PT1687031E

PT1687031E - Preparação farmacêutica contendo um anticorpo contra o receptor do egf

Info

Publication number: PT1687031E
Application number: PT04820387T
Authority: PT
Inventors: Hanns-Christian Mahler; Robert Mueller
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 2003-11-26
Filing date: 2004-10-26
Publication date: 2010-05-21
Also published as: BRPI0416986A; CN1886158A; DE502004010783D1; CO5690620A2; IL175727A0; CA2547060A1; AU2004298728A1; ECSP066662A; RU2006122638A; TW200531702A; US20110177068A1; AU2004298728B2; TWI322693B; EP1687031A1; ZA200605219B; EP1687031B1; CN1886158B; SI1687031T1; ATE457740T1; ES2339671T3

Description

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DESCRIÇÃO

"PREPARAÇÃO FARMACÊUTICA CONTENDO UM ANTICORPO CONTRA O RECEPTOR DO EGF" A presente invenção é relativa a uma preparação farmacêutica estável, contendo um anticorpo dirigido contra o receptor do factor de crescimento endotelial (EGFR), à sua produção e à sua utilização.

Foi possível mostrar em diversos estudos in vitro e in vivo que o bloqueio do EGFR por anticorpos actua a diferentes níveis contra tumores, através, por exemplo, da inibição da proliferação das células cancerígenas, da redução da angiogénese de mediação tumoral, da indução de apoptose das células cancerígenas e do aumento dos efeitos tóxicos da radioterapia e da quimioterapia convencional. 0 MAB c225 (DCI: Cetuximab) é um anticorpo testado a nível clínico, o qual se liga ao receptor do EGF. 0 Cetuximab é um anticorpo quimérico, cujas regiões variáveis são de origem murina e cujas regiões constantes são de origem humana. 0 Cetuximab foi pela primeira vez descrito por Naramura et al., "Câncer Immunol Immunotherapy" 1993, 37: 343-349 e no WO 96/40210 Al. O MAB 425 é um anticorpo de origem murina, dirigido contra o EGFR sobrexpresso em células tumorais, em particular nas células de carcinoma A431. As respectivas formas humanizadas e quiméricas são conhecidas a partir, por exemplo, do EP 0 531 472 Al; Kettleborough et al., "Protein Engineering" 1991, 4: 773-783; Bier et al., "Câncer

Chemother Pharmacol" 2001, 47: 519-524; Bier et al. , 2 "Câncer Immunol Immunother" 1998, 46: 167-173. 0 EMD 72000 (h425) é uma forma que se encontra na fase clínica I/II do MAB 425, cuja região constante se compõe de uma cadeia κ e de uma cadeia γ-l humana. É possível preparar os anticorpos anti-EGFR humanos de acordo com a tecnologia XenoMouse, como descrito nos WO 91/10741 Al, WO 94/02602 Al, WO 96/33735 AI. Um anticorpo especial que se encontra em testes clínicos e que se pode produzir com esta tecnologia é o ABX-EGF (Abgenix, "Crit Rev Oncol Hematol" 2001, 38: 17-23; "Câncer Research" 1999, 59: 1 236-43).

Outros anticorpos dirigidos contra o EGFR encontram-se descritos, por exemplo, no EP 0 586 002 BI e in "J Natl Câncer Inst" 1993, 85: 27-33 (MAB 528).

Como acontece com outros anticorpos, também se aplica os anticorpos anti-EGFR por via parenteral na forma de solução com vista à aplicação terapêutica. Um problema particular das soluções com estes anticorpos é a sua tendência de agregação e de formação de multimeros proteicos. No caso de multimeros redutíveis, isto pode ser atribuído à formação intermolecular indeliberada de pontes de dissulfureto, devido a uma interacção entre as fracções moleculares próximas umas das outras. Também entram em consideração as interacções hidrófobas e a formação com estas relacionada de multimeros não redutíveis. Além disso, ocorrem reacções de desamidação que levam em seguida a reacções de degradação proteica. As reacções de desnaturação descritas ocorrem sobretudo aquando do armazenamento a uma temperatura elevada ou no caso de um esforço de cisalhamento, como o que se verifica no transporte. 3

Na sequência da tendência de agregação referida, verifica-se precipitações do produto aquando do armazenamento de soluções de anticorpos, pelo que se põe em questão uma retirada reproduzível do recipiente que contém a solução. Acontece nesta situação que poderão correr embolias em caso de aplicação parenteral de uma solução contendo partículas. Em consequência disto, nem sempre fica garantida de forma reproduzível a administração ao doente dos anticorpos anti-EGFR na respectiva dose requerida, por meio de soluções de anticorpos, e a aplicação não pode ser realizada com a segurança necessária.

Através de filtração antes da injecção é possível reter os agregados. No entanto, este processo engloba uma etapa adicional e é, por isso, dispendioso e adequa-se pouco à prática clínica. Também continua a verificar-se o problema da reprodutibilidade da dose visto, por sua vez, uma parte desconhecida dos anticorpos se separar da solução e visto a formação de partículas após filtração representar ainda um risco de segurança.

Um processo corrente de estabilização de anticorpos monoclonais é a liofilização de soluções que contêm anticorpos e substâncias auxiliares. No entanto, a liofilização é muito dispendiosa em termos de tempo e de energia e logo cara. Além disso, é primeiro necessário reconstituir o liofilizado antes da administração. 0 EP 0 073 371 descreve preparações de administração intravenosa com imunoglobulinas que apresentam, para fins de estabilização, um valor de pH de 3,5 a 5,0. Os valores de pH baixos deste género levam contudo a reacções de 4 incompatibilidade indesejadas no ponto de injecção. 0 US 6,171,586 BI revela a utilização de um tampão acetato com um pH de 4,48 a 5,5, um agente tensioactivo e um poliol numa formulação aquosa de anticorpos, estando o NaCl excluído para fins de isotonização. Devido a falta de isotonização, também poderão ocorrer reacções de incompatibilidade no ponto da injecção.

Neste contexto, refere-se como exemplos de outras formulações com anticorpos especiais os EP 0 280 358, EP 0 170 983 e US 5,945,098.

Dentre estes, o EP 0 280 358 descreve a adição de dextrano a uma solução de anticorpos, com vista à estabilização contra determinadas hormonas, tendo-se atingido uma estabilidade durante nove meses. O EP 0 170 983 descreve a estabilização de um anticorpo monoclonal termolábil, por meio do aquecimento em conjunto com ovalbumina hidrolisada, pelo que passados 7 dias de armazenamento nos 45°C o anticorpo ainda estava estável. Contudo, a adição de proteínas de outras espécies a formulações a serem ministradas, previstas para a administração parenteral, é indesejável devido à problemática com isso relacionada, em particular devido à sua possível antigenicidade. O US 5,945,098 revela a utilização de glicina, Polysorbat 80 e polietilenoglicol na estabilização de uma formulação aquosa da imunoglobulina G. O DE 10133394 Al revela a utilização de um tampão fosfato 5 com um pH de 6 a 8 e um éster de ácido gordo de polioxietileno-sorbitano na estabilização de uma solução aquosa do anticorpo Cetuximab. Embora deste modo se reduza claramente a formação de agregados visíveis, prejudica-se de forma clara a estabilidade química, em particular sob condições de stresse. Além disso, a formulação não mostra estabilidade contra stresse térmico (extremo), por exemplo, um armazenamento a longo prazo nos 40°C. 0 DE10163459 revela composições farmacêuticas que representam liofilizados de solução aquosa ou de solução de substância activa/tampão/sal. Contêm os seguintes componentes: a) anticorpo contra os receptores do factor de crescimento epidérmico (Cetuximab), b) um aminoácido básico, ácido ou neutro em concentrações de 100 mmoles (ver o Exemplo 6) , c) agentes tensioactivos (éster de ácido gordo de polioxietileno-sorbitano, monooleato de polioxietileno-sorbitano (0,01% no Exemplo 4), monolaurato de polioxietileno-sorbitano, polímeros de polioxietileno-polioxipropileno), d) possivelmente agentes isotónicos, como o cloreto de sódio, e) tampão e f) açúcar ou aminoaçúcar. A estabilidade de armazenamento dos liofilizados aumentou, a estabilidade da solução produzida com vista à aplicação continuou a ser curta. O W02004060343 descreve a produção de partículas que podem consistir num anticorpo, como o Cetuximab, num tampão, num agente tensioactivo e num aminoácido. A invenção teve por objectivo descobrir, em especial para os anticorpos dirigidos contra o EGFR, uma formulação aquosa adequada à administração parenteral, a qual fosse de boa compatibilidade e estável no armazenamento à 6 temperatura ambiente durante pelo menos 24 meses. A estabilidade de armazenamento também se deverá manter no caso de forças de cisalhamento exercidas aquando do transporte e em caso de alteração das condições climatéricas, em particular no caso de uma temperatura mais elevada e de uma maior humidade do ar. Além disso, a formulação deverá ter uma estrutura simples e não deverá conter substâncias auxiliares perigosas do ponto de vista toxicológico.

De forma surpreendente, foi possível descobrir uma formulação correspondendo a estes requisitos com uma solução contendo, a par de um anticorpo contra o factor de crescimento epidérmico (anticorpo anti-EGFR), um tampão, um aminoácido e um agente tensioactivo. Por conseguinte, a presente invenção tem por objecto uma preparação farmacêutica aquosa que contém, a par de um anticorpo anti-EGFR, um tampão, um aminoácido e um agente tensioactivo.

Está-se na presença de uma preparação aquosa no sentido da invenção, se pelo menos uma parte do solvente nela contido for composta por água. Os outros componentes solventes nela contidos poderão ser todos os solventes que se adeqúem à aplicação parenteral, em particular álcoois, como, por exemplo, etanol, propanol, propanodiol ou glicerol. Em termos preferenciais, a preparação aquosa contém, como solvente, água ou misturas de etanol-água, com especial preferência o solvente é composto por água. 0 anticorpo contido na preparação pode ser qualquer anticorpo anti-EGFR, em particular o anticorpo murino, humanizado e quimérico mencionado no início, e os anticorpos anti-EGFR humanos que podem ser produzidos e que 7 o são por meio da tecnologia XenoMouse referida. É dada preferência ao anticorpo anti-EGFR Cetuximab ou EMD 72000 ou a um dos respectivos análogos de anticorpos murinos, humanizados ou quiméricos. É dada especial preferência a preparações aquosas que contenham o Cetuximab ou o EMD 72000 como anticorpos. O anticorpo anti-EGFR pode estar presente na formulação de acordo com a invenção numa concentração de 0,1 mg/mL a 50 mg/mL, de preferência de 2 mg/mL a 10 mg/mL, com especial preferência numa concentração de cerca de 5 mg/mL de anticorpo anti-EGFR.

Como tampão é possível empregar, em princípio, todas as substâncias fisiologicamente compatíveis, que se adeqúem ao ajuste do valor de pH pretendido, como, por exemplo, sais de citrato, sais de acetato, sais de histidina, sais de succinato, sais de malato, sais de fosfato ou sais de lactato e/ou as respectivas bases ou os respectivos ácidos livres, assim como misturas dos diversos sais e/ou dos seus ácidos ou das suas bases. Preferencialmente, o tampão consiste num sal ou em mais sais de citrato, de acetato, de histidina, de succinato, de malato, de fosfato ou de lactato e/ou na respectiva ou nas respectivas bases ou no respectivo ou nos respectivos ácidos livres, ou numa mistura de um ou mais dos diferentes sais e/ou do respectivo ou dos respectivos ácidos ou da respectiva ou das respectivas bases. A expressão mistura abrange neste caso tanto misturas de diversos sais do mesmo ácido como, por exemplo, misturas de diversos sais de citrato, assim como também misturas de sais de diferentes ácidos, como, por exemplo, misturas de sais de citrato e de acetato. Em termos preferenciais, o tampão consiste num sal ou em mais 8 sais de citrato e/ou no respectivo ácido livre (por exemplo, ácido cítrico, mono-hidrato do ácido cítrico, di-hidrato de citrato de trissódio, mono-hidrato de citrato de tripotássio), num sal ou em sais de acetato e/ou no respectivo ácido livre (por exemplo, ácido acético, acetato de sódio, tri-hidrato de acetato de sódio) ou em L-histidina e/ou num respectivo sal de adição ácida, como, por exemplo, mono-hidrato de mono-hidrocloreto de L-histidina. Em termos favoráveis, a preparação de acordo com a invenção contém o tampão numa concentração de 10 a 100 mmol/L, de preferência de 2 a 20 mmol/L, com especial preferência de cerca de 10 mmol/L. 0 valor de pH da preparação encontra-se entre 5,0 e 6,0, preferindo-se um valor de pH de 5,2 a 5,8, com especial preferência um valor de pH de cerca de 5,5. A preparação de acordo com a invenção é de boa compatibilidade fisiológica, de fácil produção, de dosagem precisa e é estável durante o tempo de armazenamento, com múltiplas operações de congelação e descongelação e com esforços de stresse mecânico, em termos de teor, de produtos de decomposição e de agregados. Pode ser armazenada de forma estável à temperatura frigorífica (2 -8°C) durante um período de pelo menos 3 meses até um período de 4 anos. De forma surpreendente, a preparação de acordo com a invenção também é de armazenamento estável a temperaturas elevadas e com elevados níveis de humidade do ar, por exemplo, a uma temperatura de 25°C e com 60% de humidade relativa do ar durante um período de até 2 anos, ou a uma temperatura de 40°C e com 75% de humidade relativa do ar durante um período de 3 meses. 9 A preparação pode conter, como aminoácido, aminoácidos básicos, como, por exemplo, arginina, histidina, ornitina, lisina ou aminoácidos neutros, como, por exemplo, glicina, metionina isoleucina, leucina e alanina, ou aminoácidos aromáticos, como, por exemplo, fenilalanina, tirosina ou triptofano. Preferencialmente, emprega-se os aminoácidos básicos na forma dos respectivos sais inorgânicos (de forma vantajosa na forma do sais do ácido clorídrico, ou seja, na forma de hidrocloretos de aminoácido). 0 aminoácido preferencialmente empregue é a sua forma L, respectivamente. Com particular preferência, a preparação de acordo com a invenção contém L-arginina, glicina ou L-metionina como aminoácido. A preparação contém o aminoácido numa concentração de 2 a 200 mmol/L, de preferência de 50 a 150 mmol/L. Com particular preferência, contém cerca de 100 mmol/L de aminoácido.

Os agentes tensioactivos que podem ser empregues são todos os agentes tensioactivos usualmente empregues em preparações farmacêuticas, de preferência éster de ácido gordo de polietileno-sorbitano e copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno. Os ésteres de ácido gordo de polietileno-sorbitano também são conhecidos pelo nome de marca registada Tween. Os ésteres de ácido gordo de polietileno-sorbitano adequados são, em particular, monolaurato de polioxietileno (20)-sorbitano, monopalmitato de polioxietileno(20)-sorbitano e monoestearato de polioxietileno(20)-sorbitano. É dada preferência ao monolaurato de polioxietileno(20)-sorbitano e ao monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano, preferindo-se dentre estes particularmente o monooleato de polioxietileno(20)- 10 sorbitano. Os copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno também são conhecidos pelo nome de marca registada Poloxamer. O copolimero de polioxietileno-polioxipropileno especialmente preferido é o Poloxamer 407 (CAS 9003-11-6) .

Os agentes tensioactivos podem estar na formulação numa concentração de 0,001% a 1,0% em peso. Se os agentes tensioactivos forem os ésteres de ácido gordo de polioxietileno-sorbitano, a sua quantidade será preferencialmente de 0,005 a 0,1% em peso, com especial preferência de cerca de 0,01% em peso. Se estiverem presentes copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno, a sua quantidade será preferencialmente de 0,01 a 0,5% em peso, com especial preferência de cerca de 0,1% em peso.

De modo a aumentar a compatibilidade no caso da administração parenteral, a osmolalidade encontrar-se-á preferencialmente na gama isotónica, ou seja, com uma osmolalidade de cerca de 250 a 350 mOsmol/Kg. Em seguida, a preparação pode ser ministrada directamente em grande medida de forma indolor por via intravenosa, intra-arterial e também por via subcutânea.

Em conformidade com uma forma de execução vantajosa, a preparação de acordo com a invenção contém adicionalmente um agente isotónico, de preferência um sal compatível a nível fisiológico, como, por exemplo, o cloreto de sódio ou o cloreto de potássio, ou um poliol compatível a nível fisiológico, como, por exemplo, glucose ou glicerina, numa concentração necessária à isotonização. Por conseguinte, a invenção tem por objecto uma preparação aquosa contendo um anticorpo anti-EGFR, um tampão, um aminoácido, um agente 11 tensioactivo e um agente isotónico numa concentração necessária à isotonização. 0 agente isotónico particularmente preferido é o cloreto de sódio.

Além disso, as soluções de acordo com a invenção podem conter outras substâncias auxiliares compatíveis a nível fisiológico, como, por exemplo, antioxidantes como o ácido ascórbico ou a glutationa, conservantes como fenol, m-cresol, metilparabeno ou propilparabeno, clorobutanol, tiomersal ou cloreto de banzalcónio, polietilenoglicóis (PEG) como os PEG 400, PEG 3000, 3350, 4000 ou 6000, dissacáridos como trealose ou sacarose, ou ciclodextrinas como as hidroxipropil-p-ciclodextrina, sulfobutiletil-β-ciclodextrina, α-ciclodextrina ou γ-ciclodextrina.

De acordo com uma forma de execução particularmente vantajosa da invenção, a preparação aquosa contém cerca de 5 mg/mL do Cetuximab ou do EMD 72000, cerca de 10 mmol/L de tampão citrato ou de tampão histidina com um valor de pH de cerca de 5,5, cerca de 100 mmol/L de glicina, arginina ou L-metionina, cerca de 100 mmol/L de cloreto de sódio e cerca de 0,01% de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano. É possível produzir a preparação aquosa, ao juntar as substâncias auxiliares referidas a uma solução contendo o anticorpo anti-EGFR. Em termos vantajosos, mistura-se neste intuito uma solução com uma concentração definida de anticorpos anti-EGFR, como se obtém na sua produção, com volumes definidos de soluções-mães contendo as outras substâncias auxiliares referidas numa concentração definida, e dilui-se eventualmente com água ou solução tampão para a concentração pré-determinada. Em alternativa, 12 também é possível adicionar as substâncias auxiliares à solução de partida contendo o anticorpo anti-EGFR na forma de sólidos. Caso o anticorpo anti-EGFR se encontre na forma de sólido, por exemplo, na forma de liofilizado, é possível produzir a preparação de acordo com a invenção ao dissolver primeiro os respectivos anticorpos em água ou numa solução aquosa contendo outra ou outras substâncias auxiliares, e ao proceder em seguida à sua mistura com as quantidades necessárias, respectivamente, das soluções-mães contendo outras substâncias auxiliares, com as outras substâncias auxiliares na forma sólida e/ou água. Em termos vantajosos, também é possível dissolver o anticorpo anti-EGFR directamente numa solução contendo todas as outras substâncias auxiliares.

Como vantagem, uma ou mais das substâncias auxiliares contidas na preparação de acordo com a invenção pode ou podem ser adicionadas logo durante ou ao fim do processo de produção do respectivo anticorpo EGFR. Preferencialmente, isto pode ocorrer ao dissolver directamente o anticorpo anti-EGFR numa solução aquosa contendo uma, mais ou todas as substâncias auxiliares, na última etapa da purificação que ocorre após a sua produção. Depois, será apenas necessário adicionar em reduzida quantidade e/ou nem sequer adicionar o outro ou outros componentes correspondentes para a produção da preparação. Prefere-se em particular que o respectivo componente seja dissolvido directamente numa solução aquosa contendo todas as outras substâncias auxiliares, na última etapa da purificação que ocorre após a sua produção. Se a solução, que contém o respectivo anticorpo e as substâncias auxiliares, ainda não apresentar o valor de pH pretendido, ajustar-se-á esse valor pela adição de um ácido ou de uma base, sendo de preferência 13 empregue o ácido ou a base já contido/a no sistema tampão. Depois procede-se a filtração estéril. É possivel empregar a preparação aquosa de acordo com a invenção de forma vantajosa no tratamento de doenças tumorais.

Os exemplos explicam a invenção sem que esta fique a eles limitada.

Exemplo 1 (Exemplo comparativo 1)

Solução aquosa contendo: 2 mg/mL do Cetuximab 10 mmol/L de tampão de fosfato de sódio com pH = 7,2 145 mmol/L de cloreto de sódio A produção tem lugar pela mistura de volumes definidos de soluções aquosas contendo as respectivas substâncias auxiliares numa concentração definida. Emprega-se as seguintes soluções:

Solução A (solução de substância activa) contendo: 18 mg/mL do Cetuximab 10 mmol/L de tampão de fosfato de sódio com pH = 7,2 (consistindo em 2,07 g/L de 7-hidrato de hidrogenofosfato de dissódio e 0,31 g/L de mono-hidrato de di-hidrogenofosfato de sódio) 145 mmol/L de cloreto de sódio (Obtém-se a solução ao se tamponar a substância activa, na última etapa da purificação da substância activa que ocorre após a sua produção, contra a solução B recorrendo a 14 filtração de fluxo tangencial.)

Solução B (solução de tampão/sal) corresponde à solução A, não contendo porém substância activa

Na produção da solução comparativa 1, junta-se 1,11 partes de volume da solução A e 8,89 partes de volume da solução B. A solução preparada é filtrada com um filtro estéril antes do seu acondicionamento e é deitada em ampolas injectáveis. Depois, as ampolas injectáveis são fechadas com tampas e rebordadas.

Exemplo 2 (Exemplo comparativo 2)

Solução aquosa contendo: 2 mg/mL do Cetuximab 10 mmol/L de tampão de fosfato de sódio com pH = 7,2 145 mmol/L de cloreto de sódio 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano A produção tem lugar pela mistura de volumes definidos de soluções aquosas contendo os respectivos componentes numa concentração definida. Além da solução A emprega-se a seguinte solução:

Solução C (solução de tampão/sal contendo monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano) corresponde à solução B, contendo porém adicionalmente 0,0125% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano. 15

Na produção da solução comparativa 2, junta-se 1,11 partes de volume da solução A e 8,89 partes de volume da solução C. A solução preparada é filtrada com um filtro estéril antes do seu acondicionamento e é deitada em ampolas injectáveis. Depois, as ampolas injectáveis são fechadas com tampas e são rebordadas.

Exemplo 3 (formulação de acordo com a invenção) 5 mg/mL do Cetuximab 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 100 mmol/L de glicina 100 mmol/L de cloreto de sódio 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano A produção tem lugar pela mistura de volumes definidos de soluções aquosas contendo os respectivos componentes numa concentração definida.

Solução D (solução de substância activa num tampão citrato) 16 mg/mL do Cetuximab 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 (consistindo em 2,1014 g/L de mono-hidrato do ácido cítrico) (obtém-se a solução ao se tamponar a substância activa, na última etapa da purificação da substância activa que ocorre após a sua produção, contra a solução E recorrendo a filtração de fluxo tangencial.) 16

Solução E (solução tampão): corresponde à solução D, não contendo porém substância activa.

Solução F (solução de tampão/sal): corresponde à solução E, contendo porém 145.5 mmol/L de glicina, 145.5 mmol/L de cloreto de sódio e 0,015% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano.

Na produção da formulação de acordo com a invenção, junta-se 3,125 partes de volume da solução D e 6,875 partes de volume da solução F.

Filtra-se a solução preparada com um filtro estéril antes do seu acondicionamento e deita-se a mesma em ampolas injectáveis. Depois, fecha-se as ampolas injectáveis com tampas e reborda-se a mesmas.

Exemplo 4

Em analogia com o processo dos exemplos anteriormente descritos, produz-se as seguintes soluções:

Exemplo 4.1, solução contendo: 5 mg/mL do Cetuximab 100 mmol/L de glicina 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 (consistindo em 2,9410 g/L de di-hidrato de citrato de trissódio) 17

Exemplo 4,2, solução contendo: 5 mg/mL do Cetuximab 100 mmol/L de glicina 100 mmol/L de cloreto de sódio 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 (consistindo em 2,1014 g/L de mono-hidrato do ácido cítrico)

Exemplo 4.3, solução contendo: 5 mg/mL do EMD 72000 100 mmol/L de glicina 100 mmol/L de cloreto de sódio 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 (consistindo em 2,1014 g/L de mono-hidrato do ácido cítrico)

Exemplo 4.4, solução contendo: 5 mg/mL do Cetuximab 100 mmol/L de L-metionina 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão acetato com pH = 5,5 (consistindo em 2,1014 g/L de mono-hidrato do ácido cítrico)

Exemplo 4.5, solução contendo: 5 mg/mL do Cetuximab 100 mmol/L de glicina 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão acetato com pH = 5,5 (consistindo em 1,3608 g/L de tri-hidrato de acetato de sódio) 18

Exemplo 4.6, solução contendo: 5 mg/mL do Cetuximab 100 mmol/L de glicina 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão histidina com pH = 5,5 (consistindo em 2,069 g/L de mono-hidrato de mono-hidrocloreto de L-histidina)

Exemplo 4.7, solução contendo: 5 mg/mL de Cetuximab 100 mmol/L de glicina 0,01% em peso de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 (consistindo em 2,1014 g/L de mono-hidrato de ácido cítrico)

Exemplo 4.8, solução contendo: 5 mg/mL do Cetuximab 100 mmol/L de glicina 0,1% em peso do copolímero de polioxietileno-polioxipropileno 407 (Poloxamer 407) 10 mmol/L de tampão citrato com pH = 5,5 (consistindo em 2,1014 g/L de mono-hidrato do ácido cítrico)

Exemplo 5

Testou-se a estabilidade da formulação de acordo com a invenção num teste de stresse. Neste intuito, armazenou-se ampolas contendo a solução de acordo com o Exemplo 3 e, para fins comparativos, ampolas contendo a solução de acordo com o Exemplo 1 e o Exemplo 2, nos 25°C com 60% de humidade relativa do ar e nos 40°C e com 75% de humidade 19 relativa do ar. Além disso, agitou-se as ampolas dos Exemplos 1, 2 e 3 durante cinco dias num agitador com uma frequência de agitação de 150 min-1 à temperatura ambiente, e, três vezes de seguida, congelou-se nos -20°C e voltou-se a descongelar depois nos +5°C. Antes do armazenamento e depois de determinados períodos de armazenamento, avaliou-se as ampolas visualmente com projecção directa de luz com uma fonte de luz fria e determinou-se a absorção das soluções nos 350 nm, representando uma medida de turvação. De modo a evidenciar a influência do armazenamento ou do tratamento, calculou-se por sua vez a turvação relativa em relação ao valor inicial. Além disso, analisou-se as ampolas em termos do teor de Cetuximab, de agregados e de produtos de decomposição por meio de HPLC-filtração em gel. 20

Os resultados dos estudos de estabilidade encontram-se representados na Tabela 1.

Solução sujeita a teste Armazenamento [tempo/condições] Cetuxi- mab [%] Agre gados [%] Produtos de decomposiçã o [%] Turvação nos λ = 350 nm Turvação relativa nos λ = 350 nm Avaliação visual Exemplo 1 0 semanas 99,67 0,12 0,22 0,005 1,00 Pequenas partículas, reduzido número, clara Exemplo 1 8 semanas, 25°C/60% h. r. 98,99 0,28 0,73 0,0081 1,62 Grandes partículas, grande número, clara Exemplo 1 8 serranas, 40°C/75% h. r. 95,08 3,23 1,69 0,0235 4,70 Grandes partículas, grande número, clara Exemplo 1 5 dias de agitação nas 150 rpm e à TA 99,60 0,17 0,24 0,829 165,80 Partículas muito grandes, número muito grande de partículas, turvação Exemplo 1 3 ciclos de congelação/descongelação entre -20°C e +5°C 99,68 0,14 0,18 0,0089 1,78 Partículas grandes, elevado teor de partículas, ligeira turvação Exemplo 2 0 serranas 99,62 0,18 0,21 0,0048 1,00 Sem partículas, clara Exemplo 2 8 serranas, 25°C/ 60¾ h. r. 99,02 0,28 0,70 0,0071 1,48 Pequenas partículas, pequeno número, clara Exemplo 2 8 93,95 4,34 1,72 0,0241 5,02 Pequenas partículas, pequeno 21 40°C/ 758 h. i. número, clara Exemplo 2 5 dias de agitação nas 150 rpm e à TA 99,51 0,26 0,23 0,0075 1,56 sem partículas, clara Exemplo 2 3 ciclos de conge-lação/descongelação entre -20°C e +5°C 99,61 0,21 0,18 0,0064 1,48 sem partículas, clara Exemplo 3 0 semanas 99,72 0,15 0,14 0,018 1,00 Sem partículas, clara Exemplo 3 8 serranas, 25°C/ 60¾ h. r. 99,38 0,18 0,44 0,020 1,08 Pequenas partículas, pequeno número, clara Exemplo 3 8 semanas, 40°C/ 751 h. r. co (Ξπ 0,46 1,40 0,030 1,63 Pequenas partículas, pequeno número, clara Exemplo 3 5 dias de agitação nas 150 rpm e à TA 99,15 0,70 0,15 0,019 1,04 sem partículas, clara Exemplo 3 3 ciclos de conge-lação/descongelação entre -20°C e +5°C 99,75 0,14 0,12 0,018 1,00 Sem partículas, clara 22

Tabela 1: Resumo dos dados de estabilidade da formulação de acordo com a invenção (Exemplo 3) e das duas soluções comparativas (Exemplos 1 e 2)

Os resultados mostram claramente que a formulação de acordo com a invenção apresenta de forma nítida uma maior estabilidade do que as soluções comparativas do estado da técnica.

Lisboa, 14 de Maio de 2010

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Preparação aquosa composta por um solvente, que consiste pelo menos em parte em água, um anticorpo anti-EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor - receptor do factor de crescimento epidérmico), um tampão, um aminoácido, um agente tensioactivo e cloreto de sódio como agente isotónico.

2. Preparação de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o anticorpo ser o Cetuximab ou o EMD 72000 ou um dos seus respectivos análogos de anticorpos murinos, humanizados ou quiméricos.

3. Preparação de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o anticorpo ser o Cetuximab ou o EMD 72000 .

4. Preparação de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, caracterizada por o tampão ser composto por um sal ou por mais sais de citrato, sais de acetato, sais de histidina, sais de succinato, sais de malato, sais de fosfato ou sais de lactato e/ou pela respectiva ou pelas respectivas bases ou pelo respectivo ou pelos respectivos ácidos livres, ou por uma mistura de um ou mais dos diferentes sais e/ou do respectivo ou dos respectivos ácidos ou da respectiva ou das respectivas bases.

5. Preparação de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por o tampão ser composto por um sal ou por mais sais de citrato e/ou pelo respectivo ácido livre, sal ou sais de acetato e/ou pelo respectivo 2 ácido livre ou por L-histidina e/ou por um respectivo sal de adição ácida.

6. Preparação de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 5, caracterizada por o aminoácido ser L-arginina, glicina ou L-metionina.

7. Preparação de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 6, caracterizada por o agente tensioactivo ser um éster de ácido gordo de polietileno-sorbitano ou um copolimero de polioxietileno-polioxipropileno.

8. Preparação de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por o agente tensioactivo éster de ácido gordo de polioxietileno-sorbitano ser o monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano ou o monolaurato de polioxietileno(20)-sorbitano.

9. Preparação de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por o agente tensioactivo ser o Poloxamer 407 .

10. Preparação de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 9, caracterizada por o solvente nela contido ser água ou uma mistura de água com álcoois.

11. Preparação de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por o álcool nela contido ser etanol, propanol, propanodiol e/ou glicerol.

12. Preparação de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 11, caracterizada por apresentar um valor de pH de 5-7, de preferência um pH de 5,2 a 6,0. 3

13. Preparação de acordo com a reivindicação 12, caracterizada por apresentar um valor de pH de cerca de 5,5.

14. Preparação aquosa que contém cerca de 5 mg/mL do Cetuximab ou do EMD 72000, cerca de 10 mmol/L de tampão citrato ou de tampão histidina, cerca de 100 mmoles/L de glicina, L-arginina ou L-metionina, cerca de 100 mmol/L de cloreto de sódio, e cerca de 0,01% de monooleato de polioxietileno(20)-sorbitano com um valor de pH de cerca de 5,5.

15. Processo para a produção de uma preparação farmacêutica de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 14, caracterizado por juntar-se as substâncias auxiliares referidas a uma preparação aquosa contendo o anticorpo anti-EGFR.

16. Utilização da preparação de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 14, na produção de um medicamento destinado ao tratamento de doenças tumorais. Lisboa, 14 de Maio de 2010