PT95517B - Utilizacao de analogos de prostaciclina contra metasteses - Google Patents

Description

A presente invenção refere-se a novos agentes com acção antimetastática.

K,V, Honn et al (Science 212, 1270 (1981)3 observaram, depois da aplicação de prostaciclina (PG12) em dose elevada (10 mg/Kg) imedíatamente antes de ; uma injecção intravenosa de células de tumor do melanoma ii . — > * — ! de rato B 16, uma redução do numero de metastases do pulmão#

Esta acção é descrita como uma inibição da adesão e agregação das células do tubor.No entanto,para utilização clinica o tempo de semi-vida é demasiado curto e a dose de PG12 é dernasi. ado alta.Admitiu-se pois uma possibilidade de utilização farma, ceutica com o análogo de prostaciclina mais estável iloprost.

V· Costantini et al (Câncer Chemother* Pharmacol. 22, 289 (1988)j compararam a acção antimetastática de PG12 (5 e 10 mg/Kg) e de Iloprost (0,1 e 0,2 mg/Kg) sobre a formação de metastases dos pulmões da linha de células de melanoma BL 6, depois da injecção intravenosa das células do tumor em ratos* A acçao ê dependente do numero de células

TF — I —

de tumor aplicadas e do intervalo de tempo entre a aplicaçao da substância e das células do tumor. Em diversos protocolos de ensaio verificou-se que o Iloprost ultrapassava nitidamente na dose, na duraçao de acçao e na acçao de inibição alcançada, o PGI2.

) Piccini et al (1988) obtiveram dados i; comparáveis no caso do carcinoma do pulmão de Lewis de ratos ₍ com utilização de doses iguais e protocolos de ensaio semelhantes, Para uma única dose de 0,2 mg/Kg, 1 hora antes da injecçao das células do tumor, o Iloprost reduziu o numero de metás¹ tases dos pulmões de mais do que 90%..

I i Protocolos de ensaio tais como injecção ? intravenosa de células de tumor ou uma única aplicaçao da í substância, todavia, sao pouco relevantes clinicamente.

!!

i' Um outro ensaio descrito por Piccini η et al reveste-se porém de maior força persuasiva. No modelo ;j clássico para determinação de uma potência antimetastática, ij nomeadamente a implantaçao i.m. de um tumor primário (carcinoma ί pulmonar de Lewis) na pata e em seguida a eliminação cirúrgica |J do tumor (leg amputation) o Iloprost a 0,2 mg/Kg, 1,5 horas pantes da eliminação do tumor) reduziu o número de metástases I do pulmão de cerca de 50%. 0 tempo de sobrevivência, no entanto, hnão foi significativamente prolongado.

Surpreendentemente, descobriu-se agora hque o Eptaloprost, o Cicaprost e combinações de Eptaloprost 1’ íi e Cicaprost com antagonistas de TXa£, ao contrario das acçoes íaté agora conhecidas de outras prostaciclinas, têm uma acçao ίantimetastatica selectiva, visto que nao se observa qualquer ii , jiacçao sobre o crescimento do tumor primário.

A invenção refere-se pois a composiçoes com acçao antimetastática constituídas por Eptaloprost ou Cicaprost ou os seus sais de adiçao com bases fisiologicamente aceitáveis, ou os seus clatratos com ciclodextrinas, ou formadas pelas combinações de antagonistas de tromboxano-A2 e deriivados de prostaciclina com as substâncias auxiliares e subs2

tâncias veiculares correntes.

Eptaloprost £(5E)-(16S)-13,14-didesiI dro-la,lb-dihomo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19,19-tetradesidro! -óa-carbaprostaglandina-I^J e o seu clatrato de J3-ciclodextr ina ¹ podem ser preparados de acordo com o seguinte processo:

i ! A uma mistura de 6,9g de 2-£(E)-(IS,5S,6S,7R)-7-(dimetil-th -butilsililoxi)-6-3(3S,4S)-3-(dimetil-t-butilsililoxi)-4-metilii i- -nona-1,6-diinil £-biciclo |*3.3 . θ] octano-3-ilidenoQ -etano-1-ol (W. SKuballa, E. Schillinger, C.-S. Sturzebecher, H. Vor' bruggen, J. Medicinal Chemistry 29 , 313 (1986); aqui descrito [; como composto 15a) e 11,5g de orto-4-bromobutirato de trimetilo π

;[ adicionam-se 17,2 ml de soda caustica a 50% e 337 mg de hidroJ genossulfato de tetrabutillamónio e agita-se 16 horas a 22°C sob atmosfera de argon. Es seguida dilui-se mediante arrefecijj mento com água gelada, com 20 ml de água e acidifica-se com 1 solução a 10% de ácido citrico até pH 5. Extrai-se por 3 vezes j! utilizando-se de cada vez 300 ml de éter, lava-se a fase orgâ' nica uma vez com 200 ml de solução de cloreto de sodio, secai -se com sulfato de magnésio e evapora-se em vacuo. Depois j’ da cromatografia do resíduo através de sílica-gel com hexano/ -eter (8+2) obtém-se 7,6 g de ester metílico-éter 11,15-bisji -(dimetil-t-butílico) de (5E)-(16S)-13,14-didesidro-la, 1b! -dihomo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19,19-tetra-desidro-6a-carbaprostaglandina-^ na forma de um óleo incolor.

IR(CHC1₃): 2953, 2925, 2859, 2230,

H 1730 , 1250 , 838 cm^-1.

ji Para a dissociação do éter silílico :! agitam-se 7,25 g do eter bis-sililico descrito anteriormente f' durante 48 horas a 24⁹C com 600 ml de uma mistua de ácido i¹ acético/ãgua/tetrahidrof urano (65+35+10). Evapora-se em seguida j'em vacuo e cromatograf ia-se o residuo através de silica-gel. ij Com acetato de etilo/hexano (3+2) obtêm-se 3,9 g de éster i metílico de (5E)-(16S)-13,14-didesidro-la,lb-dihomo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19-tetradesidro-6a-carbaprostaglandinai ^2 na forma de um óleo incolor.

IR(CHC1₃): 3400(largo), 2962, 2940, 2865,

2230, 1722 cm¹.

Clatrato de j3-ciclodextr ina de (5E)-(16S)-13,14-didesidro-la, lb-di-homo-16,20-dimetil-3-oxa-18,18,19,

19-tetradesidro-6a-carba-prostaglandina-l^.

Dissolvem-se 41,75 g de j3-ciclodextrina ',j em 298 ml de água a 80°C e adiciona-se gota a gota uma solução _;j de 1,5 g de (5E)-( 16S)-13,14-di-desidro-la, lb-dihomo-16,20H -dimetil-3-oxa-18,18,19,19-tetradesidro-6a-carba-prostaglandina-]_2 em 24 ml de etanol durante 15 minutos. Agita-se 4 horas I a 60°C e deixa-se depois arrefecer uma noite mediante agitaçao.

! 0 solido que precipita e removido por filtraçao, á lavado 1 com 50 ml de uma mistura de água e etanol (1:1) e seca-se

H 24 horas a 0,1 Torr e a 25°C na presença de pentóxido de fósfoij _λ

1' ro. Obtêm-se 38 g de cristais soltos do clatatrato de #-ciclodextrina do análogo de carbaciclina mencionado acima. 0 teor do análogo de carbaciclina no clatrato ê determinado por titu] laçao e é de 3,3%.

í

I!

Cicaprost e o seu clatrato de 0-ciclodex! trina podem ser preparados de forma correspondente ao processo descrito na Especificação EP-PS 119 949 e na Especificação internacional publicada W0 87/06294.

ii Como antagonistas de receptores de tromboií ! xano interessam todos os compostos que sao descritos ; por exemplo em: J5 5017-315; US 4472-586; US 4263-207;

: US 4394-515; Us 4282-365; BE 883-713; J5 7093-962; J6 0004-154; EP 43-292; EP 82-646; DE 3346-047; W0 8400-754; US 4474(-804; DE 3401-986; DE 3127-343; BE 897-763; EP 74-861; AU I; 8425-607; EP 78-668; DE 3339-019; EP 137-426 e porN.H. Wilson e R.L. Jones in; Advance in Prostaglandin, Thromboxane and ! LeuKotriene Research 14, 420-423 (1985), assim como por K.

Stegmeier et al. in: Thrombosis Research 35 , 379-395 (1984).

Como exemplo citam-se;

i! ácido 4-(j2-(Benzolsulf onamido)-etil |!-fenoxiacético (BM 13 177) Ίκ. Stegmeier et al in: Thrombosis • I i

Λ

Research 35 , 379-395, 1984] ácido [lct(Z), 2# ,5 <5-( + )-7-[5- [[(1,1-bifenil)-4-l]metoxi]-2-(4-morfolinil)-3-oxo-ciclopentil]-4-heptanoico (AH 23848) (Br. J. Pharmac. (1985) ,86,259) ácido [lft, 2<t(5Z) , 3<t, 4-7- [[2- £(f enilami. no)carbonil]hidrazino] metil] - 7-oxabiciclo [j2.2 . l] hepta-2-il]-5-heptanoico (SQ 29.548) (Prostaglandins 29, 785 (1985)) ácido 4-(4-Clorobenzolsulfonilamico)-etil-benzol-acético (BM 13 505) (Intern. Conf. LeuRotrienes and Prostanoids in Health and Disease, Tel-Aviv, Oct. 1985, p.10) ácidos 7-[3-[[[(fenilamino)carbonil] hidrazonol] metil] biciclo [2.2 . l] hepta-2-il] - [l Λ , 2 Jà , (Z) , 3 , 4 jj (EP 045) e 7-£( 1S , 2S , 3S , 4R)-3-(j.-(3-f eniltioreidoimino )!; -etil]-biciclo £2.2 . l] heptano-2-il]-5-heptanoico (EP 092) ¹ jambas as substâncias R.A. Armstrong et al. in BR.J. Phatmacol, 84, 595-607, 1985] .

j Dibenzo{b,f]tiepino-3-metanol-5-5-dioxido (L 640035) {C-C. Chan in: Europ.J.Pharmacol. 110 (3), 323-328, 1985] .

2,7(1H)-Isoquinolinodisulfonamida, N7-(3-clorofenil)-N2-{^7-^['(3-clorofenil) amino] sulfonil][-3,4-hidro-2(lH)-isoquinolinal] sulfonil]-3,4-dihidro (SKF

88046) |]B . M. Weichman et al. in: Prostaglandins LeuRotrienes and Medicine 15 , 167-175, 1984],

Na infusão intravenosa de Eptaloprost, Cicapros e das combinações acima referidas sao necessárias | por exemplo quantidades de cerca de .1 a 50 jig/paciente/dia, !; de preferência 12,5 ug/paciente/dia. No caso da aplicação oral utilizam-se aproximadamente 125 a 350 jig por dia.

Para a utilização oral uma unidade de dosagem contém 25 a 50 jig, para formulações retardadas contem 25 a 250 pg, na forma de comprimidos, drageias, cápsulas, pílulas, suspensões ou soluçoes, que podem ser preparadas de forma corrente com os aditivos e substâncias veiculares convencionais na prática galénica.

Os antagonistas de receptores de tromboxano sao utilizados de harmonia com a presente invenção em quantidades que se situam nas gamas das quantidades até agora utilizadas em estudos no homem |Riess, Η., E. Hiller, B. Reinhardt, C. Brauning em: Thrombosis Research 35, 371-378,

1984-j . Em geral as quantidades oscilam entre 100 e 3000 mg/dia, de preferência 200 a 1200 mg/dia de BM 13177, ou 1 a 150 mg/dia e de preferência 2 a 100 mg/dia de AH 23 848 ou SQ 29 548, ou de uma quantidade biologicamente equivalente de um outro antagonista de receptor de tromboxano.

Se as prostaciclinas forem utilizadas conjuntamente com misturas dos seus clatratos ou dos seus sais, a proporção de um composto activo para o outro nao e importante desde que a quantidade biologicamente equivalente de todos os compostos activos em conjunto permaneça dentro dos limites indicados.

Para a aplicaçao oral preferida interessam especialmente comprimidos, drageias, cápsulas, pílulas, suspensões ou soluçoes que se obtêm de forma corrente por mistura com substâncias veiculares e aditivos correntes na pratica galênica.

Nas combinações podem ser utilizadas quantidades ponderais de prostaciclina/analogo de prostaciclina/prostaglandina e de antagonista de receptores de tromboxano que no caso de aplicaçao conjunta, em comparaçao com as doses das substâncias activas individualmente, necessárias presentemente para outras indicações, sao acentuadamente inferiores.

Os PC/PCA/PG e o TXAA sao utilizados combinados numa unidade de dosagem ou separadamente, e tanto simultaneamente como sequencialmente, numa proporção ponderai de essencialmente cerca de 1:01 a 1:100 (por exemplo no comprimido ou também uma solução oleosa, uma mistura benzoato de benzilo/óleo de mesmo veiculo, um como por exemplo rícino) .

As de TXA, combinações de prostaciclinas e ‘2 podem ser realizadas dentro de um amplo intervalo desde que esteja presente uma quantidade de prostaciclina suficiente para se alcançar o efeito metastático de acordo .2 y

com a invenção. É preferível uma proporção de 1:01 ate 1:10, e especialmente de preferência de 1:0,1 ate 1:1.

Como ciclodextrina interessa em primeiro lugar a -ciclodextrina.

A invenção refere-se à utilização de Eptaloprost, Cicaprost e combinações de antagonistas de TXA₂ e derivados de prostaciclina para a preparaçao de um medicameii to com acçao antimetastática.

Em geral todos os tumores humanos malignos (com excepçao de cancro com base em leucemias) produzem metástases, e a invenção é aplicável aqueles.

EXEMPLOS

Para a linha de células R 3327 Mat-Lu utilizada nos ensaios citam-se no artigo de J.T. Isaacs (Current Concepts and Approaches to the Study of Prostate Câncer 513-576, 1987, Alan R. Liss, Inc., Animal Model Systems na pág. 533, o investigador e o laboratório que pela primeira vez manipularam esta sublinha Mat-Lu: D.W, Lanzan, W.D.W. Heston, D. Kadmon e W.R. Fair (Division of Urology, Dept. of Surgery, Washington University School of Medicine, St. Louis). Além disso descrevem-se entirpes de animais nos quais se forma esta sublinha e indicam-se para esta linha de células caracteristicas minuciosas do crescimento. D.W. Lazan et al descrevem em Câncer Research 42, 1390 (1982) como se prepara uma suspensão de células individuais de células de tumor R 3327 Mat-Lu com auxílio de um tumor do flanco recém-cortado de uma única ratazana.

A linha R 3327 MAT-Lu obtida pelo Dr. Isaacs, John Hopkins Univ cresce rapidamente independentemente do quadro endocrino e nao possui receptores de esteroides mensuráveis. A taxa de formaçao de metástases é de 100%. 0 periodo de sobrevivência dos animais depois de implantação subcutânea e de cerca de 35 dias. Para comprovação de uma acçao antimetastática dos derivados de prostaciclina ou dos produtos de combinação de antagonistas de TXA₂ e prostaciclinas, escolheu-se um protocolo de ensaio com implantaçao subcu7

animais

-se nos animais por tânea sem eliminação do tumor primário.

1- 0 tumor é extraído do animal dador cerca de 4 semanas depois da implantaçao, em condiçoes assépticas. 0 tumor é liberto das fracções necróticas em meio MEM 199 (minimum essential médium, melo standardizado da Firma Gibco, UK) e é seccionado em pedaços com cerca de 2mm de comprimento. Ratazanas Cop macho adultas (OLac, Inglaterra)sao implantadas por via subcutânea com um pedaço de tumor cada uma. Os animais sao agrupados ao acaso em 4 grupos de 10 cada um. No dia imediatamente anterior implantaramvia sub-cutânea mini-bombas Alzet.Gr.l:

dissolvente. Gr.2: Iloprost (300 ng/Kg/minuto) , Gr.3: Eptaloprost (100 ng/Kg/minuto). No I6^a/dia trocaram-se as bombas.

Os tumores foram medidos 1 vez por semana com uma craveira. As superfícies dos tumores foram calculadas como o produto da maior dimensão pela dimensão perpendicular a esta. No termo do ensaio os animais foram mortos por decapitaçao. Determinou-se no sangue o nível de substância activa. Os pulmões sao retirados e preparados, sao fixados 24 h em solução de Bouin e sao depois conservados em álcool. 0 numero de metástases dos pulmões é determinado por contagem. Esta contagem é facilitada, visto que as metástases nao sao coradas pelo Soluto de Bouin. Realiza-se adicionalmente uma classificaçao emgrandes e pequenasmetástases.

2^e Acção de Iloprost e Eptaloprost sobre

R 3327 Mat-Lu PC

No protocolo de ensaio escolhido (implan. taçao sub-cutânea do tumor, nao eliminação do tumor primário) sao indicadas condiçoes de acçao anti-metastática que são escalonadas como muito elevadas visto que o tumor primário segrega metástases continuamente.

peso corporar no terno do ensaio nao se reduziu significativamente por terapia com as prostaciclinas 2\

Peso	corporal (g)	superfície do tumor
Controle	315 + 28	1966 + 791
Iloprost	282 + 43	1658 + 485
Eptaloprost	281+ 43	1928 + 691

crescimento do tumor, a partir aproximadamente do 12^s dia depois da implantaçao, progrediu fortemen te (fig. 1). Um inibidor específico da formaçao de metástases não deve influenciar o crescimento do tumor primário. Para o Iloprost e o Eptaloprost nao se verifica também qualquer diferença no crescimento do tumor primário em comparaçao com o controle.

Um esclarecimento sobre o potencial anti-metastático é dado apenas pela avaliaçao das metástases dos pulmões, apenas no PC que cria metástases dopulmao. As metástases encontradas variaramno seu tamanho desde 1 mm de diâmetro até cerca de 3mm. Estabelece-se uma classificaçao em pequenas e grandes metástases sem a ocorrência de casos limite.

Com a utilização de Iloprost neste modelo nao se detectou qualquer redução do número total de metástases do pulmão. Pelo contrário, o Eptaloprost conduz a uma inibição significativa e acentuada do número total de metástases (fig. 2.). Para uma divisão em grandes e pequenas metástases verifica-se; para o Iloprost uma tendência para redução do número das grandes metástases (fig.3) e, pelo contrario, o numero de pequenas metástases relativamente ao controle tem tendência a aumentar (fig. A). 0 efeito igualmente nítido sobre o numero de metástases é mais acentuado no caso do Eptaloprost nas grandes metástases do que no caso das pequenas.

3^a Numa 2- experiência com o mesmo protocolo de ensaio que em 2^a) aplica-se o Eptaloprost diariamente, por via per oral, em doses de 0,1 e 0,5 mg/Kg, desde o dia da implantaçao do tumor ate ao termo do ensaio. Nao se verifica de novo qualquer acçao sobre o tumor primário. Enquan. to que na dose de 0,1 mg/Kg nao se verifica qualquer efeito sobre o número de metástases do pulmão, o Eptaloprost, para a dose mais elevada de 0,5 mg/Kg de peso corporal, conduz a uma redução significativa (p 0,05, teste de Dunnett) do número de metástases (fig. 5).

Indica-se a seguir o significado das fig. 1 a 5.

Fig. 1; acçao de Iloprost e Eptaloprost sobre o crescimento de R 3327 MAT-Lu PC (tumor primário)

CS··'

Fig. 2: acção de Iloprost e Etaloprost sobre o número total de metástases do pulmão

Fig. 3. acçao de Iloprost e Eptaloprost sobre o número de grandes metástases do pulmão

Fig. 4: acçao de Iloprost e Eptaloprost sobre o número de pequenas metástases do pulmão

Fig. 5: acçao de Eptaloprost, para diversas quantidades de dosagem, sobre o número de metástases do pulmão.

Claims (1)

1. Processo para a preparaçao de composiçoes antimetastaticas caracterizado por se incorporar como ingrediente activo Eptaloprost, os seus sais de adição com bases fisiológicamente aceitáveis ou os seus ciclodextrinas, em combinação com substâncias veiculares correntes, de modo que cada unidade contenha 25-250 mg da substância activa.

   - 2^ã clatratos com auxiliares e de dosagem

   Processo para a preparaçao de composiçoes antimetastaticas caracterizado por se incorporar como ingrediente activo Cicaprost, os seus sais de adição com bases fisiologicamente aceitáveis ou os seus clatratos com ciclodextrinas, em combinação com substâncias auxiliares e veiculares correntes, de modo que cada unidade de dosagem contendo 25-250 mg de substância activa.

   Processo para a preparaçao de composi! çoes antimetastáticas caracterizado por se incorporar como ; ingrediente activo combinações de antagonistas de tromboxano

   A„ e derivados de prostaciclina, em combinação com substâncias ι auxiliares e veiculares correntes, de modo que cada unidade ' de dosagem contenha 25-250 mg de substância activa.