KR20020000555A - 광학 진단용 조영제로서의 단쇄 펩티드-염료 접합체 - Google Patents
광학 진단용 조영제로서의 단쇄 펩티드-염료 접합체 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 혈관 작용성 장 펩티드, 소마토스타틴 또는 뉴로텐신으로부터 유래한 단쇄 펩티드와 염료와의 접합체로 구성된 종양 진단용으로 사용되는 화합물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 광학 진단 물질로서의 이들 화합물의 용도 및 이들 화합물을 포함한 진단 물질에 관한 것이다.
Description
세포 수준에서, 질환에 의해 유도된 변형은 종종 정상 상태에 비해 변형된 수용체 분포 또는 발현으로 나타난다. 이들 차이점은 정량적인 유형(예를 들어, 증식 세포에서 트랜스페린 수용체의 양) 또는 그 외에도 정성적인 유형(예를 들어, 혈관 내피 세포 성장 인자(VEGF)의 발현) 양쪽 모두일 수 있다. 병적 수용체 발현 또는 분포를 이미지화하고자 하는 이전의 시도는 탐지 방법의 필수적인 감도로 인해 주로 방사능진단에서 주목되어 왔다.
헵타헬릭스(heptahelical) 수용체는 많은 약물학적 활성 성분(예를 들어, β-차단제, H2-산 차단제, 항히스타민제)의 목표 분자이다. 치료적 배치(batch) 외에, 주로 방사능표지된 이들 수용체의 효현성 리간드가 종양의 생체내 탐지 및 위치 탐지를 위한 이른바 수용체 섬광촬영술을 위해 진단적으로 사용된다. 이 경우, 예를 들어 신경내분비 종양에서 보다 강하게 발현되는 소마토스타틴 수용체에의한 수용체 매개된 엔도시토시스의 기작이 사용된다. 소마토스타틴 유사체111In-DTPA-펜테트레오티드 (옥트레오스캔(R)(octreoscan(R))이 통상의 섬광촬영술 진단용으로 임상적으로 입증되었다:문헌[J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 37, 1079-82, 1990; J. Nucl. Med. 32, 1184-9, 1991; J. Nucl. Med. 33, 652-8, 1992; Digestion 3, 54-9, 1994; J. Clin. Invest. 93, 1321-5, 1994; Metabolism 45, 21-3, 1996.].
다른 배치는 VIP-수용체에 결합하는 방사능표지된 VIP 및 VIP-유사체의 사용에 있다. VIP-수용체는 넓은 범위의 종양(즉, 선암종)에서 보다 강하게 발현된다.
제WO 96/30055호는 방사능표지되었으며 방사능진단 및 방사능치료용으로 사용될 수 있는 특수한 VIP-수용체-결합 펩티드 방사능진단 및 방사능치료제를 기술한다. 섬광촬영용으로 Tc-99m으로 표지될 수 있는 VIP-수용체-결합 펩티드가 특별히 유리하게 기술되었다. 추가 문헌으로 다음과 같은 것이 있다 : Cancer Research 54, 690-700, 1994; Endocrinology 136, 2662-80, 1994, J. Nucl. Med. 40, 353-361, 1999.
소마토스타틴 수용체 및 VIP-수용체에 기초한 기술된 모든 진단 배치는 방사능진단성 배치이다(123I,125I,111In 또는99mTc-표지된 펩티드에 의한 섬광촬영).
문헌[EP 588754, US 5650134; US 5620675; US 5225180; WO 96/23527; J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 37, 1083-87, 1990; Lancet 242-4, 1989, J. Nucl. Med. 39, 1913-17, 1998.].
그러나, 종양의 생체내 형광 탐지를 가능하게 하는 염료와 접합된 어떠한 형광 표지된 펩티드도 현재까지 알려지지 않았다(Photochem. Photobiol. 68, 603-632, 1998).
본 발명은 혈관 작용성 장 펩티드, 소마토스타틴 또는 뉴로텐신으로부터 유래되는 단쇄 펩티드와 염료의 접합체로 구성된 종양 진단용 화합물, 광학 진단 물질로서의 이들 화합물의 용도 및 이들 화합물을 포함한 진단 물질에 관한 것이다.
도 1은 실시예 1-3의 펩티드의 아미노기(N-말단 또는 ξ-라이신)로의 인도시아닌 염료 1-3의 고상 합성 커플링을 나타내는 도면.
도 2는 실시예 4-6, 실시예 7-9, 및 실시에 10-12의 펩티드로의 고상 합성커플링을 위한 인도시아닌 염료 1-3으로부터 인도시아닌 염료 4-6, 7-9, 및 10-12의 합성을 나타내는 도면.
도 3은 VIP-수용체 결합 펩티드와 염료 1-9 및 13의 펩티드 접합체의 수지 합성을 나타내는 도면.
도 4는 용매로 PBS(인산 완충식염수, pH 7.4)를 사용한 염료-펩티드 접합체 14-38의 광물리적 성질을 조사한 흡광 및 형광 데이터.
도 5는 전형적인 흡광 및 형광 방출 스펙트럼.
도 6은 750 nm에서 대조구 값에 대한 상대값(0℃에서 1분)으로 ▲은 인도드리카르보시아닌-D-VIP(14-24)-접합체(실시예 25)를, ●은 인도드리카르보시아닌-VIP(14-28)-접합체(실시예 20)를, ■인도드리카르보시아닌-VIP(1-28)-접합체(실시예 16)를 나타내는, 소 혈장 내에서 VIP-수용체-결합 펩티드와 염료 접합체의 안정성을 나타내는 도면.
도 7은 150nM의 염료 표지된 펩티드 존재 하에 37℃에서 1시간 배양 후RIN38 VPAC1의 상대적인 형광 강도를 나타내는 도면.
본 발명의 목적은 목표 조직에 대한 화합물의 수용체 특이적 결합을 사용한 형광 방사선의 탐지에 의해 종양의 민감한 진단을 가능하게 하는 신규한 화합물을 얻을 수 있게 하는 것이다. 이 경우, 생체분자에 커플링된 특정 염료 분자는 고도로 민감하고, 감지될 수 있는 형광 시그널을 내게 된다.
이 목적은 단쇄 펩티드에 공유결합으로 커플링된 형광 염료를 포함한 화합물의 제공에 의해 달성된다. 이들 접합체는 헵타헬릭스 수용체, 특히 소마토스타틴 수용체, VIP(혈관 작용성 장 펩티드)-수용체, 및 뉴로텐신 수용체에 대해 강한 결합 친화성을 가지며, 이들은 임의로는 수용체 매개된 엔도시토시스에 의해 세포 내로 흡수된다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 건강한 세포에 비해 소마토스타틴 수용체, VIP-수용체 또는 뉴로텐신 수용체의 발현이 증가한 종양 세포 및 종양 조직의 기술적으로 간단하고 무해한 광학 진단에 적합하다. 특히 적합한 것은 형광 진단용 화합물이고, 예를 들어 선암종, 신경내분비 종양 또는 췌관 종양과 같은 다양한 종양 유형의 식도, 경부, 결장 및 기관지와 같은 속빈 장기에서의 형광 내시경 진단용으로 특히 유익하다.
특히 바람직한 염료는 이들의 광물리적 및 화학적 특정 요구 사항들을 만족시킨다는 점에 특징이 있다. 광물리적 관점에서, 가장 작은 조직 농도의 경우라도 효과적인 시그널을 제공하기 위해서 염료는 높은 흡수 계수 및 높은 형광 양자 수득률을 가져야 한다. 최대 흡수치는 자유롭게 선택될 수 있는 방식으로 넓은 스펙트럼 범위에서 겹쳐야 한다. 따라서, 저부 조직층(표면에서 수 센티미터 밑)의 탐지를 위해서, 600 내지 900nm의 스펙트럼 범위가 필수적인 반면, 표면 탐지를 위해서는 400 내지 600 nm의 흡수 파장으로 충분하다. 화학적인 관점에서, 염료는 높은 광안정성을 가져야 하고 여기 중 어떠한 분해의 징후(광표백)도 나타내서는 안된다. 일정한 화학양론적 비율을 가진 구조적으로 정의된 염료-펩티드 접합체의 간단하고 유리한 제조가 염료와 펩티드 사이에서 보장되도록, 염료는 펩티드의 고상 합성 제조에서 합성 성분으로서 사용될 수 있어야 하고, 따라서 통상의 합성 조건 하에서 안정해야 한다. 요구 사항은 폴리메틴 염료, 특히 시아닌, 메로시아닌, 옥소놀 및 스쿠아릴리움 염료에 의해 최대로 충족된다.
본 발명의 주제는 따라서 하기 화학식 (I)의 펩티드-폴리메틴 염료 접합체 및 그의 생리학적으로 적합한 염이다.
상기 식에서,
X는 D- 또는 L-형의 α-, β-, 또는 γ-아미노산을 나타내고,
m은 5 내지 30의 수를 나타내며,
이로 인해 생성된 아미노산 서열 (X)m은 직쇄 성질에서 고리화될 수 있거나 또는 두 개의 시스테인 또는 호모시스테인 사이의 이황화 결합 또는 N-말단과 C- 말단 사이에서의 아미드화에 의해 고리화될 수 있고, 혈관 작용성 장 펩티드(VIP),소마토스타틴 또는 뉴로텐신의 아미노산 서열, 또는 VIP, 소마토스타틴 또는 뉴로텐신의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내고,
A1은 수소 원자, 아세틸 라디칼, 또는 1 내지 3개의 카르복시기 및(또는) 1 내지 6개의 히드록시기에 의해 임의로 치환될 수 있는 10 개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬 라디칼, 또는 2 내지 30개의 -CH2CH2O 단위를 가진 폴리(옥시에틸렌) 라디칼, 또는 380 내지 1200 nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 갖는 폴리메틴 염료 부류의 염료 분자를 나타내며,
A2는 히드록시기, 아미노기, 또는 380 내지 1200nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 가지는 폴리메틴 염료 부류의 염료 분자를 나타내고,
단, 라디칼 A1또는 A2중 적어도 하나는 380 내지 1200 nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 가지는 폴리메틴 염료 부류의 염료 분자를 나타내고, A1및(또는) A2가 380 내지 1200nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 가지는 폴리메틸 염료 부류의 염료 분자를 나타내는 경우에, A1은 N-말단 아미노기에 연결되고, A2는 아미노산 서열 (X)m중의 어느 한 위치의 아미노산 라이신의 아미노기 또는 아미노산 세린의 히드록시기에 연결된다.
상기 언급된 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체는, 즉 짧아진 아미노산 서열, 개개의 또는 전체 아미노산의 해당 D-아미노산으로의 교환, 개개의아미노산의 다른 아미노산으로의 교환, 역전된 서열 및 상기 언급된 특징의 조합을 나타낸다.
또한 상기 언급된 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체는 나프탈라닌, 시클로헥실알라닌, 노르루신, 노르발린, α-아미노아디프산, α-아미노부티르산, β-알라닌, β-시클로헥실알라닌, 오르니틴, 사르코신 또는 δ-히드록시라이신과 같은 천연형이 아닌 아미노산을 포함할 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 실시태양은 염료 분자 A1및(또는) A2가 시아닌, 스쿠아릴리움, 크로코니움, 메로시아닌, 또는 옥소놀 염료를 나타내는 화학식 (I)의 화합물이다.
본 발명에 따른 화학식 (I)의 다른 바람직한 화합물은 염료 분자 A1및(또는) A2가 화학식 (II)의 시아닌 염료 또는 스쿠아릴리움 염료를 나타낸다는 점에 특징이 있다.
상기 식에서,
D는 하기 화학식 (III) 내지 (VI)에 해당하는 단편을 나타내고, 여기서 별표로 확인된 위치는 B와 연결되는 곳을 의미하고,
B는 화학식 (VII) 내지 (XII)에 해당하는 단편을 나타내고,
R1및 R2는 E1을 나타내고,
R3는 플루오르, 염소, 브롬, 요오드 원자 또는 니트로기를 나타내거나 또는 -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1, -E1라디칼을 나타내고, 여기서 E1및 E2는 각각 독립적으로 수소 원자, C1-C4술포알킬사슬, 포화 또는 불포화된 분지쇄 또는 직쇄 C1-C50알킬 사슬(여기서, 이 사슬 또는 이 사슬의 일부는 임의로는 하나 이상의 방향족 또는 포화 시클릭 C5-C6단위 또는 비시클릭 C10단위를 형성할 수 있으며, C1-C50알킬 사슬은 0 내지 15개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 3개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환됨)을 나타내고,
R4는 수소 원자, 플루오르, 염소, 브롬, 요오드 원자 또는 분지쇄 또는 직쇄 C1-C10알킬 사슬을 나타내고,
b는 2 또는 3의 수를 의미하며,
X 및 Y는 각각 독립적으로 O, S, Se, -CH=CH- 또는 C(CH3)2을 나타내고,
L은 하기 화학식에 해당하는 기를 나타내며,
n은 1 내지 10의 수를 의미한다.
(상기 언급된 식에서, 분자 부분의 좌측에 그려진 실선은 염료 골격에 연결되는 것을 나타내고, 분자 부분의 우측에 그려진 점선은 펩티드에 연결되는 것을 나타낸다.)
폴리메틴 염료 부류 중에서, 시아닌 염료, 예를 들어 인돌 구조에 기초한 인도카르보-, 인도디카르보- 및 인도트리카르보시아닌이 특히 유리하다. 이들 구조는 높은 화학적 및 광화학적 안정성을 갖는다는 특징이 있다. 유리한 합성에 의해, 바라는 어떠한 방식으로라도 400 내지 1000nm에서 흡수해서 형광을 발생할 수 있는 유도체를 얻을 수 있고, 적합한 링커 및 관능기, 바람직하게는 카르복실기에 의한 치환으로 펩티드에 연결될 수 있고, 바람직하게는 술포네이트기에 의해 높은 수용성을 가진다. 문헌 중에 알려진 시아닌 염료와는 달리, 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 오직 하나의 반응기만을 가지며, 이는 접합체의 수지 합성의 일부로서 펩티드와의 화학양론적으로 정의된 결합을 가능하게 한다.
본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물의 특히 바람직한 실시태양은 따라서 다음과 같은 점에서 특징이 있다:
-- 염료 분자 A1및(또는) A2가 인도카르보시아닌 염료, 인도디카르보시아닌 염료 또는 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내고,
-- 염료 분자 A1및(또는) A2가 화학식 (XIII) 또는 (XIV)의 인도카르보시아닌 염료, 인도디카르보시아닌 염료 또는 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내고,
(여기서, p은 1, 2 또는 3을 나타내고,
n은 1, 2, 3, 4 또는 10의 수를 나타내고,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필, 2-술포에틸, 3-메틸-3-술포프로필, 메틸, 에틸 또는 프로필 라디칼을 나타내고,
R3는 수소, 염소, 브롬, 요오드 원자 또는 니트로기를 나타내거나 또는 -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1라디칼을 나타내고,
E1및 E2는 각각 독립적으로 수소 원자, 또는 메틸 또는 에틸 라디칼, 또는 0 내지 2개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 1개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환된 C3-C6알킬 라디칼을 나타내거나, 또는 E1및 E2는 2 내지 30개의 -CH2CH2O 단위를 가진 폴리(옥시에틸렌)글리콜 라디칼을 나타냄)
--염료 분자 A1및(또는) A2은 화학식 (XIII) 또는 (XIV)의 인도카르보시아닌 염료, 인도디카르보시아닌 염료 또는 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내고,
<화학식 XIII>
<화학식 XIV>
(여기서, p은 1, 2 또는 3을 나타내고,
n은 1, 2 또는 4를 나타내고,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸 또는 3-술포프로필 라디칼을 나타내고,
R3는 수소 또는 -COOE1또는 -CONHE1라디칼을 나타내고,
E1은 수소 원자, 또는 메틸 또는 에틸 라디칼을 의미하거나, 또는 0 내지 2개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 1개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지5개의 히드록시기에 의해 치환된 C3-C6알킬 라디칼을 의미함)
--염료 분자 A1및(또는) A2은 화학식 (XV) 또는 (XVI)의 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내고,
상기 식에서, n은 2 또는 3을 나타내고,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필 또는 2-술포에틸 라디칼을 나타내고,
R3는 -CONH-펩티드, -CONH-(CH2)m-CONH-펩티드, -CONH-(CH2)n-NH-CS-NH-펩티드 또는 -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-펩티드(m = 1 내지 10, n = 2 또는 3)를 나타내거나, 또는 R3는 하기 화학식의 기를 나타내고:
R4및 R5는 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼 또는 예를 들어 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실과 같은 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타내고,
R6는 -(CH2)m-CONH-펩티드(m = 0 내지 2) 또는 -(CH2)m-NH-CS-NH-펩티드(m = 0 내지 2) 중 하나를 나타내고,
X는 산소 원자 또는 황 원자를 나타냄)
-- 염료 분자 A1및(또는) A2는 화학식 (XVII)의 인도트리카르보시아닌 염료를 나타낸다.
(상기 식에서,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸 라디칼 또는 3-술포프로필 라디칼을 나타내고,
R3는 -CONH-펩티드, -CONH-(CH2)m-CONH-펩티드, -CONH-(CH2)n-NH-CS-NH-펩티드 또는 -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-펩티드(m = 1 내지 10, n = 2 또는 3)를 나타내거나,
또는 R3는 하기 화학식의 기를 나타내고,
R4및 R5는 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼, 또는 예를 들어 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실과 같은 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타냄)
종양 탐지를 위한 염료 표지된 항체의 사용은 문헌[J. Cell. Pharmacol. 3, 141-145, 1992; Cancer Immunol. Immunother. 41, 257-63, 1995; Cancer Research 54, 2643-9, 1994, Biotechnol. Prog. 13, 649-658, 1997]에 공지되어 있다.
반면, 본 발명에 따른 화합물은 바람직하지 못한 약물동태학(긴 혈중 반감기, 알레르기성 부작용(면역원성))에 의해 진단 포텐셜이 제한되지 않으면서, 목표구조에 대한 높은 결합과 같은 항체의 유리한 점을 나타내는 저분자량의 펩티드 및 펩티드 유도체를 생체분자로 포함한다.
펩티드 서열에 대한 생물학적 및 약물학적 요구 사항은 따라서 목표 조직에서의 급속한 증진 및 신체의 나머지 부분으로부터의(바람직하게는 신장 배출 경로를 통해) 급속한 제거가 동시에 일어나는 경우에서의 적절한 혈장 안정성이다.
아주 놀랍게도, VIP 서열의 C-말단 부위의 5개 이상의 아미노산을 포함하고또한 형광 진단을 위한 염료가 결합된 펩티드 서열은 천연 VIP에 필적하는 종양 세포에서의 이미지를 가진다는 사실이 발견되었다. 더욱이, 하나 이상의 D-아미노산의 삽입 또는 하나 이상의 D-아미노산에 의한 교환에 의해 혈장 안정성이 상당히 증가할 수 있다는 것이 발견되었다. VIP-결합 염료-펩티드 접합체에서 모든 L-아미노산을 D-아미노산으로 완전히 교환하는 예에서, 결합 성질 및 세포 이미지가 변하지 않음을 보여주는 것이 가능했었다.
본 발명에 따른 화학식 (I)의 특히 바람직한 다른 화합물은 다음과 같은 특징을 가진다:
-- (X)m은 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN에 상응하는 자연적으로 존재하는 천연의 인간 혈관 작용성 장 펩티드를의 아미노산 서열을 나타내거나, 또는 5 내지 30개의 아미노산으로 이루어진 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내고,
-- (X)m은에 상응하는 소마토스타틴의 아미노산 서열을 나타내거나, 또는 5 내지 20개의 아미노산으로 이루어진 소마토스타틴의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내고,
-- (X)m은 피로글루탐산-LYENKPRRPYIL에 상응하는 뉴로텐신의 아미노산 서열을 나타내거나, 또는 5 내지 20개의 아미노산으로 이루어진 뉴로텐신의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내고,
-- 혈관 작용성 장 펩티드(VIP)의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체는 하기 아미노산 서열로부터 선택된다:
-- VIP 서열의 유사체로서, 하기 서열이 선택된다:
FSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN
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HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIIN
HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIWN
HSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILW
-- VIP의 유사체로서, 하기 화학식에 따른 화합물이 선택된다:
HSDAVFTX1X2Y X3RLRKQMAVK KYLNSILN(상기 식에서 X1, X2및 X3는 어떤 아미노산이라도 나타낼 수 있음)
-- 2 내지 m개(m은 상기에서 나타낸 의미를 가짐)의 아미노산은 각각 독립적으로 이들 각각의 D-아미노산으로 또는 다른 L- 또는 D-아미노산으로 교환될 수 있으며,
-- (X)m아미노산 중 하나 이상은 각각 독립적으로 천연형이 아닌 다른 아미노산 또는 아미노산 유도체로 교환될 수 있으며,
-- (X)m아미노산 중 하나 이상은 각각 독립적으로 예를 들어 나프탈라닌, 시클로헥실알라닌, 노르루신, 노르발린, α-아미노아디프산, α-아미노부티르산, β-알라닌, β-시클로헥실알라닌, 오르니틴, 사르코신 또는 δ-히드록시라이신과 같은 천연형이 아닌 다른 아미노산 또는 아미노산 유도체로 교환될 수 있으며,
-- VIP의 유사체로서, 하기 화학식에 따른 화합물이 선택되며,
X1SDAVX2TDNX3TRLRKQMAVK KX4LNSILN
(여기서, X1, X2, X3및 X4는 예를 들어 나프탈라닌, 시클로헥실알라닌, 노르루신, 노르발린, α-아미노아디프산, α-아미노부티르산, β-알라닌, β-시클로헥실알라닌, 오르니틴, 사르코신 또는 δ-히드록시라이신과 같은 천연형이 아닌 아미노산 또는 아미노산 유도체를 나타낼 수 있음)
-- 모든 아미노산 (X)m은 각자의 D-아미노산으로 교환되며,
-- 역합성 아미노산 서열이 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되며,
-- 역합성 아미노산 서열(여기서, 2 내지 m개(여기서, m은 상기에서 언급된 의미를 가짐)의 아미노산이 각자의 D-아미노산으로 교환됨)이 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되며,
-- 하기 아미노산 서열이 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되며:
-- 하기 아미노산 서열이 소마토스타틴의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되며:
-- 하기 아미노산 서열이 뉴로텐신의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택된다:
화학식 (I)의 용어는 일반적인 술어의 아미노산 서열을 포함한다. N-말단은 항상 왼쪽에 위치하고, C-말단은 오른쪽에 위치한다(비치환된 경우는 H-(X)m-OH 또는 H-(X)m-NH2(아미드의 경우)임). 아미노산의 사용된 1-문자 약자는 문헌[보단스즈키(M. Bodanszky)의 Peptide Chemistry---A Practical Textbook, 2nd Edition, Springer-Verlag Heidelberg 1993, p.3.]에서 찾아볼 수 있다. 대문자는 L-형(천연 아미노산)을 의미하고, 소문자는 D-아미노산을 의미하고, 이황화 결합(시클릭 펩티드)는 해당 문자(C=시스테인 또는 호모시스테인)를 연결하는 선에 의해 확인된다. 역합성으로, 합성시에 아미노산의 순서가 주어진 천연 서열에 대해 역전되는 서열이 나타나고, 즉 합성이 본래의 N-말단 아미노산에서 시작하여 본래의 C-말단 아미노산에 이르는 서열을 만든다.
VIP의 유사체는 치환 분석을 사용하여 결정된다(실시예 43 참조). 특히 바람직한 VIP 유사체는 하기 화합물이다:
His-Trp-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 1)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Phe-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 2)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Lys-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 3)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Gln-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 4)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Arg-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 5)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Trp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 6)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Arg-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 7)
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Arg-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn
(서열 확인 번호: 8).
본 발명에 따른 물질은 방사능 표지된 물질에 비해 다양한 장점을 가진다. 형광 염료는 흔히 형광 방출을 위해 언제든지 여기될 수 있다. 연속 시그널이 존재하지 않으며, 이는 기저로 해당 반감기를 가진 분해를 사용한다. 따라서, 진단 시간은 자유 자재로 선택될 수 있으며, 원하는 대로 반복될 수 있으며, 동위원소의 반감기에 의해 영향 받지 않는다. 환자는 어떠한 이온화 방사선에도 노출되지 않으며 또한 사용된 광방사선은 사용된 방사선량 내에서 무해하다. 광학 탐지 기술은 소수의 광자의 고도로 민감한 탐지를 허용하고 따라서 감도 면에서 방사능진단에 필적한다.
염료-생체분자 접합체의 사용과 함께 근적외선(NIR 방사선)을 사용한 진단 방법이 기술되어 있다(WO 96/17628). 본 발명의 경우, 펩티드 접합체가 자동화된 고상 합성 방법에 의해서 유리한 수율 및 고순도로 생산될 수 있다는 것이 특히 유리한 것으로 입증되었다. 충분히 놀랍게도, 다양한 카르복실기를 가진 인도시아닌 화합물이 아미노산 유사체로 사용될 수 있고, 라이신의 N-말단기 및 아미노기 모두가 고상(수지)에 커플링될 수 있다는 것이 발견되었다. 수지를 잘라낸 후 및 크로마토그래피 정제 후, 염료-펩티드 접합체를 >95% 순도로 획득하였다. 신규한 커플링 방법이 아미노산 시스테인 또는 호모시스테인으로의 할로아세틸 염료의 커플링을 허용하고, 이는 천연 VIP 서열의 어떤 아미노산이라도 대신할 수 있다.
형광 여기를 위해 빛을 사용할 때의 기본적인 문제점은 빛의 제한된 투과 깊이로, VIS의 경우 1 mm 이하의 범위이나, NIR의 경우 cm이다. 투과 깊이와 관련해서, 탐지 방법은 표면 조직 질환은 물론 연조직에서는 문제가 없다. 따라서, 본 발명의 주제는 유방조영술 방법, 내시경 방법 및 수술중 방법이고, 여기서는 질환 조직 부위가 본 발명에 따른 화합물을 사용하여 형광 또는 흡수되지 않은 방사선의 탐지에 의해 진단된다. 본 발명의 보다 독특한 주제는 내시경 방법, 예를 들어 결장경, 기관지경, 식도 내시경에서의 본 발명에 따른 화합물을 사용하는 것이고, 여기서는 표면 부위의 조직에서의 변화가 진단된다. 직접적인 시각적 평가와 함께백색광의 사용이 내시경 검사에서 보편적이다. 본 발명에 따른 화합물은 조직 특이적인 시그널의 생성, 특히 미성숙하고 시각적으로 탐지할 수 없는 조직 변화(예를 들어, 결장의 이형성증)의 진단의 경우에서의 조직 특이적인 시그널의 생성에 의해 그 방법의 결정적인 향상에 기여한다.
본 발명에 따른 염료 커플링된 화합물을 화학적으로 유도된 이형성증 및 결장암에 걸린 쥐의 장내에서 분무한 후, 후속 세척 및 내시경 형광 진단의 실행(여기 740 nm, 탐지 760nm 이상)은 결장 내의 증가된 형광을 갖는 조직 부위를 탐지하는 것을 가능하게 한다는 것이 발견되었다.
따라서 본 발명의 주제는 본 발명의 화합물을 사용한 내시경 형광 진단, 특히 위장관의 내시경 형광 진단을 위한 방법이다. 이 경우, 하나 이상의 물질이 조직 내로 바람직하게는 정맥내로, 또는 국부적으로 분무에 의해 공급되고, 또한 사용된 염료의 전자적여기를 위해 해당 스펙트럼 범위의 빛이 조사된다. 반사된 형광 방사선 또는 염료에 의해 방출된 형광 방사선을 기록하였다. 바람직한 방법은 조직이 넓은 표면 범위에 걸쳐 조사되고 또한 형광 방사선이 CCD 카메라를 이용한 이미지화에 의해 국소 분해능으로 형광 복사가 표시되거나, 또는 이미지화될 조직 부위가 섬유광학 라이트 가이드(fiber optic light guide)에 의해 래스터(raster)되고 얻어진 시그널이 컴퓨터에 의해 반응하여 합성 이미지가 된다. 이 경우, 스펙트럼으로 및(또는) 위상 선택적으로는 물론 시불변적 및(또는) 시간 분석형 방식으로 형광을 탐지할 수 있고 평가할 수 있다. 획득한 형광 이미지는 백색광 이미지와 동시에 만들어질 수 있으며 데이타 평가를 위해 도면에서 서로 겹치게 만들어진다.
본 발명에 따른 화합물의 합성은 문헌에서 알려진 방법과 유사한 방식으로 수행된다. 펩티드는 중합체 수지 중에서 고상 합성 방식으로 제조된다. 상세한 내용은 당업계에서 숙련된 기술을 가진 자들에게 알려져 있다. 문헌[Peptide Chemistry -- A Practical Textbook (M. Bodanszky), 2nd Edition, Springer-Verlag Heidelberg 1993; Anti-Cancer Drug Design 12, 145-167, 1997; J. Am. Chem. Soc. 117, 11821-2, 1995].
염료는 별도로 제조하고, 펩티드의 고상 합성 제조의 일부로서 염료를 펩티드에 커플링시키고, 수지로부터의 절단 및 정제 후에 고순도의 화합물로 본 발명에 따른 화합물을 획득한다. 통상의 시약에 의한 활성화 후 펩티드의 아미노기, 특히 라이신의 ξ-아미노기 또는 N-말단 펩티드 아미노기에 커플링되는 카르복실기를 포함한 염료들이 바람직하다. 아울러, 펩티드의 티올기, 특히 시스테인 또는 호모시스테인 아미노산에 커플링되는 할로알킬 또는 할로아세틸 라디칼을 가진 염료가 바람직하다.
폴리메틴 염료의 합성에 관해서는 다음과 같은 문헌에 기재되어 있다 : Bioconjugate Chem. 4, 105-111, 1993; Bioconjugate Chem. 7, 356-62, 1996; Bioconjugate Chem. 8, 751-56, 1997; Cytometry 10, 11-19, 1989 및 11, 418-30, 1990; J. Heterocycl. Chem. 33, 1871-6, 1996; J. Org. Chem. 60, 2391-5, 1995; Dyes and Pigments 17, 19-27, 1991; Dyes and Pigments 21, 227-34, 1993; J. Fluoresc. 3, 153-155, 1993; Anal. Biochem. 217, 197-204, 1994; US 4981977; US5688966; US 5808044; WO 97/42976; WO 97/42978; WO 98/22146; WO 98/26077; EP 0800831].
고상 펩티드로의 커플링에 특히 적합한 것은 정확히 한 개의 카르복실기를 포함한 염료, 특히 유리하게는 하기 화학식 (XVIII)의 시아닌 염료, 하기 화학식 (XIX) 또는 (XX)의 시아닌 염료, 또는 하기 화학식 (XXI)의 시아닌 염료이다.
(상기 식에서,
p는 1, 2 또는 3을 나타내고,
n는 1, 2, 3, 4 또는 10을 나타내고,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필, 2-술포에틸, 3-메틸-3-술포프로필, 메틸, 에틸 또는 프로필 라디칼을 나타내고,
R3는 수소를 나타내거나 또는 -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1라디칼을 나타내고,
E1및 E2는 각각 독립적으로 수소 원자를 나타내거나 또는 메틸, 에틸, 또는0 내지 2개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 1개의 카르보닐기에 의해 단속되고 (또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환된 C3-C6알킬 라디칼을 나타냄)
(상기 화학시규 XIX 및 XX에서,
n은 2 또는 3을 나타내고,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필 또는 2-술포에틸 라디칼을 나타내고,
R3는 -COOH기 또는 -CONH-(CH2)n-COOH(n = 2 또는 3), -CONH-(CH2)n-NCS(n = 2또는 3), -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1(n = 2 또는 3 이고 X1= Cl, Br, I) 또는중 하나를 나타내고:
R4및 R5은 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼, 또는 예를 들어 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실과 같은 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타내고,
R6은 -(CH2)m-COOH(m = 0 내지 2), -(CH2)m-NCS (m = 0 내지 2) 중 하나를 나타내고:
X는 산소 원자 또는 황 원자를 나타냄)
(상기 식에서,
R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸-, 3-술포프로필 또는 2-술포에틸 라디칼을 나타내고,
R3는 -COOH기 또는 -CONH-(CH2)n-COOH(n = 2 또는 3), -CONH-(CH2)n-NCS(n = 2 또는 3), -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1(n = 2 또는 3이고, X1= Cl, Br, I) 또는중 하나를 나타내고:
R4및 R5는 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼 또는 예를 들어 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실과 같은 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타냄)
예를 들어 카르복실기와 같은 오직 하나의 활성화 가능한 기 또는 예를 들어 이소티오시아네이트, 할로알킬기 또는 할로아세틸기와 같은 이미 활성화된 기의 장점은 화학적으로 균일한 커플링을 수행할 수 있다는 점에 있다. 할로아세틸기는 시스테인 또는 호모시스테인의 메르캅토기와의 화학적으로 균일한 커플링이 수행된다는 점에서 특별한 장점을 가진다. 이 커플링은 보호기가 제거되는 비결합된 펩티드에 대해 용액 중에서 수행될 수 있다. 부수 반응이 일어나지 않으면서 활성화기에 의한 펩티드와의 커플링이 가능하다. 수용성을 증가시키기 위해, 염료 중의 펩티드-염료 접합체는 증가된 수의 히드록시기를 나타낸다. 염료의 인돌 시스템 중에 링커가 위치함 의해, 추가로 술포네이트기를 포함한 라디칼에 의한 적절한 친수성이 인돌 시스템의 질소 원자에서 만들어질 수 있다. 그 결과, 구조적으로 균일한 커플링 반응이 펩티드에서 수행될 수 있다(실시예 4 내지 38 및 44 내지 49 참조).
본 발명의 다른 주제는 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물을 통상의 보조제 및(또는) 비히클 뿐만 아니라 희석제와 함께 포함하는 것을 특징으로 하는 질환이 일어난 조직 부위의 생체내 진단을 위한 광학 진단제이다.
하기 실시예는 본 발명을 설명한다.
실시예 1 내지 3:펩티드의 아미노기(N-말단 또는 ξ-라이신)로의 인도시아닌 염료 1-3의 고상 합성 커플링
합성은 일반적으로 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-3H-인돌레닌 및 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-5-카르복시-3H-인돌레닌로부터 개시되어 수행된다 (Cytometry 10, 11-19, 1989, Talanta 39, 505-510, 1992).
실시예 1: 1,1'-비스)4-술포부틸)인도카르보시아닌-5-카르복시산, 나트륨염 (1)의 합성
0.8g(4.0mmol)의 N,N-디페닐포름아미딘을 15 ml의 무수 아세트산에 도입하고, 실온에서 1.4 g(4.2mmol)의 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-5-카르복시-3H-인돌레닌과 조금씩 혼합하고, 30 분 동안 120℃에서 교반하고, 이후 수조로 실온으로 냉각시켰다. 이후, 1.2 g(4.1mmol)의 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-3H-인돌레닌, 1.2g(14.6mmol)의 무수 아세트산 나트륨, 15 ml의 무수 아세트산 및 6ml의 아세트산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 120℃로 가열하고, 100ml의 에테르와 혼합하였다. 침전된 고형분을 여과시켰다. RP-실리카 겔 유로프렙(EUROPREP) 60-30 C18, 60A, 20-45 m에서 크로마토그래피 정제를 수행하였다(용출액: 물/MeOH, 0%부터 70% MeOH까지의 단계별 농도구배). 메탄올을 회전 증발기에서 생성물 함유 분획으로부터 제거하였다. 수득량 1.5g (58%), 적색 동결건조물.
실시예 2:
1,1'-비스(4-술포부틸)인도디카르보시아닌-5-카르복시산, 나트륨염(2)의 합성
15 ml의 무수 아세트산 중에서 1.2g(4.1mmol)의 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-3H-인돌레닌 및 1.0g(3.9mmol)의 알데하이드-비스-페닐이민 염산을 30분 동안 120℃에서 교반한 후, 수조로 실온으로 냉각시켰다. 이후, 1.4g (4.2mmol)의 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-5-카르복시-3H-인돌레닌, 1.2g (14.6mmol)의 무수 아세트산 나트륨, 15 ml의 무수 아세트산 및 6ml의 아세트산을 차례로 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 120℃로 가열하고, 푸른 색이 된 용액을 냉각시키고 100ml의 에테르와 혼합하였다. 워킹업 및 정제를 실시예 1에서 기술된 대로 수행하였다. 수득량: 1.8g(66%), 푸른 색 동결 건조물.
실시예 3:
1,1'-bis(4-술포부틸)인도트리카르보시아닌-5-카르복시산, 나트륨염(3)의 합성
15 ml의 무수 아세트산 중에서 1.2g(4.1mmol)의 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-3H-인돌레닌 및 1.1g(3.9mmol)의 글루타콘알데하이드-디아닐 염산을 30분 동안 120℃에서 교반한 후, 수조로 실온으로 냉각시켰다. 이후, 1.4g (4.2mmol)의 1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸-5-카르복시-3H-인돌레닌, 1.2g (14.6mmol)의 무수 아세트산 나트륨, 15 ml의 무수 아세트산 및 6 ml의 아세트산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 120℃로 가열하고, 푸르게 된 용액을 냉각시키고, 100 ml의 에테르와 혼합하였다. 워킹업 및 정제를 실시예 1에서 기술된 대로 수행하였다. 수득량: 1.8g(60%), 푸른 색 동결 건조물.
실시예 1-3의 화합물의 구조를 도 1에 나타내었다.
실시예 4 내지 6:펩티드의 아미노기(N-말단 또는 ξ-라이신)로의 고상 합성 커플링을 위한 인도시아닌 염료 1-3으로부터 인도시아닌 염료 4-6의 합성
합성은 β-알라닌-t-부틸에스테르에 의한 염료 1-3의 아미드화 및 t-부틸에스테르기의 산화적 절단에 의해 수행되었다.
20 ml의 디메틸포름아미드 중의 0.5mmol의 염료 1-3 및 0.1g(1.0 mmol)의 트리에틸아민 용액을 0℃에서 10ml의 디메틸포름아미드 중의 0.5mmol의 TBTU와 혼합하고, 15분 동안 0℃에서 교반하였다. 이후, 5 ml의 디메틸포름아미드 중의 0.11g(0.6mmol)의 β-알라닌-t-부틸에스테르-염산 및 0.6mmol의 트리에틸아민 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 2 시간 동안 실온에서 교반하였다. 100ml의 디에틸 에테르를 첨가한 후, 침전된 고형분을 여과시키고, 20ml의 디클로로메탄 중에 용해시키고, 10ml의 트리플루오로아세트산으로 혼합하고, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 진공에서 증발하여 농축시키고, 실시예 1에서 기술된 대로 잔여물을 크로마토그래피하여 정제하고 냉동 건조하였다. 수득량: 0.21g(58%)의 4, 0.29g(76%)의 5, 0.28g(72%)의 6.
실시예 7 내지 9:펩티드의 아미노기(N-말단 또는 ξ-라이신)로의 고상 합성 커플링을 위한 인도시아닌 염료 1-3으로부터 인도시아닌 염료 7-9의 합성
0.1g(0.6mmol)의 글리신-t-부틸에스테르-염산을 사용하여 실시예 4-6과 유사하게 제조를 수행하였다. 수득량: 0.25g(68%)의 4, 0.30g(80%)의 5, 0.32g(83%)의 6.
실시예 10 내지 12:시스테인의 티올기로의 커플링에 의한 펩티드로의 고상 합성커플링을 위한 인도시아닌 염료 1-3으로부터 인도시아닌 염료 10-12의 합성
합성은 3-아미노프로판올에 의한 염료 1-3의 아미드화와 후속의 알콜기의 브롬으로의 전환에 의해 수행되었다.
20 ml의 디메틸포름아미드 중의 0.5mmol의 염료 1-3 및 0.1g (1.0 mmol)의 트리에틸아민을 0℃에서 10ml의 디메틸포름아미드 중의 0.5mmol의 TBTU와 혼합하고, 0℃에서 15분간 교반시켰다. 이후, 5ml의 디메틸포름아미드 중의 850mg(1.2mmol)의 3-아미노프로판올 및 1.2mmol의 트리에틸아민을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 100ml의 디에틸 에테르를 첨가한 후, 실시예 1에서 기술된 것과 같이 침전된 고형물을 여과하고 크로마토그래피로 정제하고 동결 건조시켰다.
브롬화물 10-12로의 반응은 4ml의 디클로로메탄 및 4ml의 디메틸포름아미드의 혼합물 중에서 0.3mmol의 중간 생성물과 55mg(0.5mmol)의 N-브로모숙신이미드및 130 mg(0.5mmol)의 트리페닐포스핀을 48시간 동안 4℃에서 교반하여 수행되었다. 3ml의 에테르를 첨가하여, 생성물을 침전시키고, 여과시키고 펩티드 커플링 중에서 조생성물로 사용하였다.
실시예 14-16 및 18-27:
a)고상 펩티드 합성: Fmoc 반응방식 및 유사하게 표준-Fmoc 머신 프로토콜에 따라서 (Pept. Res., 36 (1990) 225), 커플링제 PyBOP (벤조트리아졸-1-일옥시-트리스-피롤리디노포스포니움 헥사플루오로포스페이트) 및 N-메틸모르폴린을 사용하여 50μmol의 텐타겔-에스램(TentaGel-Sram) 수지 (Rapp Polymers, Tubingen) 중에서 펩티드를 합성하였다. 하기 측면 보호기를 사용하였다: Cys, His, Asn 및 Gln의 경우 트리틸; Asp, Glu, Ser 및 Thr의 경우 t-부틸; Lys 및 Trp의 경우 t-부틸옥시카르보닐, 및 Arg의 경우 펜타메틸크로마노술포닐.
라이신의 ξ-아미노기(실시예 24)로의 커플링은 직교 보호기 기술에 의해 수행되었다. 라이신 성분으로 Fmoc-Lys(Dde-OH)을 사용하였고, 펩티드는 상기에서 기술된 것과 같이 합성하였다. N-말단의 아세틸화 후, Dde-보호기의 절단을 3% 히드라진 하이드레이트에 의해 선택적으로 수행하였다.
b)염료 커플링: 염료를 아직 고상에 결합되어 있는 펩티드 중의 N-말단 위치 또는 라이신에 결합하였다. 연결시 600㎕의 디메틸포름아미드 중에서 75 μmol의 각각의 염료 1-9 및 13 (1.5 당량)을 용해시키고 83 μmol의 TBTU (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로니움-테트라플루오로보레이트) 및 150 μmol의 N,N-디이소프로필에틸아민과 혼합하였다. 2분 후, 이 반응 혼합물을 각각의 펩티드-운반 수지에 첨가하고 밤새 반응하도록 하였다. 이후, 수지를 디메틸포름아미드로 5회 세척하고, 디클로로메탄으로 3회 세척하고 공기 중에서 건조시켰다.
c)보호기의 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리: 10 ml의 트리플루오로아세트산 중의 750mg의 페놀, 250㎕의 에탄디티올, 500㎕의 티오아니솔 및 500㎕의 물로 구성된 혼합물 1.5ml 각각을 펩티드-접합체 운반 수지 중에 첨가하고 4시간 동안 작용하도록 하였다. 염료-펩티드 접합체를 차가운 t-부틸메틸 에테르로 침전시키고, 차가운 디에틸 에테르로 세척하고, 5% 아세트산 중에 용해시키고 동결 건조시켰다. 순도 분석 및 접합체의 정제를 Vydac-C18 칼럼 중의 RP-HPLC (농도 구배:20 분간 물+0, 05% TFA/아세토니트릴, 5% 내지 60% 아세토니트릴, 탐지: 214 및 750 nm)를 사용하여 수행하였다.
합성된 염료-펩티드 접합체의 구조를 하기 개관 중에 요약하였다.
VIP-수용체 결합 펩티드 I과 염료의 접합체
실시예 14 내지 16: 염료1-3과 VIP (1-28)의 접합체
n = 1: 인도카르보시아닌-VIP (1-28)-접합체14
n = 2: 인도디카르보시아닌-VIP (1-28)-접합체15
n = 3: 인도트리카르보시아닌-VIP (1-28)-접합체16
실시예 17: 염료12와 Cys17-VIP (1-28)의 접합체
인도트리카르보시아닌-Cys17-VIP (1-28)-접합체17
실시예 18 내지 20: 염료1-3과 VIP (14-28)의 접합체
n = 1: 인도카르보시아닌-VIP (14-28)-접합체18
n = 2: 인도디카르보시아닌-VIP (14-28)-접합체19
n = 3: 인도트리카르보시아닌-VIP (14-28)-접합체20
실시예 21 내지 23: 염료4-6과 VIP (14-24)의 접합체
n = 1: 인도카르보시아닌-β-알라닌-VIP (14-24)-접합체21
n = 2: 인도디카르보시아닌-β-알라닌-VIP (14-24)-접합체22
n = 3: 인도트리카르보시아닌-β-알라닌-VIP (14-24)-접합체23
실시예 17:VI-수용체 결합 펩티드 및 염료 10-12로 이루어진 펩티드 접합체의 수지 합성.
브롬 운반 염료10-12을 화학선택적으로 티올에테르 결합으로 펩티드에 결합시키기 위해, 직교 보호기를 가진 시스테인 또는 호모시스테인을 반드시 펩티드 중에 도입해야 한다. 고상 펩티드 합성은 실시예 14-16/18-27에서 기술된 것과 같이 수행하였고, 성분 Fmoc-cys(Mmt)-OH를 사용하였다. 다른 측면 보호기를 획득하면서 모노메톡시트리틸기(Mmt)를 디클로로메탄 중의 1% TFA/5% 트리이소부틸실란으로 절단할 수 있다. 이 연결 중에, 수지를 상기 각각의 용액 1ml로 10분간 3회 배양하였다. 수지를 디클로로메탄(3x), DMF(5x) 및 에탄올(3x)로 세척한 후, 수지를 20% 세슘 카르보네이트 용액 (1 ml)로 2분간 배양한 후 물(2x), 에탄올(2x) 및 DMF(2x) 로 세척하였다. 이후, 75 μmol의 각각의 염료10-12(1.5 당량)를 600㎕의 디메틸포름아미드 중에 용해시키고 각각의 수지에 첨가하고, 30분 후 이 과정을 반복하였다. 이후 수지를 디메틸포름아미드(5x) 및 디클로로메탄로(2x)로 5회 세척하였다. 수지를 공기 중에서 건조시킨 후, 보호기 절단 및 비히클의 발기를 상기에서 기술된 대로 수행하였다.
다른 합성된 염료-펩티드 접합체의 구조를 하기 개관에 요약하였다.
VIP-수용체 결합 펩티드 II와의 염료 접합체
실시예 24: Lys25-VIP (14-25)와 염료6의 접합체
(ξ-아미노-인도트리카르보시아닌)-Lys25-VIP (14-25)-접합체24
실시예 25: D-VIP (14-24)와 염료3의 접합체
인도트리카르보시아닌-D-VIP (14-24)-접합체25
실시예 26: D-VIP (14-24)와 염료13의 접합체
인도트리카르보시아닌-5-카르복시산 글루카미드-D-VIP (14-24)-접합체26
실시예 27: 레트로-D-VIP (14-24)와 염료13의 접합체
인도트리카르보시아닌-5-카르복시산 글루카미드-레트로-D-VIP (14-24)-접합체27
실시예 28 내지 32:소마토스타틴-수용체 결합 펩티드 및 염료 1-9 및 13으로 이루어진 펩티드 접합체의 수지 합성
일반적 지침:
합성은 500mg의 TCP-Thr(But)-fmoc-수지 펩켐 튜빙겐 콤파니(Pepchem Tubingen Company)에서 0.49 mmol/g의 농도로 수행하였다. 펩티드는 하기 일시적 보호기를 사용하여 "단계별"로 합성하였다: Thr 및 Ser의 경우 tert-부틸 , Cys 및 Asp의 경우 트리틸, Trp 및 Lys의 경우 Boc. 축합제로 HBTU을 사용하였다.
N-말단 Fmoc-보호기를 절단한 후, 염료1-9,13을 특정 합성 단계에서 축합하였다. 이 목적을 위해, 255mg의 수지를 약 2ml의 DMF 중에 현탁하고 0.5mmol 의 염료, 0.5mmol의 HBTU 및 0.17ml의 DIEA와 혼합하였다. 이를 실온에서 18시간 동안 교반하고, 수지를 흡입시키고, 디클로로메탄으로 세척하고 건조시켰다. 수지로부터 염료-펩티드 접합체의 절단은 95% 트리플루오로아세트산에 의해, 트리이소프로필실란에 첨가에 의해, 10% 아세트산으로부터의 후속 동결 건조에 의해 수행된다. 조생성물을 활성화된 탄소를 사용하여 고리화시키고 크로마토그래피 (50x300mm VYDAC RP-18, 농도구배: 물/아세토니트릴)로 정제하였다.
합성된 염료-펩티드 접합체의 구조를 하기 개관에 요약하였다:
소마토스타틴-수용체 결합 펩티드와의 염료 접합체
실시예 28 내지 30: 펜테트레오티드와 염료1-3의 접합체
n = 1: 인도카르보시아닌-펜테트레오티드28
n = 2: 인도디카르보시아닌-펜테트레오티드29
n = 3: 인도트리카르보시아닌-펜테트레오티드30
실시예 31: 소마토스타틴-14와 염료3의 접합체
인도트리카르보시아닌-소마토스타틴-14-접합체31
실시예 32: 소마토스타틴-14와 염료13의 접합체
인도트리카르보시아닌-5-카르복시산-글루카미드-소마토스타틴-14-접합체32
실시예 33 내지 38:뉴로텐신 펩티드 및 염료 3으로부터 펩티드 접합체의 합성.
물질의 합성은 실시예 14-27에 기술된 일반 프로토콜과 유사하게 수행하였다.
합성된 염료-펩티드 접합체의 구조는 하기 개관에 요약하였다.
뉴로텐신-수용체 결합 펩티드와의 염료 접합체
실시예 33 내지 35: D-Tyr11-뉴로텐신 (7-13)과 염료7-9의 접합체
n = 1: 인도카르보시아닌-D-Tyr11-뉴로텐신 (7-13)-접합체33
n = 2: 인도디카르보시아닌-D-Tyr11-뉴로텐신 (7-13)-접합체34
n = 3: 인도트리카르보시아닌-D-Tyr11-뉴로텐신 (7-13)-접합체35
실시예 36: D-Tyr11-뉴로텐신과 염료2의 접합체
(ξ-아미노-Lys6-인도디카르보시아닌)-D-Tyr11-뉴로텐신-접합체 36
실시예 37 to 38: D-Tyr11-뉴로텐신 (5-13)-Cys과 염료10-11의 접합체
n = 1: 인도카르보시아닌-D-Tyr11-뉴로텐신 (5-13)-Cys- 접합체37
n = 2: 인도디카르보시아닌-D-Tyr11-뉴로텐신 (5-13)-Cys- 접합체38
실시예 39:합성된 염료-펩티드 접합체의 흡광 및 형광 성질
흡광 최대치 및 흡광 계수는 PBS 중에서 및 소 혈장 중에서 측정하였다 퍼킨 엘버 람다(Perkin Elmer Lambda) 2. 형광 방출 스펙트럼은 단파 쪽 여기에 의해 PBS 중에서 획득하였다(흡광 최대치로부터 약 40 nm) 스펙스 플루오로로그(SPEX Fluorolog), R928 PMT.
흡광 및 형광 데이터를 도 4에 요약하였다. 도 5에서, 전형적인 흡광 및 형광 방출 스펙트럼이 실시예에 의해 나타내었다.
실시예 40:형광 현미경을 사용한 세포 이미지의 측정
본 발명에 따른 화합물의 결합 및 이미지를 인간 종양 세포에서 시험관내에서 연구하였으며, 혈관 작용 장 펩티드 및(또는) 소마토스타틴 및(또는) 뉴로텐신의 수용체가 발현되었다. 이 목적을 위해, 5×105의 종양 세포를 시험 물질을포함한 1.5ml의 배지 중에서 배양시켰다. 서로 다른 농도의 물질(10nM-10μM)을 사용하였으며, 배양 시간을 변화시켰다(1분-24시간). 배양 후, 세포를 조겅시키고 현미경 표본을 제조하였다. 평가는 Cy7- (여자 장치 HQ 710/70nm, 방출기 810/90nm, 빔스플리터 750nm LP), Cy5- (여자장치 575-625nm, 방출기 660-710nm BP, 빔스필리터 645nm) 및 Cy3-필터 세트 (여자장치 546/12nm, 방출기 590nm LP, 빔스플리터 580nm)를 갖춘 차이스 악시오벌트(Zeiss Axiovert) 135-형광 현미경 상에서 수행하였다. 모든 표본으로부터, 백색광 및 형광 이미지를 CCD-카메라 (Visitron RTE/CCD-576) 로 기록하고 디지털 방식으로 저장하였다.
선택된 결과를 하기에 기술한다:
10 μM 인도트리카르보시아닌-VIP (1-28)-접합체16으로 30분간 배양한 후 HT29 세포의 현미경적 백색광 및 형광 이미지(Cy7-필터 세트)를 준비하였다. 형광 이미지에서, 세포 전체에 걸쳐 대부분 균일한 형광이 탐지되었다. 아울러, 증가된 시그널 영역이 가시화되었으며, 이는 소포 구획과 연관될 수 있다. 형광 이미지 중의 세포는 백색광 이미지와 함께 그 공간적 확장과 연관된다.
하기 화합물과 관련하여, 백색광 및 형광 이미지(Cy7-필터 세트)는 유사한 수단으로 획득하였다:
인도트리카르보시아닌-VIP (14-28)-접합체20, 10 μM, HT29-세포. 형광이 세포 전체에 균일하게 분산되어 있으며, 백색광 이미지와 상당한 연관을 가짐.
인도트리카르보시아닌-레트로-D-VIP (24-14)25, 10 μM, HT29-세포. 형광이 세포 전체에 균일하게 분산되어 있으며, 백색광 이미지와 상당한 연관을 가짐.
인도트리카르보시아닌-펜테트레오티드 접합체30, 10 μM, RIN38-VIP1-세포. 세포의 막 영역 중의 소포성 패턴을 가진 형광 영역이 백색광 이미지와 상당한 연관을 가짐.
아울러, 형광 이미지는 유사한 수단에 의해 하기 화합물로부터 획득되었음: (-아미노-인도트리카르보시아닌)-Lys25-VIP (14-25)-접합체24, 10 μM, RIN38-VIP1-세포, Cy7-필터 세트. 형광 이미지는 균일한, 세포내 핵 근방의 형광을 나타내었다.
인도디카르보시아닌-VIP (1-28)-접합체15, 10 μM, RIN38-VIP1-세포, Cy5-필터 세트. 형광 이미지는 세포의 막 영역 중에서 소포성 패턴의 세포내 형광 영역을 나타내었다.
인도카르보시아닌-VIP (1-28)-접합체14, 10 μM, RIN38-VIP1-세포, Cy3-필터 세트. 형광 이미지는 세포의 막 영역 중에서 소포성 패턴의 세포내 형광 영역을 나타내었다.
실시예 41: 종양을 가진 쥐에서 생체내 형광 이미지를 사용한 종양 축적의 연구
본 발명에 따른 화합물의 이미지 성질을 종양을 가진 누드 마우스내로 주입 후 생체내에서 연구하였다. 이 목적을 위해, 1μmol/kg 내지 2μmol/kg의 물질을 정맥내에 투여하고, 종양 부위에서의 축적을 0 내지 48시간 동안 관찰하였다. 물질의 형광은 Nd:YAG 레이저에 의해 생성된 640nm(인도디카르보시아닌) 또는 740nm(인도트리카르보시아닌)의 적외선에 의해 동물을 조사하여 여기시켰다. 형광 복사는 증감된 CCD-카메라에 의해 >700nm 또는 800>nm의 파장에서 측정하였고, 형광 이미지는 디지털 방식으로 저장하였다.
선택된 결과를 하기에 기술한다:
종양을 가진 (우측 후방 측복부에 HT29-종양) 누드 마우스로부터, 전체 생체 형광 이미지를 0.1μmol/kg의 인도트리카르보시아닌-VIP(14-28)-접합체20의 투여 1시간 전 및 1시간 후에 기록하였다. 투여 전의 형광 강도는 미미하였다(낮은 자발형광). 투여 1시간 후, 형광 방출면에서 반대측 측복부에 대해 강도 면에서 약 2배의 증가를 가진 시그널이 종양에 생겼으며, 이로 인해 이러한 방출이 생체의 나머지 부분에 걸쳐 달리 균일하게 분산되었다.
종양을 가진 누드 마우스로부터 (우측 후방 측복부에 RIN38-SSTR2-종양), 전체 생체 형광 이미지를 0.1μmol/kg의 인도트리카르보시아닌-펜테트레오티드 접합체30의 투여 1시간 전 및 1시간 후에 기록하였다. 투여 전의 형광 강도는 미미하였다(낮은 자발형광). 투여 1시간 후, 형광 방출면에서 반대측 측복부에 대해 강도 면에서 약 3배의 증가를 가진 시그널이 종양에 생겼으며, 이로 인해 이러한 방출이 생체의 나머지 부분에 걸쳐 달리 균일하게 분산되었다.
종양을 가진 누드 마우스로부터(우측 후방 측복부에 HT29-종양), 전체 생체 형광 이미지를 0.1μmol/kg의 (ξ-아미노-인도트리카르보시아닌)-Lys25-VIP(14-25)-접합체24의 투여 1시간 전 및 1시간 후에 기록하였다. 투여 전의 형광 강도는 미미하였다(낮은 자발형광). 투여 1시간 후, 반대측 측복부에 비해 강도 면에서 약1.5배의 증가를 가진 시그널이 종양에 생겼다. 아울러, 신장 내에 증가된 형광 시그날이 탐지되었다.
종양을 가진 누드 마우스로부터(우측 후방 측복부에 HT29-종양), 전체 생체 형광 이미지를 0.2μmol/kg의 인도디카르보시아닌-VIP(1-28)-접합체15의 투여 5분전 및 5분 후에 기록하였다. 투여 전의 형광 강도는 미미하였다(낮은 자발형광). 투여 1시간 후, 반대측 측복부에 대해 강도 면에서 약 1.4배의 증가를 가진 시그널이 종양에 생겼다. 아울러, 신장 내에 증가된 형광 시그널이 탐지되었다.
실시예 42: 염료-펩티드 접합체
혈장 중에서 본 발명에 따른 화합물의 화학적 안정성을 시간에 따른 HPLC을 사용하여 시험관내에서 연구하였다. 이 목적을 위해, 소 혈액 혈장(그래벌 컴파니(Graeber Company)사의 동결, 헤파린 분석용) 중의 PBS 중의 1mM의 펩티드 용액을 30μM의 농도를 얻으면서 파이펫팅하였으며, 용액을 37℃에서 배양하였다.
다양한 시간대에서(0.5; 1; 2; 4; 6; 24 시간), 샘플의 워킹업을 1ml의 MeOH와 혼합되고 있는 1ml의 혈장 용액으로 수행하였으며, 침전된 단백질을 원심분리하였다.
0℃(대조구)에서 1분 배양 후, 함유량에 대한 750nm에서의 함유량을 측정하여 HPLC을 사용해 상등액의 분석을 수행하였다.
HPLC: 백맨(Beckmann), 다이오드 배열 탐지기 TIDAS (J & M 컴파니), 350-1000 nm;
컬럼: 크로마실(Chromasil) 5 μ, 250 mm x 4.5 mm
이동상 용매: A: 90% H2O (+0.5% TFA)/10% MeOH
B: 10% H2O (+0.5% TFA)/90% MeOH
농도 구배: 20분 내에 10% B에서 100% B로
실시예를 도 6에 요약하였다.
실시예 43: 점적 분석을 사용한 VIP의 치환 분석
1. 셀룰로오즈 상에서 펩티드의 합성
셀룰로오즈 상에서의 펩티드 합성 (점적 합성)은 1988년에 프랭크(R. Frank) 및 도링(R. Doring)에 의해 최초로 발표되었으며,1992년에 프랭크(R. Frank1)에 의해 상세히 기술되었다. 본원에서는 아게 슈나이더-메르게네르(AG Schneider-Mergener)에서 확립된 방법2을 사용하였다.
셀룰로오즈 막은 후속 펩티드 합성을 위한 적합한 앵커 기능을 제공하기 위해 화학적으로 변형되었다. 이 경우, 멀캅토기4를 아미노-관능기화된 셀룰로오즈 막(CAPE 막) 중에 도입하였다. 브로모프로필 에스테르 형태의 첫번째 아미노산은 이 멀캅토기에 커플링될 수 있다. 이후, 펩티드의 모든 아미노산을 Fmoc 반응 방식에 따라 연속적으로 제조하였다. 마지막에, 인도디카르보시아닌 고형물이 N-말단 위치에서 펩티드에 결합되고, 이후 모든 측면 보호기가 절단되었다.
수용체 결합에 대해 펩티드를 연구할 수 있도록, 펩티드는 셀룰로오즈로부터 절단되야만 했다. 이 점에서, 셀룰로오즈로부터 진정한 C-말단을 가진 펩티드를절단하는 것을 최초로 가능하게 하는 방법에 개발되었다.
1a. 셀룰로오즈 막의 변형
ㆍ20 x 30 cm 셀룰로오즈 막 (와트만(Whatman) 50)을 메탄올/1.2% 과염소아세트산으로 2분간 배양한 후 동결 건조하였다.
ㆍ디옥산/1.2% 과염소아세트산 중의 10% 에피브로모히드린으로 3시간 배양한 후, 메탄올과 30분간 반응시키고, 이후 메탄올로 2회 세척하였다.
ㆍ 이후, 디메틸포름아미드(DMF)로 3회 세척시키고 DMF 중의 50% 1,3-디아미노프로판 (v/v)와 함께 밤새 배양하였다. 이후, 다음과 같이 세척하였다: DMF(3x), 에탄올(2x), 증류수(2x), 에탄올(2x), 5 M 소디움 메탄올레이트로 15분간, 메탄올(3x), 증류수(4x), 에탄올(3x), 디에틸 에테르(1x).
1b. 점적의 정의
ㆍ점적의 정의를 위해, 셀룰로오즈 막 상에서 확실하게 점을 찍기 위해 1.3 ㎕의 0.6 M Fmoc-β-알라닌-Opfp 용액을 자동 점적 로봇 222 XL (랑겐펠드(Langenfeld) 소재 아비메드(Abimed))으로 15분의 반응 시간에서 2회 파이펫팅하였다.
ㆍ2% 무수 아세트산 용액으로 2분간, 및 20% 무수 아세트산/10% 디이소프로필에틸아민으로 30분간 막을 아세틸화하였다.
ㆍFmoc-보호기의 절단을 위해, 막을 DMF(3x)로 세척하고, 20% 피페리딘 용액(2x)으로 10분간 배양하고, DMF(5x) 및 에탄올(1x)로 세척하였다. 유리 아미노기는 브로모페놀릴 블루로 가시화되도록 만들 수 있다. 에탄올로 반복하여 세척한후, 막을 건조시켰다.
1c. Mmt-멀캅토프로피온산 및 브로모-프로필에스테르의 커플링
ㆍ0.6 M 멀캅토프로피온산을 한정된 점적에 대해 반응 시간 15분에서 2회 파이펫팅하였다. 이후, 이를 DMF(3x) 및 디클로로메탄(DCM)(3x)으로 세척하였다.
ㆍMmt-보호기의 절단을 10% 디클로로아세트산/0.5% 트리플루오로아세트산으로 2분간 배양 및 10% 디클로로아세트산/0.5% 트리플루오로아세트산/5% 트리이소부틸실란(3x)으로 5분간 배양하여 수행하였다. 하기 세척 단계를 실시하였다: DCM (1x), 에탄올(2x), 증류수(1x), 10% 세슘 카르보네이트(1x), 증류수(1x), 에탄올(2x), 디에틸 에테르(1x).
ㆍ각각의 Fmoc-브로모프로필-아미노산 에스테르를 0.6M 농도의 3배로 반응 시간 15분으로 커플링하였다. Fmoc-보호기의 절단을 1b에서와 같이 실시하였다.
1d. 아미노산의 커플링
펩티드를 제조하여 N-메틸피롤리돈 중의 0.6M 아미노산의 반복된 파이펫팅 및 Fmoc-보호기의 후속 절단에 의해 점적을 형성하였다.
1e. 인도디카르보시아닌 염료의 커플링
ㆍ0.3 M의 인도디카르보시아닌 염료 용액을 0.3 M의 TBTU 및 0.6 M 디이소프로필에틸아민으로 활성화시키고, 점적에 대해 반응 시간 15분간 4회 파이펫팅하였다.
1f. 측면 보호기의 절단
ㆍ측면 보호기의 절단을 90% 트리플루오로아세트산/3% 트리이소부틸실란/2%증류수/1% 페놀로 30분간, 50% 트리플루오로아세트산/3% 트리이소부틸실란/2% 증류수/1% 페놀로 2.5시간 동안 막을 후속 처리하여 수행하였다. 이후, 이것을 디클로로메탄(4x), DMF(3x) 및 에탄올(1x)로 세척하였다.
2. 셀룰로오즈 막으로부터 펩티드의 절단
ㆍ 점적을 펀칭해 내고 메탄올로 세척하였다. 절단을 위해, 메탄올 중의 70mM의 소디움 메탄올레이트와 함께 30분간 배양하였다. 37% 염산을 첨가하여 pH를 조정하는 것이 가능하였다. 이후, 펩티드를 스피트-백(speed-vac)에서 건조시켰다.
ㆍ건조 후, 펩티드를 증류수 중에 흡수시키고 역상-HPLC 및 MALDI-TOF를 사용하여 분석하였다.
3. 세포 분석 및 연속
ㆍVIP 유도체의 농도를 염료에 의해 측광계로 측정하였다. 세포 분석에서, 펩티드는 최종 농도 150mM으로 사용하였다. 이 경우, 1 x 105RIN38 (VAPC1) 세포를 VIP와 함께 결합 완충 용액(50 mM의 tris/HCL, pH 7.5, 5nM의 MgCl2, 1 mM의 CaCl2, 100 mM의 NaCl, 4% BSA) 중에서 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.
ㆍ이후, 세포를 PBS(2x)로 세척하고, FACS-튜브로 옮기고 377 g에서 5분간 원심분리하였다. 세포 펠릿을 FL4-렌즈 시스템을 가진 FACS-캘리버 (Calibur)(벡톤 디킨슨(Becton Dickinson)사) 중의 300㎕의 셀픽스(Cellfix) 중에 재현탁하여 측정하였다.
4. 평가
ㆍ연속 세포계수계 중에서 측정된 자연적으로 존재하는 천연 인간 VIP-펩티드의 형광 강도를 100%로 설정하였다. 28개의 천연 VIP-펩티드의 표준 편차는 11%였다. 다른 VIP-유도체들은 이 100%로 조정하였다.
도 7은 150nM의 염료 표지된 펩티드 존재 하에 37℃에서 1시간 배양 후 RIN38 VPAC1의 상대적인 형광 강도를 나타낸다. 데이타는 각각의 시리즈의 천연 펩티드에 대한 상대적인 %이다.
점적 합성에 관한 문헌:
1. 프랭크(Frank, R.) (1992) Spot Synthesis: An Easy Technique for the Positionally Addressable, Parallel Chemical Synthesis on a Membrane Support.Tetrahedron48, 9217-9232
2. 크레머(Kramer, A.); 슈나이더-메르게네르(Schneider-Mergener, J.) (1998) Synthesis and Screening of Peptide Libraries on Continuous Cellulose Membrane Supports.Methods in Molecular Biology87, 25-39
3. 볼크메르-엔게르트(Volkmer-Engert, R.); 호프만(Hoffman, B.); 슈나이더-메르게네르(Schneider-Mergener, J.) (1997)Tetrahedron Lett. 38, 1029-1032
4. 리카(Licha, K.); 바르가바(Bhargava, S.); 레인랜덜(Rheinlander, C.); 베커(Becker, A.); 쉬네이더-메르게네르(Schneider-Mergener, J.); 볼크메르-엔게르트(Volkmer-Engert, R.) (in press) Highly Parallel Nano-Synthesis of Cleavable 펩티드-염료 접합체s on Cellulose Membranes.Tetrahedron Lett.
실시예 44
a)5-N-(2,3-디히드록시프로필)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
0.9g(2.6 mmol)의 5-카르복시-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌 (Anal. Biochem. 217, 197, 1994)을 30ml의 순수한 N,N-디메틸포름아미드 및 3 ml의 피리딘 중으로 도입하고, 1.35g(5.3 mmol)의 디숙신이미딜 카르보네이트와 혼합하였다. 3 시간 후, 0.965g(10.6 mmol)의 2,3-디히드록시프로필아민를 첨가하였다. 이것을 밤새 실온에서 교반하고, 배치를 건조 상태로 증발시켰으며, 잔여물은 디에틸 에테르로 흡수 침전시켰다. 고형물을 흡입해 내고, 정제하기 위해 RP-물질 상에서 크로마토그래피하였다.
수득량: 0.82 g (이론치의 76%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 55.32 H 6.84 N 6.79 S 7.77 O 23.27
실측치: C 55.39 H 6.95 N 6.57 S 7.58
b) 4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)-인돌리오]-부탄술포네이트, 나트륨염
30ml의 에탄올 중의 360mg(1mmol)의N-[5-아닐리노-3-클로로-2,4-(프로판-1,3-디일)-2,4-펜타디엔-1-일리딘]아닐리니움-클로라이드, 825mg(2mmol)의 5-N-(2,3-디히드록시프로필)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌 (실시예 44a) 및 330mg (4mmol)의 무수 아세트산 나트륨 용액을 아르곤 하에서 2시간 동안 환류시켰다. 이후, 에탄올을 증류해 냈으며, 잔여물을 크로마토그래피로 정제하였다.
수득량: 0.58 g (이론치의 59%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 56.17 H 6.15 Cl 3.60 N 6.79 S 7.77 O 23.27 Na 2.34
실측치: C 55.99 H 6.30 Cl 3.41 N 6.87 S 7.64 Na 2.17
c) 4-[2-[4-(4-(2-카르복시에틸)페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염, N-히드록시숙신이미드 에스테르
커버 가스 하에서 225mg(1.4mmol)의 3-(4-히드록시페닐)프로피온산을 10ml의 건조 N,N-디메틸포름아미드 중에서 용해시키고, 65mg(2.7mmol)의 수소화물 나트륨 (오일 중 60%)과 혼합하였다. 30분 후, 138mg(0.14mmol)의 4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염(실시예 44b)을 첨가하고, 추가로 30분간 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 드라이 아이스로 켄칭(quench)시키고 건조 상태로 증발시켰다. 잔여물을 예비 HPLC로 정제하였다.활성 에스테르의 제조를 위해, 14mg(120 μmol)의 N-히드록시숙신이미드 및 2mg (2.4μmol)의 카르복시산을 200㎕의 N,N-디메틸포름아미드 중에서 용해시켰다. 10분 후, 24mg(120μmol)의 디시클로헥실카르보디이미드를 첨가하고, 밤새 실온에서 교반하였다. 활성 에스테르는 추가 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.
실시예 14-16 및 18-27a (고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSDAVFWDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN를 고상에서 합성하였다. 실시예 14-16 및 18-27b(염료 커플링)에 따라, 염료 4-[2-[4-(4-(2-카르복시에틸)-페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]-부탄술포네이트, 나트륨염을 펩티드에 커플링하고, 이 접합체를 실시예 14-16 및 18-27c (보호기 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리)에 따라 단리하고 정제하였다.
d) 4-[2-[4-(4-(2-이소티오시아나토에틸)페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
2ml의 N,N-디메틸포름아미드 중의 116mg(0.6mmol)의 2-(4-히드록시페닐)에틸이소티오시아네이트를 4ml의 무수 N,N-디메틸포름아미드 중의 28mg(0.6mmol)의 수소화물 나트륨(오일 중 60%) 현탁액에 0℃에서 첨가하였다. 30분 후, 이렇게 제조된 용액을 138mg(0.14mmol)의 4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염(실시예 44b)에 첨가하였다. 이것을 밤새 실온에서 교반한 후, 드라이 아이스로 켄칭하였다. 회전 증발기에서 건조 상태로 증발시켰으며, 잔여물을 에비 HPLC로 정제하였다.
수득량: 85 mg (이론치의 54%)
분석: (비용매 물질에 대해):
계산치: C 58.65 H 6.09 N 6.22 S 8.54 O 18.47 Na 2.04
실측치: C 58.53 H 6.17 N 6.11 S 8.63 Na 1.83
실시예 14-16 및 18-27a (고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSDAVFTDNY TRLRFQMAVK KYLNSILN를 고상에서 합성하였다. 염료 4-[2-[4-(4-(2-이소티오시아네이토에틸)-페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]-부탄술포네이트, 나트륨염을 N-말단 위치에서 펩티드에 커플링하고, 이 접합체를 실시예 14-16 및 18-27c (보호기 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리)에 따라 단리하고 정제하였다.
유사하게, 다른 대칭적으로 친수성인 염료를 하기 성분들로부터 제조하였다:
히드록시알킬 치환기를 가진 친수성 인돌레닌 유도체: (실시예 44a에 따라 제조됨)
a)5-N-(2,3-디히드록시프로필)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
b)5-N-(히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
c)5-N-(2,3-디히드록시프로필)-N-(히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
d)5-N,N-(비스-히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
e)5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
f)5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
실시예 45
a)5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
0.6g(1.8mmol)의 5-카르복시-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌 (Anal. Biochem. 217, 197, 1994)을 20ml의 순수 N,N-디메틸포름아미드 및 2ml의 피리딘 중으로 도입하고, 0.95g(3.6mmol)의 디숙신이미딜 카르보네이트와 혼합하였다. 2시간 후, 1.4ml(10 mmol)의 트리에틸아민 및 322mg(1.8mmol)의 글루카민을 첨가하였다. 이것을 밤새 실온에서 교반하고, 배치를 건조 상태로 증발시켰으며, 잔여물은 디에틸 에테르로 흡수 침전시켰다. 고형물을 흡입시키고, 정제를 위해RP-물질 상에서 크로마토그래피하였다.
수득량: 0.67 g (이론치의 74%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 52.58 H 6.82 N 5.57 S 6.38 O 28.65
실측치: C 52.47 H 6.91 N 5.39 S 6.44
b)4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸5-[N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐](3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
10ml의 에탄올 중의 180mg (0.5mmol)의 N-[5-아닐리노-3-클로로-2,4-
(프로판-1,3-디일)-2,4-펜타디엔-1-일리딘]아닐리니움-클로라이드, 503mg(1mmol)의 5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌 (실시예 45a), 및 165mg(2mmol)의 무수 아세트산 나트륨을 아르곤 하에서 2시간 동안 환류시켰다. 이후, 에탄올을 증류해 내고, 잔여물을 크로마토그래피로 정제하였다.
수득량: 0.31 g (이론치의 53%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 54.05 H 6.33 Cl 3.01 N 4.76 S 5.44 O 24.45 Na 1.95
실측치: C 53.89 H 6.20 Cl 2.87 N 4.83 S 5.29 Na 1.72
c) 4-[2-[4-(4-이소티오시아네이토티오페닐옥시)-7-[5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-[N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐](3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
아르곤 분위기 하에서 10ml의 순수한 N,N-디메틸포름아미드 중에서 54mg(0.4mmol)의 4-아미노티오페놀을 용해시키고, 165mg(0.14mmol)의 4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-[N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐](3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염(실시예 45b)과 혼합하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 드라이 아이스로 켄칭시키고, 210mg(1mmol)의 티오카르보닐디이미다졸을 첨가하였다. 45분 후, 염료 를 디에틸 에테르로 침전시키고, 고형물을 원심분리하여 단리하였다. 정제하기 위해, RP-물질 상에서 크로마토그래피할 수 있다.
수득량: 78 mg (이론치의 43%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 55.07 H 6.01 N 5.35 S 9.80 O 22.01 Na 1.76
실측치: C 54.89 H 6.20 N 5.24 S 9.58 Na 1.54
실시예 14-16 및 18-27a (고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSWAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILN를 고상에서 합성하였다. 염료 4-[2-[4-(4-이소티오시아네이토티오페닐옥시)-7-[5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-[N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐](3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염을 N-말단 위치에서 펩티드에 커플링하고, 이 접합체를 실시예 14-16 및 18-27c (보호기 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리)에 따라 단리하고 정제하였다.
유사하게, 다른 대칭적 친수성 염료를 하기 성분들부터 제조할 수 있다:
히드록시알킬 치환기를 가진 친수성 인돌레닌: (실시예 44a에 따라 제조됨)
a)5-N-(2,3-디히드록시프로필)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
b)5-N-(히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
c)5-N-(2,3-디히드록시프로필)-N-(히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
d)5-N,N-(비스-히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
e)5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
f)5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)-인돌레닌
실시예 46
7-[5-N-(2,3-디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-카르복시(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
25ml의 무수 아세트산 중의 2.35g(5.71mmol)의 5-N-(2,3-디히드록시프로필)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌(실시예 44a) 및 1.57 g(5.5mmol)의 글루타콘알데하이드 디아닐리드-염산을 120℃에서 30분간 교반하였다. 이후, 2.4g(7.1 mmol)의 5-카르복시-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)-인돌레닌, 1.71g의 아세트산 나트륨, 22ml의 무수 아세트산 및 8.6ml의 아세트산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하였으며, 실온으로 냉각시키고, 생성물을 디에틸 에테르로 침전시켰다. 조생성물을 RP-물질 상에서 크로마토그래피하였다.
수득량: 1.9 g (이론치의 40%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 54.47 H 6.03 N 5.03 S 7.67 O 21.05 Na 2.75
실측치: C 54.26 H 6.12 N 5.00 S 7.49 Na 2.48
실시예 14-16 및 18-27a (고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSDAVFTDNY TRLRKKMAVK KYLNSILN를 고상에서 합성하였다. 실시예 14-16 및 18-27b (염료 커플링)에 따라 염료 7-[5-N-(2,3-디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-카르복시(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염을 N-말단 위치에서 펩티드에 커플링하고, 실시예 14-16 및 18-27c (보호기 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리)에 따라 이 접합체를 HPLC를 사용하여 단리하고 정제하였다.
유사하게, 다른 비대칭 친수성 염료를 하기 성분들로부터 제조할 수 있다:
히드록시알킬 치환기를 가진 친수성 인돌레닌 유사체: (실시예 44a에 따라 제조됨)
a)5-N-(2,3-디히드록시프로필)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
b)5-N-(히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
c)5-N-(2,3-디히드록시프로필)-N-(히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
d)5-N,N-(비스-히드록시에틸)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
e)5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
f)5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
카르복시기를 가진 인돌레닌 유도체:
a)5-카르복시-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
b)5-카르복시메틸-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
c)5-카르복시-1-(3-술포프로필)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
d)5-카르복시메틸-1-(3-술포프로필)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
e)5-카르복시-1-(2-술포에틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
f)5-카르복시메틸-1-(2-술포에틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
모노-, 디- 또는 트리카르보시아닌 형성과 함께 상기에서 언급된 인돌레닌과의 반응을 위한 디아닐 유도체들:
a)글루타콘알데하이드 디아닐리드-염산
b)말론알데하이드-비스-페닐이민-염산
c)N,N-디페닐포름아미딘
d)N-[5-아닐리노-2,4-(프로판-1,3-디일)-2,4-펜타디엔-1-일리딘]아닐리니움-클로라이드
e)N-[5-아닐리노-2,4-(에탄-1,2-디일)-2,4-펜타디엔-1-일리딘]아닐리니움-클로라이드
f)N-[5-아닐리노-3-클로로-2,4-(프로판-1,3-디일)-2,4-펜타디엔-1-일리딘]아닐리니움 클로라이드
g)N-[5-아닐리노-3-클로로-2,4-(에탄-1,2-디일)-2,4-펜타디엔-1-일리딘]아닐리니움 클로라이드
실시예 47
7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염, N-히드록시숙신이미드 에스테르
a)4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-[2-(메톡시카르보닐)프로판-1,3-디일]-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-[N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)아미노카르보닐](3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
5.5ml(10mmol)의 포스포르옥시 클로라이드 및 6ml의 N,N-디메틸포름아미드를 0℃에서 5ml의 디클로로메탄 중의 0.8g(5mmol)의 4-(메톡시카르보닐)-시클로헥사논 용액에 첨가하였다. 이후, 이를 한 시간 동안 환류시켰다. 디클로로메탄을 증류해 내고, 10ml의 메탄올 중의 4ml의 아닐린을 최고 5℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 얼음 위에 붓고, 5ml의 진한 염산을 첨가하고, 중간 생성물이 0℃에서 5시간 동안 결정화되도록 하였다. 이 목적을 위해, 결정을 무수 에탄올 중에 용해시키고, 4.4g(10mmol)의 5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-N-메틸아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌 (실시예 45 참조) 및 0.8g의 무수 아세트산 나트륨을 첨가하였다. 이것을 한 시간 동안 환류시키고, 고형물을 여과시키고, 여과액이 건조 상태가 되도록 증발시켰다. 정제를 위해 잔여물을 크로마토그래피하였다.
수득량: 3.25 g (이론치의 58%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 54.90 H 6.14 Cl 3.18 N 5.02 S 5.75 O 22.94 Na 2.06
실측치: C 54.76 H 6.03 Cl 2.99 N 4.91 S 5.60 Na 1.83
b)7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)아미노카르보닐(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
10ml의 무수 N,N-디메틸포름아미드 중의 10mg(0.4mmol)의 수소화물 나트륨 및 80mg(1.3mmol)의 에탄티올 혼합물을 질소하에서 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이후, 이것을 3ml의 N,N-디메틸포름아미드 중의 112mg(0.1mmol)의 4-[2-[4-클로로-7-[5-N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-[2-(메톡시카르보닐)프로판-1,3-디일]-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸5-[N-(2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실)-아미노카르보닐](3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염(실시예 47a)과 혼합하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 가열하고 실온으로 냉각시킨 후, 이산화탄소로 켄칭하였다. 회전 증발기에서 건조 상태로 증발시켰으며, 잔여물을 고온의 에탄올로 추출하였다. 추출물을 증발시키고, 조생성물을 크로마토그래피하였다.
수득량: 75mg (이론치의 67%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 56.27 H 6.33 N 5.25 S 6.01 O 23.99 Na 2.15
실측치: C 56.13 H 6.46 N 5.12 S 5.87 Na 1.88
c)7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-(N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐(3H)인돌리오]부탄술포네이트-N-히드록시숙신이미드 에스테르, 나트륨염
활성 에스테르의 제조를 위해, 2ml의 N,N-디메틸포름아미드 중에서 14mg(0.12mmol)의 N-히드록시숙신이미드 및 64mg(0.06mmol)의 카르복시산을 용해시켰다. 15분 후, 25mg(0.12mmol)의 디시클로헥실카르보디이미드를 첨가하고, 이것을 밤새 실온에서 교반하였다. 활성 에스테르를 예비 HPLC를 사용하여 정제하였다.
수득량: 60 mg (이론치의 86%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 55.71 H 6.06 N 6.02 S 5.51 O 24.73 Na 1.97
실측치: C 55.59 H 6.21 N 5.93 S 5.37 Na 1.75
실시예 14-16 및 18-27a (고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSDAVFTDNY TRLRKAMAVK KYLNSILN를 고상에서 합성하였다. 실시예 14-16 및 18-27b에 따라 염료 7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐(3H)인돌리오l부탄술포네이트, 나트륨염을 N-말단 위치에서 펩티드에 커플링하고, 이 접합체를 실시예 14-16 및 18-27c (보호기 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리)에 따라 단리하고 정제하였다.
실시예 48
7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
a)5-N-(11-아미노운데실)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌
340mg(1mmol)의 5-카르복시-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌 (Anal. Biochem. 217, 197, 1994)을 5ml의 순수한 N,N-디메틸포름아미드 및 1ml 의 피리딘 중으로 도입하고, 0.5g(2mmol)의 디숙신이미딜 카르보네이트와 혼합하였다. 3시간 후, 0.805g(4mmol)의 11-아미노운데카노산을 첨가하였다. 이를 실온에서 밤새 교반하고, 배치를 건조 상채로 증발시켰으며, 잔여물을 디에틸 에테르로 흡수 침전시켰다. 고형물을 흡입해 내고, 정제하기 위해 RP-물질 상에서 크로마토그래피하였다.
수득량: 0.37g (이론치의 71%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 62.04 H 8.10 N 5.36 S 6.13 O 18.37
실측치: C 61.88 H 8.23 N 5.17 S 6.02
b)7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
3ml의 무수 아세트산 중의 0.35g(0.67mmol)의 5-N-(11-아미노운데실)아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌(실시예 48a) 및 0.18g(0.645 mmol)의 글루타콘알데하이드 디아닐 용액을 110℃에서 20분간 교반하였다. 이후, 344mg(0.83mmol)의 5-N-(2,3-디히드록시프로필)-아미노카르보닐-1-(4-술포부틸)-2,3,3-트리메틸(3H)인돌레닌(실시예 44a), 0.2g의 아세트산 나트륨, 3ml의 무수 아세트산 및 1ml의 아세트산을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하도록 하고, 실온으로 냉각시키고, 생성물을 디에틸 에테르로 침전시켰다. 조생성물을 RP-물질 상에서 크로마토그래피하였다.
수득량: 0.41g (이론치의 60%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 60.10 H 7.02 N 5.50 S 6.29 O 18.84 Na 2.26
실측치: C 59.96 H 7.14 N 5.33 S 6.15 Na 2.11
실시예 14-16 및 18-27a (고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSDAVFTDNY TRLRKQMWVK KYLNSILN를 고상에서 합성하였다. 실시예 14-16 및 18-27b에 따라 염료 7-[5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(2-카르복시프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-3,3-디메틸-5-N-(1,3,4-트리히드록시부트-2-일)-아미노카르보닐(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염을 N-말단 위치에서 펩티드에 커플링하고, 이 접합체를 실시예 14-16 및 18-27c(보호기 절단 및 염료-펩티드 접합체의 해리)에 따라 단리하고 정제하였다.
실시예 48a의 11-아미노운데카노산 대신에 하기 아미노산들이 사용되는 실시예 48a실시예 44a 및 b에 따라 본 발명에 따른 다른 화합물들이 제조될 수 있으며, 실시예 46에서 언급된 인돌레닌 유도체는 a)-f)의 히드록시알킬 치환기와 함께 사용된다:
i. 글리신
ii. 알라닌
iii. β-알라닌
iv. 4-아미노부탄산
v. 6-아미노헥산산
vi. H2N-(CH2CH2O)3CH2COOH (TH 53, 20, 6977)
vii. H2N-(CH2CH2O)4CH2COOH (Joc 63, 5, 1728, 1998)
viii. H2N-CH2CH2COO(CH2CH2O)4-CO-CH2CH2COOH (Lett. Pept. Sci. 6, 135, 1999)
ix. HCl*H2N-PEG-COOH (MW 3400 g/mol; 미국 쉐워워터 폴리머스 크(Shearwater Polymers Inc.)
실시예 49
4-[2-[4-(4-(N-(4-Aza-6-브로모-5-옥소헥실)아미노카르보닐-에틸)페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
a)[3-[N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로필]-N'-(브로모아세틸)-아미드
2.5g(14.4mmol)의 [3-[N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]-프로필]아민을 15ml의 디옥산 중에 용해시키고, 4.4ml의 트리에틸아민을 0℃에서 첨가한 후, 3.2g(16mmol)의 브로모아세틸 브롬화물과 혼합하였다. 이것을 실온에서 밤새 교반한 후, 320mg의 추가 브로모아세틸 브롬화물을 첨가하였다. 실온에서 2시간 후, 침전물을 흡입해 내고, 증발에 의해 용액을 농축시키고, 잔여물을 에틸 아세테이트 중에서 흡수하였다. 이것을 물로 세척하고, 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다.
수득량: 3.2g (이론치의 75%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 40.69 H 6.49 Br 27.07 N 9.49 O 16.26
실측치: C 40.50 H 6.37 Br 26.89 N 9.58
b)(3-[N-(브로모아세틸)아미노]프로필]아민, 히드로클로라이드
3.1g(10.5mmol)의 [3-[N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로필]-N'-(브로모아세틸)-아미드(실시예 49a)를 에틸 아세테이트 중의 50mmol의 1M 염산과 함께 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 생성물을 흡입해 내고, 고형물을 에틸 아세테이트로 재세척하였다.
수득량: 2.3g (이론치의 95%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 25.94 H 5.22 Cl 15.31 Br 34.51 N 12.10 O 6.91
실측치: C 25.76 H 5.41 Cl 15.55 Br 34.34 N 11.97
c)4-[2-[4-(4-(N-(4-Aza-6-브로모-5-옥소-헥실)아미노카르보닐-에틸)페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노-카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염
121mg(0.1mmol)의 4-[2-[4-(4-(2-카르복시에틸)페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)-아미노카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염, N-히드록시숙신이미드 에스테르(실시예 44c)를 0.5ml의 N,N-디메틸포름아미드 중에 용해시키고, 0.06ml의 트리에틸아민 및 70mg(0.3mmol)의 [3-[N-(브로모아세틸)아미노]프로필]아민, 히드로클로라이드(실시예 49b)와 혼합하였다.
이것을 60℃에서 4시간 동안 교반한 후, 실온으로 냉각시키고, 생성물을 디에틸에테르로 침전시켰다. 고형물을 흡입해 내고, 앰플 디에틸 에테르로 세척하였다.
수득량: 0.11mg(이론치의 80%)
분석 (비용매 물질에 대해):
계산치: C 56.17 H 6.18 Br 6.13 N 6.44 S 4.92 Na 1.76 O 18.40
실측치: C 55.96 H 6.26 Br 6.01 N 6.27 S 4.81 Na 1.53
실시예 14-16 및 18-27a(고상 펩티드 합성)에 따른 합성과 유사하게, VIP-유사체 HSDAVFTDNY TRLRKQCAVK KYLNSLLN를 고상에서 합성하였다. 실시예 17에 따라 염료 브롬화물 4-[2-[4-(4-(N-(4-aza-6-브로모-5-옥소-헥실)아미노카르보닐에틸)페닐옥시)-7-[5-N-(디히드록시프로필)아미노카르보닐-3,3-디메틸-1-(4-술폰아토부틸)인돌린-2-일리딘]-3,5-(프로판-1,3-디일)-1,3,5-헵타트리엔-1-일]-5-N-(디히드록시프로필)아미노-카르보닐-3,3-디메틸(3H)인돌리오]부탄술포네이트, 나트륨염을 N-말단 위치에서 펩티드에 커플링하고, 이 접합체를 실시예 14-16 및 18-27c(보호기 절단 및 펩티드 접합체의 해리)에 따라 단리하고 정제하였다.
Claims (33)
- 하기 화학식 (I)의 펩티드-폴리메틴 염료 접합체 및 그의 생리학적으로 적합한 염.<화학식 I>A 1 -(X) m -A 2 (I)(상기 식에서,X는 D- 또는 L-형의 α-, β-, 또는 γ-아미노산을 나타내고,m은 5 내지 30의 수를 나타내며,이로 인해 생성된 아미노산 서열 (X)m은 직쇄 성질에서 고리화될 수 있거나 또는 두 개의 시스테인 또는 호모시스테인 사이의 이황화 결합 또는 N- 말단과 C- 말단 사이에서의 아미드화에 의해 고리화될 수 있고, 혈관 작용성 장 펩티드(VIP), 소마토스타틴 또는 뉴로텐신의 아미노산 서열, 또는 VIP, 소마토스타틴 또는 뉴로텐신의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내고,A1은 수소 원자, 아세틸 라디칼, 또는 1 내지 3개의 카르복시기 및(또는) 1 내지 6개의 히드록시기에 의해 임의로 치환될 수 있는 10 개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬 라디칼, 또는 2 내지 30개의 -CH2CH2O 단위를 가진 폴리(옥시에틸렌) 라디칼, 또는 380 내지 1200 nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 갖는 폴리메틴염료 부류의 염료 분자를 나타내며,A2는 히드록시기, 아미노기 또는 380 내지 1200nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 가지는 폴리메틴 염료 부류의 염료 분자를 나타내고,단, 라디칼 A1또는 A2중 적어도 하나는 380 내지 1200 nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 가지는 폴리메틴 염료 부류의 염료 분자를 나타내고, A1및(또는) A2가 380 내지 1200nm 범위에서 하나 이상의 최대 흡수치를 가지는 폴리메틴 염료 부류의 염료 분자를 나타내는 경우에, A1은 N-말단 아미노기에 연결되고, A2는 아미노산 서열 (X)m중의 어느 한 위치의 아미노산 라이신의 아미노기 또는 아미노산 세린의 히드록시기에 연결된다.)
- 제1항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 시아닌, 스쿠아릴리움, 크로코니움, 메로시아닌, 또는 옥소 염료를 나타내는 것을 특징으로 하는 접합체.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 하기 화학식 (II)의 시아닌, 또는 스쿠아릴리움 염료를 나타내는 것인 접합체.<화학식 II>(상기 식에서,D는 화학식 (III) 내지 (VI)에 해당하는 단편을 나타내고, 여기서 별표로 표시된 위치는 B와 연결되는 곳을 의미하고,B는 화학식 (VII) 내지 (XII)에 해당하는 단편을 나타내고,R1및 R2는 E1을 나타내고,R3는 플루오르, 염소, 브롬, 요오드 원자 또는 니트로기를 나타내거나 또는 -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1, 또는 -E1라디칼을 나타내고,E1및 E2각각 독립적으로 수소 원자, C1-C4술포알킬 사슬, 포화 또는 불포화된 분지쇄 또는 직쇄 C1-C50알킬 사슬(여기서, 이 사슬 또는 이 사슬의 일부는 임의로는 하나 이상의 방향족 또는 포화 시클릭 C5-C6단위 또는 비시클릭 C10단위를 형성할 수 있으며, C1-C50알킬 사슬은 0 내지 15개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 3개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환됨)을 나타내고,R4는 수소 원자, 플루오르, 염소, 브롬, 요오드 원자 또는 분지쇄 또는 직쇄 C1-C10알킬 사슬을 나타내고,b는 2 또는 3의 수를 의미하며,X 및 Y는 각각 독립적으로 O, S, Se, -CH=CH- 또는 C(CH3)2을 나타내고,L은 하기 화학식에 해당하는 기를 나타내며,n은 1 내지 10의 수를 의미한다.)
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 인도카르보시아닌 염료, 인도디카르보시아닌 염료 또는 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내는 것인 접합체.
- 제4항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 하기 화학식 (XIII) 또는 (XIV)의 인도카르보시아닌 염료, 인도디카르보시아닌 염료 또는 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내는 것인 접합체.<화학식 XIII><화학식 XIV>(상기 식에서,p은 1, 2 또는 3을 나타내고,n은 1, 2, 3, 4 또는 10의 수를 나타내고,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필, 2-술포에틸, 3-메틸-3-술포프로필, 메틸, 에틸 또는 프로필 라디칼을 나타내고,R3는 수소, 염소, 브롬, 요오드 원자 또는 니트로기를 나타내거나 또는 -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, -SO2NHE1라디칼을 나타내고,E1및 E2는 각각 독립적으로 수소 원자, 또는 메틸 또는 에틸 라디칼, 또는 0 내지 2개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 1개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환된 C3-C6알킬 라디칼을 나타내거나, 또는 E1및 E2는 2 내지 30개의 -CH2CH2O 단위를 가진 폴리(옥시에틸렌)글리콜 라디칼을 나타낸다.)
- 제4항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 화학식 (XIII) 또는 (XIV)의 인도카르보시아닌 염료, 인도디카르보시아닌 염료 또는 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내는 것인 접합체.<화학식 XIII><화학식 XIV>(상기 식에서,p은 1, 2 또는 3을 나타내고,n은 1, 2 또는 4를 나타내고,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸 또는 3-술포프로필 라디칼을 나타내고,R3는 수소 또는 -COOE1또는 -CONHE1라디칼을 나타내고,E1은 수소 원자, 또는 메틸 또는 에틸 라디칼을 의미하거나, 또는 0 내지 2개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 1개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환된 C3-C6알킬 라디칼을 의미한다.)
- 제4항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 화학식 (XV) 또는 (XVI)의 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내는 것인 접합체.<화학식 XV><화학식 XVI>(상기 식에서,n은 2 또는 3을 나타내고,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필 또는 2-술포에틸 라디칼을 나타내고,R3는 -CONH-펩티드, -CONH-(CH2)m-CONH-펩티드, -CONH-(CH2)n-NH-CS-NH-펩티드 또는 -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-펩티드(m = 1 내지 10, n = 2 또는 3)를 나타내거나, 또는 R3는 하기 화학식의 기를 나타내고:R4및 R5는 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼 또는 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타내고,R6는 -(CH2)m-CONH-펩티드(m = 0 내지 2) 또는 -(CH2)m-NH-CS-NH-펩티드 (m = 0 내지 2) 중 하나를 나타내고,X는 산소 원자 또는 황 원자를 나타낸다.)
- 제4항에 있어서, 염료 분자 A1및(또는) A2가 화학식 (XVIII)의 인도트리카르보시아닌 염료를 나타내는 것인 접합체.<화학식 XVIII>(상기 식에서,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸 라디칼, 3-술포프로필 라디칼 또는 2-술포에틸 라디칼을 나타내고,R3는 -CONH-펩티드, -NH-CS-NH-펩티드 또는 -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-펩티드(n = 2 또는 3)를 나타내거나, 또는 R3는 하기 화학식의 기를 나타내고,R4및 R5는 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼 또는 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타낸다.)
- 제7항 또는 제8항에 있어서, 히드록시화된 알킬 라디칼은 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 또는 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실을 나타내는 것인 접합체.
- 제1항에 있어서, (X)m은 HSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILN에 상응하는 천연의 혈관 작용성 장 펩티드의 아미노산 서열을 나타내거나, 또는 5 내지 30개의 아미노산으로 이루어진 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내는 것인 접합체.
- 제1항에 있어서, (X)m은에 상응하는 소마토스타틴의 아미노산 서열을 나타내거나, 또는 5 내지 20개의 아미노산으로 이루어진 소마토스타틴의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내는 것인 접합체.
- 제1항에 있어서, (X)m은 피로글루탐산-LYENKPRRPYIL에 상응하는 뉴로텐신의 아미노산 서열을 나타내거나, 또는 5 내지 20개의 아미노산으로 이루어진 뉴로텐신의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체를 나타내는 것인 접합체.
- 제10항에 있어서, 혈관 작용성 장 펩티드(VIP)의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체가 하기 아미노산 서열로부터 선택되는 것인 접합체.
- 제10항에 있어서, VIP의 유사체로서 하기 서열 군의 펩티드가 선택되는 것인 접합체.FSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNISDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNLSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHFDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHHDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHIDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHLDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHMDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHQDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHTDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHVDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHWDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHYDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSAAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSEAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSFAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSHAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSIAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSLAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSMAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSWAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDFVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDGVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDMVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDQVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDSVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDWVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDYVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAFFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAIFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDALFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAMFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDATFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAWFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAYFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVKTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFVDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFWDNY TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNW TRLRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRRRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRWRKQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRFQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRLQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRMQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRRQMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKAMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKFMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKIMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKKMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKLMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKMMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKRMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKVMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKWMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKYMAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQFAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQIAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQKAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQLAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQQAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQRAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQWAVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMFVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMIVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMKVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMLVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMMVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMQVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMRVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMVVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMWVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMYVK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAAK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAIK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMALK KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVR KYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK RYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK WYLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KFLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KWLNSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLASILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLFSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLISILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLMSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLSSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLVSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLWSILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNNILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNRILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNWILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNYILNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSLLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSSLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSWLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSYLNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIFNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIINHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSIWNHSDAVFTDNY TRLRKQMAVK KYLNSILW
- 제10항에 있어서, VIP의 유사체로서 하기 화학식에 따른 화합물이 선택되는 것인 접합체.HSDAVFTX1X2Y X3RLRKQMAVK KYLNSILN(여기서, X1, X2및 X3는 어떤 아미노산이라도 나타낼 수 있음)
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 2 내지 m개(m은 상기에서 나타낸 의미를 가짐)의 아미노산이 각각 독립적으로 이들 각각의 D-아미노산으로 또는 다른 L- 또는 D-아미노산으로 교환될 수 있는 것인 접합체.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, (X)m아미노산 중 하나 이상은 각각 독립적으로 천연형이 아닌 다른 아미노산 또는 아미노산 유도체로 교환될 수 있는 것인 접합체.
- 제17항에 있어서, 천연형이 아닌 아미노산 또는 아미노산 유도체가 나프탈라닌, 시클로헥실알라닌, 노르루신, 노르발린, α-아미노아디프산, α-아미노부티르산, β-알라닌, β-시클로헥실알라닌, 오르니틴, 사르코신 또는 δ-히드록시라이신으로부터 선택된 화합물인 접합체.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, VIP의 유사체로서 하기 화학식에 따른 화합물이 선택되는 것인 접합체.X1SDAVX2TDNX3TRLRKQMAVK KX4LNSILN(상기 식에서, X1, X2, X3및 X4는 천연형이 아닌 아미노산 또는 아미노산 유도체를 나타냄)
- 제19항에 있어서, 천연형이 아닌 아미노산 또는 아미노산 유도체는 나프탈라닌, 시클로헥실알라닌, 노르루신, 노르발린, α-아미노아디프산, α-아미노부티르산, β-알라닌, β-시클로헥실알라닌, 오르니틴, 사르코신 또는 δ-히드록시라이신의 군으로부터 선택된 것인 접합체.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 모든 아미노산 (X)m이 각자의 D-아미노산으로 교환된 것인 접합체.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로서 역합성 아미노산 서열이 선택된 것인 접합체.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로서 역합성 아미노산 서열(여기서, 2 내지 m개(여기서, m은 상기에서 언급된 의미를 가짐)의 아미노산이 각자의 D-아미노산으로 교환됨)이 선택되는 것인 접합체.
- 제10항에 있어서, 하기 아미노산 서열이 혈관 작용성 장 펩티드의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되는 것인 접합체.
- 제11항에 있어서, 하기 아미노산 서열이 소마토스타틴의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되는 것인 접합체.
- 제12항에 있어서, 하기 아미노산 서열이 뉴로텐신의 단편, 부분 서열, 유도체 또는 유사체로 선택되는 것인 접합체.
- 광학 탐지 방법을 사용한 종양, 다른 질환 조직 부위 또는 선종의 생체내 진단, 또는 위장관, 식도, 기관지, 방광 또는 경부에서 내시경 방법을 사용한 종양, 종양 세포 및(또는) 염증 조직의 생체내 형광 진단, 또는 광학 유방조영술을 사용한 유방 종양의 생체내 형광 진단 및(또는) 흡수 진단을 위한 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
- 환자에게 제1항에 따른 화합물을 정맥내로, 또는 위장관, 식도, 방광내에서의 분무(분무의 경우, 비결합된 과량의 화합물은 세척에 의해 제거됨)에 의해 국부적으로 투여하거나 또는 흡입에 의해 기관지 내로 공급하는 것을 포함하는, 제1항에 따른 화합물을 사용한 내시경(내시경 검사는 380 내지 1200nm의 스펙트럼 범위로부터 선택된 여기 파장에 의한 국부적 여기 및 염료에 의해 방출된 특정 형광 방사선의 위치 의존적 탐지에 의해 수행됨) 생체내 형광 진단 방법.
- 통상의 보조제 및(또는) 비히클은 물론 희석제와 함께 하나 이상의 제1항에 따른 화합물을 포함한 질환 조직 부위의 생체내 진단을 위한 광학 진단 물질.
- 하기 화학식 (XVIII)의 시아닌 염료.<화학식 XVIII>(상기 식에서,p는 1, 2 또는 3을 나타내고,n는 1, 2, 3, 4 또는 10을 나타내고,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필, 2-술포에틸, 3-메틸-3-술포프로필, 메틸, 에틸 또는 프로필 라디칼을 나타내고,R3는 수소를 나타내거나 또는 -COOE1, -CONE1E2, -NHCOE1, -NHCONHE1, -NE1E2, -OE1, -OSO3E1, -SO3E1, 또는 -SO2NHE1라디칼을 나타내고,E1및 E2는 각각 독립적으로 수소 원자를 나타내거나 또는 메틸, 에틸, 또는0 내지 2개의 산소 원자 및(또는) 0 내지 1개의 카르보닐기에 의해 단속되고(또는) 0 내지 5개의 히드록시기에 의해 치환된 C3-C6알킬 라디칼을 나타낸다.)
- 하기 화학식 XIX 또는 XX의 시아닌 염료.<화학식 XIX><화학식 XX)(상기 식에서,n은 2 또는 3을 나타내고,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 3-술포프로필 또는 2-술포에틸 라디칼을 나타내고,R3는 -COOH기 또는 -CONH-(CH2)n-COOH(n = 2 또는 3), -CONH-(CH2)n-NCS(n = 2 또는 3), 또는 -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1(n = 2 또는 3, X1= Cl, Br, I) 라디칼 또는중 하나를 나타내고:R4및 R5은 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼 또는 예를 들어 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실과 같은 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타내고,R6은 -(CH2)m-COOH(m = 0 내지 2), -(CH2)m-NCS (m = 0 내지 2), -(CH2)m-CONH-펩티드(m=0 내지 2), 또는 -(CH2)m-NH-CS-NH-펩티드(m=0 내지 2) 중 하나를 나타내고:X는 산소 원자 또는 황 원자를 나타낸다.)
- 하기 화학식 (XXI)의 시아닌 염료.<화학식 XXI>(상기 식에서,R1및 R2는 각각 독립적으로 4-술포부틸, 또는 3-술포프로필 라디칼을 나타내고,R3는 -COOH기 또는 -CONH-(CH2)n-COOH(n = 2 또는 3), -CONH-(CH2)n-NCS(n = 2 또는 3), 또는 -CONH-(CH2)n-NHCO-CH2-X1(n = 2 또는 3이고, X1= Cl, Br, I) 라디칼 또는중 하나를 나타내고:R4및 R5는 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸 라디칼 또는 예를 들어 2-히드록시에틸, 3-히드록시프로필, 2,3-디히드록시프로필, 1,3-디히드록시-2-프로필, 2,3,4-트리히드록시부틸, 1,3,4-트리히드록시-2-부틸, 또는 2,3,4,5,6-펜타히드록시헥실과 같은 히드록시화된 알킬 라디칼을 나타낸다.)
- 하기 서열에 의해 특징지워지는 VIP의 유사체.His-Trp-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 1)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Phe-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 2)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Lys-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 3)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Gln-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 4)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Arg-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 5)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Trp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 6)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Arg-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 7)His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Arg-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn(서열 확인 번호: 8).
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Cited By (2)
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| ES2376557T3 (es) * | 2004-06-16 | 2012-03-14 | Ge Healthcare As | Compuestos basados en péptidos. |
| EP1679082A1 (en) * | 2005-01-07 | 2006-07-12 | Schering AG | Use of cyanine dyes for the diagnosis of proliferative diseases |
| CA2591942A1 (en) | 2005-01-13 | 2006-07-20 | Cinvention Ag | Composite materials containing carbon nanoparticles |
| GB0615211D0 (en) * | 2006-07-31 | 2006-09-06 | Ge Healthcare Uk Ltd | Asymmetric flouro-substituted polymethine dyes |
| GB0718957D0 (en) * | 2007-09-28 | 2007-11-07 | Ge Healthcare Ltd | Optical imaging agents |
| DK2291640T3 (en) | 2008-05-20 | 2019-03-11 | Univ Health Network | Device and method for fluorescence-based imaging and monitoring |
| CZ304948B6 (cs) * | 2013-01-02 | 2015-02-04 | Vysoká škola chemicko-technologická v Praze | Využití polymethiniových solí jako senzorů pro nádorové markery |
| WO2016011534A1 (en) | 2014-07-24 | 2016-01-28 | University Health Network | Collection and analysis of data for diagnostic purposes |
| JP2020066637A (ja) * | 2017-02-27 | 2020-04-30 | 富士フイルム株式会社 | 病理診断用染色剤、細胞核染色方法、病理標本の製造方法、及び色素 |
| US11851421B2 (en) | 2020-06-23 | 2023-12-26 | Bracco Imaging S.P.A. | Near-infrared cyanine dyes and conjugates thereof |
| CN118048050B (zh) * | 2024-04-16 | 2024-06-25 | 南京诺源医疗器械有限公司 | 一种七甲川菁近红外荧光染料及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5627027A (en) * | 1986-04-18 | 1997-05-06 | Carnegie Mellon University | Cyanine dyes as labeling reagents for detection of biological and other materials by luminescence methods |
| JPS6488537A (en) * | 1987-09-30 | 1989-04-03 | Fuji Photo Film Co Ltd | Silver halide photographic sensitive material |
| JPS6491134A (en) * | 1987-10-02 | 1989-04-10 | Fuji Photo Film Co Ltd | Silver halide photographic sensitive material |
| MY106120A (en) * | 1988-12-05 | 1995-03-31 | Novartis Ag | Peptide derivatives. |
| US5382654A (en) * | 1992-02-05 | 1995-01-17 | Mallinckrodt Medical, Inc. | Radiolabelled peptide compounds |
| US5849261A (en) * | 1991-02-08 | 1998-12-15 | Diatide, Inc. | Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy |
| JP3137349B2 (ja) * | 1991-03-27 | 2001-02-19 | 生化学工業株式会社 | ペプチド誘導体 |
| EP0591820A1 (en) * | 1992-10-05 | 1994-04-13 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Near-infrared absorbing dyes prepared from Stenhouse salts |
| JPH06172212A (ja) * | 1992-12-10 | 1994-06-21 | Tsumura & Co | 医薬組成物 |
| JPH06202260A (ja) * | 1993-01-07 | 1994-07-22 | Konica Corp | ハロゲン化銀写真感光材料及びその処理方法 |
| DE4445065A1 (de) * | 1994-12-07 | 1996-06-13 | Diagnostikforschung Inst | Verfahren zur In-vivo-Diagnostik mittels NIR-Strahlung |
| US5824772A (en) * | 1995-04-04 | 1998-10-20 | Advanced Bioconcept, Inc. | Fluorescent somatostatin |
| JP2000508709A (ja) * | 1996-04-19 | 2000-07-11 | アマーシャム・ファルマシア・バイオテック・ユーケイ・リミテッド | スクアラート染料類および蛍光配列決定法におけるそれらの使用 |
| DE19649971A1 (de) * | 1996-11-19 | 1998-05-28 | Diagnostikforschung Inst | Optische Diagnostika zur Diagnostik neurodegenerativer Krankheiten mittels Nahinfrarot-Strahlung (NIR-Strahlung) |
| DE19717904A1 (de) * | 1997-04-23 | 1998-10-29 | Diagnostikforschung Inst | Säurelabile und enzymatisch spaltbare Farbstoffkonstrukte zur Diagnostik mit Nahinfrarotlicht und zur Therapie |
| GB9712524D0 (en) * | 1997-06-16 | 1997-08-20 | Nycomed Imaging As | Method |
| DE19817517A1 (de) * | 1998-04-09 | 1999-10-14 | Diagnostikforschung Inst | Neue Benzylguanidinderivate für die Therapie, In-vivo- und In-vitro-Diagnostik |
| US6284223B1 (en) * | 1998-10-15 | 2001-09-04 | Fluoroprobe, Inc. | Method for viewing tumor tissue located within a body cavity |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100406460B1 (ko) * | 2001-09-29 | 2003-11-19 | 한국과학기술연구원 | 커플링된 스티릴시아닌 색소 및 그의 제조 방법 |
| KR100716840B1 (ko) * | 2005-08-29 | 2007-05-09 | 삼성전기주식회사 | 노트북 컴퓨터 자동개폐장치 |
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