m/z 306.1 (M+H).

59B. Pripremanje (R)-N-[(1S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0454] N-[(1E)-(3-Bromo-5-fluorofenil)metiliden]-2,2-dimetilpropanamid (35 g, 114 mol) je rastvoren u THF (500 mL) u velikom RFB sudu sa 3 grla i ispran je sa Ar. Rastvor je ohlađen do 0 °C i In (18.4 g, 160 mol) je dodat praćeno sa u kapima dodatkom alilbromida (15.2 g, 126 mol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 2 h, zatim ledeno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana na rt preko noći. Reakcija je kvenčovana sa vodom (2 L) i žetainozni materijal je filtriran kroz CELITE®. Filtrat je koncentrovan u vakuumu do uljane mase. Sirov materijal je rastvoren u vodi (2 L) i organske supstance su ekstrahovane sa EtOAc (4x200 mL), osušene preko MgSO4filtrirane i koncentrovane da se dobije ulje. Uljana tečnost je prečišćena putem silka gel ISCO kolone i eluirana sa DCM/MeOH da se dobije (R)-N-[(1S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamid (34.9 g, 88% prinos) kao polu čvrsta masa. LCMS m/z 348.2 (M+H).<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 7.44 - 7.38 (m, 2H), 7.26 - 7.20 (m, 1H), 5.79 - 5.65 (m, 1H), 5.46 - 5.42 (m, 1H), 5.04 -4.98 (m, 2H), 4.41 - 4.34 (m, 1H), 2.69 - 2.59 (m, 1H), 2.49-2.43 (m, 1H), 1.09 (s, 9H).

59C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)but-3-en-1-il]karbamata

[0456] U rastvor ohlađen do 0 °C (R)-N-[(1S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida (21.9 g, 100 mol) rastvoreogn u MeOH (100 mL) je dodata konc. HCl (50 mL) u kapima i zatim je mešano na 0 °C 48 h. Posle ovog vremena, reakciona smeša je koncentrovana da se dobije bela čvrsta masa. Ostatak je rastvoren u vodi (1000 mL) i organske supstance su ekstrahovane sa EtOAc (2x200 mL), osušene preko MgSO4filtrirane i koncentrovane do braon ulja (11.5 g). Vodeni sloj je bazifikovan sa 1 N NaOH i organske supstance su ekstrahovane sa EtOAc (2 x 300 mL), osušene preko MgSO4filtrirane i koncentrovane do braon ulja (18 g). Kombinovana ulja su rastvorena u DCM (500 mL) i u ovo je dodat Boc2O (22 g) praćeno sa TEA (15 mL) i reakciona smeša je mešana na rt preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i prečišćena putem 330 g silika gel Isco kolone eluiranjem sa heksanima i EtOAc da se dobije a bela čvrsta supstanca. Bela čvrsta supstanca je triturisana sa heksanima i precipitat je sakupljen filtracijom da se dobije tercbutil-N-[(1S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)but-3-en-1-il]karbamat (29.5 g, 87% prinos).

59D. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-16-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona.

[0457]

[0458] (9R,13S)-13-Amino-16-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1 (18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (19 mg, 92%), tamna čvrsta supstanca, je pripremljena na slilan način kao (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, opisan u Primeru 48, supstituisanjem terc-butil-N-[(1S)-1-(3-bromo-5-fluorofenil)but-3-en-1-il]karbamata, za terc-butil-N-[(1S)-1-(3-bromofenil)but-3-en-1-il]karbamat. MS(ESI) m/z: 317.4 (M+H)<+>.

59E. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-16-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1 (18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0459] (9R, 13 S)-13 - {4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-16-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (32 mg, 63.5%), bela čvrsta supstanca, je napravljena na sličan način kao (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, opisan u Primeru 48, supstituisanjem (9R,13S-13-amino-16-fluoro-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1 (18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on za (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7-triazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on. MS(ESI) m/z: 608.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.46 (s, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.32 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.13 (d, J=9.5 Hz, 1H), 5.87 - 5.84 (m, 1H), 5.55 (dd, J=12.5, 3.1 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.07 - 3.00 (m, 1H), 2.47 - 2.40 (m, 1H), 2.26 - 2.06 (m, 3H), 1.88 - 1.79 (m, 2H), 1.68 - 1.55 (m, 2H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.09 - 1.00 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A) RT = 8.82 min, čistoća = 95%; Faktor XIa Ki = 0.1 nM, Kalikrein plazme Ki = 4 nM.

Primer 60

Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklopropil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0460]

[0461] (9R,13S)-13-{4-[3-Hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil]-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il}-3-ciklopropil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (30 mg, 39%). je pripremljen na sličan način kao Primer 1 supstituisanjem 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-ciklopropil-4-nitro-1H-pirazolom i supstituisanjem 1-(5-hloro-2-(1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)prop-2-en-1-ona sa 1-(3-hloro-2-fluoro-6-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-onom. MS(ESI) m/z: 602.4 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3CN) δ 8.79 (d, J=5.7 Hz, 1H), 7.91 (br. s., 1H), 7.81 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.69 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 1H), 7.43 (s, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.54 - 5.41 (m, 1H), 3.90 -3.68 (m, 5H), 2.79 - 2.48 (m, 3H), 2.38 - 2.21 (m, 1H), 1.66 - 1.50 (m, 1H), 1.30 (br. s., 2H), 1.22 - 1.08 (m, 4H), 1.04 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.19 min, čistoća = 92%; Faktor XIa Ki = 7.2 nM, Kalikrein plazme Ki = 22 nM.

Primer 61

Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.02,6]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0462]

61A. Pripremanje 1-(4-hloro-2-etenilfenil)-4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazola [0463] U ohlađenu (-20 °C) suspenziju metiltrifenilfosfonijum bromida (1.540 g, 4.31 mmol) u Et2O (12 mL) je dodat u kapima rastvor 2.5 M nBuLi u heksanu (1.58 mL, 3.95 mmol). Dobijena žuta suspenzija je ostavljena da se zagreje do 0 °C i meša tokom 2 h. Zatim rastvor 5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il] benzaldehida (0.99 g, 3.59 mmol), pripremljen kao što je opisano u Primeru 40A, u Et2O (5 mL) je dodat u kapima da se dobije braon suspenzija. Suspenzija je mešana na 0 °C tokom 30 min i zatim je reakcija ostavljena da se ugreje do rt. Posle 17 h, reakcija je ohlađena do 0 °C i zatim zas NH4Cl je dodat. Reakcija je zagrejana do rt i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa Et2O. Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije crna pena. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi dalo je 1-(4-hloro-2-etenilfenil)-4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol (0.357 g, 36% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 274.0 (M+H)<+>i 276.0 (M+2+H)<+>.

61B. Pripremanje 4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil{-5-hidroksi-2,5-dihidrofuran-2-ona

[0464] U ohlađen (-5 °C) bistar, bezbojan rastvor Pb(OAc)4(0.567 g, 1.28 mmol) u TFA (1.3 ml) je dodat u kapima bistar, bezbojan rastvor 1-(4-hloro-2-etenilfenil)-4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol (0.350 g, 1.28 mmol) u DCM (1.3 mL). Tokom dodavanja, temperatura reakcije nije išla iznad 2 °C. Nakon dodavanja, dobijeni bistar, bledo žuti rastvor je ostavljen da se ugreje do rt. Posle 2h reakcija je ohlađena do -5 °C i dodatni Pb(OAc)4(0.283 g) u TFA (0.65 mL) je dodat u kapima. Reakcija je ostavljena da se ugreje do rt. Posle 2 h, voda (10 mL) je dodata u kapima da se dobije crveno-braon suspenzija. Suspenzija je filtrirana kroz CELITE®, eluirana sa DCM. Bifazni filtrat je razdvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM. Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani da se dobije žuto ulje. Ulje je rastvoreno u DCM i isprano sa vodom, slanim rastvorom, osušeno preko Na2SO4, filtrirano i koncentrovano da se dobije 2-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}acetaldehid (0.370 g) kao bleda, žuta pena. Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 290.3 (M+H)<+>i 292.3 (M+2+H)<+>. U rastvor morfolina (0.12 mL, 1.34 mmol) u dioksanu (1.7 mL) je dodat 6 M HCl (0.22 ml, 1.30 mmol) praćeno sa monohidratom glioksilne kiseline (0.112 g, 1.21 mmol). Zatim, rastvor 2-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}acetaldehida (0.370 g, 1.28 mmol) u dioksanu (1.7 mL) je dodat. Reakciona smeša je zagrejana do refluksa. Posle 5 h, reakcija je zaustavljena i ohlađena do rt. Voda i EtOAc su dodati i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (1x). Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije zlatno braon pena. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi dalo je 4-(3-hloro-2,6-difluorofenil)-5-hidroksi-2,5-dihidrofuran-2-on (0.112 g, 28% prinos) kao bledo, žutu penu. MS(ESI) m/z: 346.2 (M+H)<+>i 348.3 (M+2+H)<+>.

61C. Pripremanje N'-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il](terc-butoksi)karbohidrazida [0465] U ohlađenu (0 °C), ljubičastu suspenziju (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (0.083 g, 0.277 mmol), pripremljenu kako je opisano u Primeru 1, u DCM (1.848 ml) je dodat u kapima bistar, bezbojan rastvor terc-butil 3-(4-cijanofenil)-1,2-oksaziridine-2-karboksilata (0.068 g, 0.277 mmol) u DCM (1 mL). Nakon dodavanja, reakcija je ostavljena da se ugreje do rt. Posle 5.5 h, reakcija je zaustavljena i koncentrovana je. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi dalo je N'-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il](terc-butoksi)karbohidrazid (0.0310 g, 27% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 415.5 (M+H)<+>.

61D. Pripremanje (9R,13S)-13-hidrazinil-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1,0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorida

[0466] Suspenzija N'-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il](terc-butoksi)karbohidrazida (0.0310 g, 0.075 mmol) u 4 M HCl u dioksanu (0.94 ml, 3.74 mmol) je mešana na rt. MeOH (0.2 mL) je dodat da se dobije bistar, svetlo žuti rastvor. Posle 1 h reakcija je koncentrovana da se dobije žuti ostatak. Ostatak je rastvoren u MeOH i koncentrovan. Ovo je ponovljeno još dva puta da se dobije (9R,13S)-13-hidrazinil-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorid (0.029 g, 100% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 315.5 (M+H)<+>.

61E. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil{-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1,0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0467] Blago zamućen žuti rastvor (9R,13S)-13-hidrazinil-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on bis-hidrohlorid (0.029 g, 0.075 mm) i 4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-5-hidroksi-2,5-dihidrofuran-2-on (0.026 g, 0.075 mmol) u MeOH (0.75 ml) je zagrejan na 150 °C u mikrotalasnoj tokom 30 min. Po hlađenju do rt, DMF (0.75 mL) je dodat u reakcionu smešu. Prečišćavanje hromatografijom na reverznoj fazi dalo je (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.0021 g, 3.7% prinos), kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 624.4 (M+H)<+>i 626.4 (M+2+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.85 (d, J=0.6 Hz, 1H), 8.62 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.79 - 7.76 (m, 2H), 7.74 - 7.70 (m, 1H), 7.58 - 7.54 (m, 2H), 7.51 (s, 1H), 6.82 (d, J=2.5 Hz, 1H), 6.00 (dd, J=12.1, 4.1 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.63 - 2.55 (m, 1H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 2.10 - 2.00 (m, 1H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.63 - 1.55 (m, 1H), 1.36 - 1.26 (m, 1H), 1.11 - 1.03 (m, 4H).<19>F NMR (471MHz, CD3OD) δ -62.65 (s), -77.57 (s).

Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.42 min, čistoća = 99.5%. Faktor XIa Ki = 0.51 nM, Kalikrein plazme Ki = 66 nM.

Primer 62

(9R,13S)-13-(4-5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, trifluoroacetat

[0468]

[0469] Suspenzija (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,2,3,6-tetrahidropiridin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (30 mg, 0.048 mmol), pripremljena kao što je opisano u Primeru 42, u DMF (0.5 mL) je dodat K2CO3(66.0 mg, 0.478 mmol), Pearlman-ov katalizator (6.71 mg, 0.048 mmol) i terc-butil hidroperoksid (70% u vodi, 0.066 mL, 0.478 mmol). Posle 67 h, reakcija je zaustavljena dodavanjem 3 kapi 10% Na2S2O3. Reakcija je prečišćena hromatografijom na reverznoj fazi koje je dalo (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} -2-okso-1,2-dihidropiridin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, trifluoroacetat (0.0030 g, 8.4% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 626.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.72 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.67 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.01 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.66 (m, 4H), 7.52 - 7.48 (m, 2H), 6.38 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.10 -6.01 (m, 2H), 2.67 (td, J=7.0, 3.2 Hz, 1H), 2.27 - 2.15 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.93 (tt, J=11.6, 5.9 Hz, 1H), 1.66 - 1.53 (m, 1H), 1.47 - 1.34 (m, 1H), 1.02 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.77 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.28 min, čistoća = 99.7%. Faktor XIa Ki = 0.10 nM, Kalikrein plazme Ki = 6 nM.

Primer 63

(9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3-(<3>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat

[0470]

63A. Pripremanje (9R,13S)-13-hidrazinil-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, bis-hidrohlorid [0471] (9R,13S)-13-Hidrazinil-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on bis-hidrohlorid (0.088 g, 43% preko dva koraka, žuta čvrsta supstanca) je pripremljena u skladu sa procedurama opisanim u Primerima 61C i 61D, zamenjivanjem (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona sa (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-onom. MS(ESI) m/z: 318.5 (M+H)<+>.

63B. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il] fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0472] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (0.0034 g, 4.4% prinos) je pripremljen kako je opisano u Primeru 61E zamenjivanjem (9R,13S)-13-hidrazinil-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on bis-hidrohlorid sa (9R,13S)-13-hidrazinil-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorid. MS(ESI) m/z: 627.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.86 (d, J=0.8 Hz, 1H), 8.64 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.82 - 7.80 (m, 2H), 7.77 (dd, J=8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.72 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.60 - 7.58 (m, 1H), 7.57 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.83 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.01 (dd, J=12.4, 4.1 Hz, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.64 - 1.55 (m, 1H), 1.36 - 1.26 (m, 1H), 1.13 - 1.02 (m, 4H).<19>F NMR (471MHz, CD3OD) δ -62.46, -77.66. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 7.39 min, čistoća = 99.7%. Faktor XIa Ki = 0.52 nM, Kalikrein plazme Ki = 77 nM.

Primer 64

(9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on

[0473]

64A. Pripremanje (R)-N-[(1E)-(2-bromopiridin-4-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0474] U mešanu suspenziju (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (13.03 g, 108 mmol) i Cs2CO3(52.5 g, 161 mmol) u DCM (400 ml) je dodat 2-bromopiridin-4-karbaldehid (20 g, 108 mmol) tokom 10 min. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 18.5 h na rt. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je razblažen sa EtOAc (50 ml) i ispran slanim rastvorom (3 x 20 ml). Organski sloj je osušen preko MgSO4i filtriran i zatim je filtrat koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (27.2 g, 87%) (R)-N-[(1E)-(2-bromopiridin-4-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamid kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 289-291.0 (M+H)<+>.

64B. Pripremanje (R)-N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfonamida

[0475] U rastvor (R)-N-[(1E)-(2-bromopiridin-4-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamid (0.73 g, 2.52 mmol) i indijum (0.435 g, 3.79 mmol) u THF (6 ml) je polako dodat 3-bromoprop-1-en (0.458 g, 3.79 mmol) i dobijeni rastvor je zagrejan na 60 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je cooled, filtriran kroz CELITE® i filtrat je koncentrovan. U ostatak je dodat EtOAc (100 ml) i 5% NaHCO3(vod) (1000 ml) i emulzija je odmah formirana.

Suspenzija je filtrirana kroz papir. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4filtriran, i koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (0.62 g, 74%) (R)-N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfonamid kao žuta tečnost. MS(ESI) m/z: 331-333.0 (M+H)<+>.

64C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamata [0476] U rastvor (R)-N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.38 g, 4.17 mmol) u MeOH (10 ml) je dodata 4N HCl u dioksanu (5.21 mL, 20.83 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 1.5 h na rt, zatim je koncentrovan. U dobijeni ostatak je dodat ACN (10 ml), TEA (5.81 ml, 41.7 mmol) i Boc2O (1.818 g, 8.33 mmol). Posle 18 h, reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je stavljen u EtOAc, ispran sa vodom, slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksani i EtOAc kao eluenata da se dobije (0.80 g, 58.7%) terc-butil N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat kao bledo žuto ulje. MS(ESI) m/z: 324-326.1 (M+H)<+>.

64D. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0477] (9R,13S)-13-Amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on je pripremljen na sličan način kao (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, kao što je opisano u Primeru 17B kroz 17G, zamenjivanjem (S)-terc-butil(1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata, sa (S)-terc-butil(1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il)karbamatom. MS(ESI) m/z: 303.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.70 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.50 - 7.42 (m, 2H), 4.14 - 4.05 (m, 1H), 2.72 (td, J=6.7, 3.5 Hz, 1H), 2.06 - 1.94 (m, 2H), 1.65 - 1.50 (m, 2H), 1.41 - 1.26 (m, 1H), 1.02 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.70 -0.53 (m, 1H).

64E. Pripremanje (9R,13S)-13-hidrazinil-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorid [0478] (9R,13S)-13-Hidrazinil-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorid (0.067 g, 35% preko dva koraka, žuta čvrsta supstanca) je pripremljena u skladu sa procedurama opisanim u Primerima 61C i 61D, zamenjivanjem (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona sa (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17 tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-onom. MS(ESI) m/z: 318.5 (M+H)<+>.

64F. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0479] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]feni}-6-okso-1,6-dihidropiridazin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on(2.7 mg, 2.7%) je pripremljen na sličan način kao Primer 61E, zamenjivanjem (9R,13S)-13-hidrazinil-3-(<2>H3) metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorid kao što je opisano u Primeru 61D sa (9R,13S)-13-hidrazinil-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, bis-hidrohlorid. MS(ESI) m/z: 627.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.90 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.70 -8.64 (m, 1H), 7.91 - 7.75 (m, 4H), 7.64 - 7.58 (m, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 1H), 7.21 (dd, J=5.3, 1.5 Hz, 1H), 6.90 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.10 (dd, J=12.1, 4.2 Hz, 1H), 2.67 (dt, J=6.9, 3.6 Hz, 1H), 2.57 - 2.45 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 2H), 1.64 (dd, J=14.1, 5.7 Hz, 1H), 1.42 - 1.32 (m, 1H), 1.25 - 1.19 (m, 1H), 1.10 (d, J=7.0 Hz, 3H), sadrži manji diastereomer. Analitička HPLC (Metoda A): RT = 8.32 min, čistoća = 95%. Faktor XIa Ki = 0.71 nM, Kalikrein plazme Ki = 52.6 nM.

Claims (12)

1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje sa Formulom (Ia):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: --- je opciona veza; prsten A je nezavisno odabran od

   R<1>je nezavisno odabrano od H, F, OH, i C1-4alkil; R<2>je nezavisno odabrano od H, F, i OH; R<3>je nezavisno odabrano od H, C1-4alkil, C1-4haloalkil, -(CH2)n-OR<5>, -(CH2)n-C(O)OR<5>, C3-6cikloalkil po izboru supstituisan sa halogenom, i 5- do 6-očlani heteroaril koji sadrži ugljenikove atome i 1-2 atoma azota i po izboru supstituisan sa R<1>; pod uslovom da je samo jedna R<3>grupa prisutna na prstenu; R<4>je nezavisno odabrano od H, OH, F, OC1-4alkil, C1-4alkil, i CN; R<5>je nezavisno odabrano od H i C1-4alkil; R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, OCH3, CH3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2, NHC(O)C1-4alkil, C3-6cikloalkil, i 5-očlani heterociklus supstituisan sa R<9>; R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; R<9>je nezavisno odabrano od H, cijano, C1-4alkil, haloalkil, i halogen; i n, u svakom slučaju, je ceo broj izabran od 1 i 2.
2. 2. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 koje ima Formulu (IIa):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: prsten A je nezavisno odabran od

   R<1>je nezavisno odabrano od H i C1-3alkil; R<2>je nezavisno odabrano od H i F; R<3>je nezavisno odabrano od H, C1-3alkil, C1-3haloalkil, -(CH2)n-OR<5>, -(CH2)n-C(O)OR<5>, i C3-4cikloalkil po izboru supstituisan sa halogenom; R<4>je nezavisno odabrano od H i F; R<5>je nezavisno odabrano od H i C1-4alkil; R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

   R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3; i n, u svakom slučaju, je ceo broj izabran od 1 i 2.
3. 3. Jedinjenje iz patentnog zahteva 2, ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: R<1>je nezavisno odabrano od H, CH3, i CH(CH3)2; R<2>je nezavisno odabrano od H i F; R<3>je nezavisno odabrano od H, CH3, CD3, CH2CH3, -CHF2, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2OH, CH2CH2OC(CH3)3, -CH2C(O)OH, ciklopropil po izboru supstituisan sa F, i ciklobutil; R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

   R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3.
4. 4. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 koje ima Formulu (IIIa):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: prsten A je nezavisno odabran od

   R<1>je nezavisno odabrano od H, CH3, i CH(CH3)2; R<2>je nezavisno odabrano od H i F; R<3>je nezavisno odabrano od H, CH2C(=O)OH, CH2C(=O)OCH2CH3,

   R<4>je nezavisno odabrano od H i F; R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

   R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3.
5. 5. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: R<3>je nezavisno odabrano od H, CH3, CD3, CH2CH3, -CHF2, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2OH, CH2CH2OC(CH3)3, -CH2C(O)OH, CH2C(=O)OH, CH2C(=O)OCH2CH3, ciklopropil po izboru supstituisan sa F, i ciklobutil,

   R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

   R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je Cl; R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3;
6. 6. Jedinjenje koje ima Formulu (IV):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: prsten A je nezavisno odabran od

   R<1>je nezavisno odabrano od H i C1-3alkil; R<2>je nezavisno odabrano od H i F; R<3>je nezavisno odabrano od H, CD3, CHF2, i CH3; R<4>je nezavisno odabrano od H i halogen; R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; i R<9>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, i CF3.
7. 7. Jedinjenje koje ima Formulu (V):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: prsten A je nezavisno odabran od

   R<1>je nezavisno odabrano od H i C1-3alkil; R<2>je nezavisno odabrano od H i F; R<3>je nezavisno odabrano od H, CD3, CHF2, i CH3; R<4>je nezavisno odabrano od H i halogen; R<6>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, Br, CN, CF3, C(O)CH3, CHF2, CCH3F2, CF3, OCHF2,

   R<7>je nezavisno odabrano od H i F; R<8>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, i OCH3; R<9>je nezavisno odabrano od H, CHF2, i CF3; i R<9'>je nezavisno odabrano od H, F, Cl, CN, CHF2, i CF3.
8. 8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, 6 ili 7 odabrano sa liste koja se sastoji od

   Ċ

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. 9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više jedinjenja u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
10. 10. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8, ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 9 za primenu kao medikament.
11. 11. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-8, ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od arterijskih kardiovaskularnih tromboembolijskih poremećaja, venskih tromboemolijskih poremećaja, i tromboembolijskih poremećaja u komorama srca ili u perifernoj cirkulaciji.
12. 12. Jedinjenje ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu u skladu sa patentnim zahtevom 11, gde tromboembolijski poremećaj je odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, miokardijalnog infarkta, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, duboke venske tromboze, tromboflebitisa, arterijske embolije, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje od medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja izaziva trombozu. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5