PT808203E - Separador centrifugo com filtro anular - Google Patents

Description

Descrição “Separador centrífugo com filtro anular”

Campo técnico A invenção refere-se a um dispositivo separador centrífugo, para separar um componente, tal como um monómero, de fibrina, do plasma, implicando o referido processo o tratamento do plasma, com um ou mais reagentes, sendo os referidos reagentes fornecidos para uma câmara de reacção apropriada, que contém o referido plasma e sendo os referidos reagentes retirados de um produto desejado, por meio de um novo dispositivo de um novo processo de filtração centrífuga. Técnica de base A patente EP 0 592 242 descreve processos e composições para um vedante de fibrina completamente novo, que envolve o estabelecimento do contacto com um sítio desejado, com uma composição que compreende monómero de fibrina, e a conversão desse monómero num polímero de fibrina, concomitantemente com o passo de estabelecimento do contacto. O termo “fibrina” é definido como fibrina I, fibrina II e/ou dos ββ fibrina. É além disso conhecido, do pedido de patente US N° 155 984, um processo para a separação de um componente, tal como monómero de fibrina, do sangue. Este processo de separação de componentes de um líquido que contém vários componentes com pesos específicos diferentes envolve os passos de recolha do sangue, numa primeira câmara de um dispositivo, sendo a referida câmara definida por paredes exterior e interior substancialmente simétricas axialmente. 0 sangue é sujeito a uma centrifugação, por meio da rotação do dispositivo em tomo do eixo de simetria da câmara, de modo a estabelecer uma interface concêntrica entre os componentes do sangue. Pelo menos um dos componentes do sangue, por exemplo o plasma, é depois transferido para uma segunda câmara no dispositivo, de preferência por meio da redução do volume da primeira câmara, durante uma centrifugação contínua do dispositivo. A câmara interior, substancialmente simétrica axialmente, é proporcionada na primeira câmara de modo a assegurar que todo o sangue é sujeito a uma rotação centrífuga, necessária para a separação. Esta parede interior tem um raio adaptado para a velocidade de rotação desejada.

Na segunda câmara, uma fracção com polímero de fíbrina não reticulado, é separada do plasma, por meio de enzimas apropriados, sendo depois redissolvido no monómero de fíbrina e transferido para uma seringa, através de um filtro, por redução do volume da segunda câmara.

No entanto, sucedeu que a separação de um componente, tal como a fíbrina I do sangue, apenas por meio da filtração num dispositivo do tipo anterior não dá um resultado satisfatório. Isso deve-se principalmente ao facto de ser difícil assegurar uma separação satisfatória da fracção que contém fíbrina I, na segunda câmara e, por conseguinte, perde-se uma quantidade relativamente elevada do teor de fíbrina I no sangue, durante a transferência seguinte de uma fracção do fluido da segunda câmara para a primeira câmara, durante o passo seguinte do processo.

Também no primitivo processo, com monómeros de fíbrina, o tratamento atrás descrito do fibrogénio no interior do plasma, com um enzima apropriado, produzia o polímero de fíbrina não reticulado, na forma de uma massa de gel espessa, no fundo da segunda câmara. Para proporcionar a solução de monómeros de fíbrina desejada, era necessária uma quantidade significativa de tampão de redissolução, combinado com uma agitação substancial. Daí resultavam vários inconvenientes. Primeiro, os processos preferidos com monómeros de fibrina, por exemplo para a utilização de um vedante de fibrina, como na patente EP 0 592 242 exigem soluções de monómeros de fibrina concentrados e a grande quantidade de tampão de redissolução ou solvente necessária para dissolver a massa de gel proporciona soluções diluídas que não funcionam bem. Além disso, a agitação substancial necessária para dissolver a massa de gel na solução de monómero de fibrina, podem provocar danos no dispositivo e na própria fibrina. A patente WO 91/17 778 apresenta um aparelho para a preparação de um concentrado de factores de coagulação, tal como fibrogénio proveniente de uma amostra de sangue. O aparelho compreende uma primeira câmara, para a separação de uma fracção de plasma, e uma segunda câmara para a recolha do plasma e a precipitação de um concentrado. A primeira câmara é definida por um êmbolo que pode ser deslocado, quer em ligação com a recolha da amostra de sangue, quer com a transferência da referida fracção da segunda câmara e no retomo da referida fracção de plasma para a primeira câmara, depois da precipitação do concentrado. A patente WO 93/09 753 apresenta um recipiente para receber e separar plasma sanguíneo nos seus ingredientes. O recipiente compreende duas secções, interligadas através de um canal, que tem sedes de válvula em cada extremidade. Os componentes de válvula constituem fechos vedados das câmaras, tendo os componentes de válvula saliências de encosto, que garantem uma separação entre os componentes de válvula no estado de acoplamento das secções, mas sendo menores do que a distância entre sedes de válvula associadas, numa posição durante um movimento de separação das secções do recipiente.

Um pedido de patente, também pendente, intitulado “Processo e dispositivo para a separação de um componente tal como fíbrina I de doença sanguínea”, depositado ao mesmo tempo, apresenta uma invenção que inclui um processo para a separação de polímero de fibrina não reticulado, proveniente de uma fracção de plasma numa câmara cilíndrica realizada durante a centrifugação, de modo que o polímero de fibrina não reticulado se depositado na parede exterior da câmara, após o que a fracção restante do fluido recolhida na câmara é removida da câmara e a fracção com o polímero de fibrina não reticulado que fica na câmara, depositado substancialmente na parede, é dissolvido por adição de um solvente e por agitação centrífiiga.

Como o tratamento do plasma com o enzima é feito durante a centrifugação contínua, a força centrífuga aplicada ao polímero de fibrina não reticulado resultante faz com que seja precipitado na forma de uma fina película de gele, que adere às paredes periféricas da câmara. O líquido do plasma restante deposita-se no fundo da câmara, quando se interrompe a centrifugação, e pode ser removido por qualquer meio conveniente. Proporciona-se depois a solução de monómero de fibrina desejada, por introdução de uma solução tampão de redissolução apropriada, na câmara, e sujeitando-se o tampão na câmara revestida de gele a uma agitação centrífuga. Este processo tem vantagens sobre os processos anteriores. Em primeiro lugar, a redissolução do gel não reticulado pela solução tampão é extremamente eficiente, em parte devido à grande área da superfície de um mesmo volume de gel de fibrina, comparada com a massa de gel de fibrina, proporcionada pelos processos anteriores. Por conseguinte, o gel pode ser dissolvido com pequenas quantidades de tampão de redissolução, donde resulta uma solução de monómero de fíbrina desejavelmente concentrado. Além disso, a acção da agitação centrífuga da solução tampão, no interior da câmara revestida de gel é um processo comparativamente suave, que não danifica o equipamento nem o produto de monómero de fibrina A invenção, também pendente, inclui também um processo que envolve o fornecimento dos componentes do sangue, de preferência na presença de um anticoagulante, para uma primeira câmara anular, num dispositivo, no qual a câmara anular é definida por uma parede exterior cilíndrica e uma parede interior cilíndrica, estendendo-se as duas paredes coaxialmente, em tomo de um eixo comum, bem como por uma parede superior e uma parede inferior, sendo a parede superior ou a parede inferior formada por um corpo de êmbolo, que pode deslocar-se no interior da primeira câmara, envolvendo o referido processo ainda uma centrifugação do dispositivo, em tomo do referido eixo comum, para separar substancialmente o sangue numa fracção de células e uma fracção de plasma, seguida pela transferência da fracção de plasma resultante, enquanto influenciada pelo corpo de êmbolo, para uma segunda câmara, definida por uma parede exterior cilíndrica, que se estende coaxialmente com o referido eixo comum, fazendo-se a separação de uma fracção com polímero de fibrina não reticulado, na segunda câmara, enquanto se adiciona uma enzima apropriado. Este processo é caracterizado por se sujeitar a fracção de plasma que contém fibrogénio ao enzima, durante a centrifugação, de modo que o polímero de fibrina não reticulado resultante se deposita na parede exterior cilíndrica da referida segunda câmara, após o que se transfere a fracção de fluido recolhida no fundo da segunda câmara, enquanto é influenciada pelo corpo de êmbolo, para a primeira câmara, e por a fracção com o polímero de fibrina não reticulado que fica na segunda câmara depositado na parede cilíndrica faz-se dissolver por adição de um solvente e por agitação centrífuga. Depois pode ser retirado o enzima, se se desejar, e transfere-se a solução de monómero de fibrina assim produzido para qualquer recipiente de recepção desejado.

Por conseguinte, mantém-se facilmente uma condição asséptica para recolha da solução. Depois de o monómero de fibrina ter sido redissolvido, pode ser transferido para um recipiente de recepção, tal como uma seringa, para ser usado ulteriormente, como se descreve na técnica anterior. Antes da transferência, pode remover-se o enzima por qualquer meio conveniente. O pedido de patente, também pendente, anterior apresenta um dispositivo para a separação dos componentes de um líquido, por centrifugação em tomo de um eixo central de rotação, que compreende uma primeira câmara anular, definida por uma parede cilíndrica exterior e uma parede cilíndrica interior, estando as duas paredes dispostas concentricamente em tomo do eixo de rotação, bem como uma parede superior e uma parede inferior, sendo a parede inferior formada por um corpo de êmbolo que pode deslocar-se no interior da primeira câmara, compreendendo o referido dispositivo, além disso, uma segunda câmara que comunica com a primeira câmara através de uma primeira conduta e sendo definida por uma parede cilíndrica exterior, disposta concentricamente em tomo do eixo de rotação e pelo referido corpo de êmbolo e uma parede inferior, estando a referida segunda câmara adaptada para ser posicionada por baixo da primeira câmara, durante a centrifugação, e compreendendo o referido dispositivo também meios para o fornecimento de sangue à primeira câmara e meios de fornecimento da composição, para fornecer composição que promove a separação, bem como meios de recepção para a ligação de pelo menos um recipiente de recepção do líquido, comunicando os meios de recepção com a segunda câmara através de uma segunda conduta. Uma forma de realização preferida, a haste de êmbolo compreende a parede interior da primeira câmara. O dispositivo da invenção para realizar o processo de acordo com a invenção também pendente é caracterizado por a primeira conduta compreender pelo menos um canal que se estende entre uma abertura na parede superior da primeira câmara e uma abertura na parede inferior da segunda câmara.

Proporciona-se portanto um dispositivo que é relativamente simples e que, independentemente da posição do êmbolo, assegura uma transferência simples e rápida das ffacções em questão, de uma câmara para a outra e, em especial, da fracção de fluido da segunda câmara para a primeira câmara depois da separação da fracção que contém fíbrina I. Isso deve-se especialmente ao facto de o fluido se concentrar automaticamente no fundo da segunda câmara, quando se interrompe a centrifugação, de modo que pode ser facilmente transferido para a primeira câmara pelo movimento do êmbolo.

De acordo com a invenção também pendente, é particularmente preferido que o referido pelo menos um canal se estenda através do interior da parede cilíndrica exterior, tanto na primeira como na segunda câmaras, donde resulta que o dispositivo é particularmente simples e fácil de fabricar.

Além disso, a abertura do canal na parede inferior da segunda câmara pode dispor-se centralmente na câmara em ligação, com uma cavidade formada pela parede inferior. Como resultado, a fracção de fluido em questão é guiada de maneira fácil e rápida, directamente para a abertura de entrada do canal. Em alternativa, cada um dos canais pode ser formado por um tubo que se estende de maneira rectilínea através do corpo de êmbolo e fixando-se nas extremidades na parede superior da primeira câmara na parede inferior, respectivamente, da segunda câmara, onde comunica com as porções de canal que terminam na câmara respectiva.

Adicionalmente, a primeira e a segunda câmaras podem, de maneira particularmente simples, compreender uma parede exterior comum, de forma cilíndrica, configurada por um cilindro exterior e interior que se ajusta de maneira estanque no interior um do outro e definindo entre si um canal que se estende axialmente, podendo os cilindros terminar, numa extremidade, por uma parede de topo que compreende uma abertura que permite a passagem de uma haste de êmbolo ligada ao corpo do êmbolo, formando o referido corpo a parede inferior da primeira câmara e separando a referida primeira câmara da segunda câmara, e estendendo-se o canal entre as paredes de topo dos cilindros para uma abertura imediatamente adjacente à haste de êmbolo.

Na utilização de um tal dispositivo e um tal processo, carregam-se na segunda câmara, previamente, reagentes que facilitam a separação e o tratamento de componentes desejados no interior do plasma sanguíneo. Por exemplo, a patente EP 0 592 242 descreve que o sistema de captura de biotina-avidina pode ser usado, convenientemente, para retirar a batroxofina da solução desejada. Exige-se que a biotina batroxobina esteja presente na segunda câmara, para reagir com o fibrinogénio, no interior do plasme e converter o mesmo num monótnero de fibrina (que se converte imediatamente num polímero de fibrina). Para capturar depois disso a batroxobina biotinizada, usando o sistema biotina-avidina, avidina que está ligada, por exemplo, a agarose, tem de estar presente na segunda câmara. Num dispositivo centrifiigador automático, fechado, é necessário carregar estes agentes no dispositivo antes do processamento do sangue. A carga prévia da batroxobina diotinizada e avidina-agarose na mesma câmara criou dificuldades, visto que a elevada afinidade da avidina para a biotina, na qual nos apoiamos para a captura dos enzimas, evita que reajam com o fibrogénio quantidades suficientes, como é necessário.

Um segundo pedido de patente, também pendente, depositado concomitantemente, intitulado “Centrifuge with annular filter” descreve um dispositivo que toma possível colocar facilmente um ou mais reagentes no interior de uma câmara de reacção e para libertar esses reagentes numa sequência desejada. De preferência, quando usados num dispositivo do tipo descrito no pedido de patente atrás mencionado, podem libertar-se como se desejar reagentes, tais como um enzima e uma composição de captura de enzimas. Para satisfazer o objectivo anterior, proporcionar-se, de acordo com a invenção, um dispositivo, que é caracterizado por se dispor uma cápsula na segunda câmara e compreender uma pluralidade de compartimentos, para receber composições respectivas que promovem a separação, e por a cápsula compreender meios de fecho, que fecham os referidos compartimentos e, enquanto são influenciadas pelo êmbolo que se adapta, sequencialmente, para se abrir para libertar os conteúdos dos compartimentos.

Uma tal cápsula toma possível, de uma maneira simples, fornecer as substâncias necessárias para a separação de fibrina I, sendo a referida cápsula, de preferência, provida antecipadamente com estas substâncias. Além disso, os compartimentos proporcionados permitem um doseamento uniforme pré--determinado da quantidade em questão.

De preferência, a batroxobina é colocada num compartimento, numa relação química com a biotina que permite que o enzima batroxobina possa ser facilmente capturado, depois do uso por meio de avidina, que é portanto colocada no segundo compartimento, em relação química com agarose, na forma de partículas relativamente grandes. A elevada afinidade da biotina para a avidina proporciona que partículas de batroxobina/avidina biotinizadas complexadas e agarose sejam depois facilmente removidas por filtração, a partir da solução de fíbrina I. A colocação das duas substâncias no seu compartimento respectivo toma também possível dosear facilmente as substâncias, nos tempos desejados, por influência do êmbolo. As substâncias ou composições anteriores, biotina-batroxobina e respectivamente avidina-agarose, podem ser usadas de qualquer maneira conveniente, por exemplo na forma de pó liofilizado.

De acordo com a invenção, também pendente, do sistema de libertação de reagente, é particularmente preferido que a cápsula compreenda um cubo central, montado coaxialmente no interior da segunda câmara e levando três discos radiais, afastados uns dos outros, formando divisórias nos compartimentos e tendo um contorno periférico exterior substancialmente igual, e que os meios de fecho sejam formados por um corpo em forma de manga, que pode ser deslocado, mas envolvendo de maneira estanque os discos radiais.

Para activar o corpo em forma de manga, susceptível de ser deslocado, o êmbolo pode, de acordo com a invenção, compreender vantajosamente uma saia descendente, que coopera com o corpo em forma de manga, na cápsula, de modo a deslocar o referido corpo em forma de manga, intermitentemente, de modo que o referido corpo, em sequência, abre-se para libertar os conteúdos dos referidos compartimentos no interior da cápsula.

De acordo com a patente, também pendente, do sistema de libertação de reagentes, a cápsula pode ser disposta em ligação com uma passagem axial, numa terceira câmara adjacente, encostando-se o lado exterior do corpo em forma de manga da cápsula, de maneira estanque, à parede lateral da passagem axial, pelo menos depois de um deslocamento inicial do corpo, de modo que a divisória mais baixa da cápsula permita a passagem de líquido da segunda câmara para a terceira câmara, depois de um deslocamento final do corpo em forma de manga, provocado pelo êmbolo fora da sua aplicação à periferia da divisória mais baixa Deste modo, a cápsula além disso faz parte, de uma maneira vantajosa, do dispositivo e auxilia o referido dispositivo na sua operação posterior, durante a separação da fibrina I.

Assim, ao constituir uma parte integrante do dispositivo, o cubo da cápsula pode, de acordo com a invenção, compreender uma passagem de travessia axial e ser fixado numa saliência ascendente, posicionada centralmente no fundo da câmara inferior, ou terceira câmara, comunicando a referida passagem de travessia no fundo, de maneira nítida, com o compartimento anular exterior da terceira câmara, através de um sistema de canais, podendo a extremidade superior do cubo ser adaptada para se ligar de maneira estanque a uma passagem axial, no corpo de êmbolo, de modo a ser ligada a um recipiente que recebe o líquido, que pode ser fixado no mesmo.

Para retirar um ou mais reagentes da solução do produto desejado, a fracção de fluido que contém fibrina I é levado para uma seringa, através de um filtro, enquanto influenciado pelo êmbolo. Daí resulta que a solução de fibrina I é forçada através do filtro, enquanto o enzima e outras substâncias misturadas, para acelerar a separação, ficam retidos pelo filtro. A produção resultante de fibrina I não é completamente satisfatória, quando comparada com a quantidade de fibrina I presente na amostra de sangue.

Sumário da invenção

Um objecto da presente invenção é portanto proporciona um processo que tome possível obter um maior rendimento na obtenção de fibrina I, por meio de um dispositivo do tipo aqui em questão.

Para satisfazer o objectivo anterior, proporciona-se, de acordo com a invenção, um processo que é caracterizado por a porção da fracção de líquido que fica na segunda câmara, antes da transferência para o recipiente que recebe o líquido, ser transferida para uma terceira câmara, disposta coaxialmente com as outras câmaras, e por o líquido agora presente na referida terceira câmara seja obrigado a passar através de um filtro anular durante a centrifugação, de modo a entrar num compartimento exterior anular, adaptado para ser ligado ao componente que recebe o líquido. Como consequência, a solução de fibrina I pode ser passada através de um filtro, sob a influência da força centrífuga, que é consideravelmente mais eficiente que a filtração por meio do êmbolo.

Além disso, a invenção refere-se a um dispositivo para realizar o processo atrás referido. O dispositivo da invenção compreende uma primeira câmara anular, defmida por uma parede cilíndrica exterior e uma parede cilíndrica interior, estando as duas paredes dispostas concentricamente, em tomo do eixo de rotação, e por uma parede superior e uma parede inferior, onde a parede superior ou a parede inferior é formada por um corpo de êmbolo, que pode deslocar-se no interior da primeira câmara, compreendendo o referido dispositivo, além disso, uma segunda câmara, que comunica com a referida primeira câmara, através de uma primeira conduta e que é definida por uma parede cilíndrica exterior, disposta concentricamente em tomo do eixo de rotação, a referida parede inferior da primeira câmara e uma outra 13

parede inferior, estando a segunda câmara adaptada para ser colocada por baixo da primeira câmara, durante a centrifugação, e compreendendo o referido dispositivo também meios de fornecimento de sangue, para fornecer o sangue à primeira câmara, e meios de fornecimento da composição para fornecer composições que promovem a separação, bem como meios de recepção, para a ligação de pelo menos um recipiente que contém líquido, comunicando os referidos meios de recepção com a segunda câmara, através de uma segunda conduta.

Este dispositivo de acordo com a invenção é caractenzado por a segunda conduta comunicar com a segunda câmara, através de uma terceira câmara, disposta coaxialmente, em relação à mesma, e que compreende uma passagem para a segunda câmara, que pode ser aberta do exterior, por a terceira câmara compreender um compartimento interior e um compartimento exterior, estando os referidos compartimentos interligados, através de uma passagem circular que se estende radialmente, na qual se dispõe um filtro anular, para impedir a passagem de líquidos que contêm ingredientes não desejados, usados para promover a separação.

De acordo com a invenção, a passagem entre a segunda e a terceira câmaras pode dispor-se coaxialmente em relação às duas câmaras e ser fechada por meio de uma cápsula, que é apresentada no pedido de patente, também pendente, atrás referido, intitulado “Centrifuge Reagent Delivery System”. Esta cápsula compreende um cubo central, montado coaxialmente na segunda câmara e que leva uma pluralidade de discos radiais, afastados uns dos outros, formando divisórias numa pluralidade de compartimentos na cápsula, tendo os discos um contorno periférico exterior idêntico, que são fechados, fora dos compartimentos, por meio de um corpo em forma de manga, vedante e montado de modo que pode deslocar-se, cujo lado 14 exterior está adaptado para se encostar, de maneira vedante, à parede lateral da passagem axial, permitindo o disco que forma a divisória mais inferior da cápsula uma passagem livre de líquido da segunda câmara para a terceira câmara, por um deslocamento axial do corpo em forma de manga, para fora da sua aplicação à circunferência da divisória mais inferior, enquanto, sob a influência do êmbolo. Como consequência, obtém-se um acesso fácil e simples ao filtro em questão, por meio de uma cápsula, que já é usada para fornecer as substâncias necessárias para promover a separação de fibrina I no interior da segunda câmara.

Esta cápsula é de preferência activada pelo corpo de êmbolo, que compreende uma saia pendente, que se estende coaxialmente com o corpo em forma de manga da cápsula e que está adaptada para se aplicar ao referido corpo, quando se empurra o corpo de êmbolo para baixo, para desse modo abrir, sequencialmente, em instantes apropriados para os respectivos compartimentos na cápsula e, finalmente, abrir a passagem de líquido da segunda câmara para a terceira câmara.

Para facilitar a transferência da solução de fibrina I para um recipiente de recepção do líquido, por exemplo uma seringa, o cubo da cápsula pode, de acordo com a invenção, compreender uma passagem de travessia axial e ser fixado numa saliência ascendente, disposta centralmente no fundo da terceira câmara inferior comunicando a referida passagem de travessia hidraulicamente com o compartimento anular exterior da terceira câmara, através de um sistema de canais, podendo a extremidade superior do cubo ser adaptada para se ligar de maneira estanque a uma passagem no corpo do êmbolo, de modo a ser ligado com um recipiente do líquido nele fixado.

Finalmente, de acordo com a invenção, o cubo da cápsula pode ser fixado na saliência no fundo da terceira câmara, por meio de uma manga, que envolve, em cada extremidade, o cubo e a saliência, respectivamente, podendo a manga compreender uma porção de parede periférica, que se projecta para fora, de modo que o referido filtro anular é fixado entre a circunferência exterior da referida superfície da parede e a parede inferior da segunda câmara, de modo que a porção de parede da manga, que se projecta para fora, está disposta a uma certa distância do fundo da terceira câmara, formando desse modo a ligação entre o compartimento anular exterior e um canal que se estende axialmente, em ligação com a passagem de travessia do cubo e estendendo-se entre o lado exterior da saliência e o lado interior adjacente da manga. O dispositivo resultante é particulannente simples.

Os processos da presente invenção são processos aperfeiçoados para a separação e o isolamento de um componente individual do sangue ou uma solução que contém um tal componente. No entanto, o presente processo é apropriado para qualquer procedimento adaptável a um separador centrífugo, no qual se trata uma primeira solução, com um ou mais catalisadores ou reagentes, durante a centrifugação.

Outros procedimentos com sangue que podem beneficiar de um tal processo incluem, mas não de maneira limitativa, o isolamento de qualquer componente do sangue, tais como plasma rico em plaquetas, concentrado de plaquetas, fíbrinogénio, outras proteínas no plasma, tais como a trobina, a fibronectina e semelhantes. De preferência, o sangue é proveniente de um só dador e, mais preferentemente, o sangue é proveniente da mesma pessoa à qual o componente do sangue será administrado.

Embora os métodos da presente invenção se descrevem de aqui em diante, em termos de produção de uma solução de monómeros de fibrina, o escopo da invenção, como será compreendido pelos especialistas, não se limita a esta solução.

Tal como é aqui usada, a expressão “agitação centrífuga” refere-se ao movimento do dispositivo quando a solução tampão de redissolução é introduzida para redissolver o produto intermédio, tal como gel de polímeros de fibrina não reticulados, das paredes da câmara exterior. Um tal movimento ou agitação centrífuga pode incluir a centrifugação para garantir que toda a área da superfície exposta do gel é sujeita à solução de redissolução, e inclui de preferência uma tal centrifugação, seguida por rotações intermitentes, no mesmo sentido e/ou rotações intermitentes em sentidos opostos. As agitações centrífugas típicas incluem, mas não de maneira limitativa, 5-30 rotações, de preferência 5-10 rotações, a 2 000 - 5000 r.p.m. em ciclos de avanço recuo repetidos, durante um intervalo de tempo qualquer. Nos presentes processos, preferem-se rotações 5-10 segundos, a cerca de 3 000 r.p.m. e ciclos de avanço/recuo repetidos de 1 a 2 minutos. Como atrás se referiu, isso pode ser precedido por uma rotação um pouco mais longa, por exemplo 20 segundos ou mais, para micialmente distribuir o solvente. O termo “fibrina”, como é aqui usado, refere-se a fibrina I, fibrina II ou des ββ fibrina. O presente dispositivo, que incorpora o sistema de filtro anular centrífugo aqui apresentado, proporciona um processo eficiente e rigoroso para a recuperação de um ou mais reagentes a partir de uma solução do produto. Isso é particularmente crítico em separadores centrífugos automáticos, independentes e fechados, para utilização nas técnicas de separação do sangue, nas quais há que introduzir dois ou mais reagentes numa câmara de reacção, sequencialmente, e portanto remover os mesmos. Nos processos e dispositivos preferidos atrás descritos para proporcionar uma solução que contém monómeros de fibrina, por exemplo, para utilizar num novo vedante de fibrina, a introdução sequencial de batroxobina biotinizada, seguida por avidina agarose, na câmara que contém plasma proporciona um processo altamente sofisticado para a preparação de uma tal solução.

Breve descrição dos desenhos

Descrevem-se agora formas de realização preferidas do dispositivo e dos métodos da presente invenção, com referência aos desenhos anexos, cujas figuras representam: A fig. 1, uma vista em corte longitudinal, uma forma de realização preferida de um dispositivo de acordo com a presente invenção; e A fig. 2, uma segunda forma de realização do dispositivo de acordo com a invenção. O presente dispositivo é um dispositivo único, fechado e automizável, capaz de converter sangue total nos componentes desejados do sangue, de preferência componentes autólogos, por exemplo como vedantes de fibrina.

Descrição das formas de realização preferidas da presente invenção

De preferência, o presente separador centrífugo com filtro anular é usado com um dispositivo como aquele a que se referem os pedidos de patente, também pendentes, atrás referidos e portanto é descrito adiante em resposta a um tal dispositivo. No entanto, deve compreender-se que pode ser usado em qualquer dispositivo com câmaras de reacção, que exigem a remoção de um ou mais reagentes. O dispositivo da fig. 1, de acordo com a invenção, é constituído por partes que apresentam substancialmente simetria de rotação e implicando que o dispositivo possa ser colocado num aparelho de centrifugação, de uma maneira simples, conhecida em si, de modo a ser rodado em tomo de um eixo (1). Nesta fig. 1, uma forma de realização preferida do dispositivo compreende um recipiente exterior (2) e um recipiente interior (3) tais que se ajustam completamente um ao outro e se encostam mutuamente em toda a extensão, excepto na porção onde se proporciona um canal intermédio (4), que se estende axialmente. O canal (4) é provido de uma ranhura formada no recipiente interior (3). Os dois recipientes (2) e (3) compreendem as porções superiores (5) e (6) respectivas, que definem uma abertura central (7), que permite a passagem de uma haste de êmbolo (8). Em tomo da abertura (7), os dois recipientes compreendem partes (9) e (10) que se estendem axialmente, respectivamente, estendendo-se junto da haste de êmbolo oca (8) num sentido em que se afasta do interior dos recipientes. O recipiente exterior (2) encosta-se à haste de êmbolo oca, ao longo de uma aba (11) proporcionada com uma cavidade (12), que recebe um anel de vedação (13).

Como se ilustra na fig. 1, o canal (4) continua entre o recipiente interior e o exterior, em toda a extensão desde as paredes do cilindro exterior dos recipientes interior e exterior, ao longo das porções (5, 6) e das partes axiais (9) e (10) até a abertura imediatamente por baixo do anel de vedação (13) na abertura (7). A parte axial (10) do recipiente interior (3) que se encosta à abertura (7) é dimensionada de modo que existe uma passagem estreita, mas livre, para o interior dos recipientes (2) e (3), em tomo da haste oca da barra (8). O recipiente exterior (2) compreende uma parte cilíndrica com um diâmetro uniforme (fig. 1). Para baixo, considerado no desenho, esta parte continua para o interior de uma parte cilíndrica (14) com um diâmetro ligeiramente maior, através de uma parte de transição curte (15), que forma uma superfície interior troncocónica (16). O recipiente interior (3) termina no sítio onde a parte de transição (15) do recipiente exterior (2) continua para o interior da parte cilíndrica (14) de maior diâmetro. A extremidade inferior do recipiente interior (3) compreende uma superfície exterior (17) de uma forma troncocónica, que se adapta à forma da superfície troncocónica (16), no lado interior do recipiente exterior (2). Proporcionam-se um disco anular exterior e outro interior, respectivamente (19) e (20), imediatamente por baixo da extremidade inferior do recipiente interior (3), que termina numa superfície radial (18). Estes discos encostam-se estreitamente um ao outro, excepto numa parte, devido ao facto de definirem entre si um canal (21) que se estende, num plano axial, a partir de uma abertura central (22) e para a frente, para o lado interior do recipiente exterior (2), onde o canal (21) comunica com o canal (4) entre o recipiente exterior (2) e o recipiente interior (3), através de uma parte (23) que se estende axialmente. O canal (21) e a parte do canal axial (23) são, de maneira apropriada, proporcionados por meio de uma ranhura no lado do disco interior (20) voltado para o disco exterior (19). Os dois discos (19) e (20) são configurados com um curto oblíquo tal que compreendem superfície interiores e exteriores troncocónicas (fig. 1), inclinando-se desse modo para baixo, no sentido da abertura central (22). A fig. 1, mostra também que o disco interior (20) compreende uma superfície radial (24), que se encosta à superfície radial adjacente (18) no recipiente interior (3). A superfície radial do disco interior (20) está provida de uma cavidade (25), para receber um anel de vedação (26).

Os dois discos (19) e (20) são mantidos na sua posição, encostados contra a superfície radial (18) do recipiente interior (3), por meio de uma tampa (27), que fecha o recipiente exterior no sentido descendente. Esta tampa (27) compreende uma parte periférica (28), em forma de manga, adaptada para se encostar estreitamente ao lado interior do recipiente exterior (2), no qual está fixada de uma maneira apropriada, tal como por meio de uma acção de fecho de pressão elástica, por encaixe entre uma nervura periférica (29), no lado exterior da manga (28), e uma ranhura circular correspondente (30), no lado interior da manga (28) e uma ranhura circular (30) no lado interior do recipiente exterior (2). Garante-se uma ligação estanque, por meio de um anel de vedação (31) numa, cavidade circular (32) na periferia exterior do disco exterior (19). A tampa (27) compreende, além disso, uma parede relativamente fina (32), adaptada para formar o fundo inferior do dispositivo, na posição representada na fig. 1. Esta parede (32) estende-se substancialmente ao longo de um curso, paralelo aos discos exterior e interior (19) e (20), de modo tal que a parede (32) se estende a partir do lado interior da manga (28) numa porção adjacente dos discos (19) e (20), e para baixo no sentido de uma porção substancialmente num nível com o bordo inferior (33) do recipiente exterior (2). A fim de reforçar esta parede relativamente fina (32), proporciona-se uma nervura de reforço radial (34), a intervalos reguladores, vendo-se na fig. 1 apenas uma das referidas nervuras. Esta nervura (34) é configurada parcialmente com uma porção colocada no exterior da parede (32) e em parte com uma porção colocada no interior da parede (32) (fig. 1). Esta última porção tem a referência (35) e tem uma forma tal que se encosta ao lado inferior do disco exterior (19), com o resultado de ajudar a manter os discos (19) e (20) numa posição fiável.

Entre o disco exterior (19) e a tampa (27), está apertada uma divisória (36). Esta divisória (36) compreende um troço de tubo central (37). Este troço de tubo está montado num pino (38), que se projecta axialmente para dentro e que é formado integral com a parede (32) da tampa (27). Este troço de tubo (37) é formado integral com um disco (39) da parede circular, e estende-se para fora, a partir do troço de tubo (37), de modo tal que inicialmente se inclina ligeiramente para baixo, no sentido da parede (32) da tampa (27), após o que se estende ao longo de um curto curso axial, de modo a continuar-se por um curso que se estende substancialmente paralelamente à parede (32) da tampa. O disco da parede (39) termina numa periferia (40) curta, que se estende radialmente, assentando num ombro (41) nas porções de nervura (35) na tampa (27). Entre a periferia exterior (40) do disco de parede (39) e o lado inferior do disco exterior (19) é apertada uma unidade de filtro anular (42). Esta unidade de filtro anular (42) encosta-se a uma superfície formada substancialmente radial (43), no lado exterior adjacente do disco exterior (19). Um dispositivo e processos que utilizam um tal filtro anular são o objecto de um pedido de patente, também pendente, depositado concomitantemente, intitulado “Centrifuge with Annular Filter”. A fim de garantir uma certa estabilidade nos meios de divisória (36), dispõem-se além disso nervuras radiais de reforço, que têm a referência (44), entre o troço de tubo (37) e o disco da parede (39). O sistema de distribuição de reagentes da presente invenção compreende uma cápsula, com a referência (45), fixada na extremidade oposta da tampa (27), do troço de tubo (37) dos meios de divisória (36). Uma tal cápsula é apropriada para libertar selectivamente agentes para o interior da segunda câmara (75). Esta cápsula compreende um troço de tubo alongado (46), formado integral com um anel radial (47) e que leva dois anéis radiais adicionais (48) e (49). Estes anéis radiais (48) e (49) são fixados, com ajuste de interferência, no seu lado respectivo do anel fixo (47). Os anéis soltos (48) e (49) são dispostos, às suas distâncias respectivas do anel fixo (47), por meio de ombros circulares (50) e (51), respectivamente, no troço de tubo (46). Os três discos (47), (48) e (49) têm todos o mesmo diâmetro e levam, ao longo das periferias respectivas, uma manga (52) circular montada de modo que pode deslocar-se.

Como se ilustra no desenho, o disco inferior (49) encosta-se à extremidade superior do troço de tubo (37) da divisória (36), sendo desse modo determinada a posição da cápsula (45), na direcção axial. Esta posição é, além disso, determinada de modo tal que, quando deslocada na direcção axial, a manga deslocável (52) da cápsula entre numa aplicação estanque, pela sua extremidade inferior (ver o desenho), ao bordo mais interior (53) no disco exterior (19) na abertura central (22). Nesta posição da manga (52), há uma comunicação entre o espaço no interior do disco interior (20), que envolve a manga (52), e a abertura de entrada do canal (21) entre o disco exterior (19) e o disco interior (20). O comprimento axial da manga deslocável (52) está adaptado de modo que a aplicação ao disco (20) se faz antes de a extremidade superior (ver o desenho) da manga (52) se libertar do anel fixo (47), durante o deslocamento axial, para baixo, da referida manga (52). O diâmetro interior da manga (52) está também adaptado ao diâmetro exterior da parte do disco de parede (39) da divisória (36), que se estende axialmente, de modo tal que um deslocamento descendente contínuo da manga (52) no sentido da tampa (27), faz com que a referida manga (52) se aplique fíxamente à divisória (36), uma vez que se tenha libertado do disco exterior (19). O comprimento da parte axial dos meios de divisória (36) é igual também ao comprimento axial da manga (52), de modo tal que a referida manga (52), na posição mais baixa, é completamente recebida pelos meios de divisória.

Como se ilustra nos desenhos, a haste do êmbolo oca (8) compreende um êmbolo circular (55), no interior do recipiente exterior (2) e o recipiente interior, aplicando-se o referido êmbolo (55) de maneira estanque ao lado interior do recipiente interior (3), através de um anel de vedação (56).

No interior do êmbolo oco, forma-se um encaixe de seringa Luer, para receber uma seringa convencional (58), com um tampão (59) que actua como êmbolo, no conteúdo da seringa (58). O encaixe (58) é formado substancial como um troço de tubo que comunica com uma abertura central (61) no êmbolo (55), através de uma parte troncocónica (60). O troço de tubo (57) está dotado com uma nervura (62) que se projecta radialmente para dentro, para dirigir o fluido que sai da seringa (58), afastando-o de um trajecto axial e desse modo em tomo do comprimento do tubo (46), por baixo do mesmo, no interior da cápsula (45). Este último troço de tubo (46) tem um comprimento tal e dimensões tais que pode aplicar-se de maneira estanque ao troço de tubo (57) no interior da barra de êmbolo oca (8), quando o êmbolo (55) está na sua posição mais baixa, junto da tampa (27). Para promover a ligação estanque atrás referida, o lado interior do troço de tubo (57) é formado com um diâmetro gradualmente decrescente, na extremidade adjacente ao êmbolo (55).

Forma-se uma saia (63), que se projecta axialmente, integral com o êmbolo (55), em tomo da abertura central (61) do referido êmbolo. A saia (63) é feita com um diâmetro tal e com um comprimento tal que, por meio de um deslocamento apropriado do êmbolo (55), ele pode activar o deslocamento atrás referido da manga deslocável (52) da cápsula (45), para as referidas posições em que se aplica ao bordo interior (53) da abertura central (22), através dos dois discos (19) e (20), a que se segue uma aplicação dos meios de divisória (36).

Um meio de vedação (64), na forma de um lábio anular elástico, fixa-se, como está indicado, em tomo do êmbolo oco, na parte interior superior dos recipientes (2) e (3) (fig. 1). Estes meios de vedação em forma de lábio (64) estão adaptados para impedir uma passagem indesejada de fluido do interior dos recipientes (2) e (3) para o canal (4), mas permitindo a passagem de fluido quando se aplicar uma força por meio do êmbolo (55).

Como se indica na parte superior da fig. 1, proporciona-se uma ligação a um tubo flexível (65), através de uma abertura (66) nos recipientes exteriores e interior (2) e (3), respectivamente. Esta ligação é conhecida, não se representando por isso com mais pormenor, mas permite uma interrupção da ligação ao tubo flexível, quando se desejar. Além disso, proporciona-se uma abertura de escape do ar, com um filtro apropriado, de uma maneira convencional e portanto nem representada nem descrita com mais pormenor.

Proporciona-se uma passagem (69) a partir da área entre a divisória (36) e a tampa (27) e, por toda a parte, para cima, através do interior do troço de tubo (37) da divisória (36) e através do interior do troço de tubo (46) da cápsula (45). Esta passagem (69) permite uma transferência de fluido para a seringa (58), a partir da «7/ $ />5 referida área, quando o último troço de tubo (46) for ligado ao troço de tubo (57) no interior da haste de êmbolo (8). A passagem (68) é proporcionada na porção mais baixa do pino (38), na tampa (27), pelo facto de o pino (38) ser formado com uma superfície axial plana, tendo o referido pino uma secção transversal substancialmente circular. Daí resulta que se proporciona um espaço entre o pino e a porção adjacente do lado interior do troço de tubo (37). Proporciona-se uma área (67) directamente por cima do pino (38), onde a divisória (36) apresenta um diâmetro interior ligeiramente reduzido. Deste modo, é possível colocar um pequeno filtro (68), imediatamente por cima da referida área da fig. 1, de modo que o fluido tem de passar pelo referido filtro, antes de entrar no troço de tubo (46) da cápsula (45). O dispositivo descrito compreende uma primeira câmara anular (70), definida, para o interior, por um êmbolo oco (8) que forma uma parede interior cilíndrica (71), para o lado exterior por uma parede exterior cilíndrica (27), formada pelo recipiente exterior (2) e o recipiente interior (3). Quando, na posição de utilização convencional (1), a câmara anular é definida, para cima, por uma parede superior (73) formada pelo fundo (5) e o fundo (6), respectivamente, do recipiente exterior (2) e o recipiente interior (3). Para baixo, a câmara anular (70) é definida por uma parede inferior (74), formada pelo êmbolo (55). Defme-se uma segunda câmara (75), por baixo do êmbolo (55), sendo a referida segunda câmara definida, para fora, pela mesma parede exterior cilíndrica (72) que a primeira câmara. Para baixo, a segunda câmara (75) é definida por uma segunda parede inferior (76), formada pelo disco exterior (19) e o disco interior (20). A cápsula (45) dispõe-se centralmente no interior da segunda câmara (75). Proporciona-se uma terceira câmara (77) por baixo da referida segunda parede inferior (75), sendo esta terceira câmara (77), definida pela divisória (36) e a unidade de filtro anular (42). Além disso, esta terceira câmara (77) comunica com a segunda câmara (75), através da passagem formada pela abertura central (22), no disco exterior (19) e o disco interior (20). Finalmente, proporciona-se uma quarta câmara (78), por baixo da divisória (36), sendo a referida quarta câmara (78) definida, para baixo, pela parede (32) da tampa (27) e, além disso, por porções da manga (28) da tampa (27) e o lado inferior do disco exterior (19).

Como atrás se descreveu, o dispositivo descrito é primariamente apropriado para a separação de um componente, tal como o monómero de fibrina do sangue e, com essa finalidade, a segunda câmara (75) e, de preferência, a câmara superior (80) da cápsula (46), é previamente cheia com um enzima apropriado, tal como batroxobina. Como se compreende a partir da patente EP 0 592 242, pode utilizar-se qualquer enzima semelhante à trombina. Tais enzimas incluem a própria trombina ou qualquer outro material com uma actividade semelhante, tais como Ancrod, Acutin, Venyyme, Asperase, Botropase, Crotabase, Flavorxobina, Gabonase e a referida Batroxobina. A Batroxobina pode estar ligada quimicamente à biotina, que é uma substância sintética que permite que a batroxobina seja capturada de uma maneira convencionalmente conhecida, por meio de avidina, numa composição de avidina-agarose. Por conseguinte, a avidina-agarose encontra-se na câmara mais baixa (81) da cápsula. Quer a composição de biotina-batroxobina, quer a composição de biotina-batroxobina, quer a composição de avidina-agarose são relativamente fáceis de introduzir nas câmaras respectivas (0) e (81), para as encher, no interior da cápsula (45), antes de se colocar a referida cápsula no interior do dispositivo.

Finalmente, coloca-se uma seringa (58), contendo a referida seringa um tampão de PH-4, preparado a partir de um acetato diluído com ácido acético e apropriado para receber a fibrina I.

Pode também usar-se um outro tampão conhecido da técnica anterior. O agente tampão de redissolução pode ser qualquer solução tampão ácida, de preferência das que têm um pH entre 1 e 5. Os exemplos apropriados incluem o ácido acético, o ácido succínico, o ácido glucurónico, o ácido cisteico, o ácido itacónico, o ácido glutónico, o ácido fórmuco, o ácido aspártico, o ácido adípico e sais de ácido acético, por exemplo acetato de sódio, são preferidos. Também a solubilização pode ser realizada num meio de pH neutro, por meio de um agente caotrópico. Incluem-se nos agentes apropriados a ureia, o brometo de sódio, o hidrocloreto de guanidina, KCNS, iodeto de potássio e brometo de potássio. As concentrações e os volumes de um tampão ácido ou de um tal agente caotrópico estão indicados na patente EP 0 592 242.

Durante, ou imediatamente depois do fornecimento de sangue, a haste de êmbolo (8) é empurrada para o interior do dispositivo até um ponto tal que a manga deslocável (52) da cápsula (45) é deslocada para baixo, para uma aplicação estanque, na passagem de travessia através da parede inferior (76) e para a segunda câmara (77). Daí resulta a abertura do acesso simultâneo ao interior da composição de biotina-batroxobina, no interior da câmara mais elevada (80) da cápsula

Quando o dispositivo estiver pronto para ser utilizado, fomece-se uma amostra de sangue para o interior da primeira câmara, através de uma segunda agulha não representada e do tubo flexível (65), de uma maneira convencional, sendo a referida amostra de sangue de preferência misturada com um anticoagulante, também de uma maneira convencional. Durante o fornecimento do sangue através do tubo flexível (65) e da abertura (66), para o interior da primeira câmara (70), retira-se o ar de câmara, de uma maneira convencional. Depois do fornecimento do sangue, retira-se o tubo flexível (65) e fecha-se de maneira estanque a abertura (66). Subsequentemente, coloca-se o dispositivo, com o sangue, num separador centrífugo, o qual, entre outras coisas, ajuda a compressão estanque das várias partes. O separador centrífugo faz com que o dispositivo rode em tomo do eixo de rotação (1). Como resultado da centrifugação, o sangue é separado, na primeira câmara (70), numa fracção de plasma, que assenta radialmente no interior da porção restante do sangue, contendo a referida porção restante as células vermelhas e brancas do sangue. Como se descreve na patente EP 0 592 242, as plaquetas podem estar presentes em qualquer das ffacções, como se desejar, por variação da velocidade e do tempo de centrifugação.

Quando se tiver estabilizado a interface entre o plasma e a porção restante do sangue, isto é, quando a separação for completa, inicia-se uma redução do volume da primeira câmara (70), por meio da haste de êmbolo (8) e, portanto do êmbolo que são puxados para fora. Como resultado disso, primeiramente uma possível camada interior de ar passa através dos canais (4) e (21), para o interior da segunda câmara (75), implicando um outro movimento do êmbolo (55) que também passará plasma para a segunda câmara (75). O movimento do êmbolo (55) é interrompido quando toda a camada de plasma tiver sido forçada para o interior da segunda câmara (75), isto é, quando a interface entre a fracção de plasma e a porção restante do sangue tiver atingido a parede interior (71) da primeira câmara (70).

Na segunda câmara (75), a fracção de plasma chega ao contacto com o enzima batroxobina, donde resulta que o monómero de fibrina é libertado da fracção de plasma. Este processo é executado enquanto o dispositivo está a ser centrifugado continuamente, donde resulta que se separa polímero de fibrina, de maneira eficiente, da porção restante da fracção de plasma, sendo o referido polímero de fibrina formado pela reacção da composição de biotina-batroxobina e assentando, como uma camada viscosa, ao longo da parede exterior cilíndrica (72). Quando esta separação se completar, pára-se a centrifugação, de modo que a porção relativamente fluida da fracção de plasma pode ser facilmente pressionada para trás, para o interior da primeira câmara (70), levantando primeiro o êmbolo (55), para transferir ar da primeira câmara (70) para a segunda câmara (75), seguindo-se a pressão para baixo aplicada ao êmbolo (55). Esta transferência pode ser feita de maneira fácil e rápida antes de a camada viscosa, com polímero de fibrina, atingir a abertura para o canal (21). Podem, optativamente, tomar-se outras medidas, para impedir que a camada viscosa atinja a entrada do canal (21) demasiado rapidamente, por exemplo proporcionando um anel com dentes salientes para cima (82), representados a tracejado no fundo (76). Este procedimento de centrifugação/drenagem pode ser realizado duas ou mais vezes, como pode ser necessário, para obter a máxima extracção possível do fluido do plasma do polímero de fibrina.

Uma vez expulsa a porção remanescente da fracção de plasma da segunda câmara (75), desloca-se mais para baixo a manga deslocável (52) da cápsula (45), de modo a permitir o acesso à câmara mais baixa (81). Ao mesmo tempo, ou em ligação com o último deslocamento da manga, empurra-se o tampão (49) da seringa (58) completamente para baixo, por meio de um fuso, que actua do exterior de modo tal que se transfere o tampão pH-4 para a segunda câmara (75), o que pode ser feito enquanto se inicia a agitação centrífuga. A adição do tampão pH-4 proporciona a dissolução do polímero de fibrina no mesmo e a presença da composição avidina--agarose na câmara inferior (81), no interior da cápsula (45), proporciona a ligação da composição de biotina-batroxobina, de uma maneira convencional, pela avidina. Um deslocamento contínuo do êmbolo (55) faz com que a manga deslocável (52) na cápsula (45) se aplique aos meios de divisória (36) e a libertação da parede inferior (76), donde resulta que se proporciona um acesso livre à terceira câmara (77). Daí resulta que o conteúdo da segunda câmara (75) pode escoar-se livremente para baixo, para o interior da terceira câmara (77). De preferência, a redissolução é realizada durante a agitação centrífuga, que implica a centrifugação e uma série de movimentos de arranque e paragem de agitação para a frente/para trás.

Uma centrifugação contínua proporciona a possibilidade de a solução de monómero de fibrina ser separada na terceira câmara, através da unidade de filtro anular (42), que retém as partículas, relativamente grandes, de agarose e a batroxobina a ela ligada, através do sistema de captura biotina-avidina. Quando a solução de monómero de fibrina tiver passado para o interior da quarta câmara mais baixa (78), como consequência da centrifugação atrás referida, pára-se essa centrifugação e a solução de fibrina I é facilmente transferida para a seringa (58), por meio de um novo recuo do tampão (59), aplicando-se a extremidade superior do troço de tubo (46) da cápsula (45) ao troço de tubo (47) que forma a ligação com a seringa (58).

Enquanto o polímero de fibrina é separado da fracção de plasma na segunda 31 câmara (75), durante uma centrifugação contínua, e enquanto a solução de monómero de fibrina é separada, na terceira câmara (77), por centrifugação, é possível obter um rendimento relativamente elevado de fibrina I a partir da amostra de sangue em questão.

Descreveu-se a invenção com referência a uma forma de realização preferida. Podem, no entanto, introduzir-se muitas modificações sem nos afastarmos do escopo da invenção. A fig. 2 ilustra exemplos de tais modificações, pois a fig. 2 ilustra uma segunda forma de realização da invenção que corresponde mais ou menos à forma de realização da invenção representada na fig. 1. A forma de realização da fig. 2 compreende uma primeira câmara (90) e uma segunda câmara (91), separadas por um êmbolo (92), que compreende uma haste de êmbolo oca (93), que define interiormente a primeira câmara. Exteriormente, as duas câmaras são definidas por uma porção de um componente substancialmente tubular (94), que forma uma parede exterior cilíndrica (95) das duas câmaras (90) e (91). Para cima, a primeira câmara (90) é definida por uma parede superior (94), por meio de um anel (96) no referido componente tubular (94). A parede superior (85) define uma abertura de travessia, para a passagem da haste de êmbolo oca (93). Para baixo, a segunda câmara (91) é definida por uma parede inferior (96), formada por um flange interior periférico no componente tubular (94). No lado adjacente à segunda câmara (91), o componente tubular (94) compreende uma superfície troncocónica (97) que se inclina, afastando-se do êmbolo (92), no sentido do centro da segunda câmara (91). A parede inferior (96) define uma passagem de travessia central (98) para uma terceira câmara (99). A terceira câmara (99) é definida por uma divisória (100) e uma unidade de filtro anular (101), introduzida entre a parede inferior (96) e a divisória (100) e que conduz a uma quarta câmara anular (102). A quarta câmara (102) é definida entre uma cobertura (103) em forma de taça, fixada no componente tubular (94), por meio de rosca. A referida tampa (103) mantém, através de nervuras intermediárias (103) a divisória (100), na sua posição central e no interior do componente tubular (94), ao mesmo tempo que aperta a unidade de filtro anular (101). A cápsula (105) é fixada num pino (104), centralmente e projectando-se para cima, na divisória (100). A cápsula (105) compreende uma porção tubular (106) com anéis em forma de disco (107, 108), fixados frouxamente na mesma e definindo câmaras para os referidos enzimas, indicadas com as letras (BB) e (AA), respectivamente, por meio de uma manga colocada de modo que pode deslocar-se. Os anéis em forma de discos são fixados a distâncias mútuas desejadas no troço de tubo (106), por meio de ombros dispostos no mesmo, por meio de um diâmetro decrescente da periferia exterior do componente tubular (106), de baixo para cima.

Proporciona-se canais de travessia (115) e (116), da parte superior da primeira câmara (90) para a parte inferior da segunda câmara (91). Estes canais são proporcionados por meio dos respectivos troços de tubo fixos (117) e (118), respectivamente, que se estendem paralelamente ao eixo de rotação do dispositivo, sendo fixados nas suas extremidades em aberturas associadas, na parede superior (95) e na parte inferior (96). A ligação dos canais entre estes troços de tubo e as câmaras, respectivamente, é proporcionada por meio de tubos e tampões apropriados neles fixados. Os troços de tubo (117) e (118) estendem-se através da abertura respectiva no êmbolo (92). Proporcionam-se anéis de vedação em todos os pontos em que devem impedir-se fugas.

Fixa-se um acoplamento (120), centralmente no interior do êmbolo (92), para o acoplamento numa seringa (121) no interior da barra de êmbolo oca (93) e à extremidade superior do troço de tubo (106) da cápsula (105). O acoplamento (120) leva uma saia (122), que se projecta para o interior da segunda câmara (91) e influencia a manga deslocável (110) na cápsula (105). Como está ilustrado, o diâmetro exterior desta manga (110) está adaptado ao diâmetro da passagem de travessia (98), para baixo, para a terceira câmara (99), de modo que a manga (110) é guiada e retida pela parede inferior (96), em qualquer posição e, por consequência, também na posição mais baixa, na qual a manga (105) não se aplica ao anel inferior em forma de disco (109), na cápsula e permite a passagem de fluido da segunda câmara (91) para baixo, para o interior da terceira câmara (99). Um canal (123) estende-se da quarta câmara (102) e passa, centralmente, para cima, através do pino (104), na divisória (100) e ainda mais para cima, através do componente tubular (106) da cápsula (105), de modo que pode entrar fluido na seringa, a partir do mesmo. O dispositivo da fig. 2 é usado completamente da mesma maneira que o dispositivo da fig. 1, de modo que, como é evidente, são também proporcionados meios para acoplar ao mesmo o tubo flexível para o fornecimento do sangue.

As peças descritas que fazem parte dos vários dispositivos são fabricadas de maneira fácil, de materiais plásticos, por moldação por injecção, sendo portanto os dispositivos em questão relativamente baratos e próprios para uso descartável. A invenção foi descrita com referência a formas de realização preferidas do dispositivo. O processo de acordo com a invenção pode, no entanto, ser facilmente conduzido num laboratório, em condições assépticas, por meio de uma taça que pode ser fechada por uma tampa. O plasma e os enzimas são fornecidos para o interior da taça e, por mistura e centrifugação subsequente, o polímero de fibrina não reticulado é separado no fundo ou nas paredes da taça, como atrás se descreveu. Depois de retirar a ffacção de plasma restante, o polímero de fibrina não reticulado é também redissolvido, por adição de um solvente e por meio de agitação centrífuga como atrás se descreveu,

Exemplo

Introduziram-se 140 ml de sangue total e 20 ml de anticoagulante de nitrato de sódio (USP), na primeira câmara (70) do dispositivo atrás descrito. Centrifiigou--se esta combinação durante 2 minutos, a cerca de 6 000 r.p.m., para proporcionar uma separação de plasma e células sanguíneas. Continuando a centrifugação para obter a separação, elevou-se o êmbolo de modo a transferir a fase mais interior, isto é, o plasma, para a segunda câmara (72). Transferiram-se aproximadamente 60 ml de plasma. Este foi tratado com 30 unidades de batroxobina biotinizada, que foi introduzida na segunda câmara (75) por via do canal superior (80) da cápsula (45), como atrás se descreveu. Misturaram-se o plasma e a batroxobina, a baixa velocidade, por exemplo a 2 000 - 3 000 r.p.m. e depois centrifugou-se, durante 9 minutos, a 9 000 r.p.m. O gel de polímero de fibrina não reticulado precipitou, como uma camada fina de gel, nas paredes do cilindro e parou-se a rotação. Transferiu-se depois o fluido do plasma restante (soro) de novo para a primeira câmara (70). Isso foi seguido por duas outras centrifugações de 1 minuto, a 9 000 r.p.m., para remover a maior parte do soro possível no interior do gel. Depois de cada uma das 35 centrifugações de 1 minuto, transferiu-se o excesso de soro para a primeira câmara.

Depois disso, introduziu-se uma solução tampão, que compreende 3,5 ml de um acetato de sódio 0,2M (pH 4,0), que contém 24 mM de cloreto de cálcio, na segunda câmara (75), através da seringa (58). Nesta altura, efectuou-se uma agitação centrífuga, que consistiu em rotações de 5-10 segundos, a cerca de 3 000 r.p.m. cada, em ciclos de avanço/recuo, durante 2 minutos, para dissolver o gel de polímero de fíbrina e proporcionar uma solução que contém monómero de fíbrina. Adicionou--se à solução assim preparada avidina agarose, através da câmara inferior (71) da cápsula (45). Isso foi seguido por uma outra agitação centrífuga, que constou de rotações de 5-10 segundos a cerca de 3 000 r.p.m., em ciclos de avanço/retrocesso, durante 5 minutos. A solução resultante continha monómero de fíbrina mais um complexo de avidina-agarose: biotina-batroxibina.

Transferiu-se esta solução para a terceira câmara (77) e filtrou-se centrifugamente através de um filtro anular Porex de 20 pm, durante 1 minuto, a 9 000 r.p.m. Recolheu-se a solução de monómero de fíbrina na seringa (58), como atrás se descreveu.

Repolimerizou-se a solução de monómero de fíbrina assim formada (neste caso fíbrina I) num vedante de fíbrina, por co-administração, para um sítio que necessita de um tal vedante, com um tampão de carbonato/bicarbonato de sódio 0,75 M, com uma relação de fíbrina I: tampão igual a 5:1. /

Lisboa, 29 de Maio dp 2001 β/O Ag

Claims (6)

1. Reivindicações 1. Processo para a separação de um componente, tal como fibrina I, do sangue, por centrifugação, envolvendo o referido processo o fornecimento de sangue, misturado com um anticoagulante, uma primeira câmara anular (70, 90) num dispositivo, no qual a câmara anular (70, 90) é definida por uma parede exterior cilíndrica (72 95) e uma parede cilíndrica interior (71, 93), estendendo-se as duas paredes coaxialmente em tomo de um eixo comum (1), bem como por uma parede superior (73, 85) e uma parede inferior (74, 92), sendo a parede superior (73, 85) ou a parede inferior (74, 92) formadas por um corpo de êmbolo (55, 92), susceptível de se deslocar no interior da primeira câmara (70, 90), implicando o referido processo, além disso, uma centrifugação do dispositivo em tomo do referido eixo comum, seguido da transferência de uma fracção do líquido resultante, enquanto influenciada pelo corpo de êmbolo (55, 92), para uma segunda câmara (75, 91), definida por uma parede cilíndrica exterior (72, 94), que se estende coaxialmente com o referido eixo comum (1), de modo que a fracção de líquido presente na segunda câmara (75, 91) é ainda separada por uma centrifugação contínua e a adição de composições apropriadas, que promovem a separação, e o retomo da porção não utilizável para a primeira câmara (70, 90) e de modo que a porção da fracção de líquido que fica na segunda câmara (75, 91) é transferida para um recipiente (58, 121) de recepção do líquido, através de um filtro (42, 101), optativamente depois da adição de um solvente, caracterizado por a porção da fracção de líquido que fica na segunda câmara (75, 91), antes da transferência para o recipiente (58, 121) que recebe o líquido, ser transferida para uma terceira câmara (99, 77), disposta coaxialmente com as outras câmaras e por o líquido, agora presente na referida terceira câmara 2 (77, 99), ser levado a passar através de um filtro anular (42, 101), durante a centrifugação, de modo a entrar num compartimento exterior anular (78, 102) que está adaptado para ser ligado ao recipiente (58,121) de recepção do líquido.
2. 2. Dispositivo para a realização do processo de acordo com a reivindicação 1 e que compreende uma primeira câmara anular (70, 90), definida por uma parede cilíndrica exterior (72, 95) e uma parede cilíndrica interior (71, 93), estando as duas paredes dispostas concentricamente em tomo do eixo de rotação, e por uma parede superior (73, 85) e uma parede inferior (74, 92), sendo a parede superior (73, 85) ou a parede inferior (74, 92) formadas por um corpo de êmbolo (55, 92) que pode deslocar-se no interior da primeira câmara (70, 90), compreendendo o referido dispositivo ainda uma segunda câmara (75, 91), que comunica com a referida primeira câmara (70, 90), através de uma primeira conduta (4, 21, 115, 116), e que é definida por uma parede cilíndrica exterior (72, 94), disposta concentricamente em tomo do eixo de rotação, a referida parede inferior da primeira câmara (74, 92) e uma outra parede inferior (76, 97), estando a segunda câmara (75, 91) adaptada para ser colocada por baixo da primeira câmara (70, 90) durante a centrifugação, e compreendendo o referido dispositivo também meios de fornecimento (65) para fornecer sangue à primeira câmara (70, 90) e meios de fornecimento da composição (45, 105), para fornecer composições promotoras da separação, bem como meios de recepção (57, 120) para a ligação de pelo menos um recipiente (58, 121) receptor de líquido, comunicando os referidos meios de recepção (57, 120) com a segunda câmara (75, 91), através de uma segunda conduta (69), caractenzado por a segunda conduta (69) comunicar com a segunda câmara (75, 91), através de uma terceira câmara (77, 99), disposta coaxialmente em relação 3 à mesma e compreendendo uma passagem para a segunda câmara (75, 91), que pode ser aberta a partir do exterior, por a terceira câmara (77, 99) compreender um compartimento interior e um compartimento anular exterior, estando os dois compartimentos interligados, através de uma passagem circular que se estende radialmente, na qual está disposto um filtro anular (42, 10), para impedir a passagem de líquido que contém ingredientes indesejado usados para promover a separação.
3. 3. Dispositivo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por a passagem (22, 98) entre a segunda e a terceira câmaras estar disposta coaxialmente, relativamente às duas câmaras, e ser fechada por meio de uma cápsula (45, 105), que compreende um cubo central, montado coaxialmente na segunda câmara (75, 91) e que leva uma pluralidade de discos radiais espaçados (47, 48, 49, 107, 108, 109), que formam divisórias, numa pluralidade de compartimentos na cápsula (45, 105), tendo os discos (47, 48, 49, 107, 108, 109) em contornos circulares exteriores idênticos que, no exterior dos compartimentos, são fechados por meio de um corpo de vedação, montada de modo a poder deslocar-se, em forma de manga (52, 110), estando o lado exterior do mesmo adaptado para se encostar, de maneira estanque, à parede lateral da passagem axial (22, 98) em qualquer das suas posições, permitindo uma passagem livre do líquido, da segunda câmara (75, 91) para a terceira câmara (77, 99), por um deslocamento axial do corpo em forma de manga (52, 110), separando-se da periferia da divisória mais baixa (49, 109), enquanto influenciada pelo êmbolo (8, 92).
4. 4. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por o êmbolo (5, 92) compreender uma saia pendente (63, 122), que se estende coaxialmente com o corpo em forma de manga (52, 110), da cápsula (45, 105), e que está adaptada para se aplicar ao referido corpo (52, 110) quando o corpo do êmbolo (55, 92) é empurrado para baixo, de modo que, desse modo, em sequência abre, em instantes apropriados os compartimentos respectivos na cápsula (45, 105) e, fínalmente, abre a passagem de líquido proveniente da segunda câmara (75, 91), para o interior da primeira câmara (70, 90).
5. 5. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado por o cubo da cápsula (45, 105) compreender uma passagem de travessia axial (69) e estar fixado numa saliência ascendente (38, 104), disposta centralmente no fundo da terceira câmara inferior (77, 99), comunicando a referida passagem de travessia (69) hidraulicamente com o compartimento anular exterior da terceira câmara (77, 99), através de um sistema de canais e por a extremidade superior do cubo estar adaptada para se ligar, de maneira estanque, a uma passagem (57, 120) no corpo de êmbolo (8, 92), de modo a ligar-se com o recipiente (58, 121) de recepção do líquido, de maneira fixa no mesmo.
6. 6. Dispositivo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por o cubo da cápsula (45, 105) estar fixado na saliência (38, 104) no fundo da terceira câmara (77, 99), por meio de uma manga (37, 104), que envolve, em cada uma das extremidades, o cubo e a saliência (37, 104), respectivamente, por a manga (37, 104) compreender uma porção de parede (39, 100) saliente para fora e circular, estando o referido filtro anular (42, 101) fixado entre a periferia exterior da referida superfície da parede (39, 100) e a parede inferior da segunda câmara (76, 91), de modo que a porção de parede projectada para fora (39, 100) da manga (37, 104) fica disposta a uma certa distância do fundo da terceira câmara e desse modo forma a ligação ao compartimento anular exterior e um canal que se estende axialmente relativamente à 5 passagem de travessia (69, 106) do cubo, entre o lado interior da saliência e o lado interior adjacente da manga. Lisboa, 29 de Maio de 2001 j/Jo Agente Oficio! do Propriedade industria!

   s2ú;'—