LT4661B

LT4661B - Medikamentai prieš nevaisingumą ir vaisingumo skatinimui

Info

Publication number: LT4661B
Application number: LT99-101A
Authority: LT
Inventors: Greta Edelstam
Original assignee: Edelstam Inc; Greta Edelstam
Priority date: 1997-02-15
Filing date: 1999-08-12
Publication date: 2000-05-25
Also published as: NO321663B1; TR199901958T2; AU743346B2; IL131267A0; JP3497513B2; EE9900346A; SK110599A3; LT99101A; CA2280685C; LV12450A; EP1001771B1; HUP0001342A2; CN1248915A; JP2000513737A; HUP0001342A3; CA2280685A1; KR20000071053A; AU6270398A; BR9807370A; NO993921L

Description

Išradimo sritis

Šis išradimas susijęs su vietinio anestetiko panaudojimu gamyboje vaisto, skirto nevaisingumo gydymui arba vaisingumo skatinimui. Jis taip pat susijęs su farmacine kompozicija, sudaryta iš efektyvios dozės vietinio anestetiko drauge su farmaciškai priimtinu užpildu. Jis taip pat susijęs su moterų vaisingumo skatinimu, naudojant minėtą kompoziciją.

Išradimo prielaidos

Nevaisingumas arba jo stoka gali tapti problema žmonėms, kenčiantiems nuo jų. Nevaisingų moterų paplitęs gydymo būdas yra in vitro apvaisinimas (IVF). IVF gydymo pagrindą sudaro:

Ovuliacijos stimuliavimas: kasdieninės hormonų injekcijos, tyrimai ultragarsu ir kraujo analizės.

Ovocitų (nesubrendusių kiaušinėlių) pašalinimas: ultragarsu valdomos ovarinės punkcijos, atliekamos vaginaliai naudojant vietinę anesteziją.

Spermijų paruošimas: plukdymas aukštyn, plukdymas žemyn, spermos atrinkimas ir kiti būdai atrinkti optimalią populiaciją su geriausiu progresyviu judrumu.

In vitro apvaisinimas: ovocitų ir atrinktų populiacijos spermijų inkubacija ląstelės inkubatoriuje. Tiesioginis ląstelės atsiskyrimo stebėjimas mikroskopu ir labiausiai gyvybingo blastocito-atrinkimas.

Embriono pernešimas: 2-3 gyvybingiausi blastocitai patalpinami j gimdos ertmę su viltimi, kad imlantuosis j gimdos gleivinę.

IVF gydymas yra brangus būdas, kuris eilei porų sukelia komplikuotus pašalinius fiziologinius efektus. Bandymai tapti nėščia techniniu ir dirbtiniu būdu besigydančiai porai neturi privalumų, kadangi gali žalingai paveikti jų savitarpio santykius. Po viso varginančio gydymo nėštumo lygis sudaro tik 25-30 %, neįskaitant tų, kurioms nepasisekė su tarpusvio santykiais ir kurios vis dar neturi vaikų. IVF gydymo kaina per menstruacinį ciklą sudaro apie 20000-25000 Švedijos kronų (SEK).

Nežiūrint į eilę ankstesnių tyrimų, nevaisingumo priežastys esant 5 endometriozei nėra aiškios, ir po gydymo net nepastebėta, kad būtų padidėjęs vaisingumas. Iš tikrųjų, kai nėra dubens sąaugų, santykis tarp švelnios endometriozės ir nevaisingumo stokos yra neaiškus (Mahmood T.A., Templeton A., Patophysiology of mild endometriosis: review of literature. Human Reproduction,

1990; 5:765-784).

Pas pacientes su endometrialiniais peritoniniais implantais peritoniniame skystyje (PF) buvo rastas padidintas leukocitų kiekis ir tai traktuota kaip pastovus nevaisingumo uždegimas (Haney A. F., Muscato J.J., Weinberg J.B., Peritoneal fluid cell populations in infertility patients. Fertil Steril, 1981; 35:696-698; Edelstam G. A. B., Lundkvist O. E., Venge P., Laurent T. C., Hyaluronan and myeloperoxidase in the peritoneal fluid during genital inflammation. Inflammation, 1994; 18:13-21). Padidėjęs leukocitų kiekis turi in vivo pagamintų makrofagų, išskiriančių makrofagą, gaminantį augimo faktorių (MDGF), kuris gali paaiškinti endometrialinio audinio proliferaciją (Halme J., White C., Kauma S., Estes J., Haskill S., Peritoneal macrophages from patients with endometriosis release growth factor acivity in vitro, J. Clin. Endocrin.

and Metabolism., 1988; 66:1044-49). Kiti išskiriami iš makrofagų ir augimo faktorių produktai, tokie kaip TNF ir interferonas, rodo subrendusios lytinės ląstelės toksiškumą ir taip pat gali turėti žalingą poveiki vaisingumo procesui (Halme J., Role of peritoneal inflammation in endometriosis - associated infertility, Ann. NY Acad. Sci., 1991; 622:266-74).

Taip pat yra svarbus beląstelinis peritoninis skystis esant sumažintam vaisingumui, nes parodyta, kad jis žymiai sumažina kiaušintakių fimbrijų kiaušinėlio pasirinkimo galimybes (Suginami H.,Yano K., Watanbe K., Matsnura S., A factor inhibiting ovum capture by the oviductal fimbriae present in endometriosis peritoneal fluid. Fertil Steril, 1986; 46: 1140-1146). Pacienčių su endometrioze ir nepaaiškinamu nevaisingumu, atitinkamai, peritoniniame skystyje surastas sumažintas spermijų progresyvus greitis (Makarand K., Oak M., Chantler E. N., Vaughan Williams C. A., Elstein M., Sperm survival studies in peritoneal fluid from infertile women with endometriosis and unexplained infertility. Clinical reproduction and fertility, 1985; 3:

³ LT 4661 B

297-303). Net labiau įdomu tai, kad yra padidėjusi spermijų fagocitozė, kuri aptikta po 24 valandų inkubacijos in vitro su peritoniniu skysčiu iš pacienčių su endometrioze (Muscatto J. J., Haney A. F., VVeinberg J. B., Sperm phagocytosis by human peritoneal macrophages: a possible cause of infertility in endometriosis. Am.

J. Obstet. Gynecol., 1982, 144:503-510). Tačiau šiame darbe buvo keletas skirtingų spermos donorų ir todėl negali būti atmesti iškilę imunologiniai faktoriai.

Išradimo esmė

Šis išradimas yra alternatyvus būdas gydyti nevaisingas moteris IVF būdu. In vitro tyrimais surasta, kad spermijų fagocitozė gali būti sumažinta lidokainu. Manoma, kad šis lidokaino efektas yra surištas su ląstelės membranos stabilizacija, trukdant Na⁺ jonų prasiskverbimą ir tikriausiai ląstelės membranoje susikertant su ATP. Šio gydymo kaina sudarys apie 10 % nuo IVF gydymo, t. y. per menstruacinį ciklą sudarys 2500 SEK. Tai nėra techninis apvaisinimo būdas, kuris iššauktų pašalinius fiziologinius efektus. Šis gydymas gali būti taikomas pacientėms su endometrioze ir/arba su nežymiomis mechaninėmis nevaisingumo priežastimis. Jis gali būti atliekamas, kol laukiama IVF gydymo ir jis neatsiliepia į galimybę, kad vėlesnis IVF gydymas būtų sėkmingas.

Literatūroje nerasta duomenų apie nevaisingumo gydymą lidokainu. Tačiau, yra žinomi kiti lidokaino farmaciniai efektai. Pvz., EP 0507160 aprašo išorinės aplikacijos odai paruošimą su lidokainu; lidokainas, kuris įeina j vaisto atpalaidavimo sluoksnį, uždedamas ant pagrindo. Preparatas gali būti naudojamas gydyti juostinę pūslelinę neuralgiją ir popūslelinę neuralgiją.

Trumpas figūrų aprašymas

Kaip naudojama grafikuose, “endometr” reiškia endometriozę ir “end-galima” reiškia galimą endometriozę; d- reiškia dieną.

Fig. 1 yra schematinė iliustracija, rodanti laisvų spermijų skaičių, parodant kiekvieną inkubacijos dieną: su ląstelės terpe (A, kontrolė), su ląstelės terpe ir lidokainu (B), su peritoniniu skysčiu (C, kontrolė) ir su peritoniniu skysčiu ir lidokainu (D).

Fig. 2 yra schematinė iliustracija, rodanti progresyviai judančių spermijų skaičių, parodant kiekvieną inkubacijos dieną: su ląstelės terpe (A, kontrolė), su ląstelės terpe ir lidokainu (B), su peritoniniu skysčiu (C, kontrolė) ir su peritoniniu skysčiu ir lidokainu (D).

Fig. 3 yra schematinė iliustracija, rodanti neprogesyviai, bet judančių spermijų skaičių, parodant kiekvieną inkubacijos dieną: su ląstelės terpe (A, kontrolė), su ląstelės terpe ir lidokainu (B), su peritoniniu skysčiu (C, kontrolė) ir su peritoniniu skysčiu ir lidokainu (D).

Fig. 4 yra schematinė iliustracija, rodanti gyvų, bet stacionarių spermijų skaičių, parodant kiekvieną inkubacijos dieną: su ląstelės terpe (A, kontrolė), su ląstelės terpe ir lidokainu (B), su peritoniniu skysčiu (C, kontrolė) ir su peritoniniu skysčiu ir lidokainu (D).

Fig. 5 yra schematinė iliustracija, rodanti negyvų spermijų skaičių, parodant kiekvieną inkubacijos dieną: su ląstelės terpe (A, kontrolė), su ląstelės terpe ir lidokainu (B), su peritoniniu skysčiu (C, kontrolė) ir su peritoniniu skysčiu ir lidokainu (D).

Detalus išradimo aprašymas

Su nuorodomis į fig. 1-6, išradime aprašomas vietinio anestetiko panaudojimas gamyboje vaistų, skirtų gydyti nevaisingumą arba skatinti vaisingumą. Vietinis anestetikas gali būti parenkamas iš bet kurios medžiagos, kuri pasižymi vietinio anestetiko savybėmis.Tokių medžiagų pavyzdžiais gali būti bupivakainas (1butil-N-(2,6-dimetilfenil)-2-piperidinkarboksamidas), lidokainas (2-(dietilamino)-N(2,6-dimetilfenil)acetamidas), mepivakainas (N-(2,6-dimetilfenil)-1 -metil-2piperidinkarboksamidas), prilokainas (N-(2-metilfenil)-2-(propilamino)propanamidas) ir ropivakainas ((S)-N-(2,6-dimetilfenil)-1-propil-2-piperidinkarboksamidas). Kiti vietiniai anestetikai taip pat gali būti naudojami. Pirmenybė teikiama lidokainui.

Kitu šio išradimo objektu'yra farmacinė kompozicija, susidedanti iš efektyvios koncentracijos vietinio anestetiko kartu su farmaciškai priimtinu užpildu. Viena koncentracija paveikiama j moters nevaisingumą, o kita paveikiama j moters vaisingumo skatinimą. Dozę ir koncentraciją apsprendžia gydantis gydytojas. Aktyviosios medžiagos koncentracija yra mažiausiai 5 ųg/ml. Ji gali būti vartojama 100-2000 ųg 1 -20-tyje ml, pageidautina apie 118 ųg. Skiriama dozė yra bent jau 100 ųg, specialiais atvejais - iki 1000 ųg. Kompozicija yra dažniausiai įvedama į pilvo ertmę, dažniausiai pertubavimo būdu. Vietinis anestetikas yra nurodytas aukščiau.

s LT 4661 B

Aktyvusis ingredientas gali būti maišomas su užpildu, kuris yra farmaciškai priimtinas ir suderintinas su aktyviuoju ingredientų ir tokiais kiekiais, kurie tiktų panaudoti gydymo būdams, aprašytiems šiame aprašyme. Priedo, jeigu norima, kompozicija gali turėti nedidelius kiekius pagalbinių medžiagų, tokių kaip vilgiklių arba emulsiklių, pH buferių ir kitų medžiagų, kurios pagerina aktyviojo ingrediento efektyvumą.

Šio išradimo farmacinė kompozicija gali turėti komponenčių farmaciškai priimtinas drukas. Farmaciškai priimtinos druskos yra rūgščių prijungimo druskos, kurios susidaro su neorganinėmis rūgštimis, tokiomis kaip, pavyzdžiui, druskos arba fosforo rūgštis, arba su tokiomis organinėmis rūgštimis, kaip acto, vyno arba migdolų rūgštis.

Fiziologiškai toleruojami nešikliai yra gerai žinomi iš technikos lygio. Pavyzdiniu skystų nešiklių pavyzdžiu gali būti sterilaus vandens tirpalai, kurie neturi kitų pagalbinių medžiagų be aktyviojo ingrediento ir vandens, arba turi buferį, toki kaip natrio fosfatą, fiziologini natrio chlorido tirpalą arba abu, toki kaip fosfatu buferintą fiziologinį natrio chlorido tirpalą, prie fiziologinių pH reikšmių. Dar toliau, vandeninis nešiklis gali turėti daugiau negu vieną buferinę druską, o taip pat ir kitas druskas, tokias kaip natrio arba kalio chloridai, dekstrozė, propileno glikolis, polietileno glikolis ir kitas ištirpintas medžiagas.

Kompozicija taip pat gali turėti hialuronano, kuris yra klampi medžiaga, t. y. gelio formoje. Hialuronanas užtikrina aktyviosios medžiagos lėtą išsiskyrimą, kas yra pageidautina, nes kiaušinėlio apvaisinimas įvyksta po 24 valandų po ovuliacijos ir kai gydoma pagal išradimą. Kitas pasiekimas yra tas, kad hialuronanas pasižymi stimuliuojančiu poveikiu j spermą (Zimmerman E. R., Drobnis E., Robertson K. R., Nakajima S. T., Kim H., Semen preparation with the Sperm Select system versus a washing technique. Fertil Steril, 1994; 61:269-275).

Aplamai, nevaisingumas nėra traktuojamas kaip liga. Išradimas taip pat apima moterų nevaisingumo gydymą naudojant farmacinę kompoziciją pagal išradimą, pasižyminčią tuo, kad farmacinė kompozicija yra įterpiama pertubavimo būdu.

Išradimas ypatingai susietas su kosmetiniu arba neterapiniu būdu gydyti nevaisingumą arba skatinti vaisingumą, kai a) diagnozuota ovuliacija, b) gydoma vietiniu anestetiku, kai pagal a) stadiją laukiama ovuliacijos.

Pirmenybė gydymui teikiama pertubavimo būdu. Pageidautini šie veiksmai:

⁶ LT 4661 B

Savaiminė ovuliacija: pirminis gydymas normalaus menstruacinio ciklo metu.

Stimuliuojamos tik neovuliuojančios pacientės ir pirmiausia su klomifenu (tabletės), kuris yra lengvai prieinamas ir nebrangus. Reikia tik vieno kraujo tyrimo po ovuliacijos, patvirtinančio, kad ovuliacija įvyko gydymo ciklo metu.

LH (liuteinizacijos hormono) testas: 24-26 valandas prieš ovuliaciją yra diagnozuojamas LH-pakilimas, atliekamas savikontrolės testu iš šlapimo pavyzdžio.

Pertubavimas: kai LH-testas yra teigiamas, tai atliekamas pertubavimas su pvz., 10 ml 100 pg/ml dozės lidokainu fiziologiniame arba Ringerio tirpale paprasto ginekologinio apžiūrėjimo metu. Nereikalinga jokia anestezija.

Apvaisinimas: jokio dirbtino gydymo. Atlikus pertubavimą, pora bandys ir pasieks nėštumą normaliu lytiniu keliu namuose.

Rasta, kad žalingo efekto spermos gyvybingumui nėra, tai parodo, kad spermijai yra nepaveikami lidokainu, ką parodė ir kiti tyrimai (Bennett S. J., Bolton V., Parsons J., The effects of lignocaine on human sperm motility, J. Assisted Reprod. & Genetics, 1992, 9:271-3). Atrodo, kad tas pats atvejis tinka ir ovocitams, kai buvo išmatuotas didelis lidokaino kiekis, kuris nesukėlė jokių problemų apvaisinimui arba embriono vystymuisi (Bailey-Pridham D. D., Cook C. L., Reshef E., Hurst H. E., Drury

K., Yussman M. A., Follicular fluid lidocain levels during transvaginal oocyte retrieval. Fertil Steril, 1990, 53: 171-173). Aukščiausias lygis buvo 118 ųg/ml, kuris reiškia, kad lidokaino 1000 ųg dozė, naudota in vitro inkubacijoje turi būti naudojimui praskiesta iki, pvz., 100 ųg/ml 10-tyje ml izotoninio skysčio. Ši koncentracija dabar bus naudojama nėštumo klinikiniams tyrimams, vykdomiems po pertubavimo 24 valandos prieš ovuliaciją tam, kad būtų padidintas spermos gyvybingumas.

Lidokainas daugelį metų buvo vartojamas be jokio žalingo poveikio nėštumo periodu, kas taip pat parodyta tyrimuose su gyvuliukais (Ramazzotto J., Curro F. A., Paterson J. A., Tanner P., Coleman M., Toxicological Assessment of Lidocaine in the Pregnant Rat, J. Dent. Res.,1985; 64: 1214-1218) ir todėl gali būti vartojamas gydyti pacienčių su endometrioze nevaisingumą.

Išradimas iliustruojamas sekančiu pavyzdžiu. Visi techniniai ir moksliniai terminai vartojami tokie, kad turėtų tą pačią prasmę kaip paprastai suprantami eilinių asmenų, patyrusių šioje srityje, išskyrus tuos atvejus, jeigu kitaip nenurodyti. Čia naudojamos technikos yra tokios, kurios žinomos kiekvienam, dirbančiam šioje srityje, išskyrus jeigu nurodyta kitaip. Publikacijos, minimos čia, yra įtrauktos.

pavyzdys. Spermijų fagocitozės sumažinimas iš moterų su endometrioze peritoninio skysčio (PF).

Šis tyrimas atkiekamas tolimesnei leukocitų funkcijos analizei, kai yra sumažintas vaisingumas dėl endometriozės ir taip pat dėl tolimesnio potencialaus terapinio traktavimo. Išvengiant imunologinių įtakų, tik vienas spermos donoras dalyvavo eksperimentuose. Paruošti spermos pavyzdžiai buvo inkubuoti su necentrifūguotu peritoniniu skysčiu iš sveikos moters ir moters su endometrioze tam, kad būtų įvertintas spermijų fagocitozės svarbumas sumažintam nevaisingumui endometriozės metu. Buvo 5 dienas kasdien skaičiuojamas gyvų spermijų skaičius inkubacijoje esant ar nesant vietiniam anestetikui, kuris buvo pridedamas tyrimo metu tam, kad sumažintų peritoniniu leukocitų populiacijos aktyvumą.

Medžiagos ir metodikos

Pacientai

Moterys. Moterys buvo padalintos į tris skirtingas grupes. Kontrolinė grupė (n = 9, amžiaus vidurkis = 38,5), sudaryta iš moterų, kurioms atlikta laporaskopinė sterilizacija arba iš moterų, jaučiančių neaiškų pilvo skausmą. Kontroliniai atvejai laparoskopiškai parodė, kad yra norma, su anatomiškai normalia gimda ir kiaušintakiais.

Tiriamąją grupę sudarė moterys, kurioms: laparoskopiškai nustatyta nevaisingumo arba pilvo skausmo priežastis ir kurioms konstatuota endometriozės diagnozė (n= 11, amžiaus vidurkis = 34,5). Šioje grupėje diagnozė laparoskopu nustatyta 8 pacientėms, ir anamnezinė galima endometriozė - 3 pacientėms, bet kuri dar nebuvo tiek išsivysčiusi, kad duotų endometrinius implantus, kurie būtų matomi laparoskopiškai.

Vyras. Spermos donoras buvo 38 metų amžiaus vyriškis su normalia vaisingumo galia ir su 2-3 dienų susilaikymo periodu prieš kiekvieną spermos išleidimą. Spermos pavyzdžiai buvo paruošti “plūduriavimo aukšyn technika, kad būtų atrinkta optimali populiacija (Russel L. D., Rogers B. J., Improvement in the quality and fertilization potential of human sperm population using the rise technigue, J. Androl., 1987; 8:25).

Peritoninio skysčio (PF) pavyzdžiu surinkimas laparoskopu

Po to, kai pacientės buvo anestezuotos, buvo paimti kraujo pavyzdžiai hialuronano analizei, kuris PF-je gali būti naudojamas kaip einančio uždegimo 5 žymeklis, kad galima būtų eliminuoti PID (dubens uždegimo ligą). Laparoskopijos pradžioje su instrumentais labai atsargiai pilvo ertmėje visas esantis peritoninis skystis Douglas’o divertikulyje išsiurbiamas siurbimo prietaisu per teflono kateterį (diametras 1,7 mm, Optinova, Godby, Suomija) ir sumaišomas su 10TV/ml heparino (Olive D. L., VVeinberg J. B., Haney A. F., Peritoneal macrophages and infertility; the association between cell number and pelvic pathology. Fertil Steril, 1985; 44:772777) teflono butelyje (Nalgene, Brochester, NY, JAV) ir tuojau pat tiriamas. Peritoninio skysčio kiekis nustatomas elekrinėmis svarstyklėmis. Teflonas buvo pasirinktas kaip medžiaga surinkti PF dėl jo nedidelės adhezijos su žinduolių ląstelėmis (Grinnell F., Milam M., Srere P. A., Studies on cell adhesion, Arch.

Biochem. Biophys., 1972; 153:193-198). Heparinas buvo naudojamas kaip antikoaguliantas, kad apsaugotų leukoctus nuo agregacijos (Makarand etai., 1985). Prieš tai buvo panaudotas citratas (Edeistam ef ai., 1994), kuris spermos inkubacijoje turi žalingą poveikį į spermos gyvybingumą. Pacientėms leidus, visi pavyzdžiai ir visa pavyzdžių surinkimo procedūra buvo aprobuoti Etikos komiteto,

Medicinos fakultete, Upsalos universitete, Švedijoje.

Spermiįu ir peritoninio skysčio inkubacijos

Teflono tūbos buvo naudojamos per visas inkubacijas, kurios buvo atliekamos drėgname ląstelės inkubatoriuje taip:

a) ląstelės terpė (1 ml), spermijai (10⁶1-me ml ląstelės terpės) ir 0,1 ml NaCI.

b) ląstelės terpė (1 ml), spermijai (10^s 1-me ml ląstelės terpės) ir 0,1 ml lidokaino 10 mg/ml (Xylocain®, ASTRA).

c) spermijai (10⁶ 1-me ml ląstelės terpės), peritoninis skystis (1 ml) ir 0,1 ml

NaCI.

d) spermijai (10⁶ 1-me ml ląstelės terpės), 0,1 ml lidokaino (10 mg/ml) ir peritoninis skystis (1 ml).

Iš anksto sumaišo ląstelės terpę (Sigma) su 0,35 % BSA (jaučių serumo albuminas).

Likęs kiekis peritoninio skysčio buvo nucentrifūguotas, o supernatantas atšaldytas (- 20 °C) tolimesnei hialuronano analizei (Edelstam et ai., 1994). Tūbos buvo kasdien analizuojamos penkių dienų laikotarpyje ir sekantys duomenys buvo suskaičiuoti visose A-D inkubacijose iki 100 spermijų:

laisvų spermijų, nesulipusių su leukocitais, skaičius;

spermijų su progresyviu judrumu skaičius; spermijų su neprogresyviu judrumu skaičius; spermijų, kurie yra stacionarūs ir gyvi, skaičius; negyvų spermijų skaičius.

Taip pat kasdien buvo nustatomas gyvybingų peritoninių leukocitų procentas, naudojant tripano mėli.

Rezultatai

Pagrindinis atradimas buvo tas, kad tūbose statistiškai patikimai (p < 0,02) buvo žymiai mažiau fagocituotų spermijų, kai buvo inkubuota su peritoninių skysčiu ir lidokainu. Spermijai buvo stebėti įtraukti į didelius leukocitų agregatus ir kažkiek apimti fagocitozės, kas sumažina laisvai funkcionuojančių spermijų skaičių.

Spermijų išlikimas esant ir nesant endometriozei. Po dviejų dienų inkubacijos buvo statistiškai patikimai mažiau laisvų spermijų, kai buvo inkubuojama su peritoninių skysčiu iš normalios grupės, palyginus su endometriozės grupe (Kruskal Wallis, p< 0,014). Spermijų išlikimas su ir be lidokaino. Jokiu žalingų efekų į spermijų išlikimą ir statistiškai patikimai jokių žymių skirtumų tarp spermijų inkubacijų su ar be lidokaino po 24 arba 48 valandų nebuvo pastebėta. P-reikšmės, naudojant Wilcoxon’o metodiką, yra parodytos 1 ir 2 lentelėse, atitinkamai.

Spermijų išlikimas su arba be PF (peritoninio skysčio) ir lidokainu, be nerimo dėl diagnozės. Progresyvus judrumas yra sumažinamas daug greičiau be peritoninio skysčio (Fig. 2), palyginus su vienų spermijų inkubacija.

Spermijų išlikimas su ir be PF ir lidokainu, endomertiozės grupėje. Esant peritoniniam skysčiui ir lidokainui, žymiai daugiau yra laisvų spermijų, ypatingai po dviejų dienų inkubacijos endometriozės grupėje (Fig. 1 ir 2 lentelė).

Čia per laiką buvo daugiau negyvų spermijų inkubacijose su lidokainu abiejose diagnozės grupėse (Fig. 5, 2 lentelė).

Hialuronano koncentracijos peritoniniame skystyje neparodė jokių besivystančio uždegiminio proceso indikacijų, t. y. patvirtino, kad visos pacientės yra sveikos.

1 LENTELE: Įvairių parametrų, užregistruotų inkubacijose, P-reikšmės, kai lyginamos inkubacijos su arba be lidokaino. Duomenys - po inkubacijos 24 vai. laikotarpio.

	Spermijai ± lidokainas	Spermijai+PF, normali, ± lidokainas	Spermijai+PF, endometriozė, ± lidokainas	Visos pacientės be nerimo dėl diagnozės ± lidokainas
laisvi, nesulipę su leukocitais		visi laisvi, su ar be lidokaino	0,59	0,27
progresyviai judantys	0,88	0,046 (a)	0,67	0,11
neprogresyviai judantys	0,59	0,59	0,79	0,58
stacionarūs	0,76	0,40	0,31	0,18
nejudantys (negyvi)	0,28	0,14	0,09	0,024 (b)
leukocitų gyvybingumas		0,26	0,29	0,92
spermijai, sulipę su leukocitais		nesulipę su leukocitais bet kurioje grupėje	0,68	0,80

a) progesyviai labiau judantys spermijai inkubacijose su lidokainu 10 b) daugiau negyvų lidokaino grupėje

LENTELE: (vairių parametrų, užregistruotų inkubacijose, P-reikšmės, kai lyginamos inkubacijos su arba be lidokaino. Duomenys - po inkubacijos 48 vai. laikotarpio.

	Spermijai ± lidokainas	Spermijai+PF, normali, ± lidokainas	Spermijai+PF, endometriozė, ± lidokainas	Visos pacientės be nerimo dėl diagnozės ± lidokainas
laisvi, nesulipę su leukocitais		1.0	0,018 (d)	0,0021 (d)
progresyviai judantys	neprogresyviai judantys, su arba be lidokaino	1,00	0,89	0,95
neprogresyviai judantys	0,18	0,025 (c)	0,21	0,021
stacionarūs	0,78	0,26	0,58	0,22
nejudantys (negyvi)	0,50	0,038 (c)	0,003 (c)	0,00025 (c)
leukocitų gyvybingumas		0,78	0,51	0,57
spermijai, sulipę su leukocitais		1,00	0,53	0,63

c) daugiau lidokaine

b) daugiau laisvų lidokaino grupėje

Šis tyrimas įtikinamai parodo lidokaino poveikį spermos išlikimui ir efektą į spermijų peritoninių leukocitų fagocitozę in vitro inkubacijos metu per 5 dienų laikotarpį. Šis tyrimas apima tik vieną spermijų donorą tam, kad būtų išvengta skirtingų imunologinių derinių, kurie eksperimente gali tapti nekontroliuojamais faktoriais. Taip pat šis tyrimas laikėsi spermos išlikimo virš 5 dienų, kai ankstesni tyrimai tetyrė spermos išlikimą 24 valandų periode. Toliau, buvo suskaičiuotas ne tik laisvų nepaveiktų fagocitozę spermijų skaičius, bet taip pat ir kiekis spermijų, rodančių progresyvius ar stacionarius judesius, o taip pat gyvų, negyvų arba laisvų (t. y., nesulipusių su leukocitais) spermijų skaičius.

Šiame tyrime buvo patvirtinti ankstesni atradimai ir kas buvo aprašyta Muscatto et a/.,1982, liečiančių sumažintą vaisingumą pas endometrioze sergančias pacientes dėl spermos fagocitozės. Padidėjusi peritoninių makrofagų fagocitozės apimtis pas pacientes su endometrioze taip pat buvo pademonstruota su fluorescuojančia granule (Samejima T., Masuzaki H., Ishimaru T., Yamabe T., Activity of peritoneal Macrophages in Endometriosis. Asia Oceania J. Obstet. Gynecol, 1989; 15:175-181).

Kitos spermos fagocitozės studijos nesvarsto problemos, susijusios su leukocitų praradimu, kurie sulimpa su vienomis medžiagomis labiau, negu su kitomis (Grinnell et ai., 1972). Makarand et ai., 1985 metais naudojo stiklo konteinerius peritoninio skysčio laikymui. Stiklas turi didžiausią leukocitų adheziją (Grinnell et ak, 1972) ir naudojamas makrofagų atskyrimui (Smedsroed B., Pertoft H., Preparation of pure hepatocytes and reticuloendothelial cells in high yield from a single rat liver by means of Percoll centrifugation and selective adherence, J. Leukocyte Biok, 1985, 38). Muscato et ai. 1989 metais pasirinko polipropileną, kuris yra geresnė alternatyva, negu stiklas dėl ląstelių adhezijos problemos, bet mažiau optimalus už tefloną.

Mažiau negyvų spermijų inkubacijose su lidokainu suradimas per laiko tarpą turi būti traktuojamas kaip sumažintos spermos fagocitozės efektas dėl lidokaino, tuo tarpu, kai vienų spermijų inkubacijose su ar be lidokaino, nerasta jokio žalingo efekto į spermijas. Tai taip pat turi būti paaiškinimu dėl padidėjusio neprogresyviai judančių spermijų suradimo lidokaino inkubacijose (Fig. 3). Progresyvaus judrumo sumažėjimas nesant peritoninio skysčio gali būti indikacija to, kad PF (peritoninis skystis) turi medžiagų, būtinų spermijams palaikyti savo funkciją.

Kaip minėta įžangoje, kiaušintakių fimbrijos yra pastoviai drėkinamos peritoninio skysčio, kuris endometriozę turinčių pacienčių atžvilgiu sumažina kiaušinėlio galimybę pasirinkti (Suginami et ai., 1986). Kaip parodyta šiame ir ankstesniuose darbuose, pacienčių su endometrioze leukocitai peritoniniame skystyje yra labiau pajėgūs fagocitozinančiuose spermijuose (Muscatto et ai., 1982). Taigi, moterys su endometrioze gali turėti du faktorius, prisidedančius prie jų sumažinto vaisingumo. Šis darbas taip pat nustatė lidokaino panaudojimo efekto galimybę tam, kad sumažintų spermijų fagocitozę.

Sumoje, šis darbas pademonstravo spermijų fagocitozės sumažinimą vartojant lidokainą. Šis fenomenas privalo būti ištirtas atsitiktiniais klinikiniais pertubavimo bandymais su fiziologiniu tirpalu arba lidokaino/fiziologinio tirpalo tirpalais prieš ovuliaciją (LH-pakilimo metu).

Kadangi šis išradimas aprašytas sutinkamai su pageidaujama kompozicija ir įgyvendinimais, tai jis turi būti suprantamas, kad tam tikri pakeitimai ir pakitimai gali būti padaryti nepakeičiant išradimo dvasios ir išradimo apibrėžties apimties.

Claims

IŠRADIMO APIBRĖŽTIS

1. Vietinio anestetiko panaudojimas gamyboje vaistų prieš nevaisingumą arba vaisingumui skatinti.
2. Panaudojimas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad vietinį anestetiką parenka iš grupės, susidedančios iš bupivakaino, lidokaino, mepivakaino, prilokaino ir ropivakaino.
3. Farmacinė kompozicija, besiskirianti tuo, kad ji susideda iš farmaciškai efektyvios vietinio anestetiko koncentracijos drauge su farmaciškai priimtinu užpildu.
4. Farmacinė kompozicija pagal 3 punktą, besiskirianti tuo, kad farmaciškai efektyvi koncentracija sudaro mažiausiai 5 ųg/ml.
5. Farmacinė kompozicija pagal 3 punktą, besiskirianti tuo, kad vietinis anestetikas parinktas iš grupės, susidedančios iš bupivakaino, lidokaino, mepivakaino, prilokaino ir ropivakaino.
6. Farmacinė kompozicija pagal 3 punktą, besiskirianti tuo, kad farmaciškai priimtinas užpildas parinktas iš fiziologinio NaCi arba Ringerio tirpalo.
7. Farmacinė kompozicija pagal bet kurį iš 3-6 punktų, besiskirianti tuo, kad ji turi hialuronano.
8. Farmacinė kompozicija, skirta moters vaisingumo skatinimui, b e s i s k i r i a n t i tuo, kad ji turi sudėtį pagal 3 punktą ir yra įterpiama į pilvo ertmę pertubavimo būdu.