KR900003094B1

KR900003094B1 - 리포좀 내에 효율적으로 혼입된 소수성 시스-백금착물

Info

Publication number: KR900003094B1
Application number: KR1019870700524A
Authority: KR
Inventors: 알. 코카르 압둘; 로페즈-베레스타인 가브리엘; 페레즈-솔러 로맨
Original assignee: 보오드 오브 리젠트, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템; 한스 마르크
Priority date: 1985-10-18
Filing date: 1986-10-17
Publication date: 1990-05-07
Also published as: FI85492C; KR870700631A; DK307787D0; FI85492B; US5178876A; ATE77384T1; US5186940A; CA1312616C; FI872646A0; DK307787A; IL80349A; US5041581A; IL80349A0; EP0248036B1; DE3685751T2; DE3685751D1; EP0248036A1; WO1987002364A1; FI872646L

Abstract

내용 없음.

Description

리포좀 내에 효율적으로 혼입된 소수성 시스-백금착물

본 발명은 신규하게 합성된 소수성 백금착물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 종양억제 화학요법에 있어서 상기의 신규한 예비-합성된 착물을 혼입시키는 리포좀의 용도에 관한 것이다.

시스-백금(CDDP)은 인체에서 발견되는 여러가지 종양질환(neoplastic disease)을 치료하는데 매우 효과적인 약제이다[참고 : 로에러(Loehrer)등 (1984) Ann.Int.Med.V 100, pp 704 내지 713]. 그러나 이의 용도는 심각한 전신 독성, 특히 독신성 및 신경독에 의해 제한된다[참조 : 즈웰링(zwelling)등의 백금착물, In : Pharmacologic principles of Cancer treatment(1982) Ed by B.A.Chabner, Saunders, Philadelphia, PA]. CDDP의 치료계수를 변화시키려는 시도로서, 지난 10년동안 신규한 유도체들을 합성해왔다. 그러나, 몇가지 유망한 동족체의 개발은 임상용도로서의 가능성을 감소시키는 이들의 낮은 수-용해도에 의해 방해받아왔다[참조 : 벌채날(Burchenal) 등 (1979) Cancer Treat.Rep. V. 63, pp 1493-1497].

리포좀은 무수 지질막에 수용액을 첨가함으로써 자발적으로 형성될 수 있는 지질낭이다[참조 : 메이휴 등, In : Liposomes(1983) Ed by Marc J.Ostro, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.]. 리포좀은 각각 소수성 또는 친수성 구간내에 주입된 소수성 또는 친수성 약제의 담체로서 사용할 수 있다. 다박막층 리포좀은 소수성 구간이 친수성 구간보다 더 크기 때문에 소수성 약제를 운반하기에 특히 적합한 다층지질낭(MVL)이다. MLV를 동물 및 사람에게 정맥내 주사(iv)할 경우, MLV는 망내계(RES)세포가 풍부한 간, 지라 및 기타 기관내에서 농축된다[참조 : 카시(Kasi) 등 (1984) Int.J.Nucl.Med.Biol.V 11 pp 35-37, 로페즈-베레스타인(Lopez-Berestein)등, (1) (1984) Cancer Drug Deliv.V 1, pp 199-205; 로페즈-베레스타인 등, (2) (1984) Cancer Res, V 44, pp 375-378].

리포좀은 화학요법제, 면역조절인자 및 항진균제를 시험관내 및 동물 및 사람의 생체내에 전달하기 위해 시험관 내에서 이미 사용되어 왔다[참조 : 메이휴 등, Liposomes(1983), Ed by Ostro, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.; 메타(Mehta)등 (1984), Immunology V 51 pp 517-527; 로페즈-베레스타인 등 (4) (1984) Clin Exp Metastasis V 2, pp 127-137; 로페즈-베레스타인 등(1983), J Inf Dis V 147, pp 937-945 및 로페즈-베레스타인 등 (1985) J.Inf.Dis, V 151 pp 704-710].

최근의 연구는 리포좀이 특정 형태의 약제-관련된 독성(예 : 독소루비신 심장독성 및 CDDP 신독성을 감소시킬 수 있으며, 종양세포에 의한 다량의 약제 흡수와 같은 서방형 메카니즘 또는 보다 선택적인 기관 분포로 인해 종양 억제 활성을 증가시킬 수 있다는 것을 나타내고 있다[참조 : 포르센(Forssen)등 (1981) Proc.Natl.Acad.Sci.V 78 pp 1873-1877; 올센(Olsen)등 (1982), Eur.J.Cancer Clin.Oncol.V 18 pp 167-176; 가비존(Gabizon)등 (1982) Cancer Res.V 42 pp 4734-4739; 헤르만(Herman)등 (1983) CancerRes.V43pp5427-5432; 프라이세(Freise)등 (1982) Arch.Int.Pharmacodynamie Therapie V 258 pp 180-192; 매이휴 등(1978) Ann.N.Y.Acad.Sci.V 308, pp 371-386; 파텔(Patel)등 (1984) Int.J.Cancer V 34 pp 717-723; 가비존 등(1983) Cancer Res.V 43, pp 4730-4735; 및 매이휴 등(1983), Cancer Drug Deliv. V 1 pp 43-58]. 미합중국 특허 제4,330,534호에서는, 예를들어 리포좀내에 혼입된 N⁴-아실시토신 아라비노사이드를 종양을 가지는 동물에게 투여할 경우에, 효과적으로 치료되는 것으로 밝혀졌다. 이러한 유망한 결과에도 불구하고, 리포좀내에 혼입된 종양 억제제는 주로 제형화, 약제 안정성 및 대규모 생산문제로 인해 임상용으로서의 용도가 제한되고 있다.

CDDP는 매우 낮은 캡슐화 효능(7.4%) 및 낮은 안정성(0.9% NaCl용액내에서 48시간 후에 75%)에도 불구하고 이미 MLV내에 캡슐화된 바 있다[참조 : 프라이세 등(1982) Arch.Int.Pharmacodynamie Therapie V 258 pp 180-192].

미합중국 특허 제4,256,636호에는 1,2-아미노사이클로헥산(DACH)의 분해된 입체이성체를 함유하는 특정한 백금 화합물에 대해 기술되어 있다. 사용된 이성체는 시스-DACH, 트랜스-RR-DACH 및 트랜스-SS-DACH이다. 본원에 기술된 백금 화합물은 분해된 DACH 이성체 뿐만 아니라 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 브로모아세테이트, 설페이트 또는 글루쿠로네이트와 같은 2개의 친수성 백금 리간드를 함유한다. 트랜스-RR-DACH를 함유하는 백금 화합물은 시스-DACH를 백금 화합물보다 치료학적으로 더 유용한 것으로 흔히 기술된다.

유럽 특허원 제83306726.7호에는, 디아미노 사이클로헥산(비입체화학적으로 분해됨)을 함유할 수 있으며 지방산 치환체를 가진 포스파티딜 그룹을 함유하는 특정한 백금 화합물에 대해 기술되어 있다. 이러한 화합물은 혈장내에서 대부분 불용성인 것으로 기술되어 있으며, 지질낭 담체와 함께 사용하는 것이 바람직하다. 백금 화합물-인지질낭은 단일 박막층낭을 특징적으로 제공하는 음파진동법에 의해 제조하는 것이 바람직하다.

본 발명은 하기 일반식의 백금(II) 4-배위 착물을 특징으로 한다:

상기식에서, R₁및 R₂는 각각 소수성 라디칼 작용기를 포함하는 카복실레이트, 가장 바람직하게는 네오데실이거나, 함께 결합하는 경우, 소수성 라디칼 작용기를 포함하는 디카복실레이토이고, R₃및 R₄는 각각 일반식

의 그룹이며, R₅는 수소, 이소프로필, 아릴, 아르알킬, 알케닐과 같은 탄소수 2 내지 6의 알킬, 사이클로헥실, 사이클로알케닐 및 이의 혼합물과 같은 사이클로알킬로 이루어진 그룹중에서 선택되고, R₅는 바람직하게는 수소, 탄소수 1 내지 20(보다 바람직하게는 6 내지 12, 가장 바람직하게는 2 내지 6)의 알킬 또는 탄소수 3 내지 12의 사이클로알킬이다.

또한, R₃및 R₄는 함께 결합하여 단일 작용기로 작용할 수 있다. R₃및 R₄가 함께 결합하는 경우, 탄소수 약 3 내지 7의 사이클로알킬-1,2-디아미노 그룹 및 약 2 내지 12(바람직하게는, 에틸을 함유하는)알킬-1,2-디아미노로 이루어진 그룹중에서 선택하는 것이 바람직하다. 바람직한 사이클로알킬-1,2-디아미노성분은 1,2-디아미노사이클로헥산이고, 바람직하게는 트랜스-R,R-또는 트랜스 S,S-형태이다.

상술한 착물에 있어서, R₁및 R₂의 카복실레이토는 바람직하게는 탄소수 약 5 내지 20의 알킬카복실레이토, 아릴카복실레이토이며, 여기서 아릴은 페닐, 나프틸 또는 알킬페닐이고 알킬페닐의 탄소수는 약 12 내지 16이다.

착물이 디카복실레이토로서 R₁및 R₂를 함유하는 경우, 디카복실레이토는 바람직하게는 탄소수 약 5 내지 20의 알킬디카복실레이토 또는 아릴디카복실레이토이고, 여기서 아릴은 나프틸, 페닐 또는 알킬페닐이며 알킬페닐의 알킬의 탄소수는 약 6 내지 12이다. 상기 설명에서 사용된 것으로서, 아릴이란 용어는 바람직하게는 탄소수 약 6 내지 14의 작용기로서 정의된다. 이와 유사하게 알케닐이란 용어는 바람직하게는 탄소수 약 5 내지 20의 작용기이다.

본원에서 언급한 사이클로알킬은 바람직하게는 탄소수 약 3 내지 12의 작용기이다. 상기에서 사용된 사이클로알케닐이란 용어는 바람직하게는 탄소수 약 5 내지 20의 작용기이다.

상기에서 사용된 아르알킬이란 용어는 바람직하게는 탄소수 약 7 내지 20의 작용기이며 결합된 아릴 및 알킬부위를 함유한다. 아릴부위의 탄소수는 바람직하게는 약 6 내지 10이며 알킬부위의 탄소수는 바람직하게는 약 1 내지 10이다. R₃및 R₄가 함께 결합하는 경우, 바람직하게는 탄소수 약 3 내지 20의 사이클로알킬-1,2-디아미노이다. 사이클로알킬의 알킬환의 탄소수는 바람직하게는 약 3 내지 12이다.

하기 일반식을 갖는 백금(II) 4-배위착물과 관련된 본 발명의 또 다른 양태는 함께 결합된 R₁및 R₂가 하기 일반식의 디카복실레이토, 바람직하게는 시스-디카복실레이토인 경우에 관한 것이다;

상기식에서, R₆은 탄소수 약 10 내지 20의 알킬, 바람직하게는 펜틸, 네오펜틸, 데실 또는 네오데실이고; R₇및 R₈은 각각 수소 또는 탄소수 약 1 내지 5의 알킬이다.

상술한 R₃및 R₄는 각각 하기와 같다:

R₃및 R₄가 함께 결합하는 경우, 이들은 탄소수 약 3 내지 7의 사이클로알킬-1,2-디아미노 및 탄소수 약 2 내지 12의 알킬-1,2-디아미노로 이루어진 그룹중에서 선택된다. 사이클로알킬-1,2-디아미노는 바람직하게는 1,2-디아미노사이클로헥산이고, 보다 바람직하게는 트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산이고, 보다 바람직하게는 트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산이고, 보다 바람직하게는 트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산 또는 트랜스-S,S-1,2-디아미노사이클로헥산이다. 이 착물은 상술한 바와같이, 메탄올 또는 클로로포름중에 거의 용해되며 물에는 거의 불용성이다.

본 발명의 중요한 양태는 인지질, 임의의 콜레스테롤, 및 상술한 4-배위 백금착물과 같은 지방성 물질을 포함하는 리포좀 뿐만 아니라 이들 리포좀의 제조방법 및 용도를 포함한다. 본 발명의 리포좀은 백금착물 및 인지질을 바람직하게는 약 1:10 및 약 1:30, 보다 바람직하게는 1:15의 비율로 함유한다.

이러한 리포좀의 바람직한 인지질은 포소파티딜 글리세롤, 포스파티딜콜린, 스핑고마이엘린, 포스파티드산 또는 포스파티딜세린, 보다 바람직하게는 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 가장 바람직한 포스파티딜글리세롤은 필수적으로 디미리스토일포스파티딜글리세롤로 이루어진 것이며, 가장 바람직한 포스파티딜콜린은 필수적으로 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어진 것이다. 본 발명의 리포좀이 디미리스토일포스파티딜글리세롤 및 디미리스토일포스파티딜콜린을 함유하는 경우, 이들은 바람직하게는 약 1:10 내지 10:1 보다 바람직하게는 약 3:7의 비율로 존재한다.

본 발명의 리포좀은 다박막층, 또는 단일 박막층일 수 있으며, 또한 정의되지 않은 박막층 구조를 가질 수도 있다. 리포좀 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물은 암과 같은 질병을 치료하기 위해 사용할 수 있다.

본 발명의 핵심에는 백금(II) 4-배위착물의 존재에 민감한 종양세포에 의해 고통받는 숙주동물을 치료하는 방법이 포함된다. 이 방법은 상술한 다량의 백금(II) 4-배위착물 또는 인지질 및 종양세포를 억제시키는 유효량의 상기 백금착물을 포함하는 본 발명의 리포좀을 숙주에 투여하는 것이다.

투여단계는 바람직하게는 비경구적으로, 정맥내, 동맥내, 근육내, 림프내, 복강내, 피하내, 흉막내 또는 척추강내 주사에 의하거나 국소투여 또는 경구투여에 의한다. 상기 투여는 바람직하게는 예를들어 2주동안 매일 2회씩 일정하게 반복수행한다. 종양이 감소하거나 없어질때까지 치료를 계속할 수 있으며, 다른 시약을 사용하는 외과수술 또는 화학요법과 같은 기타 형태의 종양치료와 함께 사용할 수 있다.

이들 종양 억제방법은 또한 세망육종(reticulosarcoma)과 같은 종양의 전이성 번식을 억제하기 위해 사용할 수 있다. 백금(II)착물 또는 이러한 착물을 포함하는 리포좀을 사용하는 예방선처리는 예방접종과 같은 방법으로 전이성 번식을 방지하기 위해 사용할 수 있다.

백금(II) 4-배위착물을 라세믹(분해안됨) DACH, 트랜스-RR-DACH 또는 트랜스-SS-DACH를 사용하여 제조한다. 트랜스-RR-DACH 또는 트랜스-SS-DACH 및 사이클로펜텐카복실레이토와 같은 2개의 소수성 리간드를 포함하는 백금착물은 라세믹 PACH를 포함하는 유리착물보다 더 효율적으로 리포좀내에 혼입되는 것으로 밝혀졌다.

이러한 백금착물을 혼입시킨 리포좀은 수성매질내에서 안정하며, 신독성이 없고, 쥐 백혈병(murine leukemia) L-1210에 대해 활성인 것으로 밝혀졌다.

일반적으로, 본 발명의 사각-평면 백금(II) 4배위착물은 하기 일반식의 화합물이다.

여기에서 R₁및 R₂는 바람직하게는 소수성 라디칼 작용기를 함유하는 카복실레이토 1가 음이온이다. R₁및 R₂는 또한 단일 카복실레이토 2가 음이온일 수도 있으며, 이때 카복실레이토 그룹은 라디칼 작용기에 결합된 가교원자에 결합된다.

또한, R₃은 비시날 디아미노알칸 또는 비시날 디아미노사이클로알칸이다. R₂은 2개의 독립적인 알킬아민, 사이클로알킬아민 또는 암모니아일 수 있을 것이로 주지된다. 이러한 성분은 대기온도하에 메탄올 또는 클로로포름내에서 착물을 대부분 용해(일반적으로 약 5.0mg/ml 이상)시키며, 대기온도하에 수용액내에서 착물을 거의 용해시키지 못한다(약 0.5mg/ml 미만).

소수성 라디칼 작용기, 카복실 그룹 또는 중간체 또는 가교그룹으로부터 공유 측위된 작용기는 알킬, 치환된 아릴, 아릴, 알케닐, 사이클로알킬 또는 사이클로알케닐 그룹, 또는 이러한 작용기들(예 : 다수의 가능한 소수성 혼합물중 단지 두개만을 지정할 경우, 알킬아릴 또는 아릴알케닐)의 혼합물일 수 있다. 소수성 라디칼 작용기의 탄소수는 특징적으로 5 내지 20이다. 이 소수성 라디칼 작용기가 알킬 또는 알케닐 그룹을 함유하는 경우, 이 그룹은 직쇄 또는 측쇄일 수도 있다. 예를들어, 소수성 라디칼상에서 치환된 하이드록실 그룹과 같은 극성 작용기는 이의 소수성을 감소시키려는 경향이 있으며 이 소수성 라디칼을 본 발명의 목적에 유용하지 못하게 만들수도 있다.

특정한 경우에 있어서, 예를들어 두개의 아세테이트 또는 프로피오네이트 작용기가 질소원자에 의해 함께 결합될 경우 R₁및 R₂작용기는 가교될 수 있다. 이러한 경우, R₁및 R₂작용기는 단일 카복실레이토 2가 음이온이다. 예를들어, n-데칸과 같이 탄소수 6 내지 20의 알킬 소수성 작용기는 가교질소에 결합될 수 있으며 생성되는 화합물은 본 발명의 백금(II) 4배위착물의 제조에 사용될 수 있다.

카복실레이토 1가 음이온 상에 존재하는 특정한 소수성 라디칼 작용기(예 : 사이클로펜탄)를 사용하여 PT 착물을 인지질 리포좀내에 효율적으로 혼입시키는 것은 R₃작용기의 특성에 의존한다는 것이 밝혀졌다. 예를들어 R₃이 1,2-디아미노 사이클로헥산(DACH)인 경우, 아미노 그룹은 다수의 비교적 입체화학적인 배열, 시스, 트랜스-RR 및 트랜스-SS(이들의 혼합물을 "라세믹"이라 지칭함)일수 있다. 사이클로펜텐 라디칼 작용기(R₁및 R₂) 및 다양한 입체화학적 형태의 DACH를 함유하는 백금(II) 착물을 사용하여 트랜스-RR-DACH 및 트랜스-SS-DACH 착물을 유사한 라세믹 DACH착물보다 더 효율적으로 인지질 리포좀(낭은 리포좀에 상응하는 용어임)내에 혼입시킬 수 있음이 밝혀졌다.

소수성 라디칼 작용기가 네오데카노에이토(실험식 C₁₀H₂₀O₂)에서와 같이 탄소수 9의 측쇄 알킬일 경우, 라세믹 DACH 또는 트랜스-RR-DACH를 포함하는 백금(II) 착물의 혼입효율은 최대(100%)이다. 따라서, 탄소수 약 6 내지 약 12의 직쇄 또는 측쇄 알킬 라디칼 작용기는 DACH-함유 Pt(II) 착물에 효과적인 인지질 리포좀 혼입 특성을 제공한다. 상기한 백금(II) 착물을 함유하는 리포좀은 천연 또는 합성 인지질을 포함하는 다양한 양극성 물질로부터 제조할 수 있다. 리포좀 제조에 유용한 인지질은 다수이나, 이들은 일반적으로 당해분야에서 공지되어 있기 때문에 여기에 모두 기재하지는 않을 것이다. 이러한 인지질에는 하기 물질들이 포함되나, 하기 물질로 제한되는 것은 아니다 : 레시틴, 포스파티딜에탄올아민, 라이소레시틴, 라이소파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 스핑고마이엘린, 카디올리핀, 포스파티드산 및 세레브로사이드. 본 발명의 태양을 실시하기에 가장 바람직한 인지질에는 디미리스토일포스파티딜글리세롤(DMPG) 및 디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC)이 포함된다. 본 발명의 리포좀을 제조하기 위해 인지질 및 백금(II) 착물과 함께 1% 내지 약 50% 미만의 범위를 갖는 소량의 콜레스테롤이 포함될 수 있다. DMPG 및 DMPC의 혼합비는 1 : 10 내지 10 : 1이 만족스러우며, 3 : 7의 비율이 바람직하나, 이로 제한되지는 않는 것으로 밝혀졌다. 백금(II) 착물 : 인지질의 비율은 연구에는 주로 1 : 15비율이 사용되나, 약 1 : 10 내지 약 1 : 30비율이 일반적으로 만족스러운 것으로 생각된다.

단일 박막층 또는 다박막층, 또는 기타 백금(II) 착물-함유 리포좀은 본 발명을 실시하는데 사용할 수 있다. 본 발명의 백금(II) 착물은 거의 수-불용성이며, 이들은 리포좀 박막층의 인지질 이중층으로 혼입되므로 다박막층 리포좀이 통상적으로 바람직하다.

일반적으로, 본 발명의 백금(II) 화합물의 제조방법은 하기와 같은 하나의 단계로 기술할 수 있다: (1) 약 10mmole의 비시날 디아미노 사이클로알칸 또는 알칸을 50ml의 K₂PtCl₄(3.5g) 수용액에 첨가하고 실온에서 4 내지 8시간동안 교반시킨다. 시스-비스디클로로-1,2-디아민-Pt(II)를 함유하는 형성된 황색고체는 여과에 의해 분리하고 물, 메탄올 또는 아세톤과 같은 액체로 세척할 수 있다. 그후, 상기 고체를 약 20ml의 H₂O 및 첨가된 Ag₂SO₄약 0.75g을 함유하는 수용액에서 현탁시킬 수 있다. 암실에서 약 24시간동안 교반시킨 후, 침전된 AgCl을 여과에 의해 분리할 수 있다.

설페이토비시날디아민-Pt를 약 100ml의 H₂O에 용해시키고, 동일반응계내에서 제조된 카복실레이토 음이온의 알칼리 토금속염 약 2mmol을 첨가하며, 약 30분동안 교반시킨다. 여과에 의해 BaSO₄를 제거(예 : 결정화 또는 증발에 의해 용매제거)함으로써 본 발명의 백금(II) 착물을 수득할 수 있다.

특정한 백금(II) 착물의 제조방법 및 이후에 포함된 실시예에 기술한 특정한 백금(II) 착물을 사용한 화학치료 요법은 적합한 비시날 디아민 또는 소수성 라디칼-함유 카복실레이토 1가 음이온을 단순 치환시킴으로써 유사하게 기술되며 필요한 착물의 제조 및 용도에 쉽게 적용시킬 수 있다.

본 발명의 인지질 및 백금착물(Pt-리포좀)을 함유하는 리포좀은 종양의 성장 및 전이성 변식을 모두 억제하는데 유용하다.

상기 Pt-리포좀은 비경구, 국소 또는 경구투여할 수 있다. Pt-리포좀의 경구 또는 비경구 투여 용량은 대부분의 질환에 대해 약 2.5mg/kg(체중) 내지 25mg/kg(체중)이 적합한 것으로 생각된다. 종양이 생긴 사람을 치료할 경우, 특정한 용량은 환자의 상태, 종양 형태 및 정도, 및 특히 Pt-리포좀 독성에 따라 각 경우에 변화시킬 수 있다.

약제학적 조성물내에 포함된 리포좀-백금의 양 및 본 발명의 치료방법에서 사용되는 용량은 환자의 상태, 치료할 종양의 특성, 리포좀-백금의 종양 억제활성, 그의 독성 및 용해특성 등에 따라 각 경우에 변화될 것이다. 리포좀-백금은 또한 혼합된 치료요법에서 다른 종양 억제제와 함께 혼합된 상태로 투여할 수 있다.

비경구 투여는 복강내, 피하내, 흉막내, 척추강내, 요도내, 정맥내, 동맥내, 근육내 또는 림프내 투여일 수 있다.

상기 비경구 투여제형에는 멸균 등장성 수용액과 같은 약제학적으로 허용되는 용액내의 Pt-리포좀 현택제가 포함되는 것이 바람직하다. 이들 현탁제는 완전히 제조하여 수득할 수 있거나 또는 예비형성된 성분으로부터 제조할 수도 있다. 당해 분야의 숙련가들에게 공지된 바와같이 Pt-리포좀은 펠렛(pellet) 또는 분말로 제조할 수 있다. 이러한 펠렛 또는 분말은 약제학적으로 허용되는 용액과 혼합하여 비경구 투여용 현탁제를 형성시킬 수 있다.

Pt-리포좀의 국소투여는 완전히 제조하여 수득할 수 있거나, Pt-리포좀 분말 또는 펠렛으로부터 제조할 수 있는 현탁제, 크림제 또는 연고제와 같은 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 상기한 국소투여는 예를들어 상피 또는 점막과 같은 암-장해 부위 부근에서 수행할 수 있다.

Pt-리포좀의 경구투여는 바람직하게는 Pt-리포좀 분말 또는 펠렛의 캡슐화를 특징으로하며, 이에 의해 Pt-리포좀은 캡슐로부터 방출되기 전에는 위 및 장 소화활성에 대해 보호된다.

경우에 따라, 예를들어 종양치료용 기타 치료제 또는 리포좀 안정화에 도움을 주는 산화방지제를 함유하는 Pt-리포좀을 제조할 수 있다.

특히 리포좀 성분으로서의 본 발명의 착물의 용도는 종양 성장의 억제 및 종양의 전이성 번식방지에 중점을 두고 있다. 예를들어, 우선 숙주는 흔히 그 성장이 백금(II) 착물에 의해 억제되는 세포를 일반적으로 갖는 것으로 공지된 유형의 종양을 갖는다는 것으로 확인되었다. 숙주내의 종양성장은 본 발명의 Pt-함유 리포좀을 숙주에 투여함으로써 억제될 수 있다.

이와 유사하게, 숙주내의 종양의 전이성 번식은 억제될 수 있다. 흔히 백금(II) 착물에 민감한 것으로 주지된 유형의 전이성 또는 전이 가능한 종양을 갖는 숙주를 먼저 확인한다. 본 발명의 Pt-함유 리포좀을 상기 숙주에 투여하여 전이성 번식을 억제한다.

하기 실시예는 본 발명의 바람직한 실시태양을 설명하기 위한 것이며, 첨부된 청구범위에서 달리 언급이 없는 한 이들 실시예는 본 발명을 제한하려는 것이 아니다.

재료 및 분석

K₂PtCl₄는 AESAR(Johnson Matthey, Inc.Seabrook, NH)로부터 구입한다. 사이클로펜텐카복실산은 Pfaltz and Bauer, Inc., Stamford, CT로부터; 1,2-디아미노사이클로헥산(DACH)는 Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.로부터; 트랜스-RR-DACH 및 트랜스 SS-DACH는 Mortol Thiokol, Inc.,Danvers, Mo.로부터; 그리고 네오데카노산은 Exxon Chemical Co., Houston, Texas로부터 구입한다. 백금 착물에 대한 원소분석은 Integral Microanalytical Laboratories, Inc., Raleigh, NC 및 Robertson Laboratory, Inc., Florham, Park, N.J.에 의해 수행된다. 착물(KBr 펠렛으로서)의 적외선 스펙트럼은 Nicolet 600푸리에 변환 적외선 분광 광도계를 사용하여 600 내지 40000cm^-1범위내에서 측정한다.

본 연구에 사용된, 크로마토그래피적으로 순수한(박층 크로마토그래피) 디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC) 및 디미리스토일포스파티딜글리세롤(DMPG)은 Avanti Polar Lipids(Birmingham, AL)에서 구입한다.

콜레스테롤은 Sigma Chemical Co.(St Louis, MO)에서 구입한다.

[실시에 2]

시스-비스-사이클로펜텐카복실레이토-1,2-DACH-백금(II)의 합성

시스-비스-사이클로펜텐카복실레이토-1,2-DACH-백금(II)은 리포좀-백금(L-PT) 제제를 개발하기 위해 원형 물질로서 사용되는 하나의 시스-백금(CDDP) 소수성 동족체이다. 이러한 특정 착물의 구조식은 다음과 같다:

이러한 원형물질은 라세믹 DACH에 대하여 기술된 다단계 방법을 이용하여 합성한다[참조 : Khokhar et al, Inorg.Chem.Acta.Bioinorganic Section, V 108, p 63(1985)] : 0.96g의 DACH를 여과된 K₂PtCl₄수용액(50ml의 H₂O중 3.5g)에 가하고, 혼합물을 실온에서 6 내지 8시간동안 교반한다. 시스-비스-디클로로-DACH-Pt(II)을 함유하는 황색 고체를 여과하여 제거하고, 물, 메탄올 및 최종적으로 아세톤으로 세척한다. 최종 생성물을 진공하에 건조시킨후, 계산된 수율은 56%이다.

이어서, 1.0g의 시스-비스-디클로로-DACH-Pt(II)를 20ml의 H₂O에 현탁시키고, Ag₂SO₄수용액(150ml의 H₂O중 0.75g)을 가하여 수용성 설페이토-DACH-PtH₂O를 수득한다.

반응 혼합물을 암실에서 24시간동안 교반하고, 침전된 AgCl을 여과하여 제거한다. 황색 용액을 감압하에 45 내지 50℃에서 증발건조시키고, 황색 생성물을 진공중 P₂O₅상에서 더욱 건조시킨다. 설페이토-DACH-Pt(II)H₂O의 수율은 90%이다. 최종적으로, 0.423g(1mmol)의 설페이토-DACH-Pt(II)을 100ml의 H₂O에 용해시키고, 0.3g의 Ba(OH)₂를 H₂O중 0.226g(2mmol)의 사이클로펜텐카복실산에 가하여 바륨 사이클로펜텐카복실레이토를 동일 반응계내에서 제조한다. 이러한 성분들을 혼합하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분동안 교반한다. BaSO₄침전물을 여과하고, 황색 여액을 45℃, 감압하에 회전식 증발기를 사용하여 증발건조 시킨다. 황색 고체가 수득되며, 이를 메탄올로 정제한다.

생성물을 진공하에 최종적으로 건조시킨다(수율 70%):

C₁₈H₃₀N₂O₄Pt(PT)에 대한 원소분석(%);

실측치 : C; 40.26, H; 5.65, N; 5.05

이론치 : C; 40.67, H; 5.65, N; 5.27

착물의 적외선 스펙트럼(KBr 펠렛);

C=0.1632cm^-1/C-O 1398^-1.

시스-비스-사이클로펜텐카복실레이토-1,2-DACH-Pt(II)는 메탄올 및 클로로포름에 매우 잘 용해되며, 물에는 약간(0.5mg/ml 미만)만 용해될 뿐이다. 상기 합성 과정은 모두 트랜스-RR-DACH 및 트랜스-SS-DACH를 사용하여 수행함으로써 시스-비스-사이클로펜텐카복실레이토-1,2-DACH-Pt(II)의 트랜스-RR 및 트랜스-SS 이성체를 생성시킨다:

시스-비스-사이클로펜텐카복실레이토-1,2-트랜스-RR-DACH-Pt(II)-3H₂O에 대한 원소분석(%);

실측치 : C; 37.36, H; 5.50, N; 5.12

이론치: C; 37.93, H; 5.82, N; 4.80.

[실시예 3]

시스-비스-네오데카노에이토-DACH-백금(II)의 합성

실시예 2에서와 같이 제조한 설페이토-라세믹-DACH-백금(II)(0.423g)을 10ml의 물에 용해시킨다. 네오데카노산의 칼륨염(0.420g)을 이 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반한다. 점착성의 물질을 수득하여 클로로포름으로 추출하고, 클로로포름 추출물을 무수 MgSO₄상에서 건조시킨다. MgSO₄를 여과하여 분리하고, 여액을 증발 건조시킨다. 수득된 회백색 고체 생성물을 수득하여 진공하에 P₂O₅상에서 건조시킨다. 이 최종 생성물을 0℃에서 보관한다; 최종 생성물인 실험식 C₂₆H₅₂N₂O₄Pt의 화합물에 대한 원소분석(%);

실측치 : C; 48.30, H; 8.10, N; 3.92

이론치 : C; 47.93, H; 8.00, N; 4.30

시스-비스-네오데카노에이토-DACH-백금(II)의 구조식은 다음과 같다:

상기식에서, R,R' 및 R"는 실험식 C₁₀H₁₉O₂(MW=172)의 카복실레이토 라디칼 작용기를 제공하는 C₂H₅또는 C₃H₇일 수 있다.

시스-비스-네오데카노에이토-DACH-백금(II)은 메탄올 및 클로로포름에는 매우 잘 용해되지만 물에는 불용성이다.

상기 방법을 트랜스-RR-DACH를 사용하여 수행함으로써 시스-비스-네오데카노에이토-DACH-백금(II)의 트랜스-R,R-이성체를 생성시킨다: 시스-비스-네오데카노에이토-PR-DACH-백금(II)의 원소분석(%);

실측치 : C; 47.75, H; 8.16, N; 3.98

이론치 : C; 47.93, H; 8.00, N; 4.30

[실시예 4]

시스-비스-n-데실이미노디아세테이토-DACH-백금(II)의 합성

실시예 2에서와 같이 제조된 설페이토-DACH-백금(II) H₂O(0.423g)를 10ml의 H₂O에 용해시킨다. NaOH(0.08g)을 50ml의 물중 N-데실이미노디아세트산(0.273g)에 첨가하여 동일 반응계 내에서 n-데실이미노디아세트산의 나트륨염을 제조한다. 이러한 나트륨 N-데실이미노디아세테이토의 수용액을 설페이토-DACH-백금 용액에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반한다. 생성된 용액을 감압하에 40℃에서, 회전식 증발기상에서 증발 건조시킨다. 이렇게 수득한 황색 고체를 메틸 알콜에 용해시키고, 셀라이트(Celite)를 통하여 여과한다. 홍색 여액을 감압하에 회전식 증발기 상에서 증발 건조시킨다. 수득된 황색 결정성 생성물을 1-프로판올을 사용하여 정제한다(수율 80%):

생성물인 실험실 C₂₀H₃₉N₃O₄Pt2H₂O의 화합물의 원소분석(%);

실측치 : C; 39.28, H; 7.12, N; 6.68

이론치 : C; 38.95, H; 7.02, N; 6.81

착물(KBr-펠렛)의 적외선 스펙트럼;

C=O 1580cm^-1및/C-O 1410^-1.

시스-비스-n-데실이미노디아세테에토-DACH-백금(II)의 구조식은 다음과 같다:

상기식에서, R은 n-데실 또는 보다 장쇄의 직쇄 또는 측쇄알킬라디칼이다.

시스-비스-n-데실이미노디아세테이토-DACH-백금(II)은 메탄올 및 클로로포름에는 매우 잘 용해되나, 물에는 불용성이다. 상기 합성방법을 트랜스-RR-DACH를 사용하여 수행함으로써 시스-비스-n-데실이미노디아세테이토-DACH-Pt(II)의 트랜스-RR이성체를 생성시킨다: 시스-비스-n-데실이미노디아세테이토-트랜스-RR-DACH-Pt(II)의 원소분석(%);

실측치 : C; 38.60, H; 6.87, N; 6.82

이론치 : C; 38.95, H; 7.02, N; 6.81

상기 화합물은, 상기 일반식의 R₁및 R₂가 하나로 동일하며, 카복실레이트 1가 음이온이 알킬 소수성 라디칼을 함유하는 가교 원자에 의해 함께 결합되어 실제적으로 카복실레이토 2가 음이온을 형성하는 구조를 나타낸다.

[실시예 5]

백금-함유 리포좀(L-PT)

상기 혼입된 백금 착물(PT)을 함유하는 다박막층지질낭(MLV) 또는 리포좀을 다른 화합물에 대하여 전술한 바와같이 제조한다[참조: 로페즈-베레스타인(Lopes-Berestein) 등 (4)(1984)Clin,Exp.Metastasis V2 pp127-137 및 로페즈-베레스타인 등(1983) J Inf Dis V 147 pp 937-945]. 간단히 설명해서, 지질의 클로로포름 용액(목적하는 몰비) 및 PT를 지질-PT 비율 15:1로 혼합하고, 회전식 증발기(Buchi, Brinkmann Instruments, Westbury, NY)중에서 증발시킨다. 수득된 PT-함유 건조 지질막을 손으로 진탕시켜 수용액(물중 0.9% NaCl)으로 분산시킨다. 현탁액을 30,000xg에서 45분동안 원심분리시키고, 상총액을 폐기한 다음, PT를 함유하는 펠렛을 0.9% NaCl용액에 재현탁시킨다.

백금 착물을 함유하는 MLV 또는 리포좀은 또한 지질 및 백금 화합물을 함유하는 동결건조 분말로부터 제조할 수도 있다. 지질 및 백금 화합물은 소수성 용매 3급 부탄올(융점 : 26℃)에 상기 비율로 용해시킨다. 용액을 동결건조시켜 백색 분말을 수득한다. 물중의 0.9% NaCl 수용액을 동결건조 분말에 손으로 진탕하며 첨가하면 백금 화합물을 함유하는 MLV가 형성된다.

[실시예 6]

캡슐화 효율성(EE) 및 안정성의 계산

원소 백금(Pt)은 The Department of Analytical Chemistry, The University of Texas Medical School at Houston, TX.에서 이미 보고된 바와같이 X-선 형광에 의해 리포좀 현탁액 및 펠렛중에서 측정한다[참조 : 사이페르트(Seifert)등 (1979) Proc.Amer.Ass'n Cancer Res.V20, P.168]. 백금 착물의 양은 상층액중에서 224nm파장을 이용한 자외선(UV)분광 광도법에 의해 측정한다. 하기 두 계산식에 의해 EE를 먼저 계산한다:

1. EE=펠렛중 Pt/초기 리포좀 현탁액중의 총 Pt

2. EE=초기에 가해진 총 Pt-상층액중의 Pt/초기에 가해진 총 Pt

상기 두 방법에 의해 수득되는 결과는 상당히 유사하며, 두번째 방법은 단지 UV분광 광도법에 의한 Pt 측정만을 요하므로, 대부분의 EE측정은 두번째 방법으로 계산한다.

4℃, 0.9% NaCl용액, 및 37℃, 0.9% NaCl용액중 50% 인체(AB)혈청중의 상이한 리포좀-PT(L-PT)제제의 안정성은 다음 계산식을 이용하여 탐지한다:

안정성 측정에 사용된 EE값은 상층액중의 PT를 UV분광 광도법(0.9%, NaCl용액) 또는 X-선 형광(50% 인체 AB 혈청)에 의해 측정하여 수득한다. 0.9% NaCl용액에서의 안정성은 최초 제조후 14일까지 측정한다. 또한, L-PT제재를 14일째에 현미경으로 관찰하여 낭의 형태를 측정한다. 50% 인체 AB혈청중 안정성은 배양호 18시간까지 측정한다.

상이한 시스-백금 동족체를 DMPC : DMPG가 7 : 3으로 이루어진 다박막층 낭에 캡슐화한다. Pt-사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH에 대한 캡슐화 효율은 66%이다. 순수한 트랜스-RR-DACH 또는 트랜스-SS-DACH이성체를 사용하는 경우(각각 88% 및 90%), 캡슐화 효율은 상당히 증가된다. Pt-네오데카노에이토-라세믹-DACH, Pt-네오데카노에이토-트랜스-RR-DACH, Pt-n-데실이미노디아세테이토-라세믹-DACH 착물에 대한 캡슐화 효율을 하기 표 I에 나타내었다:

[표 1]

상이한 동족체를 사용한 L-PT의 캡슐화 효율

¹3회 이상의 실험치의 평균

리포좀 조성물; DMPC: DMPG=7 : 3

DMPC 단독, DMPG단독, 콜레스테롤 단독, 상이한 농도로 혼합된 DMPC 및 DMPG, 콜레스테롤 존재 또는 부재하에 유사한 실험(기재되지 않음)을 수행한 결과, 보다 나은 캡슐화 효율은 나타나지 않을 뿐 아니라, 대부분의 경우 EE가 상당히 감소된다.

[실시예 7]

수성 매질중 L-PT의 안정성

제재를 0.9% 염수에 현탁시키고, 4℃에서 14일 동안 배양한다. 광학 현미경법으로 리포좀 조성물을 관찰하고, 염수중 유리 PT의 양을 측정한다. 유일한 인지질로서의, PT를 함유하며 DMPG로 이루어진 리포좀은 현미경으로 관찰된 상당한 구조의 손실을 나타낸다. 유리 PT를 측정하고, 리포좀에 잔존하는 PT퍼센트로서 안정도를 계산한다. 상기 측정 결과는 표 2에 나타내었다.

[표 2]

14일된 염수 L-Pt중의 L-Pt 안정도¹

¹리포좀 조성물; DMPC : DMPG=7 : 3

상기 데이타로부터 알 수 있는 바와같이, Pt-사이클로펜텐카복실레이토 트랜스-RR-DACH 및 Pt-네오데카노에이토-라세믹-DACH는 Pt-사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH보다 큰 안정성을 나타낸다.

[실시예 8]

L-PT의 독성 연구(사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH)

The University of Texas Science Park(Bastrop. TX)에서 구입한 중량 22 내지 25g의 생후 6 내지 8주된 CD-1 스위스 마우스에 대해 독성 연구를 수행한다. 하이드록시 프로필셀룰로오즈중의 현탁액 상태의 유리 PT, DMPG, DMPG-PT, DMPC : DMPG; 7 : 3 및 DMPC : DMPG; 7 : 3-PT를 0.1 내지 0.3ml용량으로 복강내 투여한다. DMPC : DMPG; 7 : 3-PT는 또한 1회 단일주사 또는 매일 3회 주사하여 정맥내 투여한다. 임상적 행동 특성 및 생존 시간을 일 단위로 관찰한다. 주사후 14일째까지 발생하는 치사를 고려하여 LD₁₀, LD₅₀및 LD₉₀을 계산한다.

하이드록시프로필셀룰로오즈 중의 현탁액 상태의 PT, DMPG-PT 및 DMPC : DMPG; 7 : 3 PT는 1회 복강내(iP) 주사하였을 때(각각 91mg/kg, 86mg/kg 및 75mg/kg), 유사한 LD₅₀투여량을 나타낸다(표 3). DMPG 및 DMPC : DMPG; 7 : 3으로 이루어진 빈 리포좀의 LD₅₀투여량에서 캡슐화 되는 PT의 양이 보다 높다(각각 183mg/kg 및 〉 340mg/kg). 정맥내 주사한 DMPC : DMPG; 7 : 3-PT에 대한 LD₅₀용량은 사용된 두가지 방법에 대해 유사하다: 1회 주사 및 매일 3회 주사(82mg/kg : 96mg/kg). 복강내 및 정맥내 독성 연구에서, 주사후 5 내지 10일 사이에 대부분 치사된다. 이러한 연구의 결과는 표 3에 나타내었다.

[표 3]

복강내 및 정맥내 투여된 상이한 L-PT 제형(사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH)의 독성도

* 빈 리포좀의 LD₁₀, LD₅₀및 LD₉₀투여량에서 캡슐화되는 PT(mg/kg).

[실시예 9]

신독성도

미리 측정된 LD₅₀에 해당하는 투여량에서 하이드록시프로필셀룰로오즈, DMPG-PT 또는 DMPC : PMPG; 7 : 3-PT중의 CDDP, PT 사이클로펜텐카복실레이토 라세믹 DACH를 복강내 주사(1회 투여)한지 96시간 후의 중량 22 내지 25g의 CD₁스위스 마우스의 레트로오비탈조직(retroorbital plexus)으로부터 수득한 샘플로 혈액 우레아질소(BUN)의 양을 측정한다. 독성도를 시험한 모든 L-PT 제형은 실험당일에 멸균조건하에서 제조한다. PT의 LD₅₀용량을 하이드록시프로필셀룰로오즈, DMPG-PT 및 DMPC; DMPG 7 : 3-PT중의 현탁제로 복강내 투여한 후 BUN 상승은 없었다(각각, 34.4±9.6mg%, 30.0±4.6mg% 및 32.0±2.3mg%에서 96시간후의 BUN).

그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

[표 4]

DC₁마우스의 LD₅₀투여량에서 CDDP, 유리 PT(사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH) 및 L-PT의 급성 신독성도

1평균=27.2±mg%

[실시예 10]

시험관내에서의 L1210 세포에 대한 사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH-Pt의 종양억제활성

5% CO₂개스하에 37℃, 95% 상대습도에서 10% 말혈청, 글루타민, 스테렙토마이신 및 페니실린을 추가로 함유하는 맥코이(McCoy) 5A 매질(Gibco Laboratories, Grand Island, NY)중의 현탁배양지에서 L1210 백혈구 세포를 성장시킨다. 4ml의 세포현탁액을 배양관에 첨가하고 적절한 농도의 유리 PT 또는 L-PT를 첨가한다(최종 농도: 0.01㎍/ml 내지 10㎍/ml). 96시간 후, 대조 및 실험배지의 세포농도를 코울터카운터(Coulter Counter)(Coulter Electronics, Hialeah, FLA)로 측정하고 억제율(%)을 계산한다. 다음 제재를 시험한다: 유리 PT, DMPG, DMPC:DMPG 7 : 3, DMPG-PT 및 DMPC : DMPG 7 : 3-PT. 그 결과를 50% 성장억제율(ID₅₀)을 나타내는 투여량으로 나타낸다. 빈 리포좀에 대한 결과는 ID₅₀농도에서 캡슐화된 PT의 양으로 나타낸다.

유리 사이클로펜텐카복실레이토-라세믹 DACH에 대한 ID₅₀은 1.3㎍/ml(표 5)이다. 시험한 2개의 L-PT 제재중, DMPG-PT는 DMPC : DMPG 7 : 3-PT보다 활성이 약간 더 크다(3회 시험의 평균치 ID₅₀은 각각 0.7 및 1.6㎍/ml이다). DMPG로 이루어진 빈 리포좀은 3.7㎍/ml의 ID₅₀을 갖는 반면, DMPC : DMPG 7 : 3으로 이루어진 빈 리포좀에 대한 ID₅₀은 10㎍/ml보다 크다.(표 5)

[표 5]

시험관내에서의 L1210 세포에 대한 유리 PT, L-PT 및 빈 리포좀의 종양억제활성(여기서, PT는 사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH-PT이다).

1 CDDP ID₅₀=0.1㎍/ml

2 ID₅₀은 빈 리포좀의 ID₅₀농도에서 캡슐화되는 PT의 양(㎍/ml)이다.

[실시예 11]

L1210 마우스 백혈병에 대한 L-PT의 생체내 종양억제활성(여기서, PT는 사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH이다)

CDDP, 하이드록시프로필셀룰로오즈중의 PT, DMPG, DMPG-PT, DMPC : DMPG 7 : 3 및 DMPC : DMPG 7 : 3-PT의 시험관내 종양억제 활성은 L1210-BDF₁마우스 모델(25)에서 시험한다. BDF₁마우스는 찰스리버(Wilmington, MA)에서 구입한다. 중량 18 내지 22g의 마우스 6 내지 8마리를 1×10⁶L1210 백혈구 세포로 복강내 접종한다. L1210 세포는 DBA₂마우스내에 유지시키고 다른 실험을 통해 약간 이동시킨다. 모든 L-PT 제형은 종양접종한지 24시간후 0.1 내지 0.3ml의 용량으로 복강내 주사한다.

상이한 2가지 투여방법을 이용한다: 1일 1회 주사 또는 1,5 및 9일(수회)주사, 사용된 CDDP의 투여량은 전실험의 최대 종양억제 활성치로부터 얻은 것이다. 사용된 PT, DMPG-PT 및 DMPC : DMPG 7 : 3-PT의 투여량은 3.125mg/kg 내지 50mg/kg(약 LD₁₀)범위이다 . 임상적 행동특성 및 생존시간은 모든 동물이 치사할 때까지 측정한다. 그 결과는 %T/C(처리된 마우스의 평균 생존시간/대조용 마우스의 평균 생존 기간×100) 및 장기간 생존 동물수로서 나타낸다. 30일 및 60일이상 살아있는 마우스는 각각 1회 및 수회 주사해도 장기간 생존하는 것으로 간주한다. 종양억제활성에 대해 시험한 모든 L-PT 제형은 실험당일에 멸균조건하에서 제조한다. 첫번째 실험에서, L1210 백혈병의 치료시 CDDP, 유리 PT, DMPG 및 DMPC : DMPG 7 : 3-PT의 단일 복강내 투여량의 효과를 시험한다. 12.5mg/kg 및 25mg/kg 용량의 유리 PT로 처리한 마우스는 10mg/kg 용량의 CDDP로 처리한 마우스와 비교할만한 % T/C를 갖는다(162 : 178, 3회 실험의 평균치)(표 6). 12.5mg/kg, 6.25mg/kg 및 3.125mg/kg의 용량에서 DMPG-PT는 유리 PT 및 CDDP와 비교될만한 종양억제활성을 갖는다(평균 % T/C : 12.5mg/kg의 경우 175; 6.25mg/kg의 경우 158; 3.125mg/kg의 경우 163)(표 6). 25mg/kg 용량 이상의 DMPG-PT는 L1210 백혈병-BDF₁마우스에 대해 독성이 있다. 25mg/kg, 12.5mg/kg 및 6.25mg/kg 용량의 DMPC : DMPG 7 : 3 PT로 치료한 마우스는 CDDP, 유리 PT 및 DMPG-PT를 사용하여 수득한 거보다 약간 더 높거나 유사한 % T/C 를 갖는다(평균 % T/C: 25mg/kg의 경우 125; 12.5mg/kg의 경우 178; 6.25mg/kg의 경우 200)(표 6). 50mg/kg 용량의 DMPC : DMPG 7 : 3-PT는 L1210 백혈병-함유 BDF₁마우스에 대해 독성이 있다. 가중낭(L-PT)의 최적 용량에 해당하는 용량의 DMPG 및 DMPC : DMPG 7 : 3으로 이루어진 빈 리포좀은 종양억제활성을 나타내지 않는다(% T/C : DMPG의 경우 105; 및 DMPC : DMPG 7 : 3의 경우 93).

장기간의 생존마우스(6마리중 1 또는 2마리의 마우스)는 CDDP, DMPG-PT 및 DMPC : CMPG 7 : 3-PT로 처리된 그룹에서 나타난다(표 6).

다수회의 투여방법을 이용하는 실험에서 수득된 최고 % T/C는 CDDP, 7.5mg/kg×3의 경우에 253, 유리 PT 12.5mg/kg×3의 경우에 284, DMPG-PT 6.25mg/kg×3의 경우에 179 및 DMPC : CMPG 7 : 3-PT 12.5mg/kg×3의 경우에 403이다. 장기간 생존마우스(6마리중 1마리)는 DMPC : CMPG 7 : 3-PT로 처리된 그룹에서만 관찰되었다(표 7):

[표 6]

마우스 L1210 백혈병에 대해 복강내(1일)로 투여된 CDDP, 유리 PT 및 L-PT의 생체내 종양 억제 활성(여기서, PT는 사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH이다)

1 대조예의 평균 생존=7.5일

2 대조예의 평균 생존-11일

3 대조예의 평균 생존= 9일

4 모든 제제는 1×10⁶L1210세포의 복강내로 접종한지 24시간후 0.1 내지 0.3ml를 복강내 주사한다.

[표 7]

마우스 L1210 백혈병에 대해 복강내투여(1일, 5일 및 9일)한 CDDP, 유리 PT 및 L-PT의 생체내 종양억제 활성(여기서, PT는 사이클로펜텐카복실레이토-라세믹-DACH이다)

¹모든 제제는 종양 접종한지 24시간, 5일 및 9일후에 0.1 내지 0.3ml의 용량으로 복강내 주사한다.

[실시예 12]

L-1210 백혈병에 대해 상이한 L-PT의 동족체의 생체내 종양 억제활성

상이한 L-PT 동족체의 L-1210마우스 백혈병에 대한 종양 억제활성은 앞서 기술한 바와같이, L-1210-BDF, 마우스 모델(종양 접종 0일, 1일 처리, 복강내)로 측정한다. CDDP(% T/C=175)에 비하여, L-PT 동족체는 L-PT(사이클로펜텐카복실레이토-트랜스-SS-DACH=155 및 N-데실이미노디아세테이토-라세믹-DACH=150 및 N-데실 이미노디아세테이토-트랜스-RR-DACH=162)를 제외하고는 같거나 약간 더 높은 종양 억제 활성을 나타낸다. 이들 결과는 표 8에 나타내었다.

[표 8]

L1210 백혈병3에 대한 시스-백금 및 상이한 리포좀-백금 동족체 1의 종양 억제효과

1 리포좀 조성물 ; DMPC : DMPG 7 : 3

3 0일에 복강내 접종된 1×10⁶L1210세포

4 처리: 1일 복강내

5 염수중에 용해됨, 1mg/ml

[실시예 13]

마우스 M5076 세망육종의 간전이에 대한 L-PT-네오카노에이토-라세믹-DACH의 생체내 종양 억제 활성

실시예 6에 기술한 바와 같이 제조된 L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH 및 간으로만 전이하는 종양인 마우스 M5076 세망육종을 사용하여 간전이에 대한 L-PT의 종양 억제 가능성 효과를 시험한다.

2개의 상이한 종양 접종 및 투여 계획(표 9 및 10)을 이용하는 M5076의 간전이를 치료하는데 있어서, L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH는 시스-백금보다 고활성을 나타낸다.

L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH(25mg/kg, 8, 12, 16일)은 10⁵M5076세포를 정맥내 접종한지 30일후 시스-백금(7.5mg/kg, 8, 12, 16일후)에 비해 간전이수를 2배 이상 감소시킨다(L-PT의 경우 평균 간전이수 ±SD=39±21; 시스-백금의 경우 114±38)(표 9). L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH(25mg/kg, 4,8,12일후)는 10⁴M5076 세포를 접종한지 45일후 M5076의 간전이를 완전히 억제시키는 반면, 시스 백금(7.5mg/kg, 4,8,12일후)으로 처리된 4/6동물은 175이상의 간전이수를 갖는다(표 10).

L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH는 M5076 세망육종의 간전이를 예방하는데 유용하다. L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH(37mg/kg, -1일)는 시스-백금(10mg/kg, -1일) 및 미처리된 동물과 비교해볼때 10⁴M5076 세포를 정맥내 접종(접종일은 제 0일) 한지 21일후에 간전이의 수를 5배 감소시킨다(표 11). (평균 간전이수±SD : L-PT의 경우 52±20; 시스-백금의 경우 256±54; 및 대조용 경우 226±21).

[표 9]

L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH를 사용한 M5076 세망육종의 간전이 처리

* 10C 57 BL/6 마우스 그룹은 제 0일에 10⁵M5076세포를 정맥내 접종한다. 마우스를 8,12 및 16일후에 시스-백금 또는 L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH로 처리한다. 미처리된 마우스의 평균 생존일수는 19일이다. 처리된 마우스를 30일후에 참수시켜, 간을 해부하여 부앵 고정액(Bouin's fixative)에 넣고, 간-종양군의 수를 측정한다.

[표 10]

* 6C 57 BL/6 마우스 그룹은 제 0일에 10⁴M5076세포를 정맥내 접종한다. 4,8 및 12일후에 이 마우스를 시스-백금 또는 L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH로 처리한다. 미처리된 마우스의 평균 생존일수는 30일이다. 처리된 마우스를 45일후에 참수시켜, 간을 해부하여 부앵 고정액에 넣고, 간-종양군의 수를 측정한다. L-PT로 처리된 그룹중에서는 한마리도 죽지 않은 것에 반해 시스-배금으로 처리된 마우스 중 두마리는 45일전에 죽는다.

[표 11]

L-PT-네오데카노에이토-라세믹-DACH를 사용한 M5076 세망육종의 간전이 예방*

* 6C 57 BL/6 마우스 그룹을 제-1일에 시스-백금 또는 L-PT 네오데카노에이토-라세믹-DACH로 처리한다. 이 마우스는 제 0일에는 10⁴M5076세포로 정맥내 접종한다. 미처리된 마우스의 평균 생존일수는 21일이다. 처리된 마우스를 21일후에 참수시켜, 간을 해부하여 부앵 고정액에 넣고 종양군의 수를 측정한다.

[실시예 14]

시스-비스-네오데카노에이토-시스-디아민-백금(II)의 제조

다음 방법에 따라 우선 구조식(NH₃)₂Pt-I₂의 시스-디아민-디요오도-백금(II)를 제조한다.

K₂PtCl₄(5g)를 물(20ml)에 용해시킨다. KI(3g) 수용액을 첨가하여, 암갈색 용액을 수득한다. 실온에서 2 내지 3시간 동안 교반시킨 혼합물에 진한 수성 암모니아(21ml)를 가한다. 혼합물을 여과하고, 고체를 과량의 물, 에탄올 및 에테르로 세척한다. 생성물을 진공하에 P₂O₅상에서 건조시킨다[수율 : 4.5g(77%)].

그후, 본 발명에 따른 화합물을 다음과 같이 제조한다: (NH₃)₂-Pt-I₂(1.0g)을 물(50ml)에 현탁시키고, AgNO₃수용액(20ml H₂O중 0.68g)을 첨가한다. 반응 혼합물을 암실, 실온에서 밤새 교반한다. AgI 침전물을 여과하고, 여액을 회전식 증발기상에서 농축시킨다. 농축된 용액에, 동일반응계 내에서 제조한 나트륨 네오데카노에이토용액(20ml의 메탄올 및 1N NaOH중 네오데카노산 0.688g, 40ml)을 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한다. 황색 반응 혼합물을 회전식 증발기 상에서 감압하에 40℃에서 증발 건조시킨다. 점착성 생성물을 수득하고 이를 클로로포름으로 추출하며 클로로포름 추출물을 무수 MgSO₄상에서 건조시킨다. MgSO₄를 여과하여 분리하고, 여액을 회전식 증발기상 감압하에 증발 건조시킨다. 수득된 크림색 고체를 진공중 P₂O₅상에서 건조시킨다. 최종 생성물을 0℃에서 보관한다. 최종 생성물의 원소분석치는 다음과 같다:

C₂₀H₄₄N₂₄Pt에 대한 원소분석(%);

계산치: C; 42.00, H; 7.7, N; 4.90

실측치: C; 41.58, H; 8.03, N; 4.45

시스-비스-네오데카노에이토-비스-디아민-백금(II)의 구조식은 다음과 같다:

[H₃N]₂-Pt[OOC-CR'RR"]₂

상기 식에서, R, R', R"는 실험식 C₁₀H₁₉O₂(MW=171)의 카복실레이토 라디칼 작용기를 제공하는 C₂H₅또는 C₃H₇일 수 있다.

시스-비스-네오데카노에이토-비스-디아민-백금(II)는 클로로포름, 메탄올 및 기타 통상적인 유기 용매에는 매우 잘 용해되나, 물에는 불용성이다.

[실시예 15]

시스-비스-네오데카노에이토-비스사이클로헥실아민-백금(II)디하이드레이트의 제조

암모니아 대신 사이클로헥실아민 리간드를 사용하며, 실시예 14의 방법에 따른다. 착물은 클로로포롬, 메탄올 및 기타 유기 용매에는 매우 잘 용해되나, 물에는 불용성이다:

C₃₂H₆₄N₂O₄2H₂O에 대한 원소분석(%):

계산치: C; 49.71, H; 8.80, N; 3.62

실측치: C; 49.31, H; 8.39, N; 3.16

시스-비스-네오데카노에이토-비스-사이클로헥실아민-백금(II)은 구조식은 다음과 같다:

[C₆H₁₁NH₂]₂-Pt-[OOC-C-R'RR"]₂

상기식에서, R, R', R"는 실험식 C₁₀H₁₉O₂(분자량=171)의 카복실레이토 라디칼 작용기를 제공하는 CH₃, C₂H₅또는 C₃H₇일 수 있다.

[실시예 16]

시스-비스-네오데카노에이토에틸렌디아민-백금(II)H₂O의 제조

실시예 1의 방법으로, 암모니아 대신에 에틸렌디아민 리간드를 사용하여 생성물 수율 96%로 시스-디요오도-에틸렌디아민-백금(II)을 먼저 제조한다.

하기 방법으로 설페이토-에틸렌디아민-백금(II) H₂O을 제조한다.

시스-비스-디요오도-에틸렌디아민-백금(II)(3.9g)을 물 100ml에 현탁시키고, 여기서 Ag₂SO₄(200ml H₂O 중의 2.2g) 수용액을 첨가한다. 반응 혼합물을 암실 내에서 실온하에 일야 교반한다. 여과에 의해 AgI를 제거하고, 회전식 증발기를 사용하여 40 내지 45℃, 감압하에 황색여액을 증발 건조시킨다. 최종 생성물을 진공하에 P₂O₅상에서 건조시킨다. 생성물 수율은 2.35g(81%)이다.

그후 본 발명에 따른 화합물을 하기와 같이 제조한다.

설페이토-에틸렌디아민-백금(II)·H₂0(0.369g)를 물(200ml)에 용해시키고 동일 반응계내에서 제조된 나트륨 네오데카노에이토 용액(20ml 메탄올 및 2ml NaOH중의 네오데카노산 0.344g)을 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 3시간 동안 교반한다. 회전식 증발기를 사용하여 40 내지 45℃, 감압하에 반응 혼합물을 증발 건조한다. 점착성 생성물을 수득하여 클로로포름 중에서 추출하며 클로로프름 추출물을 무수 MgSO₄상에서 건조시킨다. 여과에 의해 MgSO₄를 분리하고 회전식 증발기를 사용하여 감압하에 여액을 건조시킨다. 최종 생성물을 진공에서 P₂P₅상에서 건조시킨다. 생성물을 0℃에서 보관한다:

C₂₂H₄₆N₂O₄Pt.H₂O에 대한 원소분석(%);

계산치: C; 42.86, H; 7.79, N; 4.54

설측치: C; 43.07, H; 7.32, N; 4.71

시스-비스-네오데카노에이토-에틸렌디아민-백금(II)는 클로로포름, 메탄올 및 기타 유기용매에 매우 잘 용해되지만 물에는 불용성이다.

시스-비스-네오데카노에이토-에틸렌디아민-백금(II)의 구조식은 하기와 같다.

상기식에서, R, R', R"는 실험식 C₁₀H₁₉O₂(분자량=171)의 카복실레이토라디칼 작용기를 제공하는 C₂H₅또는 C₅H₇일 수 있다.

[실시예 17]

시스-비스-네오데카노에이토-비스-이소프로필아민-백금(II)의 제조

에틸렌디아민 대신에 이소프로필아민 리간드를 사용하여 실시예 16의 방법으로 시스-비스-네오데카노에이토-비스-이소프로필아민-백금(II) 및 설페이토-비스-이소프로필 아민 백금(2)을 먼저 제조한다.

그후, 본 발명에 따른 화합물을 하기와 같이 제조한다: 설페이토-비스-이소프로필아민-백금(II). H₂O(0.427g)을 물(500ml)에 용해시키고, 동일 반응계 내에서 제조된 나트륨-네오데카노에이토의 용액(메탄올 20ml 및 IN NaOH 2ml중의 네오데카노산 0.344g)을 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 3시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 회전식 증발기를 사용하여 40 내지 45℃, 감압하에 증발 건조시킨다. 점착성 물질을 수득하여 클로로포름 내에서 추출하고 클로로포름 추출물을 무수 MgSO₄상에서 건조시킨다. MgSO₄를 여과에 의해 분리하며 여액을 회전식 증발기를 사용하여 감압하에 증발 건조시킨다. 생성물을 진공하에 P₂O₅상에서 건조시킨다. 최종 생성물을 0℃에서 보관한다:

C₂₆H₅₆N₂O₄Pt에 대한 원소분석(%):

계산치: C; 47.63, H; 8.53, N; 4.26

실측치: C; 47.74, H; 8.47, N; 3.93.

시스-비스-네오데카노에이토-비스-이소프로필아민-백금(II)의

구조식은 하기와 같다:

([H₃C]₂CH-NH₂)₂-Pt-[OOC-C-R'RR"]₂

상기식에서, R, R', R"는 실험식 C₁₀H₁₉O₂(분자량=171)의 카복실레이토 작용기를 제공하는 C₂H₅또는 O₃H₇일 수 있다.

시스-비스-네오데카노에이토-비스-이소프로필아민-백금(II)은 클로로포름, 메탄올 및 기타 유기 용매에 매우 잘 용해되나 물에는 불용성이다.

[실시예 18]

시스-비스-데카노에이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II)의 제조

설페이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II). H₂O(0.423g)을 물(200ml)에 용해시키며 동일 반응계내에서 제조된 나트륨-데카노에이토의 용액(메탄올을 20ml 및 IN NaOH 2ml중의 데카노산 0.344g)을 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 3시간 동안 교반시킨다. 반응 혼합물을 회전식 증발기를 사용하여 40 내지 45℃, 감압하에서 증발 건조시킨다. 고체를 수득하여 클로로포름 내에서 추출하고 클로로포름 추출물을 무수 MgSO₄상에서 건조시킨다. MgSO₄를 여과에 의해 제거하며 여액을 회전식 증발기를 사용하여 감압하에서 증발 건조시킨다. 생성물을 진공에서 P₂O₅상에서 건조시킨다. 최종 생성물을 0℃에서 보관한다:

C₂₆H₅₆N₂O₄Pt.H₂O에 대한 원소분석(%):

계산치: C; 46.59, H; 8.06, N; 4.18

실측치: C; 45.94, H; 7.87, N; 4.31

시스-비스-데카노에이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II)은 클로로포름 및 기타 유기 용매에 매우 잘 용해되나 물에는 불용성이다.

시스-비스-데카노에이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II)의 구조식은 다음과 같다.

[실시예 19]

시스-비스-네오펜타노에이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II)

설페이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II). H₂O(0.422g)을 물(200ml)에 용해시키며 동일 반응계내에서 제조된 바륨-네오펜타노에이토의 용액(함께 혼합된 메탄올 5ml중의 네오펜타노산 0.204g 및 물 50ml중의 Ba(OH)₂·8H₂O 0.3g)을 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 2 내지 3시간 동안 교반시킨다. 반응 혼합물을 회전식 증발기를 사용하여 감압하에서 40 내지 45℃에서 증발 건조시킨다. 잔사를 메탄올로 추출하고 여과하며 여액을 증발 건조시킨다. 고체를 수득하여 클로로포름을 사용하여 추가로 추출시킨다. 클로로포름 추출물을 증발 건조하며 크림색 생성물을 수득한다. 생성물을 진공하에서 P₂O₅상에서 건조시킨다:

C₁₆H₃₂N₂O₄Pt.2H₂O에 대한 원소분석(%):

계산치: C; 35.00, H; 6.57, N; 5.11

실측치: C; 35.16, H; 6.17, N; 5.27

시스-비스-네오펜타노에이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II)은 클로로포름, 메탄올 및 기타 통상의 유기 용매에 매우 잘 용해된다.

시스-비스-네오펜타노에이토-트랜스-R, R-1, 2-디아미노사이클로헥산-백금(II)의 구조식은 하기와 같다.

[실시예 20]

친유성 시스 백금 동족체의 캡슐화 효율 및 종양 억제 활성

실시예 6에 기술된 방법에 의해 실시예 14 내지 19에서 제조된 화합물에 대한 리포좀 내의 캡슐화 효율을 시험한다. 이들 리포좀 캡슐화된 화합물을 시험하여 실시예 12에 기술된 바와 같은 생체내 종양의 성장에 대한 억제제로서 이들의 적정 복용량 및 효과를 측정한다. 측정 결과는 표 12에 나타내었다.

[표 12]

리포좀에 혼입된 친유성 시스백금 동족체의 캡슐화효율 및 종양억제활성

[실시예 21]

인체 악성 세포 계통에 대한 시험관내 세포 독성

결장 형성 억제 분석을 이용하여, 3인의 악성 세포 계통의 결장암(LOVO, SW 620 및 SW 403)에 대해 시스-비스-네오데카노에이토-1, 2-디아미노사이클로헥산 백금(II)을 리포좀-형태로 시험한다. 결장 형성을 50% 억제시키는 약제 농도(IC₅₀)는 4 내지 8uM 범위이다. 이들과 동일한 세포 계통에 대한 시스 백금의 IC₅₀은 3 내지 7uM 범위이다.

하기 청구범위에 정의된 바와 같이, 본 발명의 개념 및 범주에서 벗어나지 않는한 여기에 기술된 조성물, 원소, 단계 및 방법을 다양하게 변화시킬 수 있다.

Claims

메탄올 또는 클로로포름에서는 사실상 가용성이며 물에는 사실상 불용성임을 특징으로 하는 하기 일반식의 백금(II) 4-배위 착물.

상기 식에서, R₁및 R₂는 각각 소수성 라디칼 작용기를 함유하는, 구조식
또는 일반식 -OOC(CH₂)_nCRR'R"(여기서, n은 0 내지 8이고, R,R' 및 R"는 각각 CH₃, C₂H₇및 C₃H_n로 이루어진 그룹중에서 선택된다)의 카복실레이토이거나, 함께 결합하는 경우에는 소수성 라디칼 작용기를 함유하는 구조식
데실의 카복실레이토이며, R₃및 R₄는 각각 일반식
(여기서, R₅는 수소, 탄소수 1 내지 3의 알킬 또는 C₆H₁₁이다)이거나, 함께 결합하는 경우에는 탄소수 약 3 내지 7의 사이클로 알킬-1,2-디아미노 또는 탄소수 약 2 내지 12의 알킬-1,2-디아미노이다.
제 1 항에 있어서, R₃및 R₄가 함께는 트랜스-R, R-1,2-디아미노사이클로헥산이고, R₁및 R₂가 각각 시스-데카노에이토인 착물.
제 2 항에 있어서, R₁및 R₂가 하기 일반식의 네오데카노에이토인 착물.

상기 식에서, R, R' 및 R"는 에틸 또는 프로필이며, R,R' 및 R"의 탄소수의 합은 8이다.
제 1 항에 있어서, R₃및 R₄가 함께는 트랜스 -S,S-1,2-디아미노사이클로헥산인 착물.
제 1 항에 있어서, R₁및 R₂가 네오-펜타노에이토인 착물.
제 1 항에 있어서, R₅가 수소인 착물.
제 1 항에 있어서, R₃및 R₄가 결합되지 않고 각각
(여기서, R₅는 사이클로헥실이다)인 착물.
제 7 항에 있어서, R₁및 R₂가 각각 하기 일반식의 네오-데카노에이토인 착물.

상기 식에서, R,R' 및 R"는 에틸 또는 프로필이며, R,R' 및 R"의 탄소수의 합은 8이다.
제 7 항에 있어서, R₁및 R₂가 시스인 착물.
제 1 항에 있어서, R₃및 R₄가 결합되지 않고 각각
(여기서, R₅는 이소프로필이다)인 착물.
제 10 항에 있어서, R₁및 R₂가 각각 하기 일반식의 네오-데카노에이토인 착물.

상기 식에서, R,R' 및 R"는 에틸 또는 프로필이며, R,R' 및 R"의 탄소수의 합은 8이다.
제 10 항에 있어서, R₁및 R₂가 시스인 착물.
메탄올 또는 클로로포름에서는 사실상 가용성이며, 물 및 인지질에는 사실상 불용성인 하기 일반식의 4-배위 백금 착물을 함유함을 특징으로 하는 리포좀.

상기 식에서, R₁,R₂,R₃및 R₄는 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
제 13 항의 리포좀 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 함유함을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-n-데실이미노디아세테이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-네오데카노에이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-암민-비스-네오데카노에이토-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-데카노에이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-네오펜타노에이토-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-사이클로펜텐 카복실레이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-네오데카노에이토-에틸렌디아민-백금(II)의 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-네오데카노에이토-비스-이소프로필아민-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-데카노에이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-네오펜타노에이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노사이클로헥산-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 착물이 시스-비스-네오데카노에이토-비스-사이클로헥실아민-백금(II)인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 인지질이 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린, 스핑고마이엘린, 포스파티드산 또는 포스파티딜세린인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 인지질이 필수적으로 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린 또는 이들의 혼합물로 이루어진 리포좀.
제 13 항에 있어서, 콜레스테롤을 포함하는 리포좀.
제 27 항에 있어서, 포스파티딜글리세롤이 필수적으로 디미리스토일포스파티딜글리셀롤로 이루어지며, 포스파티딜콜린이 필수적으로 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어진 리포좀.
제 29 항에 있어서, 디미리스토일포스파티딜글리세롤 및 디미리스토일포스파티딜콜린이 약 1 : 10 내지 10 : 1의 비율로 존재하는 리포좀.
제 29 항에 있어서, 디미리스토일포스파티딜글리세롤 및 디미리스토일포스파티딜콜린이 약 3 : 7의 비율로 존재하는 리포좀.
제 13 항에 있어서, 백금 착물 및 인지질이 약 1 : 10 내지 약 1 : 30의 비율로 존재하는 리포좀.
제 13 항에 있어서, 백금 착물 및 인지질이 약 1 : 15의 비율로 존재하는 리포좀.
제 13 항에 있어서, 다박막층인 리포좀.
제 13 항에 있어서, 단일박막층인 리포좀.
메탄올 또는 클로로포름에는 사실상 가용성이며, 물에는 사실상 불용성인 하기 일반식의 백금(II) 4-배위 착물의 제조방법에 있어서, 설페이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노알칸-백금(II)착물을 소수성 라디칼 작용기를 갖는 카복실레이토 1가 음이온의 알칼리토금속염과 반응시킴으로써 백금(II) 4-배위착물을 제조함을 특징으로 하는 방법.

상기 식에서, R₁,R₂,R₃및 R₄는 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
제 36 항에 있어서, 반응이 수성 조건하에서 수행되는 방법.
제 36 항에 있어서, 알칼리토금속의 설페이트염을 여과에 의해 제거하고, 백금 착물을 결정화 또는 증발에 의한 용매 제거에 의해 수득하는 방법.
제 36 항에 있어서, 증발을 45 내지 50℃에서 감압하에 수행하는 방법.
제 36 항에 있어서, 백금 착물을 추가로 건조제상에서 건조시키는 방법.
제 40 항에 있어서, 건조제가 포스포러스펜톡사이드인 방법.
제 36 항의 방법에 의해 제조된 설페이토-트랜스-R,R-1,2-디아미노알칸-백금(II)착물.
(a) 메탄올 또는 클로로포름에는 사실상 가용성이며 물에는 사실상 불용성인 하기 일반식의 백금(II) 4-배위 착물을 제조하고, (b) 상기 착물을 인지질과 함께 소수성 용매내에서 약 1 : 15의 비율로 혼합시킨 후, (c) 소수성 용매를 증발시켜 인지질 및 착물의 막을 생성시키거나 상기 혼합물을 동결건조시켜 분말을 형성시키고, (d) 상기 막 또는 분말을 수성 용액에 분산시켜 리포좀을 생성시킴을 특징으로 하는 리포좀의 제조방법.

상기 식에서, R₁,R₂,R₃및 R₄는 제 1 항에서 정의한 바와 같다.
제 43 항에 있어서, 인지질이 필수적으로 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 방법.
제 43 항에 있어서, 단계(b)에서 착물을 인지질 및 콜레스테롤과 혼합시키는 방법.
제 44 항에 있어서, 포스파티딜글리세롤이 필수적으로 디미리스토일포스파티딜글리세롤로 이루어지고, 포스파티딜콜린이 필수적으로 디미리스토일포스파티딜콜린으로 이루어지는 방법.
제 46 항에 있어서, 디미리스토일포스파티딜글리세롤 및 디미리스토일포스파티딜콜린이 약 1 : 10 내지 10 : 1의 비율로 존재하는 방법.
제 46 항에 있어서, 디미리스토일포스파티딜글리세롤 및 디미리스토일포스파티딜콜린이 약 3 : 7의 비율로 존재하는 방법.
제 38 항에 있어서, 리포좀이 착물 및 인지질을 약 1 : 10 내지 약 1 : 30의 비율로 함유하는 방법.
제 43 항에 있어서, 리포좀이 착물 및 인지질을 약 1 : 15의 비율로 함유하는 방법.
제 43 항에 있어서, 리포좀이 다박막층인 방법.
제 43 항에 있어서, 단일박막층 리포좀을 제조하기 위해 리포좀을 음파진동시키는 단계를 추가로 수행하는 방법.
제 43 항에 있어서, 단계(c)에서 회전식 증발을 수행하는 방법.