KR820001203B1 - 데옥시나라신 항생제의 제조방법 - Google Patents

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데옥시나라신 항생제의 제조방법

본 발명은 항균제 및 항콕시듐제(anticoccidial agent)로 유용하고 반추동물의 사료 이용 효과를 증진시켜 주는 다음 구조식(I) 또는 (II)의 데옥시 나라신 항생제의 제조방법에 관한 것이다.

20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17 나라신으로 구성된 데옥시나라신 항생제 혼합물은 스트렙토마이세스 오레오 파시엔스 NRRL 11181을 수중에서 호기성 발효시킴으로써 생산된다. 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신은 크로마토그라피시켜 분리시킨다. 20-데옥시-나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 데옥시나라신 항생제 혼합물은 항균제 및 항콕시듐제이고, 또한 반추동물의 사료에 대한 이용효과를 증진시킨다.

수의용 신규 항생제의 개발이 계속적으로 요구되고 있으며, 그 예로, 콕시듐증은 가축산업에서 커다란 문제가 되고 있다. 콕시듐증은 아이메리아 또는 이소스포라의 하나 또는 그 이상의 종에 의한 감염으로 기인된다.

[참조 Lund and Farr in"Diseases of Poulty'", 5th ed, Biester and Schwarte, Eds, Iowa State University Press, Ames, Iowa, 1965, pp. 1056-1096). 콕시듐증으로 기인되는 경제적 손실이 크기 때문에 좀더 좋은 항콕시듐제의 개발이 요구되고 있다. 수의학 분야에서, 경제적측면에서 요구되는 또 다른 목적은 소 및 양과 같은 반추동물의 성장을 촉진시키는 것이다.

특히 사료의 이용효율을 증가시킴으로써 성장을 촉진 시키는 것이 그 목적이다. 반추동물의 사료중의 주된 성분(탄화수소)의 이용 작용 기전은 잘 알려져 있다. 즉, 동물의 장내의 미생물이 탄화수소를 분해하여 1당류로 전환시키고 이 전환된 1당류를 피루베이트 화합물로 전환시킨다. 피루베이트는 미생물학적 방법에 의해 대사되어 휘발성 지방산(VFA)으로서 알려진 아세테이트, 부티레이트 또는 프로피오네이트가 생성된다. 더욱 상세한 설명은 다음 참조문헌에 서술되어 있다.

[참조 ; Leng in "Physiology of Digestion and Metabolism in the Ruminant", Phillipson etal. Eds., Oriel Press, Newcastle-upon-Tyne, England, 1970, pp. 408-410.]

VFA이용의 비교효과는 메클로프에 의해 토론되었다. [참조 : "Feedstuffs", June 19, 1971, page 19; Eskeland et al. in J.An. Sci. 33, 282(1971): and Church et al. in "Digestive Physiology and Nutrition of Ruminants, "Vol.2, 1971 pp. 622 and 625.]

아세테이트와 부티레이트가 이용되기도 하지만 프로피오네이트는 보다 효윤적으로 이용된다. 더군다나, 이용할 수 있는 프로피오네이트가 거의 없을 때는 동물이 케톤 과잉증을 일으킨다.

그러므로, 동물이 탄화수소로부터 프로피오네이트를 다량 생산하도록 촉진하여, 탄화수소 이용 효율을 증진시키고 또한 케톤 과잉증의 발생을 감소시키는 화합물이 유용하다.

20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신은 신규의 폴리에테르계 항생제이다. 그들은 폴리에테르계 항생제인 나라신(항생제 A-28086인자 A; 미합중국 특허원 제4,035,481호 및 4,038,384호)과 가장 밀접한 관계가 있다. 이들 특허와 옥클비츠등 Biomed. Mass Spectrometry3, 272-277(1976)에 의해 제시된 나라신의 구조는 최근에 에이치. 세토등 [J.Antibiotics (6) 530-532(1977)]에 의해 확인되었는데 다음과 같다.

세토등에 따르면 나라신은 살리노마이신(살리노 마이신=4-데메틸-나라신)과 밀접한 관계가 있다. 더욱 최근에 제이. 더블유. 웨슬리등은 데옥시-(0-8)-살리노 마이신의 C-17에피머에 관나타나 보고 하였다.

참조 [J.Antibotics 30(7) 610-612(1977)]. 데옥시살리노마이신의 에피머가 본 발명의 데옥시나라신의 에피머와 유사하지만 데옥시 살리노마이신 에피머로부터 데옥시나라신 에피머를 제조하는 화학적 공정은 아직 미지이다.

본 발명은 적어도 2개의 개별 성분인 20-데옥시 나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신으로 구성된 데옥시 나라신 항생제 혼합물에 관한 것이다. 이 혼합물은 미생물인 스트렙토마이세스 오레오훼신 NRRL 1181의 균주를 배양시켜 생산한다.

발효분야와 본 발명에서 사용되는 "항생제 혼합물"이란 용어는 화학적 착화물이 아니라 동시에 생산된 개별적인 항생제 성분의 혼합물을 뜻한다. 발효법에 의하여 항생제를 생산할 때와 같이 항생제 혼합물중에 생산된 개별적 성분의 비율은 발효조건에 따라서 달라질 것이다.

20데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 약학적으로 무독한 염은 또한 본 발명의 일부이다. 설명을 간단히 하기 위해 "데옥시나라신 항생제"란 용어는 데옥시나라신 항생제 혼합물, 20-데옥시 나라신, 20-데옥시-에피-17-나라신 및 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 약학적으로 무독한 염중의 하나에 대하여 사용한다.

본 발명의 데옥시나라신 항생제는 동물과 식물에 질병을 일으키는 미생물의 성장을 억제한다. 이와 같은 활동의 일면으로 데옥시나라신 항생제는 항콕시듐제이다. 또한, 데옥시나라신 항생제는 반추동물의 사료에 대한 이용 효율을 증진시킨다.

데옥시나라신 항생제 혼합물은 20-데옥시 나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신으로 구성되며 이들은 발효법에 의하여 혼합물로서 얻어진다. 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신은 하기 서술하는 바에 따라 데옥시 나라신 혼합물로부터 개별적인 화합물로 분리시킨다. 데옥시나라신 혼합물은 또한 기술된 공정에 의해 제거된 소량의 성분을 함유한다. 데옥시나라신 항생제 혼합물은 대부분의 유기 용매에 가용성이나 물에는 불용성이다.

[20-데옥시나라신]

본 발명의 성분의 하나인 20-데옥시나라신은 나라신과 동일한 절대 배위를 갖는다. 20-데옥시나라신의 구조는 구조식(I)과 같다.

[20-데옥시-에피-17-나라신]

본 발명의 다른 성분인 20-데옥시-에피-17-나라신의 구조는 다음 구조식 (II)와 같다.

나라신(A-28086 인자 A), 20-데옥시 나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신을 구별하는 최선의 방법은 13C핵자가 공명(nmr)스팩트럼을 사용하는 것이다. 다음의 표 I에 화합물의¹³Cnmr스팩트럼을 요약하였는데 여기서 각 화합물은 유리산 형태이며, CDCl₃중에서 시험하였다(ppm으로 표시).

[표 1]

20-데옥시-나라신을 20-데옥시-에피-17-나라신 및 기지의 A-28086인자로부터 구별하는 기타의 좋은 방법은 페이퍼 크로마토그라피와 박층 크로마토그라피이다. 예를 들면, 나라신(A-28086인자 A) A-28086인자 D, 20-데옥시나라신 및 20-데옥시-에피-17-나라신의 Rf치를 여러 가지 페이퍼-크로마토그라피내에서, 측정 미생물로서 바실러스 서브릴러스 ATCC 6633을 사용하여 측정한 결과는 표 3와 같다.

[표 2]

실리카겔을 사용하는 박층 크로마토그라피에서 이들 항생제의 Rf치는 표 II과 같다.

[표 3]

데옥시나라신 항생제(20-데옥시-나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신)는 메탄올, 에탄올, 디메틸포름아미드, 디메틸 설폭사이드, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 아세톤 및 벤젠 같은 여러종류의 유기용매중에 가용성이며 헥산같은 비극성 유기용매중에는 단지 소량만 용해하고 물에는 불용하다.

그러나 20-데옥시나라신 유리산은 알콜내에서 불안정하여 20-데옥시-에피-17-나라신 유리산으로 전환되는 점에 유의하여야 한다. 예를들면, 20-데옥시 나라신의산 (435.1mg)을 메탄올(40ml)중에 용해시켜, 실온에서 네시간 동안 방치한 후, 용액을 감압하에서 증발건조시키고, 잔유물을 디옥산내에 재용해시켜 동일 건조시키면 417.8mg의 20-데옥시-에피-17-나라신 산이 얻어진다.

미합중국 특허 제4,038,384호에 기술된 A-28086-I과 크로마토그라피상으로 일치하는 기타의 물질이 데옥시나라신 혼합물과 함께 생산된다. 이 물질은 초기에는 데옥시나라신 항생제와 함께 공침되지만, 이것은 실리카겔크로마토그라피에 의해 쉽게 분리된다. 실리카겔 박층 크로마토그라피 상에서 에틸 아세테이트를 전개 용매로 사용하면, 이 물질은 20-데옥시나라신 또는 20-데옥시-에피-17-나라신 보다 덜극성이다. 바닐린 스프레이시약(100ml의 용액당 0.5ml 농황산+메탄올증의 3%바닐린)이 검출 용으로 적합하다. 바닐린으로 산포하고 가열하면 A-28086-I과 같이 이 물질은 청색반점을 나타내는데 반해, 데옥시나라신 항생제는 후게 검게 되는 황색 반점을 나타낸다.

20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신은 염을 형성한다. 약학적으로 무독한 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 알카리-금속, 알카리 -토금속염 및 그 아민염은 본 발명의 일부이다. "약학적으로 무독한"염은 온혈동물에 있어 비염형태에 비해서 화합물의 독성이 증가되지 않는 그러한 염이다. 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 대표적이고 적합한 알카리 금속 및 알카리토 금속염은 나트륨, 칼륨, 세슘, 루비륨, 바륨, 칼슘 및 마그네슘염을 포함한다. 20-데옥시-나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 적합한 아민염은 암모늄과 1급, 2급, 3급, C₁-C₄-알킬 암모늄과 하이드록시-C₂-C₄-알킬 암모늄염을 포함한다.

예로는, 아민염은 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신을 수산화 암모늄, 에틸아민, 2급-부틸아민, 이소프로필 아민, 디에틸아민, 디이소프로필아민, 에탄올아민, 트리에틸아민, 3-아미노-1-프로판올등과 반응시켜서 형성된 것을 포함한다.

20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 알카리 금속 및 알카리토 금속의 양이온 염은 통상적으로 사용되는 공정에 따라 제조한다. 예를들면, 유리산 형태의 항생제를 아세톤 또는 디옥산-물같은 적합한 용매내에서 용해시키고, 무기염기를 화학양론적 양 함유하는 용액을 이용액에 가한다. 이와 같이 형성된 염을 여과 또는 용매의 증발등의 방법으로 분리시킨다.

유기아암과의 염은 유사한 방법으로 제조한다. 예를들면, 기상 또는 액상의 아민을 아세톤같은 적합한 용매중의 항생제 성분의 용액에 가하고 용매와 과잉의 아민을 증발 제거한다.

데옥시나라신 항생제중 하나의 염을 제조하는 방법은 분리공정의 초기에 적당히 선택해야 한다.

예를 들면 육즙의 pH를 적합한 염기로서 조절하거나 또는 적합한 양이온성 염을 추출용매에 가한다.

동물을 항생제로서 처치할 때 항생제의 형태가 중요하지 않다는 것은 수의학 분야에서 널리 알려져 있다. 대부분의 경우에, 동물의 체내에서 약물은 투여된 형태가 아닌 형태로 변화되기 때문이다. 그러므로, 투여된 염형태는 처리방법에 중요하지 않다. 그러나 염형태는 경제성, 편리성 및 독성을 고려하여 선택한다.

본 발명의 신규의 항생제는 실질적인 항생작용이 생길때까지, 적합한 배양 배지애 수중 호기성 조건하에서 데옥시 나라신-생성 균주인 스트렙토마이세스 오레오훼신을 배양시켜 제조한다. 항생제는 본 분야에서 통상 사용되는 여러 가지 분리 및 정제공정을 사용하여 회수한다.

데옥시나라신 항생제의 생성에 유용한 미생물은 스트렙토마이세스 오레오훼신 NRRL-8092을 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘으로 유도 돌연변이시켜 얻는다. S. 오레오훼신 NRRL-9092가 스트렙토마이세스 오레오훼신의 균주로서 분류되는 분류학상 근거는 미합중국 특허 제4,038,384호에 기술되어있다.

데옥시나라신 항생제의 생성에 유효한 스트렙토마이세스 오레오훼신 배양체는 미합중국 농무성의 북부리서치 센터에 기탁되어 저장균체 수집물의 일부로 되어 있으며, (Peoria, Illinois), 이것은 NRRL-11181으로 공포되었다. 에스. 오레오파시엔스 NRRL-11181의 미생물학적 성질을 요약하면 다음과 같다.

NRRL 11181은 짧고, 직선상 내지 곡선상의 포자자루로 구성돼 있으며, RF(rectus-flexibilis)분류에 속한다. 포자연쇄들은 한 연쇄당 10개 이하의 포자로 이루어지며, 호기성 균사체는 거의 생성되지 않으며, 존재할 경우에도 매우 빈약하다. 호기성 균사체의 가장 좋은 기질은 ISP No.4이다. 호기성 균사체 또는 2차 증식체의 색은 밟은 회색내지 백색이다. 1차 증식체 또는 기질 균사체는 잘 형성되며, 특히 ISP No.7과 베네트(Bennetts)한천등의 배지상에서 가장 잘 성장한다. 기질 균사체의 색은 일반적으로 회횡색이며 분생자 자루다발(coremia)이 자주 관찰된다. 포자는 장타원형 또는실린더 형으로서 매끄러운 표면을 갖고 있으며, 그 크기는 0.8-0.9μ×1.1-1.4μ이며, 평균크기는 0.85×1.25μ이다. 상기와 같은 결과는 전자현경 사진으로부터 관찰 및 측정한 결과이다.

터키의 마운트 아라라트에서 얻은 토양 샘플로부터 원래 분리시닌 스트렙토마이세스 오레오훼신의 배양체를 돌연변이 시키고 NRRL 11181로 확인된 배양체를 분리시킨다. 분리된 최초 토양을 한천 플레이트상에서 배양하고 한천 플레이트의 표면으로부터 미생물 개개의 콜로니를 제거하여 아배양체를 얻는다. 최초 토양 분리물의 배양체로부터 얻어진 단일 분리물의 하나는 여기서 NRRL 5758로 확인된 배양체이다. 자연에서 선택된 상기 배양체를 다시 평판하고 단일 콜로니를 그것으로부터 선택한다. 자연 선택의 공정을 8번 반복하고, 9번째 세대의 단일-집락 분리체를 다시 한번 선택한다.

9번째 세대의 분리체를 단일 탄소원으로서 갈락토즈 1%가 함유된 화학적인 한천 배지애세서 성숙시킨다. 포자 현탁액을 한천 배지를 초음파로서 진탕하여 포자를 이동시켜 제조한 후 와트만 No. 1여지를 통해서 현탁액을 여과하여 균사 획분을 최소로 한다.

포자 현탁액을 액체 배지 혼합물(pH를 8.8로 조절)내에서 30℃에서 72시간동안 성장시키는데, 이것은 2mg/ml의 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘을 함유한다. 배지상에서 성장하고 있는 배양체를 거두어 조직 분쇄기로 균질화한다.

균질하게 된 배양체를 희석하여 한턴 배지상에서 평편하게 바르고 30℃에서 개개의 집락을 구별할 수 있을 때까지 배양한다. 개개의 선택된 콜로니중의 하나를 NRRL 8092로서 표시되는 새로운 배양의 출발물질로서 사용한다.

NRRL 8092로서 표시되는 배양체를 단일 탄소 공급원으로 글루코오스를 함유하는 화학적인 한천 배지상에서 성장시킨다. 포자와 균사 획분으로 구성된 현탁액을 초음파로 한천 배지를 진탕시켜 제조한다. 혼합된 포자와 균사 현탁액을 96시간 동안 30℃에서, pH8.8의 액체 배지 혼합물중의 2mg/ml의 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘으로 처리하고 진탕한 후 배양체를 거두어 상기 기술된 바와 같이 평판시킨다. 한천 플레이트에서 선택한 개개콜로니중의 하나를 성장시켜 NRRL 11181로서 표시된 배양체를 제조한다.

본 발명에 주어진 반대로 에스. 오레오파시엔스 NRRL 5758, NRRL 8092, 또는 NRRL 11181을 돌연변이 처리 시킴으로써 에스. 오레오파시엔스 NRRL 11181과 동일한 생합성능(즉, 20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신을 생산할 수 있는 능력)을 가지는 다른 균주를 생성시킬 수 있다는 것은 본 분야에 통상의 지식을 가진자이면 알 수 있을 것이다. 에스. 오레오파시엔스 NRRL 1181을 얻기 위해 N-메 틸-N'-니트로-N-니트로소 구아니딘을 사용하지만, 자외선, X선, 고주파, 방사선 및 다른 화학시약같은 다른 공지의 돌연변이원을 유사한 돌연변이를 유도하는데 사용할 수 있다. NRRL 11181과 동일한 생합성능을 가지는 스트렙토마이세스 오레오파시엔스를 배양시킴으로써 데옥시나라신 항생제 혼합물을 생산하는 방법도 본 발명의 일부이다.

스트렙토마이세스 오레오파시엔스 NRRL 11181을 성장시키는데 사용되는 배양 배지는 여러 배지중의 어느 하나이다. 경제성, 최적수율과 생산체의 분리를 용이하게 하는 어떤 배양배지가 바람직하다. 예를 들면, 큰 규모의 발효법에서 바람직한 탄화수소원은 테피오카 덱스트린과 수크로오스인데 글르코오스, 옥수수전분, 푸락토오스, 만노오스, 말토오스, 락토오스등도 사용된다. 옥수수오일, 낙화생유, 대두유와 생선오일은 탄소 공급원이다. 바람직한 질소 공급원은 효소-가스분해된 카제인인데 펩톤류, 대두가루, 면실가루, 글루타민산과 같은 아미노산등이 사용된다. 영양배지내에 가해지는 영양 무기염에는 나트륨, 마그네슘, 칼슘, 암모늄, 클로라이드, 카보네이트, 설페이트, 나이트레이등의 이온을 생성시키는 가용성염이있다.

미생물의 성장과 발달에 필수적으로 필요한 미량원소도 배양 배지내에 함유되어야 한다. 이와 같은 미량원소는 일반적으로 미생물의 성장 욕구를 만족시키는 충분량의 배지중의 다늘 성분중에 불순물로서 존재한다.

기포형성이 문제가 되는 경우 폴리프로필렌글리콜 같은 소포제 소량(즉 0.2ml/l )을 대규모의 발효배지에 가하는 것이 필요하다.

필수적은 아니지만, 대두유같은 소량의 오일을 가하면 항생제의 생성도가 증가된다.

데옥시나라신 항생제가 실질량 생성될 때까지 내내 탱크내에서 수중 호기성 발효시킴이 바람직하다. 항생제소량은 진탕-플라스크 배양법으로 얻을 수 있다. 항생제 생성에 있어 시간이 지체되는 이유가 큰 탱크가 미생물의 포자형태로 오염되는 것과 관련있기 때문에 식물성 접종체를 사용하는 것이 바람직하다. 식물접종체는 배양배지의 소량에 미생물의 균사조각 또는 포자형태를 접종시켜 왕성하게 성장하는 미생물의 새로운 배양체를 얻음으로써 제조할 수 있다. 이 식물 접종체를 이어서 큰 탱크에 옮긴다. 식물 배양체를 성장시키는데 사용되는 배지는 대규모 발효법에서 사용되는 것과 동일하나 다른 배지를 사용할 수도 있다.

데옥시나라신-생성 미생물은 20°와 40℃사이에서 성장된다. 데옥시나라신 생성의 최적온도는 27°내지 30℃ 사이이다.

호기성수중 배양 공정에서 통상 사용되는 바와 같이 멸균 공기를 배양배지에 통한다. 미생물을 충분히 성장시키기 위해 탱크 생성법에서 사용되는 공기의 용량은 1분 동안 배양 배지의 부피당 공기 0.1부피 이상이다. 충분한 항생제 생성을 위해서 탱크 공정에서 사용되는 공기의 용량은 1분동안 배양배지의 부피당 공기 0.25 부피가 바람직하다. 산소의 용해도가 높다하여도 항생제공정을 억제시키지 않는다. 균사의 추출물이나 육즙의 샘플을 취하여 본 항생제에 민감한 것으로 알려진 미생물에 대한 항생제 효과를 발효시키는도중 시험한다.

항생제 생성은 항생제에 민감한 유기체에 대해 항생 작용을 가진 균사 토양의 추출물 또는 육즙의 시험샘플에 의해 발효시킨다. 본 발명의 항생제를 시험하는데 유용한 분석용 미생물은 바실러스 서브틸리스 ATCC 6633이다. 이 생물분석은 헌천 플레이트 상에서 페이퍼-디스크 분석에 의해 편리하게 수행한다.

기타의 편리한 측정방법은 반자동 시스템(Autoturb^Rmicrobiological assay ststem, Elanco)

상에서 탁도분석 법이다.

[참조 N.R. Kuzel and F.W. Kavanaugh in J.Pharmaceut. Sic. 60(5), 764and 767 (1971)]

데옥시나라신 항생제를 시험할 때 다음의 시험 매개변수가 사용된다. 스타필로코크스 아우레우스(H-Heatley) NRRL B-314를 37℃에서 4시간 동안 영양육즙배지(ph 7) 내에서 배양시킨다. 시험 샘플과 표준물질은 메탄올-물(1 : 1)내에 용해한다. 표준물질인 A-28086인자 A를 1,2,4 및 5mog/ml의 농도로 오우토터브 캐로우셀(Autoturb

carrousel)에 넣는다.

접종안된 배양 배지의 최초 pH는 사용된 배지에 따라 변한다. 일반적으로, 최초 pH는 6.0 내지 7.5의 범위이다. 발효 끝의 pH는 약간 높은데 6.5 내지 8.0의 범위이다.

일반적으로 항생제 효과는 발효시킨 둘 째날에 측정한다. 항생제 효과는 일반적으로 4째로 10째날 사이에서 최고로 나타난다.

다음 수중호기성발효조건하에 생성된 전술된 데옥시나라신 항생제는 발효법에서 사용되는 통상적인 방법에 의해 발효배지로부터 회수한다. 발효중에 생산되는 항생제는 균사체와 여과된 육즙내에 존재한다.

데옥시나라신 항생제는 여과, 추출 및 흡착 크로마토그라피등의 방법을 조합하여 수행할 때 최고로 회수된다. 데옥시나라신 항생제를 전체의 또는 여과된 발효육즙으로부터 분리시키는데 사용되는 바람직한 용매는 에틸 아세테이트인데 통상적인 기타의 용매도 사용할 만 하다.

데옥시나라신 항생제를 분리시키는 특히 유리한 방법은 발효육즙의 pH를 3.0으로 저하시키는 것이다. 이 pH에서 여과시키면 데옥시나라신 항생제는 균사체로서 쉽게분리된다. 이 방법은 유사한 항생제인 A-28086인자 A, B 및 D와 살리노마이신의 회수법에 기술되어있다. [참조 : U.S 4,009,262by Boeck and Bery]

이와같은 방법의 다른 장점은 탄산수소 나트륨 같은 중탄산염을 l당 1g의 양으로 육즙에 가하면 데옥시나라신 항생제가 염형태로 군사체로부터 쉽게 분리된다. 항생제를 균사체로 부따라분리시키는데 바람직한 용매는 메탄올인데 다른 저급알콜과 케톤도 또한 적합하다.

또한 데옥시나라신 항생제의 회수시 공비증류법도 편리하게 사용할 수 있다. 이 방법에서는 물과 함께 적합한 공비물을 형성하는 유기용매를 수성 발효육즙에 가하고, 이 용매-육즙 혼합물을 공비 증류시켜 육즙으로부터 물을 반을 제거하고 물-용매 혼합물이 남는데 이중에 데옥시 나라신 항생제는 유기용매내의 용액 형태로 존재한다. 불용성 부산물은 여과 또는 원심분리 같은 적합한 방법으로 분리시킬 수 있다. 데옥시나라신 항생제는 기지의 방법 즉 용매의 증발, 비용매를 가하여 침전형성 또는 추출에 의해 유기용액으로부터 회수한다.

회수공정을 수행하기 위하여 물과 함께 적한 공비물을 형성하는 유기용매로는 부틸알콜, 아밀알콜, 헥실알콜, 벤진알콜, 부틸 아세테이트, 아밀 아세테이트, 1, 2-디클로로에탄, 3-펜타온, 2-헥사논, 벤젠, 사이클로헥사논, 톨루엔, 크실렌등이 있다.

대규모의 발효공정에서는 공비 증류법에 의해 회수하는 것이 특별히 유리하다. 공비물내의 물과 용매는 기지의 방법으로 분리하고 재순환시켜 다시 이용한다. 이와 같이 제거된 물은 오염이 없고 폐기처분을 요하지 않는다. 데옥시나라신 항생제는 추출과 흡착공정은 거쳐 더욱 정제할 수 있다. 실리카겔, 탄소, 플로리실

(마그네슘 실리케이트, Floridin Co. P.O. BOX 989, Tallahassee, Fla)등과 같은 흡착물질이 편리하게 사용된다.

또한, 배지 조성물과 균사를 함유하는 배양 고형물은 추출 또는 분리하지 않고 사용하나 바람직한 것은 데옥시나라신 항생제 혼합물의 공급원으로서 물을 제거한 후 사용하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 데옥시나라신 항생제의 작용이 생성된 후 배양배지를 동결 건조 또느 드럼 건조시켜 건조시키고 직접 사전 혼합된 사료로 혼합한다.

다른 측면으로, 배양배지내의 데옥시나라신 작용이 생성된 후에 균사를 분리하고 건조시키며, 사전 혼합된, 사료에 직접 사용할 수 있는 생성물을 얻는다. 이와 같이 균사를 분리시킬 때 탄산칼슘(약 10g/l)을 가하여 여과한 후 건조 생성물을 얻는다.

지금까지의 사용 조건하에서 전술한 NRRL 11181인 스트렙토마이세스 오레오파시엔스 균주로부터 20-데옥시-나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신을 주성분으로 회수한다. 소량의 성분도 또한 S. 오레오파시엔스 NRRL 11181로부터 회수되는데, 그양이 극소량이기 때문에 확인할 수 없다. 성분간의 비율은 발효와 분리조건에 따라 다르지만, 20-데옥시-에피-17-나라신이 20-데옥시나라신보다 좀 더 많이 회수된다.

20-데옥시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신을 각각 분리하고 칼럼 크로마토그라피, 박층 크로마토그라피, 항류분배법등의 기지의 방법을 사용하여 개개의 화합물로서, 분리시킨다. 예를 들면, 실리카겔상의 칼럼크로마토그라피는 칼럼을 여러 가지 용매 혼합물로 추출하여 20-데옥시-나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신을 분리시키는데 사용된다. 예를 들면, 실리카겔 칼럼상에서 벤젠-에틸아세테이트 용매혼합물을 사용하면 20-데옥시-에피-17-나라신이 우선 추출되고 나중에 20-데옥시나라신이 추출된다. 100%에틸 아세테이트 용매를 사용하여 실리카겔 상에서 박층 크로마토그라피시키는 방법이 용출과정을 모니터하는데 편리한 방법이다.

본 발명에 따른 데옥시나라신 항생제는 항균제이다. 예를 들어 20-데옥시 -에피-17-나라신(유리산)의 미생물학적 비교활성도가 표 4에 기술되어 있다. 통상적인 디스크-분산방법이 사용되었다.

[표 4]

1페닐실린 내성균

2메티실린 내성균

다른 관점에서, 데옥시나라신 항생제는 혐기성균의 성장을 저해한다. 20-데옥시-에피-17-나라신(유리산)이 여러 가지 혐기성균을 저해시키는 최소억제농도( MIC)를 표준 한천 회석 분석법으로 측정하여 표 5에 요약하였다. 종말점은 24시간 배양시킨 후에 읽은 것이다.

[표 5]

마이코플라스마에 대한 작용은 데옥시나라신 항생제의 항미생물 효과면에서 또 다른 유효한 작용이다. 플레우로-뉴모니아와 유사한(PPLO) 미생물로서 알려진 마이코플라스마종은 사람과 여러 가지 동물에 질병을 일으킨다.

미생물에 대해 대해 효력을 갖는 약품이 가축산업에서 특히 필요하다. 시험관애의 육즙-희석방법으로 측정한 마이코플라스마종에 대한 20-데옥시-에피-17-나라신(유리산)의 최소억제농도(MIC)가 표 6에 요약되어있다.

[표 6]

데옥시나라신 항생제는 또한 항비루스제이다. 예를 들면 20-데옥시-에피-17-나라신은 리노비루스 타입 3, 박시니아 비루스, 헤르페스비루스와 인플루엔자 A비루스에 대해 활성이 있는데 시험관내 플레이트 억제 시험으로 입증되었다. [참조 : Simanoff에 의한 Applied Microbiology 9, [1] 66-72(1961)].

본 발명에 따른 데옥시나라신 항생제는 비루스를 처치할 목적으로 경구, 국소 또는 비경구적으로 포유동물에 투여할 수 있다. 비루스 질병의 예방 또는 치료를 위한 유용량은 체중 1kg당 1 내지 5mg/kg인데 그 용량은 비루스에 따라서 다르며, 예방목적이나 치료목적이냐에 따라 달라질 수 있다. 더욱, 데옥시나라신 항생제를 함유하는 용액은 특히 계면활성제와 함께, 생체외에서 폴리오 또는 헤르프스 같은 비루스가 존재하는 서식지를 탈오염시키는데 사용된다. 데옥시나라신 항생제 1 내지 1500mcg/ml을 함유하는 용액이 비루스 처치에 유효하다.

20-데옥시-에피-17-나라신(유리산)과 20-데옥시 나라신(Na염)의 급성 독성은 이들을 쥐의 복강내 투여했을 때 LD50으로 표시되고, 각각 201mg/kg 및 5mg/kg이다.

항콕시듐 작용은 본 발명의 데옥시나라신 항생제의 중요한 성질이다. 예를들면, 생체의 시험에서 20-데옥시-나라신(Na 염)과 20-데옥시-에피-17-나라신(유리산)은 0.2ppm 정도의 낮은 농도에서 콕시듐증과 가장 관계가 깊은 프로토아조아민 아이메리아 테넬라에 대해 활성이있다.

어린 닭의 사료투여 시험으로 데옥시나라신 항생제가 생체내에서 항콕시늄 작용을 나타내는 것을 확인하게 되었다. 이 시험에서 아이메리아 테넬라로 처리된 병아리에게 100ppm의 농도로 투여한 20-데옥시나라신(Na 염)은 병아리의 치사를 방지하고 체중을 늘이고 병해의 수를 감소시킨다. 그 시험의 결과는 표 7과 같다.

[표 7]

가축의 콕시늄증을치료 또는 예방 하기 위해 데옥시나라신 항생제의 항콕시늄제로서의 유효량을 새에게 매일 경구적으로 투여한다. 데옥시나라신 항생제는 여러 가지 방법으로 투여할 수 있으나, 생리적으로 무독한 담체 특히 새에 의해소화되는 사료와 함께 투여된다. 데옥시나라신 항생제의 적합한 농도를 결정짓는 데 여러 가지 성분을 사용할 수 있는데 투여비율은 비약품사료의 0.003 내지 0.03%이고 바람직한 것은 0.004 내지 0.02%이다.

본 발명은 또한 사료 1톤당 데옥시나라신 항생제 35 내지 180g을 함유하고 있는 가축용 항콕시듐제 사료 조성물에도 관한 것이다.

동물에서 사료 이용효과를 증진시키는 효과는 데옥시 나라신 항생제의 다른 중요한 성질이다. 예를들면, 데옥시나라신 항생제는 진화된 위기능을 갖는 반추동물에서 사료-이용 효과를 증진시켜준다.

반추동물에서 탄화수소 이용효과는 동물의 위를 자극하여 아세테이트 또는 부티레이트 보다 프로피오네이트 화합물을 더 많이 생산시키는 처리에 의해 증진된다. 사료 이용효과는 위내의 프로피오네이트의 농도와 생성도를 관찰하여 측정할 수 있다. [참조 : u.s 4,038,384]

20-데옥시나라신(Na 염)과 20-데옥시-에피-17-나라신의(유리산) 생체의 시험의 결과는 처리된 플라스크내의 휘발성 지방산(VFA) 농도와 대조 플라스크내의 농도의 비율로 나타내었는데, 그 결과는 표 8과 같다.

[표 8]

* 다음 보문에 의한 실험결과 통계학적으로 유효성 있음 (P＜0.01) [by the two-tailed LSD test (R. G. D. Steel and J.H. Torrie, "Principles and Procedures of Statistics, " McGraw Hill, New York, N. Y., 1960, P. 106)]

본 발명의 데옥시나라신 항생제는 0.05mg/kg/day 내지 5.0mg/kg/day의 비율로서 경구로 반추동물에 투여할 때, 프로피오네이트의 양을 효과적으로 증진시켜 사료 이용효과를 높여준다. 가장 유익한 결과는 0.01mg/kg/day 내지 2.5mg/kg/day의 양으로 얻어진다. 본 발명항생제의 바람직한 투여방법은 동물의 사료와 함께 혼합 투여하는 것이나 정제, 물약, 볼루스, 또는 캅셀제로서도 투여한다. 이와 같은 제형의 제제논 척추동물약제에서 잘 알려진 방법으로 완성시킨다. 각각의 용량 단위는 본 발명 화합물을 처리될 동물에 대한 적절한 1일 용량에 직접 관계되는 용량 함유한다.

본 발명은 소 및 양같은 비대한 반추동물에 사용되는 사료 조성물에 관한 것이다. 이와 같은 사료 조성물은 1톤당 데옥시나라신 항생제 1 내지 30g과 사료로 구성되어 있다.

돼지의 이질은 미국과 기타 국가에서 통상적인 질병이고 매년 전세계적으로 돼지성장에 큰 손실을 초래한다. u.s. 제3,947,586호에서 폴리에테르 항생제가 돼지의 이질을 예방하고 치료하는데 유효하다고 보고하였다. 데옥시나라신 항생제가 폴리에테르류 항생제의 신규 종이기 때문에 돼지의 이질의 예방과 치료에도 유효하다.

돼지의 이질을 예방 및 치료(조절)하기 위해 데옥시나라신 항생제 유효량을 사료에 혼합하는 것이 바람직하다.

본 발명의 데옥시나라신 항새제는 1톤당 활성화합물 35 내지 150g을 돼지에게 경구 투여했을 때 돼지의 이질을 예방 또는 치료하는 데 유효하다. 바람직한 비율은 1톤당 100g의 활성 화합물이다. 동물의 사료와 혼합 투여 하는 것이 바람직한 투여방법이지만 기타의 방법 예를 들면 정제, 물약, 볼루스 또는 캅셀로서 또한 투여할 수 있다. 각각의 용량단위는 본 발명항생제를 처리동물의 저합한 1일 용량에 직접 관련된 용량 함유한다.

더욱 본 발명은 돼지 사료와 데옥시나라신 항생제의 유효량을 함유하는 돼지용 사료 조성물에 관한 것이다. 유효량은 사로 1톤당 데옥시나라신 항생제 35 내지 150g이다.

데옥시나라신 항생제는 항비루스제이고 또한 클로스트리늄 퍼프린젠스와 같은 혐기성 박테리아에 대해 또한 활성이 있다. 그러므로 데옥시나라신 항생제는 병아리, 돼지, 소 및 양의 장영 및 반추동물의 장성중독증을 치료하고 예방하는데 유익하다.

어떤 데옥시나라신 화합물(20-데옥시-나라신과 그의염)은 이온 결합 및 이온 전달 성질이 있고 그러므로 이온 결합제이다. (참조 : B.C. Pressman, Alkali Metal Chelators Te Ionophores, in Inorganic "Biochemistry," Volume 1 G.L. Eichhorn, Elsevier, 1973).

이 화합물은 특별한 양이온을 선택적으로 제거할 필요가 있을 때 이용된다. 이와 같은 용도의 예로는 은이온을 사진의 용액으로부터 제거 및 회수할 때 사용되고 독성 양이온을 산업폐기류를 처분하기 전에 폐류로부터 독성 양이온을 제거하고 해수를 탈염시킬 때 사용된다. 데옥시나라신 화합물은 이온-고유전극의 한 성분으로 사용한다.

(참조 : O.Kedem, et al., U.S.Patent 3,753,887).

이와 같은 화합물은 천연 및 인공적인 막의 양이온 투과율을 변경시킨다. 그러므로 데옥 시나라신 화합물을 농도 경사에 대한 선택적인 양이온 전달에 사용되는 막의 조성물로서 사용된다. 이 성질은 증금속 및 귀금속의 회수에 적용시킬 수 있다. [참조 : E.L. Cussler, D.F. Evans, and Sister M.A Matesick, Science 172, 377 (1971)]

다른 측면으로, 20-데옥시나라신과 그의 염은 ATP에이즈 효소의 저해제로서 작용한다. 세포막에서 발견된 알카리-금속-민가 효소인 ATP ase은 능동적 수송에 필요한 에너지와 관련이 있다. "능동수송"은 에너지를 필요로 하는 여러 단계의 조작에 관련되는데 이로서 세포내액과 세포외액이 그의 조성을 유지하고 있다.

ATP ase의 저해제는 능동수송에 필요한 에너지를 감소시킨다. 생체의 시험에서 20-데옥시나라신(Na 염)은 간의 미토콘드리아에서 0.065mcg/ml의 ½유효 농도에서 양이온 전달 ATP ase를 저해시키는 것을 알 수 있다.

20-데옥시나라신과 그의 염은 또한 강력한 강심제이다. 분리시킨 기니아-픽 동맥을 사용해서 시험할 때 20-데옥시 나라신은 심수축력을 증진시킨다. 이 시험에 대한 반응은 노르에피네프린의 (10^-4M)에 의해 유도된 최고 수축력에 대한 백분율로 표시되는데 20-데옥시나라신 (Na염)은 10⁵몰 농도에서 43.8±1.4 n=4)% 평균(±표준오차) 수축력 증가를 가져온다. [참조 : u.s. 3,985,893]

본 발명은 20-데옥시나라신 또는 약학적으로 무독한 염을 유효량 온혈 동물에게 투여하여 심장근육의 수축력을 증진시키는 방법을 함유한다 무독한 유효량을 체중다량30 내지 500mcg/kg의 범주이다. 바람직한 용량은 30내지 100mcg/kg범주이다. 이 방법으로, 항생제를 비경구 예를 들면 정맥내에 주입시킨다. 적합한 투여방법은 적하방법인데 이때 항생제를 덱스트로오스 용액 같은 표준 정맥주사용 용액에 가한다.

20-데옥시나라신은 수축력의 증가가 바람직하게 관찰될 때까지 100mcg/kg미만의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다. 그후에, 투여하는 20-데옥시나라신의 용량은 바라는 반응을 유지하는데 필요한 주입속도에 의해 정해진다. 다른 근육 수축제를 임상적 투여할 때와 같이 투여하는 20-데옥시나라신의 용량은 20-데옥시나라신에 대한 개인의 내성, 심장질환의 특징 즉 심장근에 대한 손상의 범위와 환자의 나이와 신체조건 같은 요소에 따라서 다양하게 변화된다. 심근육수축체 20-데옥시나라신을 사용하는 본 발명에 따른 처치 방법은 심장쇼크로서 구분되는 임상적인 여러 상태에 광범위하게 사용될 수 있다. 여기에는 심근 폐색증, 울혈성심부전증, 수술후 심장쇼크가 포함된다.

본 발명을 충분히 설명하기 위해 다음 실시예를 제공한다.

[실시예 1]

A. 진탕-플라스크 발효법

스트렙토마이세스 오레오파시엔스 NRRL 11181의 배양체를 다음 조성의 한천 경사판상에서 제조하고 보존한다.

경사면을 스트렙토마이세스 오레오파시엔스 NRRL 11181로서 접종하고, 30℃에서 7일간 배양한다. 성숙한 경사배양체를 멸균 우육혈청으로 카버하고 멸균 루우프로 긁어 포자는 해체한다. 얻어지는 포자와 균사획분의 우육-혈청 현탁액을 최고 6개의 펠렛트으로하여 동결 건조시킨다. 제조된 동결 건조된 펠렛트를 다음 조성의 식물 배지 50ml를 접종하는데 사용한다.

250ml 엘렌메어 플라스크내에서 접종시킨 식물배지를 250RPM으로 직경 2인치의 진탕 회전기상에서 24 내지 48시간 동안 30℃에서 배양시킨다. 상술된 배양 식물 내지 50ml를 250ml의 다음의 발효배지를 접종시키는데 사용한다.

배지 I :

배지 II.

배지 III.

2인치의 아크가 있는 250-RPM회전 진탕기상에서 30℃에서 10일간 발효배양시킨다.

B. 탱크발효법

탱크발효법은 진탕-플라스크 발효법의 A파트에서 기술된 식물과 발효배지를 사용하여 수행한다. 탱크 발효용으로 10ml의 식물배지를 2l의 엘렌메어플라스크내의 400ml의 둘째단계 식물배지중에 접종시킨다.

30℃에서 24시간동안 배양시킨 후에, 800ml의 둘째단계 식물배지를 165l의 발효탱크내의 100l의 발효, 배지중에 접종시킨다. 121℃에서 45분간 멸균시킨 후 배지의 pH는 약 6.8±0.1이다. 발효를 10일간 30±1℃에서 진행시킨다. 300RPM속도로 통상적인 진탕기로 진탕하면서 이 탱크에 매분 배양배지 부피당 0.5부피의 속도로 멸균공기를 통한다.

[실시예 2]

[데옥시나라신 혼합물의 분리]

배지 II를 사용하여 실시예 1에 기술된 방법으로 얻은 발효육즙(4l)에 1시간 동안 진탕하면서 농염산을 가해서 pH3.0이하로 만든다. 수득된 용액을 여과보조제(125g 히플로 수퍼-셀, 규조토, 존스-만빌 코포레이션)로 여과한다. 분리된 균사체 케이크를 혼합기를 사용하여, 리터당 탄산 수소나트륨 50g을 함유하는 메탄올 2l로 추출한다. 메탄올 여액을 감압하에서 증발하여 약 450ml의 용액을 얻고, 이 용액의 pH를 농염산을 가해 pH7.5로 조정한다. 얻어진 용액을 CHCl₃(500ml)로 두 번 추출한다. 이 CHCl₃추출물을 모아서 황산나트륨상에서 건조하고 여과한다. 여액을 감압하에서 증발하여 2.0g 조(組)데옥시나라신 혼합물을 얻는다.

[실시예 3]

[데옥시나라신과 에피-데옥시나라신의 분리]

실시예 2에서 수득된 조(組)데옥시나라신 혼합물(2g)을 최소량의 벤젠에 용해하고 실리카겔(Merck 7729)의 1.5-×22cm칼럼에 적용시킨다. 분리된 획분, 사용용매와 수득량은 다음표에서와 같다.

* 황산나트륨상에서 건조 후 여과하고 여액을 감압하에서 증발건조한 후 얻음.

획분을 TLC로 측정하는데 에틸아세테이트 용매계를 사용한다. 획분 16내지17 (126mg)은20-데옥시-에피-17-나라신을 함유하고 획분 18내지 23은 20-데옥시시나라신과 20-데옥시-에피-17-나라신의 혼합물을 함유한다.

획분 18내지 23에서 얻은 20데옥시나라신과 20-데옥시-17-에피나라신의 혼합물을 에틸 아세테이트를 용매계로 사용하여 프레파라티브 TLC로 크로마토그라피한다. 혼합물(한 플레이트상의 105mg과 다른 플레이트상의 130mg)을 소량의 CH₂Cl₂중에 용해하고 실리카-겔(Merck)프레파라티브 플레이트상에 둔다. 플레이트를 전개 후 두 가지 분리물질을 자외선으로 관찰한다. 두 물질을 나타내는 각각의 부분을 플레이트로부터 분리하고 CH₂Cl₂: CH₃OH (4 : 1)로서 추출한다. 여기서 데옥시나라신은 두성분 중에서 서서히 이등되는 부분이다. 105mg의 물질릉 함유하는 플레이트로부터 7.5mg의 20-데옥시-에피-17-나라신과 27mg의 데옥시나라신을 회수한다. 130mg의 혼합물을 함유하는 플레이트로부터 4.0mg의 20-데옥시-에피-17-나라신과 56mg의 20-데옥시나라신을 회수한다.

[실시예 4]

[20-데옥시나라신의 분리(변법)]

발효육즙(95l)에 염산을 가해 pH3으로 조절하고 1시간 동안 진탕한다. 여과보조제(Hyflo Supercel, 3%)를 가하고 육즙을 여과한다.

분리된 균사케이크를 리터당 50g의 탄산수소나트륨을 함유하는 45l의 아세톤으로 두 번 추출한다. 아세톤 추출물을 모아서 감압하에서 농축하여 10l의 수용액을 얻는다. 이 용액의 pH를 5N염산으로 pH8.0으로 조절하고 수득된 용액을 1/2부피의 CH₂Cl₂로 세 번 추출한다. CH₂Cl₂추출물을 모아 감압하에서 증발시켜 오일상 잔류물을 얻는다. 이 잔유물을 헥산 ; 메탄올 : 물(10 : 7 : 1)의 용매계의 상측상 500ml중에 취하고 이 상측을 300ml의 용매계 하측상으로 6차례 추출한다. 추출물을 모아 진공중에서 농축시켜 얻은 잔류물을 디옥산중에 용해시키고 디옥산 용액을 동결 건조시켜 19.4g의 데옥시나라신 혼합물을 얻는다.

동일한 방법으로 얻능 여러 샘플을 모아(40g), 톨루엔중에 용해시키고 액체 크로마토그라피욕(waters Associates prep LC/system 500)실리카겔칼럼에 충진한다. 모여진 250ml의 획분을 250ml/min의 유속으로 톨루엔 ; 에틸 아세테이트(9 : 1)용매로서 용출시킨다. 획분 내용물을 TLC로 모니터한다. 획분 37내지 52를 모아서 감압하에서 농축한 후 디옥산중에서 재용해시켜 동결건조하며 7.8g의 20-데옥시나라신이 풍부한 정제된 물질이 얻어진다.

이 물질을 워터스 프레파라티브 액체 크로마토그라피./시스템 500상에서 재차크로마토그라피한다. 획분 50을 톨루엔 ; 에틸아세테이트(9 : 1)용매로 용출시킨 후, 용출용매를 100%에틸 아세테이트로 바꾼다. 획분 51 내지 53를 모아서 감압하에서 증발시키면 잔류물이 얻어지는데, 이것을 디옥산중에 용해시키고 동결 건조하면 1.12g의 20-데옥시나라신이 나트륨염으로 얻어진다.

[실시예 5]

[20-데옥시나라신 유리산의 제조]

20-데옥시나라신 나트륨염(200mg)을 에틸 아세테이트(10ml)중에 용해시킨다. 이 용액을 0.1N염산(10ml)으로 세척하고 물(5ml)로서 두 번세척한다. 수득한 유기층을 증발 건조시켜 잔류물질을 얻는데 이것을 디옥산중에 재용해하고 동결 건조시키면 139.6mg의 20-데옥시-나라신 유리산이 백색 고체로서 수득된다.

[실시예 6]

[콕시듐증 치료용]

체중증가를 빠르게하기 위해 병아리 사료에 사용되는 균형있는 고에너지 사료를 다음 처방으로 제조한다.

데옥시나라신 항생제 혼합물, 20-데옥시-나라신 또는 20-데옥시-에피-17-나라신(약 0.01중량%)을 사료와 함께 표준사료 혼합법으로 혼합한다. 이와같은 사료를 리비튬을 가한 물과 함께 공급한 병아리는 콤시듐으로부터 보호된다.

[실시예 7]

[개량된 소-양의사료]

균형이 있는 고그레인의 소-양의 사료는 다음과 같다.

* 1파운드당 함유량 : 2,00,000IU, 비타민 A; 227,200I.U 비타민 D₂및 385.7g의 1%오일을 가진 대두사료

** 1파운드당 20,000I.U의 d-알파-토코페닐 아세테이트를 함유하는 옥수수 증류물

데옥시나라신 항생제 혼합물, 20-데옥시-나라신 또는 20-데옥시-에피-17-나라신(약 0.004중량%)을 사료와 함께 표준기법에 따라 혼합한다. 혼합사료를 압축하여 펠렛트화 시킨다. 한 마리의 동물은 1일 평균 사료 15파운드를 소화시키므로 1마리 동물당 1일 300mg의 항생제를 공급하는 것이다.

[실시예 8]

[개량된 돼지사료]

전 혼합물을 다음의 성분을 사용하여 표준 방법으로 제조한다.

전 혼합물을 돼지사료에 가하는데 표준 사료-혼합법을 사용하여 최종생성물에 100g/t의 활성화합물이 함유하게 한다.

Claims (1)

1. 액침 호기성 조건하에, 동화원으로서 탄화수소, 질소 및 무기염을 함유하는 배지중에서 스트렙토마이세스 오레오파시엔스 NRRL 11181과 동일한 생합성능을 갖는 스트렙노카이세스 오레오파시엔스를 항균력이 실제로 나타나는 양이 생성될 때까지 배양시키고, 항생제 혼합물을 산 또는 그 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 회수함을 특징으로 하여 하기 일반식(I)의 데옥시 나라신 및 하기 일반식(II)의 20-데옥시-에피-17-나라신으로 이루어진 데옥시나라신 항생제 혼합물을 제조하는 방법.