KR860001887B1

KR860001887B1 - 글루타민 유도체의 제조방법

Info

Publication number: KR860001887B1
Application number: KR1019810004352A
Authority: KR
Inventors: 히로아끼 무나가따; 마끼오 고바야시; 가즈오 와가쓰마; 시계루 사또; 마꼬도 쓰루후지; 싱고 마쓰무라; 히로시 에노모또
Original assignee: 미쓰 비시 가세이 고오교 가부시끼가이샤; 스즈끼 에이지; 닛뽕 신야꾸 가부사끼가이샤; 모리시따 히로무
Priority date: 1980-11-12
Filing date: 1981-11-12
Publication date: 1986-10-24
Also published as: DE3164463D1; DK159149C; DK500081A; KR830008549A; EP0052296A1; CA1190240A; DK159149B; EP0052296B1; US4439448A

Abstract

내용 없음.

Description

글르타민 유도체의 제조방법

제1,4,8,15,17 및 20도는 실시예의 생성물의 스펙트럼을 나타내는 그래프이며,

제2,3,5,6,7,9,10,11,12,14,16,18,19 및 21∼23도는 실시예의 생성물의 IR스펙트럼을 나타내는 그래프이다.

본 발명은 면역조절작용을 갖는 신규한 글루타민 유도체에 관한 것이다.

본 발명자들은 압서 몇가지의 글루타민 유도체가 면역 억제작용을 갖고 있음을 발견(일본 특개소 55-36426, 특개소 55-36453 및 특개소 55-36454호 공보 참조)하였으며, 더욱 예의 연구를 거듭한 결과, 글루타민 유도체가 면역 조절작용을 갖고 있음을 발견하여 본 발명에 도달하였다.

즉, 본 발명의 요지는 일반식(I)

[식중, X는 (i) 식(CH₂)_n(n은 14의 정수를 나타낸다)로 나타내는 알킬렌기 또는 비닐렌기 또는 (ii)

(R¹,R²은 동일 또는 수소원자 또는 저급알킬기를 나타내며, R¹또는 R²는 적어도 하나는 저급알킬기를 나타낸다)을 나타내며, Z은 수소원자 또는 저급알킬기를 나타낸다.]로 나타내는 글루타민 유도체 및 이들의 무독성염에 관한 것이다.

다음에 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명에 있어, 면역조절작용이란, 면역억제작용 및 면역작용(부활, 촉진)의 양면의 작용을 뜻한다.

본 발명에 관한 화합물은 전기 일반식(I)로 나타내는 것과 이들의 무독성염이다. 이와같은 화합물로서는 예를들면, 일반식(II)

[식중 X은 일반식(I)에 있어서와 같은 뜻을 나타낸다.]로 나타내는 글루타민 유도체 및 이들의 무독성염 및 일반식(III)

[식중, X은 일반식(I)에 있어서와 같은 뜻을 나타내며, Y은 저급알킬기를 나타낸다.]로 나타내는 글루타민 유도체 및 이들의 무독성염이다.

일반식(III)에 있어, 기 Y를 위한 저급알킬기는 1∼4개의 탄소원자를 갖는 알킬기이며, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 부틸기, iso-프로필기, sec-부틸기, tert-부틸기이다.

일반식(I)에 있어, 글루타민 부분은 L-, DL-및 D-체의 어느것도 무방하다.

일반식(I)로 나타내는 글루타민 유도체로서는 예를들면 다음에 나타내는 것을 들 수 있다.

그리고, 이상의 구조식 중에서는 간편하게 하기 위하여 글루타민산 잔기

을 “Glu”라 생략하였다.

또, 다음에 있어서는 간편하게 하기 위하여 각각의 화합물을 표기의 번호로써 예를들면, “화합물(1)”과 같이 나타낼 수가 있다.

이들 L-, D-또는 DL-글루타민 유도체의 무독성 염으로서는 예를들면, 나트륨, 칼륨, 칼슘 등의 알칼리 금속, 알칼리 토류금속 등의 무기염기와의 염, 프토카인, N,N'-디벤질에틸렌디아민 등의 유기염기와의 염 : 염산염, 황산염, 푸마트산염, 말레인산염, 개 미산염 산부가염등의 약제로서 허용될 수 있는 염들 들수 있다.

다음에 본 발명에 관한 화합물의 제조법에 대하여 설명한다. 제조법의 설명은 편의상 일반식 (II)로 나타내는 화합물(이하“본 발명의 에스테르”라 한다)로 나누어 설명한다.

본 발명의 카르본산은 여러가지의 합성법에 의하여 제조할 수. 있다. 예를들면, 본 발명의 에스테르로부터 통상의 에스테르 가수분해에 의하여 용이하게 얻을 수가 있다.

또, 본 발명의 에스테르는 상법에 의하여 제조할 수가 있다.

예를들면, 본 발명의 에스테르는 아미노기를 보호한 글루타민산 무수물을 일반식(IV)

[식중, X 밍 Y는 일반식 (III)에 있어서와 같은 뜻으로 한다.]로 나타내는 아닐린 유도체와 반응시키고, 이어서 반응 생성물로부터 아미노기의 보호기를 제거함으로써 얻을 수가 있다.

또, 본 발명의 에스테르의 제조법으로서는 예를들면, α-카르복실기 및 α-아미노기를 보호된 글루타민산을 활성화의 존재하에서 일반식(VI)으로 나타내는 유도체와 반응시키든지, α-카르본산기 및 α-아미노기를 보호된 글루타민산의 γ-카르복실기의 활성 유도체를 전기 아닐린 유도체와 반응시키고, 이어서 반응 생성물로부터 아미노기, 카르복실기의 보고법을 제거함으로써 얻을 수가 있다.

활성화제 또는 반응성유도체로서 통상의 펩티드 합성시에 사용할 수 있는 것을 사용할 수가 있다.

예를들면, 디시클로헥실카그보디아미드, 카르보닐이미다졸 등의 활성화제, 혼합산무수물, 활성에스테르 등의 반응성 유도체를 들 수 있다.

아미노기의 보호기로서는 뒤에 온화한 조건으로 제거할 수 있는 기로서 통상의 펩티드 합성에 사용되는기, 예를들면 취화수소 또는 접촉환원으로 제거할 수 있는 벤질옥시 카르보닐기, 히드라진으로 제거할 수 있는 프타릴기, 약산성조건으로 제거할 수 있는 tert-부톡시카르보닐기, 포트밀기 등을 들 수 있다.

카르복실기의 보호기로서는 접촉원에의 하여 제거되는 벤질 및 그 유도체의 에스테르, 일칼리에 안정하고 산가수분해에 의하여 제거된는 제3부틸 에스테르 등을 들수 있다.

상기한 본 발명의 화합물의 제조법은 다음의 반응식으로 나타낸다.

상기 식중, R³은 수소화분해 또는 분해로써 제거될 수 있는 카르복실 보호기이며, R⁴은 같이 수소화분해 또는 산분해로써 제거될 수 있는 아미노 보호기이며,

은 카르복실기 또는 카르복실기의 활성화 유도기 이다.

화합물 (VII)의 수소화 분해는 통상 반응에 분활성인 용매중(예를들면, 물, 알콜, 초산 등의 지방산 : THF, 디옥산, 이소프로필에테르 등의 에테르 ; 초산에 틸 등의 에스테르 또는 이들의 혼합들, Pt,Pd- 특, Pd 카본 등의 수소화 촉매의 존재하에 실온으로부터 용매의 온도에 있어 수소압, 상압으로부터 50kg/cm²G의 압력하에서 30분에서 24시간 행해진다.

그리고, 상기 반응식에서 나타내는 반응의 반응조건은 다수의 문헌에 의하여 공지되며, 당업자에 있어는 주지이다.

본 발명의 화합물은 다음의 반응식에 따라서도 합성된다.

상기 반응식에 있어, 일반식 (VI)로 나타내는 화합물은 일반식 (V)로 나타내는 아미노기를 보호한 글루타민산 무수물을 일반식 (VI)로 나타내는 아닐린 유동체와 반응시킴으로서 얻어진다. 반응 용매로서는 테트라히드로푸란, 디옥산, 아니솔등의 에테르 ; 초산에틸 등의 초산에스테르 ; 클로로포름, 1,2-디클로에탄 등의 할로겐함유용매 ; 아세트니트릴 등을 들 수 있다.

이 반응에서 사용되는 화합물 (VI) 및 (V)의 량은 통상 등몰이며, 반응온도는 실온에서 용매의 비정, 바람직하기는 60℃에서 80℃,, 반응시간은 30분에서 10시간, 바람직하기는 1시간에서 3시간이다.

얻어진 화합물 (VI)로 나타내는 화합물을 화합물 (VI)을 히드라진으로 처리함으로써 얻어진다.

이 공정에서 사용되는 히드라진의 량은 화합물 (VI)에 대하여 몰비로서 1.0배 몰에서 3.0배몰, 바람직하기는 1.2배몰∼1.5배몰이다. 반응온도는 실온에서 사용하는 용매의 비점, 바람직하기는 60℃∼80℃이며, 반응시간으로서는 30분에서 10시간, 바람직하기는 1.5시간에서 4시간이다.

이와같이 하여 얻어진 화합물 (I)은 탈피한 보호기로부터 유도되는 화합물과 함께 여취한 후 염산으로써 화합물 (I)만을 추출하고, 추출액이 강암모니아수를 가하여 석술한 결정을 여과, 수세, 건조함으로써 분리 정제한다.

N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민의 제조에 대하여 2가지의 합성법을 다음에 반응식으로써 나타낸다.

또 N-4(1-에톡시카르보닐-n-프로필)페닐-L-글루타민의 정조에 대하여 합성법의 예를다음에 나타낸다.

원료의 일반식 (IV)로 나타내는 아닐린 유도체는 여러가지 합성 루트에 의하여 합성할 수가 있으며, X을 2가지 경우로 나누어 다음에 합성루트의 예를 나타내어 참고에 지한다.

(1) X가 (CH₂)_n도 나타내는 알킬기 또는 비닐렌기의 경우,

환원은 팔라듐, 팔라듐혹 또는 팔라고카본을 사용하여 접촉 수첨을 행하든지 아니면 철분/NH₄Cl에 의하여 환원등이 적용된다.

에스테르화는 염산, 환산 또는 P-톨로엔술폰산의 존재하에 원료알콜과 가열하여 필요하다면 벤젠등의 공비탈수제와 공존시켜서 공비탈수 함으로써 용이하게 에스테르를 얻을 수가 있다.

의 철분/NH₄Cl에 의한 환원에 의하여 용이하게 얻을 수가 있다.

[단, R은 메틸 또는 에틸기]

상기 (i) 법의 원료가 되는 디에틸 2-알킬-2-(4-니트로페닐) 말로네이트는 2-알킬말로네이트를 N,N-디메틸포름중에서 강염기 예를들면, 수소환나트륨 등을 작용시키고, 이어서 P-할로니트로벤젠을 작용시켜서 얻을 수가 있다.

에스테르의 가수분해는 물 또는 알콜(메탄올, 에탄올등) 또는 이들의 혼합용매중에서 서수산화나트륨 또는 수산화칼륨 등을 작용시켜서 행할 수가 있다.

α-알킬-니트로페닐초산은 디에틸 2-알킬-2-(4-니트로페닐) 마로네이트를 과잉의 수산화나트륨 또는 수산화칼륨 등과 함께 물 또는 알콜(메탈올, 에탄올등) 또는 이들의 혼합용매 중에서 가열함으로써 또는 2-알킬-2-(4-니트로페닐) 말톤산을 적당한 용매 예를들면 알콜(메탄올, 에탄올 등), 벤젠, 톨루엔 중에서 염산, 환산, P-톨루엔술폰산과 가열함으로써 얻을 수가 있다.

에스테르화는 염산, 황산 또는 P-톨루엔술폰산의 존재하에 에탄올과 가열함으로써 얻을 수가 있다.

나트로기의 환원은 팔라듐 또는 팔라듐흑을 사용하여 접촉수첨을 행하든지 아니면, 철분/NH₄Cl에 의한 환원등이 적용된다.

또, 상기 (ii)법의 원료가 되는 에틸 2-메틸-2-니트로페닐프토피오네이트는 니트로페닐초산에틸을 N,N-디메틸포름아미드중 강염기, 예를들면, 수소화나트륨등을 작용시키고, 이어서 과잉의 옥화메틸을 작용시켜서 얻을 수가 있다.

니트로기의 환원은 팔라듐 또는 팔라듐등을 사용한 접촉수첨이든지 아니면 철분/NH₄Cl에 의한 환원등이 적용된다.

이들 방법으로써 얻어진 목적의 글루타민 유도체는 유기화한의 상법에 따라서 재경절, 이온교환처리, 크로마토그라피처리, 활성탄처리 등에 의하여 정제할 수가 있다.

본 발명의 화합물은 면역반응에 기인하는 각종 질환의 치료 및 예방에 사용하는 면역 조절제로서 유용하다.

본 발명의 화합물을 포함하는 면역조절제는 1종 또는 수종의 본 발명의 화합물만으로써 이루어져도 좋지만, 상법에 의하여 보조제와 함께 약제로서 허용될 수 있는 담체와 혼합하여 예를들면, 경구투여의 경우는 정제, 세립제, 분제, 과립제, 캅셀제, 시럽제, 비경구투여의 경우는 연고, 도포제, 좌제, 주사제, 기타의 일반적 의약제제의 형태로 사용된다.

그 조성은 투여경로나 투여계획 등에 따라서 결정된다. 투여량은 환자의 연령, 건강상태, 체중, 증상의 경도, 동시처리가 있으면 그 종류, 처치빈도, 소망의 효과의 성질 등에 따라서 결정된다.

치료량은 일반적으로 비경구 투여일때 0.1∼00mg/kg·일, 경구투여 일때 1∼1000mg/kg 일이다.

본 발명의 화합물을 포함하는 면역 조절제는 예를들면, 다른 면역억제제, 면역촉진제 등을 함유할 수가 있으며, 또 이들과 병용할 수도 있다.

본 발명의 화합물은 독성도 낮고 면역조절제로서 면역반응에 기인하는 각종 질환의 치료 및 예방에 유용하다.

본 발명의 화합물을 포함하는 면역 조절제는 예를들면, 다음의 질환에 사용된다. 만성관절류마티, 전신성에리트마티디스(SLE), 코라겐병 등의 자지 면역환자, 천식등의 알렐루기성 질환자, 세균감염증 등의 치료제로서 사용될 수가 있다.

일본 노동안전위생법제정등의 6균를 피험균주로서 사용하여 화합물 (2)(∼100㎍/plate)의 돌연변이 후성 시험을 행하였으나 실험의 범위내에서는 돌연변이 후성음성으로 판정되었다.

다음에 실시예 및 참고예를 들어 본 발명을 더 상세하게 설명하겠으며, 본 발명은 그 요지를 넣지 않는한 다음의 실시예에 의하여 하등 한정을 받는것은 아니다.

[ 참고예 1 ]

N-아미노페닐초산을 15% 염산-에탄올 중에서 환류하고, 에탄올 유거후 초산에틸로써 추출하여 수세포하중조수세정, 수세, 건조한다. 초산에틸을 유거하여 P-아미노 페닐초산에틸에스테르를 얻었다.

같은 방법에 의하여 목적의 알콜-염산으로부터 메틸, n-프로필, n-부틸에스테르를 얻었다.

m-및 O -니트로페닐초산을 15% 염산-에탄올로써 에틸에스테르화 하고, 에탄올중 팔라듐 촉매에 의하여 수소첨가하여 m-및 O -아미노페닐초산 에틸 에스 테르를 얻었다. 같은 방법에 의하여 에틸-4-(P-아미노페닐) 부틸레이트를 얻었다.

P-니트로계피산을 같은 방법에 의하여 에틸에스테르화하고, 한편으로 팔라듐 촉매에 의하여 수소첨가하여 에틸-3-(P-아미노페닐) 프로피오네이트를 얻었다.

한편, 철분-염화-염화안본-물-메탄올중 환류하여 에틸-P-아미노신나메이트를 얻었다.

[실시예 1]

N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민

(가) 테트라히드로푸란 250mι와 N,N-메틸포름아미드 250mι의 용액중에 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 74.28g(0.2몰)와 트리에틸아민 28mι(0.2몰)을 가하고, 빙냉 교반하여 클로로탄산이소부틸 26.4mι(0.2몰)을 적하하여 15분 교반한다.

테트라히드로푸란 50mι와, N,N-디메틸포름아미드 50mι에 P-아미노페닐초산에틸 에스테르 35.8g(0.2몰)을 용해한 용액을 가하여 빙냉하에 30분, 실온에서 8시간 교반한다.

반응용매를 감압한 용액을 가하여 빙냉하에 30분, 실용에서 8시간 교반한다.

반응용매를 감압 유거하고 잔사에 초산에틸 1200mι와 물 200mι을 가하고, 수층을 분리하고 2N염산, 포화중소주, 포화식염수로써 세정하고 초산에틸층을 무수황산마그네슘으로써 건조후 초산에틸을 감압 유거한다.

잔사를 초산에틸-n-헥산으로부터 재결정하여 중간체를 얻는다. 96.16g(수율 90.7%).

얻어진 중간체 53.26(0.1몰)에 에탄올 1600mι을 가하고, 가열 용해 후 팔라듐블랙 0.5g을 가하고, 60℃로써 상압 수소첨가하여 보호기를 이탈한다.

팔라듐을 열시여과하고 여액을 활성탕처리후 농축하고 석출한 결정을 여취하고, 빙수로써 세정후 건조하여 N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 28.57g(수율 93%)을 얻었다.

융점 179.8∼180.5℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₅H₂₀N₂O₅계산치 58.43 6.54 9.09

실험치 58.59 6.60 9.23

[α]₂₅ ^D=＋29.5⁰(c=1 2규정정염산)

생성물의 NMR 스펙트럼을 제1도에, IR스펙트럼을 제2도에 나타냈다.

그리고, NMR스펙트럼은 트리플루오로초산중 실온에서 테트라메틸실란을 기준으로 하여 측정하고, IR스펙트럼은 취화칼륨중에서 측정하였다(다음의 실시예에 있어도 같다.)

(나) 테트라 히드로푸란 100mι중에 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 7.43g(0.02몰)와 P-아미노페닐 초산에틸에스테르 3.58g (0.02몰)을 (가하고 빙냉교반하에 옥시염화인 2.2mι(0.024몰)을 가하여 15분 교반한다.

테트라히드로푸란 30mι에 트리에틸아민 6.4mι(0.064몰)을 가한 용액을 빙냉하 25분에서 적하하고, 1신간 교반 후 실온에서 3시간 교반한다.

테트라히드로푸란을 감압 유거후 초산에틸을 가하고, 물, 2N염산, 포화중조수, 포화식염수로써 세정 후 초산에틸층을 무수황산 마그네슘으로써 건조하여 초산에틸을 감압 유거한다. 잔사를 초산에틸-n-헥산으로써 재결정하여 중간체 6.5g(수율 63%)을 얻다.

(가) 법과 같은 방법에 의하여 보호기를 이탈하여 N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 3.4g(수율 90%)을 얻다.

(다) 테트라히드로푸란 200mι에 N-프타릴-글루타민산 무수물 5.18g(0.02몰) 및 에틸 P-아미노페닐 아세테이트 3.58g(0.02몰)을 가하고 가열환류 3시간 후 테트라히드로푸란을 감압 유거한다.

잔사에 에탄올 200mι와 80중량% 포수히드라진 1.33mι(0.022몰)을 가하고, 실온에서 1시간 교반하고 가열 환류 3시간 후 에탄올을 감압 유거하고 잔사에 2N 염산 300mι을 가하고, 교반 후 불용물을 제거하여 농암모니아수로써 중화한다.

석출결정을 여취하고 빙수로써 세정 후 건조하여 N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 3.4g(수율 55%)을 얻다.

융점 : 179.4∼180.0℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₅H₂₀N₂O₅으로서의 계산치 58.43 6.54 9.09

[α]_D ²⁶℃=＋16.6(c=1 0.5 규정탄산나트륨)

생성물의 NMR스펙트럼을 제4도에, IR스펙트럼을 제5도에 나타냈다.

[실시예 3]

N-(4-메톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민

실시에 1의(가)법과 같은 방법에 의하여, N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 11.14g(0.03몰)와, P-아미노 페닐초산메틸에스테르 4.96g(0.03몰)로부터 중간체 13.38g(수율 88%)을 얻다.

테트라히드로푸란 500mι, 메탄올 200mι, 물100mι에 용해하고, 팔라듐흑 0.5g을 가하고, 상압수소첨가하여 N-(4-메톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 6.09g(수율 79%)을 얻다.

융전 183.3∼184.2℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₄H₁₃N₂O₅으로서의 계산치 57.13 6.16 9.52

[α]_D ²⁵=＋29.2℃(c=1 2규정염산)

생성물의 IR스펙트럼을 제6도에 나타냈다.

[실시예 4]

N-(4-n-프로필옥시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민

실시예 1의 (가)법과 같은 방법에 의하여 N-카르보벤족시-L-글루타민산-벤질 에스테르 11.14g(0.03 . 몰)와, P-아미노 페닐초산 n-프로필에스테르 5.8g(0.03몰)로부터 14.05g(수율 88%)을 얻다.

테트라히드로푸란 500mι, 메탄올 200mι, 물 100mι에 용해하고 팔라듐흑 0.5g을 가하고 상압수소첨가하여 N-(4-n-프로필옥시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 7.53g(수율 89%)을 얻다.

융점 177.6 178.9℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₆H₂₂N₂O₅으로서의 계산치 59.61 6.88 8.69

실험치 59.88 6.99 8.52

[α]₂₅ ^D=＋22.8°(c=1 2규정염산)

생성물의 IR스펙트럼을 제7도에 나타냈다.

[실시에 5]

N-(4-n-부틸옥시카르보닐메틸페닐-L-글루타민

실시에 1의(가)법과 같은 방법에 의하여 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 11.14g(0.03몰)와 P-아미노페닐초산 n-부틸에스테르 6.21g(0.03몰)로부터 중간체 15.0g(수율 92%)을 얻다.

테트라히드로푸란 500mι, 메탄올 200mι, 물 100mι에 용해하고, 팔라듐흑 0.5g을 가하고, 상압수소첨가하여 N-(4-n-부틸옥시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 5.72g(수율 62%)을 얻다.

융점 177.0 179.2℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₇H₂₄N₂O₅으로서의 계산치 60.70 7.19 8.23

실험치 60.61 7.11 8.44

[α]_D ²⁵=＋25.4°(c=1 2규정염산)

생성물의 NMR스펙트럼을 제8도에, IR스펙트럼을 제9도에 나타냈다.

[실시예 6]

N-(3-에톡시카르보닐메틸페닐0-L-글루타민

실시예 1의 (가)법과 같은 방법에 의하여 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 11.14g(0.03몰)와 m-아미노페닐에틸 에스테르 4.96g(0.03몰)로부터 중간체 12.95g(수율 81%)을 얻다.

테트라히드로푸란 500mι, 에탄올 200mι, 물 100mι에 용해하고 팔라듐흑 0.3g을 가하고, 상압수소첨가하여 N-(3-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 6.58g(수율 89%)을 얻다.

융점 175.5 176.2℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₅H₂₀N₂O₅으로서의 계산치 58.43 6.54 9.09

실험치 58.41 6.46 9.01

[α]_D ²⁵=26.4°(c=1 2규정염산)

생성물의 IR스펙트럼을 제10도에 나타냈다.

[실시예 7]

N-(2-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민

실시예 1의 (가)법과 같은 방법에 의하여 N-카그보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 11.14g(0.03몰)와 0-아미노페닐에틸에스테르 4.96g(0.03몰)로부터 중간체 14.19g(수율 88%)을 얻다.

테트라히드로푸란 200mι, 에탄올 200mι, 물 100mι에 용해하고 팔라듐 0.3g을 가하고, 상압수소첨가하여 N-(2-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 6.85g(수율 84%)을 얻다.

융점 171.2 171.8℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₅H₂₀N₂O₅으로서의 계산치 58.43 6.54 9.09

실험치 58.16 6.31 8.09

[α]_D ²⁵=21.6℃ (c=1∼2규정염산)

생성물의 IR스펙트럼을 제11도에 나타냈다.

[실시예 8]

N-[4-(2-에톡시카르보닐에틸)페닐]-L-글루타민

실시예 1의 (가)법과 같은 방법에 의하여 N-카르보벤족시-L-그루타민산-α-벤질에스테르 11.14g(0.03몰)와 p-아미노페닐프로피온산에스테르 5.8g(0.03몰)로부터 중간체 12.8g(수율(78%)을 얻다.

테트라히드로푸란 200mι 에탄올 200mι, 물 100mι에 용해하고 팔라듐흑 0.3g을 가하고 상압 수소첨가하여 N-4-(2-에톡시카르보닐에틸)페닐-L-글루타민 7.09g(수율 92%)을 얻다. m.p 179.5∼180.6℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₆H₂₂N₂O₅으로서의 계산치 59.61 6.88 8.69

실험치 59.63 6.68 8.02

[α]_D ²⁵=＋25.8°(c=1∼2규정염산)

생성물의 IR스펙트럼을 제12도에 나타내었다.

[실시예 9]

N-[4-(3-에톡시카르보닐-n-프로필)페닐]-L-글르타민

실시예 1의 (가)법과 같은 방법에 의하여 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α벤질에스테르 11.14g(0.03몰)와 에틸팔라아미노페닐부티레이트 6.22g(0.03몰)로부터 중간체 14.7g(수율 87%)을 얻다.

테트라히드로푸란 200mι, 에탄올 200mι, 물 100mι에 용해하고 팔라듐흑 0.3g을 가하고 상압 수소 첨가 하여 N-[4-(3-에톡시카르보닐-n-프로필)페닐]-L-글루타민 8.6g(수율 98%)을 얻다. m.p. 179.0∼180.1℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₇H₂₄N₂O₅으로서의 계산치 60.70 7.19 8.33

실험치 60.37 6.99 8.55

[α]_D ²⁵=＋24.0°(c=1∼2규정염산)

생성물의 NMR스펙크럼을 제13도에 IR스펙트럼을 제14도에 나타냈다.

[실시예 10]

N-[4-(2-에톡시카르보닐비닐)메틸]-L-글루타민

실시예 1의 (다)법과 같은 방법에 의하여 프타릴-L-글루아민산 무수물 25.9g(0.1몰)와 에몰 p-아미노신나메이트를 반응 시킨 후 히드라진 처리하여 N-[4-(2-에톡시카르보닐비닐)페닐]-L-글루타민 11.3g(수율 35%)을 얻다. m.P. 192.5∼193.3℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₆H₂₀N₂O₅으로서의 계산치 59.99 6.29 8.75

실험치 59.71 6.14 8.91

[α]_D ²⁵=＋30.3°(c=1∼2규정염산)

생성물의 NMR스펙트럼을 제15도에 IR스펙트럼을 제16도에 나타냈다.

[실시예 11]

N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민염산염

N-(4-에톡시타르보닐메틸페닐)-L-글루타민 5.0g(0.016몰)을 물 100mι와 에탄올 200mι의 혼합용매가 가열 용해하고 21중량%의 염화수소-에탄올 용액 10mι을 가하여 용매를 감압유지하다. 잔사를 에탄올에 용해하고 활성탄 처리 후 에테르를 가하여 결정화 시킨다. 석출 결정을 흡인 여과하고 감압하에 건조하여 N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-L-글루타민 염산염 2.6g(0.0075몰, 수율 47%)을 얻다.

m.p 154.8∼155.6°

원소분석(중량 %) C H N Cl

C₁₅H₂₁N₂O₅C₁으로서의 계산치 52.25 6.14 8.12 10.28

실험치 52.42 5.60 7.81 10.94

[실시예 12]

n-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-d-글루타민

실시예 1의 (다) 법과 같은 방법에 의하여 프타릴-D-글루타민산무수물 12.96g(0.05몰)과 에틸-p-아미노페닐아세테이트 8.96g(0.05몰)을 반응 시킨 후 히드라진 처리하여 N-(4-에톡시카르보닐메틸페닐)-D-글루타민 8.79g(수율 57%)을 얻다.

m.p 17.2∼177.2℃

원소분석(중량 %) C H N

C₁₅H₂₀N₂O₅으로서의 계산치 58.43 6.54 9.09

[α]_D ²⁶=-28.0°(c=1∼2규정염산)

생성물의 NMR스펙트럼을 제7도에, IR스펙트럼을 제18도에 나타냈다.

[참고예 2]

에틸-2-(4-아미노페닐)-n-부티레이트

50% 수소화 나트륨 11g을 n-헥산으로써 세정후 100mι의 N,N-디메틸포름아미드에 현탁하고 빙냉하 교반한다. 이에디에틸에틸말로네이트 37.6g(0.2몰)을 적하하고 수소의 발생이 멈출 때까지 교반하고 이어서 p-클로로니트로벤젠 31.51g(0.2몰)을 50mι의 N,N-디메틸포름아미드에 용해한 용액을 적하한다. 적하후 유용상 100℃로써 9시간 가열한 후 N,N-디메틸포름아미드를 감압유거하고 잔사를 초산에틸로써 추출하고 초산에틸층을 5%염산, 포화식염수로써 세정후, 황상마그네슘으로써 건조한다. 초산에틸을 감압유거하고 잔사를 벤젠-n-헥산(1대 1)의 용매계로써 실리카겔크로마토그라피를 행하여 디에틸 2-에틸-2-(4-니트로페닐)말로네이트 48.6g(0.157몰)을 얻다. (수율 79%)

디에틸-2-에틸-2-(4-니트로페닐) 말로네이트 37.18g(0.12몰)을 150mι의 에탄올에 용해하고 30.41g(0.76몰)의 수산화나트륨을 100mι의 물에 용해한 용액을 가하고 3시간 유욕상에서 가열환류 한 후 용매를 감압유거하고 잔사를 물 200mι에 용해하고 300mι의 에테르로써 추출하고 에테르층을 버리고 수층을 농염산으로써 산성으로하여 에테르 추출하고 에테르층을 포화식염수로써 세정한후 황산 마그네슘으로써 건조한다.

에테르를 감압유거하고 17.25g(0.083몰)의 2-(4-니트로페닐)-n-부티르산을 얻다. (수율 69%)

16.71g(0.08몰)의 2-(4-니트로페닐)-n-부티르산을 250mι의 에탄올레 용해하고 농황산 15mι을 가하고 3시간반 유욕상에서 가열 환류한 후 에탄올을 감압 유거하고 포화중조수로서 중화후 초산 에틸로써 추출하고 초산에틸층을 포화 식염수로써 세정하고 황산나트륨으로써 건조한다. 초산에틸를 감압 유거한 후 벤젠-n-헥산 1대 1의 용매계로서 실리타겔크로마토그래피를 행하고 에틸 2-(-니트로페닐)-n-부티레이트 9.13g(0.0385몰)을 얻다. (수율 48%)

9.13g(0.0385몰)의 에틸 2-(4-니트로페닐)-n-부티레이트를 150mι의 에탄올에 용해하고 팔라듐흑 촉매로써 수소첨가하여 7.51g(0.0363몰)의 에틸 2-(4-아미노페닐)-n-부티테이트를 얻다. (수율 94%)

[참고예 3]

에틸 2-(4-아미노페닐)프로피오네이트

참고예 2와 같은 방법에 의하여 p-클로로니트로벤젠 25.0g(0.159몰)와 메틸말론산디에틸 29.08(0.617몰)로부터 35.28g(0.1196몰)의 2-메틸-2-(4-니트로페닐) 말론산디에틸을 얻어(수율 75%) 이를 참고예 2와 같은 방법에 의하여 가수분해, 탈산화하고 에탄올-황산에 의하여 에스테르화 하고 팔라듐 촉매로써 환원하여 에틸 2-(4-아미노페닐)프로피오네이트 7.86g(0.041몰)을 얻다. (수율 26%)

[참고예 4]

에틸 2-(4-아미노페닐)-2-메틸프로피오네이트

50% 수소화나트륨 10.56g(0.22몰 상당)을 n-헥산으로써 세정후 N,N-디메틸포름아미드에 용해한 용액을 적하하여 30분간 교반한다. 이어서 옥화메틸 13.7mι(0.22몰)을 적하하고 빙냉하 1시간, 실온에서 2시간 교반한다. N,N-디메틸포름아미드를 감압 유거하고 초산에틸로써 추출하고 5%염산식염수로써 세정후 초산에틸층을 황산 나트륨으로써 건조한다. 초산에 틸을 감압유거하고 2-메틸-2-(4-니트로메틸)프로피온산에틸 20.33g(0.086몰)을 얻다. (수율 86%)

얻어진 에스테르 20.33g을 120mι의 에탄올에 용해하고 0.3g의 팔라듐흑 촉매로써 수소첨가한 후 팔라듐을 여과하고 에탄올을 감압 유거하고 잔사를 5%염산에 용해하고 초산에틸로써 세정한 후 수층을 탄산소다로써 중화하고 초산에틸로써 추출하고 초산에틸층을 황산나트륨으로써 건조한다. 초산에틸을 감압유기 후클로로포름을 용매로 하여 실리카겔크로마토그래피를 행하여 에틸 2-(4-아미노페닐)-2-메틸프로피오네이트 8.31g(0.04몰)을 얻다. (수율 47%)

[실시예 13]

N-4-(1-에톡시카르보닐-n-프로필)페닐-L-글루타민

테트라히드로푸란 150mι에 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 13.23g(0.0357몰)와 트리에틸아민 5mι을 가하고 교반하고 클로로탄산이소부틸 4.7mι을 적하하고 빙냉하 30분간 교반한다.

이에 7.38g(0.0357몰)의 에틸 2-(4-아미노페닐) 부리레이트를 10mι의 테느라히드로푸란에 용해한 용액을 적하하고 빙냉하 1시간, 실온에서 18시간 교반한다. 테트라히드로푸란을 감압유거하고 잔사를 초산에틸로써 추출하고 초산에틸층을 포화중소수, 5%염산 포화식염수로써 세정한 후 황산나트륨로써 건조한다. 초산에틸을 감압유거하고 잔사를 초산에틸-n-헥산으로써 재결정하여 중간체 12.99g(0.0232)을 얻다. 수율 65%)

중간체 12.98g을 에탄올 200mι에 용해하고 팔라듐흑 0.3g을 가하고 수소첨가한 후 팔라듐을 여과하고 에탄올을 감압 유거하고 잔사를 에탄올수로부터 재결정하여 N-A-(1-에톡시카르보닐-n-프로필) 페닐-L-글루타민 4.59g(0.0136몰)을 얻다(수율 38%)

융점 156.8∼157.0℃

원소분석 C₁₇H₂₄N₂O₅으로 하여

C H N

계산치 60.70 7.19 8.33

분석치 60.42 7.07 8.45

[α]_D ^27°=＋25.0°(2N-HCl)

스펙트럼(KBr)을 제19도에 나타냈다.

nmr스펙트럼(CF₃COOH)을 제20도에 나타냈다.

[실시예 14]

N-[4-(1-에톡시카르보닐-1-메틸-에틸)]페닐-L-글루타민

실시예 13과 같은 방법에 의하여 N-카르보벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 5.91g(0.0159몰)와 에틸 2-메틸-2-(4-아미노페닐) 프로피오네이트 3.3g(0.0159몰)로부터 중간체 4.84(0.0086몰)을 얻어(수율 54%) 이를 실시예 13과 같은 방법에 의하여 팔라듐흑 촉매로써 수소첨가함으로써 N-4-(1-에톡시카르보닐-1-메틸-에틸)페닐-L-글루타민 1.05g(0.0031몰)을 얻다(수율 36%).

융점 146.6∼148.5°

원소분석 C₁₇H₂₄N₂O₅으로 하여

C H N

계산치 60.70 7.19 8.33

분석치 60.40 6.60 8.59

스펙트럼(KBr)을 제21도에 나타냈다.

[α]_D ^27°=＋25.7°(2N-HCl)

[실시예 15]

N-4-(1-에톡시카트보닐에틸)페닐-L-글루타민

실시예 13과 같은 방법에 의하여 N-카르보닐벤족시-L-글루타민산-α-벤질에스테르 7.13g(0.0192몰)와 에틸 2-(4-아미노페닐)프로피오네이드 염산염 4.4g(0.0192몰)로부터 중간체 7.83g(0.0144몰)을 얻다. (수율 75%)

이를 실시예 13과 같은 방법에 의하여 팔라듐흑 촉매로써 수소첨가함으로서 N-4-(1-에톡시카르보닐에틸)페닐-L-글루타민 2.7g(0.0084몰)을 얻다. (수율 44%)

융점 157.4∼157°

원소분석 C₁₆H₂₂N₂O₅으로하여

C H N

계산치 59.62 6.88 8.69

분석치 59.31 6.86 8.57

스펙트럼(KBr)을 제22도에 나타냈다.

[α]_D ^27°=＋27.9°(2N-HCl)

[실시예 16]

N-4-(1-카르복시-n-프로필)페닐-L-글루타민 1.68g(0.005몰)을 메탄올 10mι에 현락하고 수산화나트륨 0.42g을 물 20mι에 용해한 용액을 가하고 실온에서 1시간 반 교반한 후 용매를 약반량 감압 유거하고 5%염산으로써 pH4로하여 석출한 결정을 여과하고 냉수로 수세후 감압 건조하여 N-4-(1-카르복시-n-프로필)페닐글루타민 1.116g(0.0038몰)을 얻다. (수율 75%)

융점 166.5∼167.0°

원소분석 C₁₅H₂₀N₂O₅으로하여

C H N

계산치 58.43 6.54 9.09

분석치 57.67 6.33 9.00

스펙트럼(KBr)을 제23도에 나타냈다.

[α]_D ^27°=＋24.0°(2n-HCl)

[시험예 1 급성독성]

약물을 50% 투인 80수용액에 현탁하고 새앙쥐(ddy20∼25g)에 경구 및 복강내에 표 1에 나타내는 용량을 투여한 투여후 7일째의 약물 처리한 새앙쥐의 사망수는 표 1에 나타낸다.

[표 1]

[시험예 2]

양적혈구로써 면역한 때의 새앙쥐 비장 중의 프라크 형성 세포에 미치는 영향

생앙쥐에 1×13³개 / 새앙쥐의 약적혈구를 정중 또는 복강내에 투여하여 면역하였다. 각군에 대하여 5마리의 새앙쥐를 사용하였다. 약물을 양적혈구 투여일로부터 연일 4일간, 경구 또는 복강내에 투여하였다. 4일째에 새앙쥐를 죽여서 비장중의 양적혈구에 대한 프라크 형성세포(PFC)와의 수를 카닝검의 변법인 등원등의 방법 1민역 실험 조작법 5권 p-147,1976년)에 의하여 측정하였다. 겨로가를 표 2에 나타냈다.

[표 2]

[시험예 3]

지연형 알레루기에 미치는 영향

새앙쥐(ddy25∼30g)의 우흐지장내에 1×10⁷/40μι가 되도록 조정한 양적혈구 μι을 주입하고 약물은 약적혈구 투여일도 포함하여 연일 4일간 복강내 또는 경구에 의하여 투여하였다.

양적혈구 투여일로부터 3일째에 좌후 지장내에 5×10⁸/40μι가 되도록 조정한 양적혈구 40μι을 투여하였다.

24시간 후 우후 지장 및 좌후 지장의 두께를 측정하였다. 부종을 좌후 지장의 두께와 우후지장의 두께의 차로서 나타냈다. 결과를 표 3에 나타냈다.

약물 투여군의 부종을 생리 식염수 투여군(대조)의 그것과 비교하여 %대조로 결과을 표 3에 나타냈다.

[표 3]

[시험예 4]

쥐 아쥬반트 관절염에 대한 작용

[실험법]

스프래그-돌리게 숫컷쥐(8주령) 10마리를 1군으로 하여 사용하여 우후지 발바닥 피내에 유동 팔라핀에 현탁한 미코박테리움 부티리움 0.6mg/0.05mι을 주사하였다. 주사 1일전부터 27일간 화합물(2)의 3,10 및 30mg/kg을 경구 투여함과 동시에 발바각 용적을 측정하였다.

[성적]

주사후 10일째경부터 소위 2차 염증이 발현한다. 이는 Adjuvant주사발 및 비주사발의 종장 및 이게꼬리, 4지 등의 결절로서 나타난다. 이들 2차 염증에 대하여 화합물(2)은 어느 용량에 있어도 억제작용을 나타냈다. 그러나 명확한 용량의 존성은 인정할 수 없었다. 또 Adjuvant관절염쥐에서는 2차 염증 발현에 따라 체중의 감소가 나타나는데 이체중감소에 대한 개선 경향이 화합물(2)투여군에 나타났다.

그런데 Adjuvant의 직접 작용에 의한 1차 염증에 대한 화합물(2)의 억제작용은 극히 경미하였다.

Claims

하기 일반식(VI)

[식중 X은 (1)식-(CH₂)_n(n은 1∼4의 정수를 나타낸다)로 나타내는 알킬기 또는 비닐렌기 (2)
(R¹,R²은 동일 또는 다른 수소원자 또는 저급 알킬기를 나타내며, R¹또는 R²중 적어도 하나는 저급알킬기를 나타낸다.)을 나타내며 Z은 수소원자 또는 저급 알킬기를 나타낸다]로 나타내는 화합물에 히드라진을 작용시킴을 특징으로 하는 하기 일반식(I)

[식중 X 및 Z은 상기 일반식(VI)에서 정의한 바와 같다]로 나타내는 글루타민 유도체의 제조방법
일반식(VII)

[식중 X은 (1)식 (CH₂)_n(n은 1∼4의 정수를 나타낸다)로 나타내는 알킬기 또는 비닐렌기 또는 (2)
(R¹,R²은 동일 또는 다른 수소원자 또는 저급 알킬기를 나타내며 R¹또는 R²중 적어도 하나는 저급 알킬기를 나타낸다)을 나타내며 Z은 수소원자 또는 저급알킬기를 나타내며 R³은 카르복실보호기를 나타내며 R⁴은 아미노 보호기를 나타낸다.]로 나타내는 화합물을 수소화분해(Hydrogenolysis) 또는 산분해(acid-olysis)함을 특징으로 하는 일반식(I)

[식중 X 및 Z은 상기 식중(VII)에서 정의한 바와 같다]로 나타내는 글루타민 유도체의 제조방법