DE69830176T2

DE69830176T2 - Arzneimittel gegen infertilität, die mit endometriose assoziiert ist

Info

Publication number: DE69830176T2
Application number: DE69830176T
Authority: DE
Inventors: Greta Edelstam
Original assignee: EDELSTAM Inc; Edelstam Inc Jacksonville
Current assignee: EDELSTAM Inc; Edelstam Inc Jacksonville
Priority date: 1997-02-15
Filing date: 1998-02-09
Publication date: 2006-01-26
Anticipated expiration: 2018-02-10
Also published as: EP1001771A1; HUP0001342A3; KR20000071053A; AU6270398A; EP1001771B1; LV12450B; AU743346B2; JP2000513737A; CA2280685C; IS5152A; NO993921D0; EE9900346A; SK110599A3; CA2280685A1; LT99101A; LT4661B; CN1248915A; ES2245022T3; HUP0001342A2; WO1998035676A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Lidocain für die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung gegen durch Endometriose verursachte Infertilität. Sie betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine pharmazeutisch wirksame Dosis eines Lokalanästhetikums zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Trägerstoff enthält.
Hintergrund der Erfindung
Infertilität oder Subfertilität können ein Problem für die davon betroffenen Personen sein. Eine übliche Behandlung unfruchtbarer Frauen ist die Behandlung durch IVF (In vitro-Fertilisation). Die Basis der IVF-Behandlung ist wie folgt: Stimulierung der Ovulation: Tägliche hormonelle Injektionen, Ultraschalluntersuchungen und Blutproben.
Gewinnung von Oozyten: Vaginal durchgeführte, durch Ultraschall gelenkte Punktierung der Eierstöcke unter lokaler Betäubung.
Präparation von Spermatozoen: Spermienselektion über oben Schwimmen / Absinken oder andere Verfahren zur Selektion der optimalen Population mit der besten progressiven Beweglichkeit.
In vitro-Fertilisation: Inkubation von Oozyten und der selektierten Population von Spermatozoen in einem Zellinkubator. Direkte mikroskopische Prüfung der Zellteilung und Selektion der vitalsten Blastozyste.
Embryotransfer: 2-3 Blastozysten mit der größten Vitalität werden in der Uterushöhle abgelegt, um sich hoffentlich in der Uterusschleimhaut (Endometrium) einzunisten.
Die IVF-Behandlung ist ein kostspieliges Verfahren, das bei einigen Paaren komplizierte psychologische Nebenwirkungen auslöst. Der technische und künstliche Weg bei dem Versuch, schwanger zu werden, hat für das die Behandlung durchmachende Paar Nachteile, die die Beziehung ungünstig beeinflussen können. Nach der gesamten, mühseligen Behandlung besteht nur eine Schwangerschaftsrate von 25-30% und lässt diejenigen, die keinen Erfolg hatten, mit einer beschädigten Beziehung und weiterhin keinem Kind zurück. Die Kosten für die IVF-Behandlung liegen bei etwa 20.000 – 25.000 SEK pro Menstruationszyklus.
Trotz mehrerer vorheriger Untersuchungen sind die Gründe der Infertilität bei Endometriose nicht klar, ebenso wenig wie das Fehlen einer gesteigerten Fertilitätsrate nach der Behandlung. Insbesondere ist die Beziehung zwischen milder Endometriose und Subfertilität in Abwesenheit von Beckenanheftungen unklar (Mahmood, TA, Templeton A., Pathophysiology of mild endometriosis: review of literature. Human Reproduction 1990; 5:765-784).
Es ist eine gesteigerte Anzahl an Leukozyten in der Peritonealflüssigkeit (PF) bei Patientinnen mit peritonealen Endometriumimplantationen gefunden worden, was als andauernde sterile Entzündung bewertet wurde (Haney AF, Muscato JJ, Weinberg JB: Peritoneal fluid cell populations in infertility patients. Fertil Steril 1981, 35:696-698; Edelstam GAB, Lundkvist OE, Venge P, Laurent TC: Hyaluronan and myeloperoxidase in the peritoneal fluid during genital inflammation. Inflammation 1994, 18: 13-21). Die gesteigerte Anzahl an Leukozyten enthält in vivo in Tätigkeit gesetzte Makrophagen, die einen von Makrophagen abgeleiteten Wachstumsfaktor (MDGF) sekretieren, der die Proliferation des Endometriumgewebes erklären könnte (Halme J, White C, Kauma S, Estes J, Haskill S; Peritoneal macrophages from patients with endometriosis release growth factor activity in vitro. J Clin Endocrin and Metabolism. 1988; 66: 1044-49). Andere sekretorische Produkte der Makrophagen, Wachstumsfaktoren, wie etwa TNF und Interferon, zeigen Gametentoxizität und könnten auch eine nachteilige Auswirkung auf den Fertilitätsprozess haben (Halme J: Role of peritoneal inflammation in endometriosis-associated infertility. Ann N Y Acad Sci 1991; 622: 266-74).
Die zellfreie Peritonealflüssigkeit ist außerdem von Bedeutung für die verminderte Fruchtbarkeit, da gezeigt wurde, dass sie die Fähigkeit zur Eiannahme bei den Fimbrien der Eileiter signifikant vermindert (Suginami H, Yano K, Watanbe K, Matsnura S: A factor inhibiting ovum capture by the oviductal fimbriae present in endometriosis peritoneal fluid. Fertil Steril 1986, 46:1140-1146). In der Peritonealflüssigkeit von Patientinnen mit Endometriose bzw. nicht geklärter Unfruchtbarkeit ist eine verminderte Vorwärtsgeschwindigkeit der Spermatozoen festgestellt worden (Makarand K, Oak M, Chantler EN, Vaughan Williams CA, Elstein M: Sperm survival studies in peritoneal fluid from infertile women with endometriosis and unexplained infertility, Clinical reproduction and fertility 1985; 3: 297-303). Noch interessanter ist die gesteigerte Phagozytose von Spermatozoen, die bei Inkubationen für 24 h in vitro für die Peritonealflüssigkeit von Patientinnen mit Endometriose festgestellt wurde (Muscato JJ, Haney AF, Weinberg JB: Sperm phagocytosis by human peritoneal macrophages: a possible cause of infertility in endometriosis. Am J Obstet Gynecol 1982; 144: 503-510). In dieser speziellen Studie gab es jedoch mehrere verschiedene Samenspender, sodass die Beteiligung immunologischer Faktoren nicht ausgeschlossen werden kann.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung ist ein alternatives Verfahren zu der IVF-Behandlung zur Fertilisation von Frauen. Es ist durch in vitro-Studien herausgefunden worden, dass die Phagozytose von Spermatozoen durch Lidocain vermindert wird. Es wird vorgeschlagen, dass dieser Effekt von Lidocain auf der Stabilisierung der Zellmembran beruht, indem die Zunahme der Na⁺-Permeabilität verhindert wird, und wahrscheinlich darauf, dass eine Wechselwirkung mit ATP in der Zellmembran erfolgt. Die Kosten für diese Behandlung werden etwa 10% der IVF-Behandlung betragen, z.B. 2.500 SEK pro Menstruationszyklus. Es gibt keinen technischen Fertilisationsprozess, der psychologische Nebenwirkungen verursachen könnte. Diese Behandlung kann bei Patientinnen mit Endometriose und/oder leichten mechanischen Ursachen der Infertilität verwendet werden. Sie kann durchgeführt werden, während man auf die IVF wartet und beeinträchtigt nicht die Möglichkeit einer späteren erfolgreichen IVF-Behandlung.
Bislang ist keine Behandlung der Infertilität mit Lidocain in der Literatur beschrieben worden. Jedoch sind andere pharmazeutische Wirkungen von Lidocain bekannt, z.B. wie die in der EP 507 160 , die eine äußerliche, Lidocain enthaltende Zubereitung für die Auftragung auf der Haut offenbart, wobei diese Zubereitung eine auf einem Träger angeordnete, den Arzneistoff zurückhaltende Schicht umfasst. Diese Zubereitung soll für die Behandlung von Herpes Zoster-Neuralgie und Postherpes-Neuralgie verwendet werden.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
Wie in den Zeichnungen verwendet, bezieht sich „endometr" auf Endometriose und „end-prob" auf wahrscheinliche Endometriose.
1 ist eine schematische Darstellung, die die Anzahl freier Spermatozoen für jeden Tag der Inkubation zeigt: mit Zellmedium (A, Kontrolle), mit Zellmedium und Lidocain (B), mit Peritonealflüssigkeit (C, Kontrolle) und mit Peritonealflüssigkeit und Lidocain (D).
2 ist eine schematische Darstellung, die die Anzahl der sich vorwärts bewegenden (sich fortbewegenden) Spermatozoen für jeden Tag der Inkubation zeigt: mit Zellmedium (A, Kontrolle), mit Zellmedium und Lidocain (B), mit Peritonealflüssigkeit (C, Kontrolle), mit Peritonealflüssigkeit und Zellmedium und Lidocain (B), mit Peritonealflüssigkeit (C, Kontrolle) und mit Peritonealflüssigkeit und Lidocain (D).
3 ist eine schematische Darstellung, die die Anzahl der sich nicht vorwärts bewegenden, jedoch sich bewegenden Spermatozoen für jeden Tag der Inkubation zeigt: mit Zellmedium (A, Kontrolle), mit Zellmedium und Lidocain (B), mit Peritonealflüssigkeit (C, Kontrolle) und mit Peritonealflüssigkeit und Lidocain (D).
4 ist eine schematische Darstellung, die die Anzahl der lebenden, jedoch stationären Spermatozoen für jeden Tag der Inkubation zeigt: mit Zellmedium (A, Kontrolle), mit Zellmedium und Lidocain (B), mit Peritonealflüssigkeit (C, Kontrolle) und mit Peritonealflüssigkeit und Lidocain (D).
5 ist eine schematische Darstellung, die die Anzahl toter Spermatozoen für jeden Tag der Inkubation zeigt: mit Zellmedium (A, Kontrolle), mit Zellmedium und Lidocain (B), mit Peritonealflüssigkeit (C, Kontrolle) und mit Peritonealflüssigkeit und Lidocain (D).
Detaillierte Beschreibung
Unter Bezugnahme auf die 1-6 geht es um die Verwendung von Lidocain für die Herstellung eines Medikaments zur Anwendung gegen Infertilität. Die Konzentration der Wirksubstanz beträgt mindestens 5 μg/ml. Man kann 100-2000 μg in 1-20 ml verwenden, bevorzugt etwa 118 μg. Die Dosis, die verabreicht wird, beträgt wenigstens 100 μg, insbesondere etwa 1000 μg. Die Zusammensetzung wird vorzugsweise in der Peritonealhöhle appliziert, bevorzugt durch Pertubation. Das Lokalanästhetikum ist Lidocain.
Der Wirkbestandteil kann mit Trägerstoffen gemischt werden, die pharmazeutisch akzeptabel und mit dem Wirkstoff kompatibel sind, und in einer Menge vorliegen, die zur Verwendung bei den hier beschriebenen therapeutischen Verfahren geeignet sind. Zusätzlich, wenn dies gewünscht ist, kann die Zusammensetzung geringere Mengen an Hilfsstoffen, wie etwa Befeuchtungsmittel oder Emulgatoren, pH-Puffermittel und dergleichen enthalten, die die Wirksamkeit des Wirkbestandteils verstärken.
Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann pharmazeutisch akzeptable Salze der vorliegenden Komponenten einschließen. Pharmazeutisch akzeptable Salze beinhalten die sauren Additionssalze, die mit anorganischen Säuren gebildet werden, z.B. Chlorwasserstoffsäure oder Phosphorsäure, oder mit organischen Säuren, wie Essigsäure, Weinsäure und Mandelsäure.
Physiologisch tolerierbare Träger sind in der Technik wohlbekannt. Beispiele für flüssige Träger sind sterile wässrige Lösungen, die keine Materialien zusätzlich zu den Wirkbestandteilen und Wasser enthalten, oder die einen Puffer, wie etwa Natriumphosphat bei physiologischem pH-Wert, physiologische Saline oder beides, wie etwa Phosphatgepufferte Saline, enthalten. Wiederum weiterhin können wässrige Träger mehr als ein Puffersalz enthalten, ebenso Salze, wie etwa Natrium- und Kaliumchlorid, Dextrose, Propylenglykol, Polyethylenglykol und andere gelöste Stoffe.
Die Zusammensetzung kann außerdem Hyaluronan, eine viskose Substanz, enthalten, z.B. in einer Gelform. Hyaluronan bewirkt eine langsame Freisetzung der Wirksubstanz, was bevorzugt ist, da die Empfängnis bis zu 24 Stunden nach dem Eisprung und der Behandlung gemäß der Erfindung erfolgen kann. Ein weiterer Vorteil besteht darin, dass Hyaluronan eine stimulierende Wirkung auf die Spermien hat (Zimmerman ER, Drobnis E, Robertson KR, Nakajima ST, Kim H: Semen preparation with the Sperm Select system versus a washing technique. Fertil Steril 1994; 61: 269-275).
Die Behandlung erfolgt bevorzugt mittels Pertubation. Bevorzugt sind die Schritte wie folgt:
Spontane Ovulation: Primäre Behandlung während des normalen Menstruationszyklus. Stimulierung nur bei Patientinnen ohne Ovulation und primär mit Clomifen (Tabletten), was einfach und kostengünstig ist. Nach der Ovulation wird eine Blutprobe benötigt, um zu bestätigen, dass eine Ovulation während des behandelten Zyklus stattgefunden hat.
Test auf LH (Luteinisierendes Hormon): Der LH-Anstieg wird 24-36 Stunden vor der Ovulation mittels Selbsttest zu Hause anhand einer Urinprobe gemessen.
Pertubation: Wenn der LH-Test positiv ist, wird eine Pertubationsbehandlung verabreicht, z.B. mit 10 ml an 100 μg/ml Lidocain in physiologischer NaCl- oder Ringer-Lösung während einer normalen gynäkologischen Untersuchung. Dabei ist keine Anästhesie erforderlich.
Fertilisation: Keine künstliche Behandlung. Das Paar wird auf normalem Wege mittels Geschlechtsverkehr zu Hause versuchen, eine Schwangerschaft zu erreichen, nachdem die Pertubationsbehandlung verabreicht wurde.
Das Fehlen nachteiliger Wirkungen auf die aufgefundene Überlebensrate des Spermas zeigt, dass die Spermatozoen durch Lidocain nicht beeinträchtigt werden, was auch in anderen Studien gezeigt wurde (Bennett SJ, Bolton V, Parsons J: The effects of lidocaine on human sperm motility. J Assisted Reprod. & Genetics 1992; 9: 271-3). Dies scheint auch für die Oozyten der Fall zu sein, da hohe Spiegel an Lidocain ohne irgendwelche Probleme hinsichtlich der Fertilisation oder der Embryoentwicklung gemessen wurden (Baily-Pridham DD, Cook CL, Reshef E, Hurst HE, Drury K, Yussman MA: Follicular fluid lidocain levels during transvaginal oocyte retrieval. Fertil Steril 1990; 53: 171-173). Die höchsten Spiegel betrugen 118 μg/ml, was bedeutet, dass die Dosis von 1000 μg Lidocain, die bei den in vitro-Inkubationen verabreicht wurde, eine Verwendung in verdünnter Form erlauben sollte, z.B. mit 100 μg/ml in 10 ml isotonischer Flüssigkeit. Diese Konzentration wird nun für eine klinische Studie des Schwangerschaftsergebnisses nach der Pertubation verwendet, die 24 Stunden vor der Ovulation zur Steigerung der Überlebensrate des Spermas durchgeführt wurde.
Lidocain ist für viele Jahre ohne irgendwelche Berichte über Nebenwirkungen während der Schwangerschaft verwendet worden, wie es ebenfalls in Tierversuchsstudien gezeigt wurde (Ramazotto J, Curro FA, Paterson JA, Tanner P, Coleman M: Toxicological Assessment of Lidocaine in the Pregnant Rat. J Dent Res 1985; 64: 1214-1218). Daher sollte dessen Verwendung für die Behandlung der Infertilität bei Endometriose-Patientinnen möglich sein.
Die Erfindung wird durch das folgende Beispiel veranschaulicht. Alle verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe sollen, solange nicht anders definiert, dieselbe Bedeutung haben, mit der sie für gewöhnlich vom Durchschnittsfachmann verstanden werden. Die hier verwendeten Techniken sind solche, die dem Durchschnittsfachmann bekannt sind, solange nichts anderes vermerkt ist.
Beispiel 1 – Verminderung der Phagozytose von Spermatozoen in der PF (Peritonealflüssigkeit) von Frauen mit Endometriose.
Diese Studie wurde unternommen, um die Rolle der Leukozyten bei der verminderten Fertilität bei Endometriose weiter zu analysieren, und auch, um nach einem potentiellen therapeutischen Ansatz zu suchen. Um immunologische Einflüsse auszuschließen, nahm nur ein Samenspender an den Experimenten teil. Vorbereitete Spermaproben wurden mit nicht zentrifugierter Peritonealflüssigkeit von gesunden Frauen und von Frauen mit Endometriose inkubiert, um die Bedeutung der Phagozytose von Spermatozoen auf die verminderte Fertilität bei Endometriose zu bewerten. Die Anzahl lebensfähiger Spermatozoen in den Inkubationen wurde täglich für fünf Tage mit oder ohne die Anwesenheit von Lokalanästhetika gezählt; die Lokalanästhetika wurden bei der Suche nach einem Verfahren zugegeben, um die Aktivität der peritonealen Leukozyten-Populationen zu verringern.
Materialien und Methoden
Patienten
Frauen: Die Patientinnen wurden in drei verschiedene Gruppen eingeteilt. Die Kontrollgruppe (n=9, Durchschnittsalter = 38,5 Jahre) bestand aus Frauen, die eine laparoskopische Sterilisierung durchliefen oder aus Frauen mit unklaren Unterleibsschmerzen. Die Kontrollfälle wiesen laparoskopische Befunde auf, die als normal eingeschätzt wurden, mit anatomisch normalem Uterus und Eileitern.
Die Studiengruppe bestand aus Frauen, die sich einer Laparoskopie unterzogen, um die Ursache der Infertilität oder abdominaler Schmerzen zu finden und wo die Diagnose auf Endometriose lautete (n=11, Durchschnittsalter = 34,5 Jahre). In dieser Gruppe erfolgte die Diagnose bei 8 Patientinnen laparoskopisch und bei 3 Patientinnen anamnetisch mit wahrscheinlicher Endometriose, wobei sich jedoch bei letzteren noch keinerlei endometriotische Implantationen entwickelt hatten, die bei der Laparoskopie sichtbar waren.
Männer: Der Samenspender war ein gesunder 38 Jahre alter Mann mit normaler Fruchtbarkeit mit einer Zeitspanne der Enthaltsamkeit von 2-3 Tagen vor jeder Samenspende. Die Spermaproben wurden mittels der „Oben-Schwimm-Technik" vorbereitet, um die optimale Population auszuwählen (Russel LD, Rogers BJ: Improvement in the quality and fertilisation potential of a human sperm population using the rise technique. J Androl 1987; 8:25).
Proben von bei der Laparoskopie gesammelter Peritonealflüssigkeit
Nachdem die Patientinnen betäubt worden waren, wurden Blutproben für die nachfolgende Analyse von Hyaluronan entnommen, das in der PF als Marker einer anhaltenden Entzündung verwendet werden kann, um eine PID (entzündliche Beckenerkrankung) auszuschließen. Zu Beginn der Laparoskopie und bei sicherer Positionierung der Instrumente in der Bauchhöhe wurde die gesamte zu gewinnende Peritonealflüssigkeit im Douglas'schen Raum durch eine Saugeinheit über einen Teflon-Katheter (Durchmesser 1,7 mm, Optinova, Godby, Finnland) abgesogen und mit 10 IU Heparin/ml (Olive DL, Weinberg JB, Haney AF: Peritoneal macrophages and infertility: the association between cell number and pelvic pathology; Fertil Steril 1985; 44: 772-777) in einer Teflonflasche (Nalgene, Brochester, NY, USA) gemischt und sofort weiterversorgt. Die Menge an Peritonealflüssigkeit wurde durch Auswiegen auf einer elektrischen Waage bestimmt. Teflon war aufgrund seiner geringen Anhaftung an Sängerzellen (Grinnell F, Milam M, Srere PA: Studies on cell adhesion; Arch Biochem Biophys 1972; 153:193-198) das Material der Wahl zum Auffangen der Peritonealflüssigkeit. Heparin wurde als Antikoagulans verwendet, um die Leukozyten von der Aggregation abzuhalten (Makarand et al., 1985). Zuvor ist Citrat verwendet worden (Edelstam et al., 1994), was bei der Spermieninkubation negative Auswirkungen auf die Lebensfähigkeit der Spermien hatte. Alle Proben wurden nach Zustimmung der Patienten entnommen und die Prozedur der Probengewinnung/Probenbehandlung wurde durch das Ethik-Komitee der Fakultät für Medizin, Uppsala University, Schweden, zugelassen.
Inkubationen von Spermatozoen und Peritonealflüssigkeit
Es wurden für alle Inkubationen Teflon-Phiolen verwendet, und die Inkubationen erfolgten wie folgt in einem feuchten Zellinkubator:

a) Zellmedium (1 ml), Spermatozoen (10⁶ in 1 ml Zellmedium) und 0,1 ml NaCl.
b) Zellmedium (1 ml), Spermatozoen (10⁶ in 1 ml Zellmedium) und 0,1 ml Lidocain 10 mg/ml (Xylocain^®, ASTRA).
c) Spermatozoen (10⁶ in 1 ml Zellmedium), Peritonealflüssigkeit (1 ml) und 0,1 ml NaCl.
d) Spermatozoen (10⁶ in 1 ml Zellmedium), 0,1 ml Lidocain (10 mg/ml) und Peritonealflüssigkeit (1 ml). (Earl's Zellmedium (Sigma) mit 0,35% BSA (Rinderserum-Albumin))

Die verbleibende Menge an Peritonealflüssigkeit wurde zentrifugiert und der Überstand für die nachfolgenden Analysen von Hyaluronan (Edelstam et al., 1994) eingefroren (–20°C).
Die Phiolen wurden täglich über fünf Tage analysiert und es wurde das Folgende in allen A-D-Inkubationen mit bis zu 100 Spermatozoen gezählt:

– Anzahl der freien Spermatozoen, die nicht an Leukozyten angeheftet sind
– Anzahl der Spermatozoen mit vorwärtsgerichteter Motilität
– Anzahl der Spermatozoen mit nicht vorwärtsgerichteter Bewegung
– Anzahl der Spermatozoen, die stationär und lebendig sind
– Anzahl der toten Spermatozoen

Ebenso wurde der Prozentwert der lebensfähigen peritonealen Leukozyten täglich unter Verwendung von Trypan-Blau notiert.
Ergebnisse
Die wesentliche Erkenntnis bestand darin, dass es in den Phiolen, in denen die Inkubation mit Peritonealflüssigkeit und Lidocain erfolgte, statistisch signifikant weniger phagozytierte Spermatozoen gab (p < 0,02). Die Beobachtung zeigte Spermatozoen, die in großen Zusammenballungen von Leukozyten eingefangen waren, wobei einige offensichtlich phagozytiert wurden, wodurch somit die Anzahl der freien, funktionierenden Spermatozoen verringert wurde.
Überleben der Spermien mit und ohne Endometriose
Nach zwei Tagen der Inkubation gab es statistisch signifikant mehr freie Spermatozoen bei den Inkubationen mit der Peritonealflüssigkeit der normalen Gruppe im Vergleich zu der Gruppe mit Endometriose (Kruskal Wallis p<0,014).
Überleben der Spermien mit und ohne Lidocain
Es fanden sich keine nachteiligen Effekte auf das Überleben der Spermien, und es gab statistisch keine signifikanten Unterschiede zwischen den Inkubationen der Spermatozoen mit oder ohne Lidocain nach 24 oder 48 Stunden. Die p-Werte unter Anwendung von Wilcoxon sind in der Tabelle I bzw. II dargestellt.
Überleben der Spermien mit und ohne PF (Peritonealflüssigkeit) und Lidocain, kein diagnostischer Befund
Die progressive Motilität verringert sich ohne die Anwesenheit von Peritonealflüssigkeit schneller (2) als dies im Vergleich zu der Inkubation der Spermatozoen alleine der Fall ist.
Überleben der Spermien mit und ohne PF und Lidocain bei der Endometriose-Gruppe
In Anwesenheit von Peritonealflüssigkeit und Lidocain gab es signifikant mehr freie Spermatozoen, insbesondere nach den zweitägigen Inkubationen bei der Endometriose-Gruppe. 1 und Tabelle II.
Bei beiden Diagnosegruppen gab es im Laufe der Zeit mehr tote Spermatozoen bei den Inkubationen mit Lidocain. 5, Tabelle II.
Die Hyaluronan-Konzentrationen in der Peritonealflüssigkeit zeigten keine Anzeichen anhaltender Entzündungsprozesse, d.h. dies bestätigte, dass alle Patienten diesbezüglich gesund waren.
Tabelle I: P-Werte für die verschiedenen, bei den Inkubationen festgestellten Parameter bei Vergleich der Inkubation mit oder ohne Lidocain. Daten nach 24 Stunden Inkubationszeit.
Tabelle II: P-Werte für die verschiedenen, bei den Inkubationen festgestellten Parameter bei Vergleich der Inkubation mit oder ohne Lidocain. Daten nach 48 Stunden Inkubationszeit.
Diese Untersuchung analysiert die Wirkung von Lidocain auf das Überleben der Spermien, sowie die Wirkung auf die peritoneale Leukozyten-Phagozytose von Spermatozoen in vitro während einer Inkubation für fünf Tage. In diese Studie wurde nur ein Spender von Spermatozoen einbezogen, um verschiedene immunologische Kombinationen zu vermeiden, die einen unkontrollierten Faktor in den Versuchen dargestellt hätten. Weiterhin verfolgt diese Studie das Überleben der Spermien für bis zu 5 Tage, wogegen vorherige Studien das Überleben der Spermien während einer Zeitspanne von 24 Stunden untersucht haben. Weiterhin wurde nicht nur die Anzahl freier, nicht phagozytierter Spermatozoen gezählt, sondern auch, wie viele eine vorwärtsgerichtete oder eine stationäre Bewegung zeigten, sowie die Anzahl lebender, toter oder freier (d.h. nicht an Leukozyten anhaftender) Spermatozoen.
Bei dieser Untersuchung wurde die zuvor gemachte Beobachtung von Muscato et al. 1982 hinsichtlich der verminderten Fruchtbarkeit von Endometriose-Patientinnen infolge von Spermien-Phagozytose bestätigt. Eine gesteigerte Phagozytose-Kapazität der peritonealen Makrophagen von Patientinnen mit Endometriose ist auch mit fluoreszierenden Beads gezeigt worden (Samejima T, Masuzaki H, Ishimaru T, Yamabe T: Activity of Peritoneal Macrophages in Endometriosis. Asia Oceania J Obstet Gynaecol 1989, 15: 175-181).
Andere Studien der Spermien-Phagozytose haben das Problem des Verlustes von Leukozyten, die sich an einige Materialien stärker anheften als an andere (Grinnell et al. 1972), nicht berücksichtigt. Makarand et al. 1985 verwendeten einen Glasbehälter zur Lagerung der Peritonealflüssigkeit. Glas besitzt die höchste Adhäsion von Leukozyten (Grinnell et al. 1972) und ist zur Auftrennung von Makrophagen verwendet worden (Smedsroed B, Pertoft H: Preparation of pure hepatocytes and reticuloendothelial cells in high yield from a single rat liver by means of Percoll centrifugation and selective adherence. J. Leucocyte Biol. 1985; 38). Muscato et al. 1989 wählten Polypropylen, das hinsichtlich des Problems mit der Zelladhäsion eine bessere Alternative als Glas, jedoch weniger optimal als Teflon ist.
Der Befund einer größeren Anzahl toter Spermatozoen bei den Inkubationen mit Lidocain über die Zeit muss als ein Effekt der reduzierten Spermien-Phagozytose in Gegenwart von Lidocain gewertet werden, da bei den Inkubationen der Spermatozoen alleine mit oder ohne Lidocain keine nachteiligen Wirkungen auf die Spermatozoen gefunden wurden. Dies muss auch die Erklärung für den Befund vermehrter sich nicht vorwärts bewegender Spermatozoen bei den Lidocain-Inkubationen sein (3). Die Verringerung der vorwärtsgerichteten Motilität bei Abwesenheit von Peritonealflüssigkeit könnte darauf hindeuten, dass die PF (Peritonealflüssigkeit) Substanzen enthält, die notwendig dafür sind, dass die Spermatozoen ihre Funktion aufrechterhalten.
Wie in der Einleitung erwähnt, werden die Fimbrien der Eileiter konstant von der Peritonealflüssigkeit benetzt, was im Falle von Patientinnen mit Endometriose die Befähigung zur Entgegennahme des Eis vermindert (Suginami et al., 1986). Wie in dieser und in vorherigen Studien gezeigt, sind die Leukozyten in der Peritonealflüssigkeit von Patientinnen mit Endometriose wirkungsvoller dabei, Spermatozoen zu phagozytieren (Muscato et al., 1982). Somit kann es bei Frauen mit Endometriose zwei Faktoren geben, die zu deren verringerter Fruchtbarkeit beitragen. Diese Studie hat auch die Möglichkeit angezeigt, die Wirkung von Lidocain zu nutzen, um die Phagozytose von Spermatozoen zu verringern.
Zusammengefasst hat diese Studie eine verminderte Phagozytose von Spermatozoen in Gegenwart von Lidocain gezeigt. Dieses Phänomen muss mit im Zufallsverfahren durchgeführten klinischen Testreihen von vor der Ovulation (zur Zeit des LH-Anstiegs) stattfindenden Pertubationen mit Saline oder Lidocain/Saline-Lösungen verfolgt werden.

Claims

Verwendung einer Zusammensetzung umfassend Lidocain zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch akzeptablen Exzipienten zur Herstellung eines Medikaments, das zur Behandlung und/oder Vorbeugung von durch Endometriose verursachten Infertilitätsleiden von Frauen bestimmt ist.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration an Lidocain zumindest 5 μg/ml ist.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das pharmazeutisch akzeptable Exzipient aus physiologischer NaCl- oder Ringer-Lösung besteht.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung Hyaluronan enthält.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung präpariert wird, um durch Insertion, bevorzugt Pertubation in die Peritonealhöhle verabreicht zu werden.