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KR102861303B1 - Ｋｒａｓ ｇ12ｃ 억제제 - Google Patents

Ｋｒａｓ ｇ12ｃ 억제제

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Publication number
KR102861303B1
KR102861303B1 KR1020207016494A KR20207016494A KR102861303B1 KR 102861303 B1 KR102861303 B1 KR 102861303B1 KR 1020207016494 A KR1020207016494 A KR 1020207016494A KR 20207016494 A KR20207016494 A KR 20207016494A KR 102861303 B1 KR102861303 B1 KR 102861303B1
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KR
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KR1020207016494A
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KR20200100632A (ko
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제임스 에프. 블레이크
로렌스 이. 버제스
마크 조셉 차카렐리
제임스 게일 크리스텐센
아담 쿡
제이 브래드포드 펠
존 피. 피셔
매튜 아놀드 마르크스
마케도니아 제이. 메지아
파벨 사베첸코프
가이 피.에이. 비저스
크리스토퍼 로날드 스미스
마르다 이. 로드리게즈
Original Assignee
미라티 테라퓨틱스, 인크.
어레이 바이오파마 인크.
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Publication date
Application filed by 미라티 테라퓨틱스, 인크., 어레이 바이오파마 인크. filed Critical 미라티 테라퓨틱스, 인크.
Publication of KR20200100632A publication Critical patent/KR20200100632A/ko
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Abstract

본 발명은 KRas G12C를 억제하는 화합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 KRas G12C의 활성을 비가역적으로 억제하는 화합물, 상기 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 그것의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

KRAS G12C 억제제
본 발명은 KRas G12C를 억제하는 화합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 KRas G12C의 활성을 비가역적으로 억제하는 화합물, 상기 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 그것의 사용 방법에 관한 것이다.
키르스텐 랫트 육종 2 바이러스 종양유전자 동족체 ("KRas")는 작은 GTPase이고 종양유전자의 Ras 계열의 구성원이다. KRas는, 세포 증식을 포함하는, 다양한 공정을 조절하기 위해 다중 티로신 키나제부터 다운스트림 효과기까지 받았던 업스트림 세포 신호를 형질도입하도록 불활성 (GDP-결합된) 및 활성 (GTP-결합된) 상태들 사이 분자 스위치 사이클링을 제공한다 (예를 들어, 참고 Alamgeer 등, (2013) Current Opin Pharmcol. 13:394-401).
악성종양에서 활성화된 KRas의 역할은 30년 넘게 관측되었다 (예를 들어, 참고 Santos 등, (1984) Science 223:661-664). KRas의 비정상적인 발현은 모든 암의 최대 20%를 설명하고 GTP 결합을 안정화하고 KRas의 구성적 활성화 및 다운스트림 신호전달로 이어지는 종양발생 KRas 돌연변이는 폐 선암종의 25 -30%에서 보고되어 왔다. (예를 들어, 참고 Samatar and Poulikakos (2014) Nat Rev Drug Disc 13(12): 928-942 doi: 10.1038/nrd428). KRas 일차 아미노산 서열의 12 및 13 코돈에서 미스센스 돌연변이를 초래하는 단일 뉴클레오타이드 치환은 폐 선암종에서 이들 KRas 드라이버 돌연변이의 대략 40%를 포함하고, G12C 전환은 가장 흔한 활성화 돌연변이이다 (예를 들어, 참고 Dogan 등, (2012) Clin Cancer Res. 18(22):6169-6177, 2012년 9월 26일 온라인 공개. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-11-3265).
악성종양에서 KRAs의 널리-알려진 역할 그리고 다양한 종양 유형에 있어서 KRas에서 이들 빈번한 돌연변이의 발견은 KRas를 암 치료에 대한 제약 산업의 매우 매력적인 표적으로 만들었다. 암 치료를 위한 KRas의 억제제를 개발하기 위한 30년의 대규모 발견 노력에도 불구하고, KRas 억제제는 규제 승인을 수득하기 위한 충분한 안전성 및/또는 효능을 실증하지 못했다 (예를 들어, 참고 McCormick (2015) Clin Cancer Res. 21 (8):1797-1801).
KRas를 표적화하기 위한 많은 실패한 노력에도 불구하고, KRas 활성을 억제하는 화합물은, 효과기 예컨대 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자를 방해하는 (예를 들어, 참고 Sun 등, (2012) Agnew Chem Int Ed Engl. 51(25):6140-6143 doi: 10.1002/anie201201358) 뿐만 아니라 KRas G12C (예를 들어, 참고 Ostrem 등, (2013) Nature 503:548-551)을 표적화하는 것들을 포함하여, 여전히 아주 바람직하고 조사 중이다. KRas의 억제제, 특히, KRas G12C를 포함하는, 활성화 KRas 돌연변이체의 억제제를 개발하기 위한 계속된 관심 및 노력이 분명히 남아있다.
따라서, KRas G12C-매개된 암을 치료하기 위하여 충분한 효능, 안정성 및/또는 안전성을 실증하는 신규한 KRas G12C 억제제를 개발하는 것이 필요하다. 본 발명의 화합물 및 조성물은 유익하게는 선택적 KRas G12C 억제제를 제공함으로써 이전의 단점들 중 하나 이상을 극복한다.
본 발명의 일 양태에서, KRas G12C 활성을 억제하는 화합물이 제공된다. 특정 구현예에서, 본 화합물은 식 (I) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염에 의해 제시된다:
식 (I)
식 중:
X는 4-12 원 포화 또는 부분적 포화 단환형, 브릿징된 또는 스피로환형 고리이되, 상기 포화 또는 부분적 포화 단환형 고리는 1개 이상의 R8로 선택적으로 치환되고;
Y는 결합, O, S 또는 NR5이고;
R1은 또는 이고;
R2는 수소, 알킬, 하이드록시알킬, 디하이드록시알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬, -Z-NR5R10, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴알킬이되, 각각의 Z, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴알킬은 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환될 수 있고;
Z는 C1 - C4 알킬렌이고;
각각의 R3은 독립적으로 C1 - C3 알킬, 옥소, 또는 할로알킬이고;
L은 결합, -C(O)-, 또는 C1 - C3 알킬렌이고;
R4는 수소, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 및 헤테로아릴은 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이고;
R6은 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R7은 독립적으로 할로겐, 하이드록실, C1 - C6 알킬, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 아미노, 시아노, 헤테로알킬, 하이드록시알킬 또는 Q-할로알킬이되, Q는 O 또는 S이고;
R8은 옥소, C1 - C3 알킬, C2 - C4 알키닐, 헤테로알킬, 시아노, -C(O)OR5, -C(O)N(R5)2, -N(R5)2이되, 상기 C1 - C3 알킬은 시아노, 할로겐, -OR5, -N(R5)2, 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환될 수 있고
각각의 R9는 독립적으로 수소, 옥소, 아실, 하이드록실, 하이드록시알킬, 시아노, 할로겐, C1 - C6 알킬, 아르알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 알콕시, 디알킬아미닐, 디알킬아미도알킬, 또는 디알킬아미닐알킬이되, 상기 C1 - C6 알킬은 사이클로알킬로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R10는 독립적으로 수소, 아실, C1 - C3 알킬, 헤테로알킬 또는 하이드록시알킬이고;
RA는 부재이고, 수소, 또는 C1 - C3 알킬이고;
각각의 RB는 독립적으로 수소, C1 - C3 알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬 또는 헤테로사이클릴알킬이고;
m은 제로 또는 1 내지 2의 정수이고;
p는 1 또는 2이고; 그리고
가 삼중 결합일 때, RA는 부재이고, RB는 존재하고 p는 1과 같고,
또는 가 이중 결합일 때, RA는 존재하고, RB는 존재하고 p는 2와 같거나, 또는 RA, RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 5-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성한다.
식 I-A를 갖는 식 I의 화합물이 또한 포함된다:
식 I-A
식 중, R1, R3, R4, R5, R10, L 및 m은 식 I에 대해 정의된 바와 같고, R11은 수소, C1 - C3 알킬 또는 하이드록시알킬이고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다.
식 I-B를 갖는 식 I의 화합물이 또한 포함된다:
식 I-B
식 중, R1, R3, R4, L 및 m은 식 I에 대해 정의된 바와 같고, R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴알킬이되, R9는 식 I에 대해 정의된 바와 같고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다.
특정 구현예에서, 본 화합물은 식 (II) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염에 의해 제시된다:
식 (II)
식 중:
X는 4-12 원 포화 또는 부분적 포화 단환형, 브릿징된 또는 스피로환형 고리이되, 상기 포화 또는 부분적 포화 단환형 고리는 1개 이상의 R8로 선택적으로 치환되고;
Y는 결합, O, S 또는 NR5이고;
R1은 또는 이고;
R2는 수소, 알킬, 하이드록시알킬, 디하이드록시알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬, -Z-NR5R10, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴알킬이되, 각각의 Z, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴알킬은 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 Z는 C1 - C4 알킬렌이고;
각각의 R3은 독립적으로 C1 - C3 알킬, 옥소, 할로알킬, 하이드록실 또는 할로겐이고;
L은 결합, -C(O)-, 또는 C1 - C3 알킬렌이고;
R4는 수소, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 및 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이고;
R6은 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R7은 독립적으로 할로겐, 하이드록실, C1 - C6 알킬, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 아미노, 시아노, 헤테로알킬, 하이드록시알킬 또는 Q-할로알킬이되, Q는 O 또는 S이고;
R8은 옥소, C1 - C3 알킬, C2 - C4 알키닐, 헤테로알킬, 시아노, -C(O)OR5, -C(O)N(R5)2, -N(R5)2이되, 상기 C1 - C3 알킬은 시아노, 할로겐, -OR5, -N(R5)2, 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R9는 독립적으로 수소, 옥소, 아실, 하이드록실, 하이드록시알킬, 시아노, 할로겐, C1 - C6 알킬, 아르알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 알콕시, 디알킬아미닐, 디알킬아미도알킬, 또는 디알킬아미닐알킬이되, 상기 C1 - C6 알킬은 사이클로알킬로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R10는 독립적으로 수소, 아실, C1 - C3 알킬, 헤테로알킬 또는 하이드록시알킬이고;
R11은 할로알킬이고;
RA는 부재이고, 수소, 중수소, 시아노, 할로겐, C1 - C-3 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, -C(O)N(R5)2, 또는 하이드록시알킬이고;
각각의 RB는 독립적으로 수소, 중수소, 시아노, C1 - C3 알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, C1 - C3 알콕시, 할로겐, 할로알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 디알킬아미닐알킬, 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되되, 상기 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환되고;
또는, 는 이중 결합이고 p는 2일 때, 1개의 RB는 수소이고, 그리고 RA 및 1개의 RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 옥소로 치환된 5-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성하고;
m은 제로 또는 1 내지 2의 정수이고;
p는 1 또는 2이고; 그리고
가 삼중 결합일 때, RA는 부재이고, p는 1과 같고, 그리고 RB는 하이드록시알킬이고,
또는 가 이중 결합일 때, RA는 존재하고, RB는 존재하고, p는 2와 같되, RA는 수소 또는 C1 - C3 알킬일 때, 적어도 1개의 RB는 중수소, 시아노, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 또는 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나; 또는 각각의 RB가 수소일 때, RA는 중수소, 시아노, 할로겐, 할로알킬, -C(O)N(R5)2, 하이드록시알킬 또는 헤테로알킬이다.
식 II-A를 갖는 식 II의 화합물이 또한 포함된다:
식 II-A
식 중, R1, R3, R4, R5, R10, L 및 m은 식 II에 대해 정의된 바와 같고, R11은 수소, C1 - C3 알킬 또는 하이드록시알킬이고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 II에 대해 정의된 바와 같다.
식 II-B를 갖는 식 II의 화합물이 또한 포함된다:
식 II-B
식 중, R1, R3, R4, R8, L 및 m은 식 II에 대해 정의된 바와 같고, R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴알킬이고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 II에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 치료 유효량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 세포에서 KRas G12C 활성을 억제하는 방법은 상기 세포를, 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 접촉은 시험관내이다. 일 구현예에서, 접촉은 생체내이다.
시험관내 또는 생체내에서 세포 증식을 억제하는 방법이 본 명세서에 또한 제공되고, 상기 방법은 세포를, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적 조성물의 유효량과 접촉시키는 것을 포함한다.
환자에서 암을 치료하는 방법이 또한 제공되고, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 약제학적 조성물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료 유효량을 그것이 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
치료가 필요한 환자에서 KRas G12C-연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 또한 제공되되, 상기 방법은 상기 환자에게, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물, 또는 그의 약제학적 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
요법에서 사용하기 위한, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물, 또는 그의 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다.
암의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 그의 약제학적 조성물이본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C의 억제에서 사용하기 위한, 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물이 본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C-연관된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 그의 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다.
암의 치료용 약제의 제조에서의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C의 활성의 억제용 약제의 제조에서의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 또한 본 명세서에 제공된다.
KRas G12C-연관된 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조에서의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 1-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본 명세서에 또한 제공된다.
치료가 필요한 환자에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 또한 제공되고, 상기 방법은 (a) 상기 암이 KRas G12C 돌연변이와 연관되는 지(예를 들어, KRas G12C-연관된 암)를 결정하는 단계; 및 (b) 상기 환자에게, 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적 조성물의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 제조하는 방법이 본 명세서에 또한 제공된다.
본 명세서에서 정의된 바와 같은 화합물을 제조하는 방법으로 수득된 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염이 본 명세서에 또한 제공된다.
본 발명은 KRas G12C의 억제제에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 KRas G12C의 활성을 비가역적으로 억제하는 화합물, 화합물의 치료 유효량을 포함하는 약제학적 조성물 및 그것의 사용 방법에 관한 것이다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 공보는 참고로 편입된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "KRas G12C"는 아미노산 위치 12에서 시스테인의 글리신으로의 아미노산 치환을 함유하는 포유동물 KRas 단백질의 돌연변이체 형태를 지칭한다. 인간 KRas용 잔기 위치 및 아미노산 코돈의 배정은 UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 변이체 p.Gly12Cys에 의해 확인된 아미노산 서열에 기초한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "KRas G12C 억제제"는 본 명세서에서 기재된 바와 같이 식 (I)에 의해 제시되는 본 발명의 화합물을 지칭한다. 이들 화합물은 KRas G12C의 효소적 활성의 전부 또는 일부를 음성으로 조정하거나 억제할 수 있다. 본 발명의 KRas G12C 억제제는 KRas G12C의 효소적 활성의 억제를 초래하는 12번 위치에서 시스테인 잔기의 설프하이드릴 측쇄를 가진 공유 부가물을 형성함으로써 KRas G12C와 상호작용하고 상기에 비가역적으로 결합한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "KRas G12C-연관된 질환 또는 장애"는 KRas G12C 돌연변이와 연관되거나 상기에 의해 매개되거나 상기를 가지고 있는 질환 또는 장애를 지칭한다. KRas G12C-연관된 질환 또는 장애의 비-제한적인 예는 KRas G12C-연관된 암이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 교환가능하게 사용된, "대상체", "개체", 또는 "환자"는, 포유동물 예컨대 마우스, 랫트, 다른 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 영장류, 및 인간을 포함하는, 임의의 동물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 환자는 인간이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 치료되어야 하고/거나 예방되어야 하는 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상을 경험하고/거나 나타냈다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 (예를 들어, 관리 기관-승인된, 예를 들어, FDA-승인된, 검정 또는 키트를 사용하여 결정된 경우) KRas G12C 돌연변이를 가지고 있는 암이 있는 것으로 확인되었거나 진단되었다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 (예를 들어, 관리 기관-승인된 검정 또는 키트를 사용하여 결정된 경우) KRas G12C 돌연변이에 대하여 양성인 종양이 있다. 상기 대상체는 (예를 들어, 관리 기관-승인된, 예를 들어, FDA-승인된, 검정 또는 키트를 사용하여 양성으로서 확인된) KRas G12C 돌연변이에 대하여 양성인 종양(들)을 가진 대상체일 수 있다. 상기 대상체는 종양이 KRas G12C 돌연변이를 가지고 있는 (예를 들어, 종양이 관리 기관-승인된, 예를 들어, FDA-승인된, 키트 또는 검정을 사용하여 그 자체로 확인되는) 대상체일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 KRas G12C 유전자-연관된 암이 있는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 대상체가 KRas G12C 돌연변이를 가지고 있는 종양이 있다는 것을 나타내는 임상 기록을 갖는다 (그리고 선택적으로 상기 임상 기록은 상기 대상체가 본 명세서에서 제공된 임의의 조성물로 치료되어야 한다는 것을 나타낸다).
본 명세서에서 기재된 임의의 방법 또는 용도의 일부 구현예에서, 검정은 환자 (예를 들어, KRas G12C-연관된 암이 있는 것으로 의심되는 환자, KRas G12C-연관된 암의 하나 이상의 증상을 가지고 있는 환자, 및/또는 KRas G12C-연관된 암 발생의 증가된 위험을 가지고 있는 환자)로부터 샘플 (예를 들어, 생물학적 샘플 또는 생검 샘플 (예를 들어, 파라핀-포매된 생검 샘플)을 사용하여 KRas G12C 돌연변이를 환자가 갖는지 여부를 결정하는데 사용되어, 예를 들어, 차세대 서열분석, 면역조직화학, 형광 현미경검사, 브레이크 어파트 FISH 분석, 서던 블랏팅, 웨스턴 블랏팅, FACS 분석, 노던 블랏팅, 및 PCR-기반 증폭 (예를 들어, RT-PCR 및 정량적 실시간 RT-PCR)을 포함할 수 있다. 당업계에서 널리-알려진 바와 같이, 검정은, 예를 들어, 적어도 하나의 표지된 핵산 프로브 또는 적어도 하나의 표지된 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 전형적으로 수행된다.
용어 "관리 기관"은 국가와 제약 회사의 의료 이용의 승인을 위한 국가 기관이다. 예를 들어, 관리 기관의 비-제한적인 예는 미국 식품 의약품국 (FDA)이다.
용어 "아미노"는 -NH2를 지칭하며;
용어 "아실"은 -C(O)CH3를 지칭한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같은 용어 "알킬"은 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환된, 1 내지 12개의 탄소 원자, 1 내지 8개의 탄소 원자 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 지방족 기를 지칭한다. 알킬 기의 예는, 비제한적으로, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 및 헥실을 포함한다.
용어 "할로알킬"은, 하나 이상의 수소가 할로겐에 의해 대체된 알킬 사슬을 지칭한다. 할로알킬의 예는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸 및 플루오로메틸이다.
용어 "할로알킬옥시"는 -O-할로알킬을 지칭한다.
"알킬렌" 기는, 2개의 다른 화학기 사이에 배치되고 그것을 연결하는 역할을 하는 상기에 정의된 바와 같은 알킬 기이다. 예시적인 알킬렌 기는, 비제한적으로, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 및 부틸렌을 포함한다.
용어 "알콕시"는 -OC1 - C6 알킬을 지칭한다.
본 명세서에서 이용된 바와 같은 용어 "사이클로알킬"는 3 내지 12개의 탄소, 예를 들어 3 내지 8 탄소, 및 추가 예로서 3 내지 6개의 탄소를 갖는 포화 및 부분적 불포화 환형 탄화수소 기를 포함한되, 상기 사이클로알킬 기는 추가로 선택적으로 치환된다. 사이클로알킬 기는, 비제한적으로, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜테닐, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸, 및 사이클로옥틸을 포함한다.
용어 "헤테로알킬"은 상기에 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭하되, 사슬 중 1개 이상의 탄소 원자는 O, S, 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 헤테로원자로 대체된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "하이드록시알킬"은 -알킬-OH를 지칭한다.
용어 "디하이드록시알킬"은 본 명세서에서 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭하되, 2개의 탄소 원자 각각은 하이드록실 기로 치환된다.
용어 "알킬아미닐"은 -NRx-알킬을 지칭하되, Rx는 수소이다. 일 구현예에서, Rx는 수소이다.
용어 "디알킬아미닐"은 -N(Ry)2을 지칭하되, 각각의 Ry는 C1 - C3 알킬이다.
용어 "알킬아미닐알킬"은 -알킬-NRx-알킬을 지칭하되, Rx는 수소이다. 일 구현예에서, Rx는 수소이다.
용어 "디알킬아미닐알킬"은 -알킬-N(Ry)2을 지칭하되, 각각의 Ry는 C1 - C4 알킬이고, ―알킬-N(Ry)2의 알킬은 하이드록시 또는 하이드록시알킬로 선택적으로 치환될 수 있다.
"아릴" 기는 선택적으로 치환된 1 내지 3개의 방향족 고리를 포함하는 C6-C14 방향족 모이어티이다. 하나의 구현예로서, 아릴 기는 C6-C10 아릴 기이다. 아릴 기의 예는, 비제한적으로, 페닐, 나프틸, 안트라세닐, 플루오레닐, 및 디하이드로벤조푸라닐을 포함한다.
"아르알킬" 또는 "아릴알킬" 기는, 어느 하나가 독립적으로 선택적으로 치환된 또는 비치환될 수 있는 알킬 기에 공유결합된 아릴 기를 포함한다. 아르알킬 기의 예는 벤질, 펜에틸, 및 나프틸메틸을 비제한적으로 포함하는 (C1-C6)알킬(C6-C10)아릴이다. 치환된 아르알킬의 예는, 알킬 기가 하이드록시알킬로 치환된 것이다.
"헤테로사이클릴" 또는 "복소환형" 기는 약 3 내지 약 12개의 원자, 예를 들어 4 내지 8개의 원자를 갖는 고리 구조이되, 하나 이상의 원자는 N, O, 및 S로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 고리 원자의 나머지는 탄소이다. 헤테로사이클릴은 단환형, 이환형, 스피로환형 또는 브릿징된 고리계일 수 있다. 복소환형 기는 하나 이상의 위치에서 탄소 또는 질소 상의 R7로 선택적으로 치환되되, R7은 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 복소환형 기는 또한 질소 상에서 알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬카보닐, 알킬설포닐, 아릴카보닐, 아릴설포닐, 알콕시카보닐, 아르알콕시카보닐로, 또는 황 상에서 옥소 또는 저급 알킬로 독립적으로 선택적으로 치환된다. 복소환형 기의 예는, 비제한적으로, 에폭시, 아제티디닐, 아지리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리디닐, 피롤리디노닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 이미다졸리디닐, 티아졸리디닐, 디티아닐, 트리티아닐, 디옥소라닐, 옥사졸리디닐, 옥사졸리디노닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 피페리도닐, 4-피페리디노닐, 티오모폴리닐, 티오모폴리닐 1,1 디옥사이드, 모폴리닐, 옥사제파닐, 아자바이사이클로헥산, 아자바이사이클로헵탄 및 옥사 아자바이오 사이클로헵탄을 포함한다. 인접한 환상 O 및/또는 S 원자를 갖는 화합물은 상기 용어의 범위로부터 구체적으로 배제된다.
용어 "헤테로사이클릴알킬"은 알킬 링커를 통해 분자의 잔여 부분에 연결된, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 헤테로사이클릴 기를 지칭하되, 상기 헤테로사이클릴알킬 중 알킬 링커는 하이드록시 또는 하이드록시알킬로 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로아릴"은 5 내지 14개의 고리 원자, 바람직하게는 5, 6, 9, 또는 10개의 고리 원자를 가지며; 환형 배열로 공유된 6, 10, 또는 14개의 π 전자를 가지며; 그리고, 탄소 원자 외에, N, O, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 고리당 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 기를 지칭한다. 헤테로아릴 기의 예는 아크리디닐, 아조시닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조푸라닐, 벤조티오푸라닐, 벤조티오페닐, 벤즈옥사졸릴, 벤즈티아졸릴, 벤즈트리아졸릴, 벤즈테트라졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤즈이소티아졸릴, 벤즈이미다졸리닐, 카바졸릴, 4aH-카바졸릴, 카볼리닐, 크로마닐, 크로메닐, 신놀리닐, 푸라닐, 푸라자닐, 이미다졸리닐, 이미다졸릴, 1H-인다졸릴, 인돌레닐, 인돌리닐, 인돌리지닐, 인돌릴, 3H-인돌릴, 이소벤조푸라닐, 이소크로마닐, 이소인다졸릴, 이소인돌리닐, 이소인돌릴, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 메틸렌디옥시페닐, 나프티리디닐, 옥타하이드로이소퀴놀리닐, 옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 옥사졸리디닐, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 피리미디닐, 펜안트리디닐, 펜안트롤리닐, 펜아지닐, 페노티아지닐, 펜옥사티이닐, 펜옥사지닐, 프탈라지닐, 피페로닐, 프테리디닐, 퓨리닐, 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리도옥사졸, 피리도이미다졸, 피리도티아졸, 피리디닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 4H-퀴놀리지닐, 퀴녹살리닐, 퀴누클리디닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라졸릴, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 티안트레닐, 티아졸릴, 티에닐, 티에노티아졸릴, 티에노옥사졸릴, 티에노이미다졸릴, 티오페닐, 트리아지닐, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 1,3,4-트리아졸릴, 및 크산테닐을 포함한다.
"헤테로아릴알킬" 기는 알킬 기에 공유결합된 헤테로아릴 기를 포함하되, 상기 라디칼은 알킬 기 상에 있고, 이것 중 하나는 독립적으로 선택적으로 치환된 또는 비치환된다. 헤테로아릴알킬 기의 예는 C1-C6 알킬 기에 결합된 5, 6, 9, 또는 10개의 고리 원자를 갖는 헤테로아릴 기를 포함한다. 헤테로아르알킬 기의 예는 피리딜메틸, 피리딜에틸, 피롤릴메틸, 피롤릴에틸, 이미다졸릴메틸, 이미다졸릴에틸, 티아졸릴메틸, 티아졸릴에틸, 벤즈이미다졸릴메틸, 벤즈이미다졸릴에틸 퀴나졸리닐메틸, 퀴놀리닐메틸, 퀴놀리닐에틸, 벤조푸라닐메틸, 인돌리닐에틸 이소퀴놀리닐메틸, 이소이노딜메틸, 신놀리닐메틸, 및 벤조티오페닐에틸을 포함한다. 인접한 환상 O 및/또는 S 원자를 갖는 화합물은 상기 용어의 범위로부터 구체적으로 배제된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 화합물의 "유효량"은 KRas G12C의 활성을 음성으로 조정하거나 억제하는데 충분한 양이다. 그와 같은 양은 단일 투약량으로서 투여될 수 있거나 레지멘에 따라 투여될 수 있고, 그것에 의하여 효과적이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 화합물의 "치료 유효량"은 병태의 진행을 개선시키거나, 일부 방식으로 증상을 감소시키거나 중단시키거나 반전시키거나, KRas G12C의 활성의 음성으로 조정하거나 억제시키는데 충분한 양이다. 그와 같은 양은 단일 투약량으로서 투여될 수 있거나 레지멘에 따라 투여될 수 있고, 그것에 의하여 효과적이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 치료는 병태, 장애 또는 질환의 증상 또는 병리학이 개선되거나 달리 유익하게 변경되는 임의의 방식을 의미한다. 치료는 또한 본 명세서에서 조성물의 임의의 약제학적 용도를 포괄한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 특정 약제학적 조성물의 투여에 의한 특정 장애의 증상의 개선은, 조성물의 투여에 기인될 수 있거나 이와 연관될 수 있는 영구적 또는 일시적, 지속적 또는 순간적이든 임의의 약화를 지칭한다.
화합물
본 발명의 일 양태에서, 본 화합물은 식 (I) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염에 의해 제시되어 제공된다:
식 (I)
식 중:
X는 4-12 원 포화 또는 부분적 포화 단환형, 브릿징된 또는 스피로환형 고리이되, 상기 포화 또는 부분적 포화 단환형 고리는 1개 이상의 R8로 선택적으로 치환되고;
Y는 결합, O, S 또는 NR5이고;
R1은 또는 이고;
R2는 수소, 알킬, 하이드록시알킬, 디하이드록시알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬, -Z-NR5R10, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴알킬이되, 각각의 Z, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴알킬은 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환될 수 있고;
Z는 C1 - C4 알킬렌이고;
각각의 R3은 독립적으로 C1 - C3 알킬, 옥소, 또는 할로알킬이고;
L은 결합, -C(O)-, 또는 C1 - C3 알킬렌이고;
R4는 수소, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 및 헤테로아릴은 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이고;
R6은 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R7은 독립적으로 할로겐, 하이드록실, C1 - C6 알킬, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 아미노, 시아노, 헤테로알킬, 하이드록시알킬 또는 Q-할로알킬이되, Q는 O 또는 S이고;
R8은 옥소, C1 - C3 알킬, C2 - C4 알키닐, 헤테로알킬, 시아노, -C(O)OR5, -C(O)N(R5)2, -N(R5)2이되, 상기 C1 - C3 알킬은 시아노, 할로겐, -OR5, -N(R5)2, 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R9는 독립적으로 수소, 옥소, 아실, 하이드록실, 하이드록시알킬, 시아노, 할로겐, C1 - C6 알킬, 아르알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 알콕시, 디알킬아미닐, 디알킬아미도알킬, 또는 디알킬아미닐알킬이되, 상기 C1 - C6 알킬은 사이클로알킬로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R10는 독립적으로 수소, 아실, C1 - C3 알킬, 헤테로알킬 또는 하이드록시알킬이고;
RA는 부재이고, 수소, 또는 C1 - C3 알킬이고;
각각의 RB는 독립적으로 수소, C1 - C3 알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬 또는 헤테로사이클릴알킬이고;
m은 제로 또는 1 내지 2의 정수이고;
p는 1 또는 2이고; 그리고
가 삼중 결합일 때, RA는 부재이고, RB는 존재하고 p는 1과 같거나;
또는 가 이중 결합일 때, RA는 존재하고, RB는 존재하고 p는 2와 같거나, 또는 RA, RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 5-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성한다.
특정 구현예에서, R1-X는 하기이다:
식 중, R1은 식 I에 대해 정의되고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, R8은 C1 - C3 알킬이되, 상기 알킬은 시아노 또는 OR5, 또는 -C(O)N(R5)2으로 선택적으로 치환되되, 각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이다.
특정 구현예에서, R1은 이되, RA, RB 및 p는 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, R1은 이되, 는 삼중 결합이고, 그리고 RA는 부재이고, p는 1이고, 그리고 RB는 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, R1은 이고, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 수소 또는 C1 - C3알킬이고, p는 2이고, 그리고 각각의 RB는 독립적으로 수소, C1 - C3알킬, 디알킬아미닐알킬 또는 헤테로사이클릴알킬이다. 일 구현예에서, R1은 이되, RA는 수소 또는 C1 - C3알킬이고, p는 2이고, 상기 RB 중 하나는 수소, C1 - C3알킬, 디알킬아미닐알킬 또는 헤테로사이클릴알킬이고, 그리고, 다른 RB는 수소 또는 C1 - C3알킬이다. 일 구현예에서, R1은 -C(O)CH=CH2이다.
일 구현예에서, Y는 O 또는 NR5이고, 그리고 R2는 알킬, 하이드록시알킬, 디하이드록시알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 및 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, Y는 O이고, 그리고 R2는 하이드록시알킬, 디하이드록시알킬, 알킬아미닐알킬, 또는 디알킬아미닐알킬이되, 상기 알킬아미닐알킬 또는 디알킬아미닐알킬은 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 선택적으로 치환된 알킬아미닐알킬 또는 디알킬아미닐알킬은 메틸아미닐프로판-2-일, 디메틸아미닐에틸, 메틸에틸아미닐에틸, 디메틸아미닐프로파닐, 디메틸아미닐프로판-2-일, 디메틸아미닐부타닐, 디메틸아미닐부탄-2-일, 2-디메틸아미닐프로판올, 또는 디에틸아미닐에틸로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, Y는 O 또는 NR5이고, 그리고 R2는 헤테로사이클릴 또는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴알킬이다. R2가 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬일 때의 1개 이상의 R9의 비제한적인 예는 C1 - C3 알킬, 아실, 옥소, 시아노, 알콕시, 사이클로알킬, 사이클로알킬메틸, 할로겐, 및 하이드록실을 포함한다. 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 R2 헤테로사이클릴의 비제한적인 예는 아제티디닐, C1-C3알킬-치환된 아제티디닐 (예를 들어, 메틸아제티딘일), 할로-치환된 아제티디닐 (예를 들어, 디플루오로아제티딘일), 테트라하이드로피란, 피롤리디닐, C1-C3 알킬-치환된 피롤리디닐 (예를 들어, 메틸피롤리디닐, 디메틸피롤리디닐, 및 이소프로필피롤리디닐), 사이클로알킬알킬피롤리디닐, 하이드록시파이롤린디닐렌, 할로-치환된 피롤리디닐 (예를 들어, 플루오로피롤리디닐 및 디플루오로피롤리디닐), 메톡시에틸피롤리디닐, (N-메틸)메톡시피롤리디닐, 피페라지닐, 디메틸아미닐피롤리디닐, 모폴리닐, 메틸모폴리닐, 1,4-옥사제파닐, 피페리디닐, C1-C3 알킬-치환된 피페리디닐 (예를 들어, 메틸피페리디닐), 아실피페리디닐, 시아노피페리디닐, 사이클로알킬피페리디닐, 할로피페리디닐 (예를 들어, 플루오로피페리디닐), 디할로피페리디닐 (예를 들어, 디플루오로피페리디닐), 알콕시피페리디닐, 피롤리도닐, 피페리도닐, 티오모폴리닐-1,1-디옥사이드, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 및 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일을 포함한다.
일 구현예에서, Y는 O이고, 그리고 R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬이다. 일 구현예에서, 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 피리디닐이다.
일 구현예에서, Y는 O이고, 그리고 R2는 -ZR5R10이다. 일 구현예에서, R5는 C1 - C3 알킬 및 R10는 아실, 하이드록시알킬 또는 알콕시로부터 독립적으로 선택된다.
일 구현예에서, Y는 결합이고, 그리고 R2는 수소, 헤테로사이클릴 또는 아릴이되, 상기 헤테로사이클릴 및 아릴은 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된다.
일 구현예에서, Y는 결합이고, 그리고 R2는 수소이다.
일 구현예에서, Y는 결합이고, 그리고 R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴이다. 일 구현예에서, Y는 결합이고, 그리고 R2는 메틸, 할로겐 또는 디메틸아미노로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴이다. R2 헤테로사이클릴의 비제한적인 예는 아제티디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐, 및 피롤리디닐을 포함한다.
일 구현예에서, Y는 결합이고, 그리고 R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 아릴이다. 일 구현예에서, 아릴은 헤테로사이클릴알킬로 치환된 페닐이다.
특정 다른 구현예에서 X가 단환형 고리일 때, R4는 아릴이다. 일 구현예에서, R4는 페닐 및 나프틸로 구성된 군으로부터 선택되고, 그리고 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된다. R7 치환체의 예는 할로겐, 하이드록실, C1- C6 알킬 (예를 들어, C1- C3 알킬), 사이클로알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 아미노, 시아노, 하이드록시알킬 및 알콕시를 포함한다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 하이드록실, 트리플루오로메톡시, 하이드록실, 플루오로, 클로로, 이소프로필, 사이클로프로필 및 트리플루오로메틸티오로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실, 불소 및 염소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 기로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 Q-할로알킬 및 하이드록실 또는 불소로 치환된 페닐이다.
일 구현예에서, R4는 아릴이되, 상기 아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 하이드록실, 할로겐, C1 - C3 알킬, 아미노, 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 디플루오로메틸, 메틸, 하이드록실, 아미노, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다.
일 구현예에서, 아릴은 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 트리플루오로메틸 또는 C1 - C3 알킬로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실로 치환된 나프틸이다.
일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 구현예에서, R4는 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 알콕시 및 아미노로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 인도일, 인다졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 피리디닐 또는 벤조[d]티아졸릴이다. 일 구현예에서, R4는 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 알콕시 및 아미노로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 인도일, 인다졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 피리디닐 또는 벤조[d]티아졸릴이다.
또 다른 구현예에서, R4는 헤테로아릴, 선택적으로 인도일 또는 인다졸릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 치환될 수 있다. 일 구현예에서, R4는 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬 및 알콕시로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 알콕시, 할로알킬, 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인다졸릴이다. 다른 구현예에서, R4 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 아미노, 하이드록실, C1 - C3 알킬, 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 하이드록실 및 아미노로부터 선택된 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 C1 - C3 알킬, 할로겐 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 다른 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7, 예컨대 하이드록실, 1 또는 2개의 C1 - C3 알킬, 또는 하이드록실 및 1 또는 2개의 C1 - C3 알킬로부터 선택적으로 치환된 벤조[d]티아졸릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 하이드록실 및 C1 - C3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다.
일 구현예에서, X가 단환형 고리인 경우, R4는 아르알킬이다. 특정 구현예에서, 아르알킬은 벤질이다. 다른 구현예에서, 벤질 기의 알킬은 하이드록시알킬로 선택적으로 치환된다.
일 구현예에서, L은 결합이다.
일 구현예에서, m은 1이고, 그리고 R3은 C1 - C3 알킬이다.
일 구현예에서, m은 1이고, 그리고 R3은 옥소이다.
일 구현예에서, R8은 헤테로알킬, C2-C4 알키닐 또는 C1 - C3 알킬이되, 이는 -OR5, 시아노 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R8은 메틸, 시아노메틸, 메톡시메틸, 하이드록시메틸이다. 일 구현예에서, R8은 메틸이다. 일 구현예에서, R8은 시아노메틸이다. 일 구현예에서, R8은 하이드록시메틸이다.
일 구현예에서, 식 I는 식 I-A를 갖는 화합물을 포함한다:
식 중, R1, R3, R4, R5, R10, L 및 m은 식 I에 대해 정의된 바와 같고, R11은 수소, 메틸 또는 하이드록시알킬이고, 그리고 피페리디닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, L은 결합이다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 각각의 R7은 하이드록실, 아미노, 할로겐, C1 - C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 사이클로알킬 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, R5 및 R10 각각은 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 하이드록실, 트리플루오로메톡시, 하이드록실, 플루오로, 클로로, 이소프로필, 사이클로프로필 및 트리플루오로메틸티오로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실, 불소 및 염소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 기로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 Q-할로알킬 및 하이드록실 또는 불소로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 하이드록실, 할로겐, C1 - C3 알킬, 아미노, 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 디플루오로메틸, 메틸, 하이드록실, 아미노, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 트리플루오로메틸 또는 C1 - C3 알킬로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 알콕시, 할로알킬, 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인다졸릴이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 아미노, 하이드록실, C1 - C3알킬, 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 C1 - C3 알킬, 할로겐 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7, 예컨대 하이드록실, 1 또는 2개의 C1 - C3 알킬, 또는 하이드록실 및 1 또는 2개의 C1 - C3 알킬로부터 선택적으로 치환된 벤조[d]티아졸릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 하이드록실 및 C1 - C3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R11은 메틸이다. 일 구현예에서, 피페리디닐 고리는 비치환된다. 일 구현예에서, 피페리디닐 고리는 R8로 치환된다. 일 구현예에서, R8은 시아노 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되는 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, R8은 메틸, 시아노메틸 또는 하이드록시메틸이다. 일 구현예에서, R8은 메틸이다. 일 구현예에서, R8은 시아노메틸이다. 일 구현예에서, R8은 하이드록시메틸이다. 또 다른 구현예에서, R5 및 R10 각각은 C1 - C3 알킬이고, R11은 메틸이고, R8은 메틸, 시아노메틸 또는 하이드록시메틸이고, L은 결합이고, 그리고 R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된다.
일 구현예에서, 식 I는 식 I-B를 갖는 화합물을 포함한다:
식 I-B
식 중, R1, R3, R4, R9, L 및 m은 식 I에 대해 정의된 바와 같고, R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴알킬이고, 그리고 상기 피페리디닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, R2 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 고리 헤테로원자를 갖는 단환형, 이환형, 또는 브릿징된 고리계이다. 일 구현예에서, R2 헤테로사이클릴은 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐, 1,4-옥사제파닐, 티오모폴리닐-1,1-디옥사이드, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 및 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일이되, 이는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 각각의 R9는 아실, 옥소, 할로겐, 시아노, C1 - C3 알킬, 알콕시, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, 헤테로사이클릴, 사이클로알킬, 아르알킬 및 디알킬아미도알킬로부터 선택된다. 일 구현예에서, L은 결합이다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 각각의 R7은 하이드록실, 아미노, 할로겐, C1 - C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 사이클로알킬 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 하이드록실, 트리플루오로메톡시, 하이드록실, 플루오로, 클로로, 이소프로필, 사이클로프로필 및 트리플루오로메틸티오로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실, 불소 및 염소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 기로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 Q-할로알킬 및 하이드록실 또는 불소로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 하이드록실, 할로겐, C1 - C3 알킬, 아미노, 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 디플루오로메틸, 메틸, 하이드록실, 아미노, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 트리플루오로메틸 또는 C1 - C3 알킬로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 알콕시, 할로알킬, 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인다졸릴이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 아미노, 하이드록실, C1 - C3 알킬, 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 C1 - C3 알킬, 할로겐 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7, 예컨대 하이드록실, 1 또는 2개의 C1 - C3 알킬, 또는 하이드록실 및 1 또는 2개의 C1 - C3 알킬로부터 선택적으로 치환된 벤조[d]티아졸릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R11은 메틸이다. 일 구현예에서, 피페리디닐 고리는 비치환된다. 일 구현예에서, 피페리디닐 고리는 R8로 치환된다. 일 구현예에서, 피페리디닐 고리는 비치환된다. 일 구현예에서, 피페리디닐 고리는 R8로 치환된다. 일 구현예에서, R8은 시아노, 하이드록실 또는 메톡시로 선택적으로 치환되는 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, R8은 메틸, 시아노메틸, 하이드록시메틸 또는 메톡시메틸이다.
일 구현예에서, X는 포화된 브릿징된 고리계이다. 브릿징된 고리계의 비제한적인 예는 디아자바이사이클로헵탄 및 디아자바이사이클로옥탄을 포함한다. 특정 구현예에서, X가 포화된 브릿징된 고리계일때, R1은 -C(O)CH=CH2이다. 일 구현예에서, 브릿징된 고리계는 R8로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 기로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, 브릿징된 고리계는 비치환된다. 일 구현예에서, 브릿징된 고리계는 디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일 또는 디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-3-일이다.
일 구현예에서, R1-X는 하기이다:
식 중, A 및 B는 스피로환형 고리계이되, A 및 B은 동일 또는 상이하고, 그리고 독립적으로 4-6 원 포화된 고리계를 나타내되, 상기 고리는 1개 이상의 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 I에 대해 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, R1은 -C(O)CH=CH2이다. 특정 구현예에서, 고리 A 및 B는 비치환된다.
일 구현예에서, 스피로환형 고리계는 비치환된다. 스피로환형 고리계의 비-제한적인 예는 하기를 포함한다:
및
특정 구현예에서 A 및 B가 스피로환형 고리계를 나타낼 때, R1은 -C(O)CH=CH2이다.
식 I의 일 구현예에서, R2는 하이드록시알킬, 디알킬아미닐알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, 각각의 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬은 R9로 독립적으로 선택적으로 치환된다. 또 다른 구현예에서, R2는 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬이되, 각각의 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬은 1개 이상의 R9로 독립적으로 선택적으로 치환된다. 특정 구현예에서, R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환되는 디알킬아미닐알킬이다. 비-제한적인 예는 디메틸아미닐에틸, 디메틸아미닐프로파닐, 디메틸아미닐프로판-2-일, 디메틸아미닐부타닐, 디메틸아미닐부탄-2-일, 2-디메틸아미닐프로판올, 또는 디에틸아미닐에틸을 포함한다.
일 구현예에서, Y는 O이고, 그리고 R2는 하이드록시알킬, 디알킬아미닐알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 및 -ZR5R10로 구성된 군으로부터 선택되되, R5 및 R10은 식 I에 대해 정의된 바와 같다.
일 구현예에서, Y는 O이고, 그리고 R2는 하이드록시알킬, 디알킬아미닐알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, 각각의 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬은 R9로 독립적으로 선택적으로 치환된다. 또 다른 구현예에서, R2는 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬이되, 각각의 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬은 1개 이상의 R9로 독립적으로 선택적으로 치환된다. R9의 비-제한적인 예는 아실, 옥소, 할로겐, 시아노, C1 - C6 알킬, 알콕시, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 아르알킬 또는 디알킬아미도알킬을 포함한다. 특정 구현예에서, R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환되는 디알킬아미닐알킬이다. 비-제한적인 예는 디메틸아미닐에틸, 디메틸아미닐프로파닐, 디메틸아미닐프로판-2-일, 디메틸아미닐부타닐, 디메틸아미닐부탄-2-일, 2-디메틸아미닐프로판올, 또는 디에틸아미닐에틸을 포함한다.
식 I의 일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된 아릴이다. 일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된 페닐 또는 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 페닐 또는 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 할로겐, 하이드록실, C1 - C3알킬, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 또는 Q-할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 페닐 또는 나프틸이되, Q는 O 또는 S이다. 일 구현예에서, R4는 메틸, 트리플루오로메틸, 하이드록실, 트리플루오로메톡시, 하이드록실, 플루오로, 클로로, 이소프로필, 사이클로프로필 및 메틸티오로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 페닐 또는 나프틸이다.
일 구현예에서, R4는 아미노로 선택적으로 치환된 이소퀴놀리닐이다. 일 구현예에서, R4는 아르알킬이다. 특정 구현예에서, 아르알킬은 벤질이다. 일 구현예에서, 아르알킬은 벤질이되, 상기 알킬 부분은 하이드록실 또는 하이드록시알킬로 치환된다.
식 (I), 식 I-A 및 식 I-B의 화합물의 비제한적인 예는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
및
및 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
식 (I), 식 I-A 및 식 I-B의 화합물의 추가 비제한적인 예는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
및
및 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
본 발명의 일 양태에서, 본 화합물은 식 (II) 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염에 의해 제시되어 제공된다:
식 (II)
식 중:
X는 4-12 원 포화 또는 부분적 포화 단환형, 브릿징된 또는 스피로환형 고리이되, 상기 포화 또는 부분적 포화 단환형 고리는 1개 이상의 R8로 선택적으로 치환되고;
Y는 결합, O, S 또는 NR5이고;
R1은 또는 이고;
R2는 수소, 알킬, 하이드록시알킬, 디하이드록시알킬, 알킬아미닐알킬, 디알킬아미닐알킬, -Z-NR5R10, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴알킬이되, 각각의 Z, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴알킬은 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 Z는 C1 - C4 알킬렌이고;
각각의 R3은 독립적으로 C1 - C3 알킬, 옥소, 할로알킬, 하이드록실 또는 할로겐이고;
L은 결합, -C(O)-, 또는 C1 - C3 알킬렌이고;
R4는 수소, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 아르알킬 및 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이고;
R6은 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R7은 독립적으로 할로겐, 하이드록실, C1 - C6 알킬, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 아미노, 시아노, 헤테로알킬, 하이드록시알킬 또는 Q-할로알킬이되, Q는 O 또는 S이고;
R8은 옥소, C1 - C3 알킬, C2 - C4 알키닐, 헤테로알킬, 시아노, -C(O)OR5, -C(O)N(R5)2, -N(R5)2이되, 상기 C1 - C3 알킬은 시아노, 할로겐, -OR5, -N(R5)2, 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R9는 독립적으로 수소, 옥소, 아실, 하이드록실, 하이드록시알킬, 시아노, 할로겐, C1 - C6 알킬, 아르알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 알콕시, 디알킬아미닐, 디알킬아미도알킬, 또는 디알킬아미닐알킬이되, 상기 C1 - C6 알킬은 사이클로알킬로 선택적으로 치환될 수 있고;
각각의 R10는 독립적으로 수소, 아실, C1 - C3 알킬, 헤테로알킬 또는 하이드록시알킬이고;
R11은 할로알킬이고;
RA는 부재이고, 수소, 중수소, 시아노, 할로겐, C1 - C-3 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, -C(O)N(R5)2, 또는 하이드록시알킬이고;
각각의 RB는 독립적으로 수소, 중수소, 시아노, C1 - C3 알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, C1 - C3 알콕시, 할로겐, 할로알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 디알킬아미닐알킬, 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되되, 상기 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환되고;
또는, 는 이중 결합이고 p는 2일 때, 1개의 RB는 수소이고, 그리고 RA 및 1개의 RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 옥소로 치환된 4-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성하고;
m은 제로 또는 1 내지 2의 정수이고;
p는 1 또는 2이고; 그리고
가 삼중 결합일 때, RA는 부재이고, p는 1과 같고, 그리고 RB는 하이드록시알킬이고,
또는 가 이중 결합일 때, RA는 존재하고, RB는 존재하고, p는 2와 같되, RA가 수소 또는 C1 - C3 알킬일 때, 적어도 1개의 RB는 중수소, 시아노, 할로겐, 할로알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나; 또는 각각의 RB가 수소일 때, RA는 중수소, 시아노, 할로겐, 할로알킬, -C(O)N(R5)2, 하이드록시알킬 또는 헤테로알킬이다.
특정 구현예에서, R1-X는 하기이다:
식 중, R1은 식 II에 대해 정의된 바와 같고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 II에 대해 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, R8은 C1 - C3 알킬이되, 상기 알킬은 시아노 또는 OR5, 또는 -C(O)N(R5)2으로 선택적으로 치환되되, 각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이다.
특정 구현예에서, R1은 이되, RA, RB 및 p는 식 II에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, R1은 이되, 는 삼중 결합이고, 그리고 RA는 부재이고, p는 1이고, 그리고 RB는 하이드록시알킬이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 수소 또는 C1 - C3 알킬이고, p는 2이고, 그리고 적어도 1개의 RB는 중수소, 시아노, C1 - C3 알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, C1 - C3 알콕시, 할로겐, 할로알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 디알킬아미닐알킬, 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되되, 상기 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 가 이중 결합일 때, 이중 결합은 E 배치형태이다. 일 구현예에서, 이중 결합은 Z 배치형태이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 할로겐, 하이드록실, 알콕시 또는 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환체로 치환된 헤테로사이클릴알킬이고, 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 할로겐으로 치환된 아제티디닐이다. 특정 구현예에서, 할로겐은 불소이다. 일 구현예에서, 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 하나 이상의 할로겐으로 치환된 피롤리디닐이다. 특정 구현예에서, 할로겐-치환된 피롤리디닐은 플루오로피롤리디닐 또는 디플루오르피롤리디닐이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 할로겐이고, 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 할로겐은 염소이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 할로알킬 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 할로알킬은 클로로메틸, 플루오로메틸, 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 헤테로알킬 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 헤테로알킬은 메톡시메틸이다.
특정 구현예들에서, 1개의 RB는 -ZNR5R11이되, Z는 메틸렌이고, R5는 메틸이고, 그리고 R11은 트리플루오로메틸 또는 2,2,2-트리플루오로에틸, 그리고, 다른 RB는 수소이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 하이드록시알킬 그리고, 다른 RB는 수소이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고, 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 헤테로아릴은 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐 또는 트리아지닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 치환된다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 헤테로아릴알킬이이고, 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐 또는 트리아지닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 1개 이상의 R7은 C1 - C3 알킬이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 -C(O)N(R5)2이고, 그리고, 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, 각각의 R5는 수소이다. 일 구현예에서, 각각의 R5는 C1 - C3 알킬이다.
특정 구현예에서, 1개의 RB는 -NHC(O)C1 - C3 알킬 또는 -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬이고, 그리고 다른 RB는 수소이다. 일 구현예에서, C1 - C3 알킬은 메틸이다.
일 구현예에서, R1은 이되, RA는 중수소, 시아노, 할로겐, C1 - C-3 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, -C(O)N(R5)2, 또는 하이드록시알킬이고, p는 2이고, 각각의 RB는 수소이다. 일 구현예에서, RA는 할로겐이다. 일 구현예에서, 할로겐은 불소 또는 염소이다. 일 구현예에서, RA는 할로알킬이다. 일 구현예에서, 할로알킬은 트리플루오로메틸이다. 일 구현예에서, RA는 시아노이다. 일 구현예에서, RA는 헤테로알킬이다. 일 구현예에서, 헤테로알킬은 메톡시이다. 일 구현예에서, RA는 하이드록시알킬이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 중수소이고, p는 2이고, 그리고 적어도 1개의 RB는 중수소이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 p는 2이고, 1개의 RB는 수소이고, 그리고 RA 및 1개의 RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 옥소로 치환된 5-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성한다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 p는 2이고, 1개의 RB는 수소이고, 두 번째 RB는 디알킬아미닐알킬이고, 그리고 RA는 할로겐이다.
일 구현예에서, Y는 O 또는 NR5이고, R2는 헤테로사이클릴 또는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴알킬이다. R2가 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬인 1개 이상의 R9의 비제한적인 예는 C1 - C3 알킬, 아실, 옥소, 시아노, 알콕시, 사이클로알킬, 사이클로알킬메틸, 할로겐, 및 하이드록실을 포함한다. 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 R2 헤테로사이클릴의 비제한적인 예는 아제티디닐, C1-C3 알킬-치환된 아제티디닐 (예를 들어, 메틸아제티딘일), 할로-치환된 아제티디닐 (예를 들어, 디플루오로아제티딘일), 테트라하이드로피란, 피롤리디닐, C1-C3 알킬-치환된 피롤리디닐 (예를 들어, 메틸피롤리디닐, 디메틸피롤리디닐, 및 이소프로필피롤리디닐), 사이클로알킬알킬피롤리디닐, 하이드록시파이롤린디닐렌, 할로-치환된 피롤리디닐 (예를 들어, 플루오로피롤리디닐 및 디플루오로피롤리디닐), 할로-치환된 N-메틸 피롤리디닐 (예를 들어, N-메틸플루오로피롤리디닐 및 N-메틸디플루오로피롤리디닐), 메톡시에틸피롤리디닐, 알콕시-치환된 N-메틸피롤리디닐 (예를 들어, (N-메틸)메톡시피롤리디닐), 피페라지닐, 디메틸아미닐피롤리디닐, 모폴리닐, 메틸모폴리닐, 1,4-옥사제파닐, 피페리디닐, C1-C3 알킬-치환된 피페리디닐 (예를 들어, 메틸피페리디닐), 아실피페리디닐, 시아노피페리디닐, 사이클로알킬피페리디닐, 할로피페리디닐 (예를 들어, 플루오로피페리디닐), 디할로피페리디닐 (예를 들어, 디플루오로피페리디닐), 알콕시피페리디닐, 피롤리도닐, 피페리도닐, 티오모폴리닐-1,1-디옥사이드, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 및 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일을 포함한다.
일 구현예에서, 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 N-메틸피롤리디닐이다. 일 구현예에서, 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 3,3-디플루오로-1-메틸피롤리디닐이다.
특정 다른 구현예에서, R4는 아릴이다. 일 구현예에서, R4는 페닐 및 나프틸로 구성된 군으로부터 선택되고, 그리고 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된다. R7 치환체의 예는 할로겐, 하이드록실, C1- C6 알킬 (예를 들어, C1- C3 알킬), 사이클로알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 아미노, 시아노, 하이드록시알킬 및 알콕시를 포함한다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 트리플루오로메틸, 하이드록실, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 하이드록실, 트리플루오로메틸, 불소 및 염소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 기로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 트리플루오로메틸 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다.
일 구현예에서, R4는 아릴이되, 상기 아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 하이드록실, 할로겐, C1 - C3 알킬, 아미노, 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 디플루오로메틸, 메틸, 하이드록실, 아미노, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 치환된 나프틸은 8-클로로나프틸 또는 8-메틸나프틸이다.
일 구현예에서, 아릴은 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 트리플루오로메틸 또는 C1 - C3 알킬로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실로 치환된 나프틸이다.
일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 구현예에서, R4는 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 알콕시 및 아미노로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 구현예에서, R4는 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 인도일, 인다졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 피리디닐 또는 벤조[d]티아졸릴이다. 일 구현예에서, R4는 옥소, 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 알콕시 및 아미노로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 인도일, 인다졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 피리디닐 또는 벤조[d]티아졸릴이다.
또 다른 구현예에서, R4는 헤테로아릴, 선택적으로 인도일 또는 인다졸릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 치환될 수 있다. 일 구현예에서, R4는 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬 및 알콕시로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 또는 R8 치환체로 선택적으로 치환된 헤테로아릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 옥소, 트리플루오로메틸, 알콕시, 할로알킬, 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 인다졸릴이다. 다른 구현예에서, R4 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 아미노, 하이드록실, C1 - C3 알킬, 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 하이드록실 및 아미노로부터 선택된 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 C1 - C3 알킬, 할로겐 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 하이드록실, 트리플루오로메틸 및 C1 - C3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다.
일 구현예에서, L은 결합이다.
일 구현예에서, m은 제로이다.
일 구현예에서, R8은 헤테로알킬, C2-C4 알키닐 또는 C1 - C3 알킬이되, 이는 -OR5, 시아노 또는 헤테로아릴로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R8은 메틸, 시아노메틸, 메톡시메틸, 하이드록시메틸이다. 일 구현예에서, R8은 메틸이다. 일 구현예에서, R8은 시아노메틸이다. 일 구현예에서, R8은 하이드록시메틸이다.
일 구현예에서, 식 II는 식 II-A를 갖는 화합물을 포함한다:
식 중, R1, R3, R4, R5, R10, L 및 m은 식 II에 대해 정의된 바와 같고, R11은 수소, 메틸 또는 하이드록시알킬이고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 II에 대해 정의된 바와 같다.
특정 구현예에서, R1은 이되, RA, RB 및 p는 식 II에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, R1은 이되, 는 삼중 결합이고, 그리고 RA는 부재이고, p는 1이고, 그리고 RB는 하이드록시알킬이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 수소 또는 C1 - C3 알킬이고, p는 2이고, 그리고 적어도 1개의 RB는 중수소, 시아노, C1 - C3 알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, C1 - C3 알콕시, 할로겐, 할로알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되되, 상기 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다.
일 구현예에서, R1은 -C(O)C(RA)=C(RB)p이되, RA는 중수소, 시아노, 할로겐, 할로알킬, 헤테로알킬, -C(O)N(R5)2, 또는 하이드록시알킬이고, p는 2이고, 그리고 각각의 RB는 수소이다. 일 구현예에서, RA는 할로겐이다. 일 구현예에서, 할로겐은 불소 또는 염소이다. 일 구현예에서, RA는 할로알킬이다. 일 구현예에서, 할로알킬은 트리플루오로메틸이다. 일 구현예에서, RA는 시아노이다. 일 구현예에서, RA는 헤테로알킬이다. 일 구현예에서, 헤테로알킬은 메톡시메틸이다. 일 구현예에서, RA는 하이드록시알킬이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 중수소이고, p는 2이고, 그리고 적어도 1개의 RB는 중수소이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 p는 2이고, 1개의 RB는 수소이고, 그리고 RA 및 1개의 RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 옥소로 치환된 5-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성한다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 p는 2이고, 1개의 RB는 수소이고, 두 번째 RB는 디알킬아미닐알킬이고, 그리고 RA는 할로겐이다.
일 구현예에서, L은 결합이다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 각각의 R7 또는 R8은 옥소, 하이드록실, 아미노, 할로겐, C1 - C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 사이클로알킬 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, R5 및 R10 각각은 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 하이드록실, 트리플루오로메톡시, 하이드록실, 플루오로, 클로로, 이소프로필, 사이클로프로필 및 트리플루오로메틸티오로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실, 불소 및 염소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 기로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 Q-할로알킬 및 하이드록실 또는 불소로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 하이드록실, 할로겐, C1 - C3 알킬, 아미노, 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 디플루오로메틸, 메틸, 하이드록실, 아미노, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 또는 R8 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 트리플루오로메틸 또는 C1 - C3 알킬로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 옥소, 알콕시, 할로알킬, 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 인다졸릴이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 아미노, 하이드록실, C1 - C3알킬, 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 C1 - C3 알킬, 할로겐 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 하이드록실 및 C1 - C3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R11은 메틸이다. 일 구현예에서, 피페라지닐 고리는 비치환된다. 일 구현예에서, 피페라지닐 고리는 R8로 치환된다. 일 구현예에서, R8은 시아노 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되는 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, R8은 메틸, 시아노메틸 또는 하이드록시메틸이다. 일 구현예에서, R8은 메틸이다. 일 구현예에서, R8은 시아노메틸이다. 일 구현예에서, R8은 하이드록시메틸이다. 또 다른 구현예에서, R5 및 R10 각각은 C1 - C3 알킬이고, R11은 메틸이고, R8은 메틸, 시아노메틸 또는 하이드록시메틸이고, L은 결합이고, 그리고 R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6 또는 R7로 선택적으로 치환된다.
일 구현예에서, 식 II는 식 II-B를 갖는 화합물을 포함한다:
식 II-B
식 중, R1, R3, R4, L 및 m은 식 II에 대해 정의된 바와 같고, R2는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴알킬이되, R9는 식 II에 대해 정의된 바와 같고, 그리고 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되되, R8은 식 II에 대해 정의된 바와 같다.
특정 구현예에서, R1은 이되, RA, RB 및 p는 식 II에 대해 정의된 바와 같다. 일 구현예에서, R1은 이되, 는 삼중 결합이고, 그리고 RA는 부재이고, p는 1이고, 그리고 RB는 하이드록시알킬이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 수소 또는 C1 - C3 알킬이고, p는 2이고, 그리고 적어도 1개의 RB는 중수소, 시아노, C1 - C3 알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, C1 - C3 알콕시, 할로겐, 할로알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되되, 상기 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다.
일 구현예에서, R1은 -C(O)C(RA) =C(RB)p이되, RA는 중수소, 시아노, 할로겐, 할로알킬, 헤테로알킬, -C(O)N(R5)2, 또는 하이드록시알킬이고, p는 2이고, 그리고 각각의 RB는 수소이다. 일 구현예에서, RA는 할로겐이다. 일 구현예에서, 할로겐은 불소 또는 염소이다. 일 구현예에서, RA는 할로알킬이다. 일 구현예에서, 할로알킬은 트리플루오로메틸이다. 일 구현예에서, RA는 시아노이다. 일 구현예에서, RA는 헤테로알킬이다. 일 구현예에서, 헤테로알킬은 메톡시메틸이다. 일 구현예에서, RA는 하이드록시알킬이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 RA는 중수소이고, p는 2이고, 그리고 적어도 1개의 RB는 중수소이다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 p는 2이고, 1개의 RB는 수소이고, 그리고 RA 및 1개의 RB 및 이들이 부착된 탄소 원자는 옥소로 치환된 5-8 원 부분적으로 포화 사이클로알킬을 형성한다.
일 구현예에서, R1은 이되, 는 이중 결합이고, 그리고 p는 2이고, 1개의 RB는 수소이고, 두 번째 RB는 디알킬아미닐알킬이고, 그리고 RA는 할로겐이다.
일 구현예에서, R2 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 고리 헤테로원자를 갖는 단환형, 이환형, 또는 브릿징된 고리계이다. 일 구현예에서, R2 헤테로사이클릴은 아제티디닐, 메틸아제티디닐, 에틸아제티디닐, 이소프로필아제티디닐, 디플루오로아제티디닐, 사이클로프로필아제티디닐, 테트라하이드로피라닐아제티디닐, 테트라하이드로피란, 피롤리디닐, 메틸피롤리디닐, 디에메틸피롤리디닐, 이소프로필피롤리디닐, 사이클로알킬알킬피롤리디닐, 하이드록시파이롤린디닐렌, 플루오로피롤리디닐, 디플루오로피롤리디닐, (N-메틸)플루오로피롤리디닐, (N-메틸)디플루오로피롤리디닐, 메톡시에틸피롤리디닐, 알콕시-치환된 N-메틸피롤리디닐 (예를 들어, (N-메틸)메톡시피롤리디닐), 피페라지닐, 디메틸아미닐피롤리디닐, 피롤리디논, 메틸피롤리디논, 모폴리닐, 메틸모폴리닐, 에틸모폴리닐, 이소프로필모폴리닐, 옥세타닐, 1,4-옥사제파닐, 피페리디닐, 메틸피페리디닐 아실피페리디닐, 시아노피페리디닐, 사이클로알킬피페리디닐, 할로피페리디닐, 디할로피페리디닐, 플루오로피페리디닐, 디플루오로피페리디닐, 알콕시피페리디닐, 피롤리도닐, 피페리디노닐, 테트라하이드로파이롤리지닐, 티오모폴리닐-1,1-디옥사이드, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 또는 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일이되, 이는 1개 이상의 R9로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 각각의 R9는 아실, 옥소, 할로겐, 시아노, C1 - C3 알킬, 알콕시, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 아르알킬, 헤테로사이클릴 및 디알킬아미도알킬로부터 선택된다. 일 구현예에서, L은 결합이다. 일 구현예에서, R2 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은, 3,3-디플루오로-1-메틸피롤리디닐을 포함하는 (N-메틸)디플루오로피롤리디닐이다. 일 구현예에서, R2 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 N-메틸피롤리디닐이다.
일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이들 각각은 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, 각각의 R7은 하이드록실, 아미노, 할로겐, C1 - C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 사이클로알킬 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 메틸, 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 하이드록실, 트리플루오로메톡시, 하이드록실, 플루오로, 클로로, 이소프로필, 사이클로프로필 및 트리플루오로메틸티오로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실, 불소 및 염소로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 기로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬 또는 2개의 C1 - C3 알킬로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 Q-할로알킬 및 하이드록실 또는 불소로 치환된 페닐이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 하이드록실, C1- C3 알킬, 할로알킬, Q-할로알킬, 및 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 할로겐, 할로알킬, 메틸, 이소프로필, 메톡시, Q-할로알킬 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 기로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 하이드록실, 할로겐, C1 - C3 알킬, 아미노, 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 디플루오로메틸, 메틸, 하이드록실, 아미노, 플루오로, 및 클로로로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 R7 치환체로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하나 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실 및 트리플루오로메틸 또는 C1 - C3 알킬로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, 아릴은 하이드록실로 치환된 나프틸이다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 알콕시, 할로알킬, 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인다졸릴이다.
일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4는 헤테로아릴이되, 상기 헤테로아릴은 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이되, 이들 각각은 옥소, 아미노, 하이드록실, C1 - C3 알킬, 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 C1 - C3 알킬, 할로겐 및 할로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 R7로 선택적으로 치환된 피리디닐이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 1개 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R4 헤테로아릴은 하이드록실 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 R7로 선택적으로 치환된 인돌릴이다. 일 구현예에서, R11은 메틸이다. 일 구현예에서, 피페라지닐 고리는 비치환된다. 일 구현예에서, 식 II-B의 피페라지닐 고리는 R8로 치환된다. 일 구현예에서, R8은 시아노, 하이드록실 또는 메톡시로 선택적으로 치환되는 C1 - C3 알킬이다. 일 구현예에서, R8은 메틸, 시아노메틸, 하이드록시메틸 또는 메톡시메틸이다.
식 (II), 식 II-A 및 식 II-B의 화합물의 비제한적인 예는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:
및
또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
일 구현예에서, 식 I의 화합물은 상기 화합물의 트리플루오로아세트산 염을 포함한다. 식 (I), 식 I-A, 식 I-B, 식 (II), 식 II-A, 또는 식 II-B의 화합물은 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다.
약제학적 조성물
또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 KRas G12C 억제제 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 화합물은 당해 기술에 알려진 임의의 방법에 의해 제형화될 수 있고 비경구, 경구, 설하, 경피, 국소, 비강내, 기관내, 또는 직장내를 비제한적으로 포함하는 임의의 경로에 의해 투여하기 위해 제조될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 화합물은 병원 환경에서 정맥내로 투여된다. 일 구현예에서, 투여는 경구 경로에 의한 것일 수 있다.
담체의 특성은 투여 경로에 좌우될 것이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용가능한"이란, 생물학적 시스템 예컨대 세포, 세포 배양, 조직, 또는 유기체와 양립가능하고 활성 성분(들)의 생물학적 활성의 유효성을 방해하지 않는 무독성 물질을 의미한다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은, 상기 억제제 외에, 희석제, 충전제, 염, 완충액, 안정화제, 가용화제, 및 당해 분야에서 잘 알려진 다른 물질을 함유할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 제형의 제조는, 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990에 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 약제학적으로 허용가능한 염이란, 상기-확인된 화합물의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 바람직하지 않은 독물학적 효과를 최소로 나타내거나 또는 나타내지 않는 염을 지칭한다. 그와 같은 염의 예는무기 산 (예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 및 기타 동종의 것)으로 형성된 산 부가 염, 및 유기 산 예컨대 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 석신산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 탄닌산, 파모산, 알긴산, 폴리글루탐산, 나프탈렌설폰산, 나프탈렌디설폰산, 및 폴리갈락투론산으로 형성된 염을 비제한적으로 포함한다. 본 화합물은 또한 당해 분야의 숙련가에 의해 알려진 약제학적으로 허용가능한 사차 염으로서 투여될 수 있고, 상기 사차 염은 구체적으로, 하기를 포함하는 식 --NR+Z-(식 중, R는 수소, 알킬, 또는 벤질고, 그리고 Z는 반대이온임)의 사차 암모늄 염을 포함한다: 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, --O-알킬, 톨루엔설포네이트, 메틸설포네이트, 설포네이트, 포스페이트, 또는 카복실레이트 (예컨대 벤조에이트, 석시네이트, 아세테이트, 글라이콜레이트, 말레에이트, 말레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 신나모에이트, 만델로에이트, 벤질로에이트, 및 디페닐아세테이트).
활성 화합물은 치료되는 환자에서 심각한 독성 효과를 야기하지 않으면서 치료 유효량을 환자에게 전달하는데 충분한 양으로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제 내에 포함된다. 일 구현예에서, 모든 상기-언급된 병태를 위한 활성 화합물의 용량은 약 0.01 내지 300 mg/kg, 예를 들어 일일당 0.1 내지 100 mg/kg, 및 추가 예로서 일일당 0.5 내지 약 25 mg/수령체의 체중 킬로그램의 범위이다. 전형적인 국소 투약량은 적합한 담체에서 0.01 내지 3%의 범위일 것이다. 약제학적으로 허용가능한 유도체의 효과적인 투약 범위는 전달될 모 화합물의 중량을 기준으로 계산될 수 있다. 유도체가 그 자체가 활성을 나타내면, 효과적인 투약량은 유도체의 중량을 사용하여, 또는 당해 분야의 숙련가에게 알려진 다른 수단에 의해 상기와 같이 추정될 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 사용 방법에서 사용될 수 있다.
사용 방법
또 다른 양태에서, 본 발명은 세포에서 KRas G12C 활성을 억제하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 KRas G12C 활성의 억제가 요구되는 세포를, 식 (II), 식 II-A, 또는 식 II-B의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약제학적 조성물의 유효량과 접촉시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 접촉은 시험관내이다. 일 구현예에서, 접촉은 생체내이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "접촉시키는"은 시험관내 시스템 또는 생체내 시스템에서 지시된 모이어티를 맺어주는 것을 지칭한다. 예를 들어, KRas G12C을 본 명세서에 제공된 화합물과 "접촉시키는 것"은 본 명세서에 제공된 화합물을 KRas G12C를 가지고 있는 개체 또는 환자, 예컨대 인간에 투여하는 것, 뿐만 아니라, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 화합물을 KRas G12C을 함유하는 세포 또는 정제 제제를 함유하는 샘플에 도입하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, KRas G12C 활성의 억제가 요구되는 세포는 KRas G12C의 활성을 음성으로 조절하기 위해 식 (II), 식 II-A, 또는 식 II-B의 화합물의 유효량과 접촉된다. 다른 구현예에서, 식 (II), 식 II-A, 또는 식 II-B의 화합물을 함유하는 약제학적으로 허용가능한 염 또는 약제학적 조성물의 치료 유효량이 사용될 수 있다.
KRas G12C의 활성을 음성으로 조정함으로써, 본 명세서에서 기재된 방법은 세포 내에서 향상된 KRas G12C 활성에서 비롯하는 바람직하지 않은 세포 증식을 억제하도록 설계된다. 세포는 KRas G12C의 원하는 음성 조정을 유효화하기 위한 특정 치료 레지멘에 따라 단일 용량 또는 다중 용량으로 접촉될 수 있다. KRas G12C의 공유 변형의 정도는, 아래 실시예 A에서 기재된 것들을 포함하는, 잘 알려진 방법을 사용하여 시험관내 모니터링될 수 있다. 또한, 세포내 예시적인 화합물의 억제 활성은, 치료의 유효성을 평가하기 위해, 예를 들어, 아래 실시예 B에서 기재된 것들을 포함하는, 인산화된 ERK의 양의 KRas G12C 활성의 억제를 평가함으로써 모니터링될 수 있고 투약량은 따라서 담당 의료 종사자에 의해 조정될 수 있다.
또 다른 양태에서, 치료가 필요한 환자에서 암을 치료하는 방법은상기 환자에게, 식 (I), 식 II-A, 또는 식 II-B의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에 제공된 조성물 및 방법은 치료가 필요한 환자에서 KRas G12C-연관된 암의 치료를 위해 사용될 수 있고, 상기 방법은 상기 환자에게, 식 (II), 식 II-A, 또는 식 II-B의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, KRas G12C-연관된 암은 폐암이다.
본 명세서에 제공된 조성물 및 방법은 종양 예컨대 폐, 전립선, 유방, 뇌, 피부, 자궁경부 암종, 고환 암종 등을 포함하는 다양한 암의 치료를 위해 사용될 수 있다. 더 상세하게는, 본 발명의 조성물 및 방법에 의해 치료될 수 있는 암은, 비제한적으로 종양 유형 예컨대 성상세포, 유방, 자궁경부, 결장직장, 자궁내막, 식도, 위, 두경부, 간세포, 후두, 폐, 경구, 난소, 전립선 및 갑상선 암종 및 육종을 포함한다. 더 구체적으로, 이들 화합물은 하기를 치료하기 위해 사용될 수 있다: 심장: 육종 (혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종, 지방육종), 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 및 기형종; 폐: 기관지 암종 (편평상피 세포, 미분화된 소세포, 미분화된 대세포, 선암종), 폐포 (세기관지) 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골성 과오종, 중피종; 위장: 식도 (편평상피 세포 암종, 선암종, 평활근육종, 림프종), 위 (암종, 림프종, 평활근육종), 췌장 (관상 선암종, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 유암종, 비포마), 소장 (선암종, 림프종, 유암종, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장 (선암종, 관형 샘종, 융모 샘종, 과오종, 평활근종); 비뇨생식관: 신장 (선암종, 윌름스 종양 (신모세포종), 림프종, 백혈병), 방광 및 요도 (편평상피 세포 암종, 이행 세포 암종, 선암종), 전립선 (선암종, 육종), 고환 (정상피종, 기형종, 배아 암종, 기형암종, 융모막암종, 육종, 간질성 세포 암종, 섬유종, 섬유선암종, 샘종 종양, 지방종); 간: 간종양 (간세포 암종), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 샘종, 혈관종; 담관: 담낭 암종, 팽대부 암종, 담관암종; 뼈: 골원성 육종 (골육종), 섬유육종, 악성 섬유질 조직구종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 림프종 (세망 세포 육종), 다발성 골수종, 악성 거대세포 종양 척색종, 골연골종 (골연골성 외골종증), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액유사 섬유종, 골모양 골종 및 거대세포 종양; 신경계: 두개골 (골종, 혈관종, 육아종, 황색종, 골염 변형성), 수막 (수막종, 수막육종, 교종증), 뇌 (별아교세포종, 수모세포종, 신경아교종, 뇌실막세포종, 종자세포종 (송과체종), 다형상 교모세포종, 희소돌기아교세포종, 신경집종, 망막모세포종, 선천성 종양), 척수 신경섬유종, 수막종, 신경아교종, 육종); 부인과: 자궁 (자궁내막암종), 자궁경부 (자궁경부 암종, 전-종양 자궁경부 형성이상), 난소 (난소 암종 (장액 낭샘암종, 점액성 낭샘암종, 미분류된 암종), 과립 난포막 세포 종양, 세르톨리-라이디히 세포 종양, 난소고환종, 악성 기형종), 외음부 (편평상피 세포 암종, 상피내 암종, 선암종, 섬유육종, 흑색종), 질 (투명 세포 암종, 편평상피 세포 암종, 포도형 육종 (배아 횡문근육종), 나팔관 (암종); 혈액성: 혈액 (골수성 백혈병 (급성 및 만성), 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질환, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군), 호지킨 질환, 비-호지킨 림프종 (악성 림프종); 피부: 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 편평상피 세포 암종, 카포시 육종, 점 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부섬유종, 켈로이드, 건선; 및 부신: 신경교세포종. 특정 구현예에서, 상기 암은 비-소세포 폐암이다.
환자에 대한 투여 농도 및 경로는 치료될 암에 따라 변할 것이다. 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염 및 그와 같은 화합물 및 염을 포함하는 약제학적 조성물은 또한 다른 항-신생물성 화합물, 예를 들어, 화학요법과 함께 공-투여될 수 있거나, 또는 수술전 또는 수술후 아쥬반트로서 다른 치료, 예컨대 방사선 또는 수술 개입과 함께 사용될 수 있다.
요법에서 사용하기 위한, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물, 또는 그의 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다.
암의 치료에서 사용하기 위한, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 그의 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C의 억제에서 사용하기 위한, 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물이 본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C-연관된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물 또는 그의 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다.
암의 치료용 약제의 제조에서의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C의 활성의 억제용 약제의 제조에서의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본 명세서에 또한 제공된다.
KRas G12C-연관된 질환 또는 장애의 치료용 약제의 제조에서의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물의 용도가 본 명세서에 또한 제공된다.
치료가 필요한 환자에서 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 또한 제공되고, 상기 방법은 (a) (예를 들어, 관리 기관-승인된, 예를 들어, FDA-승인된, 검정 또는 키트를 사용하여 결정된 바와 같이) 암이 KRas G12C 돌연변이 (예를 들어, KRas G12C-연관된 암)과 연관되는 지를 결정하는 단계; 및 (b) 상기 환자에게, 식 I, 식 I-A, 식 I-B, 식 II, 식 II-A 또는 식 II-B의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 약제학적 조성물의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
당해 분야의 숙련가는, 적합한, 알려진 및 일반적으로 허용된 세포 및/또는 동물 모델을 사용하는 생체내 및 시험관내 시험 둘 모두가 주어진 장애를 치료 또는 예방하기 위해 테스트 화합물의 능력을 예측함을 인정할 것이다.
당해 분야의 숙련가는, 건강한 환자 및/또는 주어진 장애를 앓고 있는 사람들에서 최초의 인간, 용량 범위 및 효능 시험을 포함하는 인간 임상시험이 임상 및 의술에서 잘 알려진 방법에 따라 완료될 수 있음을 추가로 인정할 것이다.
반응식 및 실시예
본 발명의 화합물은 본 명세서에 기재된 합성 방법 및 반응식을 사용하거나, 또는 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 다른 시약 및 종래의 방법을 사용하여 상업적으로 이용가능한 시약로부터 제조될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 화합물은 일반적인 반응식 I 및 II에 따라 제조될 수 있다.
일반적인 반응식
반응식 I
L 및 Y는 결합이고, R2는 수소이고 그리고 R4는 아릴 또는 헤테로아릴인 식 I의 화합물은 반응식 I에 따라 제조될 수 있다. 단계 A에서, 적절하게 작용화된 디하이드로피리도피리미딘 (1)은 하나의 친핵성 아민 종을 함유하는 복소환에 커플링되고, 다른 하나는 보호기에 결합되어 화합물 (2)을 제공한다. 이러한 커플링은 용매 예컨대 디클로로메탄에서 염기 예컨대 트리에틸아민 또는 휘니그 염기의 존재에서 진행된다. 단계 B에서, 화합물 (2)의 Boc 기는 당업계에서 알려진 조건을 사용하여, 예를 들어 용매 예컨대 디클로로메탄에서 트리플루오로아세트산으로 제거되어, 화합물 (3)을 제공한다. 단계 C에서, 치환체 R4는 염기 예컨대 나트륨 tert-부톡시드와 함께 팔라듐 촉매 예컨대 Pd2DBA3/Xantphos의 존재에서 용매 예컨대 톨루엔에서 적합한 작용화된 아릴 또는 헤테로아릴 시스템, 예를 들어 아릴 트리플레이트를 사용하는 팔라듐 커플링으로 도입되어, 화합물 (4)를 제공한다. 단계 D에서, 고리 X 화합물 (4)의 보호기는, 예를 들어 H2의 존재에서 극성 용매 예컨대 EtOH/THF에서 Pd/C에 의한 수소화분해로 제거되어 화합물 (5)을 제공한다. 최종 단계, E에서, R1은 예를 들어 식 또는 를 가지고 있는 산 무수물 또는 식 를 가지고 있는 무수물 (식 중, RA, RB 및 p는 식 I에 대해 정의된 바와 같음)로 처리함으로써 식 I의 화합물을 제공하기 위해 도입된다. 예를 들어, R1이 아크릴로일 기인 경우에, 이러한 반응은, 예를 들어, 용매 예컨대 메틸렌 클로라이드에서 아크릴로일 클로라이드 또는 아크릴로일 무수물 및 염기 예컨대 휘니그 염기의 존재에서 진행된다. 일부 경우에, 종 R4는 또한 후속적인 단계에서 합성 순서로 제거될 수 있는 보호기를 함유할 것이다.
반응식 I에 대해 상기에 나타나 있고 기재된 화합물 (1), (2), (3), (4) 및 (5)는 식 I의 화합물을 제조하기 위한 중간체로서 유용하고 발명의 추가 양태로서 제공된다.
반응식 II
L은 결합이고, -Y-R2는 수소 이외의 것이고 그리고 R4는 아릴 또는 헤테로아릴인 식 I의 화합물은 반응식 II에 따라 제조될 수 있다. 단계 A에서, 적절하게 작용화된 디하이드로피리도피리미딘 (6)은 하나의 친핵성 아민 종을 함유하는 복소환에 커플링되고, 다른 하나는 보호기에 결합되어 화합물 (7)을 제공한다. 이러한 커플링은 예컨대 디클로로메탄에서 염기 예컨대 트리에틸아민 또는 휘니그 염기의 존재에서 진행된다. 단계 B에서, 치환체 -Y-R2는 극성 용매 예컨대 디옥산에서 친핵체, 예를 들어 (S)-1-(디메틸아미노-프로판-2-올에 의한 염소의 치환에 의해 도입되어 화합물 (8)을 제공한다. 단계 C에서, Boc 기는 당업계에서 알려진 조건을 사용하여, 예를 들어 용매 예컨대 디클로로메탄에서 트리플루오로아세트산으로 제거되어 화합물 (9)을 제공한다. 단계 D에서, 치환체 R4는 염기 예컨대 나트륨 tert-부톡시드와 함께 팔라듐 촉매 예컨대 Pd2DBA3/BINAP의 존재에서 용매 예컨대 톨루엔에서 적합한 작용화된 아릴 또는 헤테로아릴 시스템, 예를 들어 아릴 트리플레이트를 사용하는 팔라듐 커플링으로 도입되어, 화합물 (10)을 제공한다. 단계 E에서, 고리 X의 보호기는, 예를 들어 H2의 존재에서 극성 용매 예컨대 EtOH/THF에서 Pd/C에 의한 수소화분해로 제거되어 화합물 (11)을 제공한다. 단계 F에서, R1은, 예를 들어 식 또는 를 갖는 산 염화물 또는 식 를 갖는 무수물 (식 중, RA, RB 및 p는 식 I에 대해 정의된 바와 같음)으로 처리하여 식 I의 화합물을 제공하기 위해 도입된다. 예를 들어, R1이 아크릴로일 기인 경우에, 이러한 반응은, 예를 들어, 용매 예컨대 메틸렌 클로라이드에서 아크릴로일 클로라이드 아크릴로일 무수물 및 염기 예컨대 휘니그 염기의 존재에서 진행된다. 일부 경우에, 종 R4 및 R2는 또한, 후속적인 단계에서 합성 순서로 제거될 수 있는 보호기를 함유할 수 있다.
반응식 2에 대해 상기에 나타나 있고 기재된 화합물 (6), (7), (8), (9), (10) 및 (11)은 식 I, 식 I-A 또는 식 I-B의 화합물을 제조하기 위한 중간체로서 유용하고 본 발명의 추가 양태로서 제공된다.
따라서, 또한, 하기를 포함하는, 식 I의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:
(a) Y는 결합 및 R2는 수소인 식 I의 화합물을 위해, 식 5의 화합물
(식 중, X, R3 및 R4는 식 I에 대해 정의된 바와 같음)을, 식 또는 를 갖는 산 염화물 또는 식 를 갖는 무수물 (RA, RB 및 p는 식 I에 대해 정의된 바와 같음); 또는
(b) L은 결합이고 -Y-R2는 수소 이외의 것인 식 I의 화합물을 위해, 식 (11)의 화합물
(식 중, L은 결합이고, -Y-R2는 수소 외의 것이고, 그리고 X, R3 및 R4는 식 I에 대해 정의된 바와 같음)을, 식 또는 를 갖는 산 염화물 또는 식 를 갖는 무수물 (식 중, RA, RB 및 p는 식 I에 대해 정의된 바와 같음)과, 염기의 존재에서 반응시키는 단계; 및
선택적으로 그의 염을 형성하는 단계.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 가질 수 있고 공간에서 원자의 배열이 상이한 동일한 구성의 이성질체인 입체이성질체 혼합물로서 합성될 수 있다. 화합물은 혼합물로서 사용될 수 있거나 또는 개별 구성요소/이성질체는 상업적으로 이용가능한 시약 및 당해 분야의 숙련가에서 잘 알려진 입체이성질체 및 거울상이성질체의 종래의 단리 방법을 사용하여, 예를 들어, 제조자의 지침에 따라 CHIRALPAK® (Sigma-Aldrich) 또는 CHIRALCEL® (Diacel Corp) 키랄 크로마토그래피 HPLC 칼럼을 사용하여 분리될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물은 개별의 이성질체 또는 거울상이성질체를 제조하기 위해 광학적으로 순수한, 키랄 시약 및 중간체를 사용하여 합성될 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 모든 키랄 (거울상이성질체 및 부분입체이성질체) 및 라세미 형태는 본 발명의 범위 내에 있다. 달리 나타내지 않는 한, 청구범위를 포함하는 명세서가 본 발명의 화합물을 지칭할 때는, 용어 "화합물"은 모든 키랄 (거울상이성질체 및 부분입체이성질체) 및 라세미 형태를 포괄하는 것으로 이해되어야 한다.
하기 실시예는 본 발명의 특정 구현예들을 추가로 설명하기 위함이고 본 발명의 범위를 한정하고자 함은 아니다.
중간체 1
3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트
3-하이드록시나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (13.101 g, 44.831 mmol)을 디클로로메탄 (100 mL)에 용해시키고 0℃에서 교반했다. 이 용액에 클로로(메톡시)메탄 (3.7456 ml, 49.315 mmol) 및 휘니그 염기 (11.745 mL, 67.247 mmol)을 첨가했다. 반응을 0℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응을 1M HCl으로 분할시키고 포화 중탄산나트륨으로 세정했다. 조합된 유기층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 농축된 물질을 디클로로메탄을 갖는 120 g RediSep® gold 실리카겔 칼럼 상에 장입하고 정상 크로마토그래피 (CombiFlash®, 용출액으로서 0%-20% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (11.785 g, 35.045 mmol, 78.171 % 수율)을 수득했다.
중간체 2
2-브로모-7-(메톡시메톡시)나프탈렌
디메틸 아세트아미드 (40 mL) 중 7-브로모나프탈렌-2-올 (2.0 g, 9.0 mmol)의 용액에 클로로(메톡시)메탄 (1.4 g, 18 mmol) 및 탄산세슘 (5.8 g, 18 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반했다. 반응을 물로 희석하고 수성층을 에틸 아세테이트로 세정했다. 조합된 유기층을 물 및 염수로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 조 물질을 5-50% 에틸 아세테이트/헥산을 용출액으로 사용하는 정상 크로마토그래피로 정제하여 2-브로모-7-(메톡시메톡시)나프탈렌 (1.0 g, 3.7 mmol, 42 % 수율)을 수득했다.
중간체 3
2-브로모-1-플루오로-3-(메톡시메틸)벤젠
22 mL 테트라하이드로푸란 중 2-브로모-3-플루오로페놀 (1422 mg, 7.445 mmol)의 교반 용액에 실온에서 질소 하에서 NaH (327.6 mg, 8.190 mmol)을 고체로서 순수하게 나누어서 첨가했다. 15분 후, 용액이 형성되었다. 클로로(메톡시)메탄 (678.6 μL, 8.934 mmol)을 주사기로 첨가했다. 2시간 동안 교반한 후, 반응을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (30 mL)와 물 (30 mL) 사이에서 분할시켰다. 조합된 유기층을 단리하고, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물을 헥산으로 사전-습윤된 40 그램 RediSep® 칼럼 상에서 최소의 디클로로메탄에 장입하고 에틸 아세테이트/헥산 구배 (0% 내지 20% 에틸 아세테이트)로 용출시켰다. 상기 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축시켜 생성물을 맑은 오일로서 얻었다 (1.45g, 83%).
중간체 4
2-브로모-1-플루오로-4-(메톡시메톡시)벤젠
5.1 mL 테트라하이드로푸란 중 3-브로모-4-플루오로페놀 (327 mg, 1.71 mmol)의 교반 용액에 실온에서 질소 하에서 NaH (75.3 mg, 1.88 mmol)을 고체로서 순수하게 나누어서 첨가했다. 15분 후, 용액이 형성되었다. 클로로(메톡시)메탄 (156 μL, 2.05 mmol)을 주사기로 첨가했다. 2시간 동안 교반한 후, 반응을 포화 염화암모늄 용액으로 켄칭하고 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분할시켰다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물을 헥산으로 사전-습윤된 24 그램 RediSep® 칼럼 상에서 최소의 디클로로메탄에 장입하고 에틸 아세테이트/헥산 구배 (0% 내지 20% 에틸 아세테이트)로 용출시켰다. 상기 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축시켜 생성물을 맑은 오일로서 제공했다 (120 mg, 29.8%)
중간체 5
4-브로모-5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸
0℃로 냉각된 디메틸 아세트아미드 (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸 (0.7 g, 3.3 mmol)의 용액에 NaH (0.19 g, 4.6 mmol)을 나누어서 첨가하고 반응 혼합물을 질소로 퍼지했다. 반응을 20분 동안 교반하고, 그 다음 (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (0.83 g, 5.0 mmol)을 첨가하고 반응을 실온으로 가온시키면서 2시간 동안 교반했다. 반응을 물에 부어서 켄칭하고 수성층을 에틸 아세테이트에 추출했다. 조합된 유기층을 물 및 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 조 물질을 10-50% 에틸 아세테이트/헥산을 용출액으로 사용하는 크로마토그래피로 정제하여 4-브로모-5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸 (0.87 g, 79%)을 수득했다.
중간체 6
(R)-1-(피롤리딘-1-일)프로판-2-올
밀봉 튜브에서, R-(+)-프로필렌 옥사이드 (3.69 mL, 52.7 mmol)을 -78℃로 냉각시키고 그 다음 몇 분 동안 무수 디메틸 아민으로 살포했다. 반응 혼합물을 16시간 동안 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공에서 20분 동안 농축시켜 (R)-1-(피롤리딘-1-일)프로판-2-올 (5.35 g, 41.4 mmol, 98.2% 수율)을 제공했다.
중간체 7
(R)-1-모폴리노프로판-2-올
밀봉 튜브에서, R-(+)-프로필렌 옥사이드 (2.111 mL, 30.13 mmol) 및 모폴린 (1.490 mL, 17.22 mmol)을 20시간 동안 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공에서 농축시켜 (R)-1-모폴리노프로판-2-올 (2.47 g, 17.01 mmol, 98.80 % 수율)을 제공했다.
중간체 8
(R)-1-(디메틸아미노)부탄-2-올
밀봉 튜브에서, R-(+)-프로필렌 옥사이드 (4.00 g, 55.5 mmol) 및 디메틸아민 (1.00 g, 22.2 mmol)을, 18시간 동안 65℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 (R)-1-(디메틸아미노)부탄-2-올 (1.38 g, 11.8 mmol, 53.1 % 수율)을 제공했다.
중간체 9
(R)-1-((R)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-올
밀봉 튜브에서, (R)-3-메톡시파이롤리딘 하이드로클로라이드 (1.00 g, 7.27 mmol), TEA (2.03 mL, 14.5 mmol) 및 R-(+)-프로필렌 옥사이드 (1.27 mL, 18.2 mmol)을 18시간 동안 65℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 (R)-1-((R)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-올 (775 mg, 4.87 mmol, 67.0 % 수율)을 제공했다.
중간체 10
(R)-1-((S)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-올
밀봉 튜브에서, (S)-3-메톡시파이롤리딘 하이드로클로라이드 (1.00 g, 7.27 mmol), TEA (2.03 mL, 14.5 mmol) 및 R-(+)-프로필렌 옥사이드 (1.27 mL, 18.2 mmol)을 18시간 동안 65℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 (R)-1-((S)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-올 (781 mg, 4.90 mmol, 67.5 % 수율)을 제공했다.
중간체 11
(R)-1-((S)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-일)프로판-2-올
밀봉 튜브에서, R-(+)-프로필렌 옥사이드 (0.609 mL, 8.69 mmol) 및 (S)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘 (1.00 g, 4.97 mmol)을 20시간 동안 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공에서 농축시켜 (R)-1-((S)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-일)프로판-2-올 (1.29 g, 4.20 mmol, 84.6 % 수율)을 제공했다.
중간체 12
tert-부틸 2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트
에탄올 (9 mL) 중 리튬 클로라이드 (246 mg, 5.81 mmol) 및 리튬 보로하이드라이드 (126 mg, 5.81 mmol)의 현탁액에, 0℃에서 질소 하에서, 건조 THF (6 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸 4-메틸피페라진-1,2-디카복실레이트 (750 mg, 2.90 mmol)의 용액을 적가했다. 반응을 밤새 교반하여 백색 침전물이 형성되었다. 침전물을 여과하고 에탄올로 세정했다. 조합된 여과물 및 유기 추출물을 농축시켜 백색 잔류물을 제공하고, 이것을 에틸 아세테이트로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염화나트륨 용액으로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 0.2% NH4OH를 갖는 등용매 DCM 중 10% MeOH를 갖는 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트 (104 mg, 0.452 mmol, 15.6 % 수율)을 제공했다.
중간체 13
(S)-2-(2-메틸피페리딘-1-일)에탄-1-올
4-mL 바이알 중 (S)-2-메틸피페리딘 (100 mg, 1.01 mmol), 2-브로모에탄올 (78 μL, 139 mg, 1.11 mmol, 1.1 eq.), 요오드화나트륨 (151 mg, 1 eq.), 탄산칼륨 (418 mg, 3 eq.) 및 아세토니트릴 (1 mL)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 밀봉하고 실온에서 2일 동안 교반했다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르 (15 mL)와 물 (2 mL) 사이에서 분할시켰다. 에테르 층을 염수 (2 mL)로 세정하고, TFA로 산성화하고 2일 동안 고진공 하에서 건조시켰다. 잔류물을 에테르 (3 mL)로 세정하고, 물 (0.5 mL)로 희석하고 10M NaOH (0.2 mL)로 염기성화했다. 층을 분리하고 상부층을 주의하여 NaOH 상에서 건조시켰다. 에테르 용액을 질소 하에서 증발시켜 조물질 (S)-2-(2-메틸피페리딘-1-일)에탄-1-올 (100 mg, 0.698 mmol, 69.24% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
중간체 14
(R)-2-(2-메틸피페리딘-1-일)에탄-1-올
(S)-2-메틸피페리딘 대신에 (R)-2-메틸피페리딘 (99 mg, 1 mmol)을 사용하여 중간체 13의 방법에 따라 합성했다.
중간체 15
(S)-2-(3-메톡시피페리딘-1-일)에탄-1-올
(S)-2-메틸피페리딘 대신에 (S)-3-메톡시피페리딘 (173 mg, 1.50 mmol)을 사용하여 중간체 13의 방법에 따라 합성했다.
중간체 16
(R)-2-(3-메톡시피페리딘-1-일)에탄-1-올
(S)-2-메틸피페리딘 대신에 R-3-메톡시피페리딘 (173 mg, 1.50 mmol)을 사용하여 중간체 13의 방법에 따라 합성했다.
중간체 17
3-(1,4-옥사제판-4-일)프로판-1-올
바이알에 호모모폴린 (0.250 g, 2.472 mmol), 아세토니트릴 (4.943 mL, 2.472 mmol) 및 3-브로모-1-프로판올 (0.2459 mL, 2.719 mmol)을 첨가했다. 탄산칼륨 (0.6832 g, 4.943 mmol)을 첨가하고 혼합물을 50℃로 가온시키고 6시간 동안 교반했다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, DCM으로 희석하고, 여과하고 수집된 고체를 DCM으로 세정했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 원유를 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 12g Isco RediSep Gold, 0.2% NH4OH를 갖는 10-20% MeOH/DCM)를 통해 정제하여 3-(1,4-옥사제판-4-일)프로판-1-올 (0.272 g, 1.708 mmol)을 무색 오일로서 수득했다.
중간체 18
3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올
호모모폴린 대신에 (1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 (0.250 g, 2.522 mmol)을 사용하여 중간체 17의 방법에 따라 합성했다.
중간체 19
2-(4-메톡시피페리딘-1-일)에탄-1-올
(S)-2-메틸피페리딘 대신에 4-메톡시피페리딘 (173 mg, 1.50 mmol)을 사용하여 중간체 13의 방법에 따라 합성했다.
중간체 20
2-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)에탄-1-올
(S)-2-메틸피페리딘 대신에 4,4-디플루오로피페리딘 하이드로클로라이드 (173 mg, 1.50 mmol)을 사용하여 중간체 13의 방법에 따라 합성했다.
중간체 21
(S)-2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에탄-1-올
(S)-2-메틸피페리딘 대신에 S-3-플루오로피페리딘 하이드로클로라이드 (209 mg, 1.50 mmol)을 사용하여 중간체 13의 방법에 따라 합성했다.
중간체 22
벤질 4-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(메틸설피닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 4- 하이드록시 -2-( 메틸티오 )-5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-카복실레이트: MeOH (1.00 L) 중 1-tert-부틸 4-에틸 3-옥소피페리딘-1,4-디카복실레이트 (50.0 g, 184 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 25℃에서 질소 하에서 NaOMe (49.8 g, 921 mmol, 5.00 eq)을 첨가하고, 이어서 2-메틸이소티오우레아 (62.4 g, 331 mmol, 1.80 eq, H2SO4)을 고체로서 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (2 M)로 pH 5로 조정하고, 혼합물을 감압 하에서 농축하여 MeOH를 제거했다. 잔류물을 300 mL의 에틸 아세테이트 및 300 mL의 물에 현탁시키고 빠르게 교반했다. 현탁액을 여과하고 백색 고체를 수집했다. 여과물을 분리하고 유기층을 물 (1 × 300 mL) 및 염수 (1×200 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 단리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (51.0 g, 138 mmol, 75.4 % 수율, 81.0 % 순도)을 백색 고체로서 제공하고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 298.2 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 2- 메틸설파닐 -4-( 트리플루오로메틸설포닐옥시 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: DCM (500 mL) 중 tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (51.0 g, 171 mmol, 1.00 eq)의 교반 현탁액에 0℃에서 DIEA (44.3 g, 343 mmol, 59.9 mL, 2.00 eq), 이어서 트리플루오로메탄설폰산 무수물 (72.6 g, 257 mmol, 42.4 mL, 1.50 eq)을 질소 하에서 첨가했다. 즉시 갈색 용액이 형성되었다. 25℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응을 농축시켜 갈색 오일을 수득했다. 갈색 오일을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:0 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (46.0 g, 107 mmol, 62.4 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 430.2 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: DMF (500 mL) 중 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (46.0 g, 107 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 DIEA (27.7 g, 214 mmol, 37.4 mL, 2.00 eq) 이어서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (25.9 g, 117 mmol, 22.7 mL, 1.10 eq)을 첨가했다. 반응을 1시간 동안 질소 분위기 하에서 100℃로 가열했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)에 부었고, H2O (300 mL × 3) 및 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:0 내지 5:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (51.0 g, 96.9 mmol, 90.5 % 수율, 92.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 500.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일) 피페라진-1- 카복실레이트 : DCM (50.0 mL) 중 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2- 메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (25.0 g, 50.0 mmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (85.6 g, 750 mmol, 55.6 mL, 15.0 eq)을 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 300 mL의 에틸 아세테이트 및 300 mL의 물에 용해시키고 빠르게 교반했다. 혼합물을 Na2CO3로 pH 8로 조정했다. 유기층을 물 (1 × 300 mL) 및 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 벤질 4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카복실레이트 (19.0 g, 46.6 mmol, 93.2 % 수율, 98.0 % 순도)을 황색 오일로서 제공했다. ESI MS m/z 400.2 [M+H]+.
단계 E : 벤질 4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (300 mL) 중 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (16.3 g, 52.1 mmol, 1.30 eq), 벤질 4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16.0 g, 40.1 mmol, 1.00 eq), Cs2CO3 (32.6 g, 100 mmol, 2.50 eq), Pd2(dba)3 (5.50 g, 6.01 mmol, 0.15 eq) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (3.74 g, 8.01 mmol, 0.20 eq)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지했다. 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 10/1 내지 5/1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (16.0 g, 22.8 mmol, 56.9 % 수율, 90.0 % 순도)을 황색 고체로서 제공했다. ESI MS m/z 632.5 [M+H]+.
단계 F: 벤질 4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설피닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1- 카복실레이트 : DCM (200 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (8.00 g, 12.7 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 m-CPBA (2.73 g, 12.7 mmol, 80.0 % 순도, 1.00 eq)을 0℃에서 질소 하에서 첨가했다. 0℃에서 질소 분위기 하에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 Na2S2O3 (10.0 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 물 (100 mL)로 희석하고 DCM (200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 1/0 내지 10/1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (3.50 g, 4.92 mmol, 38.8 % 수율, 91.0 % 순도)을 황색 고체로서 제공했다. ESI MS m/z 648.5 [M+H]+.
중간체 23
(R)-1-(4-(2-하이드록시프로필)피페라진-1-일)에탄-1-온
단계 A: 1-[4-[(2 R )-2- 하이드록시프로필 ]피페라진-1-일] 에탄온 : (2R)-2-메틸옥시란 (1.00 g, 17.2 mmol, 1.20 mL, 1.00 eq) 및 1-피페라진-1-일에탄온 (8.00 g, 62.4 mmol, 3.62 eq)을 마이크로웨이브 튜브에 넣었다. 밀봉하고 튜브를 150℃에서 1시간 동안 마이크로웨이브 하에서 가열했다. 혼합물을 DCM (80.0 mL)에 용해시키고, (Boc)2O (3.62 eq,13.6 g)을 첨가하고 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 100/1 내지 10/1)로 정제하여 1-[4-[(2R)-2-하이드록시프로필]피페라진-1-일]에탄온 (3.80 g, 13.5 mmol, 78.2 % 수율, 66.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
중간체 24
1-(벤질옥시)-3-브로모-5-사이클로프로필벤젠
단계 A: 1- 벤질옥시 -3,5- 디브로모 -벤젠: MeCN (30.0 mL) 중 3,5-디브로모페놀 (1.50 g, 5.95 mmol, 1.00 eq) 및 K2CO3 (2.47 g, 17.9 mmol, 3.00 eq)의 혼합물에 벤질 브로마이드 (1.07 g, 6.25 mmol, 742 μL, 1.05 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1로 정제하여 1-벤질옥시-3,5-디브로모벤젠 (1.60 g, 4.68 mmol, 78.6 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
단계 B: 1- 벤질옥시 -3- 브로모 -5- 사이클로프로필벤젠 : H2O (4.00 mL) 및 디옥산 (20.0 mL) 중 1-벤질옥시-3,5-디브로모벤젠 (1.20 g, 3.51 mmol, 1.00 eq) 및 사이클로프로필붕산 (392 mg, 4.56 mmol, 1.30 eq)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2 (513 mg, 702 μmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (2.29 g, 7.02 mmol, 2.00 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 첨가하고 에틸 아세테이트 (2 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1로 정제하여 1-벤질옥시-3-브로모-5-사이클로프로필 -벤젠 (270 mg, 890 μmol, 25.4 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
중간체 25
벤질 4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2-(3- 모폴리노프로폭시 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: THF (100 mL) 중 3-모폴리노프로판-1-올 (5.46 g, 37.6 mmol, 2.00 eq)의 혼합물에 NaH (2.26 g, 56.4 mmol, 60.0 % 순도, 3.00 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, THF (100 mL) 중 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설포닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (10.0 g, 18.8 mmol, 1.00 eq)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1.5 시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 NH4Cl 수성물 (300 mL)에 부었고, DCM (2 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50:1 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (7.70 g, 12.8 mmol, 67.8 % 수율, 98.8 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 597.4 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-[2-(3- 모폴리노프로폭시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DCM (80.0 mL) 중 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (7.70 g, 12.9 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 TFA (119 g, 1.04 mol, 76.9 mL, 80.6 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축하고, 그 다음 DCM (100 mL)로 희석하고 수성 NaOH로 pH 8로 조정했다. 유기층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 벤질 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (6.00 g, 11.2 mmol, 86.9 % 수율, 92.8 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 497.4 [M+H]+.
중간체 26
4-(벤질옥시)-2-브로모-1-플루오로벤젠
ACN (80.0 mL) 중 3-브로모-4-플루오로페놀 (4.00 g, 20.9 mmol, 1.00 eq) 및 K2CO3 (8.68 g, 62.8 mmol, 3.00 eq)의 용액에 벤질 브로마이드 (3.65 g, 21.4 mmol, 2.54 mL, 1.02 eq)을 첨가하고 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 진공에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트; 1:0 내지 10:1의 구배)로 정제하여 4-벤질옥시-2-브로모-1-플루오로-벤젠 (5.02 g, 17.0 mmol, 81.0 % 수율, 95 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
중간체 27
2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에탄-1-올
단계 A: tert -부틸 3- 플루오로파이롤리딘 -1- 카복실레이트: DCM (150.00 mL) 중 tert-부틸 3-하이드록시파이롤리딘-1-카복실레이트 (10.0 g, 53.4 mmol, 1.00 eq)의 용액에 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드 (DAST) (12.9 g, 80.1 mmol, 10.6 mL, 1.50 eq)을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. -40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 20℃로 가온시키고 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 5% 수성 중탄산나트륨 (200 mL)에 부었고 디클로로메탄 (2 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100:1 내지 5:1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 3-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트 (4.30 g, 22.7 mmol, 42.6 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 5.27 (t, J = 3.6 Hz, 0.5H), 5.13 (t, J = 3.6 Hz, 0.5H), 3.77 - 3.38 (m, 4H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 2.08 - 1.85 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
단계 B: 3- 플루오로파이롤리딘: DCM (50.00 mL) 중 tert-부틸 3-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트 (4.30 g, 22.7 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 35.0 mL, 6.16 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 디이소프로필 에테르 (20 mL)로 분쇄하고 침전물을 여과하고 진공 하에서 건조시켜 3-플루오로파이롤리딘 (2.70 g, 21.5 mmol, 94.6 % 수율, HCl)을 백색 고체로서 제공했다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 5.51 (t, J = 3.6 Hz, 0.5H), 5.38 (t, J=3.6 Hz, 1H), 3.66 - 3.27 (m, 5H), 2.45 - 2.12 (m, 2H).
단계 C: 메틸 2-(3- 플루오로피롤리딘 -1-일)아세테이트: DCM (27.00 mL) 중 3-플루오로파이롤리딘 (2.70 g, 21.5 mmol, 1.00 eq, HCl)의 현탁액을 0 ℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민 (5.44 g, 53.8 mmol, 7.45 mL, 2.50 eq) 및 메틸 2-브로모아세테이트 (3.62 g, 23.7 mmol, 2.23 mL, 1.10 eq)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 CH2Cl2 　(100 mL) 및 물 (50 mL)로 희석했다. 유기층을 5% 수성 시트르산 용액 (1 × 50 mL)로 세정했다. 수층을 포화 수성 탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 염기성화하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 메틸 2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)아세테이트 (2.20 g, 13.7 mmol, 63.5 % 수율)을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 5.22 - 5.02 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.35 (s, 2H), 3.07 - 2.93 (m, 1H), 2.91 - 2.77 (m, 2H), 2.67 (dt, J = 5.2, 8.4 Hz, 1H), 2.21 - 1.93 (m, 2H).
단계 D: 2-(3- 플루오로피롤리딘 -1-일)에탄올: THF (20 mL) 중 LiAlH4 (706 mg, 18.6 mmol, 1.50 eq)의 용액에 THF (10 mL) 중 메틸 2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)아세테이트 (2.00 g, 12.4 mmol, 1.00 eq)의 용액을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃까지 가온시키고 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 수성 황산나트륨 용액 (1 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 생성물을 DMC 중 5% MeOH를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에탄올 (1.20 g, 9.01 mmol, 72.6 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 5.28 - 5.05 (m, 1H), 3.68 - 3.61 (m, 2H), 2.99 - 2.73 (m, 4H), 2.72 - 2.67 (m, 2H), 2.58 - 2.45 (m, 1H), 2.28 - 1.97 (m, 2H).
중간체 28
1-(tert-부틸) 3-메틸 피페라진-1,3-디카복실레이트
단계 A: 메틸 피페라진-2- 카복실레이트 : MeOH (50.0 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 피페라진-1,2-디카복실레이트 (5.0 g, 22.6 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4.0 M, 134 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고, 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켜 메틸 피페라진-2-카복실레이트 (4.89 g, 2HCl, 조물질)을 백색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 B: 1-( tert -부틸) 3- 메틸 피페라진-1,3- 디카복실레이트 : MeOH (50.0 mL) 중 메틸 피페라진-2-카복실레이트 (4.30 g, 조물질) 및 TEA (8.02 g, 79.2 mmol, 11.0 mL)의 용액에 디-tert-부틸 디카보네이트 (4.32 g, 19.8 mmol, 4.55 mL)를 첨가했다. 25℃에서 12 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM / MeOH = 1:0 내지 20:1)로 정제하여 1-(tert-부틸) 3-메틸 피페라진-1,3-디카복실레이트 (4.80 g, 19.7 mmol, 2개의 단계, 99.0 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 4.10 - 3.85 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.71 - 3.65 (m, 1H), 3.47 - 3.38 (m, 1H), 3.10 - 2.98 (m, 2H), 2.78 - 2.66 (m, 1H), 2.17 (s, 1H), 1.46 (s, 9H).
중간체 29
4-브로모나프탈렌-2-올
단계 A: 2,4- 디브로모나프탈렌 -1- 아민 : AcOH (750 mL) 중 Br2 (246 g, 1.54 mol, 79.3 mL, 2.18 eq)의 용액에 AcOH (500 mL) 중 나프탈렌-1-아민 (101 g, 705 mmol, 99.0 mL, 1.00 eq)의 용액을 주위 온도에서 첨가하고, 반응을 70℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과했다. 필터 케이크를 AcOH (300 mL)로 세정하고, 그 다음 NaOH (1.2 L)의 20 % 수성물에 첨가했다. 혼합물을 20분 동안 교반하고 여과했다. 단리된 고체를 물 (1 L)로 세정하고 진공 하에서 건조시켜 2,4-디브로모나프탈렌-1-아민 (200 g, 664 mmol, 94.2% 수율)을 회색 고체로서 제공했다. ESI MS m/z 301. 9 [M+H]+.
단계 B: 4- 브로모 -1- 디아조니오 -나프탈렌-2- 올레이트 : AcOH (900 mL) 및 프로피온산 (150 mL) 중 2,4-디브로모나프탈렌-1-아민 (60.0 g, 199 mmol, 1.00 eq)의 용액에 NaNO2 (16.5 g, 239 mmol, 13.0 mL, 1.20 eq)을 5-8 ℃에서 30분에 걸쳐 나누어서 첨가하고, 그 다음 반응 혼합물을 5-8 ℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 빙수 (4000 mL)에 부었고, 수득한 고체를 수집하고 물 (2 × 50 mL)로 세정하여 4-브로모-1-디아조니오-나프탈렌-2-올레이트 (150 g, 습식 조물질)을 회색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 - 8.10 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.58 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.37 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.29 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H).
단계 C: 4- 브로모나프탈렌 -2-올: EtOH (2.00 L) 중 4-브로모-1-디아조니오-나프탈렌-2-올레이트 (100 g, 402 mmol, 1.00 eq)의 용액에 NaBH4 (30.4 g, 803 mmol, 2.00 eq)을 13-15℃에서 1 시간에 걸쳐 나누어서 첨가하고, 반응 혼합물을 15-18 ℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (1000 mL)에 용해시키고 물 (500 mL × 2)로 세정했다. 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르/에틸 아세테이트 (60:1 내지 10:1)로 용출하는 실리카겔 칼럼 크로마토그래프로 정제했다. 단리된 생성물을 역상 HPLC로 추가로 정제하여 4-브로모나프탈렌-2-올 (40.0 g, 139 mmol, 17.3 % 수율, 77.4% 순도)을 회색 고체로서 제공했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 - 8.05 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.58 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 3H), 7.07 (s, 1H).
단계 D: 3- 벤질옥시 -1- 브로모 -나프탈렌: MeCN (500 mL) 중 4-브로모나프탈렌-2-올 (30.0 g, 134 mmol, 1.00 eq), 벤질 브로마이드 (25.3 g, 148 mmol, 17.6 mL, 1.10 eq) 및 K2CO3 (55.7 g, 403 mmol, 3.00 eq)의 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르/에틸 아세테이트 (100:1 내지 60:1)로 용출하는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (40.0 g, 128 mmol, 95 % 수율)을 황색 오일로서 제공했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.19 - 8.17 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.32 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.63 (d, J=2.4 Hz,1H), 7.52 - 7.37 (m, 7H), 7.23 - 7.21 (d, J=2.0 Hz,1H), 5.2 (s, 2H).
중간체 30
3-메톡시나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트
단계 A: 3- 메톡시나프탈렌 -1-올 : MeOH (60.0 mL) 중 나프탈렌-1,3-디올 (3.00 g, 18.7 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 60.0 mL, 12.8 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 60시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트=10:1 내지 5:1)로 정제하여 3-메톡시나프탈렌-1-올 (2.10 g, 12.1 mmol, 64.4% 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3-d6) δ = 8.10 - 8.08 (d, J=8.4 Hz, 1H).7.73 - 7.71 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.45(m, 1H), 7.38 - 7.35(m, 1H), 6.80 - 6.79 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.56 - 6.55 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H).
단계 B: (3- 메톡시 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트: DCM (40.0 mL) 중 3-메톡시나프탈렌-1-올 (2.10 g, 12.0 mmol, 1.00 eq)의 용액에 DIEA (7.79 g, 60.3 mmol, 10.5 mL, 5.00 eq) 및 트리플루오로메탄설폰산 무수물 (5.10 g, 18.1 mmol, 2.98 mL, 1.50 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 DCM (30 mL) 및 물 (10 mL)로 희석하고 DCM (20 mL)으로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트=20:1 내지 10:1)로 정제하여 (3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (3.00 g, 8.52 mmol, 70.7 % 수율, 87.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 307.1 [M+H]+.
중간체 31
7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘
단계 A: 7- 벤질 -6,8- 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -2,4- 디올: EtOH (600 mL)에 Na (5.56 g, 241 mmol, 5.73 mL, 2.40 eq)을 나누어서 첨가했다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 에틸 1-벤질-3-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (30.0 g, 100 mmol, 1.00 eq, HCl) 및 우레아 (14.5 g, 242 mmol, 13.0 mL, 2.40 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 75℃에서 36시간 동안 교반하고, 그 다음 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 물 (50 mL)에 용해시키고 HCl (120 mL, 2M)로 산성화했다. 백색 고체는 용액으로부터 침전되고 여과로 수집했다. 필터 케이크를 진공 하에서 건조시켜 7-벤질-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (22.0 g, 83.8 mmol, 83.2 % 수율, 98 % 순도)을 백색 고체로서 제공했다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.97 (br s, 1H), 10.66 (br s, 1H), 7.55 - 6.95 (m, 5H), 3.81 - 3.50 (m, 2H), 3.26 - 2.91 (m, 2H), 2.77 - 2.58 (m, 2H), 2.34 - 2.09 (m, 2H).
단계 B: 7- 벤질 -2,4- 디클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 : POCl3 (330 g, 2.15 mol, 200 mL) 중 DIEA (30.1 g, 233 mmol, 40.7 mL, 3.00 eq)의 용액에 7-벤질-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (20.0 g, 77.7 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 110℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 DCM (400 mL)에 용해시키고 포화 NaHCO3 (200 mL)에 부었다. 혼합물을 DCM (2 × 400 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르: DCM=10:1 내지 0:1)로 정제하여 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (7.70 g, 26.2 mmol, 33.7 % 수율)을 갈색 오일로서 수득했다. 1HNMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.28 (m, 5H), 3.73 (s, 2H), 3.66 (br s, 2H), 2.84 (br s, 4H)
중간체 32
tert-부틸4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-(메틸설포닐)-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트
단계 A: tert - 부틸4 - 하이드록시 -2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: MeOH (1.00 mL) 중 1-tert-부틸 4-에틸-3-옥소피페리딘-1,4-디카복실레이트 (44.0 g, 162 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 25℃에서 질소 하에서 MeOH (600 mL) 중 NaOMe (35.0 g, 649 mmol, 4.00 eq)의 용액을 주사기로 첨가하고 이어서 2-메틸이소티오우레아 (61.1 g, 324 mmol, 2.00 eq, H2SO4)을 첨가했다. 25℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 MeOH를 제거했다. 잔류물을 500 mL의 에틸 아세테이트 및 500 mL의 물에 현탁시키고 빠르게 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (2 M)로 pH 5로 조정했다. 침전물을 여과하고 백색 고체를 에틸 아세테이트로 세정하고 진공 하에서 건조시켜 tert-부틸4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (33.0 g, 103 mmol, 63.8 % 수율, 93.2 % 순도)을 백색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 4.19 (s, 2 H), 3.49 (br s, 2 H), 2.46 (s, 3 H), 2.35 (br t, J = 5.2 Hz, 2 H), 1.42 (s, 9 H).
단계 B: tert -부틸 2- 메틸설파닐 -4-( 트리플루오로메틸설포닐옥시 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도 [3,4-d]피리미딘-7- 카복실레이트: DCM (200 mL) 중 tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (15.0 g, 50.4 mmol, 1.00 eq)의 교반 현탁액에 DIEA (26.1 g, 202 mmol, 35.2 mL, 4.00 eq)을 0℃에서 질소 하에서 첨가하고 이어서 트리플루오로메탄설폰산 무수물 (28.5 g, 101 mmol, 16.6 mL, 2.00 eq)을 주사기로 첨가했다. 즉시 갈색 용액이 형성되었다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 / 에틸 아세테이트 = 1:0 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (16.7 g, 35.7 mmol, 70.9 % 수율, 91.9 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 374.0 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: DMF (100 mL) 중 tert-부틸2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸 설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (16.7 g, 38.9 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 DIEA (10.0 g, 77.9 mmol, 2.00 eq) 및 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (9.41 g, 42.8 mmol, 1.10 eq)을 첨가했다. 반응을 100℃로 가열하고 1시간 동안 질소 분위기 하에서 첨가했다. 반응 혼합물을 물 (150 mL)로 희석하고 반응 혼합물을 HCl (2 M)로 pH 5로 조정하고 DCM (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 NaHCO3 (3 × 150 mL), 염수 (3 × 150 mL) 및 H2O (3 × 150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (18.1 g, 36.2 mmol, 93.0 % 수율, 94.1 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 500.1 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2- 메틸설포닐 -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: DCM (150 mL) 중 tert-부틸4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (14.4 g, 28.9 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 0℃에서 질소 하에서 메타-클로로퍼옥시벤조산 (17.4 g, 101 mmol, 3.50 eq)을 고체로서 첨가했다. 0℃에서 질소 분위기 하에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (300 mL)로 희석하고 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 pH 8로 조정하고 DCM (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1 내지 1:2)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설포닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (11.0 g, 19.7 mmol, 68.6 % 수율, 95.4 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 532.1 [M+H]+.
중간체 33
tert-부틸 (1-브로모이소퀴놀린-3-일)카바메이트
단계 A: 1-브로모이소퀴놀린-3-아민 (400 mg, 1.79 mmol, 1.00 eq) 및 tert-부톡시카보닐 tert-부틸 카보네이트 (3.91 g, 17.9 mmol, 4.12 mL, 10.0 eq)의 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디에틸 에테르/에틸 아세테이트 = 5:1)로 정제하여 tert-부틸 N-(1-브로모-3-이소퀴놀릴) 카바메이트 (400 mg, 1.24 mmol, 69.2 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 322.1, 324.1 [M+H]+.
중간체 34
3-메톡시-6-메틸나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트
단계 A: 3- 메톡시나프탈렌 -1-올: MeOH (800 mL) 중 나프탈렌-1,3-디올 (40.0 g, 250 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HCl (4 M, 750 mL, 12.0 eq, MeOH 중 4 M)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 18 ℃까지 가온시키고 30시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 1/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 3-메톡시나프탈렌-1-올 (17.7 g, 96.5 mmol, 38.6 % 수율, 95 % 순도)을 적색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (ddd, J = 1.2, 6.8, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J=1.2, 6.8, 8.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.76 (br s, 1H), 6.62 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H).
단계 B: tert -부틸-[(3- 메톡시 -1- 나프틸 ) 옥시 ]-디메틸- 실란 : THF (400 mL) 중 3-메톡시나프탈렌-1-올 (20.0 g, 115 mmol, 1.00 eq) 및 이미다졸 (23.5 g, 344 mmol, 3.00 eq)의 용액에 TBSCl (26.0 g, 172 mmol, 21.1 mL, 1.50 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃까지 가온시키고 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 석유 에테르 (600 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고, 그 다음 물 (1 × 200 mL) 및 염수 (1 × 200 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 10/1)로 정제했다. tert-부틸-[(3-메톡시-1-나프틸)옥시]-디메틸-실란 (28.0 g, 97.1 mmol, 84.6 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (dt, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.24 (dt, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 1.02 (s, 9H), 0.23 (s, 6H).
단계 C: tert -부틸-[[3- 메톡시 -6-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프틸]옥시]-디메틸-실란 및 tert -부틸((3-메톡시-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2- 디옥사보롤란 -2-일)나프탈렌-1-일) 옥시 ) 디메틸실란 : 헥산 (500 mL) 중 tert-부틸-[(3-메톡시-1-나프틸) 옥시]-디메틸-실란 (26.0 g, 90.1 mmol, 1.00 eq), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (45.8 g, 180 mmol, 2.00 eq), (1Z,5Z)-사이클로옥타-1,5-디엔;2,4-디메틸-BLAH바이사이클로[1.1.0]부탄 (2.39 g, 3.61 mmol, 0.04 eq) 및 4-tert-부틸-2-(4-tert-부틸-2-피리딜)피리딘 (1.45 g, 5.41 mmol, 0.06 eq)의 혼합물을 100℃에서 질소 분위기 하에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (500 mL) 및 에틸 아세테이트 (1000 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 500 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸-[[3-메톡시-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프틸]옥시]-디메틸-실란 및 tert-부틸((3-메톡시-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)나프탈렌-1-일)옥시)디메틸실란 (38.0 g, 85.3 mmol, 94.6 % 수율, 93 % 순도)의 혼합물을 밝은 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 415.5 [M+H]+
단계 D: 8-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시 -6- 메톡시 - 나프탈렌-2-올: 아세톤 (400 mL) 중 혼합물 (36.0 g, 86.9 mmol, 1.00 eq)의 tert-부틸-[[3-메톡시-6-(4,4,5,5- 테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-나프틸]옥시]-디메틸-실란 및 tert-부틸((3-메톡시-7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)나프탈렌-1-일)옥시)디메틸실라네인의 용액에 H2O (400 mL) 중 옥손 (58.7 g, 95.6 mmol, 1.10 eq)의 용액을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 5% 수성 티오황산나트륨 용액 (50 mL)으로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 × 300 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 물 (1 × 200 mL), 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 200/1 내지 20/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 8-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-6-메톡시- 나프탈렌-2-올 (9.00 g, 28.4 mmol, 32.7 % 수율, 96 % 순도)을 무색 오일로서 수득했고 5-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-7-메톡시-나프탈렌-2-올 (9.00 g, 29.0 mmol, 33.4 % 수율, 98 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 305.2 [M+H]+
단계 E: [5-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시 -7- 메톡시 -2- 나프틸 ] 트리플루오로메탄설포네이트 : DCM (150 mL) 중 5-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-7- 메톡시-나프탈렌-2-올 (11.0 g, 36.1 mmol, 1.00 eq) 및 DIEA (14.0 g, 108 mmol, 18.9 mL, 3.00 eq)의 용액에 Tf2O (12.2 g, 43.4 mmol, 7.15 mL, 1.20 eq)을 -40℃에서 적가했다. 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 디클로로메탄 (200 mL)로 희석하고 물 (1 × 200 mL) 및 염수 (1 × 200 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 [5-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-7-메톡시-2-나프틸] 트리플루오로메탄설포네이트 (13.0 g, 29.8 mmol, 82.4 % 수율, 100 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 436.9 [M+H]+
단계 F: tert -부틸-[(3- 메톡시 -6- 메틸 -1- 나프틸 ) 옥시 ]-디메틸- 실란 : 디옥산 (160 mL) 중 [5-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시-7-메톡시-2-나프틸]트리플루오로메탄설포네이트 (12.5 g, 28.6 mmol, 1.00 eq) 및 K2CO3 (11.9 g, 85.9 mmol, 3.00 eq)의 용액에 Pd(PPh3)4 (3.31 g, 2.86 mmol, 0.10 eq) 및 트리메틸보록신 (14.4 g, 57.3 mmol, 16.0 mL, 2.00 eq)을 질소 분위기 하에서 첨가했다. 반응을 16시간 동안 100℃로 가열했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 그 다음 물 (1 × 200 mL) 및 염수 (1 × 200 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 5/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸-[(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)옥시]-디메틸-실란 (8.00 g, 24.6 mmol, 85.9 % 수율, 93 % 순도)을 무색 오일로서 적색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 303.2 [M+H]+
단계 G: 3- 메톡시 -6- 메틸 -나프탈렌-1-올: THF (100 mL) 중 tert-부틸-[(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸) 옥시]-디메틸-실란 (8.00 g, 26.5 mmol, 1.00 eq)의 용액에 TBAF (10.4 g, 39.7 mmol, 1.50 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (200 mL)을 첨가했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 50/1 내지 5/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 3-메톡시-6-메틸-나프탈렌-1-올 (4.70 g, 25.0 mmol, 94.4 % 수율)을 적색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 188.4 [M+H]+
단계 H: 3- 메톡시 -6- 메틸 -1- 나프틸 트리플루오로메탄설포네이트 : DCM (3.00 mL) 중 3-메톡시-6-메틸-나프탈렌-1-올 (4.70 g, 25.0 mmol, 1.00 eq) 및 DIEA (9.68 g, 74.9 mmol, 13.1 mL, 3.00 eq)의 용액에 Tf2O (8.45 g, 30.0 mmol, 4.94 mL, 1.20 eq)을 -40℃에서 적가했다. 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 디클로로메탄 (200 mL)로 희석하고 물 (1 × 200 mL) 및 염수 (1 × 200 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 3-메톡시-6-메틸-1-나프틸 트리플루오로메탄설포네이트 (7.70 g, 24.0 mmol, 96.2 % 수율, 99.9 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 320.7 [M+H]+.
하기 중간체를, 2-브로모-3-플루오로페놀을 적절한 페놀로 대체하여 중간체 3에 대한 제조에 따라 제조했다.
중간체 44
2-브로모-3-플루오로-1-(메톡시메톡시)-4-메틸벤젠
단계 1: 3-플루오로-4-메틸페놀 (1.016 g, 8.055 mmol)을 Cs2 (3.9 mL, 64.44 mmol)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. Br2 (0.4150 mL, 8.055 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 10% Na2S2O2을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 조합하고, 건조시키고 여과하여 2-브로모-3-플루오로-4-메틸페놀 (1.389 g, 6.775 mmol, 84.10 % 수율)을 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 2: 2-브로모-3-플루오로-1-(메톡시메톡시)-4-메틸벤젠을, 2-브로모-3-플루오로페놀 대신에 2-브로모-3-플루오로-4-메틸페놀을 사용하여 중간체 8에 대한 제조에 따라 제조했다.
중간체 45
2-브로모-1-이소프로폭시-4-(메톡시메톡시)벤젠
단계 1: 4-이소프로폭시페놀 (1.00 g, 6.57 mmol) 및 TEA (1.83 mL, 13.1 mmol)을 DCM (25 mL)에 넣었다. 아세틸 클로라이드 (7.56 mL, 7.56 mmol)을 적가하고 반응을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 건조시키고, 여과하고 농축시켜 4-이소프로폭시페닐 아세테이트 (1.24 g, 6.38 mmol, 97.2 % 수율)을 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 2: 4-이소프로폭시페닐 아세테이트 (1.24 g, 6.585 mmol)을 ACN (20 mL)에 넣었고 N-브로모석신이미드 (1.173 g, 6.590 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 18시간 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 에테르로 추출했다. 유기층을 조합하고, 건조시키고, 농축시켜 3-브로모-4-이소프로폭시페닐 아세테이트 (1.584 g, 5.800 mmol, 88.00 % 수율)을 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 3: 3-브로모-4-이소프로폭시페닐 아세테이트 (500 mg, 1.83 mmol)을 MeOH (7 mL)에 넣었다. 물 (2 mL) 중 KOH (111 mg, 1.98 mmol)의 용액을 혼합물에 첨가하고 1시간 동안 실온에서 교반했다. 반응 혼합물을 1N HCl의 첨가로 pH 3로 조정했다. 혼합물을 DCM으로 추출했다. 추출물을 조합하고, 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조 3-브로모-4-이소프로폭시페놀을 제공하고, 이것을 다음 반응에서 직접 사용했다.
단계 4: 2-브로모-1-이소프로폭시-4-(메톡시메톡시)벤젠을, 2-브로모-3-플루오로페놀 대신에 3-브로모-4-이소프로폭시페놀을 사용하여 중간체 8에 대한 절차에 따라 제조했다.
중간체 46
브로모-3-클로로-2-이소프로필-5-(메톡시메톡시)벤젠
단계 1: 1-브로모-3-클로로-2-이소프로필-5-메톡시벤젠 (952 mg, 3.61 mmol)을 DCM (3 mL)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. BBr3 (9030 μL, 9.03 mmol)을 첨가하고 반응을 0 ℃에서 2시간 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 3-브로모-5-클로로-4-이소프로필페놀 (575 mg, 2.30 mmol, 63.8 % 수율)을 제공했다.
단계 2: 1-브로모-3-클로로-2-이소프로필-5-(메톡시메톡시)벤젠을, 2- 대신에 3-브로모-5-클로로-4-이소프로필페놀을 사용하여 중간체 8에 대한 절차에 따라 제조했다.
중간체 47
1-아이오도-3-(메톡시메톡시)나프탈렌
DCM (20 mL) 중 4-아이오도나프탈렌-2-올 (0.80 g, 3.0 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (1.1 mL, 5.9 mmol) 및 클로로(메톡시)메탄 (0.29 g, 3.6 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 추가의 클로로(메톡시)메탄 (0.15 g)는 2시간 후에 첨가되었다. 반응을 염수로 세정하고 진공에서 농축시켰다. 물질을 0 내지 10% EtOAc/헥산의 구배를 용출액으로 사용하는 크로마토그래피로 정제하여 1-아이오도-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 (0.80 g, 2.5 mmol, 86 % 수율)을 수득했다.
중간체 48
3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌
단계 A: 2,4- 디브로모나프탈렌 -1- 아민: AcOH (750 mL) 중 Br2 (246 g, 1.54 mol, 79.3 mL)의 용액에 AcOH (500 mL) 중 나프탈렌-1-아민 (101 g, 705 mmol, 99.0 mL)의 용액을 실온에서 첨가하고 반응을 70℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과했다. 필터 케이크를 AcOH (300 mL)로 세정했다. 고체를 그 다음 NaOH의 20% 수성물 (1.2 L)에 현탁시켰다. 혼합물을 20분 동안 교반하고 여과했다. 고체를 물 (1 L)로 세정하고 진공 하에서 건조시켜 2,4-디브로모나프탈렌-1-아민 (200 g, 664 mmol, 94.2% 수율)을 회색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 301.9 [M+H]+.
단계 B: 4- 브로모 -1- 디아조니오 -나프탈렌-2- 올레이트: AcOH (900 mL) 및 프로피온산 (150 mL) 중 2,4-디브로모나프탈렌-1-아민 (60.0 g, 199 mmol)의 용액에 NaNO2 (16.5 g, 239 mmol, 13.0 mL)을 5-8 ℃에서 30분에 걸쳐 나누어서 첨가하고 반응 혼합물을 5-8 ℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 빙수 (4000 mL)에 부었고, 슬러리를 여과하고 고체를 물 (2 × 50 mL)로 세정하여 4-브로모-1-디아조니오-나프탈렌-2-올레이트 (150 g, 습식 조물질)을 수득했고, 이것을 다음 단계에서 즉시 조물질로 사용했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 - 8.10 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.58 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.37 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.29 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H).
단계 C: 4- 브로모나프탈렌 -2-올: EtOH (2.00 L) 중 4-브로모-1-디아조니오-나프탈렌-2-올레이트 (100 g, 402 mmol)의 용액에 NaBH4 (30.4 g, 803 mmol)을 13-15℃에서 1 시간에 걸쳐 부분씩 첨가하고 반응을 15 내지 18 ℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (1000 mL)에 용해시키고 물 (500 mL × 2)로 세정했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc (60/1 → 10/1)로 용출하는 크로마토그래피로 정제하고 물질을 역상 HPLC로 재정제하여 4-브로모나프탈렌-2-올 (40.0 g, 139 mmol, 17.3 % 수율, 77.4% 순도)을 회색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 - 8.05 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.58 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 3H), 7.07 (s, 1H).
단계 D: 3- 벤질옥시 -1- 브로모 -나프탈렌: MeCN (500 mL) 중 4-브로모나프탈렌-2-올 (30.0 g, 134 mmol), BnBr (25.3 g, 148 mmol, 17.6 mL) 및 K2CO3 (55.7 g, 403 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 PE/EA (100/1 내지 60/1)로 용출하는 실리카겔 칼럼으로 정제하여 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (40.0 g, 128 mmol, 95 % 수율)을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.19 - 8.17 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.32 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.63 (d, J=2.4 Hz,1H), 7.52 - 7.37 (m, 7H), 7.23 - 7.21 (d, J=2.0 Hz,1H), 5.2 (s, 2H).
중간체 49
벤질 4-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(메틸설피닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 4- 하이드록시 -2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7- 카복실레이트: MeOH (1.00 L) 중 1-tert-부틸 4-에틸 3-옥소피페리딘-1,4-디카복실레이트 (50.0 g, 184 mmol)의 용액에 질소 하에서 NaOMe (49.8 g, 921 mmol)　및　2-메틸이소티오우레아 (62.4 g, 331 mmol, H2SO4)을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. HCl (2 M)을 반응 혼합물에 pH~5까지 첨가하고 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 300 mL의 에틸 아세테이트 및 300 mL의 물에 현탁시켰다. 현탁액을 여과했다. 유기상을 물 (1 × 300 mL), 염수 (1×200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7- 카복실레이트 (51.0 g, 138 mmol, 75.4 % 수율, 81.0 % 순도)을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 298.2 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 2- 메틸설파닐 -4-( 트리플루오로메틸설포닐옥시 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: DCM (500 mL) 중 tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (51.0 g, 171 mmol)의 용액에 DIEA (44.3 g, 343 mmol, 59.9 mL) 및 Tf2O (72.6 g, 257 mmol, 42.4 mL)을 0℃에서　질소 하에서 순차적으로 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃까지 가온시키고 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축시키고 잔류물을 EtOAc/석유 0 → 10%로 용출하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (46.0 g, 107 mmol, 62.4 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 430.2 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2- 메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트:　DMF (500 mL) 중　tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (46.0 g, 107 mmol)의 용액에 DIEA (27.7 g, 214 mmol, 37.4 mL) 및 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (25.9 g, 117 mmol, 22.7 mL)을 첨가했다. 반응을 1시간 동안 N2 분위기 하에서 100℃로 가열했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트　(300 mL)에 부었다. 혼합물을 H2O (300 mL × 3)로 세정했다. 유기상을 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 0→20% EtOAc/석유을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (51.0 g, 96.9 mmol, 90.5 % 수율, 92.0 % 순도)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 500.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1 - 카복실레이트: DCM (50 mL) 중 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (25.0 g, 50 mmol)의 용액에 TFA (85.6 g, 750 mmol, 55.6 mL)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 잔류물을 300 mL의 에틸 아세테이트 및 300 mL의 물에 용해시키고 pH~8까지 Na2CO3를 첨가했다. 유기층을 물 (1 × 300 mL), 염수(1 × 200 mL)로 세정하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 벤질 4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1 -카복실레이트를 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 400.2 [M+H]+.
단계 E: 벤질 4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]피페라진-1- 카복실레이트: 디옥산 (300 mL) 중 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (16.3 g, 52.1 mmol), 벤질 4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1 -카복실레이트 (16.0 g, 40.1 mmol), Cs2CO3 (32.6 g, 100 mmol), Pd2(dba)3 (5.50 g, 6.01 mmol)　및　RuPhos (3.74 g, 8.01 mmol)의 혼합물을 N2로 3회 탈가스하고 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, EtOAc (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 10→20% MeOH/DCM로 용출하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (16.0 g, 22.8 mmol, 56.9 % 수율, 90.0 % 순도)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 632.5 [M+H]+.
단계 F: 벤질 4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설피닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DCM (200 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (8.00 g, 12.7 mmol)의 용액에 m-CPBA (2.73 g, 12.7 mmol, 80.0 % 순도)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 0℃ 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 Na2S2O3 (10　mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (100 mL)로 희석하고 DCM (200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 0→10% MeoH/DCM로 용출하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (3.50 g, 4.92 mmol, 38.8 % 수율, 91.0 % 순도)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 648.5 [M+H]+.
중간체 50
tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설포닐-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2- 메틸설포닐 -6,8- 디하이드로 - 5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -7- 카복실레이트: DCM (150 mL) 중 tert-부틸4-(4-벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (14.4 g, 28.9 mmol)의 교반 용액에 m-CPB 고체 (17.4 g, 101 mmol)을 0℃에서 질소 하에서 첨가했다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (300 mL)로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 8로 염기성화하고 그 다음 DCM (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 10/1 내지 1/2)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설포닐-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (11.0 g, 19.7 mmol, 68.6 % 수율, 95.4 % 순도)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 532.1 [M+H]+.
중간체 51
4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸
단계 A: 4- 브로모 -5- 메틸 -1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸: DCM (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸 (3 g, 14.2 mmol) 및 3,4-디하이드로-2H-피란 (2.39 g, 28.4 mmol, 2.60 mL)의 혼합물에 TsOH*H2O (270 mg, 1.42 mmol)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 5→20& EtOAc/석유 에테르를 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (4 g, 13.6 mmol, 95.3% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.01 (s, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.25 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.70 (dd, J=2.8, 9.2 Hz, 1H), 4.05 - 3.96 (m, 1H), 3.79 - 3.70 (m, 1H), 2.66 - 2.44 (m, 4H), 2.25 - 2.04 (m, 2H), 1.84 - 1.56 (m, 3H).
중간체 52
4-브로모-5-메톡시-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸
4-브로모-5-메톡시-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸을, 단계 A에서 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸을 4-브로모-5-메톡시-1H-인다졸로 대체하여 중간체 51에 따라 제조했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.00 (s, 1H), 7.53 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.16 (d, J=9.2 Hz, 1H), 5.70 (dd, J=2.8, 9.2 Hz, 1H), 4.04 - 3.98 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.55 - 2.49 (m, 1H), 2.23 - 2.05 (m, 2H), 1.83 - 1.69 (m, 3H).
중간체 53
3-(벤질옥시)-1-브로모-2-메틸나프탈렌
단계 A: 에틸 2- 메틸 -3-옥소-4-페닐- 부타노에이트 . 건조된 250 ml 3-구 플라스크에 에틸 3-옥소-4-페닐-부타노에이트 (4.00 g, 19.4 mmol.), THF (50.0 mL), 수소화나트륨 (931 mg, 23.3 mmol)을 첨가하고 반응을 0.5시간 동안 0℃에서 교반했다. 요오드화메틸 (3.03 g, 21.3)의 용액을 그 다음 적가했다. 첨가가 완료된 후, 반응 혼합물을 20℃로 가온시키고 2시간 동안 20℃에서 교반했다. 반응 혼합물을 20℃에서 물 (10.0 mL)의 첨가로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (20.0 mL)로 희석하고 층을 분리했다. 수성층을 그 다음 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30.0 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트 20:1 내지 10:1)로 정제하여 에틸 2-메틸-3-옥소-4-페닐-부타노에이트 (3.60 g, 16.3 mmol, 84.3% 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.38 - 7.28 (m, 3H), 7.25 - 7.19 (m, 2H), 4.22 - 4.15 (m, 2H), 3.87 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 1.34 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.30 - 1.26 (m, 3H).
단계 B: 2-메틸나프탈렌-1,3- 디올. 농축 황산 (19.9 g, 203 mmol) 중 에틸 2-메틸-3-옥소-4-페닐-부타노에이트 (3.60 g, 16.3 mmol)의 용액을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 빙수 (30.0 mL)에 부었고 수득한 고체를 여과로 수집하고 진공 하에서 건조시켜 2-메틸나프탈렌-1,3-디올 (1.80 g, 10.3 mmol, 63.2% 수율)을 적색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.54 (m, 1H), 7.41 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.29 - 4.20 (s, 2H), 2.41 - 2.24 (s, 3H).
단계 C: 3- 메톡시 -2- 메틸 -나프탈렌-1-올. 2-메틸나프탈렌-1,3-디올 (1.70 g, 9.76 mmol)을 HCl/MeOH (2 M, 35.0 mL)에 첨가하고 수득한 혼합물을 30℃에서 3일 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 잔류물을 Prep-TLC (석유 에테르 : 에틸 아세테이트 1:1)로 정제하여 3-메톡시-2-메틸-나프탈렌-1-올 (800 mg, 4.25 mmol, 43.5% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.14 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.29 (s, 3H).
단계 D: (3- 메톡시 -2- 메틸 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (10.0 mL) 중 3-메톡시-2-메틸-나프탈렌-1-올 (800 mg, 4.25 mmol.) 및 피리딘 (504 mg, 6.38 mmol)의 혼합물에 트리플루오로아세트산 무수물 (1.44 g, 5.10 mmol)을 0℃에서 N2 분위기 하에서 적가했다. 혼합물을 20℃로 가온시키고 추가 5시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하고 잔류물을 Prep-TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 1:1)로 정제하여 (3-메톡시-2-메틸-1-나프틸)트리플루오로메탄설포네이트 (1.30 g, 4.06 mmol, 95.5% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.97 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.79 - 7.74 (m, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 2.42 (s, 3H)
단계 E: 1- 브로모 -3- 메톡시 -2- 메틸 -나프탈렌 : 밀봉 튜브에서 톨루엔 (10.0 mL) 중 (3-메톡시-2-메틸-1-나프틸)트리플루오로메탄설포네이트 (466 mg, 1.45 mmol), t-Bu-Brettphos (154 mg, 290 umol), 브롬화칼륨 (259 mg, 2.17 mmol), PEG-200 (175 mg), 2-부탄온 (157 mg, 2.17 mmol) 및 Pd2(dba)3 (133 mg, 145 umol)을 첨가하고 혼합물을 N2로 5분 동안 탈가스했다. 다음으로, 트리이소부틸알루미늄 (431 mg, 2.17 mmol)을 20℃에서 적가했다. 혼합물을 24시간 동안 100℃로 가열했다. 반응 혼합물을 물 (30.0 mL)에 부었고 수성층을 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (30.0 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 잔류물을 수득했고, 이것을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르:에틸 아세테이트 10:1)로, 그리고 그 다음 Prep-TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 10:1)로 사전-정제하여 1-브로모-3-메톡시-2-메틸-나프탈렌 (700 mg, 2.79 mmol, 64.1% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.26 - 8.17 (m, 1H), 7.73 - 7.69 (m, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 2H), 7.09 (s, 1H), 3.98 - 3.95 (m, 3H), 2.56 (s, 3H).
단계 F: 4- 브로모 -3- 메틸 -나프탈렌-2-올: -78 ℃로 냉각된 DCM (11.0 mL) 중 1-브로모-3-메톡시-2-메틸-나프탈렌 (580 mg, 2.31 mmol) 및 테트라부틸암모늄 아이오다이드 (2.13 g, 5.78 mmol)의 용액에 BCl3 (1 M, 5.78 mL)의 용액을 10분의 기간에 걸쳐 N2 하에서 적가했다. 반응 혼합물을 0℃로 가온시키고 2시간 동안 실온에서 교반했다. 그 다음 용매를 진공 하에서 제거하고 잔류물을 Prep-TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 5:1)로 정제하여 4-브로모-3-메틸-나프탈렌-2-올 (500 mg, 2.11 mmol, 91.3% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.26 - 8.15 (m, 1H), 7.63 (dd, J = 3.6, 6.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 2.60 (s, 3H), 1.56 (s, 3H).
단계 G: 3- 벤질옥시 -1- 브로모 -2- 메틸 -나프탈렌. 아세토니트릴 (3.00 mL) 중 4-브로모-3-메틸-나프탈렌-2-올 (265 mg, 1.12 mmol) 및 벤질 브로마이드 (201 mg, 1.18 mmol)의 혼합물에 탄산칼륨 (310 mg, 2.24 mmol)을 20℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 그 다음 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하고 잔류물을 Prep-TLC (석유 에테르:에틸 아세테이트 5:1)로 정제하여 3-벤질옥시-1-브로모-2-메틸-나프탈렌 (250 mg, 695 umol, 31.0% 수율, 91.0% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 327.0, 329.0 [M+H]+.
중간체 54
tert-부틸-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트
단계 A: (4- 브로모 -2- 나프틸 ) 2,2- 디메틸프로파노에이트 . DCM (200 mL) 중 4-브로모나프탈렌-2-올 (10 g, 44.8 mmol) 및 TEA (9.07 g, 89.7 mmol)의 용액에 2,2-디메틸프로파노일 클로라이드 (8.11 g, 67.2 mmol)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)의 첨가로 켄칭하고 층을 분리했다. 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE:EA =1:0 내지 100:1)로 정제하여 (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트 (9 g, 29.3 mmol, 65.4% 수율)을 적색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.63 - 7.49 (m, 4H), 1.41 (s, 9H).
중간체 55
tert-부틸 4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카복실레이트.
단계 A: 7- 벤질 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -2,4- 디올 . EtOH (600 mL)에 Na (5.56 g, 241 mmol)을 나누어서 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 이 용액에 에틸 1-벤질-3-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (30.0 g, 100 mmol) 및 우레아 (14.5 g, 242 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 75℃에서 36시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하고 잔류물을 물 (50 mL)에 용해시키고 HCl (120 mL, 2M)의 첨가로 산성화하고, 이 시점에서 고체는 침전되었다. 고체를 여과하고 필터 케이크를 진공 하에서 건조시켜 7-벤질-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (22.0 g, 83.8 mmol)을 수득했다. 1HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 10.97 (br s, 1H), 10.66 (br s, 1H), 7.55 - 6.95 (m, 5H), 3.81 - 3.50 (m, 2H), 3.26 - 2.91 (m, 2H), 2.77 - 2.58 (m, 2H), 2.34 - 2.09 (m, 2H).
단계 B: 7- 벤질 -2,4- 디클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 . POCl3 (330 g, 2.15 mol) 중 DIEA (30.1 g, 233 mmol)의 용액에 7-벤질-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-2,4-디올 (20.0 g, 77.7 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 110℃에서 5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 DCM (400 mL)에 용해시키고 포화 NaHCO3 (200 mL)에 부었고 층을 분리했다. 수성층을 DCM (2 × 400 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/DCM = 10/1 내지 0/1)로 정제하여 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (7.70 g, 26.2 mmol)을 수득했다. 1HNMR (300MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.28 (m, 5H), 3.73 (s, 2H), 3.66 (br s, 2H), 2.84 (br s, 4H).
단계 C: tert -부틸 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일) 피페라진-1- 카복실레이트 . DMSO (200 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 (17.3 g, 58.8 mmol)의 용액에 DIEA (19.0 g, 147 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (11.5 g, 61.7 mmol)을 첨가하고 혼합물을 55℃에서 10시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)에 부었고 물 (3x200mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 MTBE (200 mL)로부터의 분쇄로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카복실레이트 (24 g, 52.9 mmol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 444.2 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸 4-[7- 벤질 -2-(3- 모폴리노프로폭시 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일] 피페라진-1- 카복실레이트 . 톨루엔 (300 mL) 중 3-모폴리노프로판-1-올 (11.8 g, 81.1 mmol), tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1- 카복실레이트 (18 g, 40.5 mmol), BINAP (5.05 g, 8.11 mmol), t-BuONa (9.74 g, 101 mmol) 및 Pd2(dba)3 (3.71 g, 4.05 mmol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (200 mL)에 부었고 수성층을 에틸 아세테이트 (3x300 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 5/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 피페라진-1-카복실레이트 (14 g, 22.5 mmol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 553.4 [M+H]+.
단계 E: tert -부틸 4-[2-(3- 모폴리노프로폭시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일] 피페라진-1- 카복실레이트. MeOH (1 L) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-(3-모폴리노프로폭시)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (14 g, 25.3 mmol)의 용액에 건조 Pd/C (3 g, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 10시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켜 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1TFA)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 피페라진-1-카복실레이트 (6.5 g, 13.9 mmol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 463.4 [M+H]+.
중간체 56
나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트. 알파-나프톨 (4 g, 27.74 mmol)을 3 구 플라스크에서 DCM (200 mL)에 용해시켰다. 반응을 수조에서 10℃로 냉각시켰다. N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (4.846 ml, 27.74 mmol) 및 트리플루오로메탄설폰산 무수물 (4.668 ml, 27.74 mmol)을 용액에 적가했다. 반응을 10℃에서 2시간 동안 교반했다. TLC (25% EtOAc, UV vis)은 반응의 완료를 나타내었다. 유기물을 물 (2X) 및 염수 (2X)로 추출했다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 CombiFlash (0%-12% EtOAc:헥산)상 정상 크로마토그래피를 사용하여 정제했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 진공에서 농축하고 나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (6.77 g, 24.51 mmol, 88.34 % 수율)을 수득했다.
중간체 57
Tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트
DCE (92.47 ml, 4.624 mmol) 중 (S)-1-Boc-2-하이드록시메틸피페라진 (1.0 g, 4.62 mmol)의 용액에 포름알데하이드 (3.474 ml, 46.24 mmol) (물 중 37%) 이어서 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (4.9 g, 23.12 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 격렬하게 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (30 mL)로 처리하고, 10분 동안 교반하고, 그 다음 DCM (3 x 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. ES+APCI MS m/z 231.1 [M+H]+.
중간체 58
Tert-부틸 (R)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트
표제 화합물을, (S)-1-Boc-2-하이드록시메틸피페라진을 tert-부틸 (R)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 중간체 57에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 231.1 [M+H]+
중간체 59
브로모-3-클로로-2-플루오로-5-(메톡시메톡시)벤젠
둥근바닥 플라스크에 THF (8.87 ml, 4.44 mmol) 이어서 수소화나트륨, 광유 중 60 % 분산물 (0.213 g, 5.32 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 그 다음 3-브로모-5-클로로-4-플루오로페놀 (1.0 g, 4.44 mmol)을 나누어서 첨가했다. 거품발생이 멈추면 수득한 어두운 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 클로로메틸 메틸 에테르 (0.421 ml, 5.54 mmol)을 첨가하고 혼합물을 주위 온도로 가온시키고, 여기서 그것을 2시간 동안 교반했다. 포화 수성 염화암모늄 용액을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 물질을 크로마토그래피 (헥산 중 0-15% EtOAc)를 수행하여 생성물을 맑은 오일로서 제공했다.
중간체 60
4-브로모-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸
단계 A: 4- 브로모 -1- 테트라하이드로피란 -2-일-5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸 : DCM (10 mL) 중 4-브로모-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (500 mg, 1.89 mmol, 1 eq)의 용액에 3,4-디하이드로-2H-피란 (476 mg, 5.66 mmol, 517 uL, 3 eq) 및 TsOH·H2O (35.9 mg, 188 umol, 0.1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA=10:1 내지 1:1)로 정제하여 4-브로모-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸 (480 mg, 1.37 mmol, 72.9% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.20 (s, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 5.70 (dd, J=2.8, 8.8 Hz, 1H), 4.05 - 3.96 (m, 1H), 3.79 - 3.70 (m, 1H), 2.56 - 2.50 (m, 1H), 2.27 - 2.04 (m, 2H), 1.80 - 1.74 (m, 2H), 1.60 - 1.54 (m, 1H).
중간체 61
8- 브로모 -6-( 메톡시메톡시 )퀴놀린: DCM (20 mL) 중 8-브로모퀴놀린-6-올 (1.00 g, 4.46 mmol)의 교반 현탁액을 0℃로 냉각시키고 디이소프로필에틸아민 (1.2 mL, 6.7 mmol, 1.5 eq.)을 첨가하고 이어서 클로로(메톡시)메탄 (0.41 mL, 5.4 mmol, 1.2 eq.)을 적가하고 반응 혼합물을 밤새 실온으로 가온시켰다. 농축된 암모니아수 (0.5 mL, ~5 mmol)을 그 다음 첨가하고 수득한 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반했다. 혼합물을 진공에서 증발시키고 20% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 40g상 크로마토그래피를 수행하여 무색 분말 (0.52 g, 44%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 268.0, [M+H]+.
중간체 62
tert-부탄올 (130 mL) 및 석유 에테르 (480 mL) 중 부트-3-엔니트릴 (80.0 g, 1.19 mol, 96.4 mL, 1.00 eq)의 용액에 tert-부탄올 (130 mL) 중 Br2 (191 g, 1.19 mol, 61.5 mL, 1.00 eq)의 용액을 첨가했다. 혼합물을 10℃에서 4시간 동안 교반했다. 혼합물을 임의의 워크업 없이 다음 단계에서 사용했다.
상기 혼합물 (274 mL)에 톨루엔 (300 mL) 중 N,N'-디벤질에탄-1,2-디아민 (160 g, 445 mmol, 157 mL, 2 HOAc) 및 Et3N (178 g, 1.76 mol, 245 mL)의 용액을 첨가했다. 110℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 2-(1, 4-디벤질피페라진-2-일)아세토니트릴 (75.0 g, 246 mmol, 2개의 단계 55.7 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 306.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.37 - 7.23 (m, 10H), 3.80 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.60 - 3.42 (m, 3H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.53 (m, 4H), 2.52 - 2.35 (m, 3H).
디클로로에탄 (1.50 L) 중 2-(1,4-디벤질피페라진-2-일)아세토니트릴 (160 g, 524 mmol, 1.00 eq)의 용액에 1-클로로에틸 카보노클로리데이트 (300 g, 2.10 mol, 4.00 eq)을 15℃에서 첨가했다. 85℃에서 48시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을, 그 다음 메탄올 (1.50 L)에 용해시키고 1시간 동안 가열 환류했다. 혼합물을 농축했다. 고체를 메틸 tert-부틸 에테르 (1.00 L)로 처리하고, 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (중간체 62, 90.0 g, 454 mmol, 86.7 % 수율, 2HCl)을 백색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 10.19 (br s, 2H), 4.01 - 3.73 (m, 1H), 3.69 - 3.41 (m, 4H), 3.32 (dt, J = 2.8, 13.2 Hz, 1H), 3.27 - 3.10 (m, 3H).
중간체 63
에틸 아세테이트 (1400 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (80.0 g, 370 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NaHCO3 (93.2 g, 1.11 mol, 43.2 mL, 3.0 eq), H2O (700 mL) 및 벤질 카보노클로리데이트 (82.0 g, 481 mmol, 68.4 mL, 1.30 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 유기상을 분리하고, 물 (500 mL x 2)로 세정하고 Na2SO4 상에서 건조시키고 여과했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=40/1 내지 1/1)로 정제했다. 생성물 1-벤질 4-tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (85.0 g, 235 mmol, 64% 수율, 96% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M-99]: 251.
2-메틸테트라하이드로푸란 (240 mL) 중 1-벤질 4-tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (20.0 g, 57.1 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TEA (17.3 g, 171.23 mmol, 23.8 mL, 3.0 eq) 및 메탄설포닐 클로라이드 (7.74 g, 67.6 mmol, 5.23 mL, 1.18 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 20℃에서 H2O 150 mL의 첨가로 켄칭했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL x 2)로 추출했다. 유기층을 H2O (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과했다. 용매를 진공 하에서 제거했다. 1-벤질 4-tert-부틸 (2R)-2-(메틸설포닐옥시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (22.0 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
DMA (150 mL) 중 1-벤질 4-tert-부틸 (2R)-2-(메틸설포닐옥시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (22.0 g, 51.3 mmol)의 용액에 NaCN (10.4 g, 211 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 오일 잔류물을 수득했다. 잔류물을 H2O (40.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (80.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=40/1 내지 5:1)로 정제했다. 생성물 1-벤질 4-tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (18.5 g, 46.4 mmol, 2개의 단계, 수율 72%)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 360.
디옥산 (40.0 mL) 중 1-벤질 4-tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (18.5 g, 43.3 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 54.1 mL, 5.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물에 NaHCO3을 첨가하여 pH>7로 만들고, 감압 하에서 농축하여 디옥산을 제거했다. 잔류물을 H2O (50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 H2O (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 생성물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 63, 11.5 g, 91.8% 순도, 95% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 260.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.37 - 7.31 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 4.49 (br, s, 1H), 3.93 (br, s, 1H), 3.07 - 2.81 (m, 5H), 2.78 - 2.54 (m, 2H).
중간체 64
DMF (20.0 mL) 중 tert-부틸 2-메틸설파닐-4 -(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.81 g, 8.87 mmol, 1.0 eq), 벤질(2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 63, 2.30 g, 8.87 mmol, 1.0 eq), DIEA (3.44 g, 26.6 mmol, 4.63 mL, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 1:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.6 g, 6.16 mmol, 69% 수율, 92.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 539.
DCM (20.0 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (6.0 g, 11.1 mmol, 1.0 eq), TFA (30.8 g, 270 mmol, 20.0 mL, 24.3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (500 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 300 mL)로 추출하고 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 여과했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.8 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
톨루엔 (30.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.8 g), 1-브로모나프탈렌 (3.8 g, 18.35 mmol, 2.55 mL), Pd2(dba)3 (1.0 g, 1.09 mmol), RuPhos (1.02 g, 2.19 mmol) 및 Cs2CO3 (12.0 g, 36.8 mmol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거하여 오일 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1 내지 3:1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.2 g, 3.31 mmol, 85.3% 순도, 2개의 단계, 수율 30%)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 565.
DCM (4.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.8 g, 3.97 mmol, 1.0 eq), m-CPBA (1.05 g, 5.16 mmol, 1.3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 상기 반응을 포화 Na2SO3 용액 (50 mL)의 첨가로 켄칭했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 여과했다. 용매를 제거하여 오일 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 메탄올/에틸 아세테이트=1/20 내지 1:10)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 1.5 g, 2.35 mmol, 59% 수율, 90.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 581.
중간체 65
에틸 아세테이트 (480 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐 -3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (24.3 g, 45.0 mmol, 1.0 eq)의 용액에 m-CPBA (8.69 g, 42.8 mmol, 85% 순도, 0.95 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (50.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (2 × 300 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 에틸 아세테이트 (3 × 1000 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (22.8 g, 39.3 mmol, 87% 수율, 95.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.37 - 7.23 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.75 - 4.41 (m, 3H), 4.17 - 4.05 (m, 2H), 3.86 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.81 - 3.62 (m, 1H), 3.46 - 3.18 (m, 3H), 3.10 (d, J = 3.6, 12.0 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.77 - 2.56 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
톨루엔 (50.0 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐- 3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (5.0 g, 9.01 mmol, 1.0 eq) 및 [(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메탄올 (1.82 g, 15.8 mmol, 1.88 mL, 1.75 eq)의 용액에 t-BuONa (1.73 g, 18.0 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 냉수 (50.0 mL)에 첨가하고 에틸 아세테이트 (5 × 50.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE : EA = 10:1 - EA : MeOH = 5:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.80 g, 4.62 mmol, 51.0% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.44 - 7.35 (m, 5H), 5.21 (s, 2H), 4.73 - 4.54 (m, 2H), 4.44 - 4.33 (m, 2H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 3.41 - 3.93 (m, 1H), 3.82 (br d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.39 - 3.22 (m, 3H), 3.11 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 2.99 (d, J = 3.6, 12.8 Hz, 1H), 2.90 - 2.56 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.07 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).
DCM (8.0 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐 -3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.40 g, 3.96 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (13.9 g, 122 mmol, 9.0 mL, 30.7 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축했다. 잔류물에 포화 NaHCO3 수성물 (20.0 mL)을 첨가하고 DCM (5 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 1.40 g, 2.77 mmol, 70% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
중간체 66
단계 A: DCE (200 mL) 중 7-벤질-4-클로로-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (20.0 g, 65.4 mmol, 1 eq)의 용액에 1-클로로에틸 카보노클로리데이트 (28.1 g, 196 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고 70℃에서 15시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 MeOH (200 mL)에 용해시키고 70℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르 (60 mL)로 분쇄했다. 침전물을 여과로 수집하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (20 mL)로 세정하고 진공 하에서 건조시켜 4-클로로-2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (17.2 g, 조물질, HCl)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 4.35 (s, 2H), 3.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.05 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H).
단계 B: THF (400 mL) 중 4-클로로-2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도 [3,4-d]피리미딘 (16.5 g, 조물질, HCl) 및 TEA (20.0 g, 196 mmol, 27.3 mL)의 용액에 벤질 카보노클로리데이트 (16.7 g, 98.1 mmol, 13.9 mL)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (80 mL)로 희석하고 유기층을 분리했다. 수성상을 EtOAc (200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 80/1 내지 5/1)로 정제하여 벤질 4-클로로-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (19.6 g, 50.4 mmol, 2개의 단계 86% 수율, 90% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.37 (s, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 3.877 (d, J = 8.0, 2H), 2.80 (br s, 2H), 2.54 (s, 3H).
단계 C: DMF (400 mL) 중 벤질 4-클로로-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (21.5 g, 55.3 mmol, 1.00 eq)의 용액에 DIEA (35.7 g, 277 mmol, 48.2 mL, 5.00 eq) 및 2-[(2S)-피페라진-2-일]아세토니트릴 (6.92 g, 55.3 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 80℃에서 2시간 동안 교반한 후, (Boc)2O (60.4 g, 277 mmol, 63.5 mL, 5.00 eq)을 상기 혼합물에 첨가하고 80℃에서 또 다른 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (800 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 400 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (300 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 10/1 내지 1/1)로 정제하여 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (24.3 g, 43.0 mmol, 78% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.29 (m, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.76 - 4.54 (m, 2H), 4.46 (br d, J = 18.4 Hz, 1H), 4.08 - 3.69 (m, 4H), 3.53 - 3.35 (m, 1H), 3.34 - 3.03 (m, 2H), 3.03 - 2.89 (m, 1H), 2.81 - 2.55 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 1.51 (s, 9H).
단계 D: EtOAc (480 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (24.3 g, 45.1 mmol, 1 eq)의 용액에 m-CPBA (8.70 g, 42.9 mmol, 85% 순도, 0.95 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (800 mL)로 희석했다. pH를 NaHCO3로 8로 조정하고 유기층을 분리했다. 수성상을 EtOAc (2 × 400 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EtOAc/MeOH 100/1 내지 10/1)로 정제하여 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (20.9 g, 36.4 mmol, 81% 수율, 96% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 555.
단계 E: 톨루엔 (400 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (20.9 g, 37.6 mmol, 1 eq) 및 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (8.67 g, 75.3 mmol, 8.94 mL, 2 eq)의 용액에 t-BuONa (7.23 g, 75.3 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (200 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 400 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 1000 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (13.5 g, 20.5 mmol, 54% 수율, 92% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 606.
단계 F: MeOH (60.0 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.50 g, 5.78 mmol, 1 eq)의 용액에 NH3/MeOH (60.0 mL), Pd/C (1.00 g, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 여러 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 시, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 2.33 g, 4.55 mmol, 79% 수율, 92% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 4.58 (br s, 1H), 4.34 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.08 - 3.88 (m, 4H), 3.84 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.25 - 3.03 (m, 4H), 3.01 - 2.88 (m, 2H), 2.82 - 2.51 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.27 (dt, J = 7.2, 9.2 Hz, 1H), 2.11 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.75 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).
중간체 67
tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 4- 하이드록시 -2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7- 카복실레이트. MeOH (1.00 L) 중 1-tert-부틸 4-에틸 3-옥소피페리딘-1,4-디카복실레이트 (50.0 g, 184 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 25℃에서 질소 하에서 NaOMe (49.8 g, 921 mmol, 5.00 eq), 이어서 2-메틸이소티오우레아 (62.4 g, 331 mmol, 1.80 eq, H2SO4)을 고체로서 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 pH~5까지 HCl (2 M)로 산성화하고, 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축하여 MeOH를 제거했다. 잔류물을 300 mL의 에틸 아세테이트 및 300 mL의 물에 현탁시키고 빠르게 교반했다. 현탁액을 여과하고 백색 고체를 수집했다. 여과물을 분리하고 유기물을 물 (1 × 300 mL) 및 염수 (1×200 mL)로 세정했다. 유기물을 단리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 백색 고체로 농축시켰다. tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7- 카복실레이트 (51.0 g, 138 mmol, 75.4 % 수율, 81 % 순도)을 백색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. LCMS [M+1]: 298.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.33 (s, 2H), 3.61 (t, J=5.6 Hz, 2H), 2.68 - 2.49 (m, 5H), 1.50 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 2- 메틸설파닐 -4-( 트리플루오로메틸설포닐옥시 ) -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. DCM (500 mL) 중 tert-부틸 4-하이드록시-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (51.0 g, 171 mmol, 1.00 eq)의 교반 현탁액에 0℃에서 DIEA (44.3 g, 343 mmol, 59.9 mL, 2.00 eq), 이어서 Tf2O (72.6 g, 257 mmol, 42.4 mL, 1.50 eq)을 질소 하에서 첨가했다. 즉시 갈색 용액이 형성되었다. 25℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응을 농축시켜 갈색 오일을 수득했다. 갈색 오일을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)로 정제했다. 표제 화합물 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (46.0 g, 107 mmol, 62 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [M+1]: 430.
중간체 68
tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 4-[(3 S )-4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. DMF (20.0 mL) 중 tert-부틸 2-메틸설파닐-4 -(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트(3.81 g, 8.87 mmol, 1.0 eq), 벤질(2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 63, 2.30 g, 8.87 mmol, 1.0 eq), DIEA (3.44 g, 26.6 mmol, 4.63 mL, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 1:1)로 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.6 g, 6.16 mmol, 69% 수율, 92.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
중간체 69
브로모-8-메틸나프탈렌
단계 A: 1- 브로모 -8- 메틸 -나프탈렌. THF (20 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (1 g, 3.50 mmol, 1 eq)의 용액에 MeLi (디에틸 에테르 중 1.6 M, 2.62 mL, 1.2 eq)을 0℃에서 적가했다. 30분 동안 0℃에서 교반한 후, 아이오도메탄 (3.38 g, 23.8 mmol, 1.48 mL, 6.81 eq)을 적가했다. 혼합물을 25℃까지 가온시키고 또 다른 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 45% - 70%, 28 MIN; 40%분)으로 정제했다. T표제 화합물 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (340 mg, 1.49 mmol, 43% 수율, 97% 순도)을 동결건조 후 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 0.8, 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 2H), 7.13 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.05 (s, 3H).
중간체 70
브로모-8-클로로나프탈렌
단계 A: 1 H - 나프토[1,8-de][1,2,3]트리아진. AcOH (200 mL) 및 EtOH (1000 mL) 중 나프탈렌-1,8-디아민 (100 g, 632 mmol, 1 eq)의 용액에 이소아밀 아질산염 (72.6 g, 619 mmol, 83.4 mL, 0.98 eq)을, 온도를 냉-수조 하에서 18 내지 21 ℃로 조절하면서 2시간 동안 적가했다. 첨가 후, 수득한 적색 현탁액을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 고체를 여과로 수집하고, 에탄올 (2 × 500 mL)로 세정하고 진공 하에서 건조시켰다. 화합물 1H-나프토[1,8-de][1,2,3]트리아진 (84 g, 496 mmol, 79% 수율)을 적색 결정성 고체로서 수득하고 다음 단계에서 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 170.
단계 B: 8-클로로나프탈렌-1- 아민. HCl (1.5 L) 중 1H-나프토[1,8-de][1,2,3]트리아진 (84 g, 496 mmol, 1 eq)의 용액에 Cu (2.10 g, 33.1 mmol, 234 uL, 0.0665 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 수득한 혼합물을 물 (500 mL)로 희석하고 30분 동안 85℃에서 가열했다. 수득한 거의 맑은 수용액을 여과하고, 냉각시키고, (리트머스 종이가 청색이 될 때까지) 암모니아수로 염기성화하고 용액을 에테르 아세테이트 (2 × 1000 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 5/1)로 정제했다. 화합물 8-클로로나프탈렌-1-아민 (57 g, 259 mmol, 52% 수율, 81% 순도)을 적색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 178.
단계 C: 1- 브로모 -8- 클로로 -나프탈렌. MeCN (1000 mL) 중 8-클로로나프탈렌-1-아민 (57 g, 320 mmol, 1 eq) 및 TsOHㆍH2O (219 g, 1.16 mol, 3.6 eq)의 용액에 H2O (120 mL) 중 NaNO2 (39.8 g, 577 mmol, 1.8 eq) 및 CuBr (138 g, 963 mmol, 29.3 mL, 3 eq)의 용액을 - 5℃에서 첨가하고, 그 다음 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에 포화 Na2SO3 용액 (100 mL)을 첨가하고 15분 동안 교반하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (1000 mL×3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (500 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르)로 정제했다. 표제 화합물 1-브로모-8-클로로-나프탈렌 (56 g, 229 mmol, 72% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.93 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 1.2, 8.4, 1H), 7.79 (dd, J = 1.2, 8.4, 1H), 7.67 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 8.0 Hz, 1H).
중간체 71
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.5 g, 791 umol, 1 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 5.00 mL, 25.3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 불순한 생성물 (500 mg, 조물질, HCl)을 갈색 고체로서 수득했다. 60 mg의 불순한 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물(0.04% NH3ㆍH2O + 10mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 50% - 80%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (19.3 mg, 36.1 umol, 34% 정제 수율, 99.2% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:532.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.44 (dt, J = 3.6, 7.6 Hz, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 1H), 7.22 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.46 - 4.34 (m, 2H), 4.15 (td, J=6.4, 10.6 Hz, 1H), 4.04 (br d, J=12.4 Hz, 0.5H), 3.95 - 3.79 (m, 2H), 3.74 (br d, J=12.8 Hz, 0.5H), 3.63 - 3.48 (m, 1H), 3.40 - 2.99 (m, 7H), 2.98 - 2.80 (m, 2H), 2.73 - 2.61 (m, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 3H), 2.47 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.10 - 1.99 (m, 1H), 1.82 - 1.68 (m, 3H).
중간체 72
2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(2,3- 디메틸페닐 )-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.22 g, 1.98 mmol, 1.0 eq), 1-브로모-2,3-디메틸-벤젠 (1.10 g, 5.93 mmol, 802 uL, 3.0 eq), Cs2CO3 (1.93 g, 5.93 mmol, 3 eq), RuPhos (185 mg, 396 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (181 mg, 198 umol, 0.1 eq)의 혼합물을 탈가스하고 그 다음 12시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 수집된 원하는 분획을 포화 수성 중탄산나트륨으로 중화하고 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고, 그 다음 EtOAc (3 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (380 mg, 623 umol, 32 % 수율, 100 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 610.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 MeOH (20 mL)에 -70℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (380 mg, 623 umol, 1.0 eq)의 용액을 상기 용액에 첨가하고 이어서 Pd/C (200 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 반응을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 촉매를 여과하고 여과물을 농축시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 459 umol, 74% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.11 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 7.2, 9.6 Hz, 1H), 4.02 - 3.95 (m, 3H), 3.84 - 3.78 (m, 1H), 3.31 - 3.19 (m, 1H), 3.17 - 3.04 (m, 5H), 3.04 - 2.95 (m, 1H), 2.89 (dd, J = 9.2, 11.6 Hz, 1H), 2.76 - 2.62 (m, 3H), 2.58 - 2.50 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.29 - 2.23 (m, 4H), 2.12 - 2.00 (m, 1H), 1.89 - 1.76 (m, 3H).
중간체 73
tert-부틸(2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(2,3- 디메틸페닐 )-2- 메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.60 g, 3.96 mmol, 1.0 eq), 1-브로모-2,3-디메틸-벤젠 (1.61 g, 8.70 mmol, 1.18 mL, 2.20 eq), Pd2(dba)3 (362 mg, 395 umol, 0.10 eq), RuPhos (369 mg, 791 umol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (3.87 g, 11.9 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 물 (20.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (80.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트=3 : 1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 10 : 1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.59 mmol, 40% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 509.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.11 (t, J = 15.6 Hz, 1H), 6.95(d, J = 8.0 Hz,2H), 4.63 (br s, 1H), 4.10 - 3.93 (m, 4H), 3.89 (br d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.27 (dd, J = 3.6 Hz, J = 13.6 Hz, 1H),3.24 - 3.05 (m, 3H), 3.05 - 2.95 (m, 1H), 2.89 - 2.67 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(2,3- 디메틸페닐 )-2- 메틸설피닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 983 umol, 1.0 eq), 3-클로로벤젠카보퍼옥소산 (200 mg, 983 umol, 1.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 물 (10.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트=3 : 1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 10 : 1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 793 umol, 81% 수율, 93% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:525.
단계 C: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3- 디메틸페닐)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.52 mmol, 1.0 eq), [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (369 mg, 3.20 mmol, 380 uL, 2.10 eq), t-BuONa (293 mg, 3.05 mmol, 2.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응을 물 (20.0 mL)로 켄칭했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (80.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2 , 석유 에테르: 에틸 아세테이트=5: 1 내지 디클로로메탄: 메탄올=10:1)로 정제했다. 표제 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (740 mg, 1.22 mmol, 80% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 576.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.10 (t, J = 15.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8 Hz, J = 9.6 Hz,1H), 4.13 - 4.00 (m, 4H), 3.89 (br d, J = 12.4 Hz 1H), 3.27 - 3.13 (m, 3H), 3.13 - 2.95 (m, 3H), 2.87 - 2.65 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.09 - 2.06 (m, 1H), 2.06 - 2.04 (m, 1H), 1.93 - 1.62 (m, 4H), 1.51 (s, 9H).
실시예 1
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )피페라진-1-일)-5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-카복실레이트: 2 mL의 디메틸 아세트아미드에 tert-부틸 4-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.0 g, 3.7 mmol), 트리에틸아민 (1.0 mL, 7.4 mmol), 및 벤질 1-피페라진카복실레이트 (0.86 mL, 4.4 mmol)을 조합시켰다. 반응 용기를 밀봉하고 반응 혼합물을 교반하면서 90℃로 가열했다. 5시간 동안 교반한 후, 반응을 염수로 희석하고 메틸 t-부틸 에테르로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염화암모늄 및 염수로 순차적으로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 점성 오일로 농축했다. 오일을, 1:1 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 (RediSep®, 24 g)로 크로마토그래피를 수행하여 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.3 g, 2.9 mmol, 77 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 454.2 [M+H]+.
단계 B : 벤질 4-(5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (11.61 mL, 3.484 mmol) 중 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.58 g, 3.484 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (2.668 mL, 34.84 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 디클로로메탄에 용해시켰다. 용액을 1M NaOH 및 염수로 순차적으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 24G Isco RediSep® Gold, 10 내지 20% 메탄올/디클로로메탄)로 정제하여 생성물 (1.1 g, 89%)을 황백색 포움으로서 얻었다. ES+APCI MS m/z 354.2 [M+H]+.
단계 C: 벤질 4-(7-(3-( 메톡시메톡시 )나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드 로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (0.0069 g, 0.0075 mmol), 라세미-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸 (0.0096 g, 0.015 mmol) 및 톨루엔 (0.62 mL, 0.19 mmol)을 첨가했다. 아르곤으로 5분 동안 혼합물에 거품을 일으키고 그 다음 바이알을 캡핑하고 혼합물을 15분 동안 100℃로 가열했다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고 그 다음 나트륨 tert-부톡시드 (0.036 g, 0.37 mmol)을 첨가하고 이어서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 (0.050 g, 0.19 mmol) 및 벤질 4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.13 g, 0.37 mmol)을 첨가했다. 바이알을 캡핑하고 혼합물을 20시간 동안 100℃로 가열했다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 디클로로메탄으로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 10-50% 에틸 아세테이트/디클로로메탄)로 정제하여 생성물 (0.062 g, 61%)을 황백색 포움으로서 얻었다. CI MS m/z 540.3 [M+H]+.
단계 D : 7-(3-( 메톡시메톡시 )나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘: 에탄올 (1.1 mL, 0.11 mmol) 및 테트라하이드로푸란 (1.1 mL, 0.11 mmol) 중 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.061 g, 0.11 mmol)의 용액에 팔라듐 (0.024 g, 0.011 mmol) (데구싸 유형, 10 wt.%, 50% H2O)을 첨가했다. H2의 분위기를 진공으로 반응 용기에 도입하고, 그 다음 반응 혼합물을 H2의 분위기 하에 유지했다. 혼합물을 주위 온도에서 2.5시간 동안 교반하고, 그 다음 메탄올로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 무색 여과물을 톨루엔으로 진공 하에서 농축하여 황백색 포움 (0.048 g, 105%)를 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 406.2 [M+H]+.
단계 E: 1-(4-(7-(3-( 메톡시메톡시 )나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (1.1 mL, 0.11 mmol) 중 7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (0.046 g, 0.11 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (1.2 mL, 0.12 mmol) (디클로로메탄 중 새롭게 제조된 0.1 M 용액) 이어서 트리에틸아민 (0.032 mL, 0.23 mmol)을 첨가했다. 반응을 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 농축시키고 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 에틸 아세테이트)로 정제하여 생성물 (0.042 g, 79%)을 황백색 고체 포움으로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 460.2 [M+H]+.
단계 F: 1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 에틸 아세테이트 (0.74 mL, 0.074 mmol) 중 1-(4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (0.034 g, 0.074 mmol)의 용액에 2-프로판올 (0.44 mL, 2.2 mmol) 중 염산 (5 내지 6 N 용액을 첨가했다. 혼합물을 주위 온도에서 5시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL)로 희석하고, 폴리프로필렌 필터를 통해 여과하고 수집된 고체를 에틸 아세테이트 및 헥산으로 세정하여 생성물을 HCl 염으로서 제공했다. 불순한 물질을 1 mL의 수산화암모늄/메탄올로 처리하여 산을 켄칭하고 혼합물을 농축했다. 잔류물을 10% 메탄올/디클로로메탄에 용해시키고 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 2 내지 5% 메탄올/에틸 아세테이트)로 정제하여 생성물 (0.008 g, 25%)을 황백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 416.2 [M+H]+.
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.49 (s, 1H), 8.07 (app d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.61 (app d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.80 (m, 3H), 6.23 (dd, J = 16.8, 1.6 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 10.6, 2.0 Hz, 1H), 4.22 (br s, 2H), 3.80 (app t, J = 4.7 Hz, 4H), 3.63 (br s, 4H), 3.35 (br s, 2H), 3.03 (br s, 2H).
실시예 2
1-(4-(7-(7-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 2-브로모-7-(메톡시메톡시)나프탈렌을 사용하여 실시예 1의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 416.1 [M+H]+.
실시예 3
1-(4-(7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 1-아이오도나프탈렌을 사용하여 실시예 1의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 400.2 [M+H]+.
실시예 4
1-(4-(7-(2-플루오로-6-하이드록시페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 2-브로모-1-플루오로-3-(메톡시메틸)벤젠을 사용하여 실시예 1의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 384.2 [M+H]+.
실시예 5
1-(4-(7-(2-플루오로-5-하이드록시페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 2-브로모-1-플루오로-4-(메톡시메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 1의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 384.2 [M+H]+.
실시예 6
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계들 A-C: 벤질 4-(7-(3-( 메톡시메톡시 )나프탈렌-1-일)-6- 메틸 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 단계 A에서 4-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 대신에 tert-부틸 4-클로로-6-메틸-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트를 사용하여 실시예 1, 단계들 A-C의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 430.2 [M+H]+.
단계 D1: 벤질 4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-6- 메틸 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 이소프로판올 (10 mL) 중 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.05 g, 0.09 mmol)의 용액에 염화수소 (이소프로판올 중 5-6M) (0.02 mL, 0.09 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공 하에서 농축하고 농축물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분할시켜 물질을 유리 염기로 전환시켰다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.005 g, 0.010 mmol, 11% 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 510.3 [M+H]+.
단계 D2: 4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-올: 실시예 1, 단계 D의 방법에 따라 제조했다.
단계 E: 1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 실시예 1, 단계 E의 방법에 따라 제조했다.
실시예 7
1-(4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계들 A-D: 벤질 4-(7-(5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 4-브로모-5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸을 사용하여 일반적인 반응식 1, 단계들 A-C에 따라 합성했다.
단계 D1: 벤질 4-(7-(5- 메틸 -1H- 인다졸 -4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (10 mL) 중 벤질 4-(7-(5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.16 g, 0.26 mmol)의 용액에 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.89 g, 7.8 mmol) 이어서 아니솔 (0.028 g, 0.26 mmol)을 첨가하고, 반응을 실온에서 3시간 동안 실온에서 교반했다. 반응을 진공 하에서 농축하고 농축된 물질을 에틸 아세테이트에 용해시키고 염기성 염수로 세정했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 조 물질을, 0 내지 10% 메탄올/디클로로메탄을 용출액으로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 벤질 4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.05g, 38%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 484.2 [M+H]+.
단계 D2: 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘: 실시예 1, 단계 D의 방법에 따라 제조했다.
단계 E: 1-(4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 실시예 1, 단계 E의 방법에 따라 제조했다.
실시예 8
(S)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-카복실레이트: 벤질 1-피페라진카복실레이트 (1.268 mL, 6.575 mmol) 및 tert-부틸 2,4-디클로로- 5,6-디하이드로피리도[3 4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트 (2 g, 6.575 mmol)을 디메틸 아세트아미드 (10 mL)에 용해시키고 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (3.445 mL, 19.73 mmol)로 처리했다. 반응 혼합물을 85℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 농축물을 크로마토그래피 (CombiFlash®, 용출액으로서 0%-50% 에틸 아세테이트:헥산)으로 정제하여 생성물 (2.69g, 83%)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 488.2, 490.2 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: Tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (235 mg, 0.482 mmol), 및 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 (497 mg, 4.82 mmol)을 디옥산 (0.5 mL)에 첨가하고 3일 동안 100℃로 가열했다. 반응을 농축시키고 수득한 잔류물을 실리카겔 (Biotage Isolera, 디클로로메탄 중 0-12% 메탄올)로 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (200 mg, 0.361 mmol, 74.9 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 555.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일) 옥시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (1202 μL, 0.3606 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (200 mg, 0.3606 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (828.3 μL, 10.82 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 디클로로메탄에 용해시켰다. 용액을 1M NaOH 이어서 염수로 세정하고 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 24G Isco RediSep®Gold, 10 내지 20% 메탄올/디클로로메탄)로 정제하여 생성물을 황백색 포움으로서 얻었다 (0.135 g, 83%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 455.2 [M+H]+.
단계 D : 벤질 (S)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (21.8 mg, 0.0238 mmol), 라세미-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸 (30.4 mg, 0.0488 mmol) 및 톨루엔 (991 μL, 0.297 mmol)을 첨가했다. 아르곤으로 5분 동안 혼합물에 거품을 일으키고 그 다음 바이알을 캡핑하고 혼합물을 16분 동안 100℃로 가열했다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고 나트륨 tert-부톡시드 (57.2 mg, 0.595 mmol)을 첨가하고 이어서 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (100 mg, 0.297 mmol) 및 벤질 (S)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (135 mg, 0.297 mmol)을 첨가했다. 바이알을 캡핑하고 혼합물을 18시간 동안 100℃로 가열했다. 혼합물을 냉각시키고 농축했다. 조 물질을 실리카겔 (Biotage Isolera, 0-11% 메탄올/디클로로메탄으로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (68 mg, 0.106 mmol, 35.7 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 641.3 [M+H]+.
단계 E: (S)-2-((7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판-1-아민: 에탄올 (1061 μL, 0.11 mmol) 및 테트라하이드로푸란 (1061 μL, 0.11 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (68 mg, 0.11 mmol)의 용액에 팔라듐 (113 mg, 0.053 mmol) (데구싸 유형, 10 wt.%, 50% H2O)을 첨가했다. H2의 분위기를 진공으로 도입하고 그 다음 반응 용기를 H2의 분위기 하에 유지했다. 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 무색 여과물을 농축시켜 (S)-2-((7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판-1-아민 (54 mg, 100 % 수율)을 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. ES+APCI MS m/z 507.3 [M+H]+.
단계 F: (S)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (1066 μL, 0.11 mmol) 중 (S)-2-((7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판-1-아민 (54 mg, 0.11 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (1279 μL, 0.13 mmol) (DCM 중 새롭게 제조된 0.1 M 용액) 이어서 트리에틸아민 (30 μL, 0.21 mmol)을 첨가했다. 반응을 주위 온도에서 20분 동안 교반했다. 혼합물을 농축시키고 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 0-15% 메탄올/디클로로메탄)로 정제하여 (S)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (51 mg, 0.091 mmol, 85 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 561.3 [M+H]+.
단계 G: 1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: (S)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (51 mg, 0.091 mmol)을 350 μL의 메탄올 및 몇 방울의 테트라하이드로푸란을 수용하고 있는 바이알에 첨가하고 반응 바이알을 캡핑했다. HCl (379 μL, 2.3 mmol) (6M 수성)을 교반하면서 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 55℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 진공 하에서 농축했다. 포화 바이카보네이트 용액을 첨가하고 반응을 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 추출했다. 유기층을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (Biotage Isolera, 1% 농축된 염화암모늄을 갖는 디클로로메탄 중 4-20% 메탄올)로 정제하여 표제 생성물 (25.3 mg, 54%)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 517.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.90 (d, 1H, J=8.314Hz), 7.54 (d, 1H, J=8.021), 7.34 (m, 1H), 7.24 (m, 1H). 6.72 (m, 1H), 6.56-6.48 (m, 2H), 6.32 (dd, 1H, J=16.726, 1.858), 5.73 (dd, 1H, J=10.368, 1.858), 5.45 (m, 1H), 4.09-3.94 (m, 2H), 3.63 (bs, 2H), 3.47 (bs, 2H), 3.31 (m, 4H), 3.16 (bs, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.60 (bs, 2H), 2.45 (m, 1H), 2.43 (s, 6H), 1.31 (d, 3H, J=6.162 Hz)
실시예 9
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 503.2 [M+H]+.
실시예 10
1-(4-(2-(3-(디메틸아미노)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-(디메틸아미노)프로판-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 11
1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 12
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-메틸피페라진을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 514.3 [M+H]+.
실시예 13
1-(4-(2-(3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 N,N-디메틸피롤리딘-3-아민을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 528.3 [M+H]+.
실시예 14
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 (S)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트를 사용하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 15
(R)-1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트를 벤질 (R)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트로 대체하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 2-(디메틸아미노)에탄-1-올로 대체하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 16
1-(6-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트를 사용하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 515.3 [M+H]+.
실시예 17
1-(4-(2-(4-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 N,N-디메틸피페리딘-4-아민을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 580.3 [M+H]+.
실시예 18
1-(6-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트를 사용하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 1-(디메틸아미노)프로판-2-올로 대체하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 19
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 20
1-(6-(2-(3-(디메틸아미노)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트를 사용하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 3-(디메틸아미노)프로판-1-올로 대체하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 21
1-(4-(2-((4-(디메틸아미노)부탄-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 4-(디메틸아미노)부탄-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]+.
실시예 22
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-4-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-메틸피페리딘-4-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 23
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-3-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-메틸피롤리딘-3-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 515.3 [M+H]+.
실시예 24
1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 사용하고, 단계 D에서 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 1-브로모 나프탈렌을 사용하고, 단계 G를 제거하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]+.
실시예 25
1-(4-(2-(3-(디메틸아미노)프로폭시)-7-(1-페닐에틸)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-(디메틸아미노)프로판-1-올을 사용하고, 단계 D에서 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 (1-브로모에틸)벤젠을 사용하고, 단계 G를 제거하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]+.
실시예 26
1-(4-(2-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(피페라진-1-일)에틸 아세테이트을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. 단계 D 후, 하기 비누화 반응을 수행했다: 벤질 4-(2-(4-(2-아세톡시에틸)피페라진-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 THF (5 mL)에 용해시키고 2 M LiOH (1 mL)을 첨가했다. 혼합물을 주위 온도에서 24시간 동안 교반했다. 포화 NH4Cl을 첨가하고 반응을 DCM으로 추출했다. 조합된 유기층을 농축시키고 수득한 잔류물을 실리카겔 (Biotage Isolera Gold, DCM 중 0-10% MeOH로 용출함)로 정제하여 벤질 4-(2-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 제공했다. 합성의 나머지는 실시예 8, 단계 E에서와 같이 진행되었다. ES+APCI MS m/z 544.3 [M+H]+.
실시예 27
1-((S)-4-(2-(((R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 (S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트를 사용하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]+.
실시예 28
(S)-1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 (S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트를 사용하고 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.2 [M+H]+.
실시예 29
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-모폴리노에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-모폴리노에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 545.2 [M+H]+.
실시예 30
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-모폴리노-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 모폴린을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]+.
실시예 31
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(피롤리딘-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 파이롤리딘을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 485.2 [M+H]+.
실시예 32
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(피롤리딘-1-일)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(피롤리딘-1-일)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]+.
실시예 33
1-(4-(2-(2-(1,1-디옥시도티오모폴리노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트
단계 A: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 463.12 μmol, 1.00 eq) 및 2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에탄올 (166 mg, 926 μmol, 2.00 eq)의 혼합물에 NaOBu-t (133 mg, 1.39 mmol, 3.00 eq), BINAP (57.7 mg, 92.6 μmol, 0.20 eq), Pd2(dba)3 (42.4 mg, 46.3 μmol, 0.10 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 DCM (3 × 10 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역 플래시 크로마토그래피 (물 중 40 % MeCN (0.1 % TFA)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 301 μmol, 65.1 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 763.5 [M+H]+.
단계 B: 4-[2-[2-(1,1- 디옥소 -1,4- 티아지난 -4-일) 에톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올: MeOH (10.0 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 249 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 Pd/C (100 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 psi) 하에서 40℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 4-[2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (90.0 mg, 167 μmol, 67.1 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 539.4 [M+H]+.
단계 C: 1-[4-[2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 4-[2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (90.0 mg, 167 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA (64.8 mg, 501 μmol, 87.5 μL, 3.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (19.0 mg, 150 μmol, 0.90 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 1 mL의 MeOH로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.1% TFA) -ACN]; B%: 12%-42%,11분으로 정제하여 1-[4-[2-[2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트 (32.6 mg, 50.2 μmol, 30.0 % 수율, 91.3 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 593.5 [M+H]+.
실시예 34
1-(4-(2-(3-(1,1-디옥시도티오모폴리노)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트
단계 A에서 2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에탄올 대신에 3-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)프로판-1-올을 사용하여 실시예 33의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 607.5 [M+H]+.
실시예 35
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(4-모폴리노부톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트
단계 A에서 2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에탄올 대신에 4-모폴리노부탄-1-올을 사용하여 실시예 33의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 573.4 [M+H]+.
실시예 36
(R)-1-(4-(2-((1-(4-아세틸피페라진-1-일)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 2-(1,1-디옥소-1,4-티아지난-4-일)에탄올 대신에 1-[4-[(2R)-2-하이드록시프로필]피페라진-1-일]에탄온을 사용하여 실시예 33의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 600.6 [M+H]+.
실시예 37
1-(4-(2-(2-(4-아세틸피페라진-1-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[2-[2-(4-아세틸피페라진-1-일)에톡시]-7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (8.00 mL) 중 1-[4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]에탄온 (277 mg, 1.61 mmol, 2.60 eq)의 용액에 NaH (49.4 mg, 1.23 mmol, 60 % 순도, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반했다. 상기 혼합물에 THF (2.00 mL) 중 벤질-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 618 μmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (6 mL) 및 물 (6 mL)로 켄칭했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[2-[2-(4-아세틸피페라진-1-일)에톡시]-7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 534 μmol, 86.5 % 수율, 89.7 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 756.3 [M+H]+.
단계 B: 1-[4-[2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]에틸]피페라진-1-일]에탄온: THF (10.0 mL) 중 벤질 4-[2-[2-(4-아세틸피페라진-1-일)에톡시]-7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 264 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (100 mg, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 THF (3 × 5 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 1-[4-[2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]에틸]피페라진-1-일]에탄온 (80.0 mg, 150 μmol, 56.9 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다.
단계 C: 1-[4-[2-[2-(4-아세틸피페라진-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 1-[4-[2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]에틸]피페라진-1-일]에탄온 (80.0 mg, 150 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA (58.3 mg, 451 μmol, 78.8 μL, 3.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (14.2 mg, 113 μmol, 0.75 eq)을 -40℃에서 0.5시간 동안 첨가했다. 반응 혼합물을 MeOH (1 mL)로 켄칭하고 DCM (20 mL)으로 희석하고 그 다음 물 (5 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 반응 혼합물을 분취 HPLC : Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 30%-55%, 10분으로 정제하여 1-[4-[2-[2-(4-아세틸피페라진-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (13.8 mg, 23.3 μmol, 15.5 % 수율, 98.7 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 586.3 [M+H]+.
실시예 38
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 1-[4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]에탄온 대신에 3-(1-피페리딜)프로판-1-올을 사용하여 실시예 37의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 557.5 [M+H]+.
실시예 39
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-(피롤리딘-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 1-[4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]에탄온 대신에 3-피롤리딘-1-일프로판-1-올을 사용하여 실시예 37의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 40
1-(4-(2-(4-(디메틸아미노)부톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 1-[4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]에탄온 대신에 4-(디메틸아미노)부탄-1-올을 사용하여 실시예 37의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 531.4 [M+H]+.
실시예 41
1-(4-(7-(3-사이클로프로필-5-하이드록시페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트
단계 A: 4-[7-(3-벤질옥시-5-사이클로프로필-페닐)-2-(3- 모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 805 μmol, 1.00 eq) 및 1-벤질옥시-3-브로모-5-사이클로프로필-벤젠 (268 mg, 886 μmol, 1.10 eq)의 혼합물에 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (75.2 mg, 161 μmol, 0.20 eq), Pd2(dba)3 (111 mg, 121 μmol, 0.15 eq) 및 Cs2CO3 (656 mg, 2.01 mmol, 2.50 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (15 mL)에 첨가하고 DCM (2 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3:1 내지 디클로로메탄: 메탄올 = 10:1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-5-사이클로프로필-페닐)-2-(3- 모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 230 μmol, 28.5 % 수율, 97.2 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 719.6 [M+H]+.
단계 B: 3- 사이클로프로필 -5-[2-(3- 모폴리노프로폭시 )-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]페놀 MeOH (10.0 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-5-사이클로프로필-페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 209 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 Pd/C (150 mg, 10 % 순도) 및 CH3COOH (25.1 mg, 417.3 μmol, 23.9 μL, 2.00 eq)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 40℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 Celite®를 통해 여과하고 여과물을 농축했다. 생성물 3-사이클로프로필-5-[2-(3-모폴리노프로폭시)-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]페놀 디아세테이트 (80.0 mg, 130 μmol, 62.4 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 495.2 [M+H]+.
단계 C: 1-[4-[7-(3-사이클로프로필-5-하이드록시-페닐) -2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (2.00 mL) 중 3-사이클로프로필-5-[2-(3-모폴리노프로폭시)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]페놀 디아세테이트 (80.0 mg, 130 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 DIEA (168 mg, 1.30 mmol, 227 μL, 10.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (13.1 mg, 104 μmol, 0.80 eq)을 -78 ℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 -78 ℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (2 eq, 10 mg)로 켄칭하고, 그 다음 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (기기: GX-K; 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 조건: 물 (0.1 % TFA)-ACN; 시작 B: 8; 종료 B: 38; 구배 시간 (분): 11; 100% B 유지 시간 (분): 2; 유속 (mL/분): 25)으로 정제했다. 단리된 생성물을 동결건조로 농축했다. 생성물 1-[4-[7-(3-사이클로프로필-5-하이드록시-페닐) -2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트 (21.5 mg, 31.1 μmol, 23.9 % 수율, 95.8 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 549.5 [M+H]+.
실시예 42
1-(4-(7-(2-플루오로-5-하이드록시페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 1-벤질옥시-3-브로모-5-사이클로프로필-벤젠 대신에 4-(벤질옥시)-2-브로모-1-플루오로벤젠을 사용하여 실시예 41의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 527.4 [M+H]+.
실시예 43
1-(4-(7-(3-하이드록시-6-메틸나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (3.00 mL) 중 벤질 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 1.01 mmol, 1.00 eq), (3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)트리플루오로메탄설포네이트 (483 mg, 1.51 mmol, 1.50 eq), Cs2CO3 (820 mg, 2.52 mmol, 2.50 eq), 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (93.9 mg, 201.3 μmol, 0.20 eq) 및 Pd2(dba)3 (92.2 mg, 100 μmol, 0.10 eq)의 혼합물을 90℃에서　10시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50.0 ml)로 희석했다. 침전물을 여과로 제거하고, 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (0.1% TFA 물/아세토니트릴)로 정제했다. 원하는 분획을 조합하고 포화 수성 중탄산나트륨 (2.00 mL)로 염기성화하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400. mg, 599 μmol, 59.4 % 수율, 100 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 667.6 [M+H]+.
단계 B: 4-[3-[[7-(3- 메톡시 -6- 메틸 -1- 나프틸 )-4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린: MeOH (10.0 mL) 중 벤질 4-[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸) -2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (370 mg, 554 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd-C (100 mg, 10 % 순도)　및 AcOH (66.6 mg, 1.11 mmol, 2.00 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 40℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 진공에서 농축하여 4-[3-[[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (295 mg, 553 μmol, 99.8 % 수율)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 정제 없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 533.6 [M+H]+
단계 C: 1-[4-[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (56.8 mg, 450 μmol, 0.80 eq) 및　DIEA (727 mg, 5.63 mmol, 983 μL, 10.0 eq)의 혼합물에 DCM (1.00 mL) 중　4-[3-[[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (300 mg, 563 μmol, 1.00 eq)의 용액을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (50 μL)의 첨가로 -40℃에서 켄칭하고, 물 (10.0 mL)로 희석하고, DCM(10.0 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 1-[4-[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (270 mg, 460 μmol, 81.7 % 수율)을 제공했다. ESI MS m/z 587.6 [M+H]+.
단계 D: 1-[4-[7-(3-하이드록시-6-메틸-1-나프틸) -2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (3.00 mL) 중 1-[4-[7-(3-메톡시-6-메틸-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (100 mg, 170 μmol, 1.00 eq)의 용액에 BBr3 (213 mg, 852 μmol, 82.1 μL, 5.00 eq)을 -78 ℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 -78 ℃로 냉각시키고 DCM (20.0 mL)로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 용액 (5.00 mL)의 첨가로 켄칭하고 -78 ℃에서 10분 동안 교반하고, 그 다음 0℃로 가온시켰다. 혼합물을 DCM (2 × 15.0 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50 mm*, 10 μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 27%-57%, 12분)로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-6-메틸-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (11.0 mg, 18.6 μmol, 10.9 % 수율, 97.0 % 순도)을 갈색 고체로서 제공했다. ESI MS m/z 573.6 [M+H]+.
실시예 44
1-(4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]- 2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (20.0 mL) 중 벤질 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 1.01 mmol, 1.00 eq), 2-[(4-브로모-5-메틸-인다졸-1-일)메톡시] 에틸-트리메틸실란 (448 mg, 1.31 mmol, 1.30 eq), Cs2CO3 (822 mg, 2.53 mmol, 2.50 eq), Pd2(dba)3 (138 mg, 151 μmol, 0.15 eq) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (94.3 mg, 202 μmol, 0.20 eq)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고, 90℃에서 10시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 HPLC (0.1% TFA 물/아세토니트릴)로 정제하여 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]- 2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (420 mg, 554 μmol, 54.9 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 757.6 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (10.0 mL) 중 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸) 인다졸-4-일]-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (370 mg, 488 μmol, 1.00 eq)의 용액에 트리에틸아민 (98.9 mg, 977 μmol, 135 μL, 2.00 eq), Pd/C(100 mg, 10 % 순도) 및 tert-부톡시카보닐 tert-부틸 카보네이트 (213 mg, 977 μmol, 224 μL, 2.00 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 40℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 1:0 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (340 mg, 470 μmol, 96.2 % 수율)을 갈색 오일로서 제공했다. ESI MS m/z 723.5 [M+H]+.
단계 C: 4-[3-[[7-(5- 메틸 -1 H - 인다졸 -4-일) -4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 트리플루오로아세테이트 : DCM (500 μL) 중 tert-부틸 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 207 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (354 mg, 3.11 mmol, 230 μL, 15.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 4-[3-[[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일) -4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 트리플루오로아세테이트 (125 mg, 206 μmol, 99.3 % 수율)을 갈색 오일로서 제공하고 다음 단계에서 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 493.4 [M+H]+.
단계 D 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일) -2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 : 디클로로메탄 (2.00 mL) 중 4-[3-[[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-피페라진 -1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 트리플루오로아세테이트 (120 mg, 197 μmol, 1.00 eq, TFA) 및　DIEA (255 mg, 1.98 mmol, 345 μL, 10.0 eq)의 혼합물에 디클로로메탄 (1.00 mL) 중　프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (19.9 mg, 158 μmol, 0.80 eq)의 용액을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (50.0 μL)의 첨가로 -40℃에서 켄칭하고, 물 (10.0 mL)로 희석하고, 디클로로메탄 (10.0 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 30%-60%,10분)로 정제하여 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일) -2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (19.0 mg, 34.4 μmol, 17.4 % 수율, 99.0 % 순도)을 백색 고체로서 제공했다. ESI MS m/z 547.5 [M+H]+.
실시예 45
1-((1R,5S)-3-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 3-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트: DMSO (18.0 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (920 mg, 3.13 mmol, 1.00 eq) 및 tert-부틸 3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (677 mg, 3.19 mmol, 1.02 eq)의 혼합물에 DIEA (1.21 g, 9.39 mmol, 1.64 mL, 3.00 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc (3 × 20 mL)로 희석하고 추출하고, 물 (10 mL), 1N HCl (5 mL), NaHCO3 (15 mL), 및 염수 (15 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 3-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (1.30 g, 2.41 mmol, 76.9 % 수율, 87.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 470.2 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 3-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트: THF (40.0 mL) 중 1-(디메틸아미노)프로판-2-올 (857 mg, 8.31 mmol, 942 μL, 3.00 eq)의 용액에 NaH (222 mg, 5.54 mmol, 60.0 % 순도, 2.00 eq)을 15℃에서 N2 하에서 첨가했다. 15℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, tert-부틸 3-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (1.30 g, 2.77 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 밀봉 튜브에서 교반했다. 반응을 물 (3 mL)로 느리게 켄칭하고 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 60:1 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 3-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (700 mg, 1.07 mmol, 38.8 % 수율, 82.4 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 C: tert-부틸 3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 : MeOH (30.0 mL) 중 tert-부틸 3-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (700 mg, 1.30 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (200 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 4회 퍼지했다. 혼합물을 수소 (50 Psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 50:1 내지 5:1)로 정제하여 tert-부틸 3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (500 mg, 952 μmol, 73.2 % 수율, 85.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 D: tert-부틸 3-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트: Pd2(dba)3 (84.1 mg, 91.8 μmol, 0.10 eq)을 디옥산 (9.00 mL) 중 tert-부틸 3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (410 mg, 918 μmol, 1.00 eq), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (293 mg, 936 μmol, 1.02 eq), 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (85.7 mg, 184 μmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (897 mg, 2.75 mmol, 3.00 eq)의 용액에 첨가했다. 반응 혼합물을 100℃에서 7 시간 동안 N2 하에서 교반하고 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (5 mL)로 희석하고 DCM (2 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 100:1 내지 20:1)로 정제하여 tert-부틸 3-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (317 mg, 441 μmol, 48.1 % 수율, 94.5 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 679.2 [M+H]+.
단계 E: tert-부틸 3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트: MeOH (6.80 mL) 중 tert-부틸 3-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (340 mg, 501 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (120 mg)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 4회 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 40℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (210 mg, 316 μmol, 63.1 % 수율, 88.6 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 589.3 [M+H]+.
단계 F: 4-[4-(3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-3-일)-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 트리플루오로아세테이트 : DCM (230 μL) 중 tert-부틸 3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 (180 mg, 306 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (349 mg, 3.06 mmol, 226 μL, 10.0 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-[4-(3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-3-일)-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 트리플루오로아세테이트 (528 mg, 조물질)을 적색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 489.2 [M+H]+.
단계 G: 1-[3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (1.50 mL) 중 4-[4-(3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-3-일)-2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 트리플루오로아세테이트 (149 mg, 306 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA (1.36 g, 10.5 mmol, 1.84 mL, 34.5 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (30.9 mg, 245 μmol, 0.80 eq)을 - 50℃에서 적가했다. 혼합물을 -40 및 그 다음 -20℃에서 30분 동안 교반했다. 반응을 MeOH (19.6 mg)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 TLC (DCM/MeOH 7:1)로 정제하여 1-[3-[2-[2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일]프로프-2-엔-1-온 (18.9 mg, 32.8 μmol, 10.7 % 수율, 94.3 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 46
1-((1R,5S)-8-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-3-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 tert-부틸 3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-카복실레이트 대신에 tert-부틸 (1R,5S)-3,8-디아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트를 사용하여 실시예 4의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 543.4 [M+H]+.
실시예 47
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-8-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 에틸 2-( 벤질아미노 ) 프로파노에이트 : MeCN (600 mL) 중 에틸 2-브로모프로파노에이트 (30.0 g, 165 mmol, 21.6 mL, 1.00 eq), BnNH2 (23.1 g, 215 mmol, 23.6 mL, 1.30 eq)의 용액에 K2CO3 (45.8 g, 331 mmol, 2.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 DCM (300 mL)로 세정했다. 여과된을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트=10:1 내지 4:1)로 정제하여 에틸 2-(벤질아미노)프로파노에이트 (34.0 g, 163 mmol, 98.4 % 수율, 99.4 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
단계 B: 에틸 4-[ 벤질 -(2- 에톡시 -1- 메틸 -2-옥소-에틸)아미노] 부타노에이트: MeCN (600 mL) 및 물 (60.0 mL) 중 에틸 2-(벤질아미노)프로파노에이트 (31.0 g, 150 mmol, 1.00 eq) 및 에틸 4-브로모부타노에이트 (87.5 g, 449 mmol, 64.4 mL, 3.00 eq)의 용액에 Cs2CO3 (97.5 g, 299.12 mmol, 2.00 eq) 및 KI (4.97 g, 29.9 mmol, 0.20 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 80-90℃에서 40시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 DCM (2 × 100 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 DCM (300 mL)에 용해시키고 염수 (80 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트 = 1:0 내지 20:1)로 정제하여 에틸 4-[벤질-(2-에톡시-1-메틸-2-옥소-에틸)아미노]부타노에이트 (28.0 g, 87.1 mmol, 58.3 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 C: 에틸 1- 벤질 -2- 메틸 -3-옥소-피페리딘-4- 카복실레이트 : THF (600 mL) 중 에틸 4-[벤질-(2-에톡시-1-메틸-2-옥소-에틸)아미노]부타노에이트 (28.0 g, 87.1 mmol, 1.00 eq)의 용액에 tBuOK (19.6 g, 174 mmol, 2.00 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 켄칭하고 MTBE (3 × 300mL) 및 DCM (2 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트=100:1 내지 20:1)로 정제하여 에틸 1-벤질-2-메틸-3-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (20.0 g, 58.8 mmol, 67.5 % 수율, 81.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 276.0 [M+H]+.
단계 D: 7- 벤질 -8- 메틸 -6,8- 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -2,4- 디올 : EtOH (400 mL)에 Na (3.76 g, 163 mmol, 3.88 mL, 2.50 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 에틸 1-벤질-2-메틸-3-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (18.0 g, 65.4 mmol, 1.00 eq) 및 우레아 (9.82 g, 163 mmol, 8.77 mL, 2.50 eq)을 첨가하고 반응 혼합물을 80℃에서 80시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 물 (100 mL)에 용해시키고 MTBE (3 × 50 mL)로 세정했다. 수성상을 HCl (15 mL, 12 M)로 pH 6-7로 조정했다. 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 물 (30 mL)로 세정하고 진공에서 건조시켜 7-벤질-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (12.0 g, 44.2 mmol, 67.7 % 수율, 100 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 272.0 [M+H]+.
단계 E: 벤질 -2,4- 디클로로 -8- 메틸 -6,8- 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 : POCl3 (305 g, 1.99 mol, 185 mL, 108 eq) 중 7-벤질-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (5.00 g, 18.4 mmol, 1.00 eq)의 혼합물을 12시간 동안 110℃로 가열했다. 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 DCM (500 mL)에 용해시키고 pH를 7 초과로 유지하면서 포화 NaHCO3 (200 mL)에 부었다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용액을 실리카겔의 패드를 통해 여과하고 필터 케이크를 DCM (3 × 400 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 진공 하에서 농축하여 7-벤질-2,4-디클로로-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (4.50 g, 14.6 mmol, 79.2 % 수율)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 F: 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -8- 메틸 -6,8- 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (60.0 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (3.00 g, 9.73 mmol, 1.00 eq) 및 DIEA (2.52 g, 19.5 mmol, 3.40 mL, 2.00 eq)의 용액에 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (1.90 g, 10.2 mmol, 1.05 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3.30 g, 7.15 mmol, 73.5 % 수율, 99.3 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 458.1 [M+H]+.
단계 G: tert-부틸-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (20.0 mL) 중 2-(디메틸아미노)에탄올 (583 mg, 6.54 mmol, 655 μL, 3.00 eq)의 용액에 Pd(OAc)2 (48.9 mg, 218 μmol, 0.10 eq), tert-부틸-4-(7-벤질-2-클로로-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.00 g, 2.18 mmol, 1.00 eq), Cs2CO3 (2.13 g, 6.54 mmol, 3.00 eq) 및 BINAP (272 mg, 436 μmol, 0.20 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (10 mL)에 용해시키고 DCM (3 × 40 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1 내지 2:1, 그 다음 DCM:MeOH = 50:1 내지 5:1)로 정제하여 tert-부틸-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.76 mmol, 80.8 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 511.2 [M+H]+.
단계 H: tert -부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-8- 메틸 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트 : MeOH (20.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.57 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (100 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (50 psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 MeOH (3 × 200 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 1.07 mmol, 68.2 % 수율)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. ESI MS m/z 421.3 [M+H]+.
단계 I: tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (8.00 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (380 mg, 904 μmol, 1.00 eq) 및 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (311 mg, 994 μmol, 1.10 eq)의 혼합물에, Cs2CO3 (883 mg, 2.71 mmol, 3.00 eq) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (84.3 mg, 181 μmol, 0.20 eq) 및 Pd2(dba)3 (82.7 mg, 90.4 μmol, 0.10 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 DCM (50 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분할시켰다. 반응 혼합물을 DCM (50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (디에틸 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1, 그 다음 DCM:MeOH =100:1 내지 5:1)로 정제하고, 이어서 단리된 생성물을 분취 TLC (DCM: MeOH=10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 306 μmol, 33.9 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 653.4 [M+H]+.
단계 J: 4-[2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-8- 메틸 -4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 비스-트리플루오로아세테이트: DCM (130.00 μL) 중 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 177 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (202 mg, 1.78 mmol, 132 μL, 10.00 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 비스-트리플루오로아세테이트 (175.00 mg)을 갈색 오일로서 제공하고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다.
단계 K: 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (500.00 μL) 중 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-8-메틸-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 비스-트리플루오로아세테이트 (97.4 mg, 141 μmol, 1.00 eq)의 용액에 DIEA (222 mg, 1.72 mmol, 300 μL, 12.2 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (14.2 mg, 113 μmol, 0.80 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 한 방울의 MeOH로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 TLC (DCM:MeOH =10:1) 그리고 그 다음 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 13분)로 정제하여 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-8-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (10.7 mg, 20.7 μmol, 3개의 단계 6.8 % 수율)을 갈색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 517.2 [M+H]+.
실시예 48
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트
단계 A: 에틸 4-[ 벤질 -(2- 에톡시 -2-옥소-에틸)아미노] 펜타노에이트 : DCM (800 mL) 중 에틸 4-옥소펜타노에이트 (47.0 g, 326 mmol, 46.5 mL, 1.50 eq), 에틸 2-(벤질아미노)아세테이트 (42.0 g, 217.3 mmol, 1.00 eq) 및 AcOH (13.0 g, 217 mmol, 12.4 mL, 1.00 eq)의 용액을 12-18 ℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 0-5℃에서 냉각하고, NaBH(OAc)3 (138 g, 652 mmol, 3.00 eq)을 부분씩 첨가했다. 혼합물을 10-18 ℃로 가온시키고 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (1000 mL)로 켄칭하고 DCM (2 × 500 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 건조시키고 농축 건조시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르/에틸 아세테이트 (60:1 내지 40:1)로 용출하는 실리카겔 칼럼으로 정제하여 에틸 4-[벤질-(2-에톡시-2-옥소-에틸)아미노]펜타노에이트 (42.0 g, 91.5 mmol, 42.1 % 수율, 70 % 순도)을 무색 오일로서 제공했다. ESI MS m/z 322.2 [M+H]+.
단계 B: 에틸 1- 벤질 -2- 메틸 -5-옥소-피페리딘-4- 카복실레이트: 톨루엔 (30.0 mL) 중 에틸 4-[벤질-(2-에톡시-2-옥소-에틸)아미노]펜타노에이트 (37.00 g, 115.12 mmol, 1.00 eq) 및 t-BuOK (16.8 g, 150 mmol, 1.30 eq)의 용액을 25℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응을 물 (50 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기 추출물을 건조시키고 농축 건조시켜 에틸 1-벤질-2-메틸-5-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (14.6 g, 53.0 mmol, 46 % 수율)을 황색 오일로서 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 C: 7- 벤질 -6- 메틸 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -2,4- 디올: Na (3.05 g, 133 mmol, 3.14 mL, 2.50 eq)을 EtOH (280 mL)에 용해시키고, 그 다음 에틸 1-벤질-2-메틸-5-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (14.6 g, 53.0 mmol, 1.00 eq) 및 우레아 (7.96 g, 133 mmol, 7.11 mL, 2.50 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 16시간 동안 N2 하에서 가열 환류했다 (78 ℃). 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 물 (100 mL)에 용해시키고, MTBE (100 mL)로 세정했다. 수성상의 pH를 6N HCl (2 mL)로 pH 6-7로 조정했다. 수득한 고체를 여과로 수집하고 60℃에서 진공 하에서 건조시켜 7-벤질-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (5.00 g, 17.1 mmol, 32.3 % 수율, 93 % 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다.
단계 D: 7- 벤질 -2,4- 디클로로 -6- 메틸 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘: POCl3 (49.5 g, 323 mmol, 30.0 mL, 58.4 eq) 및 7-벤질-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2,4-디올 (1.50 g, 5.53 mmol, 1.00 eq)을 환류 하에서 12시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 농축 건조시켜 POCl3를 제거했다. 잔류물을 DCM (40 mL)에 용해시키고 포화 NaHCO3 수성 /포화 수성 Na2CO3 (1/1, 60 mL)로 세정했다. 혼합물을 여과하고 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 7-벤질-2,4-디클로로-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (2.08 g, 조물질)을 갈색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 307.9, 309.9 [M+H]+.
단계 E: 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6- 메틸 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트 : 디옥산 (50.0 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (2.50 g, 8.11 mmol, 1.00 eq) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (1.54 g, 8.27 mmol, 1.02 eq)의 혼합물에 DIEA (3.14 g, 24.3 mmol, 4.25 mL, 3.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 20시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고 DCM (2 × 80 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 자동화 플래시 크로마토그래피 시스템 (디에틸 에테르/에틸 아세테이트 50:1 내지 2:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.59 g, 5.29 mmol, 65.2 % 수율, 93.5 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 F: tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (45.0 mL) 중 2-(디메틸아미노)에탄올 (701 mg, 7.86 mmol, 788 μL, 3.00 eq)의 용액에 NaH (210 mg, 5.24 mmol, 60.0 % 순도, 2.00 eq)을 15℃에서 N2 하에서 첨가했다. 15℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.20 g, 2.62 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 110℃에서 18 시간 동안 밀봉 튜브에서 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 Al2O3 (DCM/MeOH 100:1 내지 10:1) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.38 g, 2.36 mmol, 90.3 % 수율, 87.5% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 511.3 [M+H]+.
단계 G: tert -부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-6- 메틸 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (80.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.50 g, 2.94 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (450 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 4회 퍼지했다. 혼합물을 수소 (50 Psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 40/1 내지 10/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.15 g, 2.46 mmol, 83.7 % 수율, 90.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 H: tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: Pd2(dba)3 (109 mg, 119 μmol, 0.10 eq)을 디옥산 (10.0 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 1.19 mmol, 1.00 eq), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (410 mg, 1.31 mmol, 1.10 eq), 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (111 mg, 238 μmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (1.16 g, 3.57 mmol, 3.00 eq)의 용액에 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (5 mL)로 희석하고 DCM (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 Al2O3 (DCM/MeOH 100/1 내지 10/1) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 그리고 분취 TLC (DCM/MeOH 5:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (309 mg, 453 μmol, 38.1 % 수율, 95.8 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 I: tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (6.80 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (340 mg, 521 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (120 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 4회 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 40℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 312 μmol, 59.8 % 수율, 83.5 % 순도)을 핑크색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 563.3 [M+H]+.
단계 J: 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 트리플루오로아세테이트 : DCM (240 μL) 중 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 320 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (365 mg, 3.20 mmol, 237 μL, 10.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 트리플루오로아세테이트 (273 mg)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 K: 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (500 μL) 중 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6-메틸-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 트리플루오로아세테이트 (148 mg, 320 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA (494 mg, 3.83 mmol, 668 μL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (32.3 mg, 256 μmol, 0.80 eq)을 - 50℃에서 적가했다. 혼합물을 -40 내지 -20℃에서 30분 동안 교반했다. 반응을 MeOH (20.5 mg)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 8%-38%,13분)로 정제하여 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6-메틸-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트 (73.7 mg, 113 μmol, 35.2 % 수율, 96.3 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 49
1-(4-(2-(2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: 톨루엔 (50.00 mL) 중 2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에탄올 (401 mg, 3.01 mmol, 1.60 eq), tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-메틸설포닐- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.00 g, 1.88 mmol, 1.00 eq), Cs2CO3 (1.84 g, 5.64 mmol, 3.00 eq), Pd(OAc)2 (42.2 mg, 188 μmol, 0.10 eq) 및 BINAP (234 mg, 376 μmol, 0.20 eq)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 10:1 내지 100:1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.20 g, 1.07 mmol, 56.8 % 수율, 52 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 585.3 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-[2-[2-(3- 플루오로피롤리딘 -1-일) 에톡시 ]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1- 카복실레이트: DCM (10.00 mL) 중 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1- 일)-2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.20 g, 2.05 mmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (3.51 g, 30.8 mmol, 2.28 mL, 15.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가온시키고 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 용액을 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출했다. 수층을 포화 수성 탄산나트륨 용액 (50 mL)로 염기성화하고 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.65 mmol, 80.4 % 수율)을 황색 검으로서 수득했다. ESI MS m/z 485.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (70.00 mL) 중 벤질 4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (750 mg, 1.55 mmol, 1.00 eq), (3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (949 mg, 3.10 mmol, 2.00 eq), 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (144.66 mg, 310.00 μmol, 0.20 eq), Pd2(dba)3 (141.94 mg, 155.00 μmol, 0.10 eq) 및 Cs2CO3 (1.52 g, 4.65 mmol, 3.00 eq)의 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 그 다음 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고 물 (100 mL)을 첨가했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 10:1 내지 에틸 아세테이트/메탄올 10:1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 961 μmol, 62.0 % 수율, 88% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 641.3 [M+H]+.
단계 D: 2-[2-(3- 플루오로피롤리딘 -1-일) 에톡시 ]-7-(3- 메톡시 -1- 나프틸 )-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘: MeOH 중 벤질 4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (700.00 mg, 1.09 mmol, 1.00 eq)의 혼합물을 수소첨가된 (15 Psi) 하에서 40℃에서 4시간 동안 촉매로서 건조 Pd/C (140 mg)로 수소첨가했다. 촉매를 Celite® 펠트를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 987 μmol, 90.6 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다.
단계 E: 1-[4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (8 mL) 중 2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 987 μmol, 1.00 eq) 및 DIEA (255 mg, 1.97 mmol, 345 μL, 2.00 eq)의 혼합물에 디클로로메탄 (2 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (124 mg, 987 μmol, 1.00 eq)의 용액을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (20 mL) 및 디클로로메탄 (30 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 30 mL)로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 1-[4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (450 mg, 714 μmol, 72.4 % 수율, 89 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 561.2 [M+H]+.
단계 F: 1-[4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 1-[4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일) 에톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (400 mg, 713 μmol, 1.00 eq)의 용액에 BBr3 (1.30 g, 5.19 mmol, 500 μL, 7.27 eq)을 -70℃에서 첨가하고 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 0℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 디클로로메탄 (20 mL)로 희석하고, 그 다음 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (20 mL)으로 켄칭했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.1%TFA)-ACN]; B%: 18%-48%, 12분). 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 1-[4-[2-[2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (40.0 mg, 63.7 μmol, 8.92 % 수율, 87 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 547.3 [M+H]+.
실시예 50
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 1- tert -부틸 2- 메틸4 -(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1,2- 디카복실레이트 : DMSO (40.0 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘 (2.00 g, 6.80 mmol, 1.00 eq)의 용액에 DIEA (1.76 g, 13.6 mmol, 2.38 mL, 2.00 eq) 및 1-tert-부틸 2-메틸피페라진-1,2-디카복실레이트 (1.74 g, 7.14 mmol, 1.05 eq)을 첨가했다. 혼합물을 55℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디에틸 에테르/에틸 아세테이트 = 1:0 내지 3:1)로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1,2-디카복실레이트 (3.10 g, 5.70 mmol, 83.8 % 수율, 92.3 % 순도)을 황색 반고체로서 수득했다. ESI MS m/z 502.2 [M+H]+.
단계 B: 1-tert-부틸 2-메틸4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트: 톨루엔 (60.0 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,2-디카복실레이트 (3.00 g, 5.98 mmol, 1.00 eq), 2-(디메틸아미노)에탄올 (1.07 g, 12.0 mmol, 1.20 mL, 2.00 eq), Cs2CO3 (4.87 g, 15.0 mmol, 2.50 eq), Pd(OAc)2 (201 mg, 897 μmol, 0.15 eq) 및 BINAP (744 mg, 1.20 mmol, 0.20 eq)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM / MeOH = 1:0 내지 5:1)로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (3.10 g, 4.45 mmol, 80.4 % 수율, 86.0 % 순도)을 흑색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 555.3 [M+H]+.
단계 C: 1- tert -부틸 2- 메틸4 -[2- [2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트: MeOH (50.0 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (2.33 g, 4.20 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (233 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (50 Psi) 하에서 40℃에서 36시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 유기상을 농축 건조시켜 1-tert-부틸-2-메틸4-[2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (1.50 g, 조물질)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 D: 1-tert-부틸2-메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트: 디옥산 (100 mL) 중 1-tert-부틸-2-메틸4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (1.50 g, 조물질), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (1.49 g, 4.76 mmol, 1.30 eq), Cs2CO3 (2.98 g, 9.15 mmol, 2.50 eq), Pd2(dba)3 (503 mg, 549 μmol, 0.15 eq) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (342 mg, 732 μmol, 0.20 eq)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고, 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, DCM (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM / MeOH = 10:1 내지 5:1)로 정제하여 1-tert-부틸2-메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (1.72 g, 2.25 mmol, 53.5 % 수율, 91% 순도)을 황색으로서 수득했다. ESI MS m/z 697.3 [M+H]+.
단계 E: 메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디 하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-카복실레이트: DCM (20.0 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸) -2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (1.32 g, 1.89 mmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (4.31 g, 37.8 mmol, 2.80 mL, 20.0 eq)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 2시간 동안 25℃에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (50 mL) 및 H2O (20 mL)에 용해시키고 반응 혼합물을 포화 NaHCO3로 pH 8로 조정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디 하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-카복실레이트 (1.12 g, 1.87 mmol, 69.6 % 수율, 70 % 순도)을 갈색 오일로서 얻었다, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 597.4 [M+H]+.
단계 F: [4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]메탄올: THF (5.00 mL) 중 메틸-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-카복실레이트 (400 mg, 0.670 mmol)의 혼합물에 LiAlH4 (102 mg, 2.68 mmol, 4.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고, 0℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 Na2SO4·10 H2O (0.5 g)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 DCM (50 mL)로 희석했다. 조합된 유기층을 여과하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에서 농축하여 [4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]메탄올 (280 mg, 0.493 mmol, 73.6 % 수율)을 황색 반고체로서 얻었다, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 569.3 [M+H]+.
단계 G: 2-[[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-4-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸] 피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민: THF (10.0 mL) 중 [4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]메탄올 (250 mg, 440 μmol, 1.00 eq) 및 NaH (176 mg, 4.40 mmol, 60.0 % 순도, 10.0 eq)의 교반 용액에 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (232 mg, 1.54 mmol, 189 μL, 3.50 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (25 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고 DCM (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 분취 TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 2-[[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-4-[3-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸] 피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (128 mg, 180 μmol, 40.9 % 수율, 96.0 % 순도)을 무색 반고체로서 수득했다. ESI MS m/z 683.3 [M+H]+.
단계 H: 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온; DCM (5.00 mL) 중 2-[[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-4-[3-[[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시메틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (128 mg, 187 μmol, 1.00 eq) 및 트리에틸아민 (47.4 mg, 469 μmol, 65.0 μL, 2.50 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (35.5 mg, 281 μmol, 1.50 eq)을 -40℃에서 적가하고 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 분취 TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (92.0 mg, 101 μmol, 54.0 % 수율, 81.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 737.3 [M+H]+.
단계 I: 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (8.00 mL) 중 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시메틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (92.0 mg, 125 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 BBr3 (17.0 mg, 67.8 μmol, 6.53 μL, 10.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 질소 분위기 하에서 교반하고 그 다음 25℃에서 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물에 포화 NaHCO3 수성물 (0.5 mL)을 첨가했다. 용액을 0℃에서 pH 7로 조정하고 그 다음 MeOH (2.0 mL)을 첨가했다. 용액을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.1 % TFA) - ACN]; B %: 15 % - 45 %, 11분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 감압 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 동결건조시켜 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (6.30 mg, 11.2 μmol, 9.00 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 533.2 [M+H]+.
실시예 51
아크릴로일-4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-N,N-디메틸피페라진-2-카복사미드
단계 A: 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-tert-부톡시카보닐-피페라진-2-카복실산: THF (4.00 mL) 및 H2O (1.00 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸) -2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (300 mg, 431 μmol, 1.00 eq)의 용액에 NaOH (68.9 mg, 1.72 mmol, 4.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 반응 혼합물을 HCl (6 M)로 pH 6으로 조정하고 그 다음 DCM (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켜 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-tert-부톡시카보닐-피페라진-2-카복실산 (310 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 683.3 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(디메틸카바모일)피페라진-1-카복실레이트 DCM (10.0 mL) 중 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-tert-부톡시카보닐-피페라진-2-카복실산 (310 mg, 조물질) 및 DIEA (352 mg, 2.72 mmol, 476 μL)의 혼합물에 HATU (259 mg, 681 μmol)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 30분 동안 교반한 후, N-메틸메탄아민 (130 mg, 1.59 mmol, 146 μL, HCl)을 한번에 첨가했다. 반응 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지했다. 25℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반한 후, 반응 혼합물을 0℃에서 물 (50 mL)로 희석하고 DCM (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 HCl (1 M)로 pH 6으로 조정하고, 염수 (3 × 50 mL) 및 물 (3 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켜 tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(디메틸카바모일)피페라진-1-카복실레이트 (345 mg, 428 μmol, 2개의 단계 94.2 % 수율, 88.0 % 순도)을 황색 반-고체로서 수득했다. ESI MS m/z 710.3 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(디메틸카바모일)피페라진-1-카복실레이트: MeOH (5.00 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(디메틸카바모일)피페라진-1-카복실레이트 (345 mg, 486 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (80.0 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (15 Psi) 하에서 25℃에서 8시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축 건조시켜 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(디메틸카바모일)피페라진-1-카복실레이트 (197 mg, 조물질)을 갈색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 620.3 [M+H]+.
단계 D: 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-N,N-디메틸-피페라진-2-카복사미드: DCM (5.00 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(디메틸카바모일)피페라진-1-카복실레이트 (197 mg, 조물질)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 1.61 mL)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고 25℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.05 % HCl) - ACN]; B %: 10 % - 30 %, 7.8분)으로 정제했다. 수집된 수성상을 동결건조시켜 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-N,N-디메틸-피페라진-2-카복사미드 (90.0 mg, 171 μmol, 53.1 % 수율, 99.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 520.2 [M+H]+.
단계 E: 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-N,N-디메틸-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-카복사미드: DMAC (500 μL) 중 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-N,N-디메틸-피페라진-2-카복사미드 (70.0 mg, 135 μmol, 1.00 eq)의 용액에 트리에틸아민 (40.9 mg, 404 μmol, 56.0 μL, 3.00 eq)을 0℃에서 첨가하고 그 다음 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (2.55 mg, 20.2 μmol, 0.15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 수집된 유기상을 분취 HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 μ; 이동상: [물 (0.1 % TFA)-ACN]; B %: 15 % - 45 %, 12분)으로 정제했다. 수집된 수성상을 동결건조시켜 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-N,N-디메틸-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-카복사미드 (10.0 mg, 16.5 μmol, 12.2 % 수율, 94.6 % 순도)을 황색 반고체로서 수득했다. ESI MS m/z 574.2 [M+H]+.
실시예 52
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4-[7- 벤질 -2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]-6,8- 디하이드로 - 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (40.0 mL) 중 2-(1-피페리딜)에탄올 (872 mg, 6.75 mmol, 899 μL, 3.00 eq)의 용액에 Pd(OAc)2 (50.5 mg, 225 μmol, 0.10 eq), Cs2CO3 (2.20 g, 6.75 mmol, 3.00 eq), BINAP (280 mg, 450 μmol, 0.20 eq) 및 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.00 g, 2.25 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반하고 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (10.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM /MeOH = 10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.30 mmol, 58.0 % 수율)을 적색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 537.3 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 4-[2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일] 피페라진-1- 카복실레이트: MeOH (50.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.12 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 Pd/C (67.2 mg, 10 %)을 첨가했다. 혼합물을 40℃에서 24시간 동안 50 psi에서 H2 하에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했고 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다. ESI MS m/z 447.3 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (6.00 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg) 및 (3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (343 mg, 1.12 mmol)의 용액에 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (52.3 mg, 112 μmol), Pd2(dba)3 (32.19 mg, 55.98 μmol) 및 Cs2CO3 (548 mg, 1.68 mmol)을 첨가했다. 110℃에서 72시간 동안 N2 하에서 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 물 (20.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 232 μmoL, 2개의 단계, 41.5 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 603.3 [M+H]+.
단계 D: 7-(3- 메톡시 -1- 나프틸 )-4-피페라진-1-일-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘: DCM (1.00 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 199 μmol, 1.00 eq) 및 TFA (340 mg, 2.99 mmol, 221 μL, 15.0 eq)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 비스-트리플루오로아세테이트 (145 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. ESI MS m/z 503.3 [M+H]+.
단계 E: 1-[4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 비스-트리플루오로아세테이트 (145 mg, 조물질) 및 Et3N (221 mg, 2.18 mmol, 303 μL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (25.0 mg, 198 μmol)을 -78 ℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물 MeOH로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 1-[4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (90.0 mg, 162 μmol, 2개의 단계 81.5 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 557.3 [M+H]+.
단계 F: 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 1-[4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (90.0 mg, 162 μmol, 1.00 eq)의 용액에 BBr3 (405 mg, 1.62 mmol, 156 μL, 10.0 eq)을 -78 ℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 -78℃에서 켄칭하고 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 40.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%,10분)로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (6.19 mg, 10.8 μmol, 6.71 % 수율, 95 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 543.2 [M+H]+.
실시예 53
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 1- tert -부틸 3- 메틸 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트: DMSO (50.0 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘 (3.00 g, 10.2 mmol, 1.00 eq), 1-tert-부틸-3-메틸 피페라진-1,3-디카복실레이트 (2.62 g, 10.7 mmol, 1.05 eq), DIEA (3.30 g, 25.5 mmol, 4.45 mL, 2.50 eq)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지했다. 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 DCM (200 mL)로 희석하고, 염수 (3 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1 내지 3:1)로 정제하여 1-tert-부틸 3-메틸 4-(7-벤질-2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (2.10 g, 3.81 mmol, 37.4 % 수율, 91.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 502.1 [M+H]+.
단계 B: 1-tert-부틸 3-메틸4-(7-벤질-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트: 톨루엔 (60.0 mL) 중 1-tert-부틸 3-메틸 4-(7-벤질-2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (2.10 g, 4.17 mmol, 1.00 eq), 2-(디메틸아미노)에탄올 (929 mg, 10.4 mmol, 1.04 mL, 2.50 eq), Pd(OAc)2 (140 mg, 625 μmol, 0.15 eq), BINAP (519 mg, 833 μmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (3.39 g, 10.4 mmol, 2.50 eq)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지하고, 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 30:1 내지 10:1)로 정제하여 1-tert-부틸 3-메틸4-(7-벤질-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (1.30 g, 1.67 mmol, 40.0 % 수율, 71.4 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 555.3 [M+H]+.
단계 C: 1-tert-부틸 3-메틸 4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1,3-디카복실레이트: MeOH (15.0 mL) 중 1-tert-부틸 3-메틸 4-(7-벤질-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (1.30 g, 2.34 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (300 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 수소로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 수소 (50 Psi) 하에서 45℃에서 48시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축하여 1-tert-부틸 3-메틸 4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1,3-디카복실레이트 (780 mg, 조물질)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 D: 1-tert-부틸 3-메틸 4-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트: 디옥산 (20.0 mL) 중 1-tert-부틸 3-메틸 4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (780 mg, 조물질), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (684 mg, 2.18 mmol), Pd2(dba)3 (231 mg, 252 μmol), Cs2CO3 (1.37 g, 4.20 mmol) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시바이페닐 (RuPhos) (157 mg, 336 μmol)의 혼합물을 탈가스하고 질소로 3회 퍼지했다. 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 10:1 내지 5:1)로 정제하여 1-tert-부틸 3-메틸 4-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (750 mg, 1.02 mmol, 2개의 단계 43.6 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 - 7.31 (m, 8H), 7.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.75 (br s, 1H), 4.45 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.42 - 4.34 (m, 1H), 4.34 - 4.28 (m, 1H), 4.15 (br s., 2H), 4.13 - 3.91 (m, 1H), 3.85 - 3.70 (m, 5H), 3.49 - 3.33 (m, 2H), 3.31 - 3.07 (m, 2H), 2.99 (br s, 1H), 2.83 - 2.68 (m, 3H), 2.35(s, 6H), 1.48 (s, 9H).
단계 E: 메틸 1-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카복실레이트: DCM (5.00 mL) 중 1-tert-부틸 3-메틸 4-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1,3-디카복실레이트 (200 mg, 287 μmol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (770 mg, 6.75 mmol, 500 μL, 23.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (100 mL) 및 물 (50 mL)에 용해시키고 용액을 포화 Na2CO3 수성물로 pH 8로 조정하고 그 다음 DCM (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 메틸 1-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카복실레이트 (171 mg, 263 μmol, 91.6 % 수율, 91.7 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 597.2 [M+H]+.
단계 F: (1-(7-(3-(벤질옥시) 나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)메탄올: THF (5.00 mL) 중 메틸 1-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카복실레이트 (171 mg, 287 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 LiAlH4 (65.3 mg, 1.72 mmol, 6.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 2시간 동안 교반한 후 25℃에서, 반응 혼합물을 물 (30 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, DCM (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 30 mL)로 세정했다. 수집된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 (1-(7-(3-(벤질옥시) 나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)메탄올 (160 mg, 281 μmol, 98.2 % 수율, 100 % 순도)을 무색 반고체로서 수득했다. ESI MS m/z 569.2 [M+H]+.
단계 G: 2-((7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-4-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸에탄아민: THF (5.00 mL) 중 (1-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸 아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)메탄올 (160 mg, 281 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NaH (94.0 mg, 2.35 mmol, 60.0 % 순도, 8.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 30분 동안 교반한 후, tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (133 mg, 881 μmol, 108 μL, 3.00 eq)을 적가했다. 혼합물을 25℃에서 6 시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 2-((7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-4-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸에탄아민 (133 mg, 165 μmol, 56.1 % 수율, 84.6 % 순도)을 누르스름한 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 683.2 [M+H]+.
단계 H: 1-(4-(7-(3-(벤질옥시) 나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: DCM (3.00 mL) 중 2-((7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일)-4-(2-(((tert-부틸 디메틸실릴)옥시)메틸)피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸에탄아민 (133 mg, 165 μmol, 1.00 eq) 및 TEA (39.4 mg, 389 μmol, 54.0 μL, 2.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (31.9 mg, 253 μmol, 1.30 eq)을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 MeOH (1 M)로 켄칭하고 감압 하에서 농축하여 1-(4-(7-(3-(벤질옥시) 나프탈렌-1-일)-2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (140 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 737.2 [M+H]+.
단계 I: 1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: DCM (5.00 mL) 중 1-(4-(7-(3-(벤질옥시)나프탈렌-1-일) -2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (140 mg, 조물질)의 용액에 BBr3 (476 mg, 1.90 mmol, 183 μL)을 -40℃에서 첨가했다. 2시간 동안 -40℃에서 질소 분위기 하에서 교반한 후, 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 물 (0.5 mL) 및 MeOH (2.5 mL)을 첨가하고 수득한 용액을 분취 HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3) - ACN]; B %: 27 % - 57 %, 11분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (4.32 mg, 7.94 μmol, 4.18 % 수율, 97.9 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 533.4 [M+H]+.
실시예 54
1-[4-[7-(3-아미노-1-이소퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4- 하이드록시 -6,8- 디하이드로 -5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: EtOH (400 mL) 중 Na (4.24 g, 184 mmol, 4.37 mL, 2.50 eq)의 용액에 1-tert-부틸 4-에틸 3-옥소피페리딘-1,4-디카복실레이트 (20.0 g, 73.7 mmol, 1.00 eq) 및 아세트산 메탄이미드아미드 (11.5 g, 111 mmol, 1.50 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (1N)로 pH 7로 조정하고, DCM (3 × 200 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 400 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-하이드록시-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (16.0 g, 63.7 mmol, 86.4 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 274.0 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 4-(4- 벤질옥시카보닐피페라진 -1-일)-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트: DMF (4.00 mL) 중 tert-부틸 4-하이드록시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-7-카복실레이트 (16.0 g, 63.7 mmol, 1.00 eq)의 용액에 DBU (29.1 g, 191 mmol, 28.8 mL, 3.00 eq) 및 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PYBOP) (39.8 g, 76.4 mmol, 1.20 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (21.0 g, 95.5 mmol, 18.5 mL, 1.50 eq)을 첨가하고 반응 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석하고 물 (3 × 400 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디에틸 에테르/에틸 아세테이트 = 1:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.00 g, 4.41 mmol, 6.93 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 454.3 [M+H]+.
단계 C: DCM (2.00 mL) 중 tert-부틸 4-(4-벤질옥시카보닐피페라진-1-일)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.20 g, 2.65 mmol, 1.00 eq) 및 TFA (4.53 g, 39.7 mmol, 2.94 mL, 15.0 eq)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 농축된 물질을 포화 aq. NaHCO3로 pH 8로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 2.26 mmol, 85.4 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 354.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 4-[7-[3-( tert - 부톡시카보닐아미노 )-1- 이소퀴놀릴 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DMSO (3.00 mL) 중 tert-부틸 N-(1-브로모-3-이소퀴놀릴)카바메이트 (330 mg, 1.02 mmol, 1.00 eq), DIEA (264 mg, 2.04 mmol, 357 μL, 2.00 eq) 및 벤질 4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (541 mg, 1.53 mmol, 1.50 eq)의 혼합물을 80℃에서 10시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 칼럼 (TFA, 0.1 %)로 정제하여 벤질 4-[7-[3-(tert-부톡시카보닐아미노)-1-이소퀴놀릴]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 665 μmol, 65.2 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 596.3 [M+H]+.
단계 E: ter t -부틸 N -[1-(4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -7-일) -3- 이소퀴놀릴 ] 카바메이트 : H2O (2.40 mL) 및 n-부틸 알코올 (2.40 mL) 중 벤질 4-[7-[3-(tert-부톡시카보닐아미노)-1-이소퀴놀릴]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 403 μmol, 1.00 eq), KOH (36.2 mg, 645 μmol, 1.60 eq)의 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 희석하고, 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 N-[1-(4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일) -3-이소퀴놀릴]카바메이트 (150 mg, 325 μmol, 80.7 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 462.3 [M+H]+.
단계 F: 1-(4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -7-일)이소퀴놀린-3-아민 트리플루오로아세테이트: DCM (360 μL) 중 tert-부틸 N-[1-(4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일)-3-이소퀴놀릴]카바메이트 (150 mg, 325 μmol, 1.00 eq) 및 TFA (556 mg, 4.87 mmol, 361 μL, 15.0 eq)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 1-(4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일)이소퀴놀린-3-아민 트리플루오로아세테이트 (154.52 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 G: 1-[4-[7-(3-아미노-1- 이소퀴놀릴 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 1-(4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-7-일)이소퀴놀린-3-아민 트리플루오로아세테이트 (150 mg, 조물질) 및 Et3N (319 mg, 3.15 mmol, 437 μL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (31.8 mg, 252 μmol)을 -40℃에서 첨가하고, 그 다음 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 MeOH (20.22 mg, 630.96 μmol)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 분취 HPLC (Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 26%-56%,10분)로 정제하여 1-[4-[7-(3-아미노-1-이소퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (35.4 mg, 82.5 μmol, 26.2 % 수율, 96.8 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 416.3 [M+H]+.
실시예 55
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)-3-하이드록시프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)프로판-1,3-디올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 533.3[M+H]+.
실시예 56
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-모폴리노프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-모폴리노프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]+.
실시예 57
(S)-5-(((4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-2-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (S)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 58
(R)-5-(((4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-2-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.2 [M+H]+.
실시예 59
N-(2-((4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)에틸)아세트아미드
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 N-(2-하이드록시에틸)아세트아미드를 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 60
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)부탄-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(디메틸아미노)부탄-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]+.
실시예 61
(S)-6-(((4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피페리딘-2-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 6-(하이드록시메틸)피페리딘-2-온을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했고 생성물을 키랄 크로마토그래피로 분리했다. 피크 2는 (S) 입체화학으로 주어지고 이것은 확인되지 않았다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 62
(R)-6-(((4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피페리딘-2-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 6-(하이드록시메틸)피페리딘-2-온을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했고 키랄 크로마토그래피로 분리했다. 피크 1은 (R) 입체화학으로 지정되지만, 이러한 입체화학은 확인되지 않았다. ES+APCI MS m/z 543.2 [M+H]+.
실시예 63
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-((R)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-((R)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 64
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-((S)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-((S)-3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 65
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-((S)-3-하이드록시피롤리딘-1-일)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-((S)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-1-일)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]+.
실시예 66
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-3-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (S)-1-메틸피페리딘-3-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 67
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-3-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-메틸피페리딘-3-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 68
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 1-아이오도나프탈렌을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]+.
실시예 69
1-(4-(7-(이소퀴놀린-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 4-브로모이소퀴놀린을 사용하여 실시예 1의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 401.2 [M+H]+.
실시예 70
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-(메틸아미노)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 503.3 [M+H]+.
실시예 71
1-(4-(7-(2-하이드록시-1-페닐에틸)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 대신에 2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-페닐에틸 메탄설포네이트를 사용하여 실시예 1의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 394.2 [M+H]+.
실시예 72
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (1-메틸피페리딘-3-일)메탄올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 73
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)프로판-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.2 [M+H]+.
실시예 74
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]+.
실시예 75
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(피페리딘-1-일)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(피페리딘-1-일)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]+.
실시예 76
(R)-1-(4-(7-(3-클로로-5-하이드록시-2-이소프로필페닐)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 1-브로모-3-클로로-2-이소프로필-5-(메톡시메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]+.
실시예 77
1-(4-(2-(2-((1S,4R)-2-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-((1S,4R)-2-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 555.2 [M+H]+.
실시예 78
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(5-하이드록시-2-(트리플루오로메톡시)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-4-(메톡시메톡시)-1-(트리플루오로메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]+.
실시예 79
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(5-하이드록시-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-4-(메톡시메톡시)-1-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 535.2 [M+H]+.
실시예 80
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((4-메틸피페라진-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (4-메틸피페라진-2-일)메탄올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 544.3 [M+H]+.
실시예 81
1-(2-((4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)에틸)피페리딘-4-카보니트릴
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 1-(2-하이드록시에틸)피페리딘-4-카보니트릴을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 568.2 [M+H]+.
실시예 82
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-(4-메틸피페라진-1-일)프로판-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 572.4 [M+H]+.
실시예 83
1-(4-(2-(2-((2-하이드록시에틸)(메틸)아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-((2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)(메틸)아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 533.3 [M+H]+.
실시예 84
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(2-플루오로-6-하이드록시-3-메틸페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-3-플루오로-1-(메톡시메톡시)-4-메틸벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 499.3 [M+H]+.
실시예 85
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(피롤리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(피롤리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.2 [M+H]+.
실시예 86
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(2-하이드록시-5-(트리플루오로메톡시)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-1-(메톡시메톡시)-4-(트리플루오로메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]+.
실시예 87
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-플루오로-2-하이드록시-6-메틸페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-4-플루오로-3-(메톡시메톡시)-1-메틸벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 499.2 [M+H]+.
실시예 88
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(2-메틸피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (S)-2-(2-메틸피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 557.2 [M+H]+.
실시예 89
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (1-메틸피롤리딘-3-일)메탄올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 90
1-(4-(7-(5-하이드록시-2-(트리플루오로메톡시)페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1-올을 사용하고, 단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-4-(메톡시메톡시)-1-(트리플루오로메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 593.2 [M+H]+.
실시예 91
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시-5-(트리플루오로메톡시)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 3-브로모-1-(메톡시메톡시)-5-(트리플루오로메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]+.
실시예 92
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(4-메틸피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(4-메틸피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 557.2 [M+H]+.
실시예 93
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((4-모폴리노부탄-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 4-모폴리노부탄-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 94
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(5-하이드록시-2-메톡시페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 3-브로모-1-(메톡시메톡시)-4-메톡시벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 497.2 [M+H]+.
실시예 95
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(2-하이드록시-6-메틸페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-1-(메톡시메톡시)-3-메틸벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 481.2 [M+H]+.
실시예 96
1-(4-(7-(5-하이드록시-2-이소프로폭시페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1-올을 사용하고, 단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-4-(메톡시메톡시)-1-(이소프로폭시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
실시예 97
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(2-메틸피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-2-(2-메틸피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 557.3
실시예 98
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(3-메톡시피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (S)-2-(3-메톡시피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]+.
실시예 99
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(3-메톡시피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-2-(3-메톡시피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]+.
실시예 100
1-(4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (1-사이클로프로필피페리딘-4-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 555.3 [M+H]+.
실시예 101
1-(4-(2-(3-(1,4-옥사제판-4-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (3-(1,4-옥사제판-4-일)프로판-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 102
1-(4-(2-(3-(1,4-옥사제판-4-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디에틸아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]+.
실시예 103
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-3-일)메탄올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 104
1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 105
1-(4-(7-(5-하이드록시-2-메틸페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1-올을 사용하고 단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-4-(메톡시메톡시)-1-메틸벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 523.3 [M+H]+.
실시예 106
1-(4-(7-(4-하이드록시-2-(트리플루오로메톡시)페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1-올을 사용하고, 단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 2-브로모-5-(메톡시메톡시)-1-(트리플루오로메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 593.2 [M+H]+.
실시예 107
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 547.3 [M+H]+.
실시예 108
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(4-메톡시피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(4-메톡시피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 109
1-(4-(2-(2-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 579.2 [M+H]+.
실시예 110
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-(1-메틸피롤리딘-3-일)메탄올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 111
(S)-1-(4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (S)-2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 561.3 [M+H]+.
실시예 112
1-(4-(7-(3-(디플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1-올을 사용하고 단계 D에서 (3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 대신에 1-브로모-3-(디플루오로메틸)나프탈렌 (0.129 g, 0.503 mmol)을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 593.2 [M+H]+.
실시예 113
4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-7,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-6(5H)-온
단계 A: tert -부틸 4-(6- 플루오로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1- 카복실레이트: DCM (20 mL) 중 4-클로로-6-플루오로피리도[3,4-d]피리미딘 (1.07 g, 5.83 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (2.09 mL, 11.7 mmol) 이어서 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (1.19 g, 6.41 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 tert-부틸 4-(6-플루오로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다 (1.8 g, 92.6%) ES+APCI MS m/z 334.1 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 4-(6- (벤질옥시)피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: DMA (10 mL) 중 페닐메탄올 (0.65 g, 6.0 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.24 g, 6.0 mmol)을, 질소로 탈가스하면서 나누어서 첨가하고 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반했다. 반응에 tert-부틸 4-(6-플루오로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.0 g, 3.0 mmol)을 고체로서 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 물 (300 mL)에 부었고 수성층을 에틸 아세테이트로 추출했다. 유기층을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 조 물질을, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/DCM의 구배를 용출액으로 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 tert-부틸 4-(6-(벤질옥시)피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.4 g, 0.95 mmol, 32 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 422.2 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 4-(6-옥소-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 질소로 퍼지된 95% 에탄올 (30 mL) 중 tert-부틸 4-(6-(벤질옥시)피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.40 g, 0.95 mmol)의 용액에 Pd/C (0.10 g, 0.95 mmol)을 첨가했다. 반응을 진공처리하고 수소를 3회 다시 충전했다. 세 번째 역충전 후, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반했다. 반응을 질소로 다시 탈가스하고, 슬러리 Celite®를 통해 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켜 tert-부틸 4-(6-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.4g, 126%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 334.4 [M+H]+.
단계 D: tert-부틸 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (4 mL) 중 tert-부틸 4-(6-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.28 g, 0.84 mmol)의 용액에 밀봉 튜브에서 인산칼륨 (0.36 g, 1.7 mmol), N1,N2-디메틸에탄-1,2-디아민 (0.074 g, 0.84 mmol) 및 1-아이오도-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 (0.53 g, 1.7 mmol)을 첨가했다. 반응로 20분 동안 아르곤을 살포하고, 이어서 구리(I) 아이오다이드 (0.16 g, 0.84 mmol)을 첨가했다. 반응 용기를 밀봉하고 밤새 100℃로 가열했다. 반응을 물로 희석하고 수성층을 에틸 아세테이트 (2 x 150 mL)로 추출했다. 유기물을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/DCM의 구배를 용출액으로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 tert-부틸 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 0.58 mmol, 69 % 수율)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 520.2 [M+H]+.
단계 E: 7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-4-(피페라진-1-일)-7,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -6(5H)-온: 메탄올 (10 mL) 중 tert-부틸 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-6-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 0.58 mmol)의 용액에 수성 염화수소 (0.38 mL, 2.3 mmol)을 첨가하고 반응을 밤새 50℃에서 교반했다. 반응을 진공에서 농축시켜 7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-7,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-6(5H)-온을 bis HCl 염으로서 얻었다 (0.26g, 100%). ES+APCI MS m/z 376.1 [M+H]+.
단계 F: 4-(4- 아크릴로일피페라진 -1-일)-7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-7,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-6(5H)-온: DCM/아세토니트릴의 1:1 용액 (10 mL) 중 7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-7,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-6(5H)-온 디하이드로클로라이드 (0.26 g, 0.58 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.45 g, 3.5 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (0.052 g, 0.58 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 물질을 역분취 HPLC (5 내지 95% ACN/물의 구배 사용)로 정제하여 4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-7,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-6(5H)-온 (0.038 g, 0.088 mmol, 15 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 430.2 [M+H]+.
실시예 114
4-(6-아크릴로일-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-7,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-6(5H)-온
단계 B에서 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (1.19 g, 6.41 mmol) 대신에 tert-부틸 2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트 하이드로클로라이드 (305 mg, 1.54 mmol)을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 442.2 [M+H]+
실시예 115
1-((S)-4-(2-(((R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 1-피페라진카복실레이트 대신에 벤질 (S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 (1.155 g, 4.931 mmol)을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]+.
실시예 116
(S)-1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A에서 벤질 1-피페라진카복실레이트 대신에 벤질 (S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 (1.155 g, 4.931 mmol)을 사용하고, 또한, 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-(디메틸아미노)에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
실시예 117
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-모폴리노에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 2-모폴리노에탄-1-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 545.2 [M+H]+.
실시예 118
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-모폴리노-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 모폴린을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]+.
실시예 119
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(피롤리딘-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 파이롤리딘을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 485.2 [M+H]+.
실시예 120
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(피롤리딘-1-일)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(피롤리딘-1-일)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]+.
실시예 121
4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,7-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-8(5H)-온
단계 A: Tert-부틸 2,4-디클로로-8-옥소-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트. 둥근바닥 플라스크에 tert-부틸 2,4-디클로로-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트 (1.0 g, 3.29 mmol) 및 EtOAc (16.4 mL)을 첨가했다. 물 (16.4 mL) 중 나트륨 퍼아이오데이트 (2.11 g, 9.86 mmol)의 용액을 첨가했다. 루테늄 (III) 클로라이드 (0.102 g, 0.493 mmol)을 첨가하고 혼합물을 교반하고 느슨하게 캡핑하고 6시간 동안 주위 온도에서 격렬하게 교반했다. 혼합물을 물과 EtOAc 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 수성층을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추가로 추출하고 조합된 추출물을 염수로 세정하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (CH2Cl2로 장입하는 10-30% EtOAc/헥산)를 통해 정제하여 0.864 g (82%)의 생성물을 황백색 고체로서 수득했다.
단계 B: Tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-클로로-8-옥소-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트. CH2Cl2 (5.0 mL) 중 tert-부틸 2,4-디클로로-8-옥소-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.400 g, 1.26 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.325 g, 2.51 mmol) 이어서 벤질 1-피페라진카복실레이트 (0.255 mL, 1.32 mmol)을 첨가하고 반응을 주위 온도에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고 0.5M KHSO4 용액 (5 mL), 이어서 포화 수성 NaHCO3 용액 및 염수로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물을 10 mL MTBE에서 초음파처리하고 수득한 고체를 진공 여과로 단리했다. 고체를 진공에서 건조시켜 0.507 g (80%)의 원하는 생성물을 황백색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 502.1[M+H]+.
단계 C: 벤질 4-(2-클로로-8-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. CH2Cl2 (1.0 mL) 중 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-클로로-8-옥소-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.255 g, 0.5080 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 트리플루오로아세트산 (0.3890 mL, 5.080 mmol)을 첨가하고 혼합물을 주위 온도로 가온시켰다. 1시간 후, 혼합물을 CH2Cl2로 희석하고 염수 (10 mL)와 3.0 M 수성 NaOH (1.7 mL, 5.080 mmol)의 혼합물을 첨가했다. 층을 조합하고 포화 수성 NaHCO3 용액으로 pH 8로 조정했다. 층을 분리하고 수성상을 2×10 mL의 CH2Cl2로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 표제 화합물 (0.223 g, quant.)을 황색/오렌지색 포움으로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 402.1[M+H]+.
단계 D: 벤질 4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-8-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 바이알에 N-하이드록시프로파닐모폴린 (0.687 g, 4.73 mmol) 및 벤질 4-(2-클로로-8-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.190 g, 0.473 mmol) 이어서 디옥산 (1.6 mL)을 첨가했다. 탄산세슘 (0.462 g, 1.42 mmol)을 첨가하고 혼합물을 65℃에서 15시간 동안 교반했다. 혼합물을 CHCl3로 희석하고 여과하고, 고체를 추가의 CHCl3로 세정했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (1% NH4OH를 갖는 2-10% MeOH/DCM)로 정제하여 0.061 g (25%)의 원하는 생성물을 농후한, 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 511.2[M+H]+.
단계 E: 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-8-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 바이알에 벤질 4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-8-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.060 g, 0.12 mmol), N,N'-디메틸에틸렌디아민 (0.010 g, 0.12 mmol) 및 1-아이오도-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 (0.074 g, 0.24 mmol) 이어서 디옥산 (0.78 mL) 및 인산칼륨 삼염기성 (0.050 g, 0.24 mmol)을 첨가했다. 반응을 거품발생 Ar로 10분 동안 퍼지하고, 그 다음 구리 (I) 아이오다이드 (0.022 g, 0.12 mmol)을 첨가하고 바이알을 밀봉했다. 혼합물을 110℃로 가열하고 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 물로 희석하고 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (2-8% MeOH/DCM)를 통해 정제하여 0.062 g (76%)의 생성물을 황갈색 포움으로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 697.3[M+H]+.
단계 F: 7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-4-(피페라진-1-일)-6,7-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-8(5H)-온. EtOH (0.44 mL) 및 THF (0.44 mL) 중 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-8-옥소-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.062 g, 0.089 mmol)의 용액에 탄소상 팔라듐 (0.038 g, 0.018 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 수소의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을 주위 온도에서 1.5시간 동안 교반하고, 그 다음 45℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고 나일론 필터를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시켜 밝은 황갈색 포움 (0.052g)을 제공하고, 이것을 밤새 건조시키고 상기의 동일한 반응 조건에 다시 제공했다. 주위 온도에서 5시간 동안 교반한 후, 추가의 Pd/C (0.050 g)을 첨가하고 반응을 주위 온도에서 추가 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고 나일론 필터를 통해 여과했다. 고체를 EtOAc 및 MeOH로 세정하고 여과물을 진공에서 농축시켜 0.029 g (58%)의 원하는 생성물을 밝은 황갈색 포움으로서 제공했다. ES+APCI MS m/z 563.3[M+H]+.
단계 G: 4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,7-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-8(5H)-온. CH2Cl2 (0.50 mL) 중 7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-4-(피페라진-1-일)-6,7-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-8(5H)-온 (0.028 g, 0.050 mmol)의 용액에 -78 ℃에서 트리에틸아민 (0.014 mL, 0.100 mmol)을 첨가했다. 아크릴로일 클로라이드 (0.55 mL, 0.055 mmol, 새롭게 제조된 0.1M CH2Cl2)을 첨가하고 반응을, 그 다음 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 CHCl3로 희석하고 포화 수성 NH4Cl 용액을 첨가했다. 층을 분리하고 수성층을 CHCl3 (2 x 10 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (4-6% MeOH/DCM)를 통해 정제하여 0.018 g (59%)로 정제하여 표제 화합물을 고체 황백색 포움으로서 제공하다. ES+APCI MS m/z 617.3[M+H]+.
단계 H: 4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,7-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-8(5H)-온. 1/1 MeOH/THF (0.6 mL) 중 4-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,7-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-8(5H)-온 (0.018 g, 0.0292 mmol)의 용액에 HCl (0.0486 mL, 0.292 mmol, 6 N 수성)을 첨가했다. 혼합물을 35℃에서 7시간 동안 교반했다. 혼합물을 염수로 희석하고 포화 수성 NaHCO3 용액으로 pH 8로 조정했다. 혼합물을 10% IPA/CHCl3 (2 x 10 mL) 및 CHCl3 (10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (6-10% MeOH/DCM)를 통해 정제하여 0.012 g (71%)의 생성물을 황백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 573.3[M+H]+.
실시예 122
(R,E)-4-(디메틸아미노)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온 비스-트리플루오로아세테이트
단계들 A-E: (R)-2-((7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판-1-아민을, 단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 (R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올을 사용하여 실시예 8, 단계 A 내지 단계 E의 방법에 따라 합성했다.
단계 F: (R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일) 옥시 )-4-(피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-일)나프탈렌-2-올 디하이드로클로라이드: DCM (2.9 mL) 중 (R)-2-((7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판-1-아민 (75 mg, 0.15 mmol)의 용액에 iPrOH 중 6N HCl (247 μl, 1.5 mmol)을 첨가하고 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 (R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-4-(피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-일)나프탈렌-2-올 디하이드로클로라이드를 제공하고, 이것을 다음 단계에서 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 463.2 [M+H]+.
단계 G: (R,E)-4-(디메틸아미노)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온 비스 - 트리플루오로아세테이트 : DCM (131 μl) 중 (R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-4-(피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-일)나프탈렌-2-올 디하이드로클로라이드 (7 mg, 0.01 mmol), HATU (6.2 mg, 0.02 mmol), (2E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (2.1 mg, 0.02 mmol), DIEA (6.9 μl, 0.04 mmol)의 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 잔류물을 여과하고 여과물을, 0.1% TFA 첨가제를 갖는 5-95% 아세토니트릴 / 물로 용출하는 Gilson C18 prep HPLC 상에 직접 장입했다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 농축시켜 (R,E)-4-(디메틸아미노)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온 비스-트리플루오로아세테이트를 제공했다. ES+APCI MS m/z 574.2 [M+H]+.
실시예 123
1-(4-(2-(2-하이드록시-3-모폴리노프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1,2-디올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]+.
실시예 124
(R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(4-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 (R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (221 mg, 0.345 mmol)을 ACN (2 mL)에 넣었고 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 셀렉트플루오르 (183 mg, 0.517 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 30분 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 역상 크로마토그래피 (0.1% TFA를 갖는 5-95% ACN:물)로 정제하여 벤질 (R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(4-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 트리플루오로아세테이트 (48 mg, 0.0729 mmol, 21.1 % 수율)을 제공했다.
단계 B: (R)-1-(4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(4-플루오로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 대신에(R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(4-플루오로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 트리플루오로아세테이트를 사용하여 실시예 33, 단계들 D-F에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 535.2 [M+H]+.
실시예 125
(R)-1-(4-(7-(4-클로로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 (R)-4-(2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (83 mg, 0.130 mmol) 및 NCS (21.6 mg, 0.162 mmol)을 ACN (2 mL)에 넣고 실온에서 3시간 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM (3x15 mL)로 추출했다. 유기층을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 역상 크로마토그래피 (0.1% TFA를 갖는 5-95% ACN:물)로 정제하여 벤질 (R)-4-(7-(4-클로로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 트리플루오로아세테이트 (17 mg, 0.0252 mmol, 19.4 % 수율)을 제공했다.
단계 B: (R)-1-(4-(7-(4-클로로-3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 D에서 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 대신에 (R)-4-(7-(4-클로로-3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 트리플루오로아세테이트를 사용하고 THF를 용매로서 사용하여 실시예 33, 단계들 D-F에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]+.
실시예 126
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트
단계 A: 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 0.35 mmol)의 슬러리에 마이크로웨이브에서 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.45 g, 3.5 mmol), Cs2CO3 (0.34 g, 1.0 mmol) 및 2-(피리딘-2-일)에탄-1-올 (0.43 g, 3.5 mmol)을 첨가하고 반응을 1시간 동안 마이크로웨이브에서 15℃로 가열했다. 반응을 EtOAc 및 물로 희석하고, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을, 용출액으로서 0 내지 100% EtOAc/DCM의 구배를 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.16 g, 0.24 mmol, 70 % 수율)을 수득했다.
단계 B: 4-(4-(피페라진-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일) 에톡시 )-5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-일)나프탈렌-2-올: 고체 벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.12 g, 0.18 mmol)에 MeOH (20 mL)을 첨가했다. 용액을 5분 동안 질소로 탈가스하고, 이어서 Pd/C (0.058 g, 0.54 mmol)을 첨가했다. 반응 용기를 진공처리하고 H2를 다시 충전했다. 이러한 절차를 3회 수행하고, 세 번째 역충전 후 슬러리를 수소의 분위기 하에서 1시간 동안 교반되도록 했다. 반응을 5분 동안 질소로 다시 탈가스했다. 슬러리를 그 다음 Celite®를 통해 여과하고 Celite®을 MeOH (100 mL)로 세정했다. 조합된 유기 추출물을 농축시키고 10 mL의 1:1 TFA/DCM로 2시간 동안 처리했다. 반응을 진공에서 다시 농축시켜 4-(4-(피페라진-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-일)나프탈렌-2-올 (0.096 g, 0.20 mmol, 110 % 수율)을 수득했다.
단계 C: 1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: DCM 중 4-(4-(피페라진-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-일)나프탈렌-2-올 (0.096 g, 0.20 mmol)의 용액에 휘니그 염기 (0.17 mL, 0.99 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (0.018 g, 0.20 mmol)을 첨가하고 반응을 30분 동안 실온에서 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 조 물질을 역분취 HPLC로 정제하여 1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(2-(피리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 트리플루오로아세테이트 (0.0057 g, 0.011 mmol, 5.3 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 537.2 [M+H]+.
실시예 127
(S)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘
단계 A: tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-카복실레이트 : DMA (263.0 ml, 26.30 mmol) 중 tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (8 g, 26.30 mmol)의 용액에 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (5.793 g, 26.30 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (4.721 ml, 26.30 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 2시간 동안 교반했다. TLC (20% EtOAc/DCM), UV 가시화는, 반응 완료를 나타내었다. 반응을 그 다음 물에 부었고 DCM에 추출했다. 유기물을 그 다음 물 (2x), 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 220g RegiSep 칼럼 상에 장입하고, CombiFlash (0%-10%, EtOAc:DCM) 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축하여 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (9.768 g, 20.02 mmol, 76.11 % 수율)을 백색 포움으로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 488.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트 : tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (9.768 g, 20.02 mmol)을 디클로로메탄 (200.2 ml, 20.02 mmol)에 용해시키고 2,2,2-트리플루오로아세트산 (15.33 ml, 200.2 mmol)로 처리했다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 그 다음 진공에서 농축시키고 EtOAc에 용해시키고 유기물을 1M NaOH (2X), 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 벤질 4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.406 g, 19.09 mmol, 95.39 % 수율)을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ES+APCI MS m/z 388.2 [M+H]+.
단계 C: 벤질 4-(2- 클로로 -7-(3-( 메톡시메톡시 )나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트, BINAP (0.275 g, 0.442 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.203 g, 0.221 mmol)에 아르곤 하에서 톨루엔 (221 ml, 11.1 mmol)을 첨가하고 반응에 10분 동안 Ar으로 거품을 일으키고 이어서 10분 동안 100℃로 가열했다. 반응을 그 다음 실온으로 냉각시키고 벤질 4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.29 g, 11.1 mmol) 및 나트륨 Tert-부톡시드 (2.13 g, 22.1 mmol)을 고체로서 어두운 용액에 첨가했다. 마지막으로, 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (7.44 g, 22.1 mmol)을 (오일로서)을 첨가하고 반응을 1시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 EtOAc로 용해시키고 물 및 염수로 세정했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을, 그 다음 CombiFlash 상에 장입하고 0%-->50% 헥산:EtOAc을 용출액으로 사용하여 크로마토그래피를 수행했다. 맑은 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.6 g, 4.53 mmol, 40.9 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 574.2 [M+H]+.
단계 D: 벤질 (S)-4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 마이크로웨이브 튜브에서 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 0.523 mmol)을 디옥산 (6532 μl, 0.523 mmol)에 용해시키고 탄산세슘 (511 mg, 1.57 mmol), 휘니그 염기 (913 μl, 5.23 mmol) 및 N-메틸-L-프롤리놀 (421 mg, 3.66 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 170℃에서 3시간 동안 마이크로파처리했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 잔류물을 12g RegiSep 골드 칼럼 상에 장입하고 CombiFlash (0%-15%, DCM:MeOH) 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 맑은 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜 벤질 (S)-4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (220 mg, 0.337 mmol, 64.5 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 653.3 [M+H]+.
단계 E: (S)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘: EtOH (3370 μl, 0.337 mmol) 및 THF (3370 μl, 0.337 mmol) 중 벤질 (S)-4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (220 mg, 0.337 mmol)의 용액을 5분 동안 N2로 퍼지했다. 이 용액에 탄소상 팔라듐 (179 mg, 0.0843 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 추가 5분 동안 N2로 퍼지했다. 용액, 그 다음 진공을 통해 도입된 H2 이어서 밸룬 압력 하에서 교반했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 밤새 교반했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시키고 (S)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (91 mg, 0.175 mmol, 52.1 % 수율)을 조물질로서 이월했다. ES+APCI MS m/z 519.3 [M+H]+.
단계 F: (S)-1-(4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (1774 μl, 0.18 mmol) 중 (S)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (92 mg, 0.18 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (1774 μl, 0.18 mmol) 이어서 휘니그 염기 (62 μl, 0.35 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 농축시키고 4g RegiSep 골드 칼럼 상에 장입하고 CombiFlash (0%-15%, DCM:MeOH) 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜 (S)-1-(4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (74 mg, 0.13 mmol, 73% 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
단계 G: (S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: (S)-1-(4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (74 mg, 0.13 mmol)을 메탄올 (4307 μl, 0.13 mmol)에 용해시키고 염화수소 (1077 μl, 6.5 mmol) (aq)로 처리했다. 반응을 55℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고 1.5mL의 MeOH에서 재현탁시켰다. 현탁액을 Gilson (prep HPLC) 상에 장입하고, 이것을 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 밤새 동결건조시켜 (S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (26 mg, 0.049 mmol, 38% 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 128
1-(4-(2-(3-(디메틸아미노)아제티딘-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-(2-(3-(디메틸아미노)아제티딘-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 0.35 mmol)의 용액에 N,N-디메틸아제티딘-3-아민 하이드로클로라이드 (0.24 g, 1.7 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.45 g, 3.5 mmol)을 첨가하고 반응을 72시간 동안 80C로 가열했다. 반응을 진공에서 농축시키고 잔류물을, 0-->20% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 벤질 4-(2-(3-(디메틸아미노)아제티딘-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.25g, 105%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 638.3 [M+H]+.
1-(4-(2-(3-(디메틸아미노)아제티딘-1-일)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 E에서 벤질 (S)-4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 4-(2-(3-(디메틸아미노)아제티딘-1-일)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 사용하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 514.2 [M+H]+.
실시예 129
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (2 R )-2-[(1 R )-1-하이드록시에틸] 파이롤리딘 -1- 카복실레이 트: THF (10 mL) 중 BH3-Me2S (10 M, 549 uL) 및 (3aS)-1-메틸-3,3-디페닐-3a,4,5,6-테트라하이드로피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤 (1.00 M, 844 uL,)의 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-아세틸파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.90 g, 4.22 mmol)의 용액을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (2.00 mL)의 첨가로 켄칭하고 반응을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에테르 아세테이트 = 50/1 - 5/1)로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-[(1R)-1-하이드록시에틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.60 g, 2.79 mmol, 66.0 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ = 5.18 (br s, 1H), 3.73 (dt, J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 3.70 - 3.43 (m, 2H), 3.28 (td, J = 6.64, 10.8 Hz, 1H), 1.96 (qd, J = 7.2, 12.8 Hz, 1H), 1.89 - 1.68 (m, 2H), 1.62 (br s, J = 6.4 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.15 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
단계 B: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (10 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.70 g, 1.08 mmol) 및 tert-부틸 (2R)-2-[(1R)-1-하이드록시에틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (349 mg, 1.62 mmol)의 용액에 t-BuONa (312 mg, 3.24 mmol)을 첨가하고 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 수성층을 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에테르 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.35 g, 412 umol, 38.1 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 799.4 [M+H]+.
단계 C: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)- 피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (0.42 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1- tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 375 umol) 및 TFA (642 mg, 5.63 mmol, 417 uL)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)- 피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (305 mg)를 수득했다. LCMS [M+1]: ES+APCI MS m/z 699.2 [M+H]+.
단계 D: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 메탄올 (3.00 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)- 피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 조물질), 포름알데하이드 (210 mg, 1.85 mmol, 192 uL, 37 % 물) 및 AcOH (22.16 mg, 369 umol, 21.1 uL)의 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 NaBH3CN (58.0 mg, 923 umol)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 48시간 동안 교반했다. 혼합물을 H2O (5 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 수성층을 에테르 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (15.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물(0.10 % 포름산)/아세토니트릴]로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.10 g, 126 umol)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 713.4 [M+H]+.
단계 E: 4-[2-[(1 R )-1-[(2 R )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 에톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올: 암모니아로 -78 ℃에서 30분 동안 메탄올 (3 mL)에 거품을 일으켰다. 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.09 g, 126 umol) 및 건조 10% Pd/C (0.10 g)을 그 다음 첨가하고 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 H2 (15 psi) 하에서 교반했다. 반응을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 4-[2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (0.04 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 489.2 [M+H]+.
단계 F: 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 4-[2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일] 에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (0.04 g) 및 Et3N (124 mg, 1.23 mmol, 171 uL)의 용액에 -40℃에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (7.23 mg, 57.3 umol)을 첨가하고 반응을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%포름산)-ACN]; B%: 10%-37% 10 분에 걸쳐)로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (9.13 mg, 15.5 umol)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]+.
실시예 130
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((S)-1-((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((S)-1-((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 A에서 (3aS)-1-메틸-3,3-디페닐-3a,4,5,6-테트라하이드로피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤 대신에 (3aR)-1-메틸-3,3-디페닐-3a,4,5,6-테트라하이드로 피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤을 사용하고, 한편 또한 단계 A에서 tert-부틸 (2R)-2-아세틸파이롤리딘-1-카복실레이트 대신에 tert-부틸 (2S)-2-아세틸파이롤리딘-1-카복실레이트를 사용하여 실시예 129에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]+.
실시예 131
1-[4-[2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: (2 R )-1-[ 에틸(메틸)아미노 ]프로판-2-올: (2R)-2-메틸옥시란 (540 mg, 9.31 mmol, 651 uL)을 MeOH (10 mL) 중 N-메틸에탄아민 (500 mg, 8.46 mmol, 725 uL)에 첨가했다. 수득한 용액을 80℃에서 3시간 동안 밀봉 튜브에서 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 (2R)-[에틸(메틸)아미노]프로판-2-올 (260 mg, 조물질)을 밝은 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 B: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (20 mL) 중 (2R)-1-[에틸(메틸)아미노]프로판-2-올 (217 mg, 1.85 mmol)의 용액에 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 617 umol), Pd2(dba)3 (56.6 mg, 61.8 umol), BINAP (76.9 mg, 124 umol) 및 NaOtBu (178 mg, 1.85 mmol,)을 첨가하고 혼합물을 15분 동안 N2로 탈가스하고 그 다음 16시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (110 mg, 153 umol, 24.8 % 수율, 97.5 % 순도)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 701.4 [M+H]+.
단계 C: 4-[2-[(1 R )-2-[ 에틸(메틸)아미노 ]-1- 메틸 - 에톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올: MeOH (3.00 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 143 umol)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 143 uL), 이어서 Pd(OH)2/C (50 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축시켜 4-[2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (76.0 mg, 125 umol, 87.5 % 수율, 90.3 % 순도, 2 HCl)을 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 477.2 [M+H]+.
단계 D: 1-[4-[2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (1.50 mL) 중 4-[2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (70 mg, 127 umol, 2 HCl) 및 DIEA (98.8 mg, 764 umol, 133 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (12.9 mg, 102 umol)을 - 50℃에서 적가했다. 혼합물을 -40 내지 -20℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (17.0 mg)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (1 mL)로 희석하고 DCM (3 × 6 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 48%-78%,10분)로 정제하여 1-[4-[2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (9.23 mg, 17.2 umol, 13.5 % 수율, 98.7 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]+.
실시예 132
1-[4-[2-[(1-사이클로헥실피롤리딘-3-일)메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 1- 사이클로헥실파이롤리딘 -3- 카복실레이트: 메틸 파이롤리딘-3-카복실레이트 (1.00 g, 6.04 mmol, HCl) 및 DIEA (780 mg, 6.04 mmol, 1.05 mL)의 용액에 사이클로헥산온 (652 mg, 6.64 mmol, 686 uL) 및 HOAc (725 mg, 12.1 mmol, 691 uL)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에 NaBH(OAc)3 (3.84 g, 18.12 mmol)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 반응 혼합물을 0 내지 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (5 mL)의 첨가로 켄칭하고 유기물 진공 하에서 농축했다. 수성층을 DCM (10 mL × 2)으로 추출하고 pH를 sat NaHCO3 (10 mL) 및 Na2CO3 (2 mL)로 pH>8로 조정했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 MTBE/석유 에테르 (1:3, 20 mL)로 분쇄하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 메틸 1-사이클로헥실파이롤리딘-3-카복실레이트 (1.00 g, 4.73 mmol, 78.4 % 수율)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 212.2 [M+H]+.
단계 B: (1- 사이클로헥실피롤리딘 -3-일)메탄올: THF (20 mL) 중 메틸 1-사이클로헥실파이롤리딘-3-카복실레이트 (1.00 g, 4.73 mmol)의 용액에 LiAlH4 (413 mg, 10.9 mmol)을 -10℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 -10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 (2 mL)의 첨가로 켄칭하고 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 THF (3 × 50 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공 하에서 농축하여 (1-사이클로헥실피롤리딘-3-일)메탄올 (800 mg, 4.36 mmol, 92.3 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.71 (dd, J = 4.1, 10.0 Hz, 1H), 3.53 (dd, J=4.4, 10.0 Hz, 1H), 2.90 (dt, J=4.4, 8.8 Hz, 1H), 2.74 (dd, J = 3.2, 8.8 Hz, 1H), 2.53 (dd, J = 6.8, 8.8 Hz, 1H), 2.36 - 2.24 (m, 2H), 2.04 - 1.93 (m, 2H), 1.90 (br s, 2H), 1.78 - 1.64 (m, 3H), 1.61 - 1.52 (m, 1H), 1.33 - 1.12 (m, 5H)
1-[4-[2-[(1-사이클로헥실피롤리딘-3-일)메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 (2R)-1-[에틸(메틸)아미노]프로판-2-올을 (1-사이클로헥실피롤리딘-3-일)메탄올로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 597.4 [M+H]+.
실시예 133
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로필아미노)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로필아미노)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DMSO (4.00 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 617 umol) 및 3-모폴리노프로판-1-아민 (534 mg, 3.70 mmol, 540 uL)의 용액을 12시간 동안 100℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 물 (4 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트/석유 에테르 (20→100%)로 용출하는 Al2O3상 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로필아미노)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (245 mg, 320 umol, 51.8 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 728.6 [M+H]+.
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로필아미노)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트을 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로필아미노)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 558.6 [M+H]+.
실시예 134
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(피페리딘-3-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (3 R )-3-( 하이드록시메틸 )피페리딘-1- 카복실레이트: TEA (1.76 g, 17.4 mmol, 2.42 mL)을 THF (25.0 mL) 중 [(3R)-3-피페리딜]메탄올 (1.0 g, 8.68 mmol)의 용액에 첨가하고, 이어서 THF (5 mL) 중 Boc2O (1.89 g, 8.68 mmol, 1.99 mL)의 용액을 15℃에서 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 제거하고 잔류물을 에틸 아세테이트 (50 ml) 및 H2O (30 mL)에 용해시켰다. 용액을 HCl (6 M)로 pH~6으로 산성화하고 층을 분리했다. 유기물을 염수 (3 × 50 mL)로 세정하고 조합된 유기물물 농축 건조시켜 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.68 g, 7.80 mmol, 89.9% 수율, 100% 순도)을 무색 결정으로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.73 (br s, 2H), 3.51 (br d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.05 (br s, 2H), 1.83 - 1.71 (m, 2H), 1.62 (br s, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.37 (m, 1H), 1.35 - 1.22 (m, 1H).
단계 B: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-tert-부톡시카보닐 -3-피페리딜]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (5 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸) 피페리딘-1-카복실레이트 (332 mg, 1.54 mmol)의 용액에 t-BuONa (223 mg, 2.32 mmol)을 첨가했다. THF (5 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸 설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 772 umol)의 용액을 그 다음 첨가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하고 잔류물을 석유 에테르/에틸 아세테이트 (10/1 내지 3/1)로 용출하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-tert-부톡시카보닐 -3-피페리딜]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (510 mg, 628 umol, 81.4% 수율, 98.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 799.4 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피페리딘-1-카복실레이트: MeOH (5 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-tert- 부톡시카보닐-3-피페리딜]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 313 umol)의 용액을 NH3 (10 %, w/w)으로 퍼지하고 그 다음 10% Pd/C (50 mg)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켜 tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피페리딘-1-카복실레이트 (126 mg, 211 umol, 67.4% 수율, 96.2% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 575.5 [M+H]+.
단계 D: tert-부틸(3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일 피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피페리딘-1-카복실레이트: DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸) -4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피페리딘-1-카복실레이트 (126 mg, 219 umol) 및 TEA (33.3 mg, 329 umol, 45.8 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (24.9 mg, 197 umol)을 -40℃에서 적가하고 반응을 30분 동안 -40℃에서 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (0.5 mL)의 첨가로 켄칭하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 EtOAc (50 mL) 및 H2O (20 mL)에 용해시켰다. 수득한 용액을 HCl (1 M)로 pH~6으로 산성화하고 층을 분리했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸(3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일 피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피페리딘-1-카복실레이트 (120 mg, 172 umol, 78.5% 수율, 90.2% 순도)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 629.6 [M+H]+.
단계 E: 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-3-피페리딜] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (3.0 mL) 중 tert-부틸(3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸) -4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피페리딘-1-카복실레이트 (120 mg, 191 umol)의 용액에 TFA (326 mg, 2.86 mmol, 212 uL)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 NH3 (물 중 30 %, 3방울)로 염기성화하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상:[물 (0.225% 포름산)-ACN]; B%: 5% - 35%,10분)로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-3-피페리딜] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (24.5 mg, 38.9 umol, 20.4% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 529.4 [M+H]+.
실시예 135
1-[4-[2-[3-(4-아세틸피페라진-1-일)프로폭시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 1-[4-(3- 하이드록시프로필 )피페라진-1-일] 에탄온: CH3CN (50.0 mL) 중 1-피페라진-1-일에탄온 (2.00 g, 15.6 mmol) 및 K2CO3 (4.31 g, 31.2 mmol)의 용액에 3-브로모프로판-1-올 (3.25 g, 23.4 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반했다. 고체를 여과하고 여과물을 증발시켜 1-[4-(3-하이드록시프로필)피페라진-1-일]에탄온 (2.00 g, 10.7 mmol, 68.8 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1-[4-[2-[3-(4-아세틸피페라진-1-일)프로폭시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트을 1-[4-(3-하이드록시프로필)피페라진-1-일]에탄온으로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 600.3 [M+H]+.
실시예 136
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 2-(3- 메톡시피롤리딘 -1-일)에탄올: CH3CN (10 mL) 중 3-메톡시파이롤리딘 (450 mg, 3.27 mmol, HCl) 및 2-브로모에탄올 (408 mg, 3.27 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.36 g, 9.81 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반했다. 고체를 여과하고 여과물을 증발시켜 2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에탄올 (450 mg, 3.10 mmol, 94.8 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
단계 B: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 771 umol), 2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에탄올 (224 mg, 1.54 mmol), 및 t-BuONa (222 mg, 2.32 mmol)의 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 pH~7까지 HCl(2M)을 첨가했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공에서 농축했다. 잔류물을 0→10% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (110 mg, 147.9 umol, 19.1 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 729.2 [M+H]+.
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트을 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]+.
실시예 137
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[3-(3-메톡시피롤리딘-1-일)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: (3- 메톡시피롤리딘 -1-일)프로판-1-올: CH3CN (10 mL) 중 3-메톡시파이롤리딘 (500 mg, 3.63 mmol, HCl) 및 3-브로모프로판-1-올 (505 mg, 3.63 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.51 g, 10.9 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 5시간 동안 교반했다. 고체를 여과하고 여과물을 증발시켜 3-(3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-1-올 (540 mg, 3.39 mmol, 93.3 % 수율)을 수득했다.
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[3-(3-메톡시피롤리딘-1-일)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 (2R)-1-[에틸(메틸)아미노]프로판-2-올을 (3-메톡시피롤리딘-1-일)프로판-1-올로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 138
1-[4-[2-[2-(3,3-디플루오로아제티딘-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 2-(3,3- 디플루오로아제티딘 -1-일)에탄올: CH3CN (10 mL) 중 3,3-디플루오로아제티딘（500 mg, 3.86 mmol, HCl ) 및 2-브로모에탄올 (482 mg, 3.86 mmol, 274 uL)의 용액에 K2CO3 (1.60 g, 11.5 mmol)을 첨가하고 반응을 80℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응을 여과하고 여과물을 증발시켜 2-(3,3-디플루오로아제티딘-1-일)에탄올 (300 mg, 2.19 mmol, 56.7 % 수율)을 수득했다.
1-[4-[2-[2-(3,3-디플루오로아제티딘-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 (2R)-1-[에틸(메틸)아미노]프로판-2-올을 2-(3,3-디플루오로아제티딘-1-일)에탄올로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 551.4 [M+H]+.
실시예 139
1-[4-[2-[2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 메틸 2-(3,3- 디플루오로피롤리딘 -1-일)아세테이트: 0℃로 냉각된 DCM (10 mL) 중 메틸 2-브로모아세테이트 (1.17 g, 7.67 mmol, 723 uL)의 현탁액에 TEA (1.76 g, 17.4 mmol, 2.42 mL) 및 3,3-디플루오로파이롤리딘 (1.00 g, 6.97 mmol, HCl)을 첨가하고 반응 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응을 여과하고 여과물을 증발시켰다. 잔류물을 0.5%-->20% MeOH/DCM을 용출물로서 갖는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)아세테이트 (580 mg, 3.24 mmol, 46.4 % 수율)을 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.73 (s, 3H), 3.38 (s, 2H), 3.11 (t, J = 13.6 Hz, 2H), 2.92 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.36-2.26 (m, 2H).
단계 B: 2-(3,3- 디플루오로피롤리딘 -1-일)에탄올: THF (5.0 mL) 중 LiAlH4 (184 mg, 4.86 mmol)의 용액에 THF (5.0 mL) 중 메틸 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)아세테이트 (580 mg, 3.24 mmol)의 용액을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃로 가온시키고 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 수성 황산나트륨 용액 (1.50 mL)의 첨가로 켄칭했다. 반응을 여과하고 여과된 것을 진공 하에서 농축하여 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)에탄올 (330 mg, 2.18 mmol, 67.4 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.64 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.97 (t, J = 13.2 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.49 (br. s, 1H), 2.34-2.24 (m, 2H).
1-[4-[2-[2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 (2R)-1-[에틸(메틸)아미노]프로판-2-올을 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)에탄올로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 565.3 [M+H]+.
실시예 140
2-[3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피롤리딘-1-일]-N,N-디메틸-아세트아미드
단계 A: 메틸 1-[2-(디메틸아미노)-2-옥소-에틸] 파이롤리딘 -3- 카복실레이트: ACN (200.0 mL) 중 메틸 파이롤리딘-3-카복실레이트 (1.00 g, 6.04 mmol, HCl) 및 NaHCO3 (1.01 g, 12.1 mmol, 470 uL)의 용액을 10℃에서 5분 동안 교반했다. ACN (5.00 mL) 중 2-브로모-N,N-디메틸-아세트아미드 (1.00 g, 6.04 mmol)의 용액을 그 다음 10℃에서 첨가하고 반응을 10℃에서 6 시간 동안 교반하고, 이어서 50℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고 고체를 DCM (3 × 15 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 0→10% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 메틸 1-[2-(디메틸아미노)-2-옥소-에틸]파이롤리딘-3-카복실레이트 (480 mg, 2.02 mmol, 33.4% 수율)을 수득했다.
단계 B: 2-[3-( 하이드록시메틸 ) 피롤리딘 -1-일]- N , N -디메틸-아세트아미드: THF (10 mL) 중 메틸 1-[2-(디메틸아미노)-2-옥소-에틸]파이롤리딘-3-카복실레이트 (500 mg, 2.33 mmol)의 용액에 LiAlH4 (203 mg, 5.36 mmol)을 -60℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 -60℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 (0.4 mL)의 첨가로 켄칭하고 슬러리를 여과했다. 필터 케이크를 THF (3 X 50 mL)로 세정하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[3-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-N,N-디메틸-아세트아미드 (400 mg, 2.15 mmol, 92.2% 수율)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 187.1 [M+H]+.
단계 C: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[1-[2-(디메틸아미노)-2-옥소-에틸]피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 772 umol), 2-[3-(하이드록시메틸)피롤리딘-1-일]-N,N-디메틸-아세트아미드 (216 mg, 1.16 mmol) 및 NaOBu-t (148 mg, 1.54 mmol)의 혼합물을 15℃에서 15분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 20→100% EtOAc/석유 에테르를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 직접 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[1-[2-(디메틸아미노)-2-옥소-에틸]피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (310 mg, 395 umol, 51.1% 수율, 98% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 770.4 [M+H]+.
2-[3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]피롤리딘-1-일]-N,N-디메틸-아세트아미드을, 단계 C에서 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-2-[에틸(메틸)아미노]-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트를 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[1-[2-(디메틸아미노)-2-옥소-에틸]피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 131에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 600.3 [M+H]+.
실시예 141
1-[4-[2-[[1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 메틸 파이롤리딘 -3- 카복실레이트: DCM (50 mL) 중 1-(tert-부틸) 3-메틸 파이롤리딘-1,3-디카복실레이트 (10.0 g, 43.6 mmol)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 109 mL)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 메틸 파이롤리딘-3-카복실레이트 (7.00 g, 조물질, HCl)을 갈색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 3.77 (s, 3H), 3.56 - 3.53 (m, 2H), 3.41 - 3.37 (m, 3H), 2.40 - 2.24 (m, 2H).
단계 B: 메틸 1-(2- 벤질옥시에틸 ) 파이롤리딘 -3- 카복실레이트: MeCN (60 mL) 중 메틸 파이롤리딘-3-카복실레이트 (3.0 g, 18.1 mmol, HCl), Cs2CO3 (17.7 g, 54.3 mmol) 및 KI (301 mg, 1.81 mmol)의 용액을 15℃에서 5분 동안 교반하고, 그 다음 ACN (15 mL) 중 2-브로모에톡시메틸벤젠 (4.67 g, 21.7 mmol, 3.43 mL)의 용액을 혼합물에 15℃에서 첨가하고 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 50℃로 가온시키고 50℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 DCM (3 × 30 mL)로 세정하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 10ACN%-40ACN%,30분 40%분)로 정제하여 메틸 1-(2-벤질옥시에틸)파이롤리딘-3-카복실레이트 (1.48 g, 5.06 mmol, 27.9 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.36 - 7.28 (m, 5H), 4.56 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.61 - 3.58 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.02 - 3.00 (m, 2H), 2.78 - 2.67 (m, 4H), 2.58 - 2.49 (m, 1H), 2.11 - 2.08 (m, 2H)
단계 C: (1-(2-( 벤질옥시 )에틸) 피롤리딘 -3-일)메탄올: THF (27 mL) 중 메틸 1-(2-벤질옥시에틸)파이롤리딘-3-카복실레이트 (1.38 g, 5.24 mmol)의 용액에 LiAlH4 (457 mg, 12 mmol)을 -10℃에서 첨가하고 -10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 (1 mL)로 켄칭하고 여과하고, 필터 케이크를 THF (5 × 30 mL)로 세정하고, 여과물을 진공 하에서 농축하여 (1-(2-(벤질옥시)에틸)피롤리딘-3-일)메탄올 (1.30 g, 3.31 mmol, 63.3% 수율, 60.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 236.1 [M+H]+.
1-[4-[2-[[1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에탄올을 (1-(2-(벤질옥시)에틸)피롤리딘-3-일)메탄올로 대체하여 실시예 136에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]+.
실시예 142
1-[4-[2-(2-하이드록시에톡시)-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
1-[4-[2-(2- 하이드록시에톡시 )-7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에탄올을 2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에탄올로 대체하여 실시예 136에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 476.2 [M+H]+.
실시예 143
1-[4-[2-(2,3-디하이드록시프로폭시)-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
1-[4-[2-(2,3-디하이드록시프로폭시)-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에탄올을 (2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올로 대체하여 실시예 136에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 506.3 [M+H]+.
실시예 144
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 벤질옥시메틸 ) 파이롤리딘 -1- 카복실레이트: THF (50 mL) 중 NaH (2.38 g, 59.6 mmol, 60% 순도)의 슬러이에 THF (50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (10 g, 49.69 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 브로모메틸벤젠 (12.8 g, 74.5 mmol, 8.85 mL)을 0℃에서 적가하고 혼합물을 10℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 암모니아수 클로라이드 용액 (20 mL)의 첨가로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (200 mL) 및 물 (100 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 5/1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (8.2 g, 28.06 mmol, 56.5% 수율, 99.7% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 192.1 [M+H-Boc]+.
단계 B: (2 S )-2-( 벤질옥시메틸 ) 파이롤리딘: CH2Cl2 (28 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘-1- 카복실레이트 (8.2 g, 28.14 mmol)의 용액에 TFA (43.1 g, 378 mmol, 28.0 mL)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 적가했다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 디클로로메탄 (100mL)로 희석하고 그 다음 수성층이 pH ~ 10에 도달할 때까지 1M 수성 수산화나트륨 (10 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 염수 (2 × 20 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 (4 g, 20.9 mmol, 74.3% 수율)을 수득했다. LCMS ES+APCI MS m/z 192.2 [M+H]+.
단계 C: (2 S )-2-( 벤질옥시메틸 )-1-(2- 메톡시에틸 ) 파이롤리딘: CH3CN (20 mL) 중 1-브로모-2-메톡시-에탄 (0.9 g, 6.48 mmol, 608 uL), (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 (1.24 g, 6.48 mmol) 및 K2CO3 (2.68 g, 19.4 mmol)의 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하고 그 다음 78 ℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL) 및 물 (50 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/디클로로메탄/메탄올 1/1/0 내지 10/10/2)로 정제하여 (2S)-2-(벤질옥시메틸)-1-(2-메톡시에틸)파이롤리딘 (900 mg, 3.61 mmol, 55.7% 수율)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 250.2 [M+H]+.
단계 D: (S)-(1-(2- 메톡시에틸 ) 피롤리딘 -2-일)메탄올: MeOH (20 mL) 중 (2S)-2-(벤질옥시메틸)-1-(2-메톡시에틸)파이롤리딘 (900 mg, 3.61 mmol)의 용액에 10% Pd/C (721.88 umol)를 첨가하고 슬러리를 H2 (50 Psi) 하에서 10℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 (S)-(1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일)메탄올 (450 mg, 2.83 mmol, 78.30% 수율)을 수득했다.
단계 E: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (5 mL) 중 [(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메탄올 (245 mg, 1.54 mmol), 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 772 umol), 및 t-BuONa (223 mg, 2.32 mmol)의 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)에 부었고 수성층을 에틸 아세테이트 (3x30 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (30 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 300/1 내지 10:1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 349 umol, 45.3 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 743.4 [M+H]+.
단계 F: tert-부틸 4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (150 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 323 umol) 및 (Boc)2O (141 mg, 646 umol, 148 uL)의 용액에 10% Pd/C (100 mg)을 N2 분위기 하에서 첨가했다. 현탁액을 탈가스하고 H2로 3 회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축시켜 tert-부틸 4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (215 mg, 조물질)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 619.1 [M+H]+.
단계 G: 4-[2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올: DCM (500 uL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2- 메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (215 mg, 347 umol)의 용액에 TFA (594 mg, 5.21 mmol, 385 uL)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-[2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (219 mg, 346 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 519.4 [M+H]+.
단계 H: 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: -40℃로 냉각된 디클로로메탄 (4.00 mL) 중 4-[2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일] 메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (219 mg, 346 umol) 및 DIEA (447 mg, 3.46 mmol, 603 uL)의 혼합물에 디클로로메탄 (1.00 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (34.9 mg, 276.92 umol)의 용액을 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 포화 NaHCO3 (2.00 mL)의 첨가로 켄칭하고 혼합물을 빙수 (20 mL)에 부었고 디클로로메탄 (20 mL×2)로 추출했다. 조합된 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 32%-62%, 12분)로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (27 mg, 46.7 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
실시예 145
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1- tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(하이드록시메틸) 파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.24 g, 6.17 mmol) 및 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2 g, 3.09 mmol)의 용액에 t-BuONa (890 mg, 9.26 mmol)을 첨가하고 반응을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)에 부었고 에틸 아세테이트 (3X100 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (50 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 1:1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1- tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.62 g, 2.02 mmol, 65.5 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 785.6 [M+H]+.
단계 B: (2S)-2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트: NH3으로 MeOH (50 mL)에 15℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 이 용액에 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-tert-부톡시카보닐 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.6 g, 2.04 mmol) 이어서 건조 10 % Pd/C (500 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.00 g, 1.78 mmol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 561.5 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 (2S)-2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-[4-(2,2,2-트리플루오로아세틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트: DCM (5.00 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (800 mg, 1.43 mmol)의 용액에 0℃에서 TFAA (599 mg, 2.85 mmol) 및 DIEA (737 mg, 5.71 mmol)을 첨가하고 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 부었고 에틸 아세테이트 (50 mL×3)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (30 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-[4-(2,2,2-트리플루오로아세틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.5 g, 조물질)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 657.5 [M+H]+.
단계 D: 2,2,2-트리플루오로-1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)- 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]에탄온: DCM (500 uL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸) -4-[4-(2,2,2-트리플루오로아세틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (300 mg, 조물질)의 용액에 TFA (521 mg, 4.57 mmol, 338 uL)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2,2,2-트리플루오로-1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)- 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]에탄온 (306 mg)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]+.
단계 E: 2,2,2-트리플루오로-1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]에탄온: MeOH (5.00 mL) 중 아세톤 (132 mg, 2.28 mmol, 167 uL,) 및 2,2,2-트리플루오로-1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]에탄온 (306 mg, 조물질, TFA)의 용액에 AcOH (54.8 mg, 912 umol, 52.2 uL) 및 NaBH3CN (115 mg, 1.83 mmol)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL ×3)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (10mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 2,2,2-트리플루오로-1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]에탄온 (300 mg, 조물질)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 599.5 [M+H]+.
단계 F: 4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올: MeOH (10 mL) 중 2,2,2-트리플루오로-1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]에탄온 (300 mg, 조물질)의 용액에 K2CO3 (346 mg, 2.51 mmol)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축시켜 4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (250 mg)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 503.3 [M+H]+.
단계 G: 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: -40℃로 냉각된 DCM (5.00 mL) 중 4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (250 mg, 조물질) 및 DIEA (643 mg, 4.97 mmol, 866 uL)의 혼합물에 DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (50.2mg, 398 umol)의 용액을 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 포화 NaHCO3 (2.00 mL)의 첨가로 켄칭했다. 혼합물을 빙수 (20 mL)에 부었고 DCM (20 mL×2)로 추출했다. 조합된 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 52%-78%, 12분)으로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (10 mg, 17.6 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]+.
실시예 146
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (10 mL) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.50 g, 772 umol), tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (311 mg, 1.54 mmol) 및 t-BuONa (223 mg, 2.32 mmol)의 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 수성층을 에테르 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 포화 염화나트륨 (1 × 30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에테르 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.40 g, 499 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 785.2 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트: NH3으로 메탄올 (10 mL)에 -78 ℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-3-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.25 g, 319 umol) 및 10% Pd/C (0.10 g)을 혼합물에 첨가하고 10℃에서 1시간 동안 H2 (15 psi) 하에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.17 g, 303 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 561.3 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트: -40℃로 냉각된 디클로로메탄 (4.00 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.17 g, 303 umol) 및 Et3N (153 mg, 1.52 mmol, 211 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (26.8 mg, 212 umol)을 첨가하고 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄 = 10/1)로 정제하여 tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.12 g, 189 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 615.5 [M+H]+.
단계 D: 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (0.20 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4- 프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (0.10 g, 163 umol) 및 TFA (278 mg, 2.44 mmol, 181 uL)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 NH3ㆍH2O의 첨가로 켄칭하고 pH를 pH = 7까지 조정했다. 혼합물을 prep-HPLC (칼럼: Venusil XBP C8 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%포름산)-ACN]; B%: 15%-45%, 10분)로 정제하여 1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (22.8 mg, 42.9 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 515.4 [M+H]+.
실시예 147
2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: ( Z ) 및 ( E )-4- 브로모부트 -2- 엔니트릴: tert-부탄올 (150 mL) 및 석유 에테르 (575 mL) 중 부트-3-엔니트릴 (98 g, 1.46 mol, 118 mL)의 용액에 tert-부탄올 (150 mL) 중 Br2 (233 g, 1.46 mol, 75.3 mL)의 용액을 15℃에서 첨가하고 반응을 30분 동안 교반했다. 반응에 그 다음 나트륨 에톡사이드 (100 g, 0.6 mol, 850 mL)의 에탄올 용액을 첨가했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 15℃에서 교반했다. 반응을 그 다음 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 2→20% 에틸 아세테이트/석유 에테르를 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 (Z) 및 (E)-4-브로모부트-2-엔니트릴 (141 g, E/Z = 2.5/1, 조물질)의 혼합물을 누르스름한 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d,) (E), δ = 6.79 (td, J = 7.2, 16.0 Hz, 1H), 5.63 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 1.2, 6.8 Hz, 2H); (Z), δ = 6.66 (td, J = 8.0, 10.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 0.8, 8.0 Hz, 2H).
단계 B: 2-(1,4- 디벤질피페라진 -2-일) 아세토니트릴: 톨루엔 (1 L) 중 N,N'-디벤질에탄-1,2-디아민 (115 g, 480 mmol, 113 mL) 및 TEA (97.0 g, 959 mmol, 133 mL)의 혼합물에 4-브로모부트-2-엔니트릴 (70 g, 조물질)을 0℃에서 적가하고 반응을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 5→50% EtOAc/석유 에테르를 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 2-(1,4-디벤질피페라진-2-일)아세토니트릴 (82 g, 240 mmol, 2개의 단계 37 % 수율, 89.3% 순도)을 누르스름한 반고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 306.3 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 - 7.23 (m, 10H), 3.85 - 3.76 (m, 1H), 3.54 - 3.44 (m, 3H), 3.07 - 2.96 (m, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.68 - 2.35 (m, 7H).
단계 C: 2-피페라진-2- 일아세토니트릴: DCE (1500 mL) 중 2-(1,4-디벤질피페라진-2-일)아세토니트릴 (164 g, 536 mmol)의 용액에 1-클로로에틸 카보노클로리데이트 (306 g, 2.14 mol)을 0℃에서 적가했다. 첨가 후, 반응 혼합물을 대략 48시간 동안 85℃로 가열했다. 디클로로에탄을 증발시키고 잔류물을 MeOH (1500 mL)에 용해시키고 1시간 동안 70℃로 가열했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하고 고체를 MTBE (3X3 L)로 분쇄하고 고체를 감압 하에서 건조시켜 2-피페라진-2-일아세토니트릴을 수득했다. 조 생성물을 에탄올 및 물 (8:1, v:v)에 의한 재결정화로 정제하여 2-피페라진-2-일아세토니트릴을 황백색 고체로서 얻었다 (53 g, 428 mmol, 40.0 % 수율, 96.4% 순도, 2 HCl). ES+APCI MS m/z 126.2 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, D2O) δ = 4.01 - 3.96 (m, 1H), 3.81 - 3.67 (m, 3H), 3.46 - 3.27 (m, 3H), 3.09 (d, J = 6.0 HZ, 2H).
단계 D: 2-[4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-2-일]아세토니트릴: 디옥산 (24 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (1.2 g, 4.08 mmol) 및 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (808 mg, 4.08 mmol, 2HCl)의 혼합물에 DIEA (2.64 g, 20.4 mmol, 3.55 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 수성층을 EtOAc (3 × 80 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-[4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.56 g, 4.07 mmol, 100% 수율)을 갈색 고체로서 수득했다.
단계 E: tert -부틸 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 2-[4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.56 g, 4.07 mmol)에 (Boc)2O (9.50 g, 43.5 mmol, 10 mL)을 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 50℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 10→50% EtOAc/석유 에테르를 용출물로서 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.2 g, 2.44 mmol, 59.9% 수율, 98.3% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 483.3 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.39 - 7.27 (m, 5H), 4.59 (br s, 1H), 4.06 (br d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.90 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.74 - 3.49 (m, 4H), 3.29 (dd, J = 4.0, 13.6 Hz, 1H), 3.18 (br s, 1H), 3.10 - 3.00 (m, 1H), 2.85 - 2.55 (m, 6H), 1.53 - 1.45 (m, 9H).
단계 F: tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: THF (25 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (655.74 mg, 5.69 mmol, 676 uL)의 용액에 NaH (182 mg, 4.55 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸) 피페라진-1-카복실레이트 (1.1 g, 2.28 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 밀봉 튜브에서 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (20 mL)의 첨가로 켄칭하고 수성층을 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.1 g, 1.86 mmol, 81.7% 수율, 95% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 562.4 [M+H]+.
단계 G: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 암모니아로 MeOH (30 mL)에 5분 동안 거품을 일으켰다. 이 용액에 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (950 mg, 1.69 mmol) 및 10% Pd/C (200 mg)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지하고 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 40℃에서 9시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.225%포름산)-ACN];B%: 15%-40%,30;58%분)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 830 umol, 49.1% 수율, 97.8% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 472.4 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.59 (br s, 1H), 4.43 - 4.28 (m, 1H), 4.18 - 4.09 (m, 1H), 4.07 - 3.90 (m, 4H), 3.88 - 3.78 (m, 1H), 3.21 (br dd, J = 3.2, 13.6 Hz, 2H), 3.16 - 3.05 (m, 2H), 3.03 - 2.90 (m, 2H), 2.82 - 2.55 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.91 - 1.62 (m, 4H), 1.51 (s, 9H).
단계 H: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (3 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 318 umol), 1-브로모나프탈렌 (98.8 mg, 477 umol, 66.3 uL), Cs2CO3 (311 mg, 954 umol), 및 RuPhos (29.7 mg, 63.6 umol)의 용액에 Pd2(dba)3 (29.1 mg, 31.8 umol)을 첨가하고 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 반응 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)과 EtOAc (20 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 수성층을 후속으로 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역 플래시로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (70 mg, 111 umol, 35.0 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 598.6 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.21 - 8.20 (m, 1H), 7.87 - 7.85 (m, 1H), 7.61 - 7.59 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.49 (m, 2H), 7.45 - 7.41 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.13 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.46 (br s, 1H), 4.33 - 4.28 (m, 4H), 4.10 - 4.07 (m, 2H), 3.97 - 3.94 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.46 (br s, 1H), 3.31 - 3.27 (br d, J=14.0 Hz, 1H), 3.07 - 3.01 (m, 2H), 2.77 (br s, 3H), 2.55 (br s, 3H), 2.35 (br s, 1H), 1.82 (br s, 7H), 1.52 (s, 9H).
단계 I: 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (0.1 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (60 mg, 100 umol)의 용액에 TFA (154 mg, 1.35 mmol, 0.1 mL)을 15℃에서 첨가하고 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (50 mg)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 J: 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (0.2 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (50 mg, 81.8 umol, TFA) 및 DIEA (106 mg, 817 umol, 142 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (11.3 mg, 89.9 umol)을 0℃에서 첨가하고 반응을 0-15℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물(0.225%포름산)-ACN];B%: 15%-45%,10.5분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (9.16 mg, 15.1 umol, 18.5 % 수율, 98.7 % 순도, 포르메이트)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 552.5 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.45 (br s, 1H), 8.22 - 8.19 (m, 1H), 7.87 - 7.85 (m, 1H), 7.62 - 7.60 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.49 (m, 2H), 7.45 - 7.43 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.13 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.42 - 6.38 (m, 1H), 5.84 - 5.82 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.78 - 4.53 (br dd, J=6.8, 11.6 Hz, 2H), 4.42 - 4.40 (m, 1H), 4.27 (br s, 2H), 4.21 - 4.18 (br d, J=14.0 Hz, 1H), 4.12-3.78 (br d, J=12.8 Hz, 2H), 3.68 - 3.07 (m, 7H), 3.05 - 2.84 (m, 3H), 2.77 (d, J=1.6 Hz, 3H), 2.71 - 2.64 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 1H), 2.11 - 2.03 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 2H).
실시예 148
2-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 424 umol), 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (188 mg, 636 umol), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol) 및 Cs2CO3 (414 mg, 1.27 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (38.8 mg, 42.4 umol)을 첨가하고 반응을 100℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=3:1 내지 0:1)로 직접 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 149 umol, 35.1% 수율, 85.0% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 686.6 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 5.70 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.39 (br s, 1H), 4.34 - 4.28 (m, 2H), 4.20 - 4.14 (m, 1H), 4.05 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.91 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.81 - 3.72 (m, 1H), 3.53 (br t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.27 (br d, J = 10.8 Hz, 2H), 3.10 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.90 - 2.65 (m, 5H), 2.59 (br d, J = 10.2 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (br s, 2H), 1.90 - 1.65 (m, 7H), 1.54 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (0.2 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 219 umol)의 용액에 TFA (616 mg, 5.40 mmol, 0.4 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 용매를 진공 하에서 제거하여 2-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (159 mg, 218 umol, 99.6% 수율, 2TFA)을 적색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (4 mL) 중 2-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (159 mg, 218 umol, 2TFA) 및 DIEA (366 mg, 2.83 mmol, 493 uL)의 용액에 -40℃에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (24.7 mg, 196 umol,)을 첨가하고 반응 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (2 mL)의 첨가로 켄칭하고 수성층을 분리하고 DCM (2 × 10 mL)로 역추출했다. 조합된 유기물을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (DCM: MeOH=50:1 내지 5:1)로 정제하고 이어서 역 prep HPCL (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.225%포름산)-ACN];B%: 4%-34% 10 분에 걸쳐)로 정제하여 2-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.77 mg, 3.10 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 556.5 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.00 (s, 1H), 7.18 (br s, 1H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 6.52 (br s, 1H), 6.37 - 6.21 (m, 1H), 5.75 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.99 (br s, 1H), 4.67 (br dd, J = 6.4, 11.6 Hz, 1H), 4.34 (br dd, J = 3.9, 11.6 Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.11 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.94 (br s, 1H), 3.57 - 3.40 (m, 4H), 3.29 (br d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.19 (br s, 1H), 3.02 (br dd, J=12.4, 19.7 Hz, 2H), 2.87 (br dd, J=8.4, 16.4 Hz, 2H), 2.76 - 2.58 (m, 6H), 2.35 (s, 3H), 2.22 - 2.10 (m, 1H), 2.01 (br d, J=8.4 Hz, 1H), 1.89 (br s, 2H).
실시예 149
2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (3.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 276 umol), 2-[[4-브로모-5-(트리플루오로메틸)인다졸-1-일]메톡시]에틸- 트리메틸-실란 (120 mg, 303 umol), Pd2(dba)3 (50.5 mg, 55.1 umol),RuPhos (51.5 mg, 110 umol), Cs2CO3 (225 mg, 689 umol)을 N2로 탈가스하고 그 다음 12시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (EtOAc/MeOH 8/1)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 169 umol, 61.4 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 786.3 [M+H]+.
단계 B: 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (3.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 178 umol)의 용액에 2,6-디메틸피리딘 (229 mg, 2.14 mmol) 및 TMSOTf (238 mg, 1.07 mmol)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (0.5 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 686.6 [M+H]+.
단계 C: 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2- 일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (3.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (122 mg, 178 umol) 및 DIEA (138 mg, 1.07 mmol, 186 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (18.0 mg, 143 umol)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (0.5 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (EA/MeOH 10/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Boston pH-lex 150*25 10um; 이동상: [물(0.1%TFA)-ACN];B%: 39%-69%,10분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2- 일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (54.0 mg, 43.8 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 740.6 [M+H]+.
단계 D: 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸- 4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (60 uL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (20 mg, 27.0 umol)의 용액에 TFA (30.8 mg, 270 umol)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응은 완료되지 않아서, 추가의 TFA (30.8 mg)을 첨가하고 반응을 20℃에서 추가 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물의 pH를 포화 수성 NaHCO3 (1 mL)의 첨가로 8로 조절하고 수성층을 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물에 MeOH (0.5 mL)을 첨가하고 NH3 ·H2O (0.5 mL)로 희석하고 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물(0.225%포름산)-ACN];B%: 15%-45%,10.5분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸- 4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (2.68 mg, 3.99 umol)을 백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 610.5 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 (s, 1H), 7.68 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.45 - 6.35 (m, 1H), 5.84 (br d, J=11.2 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.71 - 4.60 (m, 1H), 4.42 - 4.27 (m, 3H), 4.17 (br d, J=11.2 Hz, 1H), 4.01 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.78 - 3.31 (m, 5H), 3.23 - 3.03 (m, 2H), 3.02 - 2.75 (m, 4H), 2.71 (s, 3H), 2.66 - 2.57 (m, 1H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 3H). ES+APCI MS m/z 610.1 [M+H]+.
실시예 150
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 4-[7-벤질-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 1.04 mmol), (2R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 (214 mg, 2.07 mmoland 나트륨 tert-부톡시드 (298 mg, 3.11 mmol)의 혼합물에 BINAP (129 mg, 207 umol) 및 Pd2(dba)3 (94.8 mg, 104 umol)을 첨가하고 혼합물을 질소로 살포하고 이어서 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하고 유기층을 분리하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피 [물 (0.1% 포름산 물)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 수성 탄산나트륨 용액 (5 mL)로 중화하고 10% MeOH/DCM (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 480 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 550.4 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.1 g, 2.00 mmol)의 용액에 MeOH (3.96 g, 123.56 mmol, 5 mL) 중 NH3 (792 mg, 46.5 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 10% Pd/C (500 mg)을 첨가했다. 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 H2 (15 psi) 하에서 교반했다. 반응을 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축 건조시켜 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (756 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 460.3 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸- 에톡시]-7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트 (304 mg, 990 umol), tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 761 umol), [2-(2-아미노에틸)페닐]-클로로-팔라듐, 디사이클로헥실-[2-(2,4,6- 트리이소프로필페닐)페닐]포스판 (84.4 mg, 114 umol) 및 Cs2CO3 (620 mg, 1.90 mmol)의 혼합물을 N2로 3회 퍼지하고 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)에 부었고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (30 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % 포름산)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸- 에톡시]-7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 303 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 686.4 [M+H]+.
단계 D: [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: 디클로로메탄 (300 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 306 umol)의 용액에 TFA (523 mg, 4.59 mmol, 340 uL)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (214 mg, 305 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 586.4 [M+H]+.
단계 E: [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일- 피페라진-1-일]-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: -40℃로 냉각된 디클로로메탄 (5.00 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (214 mg, 305 umol, TFA) 및 DIEA (395 mg, 3.06 mmol, 532 uL)의 혼합물에 디클로로메탄 (1.00 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (38.6 mg, 305 umol)의 용액을 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 0℃까지 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 트리플루오로아세트산)\아세토니트릴]로 정제하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일- 피페라진-1-일]-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (100 mg, 156 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 640.7 [M+H]+.
단계 F: 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: 0℃로 냉각된 THF (500 uL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진- 1-일]-2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (90 mg, 141 umol)의 용액에 NaOH (2 M, 281.34 uL)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물의 pH를 20 % 포름산 용액의 첨가로 7로 조정했다. 수용액을 그 다음 디클로로메탄 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%포름산)-ACN]; B%: 7%-37%, 10분)로 정제하여 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(3-하이드록시-1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (5 mg, 8.82 umol, 6.27 % 수율, 98 % 순도)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 556.3 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 8.54 (br s, 0.6 H), 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 6.91 - 6.72 (m, 3H), 6.29 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.48 (br s, 1H), 5.26 - 4.96 (m, 1H), 4.57 (br s, 1H), 4.24 - 4.09 (m, 4H), 3.74 - 3.54 (m, 1H), 3.48 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 3.10 - 2.86 (m, 5H), 2.78 (br d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.53 (br s, 6H), 1.37 (dd, J = 2.0, 6.4 Hz, 3H).
실시예 151
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
(2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-일)옥시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴을, 단계 C에서 (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트를 1-브로모나프탈렌으로 대체하고 단계 F를 제외하여 실시예 150에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 540.3 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 8.51 (s, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 6.82 (br s, 1H), 6.30 (br d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.62-5.53 (m, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.70 - 4.39 (m, 1H), 4.26 - 4.11 (m, 4H), 3.94 - 3.59 (m, 1H), 3.48 - 3.34 (m, 2H), 3.28-3.18 (m, 3H), 3.13 - 2.92 (s, 5H), 2.79 - 2.61 (s, 6H), 1.48 (dd, J = 2.0, 6.0 Hz, 3H).
실시예 152
2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.50 g, 1.09 mmol), 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (482 mg, 1.63 mmol), t-BuONa (314 mg, 3.26 mmol) 및 [2-(2-아미노에틸)페닐]-클로로-팔라듐;디사이클로헥실-[2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판 (80.4 mg, 109 umol)의 혼합물을 70℃에서 10시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 수성층을 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 포화 염화나트륨 용액 (30 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (포름산, 0.1 %.)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.40 g, 522 umol, 48.0 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 674.3 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.03 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.27 (m, 2H), 5.68 (dd, J = 2.4, 9.6 Hz, 1H), 5.31 (br s, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.28 (s, 2H), 4.08 - 3.94 (m, 3H), 3.86 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 3.52 (br t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.24 (br d, J = 12.8 Hz, 2H), 3.04 - 2.91 (m, 1H), 2.87 - 2.67 (m, 5H), 2.65 - 2.47 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.32 (br s, 6H), 2.17 (br d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.09 (br s, 1H), 1.77 (br t, J = 10.8 Hz, 3H), 1.52 (s, 9H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
단계 B: 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: 디클로로메탄 (10 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.38 g, 564 umol)의 용액에 TMSOTf (752 mg, 3.38 mmol) 및 2,6-디메틸피리딘 (725 mg, 6.77 mmol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 크로마토그래피 [물 (포름산, 0.1 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 수집된 분획을 조합하고 pH를 포화 중탄산나트륨 용액의 첨가로 pH > 7로 조정하고 수성층을 디클로로메탄/메탄올 (10/1) (3 × 10 mL)로 추출했다. 추출물을 포화 염화나트륨 용액 (10 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.30 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 574.1 [M+H]+.
단계 C: 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: 디클로로메탄 (1.00 mL) 중 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.20 g, 조물질) 및 TEA (176mg, 1.74 mmol, 243 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (44.0 mg, 349 umol)을 0℃에서 첨가했다. 그리고 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (포름산, 0.1 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 수집된 분획을 조합하고 pH를 포화 중탄산나트륨 용액의 첨가로 pH > 7로 조정하고 수성층을 디클로로메탄/메탄올 (10/1) (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 추출물을 포화 염화나트륨 용액 (1 × 10 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.10 g, 127 umol, 2개의 단계 36.6 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 628.6 [M+H]+.
단계 D: 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: 아세토니트릴 (3 mL) 중 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]- 7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (40 mg, 63.7 umol,) 및 TsOH (1.10 mg, 6.37 umol)의 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (2 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 5/1)로 정제했다. 수집된 원하는 분획을 진공 하에서 농축하여 백색 고체를 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 35%-65%, 3분) 및 (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225%포름산)-ACN]; B%: 15%-45%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 모으고 동결건조하여 2-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (2.99 mg, 5.50 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 544.5 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.36 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.24 - 7.20 (m, 1H), 6.62 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 6.47 - 6.24 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.50 (br s, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.12 (br d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.99 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.55 (br t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42 - 3.29 (m, 1H), 3.10 (br s, 1H), 3.00 - 2.68 (m, 7H), 2.49 (s, 6H), 2.43 (s, 3H), 1.39 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
실시예 153
2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 773 umol) 및 3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로판-1-올 (219 mg, 1.39 mmol)의 용액에 tBuONa (111 mg, 1.16 mmol)을 N2 하에서 첨가했다. 반응 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc= 3:1 내지 0:1, 그 다음 EA: MeOH=50:1 내지 10:1) 이어서 역전된 플래시 크로마토그래피 (물 중 50 % 내지 90 % MeCN, 염기 조건)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 156 umol, 20.5% 수율, 97.9% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.19 - 8.12 (m, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.55 - 7.43 (m, 2H), 7.29 (d, J=1.6 Hz, 1H), 6.84 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.42 - 4.35 (m, 3H), 4.26 (br d, J=5.2 Hz, 2H), 4.12 - 4.03 (m, 3H), 3.96 (br d, J=12.8 Hz, 1H), 3.62 (dd, J=1.6, 7.6 Hz, 1H), 3.50 (br s, 2H), 3.31 (br d, J=13.6 Hz, 3H), 3.11 - 2.97 (m, 2H), 2.94 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 2.89 - 2.69 (m, 5H), 2.54 (br d, J=9.8 Hz, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 2H), 1.90 - 1.83 (m, 1H), 1.73 (br d, J=10.0 Hz, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.41 (s, 9H)
단계 B: 4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: TFA (370 mg, 3.24 mmol, 240 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 162 umol)의 용액을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 용매를 진공 하에서 제거하여 4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (140 mg, 161 umol, 99.5% 수율, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 C: [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: DCM (2 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (140 mg, 161 umol) 및 DIEA (167 mg, 1.29 mmol, 225 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (30.5 mg, 242 umol)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (5 mL)의 첨가로 켄칭하고 수성층을 DCM (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역전된 플래시 (염기 조건, 물 중 MeCN/NH3ㆍH2O: 50 % 내지 80%)로 정제하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (60 mg, 86.5 umol, 53.6% 수율)을 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 - 8.13 (m, 1H), 7.84 - 7.78 (m, 1H), 7.56 - 7.45 (m, 2H), 7.31 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.62 (br s, 1H), 6.47 - 6.37 (m, 1H), 5.92 - 5.79 (m, 1H), 5.24 - 4.88 (m, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 3H), 4.31 - 4.20 (m, 2H), 4.15 (br d, J=13.6 Hz, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.64 (dd, J=1.6, 7.6 Hz, 2H), 3.51 (br s, 2H), 3.38 (br s, 2H), 3.14 (br s, 1H), 3.08 - 2.73 (m, 7H), 2.56 (br d, J=10.0 Hz, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 2H), 1.88 (br d, J=9.6 Hz, 1H), 1.78 - 1.70 (m, 1H), 1.61 (s, 9H), 1.43 (s, 9H).
단계 D: 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: THF (0.5 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (60 mg, 86.5 umol)의 용액에 NaOH (2 M, 600 uL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 18℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 4 방울의 HCOOH (물 중 20 %)의 첨가로 산성화하고 수성층을 DCM (5 × 8 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물(0.225%포름산)-ACN];B%: 10%-40%,10분)로 정제하여 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (19.8 mg, 28.3 umol, 32.8% 수율, 93.8% 순도, 포름산 염)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 610.5 [M+H]+.
실시예 154
2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (60 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3 g, 7.42 mmol), 1-브로모나프탈렌 (3.07 g, 14.8 mmol, 2.06 mL) 및 Cs2CO3 (7.25 g, 22.2 mmol)의 용액에 XPhos palladacycle gen 3 (628 mg, 742 umol)을 N2 하에서 첨가하고 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 70℃로 가온시키고 70℃에서 10시간 동안 교반했다. 수득한 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 EtOAc (3 × 20 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (50:1 내지 3:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 tert-부틸2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (3.55 g, 6.02 mmol, 81.2% 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 531.4 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DCM (60 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.95 g, 5.56 mmol)의 용액에 m-CPBA (1.13 g, 5.56 mmol, 85.0 % 순도)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 (20 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고 층을 분리하고, 수성층 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (60 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% 포름산) = 100 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.7 g, 2.80 mmol, 50.3 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 574.4 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 549 umol,) 및 3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로판-1-올 (160 mg, 1.02 mmol)의 용액에 tBuONa (79.1 mg, 823 umol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE:EA= 3:1 내지 0:1, 그 다음 EA:MeOH=50:1 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 249 umol, 45.3% 수율, 79.6% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 640.5 [M+H]+.
단계 D: 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: TFA (770 mg, 6.75 mmol, 500 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 313 umol)의 반응 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료시 용매를 진공 하에서 제거하여 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (271 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 E: 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (6 mL) 중 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (271 mg, 502 umol) 및 DIEA (323 mg, 2.50 mmol, 0.435 mL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (60 mg, 476 umol)을 0℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 한 방울의 물의 첨가로 켄칭하고 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=3:1 내지 0:1), 그 다음 prep HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 33%-63%, 12분)로 정제하여 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (23.8 mg, 40.0 umol, 7.97% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 594.5 [M+H]+.
실시예 155
(S)-1-(4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (100 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (4.15 g, 36.0 mmol, 4.28 mL)의 혼합물에 NaH (2.16 g, 54.06 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, THF (60 mL) 중 tert-부틸4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트 (8.0 g, 18.02 mmol)의 용액을 첨가하고 혼합물을 70℃에서 11시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (160 mL)에 부었고, 수성층을 EtOAc (2 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (4.9 g, 8.70 mmol, 48.3% 수율, 92.8% 순도)을 회색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 523.2 [M+H]+
단계 B: tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (30 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.20 g, 4.21 mmol)의 혼합물에 Pd(OH)2/C (700 mg, 10% 순도)를 첨가하고 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지하고 반응을 40℃에서 12시간 동안 H2 (15 Psi) 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여과물을 농축시켜 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.80 g, 4.02 mmol, 95.6% 수율, 96.7% 순도)을 흑색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 433.1 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (4 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 462 umol) 및 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (204 mg, 694 umol)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (63.5 mg, 69.4 umol), RuPhos (43.2 mg, 92.5 umol) 및 Cs2CO3 (301 mg, 925 umol)을 첨가하고 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)과 EtOAc 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 수성층을 후속으로 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출하고 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1 내지 에틸 아세테이트/MeOH=10/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 310 umol, 67.1% 수율, 83.6% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 647.6 [M+H]+.
단계 D: 7-(5- 메틸 -1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘: DCM (1 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 371 umol)의 혼합물에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1 mL)을 첨가하고 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (250 mg, 309 umol, 83.4% 수율, 85.5% 순도, 2TFA)을 갈색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. ES+APCI MS m/z 463.4 [M+H]+.
단계 E: 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2 mL) 중 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (250 mg, 362 umol, 2TFA)의 혼합물에 DIEA (702 mg, 5.43 mmol, 946 uL)을 첨가하고 혼합물을 -50℃로 냉각시켰다. 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (36.5 mg, 289 umol)을 -50℃에서 반응에 나누어서 첨가하고 혼합물을 -50℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (1 mL)의 첨가로 켄칭하고 혼합물 농축했다. 잔류물을 DCM (10 mL)에 용해시키고 유기물을 H2O (2 × 8 mL)로 세정했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC ((기기: gx-l; 칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 조건: 물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN; 시작 B: 32; 종료 B: 62; 구배 시간 (분): 12; 100%B 유지 시간 (분): 2; 유속 (ml/분): 25)로 정제하여 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (48.6 mg, 92.9 umol, 25.7% 수율, 98.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 517.5 [M+H]+.
실시예 156
(S)-1-(4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸을 4-브로모-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸 (중간체 60)로 대체하여 실시예 155에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 571.4 [M+H]+.
실시예 157
(S)-1-(4-(7-(5-메톡시-1H-인다졸-4-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(7-(5-메톡시-1H-인다졸-4-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸을 4-브로모-5-메톡시-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸로 대체하여 실시예 155에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 533.4 [M+H]+.
실시예 158
1-[4-[7-(2-이소프로필페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert-부틸 4-[7-(2-이소프로필페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (4.00 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 462 umol), 1-브로모-2-이소프로필-벤젠 (120 mg, 601 umol), Cs2CO3 (452 mg, 1.39 mmol) 및 XPHOS PALLADACYCLE GEN 3 (78.3 mg, 92.5 umol)을 N2로 탈가스하고 그 다음 10시간 동안 N2 하에서 100℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 조 생성물을 EtOAc/MeOH= 50/1 내지 5/1로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(2-이소프로필페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (84.6 mg, 134 umol, 28.9 % 수율, 87.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]+.
1-[4-[7-(2-이소프로필페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 D에서 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트를 tert-부틸 4-[7-(2-이소프로필페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 155에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 505.6 [M+H]+.
실시예 159
(S)-1-(4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 4-브로모-5-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸을 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠로 대체하여 실시예 155에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 531.5 [M+H]+.
실시예 160
1-(4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[2-메틸설파닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (50 mL) 중 벤질 4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3.15 g, 7.88 mmol), 2-[(4-브로모-5-메틸-인다졸-1-일)메톡시]에틸-트리메틸-실란 (3.50 g, 10.2 mmol), Cs2CO3 (6.42 g, 19.70 mmol), Pd2(dba)3 (1.08 g, 1.18 mmol) 및 RuPhos (735 mg, 1.58 mmol)의 혼합물을 N2로 3회 탈가스하고 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)의 첨가로 켄칭하고 수성층을 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에서 농축했다. 잔류물을 1→33% EtOAc/석유 에테르를 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하고 벤질 4-[2-메틸설파닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.30 g, 2.93 mmol, 37.1 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 660.3 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-[2-메틸설피닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴 에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DCM (20 mL) 중 벤질 4-[2-메틸설파닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.30 g, 3.49 mmol)의 교반 용액에 m-CPBA (601 mg, 3.49 mmol)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 첨가했다. 반응 혼합물을 Na2S2O3 (10 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (100 mL)로 희석하고 수성층 DCM (200 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 1→10% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[2-메틸설피닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴 에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 2.84 mmol, 81.4 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 676.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-2-[3-(1-피페리딜)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (10 mL) 중 벤질 4-[2-메틸설피닐-7-[5-메틸-1-(2- 트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 739 umol) 및 3-(1-피페리딜)프로판-1-올 (211 mg, 1.48 mmol)의 혼합물에 t-BuONa (213 mg, 2.22 mmol)을 나누어서 첨가하고 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 HCl(2M)을 pH~7까지 첨가했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 물 5→95% 0.5% TFA/물/아세토니트릴을 용출물로서 사용하는 역상 플래시로 정제하여 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-2-[3-(1-피페리딜)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 385. umol, 52.1 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 755.4 [M+H]+.
단계 D: 7-(5- 메틸 -1 H - 인다졸 -4-일)-4-(피페라진-1-일)-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘: MeOH (20 mL) 중 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸) 인다졸-4-일]-2-[3-(1-피페리딜)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 397 umol)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 1.99 mL) 및 Pd(OH)2 (200 mg, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축시켜 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-(피페라진-1-일)-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (250 mg, 360 umol, 90.7 % 수율)을 수득했다.
단계 E: 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[3-(1-피페리딜)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM(8.00 mL) 중 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-(피페라진-1-일)-2-(3-(피페리딘-1-일)프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (250 mg, 360 umol, 2HCl) 및 DIEA (465 mg, 3.60 mmol, 629 uL)의 혼합물에 DCM (2.00 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (36.3 mg, 288 umol)의 용액을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가하고 반응을 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3(500 uL)의 첨가로 -40℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (10 mL)로 희석하고 수성층을 DCM (10 ml)으로 추출했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH 1/0 내지 5/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225% 포름산)-ACN]; B%: 8%-28%, 10분)로 정제하여 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[3-(1-피페리딜)프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (16.0 mg, 29.1 umol, 8.07 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]+.
실시예 161
1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[(1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[(1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 C에서 3-(1-피페리딜)프로판-1-올을 (1-메틸피롤리딘-3-일)메탄올로 대체하여 실시예 160에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 517.4 [M+H]+.
실시예 162
1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 중 (2R)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 (183 mg, 1.78 mmol) (8.00 mL), 벤질 4-[2-메틸설피닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 592 umol) 및 NaOtBu (114 mg, 1.18 mmol)의 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 Al2O3 (석유 에테르/에틸아세테이트 10/1 내지 0/1) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 352 umol)을 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.08 (s, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 5H), 7.38 - 7.33 (m, 2H), 5.76 (s, 2H), 5.43 - 5.33 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.72 - 3.67 (m, 4H), 3.64 - 3.56 (m, 4H), 3.55 - 3.47 (m, 4H), 2.87 - 2.80 (m, 2H), 2.74 (dd, J=6.8, 12.8 Hz, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.47 - 2.40 (m, 1H), 2.36 (s, 6H), 1.42 (d, J=6.4 Hz, 3H), 0.98 - 0.92 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).
단계 B: tert-부틸 4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (6.00 mL) 중 벤질 4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 280 umol) 및 (Boc)2O (122 mg, 559 umol, 129 uL)의 용액에 10% Pd/C (80 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반하고 35℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 및 (2R)-N,N-디메틸-2-[[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로판-1-아민의 혼합물을 혼합물 (110 mg)로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 681.3 [M+H]+.
단계 C: (2R)-N,N-디메틸-2-[[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로판-1-아민: (2R)-N,N-디메틸-2-[[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로판-1-아민 (TFA) 및 [4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-5-메틸-인다졸-1-일]메탄올. TFA (3.08 g, 27.0 mmol) 중 tert-부틸 4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 및 (2R)-N,N-디메틸-2-[[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로판-1-아민의 110 mg 혼합물의 용액을 30℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 (2R)-N,N-디메틸-2-[[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로판-1-아민 및 [4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-5-메틸-인다졸-1-일]메탄올의 260 mg 혼합물을 수득했다. ES+APCI MS m/z 451.3 [M+H]+.
단계 D: 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: - 50℃로 냉각된 DCM (1.00 mL) 중 (2R)-N,N-디메틸-2-[[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로판-1-아민 및 [4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-5-메틸-인다졸-1-일]메탄올의 260 mg 혼합물의 용액에 DIEA (594 mg, 4.59 mmol) 이어서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (18.0 mg, 143 umol)을 적가하고 혼합물을 -50℃ 내지 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 및 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[1-(하이드록시메틸)-5-메틸-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온의 100 mg 혼합물을 수득했다. ES+APCI MS m/z 505.4 [M+H]+.
단계 E: 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: THF (22 mL) 및 물 (550 uL) 중 100 mg의 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 및 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-[1-(하이드록시메틸)-5-메틸-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온의 혼합물에 NaOH (44.8 mg, 1.12 mmol)을 첨가하고 혼합물을 10℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (1 mL)로 희석하고 DCM (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.225% 포름산)-ACN];B%: 10%-40%, 12분)로 정제하여 1-[4-[2-[(1R)-2-(디메틸아미노)-1-메틸-에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (16.2 mg, 29.2 umol, 99.0 % 순도, 포름산 염)을 황백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 505.2 [M+H]+.
실시예 163
1-(4-(2-(2-(디에틸아미노)에톡시)-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (10 mL) 중 벤질 4-[2-메틸설피닐-7-[5-메틸-1-(2- 트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 739 umol) 및 2-(디에틸아미노)에탄올 (173 mg, 1.48 mmol, 197 uL)의 혼합물에 t-BuONa (213 mg, 2.22 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 HCl (2 M)을 pH~7까지 첨가했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 0→10% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 불순한 물질을 수득했고, 이것을 역상 크로마토그래피로 추가 정제하여 벤질 4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (220 mg, 295 umol, 39.9 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 729.3 [M+H]+.
단계 B: N,N-디에틸-2-[[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]에탄아민: MeOH (10 mL) 중 벤질 4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 164 umol)의 용액에 Pd(OH)2 (99.4 mg, 10% 순도) 및 HCl/MeOH (4 M, 823.05 uL)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공에서 농축시켜 N,N-디에틸-2-[[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]에탄아민 (105 mg, 157.24 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 595.4 [M+H]+.
단계 C: 1-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]- 7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (8 mL) 중 N,N-디에틸-2-[[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴 에톡시메틸)인다졸-4-일]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]에탄아민 (105 mg, 158 umol, 2 HCl) 및 DIEA (204 mg, 1.58 mmol, 276 uL)의 혼합물에 -40℃에서 DCM (2 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (15.9 mg, 126.4 umol)의 용액을 질소 분위기 하에서 첨가하고 반응을 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 (500 uL)의 첨가로 -40℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (10 mL)로 희석했다. 수성층을 DCM (10 ml)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 0→20% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 1-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]- 7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (60.0 mg, 71.2 umol, 45.0 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 649.3 [M+H]+.
단계 D: 1-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (500 uL) 중 1-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (50 mg, 77.0 umol)의 용액에 TFA (175 mg, 1.54 mmol, 114 uL)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 32%-62%, 12분)로 정제하여 1-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (16.0 mg, 30.2 umol, 39.2 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 519.3 [M+H]+.
실시예 164
1-(4-(7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(2-(피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)에탄온
단계 A: 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시 메틸)인다졸-4-일]-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (20 mL) 중 벤질 4-[2-메틸설피닐-7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 739 umol) 및 2-(1-피페리딜)에탄올 (191 mg, 1.48 mmol, 197 uL)의 용액에 t-BuONa (213 mg, 2.22 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 HCl (2 M)을 pH~7까지 첨가했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 0→10% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시 메틸)인다졸-4-일]-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 404 umol, 54.7 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 741.4 [M+H]+.
단계 B: 7-(5- 메틸 -1 H - 인다졸 -4-일)-4- 피페라진-1-일-2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘: TFA (10 mL) 중 벤질 4-[7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸) 인다졸-4-일]-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 337 umol)의 용액을 80℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4- 피페라진-1-일-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (200 mg, 283 umol, 84.1 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 477.3 [M+H]+.
단계 C: 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2- [2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (8 mL) 중 7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-피페라진-1-일-2- [2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (200 mg, 283 umol, 2TFA) 및 DIEA (366 mg, 2.84 mmol, 495 uL)의 혼합물에 -40℃에서 DCM (2 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (28.6 mg, 227 umol)의 용액을 질소 분위기 하에서 첨가하고 반응을 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 (500 uL)의 첨가로 -40℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (10 mL) 및 DCM (10 ml)로 희석했다. 분리된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 30% - 60%, 12분)으로 정제했다. 1-[4-[7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2- [2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (6.00 mg, 11.1 umol, 3.94 % 수율, 99.0 % 순도). ES+APCI MS m/z 531.4 [M+H]+.
실시예 165
1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 3- 메톡시나프탈렌 -1-올 : MeOH (150 mL) 중 나프탈렌-1,3-디올 (20 g, 125 mmol)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 250 mL)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 18 ℃까지 가온시키고 36시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 1/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 3-메톡시나프탈렌-1-올 (11 g, 62.5 mmol, 50.1% 수율, 99% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 175.1 [M+H]+.
단계 B: 4- 브로모 -3- 메톡시 -나프탈렌-1-올 : THF (10 mL) 중 3-메톡시나프탈렌-1-올 (0.50 g, 2.87 mmol)의 용액에 THF (3.00 mL) 중 NBS (562 mg, 3.16 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축하고, H2O (5 mL)로 희석하고, 디클로로메탄 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 포화 염화나트륨 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에테르 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 4-브로모-3-메톡시-나프탈렌-1-올 (0.43 g, 1.43 mmol, 49.7 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 253 [M+H]+.
단계 C: 4- 브로모 -2- 플루오로 -3- 메톡시 -나프탈렌-1-올: 아세토니트릴 (20 mL) 중 4-브로모-3-메톡시-나프탈렌-1-올 (4.00 g, 15.8 mmol)의 용액에 아세토니트릴 (20 mL) 중 1-(클로로메틸)-4-플루오로-1,4-디아조니아바이사이클로[2.2.2]옥탄;디테트라플루오로보레이트 (6.72 g, 19.0 mmol)의 용액을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 1시간 동안 교반하고 10℃에서 3시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에테르 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 4-브로모-2-플루오로-3-메톡시-나프탈렌-1-올 (4.00 g, 10.6 mmol, 67.2 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 271.0 [M+H]+.
단계 D: 2- 플루오로 -3- 메톡시 -나프탈렌-1-올: 에틸 아세테이트 (20 mL) 중 4-브로모-2-플루오로-3-메톡시-나프탈렌-1-올 (2.00 g, 7.38 mmol) 및 10% Pd/C (0.01 g)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 H2 하에서 15 psi에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-플루오로-3-메톡시-나프탈렌-1-올 (1.60 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. ES+APCI MS m/z 193.0 [M+H]+.
단계 E: (2- 플루오로 -3- 메톡시 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트 : 디클로로메탄 (30 mL) 중 2-플루오로-3-메톡시-나프탈렌-1-올 (1.60 g, 조물질) 및 TEA (1.85 g, 18.3 mmol, 2.55 mL)의 용액에 트리플루오로메틸설포닐 트리플루오로메탄설포네이트 (2.35 g, 8.33 mmol, 1.37 mL)을 -78 ℃에서 첨가하고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 염화암모늄 (30 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출하고, 포화 염화나트륨 (1 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에테르 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 (2-플루오로-3-메톡시-1- 나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.10 g, 2.07 mmol, 2개의 단계 24.9 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 324.9 [M+H]+.
단계 F: tert-부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3- 모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.40 g, 865 umol), (2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (561 mg, 1.73 mmol), RuPhos (80.7 mg, 173 umol), Pd2(dba)3 (79.2 mg, 86.5 umol) 및 t-BuONa (249 mg, 2.59 mmol)의 혼합물을 110℃에서 5시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, 에테르 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 추출물을 포화 염화나트륨 (1 × 20 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피 [물 (0.1 % 포름산)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3- 모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.35 g, 495 umol, 57.2 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 637.1 [M+H]+.
단계 G: 4-[3-[[7-(2- 플루오로 -3- 메톡시 -1- 나프틸 )-4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린: 디클로로메탄 (0.70 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.40 g, 628. umol) 및 TFA (1.07 g, 9.42 mmol, 698 uL)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-[3-[[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (0.41 g, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. ES+APCI MS m/z 537.5 [M+H]+.
단계 H: 1-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (5.0 mL) 중 4-[3-[[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (0.41 g, 조물질, TFA 염) 및 TEA (635 mg, 6.27 mmol, 873 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (79.1 mg, 627 umol)을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)로 정제하여 1-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (0.25 g, 411 umol, 2개의 단계 65.5 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 591.0 [M+H]+.
단계 I: 1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (4.00 mL) 중 1-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3- 모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (0.20 g, 339 umol)의 용액에 BBr3 (424 mg, 1.69 mmol, 163 uL)을 -78 ℃에서 첨가하고 0.5시간 동안 교반하고 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (5 mL)로 -78 ℃에서 켄칭하고 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 디클로로메탄 (3 × 10 mL)로 추출하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.225% 포름산)-ACN];B%: 13%-45%,7분)로 정제하여 1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (35.2 mg, 60.8 umol, 17.9 % 수율, 99.4 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 577.0[M+H]+.
실시예 166
1-[4-[7-(6-하이드록시-2-메틸-1,3-벤조티아졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 4- 트리이소프로필실릴옥시아닐린 : DCM (50.0 mL) 중 4-아미노페놀 (5.00 g, 45.8 mmol, 7.14 mL)의 용액에 이미다졸 (4.06 g, 59.6 mmol)을 첨가했다. TIPSCl (13.3 g, 68.7 mmol, 14.7 mL)을 혼합물에 적가했다. 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 자동화 플래시 크로마토그래피 시스템 (PE/EA 100/1 내지 3/1)로 정제하여 4-트리이소프로필실릴옥시아닐린 (9.46 g, 33.9 mmol, 73.9 % 수율, 95.0 % 순도)을 흑색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 6.74 - 6.71 (m, 1H), 6.71 - 6.69 (m, 1H), 6.60 - 6.58 (m, 1H), 6.58 - 6.55 (m, 1H), 3.66 - 2.98 (m, 2H), 1.28 - 1.16 (m, 3H), 1.11 - 1.06 (m, 18H)
단계 B: 2,6- 디브로모 -4- 트리이소프로필실릴옥시 -아닐린 : DCM (73.0 mL) 및 MeOH (73.0 mL) 중 4-트리이소프로필실릴옥시아닐린 (7.30 g, 27.5 mmol)의 용액에 DCM (5 mL) 중 Br2 (11.0 g, 68.8 mmol, 3.55 mL)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 15℃에서 5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 아황산나트륨 용액 (60 mL)로 희석하고 DCM (3 × 200 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA 50/1 내지 1/1)로 정제하여 2,6-디브로모-4-트리이소프로필실릴옥시-아닐린 (10.8 g, 23.2 mmol, 84.4 % 수율, 90.8 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 423.9[M+H]+.
단계 C: N -(2,6- 디브로모 -4- 트리이소프로필실릴옥시 -페닐)아세트아미드: 2,6-디브로모-4-트리이소프로필실릴옥시-아닐린 (10.4 g, 24.6 mmol) 및 CH3COOH (52 mL)의 용액에 아세트산 무수물 (10.9 g, 107 mmol, 10 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 물 (100 mL) 및 DCM (200 mL)을 첨가하고 층을 분리했다. 수성상을 DCM (100 mL × 2)로 추출했다. 조합된 추출물을 5 % Na2CO3 (80 mL), 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA 50/1 내지 1:1)로 정제하여 N-(2,6-디브로모-4-트리이소프로필실릴옥시-페닐)아세트아미드 (7.32 g, 14.2 mmol, 57.6 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.16 (s, 1H), 7.11 (s, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.28 - 1.24 (m, 3H), 1.12 - 1.09 (m, 18H).
단계 D: N -(2,6- 디브로모 -4- 트리이소프로필실릴옥시 -페닐) 티오아세트아미드: 톨루엔 (116 mL) 중 N-(2,6-디브로모-4-트리이소프로필실릴옥시-페닐)아세트아미드 (7.22 g, 15.5 mmol)의 용액에 라웨슨 시약 (3.14 g, 7.76 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 2시간 동안 110℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA 100/1 내지 1/1)을 정제하여 N-(2,6-디브로모-4-트리이소프로필실릴옥시-페닐)티오아세트아미드 (5.41 g, 8.40 mmol, 54.1 % 수율, 74.7 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 481.9[M+H]+.
단계 E: 4- 브로모 -2- 메틸 -1,3- 벤조티아졸 -6-올: CuI (94.2 mg, 494 umol)을 DME (48.0 mL) 중 N-(2,6-디브로모-4-트리이소프로필실릴옥시-페닐)티오아세트아미드 (2.38 g, 4.94 mmol), 1,10-펜안트롤린 (134 mg, 741 umol) 및 Cs2CO3 (4.83 g, 14.8 mmol)의 용액에 첨가하고, 그 다음 반응 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA 50/1 내지 0/1)로 정제하여 4-브로모-2-메틸-1,3-벤조티아졸-6-올 (1.33 g, 3.54 mmol, 71.7 % 수율, 65.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.33 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.14 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 1H), 2.72 (s, 3H).
단계 F: 6- 벤질옥시 -4- 브로모 -2- 메틸 -1,3- 벤조티아졸 : ACN (26.0 mL) 중 4-브로모-2-메틸-1,3-벤조티아졸-6-올 (1.28 g, 5.24 mmol) 및 K2CO3 (2.17 g, 15.72 mmol)의 혼합물에 BnBr (988 mg, 5.76 mmol, 685 uL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 45℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA 200/1 내지 10/1)로 정제하여 6-벤질옥시-4-브로모-2-메틸-1,3-벤조티아졸 (1.10 g, 3.13 mmol, 59.7 % 수율, 95.0 % 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 336.2 [M+H]+.
단계 G: 벤질 4-[7-(6-벤질옥시-2-메틸-1,3-벤조티아졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (16 mL) 중 벤질 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 805 umol), 6-벤질옥시-4-브로모-2-메틸-1,3-벤조티아졸 (323 mg, 967 umol), RuPhos (75.2 mg, 161 umol), Cs2CO3 (787 mg, 2.42 mmol) 및 Pd2(dba)3 (73.8 mg, 80.6 umol)을 85℃에서 16시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 Al2O3 (PE/EA 10/1 내지 0/1) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 벤질 4-[7-(6-벤질옥시-2-메틸-1,3-벤조티아졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (340 mg, 408 umol, 50.7 % 수율, 90.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 750.5[M+H]+.
단계 H: 2- 메틸 -4-[2-(3- 모폴리노프로폭시 )-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-벤조티아졸-6-올: MeOH (4 mL) 중 벤질 4-[7-(6-벤질옥시-2-메틸-1,3-벤조티아졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 213 umol)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 533 uL), 이어서 Pd(OH)2/C (80 mg, 533 umol)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 8시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축시켜 2-메틸-4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-벤조티아졸-6-올 (110 mg, 126 umol, 59.2 % 수율, 68.7 % 순도, 2 HCl)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 526.2[M+H]+.
단계 I: 1-[4-[7-(6-하이드록시-2-메틸-1,3-벤조티아졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2.00 mL) 중 2-메틸-4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-벤조티아졸-6-올 (110 mg, 184 umol, 2 HCl) 및 DIEA (143 mg, 1.10 mmol, 193 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (18.5 mg, 147 umol)을 - 50℃에서 적가했다. 혼합물을 -40 내지 -20℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (2 mL)로 희석하고 DCM (3 × 6 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 Al2O3 (DCM/MeOH 20/1 내지 10/1), prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 21%-51%, 12분) 상에서 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 1-[4-[7-(6-하이드록시-2-메틸-1,3-벤조티아졸-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (32.4 mg, 55.4 umol, 30.2 % 수율, 99.1 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 580.4[M+H]+.
실시예 167
1-(4-(7-(5-하이드록시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 2- 브로모 -4- 메톡시아닐린 : -10℃에서, THF (3 L) 중 4-메톡시아닐린 (100 g, 812 mmol)의 용액에 N-브로모석신이미드 (152 g, 853 mmol) 세 부분으로 및 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피. (석유 에테르/에틸 아세테이트 15/1)로 정제하여 2-브로모-4-메톡시아닐린을 적색 오일 (30.58 g, 18.6% 수율)로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.01 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.74-6.70 (m, 2H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.73 (s, 3H).
단계 B: 1-(2-아미노-3- 브로모 -5- 메톡시페닐 )-2- 클로로프로판 -1-온: 1,1-디클로로에탄 (220 mL) 중 2-브로모-4-메톡시-아닐린 (15.0 g, 74.2 mmol)의 0℃ 용액에 붕소 삼염화물 (1.00 M, 89.1 mL), 2-클로로프로판니트릴 (9.97 g, 111 mmol) 및 티타늄 테트라클로라이드 (16.9 g, 89.1 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 24시간 동안 85℃에서 가열했다. 혼합물을 얼음에 부었고 염산 (20%, 300 mL)을 0℃에서 첨가하고, 농축시키고 잔류물을 0.5시간 동안 환류했다. 이러한 혼합물을 pH 4을 획득할 때까지 0℃에서 수산화나트륨 (포화 수성, 120 mL)로 염기성화하고 그 다음 에틸 아세테이트 (300 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기 추출물을 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트/디클로로메탄 50/1/1)로 정제하고, 1-(2-아미노-3-브로모-5-메톡시페닐)-2-클로로프로판-1-온을 황색 고체 (18.7 g, 86.3% 수율)로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.37 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.60 (brs, 2H), 5.25 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 1.74 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 C: 7- 브로모 -5- 메톡시 -2- 메틸 -1 H -인돌 : 디옥산 (500 mL) 및 H2O (50 mL) 중 1-(2-아미노-3-브로모-5-메톡시-페닐)-2-클로로-프로판-1-온 (18.7 g, 64.1 mmol)의 용액에 NaBH4 (2.67 g, 70.5 mmol)을 첨가하고 이러한 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반했다. 혼합물을 냉각시키고, 염산 (aq., 0.10 M, 100 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (300 mL × 2)로 추출했다. 유기물을 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 25/1)로 정제하여 7-브로모-5-메톡시-2-메틸-1H-인돌을 황색 고체 (7.01 g, 45.6% 수율)로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.91 (brs, 1H), 7.03-6.91 (m, 2H), 6.23 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.46 (s, 3H).
단계 D: tert-부틸 4-(7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 2-메틸-2-부탄올 (15.0 mL) 중 tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (275 mg, 594 umol) 및 7-브로모-5-메톡시-2-메틸-1H-인돌 (130 mg, 540 umol)의 혼합물에 t BuONa (104 mg, 1.08 mmol) 및 클로로(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)[2-(2-아미노에틸페닐)]팔라듐(II) 메틸-t-부틸 에테르 부가물 (44.1 mg, 54.0 umol)을 첨가했다. 이러한 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 여과하고, 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (디클로로메탄/메탄올 10/1)로 정제하여, tert-부틸 4-(7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 황색 오일 (131 mg, 36.8 % 수율)로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 622.4[M+H]+.
단계 E: 4-[3-[[7-(5- 메톡시 -2- 메틸 -1 H -인돌-7-일)-4-피페라진-1-일-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린: 디클로로메탄 (10 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (131 mg, 211 umol)의 0℃ 용액에 트리플루오로아세트산 (2.00 mL)을 적가하고 반응을 15℃에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 감압 하에서 농축하고, 잔류물을 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다. (126 mg 조 생성물). ES+APCI MS m/z 522.4[M+H]+.
단계 F: 1-(4-(7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (5 mL) 중 4-[3-[[7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (74 mg, 116 umol, 트리플루오로아세트산 염)의 -60℃ 용액에 디이소프로필에틸아민 (45.1 mg, 349 umol, 60.8 uL)을 첨가하고 혼합물을 동일한 온도에서 10분 동안 교반했다. 혼합물을 시트르산 (aq., 1.00 mL)로 켄칭하고, 디클로로메탄 (10 mL × 2)로 추출하고, 염수 (15 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC 1-(4-(7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을 황색 고체 (31 mg, 39.2 % 수율)로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 576.4[M+H]+.
단계 G: 1-(4-(7-(5-하이드록시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (5 mL) 중 1-[4-[7-(5-메톡시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (26 mg, 45.2 umol)의 -78 ℃ 용액에 붕소 트리브로마이드 (56.6 mg, 226 umol, 21.8 uL)을 첨가했다. 반응을 0℃로 가온되도록 하고 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 NaHCO3 (aq., 3 mL)로 중화하고 디클로로메탄 (5 mL × 2)로 추출하고, 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC로 정제하여 1-(4-(7-(5-하이드록시-2-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을 황색 고체 (8.16 mg, 29.1% 수율, 90.3% 순도)로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 562.5[M+H]+.
실시예 168
1-(3-(하이드록시메틸)-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 3-[[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시메틸 ]피페라진-1- 카복실레이트 : THF (30 mL) 중 tert-부틸 3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (3.50 g, 16.2 mmol)의 용액에 NaH (3.24 g, 80.9 mmol, 60.0 % 순도)을 0℃에서 첨가했다. 30분 동안 교반한 후, TBDPSCl (6.67 g, 24.3 mmol, 6.23 mL)을 한번에 첨가했다. 혼합물을 10℃로 가온시키고 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 DCM (200 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 1/0 내지 1/2)로 정제하여 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (6.34 g, 12.1 mmol, 74.8 % 수율, 86.8 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z455.3[M+H]+.
단계 B: tert-부틸4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)- 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트: DMSO (60 mL) 중 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸] 피페라진-1-카복실레이트 (7.25 g, 13.9 mmol), 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (3.89 g, 13.2 mmol) 및 DIEA (4.27 g, 33.0 mmol, 5.77 mL)의 혼합물을 55℃에서 24시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 희석하고 염수 (3 × 150 mL)로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 1/0 내지 3/1)로 정제하여 tert-부틸4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)- 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (4.50 g, 5.91 mmol, 44.7 % 수율, 93.5 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 721.3[M+H]+.
단계 C: tert-부틸4-[7-벤질-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일)-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 2.81 mmol), 3-모폴리노프로판-1-올 (815 mg, 5.62 mmol), Pd(OAc)2 (94.6 mg, 422 umol), BINAP (350 mg, 562 umol) 및 t-BuONa (674 mg, 7.03 mmol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 110℃로 가열하고 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH 70/1 내지 20/1)로 정제하여 tert-부틸4-[7-벤질-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (1.50 g, 1.69 mmol, 60.0 % 수율, 92.3 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 821.4[M+H]+.
단계 D: tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (20 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-(3-모폴리노프로폭시) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (1.50 g, 1.83 mmol)의 용액에 Pd-C (10 %, 1.5 g)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (50 Psi) 하에서 50℃에서 24시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (988 mg, 1.21 mmol, 66.1 % 수율, 89.5 % 순도)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 731.5[M+H]+.
단계 E: tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (15 mL) 중 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (731 mg, 1.00 mmol), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (783 mg, 2.50 mmol), [2-(2-아미노페닐)페닐]팔라듐(1+);디사이클로헥실-[2-(2,4,6- 트리이소프로필페닐)페닐]포스판;메탄설포네이트 (169 mg, 200 umol), Cs2CO3 (815 mg, 2.50 mmol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 60℃에서 24시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시키고 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 70/1 내지 30/1)로 정제하여 tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 188 umol, 18.8 % 수율, 72.3 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 963.4[M+H]+.
단계 F: tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (3 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 188 umol)의 용액에 10% Pd/C (0.25 g)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 50℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켜 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 128 umol, 68.1 % 수율, 62.0 % 순도)을 농황색 고체로서 얻었고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 873.4[M+H]+.
단계 G: 4-[4-[2-( 하이드록시메틸 )피페라진-1-일]-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 : THF (1.5 mL) 중 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 149 umol), 피리딘 하이드로플루오라이드 (123 mg, 744 umol, 112 uL, 60.0 % 순도)의 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 역상 HPLC (TFA 조건; H2O 중 MeCN; 0 ~ 30 %, 유량; 40 mL/분)으로 정제했다. 원하는 분획을 감압 하에서 농축하여 4-[4-[2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (84 mg, 104 umol, 69.6 % 수율, 94.1 % 순도, 2TFA)을 황색 반고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 535.3 [M+H]+.
단계 H: 1-[3-(하이드록시메틸)-4-[7-(3-하이드록시-1- 나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (3 mL) 중 4-[4-[2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]-2-(3- 모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (84.0 mg, 114 umol, 2TFA), DIEA (36.9 mg, 285 umol, 49.8 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (8.63 mg, 68.44 umol)을 -40℃에서 적가하고, 그 다음 -40℃에서 0.5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (0.5 mL)의 첨가로 켄칭하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Venusil XBP C8 150 * 25 * 10 um; 이동상: [물 (0.225 % 포름산)-ACN]; B%: 10% - 40%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 1-[3-(하이드록시메틸)-4-[7-(3-하이드록시-1- 나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (9.75 mg, 14.5 umol, 12.7 % 수율, 94.4 % 순도, 포름산 염)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 589.3[M+H]+.
실시예 169
1-[3-(하이드록시메틸)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (25 mL) 중 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (495 mg, 694 umol), [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (160 mg, 1.39 mmol, 165 uL) 및 나트륨 tert-부톡시드 (200 mg, 2.08 mmol)의 혼합물에 BINAP (86.5 mg, 139 umol) 및 Pd2(dba)3 (63.6 mg, 69.5 umol)을 첨가했다. 혼합물에 질소 분위기로 거품을 일으키고 80℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (2 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (2 × 30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 1:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (207 mg, 262 umol, 37.7 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ =7.62 - 7.53 (m, 4H), 7.43 - 7.28 (m, 11H), 4.42 - 4.29 (m, 1H), 4.26 - 3.87 (m, 4H), 3.81 (br d, J = 13.2 Hz, 2H), 3.75 - 3.60 (m, 4H), 3.44 (dd, J = 1.6, 17.2 Hz, 1H), 3.24 - 3.04 (m, 3H), 2.96 (br s, 1H), 2.75 (br s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.43 - 2.28 (m, 2H), 2.10 - 1.96 (m, 2H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.02 - 0.89 (m, 9H).
단계 B: tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시메틸]-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: NH3으로 메탄올 (30 mL)에 -40℃에서 첨가하고 30분 동안 거품을 일으켰다. 상기 혼합물 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[ tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (530 mg, 670 umol)의 용액에 건조 10% Pd/C(0.30 g)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 40℃에서 10시간 동안 15 psi의 H2 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시메틸]-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (394 mg, 427 umol, 63.8 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.57 (br t, J = 6.0 Hz, 4H), 7.43 - 7.33 (m, 6H), 4.43 (br dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.00 (m, 4H), 3.99 - 3.89 (m, 2H), 3.88 - 3.65 (m, 4H), 3.27 - 2.89 (m, 6H), 2.81 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 2.56 - 2.50 (m, 3H), 2.42 (br d, J = 16.8 Hz, 2H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 1.88 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.79 (br d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.95 (br s, 9H).
단계 C: tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐) 실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (4 mL) 중 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.16 g, 228 umol), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (143 mg, 457 umol), [2-(2-아미노에틸)페닐]-클로로-팔라듐;디사이클로헥실-[2-(2,4,6- 트리이소프로필페닐)페닐]포스판 (16.9 mg, 22.8 umol) 및 t-BuONa (43.9 mg, 457 umol)의 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고 에테르 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 포화 염화나트륨 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (포름산, 0.1 %)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (0.15 g, 157 umol, 68.9 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 933.1[M+H]+.
단계 D: tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: NH3으로 메탄올 (10 mL)에 -78 ℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]피페라진-1-카복실레이트 (0.10 g, 107 umol) 및 건조 10% Pd/C (0.01 g)을 첨가하고 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 15 psi의 H2 하에서 교반했다. 슬러리를 셀라이트의 패드를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.09 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. ES+APCI MS m/z 843.0 [M+H]+.
단계 E: 4-[4-[2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올: 디클로로메탄 (2 mL) 중 tert-부틸 3-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.04 g, 조물질) 및 피리딘;하이드로플루오라이드 (118 mg, 712 umol, 106 uL)의 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고 10℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물의 pH를 포화 중탄산나트륨 용액 (3.00 mL)의 첨가로 pH>7로 조정하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 5/1)로 정제하여 4-[4-[2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (0.04 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 505.2 [M+H]+.
단계 F: 1-[3-(하이드록시메틸)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (2 mL) 중 4-[4-[2-(하이드록시메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (0.02 g, 조물질) 및 TEA (40.1 mg, 396 umol, 55.17 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (999 ug, 7.93 umol)을 -40℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 5/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 38%-68%, 3분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 1-[3-(하이드록시메틸)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (1.08 mg, 1.73 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 559.5 [M+H]+.
실시예 170
2-(1-아크릴로일-4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-( tert -부틸)2- 메틸4 -(7- 벤질 -2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일) 피페라진-1,2- 디카복실레이트: DMSO (80 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d] 피리미딘 (5.00 g, 17.0 mmol) 및 1-tert-부틸 2-메틸피페라진-1,2- 디카복실레이트 (4.24 g, 17.3 mmol)의 용액에 DIEA (5.49 g, 42.5 mmol, 7.42 mL)을 첨가했다. 55℃에서 12 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 염수 (3 × 150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 3/1)로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일)피페라진-1,2-디카복실레이트 (8.00 g, 15.9 mmol, 93.8 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 502.1[M+H]+.
단계 B: 1-(tert-부틸) 2-메틸 4-(7-벤질-2-(2-(디메틸아미노)에톡시) -5,6,7,8-테트라하이드로피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1,2-디카복실레이트: 톨루엔 (30 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1,2-디카복실레이트 (8.00 g, 15.9 mmol), 2-(디메틸아미노)에탄올 (2.84 g, 31.9 mmol, 3.19 mL), Cs2CO3 (13.0 g, 39.8 mmol), Pd(OAc)2 (537 mg, 2.39 mmol) 및 BINAP (1.98 g, 3.19 mmol)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 질소 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 HPLC (TFA, 0.1 %)로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (6.00 g, 10.8 mmol, 67.9 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 555.3[M+H]+.
단계 C: 1-tert-부틸 2-메틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트: MeOH (100 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노) 에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (6.00 g, 10.8 mmol) 및 10% Pd/C (600 mg, 10.8 mmol)의 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 H2 50 psi에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 1-tert-부틸 2-메틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (4.50 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 465.3[M+H]+.
단계 D: 1-tert-부틸 2-메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진 -1,2-디카복실레이트: 1,4-디옥산 (150 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (2.90 g, 6.24 mmol), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (2.54 g, 8.12 mmol), Pd2(dba)3 (857 mg, 936 umol), RuPhos (728 mg, 1.56 mmol) 및 Cs2CO3 (5.08 g, 15.6 mmol)의 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, DCM (1 × 200 mL)로 추출했다. 추출물을, 염수 (1 × 300 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 HPLC (TFA, 0.1 %)로 정제하여 1-tert-부틸 2-메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (3.50 g, 5.02 mmol, 2개의 단계 72.5 % 수율)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 697.3 [M+H]+.
단계 E: tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(하이드록시메틸)피페라진- 1-카복실레이트: THF (10 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1,2-디카복실레이트 (1.00 g, 1.44 mmol)의 용액에 LiAlH4 (219 mg, 5.76 mmol)을 -60℃에서 나누어서 첨가했다. 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 황산나트륨 용액 (0.3 mL)로 켄칭하고, 여과하고 필터 케이크를 DCM (100 mL)로 세정했다. 조합된 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]-2-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (750 mg, 1.12 mmol, 77.8 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 669.3 [M+H]+.
단계 F: 2-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: DMF 중 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(하이드록시메틸) 피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 149 umol), TBAI (11.1 mg, 29.9 umol), 1-(p-톨릴설포닐)이미다졸 (79.9 mg, 359 umol), NaCN (0.12 g, 2.45 mmol), 및 TEA (37.8 mg, 374 umol, 51.8 uL)의 혼합물을 155℃에서 6시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 물 (1 × 5 mL)로 희석하고 그 다음 에틸 아세테이트(3 × 10 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC 칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 50%-70%, 28분)로 정제하여 2-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (160 mg, 277 umol, 37.1 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 578.5[M+H]+.
단계 G: 2-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (2 mL) 중 2-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60 mg, 104 umol) 및 DIEA (67.1 mg, 519 umol, 90.7 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (13.1 mg, 104 umol)을 0℃에서 첨가했다. 10℃에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 MeOH (0.1 mL)로 켄칭하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH 10/1)로 정제하여 2-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (40.0 mg, 63.3 umol, 61.0 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 632.3[M+H]+.
단계 H: 2-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (2 mL) 중 2-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (30 mg, 47.5 umol)의 용액에 BBr3 (35.7 mg, 142 umol, 13.7 uL)을 -78 ℃에서 0.5시간 하에서 첨가했다. 혼합물을 0℃까지 가온시키고 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 그 다음 포화 중탄산나트륨 용액으로 -78 내지 0℃에서 켄팅했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, DCM/MeOH = 5/1)로 정제하고, 그 다음 추가로 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 30%-60%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (810 ug, 1.46 umol, 3.07% 수율, 97.5% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 542.5 [M+H]+.
실시예 171
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 에틸 2-(3- 옥소피페라진 -2-일)아세테이트: i-PrOH (300 mL) 중 디에틸 (E)-부트-2-엔디오에이트 (30.2 g, 175 mmol, 28.8 mL)의 용액에 에탄-1,2-디아민 (11.0 g, 183 mmol, 12.2 mL)을 첨가했다. 25℃에서 12 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 조 백색 고체를 MTBE (500 mL)로 세정하고 진공 하에서 건조시켜 에틸 2-(3-옥소피페라진-2-일)아세테이트 (26.0 g, 140 mmol, 79.6 % 수율, 100 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 6.55 (br s, 1H), 4.15 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.80 - 3.72 (m, 1H), 3.47 (dt, J = 4.8, 11.2 Hz, 1H), 3.36 - 3.22 (m, 1H), 3.18 - 3.08 (m, 1H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.76 - 2.70 (m, 1H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 B: 에틸 2-[1-[(4- 메톡시페닐 ) 메틸 ]-3-옥소- 피페라진-2-일]아세테이트: 메탄올 (400 mL) 중 에틸 2-(3-옥소피페라진-2-일)아세테이트 (23.6 g, 127 mmol)의 혼합물에 4-메톡시벤즈알데하이드 (18.9 g, 139 mmol, 16.9 mL) 및 CH3COOH (15.2 g, 253 mmol, 14.5 mL)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 -10℃로 냉각시켰다. NaBH3CN (23.9 g, 380 mmol)을 혼합물에 나누어서 첨가하고 반응 혼합물을 15℃까지 가온시키고 또 다른 11시간 동안 교반했다. 반응을 물 (400 ML)의 첨가로 켄칭하고 DCM (2 × 300 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (300 mL)로 재용해시키고, 그 다음 0.5 M HCl 용액 (2 × 200 mL)로 세정했다. 수성상을 Na2CO3 고체로 pH 7 ~ 8로 조정하고, 그 다음 DCM (2 × 300 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 에틸 2-[1-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소- 피페라진-2-일]아세테이트 (27.2 g, 87.6 mmol, 69.0 % 수율, 98.5 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 307.1 [M+H]+.
단계 C: 2-[1-[(4- 메톡시페닐 ) 메틸 ]피페라진-2-일]에탄올: THF (500 mL) 중 에틸 2-[1-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소- 피페라진-2-일]아세테이트 (27.2 g, 88.8 mmol)의 혼합물에 LiAlH4 (10.1 g, 266 mmol)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 70℃로 가열하고 11시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 포화 Na2SO4 수성물 (40 mL)로 켄칭하고, 여과하고 그 다음 농축했다. 생성물 2-[1-[(4-메톡시페닐)메틸]피페라진-2-일]에탄올 (20 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 251.1 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸-[2-[1-[(4- 메톡시페닐 ) 메틸 ] 피페라진-2-일] 에톡시 ]- 디페닐-실란: THF(300 mL) 중 2-[1-[(4-메톡시페닐)메틸]피페라진-2-일]에탄올 (20 g, 조물질)의 혼합물에 NaH (15.9 g, 399 mmol, 60 % 순도)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 그 다음 THF (100 mL) 중 TBDPSCl (65.9 g, 239 mmol, 61.6 mL)의 용액을 첨가했다. 혼합물을 15℃까지 가온시키고 추가 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 NH4Cl 용액 (300 mL)에 부었고, DCM (2 × 300 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트 3/1 내지 디클로로메탄/메탄올 10/1)로 정제하여 tert-부틸-[2-[1-[(4-메톡시페닐)메틸] 피페라진-2-일]에톡시]-디페닐-실란 (29.5 g, 59.9 mmol, 2개의 단계 35 %, 99.2 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 489.4[M+H]+.
단계 E: tert -부틸 3-[2-[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시에틸 ]-4-[(4- 메톡시페닐 )메틸] 피페라진-1- 카복실레이트 : MeOH (200 mL) 중 tert-부틸-[2-[1-[(4-메톡시페닐) 메틸] 피페라진-2-일]에톡시]-디페닐-실란 (11.0 g, 22.5 mmol)의 혼합물에 TEA (6.83 g, 67.5 mmol, 9.36 mL) 및 (Boc)2O (9.82 g, 45.0 mmol, 10.3 mL)을 첨가했다. 15℃에서 3시간 동안 교반한 후, 반응을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트 1/0 내지 5/1)로 정제하여 tert-부틸 3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[(4-메톡시페닐)메틸] 피페라진-1-카복실레이트 (11.0 g, 18.7 mmol, 82.9 % 수율, 100 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 589.4 [M+H]+.
단계 F: tert -부틸 3-[2-[ tert -부틸(디페닐) 실릴] 옥시에틸 ]피페라진-1- 카복실레이트 : MeOH (150 mL) 중 tert-부틸 3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4- [(4-메톡시페닐)메틸]피페라진-1-카복실레이트 (9.00 g, 15.3 mmol)의 혼합물에 10% Pd/C (849 umol)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (50 Psi) 하에서 40℃에서 18시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 플러그 및 여과물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 10/1 내지 3:1)로 정제하여 tert-부틸 3-[2-[tert-부틸(디페닐) 실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (5.80 g, 12.2 mmol, 79.5 % 수율, 98.2 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 469.4 [M+H]+.
단계 G: 2-[4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-[(4-메톡시페닐)메틸]피페라진-2-일]에톡시-tert-부틸-디페닐-실란: DMSO (80 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘 (4.00 g, 13.6 mmol), tert-부틸-[2-[1-[(4-메톡시페닐)메틸] 피페라진-2-일]에톡시]-디페닐-실란 (6.98 g, 14.3 mmol) 및 DIEA (4.39 g, 34.0 mmol, 5.93 mL)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 55℃로 가열하고 12시간 동안 N2 분위기 하에서 첨가했다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 1/0 내지 3/1)로 정제하여 2-[4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-[(4-메톡시페닐)메틸]피페라진-2-일]에톡시-tert-부틸-디페닐-실란 (9.00 g, 11.7 mmol, 86.0 % 수율, 97.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 746.4[M+H]+.
단계 H: 2-[[7-벤질-4-[3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[(4-메톡시페닐) 메틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민: 톨루엔 (100 mL) 중 2-(디메틸아미노)에탄올 (2.39 g, 26.8 mmol, 2.69 mL), 2-[4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-[(4- 메톡시페닐)메틸]피페라진-2-일]에톡시-tert-부틸-디페닐-실란 (8.00 g, 10.7 mmol), Pd(OAc)2 (361 mg, 1.61 mmol), BINAP (1.34 g, 2.14 mmol) 및 Cs2CO3 (8.73 g, 26.8 mmol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 110℃로 가열하고 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH 50/1 내지 10/1)로 정제하여 2-[[7-벤질-4-[3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[(4-메톡시페닐) 메틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (6.50 g, 조물질)을 황색 반고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 799.4 [M+H]+.
단계 I: 2-[4-[7- 벤질 -2-[2-(디메틸 아미노) 에톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]에탄올: 2-[4-[7-벤질-2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]에탄올: TFA (80 mL) 중 2-[[7-벤질-4-[3-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (6.50 g, 조물질)의 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시키고 잔류물을 DCM (300 mL)에 재용해시키고 물 (200 mL)로 세정했다. 수성상을 수집하고 포화 NaHCO3 수성물로 pH ~ 8로 염기성화하고 그 다음 DCM (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 2-[4-[7-벤질-2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]에탄올 (3.00 g, 조물질)을 황색 반고체로서 얻었다, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다.
단계 J: 2-[[7-벤질-4-[3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민: THF (40 mL) 중 2-[4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 피페라진-2-일]에탄올 (3.0 g, 조물질)의 용액에 NaH (1.36 g, 34.1 mmol, 60.0 % 순도)을 0℃에서 첨가했다. 30분 동안 교반한 후, TBDPSCl (2.81 g, 10.2 mmol, 2.63 mL)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가온시키고 또 다른 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고 에틸 아세테이트(3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켜 2-[[7-벤질-4-[3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (6.00 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 679.4 [M+H]+.
단계 K: tert-부틸4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (3 mL) 중 2-[[7-벤질-4-[3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸] 피페라진-1-일]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (6.0 g, 조물질), Boc2O (18.5 g, 84.8 mmol, 19.5 mL)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 80℃로 가열하고 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM /MeOH 1/0 내지 10/1)로 정제하여 tert-부틸4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (3.10 g, 3.28 mmol, 4개의 단계들 30.7 % 수율, 82.2 % 순도)을 반고체로서 얻었다. ES+APCI MS m/z 779.4 [M+H]+.
단계 L: tert-부틸2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (60 mL) 중 tert-부틸4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (3.10 g, 3.28 mmol, 82.2 % 순도)의 용액에 Pd-C (10 %, 2 g)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (50 Psi) 하에서 50℃에서 36시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켜 tert-부틸2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.20 g, 2.75 mmol, 83.8 % 수율, 86.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 689.4 [M+H]+.
단계 M: tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (40 mL) 중 tert-부틸2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.85 g, 2.69 mmol), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (1.09 g, 3.49 mmol), Cs2CO3 (2.19 g, 6.71 mmol), [2-(2-아미노페닐)페닐]팔라듐(1+); 디사이클로헥실-[2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판;메탄설포네이트 (341 mg, 403 umol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 65℃에서 10시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH 1/0 내지 10 /1)로 정제하여 tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트(1.85 g, 1.69 mmol, 63.2 % 수율, 84.3 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 922.5 [M+H]+.
단계 N: 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (10 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2- [2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 543 umol), 2,6-루티딘 (700 mg, 6.51 mmol, 759 uL)의 용액에 TMSOTf (724 mg, 3.26 mmol, 588 uL)을 첨가했다. 40℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반한 후, 반응 혼합물을 -40℃로 냉각시키고 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (137 mg, 1.09 mmol)을 나누어서 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃로 가온시키고 또 다른 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH 30/1 내지 10/1)로 직접 정제하여 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (256 mg, 226 umol, 41.6 % 수율, 77.2 % 순도)을 반고체로서 얻었다. ES+APCI MS m/z 875.5 [M+H]+.
단계 O: 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (5.00 mL) 중 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (133 mg, 152 umol)의 용액에 BBr3 (571 mg, 2.28 mmol, 220 uL)을 -40℃에서 적가했다. 반응 혼합물을 0℃로 가온시키고 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 조 물질을 MTBE (25 mL)로 세정하고 고체를 수집했다. 고체를 0℃에서 포화 NaHCO3 용액 (0.5 mL)으로 pH ~ 8로 세정하고, 그 다음 MeOH (3 mL)에 용해시켰다. 혼합물을 prep-HPLC(칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225 % 포름산)-ACN]; B %: 15 % - 39 %, 10분)로 직접 정제하여 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (16.7 mg, 28.2 umol, 18.5 % 수율, 99.9 % 순도, 포름산 염)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 547.3 [M+H]+.
실시예 172
1-(4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert-부틸4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트: DMSO (60 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘 (3.04 g, 10.3 mmol), tert-부틸3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸] 피페라진-1-카복실레이트 (5.08 g, 10.8 mmol), DIEA (3.34 g, 25.8 mmol, 4.51 mL)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 55℃로 가열하고 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 1/0 내지 3/1)로 정제하여 tert-부틸4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (3.50 g, 4.53 mmol, 43.9 % 수율, 94.0 % 순도)을 황색 반고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 726.4 [M+H]+.
단계 B: tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (40 mL) 중 2-(디메틸아미노)에탄올 (1.07 g, 12.1 mmol, 1.21 mL), tert-부틸4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-[2- [tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (3.50 g, 4.82 mmol), Pd(OAc)2 (162 mg, 723 umol,), BINAP (600 mg, 964 umol) 및 Cs2CO3 (3.92 g, 12.1 mmol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 혼합물을, 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반하면서 110℃로 가열했다. 실온으로 냉각한 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 1/0 내지 10/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (2.30 g, 2.57 mmol, 53.3 % 수율, 87.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 779.5 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4- [2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: MeOH (40 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸] 피페라진-1-카복실레이트 (2.30 g, 2.95 mmol)의 용액에 Pd-C(10%, 1.5 g)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. H2 (50 Psi) 하에서 50℃에서 36시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸 3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.58 g, 1.83 mmol, 61.9 % 수율, 79.6 % 순도)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 689.4 [M+H]+.
단계 D: tert-부틸4-[7-(3- 벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸] 피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]-4- [2-[2-(디메틸아미노)에톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 피페라진-1-카복실레이트 (1.48 g, 2.15 mmol), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (875 mg, 2.80 mmol), Cs2CO3 (1.75 g, 5.38 mmol), [2-(2-아미노페닐)페닐]팔라듐(1+); 디사이클로헥실- [2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판;메탄설포네이트 (273 mg, 323 umol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, DCM/MeOH = 1/0 내지 20/1)로 정제하여 tert-부틸4-[7-(3- 벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (1.20 g, 1.07 mmol, 49.7 % 수율, 82.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 921.4 [M+H]+.
단계 E: 2-[[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-4-[2-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일] 옥시]-N,N-디메틸-에탄아민: DCM (10 mL) 중 tert-부틸4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)- 2-[2-(디메틸 아미노)에톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]-3- [2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 326 umol) 및 2,6-루티딘 (419 mg, 3.91 mmol, 455 uL)의 혼합물에 TMSOTf (434 mg, 1.95 mmol, 353 uL)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 10℃로 가온시키고 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, DCM/MeOH 1/0 내지 50/1)로 직접 정제하여 2-[[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-4-[2-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시에틸] 피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (210 mg, 229 umol, 70.3 % 수율, 89.5 % 순도)을 황색 반-고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 821.5 [M+H]+.
단계 F: 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시에틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (10 mL) 중 2-[[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)- 4-[2-[2-[tert-부틸 (디페닐)실릴] 옥시에틸]피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (210 mg, 256 umol) 및 DIEA (49.6 mg, 384 umol, 67.0 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (33.9 mg, 269 umol)을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 나누어서 첨가했다. 30분 동안 동일한 온도에서 교반한 후, 반응 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, DCM/MeOH 1/0 내지 50/1)로 직접 정제하여 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (221 mg, 214 umol, 83.6 % 수율, 84.7 % 순도)을 누르스름한 반-고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 875.4 [M+H]+.
단계 G: 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (10 mL) 중 1-[4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[2-(디메틸아미노) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-3-[2-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시에틸]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (221 mg, 253 umol)의 혼합물에 BBr3 (949 mg, 3.79 mmol, 365 uL)을 -40℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 조 pdt를 0℃에서 MTBE (25 mL), 포화 NaHCO3 용액 (0.5 mL)으로 pH~ 8로 세정하고 MeOH (3 mL)에 용해시켰다. 수득한 용액을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225 % 포름산) - ACN]; B %: 11 % - 41 %, 10분)로 정제하여 1-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (26.7 mg, 44.0 umol, 17.4 % 수율, 97.8 % 순도, 포름산 염)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 547.3 [M+H]+.
실시예 173
1-(4-(7-(3-하이드록시-2-메틸나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-(4-(7-(3-하이드록시-2-메틸나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 F에서 (2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트를 (3-메톡시-2-메틸-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하여 실시예 165 1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온에 대한 절차에 따라 제조하여 원하는 생성물 1-(4-(7-(3-하이드록시-2-메틸나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을 황색 고체 (10.4 mg, 13.1% 수율, 98.1% 순도)로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 573.5 [M+H]+.
실시예 174
(R)-1-(4-(2-((5,5-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (5 R )-5-( 하이드록시메틸 )-2,2-디메틸- 파이롤리딘 -1- 카복실레이트 : 무수 THF (4 mL) 중 (2R)-1-tert-부톡시카보닐-5,5-디메틸-파이롤리딘- 2-카복실산 (500 mg, 2.06 mmol)의 용액에 BH3-Me2S (2 M, 1.23 mL)을 15℃에서 적가했다. 반응을 50℃에서 5분 동안 가열했다. 빙욕에서 냉각한 후, 상기 혼합물에 메탄올 (20 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 감압 하에서 농축했다. tert-부틸 (5R)-5-(하이드록시메틸)-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트 (400 mg, 1.74 mmol, 84.9% 수율)을 백색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 3.97 - 3.81 (m, 1H), 3.62 (dd, J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.45 - 3.33 (m, 1H), 2.02 - 1.79 (m, 3H), 1.79 - 1.67 (m, 1H), 1.49 - 1.41 (m, 12H), 1.32 (s, 3H).
단계 B: 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-tert-부톡시카보닐-5,5-디메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: THF (10 mL) 중 tert-부틸 (5R)-5-(하이드록시메틸)-2,2-디메틸- 파이롤리딘-1-카복실레이트 (212 mg, 926 umol) 및 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸) -2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 463 umol,)의 용액에 t-BuONa (133 mg, 1.39 mmol)을 첨가했다. 15℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 H2O (20 mL)에 부었고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 유기상을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-tert-부톡시카보닐-5,5-디메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (110 mg, 129 umol, 28.1% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 813.5 [M+H]+.
단계 C: tert-부틸 (5R)-5-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트: NH3으로 MeOH (30 mL)에 -40℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 상기 혼합물 (NH3/MeOH) 중 벤질 4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-tert-부톡시카보닐-5,5- 디메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 246 umol)의 용액에 건조 Pd-C (10%, 100 mg)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 농축시켜 생성물 tert-부틸 (5R)-5-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트 (150 mg, 244 umol, 99.4% 수율, 96 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고 다음 단계에서 정제없이 직접 사용했다. ES+APCI MS m/z 589.3 [M+H]+.
단계 D: tert-부틸 (5R)-5-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (3 mL) 중 tert-부틸 (5R)-5-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4- 피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트 (130 mg, 221 umol) 및 DIEA (285 mg, 2.21 mmol, 385 uL)의 혼합물에 디클로로메탄 (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (22.3 mg, 176 umol)의 용액을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 포화 NaHCO3 (2 mL) 수용액의 첨가로 켄칭했다. 그 다음 혼합물을 물 (20 mL)에 부었고 디클로로메탄 (20 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 1/0 내지 10/1)로 정제했다. tert-부틸 (5R)-5-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트 (140 mg, 217 umol, 98.6 % 수율)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 643.6 [M+H]+.
단계 E: 1-[4-[2-[[(2R)-5,5-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (200 uL) 중 tert-부틸 (5R)-5-[[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트 (120 mg, 187 umol)의 용액에 TFA (212 mg, 1.87 mmol, 138 uL)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 그 다음 디클로로메탄 (5 mL)로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH=7로 조정했다. 혼합물을 디클로로메탄 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 45 %-75 %, 12분)으로 정제했다. 1-[4-[2-[[(2R)-5,5-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (30 mg, 53.6 umol, 28.7 % 수율, 97 % 순도)을 황색 고체로서 동결건조로 수득했다. ES+APCI MS m/z 543.5 [M+H]+.
실시예 175
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시-2-메틸나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시-2-메틸나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온을, 단계 F에서 tert-부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-(3-모폴리노프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트를 tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트로 대체하고 (3-메톡시-2-메틸-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트를 (2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하여 실시예 165의 절차에 따라 합성했다. 1-[4-[7-(3-하이드록시-2-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (10.2 mg, 17.3 umol, 21.4 % 수율, 100 % 순도, 포름산 염)을 백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]+.
실시예 176
2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 ( 3a R )-1-옥소- 3a,4 ,6,7- 테트라하이드로 -3 H -옥사티아졸로[3,4-a]피라진-5-카복실레이트: DCM (100 mL) 중 이미다졸 (15.7 g, 231 mmol)의 용액에 SOCl2 (8.25 g, 69.4 mmol, 5.03 mL)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 DCM (100 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (5 g, 23.1 mmol)을 -70℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고 분리하고, 수성층을 DCM (40 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (3aR)-1-옥소-3a,4,6,7-테트라하이드로-3H-옥사티아졸로[3,4-a]피라진-5-카복실레이트 (5.8 g, 22.1 mmol, 95.6% 수율)을 갈색 고체로서 수득했다.
단계 B: tert -부틸 ( 3a R )-1,1- 디옥소 - 3a,4 ,6,7- 테트라하이드로 -3 H - 옥사티아졸로[3,4-a]피라진 -5-카복실레이트: MeCN (225 mL) 중 tert-부틸 (3aR)-1-옥소-3a,4,6,7-테트라하이드로-3H-옥사티아졸로[3,4-a]피라진-5-카복실레이트 (7.5 g, 28.6 mmol)의 용액에 물 (75 mL) 중 NaIO4 (7.95 g, 37.2 mmol, 2.06 mL) 이어서 RuCl3.H2O (129 mg, 572 umol)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (10 mL)로 켄칭하고 EtOAc (20 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=3:1 내지 1:1)로 정제하여 tert-부틸 (3aR)-1,1-디옥소-3a,4,6,7-테트라하이드로-3H-옥사티아졸로[3,4-a]피라진-5-카복실레이트 (7 g, 25.2 mmol, 88.0% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.64 (dd, J=6.4, 8.0 Hz, 1H), 4.36 - 3.94 (m, 3H), 3.64 (ddt, J=3.6, 6.0, 9.2 Hz, 1H), 3.46 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.13 (br s, 1H), 2.96 (dt, J=3.2, 11.2 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H)
단계 C: tert -부틸 (3 S )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1- 카복실레이트 : DMF (100 mL) 중 tert-부틸 (3aR)-1,1-디옥소-3a,4,6,7-테트라하이드로-3H-옥사티아졸로[3,4-a]피라진-5-카복실레이트 (5 g, 18.0 mmol)의 용액에 KCN (1.04 g, 16.0 mmol, 684.94 uL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 16시간 동안 50℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 HCl (2 M, 50 mL)로 켄칭하고 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 NaOH (40 %, 10 mL)로 염기성화하고 EtOAc (3 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=3:1 내지 0:1, 그 다음 EtOAc: MeOH= 100:1 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 (3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.1 g, 4.88 mmol, 27.2% 수율)을 갈색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.05 - 3.71 (m, 2H), 3.08 - 2.88 (m, 3H), 2.84 - 2.62 (m, 2H), 2.56 - 2.37 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
단계 D: 2-[(2 S )-피페라진-2-일] 아세토니트릴 : tert-부틸 (3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (850 mg, 3.77 mmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL)의 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 용매를 진공 하에서 제거하여 2-[(2S)-피페라진-2-일]아세토니트릴 (740 mg, 3.74 mmol, 99.0% 수율, 2HCl)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 4.04 - 3.90 (m, 1H), 3.81 - 3.70 (m, 2H), 3.69 - 3.61 (m, 2H), 3.53 - 3.36 (m, 2H), 3.13 (d, J=6.4 Hz, 2H).
단계 E: 2-[(2 S )-4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-2-일]아세토니트릴 : 디옥산 (25 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (1.3 g, 4.42 mmol) 및 2-[(2S)-피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.17 g, 5.91 mmol, 2HCl)의 혼합물에 DIEA (2.86 g, 22.1 mmol, 3.85 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 80 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.69 g, 4.41 mmol, 100% 수율)을 갈색 고체로서 수득했다.
단계 F: tert -부틸 (2 S )-4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 2-[(2S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.69 g, 4.41 mmol) 및 (Boc)2O (10.3 g, 47.2 mmol, 10.8 mL)의 반응 혼합물을 2시간 동안 50℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=10:1 내지 1:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.1 g, 2.12 mmol, 48.0% 수율, 93% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 483.4 [M+H]+.
단계 G: tert-부틸 (2S)-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: THF (20 mL) 중 2-(디메틸아미노)에탄올 (415 mg, 4.66 mmol, 468 uL)의 용액에 NaH (149 mg, 3.73 mmol, 60% 순도)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 tert-부틸 (2S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.86 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 밀봉 튜브에서 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고 EtOAc (3 × 40 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 활성탄으로 처리하고 여과했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.12 mmol, 60.1% 수율)을 갈색 고체로서 수득했다.
단계 H: tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: NH3으로 MeOH (20 mL)에 5분 동안 거품을 일으켰다. 용액에 tert-부틸 (2S)-4-[7-벤질-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.12 mmol) 및 10% Pd/C (200 mg)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 40℃에서 16시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 MeOH (3 × 30 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex luna(2) C18 250*50 10u; 이동상: [물(0.225% 포름산)-ACN];B%: %-%,30MIN;60%분)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (167 mg, 331 umol, 29.6% 수율, 88.3% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 446.3 [M+H]+.
단계 I: tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 404 umol), (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트 (248 mg, 808 umol) 및 Cs2CO3 (395 mg, 1.21 mmol)의 용액에 XPHOS Palladacycle Gen 3 (34.20 mg, 40.4 umol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 70℃에서 4 시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE:EA= 5:1 내지 0:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 272 umol, 67.3% 수율, 91.3% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 672.0 [M+H]+.
단계 J: [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: DCM (0.3 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 298 umol)의 용액에 TFA (420 mg, 3.68 mmol, 273 uL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (238 mg, 298 umol, 99.9% 수율, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 K: [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: DCM (5 mL) 중 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (238 mg, 298 umol, 2TFA) 및 DIEA (308 mg, 2.38 mmol, 415 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (56.3 mg, 446 umol)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 한 방울의 물로 켄칭했다. 혼합물을 (실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc= 1:1 내지 0:1, 그 다음 EtOAc: MeOH= 50:1 내지 3:1)로 정제하여 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (300 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 626.4 [M+H]+.
단계 L: 2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: THF (3 mL) 중 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (300 mg, 479 umol)의 용액에 물 중 NaOH (2 M, 3 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 8시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 0.5 mL의 포름산 (물 중 20 %)로 pH=7로 산성화하고 DCM (5 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다.
잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물(0.225% 포름산)-ACN];B%: 25%-49%,10분)로 정제하여 2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (18.3 mg, 30.2 umol, 2개의 단계 10.1% 수율, 96.7% 순도, 포름산 염)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 542.5 [M+H]+.
실시예 177
2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 549 umol) 및 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (126 mg, 1.10 mmol)의 용액에 t-BuONa (79.1 mg, 823 umol)을 18℃에서 첨가하고 반응 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에, 그 다음 EtOAc (20 mL) 및 물 (15 mL)을 첨가하고, 그 다음 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% 포름산) = 42 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 331 umol, 60.4 % 수율, 99.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 598.3[M+H]+.
단계 B: 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 334 umol) 및 TFA (763 mg, 6.69 mmol, 495 uL)의 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (250 mg, 조물질, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (250 mg, 344 umol, 2TFA) 및 DIEA (356 mg, 2.76 mmol, 480 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (65.2 mg, 517 umol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 18℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (3 mL)로 켄칭하고 그 다음 DCM (3 × 6 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 30%-60%, 3분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (9.98 mg, 17.0 umol, 4.94 % 수율, 94.1 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 552.5[M+H]+.
실시예 178
2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 7- 벤질 -2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-올: MeOH (1000 mL) 및 Na (22.0 g, 957 mmol, 22.7 mL)의 현탁액을 30분 동안 교반했다. 이러한 혼합물에 에틸 1-벤질-3-옥소-피페리딘-4-카복실레이트 (50 g, 191 mmol) 및 2-메틸이소티오우레아 (47.9 g, 344 mmol, 0.5 H2SO4)을 15℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 30시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 pH=6까지 HCl (2 M) (300 mL)로 산성화하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 200 mL의 물에 현탁시키고 빠르게 교반했다. 현탁액을 여과하고 백색 고체를 수집하고 에틸 아세테이트로 세정했다. 7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (68 g, 151 mmol, 79.1 % 수율, 64.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
단계 B: 7- 벤질 -4- 클로로 -2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 : CHCl3 (1000 mL) 중 7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (50 g, 174 mmol)의 용액에 POCl3 (166 g, 1.08 mol, 100 mL)을 첨가하고 혼합물을 80℃에서 13시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 EtOAc (500 mL)로 희석하고 포화 Na2CO3 (800 mL)을 사용하여 pH=7로 염기성화했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 400 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (100:1 내지 80:1의 PE: EA)로 정제하여 7-벤질-4-클로로-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (21.7 g, 67.4 mmol, 38.7 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 306.1[M+H]+.
단계 C: tert -부틸 4-(7- 벤질 -2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 : DMSO (52 mL) 중 7-벤질-4-클로로-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (2.6 g, 8.50 mmol) 및 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (1.68 g, 8.50 mmol, 2HCl)의 용액에 DIEA (5.49 g, 42.5 mmol, 7.40 mL)을 첨가했다. 혼합물을 80℃로 가온시키고 80℃에서 6시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 (Boc)2O (18.5 g, 85.0 mmol, 19.5 mL)을 첨가하고 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반했다. 물 (150 mL)을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 염수 (200 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (10:1 내지 0:1의 PE: EA)로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.74 g, 5.26 mmol, 61.9 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 495.4[M+H]+.
단계 D: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: DCE (50 mL) 중 tert-부틸 4-(7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.51 g, 5.07 mmol) 및 DIEA (1.97 g, 15.2 mmol, 2.65 mL)의 용액에 1-클로로에틸 카보노클로리데이트 (1.81 g, 12.7 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 MeOH (50 mL)에 용해시키고 반응 혼합물을 70℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 23%-48%,30;50%분)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.13 g, 2.51 mmol, 49.5 % 수율, 90.0 % 순도)을 핑크색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 405.3[M+H]+.
단계 E: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (18 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (730 mg, 1.80 mmol), (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트 (832 mg, 2.71 mmol) 및 Cs2CO3 (1.76 g, 5.41 mmol)의 용액에 [2-(2-아미노페닐)페닐]팔라듐(1+);디사이클로헥실-[2-(2,4,6-트리이소프로필페닐)페닐]포스판-메탄설포네이트 (153 mg, 180 umol)을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 반응 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 시, 물 (20 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (4 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (40 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (30:1 내지 0:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (740 mg, 1.15 mmol, 63.7 % 수율, 98.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 631.5[M+H]+.
단계 F: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DCM (2 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 158 umol)의 용액에 m-CPBA (32.2 mg, 158 umol, 85.0 % 순도)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 (4 mL)로 0℃에서 켄칭하고 분리하고, 그 다음 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (10:1 내지 0:1의 PE: EA)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (90 mg, 125 umol, 79.0 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 647.5[M+H]+.
단계 G: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (560 mg, 866 umol), [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (199 mg, 1.73 mmol)의 용액에 t-BuONa (125 mg, 1.30 mmol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)와 물 (15 mL) 사이에서 분할시키고 분리했다. 그 다음 수성층을 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼으로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (340 mg, 481 umol, 55.5 % 수율, 98.7 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 698.4[M+H]+.
단계 H: [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: DCM (0.2 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 201 umol)의 용액에 TFA (229 mg, 2.01 mmol, 148 uL)을 15℃에서 첨가하고 혼합물을 15℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (170 mg, 조물질, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 I: [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]2,2-디메틸프로파노에이트: DCM (0.3 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (170 mg, 206 umol, 2TFA) 및 DIEA (213 mg, 1.65 mmol, 287 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (38.9 mg, 309 umol)을 0℃에서 첨가하고 이러한 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (0.5 mL)로 켄칭하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물 (DCM: MeOH=10:1)을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=2:1 내지 EtOAc: MeOH=0:1)로 정제하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]2,2-디메틸프로파노에이트 (170 mg, 182 umol, 88.7 % 수율, 70.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 652.6[M+H]+.
단계 J: 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: THF (1.5 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]2,2-디메틸프로파노에이트 (170 mg, 261 umol)의 용액에 NaOH (2 M, 1.5 mL)을 첨가하고 반응을 15℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCOOH (20 %, 0.1 mL)로 pH=7로 중화했다. 수득한 혼합물을 DCM (3 × 5 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물(0.225% 포름산)-ACN];B%:12%-39%,10분)로 정제하여 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (6.88 mg, 11.6 umol, 4.44 % 수율, 95.6 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 568.5[M+H]+.
실시예 179
2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: [(3 R )-1- 메틸피롤리딘 -3-일]메탄올: THF (40 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (1 g, 4.97 mmol)의 용액에 LiAlH4 (377 mg, 9.94 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 70℃로 가온시키고 70℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 (3 mL)로 켄칭하고 여과하고, 필터 케이크를 THF (5 × 20 mL)로 세정했다. 조합된 유기상을 진공 하에서 농축하여 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (820 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 3.66 - 3.62 (dd, J=4.8, 10.0 Hz, 1H), 3.53 - 3.49 (dd, J=5.6, 10.0 Hz, 1H), 3.35 - 3.18 (m, 1H), 2.77 - 2.68 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.52 - 2.45 (m, 1H), 2.40 - 2.33 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31 - 2.26 (m, 1H), 2.04 - 1.93 (m, 1H), 1.69 - 1.59 (m, 1H)
단계 B: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 773 umol) 및 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (178 mg, 1.55 mmol)의 용액에 t-BuONa (111 mg, 1.16 mmol)을 첨가하고 이러한 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 에틸 아세테이트 (20 mL) 및 물 (15 mL)을 첨가하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% 포름산) = 42 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 245 umol, 31.7 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 698.6[M+H]+.
단계 C: [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 258 umol) 및 TFA (588 mg, 5.16 mmol, 382 uL)의 혼합물을 20℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (200 mg, 조물질, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 D: [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트: DCM (0.6 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (200 mg, 242 umol, 2TFA) 및 DIEA (470 mg, 3.63 mmol, 633 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (30.5 mg, 242 umol)을 0℃에서 첨가하고 반응을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EA= 2:1~0:1 내지 DCM: MeOH=50:1~1:1)로 정제하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (630 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 652.6[M+H]+.
단계 E: 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: THF (3 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (630 mg, 966 umol)의 용액에 NaOH (2 M, 3 mL)을 18℃에서 첨가하고 혼합물을 18℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCOOH (20 %, 0.5 mL)로 pH=7로 중화했다. 수득한 혼합물을 DCM (3 × 5 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 35%-65%, 3분)로 정제하여 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (9.4 mg, 15.8 umol, 1.64 % 수율, 95.5 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 568.5[M+H]+.
실시예 180
4-(3-(4-(피페라진-1-일)-7-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일옥시)프로필)모폴린
단계 A. 2-[[4- 브로모 -5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸 -1-일] 메톡시 ]에틸- 트리메틸 -실란 : DMF (30 mL) 중 4-브로모-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (650 mg, 2.45 mmol, 1 eq)의 용액에 NaH (117.71 mg, 2.94 mmol, 60% 순도, 1.2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, DMF (10 mL) 중 2-(클로로메톡시)에틸트리메틸-실란 (531.56 mg, 3.19 mmol, 564.29 uL, 1.3 eq)의 용액을 적가했다. 혼합물을 15℃로 가온시키고 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액 (50.0 mL)로 켄칭하고, 물 (100.0 mL)로 희석하고 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 100.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트= 10:1)로 정제했다. 2-[[4-브로모-5-(트리플루오로메틸)인다졸-1-일]메톡시]에틸-트리메틸-실란 (680 mg, 1.70 mmol, 69.44% 수율, 99.0% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 395.0[M+H]+.
단계 B. tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (40 mL) 중 2-[[4-브로모-5-(트리플루오로메틸)인다졸-1-일]메톡시]에틸-트리메틸-실란 (444.35 mg, 1.12 mmol, 1.3 eq), tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 864.71 umol, 1 eq), RuPhos (80.70 mg, 172.94 umol, 0.2 eq), Pd2(dba)3 (118.77 mg, 129.71 umol, 0.15 eq), 및 Cs2CO3 (845.21 mg, 2.59 mmol, 3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 질소 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 톨루엔을 제거했다. 잔류물을 물 100 mL로 희석하고 에틸 아세테이트 300 mL (100 mL x 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 300 mL (100 mL x 3)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM: CH3OH = 30:1 내지 20:1)로 정제했다. tert-부틸 4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 446.87 umol, 51.68% 수율, 86.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 773.3[M+H]+.
단계 C. 4-[3-[[4-피페라진-1-일-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린: DCM (2 mL) 중 tert-부틸-4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 111.72 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (254.77 mg, 2.23 mmol, 165.43 uL, 20 eq)을 25℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축했다. 4-[3-[[4-피페라진-1-일-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (200 mg, 조물질, TFA)을 갈색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.ES+APCI MS m/z 547.5[M+H]+.
단계 D. 1-[4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (2 mL) 중 4-[3-[[4-피페라진-1-일-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]프로필]모폴린 (200 mg, TFA) 및 DIEA (600 mg, 4.64 mmol, 808.63 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (13 mg, 103.08 umol)을 - 50℃에서 적가했다. 혼합물을 -50℃에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하고, 유기층을 물 (1 × 20 mL) 및 염수 (1 × 20 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (FA 조건) 칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 15%-36%,10분]으로 정제했다. 1-[4-[2-(3-모폴리노프로폭시)-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (18.26 mg, 28.12 mmol, 2개의 단계 23%, 99.6% 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 601.4[M+H]+.
실시예 181
1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A. 벤질 4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: THF (2 mL) 중 3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1] 헵탄-5-일)프로판-1-올 (107 mg, 681 umol)의 용액에 t-BuONa (98.1 mg, 1.02 mmol) 이어서 벤질 4-[2-메틸설피닐 -7-[5-메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 340 umol)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)에 부었고 DCM (2x10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 25%-55%, 12분)로 정제하여 벤질 4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (110 mg, 143 umol, 42.0 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.08 - 8.01 (m, 1H), 7.45 - 7.43 (m, 4H), 7.37 - 7.31 (m, 3H), 5.76 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 4.76 - 4.63 (m, 1H), 4.60 - 4.45 (m, 3H), 4.42 (s, 2H), 4.36 - 4.24 (m, 1H), 3.96 - 3.83 (m, 2H), 3.79 - 3.65 (m, 8H), 3.64 - 3.53 (m, 6H), 3.12 - 2.92 (m, 1H), 2.90 - 2.77 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.44 - 2.41 (m, 1H), 2.36 - 2.12 (m, 3H), 0.98 - 0.93 (m, 2H), 0.01 - -0.03 (m, 9H)
단계 B. tert-부틸 4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5- 메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: MeOH (2 mL) 중 벤질 4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로 [2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (90 mg, 117 umol) 및 BOC2O (51.1 mg, 234.1 umol, 53.8 uL)의 용액에 Pd/C (10 %, 50 mg)을 N2 분위기 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10 : 1)로 정제하여 tert-부틸 4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5- 메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (30 mg, 40.8 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 735.6[M+H]+.
단계 C. (1S,4S)-5-(3-((7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)프로필)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄: DCM (0.5 mL) 중 tert-부틸 4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로 [2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (30 mg, 40.8 umol)의 용액에 TFA (770 mg, 6.75 mmol)을 적가했다. 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 (1S,4S)-5-(3-((7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)프로필)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 (30 mg, 조물질)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 505.5[M+H]+.
단계 D. 1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: DCM (2 mL) 중 (1S,4S)-5-(3-((7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-4-(피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)프로필)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 (20 mg, 39.6 umol, 1 eq) 및 DIEA (30.7 mg, 238 umol, 41.4 uL, 6 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (4.00 mg, 31.7 umol, 0.8 eq)을 -50℃에서 첨가했다. 혼합물을 -40 내지 -20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 35%-65%, 12분)으로 정제했다. 생성물 1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (6.48 mg, 11.2 umol, 2개의 단계 28.3 % 수율, 96.8 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 559.5[M+H]+.
실시예 182
2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 403 umol), (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트 (248 mg, 806 umol) 및 Cs2CO3 (394 mg, 1.21 mmol)의 혼합물에 XPHOS Palladacycle Gen 3 (34.1 mg, 40.29 umol)을 첨가하고 반응 혼합물을 70℃에서 4 시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EA=3:1 내지 0:1)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (95 mg, 118 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 698.4 [M+H]+.
단계 B: [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트. DCM (0.1 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (40 mg, 57.3 umol)의 용액에 TFA (154 mg, 1.35 mmol)을 15℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 용매를 진공 하에서 제거하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (47 mg, 56.9 umol)를 수득했다.
단계 C: [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트. DCM (1 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (47 mg, 56.9 umol) 및 DIEA (58.9 mg, 455 umol)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (10.8 mg, 85.4 umol)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 한 방울의 물의 첨가로 켄칭했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=3:1 내지 EtOAc: MeOH =3:1)로 정제하여 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (130 mg, 조물질)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 652.5 [M+H]+.
단계 D: 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (1.5 mL) 중 [4-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (250 mg, 384 umol)의 용액에 물 중 NaOH (2 M, 1.5 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 15℃에서 9시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 2방울의 포름산 (물 중 20 %)의 첨가로 산성화하여 pH=7에 도달했다 및 수성층을 DCM (5 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC(칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 20%-47%,10분)로 정제하여 2-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (13.1 mg, 21.2 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 568.5 [M+H]+.
실시예 183
2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 549 umol) 및 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (126 mg, 1.10 mmol, 130 uL)의 용액에 t-BuONa (105 mg, 1.10 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 0.25시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EA/MeOH 50/1 내지 10/1)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 427 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 598.6 [M+H]+.
단계 B: 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (330 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (270 mg, 452 umol)의 용액에 TFA (515 mg, 4.52 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반하고 진공 하에서 농축했다. 그 다음 TFA (334 uL)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 조물질)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 498.4 [M+H]+.
단계 C: 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (276 mg, 451 umol) 및 DIEA (1.46 g, 11.3 mmol)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (51.2 mg, 406 umol)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (0.5 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-85%, 12분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (37.1 mg, 66.3 umol)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 552.4 [M+H]+.
실시예 184
1-[4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-(3-하이드록시프로폭시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
1-[4-[7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸 )-2-(3- 하이드록시프로폭시 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온을, 단계 B에서 2-(3-메톡시피롤리딘-1-일)에탄올을 3-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시프로판-1-올로 대체하여 실시예 136에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 490.3 [M+H]+.
실시예 185
1-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 3-(( 1R,4R )-2-옥사-5- 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 -5-일)프로판-1-올: 바이알에 (1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 HCl 염 (0.250 g, 2.522 mmol), CH3CN (5.04 mL) 및 3-브로모-1-프로판올 (0.274 mL, 3.026 mmol)을 첨가했다. 그 다음 K2CO3 (1.05 g, 7.57 mmol)을 첨가하고 혼합물을 50℃로 가온시키고, 여기서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고 여과하고 고체를 CH2Cl2로 세정했다. 여과물을, 그 다음 농축시키고 원유를 칼럼 크로마토그래피 (0.2% NH4OH를 갖는 5% MeOH/DCM)를 통해 정제하여 생성물을 무색 오일로서 수득했다.
단계 B: 1-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 단계 D에서 설명된 절차 대신에 하기 절차를 사용하여 실시예 127의 방법에 따라 합성했다. 바이알에 3-((1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올 (0.171 g, 1.09 mmol) 및 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.125 g, 0.218 mmol) 이어서 디옥산 (0.435 mL)을 첨가했다. 그 다음 Cs2CO3 (0.213 g, 0.653 mmol)을 첨가하고 혼합물을 15시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 CH2Cl2로 희석하고, 여과하고 잔존 고체를 CH2Cl2로 세정했다. 여과물을, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (0.2% NH4OH를 갖는 4% MeOH/DCM)로 정제하여 생성물을 황색 포움으로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 571.2 [M+H]+.
실시예 186
벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-(모폴리노메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
벤질 4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-(모폴리노메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 단계 D에서 설명된 절차 대신에 하기 절차를 사용하여 실시예 127의 방법에 따라 합성했다. 디옥산 (2.61 mL) 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.150 g, 0.261mmol) 및 3-(4-모폴리노메틸)-페닐붕산 피나콜 에스테르 하이드로클로라이드 (0.266 g, 0.784 mmol)의 용액에 Na2CO3 (0.523 mL, 1.0452 mmol, 2.0M Aq)을 첨가했다. 혼합물을 아르곤 거품발생으로 5분 동안 탈가스했다. 그 다음 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (0) (0.030 g, 0.026 mmol)을 첨가하고 혼합물을 95℃로 가열하고 여기서 7시간 동안 교반했다. 반응을 주위 온도로 냉각시키고 그 다음 CH2Cl2로 희석하고 여과했다. 고체를 CH2Cl2로 세정했다. 여과물을, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (30-50% EtOAc/DCM)로 정제하여 생성물을 황색 포움으로서 수득했다. ES+APCI MS m/z 591.3 [M+H]+.
실시예 187
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(R)-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 N-메틸-D-프롤리놀로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]+.
실시예 188
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피롤리딘 -3-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (3S)-(1-메틸-피롤리딘-3-일)-메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 529.2 [M+H]+.
실시예 189
1-(4-(2-((1-벤질피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-(4-(2-((1- 벤질피롤리딘 -3-일) 메톡시 )-7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 . 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (1-벤질피롤리딘-3-일)메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 605.3 [M+H]+.
실시예 190
1-(4-(2-((1-사이클로프로필피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-(4-(2-((1- 사이클로프로필피롤리딘 -3-일) 메톡시 )-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 . 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (1-사이클로프로필-3-피롤리디닐)메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 555.3 [M+H]+.
실시예 191
1-((2S,6R)-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-(( 3S,5R )-4-( tert - 부톡시카보닐 )-3,5-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: N,N -디메틸아세트아미드 (1 mL) 중 벤질 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (500 mg, 1.48 mmol), tert-부틸 시스-2,6-디메틸피페라진-1-카복실레이트 (349 mg, 1.63 mmol) 및 DIEA (0.26 mL)의 현탁액을 r.t.에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)과 1M NaHCO3 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 2M Na2CO3 및 염수 (2 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 20 내지 50% EtOAc을 용출물로서 사용하는 실리카겔 Redisep 24g 칼럼상에서 크로마토그래피를 수행하여 무색 고체 (0.440 g, 58%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 516.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-((3S,5R)-4-(tert-부톡시카보닐)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 벤질 4-((3S,5R)-4-(tert-부톡시카보닐)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (400 mg, 0.775 mmol), 3-모폴리노프로판-1-올 (400 mg, 2.33 mmol, 5 eq.), 탄산세슘 (1.26 g, 3.88 mmol, 5 eq.) 및 디옥산 (3 mL)의 혼합물을 4-mL 바이알에서 질소로 퍼지했다. 바이알을 캡핑하고 혼합물을 110℃에서 20시간 동안 교반하고, 그 다음 120℃에서 밤새 교반했다. 반응을 냉각시키고, EtOAc (10 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 진공에서 증발시켰다. 생성물을, 2 내지 10% MeOH/DCM +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 40g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 밝은-황색 비정질 고체 (272 mg, 56%)를 수득했다.
단계 C: tert -부틸 ( 2S,6R )-2,6-디메틸-4-(2-(3- 모폴리노프로폭시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-((3S,5R)-4-(tert-부톡시카보닐)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (272 mg, 0.095 mmol), 탄소상 팔라듐 (50 mg, 데구싸 유형, 10 wt% , 50% H 2 O), EtOH (5 mL) 및 THF (5 mL)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOH (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (2 x 2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시키고 2일에 걸쳐 고진공 하에서 건조시켜 황백색 포움 (205 mg, 96%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 491.3 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸 (2S,6R)-4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카복실레이트: 건조 탈가스된 톨루엔 (0.5 mL) 중 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (19 mg, 0.020 mmol)의 교반 현탁액에 실온에서 질소 하에서 (+/-)-2,2`-비스(디페닐포스피노)-1,1`-바이나프틸 (24 mg, 0.038 mmol)을 첨가했다. 혼합물을, 그 다음 16분 동안 100℃로 가열했다. 수득한 어두운 혼합물을 실온으로 냉각시키고 고체 나트륨-t-부톡시드 (39 mg, 0.41 mmol)을 첨가하고, 이어서 탈가스된 건조 톨루엔 (0.5 mL) 중 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (82 mg, 0.25 mmol) 및 tert-부틸 (2S,6R)-2,6-디메틸-4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 0.20 mmol)을 첨가했다. 플라스크를 폐쇄하고 30분 동안 교반하면서 100℃로 가열했다. 반응 혼합물을 냉각시키고 EtOAc (20 mL)과 물 (10 mL)을 사이에서 분할시켰다. 유기층을 분리하고 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을, DCM 중 4% MeOH +0.1% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 40g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 무색 고체 (87 mg, 63%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 684.3 [M+H]+.
단계 E: 1-((2S,6R)-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: Tert-부틸 (2S,6R)-4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카복실레이트 (87 mg, 0.129 mmol)을 1M TFA/DCM에 용해시켰다. 반응 혼합물은 적갈색, 그 다음 암적색으로 변했다. LCMS는 Boc 및 MOM의 비-선택적 탈보호를 나타내었다. 30분 동안 실온에서 교반한 후, 0.2 mL의 추가의 TFA을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 30분 동안 두었다. 수득한 2상 혼합물을 진공에서 증발시키고, 물 (5 mL) 및 DCM (10 mL) + NEt3 (0.5 mL) 사이에서 분할하고 유기층을 분리했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중 6% MeOH +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 40g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 또 다른 잔류물을 수득했고, 이것을 역상, C18, 5-95% MeCN-H2O +0.1%TFA 상에서 재정제하여 TFA (1.35 mg, 1.3%)를 가지고 있는 비스-염으로 추정되는 생성물을 수득했다. ES+APCI MS m/z 587.3 [M+H]+.
실시예 192
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(R)-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피페리딘 -3-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 . 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 3-피페리딘메탄올,1-메틸-,(3R)-로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 193
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((4- 메틸모폴린 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (4-메틸-2-모폴리닐)메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]+.
실시예 194
1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((4- 메틸모폴린 -3-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 4-메틸-3-(하이드록시메틸)모폴린으로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 545.2 [M+H]+.
실시예 195
(R)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(R)-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피페리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (R)-(1-메틸피페리딘-2-일)메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 196
(S)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피페리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (S)-(1-메틸피페리딘-2-일)메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 543.2 [M+H]+.
실시예 197
(S)-1-(4-(2-((1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(2-((1- 에틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 [(2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 198
(S,E)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온
S,E )-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 F에서 아크릴로일 클로라이드를 트랜스-크로토닐 클로라이드로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 543.2[M+H]+.
실시예 199
(S,E)-4-(디메틸아미노)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온
( S,E )-4-(디메틸아미노)-1-(4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-((1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온. 본 화합물을 단계 F를 하기 절차로 대체하여 실시예 127에 따라 제조했다. 7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-4a,5,6,7,8,8a-헥사하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (150 mg, 0.288 mmol)을 DCM (5 mL)에 용해시키고 (2E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (74.4 mg, 0.576 mmol) 및 휘니그 염기 (252 μl, 1.44 mmol)로 처리했다. 이러한 혼합물에 분말로서 순수한EDC (55.2 mg, 0.288 mmol) 및 HOBT (38.9 mg, 0.288 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고 추가 3시간 동안 35℃로 가열했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고 CombiFlash (0%-15% DCM/MeOH w/ 1% NH4OH 개질제) 상에서 정제했다. 깨끗한 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜 (E)-4-(디메틸아미노)-1-(4-(7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4a,5,6,7,8,8a-헥사하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온 (105 mg, 0.166 mmol, 57.7 % 수율)을 수득했다. 이에 따라 생성물을 실시예 127의 나머지에 따라 (S,E)-4-(디메틸아미노)-1-(4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-온 (14.8 mg, 0.025 mmol, 15.2% 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 586.3[M+H]+.
실시예 200
(S)-1-(4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(2-((1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 실시예 127에 따라 제조했는데, 단계 C에서 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트를 나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하고 단계 F를 수행하지 않았다. ES+APCI MS m/z 513.3 [M+H]+.
실시예 201
1-((R)-2-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-((R)-2- 메틸 -4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 실시예 127에 따라 제조했는데, 단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트를 (R)-벤질 2-메틸피페라진-1-카복실레이트로 대체하고 단계 C에서 3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트를 나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하고 단계 F를 수행하지 않았다. ES+APCI MS m/z 527.3 [M+H] +.
실시예 202
1-((S)-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-((S)-4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 실시예 127에 따라 제조했는데, 단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트를 벤질 (S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트로 대체했다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+.
실시예 203
1-((S)-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
1-((S)-4-(7-(3- 하이드록시나프탈렌 -1-일)-2-(((R)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. 본 화합물을 실시예 127에 따라 제조했는데, 단계 A에서 벤질 피페라진-1-카복실레이트를 벤질 (S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트로 대체하고 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 N-메틸-D-프롤리놀로 대체했다. ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]+ .
실시예 204
1-(4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)아미노)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)아미노)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.13 mmol), 1-사이클로프로필피페리딘-4-아민 (55 mg, 0.39 mmol) 및 디옥산 (0.5 mL)의 혼합물을 36시간 동안 120℃로 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (10 mL)와 물 (3 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시키고 잔류물 크로마토그래피를 DCM 중 6 내지 10% MeOH +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 24g 상에서 수행하여 무색 고체 (43 mg, 49%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 678.3 [M+H]+.
단계 B: 1-(4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)아미노)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 벤질 4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)아미노)-7-(3-(메톡시메톡시)-나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (43 mg, 0.063 mmol), 탄소상 팔라듐 (20 mg, 데구싸 유형, 10 wt% , 50% H 2 O), EtOH (1.5 mL) 및 THF (1.5 mL)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOH (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (2 x 2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고 교반하면서 얼음-염조 상에서 냉각시켰다. 트리에틸아민 (0.03 mL)을 그 다음, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (10 μL)을 한번에 첨가했다. -5℃에서 1분 후, 반응을 NH4OH (0.05 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)과 함께 5분 동안 교반하고, 여과하고 크로마토그래피를, DCM 중 6 내지 20% MeOH +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 12g 상에서 수행하여 무색 고체 (22 mg, 48%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 598.3 [M+H]+.
단계 C: 1-(4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)아미노)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: MeOH 및 THF 1:1 (3 mL)의 혼합물 중 1-(4-(2-((1-사이클로프로필피페리딘-4-일)아미노)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (22 mg, 0.037 mmol)의 교반 용액에 6M 수성 HCl (0.3 mL, 34 eq.)을 한번에 첨가하고 수득한 용액을, 50℃에서 1.5시간 동안 교반하면서 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 0.5M Na2CO3 (10 mL) 사이에서 분할시키고 유기층을 분리했다. 조합된 유기물을 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, DCM 중 8 내지 10% MeOH +0.2 % NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 12 g 상에서 크로마토그래피를 수행하여 무색 고체 (15 mg, 74%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 554.3 [M+H]+.
실시예 205
1-(4-(7-(6-하이드록시퀴놀린-8-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-(7-(6-(메톡시메톡시)퀴놀린-8-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 탈가스된 건조 톨루엔 (0.5 mL) 중 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (17 mg, 0.019 mmol)의 교반 현탁액에 질소 하에서 실온에서 (+/-)-2,2`-비스(디페닐포스피노)-1,1`-바이나프틸 (24 mg, 0.038 mmol)을 첨가하고 혼합물을 15분 동안 100℃로 가열했다. 어두운 혼합물을 실온으로 냉각시키고 고체 나트륨-t-부톡시드 (36 mg, 0.38 mmol)을, 그 다음 첨가하고, 이어서 탈가스된 건조 톨루엔 (0.5 mL) 중 8-브로모-6-(메톡시메톡시)퀴놀린 (61 mg, 0.23 mmol) 및 벤질 4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (94 mg, 0.19 mmol)의 용액을 첨가했다. 플라스크를 폐쇄하고 1시간 동안 100℃로 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 유기 층을 분리했다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 디클로로메탄 중 4 내지 10% MeOH (+0.2% NH4OH)을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 24g 상에서 크로마토그래피를 수행하여 황색 고체 (28 mg, 22%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 684.3 [M+H]+.
단계 B: 1-(4-(7-(6-(메톡시메톡시)퀴놀린-8-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 벤질 4-(7-(6-(메톡시메톡시)퀴놀린-8-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (28 mg, 0.095 mmol), Pd/C (15 mg, 데구싸 유형, 10 wt%, 50% H 2 O), EtOH (2 mL) 및 THF (2 mL)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOH (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (2 x 2 mL)로 세정하고 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 수득한 고체를 DCM (5 mL)에 용해시키고 교반하면서 얼음-염조에서 냉각시켰다. 트리에틸아민 (0.04 mL, 3 eq.)을, 그 다음 한번에 첨가하고 첨가하고 이어서 아크릴로일 클로라이드 (16 μL, 2 eq.)을 첨가했다. -5℃에서 1분 후, 반응을 NH4OH (0.05 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시켰다. 혼합물을 솜마개를 통해 여과하고, DCM 중 6 내지 10% MeOH +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 실리카겔, Redisep 12g 상에서 수행하여 또 다른 잔류물을 수득했고, 이것을 역상, C18, 5 내지 95% MeCN, +0.1% HCO2H 상에서 재정제하여 생성물을 수득했고, 이것은 황색 고체로서 비스-포르메이트 염인 것으로 추정되었다 (12 mg, 42%). ES+APCI MS m/z 604.2 [M+H]+.
단계 C: 1-(4-(7-(6-하이드록시퀴놀린-8-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 1-(4-(7-(6-(메톡시메톡시)퀴놀린-8-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (12 mg, 0.017 mmol)의 교반 용액에 MeOH 및 THF 1:1 (1 mL)의 혼합물을 6M 수성 HCl (0.1 mL, 35 eq.)을 한번에 첨가하고 용액을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하면서 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 pH 8의 0.5M Na-인산염 버퍼 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 조합된 유기물을 염수 (1 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을, DCM 중 7 내지 10% MeOH +0.2 % NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 12 g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 잔류물을 수득했고, 이것을 역상 크로마토그래피, C18, 5 내지 95% MeOH +0.1%TFA,)로 재정제하여 생성물을 트리스 TFA 염으로서 무색 고체로서 얻었다 (4.87 mg, 31%). ES+APCI MS m/z 560.3 [M+H]+.
실시예 206
1-(4-(2-(3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 3-(3- 아자바이사이클로[3.1.0]헥산 -3-일)프로판-1-올. 4-mL 바이알 중 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산 하이드로클로라이드 (200 mg, 1.67 mmol), 3-브로모프로판-1-올 (166 μL, 1.84 mmol, 1.1 eq.), K2CO3 (0.69 g, 5.02 mmol, 3 eq.), NaI (251 mg, 1.67 mmol, 1 eq.) 및 아세토니트릴 (2 mL)의 혼합물을 N2으로 씻어내었다. 바이알을 캡핑하고 실온에서 2일 동안 교반했다. 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고 에테르 (15 mL)로 추출했다. 에테르 용액을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 배 형상 플라스크에 경사분리하고 트리플루오로아세트산 (128 μL, 1 eq)을 첨가하고 혼합물을 ~5 mL로 농축했다. 상부 에테르성 층을 경사분리하고 버리고, 잔존 유성 액체를 밤새 진공 하에서 건조시켰다. 유성 액체를 물 (0.5 mL)로 희석하고, 그 다음 에테르 (10 mL)을 교반하면서 첨가하고, 이어서 50% NaOH (0.2 mL, 2.5 mmol, 2 eq.)을 첨가했다. 층을 분리하고, 유기 용액을 KOH 상에서 건조시키고 질소 하에서 주의하여 농축하여 조 3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로판-1-올을 무색 오일로서 수득했다. 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 B: 벤질 4-(2-(3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)-나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 1.7-mL 바이알 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.13 mmol), 조물질 3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로판-1-올 (55 mg, 0.39 mmol, 3 eq.), Cs2CO3 (213 mg, 0.65 mmol, 5 eq.) 및 디옥산 (0.5 mL)의 혼합물을 질소로 퍼지했다. 바이알을 캡핑하고 120℃에서 주말에 걸쳐 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 증발시키고 잔류물을, 4 내지 10%MeOH +1% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 24g 상에서 크로마토그래피를 수행하여 생성물을 수득했다. ES+APCI MS m/z 679.3 [M+H]+.
단계 C: 1-(4-(2-(3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 벤질 4-(2-(3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)-나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (49 mg, 0.072 mmol), 탄소상 팔라듐 (12 mg, 데구싸 유형, 10 wt% , 50% H 2 O), EtOH (1.5 mL) 및 THF (1.5 mL)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOH (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (2 x 2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 수득한 무색 고체를 DCM (5 mL)에 용해시키고, 교반하면서 얼음-염조에서 냉각시키고 트리에틸아민 (0.04 mL, 3 eq.)을 한번에 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (16 μL, 2 eq.)을 첨가했다. -5℃에서 1분 후, 반응을 NH4OH (0.05 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시켰다. 조 생성물을 DCM (5 mL)에 용해시키고, 솜마개를 통해 여과하고 크로마토그래피를, DCM 중 6 내지 10% MeOH +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 12g 상에서 수행하고 무색 고체 (30 mg, 69%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 599.3 [M+H]+.
단계 D: 1-(4-(2-(3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: MeOH 및 THF 1:1 (3 mL)의 혼합물 중 1-(4-(2-(3-(3-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (30 mg, 0.050 mmol)의 교반 용액에 6M 수성 HCl (0.3 mL, 36 eq.)을 첨가하고 용액을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하면서 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (20 mL)과 0.5M Na2CO3 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수 (1 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, DCM 중 6% MeOH +0.2 % NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 12 g 상에서 크로마토그래피를 수행하여 무색 고체 (20.62 mg, 74%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 555.4 [M+H]+.
실시예 207
(R)-1-(4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: (R)-2-(3- 플루오로피페리딘 -1-일)에탄-1-올. 4-mL 바이알 중 R-3-플루오로피페리딘 하이드로클로라이드 (209 mg, 1.50 mmol), 2-브로모에탄-1-올 (117 μL, 1.65 mmol, 1.1 eq.), K2CO3 (0.62 g, 4.5 mmol, 3 eq.), 요오드화나트륨 (225 mg, 1.5 mmol, 1 eq.) 및 아세토니트릴 (2 mL)의 혼합물을 N2로 씻어내었다. 바이알을 캡핑하고 실온에서 2일 동안 교반했다. 수득한 현탁액을 물 (2 mL)로 희석하고 에테르 (15 mL)로 추출했다. 에테르 용액을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 배 형상 플라스크에 경사분리하고 트리플루오로아세트산 (115 μL, 1 eq)을 첨가하고 혼합물을 ~5 mL로 농축시켰다. 상부 에테르성 층을 경사분리하고, 잔존 유성 액체를 밤새 진공 하에서 건조시켰다. 유성 액체를 교반하면서 물 (0.5 mL) 및 에테르 (10 mL)로 희석하고, 이어서 50% NaOH (0.2 mL, 2.5 mmol, 2 eq.)을 첨가했다. 층을 분리하고, 유기 용액을 KOH 상에서 건조시키고, 여과하고 질소 하에서 주의하여 농축하여 조 아미노 알코올을 무색 오일로서 얻었다 (120 mg, 54%).
단계 B: 벤질 (R)-4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 1.7-mL 바이알 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.13 mmol), 조물질 (R)-2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에탄-1-올 (58 mg, 0.39 mmol), Cs2CO3 (213 mg, 0.65 mmol), 및 디옥산 (0.5 mL)의 혼합물을 질소로 퍼지했다. 바이알을 캡핑하고 110℃에서 48시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (1 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOAc (2 x 2 mL)로 세정하고 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, DCM 중 6 %MeOH +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 24g 상에서 크로마토그래피를 수행하여 무색 고체 (30 mg, 34%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 685.4 [M+H]+.
단계 C: (R)-1-(4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 벤질 (R)-4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-(메톡시메톡시)-나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (30 mg, 0.044 mmol), 탄소상 팔라듐 (10 mg, 데구싸 유형, 10 wt% , 50% H 2 O), EtOH (1.5 mL) 및 THF (1.5 mL)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOH (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (2 x 2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (3 mL)에 용해시키고 교반하면서 얼음-염조에서 냉각시켰다. 트리에틸아민 (0.02 mL, 3 eq.)을 그 다음 한번에 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (7 μL, 2 eq.)을 첨가했다. -10℃에서 2분 후, 반응을 NH4OH (0.03 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고, 여과하고, 크로마토그래피를 DCM 중 6 내지 10% MeOH + DCM 중 0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 12g 상에서 수행하여 무색 고체 (22 mg, 83%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 605.3 [M+H]+.
단계 D: (R)-1-(4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: MeOH 및 THF 1:1 (3 mL)의 혼합물 중 (R)-1-(4-(2-(2-(3-플루오로피페리딘-1-일)에톡시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (22 mg, 0.036 mmol)의 교반 용액에 6M 수성 HCl (0.3 mL)을 첨가하고 용액을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하면서 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (20 mL)과 0.5M Na2CO3 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수 (1 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, DCM 중 6% MeOH +0.2 % NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 12 g 상에서 크로마토그래피를 수행하여 무색 고체 (16.86 mg, 83%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 561.2 [M+H]+.
실시예 208
1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-디플루오로피롤리딘-1-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 3-(( 3R,4S )-3,4- 디플루오로피롤리딘 -1-일)프로판-1-올. 7-mL 바이알 중 (3R,4S)-3,4-디플루오로파이롤리딘 하이드로클로라이드 (200 mg, 1.39 mmol), 3-브로모프로판-1-올 (126 μL, 1.39 mmol, 1.0 eq.), 탄산칼륨 (577 mg, 4.18 mmol, 3 eq.), 요오드화나트륨 (209 mg, 1.39 mmol, 1 eq.) 및 아세토니트릴 (2 mL)의 혼합물을 N2로 씻어내었다. 바이알을 캡핑하고 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반했다. 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고 에테르 (15 mL)로 추출했다. 에테르 용액을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 배 형상 플라스크에 경사분리했다. 트리플루오로아세트산 (107 μL, 1 eq)을 그 다음 첨가하고 혼합물을 증발시키고 진공에서 건조시켰다. 잔류물을 물 (0.5 mL)로 희석하고 에테르 (5 mL)로 세정했다. 수성층에 디에틸 에테르 (15 mL) 이어서 10M NaOH (0.2 mL, 5 mmol)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 교반했다. 유기층을 분리하고 고체 KOH 상에서 건조시키고, 솜마개를 통해 여과하고 N2 하에서 증발시켜 무색 오일 (80 mg, 35%)를 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다.
단계 B: 벤질 4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-디플루오로피롤리딘-1-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 1.7-mL 바이알 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.13 mmol), 조물질 2-(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)에탄-1-올 (65 mg, 0.39 mmol), 탄산세슘 (213 mg, 0.65 mmol, 5 eq.) 및 디옥산 (0.5 mL)의 혼합물을 질소로 퍼지했다. 바이알을 캡핑하고 110℃에서 주말에 걸쳐 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc (15 mL)과 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을, DCM 중 3% MeOH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 24g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 무색 고체 (46 mg, 50%)를 수득했다. ES+APCI MS m/z 703.3 [M+H]+.
단계 C: 1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-디플루오로피롤리딘-1-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 벤질 4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-디플루오로피롤리딘-1-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (46 mg, 0.065 mmol), 탄소상 팔라듐 (15 mg, 데구싸 유형, 10 wt% , 50% H 2 O), EtOH (1 mL) 및 THF (1 mL)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOH (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (2 x 2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (3 mL)에 용해시키고 교반하면서 얼음-염조에서 냉각시켰다. 트리에틸아민 (0.02 mL)을 그 다음 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (7 μL, 2 eq.)을 첨가했다. -10℃에서 2분 후, 반응을 NH4OH (0.03 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (3 mL)에 용해시키고, 여과하고 DCM 중 5 % MeOH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 12g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 무색 고체 (29 mg, 71%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 623.3 [M+H]+.
단계 D: 1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-디플루오로피롤리딘-1-일)프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: MeOH 및 THF 1:1 (2 mL)의 혼합물 중 1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-디플루오로피롤리딘-1-일)프로폭시)-7-(3-(메톡시메톡시)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (29 mg, 0.047 mmol)의 교반 용액에 6M 수성 HCl (0.2 mL)을 첨가하고 용액을 50℃에서 1.5시간 동안 교반하면서 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 0.5M Na2CO3 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중 5% MeOH을 용출물로서 사용하는 실리카, Redisep 12 g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 무색 고체 (12.87 mg, 48%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 579.2 [M+H]+.
실시예 209
1-(4-(7-(5-메틸-1H-인돌-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 4- 브로모 -5- 메틸 -1-( 트리이소프로필실릴 )-1H-인돌: 건조 THF (2 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인돌 (100 mg, 0.476 mmol)의 용액을 얼음-염조에서 교반하면서 질소 하에서 냉각시켰다. 수소화나트륨 (23 mg 오일 중 60%, 0.57 mg, 1.2 eq.)을 첨가하고 혼합물을 30분 동안 -5 ℃에서, 그 다음 1시간 동안 실온에서 교반했다 (가스 방출이 멈추었다). 클로로트리이소프로필실란 (0.10 mL, 0.48 mmol, 1 eq.)을 그 다음 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 EtOAc (15 mL)과 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (5 mL), 염수 (5 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 정제하여 생성물을 수득했다. (107 mg, 63%).
단계 B: 벤질 4-(7-(5-메틸-1-(트리이소프로필실릴)-1H-인돌-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 건조 탈가스된 톨루엔 (0.5 mL) 중 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (17 mg, 0.019 mmol) 및 (+/-)-2,2`-비스(디페닐포스피노)-1,1`-바이나프틸 (24 mg, 0.038 mmol)의 교반 혼합물을 질소 하에서 15분 동안 100℃로 가열했다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 고체 나트륨-t-부톡시드 (37 mg, 0.38 mmol)을 첨가하고, 이어서 건조 탈가스된 톨루엔 (0.5 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1-(트리이소프로필실릴)-1H-인돌 (90 mg, 0.25 mmol) 및 벤질 4-(2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (94 mg, 0.19 mmol)의 용액을 첨가했다. 반응 플라스크를 폐쇄하고 밤새 100℃로 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을 디클로로메탄 중 3 내지 5% MeOH을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 24g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 밝은-황색 고체 (28 mg, 19%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 782.3 [M]+.
단계 C: 1-(4-(7-(5- 메틸 -1H-인돌-4-일)-2-(3- 모폴리노프로폭시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: EtOH (1 mL) 및 THF (1 mL) 중 벤질 4-(7-(5-메틸-1-(트리이소프로필실릴)-1H-인돌-4-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (46 mg, 0.065 mmol), 탄소상 팔라듐 (35 mg, 데구싸 유형, 10 wt% , 50% H 2 O)의 혼합물을 수소로 퍼지하고 H2 분위기 (고무 밸룬) 하에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 디옥산 (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 디옥산 (2 x 2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시키고 고진공 하에서 건조시켰다. 잔류물을 N2 하에서 THF (1 mL)에 용해시키고, 그 다음 THF 중 1M 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 (0.07 mL, 2 eq.)을 교반하면서 첨가하고 용액을 0℃에서 15분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에테르 (15 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (3 mL), 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 질소 하에서 증발시켰다. 조 생성물을 DCM (3 mL)에 용해시키고 교반하면서 얼음-염-드라이아이스 배쓰 (-20℃)에서 냉각시켰다. 트리에틸아민 (10 μL, 2 eq.)을 그 다음 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (2 μL, 0.75 eq.)을 첨가했다. -20℃에서 10분 후, 반응을 NH4OH (0.03 mL)로 켄칭했다. 그리고 진공에서 증발시켰다. 생성물을 5 % MeOH/DCM + 0.1% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 칼럼상 크로마토그래피로 정제하여 무색 고체 (3.69 mg, 19%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 546.3 [M+H]+.
실시예 210
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2- 클로로 -4-(3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-5,8- 디하이드 로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (8.00 g, 26.3 mmol), 휘니그 염기 (22.9 ml, 132 mmol) 및 2-(피페라진-2-일)아세토니트릴 디하이드로클로라이드 (5.21 g, 26.3 mmol)을 DMA (75 mL)에 넣었고 실온에서 20분 동안 교반했다. 물을 반응에 첨가하고 혼합물을 EtOAc (3x100 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 물 (3x 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다. ES+APCI MS m/z 393.3 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2-클로로-4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (10.5 g, 26.7 mmol) 및 TEA (5.6 ml, 40.1 mmol)을 THF (100 mL)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. 벤질 카보노클로리데이트 (5.7 ml, 40.1 mmol)을 첨가하고 반응을 0 ℃에서 30분 동안 교반했다. 물을 반응에 첨가하고 혼합물을 DCM (3x 50 mL)으로 추출하고 추출물을 조합하고 농축했다. 잔류물을 실리카겔 (용출액으로서 헥산 중 0-60% EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (12.9 g, 24.5 mmol, 92 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 527.1 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 밀봉 튜브에서 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.50 g, 2.85 mmol)을 디옥산 (1.42 ml, 2.85 mmol)에 용해시키고 분쇄된 탄산세슘 (1.85 g, 5.69 mmol) 및 (2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올 (1.64 g, 14.2 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 24시간 동안 90℃로 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 물을 첨가했다. 혼합물을 DCM (3x 25 mL)로 추출하고, 조합된 유기물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (용출액으로서 DCM w/0.2% NH4OH 중 0-12% MeOH)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (831 mg, 1.37 mmol, 48 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 606.2 [M+H]+.
단계 D: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (831 mg, 1.37 mmol)을 DCM (15 mL)에 넣었고 TFA (2114 μL, 27.4 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 농축했다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM (3x25 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (665 mg, 1.32 mmol, 96 % 수율)을 수득했고, 이것을 있는 그대로 사용했다. ES+APCI MS m/z 506.2 [M+H]+.
단계 E: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 탄산세슘 (103 mg, 0.316 mmol), 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (80 mg, 0.158 mmol), Rhuphos Pd G3 (13.2 mg, 0.016 mmol), 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (53.4 mg, 0.237 mmol) 및 1,4-디옥산 (1582 μL, 0.158 mmol)을 첨가하고 바이알을 Ar로 탈가스하고, 밀봉하고, 그 다음 24시간 동안 70℃로 가열했다. 물 및 포화 NH4Cl을 반응에 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 진공에서 농축시켰다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (용출액으로서 DCM w/0.2% NH4OH 중 0-12% MeOH)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (20.5 mg, 0.032 mmol, 20 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 650.3 [M+H]+.
단계 F: 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (316 μL, 0.0316 mmol) 및 THF (316 μL, 0.032 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (20.5 mg, 0.032 mmol)의 용액에 팔라듐 (16.8 mg, 0.008 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O) 및 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입하고 2시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 원하는 생성물을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다. ES+APCI MS m/z 516.2 [M+H]+.
단계 G: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (16.3 mg, 0.032 mmol) 및 트리에틸아민 (13.2 μL, 0.095 mmol)을 CH2Cl2 (316 μL, 0.032 mmol)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. 아크릴로일 클로라이드 (632 μL, 0.063 mmol)을 (DCM 중 새롭게 제조된 0.1M 용액)을 첨가하고 반응을 1시간 동안 0℃에서 교반했다. 혼합물을 농축시키고 수득한 잔류물을 역상 크로마토그래피 (0-50% ACN:물 w/ 0.1%TFA)로 정제하여 원하는 생성물 (18.9 mg, 0.027 mmol, 87 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 211
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메톡시)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 1-브로모-2-(트리플루오로메톡시)벤젠을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 586.3 [M+H]+.
실시예 212
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 3-브로모-4-(트리플루오로메틸)피리딘을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 213
1-(4-(7-(5-하이드록시-2,3-디메틸페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 3- 브로모 -4,5-디메틸페놀: 밀봉 튜브에서 DPPE (0.431 g, 1.08 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (1.73 g, 13.5 mmol), (1,5-사이클로옥타디엔)-에타5-인데닐)이리듐(I) (0.449 g, 1.08 mmol) 및 1-브로모-2,3-디메틸벤젠 (1.00 g, 5.40 mmol)을 사이클로헥산 (6 mL)에 넣었고 50시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 농축시키고 아세톤 (5 mL)에 넣었고 옥스존 (3.32 g, 5.40 mmol)을 첨가하고 10분 동안 교반했다. 반응을 포화 NaHSO3로 켄칭하고 DCM (3x20 ml)로 추출했다. 추출물을 염수로 세정하고, 물 및 농축했다. 잔류물을 DCM으로 용출하는 실리카의 플러그를 통과시켜 3-브로모-4,5-디메틸페놀 (238 mg, 1.18 mmol, 22 % 수율)을 제공했다.
단계 B: 1- 브로모 -5-( 메톡시메톡시 )-2,3-디메틸벤젠: 2-브로모-3-플루오로페놀을 3-브로모-4,5-디메틸페놀로 대체하여 중간체 3에 대한 제조에 따라 제조했다.
단계 C: 1-(4-(7-(5-하이드록시-2,3-디메틸페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 2,2,2- 트리플루오로아세테이트 : 단계 C에서 벤질 4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 중간체 25로 대체하고 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌을 1-브로모-5-(메톡시메톡시)-2,3-디메틸벤젠으로 대체하여 실시예 1 단계들 C-F에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 537.3 [M+H]+.
실시예 214
1-(4-(7-(5-하이드록시-2-((트리플루오로메틸)티오)페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 3- 브로모 -4-(( 트리플루오로메틸 ) 티오 )페놀: 밀봉 튜브에서 3-브로모페놀 (575 mg, 3.32 mmol) 및 N,4-디메틸-N-(트리플루오로메틸)벤젠설폰아미드 (1010 mg, 3.99 mmol)을 건조 DCE (6 mL)에 넣었다. 트리플릭산 (295 μL, 3.32 mmol)을 느리게 첨가하고 반응을, 그 다음 18시간 동안 80℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 용매를 진공 하에서 제거하고 수득한 잔류물을 실리카겔 (헥산 중 0-20% EtOAc)로 정제하여 3-브로모-4-((트리플루오로메틸)티오)페놀 (650 mg, 2.38 mmol, 72 % 수율)을 제공했다.
단계 B: (2- 브로모 -4-( 메톡시메톡시 )페닐)( 트리플루오로메틸 )설판: 2-브로모-3-플루오로페놀을 3-브로모-4-((트리플루오로메틸)티오)페놀로 대체하여 중간체 3의 제조에 따라 제조했다.
단계 C: 1-(4-(7-(5-하이드록시-2-((트리플루오로메틸)티오)페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 단계 C에서 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌을 벤질 4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 및 (2-브로모-4-(메톡시메톡시)페닐)(트리플루오로메틸)설판을 중간체 25로 대체하여 실시예 1 단계 C-F에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 609.2 [M+H]+.
실시예 215
(R)-1-(4-(2-(2-하이드록시-3-모폴리노프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
표제 화합물을, Phenomenex OZ-H 칼럼 (4.6mm x250mm, 5u)을 사용하고 4mL/분으로 40-60% MeOH:IPA:DEA (80:20:1)을 용출하여 실시예 123의 SFC 키랄 분해로 수득했다. 제1 용출 피크를 수집하고 입체화학이 임의로 배정된 원하는 화합물을 제공했다. ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]+.
실시예 216
(S)-1-(4-(2-(2-하이드록시-3-모폴리노프로폭시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
표제 화합물을, Phenomenex OZ-H 칼럼 (4.6mm x250mm, 5u)을 사용하고 4mL/분으로 40-60% MeOH:IPA:DEA (80:20:1)를 용출하여 실시예 123의 SFC 키랄 분해로 수득했다. 제2 용출 피크를 수집하여 입체화학이 임의로 배정된 원하는 화합물을 제공했다. ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]+.
실시예 217
1-(4-(2-((1-하이드록시-3-모폴리노프로판-2-일)옥시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 B에서 (S)-1-(디메틸아미노)프로판-2-올 대신에 3-모폴리노프로판-1,2-디올을 사용하여 실시예 8의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]+.
실시예 218
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 밀봉 바이알에서, 디옥산 (2712 μL, 0.27 mmol) 중 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.27 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (2S,4R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (270 mg, 0.81 mmol), Cs2CO3 (265 mg, 0.81 mmol), Rhuphos Pd G3 (22.7 mg, 0.027 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 2시간 동안 100℃에서 가열했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축시키고 수득한 잔류물을 실리카겔 (헥산 중 0-40 % EtOAc)로 정제하여 벤질 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (113 mg, 0.13 mmol, 49 % 수율)을 제공했다.
단계 B: tert -부틸 (2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-(((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트: EtOH (1.3 mL, 0.133 mmol) 및 THF (1.3 mL, 0.133 mmol) 중 벤질 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (113 mg, 0.133 mmol)의 용액에 팔라듐 (70.9 mg, 0.033 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 1:1 MeOH 및 THF로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 C: tert -부틸 (2S,4R)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘-1-카복실레이트: tert-부틸 (2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-(((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (95 mg, 0.13 mmol) 및 트리에틸아민 (56 μL, 0.40 mmol)을 CH2Cl2 (1331 μL, 0.13 mmol)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. 아크릴로일 클로라이드 (2661 μL, 0.27 mmol) (DCM 중 새롭게 제조된 0.1M 용액)을 첨가하고 반응을 30분 동안 0℃에서 교반했다. 물을 반응에 첨가하고 혼합물을 DCM (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 D: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. tert-부틸 (2S,4R)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘-1-카복실레이트 (92 mg, 0.12 mmol)을 DCM (3 mL)에 넣었고 TFA (92 μL, 1.2 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 포화 바이카보네이트를 반응에 첨가하고 혼합물을 DCM (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조 물질을 수득했고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (80 mg, 0.12 mmol), 포름알데하이드 (45.0 μL, 0.60 mmol) 및 Na(OAc)3BH (50.8 mg, 0.24 mmol)을 THF (2 mL)에 넣었고 2시간 동안 교반했다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM 중 10% MeOH (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 F: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 2,2,2- 트리플루오로아세테이트 : 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (81 mg, 0.119 mmol)을 DCM (5 mL)에 넣었고 HCl (594 μL, 2.38 mmol)을 첨가하고 반응을 1시간 동안 교반했다. 반응을 농축시키고 물질을 역상 크로마토그래피 (0.1% TFA를 갖는 0-50% ACN:물)로 정제하여 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (38.9 mg, 0.057 mmol, 48 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 219
1-(4-(2-((1,4-디메틸피페라진-2-일)메톡시)-7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
표제 화합물을 단계 D에서 N-메틸-L-프롤리놀을 (1,4-디메틸-2-피페라지닐)메탄올로 대체하여 실시예 127과 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 558.3 [M+H]+.
실시예 220
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: DCM (25.3 ml, 7.59 mmol) 중 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (4.00 g, 7.59 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (17.4 ml, 227.7 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 점성 오일로 농축시켰다. 포화 바이카보네이트를 느리게 첨가하고 혼합물을 DCM 중 10% MeOH (3x 50 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켜 원하는 생성물 (3.24 g, 7.6 mmol, 100 % 수율)을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다. ES+APCI MS m/z 506.2 [M]+.
단계 B: 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 둥근바닥 플라스크에 탄산세슘 (8.01 g, 24.6 mmol), 벤질 4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (3.5 g, 8.2 mmol), 1-브로모나프탈렌 (4.6 ml, 32.8 mmol) 및 RuPhos Pd G3 (1.0 g, 1.23 mmol)을 첨가했다. 플라스크를 비운 후, 1,4-디옥산 (82.0 ml, 8.20 mmol)을 아르곤 흐름 하에서 격막을 통해 첨가했다. 아르곤으로 혼합물에 5분 동안 거품을 일으키고 그 다음 혼합물을 밤새 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 물을 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출하고 유기물을 진공에서 농축시켰다. 황색 고체를 최소 DCM에 용해시키고 실리카 크로마토그래피 (헥산 중 25-60% EtOAc)로 정제하여 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.0 g, 3.6 mmol, 44.1 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 553.2 [M]+.
단계 C: 벤질 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에서 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 0.22 mmol)을 디옥산 (108 μL, 0.217 mmol) 및 탄산세슘 (141 mg, 0.434 mmol)에 용해시키고, (2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로-2-하이드록시메틸파이롤리딘 (47.6 mg, 0.217 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 12시간 동안에 90℃로 가열했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과하고 농축했다. 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 0-6% MeOH)로 정제했다. ES+APCI MS m/z 736.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: DCM (170 μL, 0.170 mmol) 중 벤질 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (125 mg, 0.170 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (195 μL, 2.55 mmol)을 첨가하고 반응을 rt에서 2시간 동안 교반했다. 유기물을 중탄산나트륨으로 세정하고 수성층을 DCM으로 역추출했다. 조합된 유기층을 농축시키고 추가 정제없이 사용했다. ES+APCI MS m/z 636.3 [M+H]+.
단계 E: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: DCE (3303 μL, 0.1652 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (105 mg, 0.1652 mmol)의 용액에 포름알데하이드 (124.1 μL, 1.652 mmol) (물 중 37%) 이어서 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (175.0 mg, 0.8258 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 rt에서 2.5시간 동안 격렬하게 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (30 mL)으로 처리하고, 10분 동안 교반하고, 그 다음 DCM (3 x 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시키고 다음 반응에서 있는 그대로 사용했다. ES+APCI MS m/z 650.3 [M+H]+.
단계 F: 2-(4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (1308 μL, 0.13 mmol) 및 THF (1308 μL, 0.13 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (85 mg, 0.13 mmol)의 용액에 팔라듐 (70 mg, 0.033 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 밤새 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 2-(4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴을 제공했다. ES+APCI MS m/z 516.3 [M+H]+.
단계 G: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 : DCM (1261 μL, 0.126 mmol) 중 2-(4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (65 mg, 0.126 mmol)의 현탁액에 0℃에서 아크릴로일 클로라이드 (2521 μL, 0.252 mmol) (DCM 중 새롭게 제조된 0.1M 용액) 이어서 트리에틸아민 (35.1 μL, 0.252 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 0℃에서 45분 동안 교반했다. 반응을 농축시키고 역상 크로마토그래피 (0.1% TFA를 갖는 0-50% CAN:물)로 정제하여 표제 화합물을 제공했다. ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 221
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4S)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 C에서 tert-부틸 (2S,4R)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 대신에 tert-부틸 (2S,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트를 사용하여 실시예 220, 단계 C-G의 방법에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 222
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4S)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로-2-하이드록시메틸파이롤리딘을 tert-부틸 (2S,4S)-2-(하이드록시메틸)-4-메톡시파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 220 (단계들 C-G)에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 582.3 [M+H]+.
실시예 223
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸피페라진-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계들 A-F: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸피페라진-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 C에서 (2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로-2-하이드록시메틸파이롤리딘을 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 220 (단계들 C-G)에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 567.3 [M+H]+.
실시예 224
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸피페라진-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트를 tert-부틸 (R)-2-(하이드록시메틸)-4-메틸피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 220 (단계들 C-G)에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 567.3 [M+H]+.
실시예 225
2-(1-아크릴로일-4-(7-(5-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 2-브로모-4-플루오로-1-(트리플루오로메톡시)벤젠으로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 604.3 [M+H]+.
실시예 226
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 3-브로모-2-(트리플루오로메틸)피리딘으로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 227
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-플루오로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모-2-플루오로벤젠으로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 520.3 [M+H]+.
실시예 228
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모-2,3-디메틸벤젠으로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 530.3 [M+H]+.
실시예 229
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-클로로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모-2-클로로벤젠으로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 536.2 [M]+.
실시예 230
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠으로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 231
2-(1-아크릴로일-4-(2-(3-하이드록시프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(3- 하이드록시프로폭시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 표제 화합물을, (2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로-2-하이드록시메틸파이롤리딘을 프로판-1,3-디올로 대체하여 실시예 220 단계 C에서와 같이 제조했다. ES+APCI MS m/z 593.3 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-(2-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(3-하이드록시프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (77.6 mg, 0.131 mmol)을 첨가하고, 이것을 DCM (655 μL, 0.131 mmol)에 용해시켰다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 그 다음 트리에틸아민 (36.5 μL, 0.262 mmol)을 첨가하고 이어서 4-(디메틸아미노)-피리딘 (4.80 mg, 0.04 mmol)을 첨가했다. 그 다음 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (29.6 mg, 0.196 mmol)을 첨가하고 혼합물을, 실온으로 가온시키면서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 포화 염수 용액 (5ml)에 부었고 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 2회 추출했다. 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 반응 생성물을 있는 그대로 사용했다. ES+APCI MS m/z 707.4 [M+H]+.
단계 C: 2-(4-(2-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (1499 μL, 0.150 mmol) 및 THF (1499 μL, 0.150 mmol) 중 벤질 4-(2-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (106 mg, 0.150 mmol)의 용액에 팔라듐 (79.8 mg, 0.0375 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 밤새 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 무색 고체를 수득했고, 이것을 추가 정제없이 사용했다. ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]+.
단계 D: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (1309 μL, 0.131 mmol) 중 2-(4-(2-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (75 mg, 0.131 mmol)의 현탁액에 -78℃에서 아크릴로일 클로라이드 (2619 μL, 0.262 mmol) (DCM 중 새롭게 제조된 0.1M 용액) 이어서 트리에틸아민 (36.5 μL, 0.262 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 0℃에서 30분 동안 교반했다. 반응을 농축시키고 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ES+APCI MS m/z 627.4 [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(3-하이드록시프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (1436 μL, 0.14 mmol) 중 2-(1-아크릴로일-4-(2-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (90 mg, 0.14 mmol)의 용액에 염산 (1,4-디옥산 중 4.0 M) (359 μL, 1.4 mmol)을 0℃에서 첨가했다. 반응을 30분 동안 교반하고 이 시점에서 그것을 포화 중탄산나트륨으로 켄칭하고 CHCl3 중 10% IPA (3x15 ml)로 추출했다. 조합된 유기층을 농축시키고 잔류물을 역상 크로마토그래피 (0.1TFA를 갖는 0-95% ACN:H2O)로 정제했다. ES+APCI MS m/z 513.2 [M+H]+.
실시예 232
1-(4-(7-(3-클로로-2-플루오로-5-하이드록시페닐)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
표제 화합물을, 단계 C에서 벤질 4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 중간체 25로 대체하고 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌을 1-브로모-3-클로로-2-플루오로-5-(메톡시메톡시)벤젠으로 대체하여 실시예 1 단계 C-F에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 561.2 [M]+.
실시예 233
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1- 에틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 . 본 화합물을 단계 F에서[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올을 N-메틸-L-프롤리놀을 (S)-(1-에틸피롤리딘-2-일)메탄올로 대체하여 실시예 147에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 234
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1- 벤질 4-( tert -부틸) (R)-2-( 하이드록시메틸 )피페라진-1,4- 디카복실레이트: 에틸 아세테이트 (46.2 ml) 및 물 (46.2 ml) 중 (R)-1-Boc-3-하이드록시메틸피페라진 (5.00 g, 23.1 mmol) 및 NaHCO3 (5.83 g, 69.4 mmol)의 교반 2상 용액에 0℃에서 벤질 클로로포르메이트 (4.95 ml, 34.7 mmol)을 적가했다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (50.0 ml)로 희석하고 유기층을 분리하고, 건조시키고 (Na2SO4), 그리고 농축했다. 조 생성물을 10-50% EtOAc/헥산 구배로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (7.62 g, 21.7 mmol, 94.1%)을 수득했다. ESI MS m/z 251.1 [M-Boc+H]+.
단계 B. 1- 벤질 4-( tert -부틸) (R)-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트: CH2Cl2 (32.2 ml) 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (R)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (1.69 g, 4.83 mmol) 및 트리에틸아민 (1.01 ml, 7.25 mmol)의 용액에 0℃에서 순수한 MsCl (0.561 ml, 7.25 mmol)을 적가하고 수득한 혼합물을 rt에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 분별 깔때기에 부었고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 그 다음 1N HCl, 물, NaHCO3 (포화), 및 염수로 순차적으로 세정하여 표제 화합물 (1.9 g, ~100%, 다음 단계에서 조물질로서 사용됨)을 수득했다. ESI MS m/z 329.1 [M-Boc+H]+.
단계 C. 1- 벤질 4-( tert -부틸) (S)-2-( 시아노메틸 )피페라진-1,4- 디카복실레이트 : DMA (49.0 ml) 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (R)-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (2.10 g, 4.90 mmol), 시안화나트륨 (0.480 g, 9.80 mmol)의 용액을 55℃에서 1일 동안 가열했다. 반응을 이어서 HPLC (15분 방법)을 첨가했다. 혼합물을 EtOAc/염수 사이에서 분할시키고, 유기층을 염수 (3x)로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 잔류물을 0-100% EtOAc/헥산 구배로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (1.40 g, 3.90 mmol, 79.5%)을 수득했다. 수성층을 염기성화하고 시아나이드 폐스트림에서 처리했다. ESI MS m/z 260.1 [M-Boc+H]+.
단계 D. 벤질 (S)-2-( 시아노메틸 )피페라진-1- 카복실레이트 하이드로클로라이드 : 1-벤질 4-(tert-부틸) (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (5.32 g, 14.8 mmol)을 CH2Cl2 (25 mL)에 넣었고 HCl (디옥산 중 4.0 N, 18.5 ml, 74.0 mmol)을 첨가하고 반응을 주위 온도에서 1일 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 (4.3 g, 99%)을 수득했다. ESI MS m/z 260.1 [M+H]+.
단계 E. tert -부틸 (S)-4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: DMSO (19.5 ml) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.01 g, 3.89 mmol), tert-부틸 2,4-디클로로-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트 (1.18 g, 3.89 mmol) 및 DIEA (1.36 ml, 7.79 mmol)의 용액을 50℃에서 1일 동안 가열했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 염수 사이에서 분할시키고 유기물을 분리했다. 유기상을 염수 (3x)로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물 (1.63 g, 3.09 mmol, 79.4%)을 수득했다. ESI MS m/z 527.2 [M+H]+.
단계 F. tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 250 mL 두꺼운-벽 둥근바닥 플라스크에 PTFE 스크류 캡을 디옥산 (31.1 ml) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.64 g, 3.11 mmol)의 용액을 충전하고 혼합물을 아르곤으로 살포했다. 상기 혼합물에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (1.08 g, 9.34 mmol), Cs2CO3 (3.04 g, 9.34 mmol) 및 Ruphos-Pd Gen3 촉매 (0.260 g, 0.311 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 1일 동안 100℃에서 가열했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 유기물을 염수 (2X)로 세정했다. 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 잔류물을 수득했고, 이것을 DCM 중 0-20% (MeOH + 2% NH4OH)로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (1.42 g, 2.34 mmol, 75.3%)을 수득했다. ESI MS m/z 606.3 [M+H]+.
단계 G. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 비스 - 트리플루오로아세테이트 염: CH2Cl2 (627 μl) 및 TFA (242 μl, 3.1 mmol) 중 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (38 mg, 0.063 mmol)의 용액을 실온에서 1일 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축시키고 다음 반응에서 비스-TFA 염로서 사용했다 (46 mg, 0.063 mmol, 100%). ESI MS m/z 506.3 [M+H]+.
단계 H. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (633 μl) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 비스트리플루오로아세테이트 염 (46 mg, 0.063 mmol), 1-브로모나프탈렌 (39.3 mg, 0.190 mmol) 및 Cs2CO3 (61.9 mg, 0.190 mmol)의 현탁액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. 이러한 혼합물에 Ruphos Pd Gen 3 (5.29 mg, 0.006 mmol)을 첨가하고 수득한 현탁액을 추가 1분 동안 아르곤으로 살포했다. 바이알을 캡핑하고 2시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응 혼합물을 EtOAc와 물 사이에서 분할시키고 수성층을 EtOAc (3x)으로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 잔류물을 5% MeOH/1%NH4OH/CH2Cl2 등용매로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (31.9 mg, 0.050 mmol, 79.8%)을 수득했다. ESI MS m/z 632.3 [M+H]+.
단계 I. 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 질소가 살포된 메탄올 (981 μl) 및 THF (981 μl) 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (31 mg, 0.049 mmol)의 용액에 Pd/C (10.4 mg, 0.00491 mmol)을 첨가하고 혼합물을 H2의 밸룬 압력 분위기 하에서 1일 동안 교반했다. 반응 혼합물을 PTFE 주사기 필터 (25mm)를 통해 여과하고 여과물을 농축시켜 표제 화합물 (23.4 mg, 0.047 mmol, 95.8%)을 수득했다. ESI MS m/z 498.3 [M+H]+.
단계 J. 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: CH2Cl2 (470 μl) 중 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (23.4 mg, 0.047 mmol)의 용액에 DIEA (41.1 μl, 0.235 mmol)을 첨가하고, 그 다음 아크릴로일 클로라이드 (12 μl, 0.141 mmol)을 첨가했다. 수득한 혼합물을 주위 온도에서 15분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc와 2N K2CO3 사이에서 분할시키고 염수로 세정했다. 수성층을 EtOAc (2x)로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 잔류물을 CH2Cl2 중 5% MeOH / 1% NH4OH로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (19.2 mg, 0.035 mmol, 74.0%)을 수득했다. ESI MS m/z 552.3 [M+H]+.
실시예 235
2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A. 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: CH2Cl2 (502 μl) 중 실시예 234 단계 I로부터의 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (25 mg, 0.0502 mmol), (2E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (13.0 mg, 0.100 mmol), DIEA (43.9 μl, 0.251 mmol)의 용액에 HATU (28.7 mg, 0.0754 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc와 염수 사이에서 분할시켰다. 수성층을 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 잔류물을 5-95%ACN/H2O + 0.1% TFA로 용출하는 분취-C18로 정제했다. 원하는 분획을 EA/2M K2CO3 사이에서 분할시켰다. 수성물을 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물 (19.0 mg, 0.031 mmol, 62.1%)을 수득했다. ESI MS m/z 609.4 [M+H]+.
실시예 236
2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(E-4-(피페리딘-1-일)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A. 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(E-4-(피페리딘-1-일)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴을 (2E)-4-(1-피페리디닐)-2-부텐산 HCl 염로 치환하여 실시예 235에 따라 제조하여, 표제 화합물 (30 mg, 0.046 mmol, 92.0%)을 수득했다. ESI MS m/z 649.3 [M+H]+.
실시예 237
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 2,2,2-트리플루오로아세테이트
1-브로모나프탈렌을 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠로 치환하여 실시예 234에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 238
2-(1-아크릴로일-4-(7-(6-메틸-1H-인다졸-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7- 브로모 -6- 메틸 -2-((2-( 트리메틸실릴 ) 에톡시 ) 메틸 )-2H- 인다졸. 테트라하이드로푸란 (2 ml, 0.948 mmol) 중 7-브로모-6-메틸-1H-인다졸 (200 mg, 0.948 mmol)의 용액을 빙욕에서 교반하면서 냉각시켰다. 수소화나트륨 (45.5 mg, 1.14 mmol)을 혼합물에 나누어서 첨가하고 반응을 0 ℃에서 1시간 동안 교반했다. (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (0.201 ml, 1.14 mmol)을 그 다음 첨가하고 반응을 실온으로 가온시키면서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)과 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (2 x 10 mL), 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을 20 내지 40% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피로 정제하여 7-브로모-6-메틸-2-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-2H-인다졸 (46 mg, 14%)을 이성질체 7-브로모-6-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인다졸 (214 mg, 66%)와 함께 수득했다. ES+APCI MS m/z 341.1 [M]+.
단계 B: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(6-메틸-2-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-2H-인다졸-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (50 mg, 0.099 mmol), 7-브로모-6-메틸-2-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-2H-인다졸 (46 mg, 0.13 mmol), Cs2CO3 (97 mg, 0.30 mmol), Ruphos Pd G3 (83 mg, 0.099 mmol) 및 디옥산 (1 mL)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 70℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc (20 mL)과 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (5 mL), 염수 (5 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을 2 내지 20% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔, Redisep 24g 상에서 크로마토그래피로 정제하여 무색 고체 (50 mg, 66%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 766.4 [M]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(6-메틸-1H-인다졸-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 순수한 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(6-메틸-2-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-2H-인다졸-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (10 mg, 0.0131 mmol) (10 mg, 0.0131 mmol)을 트리플루오로아세트산 (1 ml, 13.1 mmol)에 용해시키고 황갈색 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)에 부었고 유기물을 2M Na2CO3 (10 mL, 20 mmol), 물 (2 x 3 mL), 염수 (5 mL)로 주의하여 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켜 황색 고체 (8 mg, 96%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 636.3 [M+H]+.
단계 D: 2-(1-아크릴로일-4-(7-(6-메틸-1H-인다졸-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(6-메틸-1H-인다졸-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16 mg, 0.02517 mmol), 메탄올 (1.5 ml, 0.02517 mmol), 테트라하이드로푸란 (1.815 mg, 0.02517 mmol) 및 탄소상 팔라듐 (10 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 교반 혼합물을 탈가스하고 수소 분위기 하에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 THF (3 x 3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 ~0.5 mL, DCM (5 mL)로 농축시키고, EtOH-H2O-CO2 배쓰에서 교반하면서 -30℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민 (0.02 mL, 5 eq.) 그 다음 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (0.006134 ml, 0.07550 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 1분 동안 -30℃에서 교반했다. 반응을 NH4OH (0.03 mL)로 켄칭하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 1M NaHCO3 (3 mL)과 EtOAc (15 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (3mL), 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을 10 내지 20% MeOH/DCM +0.2% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피, Redisep 12g로 정제하여 무색 고체 (5.96 mg, 43%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 556.3 [M+H]+.
실시예 239
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 240
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 1-브로모-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)벤젠을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 584.3 [M+H]+.
실시예 241
벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
단계 A: 바이알에서, 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 0.198 mmol)을 디옥산 (98.9 μl, 0.198 mmol) 및 탄산세슘 (129 mg, 0.396 mmol)에 용해시키고, 2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (163 mg, 0.989 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 12시간 동안 90℃로 가열했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과하고 농축했다. 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제했다.
단계 B: 단계 F에서 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 대신에 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 242
2-(1-(부트-2-이노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
0℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (603 μL, 0.06 mmol)을 수용하고 있는 25 mL RBF에 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.06 mmol) 및 트리에틸아민 (12.2 mg, 0.12 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 2-부틴산 (6.08 mg, 0.07 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (26.9 μl, 0.09 mmol)을 교반 혼합물에 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0℃에서 교반되도록 했다. 물을 첨가하고 반응 EtOAc (2x 25 mL)로 추출했다. 유기층을 포화 LiCl, NaCl, 및 물 (10 mL 각각의 세정)로 세정했다. 건조시키고 고체로 농축시키고, 이것을 역상 prep HPLC (0.1% TFA를 갖는 5-95% ACN:H2O)로 정제하여 표제 화합물을 제공했다.
실시예 243
2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.05 g, 2.60 mmol), 2-[[4-브로모-5-(트리플루오로메틸)인다졸-1-일]메톡시]에틸-트리메틸-실란 (1.13 g, 2.86 mmol), RuPhos (484 mg, 1.04 mmol) 및 Cs2CO3 (2.11 g, 6.49 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (475 mg, 519 umol)을 N2 하에서 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 90℃로 가온시키고 90℃에서 7시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 EtOAc (3 × 20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (30:1 내지 4:1의 PE: EA) 및 그 다음 역상 플래시 칼럼 (ACN: 100%)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (850 mg, 1.12 mmol, 43.3 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 719.5 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: DCM (17 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (850 mg, 1.18 mmol)의 용액에 m-CPBA (240 mg, 1.18 mmol, 85.0 % 순도)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 (15 mL)로 0℃에서 켄칭하고 분리하고, 그 다음 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) =　80 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (730 mg, 944 umol, 79.8 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 735.5 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 408 umol) 및 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (94.0 mg, 816 umol)의 용액에 t-BuONa (58.8 mg, 612 umol)을 15℃에서 첨가하고 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 EtOAc (15 mL) 및 물 (5 mL)을 첨가하고, 그 다음 EtOAc (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) =54 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (216 mg, 261 umol, 64.0 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 786.6[M+H]+.
단계 D: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (4 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 242 umol) 및 2,6-디메틸피리딘 (311 mg, 2.90 mmol, 338 uL)의 용액에 TMSOTf (645 mg, 2.90 mmol, 524 uL)을 0℃에서 첨가하고 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (1 mL)로 켄칭하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) =40 %). 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (85 mg, 123 umol, 50.8 % 수율, 99.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 686.5 [M+H]+.
단계 E: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 DCM (2 mL) 중 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (85.0 mg, 124 umol), DIEA (96.1 mg, 744 umol, 130 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (23.4 mg, 186 umol)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (2 mL)로 켄칭했다. 수득한 혼합물을 DCM (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) =48 %)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (45 mg, 54.7 umol, 44.2 % 수율, 90.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.16 (s, 1H), 7.71 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d, J=10.4 Hz, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.12 (s, 1H), 4.44 - 4.28 (m, 3H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 3.98 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 3.63 - 3.54 (m, 2H), 3.48 - 3.39 (m, 2H), 3.32 (br s, 1H), 3.10 (br s, 2H), 2.99 - 2.86 (m, 2H), 2.80 (br s, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.28 (br s, 1H), 2.05 (br s, 1H), 1.77 (br s, 4H), 0.94 - 0.88 (m, 2H), -0.04 (s, 9H).
단계 F: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1 H -인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 DCM (0.15 mL) 중 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (45 mg, 60.8 umol)의 용액에 TFA (208 mg, 1.82 mmol, 135 uL)을 첨가하고 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (2 mL)로 pH=8로 염기성화했다. 수득한 혼합물을 DCM: MeOH (10:1) (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 10%-40%,10.5분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (8.2 mg, 12.0 umol, 19.8 % 수율, 96.2 % 순도, FA)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 610.4 [M+H]+.
실시예 244
2-[4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (4.5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 445 umol), 8-브로모이소퀴놀린 (185 mg, 891 umol), RuPhos (41.6 mg, 89.1 umol) 및 Cs2CO3 (435 mg, 1.34 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (40.8 mg, 44.5 umol)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 EtOAc (3 × 10 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) =20 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 240 umol, 54.0 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 599.4 [M+H]+.
단계 B: 2-[4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 317 umol) 및 TFA (724 mg, 6.35 mmol, 470 uL)의 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 조물질, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-[4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 316 umol, 2TFA) 및 DIEA (409 mg, 3.17 mmol, 551 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (47.9 mg, 380 umol)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 물 (5 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 DCM (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 1%-20%,10분)로 정제하여 2-[4-[7-(8-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (12.5 mg, 19.7 umol, 6.23 % 수율, 94.5 % 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 553.2 [M+H]+.
실시예 245
2-[4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: (7- 메틸 -3,4- 디하이드로나프탈렌 -1-일) 트리플루오로메탄설포네이트: DCM (30 mL) 중 7-메틸테트랄린-1-온 (2.00 g, 12.5 mmol) 및 DIPEA (4.84 g, 37.5 mmol, 6.52 mL)의 용액에 Tf2O (5.28 g, 18.7 mmol, 3.09 mL)을 -5℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EA 1/0 내지 100/1)로 정제하여 (7-메틸-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.53 g, 4.45 mmol, 35.6 % 수율, 85.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.17 (s, 1H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 6.01 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.83 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.50 (dt, J = 4.8, 8.0 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H).
단계 B: (7- 메틸 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트: 디옥산 (28 mL) 중 (7-메틸-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일)트리플루오로 메탄설포네이트 (1.40 g, 4.79 mmol) 및 DDQ (2.17 g, 9.58 mmol)의 혼합물을 105℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EA 1/0 내지 100/1)로 정제하여 (7-메틸-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.10 g, 3.41 mmol, 71.2 % 수율, 90.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.87 - 7.79 (m, 3H), 7.49 - 7.38 (m, 3H), 2.59 (s, 3H).
단계 C: tert -부틸 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ] 피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (100 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘 (10 g, 34.0 mmol), 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (10.1 g, 51.0 mmol, 2 HCl) 및 DIEA (17.6 g, 136 mmol, 23.7 mL)의 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반했다. Boc2O (14.8 g, 68.0 mmol, 15.6 mL)을 첨가하고 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 잔류물을 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 물 (1 × 300 mL), 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 분쇄했다. 침전물을 여과하고 여과된 케이크를 에틸 아세테이트 (50 mL)로 세정하고 진공 하에서 건조시켜 회색 고체를 수득했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 100/1 내지 1/2)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 고체를 수득했고, 그 다음 상기 고체와 조합하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (15 g, 29.10 mmol, 85.6% 수율, 93.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 483.1 [M+H]+.
단계 D: 4-[7- 벤질 -2-[(1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ] 피리미딘-4-일]-2-( 시아노메틸 )피페라진-1- 카복실레이트: THF (30.0 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (1.19 g, 10.4 mmol, 1.23 mL, 2.5 eq)의 용액에 NaH (331 mg, 8.28 mmol, 광유 중 60 % 순도, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 4.14 mmol, 1.00 eq)을 혼합물에 첨가하고 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반했다. 혼합물을 빙수 (100 mL)에 부었고 에테르 아세테이트 (3 × 150 mL)로 추출했다. 유기층을 포화 염화나트륨 용액 (1 × 200 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.86 g, 조물질)을 흑색 오일로서 수득했고 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다. ESI MS m/z 562.3 [M+H]+.
단계 E: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4- [2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: NH3으로 메탄올 (70.0 mL)에 -78 ℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. tert-부틸 4-[7-벤질-2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d] 피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 조물질) 및 Pd/C (0.20 g, 10% 순도)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 40℃에서 24시간 동안 H2 하에서 15 psi에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 포화 중탄산나트륨 용액 (5.00 mL)으로 pH >7로 조정하고 수성층을 에테르 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4- [2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.40 g, 845 umol, 2개의 단계 29.4% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 472.2 [M+H]+.
단계 F: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[2-[(1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 ]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4- [2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (185 mg, 392 umol), (7-메틸-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (159 mg, 549 umol), Pd2(dba)3 (35.9 mg, 39.2 umol), RuPhos (36.6 mg, 78.5 umol) 및 Cs2CO3 (320 mg, 981 umol)의 용액을 N2로 탈가스하고 그 다음 12시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물(0.1% NH3ㆍH2O)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 283 umol, 72.1 % 수율, 96.1 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 612.6 [M+H]+.
단계 G: 2-[4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: TFA (671 mg, 5.88 mmol, 436 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 294 umol)의 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료시 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.37 g, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 H: 2-[4-[7-(7- 메틸 -1- 나프틸 )- 2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: DCM (4 mL) 중 2-[4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (189 mg, 조물질, TFA) 및 DIEA (976 mg, 7.55 mmol, 1.32 mL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (38.1 mg, 302 umol)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (1 mL)로 희석하고 DCM (3 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물(0.225%FA) - ACN]; B%: 15% - 45%,10.5분)로 정제하여 2-[4-[7-(7-메틸-1-나프틸)- 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (13.2 mg, 21.3 umol, 2개의 단계 14.2% 수율, 98.4% 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 566.5 [M+H]+.
실시예 246
2-[4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴.
단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-4-플루오로나프탈렌으로 대체하여 실시예 147의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 570.5 [M+H]+.
실시예 247
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(퀴놀린-8-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 8-브로모퀴놀린으로 대체하여 실시예 147의 방법에 따라 합성했다. ESI MS m/z 553.2 [M+H]+.
실시예 248
(S)-1-(4-(7-(5-이소프로필-1H-인다졸-4-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 2-(2- 브로모 -4- 플루오로 -페닐)프로판-2-올: THF (100 mL) 중 1-(2-브로모-4-플루오로-페닐)에탄온 (10 g, 46.1 mmol)의 용액에 MeMgBr (에테르 중) (3 M, 46.08 mL)을 - 50℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃까지 가온시키고 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액 (10 mL)로 - 50℃에서 켄칭했다. 혼합물을 15℃까지 가온시키고, 그 다음 에틸 아세테이트 (500 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 물 (1 × 500 mL) 및 염수 (1 × 500 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-(2-브로모-4-플루오로-페닐)프로판-2-올 (10 g, 36.5 mmol, 79.2% 수율, 85% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
단계 B: 2- 브로모 -4- 플루오로 -1-이소프로필-벤젠: 디클로로메탄 (100 mL) 중 2-(2-브로모-4-플루오로-페닐)프로판-2-올 (9 g, 38.6 mmol)의 용액에 Et3SiH (8.98 g, 77.2 mmol, 12.3 mL) 및 TFA (65.1 g, 571 mmol, 42.3 mL)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하고 그 다음 1시간 동안 50℃로 가열했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고 그 다음 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석했다. 수성층 pH를 포화 NaHCO3 수용액의 첨가에 의해 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기상을 염수 (30 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 100/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축했다. 2-브로모-4-플루오로-1-이소프로필-벤젠 (7 g, 32.2 mmol, 83.5 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.36-7.27 (m, 2H), 7.09 - 7.02 (m, 1H), 3.46-3.31 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
단계 C: 2- 브로모 -6- 플루오로 -3-이소프로필- 벤즈알데하이드: THF (100 mL) 중 2-브로모-4-플루오로-1-이소프로필-벤젠 (7 g, 32.2 mmol)의 혼합물에 LDA (톨루엔 중 2 M, 24.2 mL)을 - 70℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 DMF (7.07 g, 96.7 mmol, 7.44 mL)을 첨가했다. 혼합물을 - 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 물 (100 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE＼EA = 1＼0 내지 10＼1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 2-브로모-6-플루오로-3-이소프로필-벤즈알데하이드 (2.4 g, 9.79 mmol, 30.4 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.41 (s, 1H), 7.48 (dd, J = 5.6, 8.8 Hz, 1H), 7.13(t, J = 9.2, 1H), 3.57 - 3.46 (m, 1H), 1.26 (d, J = 7.2 Hz, 6H).
단계 D: 4- 브로모 -5-이소프로필-1 H - 인다졸: DMSO (3 mL) 중 2-브로모-6-플루오로-3-이소프로필-벤즈알데하이드 (2.4 g, 9.79 mmol)에 N2H4ㆍH2O (15.4 g, 302 mmol, 15 mL, 98% 순도)를 첨가하고 혼합물을 110℃로 가열하고 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)에 부었고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 유기상을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)로 정제하여 4-브로모-5-이소프로필-1H-인다졸 (650 mg, 2.72 mmol, 27.8 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.24 (br s, 1H), 8.08 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.56 (td, J = 6.8, 13.6 Hz, 1H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
단계 E: 4- 브로모 -5-이소프로필-1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸 : 디클로로메탄 (15 mL) 중 3,4-디하이드로-2H-피란 (457 mg, 5.44 mmol, 497 uL, 2 eq)의 용액에 TsOHㆍH2O (51.7 mg, 271 umol) 및 4-브로모-5-이소프로필-1H-인다졸 (650 mg, 2.72 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 5/1)로 정제하고 추가로 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴]로 정제하여 4-브로모-5-이소프로필-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (170 mg, 494 umol, 18.2% 수율, 94% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 323.0 [M+H]+.
단계 F: tert -부틸 4-[7-(5-이소프로필-1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸 - 4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (3 mL) 중 4-브로모-5-이소프로필-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (136 mg, 420 umol), tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 323 umol), RuPhos (15.1 mg, 32.4 umol), RuPhos-Pd-G2 (25.1 mg, 32.4 umol) 및 t-BuONa (77.7 mg, 809 umol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (20 mL)로 세정했다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 100/1 내지 10/1)로 정제하고 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[7-(5-이소프로필-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸- 4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (70 mg, 96.5 umol, 29.8% 수율, 93% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 675.3 [M+H]+.
단계 G: 7-(5-이소프로필-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘: 디클로로메탄 (100 uL) 중 tert-부틸 4-[7-(5-이소프로필-1-테트라하이드로피란- 2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (40 mg, 59.3 umol)의 용액에 TFA (101 mg, 889 umol, 65.8 uL)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 7-(5-이소프로필-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (42 mg, 58.4 umol, 98.6% 수율, 2 TFA)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 정제 없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 491.4 [M+H]+.
단계 H: 1-[4-[7-(5-이소프로필-1 H -인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (2 mL) 중 7-(5-이소프로필-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (42 mg, 58.4 umol) 및 DIEA (75.5 mg, 584 umol, 102 uL)의 혼합물에 디클로로메탄 (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (7.37 mg, 58.4 umol, 1 eq)의 용액을 -40℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 포화 NaHCO3 (2 mL) 수용액의 첨가로 켄칭했다. 그 다음 혼합물을 물 (20 mL)에 부었고 디클로로메탄 (20 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 5% - 38%, 10분)로 정제하여 1-[4-[7-(5-이소프로필-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (4.5 mg, 7.93 umol, 13.6% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 545.2 [M+H]+.
실시예 249
1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (7 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.50 g, 1.16 mmol), (2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (562 mg, 1.73 mmol), RuPhos (108 mg, 231 umol), Pd2(dba)3 (106 mg, 116 umol) 및 t-BuONa (333 mg, 3.47 mmol)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 질소 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 냉각시키고 수성층의 pH를 포화 중탄산나트륨 용액의 첨가로 7로 조정하고 수성층을 에테르 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염화나트륨 용액으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)로 정제하고 혼합물을 농축시켜 tert-부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 274 umol, 11.8 % 수율,)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 607.0 [M+H]+.
단계 B: 7-(2- 플루오로 -3- 메톡시 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘: 디클로로메탄 (0.4 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 330 umol) 및 TFA (564 mg, 4.94 mmol, 366 uL)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (205 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다. ESI MS m/z 507.0 [M+H]+.
단계 C: 1-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (5mL) 중 7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (0.20 g, 조물질) 및 TEA (399 mg, 3.95 mmol, 549 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (49.8 mg, 394 umol)을 -40℃에서 첨가하고, 그 다음 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 수성층 pH를 포화 중탄산나트륨 용액의 첨가로 7로 조정하고 수성층을 디클로로메탄/메탄올 (10/1) (3 × 10mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염화나트륨 (1 × 5mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 1-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (0.10 g, 174 umol, 44.1 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 561.5 [M+H]+.
단계 D: 1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: 디클로로메탄 (3mL) 중 1-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (0.10 g, 174 umol)의 용액에 BBr3 (223 mg, 892 umol, 85.9 uL)을 -78 ℃에서 첨가했다. 혼합물을 -78 ℃에서 0.5시간 동안 교반하고 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 디클로로메탄 (3mL) 및 물로 희석하고 수성층의 pH를, -78 내지 0℃에서 포화 중탄산나트륨 용액의 첨가로 > 7로 조정했다. 수성층을 그 다음 디클로로메탄 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 조합된 유기물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)로 정제하고 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 30% - 60%, 3분)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 20% - 50%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 1-[4-[7-(2-플루오로-3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (1.59 mg, 2.91 umol, 1.63 % 수율, 100 % 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 547.2[M+H]+.
실시예 250
1-[4-[7-(5-클로로-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: 4- 브로모 -5- 클로로 -1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸: DCM (3 mL) 중 4-브로모-5-클로로-1H-인다졸 (100 mg, 432.0 umol)의 용액에 TsOH·H2O (8.22 mg, 43.2 umol) 및 3,4-디하이드로-2H-피란 (72.7 mg, 864 umol, 79.0 uL)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 물 (20 mL)로 세정하고 수성층을 에틸 아세테이트 (20 mL x 2)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4로 건조시키고 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2 , 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10:1)로 정제하여 4-브로모-5-클로로-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (270 mg, 810 umol, 93.8% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 547.2[M+H]+.
단계 B: tert-부틸-4-[7-(5-클로로-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (123 mg, 284.4 umol), 4-브로모-5-클로로-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (135 mg, 427 umol), Pd2(dba)3 (26.0 mg, 28.4 umol), RuPhos (20.0 mg, 42.9 umol) 및 Cs2CO3 (278 mg, 853 umol)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 퍼지하고 그 다음 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응을 물 (20 mL)의 첨가로 켄칭했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL x 3)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4로 건조시키고 용매를 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH=10/1)로 정제하여 tert-부틸-4-[7-(5-클로로-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130.0 mg, 188.4 umol, 66.3% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 668.2[M+H]+.
단계 C: 7-(5- 클로로 -1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘: DCM (2 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(5-클로로-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (50.0 mg, 74.9 umol)의 용액에 TFA (1.95 mL)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거하여 7-(5-클로로-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (40.0 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. ESI MS m/z 483.4[M+H]+.
단계 D: 1-[4-[7-(5-클로로-1 H -인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온: DCM (3mL) 중 7-(5-클로로-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (40.0 mg, 2TFA) 및 DIEA (50 mg, 387 umol, 67.4 uL)의 용액에 아크릴산 무수물 (9.0 mg, 71.4 umol)을 N2 분위기 하에서 적가했다. 혼합물을 -70℃에서 15분 동안 교반했다. 반응을 물 (10 mL)의 첨가로 켄칭했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (10 mL x 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN];B%: 10%-37%,10 분)로 정제하고 동결건조시켜 1-[4-[7-(5-클로로-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (11.9 mg, 20.8 umol, 2개의 단계 27.3%,100% e.e.)을 황색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 537.2 [M+H]+.
실시예 251
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 마이크로웨이브 튜브에서 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.362 mmol)을 디옥산 (181 μl, 0.362 mmol)에 용해시키고 탄산세슘 (236 mg, 0.723 mmol) 및 (S)-tert-부틸 2-(하이드록시메틸)-2-메틸파이롤리딘-1-카복실레이트 (389 mg, 1.81 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 2시간 동안 90℃로 가열했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. 반응을 실온으로 냉각시키고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 CombiFlash (0%-10% DCM:MeOH) 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (264 mg, 0.361 mmol, 99.7 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 732.4 [M+H]+.
단계 B: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (264 mg, 0.361 mmol)을 디클로로메탄 (3607 μl, 0.361 mmol)에 용해시키고 TFA (556 μl, 7.21 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. 반응을 진공에서 농축시키고 포화 bicarb로 처리했다. 수성층을 DCM (2X)으로 추출하고 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 0.332 mmol, 92.2 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 632.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (105 mg, 0.1662 mmol)을 포름산 (94.05 μl, 2.493 mmol)에 용해시키고 포름알데하이드 (1868 μl, 24.93 mmol)로 처리했다. 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. 반응을 실온으로 냉각시키고 포화 bicarb로 처리하고 혼합물을 DCM (2X)으로 추출하고 유기물을 조합하고 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시키고 CombiFlash (0%-10% DCM:MeOH) 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.1161 mmol, 69.88 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 646.4 [M+H]+.
단계 D: 2-(4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. EtOH (1812 μl, 0.181 mmol) 및 THF (1812 μl, 0.181 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (117 mg, 0.181 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (96.4 mg, 0.0453 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5분 동안 퍼지했다. 용액을, 그 다음 H2 분위기 하에서 1시간 동안 교반했다. LC/MS는 깨끗한 원하는 생성물을 나타내었다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 2-(4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (88 mg, 0.172 mmol, 94.9 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 디클로로메탄 (1720 μl, 0.17 mmol) 중 2-(4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (88 mg, 0.17 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아실로일 클로라이드 (14 μl, 0.17 mmol) 이어서 휘니그 염기 (60 μl, 0.34 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 주위 온도에서 30분 동안 교반했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 농축물을 ACN:H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA를 용출액으로서 사용하는 Gilson (prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb로 유리 염기화하고 유기물 DCM으로 추출했다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (14 mg, 0.025 mmol, 14 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 252
tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트
단계 A: ( S )- 피롤리딘 -2- 일메탄올: CH2Cl2 (40 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-(하이드록시메틸) 파이롤리딘-1-카복실레이트 (2 g, 9.94 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4 M, 49.69 mL)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 15℃에서 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. (S)-피롤리딘-2-일메탄올 (1.37 g, 9.96 mmol, 100% 수율, HCl)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 B: [(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일] 메탄올: MeOH (20 mL) 중 [(2S)-피롤리딘-2-일]메탄올 (750 mg, 7.41 mmol, 724 uL) 및 아세톤 (4.31 g, 74.2 mmol, 5.46 mL)의 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 Pd/C (100 mg, 7.41 mmol, 10% 순도)로 H2 (30 psi) 하에서 수소첨가했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축했다. [(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메탄올 (0.821 g, 5.73 mmol, 77.3% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 3.54 (dd, J = 4.0, 10.8 Hz, 1H), 3.40 - 3.35 (m, 1H), 2.99 - 2.86 (m, 3H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 1H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.15 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 C: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일] 피페라진-1-카복실레이트: THF (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 549 umol) 및 [(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메탄올 (157 mg, 1.10 mmol)의 혼합물에 t-BuONa (158 mg, 1.65 mmol)을 첨가했다. 20℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을, 용액 온도를 0℃로 유지하면서 HCl (1 M)로 pH = 7로 중화시키고, 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (200mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (174 mg, 278 umol, 50.7% 수율, 100% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 626.2 [M+H]+.
단계 D: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴: CH2Cl2 (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (174 mg, 278 umol)의 용액에 TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.00 mL)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 15℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (178 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했다. ESI MS m/z 526.1 [M+H]+.
단계 E: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 - 2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴: CH2Cl2 (5 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (178 mg, 조물질, TFA 염) 및 DIEA (360 mg, 2.78 mmol, 485 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (28.1 mg, 223 umol)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 0℃에서 NaHCO3 포화 용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 25 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 27% - 54%, 10분)로 정제했다. 2-[4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘- 2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (11.7 mg, 18.3 umol, 2개의 단계 6.58% 수율, 97.9% 순도, FA)을 갈색 고체로서 수득했다. ESI MS m/z 580.2 [M+H]+.
실시예 253
2-(1-아크릴로일-4-(7-(7-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: (7- 클로로 -3,4- 디하이드로나프탈렌 -1-일) 트리플루오로메탄설포네이트: DCM (35 mL) 중 7-클로로테트랄린-1-온 (2 g, 11.1 mmol, 1 eq) 및 DIEA (4.29 g, 33.2 mmol, 5.79 mL)의 혼합물에 Tf2O (4.69 g, 16.6 mmol, 2.74 mL)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 50/1)로 정제했다. (7-클로로-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (2.25 g, 7.02 mmol, 63.4% 수율, 97.6 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.10 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.88 - 2.80 (m, 2H), 2.53 (dt, J = 4.8, 8.0 Hz, 2H).
단계 B: (7- 클로로 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트: 디옥산 (35 mL) 중 (7-클로로-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.57 g, 5.02 mmol)의 혼합물에 DDQ (2.28 g, 10.0 mmol)을 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 105℃로 가열하고 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 1,4-디옥산. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 50/1)로 정제했다. (7-클로로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.24 g, 3.94 mmol, 78.5 % 수율, 98.7 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.83 (m, 2H), 7.57 - 7.47 (m, 3H).
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 (7-클로로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 586.1 [M+H]+.
실시예 254
2-[4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모-5-플루오로나프탈렌으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 255
2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: (7- 메톡시 -3,4- 디하이드로나프탈렌 -1-일) 트리플루오로메탄설포네이트: DCM (15 mL) 중 7-메톡시테트랄린-1-온 (1 g, 5.67 mmol) 및 DIEA (2.20 g, 17.0 mmol, 2.97 mL)의 용액에 Tf2O (2.40 g, 8.51 mmol, 1.40 mL)을 적가하고, 그 다음 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 100:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 (7-메톡시-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.7 g, 5.24 mmol, 92.3 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.06 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.04 - 2.96 (m, 2H), 2.68 (t, J=8.4 Hz, 2H).
단계 2: (7- 메톡시 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트: 디옥산 (30 mL) 중 (7-메톡시-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.7 g, 5.51 mmol) 및 DDQ (2.50 g, 11.0 mmol)의 혼합물을 105℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 50:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 (7-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.41 g, 4.14 mmol, 75.1 % 수율, 90.0 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.84 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 2H), 7.15 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H).
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에(7-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 582.4 [M+H]+.
실시예 256
1-(2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-(4-( tert - 부톡시카보닐 )-3-( 메톡시메틸 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: N,N-디메틸아세트아미드 (3 ml) 중 tert-부틸 2-(메톡시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.715 g, 3.10 mmol)의 용액을 교반하면서 빙욕 상에서 냉각시키고 고체 벤질 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.00 g, 2.96 mmol)을 소량씩 첨가하고, 이어서 DIPEA (0.57 mL, 3.25 mmol, 1.1 eq.). 수득한 용액을 1시간 동안 r.t.까지 가온되도록 하고, 그 다음 물 (15 mL)과 MTBE (50 mL) 사이에서 분할시켰다. 유기층을 물 (2 x 10 mL), 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켜 황색 고체 (1.54 g, 98%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 532.3, [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(메톡시메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 조 벤질 4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(메톡시메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (500 mg, 0.940 mmol), (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (216 mg, 1.88 mmol), Cs2CO3 (612 mg, 1.88 mmol) 및 디옥산 (0.5 mL)의 혼합물을 질소로 씻어 내었다. 바이알을 캡핑하고 120℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)과 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고, 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 화합물을 4 내지 10% MeOH/DCM +0.2%NH4OH로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피, Redisep 40g로 정제하여 황색 고체 (197 mg, 34%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 611.4 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(메톡시메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (197 mg, 0.323 mmol), 메탄올 (10 mL) 및 탄소상 팔라듐 (10 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 탈가스하고 수소 분위기 (밸룬) 하에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트(2 mL)를 통해 여과하고, MeOH (3 x 3 mL)로 세정하고, 진공에서 증발시키고, 진공에서 그리고 고진공 하에서 톨루엔으로 증발 건조시켜 무색 고체 (150 mg, 98%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 477.2 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도-[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.315 mmol), Cs2CO3 (308 mg, 0.944 mmol), 디옥산 (1 mL), 1-아이오도나프탈렌 (0.0689 ml, 0.472 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (26.3 mg, 0.0315 mmol) (RuPhos-Pd-G3)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 플라스크를 캡핑하고 70℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (15 mL)과 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고, 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 화합물을 4 내지 10% MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 크로마토그래피, Redisep 40g로 정제하여 무색 고체, 131 mg를 수득했다. ES+APCI MS m/z 603.3 [M+H]+.
단계 E: 1-(2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. Tert-부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 0.2157 mmol)을 DCM 중 1M 트리플루오로아세트산에 용해시키고, 수득한 용액을 r.t.에서 1시간 동안 정치되도록 했다. 반응 혼합물을 2M Na2CO3 (5 mL)과 DCM (15 mL) 사이에서 분할시키고, 유기층을 진공에서 증발시켰다. 고형 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고, 교반하면서 얼음-EtOH-CO2 배쓰 상에서 -30℃로 냉각시키고 트리에틸아민 (0.09 ml, 0.64 mmol)을 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (0.035 ml, 0.43 mmol)을 첨가했다. -30℃에서 1분 후, 반응 혼합물을 NH4OH (0.05 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시키고 고진공 하에서 건조시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고, 솜마개를 통해 여과하고 5 내지 10% MeOH/DCM +0.25% NH4OH로 용출하는 실리카겔 크로마토그래피, Redisep 40g로 정제하여 무색 고체 (19.6 mg, 16%)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 557.3, [M+H]+.
실시예 257
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 원뿔형 바닥 바이알에서 , 디옥산 (3616 μl, 0.362 mmol) 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.362 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. (S)-(1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메탄올 (168 mg, 1.08 mmol), Cs2CO3 (353 mg, 1.08 mmol), Rhuphos Pd G3 (30.2 mg, 0.0362 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 1시간 동안 100℃에서 가열했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. EtOAc을 첨가하고 염수 (2x)로 세정했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 0-20% DCM/MeOH + 2% NH4OH로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 깨끗한 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (90 mg, 0.134 mmol, 37.0 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 672.4 [M+H]+.
단계 B: 2-(4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (1340 μl, 0.13 mmol) 및 THF (1340 μl, 0.13 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (90 mg, 0.13 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (36 mg, 0.033 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5분 동안 퍼지했다. 용액을, 그 다음 진공을 통해 도입된 H2 이어서 밸룬 압력 하에서 교반했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. LC/MS는 원하는 생성물을 나타내었다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 2-(4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (71 mg, 0.13 mmol, 99 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 538.3 [M+H]+.
단계 C: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-( 사이클로프로필메틸 ) 피롤리딘 -2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디클로로메탄 (1320 μl, 0.132 mmol) 중 2-(4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (71 mg, 0.132 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (10.7 μl, 0.132 mmol) 이어서 휘니그 염기 (46.1 μl, 0.264 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. LC/MS는 반응 완료를 나타내었다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 농축물을 ACN:H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb로 유리 염기화하고 유기물 DCM으로 추출했다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (15.7 mg, 0.0265 mmol, 20.1 % 수율)을 수득했다. ES+APCI MS m/z 592.4[M+H]+.
실시예 258
2-[4-[7-(1-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 1-브로모이소퀴놀린으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 553.3 [M+H]+.
실시예 259
2-[4-[7-(6-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: (6- 플루오로 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트: 디클로로메탄 (3 mL) 중 6-플루오로나프탈렌-1-올 (0.10 g, 617 umol) 및 DIEA (159 mg, 1.23 mmol, 215 uL)의 용액에 트리플루오로메틸설포닐 트리플루오로메탄설포네이트 (191 mg, 678 umol, 112 uL,)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (3 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 5 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 (6-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (0.17 g, 543 umol, 88.1 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.10 (dd, J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.48 - 7.40 (m, 2H).
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 1(6-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 260
2-[4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 4-브로모이소퀴놀린으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 553.1 [M+H]+.
실시예 261
2-[1-(2-메틸프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모나프탈렌으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 2-메틸프로프-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 566.4[M+H]+.
실시예 262
2-[4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 5-브로모이소퀴놀린으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 553.4 [M+H]+.
실시예 263
2-[1-[(E)-부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 대신에 1-브로모나프탈렌으로 대체하고 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 (E)-부트-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 566.4 [M+H]+.
실시예 264
2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 5-브로모퀴놀린으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다. ESI MS m/z 553.4 [M+H]+.
실시예 265
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모나프탈렌 대신에 1-브로모-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 584.3 [M+H]+.
실시예 266
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 (S)-(1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일)메탄올을 사용하여 실시예 147, 단계들 F-J에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 596.3 [M+H]+.
실시예 267
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 (R)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 사용하여 실시예 234에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 552.3 [M+H]+.
실시예 268
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-플루오로-2-하이드록시메틸파이롤리딘 대신에 tert-부틸 (2S,4R)-2-(하이드록시메틸)-4-메톡시파이롤리딘-1-카복실레이트를 사용하여 실시예 220, (단계들 C-G)에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 582.3 [M+H]+.
실시예 269
2-(1-아크릴로일-4-(2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메탄올을 2-디메틸아미노-2-메틸-1-프로판올로 대체하여 실시예 147에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 554.4 [M+H]+.
실시예 270
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 (R)-N-Boc-2-하이드록시메틸모폴린을 사용하여 실시예 147, 단계들 F-J에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 271
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 (S)-N-Boc-2-하이드록시메틸모폴린을 사용하여 실시예 147, 단계들 F-J에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 272
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 tert-부틸 (R)-3-(하이드록시메틸)모폴린-4-카복실레이트를 사용하여 실시예 147, 단계들 F-J에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 273
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 tert-부틸 (S)-3-(하이드록시메틸)모폴린-4-카복실레이트를 사용하여 실시예 147, 단계들 F-J에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 274
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 대신에 (R)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 사용하고 단계 H에서 1-브로모나프탈렌 대신에 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여 실시예 234, 단계들 G-J에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 275
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-플루오로-6-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모나프탈렌 대신에 2-브로모-1-플루오로-3-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 276
2-(1-아크릴로일-4-(7-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모나프탈렌 대신에 1-브로모-4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 277
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모나프탈렌 대신에 1-브로모-3-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 사용하고 단계 F에서 EtOH/THF 대신에 THF를 사용하여 실시예 210, 단계들 E-G에 따라 합성했다. ES+APCI MS m/z 604.3 [M+H]+.
실시예 278
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(퀴놀린-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 4-브로모퀴놀린으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210 단계들 E-G에서와 같이 제조했다.
실시예 279
2-(1-아크릴로일-4-(2-(2-(디메틸아미노)에톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올을 N, N-디메틸-에탄올아민으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210에서와 같이 제조했다.
실시예 280
2-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-아크릴로일피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올을 3-((1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210에서와 같이 제조했다.
실시예 281
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올을 (R)-(1-메틸피롤리딘-3-일)메탄올로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210에서와 같이 제조했다.
실시예 282
2-(1-(3-메틸부트-2-에노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 E에서 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모나프탈렌으로 대체하고 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 3-메틸부트-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 210에서와 같이 제조했다.
실시예 283
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올을 (2R)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210에서와 같이 제조했다.
실시예 284
2-(1-아크릴로일-4-(2-(2-(디에틸아미노)에톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 단계 C에서 (2S)-1-에틸-2-피롤리디닐]메탄올을 N, N-디에틸-에탄올아민으로 대체하고 또한 단계 G에서 아크릴로일 클로라이드를 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트로 대체하여 실시예 210에서와 같이 제조했다.
실시예 285
tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트
단계 1: ( S )- 피롤리딘 -2- 일메탄올. CH2Cl2 (40 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-(하이드록시메틸) 파이롤리딘-1-카복실레이트 (2 g, 9.94 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl (디옥산 중 4 M, 49.69 mL, 20 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 15℃에서 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 (S)-피롤리딘-2-일메탄올 (1.37 g, 9.96 mmol, 100% 수율, HCl)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 2: [(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일]메탄올. MeOH (20 mL) 중 [(2S)-피롤리딘-2-일]메탄올 (750 mg, 7.41 mmol, 724 uL, 1 eq) 및 아세톤 (4.31 g, 74.2 mmol, 5.46 mL, 10 eq)의 혼합물을 촉매로서 Pd/C (100 mg, 7.41 mmol, 10% 순도, 1 eq)로 H2 (30 psi) 하에서 15℃에서 3시간 동안 수소첨가했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 [(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메탄올 (0.821 g, 5.73 mmol, 77.3% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 3.54 (dd, J = 4.0, 10.8 Hz, 1H), 3.40 - 3.35 (m, 1H), 2.99 - 2.86 (m, 3H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 1H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.15 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. THF (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 549 umol, 1 eq) 및 [(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메탄올 (157 mg, 1.10 mmol, 2 eq)의 혼합물에 t-BuONa (158 mg, 1.65 mmol, 3 eq)을 첨가했다. 20℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 0℃에서 HCl (1 mol/L)로 pH = 7로 중화하고, 그 다음 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (200mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (174 mg, 278 umol, 50.7% 수율, 100% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 626.
단계 B: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. CH2Cl2 (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (174 mg, 278 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.00 mL, 243 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 15℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (178 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
단계 C: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 - 2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. CH2Cl2 (5 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (178 mg, 조물질, TFA) 및 DIEA (360 mg, 2.78 mmol, 485 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (28.1 mg, 223 umol)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 용액 (5 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 25 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 27% - 54%, 10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘- 2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (11.7 mg, 18.3 umol, 2개의 단계 6.58% 수율, 97.9% 순도, FA)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 580.
1H NMR (400MHz, 아세트산-d4) δ = 8.28 - 8.19 (m, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.94 - 6.71 (m, 1H), 6.38 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.15 (br s, 1H), 4.92 - 4.54 (m, 4H), 4.42 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.34 (br s, 2H), 4.13 (br s, 2H), 3.95 (br s, 1H), 3.85 - 3.21 (m, 7H), 3.20 - 2.84 (m, 3H), 2.42 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 2.07 (m, 3H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.39 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 286
2-(1-아크릴로일-4-(7-(7-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 1: (7- 클로로 -3,4- 디하이드로나프탈렌 -1-일) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (35 mL) 중 7-클로로테트랄린-1-온 (2 g, 11.1 mmol, 1 eq) 및 DIEA (4.29 g, 33.2 mmol, 5.79 mL, 3 eq)의 혼합물에 Tf2O (4.69 g, 16.6 mmol, 2.74 mL, 1.5 eq)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 50/1)로 정제했다. 화합물 (7-클로로-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (2.25 g, 7.02 mmol, 63.4% 수율, 97.6 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.10 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.88 - 2.80 (m, 2H), 2.53 (dt, J = 4.8, 8.0 Hz, 2H).
단계 2: (7- 클로로 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. 디옥산 (35 mL) 중 (7-클로로-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.57 g, 5.02 mmol, 1 eq)의 혼합물에 DDQ (2.28 g, 10.0 mmol, 2 eq)을 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 105℃로 가열하고 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 1,4-디옥산을 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 50/1)로 정제했다. 화합물 (7-클로로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.24 g, 3.94 mmol, 78.5 % 수율, 98.7 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.83 (m, 2H), 7.57 - 7.47 (m, 3H).
단계 A: tert-부틸 4-[7-(7-클로로-1-나프틸)-2 -[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 424 umol, 1 eq) 및 (7-클로로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (264 mg, 848 umol, 2 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (38.8 mg, 42.4 umol, 0.1 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (414 mg, 1.27 mmol, 3 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 혼합물을 110℃로 가열하고 5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 15.0 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 4-[7-(7-클로로-1-나프틸)-2 -[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 316 umol, 74.6% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.20 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.38 (m, 2H), 7.18 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.43 (br dd, J = 4.8, 10.3 Hz, 1H), 4.29 - 4.16 (m, 3H), 4.09 - 3.89 (m, 2H), 3.42 (br s, 1H), 3.35 - 3.20 (m, 3H), 3.17 - 2.65 (m, 7H), 2.52 (s, 3H), 2.33 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.88 - 1.71 (m, 4H).
단계 B: 2-[4-[7-(7- 클로로 -1- 나프틸 )- 2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.5 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(7-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 316 umol, 1 eq)의 혼합물에 TFA (541 mg, 4.75 mmol, 351 uL, 15 eq)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 그 다음 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 화합물 2-[4-[7-(7-클로로-1-나프틸)- 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (204 mg, 316 umol, 99.8% 수율, TFA)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 532.
단계 C: 2-[4-[7-(7- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.5 mL) 중 2-[4-[7-(7-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (204 mg, 316 umol, 1 eq, TFA) 및 TEA (160 mg, 1.58 mmol, 220 uL, 5 eq)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (39.8 mg, 316 umol, 1 eq)을 0℃에서 한번에 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (1 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (2 mL)로 희석하고 DCM (5 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (5 mL × 1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150 × 30 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 30% - 54%, 10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[7-(7-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (36.0 mg, 56.1 umol, 17.8% 수율, 98.7 % 순도, FA)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 586.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.42 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 2H), 7.19 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.61 (br s, 1H), 6.40 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.91 - 4.75 (m, 2H), 4.48 (td, J = 4.4, 12.0 Hz, 1H), 4.23 (br s, 3H), 4.07 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.82 - 3.58 (m, 2H), 3.56 - 3.08 (m, 6H), 3.08 - 2.92 (m, 2H), 2.89 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.85 - 2.70 (m, 2H), 2.28 (qd, J = 8.4, 12.5 Hz, 1H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.11 - 1.94 (m, 2H).
실시예 287
2-[4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 424 umol, 1.30 eq) 및 1-브로모-5-플루오로-나프탈렌 (73.4 mg, 326 umol, 1.0 eq)의 용액에 Cs2CO3 (319 mg, 979 umol, 3.0 eq), Pd2(dba)3 (29.9 mg, 32.6umol, 0.10 eq) 및 RuPhos (22.8 mg, 48.9 umol, 0.15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 톨루엔을 제거했다. 잔류물을 H2O (10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10.0 mL * 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 H2O (10.0 mL)로 세정하고, 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물(0.100%포름산)/아세토니트릴]로 정제했다. 화합물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 211 umol, 64.5% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
단계 B: 2-[4-[7-(5- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 211 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.00 mL, 128 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 화합물 2-[4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 517.
단계 C: 2-[4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, TFA)의 용액에 Et3N (200 mg, 1.98 mmol, 275 uL) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (40.0 mg, 317 umol)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 물 (10.0 mL)로 세정했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (20.0 mL*3)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 26%-53%,10분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[4-[7-(5-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (48.4 mg, 82.6 umol, 2개의 단계 40.0% 수율, FA)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.41 (s, 1H), 7.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.38-7.32 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.54-6.52 (m, 1H), 6.33 (m, 1H), 5.76 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.10-4.98 (br, 4H), 4.74-4.69 (m, 1H), 4.41-4.36 (m, 1H), 4.16 (m, 3H), 3.99 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.61-3.60 (m, 1H), 3.14-3.29 (m, 4H), 3.11 (br, 2H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.74-2.67 (m, 2H), 2.21-2.16 (m, 1H), 2.09-2.04 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 2H).
실시예 288
2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: (7- 메톡시 -3,4- 디하이드로나프탈렌 -1-일) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (15 mL) 중 7-메톡시테트랄린-1-온 (1 g, 5.67 mmol, 1 eq), DIEA (2.20 g, 17.0 mmol, 2.97 mL, 3 eq)의 용액에 Tf2O (2.40 g, 8.51 mmol, 1.40 mL, 1.5 eq)을 적가하고, 그 다음 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 100:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 (7-메톡시-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.7 g, 5.24 mmol, 92.3 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.06 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.75 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.04 - 2.96 (m, 2H), 2.68 (t, J=8.4 Hz, 2H).
단계 2: (7- 메톡시 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. 디옥산 (30 mL) 중 (7-메톡시-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.7 g, 5.51 mmol, 1 eq) 및 DDQ (2.50 g, 11.0 mmol, 2 eq)의 혼합물을 105℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 50:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 (7-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.41 g, 4.14 mmol, 75.1 % 수율, 90.0 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.84 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 2H), 7.15 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H).
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 200 mg, 424 umol, 1 eq), (7-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (260 mg, 848 umol, 2 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2 eq), Cs2CO3 (414 mg, 1.27 mmol, 3 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (38.8 mg, 42.4 umol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 물 (5 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 34 %)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 151 umol, 35.7 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 628.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.69 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.96 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.52 - 4.30 (m, 3H), 4.20 (ddd, J=3.2, 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.02 (br d, J=13.6 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.87 (br d, J=13.2 Hz, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 1H), 3.55 - 3.43 (m, 1H), 3.25 (br dd, J=3.6, 13.6 Hz, 2H), 3.12 (br t, J=7.6 Hz, 1H), 3.05 - 2.94 (m, 1H), 2.92 - 2.77 (m, 3H), 2.76 - 2.65 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.92 - 1.74 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 159 umol, 1 eq) 및 TFA (363 mg, 3.19 mmol, 236 uL, 20 eq)의 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 조물질, 2TFA)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.5 mL) 중 2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 159 umol, 1 eq, 2TFA), DIEA (205 mg, 1.59 mmol, 276 uL, 10 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (24.0 mg, 190 umol, 1.2 eq)을 0℃에서 첨가하고 18℃에서 1시간 동안 교반했다. 물 (5 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 DCM (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 45%-75%,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[4-[7-(7-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (10.6 mg, 17.8 umol, 2개의 단계 11.2 % 수율, 97.6 % 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.97 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 6.57 (br d, J=10.4 Hz, 1H), 6.43 - 6.36 (m, 1H), 5.83 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.25 - 4.15 (m, 1H), 4.08 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.96 (br s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.72 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.54 (br d, J=5.6 Hz, 2H), 3.30 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.22 - 2.95 (m, 3H), 2.93 (d, J=8.4 Hz, 1H), 2.86 (br d, J=4.8 Hz, 2H), 2.79 - 2.65 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.16 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.67 (m, 4H).
실시예 289
2-[4-[7-(1-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[7-(1- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S ) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. DMSO (4.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 424 umol, 1.00 eq), 1-브로모이소퀴놀린 (132 mg, 636 umol, 1.50 eq) 및 DIEA (109 mg, 848 umol, 148 uL, 2.00 eq)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 용액 (6.00 mL)로 pH > 7로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-이소퀴놀릴)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.15 g, 233 umol, 54.9 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 599.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.17 - 8.11 (m, 2H), 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.69 - 4.55 (m, 3H), 4.42 - 4.35 (m, 1H), 4.15 - 4.01 (m, 3H), 3.96 - 3.81 (m, 2H), 3.57 (ddd, J = 4.0, 8.0, 16.8 Hz, 1H), 3.27 (dd, J = 4.0, 13.6 Hz, 1H), 3.18 - 3.16 (m, 1H), 3.16 - 2.95 (m, 3H), 2.91 - 2.73 (m, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.07 - 2.01 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(1- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (0.40 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.15 g, 250.53 umol, 1.00 eq) 및 TFA (428 mg, 3.76 mmol, 278 uL, 15.0 eq)의 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(1-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (153 mg, 조물질, TFA)을 흑색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 499.
단계 C: 2-[4-[7-(1- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]-1- 프로프 -2- 에노일 -피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (4.00 mL) 중 2-[4-[7-(1-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (153 mg, 조물질, TFA) 및 TEA (253 mg, 2.50 mmol, 348 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (31.5 mg, 250 umol)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액 (1.00 mL)으로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC 칼럼: (Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%, FA) - ACN]; B%: 10% - 24%, 7분) 및 (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%, FA) - ACN]; B%: 10% - 24%, 7분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[7-(1-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (31.2 mg, 52.1 umol, 2개의 단계 20.9 % 수율, FA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 553.
1H NMR (400MHz, 아세트산) δ = 8.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 - 7.95 (m, 2H), 7.89 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.82 (br t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.91 - 6.69 (m, 1H), 6.37 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.87 (br d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.10 (br s, 2H), 4.78 (br s, 3H), 4.53 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 4.32 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.13 (br s, 3H), 3.90 (br s, 2H), 3.79 - 3.40 (m, 3H), 3.26 (br s, 3H), 3.12 (br s, 3H), 3.07 - 2.84 (m, 2H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.23 - 2.09 (m, 3H).
실시예 290
2-[4-[7-(6-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: (6- 플루오로 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. 디클로로메탄 (3.00 mL) 중 6-플루오로나프탈렌-1-올 (0.10 g, 617 umol, 1.00 eq) 및 DIEA (159 mg, 1.23 mmol, 215 uL, 2.00 eq)의 용액에 트리플루오로메틸설포닐 트리플루오로메탄설포네이트 (191 mg, 678 umol, 112 uL, 1.10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 5.00 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 (6-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (0.17 g, 543 umol, 88.1 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.10 (dd, J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.48 - 7.40 (m, 2H).
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[7-(6- 플루오로 -1- 나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘 -2-일)메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 424 umol, 1.00 eq), (6-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (150 mg, 509 umol, 1.20 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.20 eq), Pd2(dba)3 (38.8 mg, 42.4 umol, 0.10 eq) 및 Cs2CO3 (415 mg, 1.27 mmol, 3.00 eq)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 용액 (5.00 mL)으로 pH > 7로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출하고, 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(6-플루오로-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 322 umol, 75.8 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 (dd, J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 2H), 7.29 - 7.24 (m, 1H) 7.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.22 (m, 2H), 4.14 - 4.00 (m, 3H), 3.95 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.44 (br s, 1H), 3.35 - 3.25 (m, 2H), 3.23 - 2.90 (m, 4H), 2.86 - 2.63 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H) 1.89 - 1.74 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(6- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (0.40 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(6-플루오로-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 322 umol, 1.00 eq) 및 TFA (556 mg, 4.87 mmol, 361 uL, 15.0 eq)의 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(6-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (205 mg, 조물질, TFA)을 흑색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 C: 2-[4-[7-(6- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (4.00 mL) 중 2-[4-[7-(6-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (205 mg, 조물질, TFA) 및 TEA (328 mg, 3.24 mmol, 451 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (40.9 mg, 324 umol)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액 (1.00 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225 %, FA) - ACN]; B%: 17%-44%, 9분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[7-(6-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (85.6 mg, 139 umol, 42.8 % 수율, FA)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400MHz, 아세트산) δ = 8.28 (dd, J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 2H), 7.31 (dt, J = 2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.94 - 6.68 (m, 1H), 6.38 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.16 (br s, 1H), 4.84 (br s, 2H), 4.74 - 4.54 (m, 1H), 4.42 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.33 (br s, 2H), 4.25 - 4.08 (m, 1H), 3.92 (br s, 2H), 3.81 - 3.47 (m, 3H), 3.46 - 3.16 (m, 4H), 3.11 (br s, 3H), 3.08 - 2.87 (m, 3H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 2.25 - 2.11 (m, 3H).
실시예 291
2-[4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[7-(4- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.15 g, 318 umol, 1.00 eq), 4-브로모이소퀴놀린 (99.3 mg, 477 umol, 1.50 eq), RuPhos (29.7 mg, 63.6 umol, 0.20 eq), Pd2(dba)3 (29.1 mg, 31.8 umol, 0.10 eq) 및 Cs2CO3 (311 mg, 954 umol, 3.00 eq)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (6.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 용액 (5.00 mL)으로 pH > 7로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.17 g, 273 umol, 85.9 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 599.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.03 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (dt, J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.44 - 4.31 (m, 3H), 4.15 - 4.03 (m, 2H), 3.95 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.59 - 3.49 (m, 1H), 3.40 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.34 - 3.19 (m, 2H), 3.18 - 2.93 (m, 4H), 2.90 - 2.79 (m, 2H), 2.77 - 2.66 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(4- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]- 6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (0.30 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.15 g, 251 umol, 1.00 eq) 및 TFA (428 mg, 3.76 mmol, 278 uL, 15.0 eq)의 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (153 mg, 조물질, TFA)을 흑색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 499.
단계 C: 2-[4-[7-(4- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (2.00 mL) 중 2-[4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (153 mg, 조물질, TFA) 및 Et3N (254 mg, 2.51 mmol, 349 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (31.6 mg, 251 umol)을 -40℃에서 첨가했다. 15℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225%, FA) - ACN]; B%: 12%-36%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[7-(4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (28.3 g, 43.4 umol, 2개의 단계 17.3 % 수율, FA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 553.
1H NMR (400MHz, 아세트산) δ = 9.45 (s, 1H), 8.51 - 8.36 (m, 3H), 8.17 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 - 7.97 (m, 1H), 6.92 - 6.67 (m, 1H), 6.37 (br d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.87 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.14 (br s, 1H), 4.82 (br s, 2H), 4.66 - 4.48 (m, 3H), 4.40 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.22 - 3.80 (m, 3H), 3.79 - 3.49 (m, 4H), 3.32 - 3.09 (m, 7H), 3.07 - 2.88 (m, 2H), 2.47 - 2.36 (m, 1H), 2.24 - 2.11 (m, 3H).
실시예 292
2-[4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 424 umol, 1.00 eq), 5-브로모이소퀴놀린 (115 mg, 551 umol, 1.30 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.20 eq), Cs2CO3 (415 mg, 1.27 mmol, 3.00 eq) 및 Pd2(dba)3 (38.8 mg, 42.4 umol, 0.10 eq)을 탈가스하고 그 다음 12시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (217 mg, 344 umol, 81.0% 수율, 94.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 599.
단계 B: 2-[4-[7-(5- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]- 6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. TFA (620 mg, 5.44 mmol, 403 uL, 15.0 eq) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (217 mg, 362 umol, 1.00 eq)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (222 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 499.
단계 C: 2-[4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4.50 mL) 중 2-[4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (222 mg, 362 umol, TFA) 및 TEA (367 mg, 3.62 mmol, 504 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (45.7 mg, 362 umol)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (2 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 4% - 20%, 8분)로 정제하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[7-(5-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (73.0 mg, 117 umol, 2개의 단계 32.2% 수율, 95.6% 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:553.
1H NMR (400MHz, 아세트산) δ = 9.71 (s, 1H), 8.69 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.97 - 6.68 (m, 1H), 6.38 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.15 (br s, 1H), 4.81 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 4.67 - 4.51 (m, 1H), 4.49 - 4.31 (m, 3H), 4.28 - 4.04 (m, 1H), 3.91 (br s, 2H), 3.78 - 3.64 (m, 1H), 3.63 - 3.37 (m, 4H), 3.36 - 3.20 (m, 1H), 3.11 (br s, 5H), 3.08 - 2.86 (m, 2H), 2.46 - 2.33 (m, 1H), 2.24 - 2.10 (m, 3H).
실시예 293
2-[1-[(E)-부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 212 umol, 1.0 eq), Pd2(dba)3 (19.4 mg, 21.2 umol, 0.10 eq), RuPhos (14.8 mg, 31.8 umol, 0.15 eq) 및 Cs2CO3 (207 mg, 636 umol, 3.0 eq)의 혼합물을 1-브로모나프탈렌 (65.9 mg, 318 umol, 44.2 uL, 1.5 eq)을 적가로 첨가했다. 반응 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 110℃에서 4 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응을 물 (20.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-80% MeCN)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (80.0 mg, 116 umol, 54.6% 수율)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
단계 B: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (80.0 mg, 134 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 202 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 조 생성물 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (110 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]:498.
단계 C: 2-[1-[( E )-부트-2-에노일]-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (110 mg, 152 umol, 2TFA)의 용액에 DIEA (100 mg, 774 umol, 135 uL) 및 (E)-부트-2-에노일 클로라이드 (35.0 mg, 335 umol, 32.1 uL)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 물 (10.0 mL)로 켄칭했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 20%-50%,10분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[1-[(E)-부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (13.3 mg, 23.4 umol, 99.7% 순도, FA)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.37 (s, 1H), 8.14-8.13 (m, 1H), 7.80-7.78 (m, 1H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46-7.42 (m, 2H), 7.36 (m, 1H), 7.07 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.95-6.90 (m, 1H), 6.22 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.05-4.91 (br, 1H), 4.67-4.63 (m, 1H), 4.37-4.32(m, 1H), 4.24-4.20 (m, 2H), 4.12 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.96 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.51-3.49 (m, 1H), 3.39-3.29 (m, 2H), 3.18-3.12 (m, 7H), 2.90-2.76 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.18-2.12 (m, 1H), 2.00-1.95 (m, 1H), 1.90-1.86 (m, 5H).
실시예 294
2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6.00 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[(1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 424 umol, 1.00 eq), 5-브로모퀴놀린 (115 mg, 551 umol, 1.30 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.20 eq), Cs2CO3 (415 mg, 1.27 mmol, 3.00 eq) 및 Pd2(dba)3 (38.8 mg, 42.4 umol, 0.10 eq)을 탈가스하고 그 다음 12시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 315 umol, 74.4% 수율, 94.4% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 599.
단계 B: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(5- 퀴놀릴 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. TFA (571 mg, 5.01 mmol, 371 uL, 15.0 eq) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 334 umol, 1.00 eq)의 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (204 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 499.
단계 C: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]- 7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (204 mg, 333 umol, 1.00 eq, TFA) 및 TEA (337 mg, 3.33 mmol, 463 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (42.0 mg, 333 umol)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (2 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (DCM/MeOH 8/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 7%-34%,10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(5-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (49.1 mg, 79.5 umol, 2개의 단계 23.9% 수율, 96.9% 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:553.
1H NMR (400MHz, 아세트산) δ = 9.22 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 9.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 - 7.90 (m, 1H), 7.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.98 - 6.71 (m, 1H), 6.37 (br d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.88 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.15 (br s, 1H), 4.81 (br s, 2H), 4.77 - 4.52 (m, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 3H), 4.14 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.91 (br s, 2H), 3.79 - 3.66 (m, 1H), 3.65 - 3.32 (m, 4H), 3.12 (br s, 6H), 3.05 (br d, J = 16.8 Hz, 2H), 2.46 - 2.34 (m, 1H), 2.23 - 2.09 (m, 3H).
실시예 295
2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: [2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(4- 퀴놀릴 )- 6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 0.15 g, 318 umol, 1.00 eq), 4-브로모퀴놀린 (99.3 mg, 477 umol, 1.50 eq), RuPhos (29.7 mg, 63.6 umol, 0.20 eq), Pd2(dba)3 (29.1 mg, 31.8 umol, 0.10 eq) 및 Cs2CO3 (311 mg, 954 umol, 3.00 eq)의 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 (5.00 mL)로 pH > 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-퀴놀릴)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.17 g, 269 umol, 84.8 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 599.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.77 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.0, 16.0 Hz, 2H), 7.70 (dt, J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 6.92 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.44 - 4.33 (m, 3H), 4.15 - 4.04 (m, 2H), 3.95 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.74 - 3.64 (m, 1H), 3.46 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.37 - 3.21 (m, 2H), 3.18 - 2.93 (m, 4H), 2.93 - 2.79 (m, 2H), 2.72 (br dd, J = 6.0, 16.8 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.93 - 1.79 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(4- 퀴놀릴 ) -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (0.30 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-(4-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (165 mg, 276 umol, 1.00 eq) 및 TFA (471 mg, 4.13 mmol, 306 uL, 15.0 eq)의 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-퀴놀릴) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (168 mg, 조물질, TFA)을 흑색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 499.
단계 C: 2-[4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (3.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(4-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (168 mg, 조물질, TFA) 및 Et3N (277 mg, 2.74 mmol, 382 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (34.6 mg, 274.22 umol)을 -40℃에서 첨가했다. 15℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%, FA) - ACN]; B%: 1% - 21%, 7분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 295, 23.4 mg, 39.6 umol, 2개의 단계 13.4 % 수율, 93.6% 순도, FA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 553.
SFC 조건: OD-3S_3_40_3 ML 칼럼: Chiralcel OD-3 100 × 4.6mm I.D., 3 um, 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05 % DEA), 유량: 3 mL / min, 파장: 220 nm.
1H NMR (400MHz, 아세트산) δ = 8.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.99 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.77 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.32 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 1.2, 10.8 Hz, 1H), 5.01 (br s, 1H), 4.85 - 4.74 (m, 2H), 4.42 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.35 - 4.19 (m, 3H), 4.16 - 3.76 (m, 4H), 3.66 (br d, J = 14.0 Hz, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 3.39 - 3.16 (m, 4H), 3.13 (s, 3H), 3.07 - 2.90 (m, 2H), 2.49 - 2.39 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 3H).
실시예 296
2-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (1.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2- 메틸설피닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 266 umol, 1.0 eq) 및 2-(디메틸아미노)에탄올 (47.4 mg, 531 umol, 53.3 uL, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (51.1 mg, 531 umol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 EA (10 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0 - 40% MeCN)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 수성물로 pH ~ 7로 조정하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 남은 액체를 EA (10 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 254 umol, 95.8% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 590.
단계 B: 2-[4-[2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로- 5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 254 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (29.0 mg, 254 umol, 18.8 uL, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물에 포화 NaHCO3 수성물 (5 mL)을 첨가하고 DCM (10 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 2-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 490.
단계 C: DCM (1.00 mL) 중 2-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7- [2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (125 mg, 255 umol, 1.0 eq) 및 DIEA (198 mg, 1.53 mmol, 267 uL, 6.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (32.2 mg, 255 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 10%-40%, 10분)으로 정제하고, 그 다음 농축시키고 동결건조시켰다. 생성물 2-[4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 296, 30.7 mg, 51.8 umol, 20.3% 수율, 99.5% 순도, FA)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 544.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.45 (br s, 1H), 7.67 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.71 - 6.49 (m, 1H), 6.47 - 6.29 (m, 1H), 5.82 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.07 - 4.97 (m, 1H), 4.54 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.12 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.98 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.40 - 3.30 (m, 2H), 3.22 - 3.09 (m, 4H), 3.05 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.92 (dd, J = 8.0, 16.8 Hz, 1H), 2.86 - 2.81 (m, 1H), 2.79 - 2.70 (m, 2H), 2.56 (s, 6H).
실시예 297
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[2-[3-[( 1 R ,4 R )-2-옥사-5- 아자바이사이클로 [2.2. 1]헵탄 -5-일] 프로폭시 ]-7-[2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 354 umol, 1.0 eq) 및 3-[(1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로판-1-올 (중간체 18, 111 mg, 708 umol, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (68.1 mg, 708 umol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (2 Х10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 60% MeCN)로 정제하고, 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, EA (2 Х10.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[3-[(1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로 [2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 197 umol, 55.7% 수율, 99.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 658.
단계 B: 2-[4-[2-[3-[(1 R ,4 R )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (0.5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[3-[(1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (70.0 mg, 106 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL, 63.5 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (83.0 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 558.
단계 C: 2-[4-[2-[3-[(1 R ,4 R )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (83.0 mg, 106 umol, 1.0 eq, 2TFA)의 혼합물에 DIEA (81.9 mg, 634 umol, 110 uL, 6.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (13.3 mg, 106 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC ((기기: ACSWH-GX-G; 칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um；조건: 물 (0.225%FA)-ACN; 시작 B:12; 종료 B:42; 구배 시간 (분): 10.5; 100%B 유지 시간 (분): 2; 유속 (ml/분): 2)로 정제하고, 수득된 생성물을 농축시키고, 그 다음 동결건조시켰다. 생성물 2-[4-[2-[3-[(1R,4R)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 297, 17.6 mg, 26.3 umol, 2개의 단계, 수율 24.9% 수율, 98.1% 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 612.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.69 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 - 6.52 (m 1H), 6.40 (d, J = 16.4 Hz,1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.16 - 5.02 (m, 1H), 4.58 - 4.51 (m, 1H), 4.38 (br t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.21 (br d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.18 - 4.06 (m, 4H), 3.99 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.74 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.42 - 3.29 (m, 2H), 3.27 - 3.04 (m, 6H), 3.04 - 2.61 (m, 6H), 2.28 - 2.07 (m, 3H), 2.04 - 1.92 (m, 1H).
실시예 298
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: [(3 R )-1- 메틸피롤리딘 -3-일]메탄올. THF (30.0 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸) 파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.0 g, 9.94 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (754 mg, 19.9 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 첨가 후, 반응을 70℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (2.4 mL)로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 여과했다. 용매를 진공 하에서 제거하여 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (1.0 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.64 (dd, J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 3.52 (dd, J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 2.78 - 2.67 (m, 1H), 2.60 - 2.45 (m, 2H), 2.42 - 2.23 (m, 5H), 2.08 - 1.91 (m, 1H), 1.72 - 1.57 (m, 1H).
단계 B: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (1.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 177 umol, 1.0 eq) 및 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (61.2 mg, 531 umol, 3.0 eq)의 용액에 t-BuONa (34.0 mg, 354 umol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 Х10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 50% MeCN)으로 정제했다. tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (40.0 mg, 63.4 umol, 35.8% 수율, 97.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
단계 C: 2-[4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (0.5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (40.0 mg, 64.9 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (770 mg, 6.75 mmol, 500 uL, 104 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (48.0 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 D: 2-[4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (48.0 mg, 64.6 umol, 1.0 eq, 2TFA)의 혼합물에 DIEA (25.0 mg, 194 umol, 33.7 uL, 3.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (8.14 mg, 64.6 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 메탄올 (0.5 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC ((기기: ACSWH-GX-M; 칼럼: Gemini 150*25 5u; 조건: 물 (0.04% NH3H2O)-ACN; 시작 B: 60; 종료 B: 81; 구배 시간 (분): 10; 100%B 유지 시간 (분):3; 유속 (ml/분): 25)로 정제하고, 수득된 생성물을 농축시키고, 그 다음 동결건조 하에서 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴(5.48 mg, 9.26 umol, 14.4% 수율, 96.3% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.54 - 6.44 (m, 1H), 6.32 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.75 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.12 - 4.92 (m, 1H), 4.13 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.07 - 3.97 (m, 3H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.62 - 3.42 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 3.16 - 2.95 (m, 3H), 2.89 - 2.49 (m, 7H), 2.47 - 2.35 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.05 - 1.92 (m, 1H), 1.57 - 1.46 (m, 2H).
실시예 299
2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[2- 메틸설파닐 -7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디 하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (74.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-(2- 메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3.70 g, 9.15 mmol, 1.0 eq), Pd2(dba)3 (1.26 g, 1.37 mmol, 0.15 eq), RuPhos (854 mg, 1.83 mmol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (7.45 g, 22.9 mmol, 2.50 eq)의 용액에 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (4.12 g, 18.3 mmol, 2.49 mL, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (100 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-90% MeCN)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디 하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.90 g, 3.46 mmol, 37.8% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 2H), 7.22 - 7.11 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.03 (br d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.88 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.68 - 3.47 (m, 1H), 3.30 - 3.08 (m, 4H), 3.02 (dt, J = 3.2, 12.4 Hz, 1H), 2.94 - 2.69 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[2- 메틸설피닐 -7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. DCM (15.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2- 메틸설파닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.50 g, 2.46 mmol, 1.0 eq)의 용액에 m-CPBA (593 mg, 2.75 mmol, 1.12 eq, 80% 순도)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 포화 Na2S2O3 수성물 (30.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (30.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-90 % MeCN)로 정제하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.16 g, 2.05 mmol, 83.6% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:565.
단계 C： tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 354 umol, 1.0 eq)의 용액에 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (81.6 mg, 708.4 umol, 2.0 eq) 및 t-BuONa (68.1 mg, 708 umol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 물 (10.0 mL)로 켄칭했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (15 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 여과했다. 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-80% MeCN)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 275 umol, 77.7% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:616.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) 8.08 (s, 1H), 7.61 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 5.02 - 4.78 (m, 1H), 4.58 - 4.43 (m, 2H), 4.17 (br t, J = 12.5 Hz, 1H), 4.08 - 3.86 (m, 5H), 3.64 - 3.51 (m, 1H), 3.23 (br dd, J = 3.8, 13.8 Hz, 1H), 3.11 - 3.01 (m, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.84 - 2.58 (m, 4H), 2.31 - 2.03 (m, 2H), 2.02 - 1.94 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 1H).
단계 D: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.50 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 276 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.50 mL, 73.4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 15분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 조 생성물 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (240 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 E: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (240 mg, 2TFA)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (40.0 mg, 317 umol) 및 DIEA (130 mg, 1.01 mmol, 175 uL)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 반응을 물 (20.0 mL)로 켄칭했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (20.0 mLХ3)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 여과했다. 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150Х25mmХ10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-85%, 3분)로 정제했다. 화합물 2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 299, 10.2 mg, 16.8 umol, 94.3% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.68 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.40 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.85 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.66 - 4.39 (m, 1H), 4.20 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.13 - 3.95 (m, 4H), 3.70 - 3.55 (m, 2H), 3.45-3.20 (m, 2H), 3.16 - 2.99 (m, 3H), 2.98 - 2.91 (m, 4H),2.85 - 2.70 (m, 4H), 2.33 - 2.14 (m, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 2H).
실시예 300
2-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )- 4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 354 umol, 1.0 eq) 및 2-(디에틸아미노)에탄올 (83.0 mg, 708 umol, 93.9 uL, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (68.1 mg, 708 umol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0 - 40% MeCN)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 2-(시아노메틸)- 4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 291 umol, 82.3% 수율)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 618.
단계 B: 2-(4-(2-(2-(디에틸아미노)에톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-(2-(2-(디에틸아미노)에톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 291 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (33.2 mg, 291 umol, 21.6 uL, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 에틸 아세테이트 (10.0 mL,)을 첨가하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH > 7로 조정했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 ml × 3)로 추출하고 유기층을 Na2SO4로 건조시키고 여과했다. 용매를 진공 하에서 제거했다. 생성물 2-(4-(2-(2-(디에틸아미노)에톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (150 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 518.
단계 C: 2-[4-[2-[2-( 디에틸아미노 ) 에톡시 ]-7-[2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질)의 용액에 DIEA (129 mg, 1.0 mmol, 174 uL) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (44.1 mg, 0.35 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 메탄올 (10.0 mL)의 첨가로 20℃에서 켄팅했다. 반응 혼합물에, 물 (10.0 mL)을 첨가하고, DCM (10.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04%NH3H2O)-ACN]; B%: 65%-83%,10분)으로 정제했다. 생성물 2-[4-[2-[2-(디에틸아미노)에톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 300, 41.6 mg, 72.7 umol, 100% 순도, 2개의 단계, 수율 25.0%)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 572.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.28 (m, 1H), 6.70 - 6.49 (m, 1H), 6.39 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.08 (br, s, 1H), 4.39 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 4.14 - 4.00 (m, 3H), 4.02 - 3.84 (m, 1H), 3.32 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.24 - 3.16 (m, 1H), 3.15 - 3.04 (m, 2H), 2.96 - 2.88 (m, 4H), 2.87 - 2.70 (m, 1H), 2.68 - 2.61 (m, 4H), 1.89 (br s, 3H), 1.07 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
실시예 301
2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2S)-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (5 S )-5-( 하이드록시메틸 )-2,2-디메틸- 파이롤리딘 -1- 카복실레이트. 무수 THF (7.00 mL) 중 (2S)-1-tert-부톡시카보닐-5,5-디메틸-파이롤리딘- 2-카복실산 (400 mg, 1.64 mmol, 1.00 eq)의 용액에 BH3ㆍMe2S (10 M, 493 uL, 3.00 eq)을 25℃에서 적가했다. 반응을 5분 동안 50℃에서 가열했다. 완료 시, 빙욕으로 냉각한 후, 혼합물을 메탄올 (10 mL)로 켄칭했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 tert-부틸 (5S)-5-(하이드록시메틸)-2,2-디메틸-파이롤리딘-1-카복실레이트 (360 mg, 1.57 mmol, 95.9%)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 B: tert -부틸 4-[3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. DMF (300 mL) 중 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (20 g, 46.5 mmol, 1.00 eq)의 교반 용액에 DIEA (18.1 g, 139 mmol, 24.3 mL, 3 eq) 및 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (10.2 g, 51.2 mmol, 495 uL, 1.10 eq, 2 HCl)을 첨가했다. 반응을 100℃로 가열하고 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. tert-부틸 4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (18.8 g, 조물질)을 수득하고 워크업 및 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 C: tert -부틸 4-[4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. DMF (200 mL) 중 tert-부틸 4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (18.8 g, 조물질)의 용액에 DIEA (12.0 g, 92.9 mmol, 16.2 mL) 및 벤질 카보노클로리데이트 (11.9 g, 69.7 mmol, 9.91 mL)을 첨가했다. 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (200 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 30/1 내지 3/1)로 정제했다. tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (20 g, 31.6 mmol, 2개의 단계 68.0% 수율, 85% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:539.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 - 7.36 (m, 5H), 5.21 - 5.15 (m, 2H), 4.73 - 4.55 (m, 2H), 4.39 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.69 (m, 2H), 3.41 - 3.16 (m, 3H), 3.00 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.86 - 2.53 (m, 5H), 2.51 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).
단계 D: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (100 mL) 중 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (11 g, 20.4 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 102 mL, 20 eq)을 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 300 mL의 에틸 아세테이트 및 300 mL의 물에 용해시키고 빠르게 교반했다. 그 다음 포화 Na2CO3 수용액을 pH~9까지 첨가했다. 유기물을 물 (1 × 300 mL) 및 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (8.2 g, 15.2 mmol, 74.2% 수율, 81% 순도)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]:439.
단계 E: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-[2- 메틸설파닐 - 7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (100 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (5.07 g, 11.6 mmol, 1.1 eq), 1-브로모나프탈렌 (2.83 g, 13.7 mmol, 1.90 mL, 1.3 eq), Cs2CO3 (8.57 g, 26.3 mmol, 2.50 eq), Pd2(dba)3 (1.45 g, 1.58 mmol, 0.15 eq) 및 RuPhos (982 mg, 2.11 mmol, 0.20 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 85℃에서 5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (200 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 2/1)로 정제했다. 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (3.6 g, 4.65 mmol, 40.1% 수율, 73% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:565.
단계 F: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-[2- 메틸설피닐 -7-(1- 나프틸 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 메틸테트라하이드로푸란 (50 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설파닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (3.1 g, 5.49 mmol, 1 eq)의 교반 용액에 0℃에서 질소 하에서 순수한 m-CPBA (1.18 g, 5.49 mmol, 80% 순도, 1 eq)을 고체로서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반한 후, 반응 혼합물을 Na2S2O3 (100 mL) 수용액의 10 %의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 물 (200 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 100/1 내지 10/1)로 정제하고 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 추가로 정제했다. 원하는 분획을 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (100 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.3 g, 2.19 mmol, 39.9% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:581.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 - 8.13 (m, 1H), 7.92 - 7.83 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.32 (m, 5H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.54 - 4.36 (m, 2H), 4.34 - 4.17 (m, 2H), 4.12 - 4.04 (m, 1H), 3.58 - 3.17 (m, 5H), 3.01 (m, 2H), 2.93 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.90 - 2.79 (m, 1H), 2.77 - 2.65 (m, 1H).
단계 G: 톨루엔 (8.00 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (430 mg, 741 umol, 1.00 eq) 및 tert-부틸 (5S)-5-(하이드록시메틸)-2,2-디메틸-파이롤리딘- 1-카복실레이트 (340 mg, 1.48 mmol, 2.00 eq)의 용액에 t-BuONa (142 mg, 1.48 mmol, 2.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 0.25시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제하여 벤질 4-[2-[[(2S)-1-tert-부톡시카보닐-5,5-디메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 318 umol, 43.0% 수율, 95.0% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 746.
단계 H: 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-5,5-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (4.00 mL) 중 벤질 4-[2-[[(2S)-1-tert -부톡시카보닐-5,5-디메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 268 umol, 1.00 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 4.00 mL, 59.7 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-5,5-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 251 umol, 93.5% 수율, 95.0% 순도, HCl)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 I: 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2 S )-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (3.00 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-5,5- 디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 264 umol, 1.00 eq, HCl) 및 포름알데하이드 (107 mg, 1.32 mmol, 98.2 uL, 5.00 eq, 물 중 37%)의 용액에 CH3COOH (31.7 mg, 528 umol, 30.2 uL, 2.00 eq) 및 NaBH3CN (66.3 mg, 1.06 mmol, 4.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 1 M HCl (0.2 mL)로 켄칭하고, 물 (1 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 6 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2S)-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (96.0 mg, 131 umol, 49.6% 수율, 90.0% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.23 - 8.17 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.42 (m, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.27 - 5.16 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.41 (dd, J = 4.4, 10.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.22 (m, 2H), 4.20 - 4.01 (m, 3H), 3.95 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.40 - 3.21 (m, 3H), 3.13 - 2.91 (m, 2H), 2.91 - 2.69 (m, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.13 - 1.96 (m, 1H), 1.75 - 1.54 (m, 5H), 1.15 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).
단계 J: 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2 S )-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 3분 동안 -40℃에서 MeOH (6.00 mL)에 거품을 일으켰다. MeOH (6.00 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2S)-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.10 g, 152 umol, 1.00 eq)의 용액을 NH3 용액 및 Pd/C (0.05 g, 10% 순도)에 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 반응을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2S)-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (63.0 mg, 103 umol, 68.0% 수율, 86.0% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
단계 K: 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2 S )-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.00 mL) 중 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2S)-1,5,5-트리메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (75.0 mg, 143 umol, 1.00 eq) 및 TEA (72.2 mg, 713 umol, 99.3 uL, 5.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (18.0 mg, 143 umol, 1.00 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (2 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (EtOAc/MeOH 9/1) 및 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 60% - 90%, 12분)로 정제하고 동결건조시켜 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[[(2S)-1,5,5-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 301, 14.7 mg, 25.3 umol, 17.8% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:580.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.25 - 8.17 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.45 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.44 (br s, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 2H), 4.17 - 3.80 (m, 4H), 3.79 - 3.21 (m,4H), 3.19 - 2.63(m, 6H), 2.34 (br s, 3H), 2.15 - 2.03 (m, 1H), 1.69 (br s, 3H), 1.16 (br s, 3H), 0.94 (s, 3H).
실시예 302
2-[4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-2-피페리딜]아세토니트릴
삽입: (7- 플루오로 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (10 mL) 중 7-플루오로나프탈렌-1-올 (250 mg, 1.54 mmol, 1 eq) 및 DIEA (598 mg, 4.63 mmol, 806 uL, 3 eq)의 용액에 Tf2O (652 mg, 2.31 mmol, 382 uL, 1.5 eq)을 -5℃에서 적가했다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반했다. 그 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. (7-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (450 mg, 1.53 mmol, 99.2% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 8.08 (dd, J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 - 7.39 (m, 4H).
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (182 mg, 386 umol, 1 eq), (7-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (227 mg, 772 umol, 2 eq), Pd2(dba)3 (35.3 mg, 38.6 umol, 0.1 eq), RuPhos (36.0 mg, 77.2 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (377 mg, 1.16 mmol, 3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 H2O (30 mL)로 켄칭하고, 그 다음 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 ×100 mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (158 mg, 257 umol, 66.5% 수율, 100% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.92 - 7.79 (m, 2H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30 - 7.25 (m, 1H), 7.19 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.63 (br d, J = 2.1 Hz, 1H), 4.40 (br dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.20 - 4.00 (m, 4H), 3.95 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.52 - 3.37 (m, 1H), 3.36 - 3.16 (m, 3H), 3.15 - 2.63 (m, 6H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.22 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.70 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(7- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4- [7-(7-플루오로-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 162 umol, 1 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 1.62 mL, 40 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 그 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 조물질, HCl)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 C: 2-[4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-2-피페리딜]아세토니트릴. DMF (5 mL) 중 2-[4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 조물질, HCl) 및 DIEA (234 mg, 1.81 mmol, 315 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (18.3 mg, 145 umol)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 용액 (5 mL)로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 25 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/MeOH = 50/1 내지 1/1)로 정제했다. 수집된 액체를 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 12% - 42%, 10분) 및 (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 55% - 85%, 12분)로 정제하여 2-[4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-2-피페리딜]아세토니트릴 (실시예 302, 4.23 mg, 7.19 umol, 2개의 단계 4.29% 수율, 96.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.93 - 7.77 (m, 2H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.19 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.59 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.23 - 4.52 (m, 1H), 4.40 (dd, J = 4.8, 10.6 Hz, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.21 - 4.11 (m, 2H), 4.03 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.86 - 3.04 (m, 6H), 3.03 - 2.58 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.37 - 2.23 (m, 1H), 2.16 - 1.98 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 3H).
실시예 303
2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(1- 나프틸 )-2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.0 mL) 중 2-(1-피페리딜)에탄올 (89.0 mg, 689 umol, 91.5 uL, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (66.2 mg, 689 umol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 그 다음 혼합물에 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 344 umol, 1.0 eq)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 EA (10 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA=10:1 - EA:MeOH=20:1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[2-(1- 피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 296 umol, 86% 수율, 95.7 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(1- 나프틸 )-2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]- 6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 -78 ℃에서 30분 동안 MeOH (10.0 mL)에 거품을 일으켰다. 그 다음 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 279 umol, 1.0 eq) 및 Pd/C (100 mg, 10.0% 순도)을 N2 분위기 하에서 상기 액체에 첨가했다. 현탁액을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 셀라이트로 여과하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1 % FA, 0 - 40% MeCN)로 정제하여 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.0 mg, 176 umol, 63% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[4-[7-(1- 나프틸 )-2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜) 에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.0 mg, 176 umol, 1.0 eq) 및 DIEA (136 mg, 1.06 mmol, 184 uL, 6.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (22.2 mg, 176 umol, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (20.0 mg)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 60% - 90%, 12분)로 정제하여 2-[4-[7-(1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 303, 11.2 mg, 19.7 umol, 11% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.24 - 8.19 (m, 1H), 7.89 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.70 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.19 - 5.01 (m, 1H), 4.47 (br t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.12 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.06 - 3.98 (m, 1H), 3.55 - 3.45 (m, 1H), 3.43 - 3.24 (m, 2H), 3.22 - 3.09 (m, 1H), 3.04 - 2.72 (m, 6H), 2.68 - 2.42 (m, 4H), 1.61 - 1.56 (m, 6H), 1.50 - 1.40 (m, 2H).
실시예 304
2-[4-[2-[[(2R)-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
[(2 R )-1-[2-[ tert -부틸(디메틸) 실릴] 옥시에틸 ] 피롤리딘 -2-일] 메탄올. 아세토니트릴 (70.0 mL) 중 [(2R)-피롤리딘-2-일]메탄올 (0.70 g, 6.92 mmol, 673 uL, 1.00 eq), 2-브로모에톡시-tert-부틸-디메틸-실란 (1.66 g, 6.92 mmol, 1.00 eq) 및 K2CO3 (4.78 g, 34.6 mmol, 5.00 eq)의 혼합물을 83℃에서 12시간 동안 환류시켰다. 그 다음 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 메탄올로 세정했다. 유기층을 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/메탄올 = 50/1 내지 1/1)로 정제했다. 화합물 [(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸) 실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일] 메탄올 (1.40 g, 5.40 mmol, 78.0 % 수율, 100% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.68 (dd, J = 5.2, 6.4 Hz, 2H), 3.57 (dd, J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.42 - 3.25 (m, 1H), 3.23 - 2.96 (m, 2H), 2.95 - 2.82 (m, 1H), 2.72 - 2.61 (m, 1H), 2.48 (td, J = 5.2, 12.8 Hz, 1H), 2.40 - 2.27 (m, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 1H), 1.77 - 1.62 (m, 3H), 0.83 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).
단계 A: 벤질 4-[2-[[(2 R )-1-[2-[ tert -부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 861 umol, 1 eq) 및 [(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메탄올 (447 mg, 1.72 mmol, 2 eq)의 용액에 t-BuONa (248 mg, 2.58 mmol, 3 eq)을 25℃에서 한번에 첨가하고 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 1 M HCl 용액으로 pH = 8로 산성화하고 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (10 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/메탄올 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 벤질 4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (480 mg, 582 umol, 68% 수율, 94.1% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 776.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.28 - 8.11 (m, 1H), 7.95 - 7.77 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.29 (m, 8H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.29 - 5.15 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.41 - 3.88 (m, 7H), 3.83 - 3.68 (m, 2H), 3.57 - 2.69 (m, 12H), 2.67 - 2.49 (m, 1H), 2.37 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.83 - 1.74 (m, 3H), 1.00 - 0.79 (m, 9H), 0.13 -0.01 (m, 6H).
단계 B: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-[2-[ tert -부틸(디메틸) 실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 -78 ℃에서 30분 동안 메탄올 (60.0 mL)에 거품을 일으켰다. 벤질 4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 258 umol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.10 g, 10.0 % 순도)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 H2 하에서 15 psi.에서 교반하고, 그 다음 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸) 실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.15 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 642.
단계 C: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-[2-[ tert -부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (2.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.15 g, 조물질) 및 Et3N (236 mg, 2.34 mmol, 325 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (29.5 mg, 234 umol)을 0℃에서 첨가했다. 20℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액 (0.50 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/10)로 정제하여 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.10 g, 135 umol, 2개의 단계 52.3% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 696.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.25 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.22 - 4.94 (m, 1H), 4.36 (td, J = 3.6, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.20 (m, 2H), 4.15 - 4.05 (m, 2H), 4.04 - 3.97 (m, 1H), 3.75 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.63 (br s, 1H), 3.46 (br s, 1H), 3.35 (br d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.21 - 3.15 (m, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 2H), 2.99 - 2.92 (m, 2H), 2.63 - 2.54 (m, 1H), 2.42 - 2.33 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 1H), 1.84 - 1.73 (m, 3H), 1.66 (br s, 4H), 0.88 (s, 9H), 0.05 (s, 6H).
단계 D: 2-[4-[2-[[(2 R )-1-(2-하이드록시에틸) 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (0.10 mL) 중 2-[4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.09 g, 129 umol, 1 eq) 및 TBAF (THF 중 1.00 M, 1.29 mL, 10 eq)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1 %)/아세토니트릴], 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/3) 및 prep-HPLC (칼럼: Boston pH-lex 150*25 10um; 이동상: [물 (0.10 % TFA) - ACN]; B%: 22% - 52%, 10분 및 칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 47% - 77%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[2-[[(2R)-1-(2-하이드록시에틸) 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (23.9 mg, 41.0 umol, 31.7 % 수율, 99.7 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.25 - 8.18 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.44 - 6.35 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.10 - 4.50 (m, 1H), 4.38 - 4.24 (m, 3H), 4.22 - 4.09 (m, 2H), 4.00 (br d, J = 11.5 Hz, 2H), 3.73 - 3.57 (m, 2H), 3.45 (br s, 1H), 3.36 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.23 - 2.77 (m, 9H), 2.62 (td, J=3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.05 - 1.99 (m, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 3H).
실시예 305
3-(4-((S)-4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-일)이소니코티노니트릴
단계 A: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-[7-(4- 시아노 - 3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 791 umol, 1.0 eq) 및 3-브로모피리딘-4-카보니트릴 (289 mg, 1.58 mmol, 2.0 eq)의 용액에 Cs2CO3 (516 mg, 1.58 mmol, 2.0 eq), Pd2(dba)3 (72.4 mg, 79.1 umol, 0.1 eq) 및 RuPhos (73.8 mg, 158 umol, 0.2 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (15 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (2 ×15.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1 대 석유 에테르/에틸 아세테이트/메탄올=5/1/0.1)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-시아노- 3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 266 umol, 34% 수율, 80.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 608.
단계 B: 3-[4-[3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -7-일]피리딘-4- 카보니트릴. MeOH (5.0 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-시아노-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 226 umol, 1.0 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (49.4 ug, 49.4umol, 5.0 mL) 및 Pd/C (150 mg, 10% 순도)을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 30% MeCN)로 정제하고, 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 용매가 남아있지 않을 때까지 농축하고, 고체에 그 다음 DCM (10.0 mL)을 첨가하고 20℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 고체를 여과하고 여과물을 농축시켜 3-[4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]피리딘-4-카보니트릴 (35.0 mg, 73.9 umol, 33% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 474.
단계 C: 3-[4-[3-( 시아노메틸 )-4- 프로프 -2- 에노일 -피페라진-1-일]-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]피리딘-4-카보니트릴. DCM (1.0 mL) 중 3-[4-[3-(시아노메틸)피페라진 -1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]피리딘-4-카보니트릴 (35.0 mg, 73.9 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 DIEA (28.7 mg, 222 umol, 38.6 uL, 3.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (9.32 mg, 73.9 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC ((기기: ACSWH-GX-M; 칼럼: Gemini 150*25 5u; 조건: 물 (0.04%NH3ㆍH2O)-ACN; 시작 B:32; 종료 B:56; 구배 시간(분): 10; 100%B 유지 시간 (분):3; 유속 (ml/분):100)로 정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그리고 동결건조 하에 두었다. 생성물 3-[4-[3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]피리딘-4-카보니트릴 (실시예 305, 13.0 mg, 24.5 umol, 33% 수율, 99.3% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 528.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.52 (s, 1H), 8.33 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.69 - 6.53 (m, 1H), 6.42 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 5.19 - 5.01 (m, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 3H), 4.27 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.81 (m, 3H), 3.78 - 3.33 (m, 3H), 3.23 - 2.99 (m, 3H), 2.97 - 2.83 (m, 2H), 2.81 - 2.61 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.40 - 2.27 (m, 1H), 2.16 - 1.99 (m, 1H), 1.95 - 1.76 (m, 3H).
실시예 306
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: [( 2 S ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메탄올. THF (100 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4R)-4-플루오로파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (5.0 g, 20.2 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (1.53 g, 40.4 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 N2 하에서 교반한 후, 반응 혼합물을 70℃로 가열하고 70℃에서 2시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (4.5 mL)로 켄칭하고, 그 다음 여과하고, 여과물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1 내지 석유 에테르/에틸 아세테이트/메탄올=3/1/0.1)로 정제하여 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메탄올 (1.5 g, 11.3 mmol, 56% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 5.24 - 4.97 (m, 1H), 3.73 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.61 - 3.40 (m, 2H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.69 (ddd, J = 0.8, 2.8, 12.0 Hz, 1H), 2.61 (dd, J = 2.4, 12.0 Hz, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.18 - 1.98 (m, 2H).
단계 B: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 800 mg, 1.38 mmol, 1.0 eq) 및 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (367 mg, 2.76 mmol, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (265 mg, 2.76 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (30 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (2 ×15 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 포화 염수 (1 × 30 mL)로 세정하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1 내지 석유 에테르/에틸 아세테이트/메탄올=3/1/0.1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (720 mg, 997 umol, 72% 수율, 90.0% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (670 mg, 1.03 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (1.03 mmol, 15.0 mL, 1.0 eq) 및 Pd/C (400 mg, 10% 순도)을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (260 mg, 478 umol, 46% 수율, 94.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (260 mg, 504 umol, 1.0 eq)의 용액에 DIEA (196 mg, 1.51 mmol, 263 uL, 3.0 eq)　및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (63.6 mg, 504 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC ((기기: ACSWH-GX-H; 칼럼: Gemini 150*25 5u; 조건: 물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN; 시작 B:42; 종료 B:72; 구배 시간(분): 12; 100%B 유지 시간 (분):1.8; 유속 (ml/분): 25)로 정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그리고 그 다음 동결건조 하에 두었다. 생성물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 306, 65.6 mg, 115 umol, 23% 수율, 99.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.27 - 8.17 (m, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.45 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.68 - 6.56 (m, 1H), 6.42 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.86 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.30 - 4.99 (m, 2H), 4.45 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 3H), 4.15 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.03 (br d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.70 - 2.72 (m, 11H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.41 - 2.27 (m, 1H), 2.10 - 1.90 (m, 1H).
실시예 307
2-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8 -디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 300 mg, 636 umol, 1.00 eq), 1-브로모-2-플루오로-3-메톡시-벤젠 (261 mg, 1.27 mmol, 2.00 eq), Pd2(dba)3 (117 mg, 127 umol, 0.20 eq), RuPhos (89.1 mg, 191 umol, 0.30 eq) 및 Cs2CO3 (622 mg, 1.91 mmol, 3.00 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (250 mL)을 첨가했다. 분리된 유기상을 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 353 umol, 55.4% 수율, 100% 순도)을 희미한 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 596.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.00 (dt, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 6.74 - 6.56 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.44 - 4.34 (m, 1H), 4.28 - 4.10 (m, 3H), 4.01 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 4H), 3.56 - 3.40 (m, 1H), 3.25 (br dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 2H), 3.12 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (dt, J = 2.8, 12.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.63 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.06 (m, 3H), 1.90 - 1.68 (m, 3H), 1.60 - 1.42 (m, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(2-플루오로-3-메톡시- 페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 168 umol, 1.00 eq)의 용액에 TFA (1.63 g, 14.3 mmol, 1.06 mL, 85.0 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고 그 다음 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (210 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 496.
단계 C: 2-[4-[7-(2- 플루오로 -3- 메톡시 -페닐) -2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 - 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3 mL) 중 2-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (102 mg, 조물질 TFA) 및 DIEA (216 mg, 1.67 mmol, 291 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (16.9 mg, 134 umol)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 25 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 38% - 68%, 12분)으로 정제했다. 2-[4-[7-(2-플루오로-3-메톡시-페닐) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 307, 7.47 mg, 13.6 umol, 2개의 단계 17% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 550.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.07 - 6.95 (m, 1H), 6.74 - 6.51 (m, 3H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.6 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.38 (dd, J = 4.8, 10.5 Hz, 1H), 4.31 - 4.12 (m, 3H), 4.07 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.03 - 3.82 (m, 5H), 3.68 - 3.44 (m, 2H), 3.39 - 3.21 (m, 2H), 3.10 (br t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.95 - 2.61 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.62 (m, 3H).
실시예 308
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[7-(3- 플루오로 -2- 메톡시 -페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 300 mg, 636 umol, 1 eq), 1-브로모-3-플루오로-2-메톡시-벤젠 (261 mg, 1.27 mmol, 2 eq), Pd2(dba)3 (117 mg, 127 umol, 0.2 eq), RuPhos (89.1 mg, 191 umol, 0.3 eq) 및 Cs2CO3 (622 mg, 1.91 mmol, 3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에, H2O (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (250 mL)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 염수 (200 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고, 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(3-플루오로-2-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 277 umol, 43.6% 수율, 97.1% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 596.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 6.96 (dt, J = 6.0, 8.0 Hz, 1H), 6.83 - 6.69 (m, 1H), 6.83 - 6.68 (m, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.14 (m, 3H), 4.04 (br d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 0.8 Hz, 4H), 3.62 - 3.47 (m, 1H), 3.26 (br dd, J = 4.0, 13.6 Hz, 2H), 3.12 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.99 (dt, J = 2.8, 12.0 Hz, 1H), 2.88 - 2.64 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.22 - 2.07 (m, 2H), 1.94 - 1.64 (m, 3H), 1.56 - 1.46 (m, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(3- 플루오로 -2- 메톡시 - 페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.50 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(3-플루오로-2- 메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 285 umol, 1 eq)의 혼합물에 TFA (651 mg, 5.71 mmol, 423 uL, 20 eq)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 25℃에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 2-[4-[7-(3-플루오로-2-메톡시- 페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (173 mg, 284 umol, 99.4% 수율, TFA)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 496.
단계 C: 2-[4-[7-(3- 플루오로 -2- 메톡시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3 mL) 중 2-[4-[7-(3-플루오로-2-메톡시-페닐)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (173 mg, 284 umol, 1 eq, TFA) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (35.8 mg, 284 umol, 1 eq)의 혼합물에 TEA (144 mg, 1.42 mmol, 198 uL, 5 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (1.5 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 물 (2 mL)로 희석하고 DCM (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (15 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 MeOH/EA = 1/2). 원하는 분획을 수집하고 감압 하에서 농축했다. 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150 × 25mm × 10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 48% - 78%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[7-(3-플루오로-2- 메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 308, 28.2 mg, 50.4 umol, 17.8% 수율, 98.1% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 550.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 6.97 (dt, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 6.83 - 6.76 (m, 1H), 6.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.56 (br s, 1H), 4.39 (br dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.18 - 4.06 (m, 2H), 4.04 - 3.96 (m, 1H), 3.95 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 3.73 - 3.46 (m, 2H), 3.38 - 3.22 (m, 2H), 3.16 - 2.99 (m, 2H), 2.96 - 2.59 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.22 (m, 1H), 2.16 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.68 (m, 3H).
실시예 309
2-(1-아크릴로일-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
삽입: 1- 브로모 -8- 메틸 -나프탈렌. THF (20 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (1 g, 3.50 mmol, 1 eq)의 용액에 MeLi (디에틸 에테르 중 1.6 M, 2.62 mL, 1.2 eq)을 0℃에서 적가했다. 30분 동안 0℃에서 교반한 후, 아이오도메탄 (3.38 g, 23.8 mmol, 1.48 mL, 6.81 eq)을 적가했다. 혼합물을 25℃까지 가온시키고 또 다른 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 45% - 70%, 28 MIN; 40%분)으로 정제했다. 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (340 mg, 1.49 mmol, 43% 수율, 97% 순도)을 동결건조 후 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 0.8, 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 2H), 7.13 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.05 (s, 3H).
단계 A: tert -부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (122 mg, 551 umol, 1.3 eq), tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 200 mg, 424 umol, 1 eq), Cs2CO3 (345 mg, 1.06 mmol, 2.5 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (77.7 mg, 84.8 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 첨가했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 224 umol, 53% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 612.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.42 (dd, J = 8.0, 16.0 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.30 - 4.16 (m, 2H), 4.10 - 3.71 (m, 4H), 3.58-3.45 (m, 1H), 3.43-3.25 (m, 1H), 3.23 - 3.04 (m, 4H), 3.03 - 2.85 (m, 5H), 2.83 - 2.55 (m, 4H), 2.49 (br s, 3H), 2.40 - 2.20 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 2H), 1.55 - 1.44 (m, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (200 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (110 mg, 179 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (307 mg, 2.70 mmol, 199 uL, 15 eq)을 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (112 mg, 179 umol, 100% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2 mL) 중 2-[4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (112 mg, 179 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (181 mg, 1.79 mmol, 249 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 그리고 그 다음 DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (18.1 mg, 143 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 적가했다. 수득한 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭하고, 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/3)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 55% - 85%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 309, 16.2 mg, 28.4 umol, 16% 수율, 99% 순도)을 동결건조후 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
SFC 조건: "OJ-3S_5_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OJ-3 100 × 4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 에탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm"
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.68-6.52 (m J = 9.9 Hz, 1H), 6.46 - 6.35 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 3H), 4.03 - 3.82 (m, 2H), 3.85-3.67 (m, 1H), 3.61 - 3.33 (m, 2H), 3.24 - 2.99 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.77 (m, 1H), 2.71 - 2.59 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.34 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 1H), 1.85 - 1.74 (m, 3H).
실시예 310
2-(1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
삽입: 1- 브로모 -8-클로로나프탈렌. THF (30 mL) 중 퍼클로로에탄 (1.66 g, 6.99 mmol, 792 uL, 1 eq)의 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 4.20 mL, 1.5 eq)을 -78℃에서 적가했다. 추가 10 분 동안 -78℃에서 교반한 후, THF (10 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (2 g, 6.99 mmol, 1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃까지 가온시키고 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 41 ACN%-71 ACN%, 30 min; 50%분)을 첨가했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 1-브로모-8-클로로나프탈렌 (850 mg, 3.52 mmol, 50% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.92 (dd, J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.80 (ddd, J = 0.8, 8.0, 12.4 Hz, 2H), 7.67 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H).
단계 A: tert -부틸 4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 1-브로모-8-클로로-나프탈렌 (133 mg, 551 umol, 1.3 eq), tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 424 umol, 1 eq), Cs2CO3 (345 mg, 1.06 mmol, 2.5 eq), RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (77.7 mg, 84.8 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 237 umol, 56% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 2H), 4.22 - 4.15 (m, 1H), 4.10 - 3.77 (m, 4H), 3.57 (br s, 1H), 3.41 - 3.01 (m, 6H), 3.01 - 2.86 (m, 1H), 2.85 - 2.63 (m, 3H), 2.62 - 2.43 (m, 4H), 2.31 (br s, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.78 (br s, 2H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (200 uL) 중 tert-부틸 4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 237 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (405 mg, 3.56 mmol, 263 uL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (153 mg, 236 umol, 100% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 532.
단계 C: 2-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2 mL) 중 2-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (153 mg, 237 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (239 mg, 2.37 mmol, 329 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (23.9 mg, 189 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 적가했다. 수득한 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭하고 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 52% - 82%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 310, 37 mg, 61.2 umol, 26% 수율, 97% 순도)을 백색 고체로서 동결건조후 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 586.
SFC 조건: "AD-3S_4_40_3ML 칼럼: Chiralpak AD-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: CO2 중 40% 이소-프로판올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm"
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.35 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.84 - 4.25 (m, 3H), 4.22 - 3.72 (m, 5H), 3.71-3.53 (m, 1H), 3.50-3.34 (m, 1H), 3.32 - 2.96 (m, 5H), 2.91 - 2.76 (m, 1H), 2.70 - 2.52 (m, 2H), 2.48 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.96 (m, 1H), 1.86 - 1.72 (m, 3H).
실시예 311
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 1: 2 - 플루오로나프탈렌 -1-올. CH3CN (50 mL) 중 나프탈렌-1-올 (2 g, 13.9 mmol, 5.00 mL, 1 eq)의 용액에 Select-F (4.91 g, 13.9 mmol, 1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EA = 3/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 40% - 70%, 10분)로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 화합물 2-플루오로나프탈렌-1-올 (400 mg, 2.44 mmol, 18% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.21 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.47(t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J=9.6 Hz, 1H), 5.58 (br s, 1H).
단계 2: (2-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (10 mL) 중 2-플루오로나프탈렌-1-올 (400 mg, 2.47 mmol, 1 eq)의 용액에 Tf2O (765 mg, 2.71 mmol, 448 uL, 1.1 eq) 및 DIEA (637 mg, 4.93 mmol, 859 uL, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (20 mL × 3)로 세정했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 3/1)로 정제했다. 화합물 (2-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (500 mg, 1.65 mmol, 67% 수율, 97% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.95 - 7.85 (m, 2H), 7.70 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 - 7.54 (m, 1H), 7.41 (t, J = 9.2 Hz, 1H).
단계 A: tert -부틸 2-( 시아노메틸 )-4-[7-(2- 플루오로 - 1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 (2-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (243 mg, 827 umol, 1.3 eq), tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 636 umol, 1 eq), Cs2CO3 (518 mg, 1.59 mmol, 2.5 eq), RuPhos (59.4 mg, 127 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (116 mg, 127 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(2-플루오로- 1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 155 umol, 25% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.33 (br s, 1H), 7.84 (d, J = 7.76 Hz, 1H), 7.75-7.64 (m, 1H), 7.57 - 7.41 (m, 2H), 7.25-7.21 (m, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.47 - 4.16 (m, 4H), 4.13 - 3.82 (m, 4H), 3.61 - 3.25 (m, 3H), 3.20 - 2.90 (m, 4H), 2.81 - 2.56 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.38 - 2.19 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.88-1.69 (m, 2H), 1.53 (s, 9H).
단계 B: 2-[4-[7-(2- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (200 uL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[7-(2-플루오로-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 162 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (278 mg, 2.44 mmol, 180 uL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[4-[7-(2-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (102 mg, 162 umol, 100% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 C: 2-[4-[7-(2- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 - 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2 mL) 중 2-[4-[7-(2-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (102 mg, 197 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (200 mg, 1.98 mmol, 275 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (19.9 mg, 158 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 적가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭하고 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 52% - 82%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[7-(2-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 311, 11 mg, 18.9 umol, 9.6% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 동결건조후 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
SFC 조건: "OD-3S_3_40_3ML 칼럼: Chiralcel OD-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm"
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.34 (br s, 1H), 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 4.4, 8.8 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 1H), 6.65-6.50 (m, J = 10.5 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.43 - 3.85 (m, 7H), 3.81 - 3.30 (m, 3H), 3.24 - 2.95 (m, 3H), 2.94 - 2.56 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.36 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H), 1.93 - 1.75 (m, 3H).
실시예 312
2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 메틸 ( 2 S ,4 R )-4-[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시파이롤리딘 -2- 카복실레이트. 에틸 아세테이트 (10 mL) 중 메틸 (2S,4R)-4-하이드록시파이롤리딘-2-카복실레이트 (10 g, 55.1 mmol, 1 eq, HCl)의 용액에 이미다졸 (7.50 g, 110 mmol, 2 eq) 및 TBDPSCl (16.7 g, 60.6 mmol, 15.6 mL, 1.1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 침전물을 여과 제거했다. 여과물을 감압 하에서 농축하고 잔류물을 에틸 아세테이트 (200 mL) 및 물 (100 mL)로 용해시켰다. 유기상을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 10/1 내지 1/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 메틸 (2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시파이롤리딘-2-카복실레이트 (2.9 g, 7.41 mmol, 13% 수율, 98% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 384.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.64 (dt, J = 1.2, 7.2 Hz, 4H), 7.47 - 7.35 (m, 6H), 4.40 (td, J = 2.4, 4.8 Hz, 1H), 4.07 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.03 - 2.96 (m, 1H), 2.96 - 2.89 (m, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 1H), 1.84 - 1.77 (m, 1H), 1.07 (s, 9H).
단계 B: 메틸 ( 2 S ,4 R )-4-[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시 -1- 메틸 -파이롤리딘-2-카복실레이트. MeOH (20 mL) 중 메틸 (2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시파이롤리딘-2-카복실레이트 (2.7 g, 7.04 mmol, 1 eq) 및 포름알데하이드 (37% 수성, 2.86 g, 35.2 mmol, 2.62 mL, 5 eq)의 용액에 CH3COOH (423 mg, 7.04 mmol, 403 uL, 1 eq) 및 NaBH3CN (1.77 g, 28.2 mmol, 4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 물 (2 × 100 mL) 및 염수 (1 × 100 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 메틸 (2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시-1-메틸-파이롤리딘-2-카복실레이트 (2.4 g, 5.71 mmol, 81% 수율, 94.6% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 398.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.63 (ddd, J = 1.2, 4.0, 7.6 Hz, 4H), 7.46 - 7.32 (m, 6H), 4.47 - 4.39 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.32 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.24 (dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.43 - 2.40 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.23 - 2.00 (m, 2H), 1.07 (s, 9H).
단계 C: [(2 S , 4 R )-4-[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (40 mL) 중 메틸 (2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸- 파이롤리딘-2-카복실레이트 (2.20 g, 5.53 mmol, 1.00 eq)의 용액에 LiAlH4 (840 mg, 22.1 mmol, 4.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (1.00 mL), 수산화나트륨 용액 (15.0 %, 2.00 mL) 및 물 (3.00 mL)로 켄칭했다. 침전물을 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/10)로 정제하여 [(2S, 4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (1.70 g, 4.55 mmol, 82% 수율)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 370.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.68 - 7.61 (m, 4H), 7.46 - 7.35 (m, 6H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 3.62 (dd, J = 3.2, 10.8 Hz, 1H), 3.34 (dd, J = 2.0, 10.8 Hz, 1H), 3.14 (dd, J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 2.78 - 2.70 (m, 1H), 2.43 (dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.02 - 1.93 (m, 1H), 1.92 - 1.84 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).
단계 D: tert -부틸 4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4-[ tert -부틸 (디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (5 mL) 중 tert-부틸 2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐 -7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 531 umol, 1.00 eq) 및 [(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (295 mg, 797 umol, 1.50 eq)의 용액에 t-BuONa (102 mg, 1.06 mmol, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 HCl 용액 (1.00 M, 0.40 mL)에 의해 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/3)로 정제하여 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.22 g, 238 umol, 45 % 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 870.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.68 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 4H), 7.57 (br t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 7H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 2H), 4.09 - 3.95 (m, 4H), 3.87 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.28 - 3.15 (m, 4H), 3.10 (ddd, J = 3.6, 7.2, 12.0 Hz, 2H), 3.02 - 2.93 (m, 1H), 2.88 - 2.67 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.45 - 2.34 (m, 2H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 1H), 1.52 (s, 9H), 1.06 (s, 9H).
단계 E: 2-[4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (150 uL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐) 실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.08 g, 91.9 umol, 1.00 eq) 및 TFA (157 mg, 1.38 mmol, 102 uL, 15.0 eq)의 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (81.3 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 770.
단계 F: 2-[4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4- [ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (2.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.08 g, 조물질, TFA) 및 Et3N (91.6 mg, 905 umol, 125.96 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (11.4 mg, 90.5 umol)을 -40℃에서 첨가했다. 20℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (0.20 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/10)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4- [tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.06 g, 65.5 umol, 2개의 단계 72 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 412.
단계 G: 2-[4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4- 하이드록시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸) 페닐]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (0.50 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.05 g, 60.7 umol, 1.00 eq) 및 TBAF (1.00 M, 607 uL, 10.0 eq)의 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올 = 3/1) 및 역상 플래시 [물 (FA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제하고, 그 다음 추가로 prep-HPLC 칼럼: Boston pH-lex 150*25 10um; 이동상: [물(0.10%, TFA) - ACN]; B%: 31%-61%,10분 및 칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v)- ACN]; B%: 42% - 72%, 12 분 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[4-[2-[[(2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸) 페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 312, 3.70 mg, 6.30 umol, 10 % 수율, 99.7 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 586.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 6.39 (dd, J = 1.6, 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.06 (br s, 1H), 4.49 - 4.42 (m, 1H), 4.37 (ddd, J = 3.2, 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.25 - 4.17 (m, 1H), 4.15 - 4.06 (m, 3H), 3.97 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.60 (br s, 1H), 3.43 (dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.33 (br s, 1H), 3.23 - 3.16 (m, 1H), 3.15 - 3.06 (m, 2H), 3.04 - 2.89 (m, 3H), 2.88 - 2.66 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.33 (dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 2.13 - 1.93 (m, 2H).
실시예 313
2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[[4- 브로모 -5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸 -1-일] 메톡시 ]에틸- 트리메틸 -실란. DMF (45 mL) 중 4-브로모-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (1 g, 3.77 mmol, 1 eq)의 용액에 NaH (181 mg, 4.53 mmol, 60.0 % 순도, 1.2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, DMF (15 mL) 중 SEM-Cl (818 mg, 4.91 mmol, 868 uL, 1.3 eq)의 용액을 적가했다. 혼합물을 20℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액 (50 mL)로 켄칭하고, 물 (100 mL)로 희석하고 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 100:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 2-[[4-브로모-5-(트리플루오로메틸)인다졸-1-일]메톡시]에틸-트리메틸-실란 (430 mg, 1.03 mmol, 27.4 % 수율, 95.0 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.18 (s, 1H), 7.74 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 1H), 5.76 (s, 2H), 3.59 - 3.49 (m, 2H), 0.93 - 0.86 (m, 2H), -0.01 - -0.08 (m, 9H).
단계 B: tert -부틸 4-[3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. DMF (30 mL) 중 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.59 g, 8.36 mmol, 1 eq), 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (중간체 62, 1.99 g, 10.0 mmol, 1.2 eq, 2HCl)의 용액에 DIEA (2.16 g, 16.7 mmol, 2.91 mL, 2 eq)을 첨가하고, 그 다음 혼합물을 80℃로 가열하고 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 물 (80 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 EtOAc (5 × 60 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (80 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1 % FA) = 40 %)로 정제하여 tert-부틸 4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.37 g, 5.27 mmol, 63.1 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 405.
단계 C: tert -부틸 4-[4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. EtOAc (30 mL) 및 물 (15 mL) 중 tert-부틸 4-[3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.37 g, 5.86 mmol, 1 eq), NaHCO3 (1.48 g, 17.6 mmol, 684 uL, 3 eq)의 용액에 CbzCl (2.00 g, 11.7 mmol, 1.67 mL, 2 eq)을 적가하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 13시간 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc (15 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (15 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc=20:1~0:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.91 g, 5.13 mmol, 87.6 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 539.
단계 D: tert -부틸 4-[4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 메틸설피닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. EtOAc (60 mL) 및 ACN (20 mL) 중 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.91 g, 5.40 mmol, 1 eq)의 용액에 m-CPBA (1.10 g, 5.40 mmol, 85.0 % 순도, 1 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 (30 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 EtOAc (50 mL)로 추출했다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% NH3ㆍH2O) = 62 %)로 정제하여 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.65 g, 4.73 mmol, 87.6 % 수율, 99.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 555.
단계 E: tert -부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (44 mL) 중 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.2 g, 3.97 mmol, 1 eq), [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (914 mg, 7.93 mmol, 2 eq)의 용액에 t-BuONa (572 mg, 5.95 mmol, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (15 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 45 %)로 정제하여 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.64 g, 2.52 mmol, 63.5 % 수율, 93.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 605.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.44 - 7.31 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.71 - 4.54 (m, 2H), 4.35 (br d, J=19.2 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 4.11 - 3.92 (m, 2H), 3.79 (br d, J=12.4 Hz, 2H), 3.28 (br d, J=12.8 Hz, 3H), 2.98 (dt, J=3.2, 12.4 Hz, 1H), 2.87 - 2.44 (m, 8H), 2.36 (s, 3H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.87 (br s, 2H), 1.49 (s, 9H).
단계 F: 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (30 mL) 중 tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.64 g, 2.71 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 30 mL, 44.32 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 35.5 %)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.95 g, 1.78 mmol, 65.9 % 수율, 95.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.32 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.66 (br s, 1H), 4.25 - 4.07 (m, 3H), 4.01 - 3.91 (m, 3H), 3.83 (br d, J=13.6 Hz, 1H), 3.38 - 3.18 (m, 2H), 3.16 - 3.07 (m, 1H), 3.03 - 2.92 (m, 2H), 2.81 (br s, 1H), 2.75 - 2.65 (m, 3H), 2.60 (br d, J=5.6 Hz, 3H), 2.55 - 2.45 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.14 - 1.97 (m, 1H), 1.68 - 1.54 (m, 2H).
단계 G: 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (510 mg, 1.01 mmol, 1 eq), 2-[[4-브로모-5-(트리플루오로메틸)인다졸-1-일]메톡시]에틸-트리메틸-실란 (399 mg, 1.01 mmol, 1 eq), RuPhos (188 mg, 403 umol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (986 mg, 3.03 mmol, 3 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (185 mg, 202 umol, 0.2 eq)을 N2 하에서 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 90℃로 가온시키고 90℃에서 14시간 동안 교반했다. 반응 혼합물 여과하고, 필터 케이크를 EtOAc (2 × 15 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 55 %)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (365 mg, 423 umol, 41.9 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 820.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.15 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 5.76 (s, 2H), 5.24 - 5.16 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.42 - 4.27 (m, 2H), 4.21 (br d, J=6.8 Hz, 2H), 4.06 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 3.90 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 2H), 3.50 - 3.38 (m, 2H), 3.31 (br d, J=11.6 Hz, 2H), 3.10 - 2.99 (m, 1H), 2.86 (br s, 2H), 2.81 - 2.66 (m, 4H), 2.65 - 2.57 (m, 1H), 2.56 - 2.44 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 2.04 - 1.96 (m, 1H), 1.69 - 1.56 (m, 1H), 0.95 - 0.87 (m, 2H), -0.03 - -0.10 (m, 9H).
단계 H: 2-[4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 MeOH (6 mL)에 5분 동안 거품을 일으켰다. 용액에 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (310 mg, 378 umol, 1 eq), Pd/C (150 mg, 10.0 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 28℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (165 mg, 240 umol, 63.6 % 수율, 100 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 686.
단계 I: 2-[4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4 mL) 중 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (190 mg, 277 umol, 1 eq), DIEA (107 mg, 831 umol, 145 uL, 3 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (41.9 mg, 332 umol, 1.2 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 28℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (1 mL)로 켄칭하고 DCM (3 × 4 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 233 umol, 84.2 % 수율, 75.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 740.
단계 J: 2-[4-[2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1 H -인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (220 mg, 297 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (1.70 g, 14.9 mmol, 1.10 mL, 50 eq)을 첨가하고, 혼합물을 28℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (12 mL)으로 pH=8로 염기성화했다. 수득한 혼합물을 DCM: MeOH (10:1) (3 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EtOAc: MeOH=100:1~10:1)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 44%-74%, 12분)로 정제하여 2-[4-[2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-7-[5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 313, 1.23 mg, 2.01 umol, 6.74e-1% 수율, 99.4 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 610.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 8.38 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.84 (br s, 1H), 6.31 (br d, J=16.8 Hz, 1H), 5.86 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 5.13 (br s, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 5H), 4.14 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.64 (br s, 1H), 3.50 (br d, J=4.8 Hz, 2H), 3.41 - 3.34 (m, 1H), 3.29 - 3.16 (m, 2H), 3.03 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 2.94 (br s, 2H), 2.88 - 2.80 (m, 1H), 2.80 - 2.72 (m, 1H), 2.69 (br t, J=6.8 Hz, 2H), 2.58 - 2.51 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.17 - 2.06 (m, 1H), 1.75 - 1.64 (m, 1H).
실시예 314
2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질(2S)-2-(시아노메틸) -4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 900 mg, 1.78 mmol, 1.0 eq), Pd2(dba)3 (245 mg, 267 umol, 0.15 eq), RuPhos (166 mg, 356 umol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (1.16 g, 3.56 mmol, 2.0 eq)의 용액에 (3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (중간체 30, 1.09 g, 3.56 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (20.0 mL)을 첨가하고 EA (20 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE : EA = 10:1 - EA : MeOH = 10:1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.0 g, 1.42 mmol, 79% 수율, 93.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.32 (m, 7H), 6.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.27 - 5.15 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 1H), 4.30 - 4.03 (m, 5H), 3.94 - 3.87 (m, 3H), 3.53 - 3.40 (m, 1H), 3.32 (br d, J = 12.4 Hz, 3H), 3.16 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.06 (dt, J = 3.6, 12.6 Hz, 1H), 2.97 - 2.72 (m, 6H), 2.52 (s, 3H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 1.93 - 1.74 (m, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 MeOH (50.0 mL)에 -60℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 그 다음 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.0 g, 1.51 mmol, 1.0 eq) 및 Pd/C (1.0 g, 10% 순도)을 N2 분위기 하에서 상기 액체에 첨가했다. 현탁액을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 셀라이트로 여과하고 진공 하에서 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (600 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 528.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (6.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)- 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (600 mg, 1.14 mmol, 1.0 eq) 및 DIEA (882 mg, 6.82 mmol, 1.19 mL, 6.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (143 mg, 1.14 mmol, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (100 mg)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 52%-80%, 12분)으로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 314, 90.5 mg, 155 umol, 14.0% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.68 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.19 - 4.50 (m, 1H), 4.40 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.08 (m, 4H), 4.07 - 3.85 (m, 5H), 3.79 - 3.41 (m, 2H), 3.41 - 3.22 (m, 2H), 3.20 - 3.04 (m, 2H), 3.02 - 2.75 (m, 4H), 2.72 - 2.65 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.71 (m, 3H).
실시예 315
2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[2-[[( 2 S ,4 R ) -4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (20.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐 -7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 0.90 g, 1.55 mmol, 1.00 eq) 및 [(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘 -2-일]메탄올 (687 mg, 1.86 mmol, 1.20 eq)의 용액에 t-BuONa (298 mg, 3.10 mmol, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (50.0 ml)로 희석하고, 물 (30.0 mL) 및 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/10)로 정제하여 벤질 (2S)-4-[2-[[(2S,4R) -4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.90 g, 873 umol, 56 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 443.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.71 - 7.57 (m, 5H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 12H), 7.14 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.43 - 4.36 (m, 1H), 4.33 (br dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.16 - 4.03 (m, 3H), 3.93 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.47 (br s, 1H), 3.30 (br d, J = 10.4 Hz, 3H), 3.17 (br dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.11 - 2.96 (m, 3H), 2.84 (br s, 2H), 2.78 - 2.70 (m, 1H), 2.48 - 2.37 (m, 4H), 2.11 (ddd, J = 4.8, 8.4, 12.8 Hz, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3로 메탄올 (50 mL)에 -60℃에서 0.5시간 동안 거품을 일으켰다. 상기 혼합물에 벤질 (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.90 g, 1.02 mmol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.10 g, 10.0 % 순도)를 첨가했다. H2 하에서 15 psi에서 20℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (763 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 752.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 S ,4 R ) -4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (5.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐) 실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.76 g, 조물질) 및 Et3N (511 mg, 5.05 mmol, 703 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (127 mg, 1.01 mmol)을 -40℃에서 첨가했다. 20℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (0.20 mL)으로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/10)로 정제하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R) -4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.50 g, 552 umol, 2개의 단계 55% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 806.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.25 - 8.17 (m, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.68 - 7.58 (m, 5H), 7.50 (td, J = 2.4, 5.2 Hz, 2H), 7.46 - 7.35 (m, 7H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.67 - 6.51 (m, 1H), 6.46 - 6.31 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 2H), 4.27 (br s, 2H), 4.16 - 4.00 (m, 4H), 3.67 - 3.55 (m, 1H), 3.46 (br s, 1H), 3.31 (br dd, J = 8.4, 14.4 Hz, 2H), 3.17 (br dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 3.11 - 2.73 (m, 6H), 2.47 (s, 3H), 2.42 (br dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.11 (tt, J = 4.0, 8.4 Hz, 1H), 1.96 - 1.84 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (10.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.40 g, 496 umol, 1.00 eq), KF (57.7 mg, 992 umol, 23.3 uL, 2.00 eq) 및 18-크라운-6 (262 mg, 992 umol, 2.00 eq)의 혼합물을 30℃에서 24시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 포화 중탄산나트륨 (2.00 mL)으로 pH > 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 정제된 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 37 % - 67 %, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 농축시키고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 315, 51.5 mg, 90.7 umol, 18 % 수율, 96.3 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 568.
SFC: "AS-3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralpak AS - 3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5 % 내지 40 %의 CO2 중 메탄올 (0.05 %, DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.26 - 8.17 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.47 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.52 - 4.43 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 3H), 4.15 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.02 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.61 (br s, 1H), 3.53 - 3.41 (m, 2H), 3.34 (br s, 2H), 3.12 (br s, 1H), 3.05 - 2.89 (m, 3H), 2.88 - 2.66 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.34 (dd, J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 2.16 - 1.94 (m, 2H).
실시예 316
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(4-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(4- 플루오로 -1- 나프틸 )-2 -[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 1.0 g, 1.98 mmol, 1.0 eq) 및 1-브로모-4-플루오로-나프탈렌 (2.23 g, 9.89 mmol, 5.0 eq)의 용액에 Cs2CO3 (1.93 g, 5.93 mmol, 3.0 eq), XPhos-Pd-G3 (335 mg, 396 umol, 0.2 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 24시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응에 물 (20.0 mL)을 첨가하고, EA (2 × 20.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=20:1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2 -[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (680 mg, 957 umol, 48% 수율, 91.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(4- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1 -메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 1.0 mmol, 1.0 eq)의 혼합물에 NH3ㆍMeOH (1.0 mmol, 15.0 mL, 1.0 eq) 및 Pd/C (500 mg, 10% 순도)을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1 -메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (460 mg, 824 umol, 82% 수율, 92.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (460 mg, 892 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 DIEA (461 mg, 3.57 mmol, 622 uL, 4.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (113 mg, 892 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC ((Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 53% - 83%, 12분)로 정제하고, 수득된 생성물을 농축시키고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 316, 100 mg, 175 umol, 20% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.28 - 8.22 (m, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 2H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 6.70 - 6.55 (m, 1H), 6.42 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.86 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.20 - 4.48 (m, 1H), 4.41 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.10 (m, 4H), 4.09 - 3.92 (m, 2H), 3.78 - 3.20 (m, 4H), 3.19 - 3.07 (m, 2H), 3.05 - 2.64 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.73 (m, 3H).
실시예 317
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-[3-(2,2- 디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 880 mg, 1.87 mmol, 1.0 eq) 및 (4-브로모-2-나프틸)2,2-디메틸프로파노에이트 (중간체 54, 745 mg, 2.43 mmol, 1.3 eq)의 혼합물에 Cs2CO3 (1.22 g, 3.73 mmol, 2.0 eq), RuPhos (174 mg, 373 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (171 mg, 187 umol, 0.1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (30 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (2 × 20mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=20/1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2- 디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (750 mg, 774 umol, 41% 수율, 72.9% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 698.
단계 B: [4-[4-[(3 S )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트. DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (750 mg, 774 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.0 mL, 87.3 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 농축시켜 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (550 mg, 조물질, TFA)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
단계 C: [4-[4-[(3 S )-3-( 시아노메틸 )-4- 프로프 -2- 에노일 - 피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]2,2-디메틸프로파노에이트. DCM (5 mL) 중 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸] 2,2-디메틸프로파노에이트 (550 mg, 773 umol, 1.0 eq, TFA)의 혼합물에 TEA (469 mg, 4.64 mmol, 645 uL, 6.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (97.5 mg, 773 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=10/1)로 정제하여 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일- 피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]2,2-디메틸프로파노에이트 (270 mg, 323 umol, 42% 수율, 78.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 652.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (2.0 mL) 중 [4-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]2,2-디메틸프로파노에이트 (270 mg, 323 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 H2O (2.0 mL) 중 NaOH (38.8 mg, 969 umol, 3.0 eq)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (2 × 10mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Luna 페닐-헥실 150_30_5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 35% - 62%, 3분)로 정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그리고 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 317, 26.6 mg, 46.3 umol, 14% 수율, 98.8% 순도)을 핑크색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 568.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.01 - 7.93 (m, 1H), 7.64 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (br t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.66 - 6.50 (m, 2H), 6.39 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.04 - 4.89 (br s, 1H), 4.64 - 4.49 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 1H), 4.11 (br s, 2H), 4.00 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.94 - 3.71 (m, 2H), 3.47 - 3.08 (m, 4H), 2.93 - 2.61 (m, 10H), 2.47 - 2.33 (m, 1H), 2.25 - 2.06 (m, 1H), 2.00 - 1.89 (m, 3H).
실시예 318
2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 4-[(3 S )-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (중간체 64, 500 mg, 901 umol, 1.00 eq) 및 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (208 mg, 1.80 mmol, 2.00 eq)의 용액에 t-BuONa (173 mg, 1.80 mmol, 2.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % FA)/아세토니트릴]로 정제했다. pH를 포화 중탄산나트륨 용액으로 7로 조정하고 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (340 mg, 505 umol, 56% 수율, 90.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.45 - 7.32 (m, 5H), 5.28 - 5.12 (m, 2H), 4.70 - 4.55 (m, 2H), 4.42 - 4.29 (m, 2H), 4.15 - 3.93 (m, 3H), 3.90 - 3.75 (m, 2H), 3.43 - 3.16 (m, 3H), 3.09 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.54 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.49 (s, 9H).
단계 B: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (4.00 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (340 mg, 561 umol, 1.00 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 4.00 mL)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. pH를 포화 중탄산나트륨 수용액으로 8로 조정하고 혼합물을 혼합된 용매 (DCM/i-PrOH 2/1, 2 × 9 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (255 mg, 444 umol, 79% 수율, 88.0% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
단계 C: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 366 umol, 1.00 eq), 1-브로모-4-플루오로-나프탈렌 (247 mg, 1.10 mmol, 3.00 eq), RuPhos (68.2 mg, 146 umol, 0.40 eq), t-BuONa (87.8 mg, 914 umol, 2.50 eq) 및 Pd2(dba)3 (66.9 mg, 73.1 umol, 0.20 eq)을 탈가스하고 그 다음 15 시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 물 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 175 umol, 48 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.23 (dd, J = 2.0, 4.4 Hz, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 5H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 5.28 - 5.16 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 4H), 4.07 (br s, 1H), 3.95 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.54 - 3.15 (m, 4H), 3.14 - 3.03 (m, 2H), 3.00 - 2.61 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 1.97 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.83 (m, 3H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 3분 동안 -40℃에서 MeOH (5.00 mL)에 거품을 일으켰다. 용액에 MeOH (5.00 mL) 및 Pd/C (60.0 mg, 10% 순도) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)- 2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 185 umol, 1.00 eq)의 용액을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 반응을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80.0 mg, 147 umol, 79% 수율, 94.6 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80.0 mg, 155 umol, 1.00 eq) 및 TEA (78.5 mg, 776 umol, 108 uL, 5.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (19.6 mg, 155 umol, 1.00 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (2 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (EtOAc/MeOH 7/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 52% - 82%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 318, 21.0 mg, 36.7 umol, 24% 수율, 99.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
SFC 조건: OD-3S_3_40_3ML 칼럼: Chiralcel OD-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220 nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.33 - 8.22 (m, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 6.59 (br s, 1H), 6.46 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.87 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.10 (m, 4H), 4.09 - 3.78 (m, 2H), 3.77 - 3.23 (m, 2H), 3.22 - 2.53 (m, 8H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
실시예 319
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-[(3 S )-4- tert - 부톡시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- [[(2 R )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -7-카복실레이트. THF (10 mL) 중 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (1.31 g, 11.4 mmol, 3 eq)의 용액에 NaH (304 mg, 7.59 mmol, 광유 중 60% 순도, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2 g, 3.79 mmol, 1 eq)을 혼합물에 첨가하고 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 빙수 (20 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1 g, 1.60 mmol, 42% 수율, 97% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 606.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.31 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.75 - 4.64 (m, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.44 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 4.35 (br s, 1H), 4.21 - 4.11 (m, 1H), 4.07 - 3.64 (m, 4H), 3.43 (br s, 1H), 3.30-3.15 (m, 2H), 3.10 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 2.83 - 2.55 (m, 5H), 2.53 - 2.42 (m, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.88 - 1.74 (m, 3H), 1.51 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. NH3로 MeOH (100 mL)에서 - 60℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 상기 혼합물 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (900 mg, 1.49 mmol, 1 eq)의 용액에 건조 Pd/C (500 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 1.24 mmol, 84% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 472.
단계 C: tert -부틸 (2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 1-브로모-3-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (1.32 g, 5.09 mmol, 4 eq), tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.27 mmol, 1 eq), Cs2CO3 (1.04 g, 3.18 mmol, 2.5 eq), Pd2(dba)3 (233 mg, 254 umol, 0.2 eq) 및 RuPhos (118 mg, 254 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 10:1)로 정제하고, 그리고 추가로 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (370 mg, 569 umol, 45% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650
1H NMR (400MHz, 클로로포름 -d) δ = 7.40 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 4.13 - 3.98 (m, 4H), 3.95 - 3.80 (m, 1H), 3.39 - 2.95 (m, 6H), 2.93 - 2.62 (m, 5H), 2.52 (br s, 3H), 2.32 (br s, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 1.85-1.71 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (700 uL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸) 페닐]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (370 mg, 569 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (973 mg, 8.54 mmol, 632 uL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (377 mg, 567 umol, 99% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 550.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸) 페닐]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (377 mg, 567 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (574 mg, 5.68 mmol, 790 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (57.3 mg, 454 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 적가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭했다. 그 다음 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, EA/MeOH = 100/1 내지 10:1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 319, 95 mg, 154 umol, 27% 수율, 98% 순도)을 동결건조후 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 604.
SFC 조건: "OD-3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OD - 3 100 × 4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm"
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 1H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 - 6.51 (m, 1H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.25-4.52 (m, 1H), 4.38 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.22 - 4.04 (m, 4H), 3.96 (br d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.74 - 3.02 (m, 5H), 2.99 - 2.61 (m, 6H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.14 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 3H).
실시예 320
2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 300 mg, 517 umol, 1.0 eq), [(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메탄올 (148 mg, 1.03 mmol, 2.0 eq)의 혼합물에 t-BuONa (99.3 mg, 1.03 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 반응 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 물 (10.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-60% MeCN)로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출하고 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 벤질(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 272 umol, 53% 수율, 99.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 660.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1- 이소프로필피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 메탄올 (20.0 mL)에 -60℃에서 30분 동안 거품을 일으켰다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 197 umol, 1.0 eq) 및 Pd/C (80.0 mg, 197 umol, 10% 순도, 1.0 eq)을 상기 혼합물에 첨가하고, 그 다음 혼합물을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 H2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 조 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과했다. 케이크를 메탄올 (30.0 mL)로 세정하고 여과물을 고진공 하에서 건조시켰다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (75.0 mg, 132 umol, 67% 수율, 92.6% 순도)을 회색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 190 umol, 1.0 eq)의 용액에 DIEA (73.8 mg, 571 umol, 99.4 uL, 3.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (36.0 mg, 285 umol, 1.50 eq)을 0℃에서 N2 분위기 하에서 적가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 물 (10.0 mL)로 켄칭했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 15.0 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (30.0 mL)로 세정하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Luna 페닐-헥실 150_30_5um; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 52% - 82%, 3분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-이소프로필피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 320, 21.3 mg, 36.1 umol, 19% 수율, 98.1% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 580.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.24 - 8.21 (m, 1H), 7.89 - 7.87 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 2H), 7.45 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 - 6.57 (m, 1H), 6.42 (dd, J = 1.8, 16.8 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.16 - 4.51 (m, 1H), 4.35 - 4.22 (m, 3H), 4.15 -3.95 (m, 4H), 3.68 - 3.47 (m, 1H), 3.42 - 2.77 (m, 11H), 2.58 - 2.52 (m, 1H),1.90 - 1.75 (m, 3H), 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 321
1-[(3S)-4-[7-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (3 S )-4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트. NMP (40 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (2 g, 6.80 mmol, 1 eq), tert-부틸 (3S)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 (1.50 g, 7.48 mmol, 1.1 eq), DIEA (1.76 g, 13.6 mmol, 2.37 mL, 2 eq)의 용액을 100℃에서 7시간 동안 교반했다. 물 (80 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 80 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (40 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 EtOAc (3 × 5 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 (PE: EtOAc=3:1, 20 mL)로 분쇄하고 여과하고 필터 케이크를 (PE: EtOAc=3:1, 40 mL)로 세정했다. 화합물 tert-부틸 (3S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.44 g, 3.14 mmol, 46.2 % 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 458.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.39 - 7.28 (m, 5H), 4.29 - 4.20 (m, 1H), 4.16 - 3.81 (m, 2H), 3.76 (br s, 1H), 3.73 (br s, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.61 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.37 - 3.28 (m, 1H), 3.11 (br s, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: tert -부틸 (3 S )-4-[7-벤질-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트. THF (25 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (830 mg, 7.21 mmol, 855 uL, 2.5 eq)의 용액에 NaH (230 mg, 5.76 mmol, 60% 순도, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (3S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.32 g, 2.88 mmol, 1 eq)을 혼합물에 첨가했다. 반응 혼합물을 12시간 동안 튜브에서 N2 하에서 70℃로 가열했다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 40 %)로 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.35 g, 2.39 mmol, 82.9% 수율, 95% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 537.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 - 7.27 (m, 5H), 4.37 (br dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 2H), 4.07 - 3.73 (m, 2H), 3.71 - 3.64 (m, 3H), 3.63 - 3.49 (m, 2H), 3.34 - 3.24 (m, 1H), 3.21 - 2.92 (m, 3H), 2.79 - 2.64 (m, 2H), 2.63 - 2.56 (m, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.33 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.69 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 C: tert -부틸 (3 S )-3-메틸-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (28 mL) 중 tert-부틸 (3S)-4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.43 g, 2.66 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (500 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (3 × 20 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 40 %)로 정제하여 tert-부틸 (3S)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (810 mg, 1.72 mmol, 64.7 % 수율, 95.0% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 447.
단계 D: tert -부틸 (3 S )-4-[7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 (3S)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 1.12 mmol, 1 eq), 2-브로모-1-플루오로-3-메톡시-벤젠 (459 mg, 2.24 mmol, 2 eq) 및 t-BuONa (323 mg, 3.36 mmol, 3 eq)의 용액에 Brettphos-Pd-G3 (304 mg, 336 umol, 0.3 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 16시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc 2:1~0:1 내지 EtOAc: MeOH 1:0~5:1)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 32%-57%,30;80%분)로 정제하여 tert-부틸 (3S)-4-[7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 300 umol, 26.8 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 571.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.02 (dt, J = 6.4, 8.4 Hz, 1H), 6.75 - 6.65 (m, 2H), 4.36 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.24 - 4.17 (m, 1H), 4.12 - 4.09 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.74 - 3.65 (m, 1H), 3.38 - 3.27 (m, 3H), 3.24 - 2.94 (m, 3H), 2.67 (br d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.08 (br d, J=3.2 Hz, 1H), 2.04 - 1.98 (m, 1H), 1.87 - 1.69 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.25 - 1.21 (m, 3H).
단계 E: 7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-4-[(2 S )-2-메틸피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘. tert-부틸 (3S)-4-[7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 368 umol, 1 eq) 및 TFA (839 mg, 7.36 mmol, 545 uL, 20 eq)의 용액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-4-[(2S)-2-메틸피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (260 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 F: 1-[(3 S )-4-[7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (5 mL) 중 7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-4-[(2S)-2-메틸피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (260 mg, 조물질, 2TFA), DIEA (481 mg, 3.72 mmol, 648 uL,)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (46.9 mg, 372 umol)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (1 mL)로 켄칭했다. 수득한 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 33 %)로 정제하여 1-[(3S)-4-[7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (130 mg, 235 umol, 63.2 % 수율, 95.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 525.
단계 G: 3-브로모-1-[(3 S )-4-[7-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로판-1-온. PhBr (2 mL) 중 1-[(3S)-4-[7-(2-플루오로-6-메톡시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (80 mg, 152 umol, 1 eq)의 용액에 BBr3 (764 mg, 3.05 mmol, 294 uL, 20 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 (2 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 3-브로모-1-[(3S)-4-[7-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로판-1-온 (90 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 H: 1-[(3 S )-4-[7-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. THF (2 mL) 중 3-브로모-1-[(3S)-4-[7-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로판-1-온 (90 mg, 152 umol, 1 eq)의 용액에 TEA (154 mg, 1.52 mmol, 212 uL, 10 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (DCM: MeOH= 10:1), 그 다음 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 48%-78%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 1-[(3S)-4-[7-(2-플루오로-6-하이드록시-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 321, 10.6 mg, 20.1 umol, 13 % 수율, 96.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 511.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 7.17 - 6.97 (m, 1H), 6.93 - 6.76 (m, 1H), 6.71 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.61 (dd, J=8.8, 11.2 Hz, 1H), 6.29 (br dd, J=4.8, 16.4 Hz, 1H), 5.82 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.27 (m, 4H), 4.20 - 4.04 (m, 3H), 4.03 - 3.87 (m, 1H), 3.68 - 3.39 (m, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.25 - 3.05 (m, 2H), 2.82 (br s, 2H), 2.75 (td, J=6.8, 13.6 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.36 (q, J=9.2 Hz, 1H), 2.13 - 2.08 (m, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 1H), 1.28 (br d, J=5.2 Hz, 3H).
실시예 322
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(4-플루오로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (40.0 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 4.56 mmol, 1.00 eq.), 1-브로모-4-플루오로-나프탈렌 (1.54 g, 6.84 mmol, 1.50 eq.), Pd2(dba)3 (418 mg, 456 umol, 0.100 eq.), RuPhos (426 mg, 912 umol, 0.20 eq.) 및 탄산세슘 (4.46 g, 13.7 mmol, 3.00 eq.)을 탈가스하고 그 다음 3시간 동안 N2 분위기 하에서 110℃로 가열했다. 반응 혼합물을 물 (20.0 mL)의 첨가로 20℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1 내지 0/1)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 3.43 mmol, 75.2% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.24 (dt, J=1.6, 4.8 Hz, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.64 - 7.53 (m, 2H), 7.47 - 7.34 (m, 5H), 7.15 - 7.03 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.72 (br s, 1H), 4.29 - 4.17 (m, 2H), 4.12 - 4.04 (m, 1H), 3.95 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 3.51 - 3.19 (m, 3H), 3.14 - 2.68 (m, 5H), 2.54 (s, 3H).
단계 B: 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 에틸 아세테이트 (33.0 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.06 g, 1.82 mmol, 1.00 eq.)의 혼합물에 m-CPBA (332 mg, 1.64 mmol, 85.0% 순도, 0.90 eq.)을 20℃에서 N2 분위기 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응을 포화 티오황산나트륨 (20.0 mL)로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (20.0 mL×3)로 추출하고, 조합된 유기상을 염수(30.0 mL)로 세정하고, 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.00 g, 1.67 mmol, 91.8% 수율)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [M+1]: 599.1.
단계 C: 벤질-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[7-(4-플루오로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 835.16 umol, 1.00 eq.) 및 [(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메탄올 (216 mg, 1.67 mmol, 2.00 eq.)의 혼합물에 나트륨 tert-부톡시드 (120 mg, 1.25 mmol, 1.50 eq.)을 0℃에서 N2 분위기 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했고, 이것을 Prep-HPLC (TFA 조건)로 정제하여 벤질-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 292 umol, 35.0% 수율, 97.0% 순도)을 무색 고체로서 수득했다. LCMS [M+1]: 664.5.
단계 D: 2-[4-[2-[[(2 S )-1- 에틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(4- 플루오로 -1- 나프틸 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3 (g)으로 메탄올 (2 mL)에 5분 동안 0 ℃에서 거품을 일으키고, 그 다음 메탄올 (2.00 mL) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 301umol, 1.00 eq.)의 용액에 첨가하고, 그 다음 Pd/C (100 mg, 10% 순도)을 N2 분위기 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 여과하고 농축시켜 2-[4-[2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 조물질)을 흑색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [M+1]: 530.5.
단계 E: 2-[4-[2-[[(2 S )-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.00 mL) 중 2-[4-[2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 189 umol, 1.00 eq.) 및 DIEA (73.2 mg, 566 umol, 98.7 uL, 3.00 eq.)의 용액에 DCM (1.00 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (47.6 mg, 378 umol, 2.00 eq.)을 0℃에서 N2 분위기 하에서 적가했다. 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반하고, 메탄올 (1.00 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고 그 다음 용매를 제거하여 잔류물을 수득했고, 이것을 Prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1, 1 방울의 NH4OH을 첨가된)로 정제하여 조 생성물을 수득했다. 그 다음 Prep-HPLC (염기 조건)로 정제하여 표제 화합물 2-[4-[2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(4-플루오로-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (14.9 mg, 25.0 umol, 13.2% 수율, 97.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [M+1]: 584.5.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.25 (dd, J=2.4, 4.8 Hz, 1H), 8.19 - 8.08 (m, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 2H), 7.15 - 7.03 (m, 2H), 6.61 (br s, 1H), 6.47 - 6.38 (m, 1H), 5.86 (br d, J=10.2 Hz, 1H), 5.12 (br s, 1H), 4.38 (dd, J=4.4, 10.6 Hz, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 4.04 (br d, J=12.0 Hz, 2H), 3.76 - 2.67 (m, 12H), 2.52 - 2.37 (m, 1H), 2.32 - 2.21 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.16 (t, J=7.2 Hz, 3H).
실시예 323
2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 메틸 ( 2 R ,4 S )-4- 하이드록시 -1- 메틸 - 파이롤리딘 -2- 카복실레이트. MeOH (30 mL) 중 메틸 (2R,4S)-4-하이드록시파이롤리딘-2-카복실레이트 (3 g, 20.7 mmol, 1 eq, HCl) 및 포름알데하이드 (8.39 g, 103 mmol, 7.69 mL, 37% 순도, 5 eq)의 용액에 AcOH (1.24 g, 20.7 mmol, 1.18 mL, 1 eq)을 15℃에서 첨가했다. 30분 동안 교반한 후, NaBH3CN (3.25 g, 51.7 mmol, 2.5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 16시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 포화 수성 탄산나트륨 용액 (50 mL)을 첨가하고, 그 다음 디클로로메탄/메탄올 10/1 (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 메틸 (2R,4S)-4-하이드록시-1-메틸-파이롤리딘-2-카복실레이트 (2 g, 12.6 mmol, 61% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 B: 메틸 ( 2 R ,4 S )-4-[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시 -1- 메틸 - 파이롤리딘 - 2-카복실레이트. DMF (10.0 mL) 중 메틸 (2R,4S)-4-하이드록시-1-메틸-파이롤리딘 -2-카복실레이트 (1.70 g, 10.7 mmol, 1.00 eq)의 용액에 이미다졸 (1.67 g, 24.6 mmol, 2.30 eq) 및 tert-부틸클로로디페닐실란 (3.52 g, 12.8 mmol, 3.29 mL, 1.20 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20.0 mL)로 희석하고, 염수 (3 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/10)로 정제하여 메틸 (2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-파이롤리딘- 2-카복실레이트 (3.00 g, 7.24 mmol, 68 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 398.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.63 (ddd, J = 1.6, 3.6, 7.6 Hz, 4H), 7.46 - 7.35 (m, 6H), 4.47 - 4.40 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.32 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 2.42 (br d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.18 - 2.01 (m, 2H), 1.07 (s, 9H).
단계 C: [( 2 R ,4 S )-4-[ tert -부틸 (디페닐)실릴] 옥시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (10.0 mL) 중 메틸 (2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1 -메틸-파이롤리딘-2-카복실레이트 (1.50 g, 3.77 mmol, 1.00 eq)의 용액에 LiAlH4 (573 mg, 15.1 mmol, 4.00 eq)을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (0.50 mL), NaOH 용액 (15.0 %, 1.00 mL), 물 (1.50 mL)로 켄칭했다. 형성된 침전물을 여과 제거하고 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (40.0 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 1/10)로 정제하여 [(2R,4S)-4-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메탄올 (1.20 g, 3.18 mmol, 84 % 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 370.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.67 - 7.62 (m, 4H), 7.46 - 7.36 (m, 6H), 4.37 - 4.24 (m, 1H), 3.63 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.35 (dd, J = 2.0, 10.8 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.76 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.44 (dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.04 - 1.85 (m, 2H), 1.06 (s, 9H).
단계 D: 벤질 (2 S )-4-[2-[[(2 R ,4 S )-4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (5.00 mL) 중 [(2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메탄올 (305 mg, 827 umol, 1.20 eq)의 용액에 t-BuONa (132 mg, 1.38 mmol, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가하고, 이어서 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 0.40 g, 689 umol, 1.00 eq)을 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (30.0 mL)로 희석하고, 물 (1 × 20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/3)로 정제하여 벤질 (2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.35 g, 328 umol, 48 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 444.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.69 - 7.59 (m, 5H), 7.52 - 7.48 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 12H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 4.32 (br dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (br d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 3H), 3.98 - 3.88 (m, 1H), 3.47 (br s, 1H), 3.29 (br d, J = 10.8 Hz, 3H), 3.16 (br dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 3.11 - 2.95 (m, 3H), 2.91 - 2.73 (m, 3H), 2.47 - 2.36 (m, 4H), 2.11 (ddd, J = 4.8, 8.4, 13.2 Hz, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).
단계 E: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R ,4 S )-4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 메탄올 (40.0 mL)에 -78 ℃에서 0.5시간 동안 거품을 일으켰다. 벤질 (2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.32 g, 361 umol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.10 g, 10.0 % 순도)을 혼합물에 첨가했다. 25℃에서 H2 하에서 15 psi에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.27 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 377.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 R ,4 S )-4-[ tert - 부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (2.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.27 g, 조물질) 및 TEA (182 mg, 1.80 mmol, 250 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (45.3 mg, 359 umol)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 메탄올 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/3)로 정제하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tert- 부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.16 g, 171 umol, 2개의 단계 48 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 806.
단계 G: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 R ,4 S )-4- 하이드록시 -1- 메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (2.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.16 g, 198 umol, 1.00 eq), KF (46.1 mg, 794 umol, 18.6 uL, 4.00 eq) 및 18-크라운-6 (210 mg, 794 umol, 4.00 eq)의 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 (2.00 mL)으로 pH > 7로 조정하고 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (Phenomenex Gemini 150 * 25mm * 10um; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 38%-66%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4S)-4-하이드록시-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 323, 36.3 mg, 63.9 umol, 32 % 수율, 98.1% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 568.
SFC: "OJ-3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.25 - 8.18 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.46 - 6.35 (m, 1H), 5.84 (br d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.20 - 4.53 (m, 1H), 4.47 (quin, J = 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 3H), 4.14 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.02 (br d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.63 (br s, 1H), 3.46 (br dd, J = 6.0, 9.6 Hz, 2H), 3.36 (br s, 2H), 3.12 (br s, 1H), 3.07 - 2.90 (m, 3H), 2.90 - 2.67 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (dd, J = 5.2, 9.6 Hz, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.04 - 1.96 (m, 1H).
실시예 324
2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(3- 메톡시 -2- 메틸 -페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 300 mg, 593 umol, 1.00 eq), 1-브로모-3-메톡시-2-메틸-벤젠 (239 mg, 1.19 mmol, 2 eq), Cs2CO3 (580 mg, 1.78 mmol, 3 eq), Pd2(dba)3 (109 mg, 119 umol, 0.2 eq) 및 RuPhos (83.1 mg, 178 umol, 0.3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (1 × 200 mL) 및 에틸 아세테이트 (1 × 250 mL)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 pH = 7로 중화하고 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출했다. 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (170 mg, 270 umol, 45% 수율, 99.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 626.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.33 (m, 5H), 7.16 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.80 (br dd, J = 6.8, 11.6 Hz, 1H), 4.68 (br s, 1H), 4.45 (br dd, J = 4.4, 12.0 Hz, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 3H), 4.05 (s, 2H), 3.94 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.67 - 3.56 (m, 1H), 3.32 (br d, J = 11.2 Hz, 3H), 3.24 - 3.01 (m, 3H), 2.95 - 2.67 (m, 8H), 2.32 - 2.10 (m, 5H), 2.00 (br s, 1H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (50 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메톡시 -2-메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 416 umol, 1.00 eq), Pd/C (130 mg, 10% 순도) 및 NH3의 혼합물을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 H2 분위기 하에서 15 psi 압력에서 교반했다. 그 후, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 376 umol, 91% 수율, 92.4% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 492.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 407 umol, 1.00 eq) 및 TEA (206 mg, 2.03 mmol, 283 uL, 5.00 eq)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (41.0 mg, 325 umol, 0.800 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 용액 (5 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 25 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/메탄올 = 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 48% - 78%, 12분)로 추가로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-메톡시-2-메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 324, 35.2 mg, 63.6 umol, 16% 수율, 98.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 546.
SFC 조건: "OD-3S_3_40_3ML 칼럼: Chiralcel OD-3 100Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.17 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 8.0, 1H) 6.68 (d, J = 8.4, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.46 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.09 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 4.02 - 3.92 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.59 (br s, 1H), 3.31 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.22 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.17 - 3.02 (m, 3H), 3.02 - 2.62 (m, 6H), 2.49 (s, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.91 - 1.70 (m, 2H).
실시예 325
2-(1-아크릴로일-4-(7-(7-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4- [7-(2-시아노페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 320 mg, 633 umol, 1 eq) 및 2-브로모벤조니트릴 (230 mg, 1.27 mmol, 2 eq)의 혼합물에 Cs2CO3 (619 mg, 1.90 mmol, 3 eq), RuPhos (59.1 mg, 127 umol, 0.2 eq), Pd2(dba)3 (58.0 mg, 63.3 umol, 0.1 eq)을 한번에 첨가했다. 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 90℃로 가열하고 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (30 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (100 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4- [7-(2-시아노페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (139 mg, 210 umol, 33% 수율, 91.5% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 607.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.62 (dd, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 7.09 - 7.00 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.38 (br dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.19 - 4.01 (m, 3H), 3.92 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.78 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.44 - 3.21 (m, 3H), 3.15 - 2.95 (m, 3H), 2.85 - 2.61 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.12 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.72 (m, 3H).
단계 B: 2-[4-[(3 S )-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]벤조니트릴. MeOH (12 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2- 시아노페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 264 umol, 1 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (20 mL) 및 Pd/C (20 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 다음 단계에서 정제없이 직접 사용했다. 화합물 2-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]벤조니트릴 (119 mg, 조물질)을 녹색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 473,
단계 C: 2-[4-[(3 S )-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]벤조니트릴. DCM (5 mL) 중 2-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]- 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]벤조니트릴 (119 mg, 조물질) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (31.8 mg, 252 umol)의 혼합물에 TEA (127 mg, 1.26 mmol, 175 uL)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가열하고 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (5 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 DCM (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (15 mL × 1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 43% - 73%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-프로프-2-에노일-피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]벤조니트릴 (실시예 325, 35.1 mg, 65.1 umol, 2개의 단계 25% 수율, 97.5% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 527.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.38 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 3.99 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.86 - 3.52 (m, 2H), 3.39 (br s, 2H), 3.18 - 2.99 (m, 3H), 2.97 - 2.59 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.37 - 2.21 (m, 1H), 2.17 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.79 (m, 2H).
실시예 326
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(7-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 -3,4- 디하이드로나프탈렌 -1-일) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (40 mL) 중 7-메틸테트랄린-1-온 (2.5 g, 15.6 mmol, 1.0 eq)의 용액에 DIEA (6.05 g, 46.8 mmol, 8.15 mL, 3.0 eq) 및 Tf2O (6.60 g, 23.4 mmol, 3.86 mL, 1.5 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 반응 혼합물을 0 - 20℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응에 빙수 (40 mL)를 느리게 첨가하고; 유기층을 분리하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:0)로 정제하여 (7-메틸-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (4.0 g, 13.7 mmol, 88% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.18 (s, 1H), 7.12 - 7.06 (m, 2H), 6.02 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.85 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 2.54 - 2.45 (m, 2H), 2.37 (s, 3H).
단계 B: (7- 메틸 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. 디옥산 (80.0 mL) 중 (7-메틸-3,4-디하이드로나프탈렌-1-일) 트리플루오로메탄설포네이트 (4.0 g, 13.7 mmol, 1.0 eq)의 용액에 DDQ (6.21 g, 27.4 mmol, 2.0 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 105℃에서 12 시간 교반했다. 완료 후, 반응을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1:0)로 정제했다. 생성물 (7-메틸-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (3.4 g, 11.7 mmol, 86% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.89 - 7.81 (m, 3H), 7.49 - 7.40 (m, 3H), 2.60 (s, 3H).
단계 C: 벤질(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 1.20 g, 2.37 mmol, 1.0 eq) 및 (7-메틸-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.03 g, 3.56 mmol, 1.50 eq)의 혼합물에 Cs2CO3 (1.55 g, 4.75 mmol, 2.0 eq), 및 Xphos-Pd-G3 (301 mg, 356 umol, 0.15 eq)을 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (20.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 15.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=20:1)로 정제했다. 생성물 벤질(2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (820 mg, 1.22 mmol, 51% 수율, 95.9% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (790 mg, 1.22 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (1.22 mmol, 15.0 mL, 1.0 eq) 및 Pd/C (500 mg, 10% 순도)을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 필터 케이크를 DCM (2 × 20 mL)로 세정하고, 여과물을 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (490 mg, 934 umol, 76% 수율, 97.5% 순도)을 백색 고체로서 수득하고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(7- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S)-1 -메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (8.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (490 mg, 958 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 DIEA (495 mg, 3.83 mmol, 667 uL, 4.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (121 mg, 958 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 수득된 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC ((칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 57%-87%, 12분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(7-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 326, 133 mg, 235 umol, 25% 수율, 99.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.00 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 7.13 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.69 - 6.49 (m, 1H), 6.42 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.20 - 4.52 (m, 1H), 4.42 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.76 - 3.22 (m, 4H), 3.21 - 3.07 (m, 2H), 3.04 - 2.63 (m, 5H), 2.56 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.14 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.75 (m, 3H).
실시예 327
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 1: 1 - tert -부틸 2- 메틸 ( 2 S ,4 R )-4- 메톡시파이롤리딘 -1,2- 디카복실레이트. CH3CN (150 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸(2S,4R)-4- 하이드록시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (9 g, 36.7 mmol, 1 eq)의 용액에 Ag2O (25.5 g, 110 mmol, 3 eq) 및 CH3I (54.3 g, 383 mmol, 23.8 mL, 10.4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터를 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 3:1)로 정제했다. 화합물 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (9 g, 34.7 mmol, 95% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.94 - 3.79 (m, 1H), 3.66 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.44 - 3.34 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.92 - 2.53 (m, 2H), 2.40 - 2.25 (m, 4H), 2.12 - 1.99 (m, 1H), 1.89 - 1.79 (m, 1H).
단계 2: [( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (100 mL) 중 1-tert-부틸 2-메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (5 g, 19.28 mmol, 1 eq)의 용액에 LiAlH4 (2.20 g, 57.8 mmol, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수용액 (6 mL)로 켄칭하고, 그 다음 혼합물을 여과하고 필터를 농축했다. 화합물 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (1.8 g, 12.4 mmol, 64% 수율)을 무색 오일로서 수득했고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.43 - 4.23 (m, 1H), 3.45 - 3.90 (m, 1H), 3.78 - 3.69 (m, 3H), 3.68 - 3.43 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.43 - 2.24 (m, 1H), 2.12-1.95 (m, 1H), 1.52 - 1.33 (m, 9H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4- 메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. THF (10 mL) 중 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (600 mg, 4.13 mmol, 3 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.38 mmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (397 mg, 4.13 mmol, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하고 물 (20 mL)로 세정했다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH=200/1 내지 20:1)로 정제했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4- 메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (910 mg, 1.28 mmol, 93% 수율, 93% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 662.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3로 MeOH (80 mL)에 - 60℃에서 10분 동안 거품을 일으켰다. MeOH (30 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (850 mg, 1.28 mmol, 1 eq)의 용액에 상기 NH3ㆍMeOH (20 mL) 및 건조 Pd/C (500 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 필터를 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (620 mg, 1.18 mmol, 91% 수율)을 무색 오일로서 수득했고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 528.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (620 mg, 1.18 mmol, 1 eq)의 용액에 TEA (1.19 g, 11.7 mmol, 1.64 mL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, 디클로로메탄 (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (118 mg, 940 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 적가했다. 수득한 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭했다. 그 다음 물 (20 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, EA/MeOH=100/1 내지 10:1)로 정제하고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 45% - 75%, 12분)로 추가로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (101 mg, 167 umol, 14% 수율, 96.6% 순도)을 동결건조로 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.26 - 8.17 (m, 1H), 7.91 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.41 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.53 (m, 1H), 4.42 (dd, J = 4.4, 10.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.17 (m, 3H), 4.13 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.04 - 3.93 (m, 2H), 3.70 - 3.42 (m, 3H), 3.31 (s, 5H), 3.22 - 2.69 (m, 7H), 2.48 (s, 3H), 2.33 (dd, J = 5.6, 9.6 Hz, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H).
실시예 328
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.0 g, 1.98 mmol, 1.0 eq) 및 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (2.88 g, 11.9 mmol, 6.0 eq)의 혼합물에 Cs2CO3 (1.29 g, 3.96 mmol, 2.0 eq), RuPhos (185 mg, 396 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (272 mg, 297 umol, 0.15 eq)을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 18 시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (30.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 20.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=20:1)로 정제했다. 수득된 생성물을, 그 다음 역상 플래시 (C18, MeCN 중 0.1% FA)로 다시 정제하고, 수득된 생성물을 NaHCO3 고체로 pH~7로 조정하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 15.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 236 umol, 12% 수율, 98% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 668.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-[3- 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (460 mg, 689 umol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (300 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (10 mL)을 첨가하고, 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (320 mg, 591 umol, 86% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 534.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-[3- 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (8.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (320 mg, 599 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 DIEA (310 mg, 2.40 mmol, 418 uL, 4.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (75.6 mg, 599 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 그 다음 수득된 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 51%-81%, 12분)로 다시 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (86.8 mg, 145 umol, 24% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 588.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.55 - 7.45 (m, 1H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.68 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.11 - 4.52 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.14 - 4.07 (m, 3H), 3.98 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.72 - 3.52 (m, 1H), 3.42 - 3.25 (m, 2H), 3.23 - 2.58 (m, 9H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 3H).
실시예 329
2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: [(2 R )-1-[2-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시에틸 ] 피롤리딘 -2-일]메탄올. 아세토니트릴 (30.0 mL) 중 [(2R)-피롤리딘-2-일]메탄올 (0.50 g, 4.94 mmol, 481 uL, 1.00 eq), 2-브로모에톡시-tert-부틸-디메틸-실란 (1.18 g, 4.94 mmol, 1.00 eq) 및 K2CO3 (3.42 g, 24.7 mmol, 5.00 eq)의 혼합물을 83 ℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 10/1)로 정제하여 [(2R)-1-[2-[tert- 부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메탄올 (0.50 g, 1.93 mmol, 39 % 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.70 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.60 (dd, J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.36 (dd, J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.20 (td, J = 4.4, 9.2 Hz, 1H), 2.89 (td, J = 6.4, 12.8 Hz, 1H), 2.74 - 2.65 (m, 1H), 2.50 (td, J = 5.2, 12.8 Hz, 1H), 2.42 - 2.32 (m, 1H), 1.92 - 1.81 (m, 1H), 1.78 - 1.66 (m, 3H), 0.90 (d, J = 0.8 Hz, 9H), 0.07 (d, J = 0.4 Hz, 6H).
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[2-[[(2 R )-1-[2-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (10.0 mL) 중 [(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘 -2-일]메탄올 (344 mg, 1.33 mmol, 1.10 eq)의 용액에 t-BuONa (232 mg, 2.41 mmol, 2.00 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 0.70 g, 1.21 mmol, 1.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (10.0 mL)로 희석하고, 물 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 에틸 아세테이트/석유 에틸 = 3/1)로 정제하여 벤질 (2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.60 g, 704 umol, 58% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 776.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.23 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.34 (m, 6H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.34 (br dd, J = 4.2, 10.6 Hz, 1H), 4.30 - 4.20 (m, 2H), 4.17 - 3.89 (m, 4H), 3.75 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.49 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.38 - 3.13 (m, 4H), 3.10 - 2.90 (m, 4H), 2.89 - 2.70 (m, 3H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.87 - 1.73 (m, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.05 (d, J = 1.2 Hz, 6H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R )-1-[2-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시에틸 ] 피롤리딘 -2-일]메톡시]- 7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3로 메탄올 (50.0 mL)에 -78 ℃에서 10분 동안 거품을 일으켰다. 벤질 (2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.60 g, 773 umol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.1 g, 10 % 순도)을 상기 용액에 첨가했다. H2 하에서 15 psi에서 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 촉매를 여과 제거하고 필터 케이크를 THF (10.0 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.50 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 321.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R ) -1-[2-[ tert -부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (5.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.50 g, 조물질) 및 TEA (394 mg, 3.89 mmol, 542 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (98.2 mg, 779 umol,)을 -40℃에서 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/ 에틸 아세테이트 = 10/1)로 정제하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R) -1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.35 g, 427 umol, 2개의 단계 55 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 696.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R )-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (5.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.35 g, 503 umol, 1.00 eq), KF (146 mg, 2.51 mmol, 58.9 uL, 5.00 eq) 및 18-크라운-6 (665 mg, 2.51 mmol, 5.00 eq)의 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)/아세토니트릴] 및 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150 * 25mm * 10um; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 45% - 75%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 329, 146 mg, 245 umol, 49 % 수율, 97.7 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:582.
SFC 조건: " 칼럼: Chiralcel OJ-3 100 × 4.6 mm I.D., 3 um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05 % DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ =8.29 - 8.18 (m, 1H), 7.95 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.46 - 6.31 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.19 - 4.47 (m, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 3H), 4.21 - 4.09 (m, 2H), 4.02 (br d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.71 - 3.57 (m, 2H), 3.53 - 3.27 (m, 3H), 3.22 - 2.76 (m, 9H), 2.62 (td, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.41 - 2.28 (m, 1H), 2.11 - 1.95 (m, 1H), 1.89 - 1.77 (m, 3H).
실시예 330
2-[(2S)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: 1- 브로모 -3- 메톡시 -2-( 트리플루오로메틸 )벤젠. DMF (25.0 mL) 중 MeOH (264 mg, 8.23 mmol, 333 uL, 2.00 eq)의 용액에 NaH (329 mg, 8.23 mmol, 광유 중 60% 순도, 2.00 eq)을 첨가했다. 용액을 실온에서 (25℃에서) 30분 동안 혼합하고 그 후 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (1.00 g, 4.12 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 용액을, 그 다음 25 ℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 1/0 내지 100/1)로 정제하여 1-브로모-3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (880 mg, 3.11 mmol, 75% 수율, 90.0% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.34 - 7.27 (m, 2H), 6.99 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H).
단계 A: (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 550 mg, 1.09 mmol, 1.00 eq), 1-브로모-3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (416 mg, 1.63 mmol, 1.50 eq), RuPhos (152 mg, 326 umol, 0.30 eq), Cs2CO3 (1.06 g, 3.26 mmol, 3.00 eq) 및 Pd2(dba)3 (149 mg, 163 umol, 0.15 eq)을 탈가스하고 그 다음 12시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 수집된 원하는 분획을 포화 중탄산나트륨 용액으로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 321 umol, 30% 수율, 94.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 680.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-[3- 메톡시 -2-( 트리플루오로메틸 ) 페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (4.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 338 umol, 1.00 eq)의 용액에 NH3/MeOH (7 M, 4.00 mL), Pd/C (70.0 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 촉매를 여과 제거하고 여과물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸) 페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 242 umol, 72% 수율, 88.1% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 546.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-[3- 메톡시 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]-1- 프로프 -2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸) 페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 242 umol, 1.00 eq) 및 TEA (122 mg, 1.21 mmol, 168 uL, 5.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (30.5 mg, 242 umol, 1.00 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (0.1 mL) 및 물 (2 mL)로 켄칭했다. 층을 분리했다. 수성상을 EtOAc (2 × 8 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (EtOAc/MeOH 7/1) 및 그 다음 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12분)로 정제하고 동결건조시켜 2-[(2S)-4-[7-[3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 330, 28.2 mg, 45.6 umol, 19% 수율, 96.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 600.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OD-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.42 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.46 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.37 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.21 - 4.02 (m, 4H), 4.01 - 3.77 (m, 5H), 3.75 - 3.21 (m, 3H), 3.20 - 2.98 (m, 3H), 2.97 - 2.56 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.12 - 1.98 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 3H).
실시예 331
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
[0100] 단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 무수 DCM (17.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (700 mg, 1.16 mmol, 1.00 eq, 2 HCl) 및 TEA (1.76 g, 17.4 mmol, 2.42 mL, 15.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (146 mg, 1.16 mmol, 1.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 1시간 동안 25℃에서 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (1 mL) 및 물 (10 mL)로 켄칭했다. 분리된 수성상을 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 2/1 내지 0/1) 및 그 다음 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 52%-82%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 331, 122 mg, 205 umol, 18% 수율, 98.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:586.
SFC 조건: 칼럼: Chiralpak AD-3 100 × 4.6 mm I.D., 3 um, 이동상: CO2 중 40% 이소-프로판올 (0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 13.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.33 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 2H), 4.22 - 3.66 (m, 5H), 3.63 - 3.32 (m, 2H), 3.32 - 2.97 (m, 5H), 2.91 - 2.52 (m, 4H), 2.48 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.12 - 1.96 (m, 1H), 1.86 - 1.70 (m, 3H).
실시예 332
2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: t ert -부틸 (2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 751 umol, 1.0 eq) 및 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (218 mg, 1.50 mmol, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (144 mg, 1.50 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)의 첨가로 20℃에서 켄칭하고, 반응 혼합물을 EA (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1 내지 EA/MeOH = 10/1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 413 umol, 55 % 수율, 93.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 680.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (270 mg, 397 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 68.1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 580.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 371 umol, 1.0 eq, 2TFA)의 용액에 DIEA (480 mg, 3.71 mmol, 647 uL, 10.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 MeOH (10.0 mL)의 첨가로 20℃에서 켄칭하고, 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (27.6 mg, 43.5 umol, 2개의 단계 10% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 634.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.32 - 7.40 (m, 1H) 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.57 (br, d, J = 14.1 Hz, 1H), 6.44 - 6.37 (m, 1H), 5.84 (br, d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.1 (br, s, 1H), 4.45 - 4.35 (m, 1H), 4.19 (br, dd, J = 5.9, 10.9 Hz, 1H), 4.10 (s, 3H), 4.00 - 3.90 (m, 2H), 3.75 - 3.4 (m, 2H), 3.40- 3.00 (m, 8H), 3.00 - 2.65 (m, 5H), 2.45 (s, 3H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H).
실시예 333
2-[(2S)-4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: (7- 플루오로 -1- 나프틸 ) 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (40 mL) 중 7-플루오로나프탈렌-1-올 (980 mg, 6.04 mmol, 1 eq) 및 DIEA (2.34 g, 18.1 mmol, 3.16 mL, 3 eq)의 용액에 Tf2O (2.56 g, 9.07 mmol, 1.50 mL, 1.5 eq)을 - 5℃에서 적가했다. 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 화합물 (7-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (1.63 g, 5.54 mmol, 92% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.92 (dd, J = 5.6, 9.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 2.4, 9.9 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 7.42 - 7.34 (m, 1H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(7- 플루오로 -1- 나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 330 mg, 463 umol, 1 eq), (7-플루오로-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (273 mg, 927 umol, 2 eq), Pd2(dba)3 (84.9 mg, 92.7 umol, 0.2 eq), RuPhos (64.9 mg, 139 umol, 0.3 eq) 및 Cs2CO3 (453 mg, 1.39 mmol, 3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (1 × 200 mL) 및 에틸 아세테이트 (1 × 250 mL)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 pH = 7로 중화하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (1 × 200 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(7-플루오로-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 308 umol, 100% 순도, 67% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 6H), 7.24 - 7.16 (m, 1H), 7.10 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.19 - 5.09 (m, 2H), 4.62 (br s, 1H), 4.51 (dd, J = 6.0, 11.2 Hz, 1H), 4.26 (dd, J = 5.6, 11.3 Hz, 1H), 4.15 (s, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 2H), 3.90 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.38 - 3.11 (m, 5H), 3.08 - 2.95 (m, 2H), 2.93 - 2.71 (m, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.53 - 2.42 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.96 - 1.75 (m, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(7- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (7 M, 150 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(7-플루오로-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (810 mg, 1.25 mmol, 1 eq), Pd/C (400 mg, 10% 순도) 및 NH3의 혼합물을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 H2 분위기 하에서 15 psi 압력에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (600 mg, 1.16 mmol, 93% 수율, 99.4% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.89 - 7.79 (m, 2H), 7.61 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 1H), 7.19 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.51 (dd, J = 5.6, 10.9 Hz, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 3H), 4.05 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.88 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.37 - 3.21 (m, 4H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 3.06 - 2.84 (m, 5H), 2.61 - 2.53 (m, 5H), 2.47 - 2.36 (m, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.97 - 1.76 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(7- 플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (30 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(7-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (600 mg, 1.16 mmol, 1 eq) 및 TEA (589 mg, 5.82 mmol, 810 uL, 5 eq)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (117 mg, 931 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올 = 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(7- 플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 333, 139 mg, 244 umol, 21% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
SFC 조건: "칼럼: Chiralpak AD-3 100 × 4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm".
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.92 - 7.80 (m, 2H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 1H), 7.20 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.62 (br s, 1H), 6.47 - 6.37 (m, 1H), 5.85 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.27 - 4.52 (m, 1H), 4.41 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.25 (br s, 2H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 4.09 - 3.87 (m, 2H), 3.77 - 3.25 (m, 2H), 3.24 - 3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.59 (m, 6H), 2.50 (s, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.99 - 1.81 (m, 3H).
실시예 334
2-(1-아크릴로일-4-(7-(7-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 R )-2-( 벤질옥시메틸 ) 파이롤리딘 -1- 카복실레이트. THF (80 mL) 중 NaH (1.11 g, 27.8 mmol, 60% 순도, 1.2 eq)의 용액에 THF (20 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘 -1-카복실레이트 (4.67 g, 23.2 mmol, 1 eq)의 용액을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. BnBr (5.95 g, 34.8 mmol, 4.13 mL, 1.5 eq)을 0℃에서 적가하고 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(20 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 희석했다. 유기층을 물 (1 × 150 mL) 및 염수 (1 × 150 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 2/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2R)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (5.03 g, 17.3 mmol, 74% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.37 - 7.14 (m, 5H), 4.47 (br s, 2H), 4.07 - 3.77 (m, 1H), 3.67 - 3.07 (m, 4H), 2.08 - 1.68 (m, 4H), 1.38 (s, 9H).
단계 B: (2 R )-2-( 벤질옥시메틸 ) 파이롤리딘. 디옥산 (80 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 -1-카복실레이트 (4 g, 13.7 mmol, 1 eq)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 120 mL, 35 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 (2R)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 (3.13 g, 조물질, HCl)을 백색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 9.76 (br s, 1H), 9.11 (br s, 1H), 7.43 - 7.23 (m, 5H), 4.55 (s, 2H), 3.75 - 3.61 (m, 3H), 3.13 (br d, J = 4.4 Hz, 2H), 2.07 - 1.76 (m, 3H), 1.66 - 1.56 (m, 1H).
단계 C: (2 R )-2-( 벤질옥시메틸 )-1- 에틸- 파이롤리딘. CH3CN (65 mL) 중 (2R)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 (3 g, 조물질, HCl) 및 아이오도에탄 (2.05 g, 13.2 mmol, 1.05 mL)의 혼합물에 K2CO3 (1.82 g, 13.2 mmol)을 25℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 78 ℃로 가열하고 11시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (30 mL × 2)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올 = 5/1)로 정제했다. 화합물 (2R)-2-(벤질옥시메틸)-1- 에틸-파이롤리딘 (2.41 g, 10.4 mmol, 2개의 단계 79% 수율, 95% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.30 - 7.18 (m, 5H), 4.47 (s, 2H), 3.46 (dd, J = 4.8, 9.2 Hz, 1H), 3.30 (dd, J = 6.4, 9.2 Hz, 1H), 3.10 (ddd, J = 2.4, 6.8, 8.8 Hz, 1H), 2.88 (qd, J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 2.62 - 2.49 (m, 1H), 2.24 (qd, J = 7.2, 12.4 Hz, 1H), 2.14 - 2.03 (m, 1H), 1.92 - 1.80 (m, 1H), 1.78 - 1.51 (m, 3H), 1.04 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 D: [(2 R )-1- 에틸피롤리딘 -2-일]메탄올. MeOH (60 mL) 중 (2R)-2-(벤질옥시메틸)-1-에틸-파이롤리딘 (2 g, 9.12 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 30 mL, 13.2 eq)을 첨가하여 pH를 3 ~ 4로 조정하고, 그 다음 Pd(OH)2/C (300 mg, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (50 Psi) 하에서 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 촉매를 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 [(2R)-1-에틸피롤리딘-2-일]메탄올 (1.68 g, 조물질, HCl)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 3.88 (dd, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 3.75 - 3.45 (m, 4H), 3.21 - 3.08 (m, 2H), 2.30 - 1.82 (m, 4H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 E: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[(2 R )-1- 에틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. [(2R)-1-에틸피롤리딘-2-일]메탄올 (334 mg, 2.01 mmol, 1.95 eq, HCl)을 포화 탄산나트륨 용액 (5 mL)에 용해시키고 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출했다. 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 톨루엔 (35 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸) -4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 600 mg, 1.03 mmol, 1 eq) 및 상기 잔류물의 혼합물에 t-BuONa (298 mg, 3.10 mmol, 3 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가온시키고 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 0℃에서 2M HCl로 pH를 8-9로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (15 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (3 ml)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-에틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 526 umol, 51% 수율, 97.1% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R )-1- 에틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (40 mL) 및 NH3ㆍMeOH (20 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1- 에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (305 mg, 472 umol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (300 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (240 mg, 조물질)을 녹색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 G: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R )-1- 에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1-에틸피롤리딘-2- 일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (240 mg, 조물질)의 혼합물에 TEA (237 mg, 2.35 mmol, 326 uL), 그 다음 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (59.2 mg, 469 umol)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가온시키고 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (2 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 DCM mL (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (15 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올 = 5/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 59% - 89%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R)-1- 에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 334, 44.2 mg, 75.2 umol, 2개의 단계 16% 수율, 96.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.47 - 6.35 (m, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.39 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.19 - 4.09 (m, 2H), 4.02 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.47 (br s, 2H), 3.34 (br s, 2H), 3.26 - 3.07 (m, 3H), 3.05 - 2.63 (m, 5H), 2.44 (br dd, J = 6.8, 12.0 Hz, 1H), 2.26 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.12 - 1.94 (m, 1H), 1.80 (br d, J = 4.0 Hz, 4H), 1.15 (br t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 335
2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 메틸 ( 2 S ,4 R )-4- 메톡시파이롤리딘 -2- 카복실레이트 . DCM (5.0 mL) 중 O1-tert-부틸-O2-메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (5.00 g, 19.3 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.0 mL, 3.50 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축했다. 생성물 메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-2-카복실레이트 (3.0 g, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 2: 메틸 ( 2 S ,4 R )-1-에틸-4- 메톡시 - 파이롤리딘 -2 - 카복실레이트. MeCN (30.0 mL) 중 메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘 -2-카복실레이트 (3.0 g, 11.0 mmol, 1.0 eq, TFA) 및 K2CO3 (4.55 g, 32.9 mmol, 3.0 eq)의 용액에 아이오도에탄 (1.71 g, 11.0 mmol, 878 uL, 1.0 eq)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고 78 ℃로 가열하고, 그 다음 78 ℃에서 11시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA=10:1 - EA:MeOH=10:1)로 정제하여 메틸 (2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-파이롤리딘-2 -카복실레이트 (1.20 g, 6.41 mmol, 2개의 단계 33% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 4.04 - 3.95 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.55 - 3.33 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.83 - 2.70 (m, 1H), 2.53 - 2.35 (m, 2H), 2.14 (dd, J = 5.6, 8.0 Hz, 2H), 1.09 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 3: [( 2 S ,4 R )-1-에틸-4- 메톡시 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (15.0 mL) 중 메틸 (2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-파이롤리딘-2-카복실레이트 (1.20 g, 6.41 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (730 mg, 19.2 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 -78 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (0.30 mL)로 켄칭하고 여과하고, THF (10.0 mL)로 세정했다. 모액을 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA=10:1 - EA;MeOH=5:1)로 정제하여 [(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메탄올 (600 mg, 3.77 mmol, 59% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.66 (dd, J = 3.2, 10.8 Hz, 1H), 3.49 - 3.35 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.89 - 2.76 (m, 2H), 2.40 - 2.27 (m, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-[3- 클로로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-2-[[(2 S ,4 R )-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (5.0 mL) 중 [(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메탄올 (266 mg, 1.67 mmol, 2.00 eq)의 용액에 t-BuONa (241 mg, 2.50 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 835 umol, 1.0 eq)을 상기 액체에 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA=20:1 - EA:MeOH=10:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (440 mg, 513 umol, 62% 수율, 81% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 694.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.41 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.42 (br dd, J = 4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.18 - 4.06 (m, 4H), 4.06 - 3.96 (m, 2H), 4.06 - 3.96 (m, 1H), 3.92 - 3.86 (m, 1H), 3.36 - 3.20 (m, 6H), 3.18 - 2.96 (m, 4H), 2.94 - 2.66 (m, 4H), 2.58 - 2.39 (m, 1H), 2.37 - 2.30 (m, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.13 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S ,4 R )-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.00 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (390 mg, 455 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 29.7 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 조물질, 2 TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 594.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S ,4 R )-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 487 umol, 1.0 eq, 2 TFA)의 용액에 DIEA (629 mg, 4.87 mmol, 847 uL, 10.0 eq)을 -30℃에서 첨가했다. 그 다음 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (92.0 mg, 730 umol, 1.50 eq)을 -30℃에서 상기 액체에 첨가하고 혼합물을 -30℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (0.50 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 표제 화합물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12분)로 정제하여 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-1-에틸-4-메톡시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 335, 120 mg, 182 umol, 2개의 단계 28% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 648.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.42 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 - 6.55 (m, 1H), 6.42 (dd, J = 1.6, 16.4 Hz 1H), 5.85 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.20 - 4.51 (m, 1H), 4.42 (dd, J = 4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 4H), 4.04 - 3.72 (m, 3H), 3.70 - 3.41 (m, 2H), 3.39 - 3.22 (m, 5H), 3.20 - 2.79 (m, 7H), 2.76 (br s, 1H), 2.50 - 2.40 (m, 1H), 2.33 (dd, J = 5.2, 10.0 Hz, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 336
1-[(2R,5S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (2 R , 5 S )-4-(7- 벤질 -2- 클로로 - 6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트. NMP (30.0 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘 (2.70 g, 9.18 mmol, 1.00 eq), tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1 -카복실레이트 (1.77 g, 8.26 mmol, 0.90 eq) 및 DIEA (2.37 g, 18.4 mmol, 3.20 mL, 2.00 eq)의 용액을 100℃에서 7시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50.0 mL)로 희석하고, 염수 (3 × 100 mL)로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 3/1)로 정제하여 tert-부틸 (2R, 5S)-4-(7-벤질-2-클로로- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (2.80 g, 5.69 mmol, 62 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 472.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 - 7.29 (m, 5H), 4.45 - 4.19 (m, 2H), 3.71 - 3.61 (m, 4H), 3.54 - 3.43 (m, 3H), 3.41 - 3.36 (m, 1H), 2.81 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: tert -부틸 ( 2 R ,5 S )-4-[7- 벤질 -2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트. THF (20.0 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (854 mg, 7.41 mmol, 880 uL, 2.50 eq)의 용액에 NaH (237 mg, 5.93 mmol, 60.0 % 순도, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, tert-부틸 (2R, 5S)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.40 g, 2.97 mmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (20.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 30.0mL)로 추출하고, 유기층을 염수 (1 × 40.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 1/ 10)로 정제하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.55 g, 2.56 mmol, 86 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 551.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ =7.39 - 7.28 (m, 5H), 4.31 (br dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 2H), 4.16 - 4.08 (m, 1H), 3.72 - 3.62 (m, 4H), 3.61 - 3.56 (m, 1H), 3.52 - 3.43 (m, 2H), 3.38 (br s, 1H), 3.08 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.81 - 2.48 (m, 6H), 2.45 (s, 3H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 1H), 1.78 - 1.65 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.17 (br d, J = 6.4 Hz, 6H).
단계 C: tert -부틸 (2 R ,5 S )-2,5-디메틸-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. NH3으로 메탄올 (150 mL)에 -78 ℃에서 15분 동안 거품을 일으켰다. tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (2.80 g, 5.08 mmol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.50 g, 10.0 % 순도)을 혼합물에 첨가했다. 40℃에서 5시간 동안 H2 하에서 15 psi에서 교반한 후, 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.20 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 461.
단계 D: tert -부틸 (2 R ,5 S )-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30.0 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.00 g, 조물질), 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (1.02 g, 3.26 mmol, 1.50 eq), RuPhos (203 mg, 434 umol), Pd2(dba)3 (199 mg, 217 umol) 및 Cs2CO3 (2.12 g, 6.51 mmol)의 혼합물을 110℃에서 5시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (20.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 40.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 (5.00 mL)로 pH > 7로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1.06 g, 1.47 mmol, 2개의 단계 68% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 347.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 5H), 7.39 - 7.33 (m, 2H), 6.99 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.48 - 4.42 (m, 1H), 4.38 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.20 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 3.76 (br s, 1H), 3.70 - 3.61 (m, 1H), 3.60 - 3.52 (m, 1H), 3.45 (br s, 2H), 3.24 (br s, 1H), 3.10 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.93 (br s, 1H), 2.80 - 2.61 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.25 (m, 1H), 2.12 - 2.03 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.27 - 1.22 (m, 6H).
단계 E: tert -부틸 ( 2 R ,5 S )-4-[7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸 ) -2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트. 메탄올 (40.0 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (0.90 g, 1.30 mmol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.10 g, 10.0 % 순도)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 H2 하에서 15 psi에서 교반했다. 혼합물을 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (0.72 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 603.
단계 F: 4-[4-[( 2 S ,5 R )-2,5-디메틸피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올. 디클로로메탄 (1.20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (0.70 g, 조물질) 및 TFA (1.99 g, 17.42mmol, 1.29 mL)의 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-[4-[(2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (849 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 503.
단계 G: 1-[( 2 R ,5 S )-4-[7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. 디클로로메탄 (3.00 mL) 중 4-[4-[(2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]나프탈렌-2-올 (0.84 g, 조물질, 2TFA) 및 TEA (1.16 g, 11.5 mmol, 1.60 mL)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (102 mg, 805 umol)을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (0.10 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% TFA)-아세토니트릴] 및 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Luna 페닐-헥실 150_30_5um; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 45% - 75%, 3분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 1-[(2R,5S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2,5-디메틸-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 336, 55.8 mg, 94.1 umol, 3개의 단계 8.2 % 수율, 93.9 % 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:557.
SFC: "칼럼: Chiralpak AS-3 50Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.97 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.34 (m, 1H), 7.26 (dt, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.65 (br s, 1H), 6.61 - 6.43 (m, 1H), 6.39 - 6.26 (m, 1H), 5.73 (br t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.83 (br s, 1H), 4.55 (br d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.43 - 4.04 (m, 4H), 3.91 (br d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.77 - 3.26 (m, 5H), 3.19 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.06 - 2.68 (m, 3H), 2.63 (br s, 3H), 2.57 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.41 - 2.33 (m, 1H), 2.15 - 1.83 (m, 4H), 1.11 - 0.96 (m, 6H).
실시예 337
2-[(2S)-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 1 -(2- 브로모 -6- 클로로 -페닐) 에탄올. 자석 교반 막대가 장착된 열-건조된 100 mL 둥근바닥 플라스크에 N2 하에서 2-브로모-6-클로로-벤즈알데하이드 (10.0 g, 45.6 mmol, 1 eq) 및 THF (100 mL)을 첨가했다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고 그 다음 MeMgBr (Et2O 중 3 M, 22.8 mL, 1.5 eq)을 20분에 걸쳐 적가했다. 수득한 현탁액을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl 용액 (10 mL)의 적가로 켄칭했다. 혼합물을 냉각시키고, 물 (150 mL)을 수용하고 있는 100 mL 분별 깔때기에 부었고 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 150 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 화합물 1-(2-브로모-6-클로로-페닐) 에탄올 (8.00 g, 32.6 mmol, 72% 수율, 96% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M-17]: 219.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 - 6.96 (m, 1H), 5.68 - 5.44 (m, 1H), 3.24 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.61 (d, J = 4.4 Hz, 3H).
단계 2: 1 - 브로모 -3- 클로로 -2-에틸-벤젠. DCE (150 mL) 중 1-(2-브로모-6-클로로-페닐)에탄올 (8.00 g, 34.0 mmol, 1 eq)의 혼합물에 BF3.Et2O (14.5 g, 102 mmol, 12.6 mL, 3 eq) 및 Et3SiH (19.8 g, 170 mmol, 27.1 mL, 5 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 50℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수성물 (2 × 75 mL) 및 포화 염수 (1 × 75 mL)로 세정하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 65ACN% - 95ACN%, 30 min; 60%분)로 정제했다. 화합물 1-브로모-3-클로로-2-에틸-벤젠 (1.50 g, 6.83 mmol, 20% 수율, 100% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(3- 클로로 -2-에틸-페닐)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 - 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 300 mg, 636 umol, 1 eq), 1-브로모-3-클로로-2-에틸-벤젠 (279 mg, 1.27 mmol, 2 eq), Pd2(dba)3 (117 mg, 127 umol, 0.2 eq), RuPhos (89.1 mg, 191 umol, 0.3 eq) 및 Cs2CO3 (622 mg, 1.91 mmol, 3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (1 × 200 mL) 및 에틸 아세테이트 (1 × 250 mL)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 염수 (1 × 200 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 pH = 7로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 × 200 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (155 mg, 0.254 mmol, 100% 순도, 40% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 610.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.20 - 7.16 (m, 1H), 7.13 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 - 7.03 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 5.2, 10.6 Hz, 1H), 4.16 (dd, J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.09 - 3.95 (m, 4H), 3.91 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.26 (dd, J = 3.6, 13.7 Hz, 1H), 3.22 - 2.96 (m, 5H), 2.90 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.84 - 2.63 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.83 - 1.70 (m, 3H), 1.52 (s, 9H), 1.22 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3- 클로로 -2-에틸-페닐)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (600 uL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (310 mg, 508 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (869 mg, 7.62 mmol, 564 uL, 15 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (850 mg, 조물질, 2 TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 510.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (8 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (850 mg, 조물질, 2 TFA) 및 프로프-2-에노일 클로라이드 (59.8 mg, 660 umol, 53.8 uL)의 혼합물에 TEA (514 mg, 5.08 mmol, 707 uL)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 용액 (2 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 30 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3; 에틸 아세테이트/메탄올 = 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04% NH3ㆍH2O) - ACN]; B%: 65% - 95%, 10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-클로로-2-에틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 337, 142 mg, 252 umol, 2개의 단계 50% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 564.
SFC 조건: " 칼럼: Chiralpak AD-3 100Х4.6mm I.D., 3 um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm".
1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ = 7.21 (s, 3H), 6.78 (dd, J = 10.4, 16.8 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 2.0, 16.8 Hz, 1H), 5.74 (dd, J = 2.0, 10.6 Hz, 1H), 4.84 (br s, 1H), 4.28 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.90 (m, 4H), 3.39 (br s, 1H), 3.27 (br dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.20 - 3.05 (m, 3H), 2.99 - 2.93 (m, 2H), 2.93 - 2.76 (m, 4H), 2.61 - 2.52 (m, 2H), 2.40 - 2.31 (m, 3H), 2.22 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 2.00 - 1.87 (m, 1H), 1.77 - 1.54 (m, 3H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 338
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
삽입: 1- 브로모 -8- 플루오로 -나프탈렌. THF (50 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (2 g, 6.99 mmol, 1 eq)의 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 4.20 mL, 1.5 eq)을 - 78 ℃에서 적가했다. 10분 동안 -78 ℃에서 교반한 후, THF (10 mL) 중 N-(벤젠설포닐)-N-플루오로-벤젠설폰아미드 (4.41 g, 13.9 mmol, 2 eq)의 용액을 적가했다. 혼합물을 25℃까지 가온시키고 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 50% - 75%, 25분)을 첨가했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액의 첨가로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 1-브로모-8-플루오로-나프탈렌 (560 mg, 2.46 mmol, 35% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.81 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.31 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.23 (td, J = 0.8, 5.2 Hz, 1H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 1-브로모-8-플루오로-나프탈렌 (310 mg, 1.38 mmol, 1.3 eq), tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 500 mg, 1.06 mmol, 1 eq), Cs2CO3 (863 mg, 2.65 mmol, 2.5 eq), RuPhos (98.9 mg, 212 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (194 mg, 212 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 원하는 분획을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (370 mg, 570 umol, 54% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.56 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.20 - 7.08 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.47 - 4.27 (m, 2H), 4.23 - 4.14 (m, 2H), 4.11 - 3.82 (m, 3H), 3.81 - 3.65 (m, 1H), 3.44 - 3.23 (m, 2H), 3.19 - 3.07 (m, 2H), 3.02 - 2.79 (m, 3H), 2.77 - 2.66 (m, 2H), 2.56 (br s, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.34-2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.82 - 1.72 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 플루오로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (600 uL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (370 mg, 600 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (1.03 g, 9.01 mmol, 667 uL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (378 mg, 600 umol, 99% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (261 mg, 506 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (512 mg, 5.07 mmol, 705 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (51.1 mg, 405 umol, 0.8 eq)의 용액에 DCM (1 mL) 중 0℃에서 적가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 48% - 78%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-플루오로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 338, 93.5 mg, 163 umol, 32% 수율, 99.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
SFC 조건: "OD-3_MeOH (DEA)_40_3mL-35T 칼럼: Chiralcel OD-3 50 Х4.6mm I.D., 3um 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm"
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 2H), 7.19-7.09 (m, 2H), 6.60 (br s, 1H), 6.40 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.30 - 4.48 (m, 1H), 4.46 - 4.28 (m, 2H), 4.27 - 3.85 (m, 5H), 3.73 (br s, 1H), 3.56 - 2.54 (m, 10H), 2.49 (s, 3H), 2.37 - 2.21 (m, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.79 (m, 3H).
실시예 339
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 벤질옥시메틸 ) 파이롤리딘 -1- 카복실레이트. THF (50.0 mL) 중 NaH (1.19 g, 49.6 mmol, 2.0 eq)의 용액에 THF (50.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1- 카복실레이트 (5.00 g, 24.8 mmol, 1.0 eq)의 용액을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 브로모메틸벤젠 (6.38 g, 37.3 mmol, 4.43 mL, 1.50 eq)을 0℃에서 상기 혼합물에 적가하고 혼합물을 10℃에서 16시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 포화 NH4Cl 수성물 (20.0 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (50.0 ml)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르:에틸 아세테이트 =10:1 - 3:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (6.60 g, 10.4 mmol, 42% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.44 - 7.26 (m, 5H), 4.53 (s, 2H), 4.00 - 3.85 (m, 1H), 3.61 - 3.39 (m, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 2H), 2.04 - 1.77 (m, 4H), 1.50 - 1.36 (m, 9H).
단계 B: (2 S )-2-( 벤질옥시메틸 ) 파이롤리딘. DCM (23.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (6.60 g, 22.7 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (34.7 g, 304 mmol, 22.5 mL, 13.4 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 적가했다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 (10.0 g, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 192.
단계 C: (2 S )-2-( 벤질옥시메틸 )-1- 에틸파이롤리딘 . MeOH (30.0 mL) 중 (2S)-2-(벤질옥시메틸)파이롤리딘 (2.0 g, 6.55 mmol, 1.0 eq, TFA) 및 아세트알데하이드 (1.44 g, 32.8 mmol, 1.84 mL, 5.0 eq)의 용액에 CH3COOH (787 mg, 13.1 mmol, 749 uL, 2.0 eq) 및 NaBH3CN (1.65 g, 26.2 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, pH를 1 M HCl 수성물 (15.0 mL)로 3으로 조정하고 진공 하에서 농축하여 MeOH를 제거했다. 혼합물을 혼합된 용매 (PE/EA = 10:1, 2 × 60.0 mL)로 추출했다. 수성상을 포화 Na2CO3 수성물 (10.0 mL)로 pH ~ 9로 조정하고 혼합된 용매 (EA/MeOH = 10:1, 4 × 60.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 (0.1% TFA 조건)로 정제하여 (2S)-2-(벤질옥시메틸)-1-에틸파이롤리딘 (707 mg, 3.18 mmol, 49% 수율, 99.0% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.36 - 7.31 (m, 4H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 4.58 - 4.54 (s, 2H), 3.52 (dd, J = 4.8, 9.2 Hz, 1H), 3.37 (dd, J = 6.4, 9.2 Hz, 1H), 3.20 - 3.12 (m, 1H), 3.01 - 2.89 (m, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 1H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.21 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.87 (m, 1H), 1.83 - 1.62 (m, 3H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 D: [(2 S )-1- 에틸피롤리딘 -2-일]메탄올. MeOH (3.00 mL) 중 (2S)-2-(벤질옥시메틸)-1-에틸-파이롤리딘 (860 mg, 3.92 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HClㆍMeOH (4 M, 0.80 mL) 및 Pd(OH)2/C (300 mg, 20% 순도)를 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (50 Psi) 하에서 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 여과하고 농축했다. 생성물 [(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메탄올 (460 mg, 3.56 mmol, 91% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 130.
단계 E: tert -부틸 (2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 668 umol, 1.0 eq) 및 [(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메탄올 (173 mg, 1.34 mmol, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (128 mg, 1.34 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (30.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (2 × 20.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 포화 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 353 umol, 53% 수율, 97.6% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 664.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[7-[3- 클로로 -2-( 트리플루오로메틸 ) 페닐]-2-[[(2 S )-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 361 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 74.8 eq)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸) 페닐]-2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (280 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 564.
단계 G: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (280 mg, 496 umol, 1.0 eq, 2TFA)의 혼합물에 DIEA (642 mg, 4.96 mmol, 865 uL, 10.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (62.6 mg, 496 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC ((칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 12분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-에틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 339, 31.9 mg, 50.2 umol, 10% 수율, 97.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 618.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.37 - 7.29 (m, 1H), 7.23 - 7.18 (m, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.58 - 6.46 (m, 1H), 6.32 (dd, J = 0.8, 16.4 Hz, 1H), 5.76 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 - 4.37 (m, 1H), 4.28 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.09 - 3.96 (m, 4H), 3.89 (br d, J = 12.4 Hz, 2H), 3.69 - 3.41 (m, 1H), 3.33 - 2.51 (m, 12H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.00 - 1.80 (m, 3H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 340
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(4-메톡시피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (25.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (580 mg, 1.23 mmol, 1.0 eq), 3-브로모-4-메톡시-피리딘 (694 mg, 3.69 mmol, 3.0 eq), Pd2(dba)3 (113 mg, 123 umol, 0.1 eq), RuPhos (115 mg, 246 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (1.20 g, 3.69 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거하고, 물 (20.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (2 × 30.0 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0-70% MeCN]로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (2 × 50.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 397 umol, 32% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 579.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 605 umol, 1.0 eq)의 용액에 4M HCl/디옥산 (5.0 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축하고, 그 다음 DCM (10.0 mL)로 추출하고, 유기층을 포화 NaHCO3 수성물 (2 × 10.0 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (260 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 479.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (260 mg, 543 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TEA (220 mg, 2.17 mmol, 302 uL, 4.0 eq) 및 프로프-2-에노일 클로라이드 (63.9 mg, 706 umol, 57.6 uL, 1.3 eq)을 -60℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 -60℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (2.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트=3:1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04%NH3H2O)-ACN]; B%: 30%-54%,10분)으로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그 다음 동결건조 하에서 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(4-메톡시-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 340, 83.6 mg, 155 umol, 29% 수율, 98.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 533.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.25 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 6.82 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.38 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 6.44 - 6.33 (m, 1H), 5.82 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.21 - 4.52 (m, 1H), 4.37 (dd, J = 4.8 Hz, 10.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.26 (m, 1H), 4.24 - 4.13 (m, 2H), 4.06 (br d, J=13.6 Hz, 1H), 4.02 - 3.88 (m, 5H), 3.72 - 3.37 (m, 2H), 3.36 - 3.23 (m, 2H), 3.16 - 3.02 (m, 2H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.87 - 2.72 (m, 3H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.27 (m, 1H), 2.10 - 1.99 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 3H).
실시예 341
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
[(2 S )-1-[2-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시에틸 ] 피롤리딘 -2-일]메탄올. MeCN (30 mL) 중 [(2S)-피롤리딘-2-일]메탄올 (500 mg, 4.94 mmol, 481 uL, 1 eq) 및 2-브로모에톡시-tert-부틸-디메틸-실란 (1.30 g, 5.44 mmol, 1.1 eq)의 혼합물에 K2CO3 (3.42 g, 24.7 mmol, 5 eq)을 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올 = 100/1 내지 5/1)로 정제했다. 화합물 [(2S)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸] 피롤리딘-2-일]메탄올 (437 mg, 1.68 mmol, 34.0% 수율)을 갈색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.71 (dd, J = 5.2, 6.4 Hz, 2H), 3.63 - 3.58 (m, 1H), 3.37 (dd, J = 3.2, 10.8 Hz, 1H), 3.21 (td, J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 2.90 (td, J = 6.4, 12.8 Hz, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 1H), 2.52 (td, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 1H), 1.79 - 1.55 (m, 3H), 0.92 - 0.87 (m, 9H), 0.11 - 0.00 (m, 6H).
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[2-[[(2 S )-1- [2-[ tert -부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (35 mL) 중 [(2S)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸] 피롤리딘-2-일]메탄올 (447 mg, 1.72 mmol, 2 eq)의 혼합물에 t-BuONa (248 mg, 2.58 mmol, 3 eq)을 나누어서 첨가하고, 그 다음 용액에 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 500 mg, 861 umol, 1 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 20 mL로 희석하고 0℃에서 2M HCl로 pH를 8-9로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (15 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 1/2)로 정제했다. 화합물 벤질 (2S)-4-[2-[[(2S)-1- [2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 494 umol, 57.4% 수율, 95.8% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 776.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-[2-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시에틸 ] 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (30 mL) 중 벤질 (2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[tert-부틸 (디메틸)실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (380 mg, 490 umol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (230 mg, 490 umol, 10% 순도, 1.00 eq) 및 NH3ㆍMeOH (25 mL)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시에틸] 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (314 mg, 489 umol, 99.9% 수율)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 642.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-[2-[ tert - 부틸(디메틸)실릴 ] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (15 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[tert-부틸(디메틸) 실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (314 mg, 489 umol, 1 eq)의 혼합물에 TEA (148 mg, 1.47 mmol, 204 uL, 3 eq) 및 프로프-2-에노일 클로라이드 (57.6 mg, 636 umol, 51.9 uL, 1.3 eq)을 -40℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 3 mL의 첨가로 -40℃에서 켄칭하고, 그 다음 DCM (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (15 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 1/3)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[tert-부틸(디메틸)실릴] 옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (210 mg, 300 umol, 61.4% 수율, 99.5% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 696.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-(2-하이드록시에틸) 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (3 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[2-[tert-부틸(디메틸) 실릴]옥시에틸]피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (205 mg, 295 umol, 1 eq)의 혼합물에 KF (171 mg, 2.95 mmol, 69.0 uL, 10 eq) 및 18-크라운-6 (779 mg, 2.95 mmol, 10 eq)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 45% - 75%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-(2-하이드록시에틸) 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 341, 43.4 mg, 71.6 umol, 24.3% 수율, 95.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
SFC: "OJ-3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.40 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.36 - 4.22 (m, 3H), 4.16 (dd, J = 6.8, 10.4 Hz, 2H), 4.01 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.72 - 3.55 (m, 3H), 3.53 - 3.26 (m, 3H), 3.24 - 2.68 (m, 10H), 2.62 (td, J = 4.0, 12.5 Hz, 1H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 3H).
실시예 342
2-[(2S)-1-[(E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일]-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (30.0 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.00 g, 5.57 mmol, 1.00 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4.00 M, 30.0 mL, 21.6 eq)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (4.00 mL)로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 (10.0 mL)로 pH > 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 메탄올/에틸 아세테이트 = 10/1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.10 g, 4.02 mmol, 72% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 439.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.30 (m, 5H), 5.25 - 5.14 (m, 2H), 4.66 (br s, 1H), 4.14 - 4.05 (m, 1H), 4.04 - 3.90 (m, 3H), 3.84 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.26 (br d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.12 (td, J = 5.2, 12.4 Hz, 1H), 3.05 - 2.91 (m, 2H), 2.79 (br s, 1H), 2.74 - 2.56 (m, 3H), 2.49 (s, 3H).
단계 B: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-[3- 플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐 -5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 4.56 mmol, 1.00 eq), 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (1.66 g, 6.84 mmol, 1.50 eq), Pd2(dba)3 (418 mg, 456 umol, 0.10 eq), RuPhos (426 mg, 912 umol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (2.97 g, 9.12 mmol, 2.00 eq)의 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (20.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 40.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 (5.00 mL)로 pH > 7로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 30.0 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3- 플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.00 g, 2.90 mmol, 64% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 601.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.53 - 7.44 (m, 1H), 7.43 - 7.29 (m, 5H), 7.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.00 - 6.91 (m, 1H), 5.26 - 5.13 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 3H), 4.04 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.87 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.39 - 3.22 (m, 3H), 3.19 - 3.09 (m, 1H), 3.04 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.83 (br s, 2H), 2.76 - 2.67 (m, 2H), 2.51 (s, 3H).
단계 C: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-[3- 플루오로 -2-(트리플루오로메틸)페닐]-2- 메틸설피닐 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. 에틸 아세테이트 (50.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.90 g, 3.16 mmol, 1.00 eq)의 용액에 m-CPBA (610 mg, 3.01 mmol, 85% 순도, 0.95 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (30.0 mL)로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 (10.0 mL)로 pH > 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 40.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/3)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.20 g, 1.73 mmol, 55% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 617.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.44 - 7.33 (m, 5H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 - 6.94 (m, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.31 - 4.09 (m, 4H), 4.02 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 3.46 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.40 - 3.09 (m, 4H), 2.90 (br d, J = 2.8 Hz, 6H), 2.74 - 2.64 (m, 1H).
단계 D: 벤질 (2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (5.00 mL) 중 [(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (145 mg, 392 umol, 1.10 eq)의 용액에 t-BuONa (68.6 mg, 714 umol, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 그 다음 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.22 g, 357 umol, 1.00 eq)을 혼합물에 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (10.0 mL) 및 물 (10.0 mL)로 희석하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/3)로 정제하여 벤질 (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.18 g, 185 umol, 52% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 462.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4 -[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3로 메탄올 (30.0 mL)에 -78 ℃에서 15분 동안 거품을 일으켰다. 벤질 (2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.18 g, 195 umol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.10 g, 10% 순도)을 혼합물에 첨가했다. 40℃에서 1시간 동안 H2 하에서 15 psi에서 교반한 후, 촉매를 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4 -[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.13 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M/2+1]: 395.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-[ tert -부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (5 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (0.50 g, 3.03 mmol, 1.00 eq) 및 옥살릴 이염화물 (3.85 g, 30.31 mmol, 2.65 mL, 10.0 eq)의 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고 40℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 상기 잔류물 (93.0 mg, 조물질)을 디클로로메탄 (0.50 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80.0 mg, 조물질) 및 Py (80.3 mg, 1.02 mmol, 82.0 uL)의 혼합물에 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, N-메틸메탄아민 (69.4 mg, 508 umol, 77.9 uL)을 첨가하고 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)]로 정제했다. 원하는 분획을 포화 중탄산나트륨 (1 × 5.00 mL)으로 pH > 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.06 g, 48.05 umol, 2개의 단계 65% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 899.
단계 G: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-(디메틸아미노) 부트 -2- 에노일 ]-4-[7-[3 - 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐]-2-[[( 2 S ,4 R )-4- 하이드록시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시]- 6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (0.10 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.06 g, 66.7 umol, 1.00 eq), KF (38.8 mg, 667 umol, 15.6 uL, 10.0 eq) 및 18-크라운-6 (176 mg, 667 umol, 10.0 eq)의 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %/아세토니트릴)] 및 prep-HPLC 칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 30% - 60%, 12분으로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일]-4-[7-[3 -플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 342, 4.60 mg, 6.91 umol, 10% 수율, 99.2% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:661.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.52 - 7.44 (m, 1H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 - 6.90 (m, 2H), 6.46 (br d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 1H), 4.36 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.22 (dd, J = 5.6, 10.8 Hz, 1H), 4.16 - 4.06 (m, 3H), 3.96 (br d, J = 11.6 Hz, 2H), 3.60 (br s, 1H), 3.43 (dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.39 - 3.23 (m, 2H), 3.20 - 3.05 (m, 4H), 3.05 - 2.79 (m, 4H), 2.78 - 2.62 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 7H), 2.12 - 1.92 (m, 2H).
실시예 343
(S)-7-(2,3-디메틸페닐)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(4-(비닐설포닐)피페라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘
단계 A: 7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-[[(2S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘. 디옥산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 652 umol, 1.0 eq)의 용액에 4M HCl/디옥산 (5.0 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축하고, 그 다음 DCM (10.0 mL)을 첨가하고, 유기층을 포화 NaHCO3 수성물 (2 × 10.0 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (280 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 437.
단계 B: 7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-[[(2 S )- 메틸피롤리딘 - 2-일] 메톡시 ]-4-(4- 비닐설포닐피페라진 -1-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘. DCM (5.0 mL) 중 7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (280 mg, 641 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TEA (195 mg, 1.92 mmol, 268 uL, 3.0 eq) 및 에텐설포닐 클로라이드 (122 mg, 962 umol, 1.5 eq)을 -60℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 -60℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH(1.0 mL)로 켄칭하고, 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트=3:1~에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 62%-92%, 12분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-4-(4-비닐설포닐피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (실시예 343, 98.2 mg, 185 umol, 29% 수율, 99.3% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 527.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.12 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 - 6.94 (m, 2H), 6.47 (dd, J = 10.0 Hz, 16.8 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 6.11 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.15 (dd, J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.62 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.30 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.19 - 3.05 (m, 3H), 2.80 - 2.62 (m, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.32 - 2.25 (m, 7H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.72 (m, 3H).
실시예 344
2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15 mL) 중 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (101 mg, 874 umol, 1.2 eq)의 용액에 t-BuONa (140 mg, 1.46 mmol, 2 eq)을 0℃에서 10분 하에서 첨가하고, 그 다음 상기 혼합물에 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 500 mg, 728 umol, 1 eq)의 용액을 0℃에서 적가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 H2O (1 × 7 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (1 × 25 mL)로 추출했다. 유기상을 분리하고, 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3; 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 0/1)로 정제했다. 화합물 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (390 mg, 489 umol, 67% 수율, 92.6% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 738.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.46 - 7.34 (m, 10H), 7.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.24 - 5.15 (m, 4H), 4.70 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.7 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 2H), 4.20 - 4.11 (m, 3H), 3.93 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.56 - 3.19 (m, 4H), 3.14 - 2.61 (m, 7H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.84 - 1.69 (m, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 MeOH (100 mL)에 -60℃에서 20분 동안 거품을 일으켰다. MeOH (25 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (360 mg, 488 umol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (300 mg, 10% 순도)을 첨가하고 상기 용액 (NH3ㆍMeOH, 25 mL)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 514.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (8 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2R) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 조물질) 및 TEA (453 mg, 4.48 mmol, 623 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 클로라이드 (40.5 mg, 448 umol, 36.5 uL)을 -40℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 용액 (2 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 30 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3; 에틸 아세테이트/메탄올 = 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 38% - 68%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1- 나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 344, 25.6 mg, 44.8 umol, 2개의 단계 9.2% 수율, 99.5% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 568.
SFC 조건: "AS-3_MeOH (DEA) _5_40_3mL-35T 칼럼: Chiralpak AS-3 50Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400 MHz, 아세트산) δ = 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.90 - 6.68 (m, 2H), 6.38 (br d, J = 17.6 Hz, 1H), 5.87 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.17 (br s, 1H), 4.82 (br s, 2H), 4.59 (br s, 1H), 4.45 - 4.25 (m, 3H), 4.21 - 3.61 (m, 4H), 3.60 - 3.19 (m, 5H), 3.17 - 2.83 (m, 7H), 2.45 - 2.31 (m, 1H), 2.23 - 2.10 (m, 3H).
실시예 345
2-[(2S)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.48 mmol, 1.0 eq), 4-클로로-3-메틸-피리딘 (379 mg, 2.97 mmol, 2.0 eq), Pd2(dba)3 (204 mg, 223 umol, 0.15 eq), RuPhos (139 mg, 297 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (1.45 g, 4.45 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거하고, 물 (15.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3Х25.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (60.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0-45% MeCN]로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3Х50.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 tert-부틸(2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (270 mg, 475 umol, 32% 수율, 99.0% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:563.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 355 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl·디옥산 (4 M, 3.0 mL, 33.8 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3×15.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (125 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]:463.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (125 mg, 조물질)의 용액에 TEA (137 mg, 1.35 mmol, 188 uL) 및 프로프-2-에노일 클로라이드 (36.7 mg, 405 umol, 33.1 uL)을 -60℃에서 첨가했다. 혼합물을 -60℃에서 30분 동안 교반했다. 반응을 메탄올 (10.0 mL)로 켄칭하고 혼합물을 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 32%-62%, 12분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-메틸-4-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 345, 25.3 mg, 48.4 umol, 18% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:517.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.33 - 8.29 (m, 2H), 6.83 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.65 - 6.50 (m, 1H), 6.38 (dd, J = 1.6 Hz, J = 16.8 Hz,1H), 5.82 (d, J = 10.8 Hz 1H), 5.41 (br s, 1H), 4.36 (dd, J = 4.8 Hz, J = 10.4 Hz,1H), 4.20 - 4.06 (m, 4H), 4.97 (br d, J = 11.6 Hz 2H),3.68 - 3.45 (m, 1H), 3.40 - 3.31 (m, 2H),3.26 - 3.15 (m, 1H),3.15 - 3.03 (m, 2H), 2.97 - 2.60 (m, 5H), 2.31 (s, 3H), 2.29 -2.21 (m, 3H) 2.15 - 2.10 (m, 1H), 2.09 - 2.00 (m, 1H) 1.88 - 1.70 (m, 3H).
실시예 346
2-[4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: DCM (5.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (1.0 g, 6.06 mmol, 1.0 eq)의 용액에 (COCl)2 (8.70 g, 68.5 mmol, 6 mL, 11.3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 조 생성물 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (1.3 g, 조물질)을 황색 액체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.30 g, 2.17 mmol, 1.0 eq) 및 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (500 mg, 4.34 mmol, 515 uL, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (417 mg, 4.34 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 염수 (30 mL)의 첨가로 20℃에서 켄칭하고, EA (3×30.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 EA/MeOH = 10/1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.10 g, 1.62 mmol, 75% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d] 피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 308 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2.0 mL, 26.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3×20.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (130 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]:551.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 1812 umol, 1.0 eq) 및 피리딘 (115 mg, 1.45 mmol, 117 uL, 8.0 eq)의 용액에 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (133 mg, 727 umol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 개시 물질이 소비된 후, 모폴린 (79.2 mg, 909 umol, 80.0 uL, 5.0 eq)을 상기 혼합물에 첨가하고 0℃에서 3.5시간 동안 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3×15.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 346, 21.7 mg, 30.6 umol, 16.9% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 703.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 (t, J = 8.0 Hz, J = 8.0 Hz 1H), 7.28 (s, 1H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.00 - 6.93(m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.57 - 6.40 (m, 1H), 5.18 - 5.03 (m, 1H), 4.38 (dd, J = 4.8 Hz, J = 10.4 Hz,1H), 4.16 (d d, J = 6.8 Hz, J = 10.4 Hz, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 3H), 4. 04 - 3.88 (m, 2H), 3.74 (t, J = 4.4 Hz, J = 4.8 Hz, 4H), 3.52 (br s, 1H), 3.41 - 3.23 (m, 2H), 3.18 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 3.12 - 3.08 (m, 2H),2.95 - 2.85 (m, 2H), 2.30 - 2.15 (m, 3H), 2.55 - 2.45 (m, 7H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 3H).
실시예 347
2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-피롤리딘-1-일부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: ( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 클로라이드. (COCl)2 (14.5 g, 114 mmol, 10.0 mL, 18.9 eq) 및 DCM (10.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (1.00 g, 6.06 mmol, 1.00 eq)을 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (1.00 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 조 화합물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-[3- 클로로 -2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.08 mmol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 7.0 mL, 26.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축시키고 포화 NaHCO3 수성물로 pH~7로 조정하고, 그 다음 EA (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로 -2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 669 umol, 62% 수율, 92% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 550.
단계 B: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 브로모부트 - 2-에노일]-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 364 umol, 1.00 eq) 및 피리딘 (230 mg, 2.91 mmol, 235 uL, 8.0 eq)의 용액에 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (267 mg, 1.45 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 DCM (10.0 mL × 2)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트- 2-에노일]-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[(2 S) -4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-피롤리딘-1-일부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. THF (2.0 mL) 중 파이롤리딘 (306 mg, 4.30 mmol, 359 uL, 10.0 eq), K2CO3 (297 mg, 2.15 mmol, 5.0 eq) 및 KI (21.4 mg, 129 umol, 0.30 eq)의 용액에 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 430 umol, 1.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (10.0 mL)을 혼합물에 첨가하고 DCM (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 70%-100%, 3분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-피롤리딘-1-일부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 347, 17.1 mg, 24.5 umol, 2개의 단계 7% 수율, 99% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 687.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.41 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.06 - 6.95 (m, 1H), 6.47 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 5.20 - 4.60 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 4H), 3.97 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.42 - 3.23 (m, 3H), 3.21 - 3.04 (m, 3H), 2.96 - 2.86 (m, 2H), 2.79 - 2.64 (m, 5H), 2.62 - 2.54 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.83 - 1.70 (m, 7H).
실시예 348
2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: t ert -부틸 (2 R )-2-[(1 R )-1-하이드록시에틸] 파이롤리딘 -1- 카복실레이트. THF (10 mL) 중 BH3ㆍMe2S (DMS 중 10 M, 610 uL, 1.3 eq) 및 (3aS)-1-메틸-3,3-디페닐-3a,4,5,6-테트라하이드로피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤 (툴루엔 중 1 M, 938 uL, 0.2 eq)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 THF (10 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-아세틸파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.00 g, 4.69 mmol, 1 eq)의 용액을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 MeOH (4 mL)로 켄칭하고, 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE/EtOAC = 50/1 내지 5/1)로 정제했다. tert-부틸 (2R)-2-[(1R)-1-하이드록시에틸]파이롤리딘-1- 카복실레이트 (690 mg, 3.21 mmol, 68% 수율)을 백색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 5.19 (br s, 1H), 3.79 - 3.59 (m, 2H), 3.49 (br s, 1H), 3.35 - 3.18 (m, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.88 - 1.68 (m, 3H), 1.47 (d, J = 0.8 Hz, 9H), 1.20 - 1.11 (m, 3H).
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1 R )-1-[(2 R )-1- tert -부톡시카보닐피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-[(1R)-1-하이드록시에틸]파이롤리딘-1 -카복실레이트 (263 mg, 1.22 mmol, 1.2 eq)의 용액에 t-BuONa (196 mg, 2.04 mmol, 2 eq)을 0℃에서 10분 동안 첨가했다. 상기 혼합물에 톨루엔 (15 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.02 mmol, 1 eq)을 0℃에서 적가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물에 H2O (1 × 7 mL) 및 에틸 아세테이트 (1 × 35 mL)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 pH = 7로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 × 100 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (470 mg, 536 umol, 53% 수율, 95.6% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 838.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 10H), 7.00 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.78 - 5.44 (m, 1H), 5.30 - 5.08 (m, 4H), 4.70 (br s, 1H), 4.35 - 4.20 (m, 3H), 4.08 - 3.79 (m, 2H), 3.72 - 3.13 (m, 7H), 3.12 - 2.64 (m, 4H), 2.01 - 1.71 (m, 5H), 1.46 (s, 9H), 1.26 - 1.23 (m, 3H).
단계 B: 벤질 (2 S )-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1 R )-1-[(2 R )-피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. DCM (600 uL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R) -1-[(2R)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 537 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (918 mg, 8.05 mmol, 596 uL, 15 eq)을 0℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 C: 벤질 (2 S )-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1 R )-1-[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. MeOH (15 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1- [(2R)-피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 763 umol, 1 eq, TFA), 포름알데하이드 (310 mg, 3.81 mmol, 284 uL, 5 eq, 물 중 37%) 및 AcOH (45.8 mg, 763 umol, 43.6 uL, 1 eq)의 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 NaBH3CN (120 mg, 1.91 mmol, 2.5 eq)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 15 mL)로 추출하고, 염수 (1 × 15 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 pH = 7로 중화하고 에틸 아세테이트 (2 × 50 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 339 umol, 2개의 단계 68% 수율, 97.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1 R )-1-[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 MeOH (100 mL)에 - 60℃에서 20분 동안 거품을 일으켰다. MeOH (15 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘 -2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 346 umol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (200 mg, 10% 순도)을 첨가하고 상기 혼합물 (NH3ㆍMeOH, 15 mL)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 300 umol, 87% 수율, 88.0% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 528.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1 R )-1-[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (8 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1- [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 341 umol, 1 eq) 및 TEA (345 mg, 3.41 mmol, 475 uL, 10 eq)의 혼합물에 프로프-2-에노일 클로라이드 (30.9 mg, 341 umol, 27.8 uL, 1 eq)을 -40℃에서 나누어서 첨가하고 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 용액 (2 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 30 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3; 에틸 아세테이트/메탄올 = 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 42% - 72%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 348, 23.5 mg, 39.9 umol, 12% 수율, 99.0% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
SFC 조건: "OJ-3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 1H), 6.98 - 6.74 (m, 3H), 6.31 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.85 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.27 - 5.15 (m, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.33 - 4.00 (m, 5H), 3.75 - 3.38 (m, 2H), 3.27 - 2.81 (m, 7H), 2.75 - 2.62 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.47 - 2.31 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 1H), 1.86 - 1.69 (m, 3H), 1.34 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시예 349
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2,6-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 1: 2 - 브로모 -6- 플루오로 -3- 메틸 - 벤즈알데하이드. THF (200 mL) 중 2-브로모-4-플루오로-1-메틸-벤젠 (10 g, 52.9 mmol, 1 eq)의 용액에 LDA (톨루엔 중 2 M, 31.7 mL, 1.2 eq)을 -78 ℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. -78 ℃에서 2시간 동안 교반한 후, DMF (4.64 g, 63.5 mmol, 4.88 mL, 1.2 eq)의 용액을 -78 ℃에서 첨가했다. 혼합물을 주의하여 25℃까지 가온시키고 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (5 mL)로 켄칭하고 혼합물을 석유 에테르/에틸 아세테이트 (50 mL/5 mL) 및 물 (50 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-브로모-6-플루오로-3-메틸- 벤즈알데하이드 (11.5 g, 52.9 mmol, 100% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
단계 2: (2- 브로모 -6- 플루오로 -3- 메틸 -페닐)메탄올. MeOH (100 mL) 중 2-브로모-6-플루오로-3-메틸-벤즈알데하이드 (11.5 g, 52.9 mmol, 1 eq)의 용액에 NaBH4 (2.20 g, 58.2 mmol, 1.1 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 0℃에서 물로 켄칭하고 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 50/1 내지 3/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 (2-브로모-6-플루오로-3-메틸-페닐)메탄올 (8.5 g, 38.4 mmol, 73% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M-17]: 201.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.20 (dd, J = 6.4, 8.4 Hz, 1H), 6.98 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.88 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.35 - 2.11 (m, 1H).
단계 3: 3 - 브로모 -2-( 브로모메틸 )-1- 플루오로 -4- 메틸 -벤젠. THF (100 mL) 중 (2-브로모-6-플루오로-3-메틸-페닐)메탄올 (5 g, 22.8 mmol, 1 eq)의 혼합물에 PBr3 (12.4 g, 45.6 mmol, 2 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고 빙수 (1 × 50 mL), 10% 수성 중탄산나트륨 용액 (2 × 50 mL) 및 염수 (1×20 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)로 정제했다. 화합물 3-브로모-2-(브로모메틸)-1- 플루오로-4-메틸-벤젠 (5.6 g, 19.9 mmol, 87% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.20 (dd, J = 6.4, 8.0 Hz, 1H), 6.97 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H).
단계 4: 3 - 브로모 -1- 플루오로 -2,4-디메틸-벤젠. DMF (50 mL) 중 3-브로모-2-(브로모메틸)-1-플루오로-4- 메틸-벤젠 (5.6 g, 19.9 mmol, 1 eq)의 용액에 NaBH4 (1.50 g, 39.7 mmol, 2 eq) 및 AgNO3 (6.75 g, 39.7 mmol, 6.68 mL, 2 eq)을 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 화합물 3-브로모-1-플루오로-2,4-디메틸-벤젠 (2.1 g, 9.93 mmol, 50% 수율, 96% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.05 (dd, J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.35 (d, J = 2.4 Hz, 3H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 1.06 mmol, 1 eq), 3-브로모-1-플루오로-2,4-디메틸- 벤젠 (430 mg, 2.12 mmol, 2 eq), RuPhos-Pd-G3 (177 mg, 212 umol, 0.2 eq), Cs2CO3 (863 mg, 2.65 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올 = 100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (20 mg, 28.6 umol, 3% 수율, 85% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 594.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (100 uL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-플루오로- 2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (20 mg, 33.7 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (57.6 mg, 505 umol, 37.4 uL, 15 eq)을 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (20.5 mg, 33.7 umol, 100% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸- 페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (20.5 mg, 33.7 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (34.1 mg, 337 umol, 46.9 uL, 10 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 그 다음 DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 클로라이드 (3.05 mg, 33.7 umol, 2.75 uL, 1 eq)을 적가하고 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (0.1 mL)으로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150 * 25 * 10um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 16% - 43%, 9분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-플루오로-2,6-디메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 349, 0.39 mg, 0.693 umol, 2% 수율, 97.3% 순도)을 무색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 548.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.06 - 6.92 (m, 1H), 6.84 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.70 - 6.49 (m, 1H), 6.42 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.39 - 4.27 (m, 1H), 4.25 - 3.83 (m, 5H), 3.75 - 3.22 (m, 5H), 3.19 - 2.47 (m, 10H), 2.34 - 2.21 (m, 6H), 2.21 - 1.89 (m, 4H).
실시예 350
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-하이드록시나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (50 mL) 중 3-벤질옥시-1-브로모-나프탈렌 (중간체 29, 1.01 g, 3.21 mmol, 1.3 eq), tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 1 g, 2.47 mmol, 1 eq), Cs2CO3 (2.01 g, 6.18 mmol, 2.5 eq), RuPhos (230 mg, 494 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (452 mg, 494 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 3/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1- 나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.2 g, 1.71 mmol, 69% 수율, 91% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 637.
단계 B: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설피닐 -6,8-디하이드로-5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]-2-( 시아노메틸 )피페라진-1- 카복실레이트. 에틸 아세테이트 (50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1- 나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.2 g, 1.88 mmol, 1 eq)의 용액에 m-CPBA (382 mg, 1.88 mmol, 85% 순도, 1 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 수용액 (20 mL)으로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.30 mmol, 69% 수율, 94% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 653.
단계 C: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(3- 벤질옥시 -1- 나프틸 )-2-[[(3 R )-1- 메틸 피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (793 mg, 1.22 mmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (350 mg, 3.65 mmol, 3 eq) 및 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (420 mg, 3.65 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 0/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸 피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 944 umol, 78% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 704.
단계 D: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸 )-2- [[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. NH3으로 MeOH (100 mL)에 - 60℃에서 10분 동안 거품을 일으켰다. MeOH (20 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(3-벤질옥시-1-나프틸)-2-[[(3R) -1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 994 umol, 1 eq)의 용액에 건조 Pd/C (300 mg, 10% 순도)을 첨가하고 상기 NH3ㆍMeOH 용액 (20mL)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2- [[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 619 umol, 62% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 614.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.57 (br s, 1H), 4.36 - 4.22 (m, 2H), 4.17 - 4.14 (m, 1H), 4.02 (br d, J = 13.6 Hz, 2H), 3.85 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.47 - 3.08 (m, 3H), 3.07 - 2.64 (m, 12H), 2.56 (s, 3H), 2.27 - 2.14 (m, 1H), 1.89 - 1.75 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (500 uL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3- 하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 651 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (743 mg, 6.52 mmol, 482 uL, 10 eq)을 첨가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (409 mg, 조물질, TFA)을 갈색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 514.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[7-(3- 하이드록시 -1- 나프틸 )-2-[[(3 R )-1- 메틸피롤리딘 - 3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)- 2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (409 mg, 651 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (659 mg, 6.52 mmol, 907 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 클로라이드 (53.1 mg, 586 umol, 47.8 uL, 0.9 eq)을 -40℃에서 적가했다. 수득한 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 5/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 11% - 41%, 10분)로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 8로 조정하고 디클로로메탄 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘- 3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 350, 25.5 mg, 39.9 umol, 6% 수율, 89% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 568.
1H NMR (400MHz, 아세트산-d4) δ = 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.75 (br s, 1H), 6.38 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.23 - 5.01 (m, 1H), 4.98 - 4.49 (m, 4H), 4.43 (s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.23 - 4.00 (m, 1H), 3.99 - 3.51 (m, 5H), 3.50 - 3.23 (m, 4H), 3.17 - 2.91 (m, 8H), 2.63 - 2.24 (m, 1H).
실시예 351
2-[(2S)-4-[2-(1H-이미다졸-2-일메톡시)-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 에틸 1- 테트라하이드로피란 -2- 일이미다졸 -2- 카복실레이트. THF (100 mL) 중 에틸 1H-이미다졸-2-카복실레이트 (5 g, 35.7 mmol, 1 eq), DHP (33.0 g, 392 mmol, 35.9 mL, 11.0 eq) 및 PTSAㆍH2O (400 mg, 2.32 mmol, 6.51e-2 eq)의 혼합물을 60℃ (오일 배쓰 온도)에서 16시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하고 그 다음 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 20/1 내지 1/1)로 정제하여 에틸 1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-카복실레이트 (6.2 g, 26.0 mmol, 73% 수율, 94% 순도)을 밝은 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.21 (dd, J = 2.0, 10.0 Hz, 1H), 4.39 (dq, J = 0.8, 7.2 Hz, 2H), 4.20 - 4.10 (m, 1H), 3.71 (dt, J = 2.8, 11.6 Hz, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.03 - 1.88 (m, 1H), 1.80 - 1.55 (m, 4H), 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2: (1- 테트라하이드로피란 -2- 일이미다졸 -2-일)메탄올. THF (40 mL) 중 에틸 1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-카복실레이트 (2 g, 8.92 mmol, 1 eq)의 용액에 LiAlH4 (758 mg, 20.0 mmol, 2.24 eq)을 0℃에서 세 부분으로 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 Na2SO4 (2.89 mL)로 켄칭하고, 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 내지 10/1)로 정제하여 (1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메탄올 (1.57 g, 7.75 mmol, 87% 수율, 90% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 7.27 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.54 (dd, J = 2.4, 10.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.61 (m, 2H), 4.15 - 3.99 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 1H), 2.06 - 1.88 (m, 3H), 1.84 - 1.60 (m, 3H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (0.4 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-메틸설피닐-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 64, 380 mg, 654 umol, 1 eq) 및 (1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메탄올 (238 mg, 1.31 mmol, 2 eq)의 용액에 t-BuONa (126 mg, 1.31 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (SiO2, PE/EtOAc 3/1 내지 1/3)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (270 mg, 363.19 umol, 56% 수율, 94% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 699.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. NH3으로 MeOH (3 mL)에 -40℃에서 10분 동안 거품을 일으켰다. MeOH (3 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 372 umol, 1 eq)의 용액을 상기 용액에 첨가하고, 그 다음 Pd/C (100 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 6회 퍼지했다. 반응을 H2 (15 Psi) 하에서 28℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (160 mg, 275 umol, 74% 수율, 97% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 565.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(1- 나프틸 )-2-[(1- 테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (160 mg, 283 umol, 1.00 eq) 및 DIEA (73.2 mg, 567 umol, 98.7 uL, 2.00 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 클로라이드 (38.5 mg, 425 umol, 34.7 uL, 1.50 eq)을 -40℃에서 적가했다. 혼합물을 -40℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 시, 상기 혼합물에 포화 수성 NaHCO3 (1 mL) 및 물 (3 mL)을 첨가했다. 층을 분리했다. 수성상을 EtOAc (2 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 50/1 내지 10/1)로 정제하여 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1- 테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (80 mg, 101 umol, 36% 수율, 78% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 619.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-(1 H -이미다졸-2- yl메톡시)-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. MeCN (1.5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-2-[(1-테트라하이드로피란-2-일이미다졸-2-일)메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (67 mg, 84.5 umol, 1 eq) 및 TsOHㆍH2O (48.2 mg, 253 umol, 3 eq)의 용액을 60℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (1 mL)로 0℃에서 켄칭했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% NH3ㆍH2O)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: PhenomenexSynergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 20% - 50%, 10.5분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-(1H-이미다졸-2- yl메톡시)-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 351, 2.55 mg, 4.22 umol, 5.4% 수율, 96% 순도, FA)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 535.
SFC 조건: 칼럼: Chiralpak AS-3 50Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.26 - 8.20 (m, 1H), 7.92 - 7.82 (m, 1H), 7.63 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.17 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.08 - 6.99 (m, 2H), 6.69 - 6.52 (m, 1H), 6.46 - 6.32 (m, 1H), 5.84 (br d, J=11.2 Hz, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 2H), 5.24 - 4.90 (m, 1H), 4.88 - 4.14 (m, 4H), 4.14 - 3.79 (m, 2H), 3.79 - 3.37 (m, 3H), 3.35 - 2.64 (m, 4H), 2.61 - 2.49 (m, 1H).
실시예 352
2-[(2S)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
3- 브로모 -4- 사이클로프로필 -피리딘. DMF (15.0 mL) 및 H2O (3.0 mL) 중 3,4-디브로모피리딘 (3.0 g, 12.7 mmol, 1.0 eq), 사이클로프로필붕산 (1.09 g, 12.7 mmol, 1.0 eq), Pd(dppf)Cl2 (927 mg, 1.27 mmol, 0.10 eq), K3PO4 (8.06 g, 38.0 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 물 (80.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3×100 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (300 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2 , 석유 에테르 : 에틸 아세테이트=30 : 1 내지 20 : 1)로 정제했다. 화합물 3-브로모-4-사이클로프로필-피리딘 (630mg, 3.17 mmol, 25% 수율, 99.6% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 198.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.69 - 8.61 (m, 1H), 8.39 - 8.32 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 2.29 - 2.18 (m, 1H), 1.20 - 1.12 (m, 2H), 0.84 - 0.77 (m, 2H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 500 mg, 1.06 mmol, 1.0 eq), 3-브로모-4-사이클로프로필-피리딘 (315 mg, 1.59 mmol, 1.50 eq), Pd2(dba)3 (97.09 mg, 106 umol, 0.10 eq), RuPhos (99.0 mg, 212 umol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (1.04 g, 3.18 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하고 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 물 (15.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3Х20 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [물 중 C18, 0.1% NH3ㆍH2O, 0-60% MeCN]로 정제했다. 수득된 생성물을, 그 다음 농축하고, 수성물을 EA (3Х50 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 260 umol, 24.5% 수율, 85% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:589.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (30.0 mg, 43.3 umol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 1.0 mL, 92.4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하고 N2 분위기 하에서 교반했다. 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3Х10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (30.0 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 489.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.50 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (30.0 mg, 61.4 umol, 1.0 eq)의 용액에 TEA (31.1 mg, 307 umol, 42.7 uL, 5.0 eq) 및 프로프-2-에노일 클로라이드 (8.34 mg, 92.1 umol, 7.51 uL, 1.50 eq)을 -60℃에서 첨가했다. 혼합물을 -60℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응을 메탄올 (6.0 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 33%-63%, 12분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(4-사이클로프로필-3-피리딜)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 352, 2.71 mg, 4.97 umol, 8.1% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 543.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.29 (s 1H), 8.26 (d, J=5.2 Hz, 1H), 6.68 (d, J=5.2 Hz, 1H), 6.64 - 6.53 (m, 1H), 6.40 (dd, J=0.8 Hz, J=16.8 Hz, 1H), 5.52 (d, J=10.4 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.39 (dd, J=4.8 Hz, J=10.4 Hz, 1H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.21 - 4.15 (m, 2H), 4.13 - 4.07 (m, 1H), 4.00 - 3.95 (m, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.44 - 3.24 (m, 4H), 3.17 - 3.03 (m, 2H), 2.94 (dd, J=8.8 Hz, J=16.8 Hz, 1H), 2.87 - 2.80 (m, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 3H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.89 - 1.76 (m, 3H),1.17 - 1.11 (m, 2H), 0.90 - 0.77 (m, 3H).
실시예 353
1-[(3R)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (3 R )-4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트. NMP (30 mL) 중 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (1.5 g, 5.10 mmol, 1 eq), tert-부틸 (3R)-3-메틸피페라진-1-카복실레이트 (1.12 g, 5.61 mmol, 1.1 eq), DIEA (1.32 g, 10.2 mmol, 1.78 mL, 2 eq)의 용액을 100℃에서 7시간 동안 교반했다. 물 (90 mL)을 혼합물에 첨가했다. 수득한 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (40 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 (PE: EtOAc = 3:1, 20 mL)로 슬러리화하고 여과하고 필터 케이크를 (PE: EtOAc = 3:1, 40 mL)로 세정하여 tert-부틸 (3R)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (0.9 g, 1.73 mmol, 34 % 수율, 88.0 % 순도)을 회색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 458.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.38 - 7.27 (m, 5H), 4.28 - 4.18 (m, 1H), 4.16 - 3.80 (m, 2H), 3.74 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.65 - 3.52 (m, 2H), 3.41 - 3.27 (m, 1H), 3.21 - 2.89 (m, 2H), 2.74 - 2.58 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: tert -부틸 (3 R )-4-[7- 벤질 -2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트. THF (20 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (566 mg, 4.91 mmol, 583 uL, 2.5 eq)의 용액에 NaH (157 mg, 3.93 mmol, 60.0 % 순도, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (3R)-4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.97 mmol, 1 eq)을 혼합물에 첨가했다. 반응 혼합물을 N2 하 튜브에서 12시간 동안 70℃로 가열했다. 혼합물을 물 (15 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (40 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 35 %)로 정제하여 tert-부틸 (3R)-4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (680 mg, 1.14 mmol, 58 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 537.
단계 C: tert -부틸 (3 R )-3-메틸-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (14 mL) 중 tert-부틸 (3R)-4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-메틸-피페라진-1-카복실레이트 (680 mg, 1.27 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (340 mg, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (3 × 10 mL)로 세정하고, 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (3R)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (540 mg, 1.09 mmol, 86 % 수율, 90.0 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 D: tert -부틸 (3 R )-3- 메틸 -4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (11 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (520 mg, 1.16 mmol, 1 eq), 1-브로모나프탈렌 (482 mg, 2.33 mmol, 324 uL, 2 eq), RuPhos (109 mg, 233 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (1.14 g, 3.49 mmol, 3 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (107 mg, 116 umol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 105℃에서 7시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (5:1 내지 0:1의 PE: EtOAc)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 61 %)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (3R)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (330 mg, 547 umol, 47 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 573.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.26 - 8.18 (m, 1H), 7.89 - 7.84 (m, 1H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.41 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (s, 3H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 4.03 - 3.68 (m, 2H), 3.45 - 3.00 (m, 6H), 2.84 (br s, 2H), 2.69 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.91 - 1.70 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.32 - 1.27 (m, 3H).
단계 E: 4-[(2 R )-2- 메틸피페라진 -1-일]-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘. tert-부틸 (3R)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (330 mg, 576 umol, 1 eq) 및 TFA (657 mg, 5.76 mmol, 427 uL, 10 eq)의 혼합물을 30℃에서 40분 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-[(2R)-2-메틸피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (340 mg, 조물질, TFA)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 F: 1-[(3 R )-3-메틸-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (6 mL) 중 4-[(2R)-2-메틸피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (340 mg, 조물질, TFA), TEA (586 mg, 5.80 mmol, 807 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 클로라이드 (78.7 mg, 869 umol, 70.9 uL)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (2 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL)로 추출했다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-85%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 1-[(3R)-3-메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 353, 85.5 mg, 162 umol, 2개의 단계 28 % 수율, 99.8 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 527.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.23 (br d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.70 - 6.52 (m, 1H), 6.37 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.77 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.66 - 4.31 (m, 3H), 4.27 (s, 2H), 4.14 (dd, J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.02 - 3.73 (m, 2H), 3.64 - 3.25 (m, 4H), 3.24 - 2.99 (m, 2H), 2.86 (br s, 2H), 2.74 - 2.63 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.28 (br d, J = 4.4 Hz, 3H).
실시예 354
1-[3,3-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4-(7- 벤질 -2- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-3,3-디메틸-피페라진-1-카복실레이트. 7-벤질-2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (1.5 g, 5.10 mmol, 1 eq) 및 tert-부틸 3,3-디메틸피페라진-1-카복실레이트 (4.37 g, 20.4mmol, 4 eq)의 용액을 130℃에서 22시간 동안 교반했다. 잔류물을 직접 사용하여 정제했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 10:1의 PE: EtOAc)로 정제했다. 그리고 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*80mm*10 um; 이동상: [물 (0.225 %FA) - ACN]; B%: 30 %-60 %, 35 min, 60 %분)로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1 g, 2.12 mmol, 42 % 수율, 100 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 472.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.39 - 7.28 (m, 5H), 4.01 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.55 - 3.44 (m, 6H), 2.78 - 2.66 (m, 4H), 1.51 (s, 6H), 1.48 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 4-[7- 벤질 -2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,3-디메틸-피페라진-1-카복실레이트. THF (20 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (610 mg, 5.30 mmol, 629 uL, 2.5 eq)의 용액에 NaH (169 mg, 4.24 mmol, 60 % 순도, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,3-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (1 g, 2.12 mmol, 1 eq)을 혼합물에 첨가했다. 반응 혼합물을 N2 하 튜브에서 12시간 동안 70℃로 가열했다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 25 %-50 %,30;79 %분)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,3-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (980 mg, 1.69 mmol, 80 % 수율, 95.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 551.
단계 C: tert -부틸 3,3-디메틸-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (20 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3,3-디메틸-피페라진-1-카복실레이트 (980 mg, 1.78 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (500 mg, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 4시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (3 × 10 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 3,3-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (780 mg, 1.69 mmol, 95 % 수율, 100 % 순도)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 461.
단계 D: tert -부틸 3,3-디메틸-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8 mL) 중 tert-부틸 3,3-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 868 umol, 1 eq), 1-브로모나프탈렌 (360 mg, 1.74 mmol, 241 uL, 2 eq), Cs2CO3 (849 mg, 2.61 mmol, 3 eq) 및 RuPhos (81.0 mg, 174 umol, 0.2 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (79.5 mg, 86.8 umol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 95℃에서 8시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 10:1 ~ 0:1)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1 % FA) = 52 %)로 정제하여 tert-부틸 3,3-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 340 umol, 39 % 수율, 95.0 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 587.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 (dd, J = 3.2, 6.4 Hz, 1H), 7.87 - 7.82 (m, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.39 - 4.27 (m, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 3H), 3.60 - 3.26 (m, 6H), 3.14 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.79 (br s, 2H), 2.74 - 2.65 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.70 (m, 4H), 1.58 (br d, J = 4.0 Hz, 6H), 1.49 (s, 9H).
단계 E: 4-(2,2-디메틸피페라진-1-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘. tert-부틸 3,3-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 358 umol, 1 eq) 및 TFA (408 mg, 3.58 mmol, 265 uL, 10 eq)의 용액을 30℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 4-(2,2-디메틸피페라진-1-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (210 mg, 조물질, TFA)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 F: 1-[3,3-디메틸-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (4 mL) 중 4-(2,2-디메틸피페라진-1-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (210 mg, 조물질, TFA) 및 TEA (531 mg, 5.24 mmol, 730 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 클로라이드 (47.5 mg, 524 umol, 42.8 uL)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (2 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL)로 추출했다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 73 %-100 %, 12분)로 정제하여 표제 화합물 1-[3,3-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 354, 104 mg, 189 umol, 53 % 수율, 98.6 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 541.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.26 - 8.18 (m, 1H), 7.85 (dd, J = 3.2, 6.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 3.2, 6.4 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 6.48 - 6.33 (m, 1H), 5.79 - 5.70 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 2H), 4.21 (br t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.17 - 4.06 (m, 3H), 3.80 (s, 1H), 3.78 - 3.69 (m, 2H), 3.61 (s, 1H), 3.39 (br s, 2H), 3.13 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.80 (br s, 2H), 2.73 - 2.65 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.09 - 1.99 (m, 1H), 1.94 - 1.68 (m, 3H), 1.62 (br s, 6H).
실시예 355
1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert-부틸 4-(7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카복실레이트. DMSO (20.0 mL) 중 7-벤질-4-클로로-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (5.0 g, 16.4 mmol, 1.0 eq) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (4.57 g, 24.5 mmol, 1.50 eq)의 용액에 DIEA (6.34 g, 49.1 mmol, 8.54 mL, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (200 mL)을 첨가하고 EA (200 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 염수 (500 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE : EA = 50:1 - 5:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일) 피페라진-1-카복실레이트 (7.0 g, 15.4 mmol, 93% 수율)을 밝은 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 456.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.27 (m, 5H), 3.68 (s, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.54 - 3.48 (m, 4H), 3.47 - 3.38 (m, 4H), 2.65 (s, 4H), 1.48 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트. DCE (100 mL) 중 tert-부틸 4-(7-벤질-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.0 g, 15.4 mmol, 1.0 eq) 및 DIEA (5.96 g, 46.1 mmol, 8.03 mL, 3.0 eq)의 용액에 1-클로로에틸 카보노클로리데이트 (5.49 g, 38.4 mmol, 2.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 농축했다. 잔류물을 MeOH (100 mL)로 용해시키고 70℃로 가열하고, 반응 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-50% MeCN)로 정제하여 tert-부틸 4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.6 g, 12.6 mmol, 82% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 366.
단계 C: 톨루엔 (30.0 mL) 중 tert-부틸 4-(2-메틸설파닐 -5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3.60 g, 9.85 mmol, 1.0 eq), (3-메톡시-1-나프틸) 트리플루오로메탄설포네이트 (중간체 30, 7.54 g, 24.6 mmol, 2.50 eq), RuPhos (919 mg, 1.97 mmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (9.63 g, 29.6 mmol, 3.0 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (1.35 g, 1.48 mmol, 0.15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (50.0 mL)을 첨가하고 EA (50.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA = 20:1 - EA:MeOH = 10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (4.60 g, 8.82 mmol, 89% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 522.
단계 D: tert -부틸 4-[7-(3- 메톡시 -1- 나프틸 )-2- 메틸설피닐 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. EA (40.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)- 2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (3.80 g, 7.28 mmol, 1.0 eq)의 용액에 m-CPBA (1.41 g, 6.56 mmol, 0.90 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 포화 NaHSO3 수성물 (30.0 mL)로 켄칭하고 EA (50.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-60 % MeCN)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시 -1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.70 g, 5.02 mmol, 69% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 - 7.42 (m, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 1H), 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.42 (br s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.61 (br d, J = 4.0 Hz, 8H), 3.52 - 3.34 (m, 2H), 3.08 - 2.81 (m, 5H), 1.50 (s, 9H).
단계 E: tert -부틸 4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.49 mmol, 1.0 eq) 및 t-BuONa (286 mg, 2.98 mmol, 2.0 eq)의 용액에 [(2S,4R)-4-플루오로 -1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (396 mg, 2.98 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 EA (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1 % FA, 0-60 % MeCN)로 정제하여 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (670 mg, 1.10 mmol, 74% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 1H), 6.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.29 - 5.06 (m, 1H), 4.44 (dd, J = 4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.27 - 4.20 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.66 - 3.43 (m, 9H), 3.36 (br s, 2H), 3.11 - 2.99 (m, 1H), 2.85 (br s, 2H), 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.40 - 2.26 (m, 1H), 2.05 - 1.91 (m, 1H), 1.50 (s, 9H).
단계 F: 2-[[( 2 S ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(3 - 메톡시 -1- 나프틸 )-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘. DCM (1.50 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1 -메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 1.07 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (2.39 g, 21.0 mmol, 1.55 mL, 19.6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3 -메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (780 mg, 조물질, 2 TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 507.
단계 G: 1-[4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (8.0 mL) 중 2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (780 mg, 1.06 mmol, 1.0 eq, 2 TFA) 및 DIEA (1.65 g, 12.7 mmol, 2.22 mL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (201 mg, 1.59 mmol, 1.50 eq)을 -50℃에서 첨가했다. 혼합물을 -50℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (1 mL)로 켄칭하고, 그 다음 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 46%-76%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 355, 300 mg, 528 umol, 2개의 단계 49% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 561.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.61 (dd, J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.36 (dd, J = 2.0, 16.8 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 1.6, 10.4 Hz, 1H), 5.28 - 5.07 (m, 1H), 4.44 (dd, J = 4.8, 11.2 Hz, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.84 (br s, 2H), 3.72 (br s, 2H), 3.65 - 3.50 (m, 5H), 3.37 (br s, 2H), 3.10 - 3.01 (m, 1H), 2.87 (br s, 2H), 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.42 - 2.26 (m, 1H), 2.07 - 1.90 (m, 1H).
실시예 356
1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: [( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (30.0 mL) 중 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.8 g, 6.94 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (790 mg, 20.8 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수용액 (6.0 mL)로 켄칭하고, 그 다음 혼합물을 여과하고 필터를 농축했다. 화합물 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (1.1 g, 6.82 mmol, 98% 수율, 90% 순도)을 무색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.90 - 3.82 (m, 1H), 3.66 (dd, J = 3.2 Hz, 10.8 Hz, 1H), 3.46 - 3.37 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.77 - 2.65 (m, 1H), 2.64 - 2.57 (m, 1H), 2.35 - 2.30 (m, 4H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 1H).
단계 B: tert -부틸 4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(3-메톡시-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.49 mmol, 1.0 eq), [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (454 mg, 3.12 mmol, 2.1 eq), t-BuONa (286 mg, 2.98 mmol, 2.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (15.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0-60% MeCN]로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 EA (3 × 50.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 808 umol, 54% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 619.
단계 C: 2-[[( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(3- 메톡시 -1- 나프틸 )-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘. DCM (6.0 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 727 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (6.93 g, 60.8 mmol, 4.50 mL, 83.6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거하여 2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (540 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 519.
단계 D: 1-[4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (6.0 mL) 중 2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (540 mg, 2TFA)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (130 mg, 1.03 mmol) 및 DIEA (800 mg, 6.19 mmol, 1.08 mL)을 N2 분위기 하에서 적가로 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 메탄올 (10.0 mL)로 켄칭하고 혼합물을 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 48% - 78%, 12분)으로 정제하고 그리고 동결건조시켰다. 표제 화합물 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(3-메톡시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 356, 112 mg, 196 umol, 99% 순도, 18% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 573.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.44 (m, 1H), 7.38 - 7.34 (m, 1H), 6.91 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.61 (dd, J = 10.4 Hz, 16.8 Hz, 1H), 6.35 (dd, J = 2.0 Hz, 16.8 Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 1.6 Hz, 9.6 Hz, 1H), 4.41 (dd, J = 4.8 Hz, 10.8 Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.22 - 4.16 (m, 1H), 4.00 - 3.94 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.83 - 3.67 (m, 4H), 3.62 - 3.48 (m, 4H), 3.47 - 3.42 (m, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.33 (dd, J = 6.0 Hz, 10.0 Hz, 1H), 2.12 - 2.04 (m, 1H), 2.01 - 1.93 (m, 1H).
실시예 357
1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4-[7- 벤질 -2-[[( 2 S ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. THF (7.0 mL) 중 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (631 mg, 4.74 mmol, 3.76 eq)의 용액에 NaH (126 mg, 3.16 mmol, 60% 순도, 2.51 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 4-(7-벤질-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.26 mmol, 1.0 eq)을 상기 혼합물에 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 포화 NH4Cl 수성물 (15.0 mL)로 켄칭하고 EA (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 20:1 내지 10:1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (530 mg, 980 umol, 78% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 541.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.24 - 7.13 (m, 5H), 5.08 - 4.91 (m, 1H), 4.23 (dd, J = 4.4 Hz, 10.8 Hz, 1H), 4.04 (dd, J = 6.0 Hz, 10.8 Hz, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.45 - 3.42 (m, 2H), 3.38 - 3.33 (m, 5H), 3.31 - 3.27 (m, 4H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.52 - 2.46 (m, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.21 - 2.09 (m, 1H), 1.87 - 1.73 (m, 3 H), 1.34 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (6.0 mL) 중 tert-부틸 4-[7-벤질-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (480 mg, 887 umol, 1 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (270 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, EA/MeOH = 20:1 내지 10:1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 706 umol, 79% 수율, 91% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:451.
단계 C: 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 621 umol, 1.0 eq), Pd2(dba)3 (85.3 mg, 93.2 umol, 0.15 eq), RuPhos (58.0 mg, 124.3 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (404 mg, 1.24 mmol, 2.0 eq)의 혼합물에 (4-브로모-2-나프틸) 2,2-디메틸프로파노에이트 (중간체 54, 572 mg, 1.86 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 110℃에서 5시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (15.0 mL)로 켄칭하고 EA (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC (18C, 물 중 0.1% FA, 0-70% MeCN)로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH-8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 EA (3 × 40.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 tert-부틸 4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 272 umol, 44% 수율, 97% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 677.
단계 D: [4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-일]-2-나프틸]-2,2-디메틸프로파노에이트. DCM (1.5 mL) 중 tert-부틸 4-[7-[3-(2,2-디메틸프로파노일옥시)-1-나프틸]-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (110 mg, 162 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (2.31 g, 20.2 mmol, 1.5 mL, 124 eq)을 25℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 [4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]-2,2-디메틸프로파노에이트 (200 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 577.
단계 E: [4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-일]-2-나프틸]-2,2-디메틸프로파노에이트. DCM (2.0 mL) 중 [4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]-2,2-디메틸프로파노에이트 (200 mg, 2TFA) 및 TEA (493 mg, 4.87 mmol, 678 uL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (40.9 mg, 324 umol)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (3.0 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, EA/MeOH = 20:1 내지 10:1)로 정제했다. 화합물 [4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]-2,2-디메틸프로파노에이트 (100 mg, 153 umol, 97% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:631.
단계 F: 1-[4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. THF (1.5 mL) 및 H2O (1.5 mL) 중 [4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-2-나프틸]-2,2-디메틸프로파노에이트 (39.0 mg, 61.8 umol, 1.0 eq) 및 NaOH (61.8 mg, 1.55 mmol, 25.0 eq)의 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)로 켄칭하고 그 다음 EA (3 × 15.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B: 38%-68%, 12분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 1-[4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(3-하이드록시-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 357, 10.1 mg, 18.4 umol, 30% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 547.
SFC 조건: 100% ee.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.30 - 7.34 (m, 1H), 6.88 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.60 (dd, J = 10.4 Hz, 16.8 Hz, 1H), 6.37 (dd, J = 1.6 Hz, 16.8 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 2.0 Hz, 10.2 Hz, 1H), 5.28 - 5.14 (m, 1H), 4.46 (dd, J = 4.8 Hz, 11.2 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 5.2 Hz, 11.2 Hz, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.82 - 3.68 (m, 2H), 3.66 - 3.55 (m, 4H), 3.52 - 3.42 (m 4H), 3.35 - 3.21 (m, 2H), 3.17 - 3.10 (m, 1H), 2.82 - 2.68 (m, 2H), 2.63 - 2.74 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.40 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 1.94 (m, 1H).
실시예 358
1-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-프로프-2-이닐-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 A: (2 S )-2-( tert - 부톡시카보닐아미노 ) 펜트 -4- 이노산. THF (15 mL) 중 (2S)-2-아미노펜트-4-이노산 (5 g, 44.2 mmol, 1 eq)의 현탁액에 H2O (15 mL), K2CO3 (18.3 g, 133 mmol, 3 eq) 및 Boc2O (11.1 g, 50.8 mmol, 11.7 mL, 1.15 eq)을 첨가했다. 추가의 물을 첨가하여 용액을 생성하고, 이것을 12시간 동안 25℃에서 교반했다. 유기 용매를, 그 다음 증발시키고 수용액을 t-부틸 메틸 에테르로 세정하고, 그 다음 1N HCl 산으로 pH = 3으로 산성화했다. 용액을 에틸 아세테이트 (2 × 100 mL)로 추출했다. 용매를 증발시켜 (2S)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)펜트-4-이노산 (8 g, 37.5 mmol, 85% 수율)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 589.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 8.0, 13.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.21 - 4.01 (m, 3H), 3.96 - 3.79 (m, 2H), 3.60 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.44 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.32 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.53 (m, 4H), 2.48 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.29 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.87 - 1.71 (m, 3H).
단계 B: 에틸 2-[ 벤질 -[(2S)-2-( tert - 부톡시카보닐아미노 ) 펜트 - 4- 이노일 ]아미노]아세테이트. DMF (50 mL) 중 (2S)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)펜트-4-이노산 (7.75 g, 36.4 mmol, 1 eq), 에틸 2-(벤질아미노)아세테이트 (7.02 g, 36.4 mmol, 1 eq) 및 HATU (16.6 g, 43.5 mmol, 1.20 eq)의 용액에 TEA (7.35 g, 72.7 mmol, 10.1 mL, 2.00 eq)을 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (150 mL)로 희석하고 물 (3 × 200 mL) 및 염수 (1 × 100 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 물 (1 × 100 mL) 및 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. 화합물 에틸 2-[벤질-[(2S)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)펜트- 4-이노일]아미노]아세테이트 (13.7 g, 32.1 mmol, 88.3% 수율, 91% 순도)을 적색 오일로서 수득했고, 이것은 25℃에서 16시간 동안 정치시 적색 고체로 되었다. LCMS [ESI, M-99]: 289.
단계 C: (3 S )-1- 벤질 -3- 프로프 -2- 이닐 -피페라진-2,5- 디온. DCM (40 mL) 중 에틸 2-[벤질-[(2S)-2-(tert-부톡시카보닐아미노) 펜트-4-이노일]아미노]아세테이트 (11.7 g, 30.1 mmol, 1 eq)의 용액에 TFA (46.2 g, 405 mmol, 30 mL, 13.5 eq)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 톨루엔 (30 mL)을 첨가했다. 100℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (200 mL)에 용해시키고 포화 수성 탄산나트륨 용액으로 pH = 8로 염기성화했다. 분리된 유기층을 물 (1 × 200 mL) 및 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 (에틸 아세테이트/석유 에테르 1/5, 100 mL)로 분쇄하고 침전물을 여과했다. 필터 케이크를 진공 하에서 건조시켰다. 화합물 (3S)-1-벤질-3-프로프-2-이닐-피페라진-2,5-디온 (5 g, 20.5 mmol, 68% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 243.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.20 (m, 5H), 6.59 (br s, 1H), 4.76 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.50 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.20 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.04 - 3.90 (m, 1H), 3.89 - 3.76 (m, 1H), 2.95 - 2.69 (m, 2H), 2.05 (t, J = 2.8 Hz, 1H).
단계 D: (3 S )-1- 벤질 -3- 프로프 -2- 이닐 -피페라진. THF (50.0 mL) 중 (3S)-1-벤질-3-프로프-2-이닐-피페라진-2,5-디온 (5.00 g, 20.6 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 LiAlH4 (3.13 g, 82.6 mmol, 4.00 eq)을 25℃에서 첨가했다. 65℃에서 12 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 여과 제거하고 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 (3S)-1-벤질-3-프로프-2-이닐-피페라진 (4.10 g, 19.1 mmol, 93% 수율)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.37 - 7.24 (m, 5H), 3.55 - 3.47 (m, 2H), 3.03 - 2.86 (m, 3H), 2.85 - 2.78 (m, 1H), 2.73 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.33 - 2.20 (m, 2H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 2.02 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 1.90 - 1.83 (m, 1H).
단계 E: tert -부틸 (2 S )-4- 벤질 -2- 프로프 -2- 이닐 -피페라진-1- 카복실레이트. THF (20.0 mL) 중 (3S)-1-벤질-3-프로프-2-이닐-피페라진 (2.00 g, 9.33 mmol, 1.00 eq), TEA (2.83 g, 28.0 mmol, 3.90 mL, 3.00 eq) 및 (Boc)2O (10.2 g, 46.7 mmol, 10.7 mL, 5.00 eq)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (1 × 20.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-4-벤질-2-프로프-2-이닐-피페라진-1-카복실레이트 (1.50 g, 4.20 mmol, 45% 수율, 88% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 315.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.38 - 7.27 (m, 5H), 4.26 (br s, 1H), 3.99 - 3.74 (m, 1H), 3.59 - 3.45 (m, 2H), 3.08 - 2.89 (m, 2H), 2.79 - 2.68 (m, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.11 (dd, J = 3.6, 11.2 Hz, 1H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.89 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 1.48 - 1.45 (m, 9H).
단계 F: (2 S )-2- 프로프 -2- 이닐피페라진. DCE (20.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-벤질-2-프로프-2-이닐-피페라진 -1-카복실레이트 (1.40 g, 4.45 mmol, 1.00 eq), 1-클로로-1-(1-클로로비닐옥시)에탄 (2.51 g, 17.8 mmol, 4.00 eq)의 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 메탄올 (20.0 mL)에 용해시키고 65℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 석유 에테르 (10.0 mL)로 분쇄하여 (2S)-2-프로프-2-이닐피페라진 (0.80 g, 조물질, 2 HCl)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ = 4.56 - 4.44 (m, 1H), 3.88 - 3.80 (m, 1H), 3.79 - 3.73 (m, 1H), 3.62 - 3.34 (m, 4H), 2.87 - 2.76 (m, 3H).
단계 G: 4- 벤질옥시 -2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘. 톨루엔 (20.0 mL) 중 4-벤질옥시-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (2.00 g, 5.64 mmol, 1.00 eq), 1-브로모나프탈렌 (1.75 g, 8.46 mmol, 1.18 mL, 1.50 eq), Pd2(dba)3 (517 mg, 564 umol, 0.10 eq), RuPhos (527 mg, 1.13 mmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (3.68 g, 11.3 mmol, 2.00 eq)의 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 N2 하에서 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (TFA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 중탄산나트륨 (5.00 mL)로 pH > 7로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 4-벤질옥시-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (1.34 g, 2.78 mmol, 49% 수율, 99.6% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 481.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 - 8.16 (m, 1H), 7.89 - 7.82 (m, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 4H), 7.45 - 7.33 (m, 4H), 7.14 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.45 (dd, J = 5.6, 10.4 Hz, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 3H), 3.55 - 3.24 (m, 2H), 3.12 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.89 (br s, 2H), 2.76 - 2.65 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H).
단계 H: 2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-올. 메탄올 (200 mL) 중 4-벤질옥시-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (1.30 g, 2.70 mmol, 1.00 eq) 및 Pd/C (0.20 g, 10% 순도)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 H2 하에서 15 psi에서 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (1.00 g, 1.90 mmol, 70% 수율, 74% 순도)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 391.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.24 - 8.16 (m, 1H), 7.90 - 7.81 (m, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.42 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.38 (br s, 2H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 2.79 (br s, 2H), 2.70 - 2.54 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.32 (dt, J = 7.2, 9.6 Hz, 1H), 2.02 - 1.96 (m, 1H), 1.91 - 1.75 (m, 3H).
단계 I: [2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 - 5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트. 디클로로메탄 (10.0 mL) 중 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (0.40 g, 1.02 mmol, 1.00 eq) 및 TEA (207 mg, 2.05 mmol, 285 uL, 2.00 eq)의 용액에 Tf2O (318 mg, 1.13 mmol, 186 uL, 1.10 eq)을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 0.25 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (3.00 mL)로 희석하고 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 5.00 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 10/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 [2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (0.40 g, 528 umol, 52% 수율, 69% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 523.
단계 J: 2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-4-[(3 S )-3- 프로프 -2-이닐피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘. DMF (4.00 mL) 중 [2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (0.38 g, 727 umol, 1.00 eq), (2S)-2-프로프-2-이닐피페라진 (350 mg, 조물질, 2 HCl) 및 DIEA (939 mg, 7.27 mmol, 1.27 mL, 10.0 eq)의 혼합물 100℃에서 0.25시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1%)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-4-[(3S)-3-프로프-2-이닐피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (0.20 g, 336 umol, 46% 수율, 99% 순도, 2 FA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 497.
단계 K: 1-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-프로프-2-이닐-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. 디클로로메탄 (4.00 mL) 중 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-4-[(3S)-3-프로프-2-이닐피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (145 mg, 246 umol, 1.00 eq, 2 FA) 및 TEA (374 mg, 3.69 mmol, 514 uL, 15.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 클로라이드 (22.3 mg, 246 umol, 20.1 uL, 1.00 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 25℃에서 0.25시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (3.00 mL)로 희석하고, 그 다음 디클로로메탄 (3 × 3.00 mL)로 추출했다. 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 57% - 87%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 1-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-프로프-2-이닐-피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 358, 25.6 mg, 46.3 umol, 19% 수율, 99.5% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 551.
SFC 조건: "OD-3S_3_40_3ML 칼럼: Chiralcel OD-3 100Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.21 (m, 1H), 7.91 - 7.81 (m, 1H), 7.60 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 (br s, 1H), 6.36 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 2.0, 10.8 Hz, 1H), 5.00 - 4.52 (m, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 1H), 4.34 - 3.81 (m, 6H), 3.47 (m, 1H), 3.38 - 3.21 (m, 2H), 3.19 - 2.90 (m, 4H), 2.84 (br s, 1H), 2.73 - 2.52 (m, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.90 - 1.70 (m, 4H).
실시예 359
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (중간체 69, 507 mg, 1.65 mmol, 1.3 eq), tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 600 mg, 1.27 mmol, 1 eq), Cs2CO3 (1.04 g, 3.18 mmol, 2.5 eq), RuPhos (118 mg, 254 umol, 0.2 eq) 및 Pd2(dba)3 (233 mg, 254 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (310 mg, 501 umol, 39% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 612.
1HNMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.60 (m, 2H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.30 - 4.14 (m, 2H), 4.10 - 3.72 (m, 4H), 3.60 - 3.44 (m, 1H), 3.38 (br dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.24 - 3.04 (m, 4H), 3.03 - 2.84 (m, 5H), 2.82 - 2.53 (m, 4H), 2.52 - 2.42 (m, 3H), 2.29 (br s, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 2H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (500 uL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (310 mg, 506 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (866 mg, 7.60 mmol, 562 uL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (317 mg, 506 umol, 99% 수율, TFA)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (317 mg, 506 umol, 1 eq, TFA)의 용액에 TEA (512 mg, 5.07 mmol, 705 uL, 10 eq)을 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, DCM (1 mL) 중 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (51.1 mg, 405 umol, 0.8 eq)을 0℃에서 적가했다. 수득한 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (1 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 359, 60.2 mg, 105 umol, 21% 수율, 99.5 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
SFC 조건: "OJ-3S_5_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 에탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm"
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 - 7.60 (m, 2H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 6.46 - 6.33 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.44 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 4.20 - 4.03 (m, 3H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.78 - 3.62 (m, 1H), 3.60 - 3.36 (m, 2H), 3.23 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.74 (m, 1H), 2.73 - 2.55 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H).
대안적으로, 실시예 359은 아래와 같이 제조될 수 있다:
단계 A: tert -부틸 4-[(3 S )-4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 클로로 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. DMF (200 mL) 중 tert-부틸 2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (18.8 g, 61.7 mmol, 1 eq)의 용액에 DIEA (15.9 g, 123 mmol, 21.5 mL, 2 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 63, 16.0 g, 61.7 mmol, 1 eq)을 첨가했다. 80℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석하고 물 (200 mL × 3)로 세정했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 2/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (26 g, 48.8 mmol, 79% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 527.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.34 (m, 5H), 5.20 (s, 2H), 4.73 - 4.60 (m, 2H), 4.45 (d, J = 19.2 Hz, 1H), 4.13 - 4.02 (m, 2H), 3.94 - 3.75 (m, 2H), 3.45 - 3.25 (m, 3H), 3.11 (td, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.88 - 2.59 (m, 4H), 1.60 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 4-[(3 S )-4- 벤질옥시카보닐 -3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (450 mL) 중 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (10.5 g, 91.1 mmol, 10.8 mL, 2 eq), tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (24 g, 45.6 mmol, 1 eq), Pd2(dba)3 (6.18 g, 6.84 mmol, 0.15 eq), RuPhos (4.26 g, 9.12 mmol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (37.1 g, 114 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (500 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 에틸 아세테이트/메탄올 = 1/0 내지 10/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐 -3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (25 g, 35.9 mmol, 79% 수율, 87% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 606.
단계 C: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (100 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (16 g, 26.4 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 99.1 mL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 디옥산을 경사분리하고 고체를 수집했다. 고형 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (200 mL)로 희석하고, 그 다음 포화 Na2CO3 수용액으로 pH = 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (200 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 13.5 g, 24.5 mmol, 93% 수율, 91.6% 순도)을 황색 오일로서 수득했고 다음 단계에서 정제없이 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.45 - 7.31 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.65 (br s, 1H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 2H), 4.03 - 3.91 (m, 3H), 3.91 - 3.77 (m, 1H), 3.24 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 3.16 - 3.05 (m, 2H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.81 (br s, 1H), 2.75 - 2.51 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.08 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
단계 D: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (100 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (10 g, 19.8 mmol, 1 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (중간체 69, 5.68 g, 25.7 mmol, 1.3 eq), RuPhos (2.77 g, 5.93 mmol, 0.3 eq), Cs2CO3 (16.1 g, 49.5 mmol, 2.5 eq) 및 Pd2(dba)3 (3.62 g, 3.96 mmol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (200 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (500 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (9 g, 12.9 mmol, 33% 수율, 93% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
1H NMR (400MHz, C2D2Cl4) δ = 7.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 7H), 6.91 - 6.78 (m, 2H), 4.81 (s, 2H), 4.30 (s, 1H), 4.13 - 3.95 (m, 1H), 3.88 - 3.33 (m, 6H), 3.22 - 2.87 (m, 2H), 2.86 - 2.65 (m, 4H), 2.65 - 2.42 (m, 5H), 2.41 - 2.32 (m, 1H), 2.30 - 2.13 (m, 2H), 2.07 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.92 (br s, 1H), 1.72 - 1.45 (m, 4H).
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (100 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (8 g, 12.4 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (2 g, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (50 mL, 15%)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (5.7 g, 10.0 mmol, 81% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 3.2, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (td, J = 4.4, 7.6 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.46 - 4.34 (m, 1H), 4.25 - 4.03 (m, 2H), 3.97 - 3.69 (m, 3H), 3.49 - 3.44 (m, 1H), 3.39 - 3.07 (m, 5H), 3.06 - 2.83 (m, 6H), 2.76 - 2.63 (m, 1H), 2.62 - 2.51 (m, 3H), 2.48 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 1H), 1.83 - 1.69 (m, 3H).
단계 F: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (120 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (6.4 g, 12.5 mmol, 1 eq)의 용액에 TEA (19 g, 187 mmol, 26 mL, 15 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 첨가 후, 디클로로메탄 (2 mL) 중 프로프-2-에노일 클로라이드 (1.70 g, 18.8 mmol, 1.53 mL, 1.5 eq)의 용액을 -40℃에서 적가했다. -40℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고, 그 다음 물 (50 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Kromasil 250*50mm*10um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 20% - 50%, 28분)으로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 디클로로메탄 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 359, 2.3 g, 4.03 mmol, 32% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
1H NMR (400MHz, 클로로포름 -d) δ = 7.74 - 7.59 (m, 2H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 6.70 - 6.47 (s, 1H), 6.39 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.16 - 4.47 (m, 1H), 4.44 - 4.32 (m, 1H), 4.30 - 3.62 (m, 6H), 3.58 - 3.26 (m, 2H), 3.25 - 2.95 (m, 5H), 2.91 (s, 3H), 2.86 - 2.55 (m, 4H), 2.48 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.67 (m, 3H).
실시예 360
2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: 1- 브로모 -8-에틸-나프탈렌. THF (15.0 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (2.0 g, 6.99 mmol, 1.0 eq) 및 Pd(dppf)Cl2 (367 mg, 501 umol, 7.16 e-2 eq)의 용액에 디에틸 아연 (톨루엔 중 1.0 M, 3.50 mL, 0.50 eq)을 - 78℃에서 첨가했다. 혼합물을 -78 - 20℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (30.0 mL)을 첨가하고 EA (30.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 PE (60.0 mL)로 분쇄하고 여과했다. 필터 케이크를 PE (10.0 mL × 2)로 세정하고, 모액을 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1% FA, 0 - 100 % MeCN)로 정제하여 1-브로모-8-에틸-나프탈렌 (600 mg, 2.45 mmol, 35% 수율, 96% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.72 - 7.63 (m, 2H), 7.58 (dd, J = 2.4, 7.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 2H), 7.13 - 7.04 (m, 1H), 3.43 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 300 mg, 636 umol, 1.0 eq), t-BuONa (183 mg, 1.91 mmol, 3.0 eq), RuPhos (59.4 mg, 127 umol, 0.2 eq) 및 RuPhos-Pd-G3 (106 mg, 127 umol, 0.20 eq)의 용액에 1-브로모-8-에틸-나프탈렌 (299 mg, 1.27 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 EA (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 물 중 0.1 % FA, 0-60 % MeCN)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 221 umol, 34% 수율, 98% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 626.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8- 에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 208 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 65.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 199 umol, 1.0 eq, 2TFA) 및 DIEA (309 mg, 2.39 mmol, 416 uL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (37.7 mg, 299 umol, 1.50 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (1.0 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 53%-83%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 360, 20.0 mg, 33.8 umol, 17% 수율, 98% 순도)을 핑크색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 580.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.74 - 7.64 (m, 2H), 7.46 - 7.35 (m, 2H), 7.27 - 7.20 (m, 2H), 6.64 - 6.60 (m, 1H), 6.46 - 6.36 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.20 - 4.50 (m, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.17 - 3.96 (m, 3H), 3.93 - 3.84 (m, 1H), 3.74 (br d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.65 - 3.39 (m, 3H), 3.37 - 2.92 (m, 7H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (br d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.80 - 1.72 (m, 3H), 1.17 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
실시예 361
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: [(3 R )-1- 메틸피롤리딘 -3-일] 메탄올. THF (20.0 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸) 파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.0 g, 4.97 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (377 mg, 9.94 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 70℃로 가열하고 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (1.0 mL)로 켄칭하고 여과했다. 필터 케이크를 THF (10.0 mL)로 세정하고, 그 다음 모액을 농축시켜 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일] 메탄올 (500 mg, 4.34 mmol, 87% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.65 (dd, J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 3.52 (dd, J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 3.05 - 2.69 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.40 - 2.25 (m, 5H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.72 - 1.59 (m, 1H).
단계 A: tert -부틸(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일] 메탄올 (178 mg, 1.55 mmol, 3.0 eq)의 용액에 t-BuONa (124 mg, 1.29 mmol, 2.50 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 516 umol, 1.0 eq)을 상기 혼합물에 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 ml)을 첨가하고 EA (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-60% MeCN)로 정제하여 tert-부틸(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (220 mg, 342 umol, 66% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(3 R ) -1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (360 mg, 569 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.50 mL, 35.6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(3R) -1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (450 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했다.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (450 mg, 592 umol, 1.0 eq, 2TFA) 및 DIEA (918 mg, 7.10 mmol, 1.24 mL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (112 mg, 888 umol, 1.50 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (1.0 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04% NH3ㆍH2O)-ACN]; B%: 70%-82%,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 361, 32.6 mg, 53.8 umol, 9% 수율, 97% 순도)을 회색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 586.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.68 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.41 -7.32 (m, 1H), 7.26 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 - 7.11 (m, 1H), 6.60 - 6.43 (m, 1H), 6.32 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.75 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.15 - 4.50 (m, 1H), 4.41 - 4.28 (m, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 2H), 4.09 - 3.88 (m, 2H), 3.87 - 3.68 (m, 2H), 3.57 -3.45 (m, 1H), 3.42 - 3.26 (m, 1H), 3.25 - 2.87 (m, 5H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.73 - 2.57 (m, 3H), 2.56 - 2.47 (m, 2H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.07 - 1.90 (m, 1H). LCMS [ESI, M+1]: 586.
실시예 362
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.0 mL) 중 2-(1-피페리딜) 에탄올 (133 mg, 1.03 mmol, 137 uL, 3.0 eq)의 용액에 t-BuONa (66.2 mg, 688 umol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 344 umol, 1.0 eq)을 상기 액체에 0℃에서 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (5.0 mL)을 첨가하고 EA (5.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE:EA = 3:1 - EA:MeOH = 10:1)로 정제하여 tert-부틸(2S)-4-[7-(8-클로로-1- 나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 221 umol, 64% 수율, 95% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.64 - 4.61 (m, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 3H), 4.14 - 3.92 (m, 3H), 3.90 - 3.76 (m, 1H), 3.63 - 3.54 (m, 1H), 3.36 (br dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.26 - 3.06 (m, 3H), 3.01 - 2.86 (m, 1H), 2.82 - 2.76 (m, 2H), 2.71 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.64 - 2.58 (m, 1H), 2.58 - 2.50 (m, 4H), 2.48 - 2.42 (m, 1H), 2.06 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.64 - 1.57 (m, 5H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[2-(1- 피페리딜 ) 에톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 387 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 34.9 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 546.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 388 umol, 1.0 eq, 2TFA) 및 DIEA (601 mg, 4.65 mmol, 810 uL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (73.3 mg, 581 umol, 1.5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH(1.0 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 362, 54.0 mg, 88.1 umol, 23% 수율, 98% 순도)을 무색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 600.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.58 - 6.62 (m, 1H), 6.44 - 6.36 (m, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.15 - 4.55 (m, 1H), 4.51 - 4.36 (m, 3H), 4.20 - 3.97 (m, 2H), 3.95 - 3.75 (m, 2H), 3.66 - 3.54 (m, 1H), 3.51 - 3.37 (m, 1H), 3.34 - 2.97 (m, 4H), 2.94 - 2.67 (m, 4H), 2.65 - 2.57 (m, 1H), 2.55 - 2.48 (m, 4H), 1.65 - 1.60 (m, 4H), 1.49 - 1.39 (m, 2H).
실시예 363
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: [(2 R )-4- 메틸모폴린 -2-일] 메탄올. THF (20.0 mL) 중 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸) 모폴린-4-카복실레이트 (1.50 g, 6.90 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (524 mg, 13.8 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 60℃로 가열하고 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (1.50 mL)로 켄칭하고 여과했다. 케이크를 THF (20.0 mL × 2)로 세정했다. 그 다음 모액을 농축시켜 [(2R)-4-메틸모폴린-2-일] 메탄올 (800 mg, 6.10 mmol, 88% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.92 - 3.86 (m, 1H), 3.73 - 3.52 (m, 4H), 2.84 - 2.56 (m, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.11 (dt, J = 3.6, 11.6 Hz, 1H), 1.93 (t, J = 10.8 Hz, 1H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2- [[(2 R )-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (4.0 mL) 중 [(2R)-4-메틸모폴린-2-일]메탄올 (203 mg, 1.55 mmol, 3.0 eq)의 용액에 t-BuONa (99.2 mg, 1.03 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 516 umol, 1.0 eq)을 상기 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 ml)을 첨가하고 EA (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득된 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, PE: EA=3:1 - EA: MeOH=10:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2R)-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 366 umol, 71% 수율, 95% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 648.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 4.68 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.31 (m, 2H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 4.16 - 4.01 (m, 3H), 4.00 - 3.82 (m, 4H), 3.79 - 3.69 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 1H), 3.36 (br dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.29 - 3.06 (m, 3H), 3.01 - 2.86 (m, 2H), 2.83 - 2.64 (m, 3H), 2.63 - 2.45 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 3H), 2.19 (dt, J = 3.6, 11.6 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 R )-4- 메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 370 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 36.5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-4- 메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질, 2TFA)을 밝은 적색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 548.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2-[[(2 R )-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 387 umol, 1.0 eq, 2TFA) 및 DIEA (599 mg, 4.64 mmol, 808 uL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (73.1 mg, 580 umol, 1.50 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH(1.0 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04% NH3ㆍH2O)-ACN]; B%: 45%-75%,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2R)-4-메틸모폴린-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 363, 42.7 mg, 70.4 umol, 18% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 602.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 6.39 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.25 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 2H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.00 (m, 2H), 3.99 - 3.89 (m, 3H), 3.88 - 3.76 (m, 1H), 3.75 - 3.68 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.52 - 3.35 (m, 1H), 3.31 - 2.98 (m, 4H), 2.92 - 2.55 (m, 5H), 2.31 (s, 3H), 2.18 (dt, J = 3.2, 11.4 Hz, 1H), 2.02 (dt, J = 1.6, 10.8 Hz, 1H).
실시예 364
2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 1 - 브로모 -3- 메톡시 -2-( 트리플루오로메틸 )벤젠. DMF (125 mL) 중 MeOH (1.32 g, 41.2 mmol, 1.67 mL, 2 eq)의 용액에 NaH (1.65 g, 41.2 mmol, 60.0 % 순도, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 상기 혼합물에 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (5 g, 20.6 mmol, 1 eq)을 첨가하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 빙수 (20 mL)로 켄칭했다. 물 (300 mL)을 혼합물에 첨가하고 MTBE (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE)로 정제하여 1-브로모-3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (5.28 g, 18.6 mmol, 91.0 % 수율, 90.0 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.34 - 7.28 (m, 2H), 7.01 - 6.97 (m, 1H), 3.91 (s, 3H).
단계 2: 1 - 메톡시 -3- 메틸 -2-( 트리플루오로메틸 )벤젠. 디옥산 (105 mL) 및 물 (21 mL) 중 1-브로모-3-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (5.28 g, 20.7 mmol, 1 eq), Cs2CO3 (20.2 g, 62.1 mmol, 3 eq), 메틸붕산 (6.20 g, 104 mmol, 5 eq)의 용액에 Pd(dppf)Cl2 (2.27 g, 3.11 mmol, 0.15 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 100℃에서 6시간 동안 교반했다. 물 (50 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL)로 추출했다. 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE)로 정제하여 1-메톡시-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (3.2 g, 15.1 mmol, 73.1 % 수율, 90.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.33 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.87 (br d, J=8.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J=7.2 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.49 (q, J=3.6 Hz, 3H).
단계 3: 3 - 메틸 -2-( 트리플루오로메틸 )페놀. DCE (65 mL) 중 1-메톡시-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (3.2 g, 16.8 mmol, 1 eq)의 용액에 BBr3 (21.1 g, 84.1 mmol, 8.11 mL, 5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40 - -10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 50:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페놀 (740 mg, 4.08 mmol, 24.2 % 수율, 97.0 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.29 - 7.24 (m, 1H), 6.87 - 6.77 (m, 2H), 5.95 (q, J=6.4 Hz, 1H), 2.46 (q, J=2.8 Hz, 3H).
단계 4: [3- 메틸 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐] 트리플루오로메탄설포네이트. EtOAc (12 mL) 중 3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페놀 (600 mg, 3.41 mmol, 1 eq), TEA (1.38 g, 13.6 mmol, 1.90 mL, 4 eq)의 용액에 Tf2O (1.44 g, 5.11 mmol, 843 uL, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (1:0 내지 100:1의 PE: EtOAc)로 정제하여 [3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐] 트리플루오로메탄설포네이트 (590 mg, 1.82 mmol, 53.0 % 수율, 95.0 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.33 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J=8.4 Hz, 1H), 2.57 (q, J=2.8 Hz, 3H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (12 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 600 mg, 973 umol, 1 eq), [3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐] 트리플루오로메탄설포네이트 (450 mg, 1.46 mmol, 1.5 eq), Cs2CO3 (951 mg, 2.92 mmol, 3 eq) 및 RuPhos (90.8 mg, 195 umol, 0.2 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (89.1 mg, 97.3 umol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 4시간 동안 교반했다. 물 (15 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 5:1 ~ 1:1 내지 EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 20:1)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 50.0 %)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 354 umol, 36 % 수율, 98.0 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 664.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.41 - 7.35 (m, 6H), 7.18 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.07 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 5.20 (s, 2 H), 4.69 (br s, 1H), 4.38 (dd, J=5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.16 (t, J=3.2 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.89 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 3.30 (br s, 2H), 3.21 - 2.95 (m, 5H), 2.92 - 2.62 (m, 6H), 2.52 (q, J=3.6 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 3H).
단계 B: NH3으로 MeOH (5 mL)에 5분 동안 거품을 일으켰다. 용액에 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 362 umol, 1 eq), Pd/C (50 mg, 10.0 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 30℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 336 umol, 93.0 % 수율, 99.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 530.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.5 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (170 mg, 321 umol, 1 eq) 및 TEA (97.4 mg, 963 umol, 134 uL, 3 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 클로라이드 (43.6 mg, 482 umol, 39.3 uL, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40 - 30℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (2 mL)로 켄칭하고 분리했다. 수성상을 EtOAc (4 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-85%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 364, 110 mg, 188 umol, 58.0 % 수율, 100 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 584.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.35 (m, 1H), 7.19 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.08 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.40 (dd, J=1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d, J=10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.37 (dd, J=4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 3.96 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.60 (br s, 1H), 3.30 (br s, 1H), 3.22 - 3.01 (m, 4H), 2.98 - 2.62 (m, 5H), 2.52 (q, J=3.2 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.90 - 1.68 (m, 3H).
실시예 365
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: 3-[( 1 S ,4 S )-2-옥사-5- 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 -5-일]프로판-1-올. CH3CN (6.0 mL) 중 (1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 (500 mg, 3.69 mmol, 1.0 eq, HCl), 3-브로모프로판-1-올 (513 mg, 3.69 mmol, 333 uL, 1.0 eq)의 용액에 K2CO3 (1.53 g, 11.1 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 증발시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트: MeOH = 50: 1 내지 20: 1)로 정제하여 3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로판-1-올 (195 mg, 1.12 mmol, 30% 수율, 90% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 4.42 (s, 1H), 3.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.82 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.65 - 3.61 (m, 1H), 3.53 - 3.45 (m, 2H), 2.99 - 2.92 (m, 2H), 2.84 - 2.77 (m, 1H), 2.67 - 2.61 (m, 1H), 1.86 - 1.80 (m, 1H), 1.79 - 1.58 (m, 3H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.0 mL) 중 3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄- 5-일]프로판-1-올 (325 mg, 2.06 mmol, 3.0 eq), t-BuONa (198 mg, 2.06 mmol, 3.0 eq)의 혼합물에 톨루엔 (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 71, 단계 A, 400 mg, 688 umol, 1.0 eq)의 용액을 나누어서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매에 물 (10.0 mL)을 첨가했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2 , 석유 에테르 : 에틸 아세테이트=3 : 1 내지 에틸 아세테이트 : MeOH =20 : 1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (320 mg, 432 umol, 62% 수율, 91% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 674.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (340 mg, 504 umol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4.0 M, 3.0 mL, 23.8 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 15분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물 (10 mL)로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (270 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 574.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[3- [(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)- 2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (270 mg, 470 umol, 1.0 eq)의 용액에 TEA (143 mg, 1.41 mmol, 196 uL, 3.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (178 mg, 1.41 mmol, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 3: 1 내지 1: 1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 12분)로 그리고 동결건조 하에서 재정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3- [(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 365, 43.1 mg, 67.7 umol, 14% 수율, 98% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 628.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 6.40 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.16 - 5.03 (m, 1H), 4.48 - 4.40 (m, 1H), 4.38 - 4.34 (m, 3H), 4.22 - 4.08 (m, 1H), 4.07 - 3.99 (m, 2H), 3.97 - 3.74 (m, 2H), 3.64 - 3.55 (m, 2H), 3.54 - 3.35 (m, 2H), 3.31 - 3.20 (m, 1H), 3.19 - 3.14 (m, 1H), 3.13 - 2.99 (m, 2H), 2.92 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.81 (m, 1H), 2.80 - 2.76 (m, 1H), 2.75 - 2.68 (m, 1H), 2.64 - 2.57 (m, 1H), 2.52 (d, J=10.0 Hz, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 2H), 1.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 1.74 - 1.70 (m, 2H).
실시예 366
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: THF (8.0 mL) 중 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2S)-4,4-디플루오로파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (300 mg, 1.13 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (129 mg, 3.39 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수용액 (6.0 mL)으로 켄칭하고, Na2SO4로 건조시켰다. 그 다음 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. [(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메탄올 (165 mg, 조물질)을 무색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.0 mL) 중 [(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (156 mg, 1.03 mmol, 3.0 eq)의 용액에 t-BuONa (99.2 mg, 1.03 mmol, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가하고 톨루엔 (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 344 umol, 1.0 eq)의 용액을 0℃에서 N2 하에서 적가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 후, 유기 용매에 물 (10.0 mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르 ： 에틸 아세테이트 = 5 ： 1 내지 1 : 1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 230 umol, 67% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 668.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (137 mg, 205 umol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 1.0 mL, 19.5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 15분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물 (10 mL)로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (110 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 568.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (110 mg, 194 umol, 1.0 eq)의 용액에 TEA (196 mg, 1.94 mmol, 270 uL, 10.0 eq) 및 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (73.3 mg, 581 umol, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 메탄올 (6.0 mL)로 켄칭하고 혼합물을 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150×25mm×10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55% - 85%, 12분)로 정제하고 그리고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 366, 34.1 mg, 54.5 umol, 28% 수율, 99% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 622.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 6.63 - 6.57 (m, 1H), 6.40 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.02 - 4.98 (m, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 2H), 4.31 - 4.22 (m, 1H), 4.19 - 3.97 (m, 2H), 3.96 - 3.89 (m, 1H), 3.88 - 3.77 (m, 1H), 3.76 - 3.65 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.52 - 3.37 (m, 2H), 3.36 - 3.10 (m, 3H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.94 - 2.80 (m, 1H), 2.79 - 2.48 (m, 4H), 2.47 - 2.45 (m, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H).
실시예 367
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]- 6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (중간체 71, 단계 A, 200 mg, 316 umol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 1.5 mL, 19.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 NaHCO3 수성물 (10 mL)로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 여과물을 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (130 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 532.
단계 B: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 ]-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 282 umol, 1.0 eq)의 용액에 피리딘 (446 mg, 5.64 mmol, 455 uL, 20.0 eq) 및 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (155 mg, 846 umol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (190 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 680.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (190 mg, 280 umol, 1.0 eq), KI (9.29 mg, 56.0 umol, 0.20 eq) 및 K2CO3 (387 mg, 2.80 mmol, 10.0 eq)의 용액에 모폴린 (146 mg, 1.68 mmol, 148 uL, 6.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 메탄올 (10.0 mL)로 켄칭하고 혼합물을 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 60%-90%, 12분)로, 그리고 그 다음 동결건조 하에서 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 367, 31.6 mg, 45.2 umol, 16% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 685.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.78 - 7.73 (m, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.51 (m, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.55 - 6.42 (m, 1H), 5.15 - 5.01 (m, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 2H), 4.20 - 4.13 (m, 1H), 4.12 - 4.04 (m, 1H), 3.95 - 3.79 (m, 2H), 3.78 - 3.65 (m, 5H), 3.62 - 3.63 (m, 1H), 3.52 - 3.36 (m, 1H), 3.30 - 3.14 (m, 4H), 3.13 - 2.97 (m, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.73 - 2.53 (m, 3H), 2.52 - 2.46 (m, 7H), 2.34 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.70 (m, 3H).
실시예 368
2-((2S,5S)-1-아크릴로일-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: (( 2R,5S )-5- 메틸피페라진 -2-일)메탄올: 사이클로(L-Ala-L-Ser) (400 mg, 2.53 mmol)을 보란-테트라하이드로푸란 착물 (18716 μl, 18.7 mmol)로 희석하고, 질소 하에 두었고 70℃로 가열했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각되도록 했다. 반응을 빙욕에서0℃로 냉각시키고 이어서 MeOH (5116 μl, 126 mmol)을 느리게 적가하고, 이어서 HCl (1096 μl, 6.58 mmol)을 첨가했다. 1시간 동안 교반한 후, 반응을 농축시켜 ((2R,5S)-5-메틸피페라진-2-일)메탄올 (328 mg, 2.52 mmol, 99.6 % 수율)을 수득했다.
단계 B: tert -부틸 ( 6S,8aR )-6- 메틸 -3- 옥소테트라하이드로 -3H- 옥사졸로[3,4-a]피라진 -7(1H)-카복실레이트: ((2R,5S)-5-메틸피페라진-2-일)메탄올 (500 mg, 3.84 mmol)을 메탄올 (5 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 0℃로 냉각시켰다. TEA (2141 μl, 15.4 mmol)을 첨가하고 이어서 BOC-무수물 (2675 μl, 11.5 mmol) (메탄올 5 mL 중, 15분에 걸쳐)을 첨가했다. 반응을 <10℃에서 1시간 동안 유지하고 그 다음 빙욕을 제거했다. 추가 1시간 후, 반응을 50℃로 가열했다. 50℃에서 12 시간 동안 교반한 후, 반응을 농축시켜 tert-부틸 (6S,8aR)-6-메틸-3-옥소테트라하이드로-3H-옥사졸로[3,4-a]피라진-7(1H)-카복실레이트 (980 mg, 3.82 mmol, 99.6 % 수율)을 수득했다.
단계 C: tert -부틸 ( 2S,5R )-5-( 하이드록시메틸 )-2- 메틸피페라진 -1- 카복실레이트 : Tert-부틸 (6S,8aR)-6-메틸-3-옥소테트라하이드로-3H-옥사졸로[3,4-a]피라진-7(1H)-카복실레이트 (980 mg, 3.82 mmol)을 에탄올 (10047 μl, 172 mmol)로 희석하고 이어서 NaOH (9559 μl, 19.1 mmol)을 첨가했다. 반응을 질소 하에 두었고, 95℃로 가열하고 4시간 동안 교반했다. KMNO4로 염색하는 TLC (메탄올/DCM/NH4OH, 10/89/1)는 약간 더 높은 rf 스폿(spot)의 사라짐을 나타내었다. 반응을 냉각되도록 하고, 그 다음 빙욕에 두었다. pH를 2N HCl로 ~9로 조정하고 그 다음 DCM로 2회 추출했다. DCM을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 tert-부틸 (2S,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트 (850 mg, 3.69 mmol, 96.5 % 수율)을 수득했다.
단계 D: 1- 벤질 4-( tert -부틸) ( 2R,5S )-2-( 하이드록시메틸 )-5- 메틸피페라진 -1,4- 디카복실레이트 : Tert-부틸 (2S,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 1.52 mmol)을 THF (4 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 0℃로 냉각시켰다. NaOH (1672 μl, 1.67 mmol)을 첨가하고 이어서 벤질 클로로포르메이트 (228 μl, 1.52 mmol)을 첨가했다. 2시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 물을 2회 더 추출하고 에틸 아세테이트를 조합하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-80% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5S)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (300 mg, 0.823 mmol, 54.2 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 265.1 [M+H]+ (마이너스 boc).
단계 E: 1- 벤질 4-( tert -부틸) ( 2R,5S )-5- 메틸 -2-((( 메틸설포닐 ) 옥시 ) 메틸 )피페라진-1,4-디카복실레이트: 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5S)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (300 mg, 0.823 mmol)을 DCM (4 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 0℃로 냉각시켰다. DIEA (216 μl, 1.23 mmol)을 첨가하고 이어서 메탄설포닐 클로라이드 (70.1 μl, 0.905 mmol)을 첨가했다. 2시간 동안 0℃에서 교반한 후, 반응을 DCM 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5S)-5-메틸-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (290 mg, 0.655 mmol, 79.6 % 수율)을 수득했다.
단계 F: 1- 벤질 4-( tert -부틸) ( 2S,5S )-2-( 시아노메틸 )-5- 메틸피페라진 -1,4- 디카복실레이트 : 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5S)-5-메틸-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (290 mg, 0.655 mmol)을 DMA (4 mL)로 희석하고 이어서 NaCN (64.2 mg, 1.31 mmol)을 첨가했다. 반응을 55℃로 가열하고 12시간 동안 교반했다. 반응을 냉각되도록 하고, MTBE로 희석하고 포화 중탄산나트륨, 물 및 염수로 세정했다. MTBE을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (2S,5S)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (200 mg, 0.536 mmol, 81.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 274.2 [M+H]+ (마이너스 boc).
단계 G: 벤질 ( 2S,5S )-2-( 시아노메틸 )-5- 메틸피페라진 -1- 카복실레이트 : 1-벤질 4-(tert-부틸) (2S,5S)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (200 mg, 0.536 mmol)을 DCM (2 mL)로 희석하고 이어서 HCl (669 μl, 2.68 mmol)을 첨가했다. 3시간 동안 교반한 후, 반응을 농축시켜 벤질 (2S,5S)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (146 mg, 0.534 mmol, 99.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 274.1 [M+H]+.
단계 H: tert -부틸 4-(( 2S,5S )-4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-5-( 시아노메틸 )-2- 메틸피페라진 -1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2,4-디클로로-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트 (211 mg, 0.695 mmol)을 DMA (4 mL)로 희석하고 이어서 벤질 (2S,5S)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 0.695 mmol) 및 DIEA (364 μl, 2.09 mmol)을 첨가했다. 반응을 주위 온도에서 12시간 동안 교반되도록 했다. 매우 적은 생성물을 검출하여, 반응을 추가 12시간 동안 75℃로 가열했다. 반응을 냉각되도록 하고, 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 에틸 아세테이트를 물, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 tert-부틸 4-((2S,5S)-4-((벤질옥시)카보닐)-5-(시아노메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (53 mg, 0.0980 mmol, 14.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 541.2 [M+H]+.
단계 I: 벤질 ( 2S,5S )-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트: Tert-부틸 4-((2S,5S)-4-((벤질옥시)카보닐)-5-(시아노메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (53 mg, 0.098 mmol)을 DCM으로 희석하고, 이어서 HCl (122 μl, 0.49 mmol)을 첨가했다. 4 시간 교반한 후, 반응을 농축시켜 벤질 (2S,5S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (43 mg, 0.098 mmol, 100 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 441.1 [M+H]+.
단계 J: 벤질 ( 2S,5S )-4-(2- 클로로 -7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (2S,5S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (43 mg, 0.0975 mmol), 1-아이오도나프탈렌 (124 mg, 0.488 mmol), Cs2CO3 (95.3 mg, 0.293 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (12.5 mg, 0.0146 mmol)을 DMA (600 uL)로 희석하고, 아르곤으로 퍼지하고, 밀봉하고 92 ℃로 가열했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각되도록 하고, 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-50% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 벤질 (2S,5S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (26.5 mg, 0.0467 mmol, 47.9 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
단계 K: 2-((2S,5S)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (2S,5S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (26.5 mg, 0.0467 mmol), (s)-(디사이클로헥실(2',6'-디이소프로폭시-[1,1'-바이페닐]-2-일)-l5-포스파닐)(2'-(메틸아미노)-[1,1'-바이페닐]-2-일)팔라듐(III) 메탄설포네이트 (7.96 mg, 0.00935 mmol) 및 Cs2CO3 (76.1 mg, 0.234 mmol)을 DMA (300 uL)로 희석하고 이어서 N-메틸-l-프롤리놀 (21.5 mg, 0.187 mmol)을 첨가했다. 반응을 아르곤으로 퍼지하고, 밀봉하고 90℃로 가열했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각되도록 하고, 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 벤질 (2S,5S)-2-(시아노메틸)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (8 mg, 0.0124 mmol, 26.5 % 수율) 및 2-((2S,5S)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (10 mg, 0.0195 mmol, 41.8 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 L: 2-((2S,5S)-1-아크릴로일-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((2S,5S)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (10 mg, 0.020 mmol)을 DCM (200 uL)로 희석하고, 이어서 DIEA (6.8 μl, 0.039 mmol)을 첨가했다. 반응을 질소 하에 두었고 0℃로 냉각시켰다. 아크릴로일 클로라이드 (1.8 μl, 0.021 mmol)을 첨가하고 반응을 2시간 동안 교반했다. 반응을 10% 중탄산나트륨 용액에 부었고 DCM으로 추출했다. DCM을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 2-((2S,5S)-1-아크릴로일-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 368, 6 mg, 0.011 mmol, 54 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 369
2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-아크릴로일피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (S)-4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (10 g, 34 mmol)을 DMA (68 ml, 34 mmol)에 용해시켰다. 용액에 그 다음 tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (9.3 g, 30 mmol) 이어서 휘니그 염기 (24 ml, 135 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 염기성 물에 부었고 MTBE로 추출했다. 유기물을 추가의 물, 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 10% 내지 70% EtOAc:헥산을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (12 g, 23 mmol, 67 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: Tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1 g, 2 mmol)을 DCM (19 ml, 2 mmol)에 용해시키고 염산 (1,4-디옥산 중 4.0 M 용액) (2 ml, 9 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 DCM에서 재현탁시켰다. 현탁액을 1M NaOH로 세정했다. 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시키고 조 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.8 g, 2 mmol, 99 % 수율)로서 취했다. ESI+APCI MS m/z 427.1 [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (343 mg, 0.375 mmol) 및 2-(디사이클로헥실포스피노)-2',4',6'-트리-i-프로필-1,1'-바이페닐 (357 mg, 0.750 mmol)을 1,4-디옥산 (18740 μl, 1.87 mmol)에 용해시키고 아르곤 하에서 5분 동안 퍼지했다. 반응을 100℃에서 아르곤 하에서 추가 15분 동안 교반했다. 반응에 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.87 mmol), 1-브로모-8-메틸나프탈렌 (1243 mg, 5.62 mmol), 및 탄산세슘 (1832 mg, 5.62 mmol)을 아르곤 하에서 첨가했다. 반응을 아르곤 하에서 캡핑하고 밤새 100℃에서 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 0%-15% DCM:MeOH(+2% NH4OH 개질제)로 용출하는 CombiFlash 상에서 정상 크로마토그래피로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (378 mg, 0.667 mmol, 35.6 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
단계 D: 벤질 (S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 둥근바닥 플라스크에서, 디옥산 (5.29 ml, 0.529 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.3 g, 0.529 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포했다. 3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올 (0.250 g, 1.59 mmol), Cs2CO3 (0.517 g, 1.59 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (0.0969 g, 0.106 mmol) 및 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐-포스피노)크산텐 (0.122g, 0.212mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 2시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 2% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH로 용출하는 실리카겔로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.155 g, 0.225 mmol, 42.6 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 688.3 [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (2253 μl, 0.225 mmol) 및 THF (2253 μl, 0.225 mmol) 및 EtOH (2253 μl, 0.225 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (155 mg, 0.225 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (60.0 mg, 0.0563 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5 분 동안 퍼지했다. 용액, 그 다음 H2의 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (98 mg, 0.177 mmol, 78.5 % 수율)을 제공했다. 이것을 조물질로서 이월했다. ESI+APCI MS m/z 554.3 [M+H]+.
단계 F: 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-아크릴로일피페라진-2-일)아세토니트릴: 디클로로메탄 (1770 μl, 0.177 mmol) 중 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (98 mg, 0.177 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아실로일 클로라이드 (14.4 μl, 0.177 mmol) 이어서 휘니그 염기 (61.8 μl, 0.354 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 주위 온도에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 농축물을 ACN: H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-아크릴로일피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 369, 63.5 mg, 0.104 mmol, 59.0 % 수율)을 수득했다.ESI+APCI MS m/z 608.3 [M+H]+.
실시예 370
(S)-2-(1-아크릴로일-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
(S)-2-(1-아크릴로일-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(3-모폴리노프로폭시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 D에서 3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올 대신에 N-하이드록시프로파닐모폴린으로 대체하고 또한 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) 및 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐-포스피노)크산텐을 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II)로 대체하여 실시예 369에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 596.3 [M+H]+.
실시예 371
(S)-3-((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드
(S)-3-((4-(4-아크릴로일-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드: 표제 화합물을, 단계 D에서 3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로판-1-올을 3-하이드록시-N,N-디메틸프로판아미드로 대체하고 또한 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) 및 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐-포스피노)크산텐을 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II)로 대체하여 실시예 369에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 372
2-((S)-1-((E)-부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.05863 mmol) 및 3-(E)-부트-2-에노산 (6.562 mg, 0.07622 mmol)을 DMF (400 uL)로 희석하고 이어서 DIEA (20.48 μl, 0.1173 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (52.35 μl, 0.08795 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-((E)-부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 372, 10 mg, 0.01725 mmol, 29.42 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 580.3 [M+H]+.
실시예 373
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 마이크로웨이브 튜브에서 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 0.198 mmol)을 디옥산 (98.9 μl, 0.198 mmol)에 용해시키고 탄산세슘 (129 mg, 0.396 mmol), 및 2-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (163 mg, 0.989 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 12시간 동안 90℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 GF/F 종이를 통해 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (0.25 % NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (70 mg, 0.11 mmol, 54%)을 제공했다.
단계 B: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 표제 화합물을, 실시예 375 단계 F에서 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 375, 단계들 F-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 374
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(2,2,2-트리플루오로에틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(2-(2,2,2- 트리플루오로에틸 )페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를 1-브로모-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)벤젠로 대체하여 실시예 375, 단계들 E-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]+.
실시예 375
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 2- 클로로 -4-(3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (8.0 g, 26.3 mmol), 휘니그 염기 (22.9 ml, 132 mmol) 및 2-(피페라진-2-일)아세토니트릴 디하이드로클로라이드 (5.21 g, 26.3 mmol)을 DMA (75 mL)에 넣고 rt에서 20분 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 EtOAc (3x100 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 물 (3x 50 mL)로 세정하고 그 다음 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과하고 여과물을 농축시켜 조 tert-부틸 2-클로로-4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트를 제공했다. ESI+APCI MS m/z 337.1 [M+H]+.
단계 B : tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2-클로로-4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (10.50 g, 26.725 mmol) 및 TEA (5.5876 ml, 40.088 mmol)을 THF (100 mL)에 넣었고 0C로 냉각시켰다. 벤질 카보노클로리데이트 (5.6518 ml, 40.088 mmol)을 첨가하고 반응을 교반된0C에서 30분 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM (3x 50 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (hex 중 0-60% EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (12.939 g, 24.551 mmol, 91.865 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]+.
단계 C : tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 원뿔형 바닥 바이알에서, 디옥산 (62.2 ml, 6.22 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (3.28g, 6.22 mmol)을 아르곤으로 살포하고 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (2.15 g, 18.7 mmol), Cs2CO3 (6.08 g, 18.7 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.795 g, 0.934 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 18시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 냉각시키고 물을 첨가했다. 혼합물을 DCM (3x15mL)로 추출하고 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (2.65 g, 4.37 mmol, 70.3 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.6 g, 1.0 mmol)을 디클로로메탄 (10 ml, 1.0 mmol)에 용해시키고 염산 (1,4-디옥산 중 4.0 M 용액 (1 ml, 5 mmol)로 처리하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 진공에서 농축시키고 물질을 EtOAc와 염기성 물 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.4 g, 0.8 mmol, 80 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 506.2 [M+H]+.
단계 E : 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 : 바이알에 탄산세슘 (193 mg, 0.593 mmol), 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (60 mg, 0.119 mmol) 및 Rhuphos Pd G3 (9.92 mg, 0.0119 mmol), 및 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드 (93.4 mg, 0.356 mmol)을 첨가했다. 바이알을 밀봉하고 1,4-디옥산 (1187 μl, 0.119 mmol)을 격막을 통해 첨가했다. Ar로 혼합물에 5분 동안 거품을 일으키고 그 다음 혼합물을 7시간 동안 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고, 정성지를 통해 여과하고 농축했다. 황색 고체를 최소 DCM에 용해시키고 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (35 mg, 0.0541 mmol, 45.6%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 551.3 [M+H]+.
단계 F: 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (541 μl, 0.0541 mmol) 및 THF (541 μl, 0.0541 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (35.2 mg, 0.0541 mmol)의 용액에 팔라듐 (28.8 mg, 0.0135 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (26.4 mg, 0.0511 mmol, 94.5 % 수율)을 제공했다.
단계 G : 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: CH2Cl2 (511 μl, 0.0511 mmol) 중 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (26.4 mg, 0.0511 mmol)의 현탁액에 -78℃에서 아크릴로일 클로라이드 (1022 μl, 0.102 mmol) (DCM 중 새롭게 제조된 0.1M 용액) 이어서 트리에틸아민 (14.2 μl, 0.102 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 0 ℃에서 45분 동안 교반했다. LC-MS는 생성물 형성을 나타내었다. 반응 농축시키고 prep HPLC로 정제하여 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 375, 3 mg, 0.00526 mmol, 10.3 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 376
2-(1-(부트-2-이노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 2,2,2-트리플루오로아세테이트
단계 A: tert -부틸 2- 클로로 -4-(3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-5,8- 디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (8.0 g, 26.3 mmol), 휘니그 염기 (22.9 ml, 132 mmol) 및 2-(피페라진-2-일)아세토니트릴 디하이드로클로라이드 (5.21 g, 26.3 mmol)을 DMA (75 mL)에 넣었고 rt에서 20분 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 EtOAc (3x100 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 물 (3x 50 mL)로 세정하고 그 다음 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과하고 여과물을 농축시켜 조 tert-부틸 2-클로로-4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트를 제공했다. ESI+APCI MS m/z 337.1 [M+H]+.
단계 B : tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 2-클로로-4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (10.50 g, 26.73 mmol) 및 TEA (5.59 ml, 40.0 mmol)을 THF (100 mL)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. 벤질 카보노클로리데이트 (5.65 ml, 40.0 mmol)을 첨가하고 반응을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM (3x 50 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (hex 중 0-60% EtOAc)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (12.94 g, 24.6 mmol, 92 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]+.
단계 C : tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 원뿔형 바닥 바이알에서, 디옥산 (62.2 ml, 6.22 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (3.28g, 6.22 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (2.15 g, 18.7 mmol), Cs2CO3 (6.08 g, 18.7 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.795 g, 0.934 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 18시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 냉각시키고 물을 첨가했다. 혼합물을 DCM (3x15mL)로 추출하고 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (2.65 g, 4.37 mmol, 70 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.6 g, 1.0 mmol)을 디클로로메탄 (10 ml, 1.0 mmol)에 용해시키고 염산 (1,4-디옥산 중 4.0 M 용액 (1 ml, 5 mmol)로 처리하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 물질을 EtOAc와 염기성 물 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.4 g, 0.8 mmol, 80 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 506.2 [M+H]+.
단계 E: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 탄산세슘 (193 mg, 0.59 mmol), 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (60 mg, 0.12 mmol) 및 Rhuphos Pd G3 (9.92 mg, 0.012 mmol), 및 1-브로모나프탈렌 (49.8 μl, 0.36 mmol)을 첨가했다. 바이알을 밀봉하고 1,4-디옥산 (1187 μl, 0.12 mmol)을 격막을 통해 첨가했다. Ar로 혼합물에 5분 동안 거품을 일으키고 그 다음 혼합물을 7시간 동안 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고, 정성지를 통해 여과하고 농축했다. 황색 고체를 최소 DCM에 용해시키고 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (28 mg, 0.044 mmol, 37% 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 632.4 [M+H]+.
단계 F: 2-(4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (712 μl, 0.071 mmol) 및 THF (712 μl, 0.071 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (45 mg, 0.071 mmol)의 용액에 팔라듐 (38 mg, 0.018 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.060 mmol, 85 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 498.3 [M+H]+.
단계 G: 2-(1-(부트-2-이노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 2,2,2- 트리플루오로아세테이트: 0℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (603 μl, 0.060 mmol)을 수용하고 있는 25 mL RBF에 2-(4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.060 mmol) 및 트리에틸아민 (12.2 mg, 0.12 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, 2-부틴산 (6.08 mg, 0.072 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (26.9 μl, 0.090 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0℃에서 교반되도록 했다. 물을 첨가하고 반응 EtOAc (2x 25 mL)로 추출했다. 유기층을 포화 LiCl, NaCl, 및 물 (10 mL 각각의 세정)로 세정했다. 건조시키고 고체로 농축시키고, 이것을 prep HPLC (5-95% ACN:H2O, TFA)로 정제하여 표제 화합물 2-(1-(부트-2-이노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (실시예 376, 11.2 mg, 0.02 mmol, 33% 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 564.3 [M+H]+.
실시예 377
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디옥산 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.30 g, 0.54 mmol)의 용액에 (S)-(1-메틸피페리딘-2-일)메탄올 (0.49 g, 3.8 mmol) 및 Cs2CO3 (0.53 g, 1.6 mmol)을 첨가하고 반응을 15분 동안 아르곤으로 탈가스하고, 이어서 Rhuphos Pd G3 (0.068 g, 0.081 mmol)을 첨가하고 반응을 밤새 100℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 GFF 종이를 통해 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 그 다음 2% 수산화암모늄을 갖는 1→15% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.23 g, 0.45 mmol, 83 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0℃로 냉각된 DCM (20 mL) 중 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.23 g, 0.45 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.16 ml, 0.90 mmol)을 첨가하고 이어서 (10 mL의 DCM 중) 아크릴로일 클로라이드 (0.037 ml, 0.45 mmol)의 용액을 첨가하고 반응을 0 ℃에서 10분 동안 교반했다. 반응에 그 다음 1 mL의 메탄올을 첨가하고 반응을 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 2% NH4OH를 갖는 1→ 10% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 2회 수행하여 고체를 수득했고, 이것을 0.1%TFA를 갖는 5→95% ACN/물을 개질제로서 사용하는 역 prep HPLC로 추가로 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 377, 0.030 g, 0.053 mmol, 12 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 378
2-((2S,5R)-1-아크릴로일-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1- 벤질 4-( tert -부틸) ( 2R,5R )-2-( 하이드록시메틸 )-5- 메틸피페라진 -1,4-디카복실레이트: Tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카복실레이트 (1.0 g, 4.34 mmol)을 물 (50 mL)에 용해시키고 이어서 EtOAc (6.68 ml, 4.34 mmol) 및 나트륨 수소 카보네이트 (1.09 g, 13.0 mmol)을 첨가하고 반응을 3 분 동안 교반했다. 반응에 1개의 볼러스 중 벤질 카보노클로리데이트 (0.648 ml, 4.56 mmol)을 첨가하고 (내부 온도 19 --> 25 C), 그리고 반응을 밤새 실온에서 교반했다. 층을 그 다음 분리하고 유기물 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을, 10→70% EtOAc/Hex을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (1.2 g, 3.29 mmol, 75.8 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 265.2 [M+H-boc]+.
단계 B: 1- 벤질 4-( tert -부틸) ( 2R,5R )-5- 메틸 -2-((( 메틸설포닐 ) 옥시 ) 메틸 )피페라진-1,4-디카복실레이트: 0C로 냉각된 DCM 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (1.2 g, 3.3 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.64 g, 4.9 mmol) 및 메탄설포닐 클로라이드 (0.30 ml, 3.6 mmol)을 첨가하고 반응을 0 ℃에서 2시간 동안 교반했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 10→70% EtOAc/hex을 용출물로서 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5R)-5-메틸-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (1.3 g, 2.9 mmol, 89 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 343.1 [M+H-boc]+.
단계 C: 1- 벤질 4-( tert -부틸) ( 2S,5R )-2-( 시아노메틸 )-5- 메틸피페라진 -1,4- 디카복실레이트: DMA (20 mL) 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (2R,5R)-5-메틸-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (1.3 g, 2.9 mmol)의 용액에 시아노나트륨 (0.29 g, 5.9 mmol)을 첨가하고 반응을 48시간 동안 55 ℃에서 교반했다. 반응을 그 다음 염기성 물 (220 mL)로 희석하고 aq 층을 MTBE로 추출했다. 유기물을 그 다음 물 (2x50 mL), 염수 (50 mL)로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 10→50% EtOAc/hex을 용출물로서 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (2S,5R)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (0.90 g, 2.4 mmol, 82 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 274.1 [M+H-boc]+.
단계 D: 벤질 ( 2S,5R )-2-( 시아노메틸 )-5- 메틸피페라진 -1- 카복실레이트 하이드로클로라이드: DCM 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (2S,5R)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카복실레이트 (0.90 g, 2.4 mmol)의 용액에 염화수소 (3.0 ml, 12 mmol)을 첨가하고 반응을 2시간 동안 rt에서 교반했다 (1시간 내에 5 초과 eq의 HCl을 첨가함). 반응을 그 다음 진공에서 농축시키고 물질 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 274.2 [M+H]+.
단계 E: tert -부틸 4-(( 2R,5S )-4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-5-( 시아노메틸 )-2- 메틸피페라진 -1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 고체 벤질 (2S,5R)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (0.75 g, 2.4 mmol) 및 tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.74 g, 2.4 mmol)에 DMA (10 mL) 이어서 휴니그 염기 (1.3 ml, 7.3 mmol)을 첨가하고 반응을 밤새 실온에서 교반했다. 반응을 그 다음 물에 부었고 수성층을 MTBE로 추출했다. MTBE 층을 물, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 10→70% etoac/hex을 용출물로서 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 4-((2R,5S)-4-((벤질옥시)카보닐)-5-(시아노메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.72 g, 1.3 mmol, 55 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 541.3 [M+H]+.
단계 F: 벤질 ( 2S,5R )-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트: DCM (20 mL) 중 tert-부틸 4-((2R,5S)-4-((벤질옥시)카보닐)-5-(시아노메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.72 g, 1.3 mmol)의 용액에 염화수소 (1.7 ml, 6.7 mmol) (디옥산 중 4 M)을 첨가하고 반응을 1시간 동안 실온에서 교반했다. 반응을 그 다음 진공에서 농축시키고 잔류물을 EtOAc와 염기성 물 사이에서 분할시켰다. 유기물을 분리하고 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 다음 반응에서 조물질로 사용했다. ESI+APCI MS m/z 441.2 [M+H]+.
단계 G: 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (40 mL) 중 벤질 (2S,5R)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (0.48 g, 1.1 mmol)의 용액에 1-아이오도나프탈렌 (1.4 g, 5.4 mmol) 및 Cs2CO3 (1.1 g, 3.3 mmol)을 첨가하고 반응을 15분 동안 Ar로 탈가스하고, 이어서 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.14 g, 0.16 mmol)을 첨가하고 반응을 5시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 그 다음 냉각시키고 GFF 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 10→70 etoac/hex을 용출물로서 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.8 g, 5.1 mmol, 64 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
단계 H: 2-((2S,5R)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디옥산 (40 mL) 중 벤질 (2S,5R)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)-5-메틸피페라진-1-카복실레이트 (0.48 g, 0.85 mmol)의 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (0.39 g, 3.4 mmol) 및 Cs2CO3 (1.4 g, 4.2 mmol)을 첨가하고 반응을 15분 동안 Ar로 탈가스하고 이어서 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.11 g, 0.13 mmol)을 첨가하고 반응을 밤새 100℃로 가열했다. 반응을 그 다음 냉각시키고 GFF 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 1→15% (MeOH +2% NH4OH)/DCM을 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 벤질 (2S,5R)-2-(시아노메틸)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 0.31 mmol, 37 % 수율) 및 2-((2S,5R)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.14 g, 0.27 mmol, 32 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 I: 2-((2S,5R)-1-아크릴로일-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0℃로 냉각된 2-((2S,5R)-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.14 g, 0.274 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.0982 ml, 0.547 mmol) 이어서 아크릴로일 클로라이드 (0.0225 ml, 0.274 mmol)을 첨가하고 반응을 0 ℃에서 10분 동안 교반했다. 1 mL의 메탄올을 반응에 첨가하고 반응을 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 개질제로서 0.1% TFA를 갖는 5→95% ACN/물로 용출하는 길슨 역 prep 2 HPLC로 2회 정제했다. 조합된 분획을 EtOAc와 염기성 물 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((2S,5R)-1-아크릴로일-5-메틸-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 378, 0.0118 g, 0.0209 mmol, 7.62 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 379
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-2-(트리플루오로메틸)벤젠으로 대체하여 실시예 234, 단계들 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 380
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(2- 메톡시에틸 ) 피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를, C에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 (S)-(1-(2-메톡시에틸)피롤리딘-2-일)메탄올로 대체하고 단계 및 1-브로모나프탈렌으로 대체하여 실시예 375, 단계들 C-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 596.3 [M+H]+.
실시예 381
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2S,4R)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-메톡시파이롤리딘-1-카복실레이트: 단계 C에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 tert-부틸 (2S,4R)-2-(하이드록시메틸)-4-메톡시파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하고 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를 1-브로모나프탈렌으로 대체하여 실시예 375, 단계들 C-F에 따라 제조했다.
단계 B: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((2S,4R)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(2-(((2S,4R)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-메톡시피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (27.0 mg, 0.04 mmol, 포름알데하이드 (15.7 μl, 0.2 mmol), Na(OAc)3BH (17.7 mg, 0.08 mmol)을 THF (2 mL)에 넣었고 2시간 동안 교반했다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM 중 10% MeOH (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 C: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴을, 단계 F에서 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((2S,4R)-4-메톡시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 375 단계 F 및 G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 582.3 [M+H]+.
실시예 382
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3- 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 (R)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올로 대체하고 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠로 대체하여 실시예 234, 단계들 F-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 383
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5- 플루오로 -4-( 트리플루오로메틸 )피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 3-브로모-5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘으로 대체하여 실시예 234, 단계들 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 589.3 [M+H]+.
실시예 384
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: Tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.37 g, 10.2 mmol)을 DCM (75 mL)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. HCl (12.7 ml, 50.9 mmol)을 첨가하고 반응을 rt로 가온시키고 2시간 동안 교반했다. 반응을 농축시키고 DCM에 넣었다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM (3x 50 mL)로 추출했다. 유기층을 조합하고, 건조시키고, 농축시켜 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (4.33 g, 10.1 mmol, 99 % 수율)을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 탄산세슘 (2.29 g, 7.0 mmol), 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.00 g, 2.3 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.30 g, 0.35 mmol), 3-브로모-5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘 (1.29 g, 5.3 mmol) 및 1,4-디옥산 (15.6 ml, 2.3 mmol) 바이알을 Ar로 탈가스하고 밀봉하고, 그 다음 24시간 동안 90℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고 물 및 포화 NH4Cl을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (헥산 중 5-75% EtOAc)로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (634 mg, 1.1 mmol, 46 % 수율)을 제공했다.
단계 C: tert -부틸 (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트: 원뿔형 바닥 바이알에서, 디옥산 (10746 μl, 1.07 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (634 mg, 1.07 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포했다. Tert-부틸 (2S,4R)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (942 mg, 4.30 mmol), Cs2CO3 (1050 mg, 3.22 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (137 mg, 0.161 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 18시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 냉각시키고 물을 첨가했다. 혼합물을 DCM (3x20mL)로 추출하고 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0-10% MeOH)로 정제하여 tert-부틸 (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트 (579 mg, 0.907 mmol, 84 % 수율)을 수득했다.
단계 D: tert -부틸 (2S,4R)-2-(((4-((S)-4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트: Tert-부틸 (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트 (579 mg, 0.907 mmol), 트리에틸아민 (379 μl, 2.72 mmol)을 CH2Cl2 (9066 μl, 0.907 mmol)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. 아크릴로일 클로라이드 (6044 μl, 1.81 mmol)을 (DCM 중 새롭게 제조된 0.3M 용액)을 첨가하고 반응을 45분 동안 0℃에서 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM (3x 15 mL)로 추출했다. 층을 조합하고 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 E: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 밀봉 용기에서 tert-부틸 (2S,4R)-2-(((4-((S)-4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트 (628 mg, 0.91 mmol)을 MeOH (2 mL)에 넣었다. HCl (756 μl, 4.53 mmol) (6M 수성)을 첨가하고 혼합물을 rt에서 5시간 동안 교반했다. 포화 바이카보네이트를 느리게 첨가하고 pH ~9가 되도록 했다. 혼합물을 DCM (3x20 ml)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 F: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (175 mg, 0.30 mmol), 포름알데하이드 (111 μl, 1.48 mmol), Na(OAc)3BH (125 mg, 0.59 mmol)을 THF (2 mL)에 넣었고 2시간 동안 교반했다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM 중 10% MeOH (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 4-13% MeOH)로 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (69.7 mg, 0.115 mmol, 39 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 607.2 [M+H]+.
실시예 385
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5-클로로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5- 클로로 -4-( 트리플루오로메틸 )피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌 대신에 3-브로모-5-클로로-4-(트리플루오로메틸)피리딘을 사용하고 단계 I에서 MeOH 대신에 THF를 사용하여 실시예 234, 단계들 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 605.3 [M+H]+.
실시예 386
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-이소프로필피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-((( 2S,4R )-4- 플루오로 -1- 이소프로필피롤리딘 -2-일)메톡시)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴을, 단계 F에서 포름알데하이드 대신에 프로판-2-온을 사용하여 실시예 384, 단계 F에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 635.3 [M+H]+.
실시예 387
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5-클로로-4-메틸피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5- 클로로 -4- 메틸피리딘 -3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌 대신에 3-브로모-5-클로로-4-메틸피리딘을 사용하여 실시예 234, 단계들 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 551.2 [M+H]+.
실시예 388
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌 대신에 1-브로모-3-플루오로-2-메틸벤젠을 사용하여 실시예 234, 단계들 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 534.3 [M+H]+.
실시예 389
2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1- 벤질 4-( tert -부틸) (R)-2-( 하이드록시메틸 )피페라진-1,4- 디카복실레이트: 3L 플라스크 중 tert-부틸 (R)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (76.0 g, 351 mmol)에 물 (500 mL)을 첨가하고 슬러리를 물질이 완전히 용해될 때까지 교반했다. 이러한 혼합물에 EtOAc (541ml, 351 mmol) 이어서 NaHCO3 (88.6 g, 1.05 mol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 3분 동안 교반했다 (내부 온도 = 20℃). 이러한 혼합물에 Cbz-Cl (52.5 ml, 369 mmol)을 3분에 걸쳐 첨가했다 (내부 온도 20℃에서 내지 25℃, 배기가스가 이 시점에서 보였다), 반응을 1일 동안 rt에서 교반했다. 반응 혼합물을 분별 깔때기로 옮기고 유기층을 염수로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 10-70% EtOAc/hex로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (R)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (114.6 g, 327.0 mmol, 93% 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 251.1 [M-Boc+H]+.
단계 B: 1- 벤질 4-( tert -부틸) (R)-2-((( 메틸설포닐 ) 옥시 ) 메틸 )피페라진-1,4- 디카복실레이트: 0℃로 냉각된 CH2Cl2 (457 mL, 0.2 M) 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (R)-2-(하이드록시메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (32 g, 91.3 mmol)의 용액에 DIEA (24.6 ml, 137 mmol) 이어서 메탄설포닐 클로라이드 (7.77 ml, 100 mmol)을 1분에 걸쳐 첨가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 분별 깔때기로 옮기고 1:1 물/염수 (500 mL)로 세정했다. 유기층을 수집하고, 건조시키고 (MgSO4), 및 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 10-60% EtOAc/hex로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (R)-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (33 g, 77.0 mmol, 84.3 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 329.1 [M-Boc+H]+.
단계 C: 1- 벤질 4-( tert -부틸) (S)-2-( 시아노메틸 )피페라진-1,4- 디카복실레이트 : DMA (368 ml, 73.5 mmol) 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (R)-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (12.6 g, 29.4 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포했다. 용액에 시안화나트륨 (3.60 g, 73.5 mmol)을 첨가하고 반응을 55℃에서 1일 동안 교반하고, HPLC (긴 방법)으로 모니터링하여 반응 완료를 결정했다. 반응 혼합물을 분별 깔때기로 옮기고, 0.5M NaOH (800 mL)로 희석하고, 그 다음 MTBE (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 그 다음 염기성 물 (2x 200 mL), 염수 (100 mL)로 세정하고, 건조시키고 (MgSO4), 그리고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 용출물로서 10-->60% EtOAc/hex로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 1-벤질 4-(tert-부틸) (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (7.9 g, 22.0 mmol, 75 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 260.1 [M-Boc+H]+.
단계 D: 벤질 (S)-2-( 시아노메틸 )피페라진-1- 카복실레이트 하이드로클로라이드 : DCM (50 mL) 중 1-벤질 4-(tert-부틸) (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (20.4 g, 56.8 mmol)의 용액에 염화수소 (99.3 ml, 397 mmol) (디옥산 중 4.0 M 용액)을 첨가하고 반응을 rt에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고 진공 하에서 건조시켜 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (16.8 g, 56.8 mmol, 100 % 수율)을 포움으로서 수득했다. ESI+APCI MS m/z 260.1 [M+H]+.
단계 E: tert -부틸 (S)-4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 : DMA (114 ml, 56.8 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (16.8 g, 56.8 mmol)의 용액에 tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (15.5 g, 51.1 mmol) 이어서 DIEA (39.7 ml, 227 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 1L의 물로 희석하고 MTBE (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 물 (2x200 mL), 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 10-60% 용출물로서 EtOAc/hex로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (22.8 g, 43.3 mmol, 76 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]+.
단계 F: tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: PTFE 스크류 캡이 장착된 250 mL 두꺼운-벽 RBF에서, 디옥산 (60.2 ml, 10.5 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.55 g, 10.5 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.64 g, 31.6 mmol), Cs2CO3 (10.3 g, 31.6 mmol), Ruphos Pd G3 (0.881 g, 1.05 mmol)을 순차적으로 첨가하고 수득한 혼합물을 추가 5분 동안 아르곤으로 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 1일 동안 100℃에서 가열했다. 개시 물질의 소비 시에, 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고 Cbz-Cl을, 필요에 따라 첨가하여 Cbz-가수분해된 생성물을 표제 화합물로 전환시켰다. 반응 혼합물을, 그 다음 EtOAc/10% 염수 사이에서 분할시켰다. 수성층을 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 농축했다. 잔류물을 1.5%MeOH/0.15% NH4OH/DCM 내지 11.25%MeOH/1.125% NH4OH/DCM (DCM 중 사전혼합물 15%MeOH/1.5%NH4OH 및 DCM 중 이러한 혼합물의 10-75%의 램프)의 구배로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하고 표제 화합물 (4.51 g, 7.45 mmol, 71%)을 수득했다. ESI MS m/z 606.3 [M+H]+.
단계 G: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: DCM (1.0 g, 12 mmol) 중 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (7.2 g, 12 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4M, 15 ml, 59 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 비스 HCl 염으로 농축시켰다. 잔류물을 DCM / NaHCO3 (sat) 사이에서 분할시키고 수성층을 DCM (3x)으로 추출했다. 조합된 유기층을 건조시키고 농축시켜 표제 화합물 4.72 g (0.009 mmol, 79%)을 제공했다. ESI MS m/z 506.3 [M+H]+.
단계 H: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 탄산세슘 (967 mg, 2.97 mmol), 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 0.989 mmol), Rhuphos Pd G3 (124 mg, 0.148 mmol), 1-브로모-2,3-디메틸벤젠 (915 mg, 4.94 mmol) 및 1,4-디옥산 (9889 μl, 0.989 mmol)을 첨가하고 바이알을 Ar로 탈가스하고 밀봉하고, 그 다음 24시간 동안 75℃로 가열했다. 물 및 포화 NH4Cl을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 유기층을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (DCM 중 0-12% MeOH w/0.25% NH4OH)로 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (505mg, 0.828 mmol, 83.7 % 수율)을 제공했다. ESI MS m/z 610.4 [M+H]+.
단계 I: 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (8282 μl, 0.828 mmol) 및 THF (8282 μl, 0.828 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (505 mg, 0.828 mmol)의 용액에 팔라듐 (441 mg, 0.207 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입했다. 혼합물을, 그 다음 주위 온도에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 THF 1:1 및 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다. ESI MS m/z 476.3 [M+H]+.
단계 J: 2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0 ℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (4415 μl, 0.4415 mmol)를 수용하고 있는 25 mL RBF에 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (210 mg, 0.44 mmol) 및 트리에틸아민 (122.7 μl, 0.88 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, 부트-2-이노산 (44.54 mg, 0.53 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (197.1 μl, 0.66 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0 ℃에서 교반되도록 했다. 물을 첨가하고 고체를 여과했다. 고체를 실리카겔 (0.25% NH4OH를 가지고 있는 DCM 중 5-18% MeOH)로 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 389, 144 mg, 0.27 mmol, 60%)를 제공했다. ESI+APCI MS m/z 542.3 [M+H]+.
실시예 390
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,3S)-3-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(2-(((2R,3S)-1-(tert-부톡시카보닐)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 단계 C에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 tert-부틸 (2R,3S)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 400, 단계 C-E에 따라 제조했다.
단계 B: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,3S)-3-하이드록시피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 tert-부틸 (2R,3S)-2-(((4-((S)-4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘-1-카복실레이트 (363 mg, 0.473 mmol)을 MeOH (10 mL)에 넣었다. 6M 수성 HCl을 첨가하고 rt에서 6시간 동안 교반했다. 반응을 0℃로 냉각시키고 포화 바이카보네이트를 느리게 첨가했다. 혼합물을 DCM (3x20 ml)로 추출했다. 추출물을 조합하고, 건조시키고, 여과하고 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 C: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,3S)-3-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴을 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,3S)-3-하이드록시피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴로 대체하여 실시예 384, 단계 F에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 391
2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-( 부트 -2- 이노일 )-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모-2,3-디메틸벤젠을 1-브로모-8-클로로나프탈렌으로 대체하여 실시예 389, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 598.2 [M+H]+.
실시예 392
2-((S)-1-(사이클로부트-1-엔-1-카보닐)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-( 사이클로부트 -1-엔-1- 카보닐 )-4-(7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 부트-2-이노산을 사이클로부트-1-엔-1-카복실산으로 대체하여 실시예 389 단계 J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 556.3 [M+H]+.
실시예 393
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.22 mmol), K2CO3 (329 μl, 0.66 mmol), 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (82.6 mg, 0.658 mmol) 및 테트라키스 (25.3 mg, 0.022 mmol)을 디옥산 (731 μl, 0.22 mmol)에 넣었고 18시간 동안 90℃로 가열했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM 중 10% MeOH (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 2-80% MeOH)로 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.11 mmol, 52 % 수율)을 제공했다.
단계 B: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 I에서 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 234, 단계 I 및 J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]+.
실시예 394
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌 대신에 1-브로모-2,3-디메틸벤젠을 사용하여 실시예 234, 단계들 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 530.3 [M+H]+.
실시예 395
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 : 마이크로웨이브 튜브에서 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.362 mmol)을 디옥산 (181 μl, 0.362 mmol)에 용해시키고 탄산세슘 (236 mg, 0.723 mmol) 및 (S)-tert-부틸 2-(하이드록시메틸)-2-메틸파이롤리딘-1-카복실레이트 (389 mg, 1.81 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 2시간 동안 90℃로 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 0%-10% DCM:MeOH로 용출하는 CombiFlash 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (264 mg, 0.361 mmol, 99.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 732.4 [M+H]+.
단계 B: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (264 mg, 0.361 mmol)을 디클로로메탄 (3607 μl, 0.361 mmol)에 용해시키고 TFA (556 μl, 7.21 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 포화 bicarb로 처리했다. 수성물을 DCM (2X)로 추출하고 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기물을 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 0.332 mmol, 92.2 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-2-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (105 mg, 0.1662 mmol)을 포름산 (94.05 μl, 2.493 mmol)에 용해시키고 포름알데하이드 (1868 μl, 24.93 mmol)로 처리했다. 반응 혼합물을 85℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 포화 bicarb로 처리했다. 수성물을 DCM (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시키고 0%-10% DCM:MeOH로 용출하는 CombiFlash 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (75 mg, 0.1161 mmol, 69.88 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]+.
단계 D: 2-(4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (1812 μl, 0.181 mmol) 및 THF (1812 μl, 0.181 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (117 mg, 0.181 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (96.4 mg, 0.0453 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5분 동안 퍼지했다. 용액, 그 다음 H2의 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 2-(4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (88 mg, 0.172 mmol, 94.9 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디클로로메탄 (1720 μl, 0.17 mmol) 중 2-(4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (88 mg, 0.17 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (14 μl, 0.17 mmol) 이어서 휘니그 염기 (60 μl, 0.34 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 주위 온도에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을, 그 다음 진공에서 농축시켰다. 농축물을 ACN: H2O의 60:40 혼합물에 현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (14 mg, 0.025 mmol, 14 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 396
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 원뿔형 바닥 바이알에서, 디옥산 (3616 μl, 0.362 mmol) 중 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.362 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (S)-(1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메탄올 (168 mg, 1.08 mmol), Cs2CO3 (353 mg, 1.08 mmol), Rhuphos Pd G3 (30.2 mg, 0.0362 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 1시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. EtOAc을 첨가하고 염수 (2X)로 세정했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 0-20% DCM/MeOH + 2% NH4OH로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 깨끗한 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (90 mg, 0.134 mmol, 37.0 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 672.4 [M+H]+.
단계 B : 2-(4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (1340 μl, 0.13 mmol) 및 THF (1340 μl, 0.13 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (90 mg, 0.13 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (36 mg, 0.033 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5분 동안 퍼지했다. 용액, 그 다음 H2의 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시켜 조 2-(4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (71 mg, 0.13 mmol, 99 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 538.3 [M+H]+.
단계 C : 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디클로로메탄 (1320 μl, 0.132 mmol) 중 2-(4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (71 mg, 0.132 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (10.7 μl, 0.132 mmol) 이어서 휘니그 염기 (46.1 μl, 0.264 mmol)을 첨가했다. 반응을 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 농축물을 ACN: H2O의 60:40 혼합물에 현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 396, 15.7 mg, 0.0265 mmol, 20.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 592.4 [M+H]+.
실시예 397
2-(1-아크릴로일-4-(2-(2-(디메틸아미노)-2-메틸프로폭시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-(2-(디메틸아미노)-2- 메틸프로폭시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 (S)-(1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메탄올을 2-디메틸아미노-2-메틸-1-프로판올로 대체하여 실시예 396에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 554.4 [M+H]+.
실시예 398
2-((2S)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드
단계 A: 2- 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 마이크로웨이브 튜브에서 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.362 mmol)을 디옥산 (181 μl, 0.362 mmol)에 용해시키고 탄산세슘 (236 mg, 0.723 mmol) 및 N-tert-부톡시카보닐-L-프롤리놀 (364 mg, 1.81 mmol)로 처리했다. 튜브를, 그 다음 캡핑하고 밤새 90℃로 가열했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 0%-10% DCM:MeOH로 용출하는 CombiFlash 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (225 mg, 0.313 mmol, 86.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 718.4 [M+H]+.
단계 B : 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((S)- 피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (225 mg, 0.313 mmol)을 디클로로메탄 (3134 μl, 0.313 mmol)에 용해시키고 TFA (483 μl, 6.27 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 유기물을 포화 bicarb로 세정했다. 유기물을 DCM(3x)으로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((S)-피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (111 mg, 0.180 mmol, 57.3 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 618.3 [M+H]+.
단계 C : 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((S)-피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (111 mg, 0.1797 mmol)을 디클로로메탄 (1797 μl, 0.1797 mmol)에 용해시키고 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (156.9 μl, 0.8984 mmol) 및 클로로아세틸디메틸아민 (46.20 μl, 0.4492 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 30분 동안 교반했다. 2 초과 당량의 염기를 첨가하고 반응을 추가 3시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 0%-15% DCM/MeOH + 0.5% NH4OH 개질제로 용출하는 CombiFlash 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 깨끗한 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (73 mg, 0.1039 mmol, 57.80 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 703.3 [M+H]+.
단계 D : 2-((2S)-2-(((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드: EtOH (1039 μl, 0.10 mmol) 및 THF (1039 μl, 0.10 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-(2-(디메틸아미노)-2-옥소에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (73 mg, 0.10 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (28 mg, 0.026 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5 분 동안 퍼지했다. 용액, 그 다음 H2의 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 2-((2S)-2-(((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드 (43 mg, 0.076 mmol, 73 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 569.3 [M+H]+.
단계 E : 2-((2S)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드: 디클로로메탄 (756 μl, 0.0756 mmol) 중 2-((2S)-2-(((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드 (43 mg, 0.0756 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아크릴로일 클로라이드 (6.14 μl, 0.0756 mmol) 이어서 휘니그 염기 (26.4 μl, 0.151 mmol)을 첨가했다. 반응을, 그 다음 주위 온도에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, ACN: H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-((2S)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드 (14.9 mg, 0.0239 mmol, 31.6 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]+.
실시예 399
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -3-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 (S)-(1-(사이클로프로필메틸)피롤리딘-2-일)메탄올을 (3R)-(1-메틸-피롤리딘-3-일)-메탄올로 대체하여 실시예 396에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 552.3 [M+H]+.
실시예 400
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: DCM (50 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.0 g, 9.5 mmol)의 용액에 염화수소 (12 ml, 47 mmol, 디옥산 중 4 M 용액)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 탁한 슬러리로 농축시키고 EtOAc/물의 혼합물을 첨가했다. 수성층을 1M NaOH로 염기성화하고 수성층을 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (4.0 g, 9.4 mmol, 99 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 427.1 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (40 mL) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (3.4 g, 8.0 mmol)의 용액에 1-아이오도나프탈렌 (6.0 ml, 40 mmol) 및 탄산세슘 (5.2 g, 16 mmol)을 첨가하고 반응을 15분 동안 아르곤으로 탈가스하고 이어서 Rhuphos Pd G3 (1.00 g, 1.2 mmol)을 첨가하고 반응을 밤새 100℃로 가열했다. 반응을 그 다음 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 10-->70 EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.8 g, 5.1 mmol, 64 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 553.2 [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 원뿔형 바닥 바이알에서 디옥산 (4520 μl, 0.452 mmol) 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 0.452 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. (3R)-(1-에틸-피롤리딘-3-일)-메탄올 (175 mg, 1.36 mmol), Cs2CO3 (442 mg, 1.36 mmol), Rhuphos Pd G3 (37.8 mg, 0.0452 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 1시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 에틸 아세테이트를 첨가했다. 유기물을 염수 (2x)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축했다. 농축물을 0-20% (MeOH + 2% NH4OH)/DCM로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 깨끗한 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (118 mg, 0.183 mmol, 40.4 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (3670 μl, 0.367 mmol) 및 THF (3670 μl, 0.367 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (237 mg, 0.367 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (97.6 mg, 0.0917 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5분 동안 퍼지했다. 용액, 그 다음 H2의 분위기 하에서 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 2-((S)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (155 mg, 0.303 mmol, 82.5 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디클로로메탄 (4417 μl, 0.442 mmol) 중 2-((S)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (226 mg, 0.442 mmol)의 현탁액에 주위 온도에서 아실로일 클로라이드 (35.9 μl, 0.442 mmol) 이어서 휘니그 염기 (154 μl, 0.883 mmol)을 첨가했다. 반응을 주위 온도에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고 12g RediSep Gold 칼럼 상에 장입하고 CombiFlash (0%-15% DCM:MeOH +1% NH4OH 개질제) 상에서 크로마토그래피를 수행했다. 모든 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 ACN:H2O의 60:40 혼합물에 현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 400, 136 mg, 0.240 mmol, 54.4 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 566.2 [M+H]+.
실시예 401
2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (2932 μl, 0.293 mmol) 중 2-((S)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (150 mg, 0.293 mmol), (2E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (75.7 mg, 0.586 mmol), DIEA (256 μl, 1.47 mmol)의 용액에 HATU (167 mg, 0.440 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc와 염수 사이에서 분할시켰다. 수성물을 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 농축물을 60:40 ACN:H2O에서 희석하고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(2-(((S)-1-에틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 401, 27.6 mg, 0.0443 mmol, 15.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 623.4 [M+H]+.
실시예 402
2-((S)-2-(((4-((S)-4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드
2-((S)-2-(((4-((S)-4-아크릴로일-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드: 표제 화합물을, 단계 A에서 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트를 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 398에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]+.
실시예 403
벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((S)-3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((S)-3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 표제 화합물을, 단계 C에서 (3R)-(1-에틸-피롤리딘-3-일)-메탄올을 (3S)-(-)-3-(디메틸아미노)파이롤리딘으로 대체하여 실시예 400에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 551.3 [M+H]+.
실시예 404
2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2- tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 둥근바닥 플라스크에서, 디옥산 (94.87 ml, 9.487 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5 g, 9.487 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.278 g, 28.46 mmol), Cs2CO3 (9.273 g, 28.46 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.8078 g, 0.9487 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 밤새 100℃에서 가열했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 콤비 플래시 (2% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH) 상에서 정제하여 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.425 g, 8.508 mmol, 89.68 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 606.4 [M+H]+.
단계 B : 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.4 g, 8.915 mmol)을 디클로로메탄 (89.15 ml, 8.915 mmol)에 용해시키고 염산 (1,4-디옥산 중 4.0M 용액) (11.14 ml, 44.57 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 더 많은 DCM 및 1M NaOH로 희석하고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.364 g, 8.631 mmol, 96.82 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 506.3 [M+H]+.
단계 C : 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 둥근바닥 플라스크에서, 디옥산 (43.15 ml, 8.631 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.364 g, 8.631 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. 1-브로모-2,3-디메틸벤젠 (5.851 ml, 43.15 mmol), Cs2CO3 (14.06 g, 43.15 mmol), 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.7348 g, 0.8631 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 100℃에서 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시켰다. 에틸 아세테이트를 첨가하고 반응 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 용출액으로서 2% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-15% MeOH를 사용하는 CombiFlash 상에서 정상 크로마토그래피를 통해 2회 정제했다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 수집하고 진공에서 농축시켜 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.411 g, 0.8641 mmol, 100.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 476.3 [M+H]+.
단계 D : 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (1997 μl, 0.200 mmol) 중 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (95 mg, 0.200 mmol), (2E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (51.6 mg, 0.399 mmol), DIEA (174 μl, 0.999 mmol)의 용액에 HATU (114 mg, 0.300 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 염수로 세정하고 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하고, 60:40 ACN:H2O에서 희석하고 물/0.1% TFA 중 5%-95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb로 유리 염기화하고 유기물 DCM으로 추출했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (38 mg, 0.0648 mmol, 32.4 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 587.4 [M+H]+.
실시예 405
2-((2S)-1-아크릴로일-4-(2-(3-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((2S)-1-아크릴로일-4-(2-(3-(디메틸아미노)피페리딘-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 C에서 (3R)-(1-에틸-피롤리딘-3-일)-메탄올을 N,N-디메틸피페리딘-3-아민으로 대체하여 실시예 400에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 565.4 [M+H]+.
실시예 406
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2-클로로-3-플루오로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2- 클로로 -3- 플루오로페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-2-클로로-3-플루오로벤젠로 대체하여 실시예 234에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 554.2 [M+H]+.
실시예 407
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디플루오로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3- 디플루오로페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-2,3-디플루오로벤젠으로 대체하여 실시예 234에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 538.2 [M+H]+.
실시예 408
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)아미노)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)아미노)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 0.542 mmol)을 디옥산에 용해시키고 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄아민 (356 μl, 2.71 mmol)로 처리했다. 반응을 80℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 물과 EtOAc 사이에서 분할시켰다. 수성층을 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 물 및 염수로 세정하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 0%-15% DCM:MeOH + 2% NH4OH로 용출하는 CombiFlash 상에서 크로마토그래피를 수행하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)아미노)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 아세토니트릴 (146 mg, 0.231 mmol, 42.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 631.3 [M+H] +. 표제 화합물에 대한 합성의 나머지를 실시예 396 단계들 B 내지 C에 따라 수행했다. ESI+APCI MS m/z 551.3 [M+H]+.
실시예 409
(S)-2-(1-아크릴로일-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(2-(피페리딘-1-일)에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
(S)-2-(1-아크릴로일-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(2-(피페리딘-1-일) 에톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 C에서 (3R)-(1-에틸-피롤리딘-3-일)-메탄올을 1-피페리딘에탄올로 대체하여 실시예 400에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 556.3 [M+H]+.
실시예 410
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1- 메틸피롤리딘 -3-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 C에서 (3R)-(1-에틸-피롤리딘-3-일)-메탄올을 (R)-3-(하이드록시메틸)-1-메틸파이롤리딘로 대체하여 실시예 400에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 552.3 [M+H]+.
실시예 411
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3- 플루오로 -2- 메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드 대신에 1-브로모-3-플루오로-2-메틸벤젠로 대체하여 실시예 375, 단계들 E-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 534.3 [M+H]+.
실시예 412
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-플루오로-6-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2- 플루오로 -6-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를 2-브로모-1-플루오로-3-(트리플루오로메틸)벤젠으로 대체하여 실시예 375 단계들 E-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 413
2-(1-아크릴로일-4-(7-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(7-(4- 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를 1-브로모-4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠로 대체하여 실시예 375 단계들 E-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 588.3 [M+H]+.
실시예 414
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3- 클로로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 E에서 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 하이드로브로마이드를 1-브로모-3-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤젠으로 대체하고 단계 F에서 MeOH THF로 대체하여 실시예 375 단계들 E-G에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 604.2 [M+H]+.
실시예 415
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((2R,4S)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-(2- 클로로 -7-(3- 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 탄산세슘 (4.01 g, 12.3 mmol), 벤질 4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.75 g, 4.10 mmol) 및 Rhuphos Pd G3 (0.343 g, 0.410 mmol), 및 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (4.98 g, 20.5 mmol)을 첨가했다. 바이알을 밀봉하고 1,4-디옥산 (41.0 ml, 4.10 mmol)을 격막을 통해 첨가했다. Ar로 혼합물에 5분 동안 거품을 일으키고 그 다음 혼합물을 7시간 동안 70℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고, 정성지를 통해 여과하고 농축했다. 황색 고체를 최소 DCM에 용해시키고 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하고, 이것으로 벤질 4-(2-클로로-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.3 g, 2.21 mmol, 54% 수율)을 제공했다.
단계 B: 벤질 4-(2-(((2R,4S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (2547 μl, 0.255 mmol) 중 벤질 4-(2-클로로-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.255 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (2S,4R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (211 mg, 0.637 mmol), Cs2CO3 (249 mg, 0.76 mmol), Rhuphos Pd G3 (21.3 mg, 0.026 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 4시간 동안 100℃에서 가열했다. 혼합물을 GF/F 종이를 통해 여과하고, 농축시키고 잔류물을 DCM에 용해시키고 물로 세정하고, 수성물을 분리하고 DCM (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축시키고 수득한 잔류물을 실리카겔 (0-50 %EtOAc/hex 20CV, 50% EA/hex 2CV, 50-100% EA/hex 10CV)로 정제하여 벤질 4-(2-(((2R,4S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (95 mg, 0.107 mmol, 42 % 수율)을 제공했다.
단계 C: tert -부틸 (2R,4S)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘-1-카복실레이트: 단계 F에서 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트를 벤질 4-(2-(((2R,4S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 375, 단계 F 및 G에 따라 제조했다.
단계 D: 2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((2R,4S)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 B에서 tert-부틸 (2R,3S)-2-(((4-((S)-4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘-1-카복실레이트를 tert-부틸 (2R,4S)-2-(((4-(4-아크릴로일-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 390, 단계 B 및 C에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 604.3 [M+H]+.
실시예 416
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((2R,4R)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(7-(3- 플루오로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-((( 2R,4R )-4- 하이드록시 -1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 B에서 (2S,4R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트를 tert-부틸 (2R,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 415 , 단계들 B-D에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 604.3 [M+H]+.
실시예 417
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2R,4S)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-((( 2R,4S )-4- 플루오로 -1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 B에서 (2S,4R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트를 tert-부틸 (2R,4S)-4-플루오로-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 415 , 단계들 B-D에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 606.2 [M+H]+.
실시예 418
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1,2-디메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1,2- 디메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(3- 플루오로 -2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 B에서 (2S,4R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트를 tert-부틸 (R)-2-(하이드록시메틸)-2-메틸파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 415 , 단계들 B-D에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 602.3 [M+H]+.
실시예 419
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((2S,4S)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(1-아크릴로일-4-(2-((( 2S,4S )-4- 하이드록시 -1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 A에서 1-브로모-3-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤젠을 1-브로모나프탈렌으로 대체하고 단계 B에서 (2S,4R)-4-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트를 tert-부틸 (2S,4S)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 415 , 단계들 A-D에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]+.
실시예 420
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3- 클로로 -2- 메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-3-클로로-2-메틸벤젠으로 대체하여 및 단계 I에서 MeOH을 THF로 대체하여 실시예 234, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 550.3 [M+H]+.
실시예 421
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디클로로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3- 디클로로페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-2,3-디클로로벤젠으로 대체하고 단계 I에서 MeOH을 THF로 대체하여 실시예 234, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 570.2 [M+H]+.
실시예 422
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3- 클로로 -2- 메톡시페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-3-클로로-2-메톡시벤젠으로 대체하고 단계 I에서 MeOH를 THF로 대체하여 실시예 234, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 566.2 [M+H]+.
실시예 423
2-((S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 F에서 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 (R)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올로 대체하고, 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-3-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤젠으로 대체하고 단계 I에서 MeOH를 THF로 대체하여 실시예 234, 단계 F-I에 따라 제조했다.
단계 B: 2-((S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴: N,N'-디이소프로필에틸아민 (29.5 μl, 0.166 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 PF6 HATU (25.2 mg, 0.066 mmol)을 디클로로메탄 (331 μl, 0.033 mmol) 중 트랜스-4-디메틸아미노크로톤산 (6.42 mg, 0.05 mmol) 및 2-((S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (22 mg, 0.033 mmol)의 용액에 첨가했다. 반응을 rt에서 18시간 동안 교반했다. 혼합물을 염수로 세정하고, 30% iPrOH/CHCl3 (3x)로 추출하고, 조합된 추출물 및 농축했다. 수득한 잔류물을 역상 크로마토그래피 (0.1% TFA를 갖는 5-95% ACN/H2O)로 정제하고, 그 다음 DCM 및 수성 bicarb를 사용하여 유리 염기화하여 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 423, 10 mg, 0.015 mmol, 46 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 661.3[M+H]+.
실시예 424
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(4-플루오로-2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(4- 플루오로 -2,3- 디메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-4-플루오로-2,3-디메틸벤젠으로 대체하여 실시예 234, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 548.3 [M+H]+.
실시예 425
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2-클로로-3-메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2- 클로로 -3- 메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-2-클로로-3-메틸벤젠으로 대체하고 단계 I에서 MeOH를 THF로 대체하여 실시예 234, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 550.2 [M+H]+.
실시예 426
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-( 시아노메틸 )-4-(2-( 메틸티오 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (9171 μl, 1.38 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(메틸티오)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (741 mg, 1.38 mmol)의 혼합물을 염산 (1720 μl, 6.88 mmol)으로 0℃에서 처리하고 rt로 가온시킨 후 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 수성상을 분리하고 DCM (3x)으로 추출했다. 조합된 추출물을 건조시키고, 여과하고 농축하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (608 mg, 1.39 mmol, 100 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 439.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 바이알에 1,4-디옥산 (11.2 ml, 1.69 mmol) 중 탄산세슘 (1.65 g, 5.06 mmol), 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.74 g, 1.69 mmol), 및 1-브로모-3-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (0.876 g, 3.37 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 10 분 동안 Ar로 퍼지하고 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) RuPhos Pd G4 (0.215 g, 0.253 mmol)로 처리했다. 혼합물을 Ar로 10분 동안 퍼지하고, 수득한 혼합물을 4시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 농축하고, 물로 처리하고, 30% iPrOH/CHCl3 (3x)로 추출하고, 건조시키고, 여과하고 농축시키고 수득한 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 2-16% MeOH)로 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (388 mg, 0.63 mmol, 37 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 617.2 [M+H]+.
단계 C: 벤질 (2S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(메틸설피닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 디클로로메탄 (5659 μl, 0.566 mmol) 중 벤질 (S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (388 mg, 0.566 mmol)의 용액에 m-클로로퍼벤조산 (117.6 mg, 0.680 mmol)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 이 온도에서 90분 동안 교반했다. 혼합물을 포화 Na2S2O3로 켄칭하고, 수성층을 분리하고 EtOAc (3x)으로 추출했다. 추출물을 조합된 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0-100% EA/hex)로 정제하여 벤질 (2S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(메틸설피닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (282 mg, 0.445 mmol, 79 % 수율)을 수득했다.
단계 D: (( 2S,4R )-4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메탄올: 테트라하이드로푸란 (66.7 ml, 13.3 mmol) 중 메틸 (2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸파이롤리딘-2-카복실레이트 (3.65 g, 13.3 mmol)의 현탁액에, 0℃에서 질소 하에서 리튬 보로하이드라이드 (13.3 ml, 26.7 mmol)을 느리게 첨가했다. 반응을 rt로 가온되도록 하고 혼합물을 rt에서 18시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 느리게 켄칭하고, 물로 희석하고 EtOAc (20 mL)로 2회 추출했다. 조합된 유기상을 건조시키고, 여과하고 농축시키고 실리카겔 (0-80% EA/hex)로 정제하여 ((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (1.8 g, 5.87 mmol, 44 % 수율)을 수득했다.
단계 E: 벤질 (S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (2935 μl, 0.294 mmol) 중 (2S,4R)-1-boc-4-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘 (144 mg, 0.587 mmol) 및 벤질 (2S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(메틸설피닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (258 mg, 0.294 mmol)의 용액에 나트륨-t-부톡시드 (42.3 mg, 0.440 mmol)을 첨가했다. 반응을 rt에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물로 세정하고, 30% iPrOH/CHCl3 (3x)로 추출하고, 추출물을 조합하고, 건조시키고, 여과하고 농축했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 (0-100% EA/hex 20 CV)로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (57 mg, 0.070 mmol, 23 % 수율)을 수득했다.
단계 F: 2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: THF (688 μl, 0.069 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (56 mg, 0.069 mmol)의 용액에 팔라듐 (29 mg, 0.028 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 그 다음 H2의 분위기를 진공 이어서 밸룬 압력을 통해 도입하고 6시간 동안 교반했다. 혼합물을, 그 다음 MeOH로 희석하고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 농축시켜 원하는 생성물을 제공하고, 이것을 있는 그대로 사용했다.
단계 G: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((2S,4R)-4-하이드록시-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 D에서 Tert-부틸 (2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(5-플루오로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-4-플루오로파이롤리딘-1-카복실레이트를 2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴로 대체하여 실시예 384 단계 D 및 E에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 620.2 [M+H]+.
실시예 427
2-((S)-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(3- 클로로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 A에서 (R)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올로 대체하여 실시예 234에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 661.3[M+H]+.
실시예 428
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3- 클로로 -2-( 트리플루오로메틸 )페닐)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 단계 H에서 1-브로모나프탈렌을 1-브로모-3-클로로-2-(트리플루오로메틸)벤젠으로 대체하고 단계 I에서 MeOH을 THF로 대체하여 실시예 234, 단계 H-J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 604.2 [M+H]+.
실시예 429
1-(2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 벤질 4-(4-( tert - 부톡시카보닐 )-3-( 메톡시메틸 )피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: N,N-디메틸아세트아미드 (3 ml, 2.96 mmol) 중 tert-부틸 2-(메톡시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.715 g, 3.10 mmol)의 교반 용액을 빙욕 상에서 냉각시키고 그 다음 고체 벤질 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.00 g, 2.96 mmol)을 소량씩 첨가하고 이어서 DIPEA (0.57 mL, 3.25 mmol)을 첨가했다. 수득한 용액을 r.t.로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (15 mL)과 MTBE (50 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (2*10 mL), 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시키고 다음 반응에서 조물질로서 사용했다.
단계 B : 벤질 4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(메톡시메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 조 벤질 4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(메톡시메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (500 mg, 0.940 mmol), (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (216 mg, 1.88 mmol), Cs2CO3 (612 mg, 1.88 mmol) 및 디옥산 (0.5 mL)의 혼합물을 질소로 씻어 내고, 바이알을 캡핑하고 100℃에서 2시간 동안 교반하고 그 다음 120℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고 EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시켰다. 유기층을 분리하고 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4 내지 10%MeOH/DCM +0.2%NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (197 mg, 34%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 611.4 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(메톡시메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (197 mg, 0.323 mmol), 메탄올 (10 mL) 및 탄소상 팔라듐 (10 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 탈가스하고 수소 분위기 하에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 여과물을 진공에서 증발시키고, 톨루엔으로 증발 공비시키고, 고진공 하에서 건조시켜 생성물 (150 mg, 98%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 477.2 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.315 mmol), Cs2CO3 (308 mg, 0.944 mmol), 디옥산 (1 mL), 1-아이오도나프탈렌 (0.0689 ml, 0.472 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 26.3 mg, 0.0315 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 플라스크를 캡핑하고 반응을 70℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (15 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4 내지 10% MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (131 mg, 69%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 603.3 [M+H]+.
단계 E: 1-(2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: Tert-부틸 2-(메톡시메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 0.2157 mmol)을 1M TFA/DCM에 용해시키고 용액을 r.t.에서 1시간 동안 교반했다. 용액을 2M Na2CO3 (5 mL)와 DCM (15 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리하고 유기층을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고 교반하면서 -30℃로 냉각시키고 트리에틸아민 (0.09018 ml, 0.6470 mmol)을 첨가하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (0.03504 ml, 0.4313 mmol)을 첨가했다. -30℃에서 1분 후, 반응 혼합물을 NH4OH (0.05 mL)로 켄칭하고 진공에서 증발시키고 고진공 하에서 건조시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고, 솜마개를 통해 여과하고 5 내지 10% MeOH/DCM +0.25% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하고 표제 화합물 (실시예 429, 19.55 mg, 16%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 557.3 [M+H]+.
실시예 430
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(이소퀴놀린-8-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(이소퀴놀린-8-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 2 mL의 디옥산 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (125 mg, 0.247 mmol), Cs2CO3 (242 mg, 0.742 mmol), 8-브로모이소퀴놀린 (77.2 mg, 0.371 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 20.7 mg, 0.0247 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 플라스크를 캡핑하고 80℃에서 2.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (100 mg, 64%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 633.3 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(이소퀴놀린-8-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: MeOH-THF (1:1; 3 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(이소퀴놀린-8-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 0.1580 mmol)의 용액에 탄소상 팔라듐 (30 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)을 첨가하고 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (3*2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (10 mL)에 용해시키고 용액을 교반하면서 -30℃로 냉각시켰다. 용액에 NEt3 (0.14 mL) 이어서 아크릴로일 클로라이드 (0.02568 ml, 0.3161 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 -30℃에서 1분 동안 교반했다. 반응을 NH4OH (0.05 mL)의 첨가로 켄칭하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고, 솜마개를 통해 여과하고 6 내지 10% MeOH/DCM +0.6% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 430, 22.19 mg, 25%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 553.3 [M+H]+.
실시예 431
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(프탈라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(프탈라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 1,4-디옥산 (0.5 ml, 0.200 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (101 mg, 0.200 mmol), 1-클로로프탈라진 (65.8 mg, 0.400 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.0696 ml, 0.400 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 반응을 캡핑하고 80℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을, 6% MeOH/DCM +0.6% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (53 mg, 42%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 634.3 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(프탈라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(프탈라진-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (60 mg, 0.09467 mmol), 메탄올 (2 ml) 및 탄소상 팔라듐 (20 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 4시간 동안 교반했다. 반응을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL)에 용해시키고 교반하면서 -30℃로 냉각시켰다. 용액에 그 다음 트리에틸아민 (0.06598 ml, 0.4734 mmol) 이어서 아크릴로일 클로라이드 (0.02308 ml, 0.2840 mmol)을 첨가하고 반응을 5분 동안 -30℃에서 교반했다. 반응을 포화 NaHCO3 (1 mL)의 첨가로 켄칭했다. 혼합물을 r.t.까지 가온시키고, 물 (2 mL)을 첨가하고 층을 분리했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시키고 잔류물을 4 내지 10% MeOH +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 불순한 생성물을 수득했고, 이것을 물 중 5 내지 95% 아세토니트릴 +0.1% TFA로 용출하는 Gilson 역 prep HPCL 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 DCM과 포화 Na2CO3 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (실시예 431, 1.1 mg, 2%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 554.2 [M+H]+.
실시예 432
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(2-(((R)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 1,4-디옥산 (2 mL) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 0.452 mmol), (R)-(1-메틸피페리딘-2-일)메탄올 (175 mg, 1.36 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (19.2 mg, 0.0226 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 80℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, MTBE (20 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 MeOH (5 mL)에 용해시키고 이어서 탄소상 팔라듐 (70 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)을 첨가했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 H2 분위기 하에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정하고 진공에서 농축시켜 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: Crude 2-((S)-4-(2-(((R)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (292 mg, 0.57068 mmol)을 DCM (10 mL)에 용해시키고 이어서 트리에틸아민 (238.63 μl, 1.7120 mmol)을 첨가하고 용액을 -30℃로 냉각시켰다. 반응에 그 다음 아크릴로일 클로라이드 (92.728 μl, 1.1414 mmol)을 적가하고 혼합물을 -30℃에서 10분 동안 교반했다. EtOH (0.1 mL)을 그 다음 첨가하고 반응 0℃로 가온시켰다. 혼합물을, 5%MeOH +0.5% NH4OH/DCM를 용출물로 사용하는 실리카 상에서 크로마토그래피를 직접 수행하고 이어서 동일한 용출액 조건을 사용하여 물질을 재정제하여 표제 화합물 (실시예 432, 107.47 mg, 33%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]+.
실시예 433
1-((S)-2-(2-메톡시에틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
단계 A: 4- 벤질 1-( tert -부틸) (S)-2-(2-하이드록시에틸)피페라진-1,4- 디카복실레이트: 고체 (S)-tert-부틸-2-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (500 mg, 1.874 mmol) 및 NaHCO3 (629.8 mg, 7.497 mmol)에 EtOAc 및 물 (10 mL 각각)을 첨가하고 혼합물을 0℃로 냉각시키고 이어서 벤질 카보노클로리데이트 (0.4013 ml, 2.811 mmol)을 적가하고 반응 혼합물을 실온으로 가온시키면서 밤새 교반했다. 층을 그 다음 분리하고 유기층 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 20% 내지 40% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (578 mg, 85%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 256.2 [M-Boc+H]+.
단계 B: 4- 벤질 1-( tert -부틸) (S)-2-(2- 메톡시에틸 )피페라진-1,4- 디카복실레이트: N,N-디메틸포름아미드 (3 ml, 0.741 mmol) 중 4-벤질 1-(tert-부틸) (S)-2-(2-하이드록시에틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (270 mg, 0.741 mmol)의 교반 용액을 N2 하에서 -20℃로 냉각시키고 이어서 하나의 볼러스 중 수소화나트륨 (44.4 mg, 1.11 mmol)을 첨가했다. 반응에 그 다음 아이오도메탄 (0.138 ml, 2.22 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 1 시간에 걸쳐 r.t.로 가온시키고 1시간 동안 실온에서 계속 교반했다. 반응을 얼음 (~5g)의 첨가로 켄칭하고 혼합물을 MTBE (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다 (252 mg, 90%). ESI+APCI MS m/z 279.1 [M-Boc+H]+.
단계 C: tert -부틸 (S)-2-(2- 메톡시에틸 )피페라진-1- 카복실레이트: 메탄올 (5 ml) 중 4-벤질 1-(tert-부틸) (S)-2-(2-메톡시에틸)피페라진-1,4-디카복실레이트 (252 mg, 0.666 mmol)의 혼합물에 탄소상 팔라듐 (50 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)을 첨가하고 반응을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 3시간 동안 교반했다. 슬러리를 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시키고 고진공 하에서 건조시켜 생성물 (140 mg, 86%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 245.2 [M+H]+.
단계 D: 벤질 (S)-4-(4-( tert - 부톡시카보닐 )-3-(2- 메톡시에틸 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 조 tert-부틸 (S)-2-(2-메톡시에틸)피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 0.573 mmol) 및 N,N-디메틸아세트아미드 (0.5 ml, 0.573 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시키고 벤질 2,4-디클로로-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트 (194 mg, 0.573 mmol)을 하나의 볼러스에서 첨가했다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고 이어서 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.150 ml, 0.859 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 MTBE (20 mL)와 포화 NaHCO3 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 2% MeOH/DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (190 mg, 61%)을 수득했다.
단계 E: 벤질 4-((S)-4-(tert-부톡시카보닐)-3-(2-메톡시에틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: N2 분위기 하의 벤질 (S)-4-(4-(tert-부톡시카보닐)-3-(2-메톡시에틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (190 mg, 0.348 mmol), (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (120 mg, 1.04 mmol), Cs2CO3 (340 mg, 1.04 mmol) 및 1,4-디옥산 (0.5 ml)의 혼합물을 20시간 동안 120℃로 가열했다. 반응을 냉각시키고, EtOAc (3 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피를 4 내지 8% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 수행하여 생성물 (77 mg, 35%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 625.3 [M+H]+.
단계 F: tert -부틸 (S)-2-(2-메톡시에틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 메탄올 (5 ml) 중 벤질 4-((S)-4-(tert-부톡시카보닐)-3-(2-메톡시에틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (77 mg, 0.12 mmol)의 혼합물에 탄소상 팔라듐 (20 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)을 첨가하고 슬러리를 진공 하에서 탈가스하고 수소로 역충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 밤새 교반했다. 슬러리를 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시키고 와 공비시키고 톨루엔 (2X2 mL)로 정제하여 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 491.3 [M+H]+.
단계 G: tert -부틸 (S)-2-(2-메톡시에틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 조 tert-부틸 (S)-2-(2-메톡시에틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (60 mg, 0.122 mmol), Cs2CO3 (120 mg, 0.367 mmol), 디옥산 (2 mL), 1-아이오도나프탈렌 (0.0268 ml, 0.183 mmol) (1.5 eq.) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 10.2 mg, 0.0122 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 80℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 5% MeOH/DCM +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (56 mg, 74%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 617.4 [M+H]+.
단계 H: 4-((S)-3-(2- 메톡시에틸 )피페라진-1-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘: 고체 tert-부틸 (S)-2-(2-메톡시에틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (56 mg, 0.091 mmol)에 염화수소 (0.5 ml, 2.0 mmol)을 첨가하고 반응을 0 ℃에서 교반하고 이어서 15분 동안 실온으로 가온시키고, 이 시점에서 고체가 형성되었다. 유기물을 경사분리하고 고체를 DCM (12 mL)와 2M Na2CO3 (1 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 조 생성물을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 517.3 [M+H]+.
단계 I: 1-((S)-2-(2-메톡시에틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온. Crude 4-((S)-3-(2-메톡시에틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 (39 mg, 0.07548 mmol)을 DCM (10 mL)에 용해시키고 이어서 트리에틸아민 (31.56 μl, 0.2264 mmol)을 첨가하고 용액을 -40℃로 냉각시키고 5분 동안 교반하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (12.26 μl, 0.1510 mmol)을 적가했다. 반응 혼합물을 -30℃에서 10분 동안 교반하고 이어서 MeOH (0.05 mL)을 첨가했다. 혼합물을 0℃까지 가온시키고 유기물을 0.5M Na2CO3로 세정했다. 유기층을 진공에서 증발시키고 DCM 중 5%MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 433, 25.45 mg, 59%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 434
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 8-( 트리플루오로메틸 )나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트: DCM (10 mL) 중 8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-올 (500 mg, 2.36 mmol)의 교반 용액에 0 ℃에서 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (616 μl, 3.53 mmol) 이어서 트리플루오로메탄설폰산 무수물 (475 μl, 2.83 mmol)을 적가하고 반응 혼합물을 실온으로 가온시키면서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 헥산 (20 mL) 및 MTBE (5 mL)로 희석하고 유기물을 포화 NaHCO3, 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 헥산 중 10% EtOAc/10% DCM에 용해시키고 물질을 실리카겔 플러그를 통해 여과했다. 유기물을 농축시키고 크로마토그래피를 5 내지 10% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 수행하여 불순한 물질을 수득했다. 고체를 마지막으로 헥산으로부터 결정화하고, 고체를 소량의 차가운 헥산으로 세정하고 생성물 (482 mg, 59%)을 수득했다.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 조 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.38 mmol), Cs2CO3 (1353 mg, 4.15 mmol), 톨루엔 (7 ml), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq.,116 mg, 0.138 mmol) 및 8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄설포네이트 (715 mg, 2.08 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (50 mL)와 물 (20 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수(10 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (86 mg, 9%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 700.3 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (86 mg, 0.123 mmol), 메탄올 (3 ml, 74.2 mmol) 및 탄소상 팔라듐 (30 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 H2 분위기 하에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시켜 조 생성물 (60 mg, 86%)을 수득했다.
단계 D: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.08839 mmol)을 DCM (10 mL)에 용해시키고 이어서 트리에틸아민 (36.96 μl, 0.2652 mmol)을 첨가하고 용액을 -40℃로 냉각시키고 5분 동안 교반하고 이어서 아크릴로일 클로라이드 (14.36 μl, 0.1768 mmol)을 적가했다. 반응 혼합물을 -30℃에서 10분 동안 교반하고 이어서 0.01 mL의 아크릴로일 클로라이드를 첨가했다. MeOH (0.05 mL)을 그 다음 반응에 첨가하고 혼합물을 0℃로 가온시켰다. 반응을 그 다음 0.5M Na2CO3로 세정하고 유기물을 분리했다. 유기물을 진공에서 증발시키고 DCM 중 5%MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 434, 39 mg, 71%)을 수득했다.
실시예 435
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.396 mmol), Cs2CO3 (387 mg, 1.19 mmol), 디옥산 (0.5 mL), 7-브로모-2,3-디하이드로벤조푸란 (118 mg, 0.593 mmol, 1.5 eq.) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 33.7 mg, 0.0396 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 반응을 캡핑하고 80℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 그 다음 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (97 mg, 39%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 624.3 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-4-(7-(2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (97 mg, 0.16 mmol), 메탄올 (4 ml), THF (4 mL) 및 탄소상 팔라듐 (30 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 밤새 교반했다. 잔류물을 셀라이트 (1 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3x2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켜 조 생성물을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 490.3 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(2,3-디하이드로벤조푸란-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (69 mg, 0.1409 mmol)의 용액을 교반하면서 -30℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민 (58.93 μl, 0.4228 mmol)을 첨가하고 이어서 아크릴로일 클로라이드 (22.90 μl, 0.2818 mmol)을 첨가하고 반응을 5분 동안 -30℃에서 교반했다. 반응을 그 다음 MeOH (0.05 mL)의 첨가로 켄칭하고 반응을 실온으로 가온시켰다. 유기물을 0.5M Na2CO3 (4 mL)로 세정하고, K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 5% MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 435, 45.85 mg, 60%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 544.3 [M+H]+.
실시예 436
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(1-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7- 아이오도 -1- 메틸 -1H-인돌: N,N-디메틸포름아미드 (4 ml, 51.9 mmol) 중 7-아이오도-1H-인돌 (4.11 ml, 2.06 mmol)의 교반 용액을 -20℃로 냉각시키고 수소화나트륨 (123 mg, 3.09 mmol)을 소량씩 첨가하고 이어서 아이오도메탄 (0.256 ml, 4.11 mmol)을 첨가하고 혼합물을 2시간 동안 기간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 혼합물을 MTBE (40 mL)와 빙수 혼합물 (20 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 (2X20 mL), 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 고체를 MTBE (1 mL)로 세정했다. 고체를 MTBE로부터 재결정화하여 생성물 (0.31 g, 59%)을 수득했다.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(1-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.396 mmol), Cs2CO3 (387 mg, 1.19 mmol), 디옥산 (0.5 mL), 7-아이오도-1-메틸-1H-인돌 (153 mg, 0.593 mmol) (1.5 eq.) 및 메탄설포네이토 (2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 33.7 mg, 0.0396 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 90℃에서 5시간 동안 교반하고, 그 다음 밤새 80℃에서 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (65 mg, 26%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 635.3 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-4-(7-(1-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(1-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (65 mg, 0.10 mmol), 메탄올 (6 ml), 및 탄소상 팔라듐 (30 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공으로 탈가스하고 수소로 역충전하고 혼합물을 수소 분위기 하에서 밤새 교반했다. 슬러리를 셀라이트 (1 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켜 조 생성물을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 501.3 [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(1-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(1-메틸-1H-인돌-7-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (51 mg, 0.1019 mmol)의 용액을 교반하면서 -30℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (42.60 μl, 0.3056 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (16.55 μl, 0.2037 mmol)을 첨가했다. -30℃에서 5분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 MeOH (0.05 mL)로 켄칭하고 실온으로 가온시켰다. 유기물을 0.5M Na2CO3 (4 mL)로 세정하고, K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 5% MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 436, 36 mg, 64%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 555.3 [M+H]+.
실시예 437
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.1013 mmol)의 용액을 -30℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (42.35 μl, 0.3039 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (16.46 μl, 0.2026 mmol)을 첨가했다. -30℃에서 5분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 MeOH(0.05 mL)로 켄칭하고 실온으로 가온시켰다. 유기물을 0.5M Na2CO3 (4 mL)로 세정하고, K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH + 0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 437, 34 mg, 61%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 548.3 [M+H]+.
실시예 438
2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (1 mL) 중 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.1013 mmol)의 교반 용액에 (2E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (26.17 mg, 0.2026 mmol), N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.03529 ml, 0.2026 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (57.77 mg, 0.1519 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반했다. 물 (1 mL)을 그 다음 첨가하고 반응 혼합물을 5분 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)와 포화 NaHCO3 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 NaHCO3, 염수로 세정하고, K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 5% MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 438, 45 mg, 74%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 605.3 [M+H]+.
실시예 439
2-(4-아크릴로일-1-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-2-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2- 클로로 -5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: DCM (20 mL)과 및 iPrOH (10 mL)의 혼합물 중 2-(피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.2 g, 1.278 mmol)의 교반 용액을 -30℃로 냉각시키고 벤질 카보노클로리데이트 (0.2190 ml, 1.534 mmol)을 적가하고 반응을 실온으로 가온시키면서 1시간 동안 교반했다. 유기물을 N2의 느린 흐름 하에서 증발시켰다. 잔류물을 N,N-디메틸아세트아미드 (1 ml, 1.278 mmol)에 용해시키고 이어서 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.3340 ml, 1.917 mmol) 및 tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (0.3888 g, 1.278 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 2시간 동안 70℃로 가열하고 이어서 실온에서 4일 동안 교반했다. 반응을 물 (5 mL)과 MTBE (20 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 40 내지 100% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (134 mg, 20%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]+.
단계 B: tert -부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-2-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-2-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (134 mg, 0.254 mmol), Cs2CO3 (249 mg, 0.763 mmol), 메탄설포네이토 (2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (21.6 mg, 0.0254 mmol), (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (146 mg, 1.27 mmol) 및 1,4-디옥산 (2 ml, 0.254 mmol)의 혼합물을 N2로 퍼지하고, 반응을 캡핑하고 80℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 염수 (5 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH + 0.4% NH4OH /DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (60 mg, 39%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 3-( 시아노메틸 )-4-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-카복실레이트: 순수한 (tert-부틸 4-(4-((벤질옥시)카보닐)-2-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (60 mg, 0.09905 mmol))을 DCM (0.2 mL)로 희석했다. 반응을 0℃로 냉각시키고 디옥산 중 4M HCl (0. 50 mL, 20 eq)을 교반하면서 첨가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 밤새 냉장고에 두었고, 이 시점에서 고체는 침전되었다. 액상을 경사분리하고 고체를 DCM (10 mL)와 2M Na2CO3 (0.5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 K2CO3 상에서 건조시키고 N2 흐름 하에서 증발시켰다. 생성물을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다.
단계 D: 벤질 3-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 조 벤질 3-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (50 mg, 0.0989 mmol), Cs2CO3 (96.7 mg, 0.297 mmol), 디옥산 (0.5 mL), 1-아이오도나프탈렌 (37.7 mg, 0.148 mmol, 1.5 eq.) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 8.42 mg, 0.00989 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 80℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고 EtOAc (20 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카상 크로마토그래피를 수행하여 불순한 생성물을 수득했고, 이것을 5 내지 95% MeCN/물 +0.1%TFA (제1 용출된 화합물)로 용출하는 역상 prep HPLC 크로마토그래피로 정제했다. 상기 표적 분획을 2M Na2CO3로 희석하고 수성물을 나중에 DCM (3X20 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (15 mL)로 세정하고, K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켜 생성물 (26 mg, 42%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]+.
단계 E: 2-(1-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 3-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (26 mg, 0.041 mmol), 메탄올 (2 ml), 및 탄소상 팔라듐 (10 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켜 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 498.3 [M+H]+.
단계 F: 2-(4-아크릴로일-1-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-(1-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (15 mg, 0.03014 mmol)의 용액을 교반하면서 -30℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (12.60 μl, 0.09043 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (4.898 μl, 0.06028 mmol)을 첨가했다. 5분 동안 -30℃에서 교반한 후, 반응 혼합물을 MeOH (0.05 mL)의 첨가로 켄칭하고 가온된 실온까지. 유기물을 0.5M Na2CO3 (4 mL)로 세정하고, Na2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH + 0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 439, 8.43 mg, 51%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 552.2 [M+H]+.
실시예 440
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,3R)-3-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: ( 2R,3R )-3- 플루오로파이롤리딘 -2- 카복실산: 고체 (2R, 3R)-1-Boc-3-플루오로파이롤리딘-카복실산 (400 mg, 1.71 mmol)에 4M 염화수소 (2144 μl, 8.57 mmol)을 적가하고 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공에서 증발시키고 이어서 고체 NaHCO3 (173 mg, 2.06 mmol) 및 메탄올 (1715 μl, 1.71 mmol)을 첨가하고 서스펜션을 실온에서 밤새 교반했다. 상기 혼합물에 추가의 부분의 MeOH (10 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고 반-고체의 전체의 분산이 달성될 때까지 초음파처리했다. 이러한 슬러리를 다음 반응에서 조물질로서 사용했다.
단계 B: ( 2R,3R )-3- 플루오로 -1- 메틸파이롤리딘 -2- 카복실산: MeOH (12 mL) 중 조물질 (2R,3R)-3-플루오로파이롤리딘-2-카복실산 (228 mg, 1.71 mmol)의 교반 현탁액 용액에 탄소상 팔라듐 (30 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W) 이어서 수성 포름알데하이드 (159 μl, 2.14 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 수소로 탈가스하고 수소 하에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3x2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켰다. 반-고체를 디옥산에 용해시키고 N2 하에서 주말에 걸쳐 증발시켰다. 생성물을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다.
단계 C: (( 2R,3R )-3- 플루오로 -1- 메틸피롤리딘 -2-일)메탄올: THF 중 조 1-Boc-2-(S)-파이롤리딘디카복실산, 3-(R)-플루오로-(252 mg, 1.71 mmol)의 교반 현탁액을 질소 하에서 0℃로 냉각하고 이어서 2.4M 리튬 알루미늄 하이드라이드 (0.999 ml, 2.40 mmol)을 적가하고 반응을 실온으로 가온하면서 30분 동안 교반했다. 반응을 초음파처리하고, 이어서 THF (0.999 ml, 2.40 mmol) 중 또 다른 부분의 리튬 알루미늄 하이드라이드를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 교반했다. 슬러리를 0℃로 냉각하고 물 (0.18 mL), 15% NaOH (0.18 mL) 및 물 (0.54 mL)의 연속적인 첨가로 켄칭했다. 슬러리를 에테르 (20 mL)로 희석하고 침전물을 분리했다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 셀라이트를 에테르 (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물에 4M HCl/디옥산 (0.45 mL, 1.1 eq.)을 첨가했다. 혼합물은 무색 현탁액에서 불그스름한 침전물로 변했다. 상청액 용액을 진공에서 증발시켰다. 잔존 적색 고체를 최소 양의 물로 추출하고, 솜마개를 통해 여과하고 솜마개를 소량의 물로 세정했다. 조합된 수용액을 포화 KOH 및 에테르 (3X7 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 NaOH 상에서 건조시키고 부분적으로 질소 하에서 증발시켜 생성물을 에테르 중 용액 (340 mg, 에테르 중 40% 용액, 60%)으로서 수득했다.
단계 D: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,3R)-3-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.2712 mmol), Cs2CO3 (265.1 mg, 0.8137 mmol), 1,4-디옥산 (1 ml), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (23.09 mg, 0.02712 mmol) 및 RuPhos (9.492 mg, 0.02034 mmol)의 혼합물을 질소로 탈가스하고 70℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고 EtOAc (20 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, DCM 중 3% MeOH +0.3% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (108 mg, 61%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 650.3 [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-4-(2-(((2R,3R)-3-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,3R)-3-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (108 mg, 0.166 mmol), 메탄올 (5 ml), 및 탄소상 팔라듐 (35 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3X3 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켜 조 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 사용했다.
단계 F: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,3R)-3-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(2-(((2R,3R)-3-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (78 mg, 0.1513 mmol)의 용액을 -30℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (63.25 μl, 0.4538 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (24.58 μl, 0.3025 mmol)을 첨가했다. 5분 동안 -30℃에서 교반한 후, 반응 혼합물을 MeOH(0.05 mL)로 켄칭하고 실온으로 가온시켰다. 혼합물을 0.5M Na2CO3 (4 mL)로 세정하고, Na2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% 내지 10% MeOH 용출액을 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 440, 63 mg, 73%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 570.3 [M+H]+.
실시예 441
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트. tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (500 mg, 0.949 mmol), (D)-(R)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (328 mg, 2.85 mmol)(3 eq.), Cs2CO3 (927 mg, 2.85 mmol), 디옥산 (1 mL) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 79.3 mg, 0.0949 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 70℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4 내지 10% MeOH +0.5% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (150 mg, 26%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: DCM (2.5 mL) 중 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (296 mg, 0.489 mmol)의 용액을 드라이아이스 상에서 냉각하고, 이어서 디옥산 중 4M HCl (1.2 mL)을 첨가하고 반응을 실온으로 가온시키면서 3시간 동안 교반하고, 이 시점에서 침전물이 형성되었다. 액체 층을 경사분리하고 침전물을 DCM (2 mL)로 세정했다. 고체를, 그 다음 DCM (20 mL) 및 2M Na2CO3 (3 mL)의 혼합물과 함께 1시간 동안 교반했다. 층을 분리하고 유기물을 Na2CO3 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켰다. 물질을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 506.3 [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 조 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (247 mg, 0.489 mmol), Cs2CO3 (477 mg, 1.47 mmol), 디옥산 (2 mL), 1-아이오도나프탈렌 (107 μl, 0.733 mmol, 1.5 eq.) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2-아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 40.9 mg, 0.0489 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 80℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 5% MeOH/DCM +0.25% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (216 mg, 70%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: MeOH-THF (1:1, 3 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (216 mg, 0.3419 mmol)의 교반 용액에 탄소상 팔라듐 (50 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)을 첨가하고 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고, 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 EtOH (3X2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시키고 잔류물을 DCM (10 mL)에 용해시켰다. 용액을 교반하면서 -30℃로 냉각하고 이어서 NEt3 (0.28 mL, 1.71 mmol) 아크릴로일 클로라이드 (0.08333 ml, 1.026 mmol)을 첨가하고 반응을 -30℃에서 1분 동안 교반했다. 반응을 NH4OH (0.05 mL)의 첨가로 켄칭하고 실온으로 가온시켰다. 용액을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 DCM (10 mL)에 용해시키고, 솜마개를 통해 여과하고 DCM 중 5 내지 10% MeOH +0.25% NH4OH을 용출물로서 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 441, 109 mg, 58%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 552.3 [M+H]+.
실시예 442
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(인돌리진-5-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 5- 아이오도인돌리진: -80℃로 냉각된 무수 테트라하이드로푸란 (5.7 ml, 1.71 mmol) 중 인돌리진 (5.69 ml, 1.71 mmol) 및 N1,N1,N2,N2-테트라메틸에탄-1,2-디아민 (0.282 ml, 1.88 mmol)의 교반 용액에 부틸리튬 (120 mg, 1.88 mmol)의 용액을 적가했다. 반응 혼합물을 -20℃로 가온시키고 -20℃에서 2시간 동안 유지했다. 혼합물을 -80℃로 냉각시키고 건조 THF (3 mL) 중 요오드 (433 mg, 1.71 mmol)의 용액을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 염화암모늄의 포화 용액으로 처리했다. 유기층을 분리하고 수성층을 헥산으로 추출했다. 조합된 유기물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물 (216 mg)을 수득했다.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(인돌리진-5-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 조 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 0.198 mmol), Cs2CO3 (193 mg, 0.593 mmol), 디옥산 (0.5 mL), 5-아이오도인돌리진 (72.1 mg, 0.297 mmol) (1.5 eq.) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 16.8 mg, 0.0198 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고 반응을 캡핑하고 80℃에서 4시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH/DCM +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (74 mg, 60%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 621.3 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-4-(7-(인돌리진-5-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(인돌리진-5-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (74 mg, 0.12 mmol), 메탄올 (5 ml) 및 탄소상 팔라듐 (20 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 진공 하에서 탈가스하고 수소를 다시 충전하고 반응을 수소 분위기 하에서 2시간 동안 교반했다. 슬러리를 셀라이트(1 mL)를 통해 여과하고 셀라이트를 MeOH (3x2 mL)로 세정했다. 조합된 유기물을 진공에서 증발시켜 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 487.3 [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(인돌리진-5-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(인돌리진-5-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.1027 mmol)의 용액을 -30℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (42.96 μl, 0.3082 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (16.70 μl, 0.2055 mmol)을 첨가했다. 5분 동안 -30℃에서 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (1 mL)로 켄칭하고 실온으로 가온시키고 이어서 물 (2 mL)을 첨가했다. 층을 분리하고 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH +0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 442, 33 mg, 59%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+.
실시예 443
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2R)-2-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트: 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (65 mg, 0.118 mmol) 및 (R)-N-Boc-2-하이드록시메틸모폴린 (76.6 mg, 0.353 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R)-2-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (49 mg, 0.0668 mmol, 56.8 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((R)- 모폴린 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드: tert-부틸 (2R)-2-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (49 mg, 0.067 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (45 mg, 0.067 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. DCM (671 μl, 0.067 mmol) 및 THF (671 μl, 0.067 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (45 mg, 0.067 mmol), 포름알데하이드 (54 mg, 0.67 mmol) (MeOH/물 중 37 wt%)의 용액에 NaBH(OAc)3 (142 mg, 0.67 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 1N NaOH 사이에서 분할시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (1x)로 추출했다. 조합된 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 농축시켜 잔류물을 수득했고, 이것을 DCM 중 10%MeOH/1%NH4OH/DCM 혼합물의 25-50%의 구배로 용출하는 플래시로 정제했다. 생성물-함유 분획을 농축시켜 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (22 mg, 0.034 mmol, 51%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-(4-(2-(((R)-4- 메틸모폴린 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (22 mg, 0.034 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-(4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (15.9 mg, 0.031 mmol, 91%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-(4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (16 mg, 0.031 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 443, 8.0 mg, 0.014 mmol, 46%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]+.
실시예 444
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2S)-2-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트: 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (65 mg, 0.118 mmol) 및 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)모폴린-4-카복실레이트 (76.6 mg, 0.353 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (43mg, 0.059 mmol, 49.9 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((S)- 모폴린 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드: tert-부틸 (2S)-2-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (43 mg, 0.059 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (39 mg, 0.058 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (39 mg, 0.067 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (17 mg, 0.026 mmol, 45%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-(4-(2-(((S)-4- 메틸모폴린 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (17 mg, 0.026 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-(4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (13.5 mg, 0.026 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-(4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (13.5 mg, 0.026 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 444, 9.5 mg, 0.017 mmol, 65%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]+.
실시예 445
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (3S)-3-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트. 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (65 mg, 0.118 mmol) 및 tert-부틸 (R)-3-(하이드록시메틸)모폴린-4-카복실레이트 (76.6 mg, 0.353 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (3S)-3-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (80 mg, 0.109 mmol, 92.8 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((S)- 모폴린 -3-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드. tert-부틸 (3S)-3-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (80 mg, 0.11 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (73 mg, 0.11 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (73 mg, 0.109 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (27.6 mg, 0.042 mmol, 39%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-(4-(2-(((S)-4- 메틸모폴린 -3-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (27.6 mg, 0.042 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-(4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20.2 mg, 0.039 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-(4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20.2 mg, 0.0393 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 445, 15 mg, 0.026 mmol, 67%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]+.
실시예 446
2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (3R)-3-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트. 벤질 4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (65 mg, 0.118 mmol) 및 tert-부틸 (S)-3-(하이드록시메틸)모폴린-4-카복실레이트 (76.6 mg, 0.353 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (3R)-3-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (50 mg, 0.068 mmol, 58.0 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((R)- 모폴린 -3-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드. tert-부틸 (3R)-3-(((4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (50 mg, 0.068 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (46 mg, 0.068 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (73 mg, 0.109 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (23.0 mg, 0.036 mmol, 52%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-(4-(2-(((R)-4- 메틸모폴린 -3-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (23.0 mg, 0.036 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-(4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (18.2 mg, 0.036 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-(4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (18.2 mg, 0.036 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-3-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 446, 14 mg, 0.025 mmol, 69%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]+.
실시예 447
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (50 mg, 0.090 mmol) 및 tert-부틸 (S)-4,4-디플루오로-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (64.3 mg, 0.271 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (15 mg, 0.020 mmol, 22.0 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 754.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 . 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (18 mg, 0.024 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (16 mg, 0.023 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 654.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16 mg, 0.023 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16.0 mg, 0.024 mmol, 52%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 668.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16.0 mg, 0.024 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8.0 mg, 0.015 mmol, 63%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 534.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8.0 mg, 0.015 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 447, 4 mg, 0.007 mmol, 45%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 588.3 (100%) [M+H]+.
실시예 448
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (R)-6-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (25 mg, 0.045 mmol) 및 tert-부틸 (R)-6-(하이드록시메틸)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카복실레이트 (33.0 mg, 0.136 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (R)-6-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카복실레이트 (35 mg, 0.0461 mmol, 100 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 760.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2-(((R)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 . tert-부틸 (R)-6-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카복실레이트 (35 mg, 0.046 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 (S)-4-(2-(((R)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (32 mg, 0.046 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 660.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(2-(((R)-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (32 mg, 0.046 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (31 mg, 0.046 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 674.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (31.0 mg, 0.046 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (18.0 mg, 0.033 mmol, 72%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 540.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (18.0 mg, 0.033 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 448, 5.8 mg, 0.010 mmol, 29%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 594.3 (100%) [M+H]+.
실시예 449
2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (593 μl, 0.0593 mmol) 중 벤질 2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (30 mg, 0.0593 mmol), 1-브로모-2-디플루오로메틸벤젠 (36.8 mg, 0.178 mmol), BINAP Palladacycle Gen. 3 (5.9 mg, 0.006 mmol), Cs2CO3 (77.3 mg, 0.237 mmol)의 혼합물을 5분 동안 Ar로 살포하고, 그 다음 밀봉하고 1일 동안 100℃에서 가열했다. 반응 혼합물을 실리카겔 샘플 상에 장입하고 1-10% MeOH/DCM (1% NH4OH) 구배로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (12 mg, 0.019 mmol, 32%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 632.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸-7-옥사-4-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (12.0 mg, 0.019 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-(4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (9.5 mg, 0.019 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 498.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-(4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (9.5 mg, 0.019 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-(1-아크릴로일-4-(7-(2-(디플루오로메틸)페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 449, 4.2 mg, 0.008 mmol, 40%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 552.3 (100%) [M+H]+.
실시예 450
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (95 mg, 0.172 mmol) 및 (R)-N-Boc-2-하이드록시메틸모폴린 (112 mg, 0.515 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 A의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (126 mg, 0.172 mmol, 100 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-2-( 시아노메틸 )-4-(2-(((R)- 모폴린 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드: tert-부틸 (R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)모폴린-4-카복실레이트 (126 mg, 0.172 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (109 mg, 0.172 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (109 mg, 0.172 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (76 mg, 0.117 mmol, 68%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (76 mg, 0.117 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (57.1 mg, 0.111 mmol, 95%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-(1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (56 mg, 0.11 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((R)-4-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 450, 50 mg, 0.088 mmol, 81%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]+.
실시예 451
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-5-메틸모폴린-4-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (95 mg, 0.172 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸모폴린-4-카복실레이트 (119 mg, 0.515 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-5-메틸모폴린-4-카복실레이트 (128 mg, 0.171 mmol, 100 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 748.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,5R)-5-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. tert-부틸 (2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-5-메틸모폴린-4-카복실레이트 (128 mg, 0.171 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,5R)-5-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (111 mg, 0.171 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,5R)-5-메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (111 mg, 0.171 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (56 mg, 0.085 mmol, 49%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 662.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (56 mg, 0.085 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (44.3 mg, 0.084 mmol, 99%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 528.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (43 mg, 0.081 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((2R,5R)-4,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 451, 32 mg, 0.055 mmol, 68%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 582.3 (100%) [M+H]+.
실시예 452
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-5,5-디메틸모폴린-4-카복실레이트. 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (95 mg, 0.172 mmol) 및 tert-부틸 (R)-2-(하이드록시메틸)-5,5-디메틸모폴린-4-카복실레이트 (126 mg, 0.515 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 C의 절차에 따라 제조하고, 25-100% hex/EtOAc로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-5,5-디메틸모폴린-4-카복실레이트 (131 mg, 0.172 mmol, 100 % 수율)을 수득했다. ESI+ MS m/z 762.3 (100%) [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-5,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. tert-부틸 (R)-2-(((4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)-5,5-디메틸모폴린-4-카복실레이트 (131 mg, 0.172 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 D의 절차에 따라 제조하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-5,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (114 mg, 0.172 mmol, 100%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 662.3 (100%) [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((R)-5,5-디메틸모폴린-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (114 mg, 0.172 mmol)로 대체하여 실시예 443 단계 C의 절차에 따라 제조하여, 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (77 mg, 0. 114 mmol, 66%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 676.3 (100%) [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (77 mg, 0.114 mmol)로 대체하여 실시예 375 단계 F의 절차에 따라 제조하여 2-((S)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (47 mg, 0.087 mmol, 77%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 542.3 (100%) [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (46 mg, 0.085 mmol)로 대체하여 실시예 1 단계 G의 절차에 따라 제조하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(나프탈렌-1-일)-2-(((R)-4,5,5-트리메틸모폴린-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 452, 36 mg, 0.060 mmol, 71%)을 수득했다. ESI+ MS m/z 582.3 (100%) [M+H]+.
실시예 453
1-[4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 1: 3 - 브로모 -1,2,4- 트리메틸 -5-니트로-벤젠. DCE (200 mL) 중 1,2,4-트리메틸-5-니트로-벤젠 (10 g, 60 mmol, 1 eq)의 용액에 FeBr3 (358 mg, 1.21 mmol, 0.02 eq), Fe (879 mg, 15.7 mmol, 0.26 eq), 이어서 Br2 (11.6 g, 72.6 mmol, 3.74 mL, 1.2 eq)을 적가했다. 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 물에서 슬러리화하고 여과로 수집했다. 3-브로모-1,2,4-트리메틸-5-니트로-벤젠 (8.6 g, 34.9 mmol, 58% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
단계 2: 3 - 브로모 -2,4,5- 트리메틸 -아닐린. EtOH (100 mL) 중 3-브로모-1,2,4-트리메틸-5-니트로-벤젠 (5.2 g, 21.3 mmol, 1 eq)의 용액에 Fe (5.95 g, 107 mmol, 5 eq) 및 AcOH (12.8 g, 213 mmol, 12.2 mL, 10 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 수성 NaHCO3로 중화하고, 그 다음 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 3-브로모-2,4,5-트리메틸-아닐린 (3.4 g, 14.3 mmol, 67% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 6.51 (s, 1H), 3.56 (br s, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.26 (s, 3H).
단계 3: 4 - 브로모 -5,6-디메틸-1 H - 인다졸. 3-브로모-2,4,5-트리메틸-아닐린 (200 mg, 934.14 umol, 1 eq)을 트리플루오로보란;하이드로플루오라이드 (1.69 g, 7.71 mmol, 1.20 mL, 8.25 eq, 물 중 40%)에 0℃에서 적가로 용해시켰다. (포화 수성물에 대한 최소의 물 중) NaNO2 (96.7 mg, 1.40 mmol, 1.5 eq)의 냉각 수용액. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. NaNO2 (64 mg, 포화 수성물에 대한 최소의 물에서)을 0℃에서 첨가하고 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음, 수득한 침전물을 여과하고, (i-Pr)2O (40 mL)로 세정하고 진공 하에서 농축하고, 이것을 N2 하에서 CHCl3 (8 mL) 중 KOAc (183 mg, 1.87 mmol, 2 eq) 및 18-크라운-6 (12.4 mg, 46.7 umol, 0.05 eq)의 교반 혼합물에 한번에 직접 첨가했다. 혼합물을 35℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 100/1 내지 5/1)로 정제하여 4-브로모-5,6-디메틸-1H-인다졸 (70 mg, 280 umol, 30% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 4: 4 - 브로모 -5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란 - 2-일- 인다졸. DCM (6 mL) 중 4-브로모-5,6-디메틸-1H-인다졸 (290 mg, 1.29 mmol, 1 eq)의 용액에 TsOHㆍH2O (24.5 mg, 129 umol, 0.1 eq), 이어서 DHP (217 mg, 2.58 mmol, 236 uL, 2 eq) 및 MeCN (1 mL)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액 (5 mL)로 켄칭하고, 물 (20 mL)로 희석했다. 층을 분리하고 수성상을 EtOAc (2 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 100/1 내지 25/1)로 정제하여 4-브로모-5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란- 2-일-인다졸 (320 mg, 828 umol, 64% 수율, 80% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 309.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.94 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.66 (dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1H), 4.06 - 3.97 (m, 1H), 3.79 - 3.67 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.16 (qd, J = 4.4, 7.6 Hz, 1H), 2.06 (qd, J = 3.2, 13.2 Hz, 1H), 1.83 - 1.64 (m, 4H).
단계 A: tert -부틸 4-[7-(5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸 -4-일)- 2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (385 mg, 890 umol, 1 eq), 4-브로모-5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (303 mg, 979 umol, 1.10 eq), Pd2(dba)3 (163 mg, 178 umol, 0.2 eq), RuPhos (166 mg, 356 umol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (725 mg, 2.23 mmol, 2.5 eq)을 탈가스하고 그 다음 8 시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EtOAc/MeOH 100/1 내지 5/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)- 2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 275 umol, 31% 수율, 91% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 661.
단계 B: 7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘. DCM (0.4 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (190 mg, 288 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (924 mg, 8.10 mmol, 0.6 mL, 28.2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (220 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 C: 1-[4-[7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]- 6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-1-일] 프로프 -2-엔-1-온. DCM (4 mL) 중 7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (200 mg, 284 umol, 1 eq, 2 TFA) 및 TEA (574 mg, 5.68 mmol, 790 uL, 20 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (35.8 mg, 284 umol, 1 eq)을 -40℃에서 적가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (5 mL)로 희석하고 그 다음 DCM (2 × 10 mL)로 추출했다. 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 100/1 내지 10/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 1-[4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 453, 45.3 mg, 85.2 umol, 2개의 단계 30% 수율, 99.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:531.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 10.84 (br s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.59 (dd, J = 10.4, 16.8 Hz, 1H), 6.34 (dd, J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.79 - 5.68 (m, 1H), 4.40 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.17 (dd, J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 3.90 - 3.39 (m, 10H), 3.09 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.89 - 2.62 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.30 - 2.23 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 3H).
실시예 454
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 4 ,4- 디플루오로피페리딘. DCM (0.50 mL) 중 tert-부틸 4,4-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (2.0 g, 9.04 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.50 mL, 7.47 e-1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하여 생성물 4,4-디플루오로피페리딘 (1.50 g, 조물질, TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 2: 1 -(2- 벤질옥시에틸 )-4,4- 디플루오로 -피페리딘. MeCN (20.0 mL) 중 4,4-디플루오로피페리딘 (1.50 g, 6.38 mmol, 1.0 eq, TFA)의 용액에 NaOH (765 mg, 19.1 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 2-브로모에톡시메틸벤젠 (1.65 g, 7.65 mmol, 1.21 mL, 1.20 eq) 및 KI (212 mg, 1.28 mmol, 0.20 eq)을 상기 액체에 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (20.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 10:1 내지 0:1)로 정제하여 1-(2-벤질옥시에틸)-4,4-디플루오로 -피페리딘 (600 mg, 2.35 mmol, 2개의 단계 37% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.41 - 7.29 (m, 5H), 4.54 (s, 2H), 3.82 - 3.72 (m, 2H), 3.33 - 2.94 (m, 6H), 2.37 - 2.15 (m, 4H).
단계 3: 2 -(4,4- 디플루오로 -1- 피페리딜 )에탄올. EtOH (5.0 mL) 중 1-(2-벤질옥시에틸)-4,4-디플루오로-피페리딘 (400 mg, 1.57 mmol, 1.0 eq) 및 Pd/C (200 mg, 10% 순도)의 용액을 H2 (15 Psi) 분위기 하에서 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 THF (10.0 mL)로 세정했다. 여과물을 수집하고 농축시켜 생성물 2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에탄올 (170 mg, 1.03 mmol, 66% 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.84 - 3.70 (m, 2H), 2.98 - 2.89 (m, 4H), 2.86 - 2.80 (m, 3H), 2.24 - 2.11 (m, 4H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 및 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 206 umol, 1.0 eq) 중 2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에탄올 (102 mg, 619 umol, 3.0 eq)의 용액에 t-BuONa (39.7 mg, 413 umol, 2.0 eq)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 EA (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 0.1% NH3ㆍH2O, 0 - 60% MeCN)로 정제하여 생성물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (90.0 mg, 132 umol, 64% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 682.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (0.5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (30.0 mg, 44.0 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.50 mL, 154 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 수성물로 pH ~ 7로 조정하고, 그 다음 EA (3 × 5.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (26.0 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
단계 C: 2-[(2 S) -4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (26.0 mg, 44.7 umol, 1.0 eq) 및 DIEA (69.3 mg, 536 umol, 93.4 uL, 12.0 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (8.45 mg, 67.0 umol, 1.50 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH(1.0 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 농축시켜 잔류물을 수득했다. 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 47% - 77%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(4,4-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 454, 6.35 mg, 9.82 umol, 2개의 단계 22% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 636.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 6.40 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.20 - 4.56 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 3H), 4.22 - 4.01 (m, 2H), 3.98 - 3.75 (m, 2H), 3.66 - 3.57 (m, 1H), 3.53 - 3.36 (m, 1H), 3.31 - 2.98 (m, 4H), 2.91 - 2.80 (m, 3H), 2.79 - 2.49 (m, 6H), 2.09 - 1.94 (m, 4H).
실시예 455
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 1 -(2- 벤질옥시에틸 )-3,3- 디플루오로 -피페리딘. MeCN (6.0 mL) 중 3,3-디플루오로피페리딘 (1.0 g, 6.35 mmol, 1.0 eq, HCl)의 용액에 NaOH (761 mg, 19.0 mmol, 3.0 eq)을 25℃에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 5분 동안 교반하고, 그 다음 2-브로모에톡시메틸벤젠 (1.64 g, 7.61 mmol, 1.20 mL, 1.20 eq) 및 KI (211 mg, 1.27 mmol, 0.20 eq)을 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 H2O (15.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 EA (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10:1 내지 5:1)로 정제하여 1-(2-벤질옥시에틸)-3,3-디플루오로-피페리딘 (1.40 g, 5.48 mmol, 86% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.38 - 7.31 (m, 5H), 4.56 (s, 2H), 3.64 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.79 - 2.73 (m, 4H), 2.55 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.85 - 1.85 (m, 2H), 1.82 - 1.76 (m, 2H).
단계 2: 2 -(3,3- 디플루오로 -1- 피페리딜 )에탄올. MeOH (5.0 mL) 중 1-(2-벤질옥시에틸)-3,3-디플루오로-피페리딘 (400 mg, 1.57 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (200 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 농축시켜 2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에탄올 (240 mg, 1.45 mmol, 93% 수율)을 무색 오일로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 3.64 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.73 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.54 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 1.97 - 1.87 (m, 2H), 1.82 - 1.76 (m, 2H).
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 396 umol, 1.0 eq), 2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에탄올 (196 mg, 1.19 mmol, 3.0 eq), t-BuONa (114 mg, 1.19 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 H2O (5.0 mL)로 켄칭하고 EA (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 NaCl 수용액 (20.0 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3:1 내지 0:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 344 umol, 87% 수율, 94% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.42 (m, 1H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 4.67 - 4.64 (m, 1H), 4.48 - 4.39 (m, 3H), 4.06 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.01 - 3.80 (m, 3H), 3.60 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.37 (dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.27 - 3.10 (m, 3H), 2.97 - 2.90 (m, 3H), 2.84 - 2.78 (m, 3H), 2.61 - 2.57 (m, 2H), 1.89 - 1.85 (m, 3H), 1.72 - 1.54 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[2-(3,3- 디플루오로 -1- 피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 293 umol, 1.0 eq)의 혼합물에 TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.50 mL, 69.0 eq)을 25℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(3,3-디플루오로-1- 피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 조물질, 2TFA)을 황색 고체로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 582.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 494 umol, 조물질, 2TFA) 및 TEA (727 mg, 7.18 mmol, 1.0 mL)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (100 mg, 793 umol)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 MeOH (3.0 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 농축시켜 잔류물을 수득했다. 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; 이동상: [물 (10.0 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 57%-87%, 10분)로 정제하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[2-(3,3-디플루오로-1-피페리딜)에톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 455, 48.4 mg, 75.8umol, 26% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
SFC 조건: 100%.e.e.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.78 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.36 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 1H), 6.60 - 6.58 (m, 1H), 6.44 - 6.39 (m, 1H), 5.85 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.10 - 4.66 (m, 1H), 4.49 - 4.40 (m, 3H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 3.94 - 3.89 (m, 1H), 3.85 - 3.73 (m, 1H), 3.63 - 3.60 (m, 1H), 3.50 - 3.41 (m, 1H), 3.33 - 3.02 (m, 4H), 2.94 - 2.76 (m, 6 H), 2.64 - 2.61 (m, 3H), 1.95 - 1.85 (m, 2H), 1.80 - 1.78 (m, 2H). LCMS [ESI, M+1]: 636.
실시예 456
5,6-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-2-온
삽입 단계 1: 2 - 브로모 -3,4-디메틸 -6-니트로-아닐린. CHCl3 (100 mL) 중 4,5-디메틸-2-니트로-아닐린 (5 g, 30.1 mmol, 1 eq)의 용액에 Br2 (7.21 g, 45.1 mmol, 2.33 mL, 1.5 eq)을 10℃에서 적가했다. 반응 혼합물을 10℃에서 30분 동안 교반하고 25℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수성물 (80 mL)로 세정했다. 수성물을 CHCl3 (30 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 실리카겔의 패드를 통해 여과하고, 그 다음 농축 건조시켰다. 2-브로모-3,4-디메틸 -6-니트로-아닐린 (7 g, 28.5 mmol, 95% 수율, 99.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+3]: 247
단계 2: 3 - 브로모 -1,2-디메틸-4,5- 디니트로 -벤젠. TFA (50 mL) 중 2-브로모-3,4-디메틸-6-니트로-아닐린 (7 g, 28.6 mmol, 1 eq)의 용액에 과산화수소 (25.9 g, 229 mmol, 22.0 mL, 30% 순도, 8.0 eq)을 10℃에서 적가했다. 반응 혼합물을 10℃에서 30분 동안 그리고 25℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 40℃에서 추가 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 5 - 10℃로 냉각시키고 그 다음을 여과했다. 필터 케이크를 PE (3 × 20 mL)로 세정했다. 고체를, 그 다음 50℃에서 감압 하에서 건조시켰다. 3-브로모-1,2-디메틸-4,5-디니트로-벤젠 (5 g, 18.2 mmol, 64% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 A: tert -부틸 4-[7-(2,3-디메틸-5,6-디니트로-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (25 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 578 umol, 1 eq), 3-브로모-1,2-디메틸-4,5-디니트로-벤젠 (318 mg, 1.16 mmol, 2 eq), Pd2(dba)3 (52.9 mg, 57.8 umol, 0.1 eq), RuPhos (40.5 mg, 86.7 umol, 0.15 eq) 및 Cs2CO3 (377 mg, 1.16 mmol, 2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL × 1) 및 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 희석했다. 분리된 유기상을 염수 (100 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 50/1 내지 3/1) 및 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 × 100 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 4-[7-(2,3-디메틸-5,6-디니트로-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (22.0 mg, 140 umol, 6% 수율, 99.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 627.
단계 B: tert -부틸 4-[7-(2,3- 디아미노 -5,6- 디메틸-페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(2,3-디메틸-5,6-디니트로-페닐) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 191 umol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (24.0 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 4-[7-(2,3-디아미노-5,6- 디메틸-페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 567.
단계 C: tert -부틸 4-[7-(5,6-디메틸-2-옥소-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. THF (10 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(2,3-디아미노-5,6-디메틸-페닐)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 176 umol, 1 eq)의 용액에 CDI (57.2 mg, 353 umol, 2 eq)을 첨가했다. 50℃에서 1시간 동안 교반한 후, CDI (171 mg)을 첨가하고 혼합물을 70℃에서 추가 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O (3 mL × 1)로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 17% - 47%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고 에틸 아세테이트 (1 × 30 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 4-[7-(5,6-디메틸-2-옥소-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (20.0 mg, 33.7 umol, 2개의 단계 19% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 593.
단계 D: 5,6-디메틸-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-일]-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-2-온. 디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(5,6-디메틸-2-옥소-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (16.0 mg, 27.0 umol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 101 uL, 15 eq)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 5,6-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-2-온 (20.0 mg, 조물질, HCl)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 493.
단계 E: 5,6-디메틸-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-일]-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-2-온. DCM (2 mL) 중 5,6-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2- 일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-2-온 (20.0 mg, 37.8 umol, 1 eq, HCl) 및 TEA (38.3 mg, 378 umol, 52.6 uL, 10 eq)의 혼합물에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (4.77 mg, 37.8 umol, 1 eq)을 -40℃에서 나누어서 첨가했다. -40℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (0.5 mL)으로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 CH2Cl2 (2 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150 * 25 * 10um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 10% - 37%, 9분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 5,6-디메틸-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-(4-프로프-2-에노일피페라진-1-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-일]-1,3-디하이드로벤즈이미다졸-2-온 (실시예 456, 3.15 mg, 5.25 umol, 2개의 단계 14% 수율, 98.8% 순도, HCOOH)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 547.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) 6.90 - 6.81 (m, 1H), 6.80 - 6.72 (m, 1H), 6.28 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.82 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.72 - 4.46 (m, 2H), 4.32 - 4.01 (m, 2H), 3.93 - 3.53 (m, 10H), 3.53 - 3.38 (m, 1H), 3.21 - 3.02 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.95 - 2.58 (m, 2H), 2.48 - 2.32 (m, 1H), 2.31 (br s, 3H), 2.29 (br s, 3H), 2.19 - 1.94 (m, 3H).
실시예 457
1-[4-[7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온
단계 1: ( E )-2-(2- 브로모 -3,4-디메틸-6-니트로-페닐)- N , N -디메틸- 에텐아민. DMF (20 mL) 중 3-브로모-1,2,4-트리메틸-5-니트로-벤젠 (2 g, 8.19 mmol, 1 eq)의 용액에 DMFDMA (5.86 g, 49.2 mmol, 6.53 mL, 6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 130℃에서 10시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 (E)-2-(2-브로모-3,4-디메틸-6-니트로-페닐)-N,N-디메틸- 에텐아민 (2.5 g, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 2: 4 - 브로모 -5,6-디메틸-1 H -인돌. EtOH (50 mL) 중 (E)-2-(2-브로모-3,4-디메틸-6-니트로-페닐)- N,N-디메틸-에텐아민 (2.5 g, 8.36 mmol, 1 eq)의 용액에 Fe (2.33 g, 41.8 mmol, 5 eq) 및 AcOH (5.02 g, 83.6 mmol, 4.78 mL, 10 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 농축했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 1/0 내지 50/1)로 정제하여 4-브로모-5,6-디메틸-1H-인돌 (380 mg, 1.46 mmol, 2개의 단계, 수율 18%, 86% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.12 (br s, 1H), 7.20 - 7.10 (m, 2H), 6.59 - 6.52 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.43 (s, 3H).
단계 3: 2 -[(4- 브로모 -5,6-디메틸-인돌-1-일) 메톡시 ]에틸- 트리메틸 - 실란. THF (9 mL) 중 4-브로모-5,6-디메틸-1H-인돌 (450 mg, 2.01 mmol, 1 eq)의 용액에 NaH (161 mg, 4.02 mmol, 60% 순도, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 반응을 0℃에서 15분 동안 N2 하에서 교반했다. 반응을 25℃로 가온되도로 하고 0.5시간 동안 교반했다. 반응을 0℃로 다시 냉각했다. 그리고 THF (100 uL) 중 SEM-Cl (502 mg, 3.01 mmol, 533 uL, 1.5 eq)을 0℃에서 적가했다. 5분 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고 (25℃), 그리고 또 다른 5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, 물 (10 mL)로 희석하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 30 mL)로 추출했다. 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 1/0 내지 50/1)로 정제하여 2-[(4-브로모-5,6-디메틸-인돌-1-일)메톡시]에틸-트리메틸-실란 (440 mg, 1.18 mmol, 59% 수율, 95% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.25 (s, 1H), 7.11 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 3.52 - 3.40 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 0.92 - 0.87 (m, 2H), -0.01 - -0.08 (m, 9H).
단계 A: tert -부틸 4-[7-[5,6-디메틸-1-(2- 트리메틸실릴에톡시메틸 )인돌-4-일]-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (30 mL) 중 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 66, 450 mg, 1.04 mmol, 1 eq), 2-[(4-브로모-5,6-디메틸-인돌-1-일)메톡시]에틸-트리메틸-실란 (406 mg, 1.14 mmol, 1.1 eq), Pd2(dba)3 (191 mg, 208 umol, 0.2 eq), RuPhos (194 mg, 416 umol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (847 mg, 2.60 mmol, 2.5 eq)을 탈가스하고 그 다음 8 시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EtOAc/MeOH 50/1 내지 10/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-[5,6-디메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인돌-4-일]-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (106 mg, 135 umol, 13% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 706.
단계 B: tert -부틸 4-[7-(5,6-디메틸-1 H -인돌-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. DMF (0.35 mL) 중 tert-부틸 4-[7-[5,6-디메틸-1-(2-트리메틸실릴에톡시메틸)인돌-4-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (70 mg, 99.2 umol, 1 eq)의 용액에 TBAF (THF 중 1 M, 496 uL, 5 eq) 이어서 에탄-1,2-디아민 (8.94 mg, 149 umol, 9.95 uL, 1.5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 EtOAc (3 mL) 및 물 (2 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (DCM/MeOH 10/1)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (50 mg, 60.8 umol, 61% 수율, 70% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 576.
단계 C: 7-(5,6-디메틸-1 H -인돌-4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘. DCM (70 uL) 중 tert-부틸 4-[7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (45 mg, 78.2 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (89.1 mg, 782 umol, 57.9 uL, 10 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (60 mg, 조물질, 2 TFA)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 D: 1-[4-[7-(5,6-디메틸-1 H -인돌-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온. DCM (1 mL) 중 7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-4-피페라진-1-일-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (55 mg, 78.2 umol, 1 eq, 2 TFA) 및 TEA (158 mg, 1.56 mmol, 218 uL, 20 eq)의 용액에 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트 (9.86 mg, 78.2 umol, 1 eq)을 -40℃에서 적가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 MeOH (0.5 mL)로 켄칭하고, 물 (5 mL)로 희석하고 그 다음 DCM (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 100/1 내지 10/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.1% TFA)-ACN]; B%: 16%-43%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 수성 NaHCO3로 중화하고, DCM (2 × 15 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 표제 화합물 1-[4-[7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-일]프로프-2-엔-1-온 (실시예 457, 9.81 mg, 18.3 umol, 2개의 단계 23% 수율, 98.8% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 530.
SFC 조건: OJ-3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 (br s, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.07 - 7.03 (m, 1H), 6.60 (dd, J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.53 - 6.48 (m, 1H), 6.34 (dd, J = 2.0, 16.9 Hz, 1H), 5.76 (dd, J = 2.0, 10.4 Hz, 1H), 4.49 - 4.10 (m, 4H), 3.81 (br s, 2H), 3.76 - 3.38 (m, 8H), 3.13 (br t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.02 - 2.56 (m, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.34 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.84 - 1.71 (m, 3H).
실시예 458
2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1- 브로모 -8-메틸나프탈렌: -78℃로 냉각된 THF (200 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (33.8 g, 118 mmol)의 용액에, 내부 온도가 -69℃를 초과하지 않는 속도로 부틸리튬 (49.6 ml, 124 mmol)을 첨가했다. 첨가 완료 후, 반응을 -78℃로 냉각시키고, 요오드화메틸 (14.8 ml, 236 mmol)을 내부 온도가 -40℃로 증가된 볼러스에서 첨가했다. 요오드화메틸 첨가 후, 드라이아이스/아세톤 배쓰를 제거하고 반응을 실온으로 가온시켰다. 반응을 그 다음 염수에 부었고 수성층을 EtOAc (300 mL)로 추출하고 유기물을 분리했다. 유기물을 그 다음 MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시키고 잔류물을 헥산을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 백색 고체 (24 g)를 수득했다. 고체를 그 다음 IPA (ca. 60 mL)에서 슬러리화하고 슬러리 60℃로 가열하고 이 시점에서 고체는 용해되었다. 용액을 가열을 없애고 2시간에 걸쳐 실온으로 냉각시켰다. 수득한 슬러리를 여과하고 고체를 진공에서 건조시켜 1-브로모-8-메틸나프탈렌을 얻었다 (16 g, 72.4 mmol, 61 % 수율) >95% 순도.
단계 B: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (100 mL) 중 xantphos (4.5 g, 7.8 mmol) 및 Pd2(dba)3 (3.5 g, 3.9 mmol)의 용액을 15분 동안 아르곤으로 탈가스하고, 이어서 용액을 20분 동안 100℃에서 가열했다. 용액을 실온으로 냉각시키고 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (9.8 g, 19 mmol), 1-브로모-8-메틸나프탈렌 (13 g, 58 mmol) 및 Cs2CO3 (32 g, 97 mmol), Pd2(dba)3 (3.5 g, 3.9 mmol)을 용액에 첨가하고 혼합물을 추가 20분 동안 아르곤으로 탈가스하고 반응을 밤새 100℃로 가열했다. 반응을 그 다음 실온으로 냉각시키고 GFF 종이를 통해 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 그 다음 크로마토그래피를, 1-->10%(MeOH+2% NH4OH)/DCM을 사용하여 3회 수행하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.8 g, 12 mmol, 62 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 1:1 EtOH/THF (100 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.8 g, 12 mmol)의 용액을 5분 동안 N2로 탈가스하고 이어서 Pd/C (2.6 g, 2.4 mmol)을 첨가했다. 슬러리를 그 다음 진공 하에서 탈가스하고 H2 (3x)를 다시 충전했다. 제3 역충전시, 혼합물을 밤새 수소의 밸룬 하에서 교반했다. 슬러리를 N2로 다시 탈가스하고 슬러리 셀라이트를 통해 여과했다. 조합된 여과물을 진공에서 농축시키고 고체를, 1-->10%(MeOH+2% NH4OH)/DCM을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (5.0 g, 9.8 mmol, 81 % 수율)을 수득했다.
단계 D: 2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (1954 μl, 0.391 mmol)을 수용하고 있는 25 mL RBF에 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (200 mg, 0.391 mmol) 및 트리에틸아민 (136 μl, 0.977 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 부트-2-이노산 (49.3 mg, 0.586 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (175 μl, 0.293 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 rt에서 18시간 동안 교반되도록 했다. 물을 첨가하고 고체를 여과했다. 고체를 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 5-18% MeOH)로 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-(부트-2-이노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 458, 110 mg, 0.190 mmol, 49 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 578.3 [M+H]+.
실시예 459
2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (100 mg, 0.1954 mmol), (E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (37.86 mg, 0.2932 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL, 25.58 mmol)의 교반 혼합물을 얼음-염조 상에서 냉각시키고 트리에틸아민 (0.02724 mL, 0.1954 mmol)을 한번에 첨가하고, 이어서 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드, EtOAc 중 50% (0.1745 mL, 0.2932 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 5분에 걸쳐 r.t.로 가온되도록 하고, 그 다음 r.t.에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)와 0.5 M Na2CO3 (20 mL) 사이에서 분할시키고, 유기물을 분리하고, 유기층을 물 및 염수(10 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. DCM 중 5 내지 10% MeOH + 0.5% NH4OH에서 실리카겔상 크로마토그래피로 조 생성물을 수득했고, 이것을 역상, Gilson, 물 중 5 내지 95% MeCN +0.1% TFA 상에서 정제했다. 상기 표적 분획을 조합하고, 2M Na2CO3로 염기성화하고 DCM (3*20 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 고형 잔류물을 DCM (3 mL)에 용해시키고, 여과하고 증발시켜 원하는 표제 화합물을 무색 고체 (실시예 459, 40 mg, 33%)로서 수득했다. ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]+.
실시예 460
2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )- 4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)- 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 500 mg, 989 umol, 1.0 eq), Pd2(dba)3 (181 mg, 198 umol, 0.20 eq), Xantphos (172 mg, 297 umol, 0.30 eq) 및 Cs2CO3 (967 mg, 2.97 mmol, 3.0 eq)의 용액에 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (중간체 69, 284 mg, 1.29 mmol, 1.30 eq)을 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 4)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (C18, 포름산 중 0.1 %, 0-70 % 아세토니트릴)로 정제하여 생성물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)- 4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 619 umol, 63% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (20.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (700 mg, 1.08 mmol, 1.0 eq) 및 NH3ㆍMeOH (20.0 mL, 30% 순도)의 용액에 Pd/C (200 mg, 10% 순도)을 첨가했다. 혼합물을 질소로 3회 퍼지했다. 그 다음 혼합물을 수소 분위기 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 테트라하이드로푸란 (20.0 mL)로 세정했다. 모액을 수집하고 진공 하에서 농축하여 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (500 mg, 977 umol, 90% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 3.2, 7.2 Hz, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.22 (dd, J = 6.8, 18.0 Hz, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 4.07 - 3.89 (m, 1H), 3.89 - 3.70 (m, 2H), 3.52 - 3.45 (m, 2H), 3.38 - 3.20 (m, 1H), 3.19 - 3.04 (m, 4H), 3.03 - 2.94 (m, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 4H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 3H), 2.47 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.31 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.88 - 1.76 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 ]-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 ) -2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (4.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (250 mg, 489 umol, 1.0 eq) 및 피리딘 (309 mg, 3.91 mmol, 316 uL, 8.0 eq)의 용액에 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (359 mg, 1.95 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (330 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 658.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8- 메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질) 및 K2CO3 (630 mg, 4.55 mmol, 10.0 eq)의 용액에 모폴린 (238 mg, 2.73 mmol, 241 uL, 6.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-모폴리노부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 460, 48.2 mg, 72.5 umol, 16% 수율)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 665.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 7.6, 15.2 Hz 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.55 - 6.39 (m, 1H), 5.23 - 4.47 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.09 (m, 2H), 4.07 - 3.83 (m, 2H), 3.81 - 3.64 (m, 5H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.24 - 3.13 (m, 4H), 3.12 - 2.94 (m, 3H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.75 - 2.54 (m, 3H), 2.50 (br s, 4H), 2.48 - 2.45 (m, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.10 - 2.00 (m, 1H), 1.87 - 1.71 (m, 3H).
실시예 461
2-[(2R)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert - 부틸 4-[4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. DMAc (60 mL) 중 tert-부틸 2,4-디클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-7-카복실레이트 (3 g, 9.86 mmol, 1 eq)의 용액에 DIEA (3.82 g, 29.6 mmol, 5.15 mL, 3 eq) 및 2-피페라진-2-일아세토니트릴 (중간체 62, 2.15 g, 10.9 mmol, 1.1 eq, 2HCl)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 그 다음 용액에 DIEA (2.55 g, 19.7 mmol, 3.43 mL, 2 eq) 및 벤질 클로로포르메이트 (2.52 g, 14.8 mmol, 2.10 mL, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 또 다른 2.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (40 mL) 및 에틸 아세테이트 (100 mL)을 첨가했다. 분리된 유기상을 수성 시트르산 용액의5 % (40 mL × 1), 수성 포화 Na2CO3 용액 (40 mL × 1) 및 염수 (40 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과했다. 여과물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르 (25 mL)로 분쇄하여 순수한 생성물. tert -부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (4.10 g, 7.62 mmol, 79% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 527.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.43 - 7.29 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 4.71 - 4.55 (m, 2H), 4.48 - 4.37 (m, 1H), 4.21 - 3.97 (m, 2H), 3.92 - 3.67 (m, 2H), 3.40 - 3.20 (m, 3H), 3.09 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.88 - 2.57 (m, 4H), 1.47 (s, 9H).
SFC 조건 (40935): 칼럼: Chiralcel OD - 3 50 × 4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3 mL/분, 파장: 220 nm.
단계 B: tert -부틸 4-[(3 R )-4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 ) 피페라진-1-일]-2- 클로로 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. tert-부틸 4-[4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]- 2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.20 g, 4.17 mmol, 1 eq)을 SFC (칼럼: OD (250mm * 30mm, 10um); 이동상: [0.1% NH3H2O MeOH]; B%: 40% - 40%, 3.1 min: 180분)로 분리했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 4-[(3R)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸) 피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (940 mg, 1.78 mmol, 43% 수율, 99.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 527.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OD - 3 50 × 4.6 mm I.D., 3 um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3 mL/분, 파장: 220 nm.
단계 C: tert -부틸 4-[(3 R )-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 4-[(3R)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (290 mg, 550 umol, 1 eq), [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (127 mg, 1.10 mmol, 131 uL, 2 eq), Pd2(dba)3 (60.5 mg, 66.0 umol, 0.12 eq), RuPhos (51.4 mg, 110 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (448 mg, 1.38 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 7 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (25 mL × 1) 및 에틸 아세테이트 (25 mL × 2)을 첨가했다. 분리된 유기상을 염수 (100 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 그 다음 여과했다. 여과물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고 수성 HCl 용액 (1 mol/L)을 pH = 3 ~ 4로 산성화했다. 분리된 수층에 에틸 아세테이트 (60 mL)을 첨가하고 포화 수성 Na2CO3 용액을 pH = 8 ~ 9로 염기성화했다. 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. tert-부틸 4-[(3R)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (225 mg, 0.36 mmol, 66% 수율, 97.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 606.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.47 - 7.30 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.73 - 4.52 (m, 2H), 4.44 - 4.26 (m, 2H), 4.22 - 4.14 (m, 1H), 4.03 - 3.74 (m, 3H), 3.41 - 3.21 (m, 3H), 3.08 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.97 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.53 (m, 5H), 2.46 (s, 3H), 2.38 - 2.10 (m, 2H), 2.08 - 2.03 (m, 1H), 1.89 - 1.65 (m, 3H), 1.48 (s, 9H).
SFC 조건: 칼럼: Chiralpak AD - 3 50 × 4.6 mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3 mL/분, 파장: 220 nm.
단계 D: 벤질 (2 R )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (12 mL) 중 tert-부틸 4-[(3R)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (620 mg, 1.02 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 12.4 mL, 48.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 액체를 경사분리하고 잔류물을 진공 하에서 농축했다. 벤질 (2R)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (470 mg, 조물질, HCl)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 DCM (10 mL)에 용해시켰다. 혼합물을 포화 수성 탄산나트륨 용액으로 pH = 9로 염기성화했다. 유기상을 분리하고, 염수 (5 mL × 1)로 세정하고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했고, 이것은 추가 정제없이 충분히 순수했다. 벤질 (2R)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 718 umol, 77% 수율, 90.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
단계 E: 벤질 (2 R )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (7 mL) 중 벤질 (2R)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 415 umol, 1 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (중간체 69, 119 mg, 540 umol, 1.3 eq) Pd2(dba)3 (76.1 mg, 83.1 umol, 0.2 eq), Cs2CO3 (406 mg, 1.25 mmol, 3 eq) 및 Xantphos (72.1 mg, 125 umol, 0.3 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물에 H2O (20 mL × 1)을 첨가하고 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL × 2)로 추출했다. 추출물을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고 수성 HCl 용액 (1 mol/L)로 pH = 3 ~ 4로 산성화했다. 수층에 에틸 아세테이트 (60 mL)을 첨가하고 포화 수성 Na2CO3 용액으로 pH = 8 ~ 9로 염기성화했다. 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 50/1 내지 5/1)로 정제했다. 벤질 (2R)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (86 mg, 0.128 mmol, 31% 수율, 96.0 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 E: 2-[(2 R )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15 mL) 중 벤질 (2R)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸- 1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 201 umol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (25 mg, 15.5 umol, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (15.5 umol, 15 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 셀라이트의 패드를 통해 여과 제거했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2R)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 0.183 mmol, 91% 수율, 93.5% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 F: 2-[(2 R )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (10 mL) 중 2-[(2R)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 195 umol, 1 eq) 및 TEA (198 mg, 1.95 mmol, 272 uL, 10 eq)의 혼합물에 프로프-2-에노일 클로라이드 (17.7 mg, 195 umol, 15.9 uL, 1 eq)을 나누어서 첨가했다. -40℃에서 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 MeOH (2 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1 내지 10/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 25% - 45%, 7.8분) 및 (칼럼: Gemini 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 57% - 87%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 감압 하에서 농축하여 아세토니트릴을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2R)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 461, 17.6 mg, 31.0 umol, 16% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 566.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 50 × 4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3 mL/분, 파장: 220 nm.
1H NMR (400M Hz, 클로로포름-d) δ = 7.77 - 7.63 (m, 2H), 7.48 - 7.32 (m, 2H), 7.31 - 7.18 (m, 2H), 6.61 (br s, 1H), 6.48 - 6.37 (m, 1H), 5.85 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.27 - 4.49 (m, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 4.33 - 4.06 (m, 4H), 4.05 - 3.62 (m, 3H), 3.61 - 3.34 (m, 2H), 3.33 - 2.99 (m, 5H), 2.94 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.57 (m, 2H), 2.54 - 2.44 (m, 3H), 2.30 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.15 - 1.95 (m, 1H), 1.95 - 1.79 (m, 3H).
실시예 462
2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.27 mmol, 1 eq), 4-브로모-5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2- 일-인다졸 (511 mg, 1.65 mmol, 1.3 eq), RuPhos (237 mg, 509 umol, 0.4 eq), Cs2CO3 (1.04 g, 3.18 mmol, 2.5 eq) 및 Pd2(dba)3 (233 mg, 254 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 그 다음 8 시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 수성 NaHCO3로 중화했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (365 mg, 469 umol, 37% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 700.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.99 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd, J = 2.8, 9.6 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.40 (br dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.09 - 3.97 (m, 3H), 3.90 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.80 - 3.71 (m, 1H), 3.50 (br t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.25 (br s, 2H), 3.09 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.99 (br t, J = 11.2 Hz, 1H), 2.83 - 2.51 (m, 6H), 2.48 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 2.21 - 2.13 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 8H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (720 mg, 1.03 mmol, 1 eq)의 용액에 TFA (4.62 g, 40.5 mmol, 3 mL, 39.4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 DCM (10 mL)로 희석하고 포화 수성 NaHCO3로 중화하고, 그 다음 수성상을 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (880 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 516.
단계 C: (2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (4 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질) 및 TEA (177 mg, 1.75 mmol, 243 uL)의 용액에 프로프-2-에노일 클로라이드 (13.2 mg, 145 umol, 11.9 uL)을 -40℃에서 적가했다. -40℃에서 30분 동안 교반하고, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (1 mL)로 켄칭하고 DCM (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 내지 10/1) 이어서 prep-HPLC (칼럼: Gemini 200*30 10μ; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 40%-70%, 6.0분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 (2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-프로프-2-에노일-피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 462, 15.6 mg, 27.2 umol, 2개의 단계 15% 수율, 99.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:570.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 100Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 10.26 (br s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.57 (br d, J = 9.6 Hz, 1H), 6.39 (dd, J = 1.2, 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.12 - 4.38 (m, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.23 - 3.84 (m, 4H), 3.73 - 3.40 (m, 3H), 3.32 (br s, 1H), 3.10 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.98 - 2.61 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.32 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H).
실시예 463
(S,E)-3-((4-(3-(시아노메틸)-4-(4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드
단계 A: tert -부틸 (S)-4-(4-(( 벤질옥시 ) 카보닐 )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 하이드로클로라이드 (10 g, 34 mmol)을 DMA (68 ml, 34 mmol)에 용해시켰다. 용액에 그 다음 tert-부틸 2,4-디클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (9.3 g, 30 mmol) 이어서 휘니그 염기 (24 ml, 135 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 염기성 물에 부었고 MTBE로 추출했다. 유기물을 추가의 물, 염수로 세정하고, Na2 SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 농축물을, 그 다음 10→70% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피를 수행하여 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (12 g, 67 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 580.3 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: Tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (1.5 g, 2.8 mmol)을 DCM (28 ml, 2.8 mmol)에 용해시키고 염산 용액 (1,4-디옥산 중 4.0 M) (3.6 ml, 14 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 유기물을 1M NaOH로 세정했다. 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 조합된 유기물을 Na2 SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시키고 조 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.2 g, 99 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 427.2 [M+H]+.
단계 C: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.51 g, 0.56 mmol) 및 Xantphos (0.54 g, 1.1 mmol)을 1,4-디옥산 (28 ml, 2.8 mmol)에 용해시키고 아르곤 하에서 5분 동안 퍼지하고 이어서 100℃에서 아르곤 하에서 15분 동안 교반했다. 반응을 그 다음 실온으로 냉각시켰다. 반응에 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.2 g, 2.8 mmol), 1-브로모-8-메틸나프탈렌 (1.9 g, 8.4 mmol), 및 탄산세슘 (2.7 g, 8.4 mmol)을 아르곤 하에서 첨가했다. 반응을 아르곤 하에서 캡핑하고 밤새 100℃에서 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 GF/F 종이를 통해 여과했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 0% →75% 헥산/EtOAc를 용출액으로서 사용하는 CombiFlash상 정상 크로마토그래피로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.45 g, 28 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
단계 D: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(3-(디메틸아미노)-3-옥소프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,4-디하이드로피라진-1(2H)-카복실레이트: 마이크로웨이브 튜브에서 디옥산 (4408 μl, 0.441 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 0.441 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. 3-하이드록시-N,N-디메틸프로판아미드 (155 mg, 1.32 mmol), 탄산세슘 (431 mg, 1.32 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (37.5 mg, 0.0441 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 반응을 아르곤으로 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 1시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 에틸 아세테이트를 첨가했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과하고 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 0 →20% MeOH + 2% NH4OH/DCM으로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 깨끗한 원하는 생성물을 함유하는 모든 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(3-(디메틸아미노)-3-옥소프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-3,4-디하이드로피라진-1(2H)-카복실레이트 (140 mg, 49.2 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 648.3 [M+H]+.
단계 E: (S)-3-((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드: EtOH (2161 μl, 0.216 mmol) 및 THF (2161 μl, 0.216 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(3-(디메틸아미노)-3-옥소프로폭시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 0.216 mmol)의 용액을 5분 동안 N2로 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (57.5 mg, 0.0540 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고 반응을 캡핑하고 N2로 추가 5 분 동안 퍼지했다. 용액을 H2의 하나의 분위기 하에서 밤새 교반했다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 조물질 (S)-3-((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드 (111 mg, 100.0 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 514.3 [M+H]+.
단계 F: (S,E)-3-((4-(3-(시아노메틸)-4-(4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드: 0℃로 냉각된 디클로로메탄 (2161 μl, 0.216 mmol)를 수용하는 25 mL 둥근바닥 플라스크에 (S)-3-((4-(3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드 (111 mg, 0.216 mmol) 및 휘니그 염기 (226 μl, 1.30 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, (E)-4-(디메틸아미노)부트-2-에노산 (167 mg, 1.30 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (772 μl, 1.30 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0℃에서 교반했다. 반응을 염기성 물로 처리하고 수성층을 EtOAc (3x)으로 추출했다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시키고 5 →95% ACN +0.1% TFA /물+0.1% TFA로 용출하는 Gilson (prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고, 1M NaOH로 희석하고 수성층을 DCM으로 추출했다. 유기물을 Na2 SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (S,E)-3-((4-(3-(시아노메틸)-4-(4-(디메틸아미노)부트-2-에노일)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)-N,N-디메틸프로판아미드 (17.6 mg, 13.0 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 625.4 [M+H]+.
실시예 464
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.396 mmol), Cs2CO3 (644 mg, 1.98 mmol), 1,8-디브로모나프탈렌 (339 mg, 1.19 mmol), Pd2(dba)3 (72.4 mg, 0.0791 mmol) 및 XANTPHOS (91.6 mg, 0.158 mmol)을 톨루엔 (1582 μl, 0.396 mmol)로 희석했다. 반응을 아르곤으로 퍼지하고, 밀봉하고 100℃로 가열했다. 23시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각시키고 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 1-10% 메탄올/DCM (첨가제로서 1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (68 mg, 24.2 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 712.2 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (25 mg, 0.035 mmol)을 TFA (2 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 90℃로 가열했다. 2시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각시키고 농축했다. 물질을 DCM으로 희석하고 포화 중탄산나트륨으로 세정했다. DCM을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 (1% NH4OH을 첨가제로서 사용하는) 10% 메탄올/DCM로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8 mg, 39 % 수율)을 수득했다. ESI-APCI MS m/z 578.2 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8 mg, 0.014 mmol)을 DCM (200 uL)로 희석하고, 이어서 아크릴로일 클로라이드 (1.4 mg, 0.015 mmol) 및 DIEA (4.8 μl, 0.028 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 포화 탄산나트륨으로 희석하고 DCM로 2회 추출했다. DCM을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (첨가제로서 1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 464, 6 mg, 69 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 632.2 [M+H]+.
실시예 465
(R)-4-아크릴로일-1-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카보니트릴
단계 A: 벤질 (R)-4-(4-( tert - 부톡시카보닐 )-2- 시아노피페라진 -1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 벤질 2,4-디클로로-5,6-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(8H)-카복실레이트 (700 mg, 2.07 mmol), R-1-N-Boc-3-시아노피페라진 (656 mg, 3.10 mmol), N,N-디메틸아세트아미드 (1 ml) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.433 ml, 2.48 mmol)의 혼합물을 60℃에서 질소 분위기 하에서 48시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고, MTBE (50 mL)와 0.2M Na2CO3 (15 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수(10 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 물질을 MTBE (5 mL)에 의한 희석시 결정화했다. 모액을 경사분리하고 고체를 MTBE (2*1 mL)로 세정하고 이어서 40 내지 60% EtOAc/헥산을 용출물로서 사용하는 실리카겔 상에서 정제하여 생성물 (308 mg, 29%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 513.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 4-((R)-4-(tert-부톡시카보닐)-2-시아노피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트: 벤질 (R)-4-(4-(tert-부톡시카보닐)-2-시아노피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (308 mg, 0.600 mmol), Cs2CO3 (587 mg, 1.80 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 51.1 mg, 0.0600 mmol), (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (346 mg, 3.00 mmol) 및 1,4-디옥산 (4 ml)의 혼합물을 N2로 퍼지하고 바이알을 캡핑하고 반응을 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)과 EtOAc (20 mL) 사이에서 분할시키고 유기층을 분리했다. 유기물을 물 및 염수 (3 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH + 0.4% NH4OH/DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물을 이성질체의 혼합물 (214 mg의 ~60% 순도, 36%)로서 수득했다. ESI+APCI MS m/z 592.3 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 (R)-3-시아노-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 조 벤질 4-((R)-4-(tert-부톡시카보닐)-2-시아노피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (214 mg, 0.362 mmol), 메탄올 (7 ml, 0.362 mmol), 및 탄소상 팔라듐 (20 mg, 5%, 데구싸 유형 E101 NO/W)의 혼합물을 탈가스하고 수소 분위기 하에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트 (2 mL)를 통해 여과하고, 셀라이트를 MeOH (3*3 mL)로 세정하고 조합된 유기물을 진공에서 증발시켜 생성물을 수득했고, 이것을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 458.3 [M+H]+.
단계 D: tert -부틸 (R)-3-시아노-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 (R)-3-시아노-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (165 mg, 0.361 mmol), Cs2CO3 (352 mg, 1.08 mmol), 디옥산 (0.5 mL), 1-아이오도나프탈렌 (0.0790 ml, 0.541 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 30.7 mg, 0.0361 mmol)의 혼합물을 질소로 퍼지하고, 플라스크 캡핑하고 70℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 냉각시키고 EtOAc (20 mL)와 물 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH+0.4% NH4OH /DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 생성물 (120 mg, 57%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]+.
단계 E: (R)-1-(2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카보니트릴: (tert-부틸 (R)-3-시아노-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (120 mg, 0.206 mmol)을 디클로로메탄 (0.5 ml)에 용해시키고 0℃로 냉각시키고 이어서 4M 염화수소 (1.03 ml, 4.11 mmol)을 첨가하고 반응을 실온으로 가온시키면서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공에서 증발시키고 잔류물을 DCM (10 mL)과 2M Na2CO3 (0.5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 Na2CO3 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 증발시켰다. 물질을 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 484.2 [M+H]+.
단계 F: (R)-4-아크릴로일-1-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카보니트릴: DCM (5 mL) 중 (R)-1-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-카보니트릴 (79 mg, 0.1634 mmol)의 용액을 교반하면서 -30℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (68.31 μl, 0.4901 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (26.54 μl, 0.3267 mmol)을 첨가했다. -30℃에서 5분 동안 교반한 후, 반응을 MeOH (0.05 mL)의 첨가로 켄칭하고 반응을 실온으로 가온시켰다. 유기물을 그 다음 분리하고 0.5M Na2CO3 (4 mL)로 세정하고, Na2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 4% MeOH + 0.4% NH4OH/DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 465, 17 mg, 19%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 538.3 [M+H]+.
실시예 466
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 표제 화합물은 단계 A에서 tert-부틸 4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트를 중간체 66로 대체하여 실시예 454에 따라 제조된다.
실시예 467
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-4,4- 디플루오로 -1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물은 실시예 447, 단계 A에서 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트를 실시예 447, 단계 A 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 447에 따라 제조된다.
실시예 468
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-4,4- 디플루오로 -1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물은 실시예 447, 단계 A에서 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트를 실시예 447, 단계 A에서 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트로 대체하여 실시예 447에 따라 제조된다.
실시예 469
(S)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(2-((4,4- 디플루오로 -1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 표제 화합물은 중간체 66, 단계 E의 제조에서 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올을 실시예 139, 단계 B 생성물 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)에탄올로 대체하고 그 다음 실시예 457 단계들 B - D에 따라 실시예 457에 따라 제조된다.
실시예 470
(S)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온
(S)-1-(4-(2-((4,4- 디플루오로 -1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온: 표제 화합물은 중간체 66, 단계 E의 제조에서 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올을 실시예 139, 단계 B 생성물 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)에탄올로 대체하고 그 다음 실시예 453 단계들 B - C에 따라 실시예 453에 따라 제조된다.
실시예 471
2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
(E)-4- 브로모부트 -2- 에노일 클로라이드. DCM (2.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (500 mg, 3.03 mmol, 1.0 eq)의 용액에 (COCl)2 (4.35 g, 34.3 mmol, 3.0 mL, 11.3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (500 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.30 g, 2.17 mmol, 1.0 eq) 및 [(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (500 mg, 4.34 mmol, 515 uL, 2.0 eq)의 용액에 t-BuONa (417 mg, 4.34 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 염수 (30.0 mL)의 첨가로 20℃에서 켄칭하고, EA (3×30.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 EA/MeOH = 10/1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.1 g, 1.62 mmol, 75% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (0.5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 154 umol, 1.00 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 1.00 mL, 26.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 디옥산을 제거했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 수성물 (10.0 mL)로 희석하고 EA (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.0 mg, 조물질)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:550.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80.0 mg, 145 umol, 1.0 eq)의 용액에 DCM (3.0 mL) 중 Py (115 mg, 1.45 mmol, 117 uL, 10.0 eq) 및 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (107 mg, 582 umol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 개시 물질이 소비된 후, 그 다음 DCM (6.0 mL) 중 3,3-디플루오로파이롤리딘 (156 mg, 1.45 mmol, 10.0 eq)의 용액에 반응 혼합물을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 62%-92%, 12분)으로 정제했다. 그리고 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-[3-클로로-2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 471, 15.4 mg, 20.8 umol, 14 % 수율, 97.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 723.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.26 (m, 1H), 7.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 - 6.90 (m, 1H), 6.60 - 6.40 (m, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.39 (br dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.17 (br dd, J=6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.1 (br s, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 3.97 (br d, J=10.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.53 (m, 1H), 3.35 - 3.25 (m, 3H), 3.17 - 3.07 (m, 2H), 2.96 (br t, J=13.2 Hz, 3H), 2.90 - 2.85 (m, 1H), 2.81 (br t, J = 6.8 Hz, 3H), 2.75 - 2.65 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.40 - 2.27 (m, 3H), 2.15 - 1.95 (m, 1H), 1.95 - 1.72 (m, 5H).
실시예 472
2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
2- 클로로프로프 -2- 에노일 클로라이드. DCM (1.50 mL) 중 2-플루오로프로프-2-에노산 (400 mg, 4.44 mmol, 1.0 eq)의 용액에 (COCl)2 (846 mg, 6.66 mmol, 583 uL, 1.50 eq) 및 DMF (32.5 mg, 444 umol, 34.2 uL, 0.10 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 2-클로로프로프-2-에노일 클로라이드 (400 mg, 조물질)을 다음 단계를 위해 직접 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 347 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 77.8 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 10분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 조물질, TFA)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 339 umol, 1.0 eq, TFA)의 용액에 DCM (2.0 mL) 중 DIEA (1.11 g, 8.61 mmol, 1.50 mL, 25.4 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드 (200 mg, 1.84 mmol, 5.43 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55%-83%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 472, 120 mg, 217 umol, 2개의 단계 62% 수율, 98.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 548.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.11 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.01 - 6.91 (m, 2H), 5.52 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.70 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.02 (m, 5H), 3.97 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.43 - 3.73 (br s, 1H) 3.32 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.25 - 3.16 (m, 1H), 3.15 - 3.02 (m, 3H), 3.01 - 2.91 (m, 1H), 2.90 -2.80 (m, 2H) 2.79 - 2.60 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.31-2.28 (m, 7H), 2.13 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.70 (m, 3H).
실시예 473
2-[(2S)-1-(2-클로로프로프-2-에노일)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
2- 클로로아크릴로일 클로라이드. DCM (1.0 mL) 중 2-클로로프로프-2-에노산 (400 mg, 3.76 mmol, 1.0 eq) 및 (COCl)2 (715 mg, 5.63 mmol, 493 uL, 1.50 eq)의 용액을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 워크업하지 않고, 다음 단계를 위해 직접 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (0.50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 73, 400 mg, 695 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 38.9 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 농축시키고 포화 NaHCO3 수성물로 pH~7로 조정하고, 그 다음 DCM (5.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (400 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 B: 2-[(2 S )-1-(2-클로로프로프-2-에노일)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 631 umol, 1.0 eq) 및 DIEA (245 mg, 1.89 mmol, 330 uL, 3.0 eq)의 용액에 2-클로로프로프-2-에노일 클로라이드 (236 mg, 1.89 mmol, 3.0 eq)을 -78 ℃에서 첨가했다. 혼합물을 -78 ℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물에 포화 NaHCO3 수성물 (2.0 mL)을 첨가하고 EA (10.0 mL × 3)로 추출했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 53%-83%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-클로로프로프-2-에노일)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 473, 4.72 mg, 8.35 umol, 2개의 단계 1% 수율, 99.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 564.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.11 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.98 - 6.94 (m, 2H), 5.86 - 5.78 (m, 1H), 5.77 - 5.72 (m, 1H), 5.15 - 4.78 (m, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 3H), 3.96 (br d, J = 12.4 Hz, 2H), 3.30 (br dd, J = 3.2, 13.6 Hz, 1H), 3.23 - 3.04 (m, 4H), 3.04 - 2.54 (m, 6H), 2.50 (br s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 7H), 2.12 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.66 (m, 3H).
실시예 474
2-((S)-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 65, 1 g, 1.58 mmol, 1 eq) 및 1-브로모나프탈렌 (655 mg, 3.16 mmol, 440 uL, 2 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (145 mg, 158 umol, 0.1 eq), RuPhos (148 mg, 316 umol, 0.2 eq), Cs2CO3 (1.55 g, 4.75 mmol, 3 eq)을 한번에 첨가했다. 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 90℃로 가열하고 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (50 mL × 1)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (6 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (100 mL × 2)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (515 mg, 726 umol, 45.9% 수율, 89.1% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
단계 B: 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (60 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1 g, 1.58 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (500 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (20%, 50 mL)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축했다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (680 mg, 1.26 mmol, 80% 수율, 92.3% 순도)을 황색 고체로서 수득하고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 498.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.26 - 8.19 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.16 - 7.12 (m, 1H), 4.41 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.16 (dd, J = 7.2, 10.8 Hz, 1H), 4.01 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.82 (m, 1H), 3.44 - 3.21 (m, 3H), 3.18 - 2.97 (m, 4H), 2.95 - 2.76 (m, 3H), 2.74 - 2.63 (m, 1H), 2.55 (dd, J = 1.2, 5.6 Hz, 2H), 2.51 - 2.46 (m, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.80 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeCN (5 mL) 중 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산 (172 mg, 803 umol, 2 eq) 및 DIEA (155 mg, 1.21 mmol, 210 uL, 3 eq)의 용액에 MsCl (92.1 mg, 803 umol, 62.2 uL, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 상기 혼합물에 2-[(2S)-4-[2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 402 umol, 1 eq)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 10시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Boston Green ODS 150*30 5u; 이동상: [물 (0.225% FA)-ACN]; B%: 25% - 45%, 10분)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 45% - 75%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 474, 1.43 mg, 2.39 umol, 1% 수율, 96.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 580.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.26 - 4.89 (m, 1H), 4.60 - 4.34 (m, 4H), 4.33 - 4.16 (m, 3H), 4.14 - 3.96 (m, 1H), 3.95 - 3.80 (m, 1H), 3.78 - 3.50 (m, 2H), 3.50 - 3.28 (m, 2H), 3.27 - 3.07 (m, 3H), 3.06 - 2.82 (m, 3H), 2.80 - 2.64 (m, 2H), 2.51 (d, J=12.4 Hz, 3H), 2.38 - 2.24 (m, 1H), 2.14 - 2.00 (m, 1H), 1.97 - 1.85 (m, 2H).
실시예 475
2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. MeCN (3 mL) 중 듀테리오 2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노에이트 (68.8 mg, 904 umol, 3 eq) 및 DIEA (234 mg, 1.81 mmol, 315 uL, 6 eq)의 용액에 MsCl (69.1 mg, 603 umol, 46.7 uL, 2 eq)을 5℃에서 0.5시간 동안 첨가했다. 수득한 반응에 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 301 umol, 1 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 5℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 12시간 동안 80℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (0.5 mL)로 켄칭했다. 잔류 혼합물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 50%-80%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 475, 34.2 mg, 60.2 umol, 20% 수율, 97.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 555.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.28 - 8.16 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.63 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.16 (d, J=7.2 Hz, 1H), 5.28 - 4.94 (m, 1H), 4.41 (dd, J=5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 4.23 - 4.11 (m, 2H), 4.04 (br d, J=11.6 Hz, 2H), 3.73 - 3.25 (m, 3H), 3.22 - 2.74 (m, 7H), 2.69 (td, J=6.4, 13.2 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.83 - 1.77 (m, 3H).
실시예 476
2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: (E)-4- 브로모부트 -2- 에노일 클로라이드. (COCl)2 (14.5 g, 114 mmol, 10.0 mL, 18.9 eq) 및 DCM (10.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (1.0 g, 6.06 mmol, 1.0 eq)의 용액을 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (1.0 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 조 화합물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (중간체 73, 200 mg, 347 umol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4.0 M, 2.0 mL, 23.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH=7로 조정하고 EA (5.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (160 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 B: 2-[(2 S )-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (6.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (160 mg, 336 umol, 1.0 eq)의 용액에 Py (532 mg, 6.73 mmol, 543 uL, 20.0 eq) 및 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (246 mg, 1.35 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 MeOH (5.0 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 622.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 321 umol, 1.0 eq)의 용액에 K2CO3 (88.8 mg, 642 umol, 2.0 eq), KI (2.67 mg, 16.1 umol, 0.05 eq) 및 3-플루오로파이롤리딘 (403 mg, 3.21 mmol, 10.0 eq, HCl 염)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH=7로 조정하고 EA (10.0 mL× 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물(0.04%NH3H2O)-ACN];B%: 60%-84%,10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하고 그 다음 동결건조하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(2,3-디메틸페닐)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 476, 123 mg, 193 umol, 56% 수율 3 단계로, 99.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 631.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.16 - 7.07 (m, 1H), 7.02 - 6.92 (m, 3H), 6.59 - 6.41 (m, 1H), 5.31 - 5.10 (m, 1H), 5.09 - 4.46 (m, 1H), 4.38 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 - 3.83 (m, 6H), 3.80 - 3.45 (m, 1H), 3.42 - 3.24 (m, 3H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 3.14 - 3.03 (m, 3H), 3.02 - 2.83 (m, 4H), 2.82 - 2.62 (m, 4H), 2.54 - 2.49 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.32 - 2.26 (m, 6H), 2.25 - 2.17 (m, 1H), 2.16 - 2.09 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.78 (m, 4H).
실시예 477
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. ACN (3 mL) 중 듀테리오 2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노에이트 (56.6 mg, 744 umol, 3 eq) 및 DIEA (481 mg, 3.72 mmol, 648 uL, 15 eq)의 용액에 MsCl (56.8 mg, 496 umol, 38.4 uL, 2 eq)을 5℃에서 첨가하고, 혼합물을 5℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 상기 혼합물에 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 150 mg, 248 umol, 1 eq, 2 HCl)을 첨가하고, 수득한 혼합물을 5℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 80℃로 가열하고 80℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (0.5 mL)로 켄칭했다. 반응 혼합물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 50 % - 80 %,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2,3,3-트리듀테리오프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 477, 13.0 mg, 21.6 umol, 9 % 수율, 98.2 % 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 589.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 8.0, 13.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.21 - 4.01 (m, 3H), 3.96 - 3.79 (m, 2H), 3.60 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.44 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.32 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.53 (m, 4H), 2.48 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.29 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.87 - 1.71 (m, 3H).
실시예 478
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
2- 플루오로프로프 -2- 에노일 클로라이드. DCM (4 mL) 중 2-플루오로프로프-2-에노산 (400 mg, 4.44 mmol, 1 eq)의 용액에 (COCl)2 (846 mg, 6.66 mmol, 583 uL, 1.5 eq) 및 DMF (32.5 mg, 444 umol, 34.2 uL, 0.1 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 용매의 일부를 제거하고, DCM 중 잔류물을 수득했다. 화합물 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드 (400 mg, 조물질)을 황색 액체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 528 umol, 1 eq, HCl)의 용액에 DCM (5 mL) 중 DIEA (1.73 g, 13.4 mmol, 2.33 mL, 25.4 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드 (286 mg, 2.64 mmol, 5 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1 내지 10/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 55% - 85%, 12분)으로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150 * 30mm * 4um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 20% - 50%, 10.5분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 478, 24.1 mg, 36.7 umol, 7% 수율, 99.1% 순도, FA)을 갈색 고체로서 수득했다.
SFC 조건: "AD - 3S_3_5_40_3ML 칼럼: Chiralpak AD - 3 100 × 4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
1H NMR (400 MHz, 아세트산) δ = 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.30 (m, 2H), 5.58 - 5.25 (m, 2H), 5.17 - 4.59 (m, 4H), 4.57 - 4.28 (m, 3H), 4.24 - 3.78 (m, 4H), 3.67 - 3.13 (m, 7H), 3.08 (br d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.98 (br d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.83 - 2.61 (m, 1H), 2.45 - 2.29 (m, 1H), 2.24 - 2.08 (m, 3H).
실시예 479
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 에틸 ( E )-4- 플루오로부트 -2- 에노에이트. 아세토니트릴 (20.0 mL) 중 에틸 (E)-4-브로모부트-2-에노에이트 (2.00 g, 10.4 mmol, 1.43 mL, 1.00 eq) 및 AgF (3.94 g, 31.1 mmol, 674 uL, 3.00 eq)의 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고 THF (10.0 mL)로 세정하고, 그 다음 진공 하에서 농축하여 에틸 (E)-4-플루오로부트-2-에노에이트 (2.50 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ =7.04 - 6.89 (m, 1H), 6.12 (qd, J = 2.0, 16.0 Hz, 1H), 5.14 - 4.94 (m, 2H), 4.22 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 1.30 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
단계 B: ( E )-4- 플루오로부트 -2- 에노산. THF (1.00 mL) 및 H2O (1.00 mL) 중 에틸 (E)-4-플루오로부트-2-에노에이트 (0.10 g, 조물질) 및 NaOH (121 mg, 3.03 mmol)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. pH 값을 HCl (1N, 5.00 mL)로 1~3으로 조정하고, 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (0.02 g, 192 mmol, 2개의 단계 46%)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.37 - 7.31 (m, 1H), 7.15 - 7.01 (m, 1H), 6.15 (dd, J=1.6, 16.0 Hz, 1H), 5.22 - 4.96 (m, 2H).
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 아세토니트릴 (1.00 mL) 중 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (7.32 mg, 70.4 umol, 2 eq) 및 Py (8.35 mg, 106 umol, 8.52 uL, 3.00 eq)의 용액에 MsCl (8.06 mg, 70.4 umol, 5.45 uL, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.02 g, 35.2 umol, 1.00 eq, HCl)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 × 5.00 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 479, 3.01 mg, 4.82 umol, 14 % 수율, 98.9% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 618.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 7.09 - 6.91 (m, 1H), 6.59 (br d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.19 - 5.05 (m, 2H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.22 - 3.79 (m, 5H), 3.76 - 2.96 (m, 8H), 2.92 - 2.55 (m, 4H), 2.48 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.29 (br d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.06 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.83 - 1.71 (m, 3H).
실시예 480
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: ( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 클로라이드. DCM (2.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (930 mg, 5.64 mmol, 1.0 eq)의 용액에 (COCl)2 (2.90 g, 22.9 mmol, 2.0 mL, 4.05 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (650 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 ]-4-[7-(8- 클로로 - 1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 150 mg, 282 umol, 1.0 eq)의 용액에 DCM (1.0 mL) 중 Py (446 mg, 5.64 mmol, 455 uL, 20.0 eq) 및 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (207 mg, 1.13 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로- 1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질)을 갈색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 680.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-(3-플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (10.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 221 umol, 1.0 eq)의 용액에 K2CO3 (366 mg, 2.65 mmol, 12.0 eq), KI (1.83 mg, 11.0 umol, 0.05 eq) 및 3-플루오로파이롤리딘 (277 mg, 2.21 mmol, 10.0 eq, HCl)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH~7로 조정하고 EA (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04%NH3ㆍH2O)-ACN]; B%: 60%-84%, 10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하고 그 다음 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로피롤리딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 480, 9.67 mg, 14.0 umol, 6% 수율, 99.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 687.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.05 - 6.92 (m, 1H), 6.57 - 6.42 (m, 1H), 5.32 - 5.11 (m, 1H), 5.10 - 4.50 (m, 1H), 4.47 - 4.35 (m, 2H), 4.19 - 4.00 (m, 2H), 3.95 - 3.75 (m, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.47 - 3.28 (m, 3H), 3.24 - 3.05 (m, 4H), 3.04 - 2.86 (m, 4H), 2.85 - 2.71 (m, 2H), 2.70 - 2.50 (m, 3H), 2.47 - 2.45 (m, 3H), 2.32 - 2.15 (m, 2H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 1.87 - 1.67 (m, 4H).
실시예 481
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: ( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 클로라이드. DCM (5.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (1 g, 6.06 mmol, 1.0 eq)의 용액에 옥살릴 이염화물 (7.25 g, 57.1 mmol, 5.0 mL, 9.4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (850 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 A: 중간체 71, 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (4.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (310 mg, 414 umol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4.0 M, 4.0 mL, 39.0 eq)을 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (20.0 mL)로 켄칭하고, 그 다음 EA (3 × 40.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 NaCl 수용액 (100.0 mL)으로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 잔류물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (250 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 532.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (6.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 150 mg, 282 umol, 1.0 eq, 조물질)의 용액에 DCM (1.0 mL) 중 Py (446 mg, 5.6 mmol, 455 uL, 20.0 eq) 및 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (207 mg, 1.2 mmol, 4.0 eq, 조물질)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 K2CO3 (779 mg, 5.6 mmol, 20.0 eq), KI (4.6 mg, 28.2 umol, 0.1 eq) 및 3-플루오로아제티딘 (472 mg, 4.2 mmol, 15.0 eq, HCl)을 0℃에서 첨가했다. 그 다음 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; 이동상: [물 (10.0 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 55%-85%, 10분) 및 동결건조하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 481, 10.8 mg, 15.7 umol, 6% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 673.
SFC 조건: 100%.e.e.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.54 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.50-7.43 (m, 1 H), 7.35 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.26 - 7.21 (m, 1 H), 6.89 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 6.42 (d, J = 14.8 Hz, 1 H), 5.26-4.62 (m, 1 H), 5.11 (t, J = 5.2 Hz, 1 H), 4.80 - 4.37 (m, 2 H), 4.20 - 4.08 (m, 2 H), 3.92 (br d, J = 17.6 Hz, 1 H), 3.86 - 3.71 (m, 3 H), 3.60 (s, 1 H), 3.52 - 3.47 (m, 1 H), 3.45 - 3.33 (m, 1 H), 3.28 - 3.21 (m, 3 H), 3.16 - 3.11 (m, 3 H), 3.03 (dd, J = 8.4, 16.8 Hz, 1 H), 2.82 - 2.60 (m, 4 H), 2.49 (d, J = 2.8 Hz, 3 H), 2.37 - 2.25 (m, 1 H), 2.09 - 2.03 (m, 1 H), 1.86 - 1.83 (m, 1 H), 1.78 - 1.76 (m, 3 H).
실시예 482
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-[메틸(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
삽입: ( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일 클로라이드. (COCl)2 (10.2 g, 80.0 mmol, 7.0 mL, 22.0 eq) 및 DCM (7.0 mL) 중 (E)-4-브로모부트-2-에노산 (600 mg, 3.64 mmol, 1.0 eq)의 용액을 70℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (500 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 A: 2-[(2 S )-1-[( E )- 4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 188 umol, 1.0 eq) 및 피리딘 (119 mg, 1.50 mmol, 121 uL, 8.0 eq)의 용액에 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (138 mg, 752 umol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 2-[(2S)-1-[(E)- 4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (130 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 678, 680.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-[메틸(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (128 mg, 189 umol, 1.0 eq), K2CO3 (130 mg, 943 umol, 5.0 eq) 및 KI (9.39 mg, 56.6 umol, 0.30 eq)의 용액에 2,2,2-트리플루오로-N-메틸-에탄아민 (213 mg, 1.88 mmol, 10.0 eq)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0-25℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 수득된 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.04% NH3ㆍH2O)-ACN]; B%: 70%-100%, 10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-[메틸(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 482, 2.87 mg, 3.84 umol, 2% 수율, 95% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 711.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.95 -6.79 (m, 1H), 6.54 - 6.38 (m, 1H), 5.12 - 4.50 (m, 1H), 4.48 - 4.35 (m, 2H), 4.24 - 3.99 (m, 3H), 3.96 - 3.78 (m, 2H), 3.77 - 3.64 (m, 1H), 3.61 - 3.53 (m, 1H), 3.52 - 3.34 (m, 3H), 3.33 - 2.97 (m, 7H), 2.92 - 2.76 (m, 1H), 2.75 -2.65 (m, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.49 (br d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.89 - 1.67 (m, 3H).
실시예 483
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (2.00 mL) 중 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산 (129 mg, 564 umol, 1.50 eq) 및 DIEA (194 mg, 1.50 mmol, 262 uL, 4.00 eq)의 용액에 HATU (214 mg, 564 umol, 1.50 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.20 g, 376 umol, 1.00 eq)을 혼합물에 첨가했다. 25℃에서 12 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 에틸 아세테이트 (10.0 mL)로 희석하고, 염수 (3 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고, 포화 중탄산나트륨 (5.00 mL)로 pH > 7로 중화하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC 칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%, FA) - ACN]; B%: 10% - 40%, 10분으로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 483, 10.1 mg, 15.3 umol, 4.1 % 수율, 99.6% 순도, FA)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 614.
1H NMR (400MHz, 아세트산-d4) δ = 7.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.31 (m, 2H), 5.14 - 4.73 (m, 4H), 4.70 - 4.23 (m, 5H), 4.01 - 3.81 (m, 3H), 3.80 - 3.51 (m, 3H), 3.49 - 3.17 (m, 4H), 3.09 (m, 5H), 2.81 - 2.63 (m, 1H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.22 - 2.08 (m, 3H).
실시예 484
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4,4-디플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 4 ,4- 디플루오로 -3- 하이드록시 - 부타노에이트. 톨루엔 (150 mL) 중 에틸 4,4-디플루오로-3-옥소-부타노에이트 (5.00 g, 30.1 mmol, 1.00 eq)의 용액에 NaBH4 (1.20 g, 31.7 mmol, 1.05 eq)을 0℃에서 첨가했다. 25℃에서 4시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (50.0 mL)로 0℃에서 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 에틸 4,4-디플루오로-3-하이드록시-부타노에이트 (4.30 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 6.05 - 5.87 (m, 1H), 5.86 - 5.72 (m, 1H), 4.11 - 4.01 (m, 2H), 2.57 (dd, J = 4.0, 15.6 Hz, 1H), 2.38 (dd, J = 9.2, 15.6 Hz, 1H), 1.21 - 1.17 (m, 3H).
단계 2: 에틸 ( E )-4,4- 디플루오로부트 -2- 에노에이트. 디클로로메탄 (20.0 mL) 중 에틸 4,4-디플루오로-3-하이드록시-부타노에이트 (3.00 g, 조물질)의 용액에 TEA (1.81 g, 17.8 mmol, 2.48 mL,) 및 MsCl (3.68 g, 32.1 mmol, 2.49 mL)을 0℃에서 첨가했다. 4시간 동안 교반한 후, 상기 혼합물에 TEA (3.61 g, 35.68 mmol, 4.97 mL, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 25℃까지 가온시키고 12 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고, HCl (1N, 1 × 20.0 mL) 및 염수 (1 × 20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 에틸 (E)-4,4-디플루오로부트-2-에노에이트 (1.40 g, 9.33 mmol, 2개의 단계 44 % 수율)을 무색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 6.81 (m, 1H), 6.29 (dt, J = 2.8, 1.6 Hz, 1H), 6.23 (dd, J = 4.0, 55.2 Hz, 1H), 4.25 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 3: ( E )-4,4- 디플루오로부트 -2- 에노산. THF (5.00 mL) 및 H2O (5.00 mL) 중 에틸 (E)-4,4-디플루오로부트-2-에노에이트 (1.30 g, 8.66 mmol, 1.00 eq) 및 NaOH (1.39 g, 34.6 mmol, 4.00 eq)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 HCl (2N, 20.0 mL)로 pH = 1 ~ 3로 산성화하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 (E)-4,4-디플루오로부트-2-에노산 (0.35 g, 2.87 mmol, 33% 수율)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 6.92 (m, 1H), 6.32 (dtd, J = 0.8, 2.8, 16.8 Hz, 1H), 6.27 (dtd, J = 1.2, 54.8 Hz, 4.0, 1H).
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4,4-디플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. Py (3 mL) 중 (E)-4,4-디플루오로부트-2-에노산 (68.8 mg, 564 umol, 1.50 eq), EDCI (108 mg, 564 umol, 1.50 eq) 및 HOBt (50.8 mg, 376 umol, 1.00 eq)의 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 그 다음 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 0.20 g, 376 umol, 1.00 eq)을 혼합물에 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반하고 25℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (1 × 10.0 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.10 %)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (5.00 mL)으로 중화하고, 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 55% - 85%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4,4-디플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 484, 66.9 mg, 104 umol, 28% 수율, 98.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 636.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.88 - 6.71 (m, 2H), 6.45 - 6.12 (m, 1H), 5.17 - 4.59 (m, 1H), 4.55 - 4.41 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 4.21 - 3.69 (m, 5H), 3.64 - 3.32 (m, 2H), 3.31 - 2.97 (m, 5H), 2.96 - 2.52 (m, 4H), 2.47 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 3H).
실시예 485
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[2-(메톡시메틸)프로프-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 1 -(2-( 에톡시카보닐 )알릴)-1,4- 디아자바이사이클로[2.2.2]옥탄 -1- 이움 브로마이드. THF (5 mL) 중 에틸 2-(브로모메틸)프로프-2-에노에이트 (15 g, 77.7 mmol, 1 eq)에 DABCO (10.5 g, 93.6 mmol, 10.3 mL, 1.20 eq)을 첨가하고 수득한 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 침전물을 형성하고 질소 분위기 하에서 여과했다. 필터 케이크를 수집하여 1-(2-(에톡시카보닐)알릴)-1,4-디아자바이사이클로[2.2.2]옥탄-1-이움 브로마이드 (15 g, 49.6 mmol, 64% 수율)을 밝은 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 2: 에틸 2-( 메톡시메틸 ) 프로프 -2- 에노에이트. MeOH (150 mL) 중 1-(2-(에톡시카보닐)알릴)-1,4-디아자바이사이클로[2.2.2] 옥탄-1-이움 브로마이드 (15 g, 49.6 mmol, 1 eq) 및 TEA (10.5 g, 104 mmol, 14.5 mL, 2.09 eq)의 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 용매를 진공 하에서 증발시켰다 (25℃). 잔류물을 DCM (40 ml)에 용해시키고 그 다음 5% 수성 시트르산 용액 (1 × 40 mL)로 세정하고 포화 중탄산나트륨 수용액 (1 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하고 25℃에서 에틸 2-(메톡시메틸)프로프-2-에노에이트 (5.3 g, 36.8 mmol, 74% 수율)을 황색 액체로서 얻었고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 3: 2 -( 메톡시메틸 ) 프로프 -2- 에노산. THF (71 mL) 중 에틸 2-(메톡시메틸)프로프-2-에노에이트 (5.1 g, 35.4 mmol, 1 eq)의 용액에 H2O (71 mL) 중 NaOH (5.66 g, 142 mmol, 4 eq)의 용액을 5℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, THF를 진공 하에서 증발시켰다. 혼합물의 pH를 1 M HCl로 3으로 조정하고 EtOAc (3 × 70 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-(메톡시메틸)프로프-2-에노산 (3.4 g, 26.4 mmol, 75% 수율, 90% 순도)을 밝은 황색 액체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 6.45 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.98 (q, J = 1.6 Hz, 1H), 4.16 (t, J = 1.2 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H).
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[2-(메톡시메틸)프로프-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (8 mL) 중 2-(메톡시메틸)프로프-2-에노산 (175 mg, 1.50 mmol, 2 eq) 및 DIEA (389 mg, 3.01 mmol, 524 uL, 4 eq)의 용액에 HATU (429 mg, 1.13 mmol, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가했다. -40℃에서 10분 동안 교반한 후, 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 400 mg, 752 umol, 1 eq)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 20분 동안 교반하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 상기 혼합물에 물 (10 mL) 및 DCM (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 100/1 내지 40/1) 및 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[2-(메톡시메틸)프로프-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 485, 73.0 mg, 116 umol, 15% 수율, 98.9% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:630.
SFC 조건: 칼럼: Chiralpak AS-3 100Х4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J= 8 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 13.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.32 (br s, 1H), 5.19 - 4.58 (m, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.23 - 4.07 (m, 4H), 4.06 - 3.78 (m, 3H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.36 - 2.72 (m, 8H), 2.71 - 2.53 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.14 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 3H).
실시예 486
2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2- tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트. 둥근바닥 플라스크에서, 디옥산 (94.87 ml, 9.487 mmol) 중 tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5 g, 9.487 mmol)의 용액을 아르곤으로 살포하고 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.278 g, 28.46 mmol), Cs2CO3 (9.273 g, 28.46 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.8078 g, 0.9487 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 밤새 100℃에서 가열했다. 반응을 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 콤비 플래시 (2% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH) 상에서 정제하여 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.425 g, 8.508 mmol, 89.68 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 606.4 [M+H]+.
단계 B : 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (5.4 g, 8.915 mmol)을 디클로로메탄 (89.15 ml, 8.915 mmol)에 용해시키고 염산 (1,4-디옥산 중 4.0M 용액) (11.14 ml, 44.57 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 더 많은 DCM 및 1M NaOH로 희석하고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.364 g, 8.631 mmol, 96.82 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 506.3 [M+H]+.
단계 C : 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 둥근바닥 플라스크에서, 디옥산 (43.15 ml, 8.631 mmol) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.364 g, 8.631 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. 1-브로모-2,3-디메틸벤젠 (5.851 ml, 43.15 mmol), Cs2CO3 (14.06 g, 43.15 mmol), 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (0.7348 g, 0.8631 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 추가 5분 동안 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 100℃에서 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시켰다. 에틸 아세테이트를 첨가하고 반응 GF/F 종이를 통해 여과하고 진공에서 농축시켰다. 농축물을 2% NH4OH를 용출액으로서 갖는 DCM 중 0-15% MeOH를 사용하여 CombiFlash 상에서 정상 크로마토그래피를 통해 2회 정제했다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 수집하고 진공에서 농축시켜 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.411 g, 0.8641 mmol, 100.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 476.3 [M+H]+.
단계 D : 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (4205 μl, 0.420 mmol) 중 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (200 mg, 0.420 mmol), 4,4,4-트리플루오로크로톤산 (118 mg, 0.841 mmol), DIEA (367 μl, 2.10 mmol)의 용액에 HATU (240 mg, 0.631 mmol)을 첨가하고 수득한 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 염수로 세정하고 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축하고, 60:40 ACN:H2O에서 희석하고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb로 유리 염기화하고 유기물 DCM으로 추출했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 486, 28 mg, 0.0468 mmol, 11.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]+.
실시예 487
2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-(트리플루오로메틸)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-(트리플루오로메틸)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 실시예 486에 따라 제조했는데, 단계 D에서 4,4,4-트리플루오로크로톤산을 2-(트리플루오로메틸)프로펜산으로 대체했다. ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]+.
실시예 488
2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-(하이드록시메틸)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-1-(2-(하이드록시메틸)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을 실시예 486에 따라 제조했는데, 단계 D에서 4,4,4-트리플루오로크로톤산을 2-(하이드록시메틸)프로프-2-에노산으로 대체했다. ESI+APCI MS m/z 560.3 [M+H]+.
실시예 489
2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴: DCM (1 mL) 중 2-((S)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.1051 mmol)의 용액에 (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (24.41 mg, 0.2102 mmol), N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.03662 ml, 0.2102 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 PF6 (59.96 mg, 0.1577 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반했다. 물 (1 mL)을 그 다음 첨가하고 반응 혼합물을 5분 동안 교반했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)와 0.5M NaHCO3 (5 mL) 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 3% MeOH + 0.3% NH4OH 내지 4% MeOH + 0.4% NH4OH을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 표제 화합물 (실시예 489, 26 mg, 43%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 574.4 [M+H]+.
실시예 490
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 디옥산 (10 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.6 g, 1.2 mmol)의 용액에 1-브로모-8-클로로나프탈렌 (0.37 g, 1.5 mmol)을 첨가하고 반응을 15분 동안 Ar로 탈가스하고 이어서 Cs2CO3 (1.2 g, 3.6 mmol), Pd2(dba)3 (0.22 g, 0.24 mmol) 및 2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐 (0.11 g, 0.24 mmol)을 첨가하고 반응을 밤새 100℃로 가열했다. 반응을 그 다음 GFF 종이를 통해 여과하고 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 그 다음 1→10% (MeOH+2% NH4OH)/DCM을 사용하여 크로마토그래피를 수행하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.20 g, 0.30 mmol, 25 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 666.2 [M+H]+.
단계 B: 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: THF (30 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.17 g, 0.255 mmol)의 용액을 N2로 퍼지하고 이어서 Pd/C (0.0272 g, 0.255 mmol)을 첨가했다. 반응을 진공처리하고 H2를 3회 다시 충전하고 혼합물을 3일 동안 실온에서 교반했다. 반응을 N2로 다시 퍼지하고 이어서 셀라이트를 통해 여과하고 여과물을 진공에서 농축시켰다. 물질 다음 반응에서 조물질로서 사용했다. ESI+APCI MS m/z 532.2 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 : DCM (20 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.055 g, 0.10 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.040 g, 0.31 mmol), (E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노산 (0.017 g, 0.12 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (0.033 g, 0.10 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 30분 동안 교반했다. 그 다음 추가의 TEP3 및 산 (0.24 mmol)을 첨가하고, 그리고 반응 첨가 1시간. 유기물을 그 다음 1 N NaOH, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 정상 실리카 (1→ 10% (MeOH+2% NH4OH)/DCM) 상에서 크로마토그래피를 2회 수행하고, 이어서 0.1% TFA를 갖는 5→95% ACN/물을 첨가제로서 사용하는 길슨 역 prep HPLC로 정제했다. 순수한 분획을 염기성 물에 부었고 EtOAc로 추출했다. 유기물을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 490, 0.0094 g, 0.014 mmol, 14 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 654.2 [M+H]+.
실시예 491
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (2932 μl, 0.293 mmol)을 수용하고 있는 25 mL RBF에 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (150 mg, 0.293 mmol) 및 휘니그 염기 (102 μl, 0.586 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, (E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노산 (49.3 mg, 0.352 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (262 μl, 0.440 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0℃에서 교반했다. 반응을 염기성 물로 처리하고 수성층을 EtOAc (3x)으로 추출했다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시키고 ACN: H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5-->95% ACN/0.1% TFA로 용출하는 Gilson (역 prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 포화 bicarb와 DCM 사이에서 분할시켰다. 수성층을 DCM로 2회 더 추출했다. 유기층을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 491, 74.5 mg, 0.118 mmol, 40.1 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 634.3 [M+H]+.
실시예 492
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-(트리플루오로메틸)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-(트리플루오로메틸)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 (E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노산을 2-(트리플루오로메틸)아크릴산으로 대체하여 실시예 491에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 634.2 [M+H]+.
실시예 493
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-3-(피리딘-2-일)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메톡시 )-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-3-(피리딘-2-일)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 (E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노산을 3-(피리딘-2-일)아크릴산으로 대체하여 실시예 491에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 643.3 [M+H]+.
실시예 494
2-((S)-1-((E)-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-((E)-3-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 (E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노산을 (2E)-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)아크릴산으로 대체하여 실시예 491에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 646.4 [M+H]+.
실시예 495
2-((S)-1-((E)-4,4-디플루오로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-((E)-4,4- 디플루오로부트 -2- 에노일 )-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 (E)-4,4,4-트리플루오로부트-2-에노산을 4,4-디플루오로부트-2-에노산으로 대체하여 실시예 491에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 616.3 [M+H]+.
실시예 496
2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피페리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-3-(피리딘-3-일)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: DCM (10 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.12 g, 0.23 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.13 ml, 0.70 mmol), (E)-3-(피리딘-3-일)아크릴산 (0.070 g, 0.47 mmol) 및 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (0.30 g, 0.47 mmol)을 첨가하고 반응을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 1N NaOH에 부었고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 0.1% TFA를 갖는 5→95 ACN/물을 개질제로서 용출하는 Gilson 역 prep HPLC로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 1N NaOH에 부었고 수성층을 EtOAc (3X)으로 추출했다. 조합된 유기물을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-3-(피리딘-3-일)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 496, 0.040 g, 0.062 mmol, 27 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 643.3 [M+H]+.
실시예 497
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(3-옥소사이클로펜트-1-엔-1-카보닐)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(3-옥소사이클로펜트-1-엔-1-카보닐)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.05863 mmol) 및 3-옥소사이클로펜트-1-엔카복실산 (9.612 mg, 0.07622 mmol)을 DMF (400 uL)로 희석하고 이어서 DIEA (20.48 μl, 0.1173 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (52.35 μl, 0.08795 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(3-옥소사이클로펜트-1-엔-1-카보닐)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 497, 2.3 mg, 0.003711 mmol, 6.329 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 620.3 [M+H]+.
실시예 498
2-((S)-1-((E)-4-클로로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-4-클로로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.05863 mmol) 및 감마-클로로크로톤산 (10.60 mg, 0.08795 mmol)을 DMF (400 uL)로 희석하고 이어서 DIEA (20.48 μl, 0.1173 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (55.84 μl, 0.09381 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-((E)-4-클로로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 498, 4.5 mg, 0.007327 mmol, 12.50 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 614.3 [M+H]+.
실시예 499
(E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-N,N-디메틸-4-옥소부트-2-엔아미드
단계 A: 에틸 (E)-4-(디메틸아미노)-4- 옥소부트 -2- 에노에이트 : 푸마르산 모노에틸 에스테르 (442 mg, 3.07 mmol)을 DCM (5 mL)로 희석하고 이어서 옥살릴 클로라이드 (1533 μl, 3.07 mmol) 및 1 방울의 DMF를 첨가했다. 15분 동안 교반한 후, 디메틸아민 (4600 μl, 9.20 mmol)을 첨가하고 반응을 3시간 동안 교반했다. 반응을 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-70% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 에틸 (E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-에노에이트 (382 mg, 2.23 mmol, 72.8 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 172.1 [M+H]+.
단계 B: (E)-4-(디메틸아미노)-4- 옥소부트 -2- 에노산 : 에틸 (E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-에노에이트 (382 mg, 2.23 mmol)을 메탄올 (8 mL)로 희석하고 이어서 NaOH (4463 μl, 8.93 mmol)을 첨가했다. 4 시간 교반한 후, 반응을 2N HCl (4.5 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출했다. 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 (E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-에노산을 수득했다.
단계 C: (E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-N,N-디메틸-4-옥소부트-2-엔아미드: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.05863 mmol)을 DMF로 희석하고, 이어서 (E)-4-(디메틸아미노)-4-옥소부트-2-에노산 (10.07 mg, 0.07036 mmol), DIEA (20.48 μl, 0.1173 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (52.35 μl, 0.08795 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 (E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-N,N-디메틸-4-옥소부트-2-엔아미드 (실시예 499, 3.7 mg, 0.005810 mmol, 9.910 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 637.3 [M+H]+.
실시예 500
(E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔아미드
단계 A: 에틸 (E)-3- 시아노아크릴레이트 : 에틸 시스-(베타-시아노)아크릴레이트 (1.0 g, 7.99 mmol)을 ACN (30 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 3일 동안 가열 환류했다. 반응을 냉각되도록 하고, 그 다음 농축했다. 물질을 헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 에틸 (E)-3-시아노아크릴레이트 (300 mg, 2.40 mmol, 30.0 % 수율)을 수득했다.
단계 B: (E)-4-아미노-4- 옥소부트 -2- 에노산 : 에틸 (E)-3-시아노아크릴레이트 (300 mg, 2.40 mmol)을 HCl (3996 μl, 24.0 mmol)로 희석했다. 반응을 질소 하에 두었고 4시간 동안 100℃로 가열했다. 반응을 냉각되도록 하고, 그 다음 농축시켜 (E)-4-아미노-4-옥소부트-2-에노산 (214 mg, 1.86 mmol, 77.6 % 수율)을 수득했다.
단계 C: (E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔아미드: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20 mg, 0.039 mmol), HATU (30 mg, 0.078 mmol) 및 (E)-4-아미노-4-옥소부트-2-에노산 (9.0 mg, 0.078 mmol)을 DMF (400 uL)로 희석하고 이어서 DIEA (14 μl, 0.078 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 (E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔아미드 (실시예 500, 2.9 mg, 0.0048 mmol, 12 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 609.3 [M+H]+.
실시예 501
(E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔니트릴
단계 A: 에틸 (E)-3- 시아노아크릴레이트 : 에틸 시스-(베타-시아노)아크릴레이트 (1.0 g, 7.99 mmol)을 ACN (30 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 3일 동안 가열 환류했다. 반응을 냉각되도록 하고, 그 다음 농축했다. 물질을 헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 에틸 (E)-3-시아노아크릴레이트 (300 mg, 2.40 mmol, 30.0 % 수율)을 수득했다.
단계 B: (E)-3- 시아노아크릴산 : 에틸 (E)-3-시아노아크릴레이트 (10 mg, 0.080 mmol)을 HCl (133 μl, 0.80 mmol)로 희석하고, 질소 하에 두었고 100℃로 가열했다. 15분 동안 교반한 후 반응을 농축시켜 (E)-3-시아노아크릴산 (7.5 mg, 0.077 mmol, 97 % 수율)을 수득했다.
단계 C: (E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20 mg, 0.03909 mmol) 및 (E)-3-시아노아크릴산 (5.312 mg, 0.05472 mmol)을 DMF (400 uL)로 희석하고 이어서 DIEA (13.65 μl, 0.07817 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (34.90 μl, 0.05863 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 (E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔니트릴 (실시예 501, 3.5 mg, 0.005925 mmol, 15.16 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 591.3 [M+H]+.
실시예 502
(Z)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔니트릴
단계 A: (Z)-3- 시아노아크릴산 : 에틸 시스-(베타-시아노)아크릴레이트 (50 mg, 0.40 mmol)을 HCl (200 μl, 1.2 mmol)로 희석하고, 질소 하에 두었고 100℃로 가열했다. 1분 동안 교반한 후, 반응을 냉각시키고 농축시켜 (Z)-3-시아노아크릴산 (35 mg, 0.36 mmol, 90 % 수율)을 수득했다.
단계 B: (Z)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20 mg, 0.03909 mmol) 및 (Z)-3-시아노아크릴산 (6.071 mg, 0.06254 mmol)을 DMF (400 uL)로 희석하고 이어서 DIEA (13.65 μl, 0.07817 mmol) 및 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (39.56 μl, 0.06645 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 (Z)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔니트릴 (실시예 502, 2.1 mg, 0.003555 mmol, 9.095 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 591.3 [M+H]+.
실시예 503
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(디메틸아미노)-2-플루오로-부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: ( E )-4-[ tert - 부톡시카보닐(메틸)아미노 ]-2- 플루오로 - 부트 -2- 에노산. THF (40 mL) 중 에틸 2-디에톡시포스포릴-2-플루오로-아세테이트 (2 g, 8.26 mmol, 1.68 mL, 1 eq) 및 tert-부틸 N-메틸-N-(2-옥소에틸)카바메이트 (2.15 g, 12.4 mmol, 1.5 eq)의 용액에 NaH (661 mg, 16.5 mmol, 60% 순도, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (8 mL)로 켄칭하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 20ACN%-50ACN%,30min; 50%분)로 정제하여 (E)-4-[tert-부톡시카보닐(메틸)아미노]-2-플루오로-부트-2-에노산 (820 mg, 3.16 mmol, 38.3% 수율, 90% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 A: tert -부틸 N -[( E )-4-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-일]-3-플루오로-4-옥소-부트-2-에닐]- N -메틸-카바메이트. DCM (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 300 mg, 564 umol, 1 eq), (E)-4-[tert-부톡시카보닐(메틸)아미노]-2-플루오로-부트-2-에노산 (600 mg, 2.57 mmol, 4.56 eq) 및 DIEA (729 mg, 5.64 mmol, 982 uL, 10 eq)의 용액에 HATU (643 mg, 1.69 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (3 mL)로 켄칭하고 DCM (3 × 8 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역전된 플래시 크로마토그래피 (FA 조건: 물 (0.1% FA) 중 60 % MeCN)로 정제하여 tert-부틸 N-[(E)-4-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-일]-3-플루오로-4-옥소-부트-2-에닐]-N-메틸-카바메이트 (330 mg, 404 umol, 72% 수율, 91.5% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 747.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[( E )-2-플루오로-4-(메틸아미노)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 tert-부틸 N-[(E)-4-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-일]-3-플루오로-4-옥소-부트-2-에닐]-N-메틸-카바메이트 (300 mg, 401 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (915 mg, 8.03 mmol, 594 uL, 20 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 DCM (10 mL)으로 희석하고 포화 NaHCO3 (8 mL)로 염기성화했다. 혼합물을 DCM (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-2-플루오로-4-(메틸아미노)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (240 mg, 356 umol, 89% 수율, 95.9% 순도)을 갈색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 647.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-(디메틸아미노)-2-플루오로-부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-2-플루오로-4-(메틸아미노)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 185 umol, 1 eq) 및 파라포름알데하이드 (83.5 mg, 927 umol, 5 eq), HCOOH (26.7 mg, 556 umol, 3 eq)의 용액에 NaBH3CN (35.0 mg, 556 umol, 3 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (0.5 mL)로 켄칭하고 여과했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EA:MeOH:NH3ㆍH2O=50:1:0 내지 10:1:0.1), 그 다음 prep-HPLC(칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%:50%-100%,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(디메틸아미노)-2-플루오로-부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 503, 26.7 mg, 40.2 umol, 22% 수율, 99.5% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 661.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.68 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.54 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.37 (td, J=7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.26 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.19 - 7.08 (m, 1H), 5.81 - 5.60 (m, 1H), 5.04 - 4.41 (m, 1H), 4.40 - 4.25 (m, 2H), 4.16 - 3.91 (m, 3H), 3.88 - 3.71 (m, 2H), 3.66 - 3.46 (m, 2H), 3.36 (br d, J=10.8 Hz, 1H), 3.27 - 2.69 (m, 9H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.55 - 2.46 (m, 1H), 2.40 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 7H), 2.06 - 1.90 (m, 1H), 1.85 - 1.72 (m, 3H).
실시예 504
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)프로프-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)프로프-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (0.20 mL) 중 2-(트리플루오로메틸)프로프-2-에노산 (39.5 mg, 282 umol, 1.50 eq), 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 0.10 g, 188 umol, 1.00 eq) 및 DIEA (48.6 mg, 376 umol, 65.5 uL, 2.00 eq)의 용액에 HATU (107 mg, 282 umol, 1.50 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물로 희석하고 층을 분리했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1%)/아세토니트릴] 및 prep HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 56%-86%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[2-(트리플루오로메틸)프로프-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 504, 13.1 mg, 19.6 umol, 10.5% 수율, 97.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 654.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 50×4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 10.0 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 6.18 (br s, 1H), 5.86 (br s, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 2H), 4.33 - 4.10 (m, 2H), 4.04 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 2H), 3.66 - 3.54 (m, 1H), 3.50 - 3.33 (m, 1H), 3.29 - 3.07 (m, 4H), 3.04 - 2.72 (m, 4H), 2.63 - 2.50 (m, 4H), 2.45 - 2.32 (m, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 1H), 1.90 (br s, 3H).
실시예 505
2-((S)-1-((Z)-3-클로로아크릴로일)-4-(7-(2,3-디메틸페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-((Z)-3- 클로로아크릴로일 )-4-(7-(2,3- 디메틸페닐 )-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 부트-2-이노산을 (Z)-3-클로로아크릴산으로 대체하여 실시예 389 단계 J에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 564.3 [M+H]+.
실시예 506
2-((S)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (3909 μl, 0.39 mmol)을 수용하고 있는 25 mL RBF에 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (200 mg, 0.391 mmol) 및 트리에틸아민 (136 μl, 0.98 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (61.0 mg, 0.59 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (175 μl, 0.59 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 실온에서 18시간 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 EtOAc (3x 15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 물 (1x 10 mL)로 세정하고 농축했다. 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 5-18% MeOH)로 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 506, 89.3 mg, 0.15 mmol, 38 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]+.
실시예 507
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8 g, 15.63 mmol)을 DMF (78.17 ml, 15.63 mmol)로 희석하고, 질소 하에 두었고 0℃로 냉각시켰다. DIEA (6.827 ml, 39.09 mmol)을 첨가하고 이어서 2-플루오로아크릴산 (2.112 g, 23.45 mmol)을 첨가하고 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (9.307 ml, 15.63 mmol)을 적가했다. 반응을 0℃에서 6 시간 동안 교반하고 정치시켜 주위 온도로 가온시키면서 추가 10시간 동안 교반했다. 반응을 5% 중탄산나트륨 용액에 부었고 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 에틸 아세테이트를 물, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 (1% NH4OH을 첨가제로서 사용하는) 1-10% 메탄올/DCM로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 표제 화합물 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 507, 6.6 g, 11.31 mmol, 72.32 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]+.
실시예 508
2-((S)-1-(4-하이드록시부트-2-이노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-(4- 하이드록시부트 -2- 이노일 )-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 부트-2-이노산을 4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)부트-2-이노산으로 대체하여 실시예 458, 단계 D에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 594.3 [M+H]+.
실시예 509
2-((S)-1-((E)-4-(1H-피라졸-1-일)부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: (E)-4-(1H- 피라졸 -1-일) 부트 -2- 에노산. 아세토니트릴 (1 ml, 19.1 mmol) 중 4-브로모크로톤산 (100 mg, 0.606 mmol) 및 피라졸 (37.1 mg, 0.546 mmol)의 용액을 교반하면서 폐쇄 바이알에서 48시간 동안 60℃로 가열했다. 수득한 밝은-녹색 용액을 물 (5 mL)과 EtOAc (15 mL) 사이에서 분할시키고, 유기물을 분리하고, 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 물질을 2 내지 5% MeOH/DCM + 0.2% TFA 중 실리카겔상 크로마토그래피를 수행했다. 수득한 고체를 최소 양의 6M HCl에 용해시키고 느린 N2 흐름 하에서 증발시켰다. 이러한 물질을 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다.
단계 B: 2-((S)-1-((E)-4-(1H-피라졸-1-일)부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (42.37 mg, 0.08281 mmol), (E)-4-(1H-피라졸-1-일)부트-2-에노산 (12.6 mg, 0.08281 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL, 12.79 mmol)의 교반 혼합물을 교반하면서 얼음-염조 상에서 냉각시키고, 트리에틸아민 (0.03463 mL, 0.2484 mmol)을 한번에 첨가하고, 이어서 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드, EtOAc 중 50% (0.07395 mL, 0.1242 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 5분에 걸쳐 r.t.로 가온되도록 하고 r.t.에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 0.5M Na2CO3 (5 mL)과 EtOAc (10 mL) 사이에서 분할시키고, 유기물을 분리하고, 유기층을 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 생성물을 DCM 중 5%MeOH +0.5% NH4OH를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 무색 고체 (실시예 509, 11.46 mg, 23%)로서 수득했다. ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]+.
실시예 510
2-((S)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: (E)-4- 하이드록시부트 -2- 에노산. 물 (48 mL) 중 4-브로모크로톤산 (4824 mg, 29.24 mmol)의 교반 현탁액에 수산화칼륨 (4.921 g, 87.72 mmol)의 2M 용액을 적가하고 수득한 용액을 5분 동안 가열 환류했다. 반응 혼합물을 N2 스트림 하에 두어 냉각시키고 농축했다. 잔류물을 빙욕 상에서 냉각시키고, 4M H2SO4로 pH 1-2로 산성화하고, 수득한 현탁액을 절반까지 진공에서 증발시키고 그 다음 EtOAc (3*60 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 물질을 2 내지 5% MeOH +0.2% TFA를 사용하는 크로마토그래피로 정제하여 상기 표적 산을 무색 결정 (2.165 g, 73%)으로서 수득했다.
단계 B: 2-((S)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (100 mg, 0.1954 mmol), (2E)-4-하이드록시부트-2-에노산 (39.90 mg, 0.3909 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.06809 ml, 0.3909 mmol)의 교반 용액에, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (111.5 mg, 0.2932 mmol)을 한번에 첨가하고 반응 혼합물을 r.t에서 4시간 동안 교반했다. 물 (1 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 5분 동안 교반하고 EtOAc (10 mL)과 포화 NaHCO3 (5 mL) 사이에서 분할시켰다. 유기층을 분리하고, NaHCO3, 염수 (5 mL 각각)으로 세정하고, K2CO3 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을, 5% MeOH +0.5% NH4OH를 갖는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행했다. 표제 화합물을 무색 고체 (실시예 510, 29 mg, 25%)로서 수득했다. ESI+APCI MS m/z 596.3 [M+H]+.
실시예 511
2-((S)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (250 mg, 0.4886 mmol), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (85.10 mg, 0.7329 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL, 25.58 mmol)의 교반 혼합물을 얼음-염조 상에서 냉각시키고 트리에틸아민 (0.2043 mL, 1.466 mmol)을 한번에 첨가하고, 이어서 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드, EtOAc 중 50% (0.4363 mL, 0.7329 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 5분에 걸쳐 r.t.로 가온되도록 하고, r.t.에서 2시간 동안 교반했다. 수득한 용액을 0.5M Na2CO3 (10 mL)과 EtOAc (30 mL) 사이에서 분할시키고, 유기층을 분리하고, 물 및 염수(10 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 물질을 DCM 중 5% MeOH +0.5% NH4OH를 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제했다. 물질을 역상 크로마토그래피, Gilson, 25 내지 75% MeCN/H2O + 0.1% TFA로 추가로 정제했다. 표적 분획을 과잉의 2M Na2CO3로 염기성화하고 DCM (3*50 mL)로 추출했다. 조합된 유기 추출물을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 표제 화합물을 밝은-황색 고체 (실시예 511, 123 mg, 41%)로서 수득했다. ESI+APCI MS m/z 610.3 [M+H]+.
실시예 512
2-[(2S)-1-(2-메톡시프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 메틸 2,2- 디메톡시프로파노에이트. 메탄올 (10.0 mL) 중 에틸 2-옥소프로파노에이트 (4.00 g, 34.5 mmol, 3.81 mL, 1.00 eq) 및 트리메톡시메탄 (4.75 g, 44.8 mmol, 4.91 mL, 1.30 eq)의 용액에 H2SO4 (33.8 mg, 344 umol, 18.4 uL, 0.01 eq)을 첨가했다. 65℃에서 4시간 동안 교반한 후, pH 값을 KOH (20.0 mL 물 중 120 mg)로 > 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 60℃에서 오일 펌프 하에서 증류시켜 메틸 2,2-디메톡시프로파노에이트 (4.00 g, 27.0 mmol, 78% 수율)을 무색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.81 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 1.52 (s, 3H).
단계 B: 메틸 2- 메톡시프로프 -2- 에노에이트. DMF (20.0 mL) 중 메틸 2,2-디메톡시프로파노에이트 (2.00 g, 13.5 mmol, 1.00 eq)의 용액에 P2O5 (1.05 g, 7.42 mmol, 458 uL, 0.55 eq)을 나누어서 첨가했다. 1시간 동안 100℃로 가열한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (20.0 mL)로 희석하고, 이소프로필 에테르 (3 × 30.0 mL)로 추출하고, 염수 (3 × 40.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 오일 펌프 하에서 증류시켜 메틸 2-메톡시프로프-2-에노에이트 (0.65 g, 5.60 mmol, 41% 수율)을 무색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 C: 2- 메톡시프로프 -2- 에노산. H2O (5.00 mL) 및 THF (5.00 mL) 중 메틸 2-메톡시프로프-2-에노에이트 (0.60 g, 5.17 mmol, 1.00 eq) 및 NaOH (827 mg, 20.7 mmol, 4.00 eq)의 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 농축 HCl (10.0 mL)로 pH < 3로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-메톡시프로프-2-에노산 (0.40 g, 1.96 mmol, 38% 수율, 50% 순도)을 핑크색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.63 (br s, 1H), 5.52 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H).
단계 D: 2-[(2 S )-1-(2- 메톡시프로프 -2- 에노일 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (5.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.14 g, 274 umol, 1.00 eq), 2-메톡시프로프-2-에노산 (112 mg, 1.09 mmol, 4.00 eq) 및 DIEA (141 mg, 1.09 mmol, 191 uL, 4.00eq)의 용액에 HATU (208 mg, 547umol, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (3.00 mL)로 희석했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (FA, 0.10%)/아세토니트릴] 및 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 60% - 90%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-메톡시프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 512, 10.27 mg, 17.22 umol, 6.3% 수율, 99.9% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 596.
SFC 조건: "IC-3S_3_40_3ML 칼럼: Chiralpak IC-3 100Х4.6mm I.D., 3 um, 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220 nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.05 - 4.61 (m, 1H), 4.48 (br s, 1H), 4.37 (td, J = 4.4, 10.0 Hz, 1H), 4.30 - 3.98 (m, 4H), 3.96 - 3.74 (m, 2H), 3.69 (br s, 3H), 3.59 - 3.28 (m, 2H), 3.27 - 2.93 (m, 6H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.51 (m, 4H), 2.47 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.89 - 1.74 (m, 3H).
실시예 513
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 에틸 ( E )-4- 하이드록시부트 -2- 에노에이트. THF (6.0 mL) 중 (E)-4-에톡시-4-옥소-부트-2-에노산 (1.0 g, 7.29 mmol, 1.0 eq)의 용액에 THF (8.0 mL) 중 BH3-Me2S (10.0 M, 692 uL, 0.95 eq)의 용액을 1 시간에 걸쳐 -10℃에서 적가했다. 반응 혼합물을 25℃로 서서히 가온시키고 17시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (30.0 mL)의 첨가로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (30.0 mLХ3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30.0 mLХ2)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 화합물 에틸 (E)-4-하이드록시부트-2-에노에이트 (900 mg, 조물질)을 무색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 2: ( E )-4- 트리틸옥시부트 -2- 에노에이트. DCM (5.0 mL) 중 에틸 (E)-4-하이드록시부트-2-에노에이트 (900 mg, 조물질), [클로로(디페닐)메틸]벤젠 (2.89 g, 10.4 mmol), DMAP (84.5 mg, 692 umol), TEA (1.4 g, 13.8 mmol, 1.9 mL)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)의 첨가로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (10.0 mLХ3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20:1 내지 15:1)로 정제했다. 화합물 에틸 (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노에이트 (340 mg, 913 umol, 13% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.38 - 7.35 (m, 6 H), 7.26 - 7.22 (m, 6 H), 7.18 - 7.15 (m, 3 H), 6.88 (dt, J = 15.6, 3.6 Hz, 1 H), 6.29 (dt, J = 15.6, 2.2 Hz, 1 H), 4.16 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.72 (dd, J = 2.4, 2.0 Hz, 2 H), 1.25 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
단계 3: (E)-4- 트리틸옥시부트 -2- 에노산. MeOH (1.0 mL) 중 에틸 (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노에이트 (170 mg, 456 umol, 1.0 eq)의 용액에 H2O (0.5 mL) 중 NaOH (54.5 mg, 1.37 mmol, 3.0 eq)의 용액을 첨가하고 그 다음 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 pH = 5까지 0℃에서 1M HCl의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (8.0 mLХ3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3:1 내지 1:1)로 정제했다. 화합물 (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노산 (113 mg, 328 umol, 72% 수율)을 백색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.38 - 7.36 (m, 6 H), 7.26 - 7.24 (m, 5 H), 7.20 - 7.16 (m, 4 H), 7.0 (dt, J = 15.6, 3.6 Hz, 1 H), 6.32 (dt, J = 15.6, 2.0 Hz, 1 H), 3.76 (dd, J = 3.2, 2.4 Hz, 2 H).
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (중간체 71, 60.0 mg, 113 umol, 1.0 eq), (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노산 (77.8 mg, 226 umol, 2.0 eq) 및 DIEA (73.0 mg, 564 umol, 98 uL, 5.0 eq)의 용액에 HATU (64 mg, 169 umol, 1.5 eq)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 H2O (8.0 mL)의 첨가로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (10.0 mL×3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득하고, 조 생성물을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 858.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-하이드록시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질)의 용액에 TFA (1.0 ml, 13.5 mmol)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 pH = 8까지 0℃에서 NaHCO3 수용액의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (10.0 mL×3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; 이동상: [물 (0.04% NH3H2O + 10 mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 48%-72%, 10min.)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 513, 8.21 mg, 13.3 umol, 7.6% 수율, 99.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
SFC 조건: 100% e.e.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.70-7.33 (m, 1 H), 7.49 (dd, J = 6.8, 0.8 Hz, 1 H), 7.37 (dt, J = 11.98, 7.82 Hz, 1 H), 7.26 (t, J = 11.8 Hz, 1 H), 7.19 - 7.11 (m, 1 H), 6.99 (dt, J = 14.8, 3.4 Hz, 1 H), 6.56 (br s, 1 H), 5.02-4.57 (m, 1 H), 4.39-4.29 (m, 4 H), 4.12-4.06 (m, 1 H), 4.03-3.99 (m, 2 H), 3.85-3.72 (m, 2 H), 3.67-3.36 (m, 3 H), 3.24-3.09 (m, 2 H), 3.03-2.89 (m, 3 H), 2.73 (br s, 1 H), 2.63-2.61 (m, 1 H), 2.50 (br s, 1 H), 2.41 (s, 3 H), 2.25-2.19 (m, 1 H), 2.03-1.92 (m, 1 H), 1.70-1.60 (m, 3 H).
실시예 514
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-메톡시프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: 메틸 2,2- 디메톡시프로파노에이트. 메탄올 (10.0 mL) 중 에틸 2-옥소프로파노에이트 (4.00 g, 34.5 mmol, 3.81 mL, 1.00 eq) 및 트리메톡시메탄 (4.75 g, 44.8 mmol, 4.91 mL, 1.30 eq)의 용액에 H2SO4 (33.8 mg, 344 umol, 18.4 uL, 0.01 eq)을 첨가했다. 65℃에서 4시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을, pH 값을 KOH 수성물 (20.0 mL 물 중 120 mg)로 > 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (1 × 30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 60℃에서 진공 하에서 증류시켜 메틸 2,2-디메톡시프로파노에이트 (4.00 g, 27.0 mmol, 78% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 3.81 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 1.52 (s, 3H).
단계 2: 메틸 2- 메톡시프로프 -2- 에노에이트. DMF (20.0 mL) 중 메틸 2,2-디메톡시프로파노에이트 (2.00 g, 13.5 mmol, 1.00 eq)의 용액에 P2O5 (1.05 g, 7.42 mmol, 458 uL, 0.55 eq)을 나누어서 첨가했다. 100℃에서 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 포화 중탄산나트륨 (20.0 mL)로 희석하고, 이소프로필 에테르 (3 × 30.0 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (3 × 40.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 진공 하에서 증류시켜 메틸 2-메톡시프로프-2-에노에이트 (0.65 g, 5.60 mmol, 41% 수율)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 5.36 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.66 (s, 3H).
단계 3: 2 - 메톡시프로프 -2- 에노산. H2O (5.00 mL) 및 THF (5.00 mL) 중 메틸 2-메톡시프로프-2-에노에이트 (0.60 g, 5.17 mmol, 1.00 eq) 및 NaOH (827 mg, 20.7 mmol, 4.00 eq)의 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 농축 HCl (10.0 mL)로 pH < 3로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-메톡시프로프-2-에노산 (0.40 g, 1.96 mmol, 38% 수율, 50% 순도)을 핑크색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.63 (br s, 1H), 5.52 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H).
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-메톡시프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (5.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (0.20 g, 376 umol, 1.00 eq), 2-메톡시프로프-2-에노산 (153 mg, 1.50 mmol, 4.00 eq) 및 DIEA (194 mg, 1.50 mmol, 262 uL, 4.00 eq)의 용액에 HATU (286 mg, 752 umol, 2.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응을 역상 플래시 [물 (FA, 0.1%)/아세토니트릴], prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물(0.225% FA) - ACN]; B%: 25% - 45%, 7.8분) 및 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 55% - 79%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-메톡시프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 514, 30.1 mg, 48.9 umol, 13% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
SFC 조건: "AS-3_ MeOH (DEA)_5_40_3mL-35T 칼럼: Chiralpak AS-3 50Х4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.44 (td, J = 7.6, 13.6 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.07 - 4.63 (m, 1H), 4.57 - 4.29 (m, 4H), 4.21 - 3.96 (m, 3H), 3.95 - 3.77 (m, 2H), 3.69 (br s, 3H), 3.59 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.51 - 3.32 (m, 1H), 3.30 - 3.02 (m, 5H), 2.89 - 2.50 (m, 4H), 2.47 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.89 - 1.72 (m, 3H).
실시예 515
2-[(2S)-1-[(E)-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (4.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 293 umol, 1.0 eq) 및 피리딘 (186 mg, 2.35 mmol, 189 uL, 8.0 eq)의 용액에 (E)-4-브로모but -2-에노일 클로라이드 (215 mg, 1.17 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축시켜 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 658.
단계 B: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-(3- 플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 아세토니트릴 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[7-(8- 메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 228 umol, 1.0 eq) 및 K2CO3 (315 mg, 2.28 mmol, 10.0 eq)의 용액에 3-플루오로아제티딘 (152 mg, 1.37 mmol, 6.0 eq, HCl)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (5.0 mL)에 첨가하고 에틸 아세테이트 (5.0 mL × 4)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 60%-90%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-(3- 플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 515, 45.0 mg, 66 umol, 29% 수율, 96% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 653.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (dd, J = 7.6, 15.2 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 6.92 -6.82 (m, 1H), 6.52 - 6.31 (m, 1H), 5.28 - 5.08 (m, 1H), 5.07 - 4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.32 - 4.01 (m, 4H), 4.01 - 3.79 (m, 2H), 3.79 - 3.56 (m, 3H), 3.55 - 3.37 (m, 2H), 3.36 - 3.31 (m, 2H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.23 - 3.18 (m, 2H), 3.17 - 3.15 (m, 1H), 3.14 - 3.06 (m, 2H), 3.05 - 2.95 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.75 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.67 (m, 3H).
실시예 516
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 4-[(3 S )-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (100 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (5.5 g, 10.4 mmol, 1 eq), [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (2.40 g, 20.9 mmol, 2.25 mL, 2 eq), Pd2(dba)3 (1.91 g, 2.09 mmol, 0.2 eq), RuPhos (1.95 g, 4.17 mmol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (8.50 g, 26.1 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (50 mL)로 희석했다. 그 다음 혼합물을 1 M HCl 수용액으로 pH ~ 4로 산성화했다. 수성상을 분리하고 포화 Na2CO3 수용액으로 pH ~ 8로 염기성화하고, 그 다음 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (4 g, 5.55 mmol, 53% 수율, 84% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.31 (m, 5H), 5.23 (s, 2H), 4.74 - 4.49 (m, 2H), 4.43 - 4.27 (m, 2H), 4.21 - 3.70 (m, 5H), 3.42 - 3.17 (m, 3H), 3.09 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (td, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.74 - 2.54 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.49 (s, 9H).
단계 B: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (20 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.7 g, 6.11 mmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 22.9 mL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 액체를 경사분리하고 고체를 수집했다. 고형 잔류물을 물 (50 mL) 및 디클로로메탄 (100 mL)로 희석하고, 그 다음 혼합물을 포화 Na2CO3 수용액으로 pH ~ 8로 염기성화하고 디클로로메탄 (100 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50m L)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.6 g, 4.89 mmol, 80% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 다음 단계에서 정제없이 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
단계 C: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (50 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2.3 g, 4.55 mmol, 1 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (중간체 69,1.31 g, 5.91 mmol, 1.3 eq), Cs2CO3 (3.71 g, 11.4 mmol, 2.5 eq), Pd2(dba)3 (833 mg, 909 umol, 0.2 eq) 및 Xantphos (1.05 g, 1.82 mmol, 0.4 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (200 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/ 메탄올 = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.6 g, 2.48 mmol, 54% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (20.0 mL) 및 NH3 (MeOH 중 20% w/w, 7 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.60 g, 2.48 mmol, 1.00 eq)의 혼합물을 H2 (4.99 mg, 2.48 mmol, 1.00 eq, 15 Psi) 하에서 25℃에서 3시간 동안 촉매로서 Pd/C (100 mg, 2.48 mmol, 10% 순도, 1.00 eq)로 수소첨가했다. 촉매를 셀라이트의 패드를 통해 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.20 g, 2.35 mmol, 95% 수율)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 E: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2 -[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (3.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (140 mg, 274 umol, 1.00 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (73.9 mg, 821 umol, 3.00 eq)의 혼합물에 DIEA (212 mg, 1.64 mmol, 286 uL, 6.00 eq), HATU (312 mg, 821 umol, 3.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (2 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (1 × 10.0 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.04% NH3H2O + 10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 55% - 85%, 10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2 -[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 516, 48.7 mg, 82.1 umol, 30% 수율, 98.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
SFC 조건: "칼럼: Chiralcel OJ-3 50 × 4.6 mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3 mL/분, 파장: 220 nm".
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.22 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 4.10 - 4.02 (m, 1H), 3.89 (br d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.27 - 3.15 (m, 2H), 3.14 - 3.04 (m, 2H), 3.03 - 2.90 (m, 4H), 2.90 - 2.73 (m, 2H), 2.72 - 2.56 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H).
실시예 517
2-((S)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 234 umol, 1 eq), TEA (142 mg, 1.41 mmol, 195 uL, 6 eq) 및 (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노산 (96.9 mg, 281 umol, 1.2 eq)의 용액에 T3P (448 mg, 703 umol, 418 uL, EtOAc 중 50% 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 200/1 내지 10/1)로 정제했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90 mg, 103 umol, 44% 수율, 96% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 838.
단계 B: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-하이드록시부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (200 uL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80 mg, 95.5 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (218 mg, 1.91 mmol, 141 uL, 20 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 NaHCO3 수용액 (2 mL)로 pH ~ 8로 염기성화했다. 혼합물을 디클로로메탄 (5 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 12분)로 정제했다. 혼합물을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 517, 10.2 mg, 16.8 umol, 18% 수율, 98.5% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 596.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OD-3 50 × 4.6mm I.D., 3um, 이동상: CO2 중 40% 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.06 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 5.25 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 3H), 4.30 - 3.95 (m, 4H), 3.93 - 3.82 (m, 1H), 3.81 - 3.61 (m, 1H), 3.59 - 3.39 (m, 2H), 3.30 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.53 (m, 4H), 2.47 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.34 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.82 (m, 3H).
실시예 518
2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: O1- tert -부틸 O2- 메틸 ( 2 R ,4 R )-4- 플루오로파이롤리딘 -1,2- 디카복실레이트. DMF (2.0 mL) 중 (2R,4R)-1-tert-부톡시카보닐-4-플루오로- 파이롤리딘-2-카복실산 (300 mg, 1.29 mmol, 1.0 eq) 및 K2CO3 (533 mg, 3.86 mmol, 3.0 eq)의 용액에 MeI (4.80 g, 33.8 mmol, 2.11 mL, 26.3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (5.0 mL)에 첨가하고 에틸 아세테이트 (10.0 ml × 2)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트=10:1-1:1)로 정제하여 생성물 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2R,4R)-4-플루오로파이롤리딘-1,2- 디카복실레이트 (300 mg, 1.21 mmol, 94% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 5.30 - 5.10 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 3.94 - 3.76 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.72 - 3.55 (m, 1H), 2.54 - 2.23 (m, 2H), 1.52 - 1.40 (m, 9H).
단계 2: [( 2 R ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올 THF (3.0 mL) 중 O1-tert-부틸 O2- 메틸 ( 2 R ,4 R )-4- 플루오로파이롤리딘 -1,2- 디카복실레이트 (300 mg, 1.21 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (138 mg, 3.64 mmol, 3.0 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 혼합물을 이 온도에서 1시간 동안 교반하고, 그 다음 70℃로 가열하고 70℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (0.30 mL)로 켄칭하고, 그 다음 여과했다. 모액을 수집하고 진공 하에서 농축하여 생성물 [(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (130 mg, 976 umol, 80% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 5.18 - 4.98 (m, 1H), 3.76 - 3.70 (m, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.38 - 3.28 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.42 - 2.37 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.34 - 2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 1H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2- [[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.0 mL) 중 [(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메탄올 (103 mg, 773 umol, 2.0 eq) 및 t-BuONa (55.8 mg, 580 umol, 1.50 eq)의 용액에 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 387 umol, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 물 (10.0 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (10.0 ml × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC (C18, 물 중 0.1 % FA, 0 - 60 % MeCN)로 정제하여 생성물 벤질(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2- [[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (210 mg, 316 umol, 82% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:664.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 7H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 5.24 - 5.02 (m, 3H), 4.73 - 4.61 (m, 1H), 4.53 - 4.42 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.11 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.81 (m, 1H), 3.81 - 3.67 (m, 1H), 3.58 - 3.47 (m, 1H), 3.46 - 3.29 (m, 2H), 3.24 - 3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.96 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.82 - 2.71 (m, 2H), 2.70 - 2.51 (m, 2H), 2.50 - 2.47 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 R ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(8- 메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (4.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R,4R)-4- 플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 301 umol, 1.0 eq) 및 NH3ㆍMeOH (2.0 mL, 20% 순도)의 용액에 Pd/C (80 mg, 10% 순도)을 첨가했다. 혼합물을 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 H2 분위기 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과했다. 모액을 진공 하에서 농축하여 생성물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8- 메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (140 mg, 264 umol, 88% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. 생성물을 다음 단계를 위해 직접적으로 추가 정제없이 사용했다. LCMS [ESI, M+1]:664.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2- [[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 226 umol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2- 에노산 (61.2 mg, 680 umol, 3.0 eq) 및 DIEA (176 mg, 1.36 mmol, 238 uL, 6.0 eq)의 용액에 HATU (258.44 mg, 679.69 umol, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (5.0 mL)에 첨가하고 에틸 아세테이트 (5.0 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2- [[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 518, 37.9 mg, 60.1 umol, 27% 수율, 96% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 602.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.30 - 5.22 (m, 1H), 5.21 - 5.03 (m, 1H), 4.97 - 4.68 (m, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.29 - 4.20 (m, 2H), 4.18 - 4.03 (m, 2H), 3.95 - 3.68 (m, 2H), 3.60 - 3.41 (m, 2H), 3.39 - 3.30 (m, 1H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 3.15 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.54 (m, 4H), 2.53 - 2.46 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H).
실시예 519
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 1: O 1- tert -부틸 O 2- 메틸 ( 2 R ,4 R )-4- 메톡시파이롤리딘 -1,2- 디카복실레이트. MeCN (42 mL) 중 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2R,4R)-4-하이드록시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (2.1 g, 8.56 mmol, 1 eq)의 용액에 Ag2O (5.95 g, 25.7 mmol, 3 eq) 및 CH3I (7.75 g, 54.6 mmol, 3.40 mL, 6.38 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 33 ℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 8/1 내지 5/1)로 정제하여 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2R,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.88 g, 6.89 mmol, 80 % 수율, 95.0 % 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 4.45 - 4.26 (m, 1H), 3.96 - 3.89 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.68 - 3.55 (m, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.38 - 2.17 (m, 2H), 1.51 - 1.37 (m, 9H).
단계 2: [( 2 R ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (60 mL) 중 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2R,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (2.98 g, 11.5 mmol, 1 eq)의 용액에 LiAlH4 (872 mg, 23.0 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 그 다음 반응 혼합물을 80℃로 가열하고 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 포화 Na2SO4 수성물 (3 mL)로 켄칭하고, 그 다음 여과하고 필터 케이크를 THF (3 × 20 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 [(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (1.53 g, 10.0 mmol, 87 % 수율, 95.0 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 3.82 - 3.76 (m, 1H), 3.69 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 1.6, 10.8 Hz, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.18 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.62 (br s, 1H), 2.42 (tdd, J = 2.8, 6.4, 9.2 Hz, 1H), 2.38 - 2.33 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (ddd, J = 6.8, 8.8, 14.0 Hz, 1H), 1.92 (tdd, J = 1.6, 6.8, 14.0 Hz, 1H).
단계 A: ( 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (40 mL) 중 [(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (1.37 g, 9.42 mmol, 2.8 eq)의 용액에 t-BuONa (970 mg, 10.1 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2 g, 3.36 mmol, 1 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (20 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 57 %)로 정제하여 (벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1.8 g, 2.53 mmol, 75 % 수율, 95.0 % 순도))을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 676.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.67 (br s, 1H), 4.45 (br dd, J = 4.4, 10.0 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.96 - 3.65 (m, 3H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.29 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 3.25 - 3.06 (m, 4H), 3.00 (dt, J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.81 - 2.55 (m, 4H), 2.45 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.88 - 1.68 (m, 2H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (40 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (2 g, 2.96 mmol, 1 eq) 및 NH3ㆍMeOH (20 mL, 20 % 순도)의 용액에 Pd/C (1 g, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.29 g, 2.26 mmol, 76 % 수율, 95 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 542.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (3 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 277 umol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (74.8 mg, 831 umol, 3 eq) 및 TEA (336 mg, 1.66 mmol, 462 uL, 50 % 순도, 6 eq)의 용액에 T3P (264 mg, 831 umol, 247 uL, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (4 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (3 × 8 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1 % FA) = 32 %)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-85%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 519, 59.5 mg, 97.0 umol, 35 % 수율, 100 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 614.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.50 - 4.41 (m, 1H), 4.30 - 3.99 (m, 4H), 3.96 - 3.71 (m, 3H), 3.59 - 3.40 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.25 - 3.15 (m, 3H), 3.14 - 2.94 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.73 - 2.55 (m, 2H), 2.45 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.81 (br dd, J = 7.2, 14.4 Hz, 1H).
실시예 520
2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4- [2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (2.0 mL) 중 [(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (609.98 mg, 4.04 mmol, 3.0 eq) 및 t-BuONa (388 mg, 4.04 mmol, 3.0 eq)의 용액에 톨루엔 (4.0 mL) 중 벤질(2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.35 mmol, 1.0 eq)의 용액을 0℃에서 적가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (15.0 mL)로 세정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (50.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 용매를 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0-80% MeCN]로 정제했다. 수득된 생성물을, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (3 × 50.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 화합물 벤질(2S)-2-(시아노메틸)-4- [2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (750 mg, 1.08 mmol, 80.1% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 682.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 벤질(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 953 umol, 1.0 eq) 및 Pd/C (200 mg, 10% 순도)을 MeOH (8.0 mL) 및 NH3·MeOH (8.0 mL, 20% 순도)에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 H2 (15 psi) 분위기 하에서 교반했다. 완료 후, 조 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과했다. 케이크를 MeOH (50.0 mL)로 세정하고 여과물을 고진공 하에서 건조시켰다. 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (420 mg, 736 umol, 77.2% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 548.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 브로모부트 -2- 에노일]- 4-[2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (6.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (420 mg, 822 umol, 1.0 eq) 및 피리딘 (520 mg, 6.57 mmol, 531 uL, 8.0 eq)의 용액에 (E)-4-브로모부트-2-에노일 클로라이드 (603 mg, 3.29 mmol, 4.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 생성물 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (500 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 695.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S) -4,4- 디플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeCN (12.0 mL) 중 2-[(2S)-1-[(E)-4-브로모부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (500 mg, 720 umol, 1.0 eq) 및 K2CO3 (995 mg, 7.20 mmol, 10.0 eq)의 용액에 3-플루오로아제티딘 (482 mg, 4.32 mmol, 6.0 eq, HCl)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 물 (10.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3Х10 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시켰다. 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 3:1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 100:1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150×25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-79%,10min];B%: 45%-75%, 12분)로 정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 520, 45.8 mg, 66.5 umol, 9.24% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 689.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 6.88 (br d, J = 15.3Hz, 1H), 6.42 (br d, J = 15.4 Hz, 1H), 5.27 - 5.05 (m, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.18 (m, 2H), 4.16 - 3.95 (m, 2H), 3.94 - 3.84 (m, 1H), 3.82 - 3.66 (m, 3H), 3.54 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.50 - 3.36 (m, 2H), 3.34 (br d, J = 3.8 Hz, 2H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.24 - 3.08 (m, 4H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.76 - 2.57 (m, 3H), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.46 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H).
실시예 521
2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]- 6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (720 mg, 1.03 mmol, 1 eq)의 용액에 TFA (4.62 g, 40.5 mmol, 3 mL, 39.4 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 DCM (10 mL)로 희석하고 포화 수성 NaHCO3로 중화하고, 그 다음 수성상을 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (880 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 - 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (500 mg, 조물질), 2-플루오로프로프-2-에노산 (61.1 mg, 679 umol) 및 TEA (294 mg, 2.91 mmol, 405 uL)의 용액에 T3P (926 mg, 1.45 mmol, 865 uL, EtOAc 중 50% 순도)을 -40℃에서 첨가했다. 그 다음 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반하고 0℃에서 또 다른 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 수성 NaHCO3로 중화하고 EtOAc (2 × 70 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 10%-40%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 521, 52.5 mg, 79.8 umol, 2개의 단계 15% 수율, 96.4% 순도, FA)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:588.
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.03 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 5.25 (br dd, J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.02 - 4.61 (m, 3H), 4.43 (dd, J = 4.8, 11.6 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.19 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.01 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.68 - 3.56 (m, 1H), 3.55 - 3.50 (m, 2H), 3.49 - 3.21 (m, 3H), 3.14 (br s, 1H), 2.98 (br s, 1H), 2.91 - 2.61 (m, 7H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (qd, J = 8.4, 12.4 Hz, 1H), 2.14 - 1.95 (m, 3H).
실시예 522
2-((S)-4-(2-(((2R,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 R ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 378 umol, 1.0 eq), (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노산 (169 mg, 491 umol, 1.3 eq) 및 DIEA (293 mg, 2.27 mmol, 395 uL, 6.0 eq)의 용액에 HATU (431 mg, 1.13 mmol, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 물 (10 mL)에 첨가하고 에틸 아세테이트 (2 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올=20:1)로 정제했다. 생성물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (290 mg, 339 umol, 90% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (1.5 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (290 mg, 339 umol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.5 mL, 59.8 eq)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축하고, 그 다음 디클로로메탄 (10.0 mL)을 첨가하고, 유기층을 포화 NaHCO3 수성물 (2 × 10.0 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=20:1)로 정제했다. 조 생성물을, 그 다음 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 45%-75%, 12분)으로 재정제하고, 수득된 생성물을 동결건조 하에서 농축시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 522, 61.3 mg, 99.9 umol, 29% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 614.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.06 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.27 - 4.97 (m, 1H), 4.74 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.34 (m, 3H), 4.31 - 4.16 (m, 2H), 4.15 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.58 (m, 3H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.46 - 3.41 (m, 1H), 3.36 - 3.29 (m, 1H), 3.26 - 3.07 (m, 3H), 3.04 - 2.97 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.85 - 2.57 (m, 4H), 2.49 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.29 - 1.91 (m, 2H).
실시예 523
2-[(2S)-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (4 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 369 umol, 1 eq), (E)-4-트리틸옥시부트-2-에노산 (254 mg, 738 umol, 2 eq) 및 TEA (374 mg, 3.69 mmol, 514 uL, 10 eq)의 용액에 T3P (705 mg, 1.11 mmol, 659 uL, 50 % 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석하고 EtOAc (15 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 70 %)로 정제하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 262 umol, 71 % 수율, 99 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 B: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-하이드록시부트-2-에노일]-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (2.3 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-트리틸옥시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (230 mg, 265 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (3.54 g, 31.1 mmol, 2.3 mL, 117 eq)을 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (30 mL)로 pH=7~8로 염기성화하고, 그 다음 DCM (2 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1% FA) = 32 %)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 37%-67%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-하이드록시부트-2-에노일]-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 523, 41.7 mg, 66.6 umol, 25 % 수율, 100 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 626.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.07 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.85 - 4.55 (m, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 3H), 4.30 - 3.97 (m, 4H), 3.94 - 3.65 (m, 2H), 3.58 - 3.40 (m, 2H), 3.29 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.54 (m, 4H), 2.45 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.42 - 2.28 (m, 2H), 1.81 (br dd, J = 8.9, 13.6 Hz, 1H).
실시예 524
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (100 mg, 0.1879 mmol), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (32.73 mg, 0.2819 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL, 12.79 mmol)의 교반 혼합물을 0℃로 냉각시키고 이어서 트리에틸아민 (0.07859 mL, 0.5638 mmol) 및 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드, EtOAc 중 50% (0.1678 mL, 0.2819 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키면서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 0.5M Na2CO3 (5 mL)과 EtOAc (15 mL) 사이에서 분할시키고 유기물을 분리했다. 유기물을 그 다음 물 및 염수 (5 mL 각각)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 그 다음 4%MeOH + 0.4% NH4OH/DCM을 용출물로서 사용하는 실리카겔상 크로마토그래피를 수행하여 불순한 물질을 수득했고, 이것을 5 내지 75% ACN+0.1% TFA /H2O +0.1% TFA로 용출하는 Gilson 역 prep HPLC로 추가 정제했다. 순수한 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 DCM과 Na2CO3의 포화 용액 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 유기물을 그 다음 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 순수한 표제 화합물 (실시예 524, 33 mg, 28%)를 수득했다. ESI+APCI MS m/z 630.3 [M+].
실시예 525
N-(3-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로프-1-엔-2-일)아세트아미드
단계 A: N-(3-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로프-1-엔-2-일)아세트아미드: 0℃로 냉각된 디클로로메탄 (2932 μl, 0.2932 mmol)를 수용하는 25 mL 둥근바닥 플라스크에 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (150 mg, 0.2932 mmol) 및 휘니그 염기 (307.2 μl, 1.759 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, 2-아세트아미도아크릴산 (227.1 mg, 1.759 mmol)을 한번에 첨가하면서, 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (1047 μl, 1.759 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0℃에서 교반했다. 반응을 염기성 물로 처리하고 수성층을 EtOAc (3x)으로 추출했다. 조합된 유기물을 진공에서 농축시키고 5→95% ACN+0.1% TFA /물+0.1% TFA로 용출하는 Gilson (prep HPLC) 상에서 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 1M NaOH로 염기성화하고 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 표제 화합물 N-(3-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로프-1-엔-2-일)아세트아미드 (실시예 525, 124.2 mg, 68.03 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]+.
실시예 526
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-3-(피리딘-4-일)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-3-(피리딘-4-일)아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 표제 화합물을, 단계 A에서 2-아세트아미도아크릴산을 트랜스-3-(4-피리딜) 아크릴산으로 대체하여 실시예 525에 따라 제조했다. ESI+APCI MS m/z 643.3 [M+H]+.
실시예 527
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
1- 브로모 -5- 플루오로 -3- 메틸 -2-( 트리플루오로메틸 )벤젠. DMF (40 mL) 중 1-브로모-5-플루오로-2-아이오도-3-메틸-벤젠 (2 g, 6.35 mmol, 1 eq)의 용액에 CuI (7.26 g, 38.1 mmol, 6 eq) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-플루오로설포닐-아세테이트 (7.32 g, 38.1 mmol, 4.85 mL, 6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (20 mL × 3)로 세정했다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)로 정제했다. 1-브로모-5-플루오로-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (1.3 g, 3.74 mmol, 59% 수율, 74% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.33 (dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 2.54 (q, J = 3.6 Hz, 3H).
2- 브로모 -6- 플루오로 -4- 메틸 -3-( 트리플루오로메틸 ) 벤즈알데하이드. THF (20 mL) 중 1-브로모-5-플루오로-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (900 mg, 3.50 mmol, 1 eq)의 혼합물에 LDA (THF 중 2 M, 3.50 mL, 2 eq)을 - 60℃에서 질소 분위기 하에서 첨가했다. 0.5시간 동안 교반한 후, 상기 혼합물에 DMF (768 mg, 10.5 mmol, 808 uL, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 - 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 포화 NH4Cl 수용액 (10 mL)으로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기상을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 5/1)로 정제했다. 2-브로모-6-플루오로-4-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드 (700 mg, 2.46 mmol, 70% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.35 (s, 1H), 7.08 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 3H).
4- 브로모 -6- 메틸 -5-( 트리플루오로메틸)-1 H- 인다졸. DMSO (8 mL) 중 2-브로모-6-플루오로-4-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드 (600 mg, 2.11 mmol, 1 eq) 및 하이드라진 일수화물 (2.11 g, 42.1 mmol, 2.05 mL, 20 eq)의 용액을 60℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고 물 (3 × 50 mL) 및 염수 (1 × 50 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. 4-브로모-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (550 mg, 1.97 mmol, 94% 수율)을 백색 고체로서 수득했다.
4- 브로모 -6- 메틸 -1- 테트라하이드로피란 -2-일-5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸. DCM (10 mL) 중 4-브로모-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (500 mg, 1.79 mmol, 1 eq)의 용액에 4-메틸벤젠설폰산 수화물 (34.1 mg, 1791 umol, 0.1 eq), 이어서 CH3CN (2 mL) 중 DHP (603 mg, 7.17 mmol, 655 uL, 4 eq)의 용액을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고 물 (2 × 100 mL) 및 염수 (1 × 50 mL)로 세정했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 4-브로모-6-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸 (600 mg, 1.54 mmol, 86% 수율, 93% 순도)을 밝은 황색 검으로서 수득했다. LCMS [MSI, M+1]: 363.
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]- 7-[6- 메틸 -1- 테트라하이드로피란 -2-일-5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸 -4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 848 umol, 1 eq), 4-브로모-6-메틸-1-테트라하이드로피란- 2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸 (431 mg, 1.19 mmol, 1.4 eq) Pd2(dba)3 (155 mg, 170 umol, 0.2 eq), RuPhos (158 mg, 339 umol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (691 mg, 2.12 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 상기 혼합물에 H2O (20 mL × 1) 및 에틸 아세테이트 (20 mL × 1)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 /메탄올 = 50/1 내지 2/1)로 정제했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-[6-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 535 umol, 32% 수율, 80.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [MSI, M+1]: 754.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 - 2-일]메톡시]-7-[6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[6-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (470 mg, 503 umol, 1 eq)의 용액에 TFA (2.29 g, 20.1 mmol, 1.49 mL, 40 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 디클로로메탄 (5 mL)을 첨가하고 포화 수성 NaHCO3 용액을 pH = 8 ~ 9로 염기성화했다. 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-7-[6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (420 mg, 453 umol, 90% 수율, 61.4% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [MSI, M+1]: 570.
단계 C: 2-(( S )-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-2-((( S )-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. DMF (8 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (380 mg, 410 umol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (18.4 mg, 205 umol, 0.5 eq) 및 TEA (124 mg, 1.23 mmol, 171 uL, 3 eq)의 용액에 T3P (391 mg, 614 umol, 365 uL, DMF 중 50% 순도, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 그 다음 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반하고 0℃에서 또 다른 0.5시간 동안 교반했다. 2-플루오로프로프-2-에노산 (11 mg) 및 T3P (100 uL)을 첨가하고 혼합물을 -40℃에서 추가 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 22% - 42%, 7.8분) 및 (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 이동상: [물 (0.04% NH3H2O + 10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 50% - 68%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조하여 표제 화합물 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (실시예 527)을 백색 고체로서 수득했다.
실시예 528
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-(3-플루오로아제티딘-1-일)부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 중간체 66, 단계 E에서 (1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올을 (S)-(4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올로 대체하여 중간체 66를 변형시킴으로써 실 시예 520에 따라 제조되고, 변형된 중간체 66은 중간체 71, 단계 A에서의 조건을 사용하여 탈보호되고, 그 다음 실시예 520, 단계 A에서의 중간체 66을 대체한다.
실시예 529
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 실시예 479, 단계 C의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 (E)-4-플루오로부트-2-에노산으로 대체하여 실시예 467에 따라 제조했다. LCMS [ESI, M+1]: 634.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.32 - 4.93 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.45 (td, J = 5.2, 11.2 Hz, 1H), 4.32 - 3.63 (m, 6H), 3.58 - 3.36 (m, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.93 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.50 (m, 3H), 2.46 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.15 (m, 1H).
SFC 조건: 칼럼: Chiralcel OJ-3 50×4.6mm I.D., 3um, 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA), 유량: 3mL/분, 파장: 220nm.
실시예 530
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 실시예 478, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 467에 따라 제조했다. LCMS [ESI, M+1]:620.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.63 (m, 2H), 7.46 - 7.33 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.54 - 5.33 (d, J = 47.6 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.05 - 4.62 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 4.31 - 4.13 (m, 3H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 3.97 - 3.73 (m, 1H), 3.59 - 3.36 (m, 3H), 3.27 - 2.95 (m, 6H), 2.92 (s, 3H), 2.89 - 2.49 (m, 5H), 2.46 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H).
SFC: "칼럼: Chiralcel OJ - 3 50Х4.6 mm I.D., 3 um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05% DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
실시예 531
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 실시예 489, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 (메톡시메틸)프로프-2-에노산으로 대체하여 실시예 467에 따라 제조했다.
실시예 532
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 실시예 483, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산으로 대체하여 실시예 467에 따라 제조했다.
실시예 533
(S,E)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-플루오로부트-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 479, 단계 C에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 (E)-4-플루오로부트-2-에노산으로 대체하여 실시예 469에 따라 제조된다.
실시예 534
(S,E)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-메톡시부트-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 489, 단계 A에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 2-(메톡시메틸)프로프-2-에노산으로 대체하여 실시예 469에 따라 제조된다.
실시예 535
(S)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-2-플루오로프로프-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 478, 단계 A에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 2-플루오로아크릴산으로 대체하여 실시예 469에 따라 제조된다.
실시예 536
(S,E)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-하이드록시부트-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 469, 단계 D에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산으로 대체하고 그리고 실시예 483, 단계 A의 절차에 따라 실시예 469에 따라 제조된다.
실시예 537
(S)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-2-플루오로프로프-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 478, 단계 A에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 (E)-4-플루오로부트-2-에노산으로 대체하여 실시예 470에 따라 제조된다.
실시예 538
(S,E)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-플루오로부트-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 479, 단계 C에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 (E)-4-플루오로부트-2-에노산으로 대체하여 실시예 470에 따라 제조된다.
실시예 539
(S)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-2-플루오로프로프-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 478, 단계 A에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 2-플루오로아크릴산으로 대체하여 실시예 470에 따라 제조된다.
실시예 540
(S,E)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-메톡시부트-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 489, 단계 A에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 2-(메톡시메틸)프로프-2-에노산으로 대체하여 실시예 470에 따라 제조된다.
실시예 541
(S,E)-1-(4-(2-((4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-하이드록시부트-2-엔-1-온
표제 화합물은 실시예 470, 단계 C에서 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산으로 대체하고 실시예 483, 단계 A의 절차에 따라 실시예 470에 따라 제조된다.
실시예 542
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 실시예 479, 단계 C의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 468에 따라 제조된다. LCMS [ESI, M+1]: 655.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.60 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.26 - 5.03 (m, 2H), 4.90 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 2H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 3.98 (m, 2H), 3.97 - 3.72 (m, 2H), 3.66 - 7.56 (m, 1H), 3.53 - 3.37 (m, 2H), 3.34 - 3.11 (m, 3H), 3.07 - 2.92 (m, 2H), 2.89 - 2.79 (m, 1H), 2.77 - 2.48 (m, 4H), 2.47 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.18 (m, 1H).
실시예 543
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물을, 실시예 478, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 468에 따라 제조된다. LCMS [ESI, M+1]: 640.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 5.54 - 5.33 (dd, J = 2.8, 47.6 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.51 - 4.38 (m, 2H), 4.31 - 3.77 (m, 4H), 3.69 - 3.54 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 3.35 - 2.48 (m, 11H), 2.47 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.16 (m, 1H).
SFC: "칼럼: Cellucoat 50 × 4.6mm I.D., 3um 이동상: 5% 내지 40%의 CO2 중 메탄올 (0.05 % DEA) 유량: 3mL/분 파장: 220nm".
실시예 544
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 실시예 489, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 (메톡시메틸)프로프-2-에노산으로 대체하여 실시예 468에 따라 제조된다.
실시예 545
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 실시예 483, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산으로 대체하여 실시예 468에 따라 제조된다.
실시예 546
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 실시예 479, 단계 C의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 527에 따라 제조된다.
실시예 547
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 실시예 478, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 2-플루오로프로프-2-에노일 클로라이드로 대체하여 실시예 527에 따라 제조된다.
실시예 548
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 실시예 489, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 (메톡시메틸)프로프-2-에노산으로 대체하여 실시예 527에 따라 제조된다.
실시예 549
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-하이드록시부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
표제 화합물은 실시예 483, 단계 A의 조건을 사용하여 아크릴로일 클로라이드를 4-[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시부트-2-이노산으로 대체하여 실시예 527에 따라 제조된다.
실시예 550
2-((S)-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인돌-4-일)-2-(((S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 표제 화합물은 실시예 478, 단계 A에서 기재된 바와 같이 프로프-2-에노일 프로프-2-에노에이트를 2-플루오로아크릴산으로 대체하여 실시예 466에 따라 제조된다.
실시예 551
2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-메톡시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-메톡시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 378 umol, 1.0 eq), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (110 mg, 944 umol, 2.5 eq)의 용액에 TEA (382 mg, 3.78 mmol, 526 uL, 10.0 eq) 및 T3P (721 mg, 1.13 mmol, 674 uL, 50 % 순도, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 물 (10.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 여과했다. 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 10:1 내지 1:1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150×25mm×10um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 48%-78%,9-10분)로 재정제하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-메톡시부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 551, 50 mg, 79.6 umol, 21% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 628.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.05 - 6.94 (m, 1H), 6.55 (br d, J = 15.0 Hz, 1H), 5.23 - 5.03 (m, 1H), 4.66 (br s, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.18 - 3.94 (m, 4H), 3.93 - 3.84 (m, 1H), 3.83 - 3.65 (m, 1H), 3.54 (br d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.42 - 3.26 (m, 2H), 3.25 - 3.15 (m, 2H), 3.05 (br dd, J = 8.5, 16.4 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.58 (m, 4H), 2.57 -2.35 (m, 5H), 2.14 - 1.96 (m, 1H).
실시예 552
2-[(2S)-1-[(E)-4-메톡시부트-2-에노일]-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-메톡시부트-2-에노일]-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (3 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 277 umol, 1 eq), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (64.3 mg, 554 umol, 2 eq) 및 TEA (280 mg, 2.77 mmol, 385 uL, 10 eq)의 용액에 T3P (529 mg, 831 umol, 494 uL, 50 % 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1 % FA) = 35 %)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B %: 50 % - 74 %,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-메톡시부트-2-에노일]-4-[2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 552, 37.1 mg, 57.2 umol, 21 % 수율, 98.7 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 640.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 6.55 (br d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.31 - 4.04 (m, 5H), 3.95 - 3.68 (m, 3H), 3.63 - 3.47 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.30 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.76 (br dd, J = 8.0, 16.8 Hz, 1H), 2.72 - 2.52 (m, 3H), 2.45 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 2.41 - 2.27 (m, 2H), 1.81 (br dd, J = 7.2, 14.0 Hz, 1H).
실시예 553
2-((S)-1-((E)-4-메톡시부트-2-에노일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((R)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 3- 하이드록시 -4- 메톡시 - 부타노에이트. 톨루엔 (300 mL) 중 메틸 4-메톡시-3-옥소-부타노에이트 (20 g, 137 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NaBH4 (5.44 g, 144 mmol, 1.05 eq)을 0℃에서 첨가했다. 그 다음 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 0℃에서 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 추출물을 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 메틸 3-하이드록시-4-메톡시-부타노에이트 (7.5 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.23 - 4.15 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.44 - 3.38 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.04 (br s, 1H), 2.51 (d, J = 6.4 Hz, 2H).
단계 B: 메틸 ( E )-4- 메톡시부트 -2- 에노에이트. DCM (50.0 mL) 중 메틸 3-하이드록시-4-메톡시-부타노에이트 (7.5 g, 조물질)의 용액에 TEA (5.12 g, 50.6 mmol, 7.05 mL) 및 MsCl (8.70 g, 75.9 mmol, 5.88 mL)을 0℃에서 첨가했다. 4시간 동안 교반한 후, 상기 혼합물에 TEA (10.2 g, 101 mmol, 14.1 mL)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃까지 가온시키고 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 물 (50.0 mL)로 희석하고, HCl (1N, 15.0 mL) 및 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 50:1)로 정제하여 메틸 (E)-4-메톡시부트-2-에노에이트 (1.7 g, 11.8 mmol, 2개의 단계 8.6% 수율, 90% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 6.93 (td, J = 4.3, 15.8 Hz, 1H), 6.04 (td, J = 2.0, 15.8 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 2.0, 4.3 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.36 (s, 3H).
단계 C: ( E )-4- 메톡시부트 -2- 에노산. MeOH (2.0 mL) 및 H2O (2.0 mL) 중 메틸 (E)-4-메톡시부트-2-에노에이트 (300 mg, 2.31 mmol, 1.0 eq) 및 KOH (517 mg, 9.22 mmol, 4.0 eq)의 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 HCl (2N, 5.0 mL)로 pH = 1 - 3로 산성화하고 에틸 아세테이트 (2×20 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (200 mg, 1.55 mmol, 67.3% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 11.13 (br s, 1H),7.06 (td, J= 4.1, 15.7 Hz, 1H), 6.08 (td, J = 2.0, 15.7 Hz, 1H), 4.12 (dd, J = 2.0, 4.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 3H).
단계 D: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-메톡시부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (4 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 391 umol, 1 eq), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (113 mg, 977 umol, 2.5 eq), TEA (395 mg, 3.91 mmol, 544 uL, 10 eq)의 용액에 T3P (746 mg, 1.17 mmol, 697 uL, 50% 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (10 mL × 3)로 세정했다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 10:1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Boston pH - lex 150*25 10 um; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 35% - 59%, 8분)로 정제했다. 혼합물을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-메톡시부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (실시예 553, 37.5 mg, 60.4 umol, 15% 수율, 98.2% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 610.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.77 - 7.57 (m, 2H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d, J = 14.4 Hz, 1H), 6.55 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.24 - 4.49 (m, 1H), 4.46 - 4.32 (m, 1H), 4.32 - 3.74 (m, 7H), 3.73 - 3.25 (m, 6H), 3.25 - 2.94 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.54 (m, 4H), 2.49 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.93 - 1.65 (m, 3H).
실시예 554
2-[(2S)-1-[(E)-4-메톡시부트- 2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 ) -2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (850 mg, 1.80 mmol, 1.0 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (1.20 g, 5.41 mmol, 3.0 eq), Pd2(dba)3 (330 mg, 360 μmol, 0.20 eq), Xantphos (417 mg, 721 μmol, 0.40 eq) 및 Cs2CO3 (1.76 g, 5.41 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응을 2 N HCl (2 × 15.0 mL)로 세정했다. 수성상을 고체 NaHCO3로 pH ~ 7로 염기성화하고 에틸 아세테이트 (2 × 50.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0 - 65% MeCN]로 정제하고 고체 NaHCO3로 pH ~ 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (2 × 150 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 1.03 mmol, 57% 수율, 97% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 612.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 4.63 - 4.52 (m, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.09 - 3.95 (m, 2H), 3.93 - 3.73 (m, 2H), 3.57 - 3.47 (m, 1H), 3.42 - 3.27 (m, 1H), 3.22 - 3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.94 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.81 - 2.54 (m, 4H), 2.53 - 2.47 (m, 3H), 2.40 - 2.26 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 981 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 3.0 mL, 12.2 eq)을 25℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (8.0 mL)로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 H2O (5.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 15.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (410 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 메톡시부트 - 2- 에노일 ]-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- [[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 293 μmol, 1.0 eq), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (102 mg, 880 μmol, 3.0 eq)의 용액에 TEA (237 mg, 2.35 mmol, 326 μL, 8.0 eq) 및 T3P (560 mg, 880 μmol, 523 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (5.0 mL)을 첨가했다. 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 3 : 1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 50 : 1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN];B%: 50%-77%,10분)로 재정제하고 동결건조시켰다. 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-메톡시부트- 2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴 (38.6 mg, 62.4 μmol, 21% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 D: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 메톡시부트 - 2- 에노일 ]-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- [[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 293 μmol, 1.0 eq), (E)-4-메톡시부트-2-에노산 (102 mg, 880 μmol, 3.0 eq)의 용액에 TEA (237 mg, 2.35 mmol, 326 μL, 8.0 eq) 및 T3P (560 mg, 880 μmol, 523 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (5.0 mL)을 첨가했다. 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 3 : 1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 50 : 1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN];B%: 50%-77%,10분)로 재정제하고 동결건조시켰다. 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-메톡시부트- 2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴 (38.6 mg, 62.4 μmol, 21% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 610.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d, J = 15.2 Hz, 1H), 6.55 (br d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.20 - 4.50 (m, 1H) 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.29 - 3.96 (m, 6H), 3.94 - 3.83 (m, 1H), 3.81 - 3.63 (m, 1H), 3.58 - 3.37 (m, 5H), 3.23 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.54 (m, 4H), 2.52 - 2.43 (m, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.87 - 1.72 (m, 3H).
실시예 555
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
1- 브로모 -5- 플루오로 -3- 메틸 -2-( 트리플루오로메틸 )벤젠. DMF (40 mL) 중 1-브로모-5-플루오로-2-아이오도-3-메틸-벤젠 (2 g, 6.35 mmol, 1 eq)의 용액에 CuI (7.26 g, 38.1 mmol, 6 eq) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-플루오로설포닐-아세테이트 (7.32 g, 38.1 mmol, 4.85 mL, 6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (20 mL × 3)로 세정했다. 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/0 내지 10/1)로 정제했다. 1-브로모-5-플루오로-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (1.3 g, 3.74 mmol, 59% 수율, 74% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.33 (dd, J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 2.54 (q, J = 3.6 Hz, 3H).
2- 브로모 -6- 플루오로 -4- 메틸 -3-( 트리플루오로메틸 ) 벤즈알데하이드. THF (20 mL) 중 1-브로모-5-플루오로-3-메틸-2-(트리플루오로메틸)벤젠 (900 mg, 3.50 mmol, 1 eq)의 혼합물에 LDA (THF 중 2 M, 3.50 mL, 2 eq)을 - 60℃에서 질소 하에서 첨가했다. 0.5시간 동안 교반한 후, 상기 혼합물에 DMF (768 mg, 10.5 mmol, 808 μL, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 - 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 포화 수성 NH4Cl (10 mL)로 켄칭하고 그 다음 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기상을 염수 (10 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 200/1 내지 5/1)로 정제했다. 2-브로모-6-플루오로-4-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드 (700 mg, 2.46 mmol, 70% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.35 (s, 1H), 7.08 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 3H).
4- 브로모 -6- 메틸 -5-( 트리플루오로메틸)-1 H- 인다졸. DMSO (8 mL) 중 2-브로모-6-플루오로-4-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤즈알데하이드 (600 mg, 2.11 mmol, 1 eq) 및 하이드라진 일수화물 (2.11 g, 42.1 mmol, 2.05 mL, 20 eq)의 용액을 60℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하고 물 (3 × 50 mL) 및 염수 (1 × 50 mL)로 세정했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 다음 단계에서 추가 정제없이 사용했다. 4-브로모-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (550 mg, 1.97 mmol, 94% 수율)을 백색 고체로서 수득했다.
4- 브로모 -6- 메틸 -1- 테트라하이드로피란 -2-일-5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸. DCM (10 mL) 중 4-브로모-6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸 (500 mg, 1.79 mmol, 1 eq)의 용액에 4-메틸벤젠설폰산 수화물 (34.1 mg, 1791 μmol, 0.1 eq)을 첨가하고, 이어서 CH3CN (2 mL) 중 DHP (603 mg, 7.17 mmol, 655 μL, 4 eq)의 용액을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고 물 (2 × 100 mL) 및 염수 (1 × 50 mL)로 세정했다. 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 실리카겔상 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 20/1 내지 3/1)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 4-브로모-6-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸 (600 mg, 1.54 mmol, 86% 수율, 93% 순도)을 밝은 황색 검으로서 수득했다. LCMS [MSI, M+1]: 363.
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]- 7-[6- 메틸 -1- 테트라하이드로피란 -2-일-5-( 트리플루오로메틸 ) 인다졸 -4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 848 μmol, 1 eq), 4-브로모-6-메틸-1-테트라하이드로피란- 2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸 (431 mg, 1.19 mmol, 1.4 eq) Pd2(dba)3 (155 mg, 170 μmol, 0.2 eq), RuPhos (158 mg, 339 μmol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (691 mg, 2.12 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 100℃에서 16시간 동안 N2 하에서 교반했다. 상기 혼합물에 H2O (20 mL × 1) 및 에틸 아세테이트 (20 mL × 1)을 첨가했다. 유기상을 분리하고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 /메탄올 = 50/1 내지 2/1)로 정제했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-[6-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 535 μmol, 32% 수율, 80.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [MSI, M+1]: 754.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 - 2-일]메톡시]-7-[6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[6-메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-5-(트리플루오로메틸)인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (470 mg, 503 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (2.29 g, 20.1 mmol, 1.49 mL, 40 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 디클로로메탄 (5 mL) 및 포화 수성 NaHCO3로 pH = 8 ~ 9로 염기성화했다. 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2-일]메톡시]-7-[6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (420 mg, 453 μmol, 90% 수율, 61.4% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [MSI, M+1]: 570.
단계 C: 2-(( S )-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-2-((( S )-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. DMF (8 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-[6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (380 mg, 410 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (18.4 mg, 205 μmol, 0.5 eq) 및 TEA (124 mg, 1.23 mmol, 171 μL, 3 eq)의 용액에 T3P (391 mg, 614 μmol, 365 μL, DMF 중 50% 순도, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반하고 0℃에서 또 다른 0.5시간 동안 교반했다. 2-플루오로프로프-2-에노산 (11 mg) 및 T3P (100 μL)을 첨가하고 혼합물을 -40℃에서 추가 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (15 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - MeCN]; B%: 22% - 42%, 7.8분) 및 (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10μm; 이동상: [물 (0.04% NH3H2O + 10 mM NH4HCO3) - MeCN]; B%: 50% - 68%, 12분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 642.
실시예 556
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
3- 브로모 -1-( 메톡시메톡시 )나프탈렌. DMF (35.0 mL) 중 4-브로모나프탈렌-2-올 (3.50 g, 15.7 mmol, 1.0 eq)의 용액에 NaH (941 mg, 23.5 mmol, 60% 순도, 1.50 eq)을 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 이 온도에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 클로로(메톡시)메탄 (5.90 g, 73.3 mmol, 5.57 mL, 4.67 eq)을 0℃에서 적가했다. 혼합물을 30℃로 가온시키고 추가 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 조합된 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 50.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (200 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=1/0 내지 100/1)로 정제했다. 화합물 3-브로모-1-(메톡시메톡시)나프탈렌 (3.50 g, 13.1 mmol, 84% 수율)을 적색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.19 - 8.12 (m, 1H), 7.78 - 7.71 (m, 1H), 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 2H), 7.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.29 (s, 2H), 3.53 (s, 3H).
단계 A: t ert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(메톡시메톡시)-1-나프틸]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (800 mg, 1.70 mmol, 1.0 eq) 및 1-브로모-3-(메톡시메톡시)나프탈렌 (680 mg, 2.54 mmol, 1.50 eq)의 용액에 Cs2CO3 (2.21 g, 6.79 mmol, 4.00 eq), RuPhos (158 mg, 339 μmol, 0.20 eq) 및 Pd2(dba)3 (233 mg, 254 μmol, 0.15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 H2O 100 mL로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 추가 정제했다. 혼합물을 NaHCO3 수용액으로 pH=7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 50.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(메톡시메톡시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 426 μmol, 25 % 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 658.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.09 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.34 (m, 1H), 7.16 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.63 (br s, 1H), 4.40 (dd, J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 2H), 4.21 - 4.16 (m, 1H), 4.09 - 3.86 (m, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 3.37 - 3.17 (m, 3H), 3.15 - 2.96 (m, 3H), 2.89 - 2.73 (m, 3H), 2.72 - 2.64 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.05 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-[3-(메톡시메톡시)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 395 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 98.8 μL, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 373 μmol, 94% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 514.
단계 C: 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (4.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 389 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (105 mg, 1.17 mmol, 3.0 eq)의 용액에 TEA (158 mg, 1.56 mmol, 217 μL, 4.0 eq) 및 T3P (743 mg, 1.17 mmol, 695 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)로 희석하고 DCM (3 ×10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 DCM/ MeOH = 5/1), 및 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10μm; 이동상: [물(0.04%NH3H2O+10mM NH4HCO3)-MeCN];B%: 45%-75%, 12분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(3-하이드록시-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (50.0 mg, 85.0 μmol, 22% 수율, 99.6% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 586.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.94 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.52 (br s, 1H), 5.51 - 5.29 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.95 - 4.35 (m, 2H), 4.24 (dd, J = 4.4, 11.2 Hz, 1H), 4.15 - 3.93 (m, 3H), 3.85 - 3.69 (m, 1H), 3.45 - 3.26 (m, 1H), 3.25 - 3.18 (m, 2H), 3.17 - 2.95 (m, 2H), 2.94 - 2.73 (m, 3H), 2.72 - 2.62 (m, 5H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 2.01 - 1.93 (m, 1H), 1.88 - 1.74 (m, 3H).
실시예 557
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-[(3 S )-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (15.0 mL) 중 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (934 mg, 8.11 mmol, 3.0 eq) 및 t-BuONa (780 mg, 8.11 mmol, 3.0 eq)의 용액에 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.5 g, 2.70 mmol, 1.0 eq)의 용액을 0℃에서 적가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 추가 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 물 (30.0 mL)로 켄칭했다. 조 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 50.0 mL)로 추출했다. 조합 추출물을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0 - 65% MeCN]로 정제하고 NaHCO3로 pH = 8로 산성화하고 에틸 아세테이트 (2 × 150 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (820 mg, 1.26 mmol, 47% 수율, 93% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 606.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.42 - 7.29 (m, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.69 (br d, J = 18.6 Hz, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.44 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 4.34 (br s, 1H), 4.05 - 3.69 (m, 4H), 3.42 (br s, 1H), 3.24 (br d, J = 13.0 Hz, 2H), 3.09 (br t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.02 - 2.90 (m, 1H), 2.81 - 2.56 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.28 (dt, J = 7.2, 9.4 Hz, 1H), 2.05 - 1.99 (m, 1H), 1.89 - 1.67 (m, 4H), 1.51 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. NH3으로 MeOH (10.0 mL)에 -70℃에서 0.5시간 동안 거품을 일으켰다. 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (820 mg, 1.35 mmol, 1.0 eq) 및 Pd/C (250 mg, 10% 순도)을 상기 혼합물에 첨가하고 MeOH (10.0 mL), 그 다음 혼합물을 탈가스하고 H2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 H2 (15 psi) 하에서 교반했다. 완료 후, 조 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과했다. 케이크를 MeOH (50.0 mL)로 세정하고 여과물을 고진공 하에서 건조시켰다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.27 mmol, 94% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 472.
단계 C: tert-부틸(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (550 mg, 1.17 mmol, 1.0 eq), 1-브로모-8-클로로-나프탈렌 (845 mg, 3.50 mmol, 3.0 eq), Pd2(dba)3 (160 mg, 175 μmol, 0.15 eq), Xantphos (135 mg, 233 μmol, 0.20 eq) 및 Cs2CO3 (1.14 g, 3.50 mmol, 3.0 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 N2 하에서 8시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응을 HCl (2N 2 × 15 mL) 수용액으로 세정했다. 수성상을 NaHCO3로 pH 8로 염기성화하고 에틸 아세테이트 (2 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC [C18, 물 중 0.1% FA, 0 - 65% MeCN]로 정제하고 NaHCO3로 pH = 8로 산성화하고 에틸 아세테이트 (2 × 150 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 930 μmol, 80% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.75 (br d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.44 (td, J = 7.8, 15.2 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.10 - 3.91 (m, 3H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 1H), 3.34 (br dd, J = 3.6, 13.8 Hz, 1H), 3.30 - 3.01 (m, 5H), 2.95 (dt, J = 3.5, 12.3 Hz, 1H), 2.89 - 2.75 (m, 1H), 2.70 (br s, 2H), 2.57 (br d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.53 - 2.46 (m, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.93 - 1.66 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 316 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2.0 mL, 25.3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 0.5시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 진공 하에서 제거했다. 수득된 생성물을 포화 수성 NaHCO3로 Ph = 8로 조정하고, 그 다음 농축했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 조 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (145 mg, 259 μmol, 82% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 532
단계 E: 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (125 mg, 235 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (42.3 mg, 470 μmol, 2.0 eq)의 용액에 TEA (190 mg, 1.88 mmol, 262 μL, 8.0 eq) 및 T3P (449 mg, 705 μmol, 419 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 유기 용매를 물 (5.0 mL)로 세정했다. 수성상을 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기 추출물을 염수 (20.0 mL)로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고 용매를, 그 다음 진공 하에서 제거했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르 : 에틸 아세테이트 = 3 : 1 내지 에틸 아세테이트 : 메탄올 = 50 : 1)로 정제하고, 그 다음 조 생성물을 농축시키고 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150 × 25 mm × 10 μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN];B%: 55% - 85%,11.5분)로 재정제하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (22.5 mg, 37.1 μmol, 16% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 605.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.51 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (br dd, J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 4.90 (br s, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 2H), 4.24 - 4.01 (m, 3H), 3.97 - 3.78 (m, 2H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.44 (br s, 1H), 3.32 - 2.95 (m, 5H), 2.94 - 2.43 (m, 7H), 2.38 - 2.20 (m, 1H), 2.14 - 1.99 (m, 1H) 1.91 - 1.71 (m, 3H).
실시예 558
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2R,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-[(3 S )-4- tert -부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (4.0 mL) 중 [(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (169 mg, 1.27 mmol, 1.5 eq)의 용액에 t-BuONa (163 mg, 1.69 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (470 mg, 847 μmol, 1.0 eq)을 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)에 첨가하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 10.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하여 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (330 mg, 484 μmol, 57% 수율, 92% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 624.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.30 (m, 5H), 5.24 - 5.03 (m, 3H), 4.69 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 4.61 - 4.53 (m, 1H), 4.51 - 4.38 (m, 2H), 4.23 (dd, J = 7.6, 10.4 Hz, 1H), 4.08 - 3.73 (m, 4H), 3.52 - 3.11 (m, 4H), 3.04 - 2.91 (m, 1H), 2.81 - 2.57 (m, 5H), 2.55 - 2.36 (m, 5H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.51 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 메탄올 (3.0 mL) 및 NH3.MeOH (529 μmol, 3 mL, 20% 순도, 1.0 eq) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (330 mg, 529 μmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (50 mg, 529 μmol, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 3시간 동안 교반했다. 완료 후, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 THF (2 × 3.0 mL)로 세정하고, 여과물을 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피 (MeCN 중 0.1% FA)로 정제했다. 혼합물을 NaHCO3 고체로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축했다. 수성층 (20.0 mL)을 에틸 아세테이트 (2 × 15.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 299 μmol, 58% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 490.
단계 C: tert -부틸(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 306 μmol, 1.0 eq) 및 1-브로모-8-클로로-나프탈렌 (148 mg, 618 μmol, 2.0 eq)의 용액에 XantPhos (35.5 mg, 61.3 μmol, 0.2 eq), Pd2(dba)3 (42.1 mg, 45.9 μmol, 0.15 eq), 및 Cs2CO3 (399 mg, 1.23 mmol, 4.0 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 1N 수성 HCl (2 × 10.0 mL)로 세정하고, 수성층을 고체 Na2CO3로 pH~8로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 15.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 크로마토그래피 (MeCN 중 0.1% FA)로 정제했다. 수득된 생성물을 고체 NaHCO3로 pH~8로 조정하고, 농축했다. 수성층 (20 mL)을 에틸 아세테이트 (2 × 15.0 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 tert-부틸(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (85 mg, 129 μmol, 43% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1, M+23]: 650, 672.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.24 - 5.03 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.36 (m, 2H), 4.23 (dd, J = 7.6, 10.4 Hz, 1H), 4.13 - 3.77 (m, 4H), 3.65 - 3.52 (m, 1H), 3.43 - 2.86 (m, 7H), 2.84 - 2.64 (m, 3H), 2.62 - 2.38 (m, 5H), 2.16 - 1.98 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (85.0 mg, 131 μmol, 1.0 eq)의 용액에 4 M HCl/디옥산 (1.0 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축하고, 혼합물에 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고, 그 다음 포화 수성 Na2CO3로 pH~8로 조정하고, 유기층을 분리하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90 mg, 조물질)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 550.
단계 E: 2-(( S )-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2 R ,4 R )-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.0 mg, 120 μmol, 73% 순도, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (21.7 mg, 241 μmol, 2.0 eq)의 용액에 T3P (230 mg, 361 μmol, 215 μL, 50% 순도, 3.0 eq) 및 TEA (97.6 mg, 962 μmol, 134 μL, 8.0 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (10.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 유기층을 분리하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (2 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=10:1)로 정제했다. 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10μm; 이동상: [물 (0.04%NH3H2O + 10mM NH4HCO3)-MeCN]; B%: 48%-78%, 12분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 그 다음 동결건조시켰다. 생성물 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2R,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (10.9 mg, 17.3 μmol, 14% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 622.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.50 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.22 - 5.04 (m, 1H), 4.98 - 4.72 (m, 1H), 4.54 - 4.37 (m, 2H), 4.30 - 4.02 (m, 3H), 3.96 - 3.75 (m, 2H), 3.66 - 3.54 (m, 1H), 3.51 - 2.99 (m, 6H), 2.98 - 2.67 (m, 3H), 2.64 - 2.36 (m, 6H), 2.14 - 1.97 (m, 1H).
실시예 559
2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 2-[(7- 벤질 -4- 메톡시 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -2-일)옥시]- N , N -디메틸-에탄아민. 톨루엔 (100 mL) 중 7-벤질-2-클로로-4-메톡시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (5 g, 17.3 mmol, 1 eq), 2-(디메틸아미노)에탄올 (3.08 g, 34.5 mmol, 3.46 mL, 2 eq), Cs2CO3 (5.62 g, 17.3 mmol, 1 eq) 및 BINAP (2.15 g, 3.45 mmol, 0.2 eq)의 용액에 Pd(OAc)2 (387 mg, 1.73 mmol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 100℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과했다. 여과물에 HCl (2 M, 200 mL)을 첨가하고, 그 다음 분리했다. 수성상을 NaHCO3 및 K2CO3로 pH = 8~9로 염기성화하고, 그 다음 EtOAc (5 × 80 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 염수 (100 mL)로 세정하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하여 2-[(7-벤질-4-메톡시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (4.8 g, 12.6 mmol, 73 % 수율, 90 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 - 7.28 (m, 5H), 4.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 2.76 - 2.69 (m, 4H), 2.62 - 2.56 (m, 2H), 2.32 (s, 6H).
단계 B: 2-[(4- 메톡시 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘 -2-일)옥시]- N , N -디메틸-에탄아민. MeOH (100 mL) 중 2-[(7-벤질-4-메톡시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (4.8 g, 14.0 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (2 g, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 18시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 HCl/MeOH (4 M, 7.01 mL, 2 eq)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 40℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 NH3ㆍMeOH (10 %, 3 × 30 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (10 mL) 및 EtOAc (10 mL)로 용해시키고, 그 다음 혼합물을 K2CO3로 pH = 11로 염기성화했다. 혼합물을 EtOAc (8 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(4-메톡시-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (2.58 g, 8.69 mmol, 62 % 수율, 85 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 253.
단계 C: 2-[[4- 메톡시 -7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -2-일]옥시]- N , N -디메틸-에탄아민. 톨루엔 (70 mL) 중 2-[(4-메톡시-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (2.28 g, 7.68 mmol, 1 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (2.55 g, 11.5 mmol, 1.5 eq), Cs2CO3 (7.51 g, 23.0 mmol, 3 eq) 및 Xantphos (889 mg, 1.54 mmol, 0.2 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (703 mg, 768 μmol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 100℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 10:1 ~ 0:1 내지 EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 10:1)로 정제하여 2-[[4-메톡시-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (3.2 g, 7.34 mmol, 95 % 수율, 90 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 393.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 2H), 4.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.17 - 4.05 (m, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.81 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.57 - 3.48 (m, 1H), 3.20 (dt, J = 4.0, 11.2 Hz, 1H), 2.94 - 2.82 (m, 4H), 2.75 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.67 (br d, J = 16.4 Hz, 1H), 2.34 (s, 6H).
단계 D: 2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-올. DMF (60 mL) 중 EtSH (1.96 g, 31.5 mmol, 2.33 mL, 3.64 eq)의 용액에 NaH (693 mg, 17.3 mmol, 60 % 순도, 2 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 DMF (10 mL) 중 2-[[4-메톡시-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시]-N,N-디메틸-에탄아민 (3.4 g, 8.66 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 60℃로 가열하고 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 빙수 (200 mL)에 부었고 EtOAc (30 mL)로 추출했다. 수성상을 HCl (2 M)로 pH = 7~8로 산성화하고, 그 다음 EtOAc (6 × 80 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 PE: EtOAc = 5:1로 분쇄하여 2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (2.4 g, 6.28 mmol, 72 % 수율, 99 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 379.
단계 E: [2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일] 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (20 mL) 중 2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (1 g, 2.64 mmol, 1 eq) 및 TEA (668 mg, 6.61 mmol, 919 μL, 2.5 eq)의 용액에 Tf2O (1.12 g, 3.96 mmol, 654 μL, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 10분 동안 교반했다. 상기 혼합물에 물 (10 mL)을 첨가하고, 그 다음 분리했다. 수성상을 EtOAc (20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 5:1~0:1)로 정제하여 [2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (650 mg, 1.15 mmol, 43% 수율, 90 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[2-[2-(디메틸아미노) 에톡시 ]-7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMAC (4 mL) 중 [2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (350 mg, 685 μmol, 1 eq) 및 2-[(2S)-피페라진-2-일]아세토니트릴 (111 mg, 754 μmol, 1.1 eq)의 용액에 DIEA (177 mg, 1.37 mmol, 239 μL, 2 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 10분 동안 교반했다. 혼합물을 역상 플래시 칼럼 (MeCN/물 (0.1% FA) = 40 %)로 정제하여 2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60 mg, 121 μmol, 18 % 수율, 98 % 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 486.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (1.2 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60 mg, 123 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (22.2 mg, 247 μmol, 2 eq) 및 TEA (100 mg, 988 μmol, 138 μL, 8 eq)의 용액에 T3P (236 mg, 370 μmol, 220 μL, 50 % 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (5 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (2 × 8 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 Al2O3 크로마토그래피 (EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 20:1)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Gemini 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모늄 v/v)-MeCN];B%: 53 % - 83 %, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[2-(디메틸아미노)에톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (39.5 mg, 70.4 μmol, 57 % 수율, 99.4 % 순도)을 회색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 558.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.52 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.47 - 4.37 (m, 2H), 4.31 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.01 (m, 2H), 3.94 - 3.84 (m, 1H), 3.77 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.58 - 3.41 (m, 2H), 3.25 - 2.95 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.77 (m, 2H), 2.77 - 2.70 (m, 2H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.34 (d, J = 3.6 Hz, 6H).
실시예 560
2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
1- tert -부틸-2- 메틸 (2 S , 4 R )-4- 플루오로파이롤리딘 -1,2- 디카복실레이트. CH3CN (20.0 mL) 중 (2S,4R)-1-tert-부톡시카보닐-4-플루오로-파이롤리딘-2-카복실산 (2.0 g, 8.58 mmol, 1.0 eq) 및 Ag2O (3.97 g, 17.2 mmol, 2.0 eq)의 용액에 MeI (2.43 g, 17.2 mmol, 1.07 mL, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 물 (30.0 mL)에 첨가하고, 그 다음 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (30.0 mLХ2)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트=3:1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=10:1)로 정제했다. 생성물 1-tert-부틸-2-메틸 (2S, 4R)-4-플루오로파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.98 g, 8.01 mmol, 93% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 5.29-5.15 (m, 1H), 4.49-4.38 (m, 1H), 3.92-3.74 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.60-3.56 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 2.17-2.05 (m, 1H), 1.44 (d, J=18.0 Hz, 9H).
[( 2 S ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (20.0 mL) 중 1-tert-부틸-2-메틸 (2S,4R)-4-플루오로파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.98 g, 8.0 mmol, 1.0 eq)의 용액에 LiAlH4 (912 mg, 24.0 mmol, 3.0 eq)을 -40℃에서 느리게 첨가하고, 완료 후, 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 그 다음 혼합물을 70℃로 가온시키고 이 온도에서 3시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 Na2SO4 (6.0 mL)의 용액의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 THF (10.0 mL)로 희석하고, 그 다음 여과하고 고체를 에틸 아세테이트 (30.0 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (800 mg, 6.01 mmol, 75% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 5.13-4.97 (m, 1H), 3.67-3.63 (m, 1H), 3.51-3.37 (m, 2H), 2.95 (s, 1H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.63-2.51 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.07-2.02 (m, 1H), 1.99-1.95 (m, 1H).
단계 A: 벤질 4-[(3 S )-4- tert -부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (8.0 mL) 중 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (480 mg, 3.6 mmol, 2.0 eq) 및 t-BuONa (295 mg, 3.1 mmol, 1.7 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고 혼합물을 0℃에서 교반하고, 그 다음 톨루엔 (8.0 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1 g, 1.8 mmol, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 혼합물을 H2O (25.0 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (30.0 mL×3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC (18C, 물 중 0.1% FA, 0-60% MeCN)로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (100.0 mLХ3)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (860 mg, 1.38 mmol, 76% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 624.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.31-7.25 (m, 5H), 5.15-5.02 (m, 3H), 4.63-4.58 (m, 1H), 4.51 (br s, 1H), 4.39-4.31 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 3.99-3.88 (m, 3H), 3.71 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.52-3.41 (m, 1H), 3.36 (br s, 1H), 3.19-3.16 (m, 2H), 2.99-2.86 (m, 2H), 2.71-2.48 (m, 5 H), 2.43 (s, 3H), 2.76-2.17 (m, 1H), 1.96-1.80 (m, 1H), 1.74 (br s, 1H), 1.43 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸-(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (20.0 mL) 및 NH3ㆍMeOH (10.0 mL, 50% w/w) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (860 mg, 1.4 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (200 mg, 10% 순도, 1.0 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 tert-부틸-(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (620 mg, 조물질)을 백색 고체로서 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 490.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 5.16-5.02 (m, 1H), 4.51 (br s, 1H), 4.31 (dd, J = 4.8, 11.2 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 6.0, 11.2 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.76 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.52-3.41 (m, 1H), 3.14 (dd, J = 3.6, 13.6 Hz, 2H), 3.06-3.03 (m, 1H), 2.99-2.88 (m, 3H), 2.74-2.48 (m, 6H), 2.43 (s, 3H), 2.29-2.18 (m, 1H), 1.96-1.80 (m, 1H), 1.68-1.59 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
단계 C: tert -부틸-(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 tert-부틸-(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.2 mol, 1.0 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (812 mg, 3.7 mmol, 3.0 eq), Pd2(dba)3 (168 mg, 184 μmol, 0.15 eq), Cs2CO3 (1.2 g, 3.7 mmol, 3.0 eq) 및 Xantphos (142 mg, 246 μmol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했고, 그 다음 잔류물을 EA 15.0 mL로 용해시키고, 그 다음 0.5 M HCl로 pH~2로 조정했다. 유기층을 H2O (15.0 mL×3)로 세정하고, 그 다음 고체 NaHCO3을, pH가 8에 도달할 때까지 조합된 수성상에 첨가하고, 그 후, 수성상을 에틸 아세테이트 (50.0 mL×3)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC (18C, 물 중 0.1% TFA, 0-50% MeCN)로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 수성 NaHCO3로 pH-8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성층을 EA (100.0 mL×3)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 tert-부틸-(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 467 μmol, 35% 수율, 99% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 630.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.5 mL) 중 tert-부틸-(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 318 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2.0 mL, 25.0 eq)을 25℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (6.0 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 H2O 10.0 mL로 희석하고 EA (15.0 mL×3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 530.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 283 μmol, 1.0 eq)의 용액에 에틸 아세테이트 (0.5 mL) 중 2-플루오로프로프-2-에노산 (42.9 mg, 476 μmol, 1.68 eq)의 용액을 첨가하고, 그 다음 TEA (1.93 g, 19 mmol, 2.65 mL, 67.0 eq) 및 T3P (455 mg, 715 μmol, 425 μL, 50% 순도, 2.5 eq)을 첨가하고 혼합물을 0℃에서 교반하고, 그 후 반응 혼합물을 20℃로 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 H2O 10.0 mL의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (15.0 mLХ3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN]; B%: 58%-88%, 11.5분)로 정제하고 동결건조하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (50.1 mg, 82.9 μmol, 2개의 단계 26% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 602.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.72 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46-7.43 (m, 2H), 7.26-7.21 (m, 2H), 5.50-5.38 (m, 1H), 5.30-5.11 (m, 2H), 4.89 (br s, 1H), 4.45-4.40 (m, 1H), 4.30-4.20 (m, 2H), 4.19-4.13 (m, 1H), 4.10-4.05 (m, 1H), 3.92-3.88 (m, 1H), 3.82-3.77 (m, 1H), 3.62-3.46 (m, 3H), 3.25-3.18 (m, 2H), 3.15-3.09 (m, 1H), 3.08-2.98 (m, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.90-2.77 (m, 2H), 2.67-2.56 (m, 2H), 2.51 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.07-1.89 (m, 1H).
실시예 561
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
1- tert -부틸-2- 메틸 ( 2 S ,4 R )-4- 메톡시파이롤리딘 -1,2- 디카복실레이트. MeCN (40 mL) 중 (2S,4R)-1-tert-부톡시카보닐-4-하이드록시-파이롤리딘-2-카복실산 (2 g, 8.65 mmol, 1 eq) 및 Ag2O (6.01 g, 26.0 mmol, 3 eq)의 용액에 CH3I (10.0 g, 70.8 mmol, 4.41 mL, 8.19 eq)을 첨가하고, 혼합물을 30℃에서 14시간 동안 교반했다. 상기 혼합물에 CH3I (13.2 g, 93.1 mmol, 5.80 mL, 10.8 eq)을 첨가하고, 혼합물을 30℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 20:1~10:1)로 정제하여 1-tert-부틸-2-메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.85 g, 6.99 mmol, 81 % 수율, 98 % 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
[( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메탄올. THF (50 mL) 중 O1-tert-부틸 O2-메틸 (2S,4R)-4-메톡시파이롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.85 g, 7.13 mmol, 1 eq)의 용액에 LiAlH4 (542 mg, 14.3 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 혼합물을 70℃로 가열하고 3시간 동안 교반했다. 그 다음 LiAlH4 (542 mg, 14.27 mmol, 2 eq)을 10℃에서 첨가하고, 혼합물을 80℃로 가열하고 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 (5 mL)로 켄칭하고, 그 다음 여과했다. 필터 케이크를 THF (3 × 30 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (840 mg, 5.21 mmol, 73 % 수율, 90 % 순도)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 3.93 - 3.83 (m, 1H), 3.68 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.48 - 3.36 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.67 - 2.58 (m, 1H), 2.40 - 2.30 (m, 4H), 2.08 (td, J = 8.0, 13.2 Hz, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 1H).
단계 A: 벤질 4-[(3 S )-4- tert -부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (18 mL) 중 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (367 mg, 2.52 mmol, 2 eq)의 용액에 t-BuONa (364 mg, 3.79 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (700 mg, 1.26 mmol, 1 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 8 ℃에서 1시간 동안 교반했다. 물 (30 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (MeCN/물 (0.1 % FA) = 30 %)로 정제하여 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (450 mg, 694 μmol, 55 % 수율, 98 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 636.
단계 B: tert -부틸-(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (5 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (490 mg, 771 μmol, 1 eq) 및 NH3ㆍMeOH (5 mL, 25 % 순도)의 용액에 Pd/C (100 mg, 10 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (3 × 5 mL)로 세정했다. 여과물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (360 mg, 682 μmol, 88 % 수율, 95 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 C: tert -부틸(2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (360 mg, 718 μmol, 1 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (238 mg, 1.08 mmol, 1.5 eq), Cs2CO3 (701 mg, 2.15 mmol, 3 eq) 및 Xantphos (83.0 mg, 143 μmol, 0.2 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (65.7 mg, 71.8 μmol, 0.1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 5:1~1:1 내지 EtOAc: MeOH = 1:0~20:1)로 정제하고, 그 다음 잔류물을 역상 플래시 칼럼 (ACN/물 (0.1 % FA) = 45 %)로 정제하여 tert-부틸(2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 414 μmol, 58 % 수율, 95 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 642.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.60 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.39 (ddd, J = 4.8, 6.8, 11.2 Hz, 1H), 4.30 - 4.20 (m, 1H), 4.16 - 4.11 (m, 1H), 4.11 - 3.89 (m, 4H), 3.88 - 3.68 (m, 1H), 3.56 - 3.47 (m, 1H), 3.46 - 3.32 (m, 2H), 3.30 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 3.21 - 3.05 (m, 3H), 3.01 - 2.85 (m, 5H), 2.81 - 2.67 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 2.46 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 2.00 - 1.88 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 436 μmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 1.64 mL, 15 eq)을 10℃에서 1시간 동안 첨가했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 포화 NaHCO3로 pH = 8~9로 염기성화하고 EtOAc (3 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (210 mg, 349 μmol, 80 % 수율, 90 % 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 542.
단계 E: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 185 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (33.2 mg, 369 μmol, 2 eq) 및 TEA (149 mg, 1.48 mmol, 206 μL, 8 eq)의 용액에 T3P (352 mg, 554 μmol, 329 μL, 50 % 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (3 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (2 × 3 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05 % 수산화암모늄 v/v)-ACN];B%: 52 % - 82 %, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (28.1 mg, 45.5 μmol, 25 % 수율, 99.4 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 614.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.65 - 7.54 (m, 2H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.27 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 5.46 - 5.26 (m, 1H), 5.18 (br dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.83 (br s, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.23 - 3.94 (m, 4H), 3.92 - 3.85 (m, 1H), 3.84 - 3.76 (m, 1H), 3.70 (br d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.46 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.42 - 3.31 (m, 2H), 3.22 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 3.18 - 3.07 (m, 2H), 3.06 - 2.87 (m, 2H), 2.87 - 2.64 (m, 6H), 2.59 - 2.49 (m, 1H), 2.38 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.24 (ddd, J = 3.2, 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 1H).
실시예 562
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
[(3 R )-1- 메틸피롤리딘 -3-일]메탄올. THF (20 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1- 카복실레이트 (0.5 g, 2.48 mmol, 1 eq)의 용액에 LiAlH4 (189 mg, 4.97 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가하고, 그 다음 혼합물을 70℃로 가온시키고 70℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 Na2SO4 (1 mL)로 켄칭했다. 침전물을 여과 제거하고 필터 케이크를 THF (3 × 20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (220 mg, 1.72 mmol, 69% 수율, 90% 순도)을 무색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 3.67 - 3.57 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.45 - 3.18 (m, 1H), 2.70 (dt, J = 4.8, 8.8 Hz, 1H), 2.56 - 2.44 (m, 2H), 2.42 - 2.24 (m, 5H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.68 - 1.54 (m, 1H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )- 2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1 eq) 및 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (194 mg, 1.68 mmol, 2 eq)의 용액에 t-BuONa (162 mg, 1.68 mmol, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (EtOAc/MeOH 50/1 내지 3/1)로 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)- 2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (290 mg, 427 μmol, 51% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 5H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 5.28 - 5.15 (m, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.30 - 4.01 (m, 6H), 4.00 - 3.73 (m, 2H), 3.56 - 3.31 (m, 2H), 3.26 - 3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.82 - 2.70 (m, 4H), 2.70 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.20 - 2.07 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 1H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (4 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (290 mg, 449 μmol, 1 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (2 mL, 15% 순도), Pd/C (100 mg, 449 μmol, 10% 순도, 1 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 279 μmol, 62% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 235 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (42.2 mg, 469 μmol, 2 eq) 및 TEA (71.2 mg, 704 μmol, 97.9 μL, 3 eq)의 용액에 T3P (224 mg, 352 μmol, 209 μL, EtOAc 중 50% 순도, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 그 다음 혼합물을 -40℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고 혼합된 용매 (EtOAc/MeOH 10/1, 5 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 50/1 내지 20/1) 이어서 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Gemini 150*25mm*10μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 50%-100%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (16.0 mg, 26.5 μmol, 11% 수율, 96.5% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 584.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.33 - 4.02 (m, 5H), 4.01 - 3.65 (m, 2H), 3.61 - 3.36 (m, 2H), 3.27 - 2.97 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.74 - 2.56 (m, 4H), 2.55 - 2.42 (m, 2H), 2.36 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.14 - 1.99 (m, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 1H).
실시예 563
2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
2-[(2S)-1-[(E)-4- 플루오로부트 -2- 에노일]- 4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.5 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (260 mg, 508 μmol, 1.0 eq)의 용액에 에틸 아세테이트 (0.5 mL), TEA (206 mg, 2.03 mmol, 283 μL, 4.0 eq) 및 T3P (647 mg, 1.02 mmol, 605 μL, 50% 순도, 2.0 eq) 중 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (106 mg, 1.02 mmol, 2.0 eq)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 교반하고 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3 × 15.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 25%-45%, 7.8분)으로 정제했다. 수득된 생성물을 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성층을 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (132 mg, 220 μmol, 43% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 - 7.62 (m, 2H), 7.43 - 7.38 (m, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 7.04 - 6.94 (m, 1H), 6.59 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 5.17 - 4.60 (m, 3H), 4.41 - 4.35 (m, 1H), 4.28 - 3.44 (m, 9H), 3.20 - 3.08 (m, 4H), 3.05 - 2.99 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.83 - 2.77 (m, 1H), 2.72 - 2.62 (m, 2H), 2.47 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.32 - 2.25 (m, 1H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.88 - 1.70 (m, 3H).
실시예 564
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 4-[(3 S )-4- tert - 부톡시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2-[3- [(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (800 mg, 1.44 mmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (277 mg, 2.88 mmol, 2 eq) 및 3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로판-1-올 (340 mg, 2.16 mmol, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1 % 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[3- [(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (500 mg, 725 μmol, 50 % 수율, 94 % 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 648.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.44 - 7.30 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.79 - 4.53 (m, 2H), 4.51 - 4.30 (m, 4H), 4.09 - 3.71 (m, 5H), 3.67 - 3.58 (m, 1H), 3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.32 - 3.12 (m, 2H), 3.04 - 2.87 (m, 2H), 2.85 - 2.46 (m, 7H), 2.00 - 1.89 (m, 2H), 1.85 (d, J=9.2 Hz, 1H), 1.72 (d, J=9.2 Hz, 1H), 1.51 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. MeOH (30 mL) 중 벤질 4-[(3S)-4-tert-부톡시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (900 mg, 1.39 mmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (100 mg, 10 % 순도)및 NH3ㆍMeOH (20 mL, 25 % 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (650 mg, 1.06 mmol, 77 % 수율, 84 % 순도)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 514.
단계 C: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 350 μmol, 1 eq), 1-브로모-8-클로로-나프탈렌 (127 mg, 526 μmol, 1.5 eq), Cs2CO3 (342 mg, 1.05 mmol, 3 eq) 및 RuPhos (65.4 mg, 140 μmol, 0.4 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (64.2 mg, 70.1 μmol, 0.2 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 10시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE: EtOAc = 5:1 ~ 1:1 내지 EtOAc: MeOH = 1:0~20:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 173 μmol, 50 % 수율, 90 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 674.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (0.6 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 222 μmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 556 μL, 10 eq)을 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (15 mL) 및 EtOAc (10 mL)로 용해시키고, 그 다음 분리했다. 수성상을 NaHCO3 고체로 pH = 8~9로 염기성화하고 EtOAc (2 × 15 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 162 μmol, 73 % 수율, 93 % 순도)을 갈색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 574.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 174 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (31.4 mg, 348 μmol, 2 eq) 및 TEA (141 mg, 1.39 mmol, 194 μL, 8 eq)의 용액에 T3P (332 mg, 522 μmol, 311 μL, 50 % 순도, 3 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 물 (3 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 EtOAc (2 × 3 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 10μ 250 mm *50mm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN];B%: 45%-75%, 12분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (26.5 mg, 41 μmol, 24 % 수율, 99.9 % 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.12 - 4.64 (m, 1H), 4.49 - 4.31 (m, 4H), 4.21 - 3.98 (m, 3H), 3.95 - 3.76 (m, 2H), 3.68 - 3.55 (m, 2H), 3.52 - 3.36 (m, 2H), 3.33 - 2.97 (m, 4H), 2.95 - 2.66 (m, 5H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.84 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.71 (br d, J = 10.0 Hz, 1H).
실시예 565
2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3- [(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[3-[( 1 S ,4 S )-2-옥사-5- 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 -5-일] 프로폭시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[3-[(1S,4S)- 2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 681 μmol, 1 eq), 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (226 mg, 1.02 mmol, 1.5 eq), Xantphos (78.9 mg, 136 μmol, 0.2 eq), Pd2(dba)3 (62.4 mg, 68.1 μmol, 0.1 eq) 및 Cs2CO3 (555 mg, 1.70 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 300/1 내지 10/1)로 정제했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5- 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (270 mg, 379 μmol, 56% 수율, 92% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 654.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 4.62 (br s, 1H), 4.45 - 4.31 (m, 3H), 4.30 - 4.16 (m, 1H), 4.10 - 3.70 (m, 5H), 3.61 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 3.57 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.25 (m, 1H), 3.24 - 3.05 (m, 3H), 3.03 - 2.86 (m, 5H), 2.84 - 2.67 (m, 4H), 2.66 - 2.48 (m, 2H), 2.00 - 1.88 (m, 2H), 1.84 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.72 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[3-[( 1 S ,4 S )-2-옥사-5- 아자바이사이클로 [2.2.1] 헵탄-5-일] 프로폭시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8- 메틸-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 382 μmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 1.91 mL, 1.00 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 그 다음 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1] 헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (260 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 554.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 플루오로부트 -2- 에노일 ]-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[3- [(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 216 μmol, 1 eq), TEA (87.7 mg, 866 μmol, 121 μL, 4 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (45.1 mg, 433 μmol, 2 eq)의 용액에 T3P (276 mg, 433 μmol, 258 μL, 50% 순도, 2 eq)을 -70℃에서 첨가했다. 혼합물을 -70℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (1 N, 1 mL)로 켄칭하고 희석하고 그 다음 물 (20 mL)로 희석했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3- [(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (14.5 mg, 22.5 μmol, 10% 수율, 99.3% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 640.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.09 - 6.91 (m, 1H), 6.59 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.29 - 4.48 (m, 3H), 4.44 - 4.31 (m, 3H), 4.29 - 3.72 (m, 6H), 3.71 - 3.40 (m, 4H), 3.28 - 2.96 (m, 4H), 2.95 - 2.88 (m, 4H), 2.87 - 2.56 (m, 5H), 2.52 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.99 - 1.87 (m, 2H), 1.84 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 9.6 Hz, 1H).
실시예 566
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[3-[( 1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3- [(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 181 μmol, 1 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (32.5 mg, 361 μmol, 2 eq)의 용액에 HATU (137 mg, 361 μmol, 2 eq) 및 DIEA (93.4 mg, 722 μmol, 126 μL, 4 eq)을 첨가했다. 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 TLC (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하고 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 10μ 250 mm *50mm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 12분)로 추가로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (12 mg, 19.1 μmol, 11% 수율, 99.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 626.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 8.4 Hz, 1H),7.39 - 7.23 (m, 2H), 7.19 - 7.09 (m, 2H), 5.35 (d, J = 48.8 Hz, 1H), 5.18 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.04 - 4.40 (m, 1H), 4.37 - 3.89 (m, 7H), 3.86 - 3.61 (m, 2H), 3.59 - 3.32 (m, 4H), 3.20 - 2.40 (m, 14H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.78 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.65 (d, J = 9.6 Hz, 1H).
실시예 567
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-[8-(하이드록시메틸)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
8- 브로모나프탈렌 -1- 카브알데하이드. THF (100 mL) 중 1,8-디브로모나프탈렌 (5 g, 17.5 mmol, 1 eq)의 용액에 n-BμLi (2.5 M, 9.09 mL, 1.3 eq)을 -70℃에서 적가했다. 30분 동안 -70℃에서 교반한 후, DMF (12.8 g, 175 mmol, 13.5 mL, 10 eq)을 적가했다. 혼합물을 12 ℃까지 가온시키고 또 다른 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (20 mL)로 켄칭했다. 분리된 수성상을 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 8-브로모나프탈렌-1-카브알데하이드 (4.5 g, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 11.4 (s, 1H), 8.04 - 7.92 (m, 2H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.60 - 7.55 (m, 1H), 7.39 (t, J = 8.0 Hz, 1H).
(8- 브로모 -1- 나프틸 )메탄올. MeOH (80 mL) 중 8-브로모나프탈렌-1-카브알데하이드 (4.5 g, 19.1 mmol)의 혼합물에 NaBH4 (2.90 g, 76.6 mmol)을 0℃에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 상기 혼합물에 물 (1 mL)을 첨가하고 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 30/1 내지 3/1)로 정제하여 (8-브로모-1-나프틸)메탄올 (3.3 g, 12.5 mmol, 2개의 단계 72% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.92 - 7.82 (m, 3H), 7.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 5.48 (br s, 2H).
2-[(8- 브로모 -1- 나프틸 ) 메톡시 ] 테트라하이드로피란. DCM (10 mL) 중 (8-브로모-1-나프틸)메탄올 (0.5 g, 2.11 mmol, 1 eq)의 용액에 DHP (355 mg, 4.22 mmol, 386 μL, 2 eq), 이어서 TsOHㆍH2O (40.1 mg, 211 μmol, 0.1 eq)을 12℃에서 첨가했다. 혼합물을 12 ℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액 (2 mL)로 켄칭하고 물 (5 mL)로 희석했다. 분리된 수성상을 EtOAc (10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 500/1 내지 100/1)로 정제하여 2-[(8-브로모-1-나프틸)메톡시]테트라하이드로피란 (560 mg, 1.57 mmol, 74% 수율, 90% 순도)을 무색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.94 - 7.88 (m, 2H), 7.85 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 1H), 5.63 (s, 2H), 4.92 (t, J = 3.6 Hz, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.69 - 3.61 (m, 1H), 2.08 - 1.76 (m, 4H), 1.75 - 1.65 (m, 2H).
단계 A: 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 2-[(8-브로모-1-나프틸)메톡시]테트라하이드로피란 (476 mg, 1.48 mmol, 1.5 eq), 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 989 μmol, 1 eq), Cs2CO3 (806 mg, 2.47 mmol, 2.5 eq), (5-디페닐포스파닐-9,9-디메틸-크산텐-4-일)-디페닐-포스판 (229 mg, 396 μmol, 0.4 eq) 및 Pd2(dba)3 (181 mg, 198 μmol, 0.2 eq)을 탈가스하고 그 다음 10시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고, 포화 수성 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 338 μmol, 34% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 746.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (6 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 375 μmol, 1 eq)의 용액에 NH3/MeOH (4 mL, 20% 순도), Pd/C (120 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (200 mg, 294 μmol, 78% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 612.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (4 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 294 μmol, 1 eq), T3P (562 mg, 883 μmol, 525 μL, EtOAc 중 50% 순도, 3 eq) 및 TEA (238 mg, 2.35 mmol, 328 μL, 8 eq)의 용액에 2-플루오로프로프-2-에노산 (53.0 mg, 588 μmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (4 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (160 mg, 227 μmol, 77% 수율, 97% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 684.
단계 D: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-[8-(하이드록시메틸)-1-나프틸]-2-[[(2 S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (160 μL) 중 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-[8-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)-1-나프틸]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 219 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (250 mg, 2.19 mmol, 162 μL, 10 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 디클로로메탄 (3 mL)로 희석하고 포화 Na2CO3 수용액으로 pH = 9로 조정했다. 분리된 수성상을 DCM (5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 42%-72%, 8분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-[8-(하이드록시메틸)-1-나프틸]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (62.0 mg, 103 μmol, 47% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 600.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 3.2, 7.2 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 3H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.94 (m, 2H), 4.89 (br t, J = 13.2 Hz, 1H), 4.41 - 3.90 (m, 7H), 3.66 - 3.39 (m, 2H), 3.37 - 3.00 (m, 5H), 3.00 - 2.58 (m, 4H), 2.50 - 2.43 (m, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 3H).
실시예 568
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프- 2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 4-[(3 S )-4- 벤질옥시카보닐 -3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐 -6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. DMAc (250 mL) 중 tert-부틸 2-메틸설파닐-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (20.0 g, 46.6 mmol, 1.00 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (13.3 g, 51.2 mmol, 1.10 eq)의 혼합물에 DIEA (18.1 g, 140 mmol, 24.3 mL, 3 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 50℃로 가열하고 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 300 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (3 × 500 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2- 메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (23.0 g, 42.7 mmol, 92% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 539.
단계 B: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-(2- 메틸설파닐 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도 [3,4- d ]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (200 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (23.0 g, 42.7 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 192 mL, 18.0 eq)을 첨가했다. 20℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (200 mL)에 용해시켰다. pH를 포화 Na2CO3 용액으로 8-9로 조정하고 그 다음 물 (20.0 mL)로 희석했다. 분리된 수층을 에틸 아세테이트 (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8-테트라하이드로피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16.1 g, 34.5 mmol, 81% 수율, 94% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.42 - 7.33 (m, 5H), 5.25 - 5.12 (m, 2H), 4.66 (br s, 1H), 4.11 - 4.04 (m, 1H), 4.03 - 3.90 (m, 3H), 3.84 (br d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.34 - 3.17 (m, 2H), 3.11 (td, J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 2H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.75 - 2.56 (m, 3H), 2.50 (s, 3H).
단계 C: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- 메틸설파닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (350 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (16.1 g, 36.7 mmol, 1.00 eq) 및 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (10.6 g, 47.7 mmol, 1.30 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (6.72 g, 7.34 mmol, 0.20 eq), Xantphos (8.50 g, 14.7 mmol, 0.40 eq) 및 Cs2CO3 (35.9 g, 110 mmol, 3.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 90℃에서 8 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (1 × 100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 150 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (1 × 300 mL) 및 염수 (1 × 300 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/1 내지 2/1)로 정제하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (15.3 g, 26.5 mmol, 72% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.68 - 7.55 (m, 2H), 7.40 - 7.28 (m, 7H), 7.22 (s, 2H), 5.22 - 5.09 (m, 2H), 4.64 (br s, 1H), 4.27 - 4.14 (m, 1H), 4.05 - 3.84 (m, 2H), 3.83 - 3.68 (m, 1H), 3.55 - 3.30 (m, 2H), 3.18 - 3.03 (m, 3H), 3.01 - 2.79 (m, 5H), 2.78 - 2.50 (m, 3H), 2.45 (d, J = 4.8 Hz, 3H).
단계 D: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- 메틸설피닐 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. EtOAc (200 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- 메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (13.3 g, 23.0 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 m-CPBA (4.67 g, 23.0 mmol, 85% 순도, 1.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 첨가했다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 Na2S2O3 (100 mL)로 0℃에서 켄칭했다. 분리된 유기층을 물 (1 × 100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)로 정제했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (9.60 g, 15.3 mmol, 67% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 595.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.25 - 5.17 (m, 2H), 4.67 (br s, 1H), 4.48 - 4.21 (m, 2H), 4.10 - 3.88 (m, 2H), 3.66 - 3.46 (m, 2H), 3.42 - 3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.83 (m, 6H), 2.81 - 2.60 (m, 1H), 2.81 - 2.60 (m, 3H).
단계 E: tert -부틸 (2 S )-4-[2-[[(2 S )-1- tert - 부톡시카보닐피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)- 2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1.00 eq) 및 tert-부틸 (2S)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (338 mg, 1.68 mmol, 2.00 eq)의 혼합물에 t-BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 염산 (1 M) 2 mL의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 물 (10 mL)을 첨가했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (30 mL × 1) 및 염수 (30 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 0/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[2-[[(2S)-1-tert- 부톡시카보닐피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (330 mg, 473 μmol, 56% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 5.27 - 5.14 (m, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.42 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 3.73 (m, 3H), 3.58 - 3.29 (m, 5H), 3.25 - 2.88 (m, 8H), 2.86 - 2.51 (m, 3H), 2.03 - 1.76 (m, 4H), 1.44 (d, J = 4.8 Hz, 9H).
단계 F: tert -부틸 (2 S )-2-[[4-[(3 S )-3-( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-7-(8- 메틸 -1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. MeOH (15 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[2-[[(2S)-1-tert-부톡시카보닐피롤리딘-2- 일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (330 mg, 473 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NH3ㆍMeOH (15 mL, 20% 순도), Pd(OH)2/C (80 mg, 20% 순도)을 N2 하에서 한번에 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거하고 여과물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-7-(8-메틸-1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (200 mg, 335 μmol, 71% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
단계 G: tert -부틸 (2 S )-2-[[4-[(3 S )-3-(시아노메틸)-4-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-1-일]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. DCM (15.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-7-(8 -메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (190 mg, 318 μmol, 1.00 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (42.9 mg, 477 μmol, 1.50 eq)의 혼합물에 DIEA (123 mg, 954 μmol, 166 uL, 3.00 eq) 및 HATU (181 mg, 477 μmol, 1.50 eq)을 0℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석했다. 분리된 유기층을 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM: MeOH = 50:1 내지 5:1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-1-일]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (210 mg, 292 μmol, 92% 수율, 93% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 670.
단계 H: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 - 2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (5.00 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-(2-플루오로프로프- 2-에노일)피페라진-1-일]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (210 mg, 314 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 TFA (1.07 g, 9.41 mmol, 696 μL, 30.0 eq)을 20℃에서 N2 하에서 한번에 첨가했다. 20℃에서 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150 × 30mm × 4μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 20%-50%,5분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프- 2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (75.5 mg, 122 μmol, 39% 수율, 99.8% 순도, FA)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 570.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 2H), 6.49 - 5.98 (m, 1H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.42 (m, 2H), 4.36 - 3.87 (m, 5H), 3.86 - 3.67 (m, 1H), 3.64 - 3.37 (m, 2H), 3.35 - 3.26 (m, 2H), 3.25 - 2.94 (m, 4H), 2.92 - 2.70 (m, 5H), 2.66 - 2.51 (m, 1H), 2.18 - 1.81 (m, 4H).
실시예 569
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4- [7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
(5 S )-5-( 테트라하이드로피란 -2- 일옥시메틸 ) 피롤리딘 -2-온. DCM (80.0 mL) 중 (5S)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-2-온 (5.00 g, 43.4 mmol, 1.00 eq) 및 DHP (3.65 g, 43.4 mmol, 3.97 mL, 1.00 eq)의 혼합물에 TsOH.H2O (826 mg, 4.34 mmol, 0.10 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 12시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 염수 (30.0 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 0:1)로 정제했다. 화합물 (5S)-5-(테트라하이드로피란-2- 일옥시메틸)피롤리딘-2-온 (5.70 g, 28.6 mmol, 66% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 6.36 - 6.01 (m, 1H), 4.66 - 4.47 (m, 1H), 3.92 - 3.71 (m, 2.5H), 3.64 - 3.43 (m, 2H), 3.24 (dd, J = 8.0, 9.6 Hz, 0.5H), 2.42 - 2.10 (m, 3H), 1.86 - 1.64 (m, 3H), 1.62 - 1.48 (m, 4H).
(5 S )-1- 메틸 -5-( 테트라하이드로피란 -2- 일옥시메틸 ) 피롤리딘 -2-온. DMF (60.0 mL) 중 (5S)-5-(테트라하이드로피란-2- 일옥시메틸)피롤리딘-2-온 (5.60 g, 28.1 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NaH (1.35 g, 33.7 mmol, 60% 순도, 1.20 eq)을 -40℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 CH3I (6.58 g, 46.4 mmol, 2.89 mL, 1.65 eq)을 첨가하고 0℃에서 2.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 포화 NaHSO3 수용액 (30.0 mL)의 첨가로 켄칭하고 EA (3 × 50.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 0/1)로 정제했다. 화합물 (5S)-1-메틸-5-(테트라하이드로피란-2-일옥시메틸)피롤리딘-2-온 (4.40 g, 20.6 mmol, 73% 수율)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 4.59 (td, J = 3.2, 13.6 Hz, 1H), 3.93 - 3.73 (m, 2H), 3.63 - 371 (m, 1H), 3.57 - 3.44 (m, 2H), 2.88 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.54 - 2.40 (m, 1H), 2.38 - 2.24 (m, 1H), 2.07 -2.20 (m, 1H), 1.93 - 1.53 (m, 7H).
(5 S )-5-( 하이드록시메틸 )-1- 메틸 - 피롤리딘 -2-온. DCM (20.0 mL) 중 (5S)-1-메틸-5-(테트라하이드로피란-2- 일옥시메틸)피롤리딘-2-온 (2.20 g, 10.3 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 TFA (23.5 g, 206 mmol, 15.3 mL, 20.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 (5S)-5-(하이드록시메틸)-1-메틸-피롤리딘-2-온 (2.60 g, 조물질)을 적색 오일로서 수득했다.
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S ) -1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. THF (30.0 mL) 중 (5S)-5-(하이드록시메틸)-1-메틸-피롤리딘-2 -온 (543 mg, 4.20 mmol, 5.00 eq)의 혼합물에 t-BuONa (808 mg, 8.41 mmol, 10.0 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1.00 eq)을 첨가하고 15℃로 가온시키고 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (50 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (10.0 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (50.0 mL × 2)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S) -1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (162 mg, 243 μmol, 29% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 660.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (2.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 197 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 NH3ㆍMeOH (1.00 mL, 20% 순도) 및 Pd/C (35.0 mg, 10% 순도)을 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (70.0 mg, 조물질)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )-4- [7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EA (1.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60.0 mg, 114 μmol, 1.00 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (20.6 mg, 228 μmol, 2.00 eq)의 혼합물에 TEA (92.4 mg, 913 μmol, 127 uL, 8.00 eq), T3P (218 mg, 342 μmol, 204 uL, 50% 순도, 3.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (5.00 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (10.0 mL × 1) 및 염수 (10.0 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 × 25 mm × 5 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN];B%: 42%-72%,10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4- [7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (26.8 mg, 43.9 μmol, 2개의 단계 26% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.63 (m, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 4.25 - 4.00 (m, 3H), 3.97 - 3.71 (m, 3H), 3.59 - 3.35 (m, 2H), 3.29 - 2.98 (m, 4H), 2.91 (d, J = 5.6 Hz, 8H), 2.69 - 2.58 (m, 1H), 2.57 - 2.45 (m, 1H), 2.42 - 2.29 (m, 1H), 2.28 - 2.14 (m, 1H), 2.06 - 1.91 (m, 1H).
실시예 570
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
(2 R )-2-( tert - 부톡시카보닐아미노 )-3-[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시 -프로판산. DMF (270 mL) 중 (2R)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)-3-하이드록시-프로판산 (27 g, 132 mmol, 1 eq)의 용액에 이미다졸 (45.4 g, 667 mmol, 5.07 eq)을 0℃에서 질소 하에서 첨가했다. 용액이 맑게 된 후, TBDPSCl (90.4 g, 329 mmol, 84.5 mL, 2.5 eq)을 첨가했다. 반응을 15℃로 가온시켰다. 15℃에서 24시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고, 에테르 (250 ml)로 희석하고 포화 NaCl (100 mL)에 부었다. 분리된 유기층을 10% HC1 (25 mL)와 포화 NaCl (50 mL)의 혼합물로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축했다. 잔류물을 아세토니트릴로 희석하고 그 다음 백색 침전물이 형성되었다. 침전물을 여과하고 필터 케이크를 진공 하에서 건조시켜 (2R)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)-3-[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시-프로판산 (45 g, 90 mmol, 69% 수율, 89% 순도)을 백색 고체로서 수득했다.
tert -부틸 N -[(1 R )-1-[[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시메틸 ]-2-(2,2-디메틸-4,6- 디옥소 -1,3-디옥산-5-일)-2-옥소-에틸]카바메이트. DCM (400 mL) 중 (2R)-2-(tert-부톡시카보닐아미노)-3-[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시-프로판산 (24 g, 54.1 mmol, 1 eq)의 교반 용액에 0℃에서 2,2-디메틸-1,3-디옥산-4,6-디온 (8.19 g, 56.8 mmol, 1.05 eq) 및 DMAP (16.0 g, 131 mmol, 2.42 eq), 이어서 BOP (25.1 g, 56.8 mmol, 1.05 eq)을 소량씩 첨가했다. 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반했다. 완료 시, 혼합물을 1N KHSO4 (2 × 360 mL)로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 실온에서 농축하여 tert-부틸 N-[(1R)-1-[[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시메틸]-2-(2,2-디메틸-4,6-디옥소-1,3-디옥산-5-일)-2-옥소-에틸]카바메이트 (35 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다.
tert -부틸 (2 R )-2-[[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시메틸]- 3,5- 디옥소 - 파이롤리딘 -1-카복실레이트. tert-부틸 N-[(1R)-1-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-2-(2,2- 디메틸-4,6-디옥소-1,3-디옥산-5-일)-2-옥소-에틸]카바메이트 (35 g, 61.43 mmol, 1 eq)을 EtOAc (600 mL)에서 77 ℃에서 1시간 동안 환류시켰다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2R)-2-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-3,5-디옥소-파이롤리딘-1-카복실레이트 (30 g, 조물질)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
tert -부틸 ( 2 R ,3 R )-2-[[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시메틸 ]-3- 하이드록시 -5-옥소- 파이롤리딘 -1- 카복실레이트. tert-부틸 (2R)-2-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-3,5-디옥소- 파이롤리딘-1-카복실레이트 (30 g, 64.2 mmol, 1 eq)을 DCM (480 mL)에 0℃에서 용해시키고, 이어서 NaBH4 (3.78 g, 99.9 mmol, 1.56 eq)을 소량씩 첨가했다. 현탁액을 18℃에서 16시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (300 ml)에 부었고 고체가 남아 있지 않을 때까지 교반했다. 분리된 유기층을 물 (150 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 10/1 내지 2/1) 이어서 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고, 그 다음 DCM (2 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2R,3R)-2-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-3-하이드록시-5-옥소-파이롤리딘-1- 카복실레이트 (2.13 g, 3.99 mmol, 3개의 단계 7.6% 수율, 88% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.72 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 2H), 7.59 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.39 (m, 6H), 5.67 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.57 - 4.46 (m, 1H), 4.09 - 3.97 (m, 2H), 3.83 (dd, J = 2.8, 10.0 Hz, 1H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 0.93 (s, 9H).
tert -부틸 ( 2 R ,3 R )-2-[[ tert -부틸 (디페닐)실릴] 옥시메틸 ]-5-옥소-3- 테트라하이드로피란 -2-일옥시-파이롤리딘-1-카복실레이트. DCM (50 mL) 중 tert-부틸 (2R,3R)-2-[[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시메틸]-3-하이드록시-5-옥소-파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.55 g, 5.43 mmol, 1 eq)의 용액에 DHP (913 mg, 10.9 mmol, 993 μL, 2 eq), 이어서 TsOHㆍH2O (103 mg, 543 μmol, 0.1 eq)을 20℃에서 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액 (10 mL)로 켄칭하고, 물 (5 mL)로 희석하고 DCM (2 × 40 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (PE/EtOAc 15/1 내지 7/1)로 정제하여 tert-부틸 (2R,3R)-2-[[tert-부틸 (디페닐)실릴]옥시메틸]-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.62 g, 4.64 mmol, 85% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 (td, J = 1.2, 7.6 Hz, 2H), 7.66 (td, J = 1.6, 8.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.34 (m, 6H), 4.75 - 4.68 (m, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.20 - 4.17 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (m, 2H), 3.87 - 3.74 (m, 1H), 3.60 - 3.50 (m, 1H), 3.23 - 3.01 (m, 1H), 2.76 (ddd, J = 8.8, 10.4, 16.8 Hz, 1H), 2.01 - 1.80 (m, 2H), 1.79 - 1.62 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.02 (d, J = 8.0 Hz, 9H).
( 4 R ,5 R )-5-[[ tert -부틸(디페닐) 실릴] 옥시메틸 ]-4-테 트라하이드로피란 -2- 일옥시 -피롤리딘-2-온. MeCN (50 mL) 중 tert-부틸 (2R,3R)-2-[[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시메틸]-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.62 g, 4.73 mmol, 1 eq)의 용액에 Mg(ClO4)2 (211 mg, 946 μmol, 95.6 μL, 0.2 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 70℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 (4R,5R)-5-[[tert-부틸(디페닐) 실릴]옥시메틸]-4-테트라하이드로피란-2- 일옥시-피롤리딘-2-온 (1.14 g, 2.29 mmol, 48% 수율, 91% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 454.
( 4 R ,5 R )-5-[[ tert - 부틸(디페닐)실릴 ] 옥시메틸 ]-1- 메틸 -4- 테트라하이드로피란 -2- 일옥시 -피롤리딘-2-온. THF (20 mL) 중 (4R,5R)-5-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-4-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-온 (0.95 g, 2.09 mmol, 1 eq)의 용액에 NaH (168 mg, 4.19 mmol, 광유 중 60% 순도, 2 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 그 다음 CH3I (594 mg, 4.19 mmol, 261 uL, 2 eq)을 첨가했다. 0℃에서 추가 0.5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 × 30 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 (4R,5R)-5-[[tert-부틸(디페닐)실릴]옥시메틸]-1-메틸-4-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-온 (820 mg, 1.67 mmol, 80% 수율, 95% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 - 7.70 (m, 2H), 7.70 - 7.65 (m, 2H), 7.48 - 7.36 (m, 6H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.59 - 4.48 (m, 1H), 4.07 - 3.77 (m, 2H), 3.77 - 3.66 (m, 1H), 3.65 - 3.56 (m, 1H), 3.55 - 3.40 (m, 1H), 2.89 - 2.79 (m, 3H), 2.79 - 2.53 (m, 2H), 1.90 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.53 (m, 4H), 1.09 - 1.03 (m, 9H).
( 4 R ,5 R )-5-( 하이드록시메틸 )-1- 메틸 -4- 테트라하이드로피란 -2- 일옥시 - 피롤리딘 -2-온. DMSO (10 mL) 중 (4R,5R)-5-[[tert-부틸(디페닐)실릴] 옥시메틸]-1-메틸-4-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-온 (1.07 g, 2.29 mmol, 1 eq)의 혼합물에 CsF (1.04 g, 6.86 mmol, 253 μL, 3 eq)을 첨가했다. 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 50/1 내지 5/1)로 정제하여 (4R,5R)-5-(하이드록시메틸)-1-메틸-4-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-온 (380 mg, 1.49 mmol, 65% 수율, 90% 순도)을 황색 오일로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 4.80 - 4.52 (m, 2H), 3.98 - 3.81 (m, 3H), 3.72 - 3.61 (m, 1H), 3.60 - 3.48 (m, 1H), 2.87 (d, J = 9.6 Hz, 3H), 2.67 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.60 - 2.46 (m, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.67 - 1.51 (m, 4H).
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[( 2 R ,3 R )-1- 메틸 -5-옥소- 3- 테트라하이드로피란 -2- 일옥시 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 471 μmol, 1 eq) 및 (4R,5R)-5-(하이드록시메틸)-1-메틸-4-테트라하이드로피란-2-일옥시- 피롤리딘-2-온 (140 mg, 612 μmol, 1.3 eq)의 용액에 t-BuONa (90.5 mg, 942 μmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R,3R)-1-메틸-5-옥소- 3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 258 μmol, 55% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 760.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.84 - 4.43 (m, 5H), 4.30 - 3.70 (m, 8H), 3.59 - 3.34 (m, 3H), 3.25 - 2.98 (m, 4H), 2.96 - 2.90 (m, 6H), 2.81 - 2.56 (m, 4H), 1.83 - 1.63 (m, 2H), 1.60 - 1.47 (m, 4H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸)-2-[[(2 R ,3 R )-1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (3 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2R,3R)-1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 197 μmol, 1 eq)의 용액에 NH3/MeOH (3 mL, 20% 순도), Pd/C (75 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2R,3R)-1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 144 μmol, 73% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 626.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 R ,3 R )-3- 하이드록시 -1- 메틸 -5-옥소- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (100 μL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R,3R)-1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 160 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (273 mg, 2.40 mmol, 177 μL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 DCM (5 mL)로 희석하고 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH = 8로 염기성화했다. 분리된 수성층을 EtOAc (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80 mg, 126 μmol, 79% 수율, 85% 순도)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다.
단계 D: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2 R ,3 R )-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EA (3 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80 mg, 148 μmol, 1 eq), TEA (44.8 mg, 443 μmol, 61.7 μL, 3 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (26.6 mg, 295 μmol, 2 eq)의 용액에 T3P (141 mg, 222 μmol, 132 uL, EtOAc 중 50% 순도, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (5 mL)으로 켄칭하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 내지 10/1) 이어서 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 34%-64%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (11.8 mg, 19.1 μmol, 13% 수율, 99.3% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 614.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 1H), 7.41 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.27 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.86 (dd, J = 5.6, 12.0 Hz, 1H), 4.79 (dd, J = 5.6, 12.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.49 (m, 2H), 4.39 - 3.94 (m, 3H), 3.89 - 3.77 (m, 2H), 3.76 - 3.63 (m, 1H), 3.61 - 3.44 (m, 2H), 3.38 - 2.99 (m, 4H), 2.91 (d, J = 7.2 Hz, 6H), 2.89 - 2.70 (m, 2H), 2.70 - 2.55 (m, 2H), 2.46 (dt, J = 5.2, 16.0 Hz, 1H).
실시예 571
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일) -2-((S)-피롤리딘-2-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-[(7- 벤질 -4- 메톡시 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -2-일) 옥시메틸 ] 파이롤리딘 -1- 카복실레이트. 톨루엔 (80.0 mL) 중 7-벤질-2-클로로-4-메톡시-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (4.00 g, 13.8 mmol, 1.00 eq) 및 tert-부틸 (2S)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (5.56 g, 27.6 mmol, 2.00 eq)의 용액에 BINAP (1.72 g, 2.76 mmol, 0.20 eq), Pd(OAc)2 (310 mg, 1.38 mmol, 0.10 eq) 및 Cs2CO3 (13.5 g, 41 mmol, 3.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 110℃에서 8시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 H2O (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (200 mL)로 희석했다. 혼합물을 수성 HCl (2N)로 pH~3으로 산성화했다. 수성상을 분리하고 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 1/1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-[(7-벤질-4-메톡시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일) 옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (3.80 g, 8.26 mmol, 60% 수율, 99% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 455.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.37 - 7.27 (m, 5H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.25 - 4.16 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.43 - 3.33 (m, 2H), 2.76 - 2.72 (m, 2H), 2.62 - 2.57 (m, 2H), 2.04 - 1.90 (m, 3H), 1.85 - 1.76 (m, 1H), 1.61 - 1.54 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (2 S )-2-[(4- 메톡시 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도 [3,4- d ] 피리미딘-2-일)옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. 메탄올 (100 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[(7-벤질-4-메톡시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (3.80 g, 8.36 mmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd(OH)2/C (1.00 g, 10.3 mmol, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 H2 (45 Psi) 하에서 40℃에서 24시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-2-[(4-메톡시-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d] 피리미딘-2-일)옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.70 g, 7.17 mmol, 86% 수율, 97% 순도)을 황색 오일로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 365.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 4.54 - 4.35 (m, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.48 (s, 1H), 3.43 - 3.33 (m, 2H), 3.13 - 3.04 (m, 2H), 2.56 - 2.46 (m, 2H), 2.10 - 1.93 (m, 3H), 1.87 - 1.82 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).
단계 C: tert -부틸 (2 S )-2-[[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-4- 메톡시 -6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. 톨루엔 (50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[(4-메톡시-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.5 g, 6.86 mmol, 1.0 eq) 및 1-브로모-8-클로로-나프탈렌 (3.31 g, 13.7 mmol, 2.0 eq)의 용액에 Pd2(dba)3 (1.26 g, 1.37 mmol, 0.2 eq), Cs2CO3 (5.59 g, 17.2 mmol, 2.5 eq), 및 RuPhos (1.28 g, 2.74 mmol, 0.4 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 N2 하에서 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 포화 염수 (1 × 80 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 3/1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)-4-메톡시-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.3 g, 2.46 mmol, 36% 수율, 99% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 525.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.60 - 4.37 (m, 1H), 4.34 - 4.16 (m, 3H), 4.03 (s, 3H), 3.87 (br d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.63 - 3.57 (m, 1H), 3.45 - 3.30 (m, 2H), 3.21 - 3.10 (m, 1H), 2.99 (br s, 1H), 2.62 (br d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.07 - 1.79 (m, 4H), 1.45 (s, 9H).
단계 D: tert -부틸 (2 S )-2-[[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-4- 하이드록시 -6,8 -디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. DMF (15 mL) 중 NaH (168 mg, 4.19 mmol, 60% 순도, 2.0 eq)의 용액에 EtSH (391 mg, 6.29 mmol, 465 μL, 3.0 eq)을 15℃에서 나누어서 첨가했다. 0.5시간 동안 교반한 후, DMF (7.0 mL) 중 tert-부틸(2S)-2-[[7-(8-클로로 -1-나프틸)-4-메톡시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (1.1 g, 2.10 mmol, 1.0 eq)의 용액을 혼합물에 첨가하고, 그 다음 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 빙수 (10 mL)에 부었고, 그 다음 혼합물을 1N HCl 수성물로 pH 7~8로 조정하고, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 디클로로메탄 (10 mL)로 용해시키고, 포화 염수 (2 × 15 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=10:1)로 정제하여 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)-4-하이드록시-6,8 -디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (670 mg, 1.28 mmol, 61% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 511.
단계 E: tert -부틸(2 S )-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸) -4-하이드록시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (640 mg, 1.25 mmol, 1.0 eq)의 용액에 TEA (380 mg, 3.76 mmol, 523 μL, 3.0 eq),4A 분자체 (500 mg), 및 Tf2O (530 mg, 1.88 mmol, 310 μL, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 -40℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 후, 물 (10 mL)을 -40℃에서 나누어서 첨가하고, 그 다음 반응 혼합물을 15℃로 가온시키고 유기층을 분리하고 포화 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 내지 3/1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸(2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)-4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (400 mg, 616 μmol, 49% 수율, 99% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 643.
단계 F: tert -부틸 (2 S )-2-[[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -4-[(3 S )-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. DMAC (4.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)- 4-(트리플루오로메틸설포닐옥시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (400 mg, 622 μmol, 1.0 eq)의 용액에 2-[(2S)-피페라진-2-일]아세토니트릴 (86.5 mg, 622 μmol, 1.0 eq) 및 DIEA (161 mg, 1.24 mmol, 217 μL, 2.0 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 빙수 (10 mL)에 부었고, 침전된 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (15 mL)로 용해시키고, 유기층을 포화 염수 (2 × 15 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (0.1% FA 조건, 20%-물 중 30% MeCN)로 정제하고, 수득된 생성물을 NaHCO3 고체로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성물을 에틸 아세테이트 (2 × 15 mL)로 추출하고, 유기층을 포화 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸) -4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (300 mg, 480 μmol, 77% 수율, 99% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 618.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 (br t, J = 6.2 Hz, 1H), 4.71 - 4.31 (m, 2H), 4.29 - 4.06 (m, 3H), 3.95 - 3.69 (m, 2H), 3.63 - 3.28 (m, 4H), 3.26 - 2.82 (m, 7H), 2.72 - 2.46 (m, 3H), 2.02 - 1.79 (m, 4H), 1.45 (s, 9H).
단계 G: tert -부틸(2 S )-2-[[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-4- [(3 S )-3-(시아노메틸)-4-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트. 에틸 아세테이트 (1.5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸) -4-[(3S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (100 mg, 162 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (29.1 mg, 324 μmol, 2.0 eq)의 용액에 TEA (131 mg, 1.29 mmol, 180 μL, 8.0 eq) 및 T3P (309 mg, 485 μmol, 289 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (10 ml)을 첨가하고, 그 다음 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 1/1)로 정제했다. 생성물 tert-부틸(2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)-4- [(3S)-3-(시아노메틸)-4-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (110 mg, 조물질)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 690.
단계 H: 2-(( S )-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일) -2-(( S )-피롤리딘-2-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 디클로로메탄 (0.5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-[[7-(8-클로로-1-나프틸)- 4-[(3S)-3-(시아노메틸)-4-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-2-일]옥시메틸]파이롤리딘-1-카복실레이트 (90.0 mg, 130.40 μmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL, 51.8 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (10 mL)로 용해시키고, 포화 수성 Na2CO3 (1 × 10 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트: 메탄올=10:1), 그 다음 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 20%-50%, 10분)으로 정제하고, 수득된 생성물을 농축시키고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일) -2-((S)-피롤리딘-2-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (24.7 mg, 38.1 μmol, 29% 수율, 98% 순도, FA)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 590.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.89 - 4.52 (m, 1H), 4.64 - 4.45 (m, 2H), 4.42 - 4.23 (m, 2H), 4.17 - 3.92 (m, 4H), 3.89 - 3.78 (m, 2H), 3.51 - 3.42 (m, 1H), 3.35 - 3.05 (m, 5H), 2.95 - 2.73 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 1H), 2.21 - 1.84 (m, 4H).
실시예 572
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. THF (20.0 mL) 중 (5S)-5-(하이드록시메틸)-1-메틸-피롤리딘-2-온 (556 mg, 4.30 mmol, 5.00 eq)의 혼합물에 t-BuONa (827 mg, 8.60 mmol, 10.0 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 860 μmol, 1.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃로 가온시키고 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (50.0 ml)로 희석하고 물 (30 mL × 2)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% TFA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (10.0 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (50.0 mL × 3)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (125 mg, 193 μmol, 22% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.45 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 1H), 7.23 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.70 - 4.31 (m, 3H), 4.10 - 3.82 (m, 4H), 3.65 - 3.51 (m, 1H), 3.46 - 2.99 (m, 5H), 2.98 - 2.82 (m, 3H), 2.79 - 2.37 (m, 5H), 2.22 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.93 - 1.59 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸 -5-옥소- 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.50 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 155 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4 M, 967 μL, 25.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (10.0 mL)로 용해시키고 포화 NaHCO3 용액 (3.00 mL)으로 pH = 8로 염기성화하고, 에틸 아세테이트 (5.00 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10.0 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소- 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80.0 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 546.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. EA (1 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60.0 mg, 110 μmol, 1.00 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (19.8 mg, 220 μmol, 2.00 eq)의 혼합물에 TEA (89.0 mg, 879 μmol, 122 μL, 8.00 eq), T3P (210 mg, 330 μmol, 196 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 3.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 물 (10 mL × 1) 및 염수 (10 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 × 25mm × 5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 10분)로 정제했다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (11.3 mg, 18.2 umol, 17% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득하고 LCMS [ESI, M+1]: 618.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.46 (td, J = 8.0, 10.4 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 5.52 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.92 (br s, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.27 - 3.77 (m, 5H), 3.61 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.46 (br d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.36 - 2.94 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.79 (m, 1H), 2.64 - 2.48 (m, 2H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.28 - 2.17 (m, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H).
실시예 573
2-[(2S) -4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[( 2 R ,3 R ) -1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 482 μmol, 1 eq) 및 (4R,5R)-5-(하이드록시메틸)-1-메틸-4-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-온 (144 mg, 626 μmol, 1.3 eq)의 용액에 t-BuONa (92.6 mg, 964 μmol, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,3R) -1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 345 μmol, 72% 수율, 92% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 746.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.57 (m, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.41 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 4.88 - 4.69 (m, 1H), 4.68 - 4.47 (m, 4H), 4.46 - 4.35 (m, 1H), 4.11 - 3.74 (m, 6H), 3.65 - 3.48 (m, 2H), 3.44 - 2.99 (m, 5H), 2.96 (dd, J = 2.8, 8.4 Hz, 3H), 2.91 - 2.51 (m, 5H), 1.81 - 1.64 (m, 2H), 1.52 (s, 13H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸)-2-[[(2 R ,3 R )-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (0.15 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,3R) -1-메틸-5-옥소-3-테트라하이드로피란-2-일옥시-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 268 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (458 mg, 4.02 mmol, 298 μL, 15 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 DCM (5 mL)로 희석하고 포화 중탄산나트륨 수용액으로 pH = 8로 염기성화했다. 분리된 수성층을 EtOAc (5 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1- 나프틸)-2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 230 μmol, 86% 수율, 86% 순도)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 562.
단계 C: 2-[(2 S ) -4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 R ,3 R )-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (4 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,3R)-3- 하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 267 umol, 1 eq), TEA (81.0 mg, 801 umol, 111 uL, 3 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (48.1 mg, 534 umol, 2 eq)의 용액에 T3P (255 mg, 400 umol, 238 uL, EtOAc 중 50% 순도, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (5 mL)로 켄칭하고 EtOAc (2 × 10 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 내지 20/1) 이어서 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 33%-63%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S) -4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,3R)-3-하이드록시-1-메틸-5-옥소-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (22.0 mg, 34.5 umol, 13% 수율, 99.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 634.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.77 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 4.4, 8.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.46 (dt, J = 6.0, 8.0 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 1H), 5.54 - 5.33 (m, 1H), 5.27 (dd, J = 2.8, 17.2 Hz, 1H), 4.88 (dd, J = 1.6, 12.0 Hz, 1H), 4.80 (dd, J = 6.0, 12.0 Hz, 1H), 4.64 - 4.48 (m, 2H), 4.47 - 3.94 (m, 4H), 3.91 - 3.65 (m, 3H), 3.64 - 3.43 (m, 2H), 3.37 - 2.98 (m, 4H), 2.91 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 2.89 - 2.76 (m, 1H), 2.70 - 2.53 (m, 2H), 2.46 (dt, J = 5.2, 16.4 Hz, 1H).
실시예 574
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘- 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2- [[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (12.0 mL) 중 [(2S,4R)-4-플루오로- 1-메틸-피롤리딘- 2-일]메탄올 (275 mg, 2.06 mmol, 2.0 eq)의 혼합물에 t-BuONa (198 mg, 2.06 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.03 mmol, 1.0 eq)을 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (15.0 mL)을 첨가하고, 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1%TFA, 30%-50% MeCN)로 정제하고, 수득된 생성물을 NaHCO3 고체로 pH=8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (2 × 15 mL)로 추출하고, 유기층을 포화 염수 (20.0 mL)로 세정하고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (510 mg, 769 μmol, 75% 수율, 98% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 650.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.80 - 7.72 (m, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.29 - 5.07 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 2H), 4.30 - 4.17 (m, 1H), 4.06 - 3.76 (m, 3H), 3.65 - 3.47 (m, 2H), 3.41 - 2.86 (m, 7H), 2.84 - 2.45 (m, 7H), 2.40 - 2.24 (m, 1H), 2.04 - 1.86 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (5.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 769 μmol, 1.0 eq)의 용액에 4N HClㆍ디옥산 (5.0 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 여과하고, 고체를 디클로로메탄 (15.0 mL)로 용해시키고, 유기층을 포화 염수 (1 × 15 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (360 mg, 635 μmol, 85% 수율, 97% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 550.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[( 2 S ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 - 2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]-1-(2- 플루오로프로프 -2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (120 mg, 218 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (39.3 mg, 436 μmol, 2.0 eq)의 용액에 TEA (177 mg, 1.75 mmol, 243 μL, 8.0 eq) 및 T3P (416 mg, 654 μmol, 389 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물에 포화 염수 (10.0 mL)을 첨가하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트 / 메탄올=20/1)로 정제하고, 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 10 min]; B%: 45%-75%, 10분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘- 2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (50.9 mg, 81.0 μmol, 37% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 622.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.30 - 5.07 (m, 2H), 5.01 - 4.66 (m, 1H), 4.53 - 4.35 (m, 2H), 4.29 - 3.98 (m, 3H), 3.96 - 3.78 (m, 2H), 3.73 - 3.33 (m, 3H), 3.32 - 2.98 (m, 5H), 2.94 - 2.71 (m, 2H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 2.51 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 1H), 2.08 - 1.87 (m, 1H).
실시예 575
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)- 2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1-나프틸)-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (6.0 mL) 중 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (297 mg, 2.58 mmol, 2.50 eq)의 용액에 t-BuONa (198 mg, 2.06 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 그 다음 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.03 mmol, 1.0 eq)을 상기 액체에 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 또 다른 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (20.0 mL)을 첨가하고 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1% FA, 0-60 % MeCN)로 정제하여 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로 -1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (430 mg, 680 μmol, 66% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 2H), 4.08 - 3.75 (m, 4H), 3.65 - 3.50 (m, 1H), 3.39 - 3.02 (m, 5H), 3.00 - 2.86 (m, 1H), 2.81 - 2.64 (m, 4H), 2.62 - 2.46 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (2.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 632 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4.0 M, 2.0 mL, 12.6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축했다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 (10.0 mL)로 pH~7로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (240 mg, 451 μmol, 71% 수율)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 532.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )- 2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80.0 mg, 150 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (27.1 mg, 301 μmol, 2.0 eq) 및 TEA (122 mg, 1.20 mmol, 167 μL, 8.0 eq)의 용액에 T3P (287 mg, 451 umol, 268 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 HCl (12.0 M, 2.0 mL의 물 중 60.0 uL)로 켄칭했다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 pH ~ 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN]; B%: 25%-45%, 8분)로 정제하고, 그 다음 농축했다. 수성층을 포화 수성 NaHCO3로 pH ~ 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)- 2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (35.9 mg, 57.5 μmol, 38% 수율, 96.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 604.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.78 - 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 5.30 - 5.21 (m, 1H), 5.04 - 4.75 (m, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 2H), 4.16 - 3.96 (m, 2H), 3.89 - 3.75 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.51 - 3.32 (m, 1H), 3.30 - 2.98 (m, 4H), 2.96 - 2.67 (m, 4H), 2.66 - 2.46 (m, 4H), 2.37 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 1H).
실시예 576
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4- 메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[( 2 R ,4 R )-4- 메톡시 - 1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.00 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 516 μmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (124 mg, 1.29 mmol, 2.5 eq) 및 [(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘- 2-일]메탄올 (149 mg, 1.03 mmol, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 100/1 내지 10:1)로 정제했다. tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4-메톡시- 1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 265 μmol, 51% 수율, 88% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 662.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 R ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.00 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 302 μmol, 1 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 1.13 mL, 1.00 eq)을 첨가했다. 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축하고 물 (20 mL)로 희석했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (110 mg, 154.60 μmol, 70% 수율, 79% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 다음 단계에서 정제없이 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 562.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[( 2 R ,4 R )-4- 메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2R,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (110 mg, 195 μmol, 1 eq)의 용액에 2-플루오로프로프-2-에노산 (35.3 mg, 391 μmol, 2 eq), T3P (374 mg, 587 μmol, 349 μL, 50% 순도, 3 eq) 및 TEA (158 mg, 1.57 mmol, 218 μL, 8 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (30 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 45% - 75%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R,4R)-4- 메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (17 mg, 26.7 μmol, 14% 수율, 99.8% 순도)을 백색 검으로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 634.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.42 (d, J = 49.2 Hz, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.54 - 4.34 (m, 2H), 4.27 - 4.00 (m, 3H), 3.96 - 3.77 (m, 2H), 3.67 - 3.54 (m, 1H), 3.51 - 3.37 (m, 1H), 3.37 - 2.96 (m, 9H), 2.95 - 2.64 (m, 3H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.52 - 2.27 (m, 5H), 1.91 - 1.74 (m, 1H).
실시예 577
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸)-2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (7.0 mL) 중 [(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2- 일]메탄올 (300 mg, 2.06 mmol, 2.0 eq) 및 t-BuONa (149 mg, 1.55 mmol, 1.50 eq)의 용액에 tert-부틸(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.03 mmol, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (20.0 mL)을 첨가하고 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1 % FA, 0-60 % MeCN)로 정제하여 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1- 나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 652 μmol, 63% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 662.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 4.12 - 3.91 (m, 4H), 3.90 - 3.75 (m, 1H), 3.65 - 3.53 (m, 1H), 3.50 - 3.39 (m, 1H), 3.38 - 3.32 (m, 1H), 3.30 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 3.28 - 3.06 (m, 3H), 3.02 - 2.85 (m, 2H), 2.83 - 2.64 (m, 2H), 2.62 - 2.52 (m, 1H), 2.47 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.35 - 2.29 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1-나프틸)-2-[[(2 S ,4 R )-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (4.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 680 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4 M, 4.0 mL, 23.6 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축했다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 (10.0 mL)로 pH~7로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로 -1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (300 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 562.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2- [[( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 -1- 메틸 - 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. EA (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.0 mg, 160 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (28.8 mg, 320 μmol, 2.0 eq) 및 TEA (130 mg, 1.28 mmol, 178 μL, 8.0 eq)의 용액에 T3P (306 mg, 480 μmol, 286 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (10.0 mL)을 첨가하고 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%,10분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (32.0 mg, 50.3 μmol, 31% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 635.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.10 - 4.70 (m, 1H), 4.52 - 4.34 (m, 2H), 4.27 - 3.80 (m, 6H), 3.69 - 3.54 (m, 1H), 3.50 - 3.37 (m, 2H), 3.30 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 3.28 - 3.02 (m, 4H), 2.98 - 2.68 (m, 3H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 2.47 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.02 - 1.90 (m, 1H).
실시예 578
2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 840 μmol, 1.00 eq)의 용액에 t-BuONa (202 mg, 2.10 mmol, 2.50 eq) 및 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (224 mg, 1.68 mmol, 2.00 eq)을 첨가했다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (340 mg, 502 μmol, 60% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 664.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 S ,4 R )-4- 플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 301 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (30.0 mg, 10% 순도) 및 NH3/MeOH (5.00 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15psi) 하에서 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (159 mg, 294 μmol, 98% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 530.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (140 mg, 264 μmol, 1.00 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (82.5 mg, 793 μmol, 3.00 eq)의 용액에 TEA (160 mg, 1.59 mmol, 220 μL, 6.00 eq) 및 T3P (505 mg, 793 μmol, 472 μL, 50% 순도, 3.00 eq)을 - 70℃에서 첨가했다. 혼합물을 - 70℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (12 N, 2 mL의 물 중 130 μL)로 -70℃에서 켄칭했다. 혼합물을 0℃로 가온시키고 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 8로 염기성화하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v) - ACN]; B%: 45% - 75%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (34.5 mg, 55.8 umol, 21% 수율, 99.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 616.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.74 - 7.62 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.59 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.30 - 4.51 (m, 4H), 4.48 - 4.35 (m, 1H), 4.30 - 3.66 (m, 6H), 3.63 - 3.34 (m, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.53 (m, 4H), 2.50 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.40 - 2.22 (m, 1H), 2.10 - 1.86 (m, 1H) (m, 3H).
실시예 579
2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(2 R )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸- 1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3 eq) 및 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (194 mg, 1.68 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 338 μmol, 40% 수율, 91% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- [[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 372 μmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (30 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (5 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 352 μmol, 95% 수율)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 195 umol, 1 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (40.7 mg, 391 umol, 2 eq)의 용액에 TEA (79.1 mg, 782 umol, 109 uL, 4 eq) 및 T3P (249 mg, 391 umol, 232 uL, EtOAc 중 50% 순도, 2 eq)을 - 70℃에서 첨가했다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (2 mL의 물 중 60 uL (12 M))로 켄칭했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5u; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 25% - 45%, 7.8분)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 52%-79%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (16.6 mg, 27.7 umol, 14% 수율, 99.6% 순도)을 황색 검으로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.07 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.26 - 4.51 (m, 3H), 4.39 (s, 1H), 4.31 - 3.33 (m, 9H), 3.27 - 2.97 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.76 (m, 1H), 2.65 (m, 2H), 2.49 (br d, J=4.6 Hz, 3H), 2.29 (m, 1H), 2.15 - 1.96 (m, 1H), 1.92 - 1.67 (m, 3H).
실시예 580
2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(2 R )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸- 1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3 eq) 및 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (194 mg, 1.68 mmol, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/MeOH = 100/1 내지 10/1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 338 μmol, 40% 수율, 91% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 646.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2- [[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (15 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 372 μmol, 1 eq)의 혼합물에 Pd/C (30 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (5 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 촉매를 여과 제거했다. 여과물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 352 μmol, 95% 수율)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 195 μmol, 1 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (40.7 mg, 391 umol, 2 eq)의 용액에 TEA (79.1 mg, 782 μmol, 109 μL, 4 eq) 및 T3P (249 mg, 391 μmol, 232 μL, EtOAc 중 50% 순도, 2 eq)을 - 70℃에서 첨가했다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 HCl (2 mL의 물 중 60 μL (12 M))로 켄칭했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (20 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Luna C18 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.225% FA) - MeCN]; B%: 25% - 45%, 7.8분)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5μ; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v) - MeCN]; B%: 52%-79%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (16.6 mg, 27.7 μmol, 14% 수율, 99.6% 순도)을 황색 검으로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 628.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.08 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d, J = 16.0 Hz, 1H), 5.26 - 4.54 (m, 3H), 4.40 (m, 1H), 4.31 - 3.69 (m, 7H), 3.61 - 3.36 (m, 3H), 3.30 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.91 - 2.55 (m, 4H), 2.47 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.37 - 2.26 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.01 - 1.89 (m, 1H).
실시예 581
2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(3 R )-1- 메틸피롤리딘 -3-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1- 카복실레이트. 톨루엔 (9 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸 -1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 757 umol, 1 eq) 및 [(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메탄올 (131 mg, 1.13 mmol, 1.5 eq)의 용액에 t-BuONa (145 mg, 1.51 mmol, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반했다. 완료 시, 물 (15 mL)을 첨가하고 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL × 2)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 50 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일] 메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 455 μmol, 60% 수율, 98% 순도)을 핑크색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 5H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.30 - 3.78 (m, 7H), 3.59 - 3.29 (m, 2H), 3.25 - 2.94 (m, 4H), 2.91 (s, 3H), 2.82 - 2.62 (m, 4H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.53 - 2.42 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 1.66 - 1.51 (m, 1H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(3 R )-1- 메틸 피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (4 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 465 μmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (150 mg, 10% 순도), NH3/MeOH (4 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸 피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (210 mg, 369 μmol, 80% 수율, 90% 순도)을 핑크색 고체로서 수득했고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 512.
단계 C: 2-[(2 S )-1-[( E )-4- 플루오로부트 -2- 에노일]- 4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (70 mg, 137 μmol, 1 eq), TEA (41.5 mg, 410 μmol, 57.1 μL, 3 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (28.5 mg, 274 μmol, 2 eq)의 용액에 T3P (131 mg, 205 μmol, 122 μL, EtOAc 중 50% 순도, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 1 M HCl (0.4 mL)로 -40℃에서 켄칭하고 얼음이 남아 있지 않을 때까지 교반했다. 분리된 수성층을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-MeCN]; B%: 20%-50%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 표제 화합물 2-[(2S)-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (13.7 mg, 20.8 μmol, 15% 수율, 97.7% 순도, FA)을 회색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.32 (td, J = 7.6, 11.6 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 - 7.07 (m, 2H), 7.00 - 6.83 (m, 1H), 6.52 (br d, J= 14.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.31 (m, 3H), 4.29 - 3.96 (m, 3H), 3.94 - 3.53 (m, 7H), 3.45 (br d, J = 6.8 Hz, 4H), 3.15 - 2.88 (m, 7H), 2.84 (s, 3H), 2.81 - 2.74 (m, 1H), 2.61 - 2.47 (m, 2H), 2.18 (br s, 1H), 1.85 (br s, 1H).
실시예 582
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)- 4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-(( S )-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-((( 2 S ,4 R )- 4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)-1-(( E )-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 327 μmol, 1.0 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (102 mg, 982 μmol, 3.0 eq)의 용액에 TEA (265 mg, 2.62 mmol, 364 μL, 8.0 eq) 및 T3P (833 mg, 1.31 mmol, 778 μL, 50% 순도, 4.0 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 -65℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 -65℃에서 2 N HCl으로 pH~7로 켄칭하고, 그 다음 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN]; B%: 50%-80%, 8분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)- 4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (72.2 mg, 113 μmol, 34% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 637.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.79 - 7.73 (m, 1H), 7.62 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 1H), 6.59 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.29 - 5.03 (m, 3H), 4.54 - 4.52 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.30 - 3.78 (m, 5H), 3.76 - 3.35 (m, 3H), 3.32 - 2.96 (m, 5H), 2.91 - 2.54 (m, 4H), 2.51 (d, J = 3.2 Hz, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 1H), 2.08 - 1.86 (m, 1H).
실시예 583
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-메톡시- 1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[( 2 S ,4 R )-4- 메톡시 - 1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (4.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S,4R)-4-메톡시-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 267 μmol, 1.0 eq), (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (55.6 mg, 534 μmol, 2.0 eq) 및 TEA (108 mg, 1.07 mmol, 149 μL, 4.0 eq)의 용액에 T3P (340 mg, 534 μmol, 317 μL, 50% 순도, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 HCl (12 M, 2.0 mL의 물 중 60.0 μL)로 켄칭했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH~8로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 20.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 포화 염수 (60.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN]; B%: 50%-80%, 8분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S,4R)-4-메톡시- 1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (39.6 mg, 60.9 μmol, 23% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 619.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 5.25 - 5.03 (m, 2H), 4.80 - 4.60 (m, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.21 - 3.77 (m, 5H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.51 - 3.37 (m, 1H), 3.31 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.54 (m, 4H), 2.48 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 3H).
실시예 584
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2 -[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2 -[[(3 R )-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (3.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 188 μmol, 1.0 eq), (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (39.1 mg, 376 μmol, 2.0 eq) 및 TEA (95.1 mg, 940 μmol, 131 μL, 5.0 eq)의 용액에 T3P (179 mg, 282 μmol, 168 μL, 50 % 순도, 1.50 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 HCl (12 M, 5.0 eq)로 -40℃에서 켄칭했다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150*25*10μm; 이동상: [물 (0.225%FA)-MeCN]; B%: 30%-50%, 8분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2 -[[(3R)-1-메틸피롤리딘-3-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (15.7 mg, 24.9 μmol, 13% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 619.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.92 (m, 1H), 6.74 - 6.46 (m, 1H), 5.25 - 4.95 (m, 3H), 4.75 - 4.55 (m, 1H), 4.47 - 4.36 (m, 1H), 4.35 - 4.26 (m, 2H), 4.14 - 3.92 (m, 2H), 3.91 - 3.76 (m, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 1H), 3.53 - 3.35 (m, 1H), 3.33 - 3.04 (m, 7H), 3.03 - 2.72 (m, 4H), 2.67 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.64 - 2.51 (m, 1H), 2.31 - 2.19 (m, 1H), 1.98 - 1.85 (m, 1H).
실시예 585
2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )- 2-[3-[(1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (3.0 mL) 중 3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄 -5-일]프로판-1-올 (150 mg, 954 μmol, 1.85 eq)의 혼합물에 t-BuONa (99.2 mg, 1.03 mmol, 2.0 eq)을 0℃에서 나누어서 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 516 μmol, 1.0 eq)을 혼합물에 첨가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (15 mL)을 첨가하고, 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1%TFA, 30%-50% MeCN)로 정제하고, 수득된 생성물을 NaHCO3 고체로 pH~8로 조정하고, 그 다음 농축하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (2 × 15 mL)로 추출하고, 유기층을 포화 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로 -1-나프틸)- 2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 267 μmol, 52% 수율, 100% 순도)을 밝은 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 674.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 4.66 - 4.54 (m, 1H), 4.50 - 4.29 (m, 4H), 4.08 - 3.77 (m, 5H), 3.65 - 3.54 (m, 2H), 3.51 - 3.44 (m, 1H), 3.39 - 3.31 (m, 1H), 3.29 - 3.02 (m, 4H), 3.00 - 2.87 (m, 2H), 2.84 - 2.46 (m, 6H), 1.99 - 1.82 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[3-[( 1 S ,4 S )-2-옥사 -5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 222 μmol, 1.0 eq)의 용액에 4 N HClㆍ디옥산 (1.0 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축하고, 디클로로메탄 (10 mL)을 첨가하고, 그 다음 포화 수성 Na2CO3 (1 × 10 mL)로 세정하고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 생성물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[3-[(1S,4S)-2-옥사 -5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 172 μmol, 77% 수율, 98% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 574.
단계 C: 2-(( S )-4-(2-(3-((1 S ,4 S )-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)-1-(( E )-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[3-[(1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일]프로폭시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.0 mg, 157 μmol, 1.0 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (48.9 mg, 470 μmol, 3.0 eq)의 용액에 TEA (127 mg, 1.25 mmol, 175 μL, 8.0 eq) 및 T3P (399 mg, 627 μmol, 373 μL, 50% 순도, 4.0 eq)을 -65℃에서 나누어서 첨가하고, 반응 혼합물을 -65℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 -65℃에서 2 N HCl로 pH~7로 켄칭하고, 그 다음 유기층을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출하고, 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (염기성 Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올=20/1)로 정제하고, 조 생성물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN]; B%: 44%-74%, 8분)로 재정제하고, 수득된 생성물을 농축하고, 동결건조시켰다. 표제 화합물 2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일)프로폭시)-7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (10.6 mg, 16.0 μmol, 10% 수율, 99% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 660.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d, J = 14.0 Hz, 1H), 5.26 - 5.01 (m, 2H), 4.76 - 7.54 (m, 1H), 4.52 - 4.29 (m, 4H), 4.19 - 3.97 (m, 3H), 3.95 - 3.69 (m, 2H), 3.66 - 3.37 (m, 4H), 3.33 - 2.99 (m, 4H), 2.97 - 2.67 (m, 5H), 2.65 - 2.48 (m, 2H), 2.01 - 1.90 (m, 2H), 1.90 - 1.82 (m, 1H), 1.76 - 1.69 (m, 1H).
실시예 586
2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.0 mL) 중 [(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (99.1 mg, 860 μmol, 2.50 eq)의 용액에 t-BuONa (66.2 mg, 688 μmol, 2.0 eq) 및 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 344 μmol, 1.0 eq)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 물 (20.0 mL)을 첨가하고 수득한 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 (C18, 물 중 0.1 % FA, 0-60 % MeCN)로 정제하여 화합물 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1- 나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 313 μmol, 91% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.77 - 7.73 (m, 1H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 1H), 4.67 - 4.56 (m, 1H), 4.47 - 4.35 (m, 2H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 4.09 - 3.89 (m, 3H), 3.88 - 3.77 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 1H), 3.41 - 3.30 (m, 1H), 3.22 - 3.03 (m, 4H), 3.01 - 2.85 (m, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 2H), 2.49 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2- [[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 (2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 316 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HClㆍ디옥산 (4.0 M, 3.0 mL, 37.9 eq)을 첨가했다. 혼합물을 15℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 농축했다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 (10.0 mL)로 pH~7로 조정하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. 생성물을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 532.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 R )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 188 μmol, 1.0 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2- 에노산 (39.1 mg, 376 μmol, 2.0 eq)의 용액에 TEA (76.1 mg, 752 μmol, 105 μL, 4.0 eq) 및 T3P (239 mg, 376 μmol, 224 μL, 50% 순도, 2.0 eq)을 -70℃에서 첨가했다. 혼합물을 - 70℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 후, 반응 혼합물을 HCl (12.0 M, 2.0 mL의 물 중 60.0 μL)로 켄칭했다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 pH = 8로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 10.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모늄 v/v)-MeCN]; B%: 598%-89%, 8분)로 정제하여 표제 화합물 2-[(2S)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2R)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (13.97 mg, 22.2 μmol, 12% 수율, 98.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 619.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.76 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 5.25 - 5.03 (m, 2H), 4.80 - 4.60 (m, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.21 - 3.77 (m, 5H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.51 - 3.37 (m, 1H), 3.31 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.54 (m, 4H), 2.48 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 3H).
실시예 587
N-((E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔-1-일)-N-메틸아세트아미드
단계 A: 에틸 (E)-4-(N- 메틸아세트아미도 ) 부트 -2- 에노에이트 : 에틸 (E)-4-아세트아미도부트-2-에노에이트 (140 mg, 0.818 mmol)을 DMF (4 mL)로 희석하고 이어서 NaH (21.6 mg, 0.900 mmol) 및 MeI (56.2 μl, 0.900 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10-70% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 에틸 (E)-4-(N-메틸아세트아미도)부트-2-에노에이트 (120 mg, 0.648 mmol, 79.2 % 수율)을 수득했다.
단계 B: (E)-4-(N- 메틸아세트아미도 ) 부트 -2- 에노산 : 에틸 (E)-4-(N-메틸아세트아미도)부트-2-에노에이트 (20 mg, 0.11 mmol)을 메탄올 (1 mL)로 희석하고 이어서 NaOH (270 μl, 0.54 mmol)을 첨가했다. 4 시간 교반한 후, 반응을 2N HCl로 pH ~4로 희석하고 수성층을 에틸 아세테이트로 추출했다. 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 (E)-4-(N-메틸아세트아미도)부트-2-에노산 (15 mg, 0.095 mmol, 88 % 수율)을 수득했다.
단계 C: N-((E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔-1-일)-N-메틸아세트아미드: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20 mg, 0.039 mmol)을 DMF로 희석하고, 이어서 DIEA (13.65 μl, 0.07817 mmol)을 첨가했다. (E)-4-(N-메틸아세트아미도)부트-2-에노산 (9.83 mg, 0.0625 mmol)을 첨가하고 이어서 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (39.6 μl, 0.0664 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 N-((E)-4-((S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부트-2-엔-1-일)-N-메틸아세트아미드 (2.1 mg, 0.0032 mmol, 8.2 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 651.4 [M+H]+.
실시예 588
2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 0.277 mmol), 1,8-디브로모나프탈렌 (238 mg, 0.831 mmol), Pd2(dba)3 (25.4 mg, 0.0277 mmol), Cs2CO3 (451 mg, 1.38 mmol) 및 XANTPHOS (32.0 mg, 0.0554 mmol)을 톨루엔 (111 μl, 0.277 mmol)로 희석했다. 반응을 아르곤으로 퍼지하고, 밀봉하고 12시간 동안 교반하면서 110℃로 가열했다. 반응을 냉각되도록 하고 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 1-10% 메탄올/DCM (1%NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (80 mg, 0.113 mmol, 40.7 % 수율)을 수득했다.
단계 B: 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (80 mg, 0.11 mmol)을 TFA (2 mL)로 희석하고, 질소 하에 두었고 90℃로 가열했다. 2시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각시키고 농축했다. 물질을 DCM로 희석하고 포화 중탄산나트륨으로 세정했다. DCM을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (23 mg, 0.040 mmol, 35 % 수율)을 수득했다.
단계 C: 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (23 mg, 0.040 mmol)을 DMF (350 μL)로 희석하고 이어서 DIEA (22 μl, 0.13 mmol) 및 2-플루오로아크릴산 (5.4 mg, 0.060 mmol)을 첨가했다. 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (25 mg, 0.040 mmol)을 첨가하고 반응을 12시간 동안 실온에서 교반했다. 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (9 mg, 0.014 mmol, 35 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 650.2 [M+H]+.
실시예 589
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (24 mg, 0.042 mmol)을 DMF (400 μL)로 희석하고, DIEA (19 μl, 0.11 mmol)을 첨가하고 이어서 2-플루오로아크릴산 (6.1 mg, 0.068 mmol)을 첨가하고 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (30 μl, 0.047 mmol)을 첨가했다. 반응을 주위 온도에서 10시간 동안 교반했다. 반응을 5% 중탄산나트륨 용액에 부었고 에틸 아세테이트로 2회 추출했다. 에틸 아세테이트를 물, 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 1-10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-(트리플루오로메틸)나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (5 mg, 0.0078 mmol, 18 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 638.3 [M+H]+.
실시예 590
2-((S)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-4-(7-(8-브로모나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (30 mg, 0.042 mmol) 및 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 (II) 디클로로메탄 부가물 (14 mg, 0.017 mmol)을 사이클로프로필아연 브로마이드 (253 μl, 0.13 mmol)로 희석했다. 반응을 아르곤으로 퍼지하고, 밀봉하고 90℃로 가열했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 냉각되도록 하고 에틸 아세테이트 및 물로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7 mg, 0.010 mmol, 25 % 수율)을 수득했다.
단계 B: 2-((S)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (9 mg, 0.01 mmol)을 메탄올 (1 mL)로 희석하고 이어서 Pd-C (1 mg, 0.01 mmol)을 첨가했다. 반응을 수소 밸룬을 장착하고 3회 퍼지하고, 이어서 수소의 분위기 4시간 동안 교반했다. 고체를 여과로 수집하고, 메탄올로 린스하고 조합된 유기상을 농축시켜 2-((S)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (7 mg, 0.01 mmol, 97 % 수율)을 수득했다.
단계 C: 2-((S)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (10 mg, 0.019 mmol)을 DMF (500 μL)로 희석하고 이어서 DIEA (11 μl, 0.065 mmol), 2-플루오로아크릴산 (2.5 mg, 0.028 mmol) 및 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥사이드 (13 μl, 0.020 mmol)을 첨가했다. 12시간 동안 교반한 후, 반응을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨으로 희석했다. 층을 분리하고 에틸 아세테이트를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 물질을 10% 메탄올/DCM (1% NH4OH)로 용출하는 실리카겔 상에서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-사이클로프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (0.9 mg, 0.0015 mmol, 7.9 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 610.3 [M+H]+.
실시예 591
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-이소프로필나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A에서 사이클로프로필 아연 브로마이드를 이소프로필 아연 브로마이드로 대체하여 실시예 590과 동일한 방식으로 합성했다. ESI+APCI MS m/z 612.3 [M+H]+.
실시예 592
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(1-메틸이소퀴놀린-8-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A에서 1,8-디브로모나프탈렌을 8-브로모-1-메틸이소퀴놀린으로 대체하여 실시예 588과 동일한 방식으로 합성했다. ESI+APCI MS m/z 585.3 [M+H]+.
실시예 593
2-((S)-4-(7-(5-클로로이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A에서 1,8-디브로모나프탈렌을 4-브로모-5-클로로이소퀴놀린으로 대체하여 실시예 588과 동일한 방식으로 합성했다. ESI+APCI MS m/z 605.2 [M+H]+.
실시예 594
2-((S)-4-(7-(8-브로모이소퀴놀린-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A에서 1,8-디브로모나프탈렌을 8-브로모-1-클로로이소퀴놀린으로 대체하여 실시예 588과 동일한 방식으로 합성했다. ESI+APCI MS m/z 651.2 [M+H]+.
실시예 595
2-((S)-4-(7-(1-클로로이소퀴놀린-8-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A에서 1,8-디브로모나프탈렌을 8-브로모-1-클로로이소퀴놀린으로 대체하여 실시예 589와 동일한 방식으로 합성했다. ESI+APCI MS m/z 605.3 [M+H]+.
실시예 596
2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: Tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (3 g, 5.7 mmol)을 DCM (57 ml, 5.7 mmol)에 용해시키고 염산 용액 (1,4-디옥산 중 4.0M) (7.1 ml, 28 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 1M NaOH로 세정했다. 수성상을 추가의 DCM (2X)로 추출하고, 조합된 유기상을 MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.4 g, 5.6 mmol, 99 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 427.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (1.030 g, 1.124 mmol) 및 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐포스피노)크산텐 (1.301 g, 2.249 mmol)을 1,4-디옥산 (56.22 ml, 5.622 mmol)에 용해시키고 아르곤 하에서 5분 동안 퍼지했다. 반응을 100℃에서 아르곤 하에서 15분 동안 교반하고 반응을 실온으로 냉각시켰다. 반응에 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.4 g, 5.622 mmol), 1-브로모-8-메틸나프탈렌 (3.729 g, 16.87 mmol), 및 탄산세슘 (5.495 g, 16.87 mmol)을 아르곤 하에서 첨가했다. 반응을 아르곤 하에서 캡핑하고 밤새 100℃에서 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 고체를 여과로 제거했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 0→75% 헥산/EtOAc를 용출액으로 사용하는 CombiFlash 상 정상 크로마토그래피 (2X)로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.532 g, 4.465 mmol, 79.42 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
단계 C: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 마이크로웨이브 튜브에서 디옥산 (2204 μl, 0.441 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 0.441 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. (S)-(-)-1-벤질-2-파이롤리딘메탄올 (169 mg, 0.882 mmol), Cs2CO3 (431 mg, 1.32 mmol), 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (37.5 mg, 0.0441 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 반응을 추가 5 분 동안 Ar로 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 2시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 에틸 아세테이트를 첨가했다. 고체를 여과로 제거하고, 여과물을 농축시키고 0→20% DCM/MeOH + 2% NH4OH로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 모든 원하는 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축시켜 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (120 mg, 0.204 mmol, 77.2 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 722.4 [M+H]+.
단계 D: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (2770 μl, 0.277 mmol) 및 THF (2770 μl, 0.277 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.277 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (73.7 mg, 0.0693 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5 분 동안 퍼지했다. 용액을, 그 다음 H2의 하나의 분위기 하에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 조 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (160 mg, 0.272 mmol, 98.3 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 588.4 [M+H]+.
단계 E: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 디클로로메탄 (2722 μl, 0.272 mmol)를 함유하는 25 mL RBF에 0℃에서 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (160 mg, 0.272 mmol) 및 휘니그 염기 (95.1 μl, 0.544 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, 2-플루오로아크릴산 (98.1 mg, 1.09 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (243 μl, 0.408 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 2시간 동안 0℃에서 교반했다. 반응을 염기성 물로 처리하고 수성층을 DCM (3X)으로 추출했다. 조합된 유기상을 진공에서 농축시키고 잔류물을 MeCN:H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5→95% MeCN/0.1% TFA로 용출하는 (prep HPLC)로 정제하여 생성물을 수득했다. 순수한 분획을 모으고 EtOAc 및 1N NaOH로 희석하고 층을 분리했다. 조합된 유기상을 염수로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-((S)-4-(2-(((S)-1-벤질피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8 mg, 0.0121 mmol, 4.45 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 660.4 [M+H]+.
실시예 597
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-(2-플루오로에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (2 g, 3.795 mmol)을 DCM (37.95 ml, 3.795 mmol)에 용해시키고 염산 용액 (1,4-디옥산 중 4.0 M) (4.744 ml, 18.97 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 1M NaOH로 세정하고 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 유기상을 조합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.619 g, 3.792 mmol, 99.93 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 427.2 [M+H]+.
단계 B: 벤질 (S)-4-(2- 클로로 -7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.6946 g, 0.7585 mmol) 및 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐포스피노)크산텐 (0.8778 g, 1.517 mmol)을 1,4-디옥산 (37.92 ml, 3.792 mmol)에 용해시키고, 아르곤 하에서 5분 동안 퍼지하고 100℃에서 아르곤 하에서 15분 동안 교반하고 반응을 실온으로 냉각시켰다. 상기 혼합물에 벤질 (S)-4-(2-클로로-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.619 g, 3.792 mmol), 1-브로모-8-메틸나프탈렌 (2.515 g, 11.38 mmol), 및 탄산세슘 (3.707 g, 11.38 mmol)을 아르곤 하에서 첨가했다. 반응을 아르곤 하에서 캡핑하고 밤새 100℃에서 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 고체를 여과로 제거했다. 여과물을 진공에서 농축시키고 0→75% 헥산/EtOAc를 용출액으로 사용하는 정상 크로마토그래피 (2X)로 정제하여 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (958 mg, 1.689 mmol, 44.54 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]+.
단계 C: tert -부틸 (S)-2-(((4-((S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 : 마이크로웨이브 튜브에서, 디옥산 (2204 μl, 0.441 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-클로로-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 0.441 mmol)의 용액을 5분 동안 아르곤으로 살포했다. (S)-(-)-1-(tert-부톡시카보닐)-2-파이롤리딘메탄올 (222 mg, 1.10 mmol), Cs2CO3 (431 mg, 1.32 mmol) 및 메탄설포네이토(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-i-프로폭시-1,1'-바이페닐)(2'-메틸아미노-1,1'-바이페닐-2-일)팔라듐(II) (37.5 mg, 0.0441 mmol)을 아르곤 하에서 순차적으로 첨가하고 반응을 추가 5 분 동안 Ar로 살포했다. 반응 혼합물을 캡핑하고 2시간 동안 100℃에서 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 에틸 아세테이트를 첨가했다. 고체를 여과로 제거하고, 여과물을 농축시키고 0→20% DCM/MeOH + 2% NH4OH로 용출하는 플래시 크로마토그래피로 정제했다. 모든 원하는 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (306 mg, 0.418 mmol, 94.8 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]+.
단계 D: 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 (S)-2-(((4-((S)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-2-일)옥시)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (93 mg, 0.1556 mmol)을 디클로로메탄 (1556 μl, 0.1556 mmol)에 용해시키고 휘니그 염기 (135.9 μl, 0.7779 mmol) 및 벤질 카보노클로리데이트 (33.31 μl, 0.2334 mmol)로 처리했다. 반응을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 반응을 DCM과 물 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 수성층을 DCM (2X)로 추출했다. 조합된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공에서 농축시키고 잔류물을 0→15% DCM/MeOH + 2% NH4OH을 용출액으로서 사용하는 크로마토그래피로 정제했다. 모든 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 농축시켜 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (367 mg, 0.5014 mmol, 322.3 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 732.4 [M+H]+.
단계 E: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (367 mg, 0.501 mmol)을 DCM (5014 μl, 0.501 mmol)에 용해시키고 TFA (193 μl, 2.51 mmol)로 처리하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응이 관측되지 않았다. 혼합물을 진공에서 농축시키고 DCM에서 재현탁시켰다. 이것에 HCl (디옥산 중 4M, 500μL)을 첨가하고 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 진공에서 농축시키고 잔류물을 1M NaOH와 DCM 사이에서 분할시켰다. 조합된 유기상을 진공에서 농축시켜 조 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (192 mg, 0.304 mmol, 60.6 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]+.
단계 F: 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트: 2.5 mL의 DMF 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 0.23742 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (광유 중 60 % 분산물 (8.5465 mg, 0.35614 mmol))을 첨가했다. 15분 후 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 (142.00 mg, 0.59356 mmol)을 첨가하고 반응을 3.5시간 동안 75℃로 가열했다. 반응을 실온으로 냉각시키고 물과 EtOAc 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 수성층을 EtOAc로 추출하고 조합된 유기상을 더 많은 물 및 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 조 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (187 mg, 0.237 mmol, 99.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 790.4 [M+H]+.
단계 G: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: EtOH (2367 μl, 0.237 mmol) 및 THF (2367 μl, 0.237 mmol) 중 벤질 (S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (187 mg, 0.237 mmol)의 용액을 N2로 5분 동안 퍼지했다. 이 용액에 팔라듐 (63.0 mg, 0.0592 mmol) (데구싸 유형, 10 wt%, 50% H2O)을 첨가하고, 즉시 캡핑하고 N2로 추가 5 분 동안 퍼지했다. 용액을, 그 다음 H2의 하나의 분위기 하에서 밤새 교반했다. 혼합물을 MeOH로 희석하고 팩킹된 셀라이트를 통해 여과했다. 여과물을, 그 다음 진공에서 농축시켜 조 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (134 mg, 0.204 mmol, 86.3 % 수율)을 제공했다. ESI+APCI MS m/z 656.4 [M+H]+.
단계 H: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 0℃에서, N,N-디메틸포름아미드 (2043 μl, 0.204 mmol)를 함유하는 25 mL RBF에 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (134 mg, 0.204 mmol) 및 휘니그 염기 (71.4 μl, 0.409 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, 2-플루오로아크릴산 (22.1 mg, 0.245 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (182 μl, 0.306 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 1시간 동안 0℃에서 교반했다. 반응을 수성 NaOH로 처리하고 수성층을 EtOAc (3X)으로 추출했다. 조합된 유기상을 진공에서 농축시켜 조 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (120 mg, 0.165 mmol, 80.7 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 728.4 [M+H]+.
단계 I: 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(2-(((S)-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.069 mmol)을 디클로로메탄 (687 μl, 0.069 mmol)에 용해시키고 염화수소 (52 μl, 0.21 mmol) (디옥산 중 4M)로 처리했다. 반응을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 반응을, 그 다음 진공에서 농축시키고 MeCN:H2O의 60:40 혼합물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5→95% MeCN/0.1% TFA로 용출하는 (prep HPLC)로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 1M NaOH와 DCM 사이에서 분할시키고 층을 분리하고 수성층을 추가의 DCM으로 추출했다. 조합된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(2-(((S)-1-(2-하이드록시에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (2.7 mg, 0.0044 mmol, 6.4 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 614.3 [M+H]+.
실시예 598
2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-(2-플루오로에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-(2-플루오로에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (30 mg, 0.0508 mmol)을 아세토니트릴 (508 μl, 0.0508 mmol)에 용해시키고 탄산세슘 (19.9 mg, 0.0610 mmol)을 한번에 첨가했다. 이러한 혼합물에, 그 다음 1-플루오로-2-아이오도에탄 (3.72 μl, 0.0458 mmol)을 첨가하고 반응을 60℃에서 밤새 교반했다. 반응을 실온으로 냉각시키고, 고체를 여과로 제거하고, 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 60:40 MeCN:물에서 재현탁시키고 물/0.1% TFA 중 5→95% MeCN/0.1% TFA로 용출하는 (prep HPLC)로 정제했다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 조합하고 EtOAc과 및 1M NaOH 사이에서 분할시키고 층을 분리했다. 수성층을 추가의 EtOAc (2X)로 추출했다. 조합된 유기상을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-(2-플루오로에틸)피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (4.8 mg, 0.00755 mmol, 14.8 % 수율)을 수득했다. ESI+APCI MS m/z 636.3 [M+H]+.
실시예 599
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (S)-2-((( 메틸설포닐 ) 옥시 ) 메틸 ) 파이롤리딘 -1- 카복실레이트: 0℃로 냉각된 DCM (74.53 ml, 14.91 mmol) 중 tert-부틸 (S)-2-(하이드록시메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (3.0 g, 14.91 mmol)의 용액에 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (4.01 ml, 22.36 mmol)을 첨가하고 이어서 메탄설포닐 클로라이드 (1.38 ml, 17.89 mmol)을 1 분에 걸쳐 첨가하고 반응을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응을 그 다음 1:1 물/염수 (10 mL)로 세정하고 층을 분리했다. 조합된 유기상을 그 다음 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 물질을 그 다음 DCM 중 0-10% MeOH을 용출물로서 사용하는 크로마토그래피로 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (3.786 g, 13.55 mmol, 90.9 % 수율)을 수득했다.
단계 B: tert -부틸 (S)-2-(((3- 메톡시 -3- 옥소프로필 ) 티오 ) 메틸 ) 파이롤리딘 -1- 카복실레이트: tert-부틸 (S)-2-(((메틸설포닐)옥시)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.00 g, 7.16 mmol) 및 Cs2CO3 (4.665 g, 14.32 mmol)을 디옥산 (10 mL)에 넣었고 3시간 동안 실온에서 교반했다. NaOH (0.5M)을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 조합된 유기상을 농축시키고 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 tert-부틸 (S)-2-(((3-메톡시-3-옥소프로필)티오)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.172 g, 7.16 mmol, 99 % 수율)을 수득했다.
단계 C: 메틸 (S)-3-(((1- 메틸피롤리딘 -2-일) 메틸 ) 티오 ) 프로파노에이트: 바이알에 포름산 (6.751 ml, 179.0 mmol) 중 tert-부틸 (S)-2-(((3-메톡시-3-옥소프로필)티오)메틸)파이롤리딘-1-카복실레이트 (2.172 g, 7.16 mmol)을 첨가하고, 이어서 포름알데하이드 (10.76 ml, 143.2 mmol) (37% 수성)을 첨가했다. 혼합물을, 그 다음 65℃로 가열하고 18시간 동안 교반했다. 반응을 냉각시키고 포화 바이카보네이트를 느리게 첨가하고 혼합물을 DCM 중 10% MeOH (3x20 ml)로 추출했다. 추출물을 조합하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 5-20% MeOH)로 정제하여 메틸 (S)-3-(((1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)프로파노에이트 (186 mg, 0.86 mmol, 12 % 수율)을 수득했다.
단계 D: tert -부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트,: 메틸 (S)-3-(((1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)프로파노에이트 (186 mg, 0.854 mmol)을 디옥산 (5 mL)에 넣었다. KOtBu (1708 μl, 1.71 mmol)을 첨가하고 혼합물을 30분 동안 교반했다. tert-부틸 (S)-4-(4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (300 mg, 0.569 mmol)을 첨가하고 혼합물을 24시간 동안 80 ℃로 가열했다. 혼합물을 냉각시키고, 물로 희석하고 DCM (3x15 mL)로 추출했다. 추출물을 조합하고 농축했다. 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-15% MeOH)로 정제하여 tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (72 mg, 0.116 mmol, 20.3 % 수율)을 제공했다.
단계 E: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: tert-부틸 4-((S)-4-((벤질옥시)카보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,8-디하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-7(6H)-카복실레이트 (72 mg, 0.12 mmol)을 DCM (5 mL)에 넣었고 0℃로 냉각시켰다. HCl (145 μl, 0.58 mmol)을 첨가하고 반응을 실온으로 가온시키고 18시간 동안 교반했다. 반응을 농축시키고 DCM에 넣었다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM (3x 20 mL)로 추출했다. 유기층을 조합하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (61 mg, 0.12 mmol)을 제공했다.
단계 F: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트: 톨루엔 (2 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (61 mg, 0.12 mmol)의 용액에 1-브로모-8-메틸나프탈렌 (78 mg, 0.35 mmol)을 첨가하고 반응을 15분 동안 아르곤으로 탈가스하고 이어서 Cs2CO3 (190 mg, 0.58 mmol), Pd2(dba)3 (21 mg, 0.023 mmol) 및 Xantphos (27 mg, 0.047 mmol)을 첨가하고 반응을 18시간 동안 100 ℃로 가열했다. 고체를 여과로 제거하고, 여과물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 그 다음 2% NH4OH를 갖는 1→12%MeOH/DCM를 첨가제로서 사용하는 크로마토그래피로 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (54 mg, 0.082 mmol, 70 % 수율)을 수득했다.
단계 G: 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (54 mg, 0.082 mmol)을 DCM (10 mL)에 넣었고 반응을 0 ℃로 냉각시켰다. AcOH (14.01 μl, 0.244 mmol) 및 TMS-I (69.67 μl, 0.490 mmol)을 첨가하고 반응을 실온으로 느리게 가온시키고 1시간 동안 교반했다. 포화 바이카보네이트를 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출했다. 추출물을 농축시키고 잔류물을 역상 크로마토그래피 (0.1% TFA를 갖는 물 중 5-95% MeCN)로 정제했다. 단리된 생성물을, 그 다음 DCM에서 유리 염기화하고 포화 바이카보네이트를 첨가했다. 유기층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8 mg, 0.15 mmol, 19%)을 제공했다.
단계 H: 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴: N,N-디메틸포름아미드 (152 μl, 0.015 mmol)의 0℃ 용액에 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (8.0 mg, 0.015 mmol) 및 트리에틸아민 (7.37 μl, 0.053 mmol)을 첨가했다. 반응 혼합물을, 2-플루오로아크릴산 (4.10 mg, 0.046 mmol)을 한번에 첨가하면서 격렬하게 교반했다. 다음으로, 1-프로판포스폰산 환형 무수물 (13.5 μl, 0.023 mmol)을 교반 혼합물에 느리게 첨가했다. 반응을 실온에서 20분 동안 교반했다. 물을 첨가하고 혼합물을 DCM으로 추출하고 추출물을 농축했다. 잔류물을 실리카겔 (0.25% NH4OH를 갖는 DCM 중 0-12% MeOH)로 정제하여 2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메틸)티오)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (2.3 mg, 0.0038 mmol, 25.3 % 수율)을 제공했다. ES+APCI MS m/z 600.3 [M+H]+.
실시예 600
2-((S)-4-(7-(5-클로로-4-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
2-((S)-4-(7-(5- 클로로 -4-( 트리플루오로메틸 )피리딘-3-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴을, 단계 A에서 1-브로모-8-메틸나프탈렌을 3,5-디클로로-4-(트리플루오로메틸)피리딘로 대체하여 실시예 359에 따라 제조했다. ES+APCI MS m/z 623.2 [M+H]+.
실시예 601
2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[(2 S )-4,4- 디플루오로 -1- 메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1 eq) 및 [(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (191 mg, 1.26 mmol, 1.5 eq)의 용액에 t-BuONa (162 mg, 1.68 mmol, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]- 7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 418 μmol, 50% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 682.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4- 디플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2- 일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (4 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 381 μmol, 1 eq)의 용액에 Pd/C (120 mg, 10% 순도), NH3/MeOH (3 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하에서 15℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2- 일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 296 μmol, 78% 수율, 90% 순도)을 황색 고체로서 수득했고 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 548.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4- 디플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EA (3 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (150 mg, 274 umol, 1 eq), TEA (222 mg, 2.19 mmol, 305 uL, 8 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (57.0 mg, 548 μmol, 2 eq)의 용액에 T3P (523 mg, 822 μmol, 489 μL, EA 중 50% 순도, 3 eq)을 -70℃에서 첨가했다. 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 1 M HCl (2.2 mL)로 -70℃에서 켄칭하고, 얼음이 남아있지 않을 때까지 교반했다. 층을 분리했다. 유기층을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH = 8로 염기성화하고 에틸 아세테이트 (15 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, EtOAc/MeOH 1/0 내지 20/1) 이어서 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (50.6 mg, 78 μmol, 29% 수율, 98% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 634.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d, J = 14.8 Hz, 1H), 5.32 - 4.93 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.45 (td, J = 5.2, 11.2 Hz, 1H), 4.32 - 3.63 (m, 6H), 3.58 - 3.36 (m, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.93 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.50 (m, 3H), 2.46 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.15 (m, 1H).
실시예 602
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[(2 S ) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 593 umol, 1.0 eq), 1-브로모나프탈렌 (184 mg, 890 μmol, 124 μL, 1.5 eq), Pd2(dba)3 (54.3 mg, 59.3 μmol, 0.1 eq), Cs2CO3 (483 mg, 1.48 mmol, 2.5 eq) 및 RuPhos (55.4 mg, 119 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (1 × 50 mL)로 추출하고 유기층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)으로 정제했다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 pH ~ 8로 염기성화하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 25 mL)로 추출했다. 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 317 μmol, 53% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 632.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 158 μmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (20 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (8 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (70 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 498.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (6 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60 mg, 121 umol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (21.7 mg, 241 μmol, 2.0 eq) 및 Et3N (97.6 mg, 965 umol, 134 uL, 8.0 eq)의 용액에 T3P (230 mg, 362 μmol, 215 μL, 50% 순도, 3.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0 - 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (6 mL)로 희석했다. 유기층을 분리하고, 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트 / 메탄올 = 20 / 1 내지 5 / 1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 60% - 78%, 10분)로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (7.23 mg, 12.7 μmol, 11% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 571.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.27 - 8.16 (m, 1H), 7.91 - 7.81 (m, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.56 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.41 (dd, J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 2H), 4.22 - 3.96 (m, 4H), 3.75 - 3.21 (m, 4H), 3.12 (br t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.04 - 2.92 (m, 2H), 2.87 (m, 2H), 2.70 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.15 - 1.99 (m, 1H), 1.94 - 1.73 (m, 3H).
실시예 603
2-[(2S)-4-[2-(사이클로펜틸메톡시)-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-( 사이클로펜틸메톡시 )-7-(8- 메틸 -1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5 mL) 중 사이클로펜틸메탄올 (50.5 mg, 504 μmol, 54.6 μL, 3.0 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 168 μmol, 1.0 eq)의 용액에 t-BuONa (48.5 mg, 504 umol, 3.0 eq)을 -10℃에서 첨가했다. 혼합물을 -10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 -10℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 3/1)로 정제했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-(사이클로펜틸메톡시)-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (58 mg, 91.6 μmol, 54% 수율, 99.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 631.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 7H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 5.27 - 5.15 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.32 - 3.72 (m, 7H), 3.59 - 3.30 (m, 2H), 3.24 - 2.87 (m, 7H), 2.87 - 2.30 (m, 4H), 1.90 - 1.76 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.57 - 1.51 (m, 1H), 1.42 - 1.21 (m, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-( 사이클로펜틸메톡시 )-7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (3 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-(사이클로펜틸메톡시) -7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (58 mg, 92.0 μmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (20 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (2 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[2-(사이클로펜틸메톡시)-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (34 mg, 조물질)을 황색 오일로서 수득하고 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 497.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-(사이클로펜틸메톡시)-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. EA (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-(사이클로펜틸메톡시)-7-(8-메틸 -1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (30 mg, 60.4 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (16.3 mg, 181 umol, 3.0 eq) 및 Et3N (55.0 mg, 544 μmol, 75.7 μL, 9.0 eq)의 용액에 T3P (154 mg, 242 umol, 144 uL, 50% 순도, 4.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (6 mL)로 희석했다. 유기층을 분리하고, 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 1/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 65%-95%, 10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[2-(사이클로펜틸메톡시)-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (8.85 mg, 15.3 μmol, 2개의 단계 17% 수율, 98.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 569.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.56 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.89 (br s, 1H), 4.33 - 3.98 (m, 5H), 3.95 - 3.72 (m, 2H), 3.60 - 3.39 (m, 2H), 3.30 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.91 - 2.73 (m, 2H), 2.69 - 2.54 (m, 1H), 2.45 - 2.29 (m, 1H), 1.93 - 1.74 (m, 2H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.53 (m, 2H), 1.45 - 1.25 (m, 2H).
실시예 604
2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (1 g, 1.98 mmol, 1 eq), 4-브로모-5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (795 mg, 2.57 mmol, 1.3 eq), RuPhos (369 mg, 791 umol, 0.4 eq), Cs2CO3 (1.61 g, 4.94 mmol, 2.5 eq) 및 Pd2(dba)3 (362 mg, 396 umol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 그 다음 8 시간 동안 N2 하에서 90℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 고체 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.23 mmol, 62% 수율, 100% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.43 - 7.33 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd, J = 2.8, 9.6 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 4.25 (s, 2H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 4.04 (br d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.75 (dt, J = 2.8, 10.8 Hz, 1H), 3.50 (br t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.13 - 2.98 (m, 2H), 2.95 - 2.52 (m, 6H), 2.47 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.30 - 2.23 (m, 1H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.07 (br d, J = 3.2 Hz, 1H), 1.89 - 1.63 (m, 8H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (20 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (0.9 g, 1.23 mmol, 1 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (20 mL, 20% 순도), Pd/C (0.45 g, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 촉매를 셀라이트의 플러그를 통한 여과로 제거했다. 용매를 감압 하에서 제거했다. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (620 mg, 1.03 mmol, 84% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득하고, 이것을 다음 단계에서 추가 정제없이 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 600.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (8 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일- 인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (600 mg, 1.00 mmol, 1 eq)의 용액에 EA (4 mL) 중 2-플루오로프로프-2-에노산 (180 mg, 2.00 mmol, 2 eq) 및 TEA (304 mg, 3.00 mmol, 414 μL, 3 eq) 이어서 T3P (955 mg, 1.50 mmol, 892 μL, EtOAc 중 50% 순도, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 고체 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (3 × 100 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (380 mg, 554 μmol, 55% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 672.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 5.51 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (br dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.09 - 4.59 (m, 1H), 4.44 - 4.33 (m, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.19 - 4.14 (m, 1H), 4.05 (br d, J = 14.4 Hz, 2H), 4.00 - 3.91 (m, 1H), 3.76 (dt, J = 2.4, 11.2 Hz, 1H), 3.59 - 3.39 (m, 3H), 3.37 - 3.21 (m, 1H), 3.14 - 3.02 (m, 2H), 2.90 - 2.52 (m, 6H), 2.48 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.29 - 2.23 (m, 1H), 2.22 - 2.08 (m, 2H), 1.90 - 1.69 (m, 8H).
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1 H - 인다졸 -4-일)-2-[[(2 S )-1- 메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (0.4 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란 -2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (360 mg, 536 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (1.22 g, 10.7 mmol, 794 μL, 20 eq)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 DCM (10 mL)로 희석하고 포화 NaHCO3 용액으로 중화했다. 분리된 수성층을 DCM (2 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 고체 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 EtOAc (2 × 15 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H- 인다졸-4-일)-2-[[(2S)-1-메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (73.3 mg, 120 μmol, 22% 수율, 96.6% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 588.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 9.97 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.55 - 5.31 (m, 1H), 5.26 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.50 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 4.20 - 3.68 (m, 4H), 3.65 - 3.27 (m, 4H), 3.10 (br t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.02 - 2.72 (m, 4H), 2.71 - 2.60 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.93 - 1.73 (m, 3H).
실시예 605
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5.00 mL) 중 2-피리딜메탄올 (55.1 mg, 504 μmol, 48.7 μL, 3.0 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 168 μmol, 1.0 eq)의 용액에 t-BuONa (48.5 mg, 504 μmol, 3.0 eq)을 - 10℃에서 첨가했다. 혼합물을 - 10℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (5.00 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 내지 1/1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (64.0 mg, 98.8 μmol, 59% 수율, 98.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 641.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-(2- 피리딜메톡시 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (3.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (64.0 mg, 100 μmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (20.0 mg, 10% 순도) 및 NH3ㆍMeOH (2.00 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 100/1 내지 8/1)로 정제했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (15.0 mg, 19.3 μmol, 19% 수율, 64.9% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 506.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. EtOAc (2.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (10.0 mg, 19.8 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (5.34 mg, 59.3 μmol, 3.0 eq) 및 Et3N (18.0 mg, 178 μmol, 24.8 μL, 9.0 eq)의 용액에 T3P (50.3 mg, 79.1 μmol, 47.1 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 4.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (3.00 mL)로 희석했다. 유기층을 분리하고, 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 50/1 내지 10/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 50% - 80%, 10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-(2-피리딜메톡시)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (1.41 mg, 2.44 umol, 12% 수율, 99.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 579.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.61 - 8.55 (m, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 3H), 7.55 - 7.48 (m, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 3H), 5.52 - 5.48 (m, 2H), 5.47 - 5.33 (m, 1H), 5.25 (dd, J = 3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.79 (br s, 1H), 4.38 - 3.73 (m, 6H), 3.61 - 3.41 (m, 2H), 3.26 - 3.12 (m, 2H), 3.09 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.85 - 2.56 (m, 2H).
실시예 606
2-((S)-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (100 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐 -5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (5.0 g, 11.4 mmol, 1.0 eq), 4-브로모-5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (7.05 g, 22.8 mmol, 2.0 eq), Pd2(dba)3 (2.09 g, 2.28 mmol, 0.2 eq), RuPhos (2.13 g, 4.56 mmol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (9.29 g, 28.5 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 2/1)로 정제하고, 그리고 추가로 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (4.90 g, 7.20 mmol, 63% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 667.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.50 - 7.31 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd, J=2.4, 9.6 Hz, 1H), 5.27 - 5.13 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.13 - 3.97 (m, 3H), 3.89 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.81 - 3.68 (m, 1H), 3.51 (t, J=5.2 Hz, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.04 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.93 - 2.66 (m, 4H), 2.62 - 2.48 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.85 - 1.67 (m, 3H).
단계 B: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 749 μmol, 1.0 eq)의 용액에 m-CPBA (152 mg, 749 μmol, 85% 순도, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 으 포화 NaHCO3 수용액로 pH ~ 7로 조정했다. 그 다음 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 539 μmol, 72% 수율, 92% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 683.
단계 C: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸-4-일)-2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (350 mg, 512 μmol, 1.0 eq)의 용액에 t-BuONa (148 mg, 1.54 mmol, 3.0 eq) 및 [(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (136 mg, 1.03 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일- 인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 372 μmol, 73% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 752.
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1- 테트라하이드로피란 -2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (2.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 306 umol, 1.0 eq)의 용액에 건조 Pd/C (50.0 mg, 10% 순도) 및 NH3/메탄올 (1.00 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란 -2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (180 mg, 285 μmol, 93% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 다음 단계에서 정제없이 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 618.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (300 uL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸 -1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (30 mg, 48.6 μmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (221 mg, 1.94 mmol, 144 μL, 40 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 물 (10 mL)로 희석했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 8로 조정하고 디클로로메탄 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 26% - 56%, 1분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (7.08 mg, 13.1 μmol, 27% 수율, 98.5% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 534.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.14 (br s, 1H), 8.04 (d, J=0.8 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.32 - 5.03 (m, 1H), 4.44 (dd, J=4.4, 11.2 Hz, 1H), 4.33 - 4.19 (m, 3H), 4.00 (br d, J=12.8 Hz, 1H), 3.82 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 3.65 - 3.41 (m, 3H), 3.27 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 3.17 - 2.95 (m, 4H), 2.90 (br dd, J=10.0, 12.4 Hz, 1H), 2.83 - 2.47 (m, 8H), 2.41 (s, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 4H), 2.09 - 1.90 (m, 1H).
단계 E: 2-[(2 S )-4-[7-(5,6-디메틸-1 H -인다졸-4-일)-2-[[(2 S ,4 R )-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2.0 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 187 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (25.3 mg, 281 μmol, 1.5 eq)의 용액에 T3P (477 mg, 749 μmol, 446 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 4.0 eq) 및 TEA (114 mg, 1.12 mmol, 156 μL, 6.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 38% - 68%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-2-[[(2S,4R)-4-플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (8 mg, 12.8 umol, 7% 수율, 96.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 606.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.03 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.42 (dd, J=6.4 Hz, J=47.2 Hz 1H), 5.31 - 5.05 (m, 2H), 5.04 - 3.76 (m, 9H), 3.65 - 3.47 (m, 3H), 3.42 - 3.25 (m, 1H), 3.20 - 2.70 (m, 6H) 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.38 - 2.25 (m, 4H), 2.10 - 1.87 (m, 1H).
실시예 607
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(6-메틸이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 530 μmol, 1.0 eq), 4-브로모-6-메틸-이소퀴놀린 (235 mg, 1.06 mmol, 2.0 eq), RuPhos (98.9 mg, 212 μmol, 0.4 eq), Pd2(dba)3 (97.1 mg, 106 umol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (432 mg, 1.33 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (230 mg, 349 μmol, 66% 수율, 93% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 613.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(6- 메틸 -4- 이소퀴놀릴 ) -2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디옥산 (400 μL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (50 mg, 81.6 μmol, 1.0 eq)의 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 408 uL)을 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.3시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 물 (10 mL)로 희석했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 8로 조정하고 디클로로메탄 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 정제된 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 28% - 58%, 1분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (19 mg, 37 μmol, 45% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 513.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.94 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.92 - 7.83 (m, 2H), 7.45 (dd, J=1.2, 8.4 Hz, 1H), 4.40 (dd, J=4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 4.17 (dd, J=6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.03 (br d, J=12.8 Hz, 1H), 3.86 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.42 (br t, J=5.2 Hz, 2H), 3.33 - 3.22 (m, 1H), 3.17 - 2.80 (m, 7H), 2.72 - 2.63 (m, 1H), 2.61 - 2.52 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.89 - 1.68 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 ) -4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 195 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (35.1 mg, 390 umol, 2.0 eq)의 용액에 T3P (372 mg, 585 μmol, 348 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 3.0 eq) 및 TEA (158 mg, 1.56 mmol, 217 μL, 8.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 38% - 62%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일) -4-[7-(6-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (11 mg, 18.6 μmol, 9% 수율, 98.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 585.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.96 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.93 - 7.85 (m, 2H), 7.46 (dd, J=1.2, 8.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.36 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.50 - 4.29 (m, 3H), 4.27 - 3.96 (m, 4H), 3.61 - 3.30 (m, 4H), 3.22 - 3.06 (m, 2H), 3.04 - 2.77 (m, 4H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.31 - 2.29 (m, 1H), 2.15 - 1.97 (m, 1H), 1.80 - 1.77 (m, 3H).
실시예 608
2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (240 mg, 508.91 μmol, 1 eq), t-BuONa (146.72 mg, 1.53 mmol, 3 eq), RuPhos (47.50 mg, 101.78 umol, 0.2 eq) 및 RuPhos Pd G3 (85.13 mg, 101.78 μmol, 0.2 eq)의 용액에 1-브로모-8-에틸-나프탈렌 (239.31 mg, 1.02 mmol, 2 eq)을 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물에 물 (10 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 HPLC (C18, 물 중 0.1 % FA, 0-45 % MeCN)로 정제했다. tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (113 mg, 180.57 μmol, 35.48% 수율, 100% 순도)의 생성물을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:626.
단계 B: 2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1- 나프틸 )-2-[[(2S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로- 5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일] 아세토니트릴. DCM (2 mL) 중 tert-부틸 (2S)-2-(시아노메틸)- 4- [7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (103 mg, 164.59 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (2 mL)을 25℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 pH = 8까지 25℃에서 포화 NaHCO3 수성물 (20 mL)의 첨가로 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (3 × 10 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (81 mg, 조물질)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.19 - 7.14 (m, 1H), 4.36 - 4.26 (m, 1H), 4.21 - 4.02 (m, 2H), 4.00 - 3.62 (m, 3H), 3.56 - 2.73 (m, 11H), 2.65 - 2.34 (m, 7H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 1H), 1.82 - 1.62 (m, 4H), 1.13 - 1.02 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2S)-4- [7-(8-에틸- 1- 나프틸 ) -2-[[(2S) -1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]- 6,8- 디하이드로 - 5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-에틸-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (61 mg, 116.04 μmol, 1 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (20.90 mg, 232.08 μmol, 2 eq)의 용액에 TEA (281.81 mg, 2.78 mmol, 387.63 μL, 24 eq) 및 T3P (332.29 mg, 1.04 mmol, 310.55 uL, 9 eq)을 -40℃에서 첨가했다. 첨가 후, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (3×20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3×20 mL)로 희석했다. 유기층을 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 10분)으로 정제했다. 혼합물을 물 (3Х20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3Х20 mL)로 희석했다. 유기층을 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축하여 2-[(2S)-4- [7-(8-에틸- 1-나프틸) -2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로 - 5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (7 mg, 11.63 μmol, 10.02% 수율, 99.3% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:598.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.67 - 7.54 (m, 2H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.45 - 5.24 (m, 1H), 5.23 - 5.12 (m, 1H), 4.95 - 4.58 (m, 1H), 4.33 - 4.25 (m, 1H), 4.25 - 3.63 (m, 6H), 3.57 - 3.33 (m, 3H), 3.21 - 2.49 (m, 10H), 2.44 - 2.35 (m, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.13 - 1.04 (m, 3H).
실시예 609
2-[(2S)-4-[7-(6-플루오로-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(6-플루오로-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 791 μmol, 1.0 eq), 4-브로모-6-플루오로- 이소퀴놀린 (215 mg, 949 μmol, 1.2 eq), Cs2CO3 (773 mg, 2.37 mmol, 3.0 eq) 및 RuPhos (148 mg, 316 μmol, 0.4 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (145 mg, 158 μmol, 0.2 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 N2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 N2 하에서 90℃에서 10시간 동안 교반했다. 반응 혼합물 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 고체 NaHCO3로 염기성화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 에틸 아세테이트 (2 × 40 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(6-플루오로-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (140 mg, 204 μmol, 26% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(6- 플루오로 -4- 이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (0.3 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(6- 플루오로-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (30 mg, 46.1 μmol, 1.0 eq) 및 NH3ㆍMeOH (0.3 mL, 20% 순도)의 혼합물에 Pd/C (10 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 30%-60%,1분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[(2S)-4-[7-(6-플루오로-4- 이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (9.78 mg, 18.9 μmol, 41% 수율, 99.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 517.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.00 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.02 (dd, J=5.6, 9.2 Hz, 1H), 7.74 (dd, J=2.4, 10.4 Hz, 1H), 7.39 (dt, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 4.41 (dd, J=4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.28 (s, 2H), 4.18 (dd, J=6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.02 (br d, J=12.4 Hz, 1H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 2H), 3.33 - 3.24 (m, 1H), 3.18 - 3.07 (m, 3H), 3.07 - 2.97 (m, 1H), 2.93 (dd, J=9.6, 12.8 Hz, 1H), 2.85 (br s, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.56 (dd, J=2.4, 6.4 Hz, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(6-플루오로-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.5 mL) 및 DMF (1 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(6-플루오로-4-이소퀴놀릴)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80 mg, 155 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (41.8 mg, 464 μmol, 3.0 eq) 및 TEA (235 mg, 2.32 mmol, 323 uL, 15 eq)의 혼합물에 T3P (493 mg, 774 μmol, 460 uL, 50% 순도, 5.0 eq)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 물 (10 mL)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (2 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 40% - 70%,1분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[(2S)-4-[7-(6-플루오로-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (17.4 mg, 29.3 μmol, 19% 수율, 99.2% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 589.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.01 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.03 (dd, J=5.6, 8.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J=2.4, 10.4 Hz, 1H), 7.40 (dt, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 5.52 - 5.35 (m, 1H), 5.27 (dd, J=3.6, 17.2 Hz, 1H), 5.02 - 4.62 (m, 1H), 4.46 - 4.38 (m, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 2H), 4.24 - 4.07 (m, 3H), 4.02 (br d, J=13.2 Hz, 1H), 3.62 - 3.29 (m, 4H), 3.13 (br s, 2H), 3.03 - 2.93 (m, 2H), 2.91 - 2.77 (m, 2H), 2.72 (br s, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.32 (br d, J=8.4 Hz, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.70 (m, 3H).
실시예 610
(S)-2-(1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert -부틸 4- 하이드록시 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -7- 카복실레이트 . n-BuOH (30.0 mL) 중 O1-tert-부틸 O4-에틸 3-옥소피페리딘-1,4- 디카복실레이트 (5.00 g, 18.4 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 아세트산;메탄이미드아미드 (9.59 g, 92.2 mmol, 5.00 eq)을 나누어서 첨가했다. 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 교반했다. 혼합물을 농축시켜 용매를 제거했다. 잔류물 물 (30.0 mL)을 첨가하고 여과했다. 침전물을 물 (30.0 mL)로 세정하고 농축했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 tert-부틸 4-하이드록시-6,8-디하이드로-5H- 피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (4.10 g, 16.1 mmol, 87% 수율, 98.4% 순도)을 갈색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 196.
단계 B: tert -부틸 4- 클로로 -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -7- 카복실레이트. DCE (60.0 mL) 중 tert-부틸 4-하이드록시-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4- d]피리미딘-7-카복실레이트 (3.30 g, 13.1 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 PPh3 (6.89 g, 26.3 mmol, 2.00 eq), CCl4 (6.06 g, 39.4 mmol, 3.79 mL, 3.00 eq)을 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 70℃에서 3시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 1/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 4-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4- d]피리미딘-7-카복실레이트 (2.54 g, 9.42 mmol, 72% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 214.
단계 C: tert -부틸 4-[(3 S )-4- 벤질옥시카보닐 -3 -( 시아노메틸 )피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-7-카복실레이트. DMAc (30.0 mL) 중 tert-부틸 4-클로로-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4- d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.30 g, 4.82 mmol, 1.00 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.00 g, 3.86 mmol, 0.80 eq)의 혼합물에 DIEA (3.11 g, 24.1 mmol, 4.20 mL, 5.00 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석했다. 유기층을 물 (30 mL × 2) 및 염수 (30 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1 내지 0/1)로 정제했다. 화합물 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3 -(시아노메틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.18 g, 2.30 mmol, 48% 수율, 96% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 493.
단계 D: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-(5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4 - d ]피리미딘 -4-일) 피페라진- 1- 카복실레이트. 아세토니트릴 (10.0 mL) 중 tert-부틸 4-[(3S)-4-벤질옥시카보닐-3-(시아노메틸)피페라진-1-일]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-7-카복실레이트 (1.20 g, 2.44 mmol, 1.00 eq)의 혼합물에 HCl/디옥산 (4.00 M, 12.2 mL, 20.0 eq)을 25℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 조 생성물을 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4 -d]피리미딘-4-일) 피페라진- 1-카복실레이트 (883 mg, 2.16 mmol, 89% 수율, 96% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 393.
단계 E: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 764 μmol, 1.00 eq) 및 1-브로모나프탈렌 (317 mg, 1.53 mmol, 212 uL, 2.00 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (140 mg, 153 μmol, 0.20 eq), RuPhos (143 mg, 306 μmol, 0.40 eq) Cs2CO3 (747 mg, 2.29 mmol, 3.00 eq)을 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20.0 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (5.00 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (50.0 mL × 2)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 289 μmol, 38% 수율)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 F: 2-[(2 S )-4-[7-(1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (3.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(1- 나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (50.0 mg, 96.4 μmol, 1.00 eq)의 용액에 Pd/C (30.0 mg, 10% 순도), NH3ㆍMeOH (0.50 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 35% - 59%, 10분)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (8.63 mg, 22.4 μmol, 23% 수율, 99.8% 순도)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 385.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.63 (s, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.17 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 3.99 (br d, J=12.8 Hz, 1H), 3.83 (br d, J=12.8 Hz, 1H), 3.53 - 3.23 (m, 3H), 3.20 - 3.07 (m, 2H), 3.07 - 2.90 (m, 4H), 2.63 - 2.49 (m, 2H).
단계 G: 에틸 아세테이트 (0.60 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H- yrido[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60.0 mg, 156 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 2-플루오로프로프-2-에노산 (56.2 mg, 624 μmol, 4.00 eq), TEA (253 mg, 2.50 mmol, 348 uL, 16.0 eq) 및 T3P (596 mg, 936 μmol, 557 uL, 50% 순도, 6.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (1.00 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (5.00 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)-1-(2- 루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (15.2 mg, 32.8 μmol, 21% 수율, 98.9% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 457.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.67 (s, 1H), 8.26 - 8.18 (m, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.63 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.45 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.54 - 5.34 (m, 1H), 5.27 (dd, J=4.0, 17.2 Hz, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.46 - 4.29 (m, 2H), 4.14 (br d, J=13.6 Hz, 1H), 3.99 (br d, J=13.2 Hz, 1H), 3.63 - 3.32 (m, 4H), 3.16 (br t, J=11.2 Hz, 2H), 2.99 (br dd, J=8.0, 16.4 Hz, 3H), 2.90 - 2.77 (m, 1H).
실시예 611
(S)-2-(1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (8.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 255 μmol, 1.00 eq) 및 1-브로모-8-메틸-나프탈렌 (113 mg, 510 μmol, 10.6 uL, 2.00 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (46.7 mg, 51.0 μmol, 0.20 eq), RuPhos (47.6 mg, 102 μmol, 0.40 eq) Cs2CO3 (249 mg, 764 μmol, 3.00 eq)을 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20.0 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (5.00 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (50.0 mL × 2)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다.
단계 B: 2-[(2 S )- 4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (1.00 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8- 메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (50.0 mg, 93.9 μmol, 1.00 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (93.9 μmol, 0.2 mL, 20% 순도, 1.00 eq), Pd/C (15.0 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 38%-62%, 10분)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)- 4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (6.13 mg, 15.3 μmol, 16% 수율, 99.5% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 399.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.61 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.41 (dt, J=2.8, 7.6 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 2H), 4.32 (br d, J=18.0 Hz, 1H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.92 - 3.86 (m, 1H), 3.86 - 3.67 (m, 1H), 3.56 - 3.48 (m, 1H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.24 - 3.18 (m, 1H), 3.18 - 2.96 (m, 4H), 2.94 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.92 (br s, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.59 (m, 1H), 2.57 - 2.53 (m, 2H).
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (1.00 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60.0 mg, 151 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 2-플루오로프로프-2-에노산 (54.2 mg, 602 μmol, 4.00 eq), TEA (244 mg, 2.41 mmol, 335 uL, 16.0 eq) 및 T3P (575 mg, 903 μmol, 537 uL, 50% 순도, 6.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (1.00 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (10 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (5 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)-1-(2- 플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (8.97 mg, 18.7 μmol, 12% 수율, 98.2% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 492.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.64 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.74 - 7.64 (m, 2H), 7.47 - 7.39 (m, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 1H), 7.29 (br d, J=1.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 5.53 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.87 (br s, 1H), 4.33 (br dd, J=14.8, 18.0 Hz, 1H), 4.19 (br d, J=13.6 Hz, 1H), 4.12 - 3.97 (m, 2H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.61 - 3.42 (m, 2H), 3.27 - 3.04 (m, 4H), 2.92 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.89 - 2.62 (m, 3H).
실시예 612
(S)-2-(4-(7-(5-클로로이소퀴놀린-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[7-(5- 클로로 -4- 이소퀴놀릴 )-6, 8- 디하이드로 -5 H - 피리도 [3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-( 시아노메틸 )피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(5,6,7,8- 테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 764 μmol, 1.00 eq) 및 4-브로모-5-클로로-이소퀴놀린 (371 mg, 1.53 mmol, 10.6 μL, 2.00 eq)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (140 mg, 153 μmol, 0.20 eq), RuPhos (143 mg, 306 μmol, 0.40 eq), Cs2CO3 (747 mg, 2.29 mmol, 3.00 eq)을 N2 하에서 한번에 첨가했다. 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (20.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20.0 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 NaHCO3 용액 (5 mL)로 중화하고 에틸 아세테이트 (50 mL × 2)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 화합물 벤질 (2S)-4-[7-(5-클로로-4-이소퀴놀릴)-6, 8-디하이드로-5H- 피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 223 μmol, 29% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 554.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(5- 클로로 -4- 이소퀴놀릴 ) -6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (3.00 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(5-클로로-4-이소퀴놀릴)- 6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (30.0 mg, 54.2 μmol, 1.00 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (0.50 mL, 20% 순도), Pd/C (35.0 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 22%-46%, 10분)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(5-클로로-4-이소퀴놀릴) -6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (8.51 mg, 20.1 μmol, 37% 수율, 99.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 420.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.02 (s, 1H), 8.60 (d, J=4.4 Hz, 1H), 8.35 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.91 (dd, J=1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.75 (dd, J=1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.50 (t, J=7.6 Hz, 1H), 4.54 (br d, J=17.2 Hz, 1H), 4.06 - 3.61 (m, 4H), 3.41 - 3.08 (m, 5H), 3.07 - 2.85 (m, 2H), 2.72 - 2.59 (m, 1H), 2.58 - 2.49 (m, 2H).
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(5- 클로로 -4- 이소퀴놀릴 )-6,8- 디하이드로 -5 H - 피리도[3,4- d ]피리미딘 -4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (0.80 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(5-클로로-4-이소퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (60.0 mg, 143 μmol, 1.00 eq)의 혼합물에 2-플루오로프로프-2-에노산 (25.7 mg, 286 μmol, 2.00 eq), TEA (86.8 mg, 857 μmol, 119 uL, 6.00 eq) 및 T3P (273 mg, 429 μmol, 255 uL, 50% 순도, 3.00 eq)을 0℃에서 N2 하에서 나누어서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (1.00 mL)의 첨가로 0℃에서 켄칭하고, 그 다음 에틸 아세테이트 (10.0 mL × 3)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (5.00 mL × 1)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 22%-52%, 10분)로 정제했다. 화합물 2-[(2S)-4-[7-(5-클로로-4-이소퀴놀릴)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (7.88 mg, 16.0 μmol, 11% 수율, 100% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 492.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.04 (d, J=3.6 Hz, 1H), 8.65 (d, J=6.4 Hz, 1H), 8.35 (d, J=11.6 Hz, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 1H), 7.76 (dd, J=1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 1H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.03 - 4.70 (m, 1H), 4.55 (br dd, J=6.4, 18.0 Hz, 1H), 4.23 - 3.84 (m, 4H), 3.69 (br d, J=6.4 Hz, 1H), 3.50 (br d, J=13.6 Hz, 1H), 3.35 - 3.19 (m, 3H), 3.16 - 3.00 (m, 1H), 2.97 - 2.61 (m, 3H).
실시예 613
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-(2-플루오로아크릴로일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (100 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(2-메틸설파닐 -5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (5.0 g, 11.4 mmol, 1.0 eq), 4-브로모-5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸 (7.05 g, 22.8 mmol, 2.0 eq), Pd2(dba)3 (2.09 g, 2.28 mmol, 0.2 eq), RuPhos (2.13 g, 4.56 mmol, 0.4 eq) 및 Cs2CO3 (9.29 g, 28.5 mmol, 2.5 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지하고, 그 다음 혼합물을 90℃에서 8 시간 동안 N2 분위기 하에서 교반했다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 200 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (100 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 20/1 내지 2/1)로 정제하고, 그리고 추가로 역상 플래시 [물 (0.1% 포름산)/아세토니트릴)]로 정제했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 7로 조정하고 에틸 아세테이트 (3 × 100 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (4.90 g, 7.20 mmol, 63% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 667.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.50 - 7.31 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd, J=2.4, 9.6 Hz, 1H), 5.27 - 5.13 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.13 - 3.97 (m, 3H), 3.89 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.81 - 3.68 (m, 1H), 3.51 (t, J=5.2 Hz, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.04 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.93 - 2.66 (m, 4H), 2.62 - 2.48 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.85 - 1.67 (m, 3H).
단계 B: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설파닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 749 μmol, 1.0 eq)의 용액에 m-CPBA (152 mg, 749 μmol, 85% 순도, 1.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 7로 조정했다. 그 다음 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 539 μmol, 72% 수율, 92% 순도)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 683.
단계 C: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (900 mg, 1.32 mmol, 1.0 eq)의 용액에 t-BuONa (379 mg, 3.95 mmol, 3.0 eq) 및 [(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메탄올 (398 mg, 2.64 mmol, 2.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (630 mg, 793 μmol, 60% 수율, 97% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 770.
단계 D: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4- 디플루오로 -1- 메틸 - 피롤리딘 -2-일]메톡시]-7-(5,6- 디메틸-1- 테트라하이드로피란 -2-일- 인다졸 -4-일)-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (2 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸) -4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 519 μmol, 1.0 eq)의 용액에 건조 Pd/C (50 mg, 10% 순도) 및 NH3/메탄올 (1 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6- 디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (330 mg, 519 μmol, 99% 수율)을 황색 고체로서 수득하고 정제없이 다음 단계에서 직접 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 636.
단계 E: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1 H -인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 디클로로메탄 (50 uL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸 -피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1-테트라하이드로피란-2-일-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (50 mg, 78.6 μmol, 1.0 eq)의 용액에 TFA (359 mg, 3.15 mmol, 233 μL, 40 eq)을 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고 물 (10 mL)로 희석했다. 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 pH ~ 8로 조정하고 디클로로메탄 (3 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 생성물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 30% - 60%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (7.29 mg, 13.2 μmol, 17% 수율, 99.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 552.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.95 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 4.48 (dd, J=4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.33 - 4.19 (m, 3H), 4.00 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.83 (br d, J=11.6 Hz, 1H), 3.51 (t, J=5.2 Hz, 2H), 3.42 (dt, J=5.6, 11.7 Hz, 1H), 3.26 (br s, 1H), 3.17 - 2.95 (m, 4H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.84 - 2.62 (m, 3H), 2.61 - 2.49 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.32 - 2.18 (m, 1H).
단계 F: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1 H -인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로- 1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 181 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (24.5 mg, 272 μmol, 1.5 eq)의 용액에 T3P (461 mg, 725 μmol, 431 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 4.0 eq) 및 TEA (147 mg, 1.45 mmol, 202 uL, 8.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 ×30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 38% - 68%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (11 mg, 17.5 μmol, 10% 수율, 99.2% 순도, 100% ee)을 황백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 624.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.27 - 9.49 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.55 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.86 (br s, 1H), 4.46 (dd, J=4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 3.88 (m, 6H), 3.66 - 3.25 (m, 5H), 3.19 - 2.62 (m, 7H), 2.60 - 2.45 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.32 - 2.19 (m, 1H).
실시예 614
2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-디플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-1-((E)-4-플루오로부트-2-에노일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S )-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1 H -인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-[( E )-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸- 피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 181 μmol, 1.0 eq) 및 (E)-4-플루오로부트-2-에노산 (28.3 mg, 272 μmol, 1.5 eq)의 용액에 T3P (461 mg, 725 μmol, 431 uL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 4.0 eq) 및 TEA (147 mg, 1.45 mmol, 202 uL, 8.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 40% - 70%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-디플루오로-1-메틸-피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-[(E)-4-플루오로부트-2-에노일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (12 mg, 18.3 μmol, 10% 수율, 97.3% 순도, 95% ee)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 638.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 10.06 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.07 - 6.97 (m, 1H), 6.61 (br d, J=14.8 Hz, 1H), 5.20 - 5.07 (m, 3H), 4.48 (dd, J=4.8, 11.2 Hz, 1H), 4.31 - 4.27 (m, 3H), 4.20 - 3.80 (m, 3H), 3.55 (br t, J=5.2 Hz, 3H), 3.49 - 3.27 (m, 2H), 3.13 (br s, 1H), 3.05 - 2.63 (m, 6H), 2.62 - 2.46 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 1H).
실시예 615
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (15 mL) 중 [(2S)-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (217 mg, 1.51 mmol, 68.2 μL, 3 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2- 메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 504 μmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (145 mg, 1.51 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 50 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA) / 아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 포화 Na2CO3 용액 (10 mL)으로 중화하고 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 분리된 유기층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (180 mg, 267 μmol, 53% 수율, 99.8% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 675.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.27 (s, 9H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.13 - 4.04 (m, 1H), 3.95 - 3.69 (m, 2H), 3.56 - 3.34 (m, 2H), 3.28 - 2.48 (m, 13H), 2.47 - 2.33 (m, 3H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 1.88 (br dd, J=8.4, 12.6 Hz, 1H), 1.56 (ddd, J=4.6, 7.8, 12.6 Hz, 1H), 1.16 (d, J=4.0 Hz, 3H), 1.10 - 0.98 (m, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(8- 메틸 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1,4,4- 트리메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (4 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1- 나프틸)-2-[[(2S)-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 193 μmol, 1 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (2 mL, 15% 순도) 및 Pd/C (26 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1,4,4-트리메틸 피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 159 μmol, 85.9% 순도)을 황색 고체로서 수득하고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용했다. LCMS [ESI, M+1]: 540.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 에틸 아세테이트 (15 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S) -1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90 mg, 143 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (38.7 mg, 430 μmol, 3 eq) 및 Et3N (130 mg, 1.29 mmol, 179 uL, 9 eq)의 용액에 T3P (365 mg, 573 μmol, 341 uL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 4 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (3 mL)로 희석했다. 유기층을 분리하고, 염수 (1 × 10 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올 = 20/1 내지 10/1)로 정제했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 62% - 89%, 10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸)-2-[[(2S)-1,4,4-트리메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (12.7 mg, 20.6 μmol, 99.7% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 612.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.79 - 7.56 (m, 2H), 7.51 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.08 (m, 2H), 5.65 - 5.08 (m, 2H), 4.85 (br s, 1H), 4.49 - 4.32 (m, 1H), 4.30 - 3.96 (m, 4H), 3.95 - 3.71 (m, 1H), 3.59 - 3.35 (m, 2H), 3.28 - 2.54 (m, 13H), 2.42 (br s, 3H), 2.16 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 1.96 - 1.81 (m, 1H), 1.63 - 1.45 (m, 1H), 1.15 (br s, 3H), 1.06 (br s, 3H).
실시예 616
2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-( 시아노메틸 )-4-[2-[[( 2 S ,4 S ) -1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (20 mL) 중 [(2S,4S)-1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메탄올 (326 mg, 2.52 mmol, 68.2 uL, 3 eq) 및 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(8-메틸-1-나프틸) -2-메틸설피닐-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, 841 μmol, 1 eq)의 용액에 t-BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)으로 정제했다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 pH = 8로 염기성화하고 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 유기상을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4S) -1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (328 mg, 461 μmol, 55% 수율, 92.7% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 661.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[2-[[( 2 S ,4 S )-1,4- 디메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]- 7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (4 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S,4S) -1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 151 μmol, 1 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (2 mL, 20% 순도) 및 Pd/C (20 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep - HPLC (칼럼: Phenomenex Synergi C18 150 * 30mm * 4um; 이동상: [물 (0.225% FA) - ACN]; B%: 13% - 43%, 10분)으로 정제했다. 그 후, 잔류물을 prep - HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 55% - 85%, 10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (13.9 mg, 26.4 μmol, 17% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 526.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.69 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.64 (dd, J=2.6, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (dt, J=4.0, 7.8 Hz, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.43 (dt, J=4.8, 10.2 Hz, 1H), 4.28 - 4.11 (m, 2H), 4.07 - 3.70 (m, 3H), 3.48 (br d, J=11.8 Hz, 1H), 3.38 - 2.82 (m, 11H), 2.80 - 2.64 (m, 2H), 2.61 - 2.53 (m, 3H), 2.49 (t, J=8.6 Hz, 1H), 2.42 (d, J=2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.15 (m, 2H), 1.39 - 1.25 (m, 1H), 1.08 (d, J=6.8 Hz, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-4-[2-[[(2 S ,4 S )-1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (10 mL) 중 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-디메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (100 mg, 190 μmol, 1 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (51.4 mg, 571 μmol, 3 eq) 및 Et3N (173 mg, 1.71 mmol, 238 uL, 9 eq)의 용액에 T3P (484 mg, 761 μmol, 452 uL, 50% 순도, 4 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 잔류물을 물 (10 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (2 × 20 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (1 × 20 mL)로 세정하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)로 정제했다. 그 후, 잔류물을 prep - HPLC (칼럼: Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v / v) - ACN]; B%: 60% - 90%, 10분)으로 정제했다. 잔류물을 감압 하에서 농축하여 ACN을 제거하고, 그 다음 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[2-[[(2S,4S)-1,4-디메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-7-(8-메틸-1-나프틸)-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (22.2 mg, 37.1 μmol, 19% 수율, 99.8% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 598.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.86 (br s, 1H), 4.48 - 4.35 (m, 1H), 4.30 - 3.99 (m, 4H), 3.95 - 3.73 (m, 1H), 3.60 - 3.39 (m, 2H), 3.29 - 2.94 (m, 5H), 2.93 - 2.67 (m, 7H), 2.66 - 2.56 (m, 1H), 2.55 - 2.47 (m, 1H), 2.43 (d, J=4.6 Hz, 3H), 2.35 - 2.13 (m, 2H), 1.36 - 1.25 (m, 1H), 1.09 (dd, J=3.0, 6.8 Hz, 3H).
실시예 617
2-((S)-1-(2-플루오로아크릴로일)-4-(7-(3-메틸이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트. 디옥산 (6 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 593 μmol, 1.0 eq), 4-브로모-3-메틸-이소퀴놀린 (198 mg, 890 μmol, 1.5 eq), Cs2CO3 (483 mg, 1.48 mmol, 2.5 eq), BINAP-Pd-G3 (118 mg, 119 μmol, 0.2 eq)의 혼합물을 탈가스하고 N2로 3회 퍼지했다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 가열했다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 30 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트 /메탄올=100/1 내지 10:1)로 정제했다. 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 303 μmol, 51% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 647.
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(3- 메틸 -4- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. 메탄올 (2 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸) -4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (50 mg, 77.3 μmol, 1.0 eq)의 용액에 건조 Pd/C (10 mg, 10% 순도) 및 NH3/MeOH (1 mL, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 30% - 60%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (7.81 mg, 14.9 μmol, 19% 수율, 98.3% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 513.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.07 (s, 1H), 8.14 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.65 (dt, J=1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.58 - 7.47 (m, 1H), 4.41 (br dd, J=4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.3 (s, 2H), 4.16 (dd, J=6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.10 - 3.93 (m, 1H), 3.91 - 3.77 (m, 1H), 3.57 - 3.37 (m, 2H), 3.36 - 3.21 (m, 1H), 3.18 - 2.85 (m, 6H), 2.75 - 2.61 (m, 5H), 2.56 (br d, J=6.8 Hz, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.12 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 3H).
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 ) -4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (80 mg, 156 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (28.1 mg, 312 μmol, 2.0 eq)의 용액에 T3P (297 mg, 468 μmol, 278 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 3.0 eq) 및 TEA (126 mg, 1.25 mmol, 173 μL, 8.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (3 × 20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150 * 25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 35% - 65%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일) -4-[7-(3-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (12 mg, 19.9 μmol, 13% 수율, 97.4% 순도, 100% ee)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 585.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 9.08 (s, 1H), 8.26 - 8.04 (m, 1H), 7.97 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 7.73 - 7.60 (m, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 1H), 5.42 (d, J=47.6 Hz, 1H), 5.27 (dd, J=3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.45 - 3.92 (m, 7H), 3.83 - 3.25 (m, 4H), 3.22 - 2.59 (m, 10H), 2.49 (s, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
실시예 618
(S)-벤질-2-(시아노메틸)-4-(7-(7-플루오로이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트
단계 A: ( S )-벤질-2-(시아노메틸)-4-(7-(7-플루오로이소퀴놀린-4-일)-2-((( S )-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10.0 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 0.59 mmol, 1.0 eq)의 용액에 4-브로모-7-플루오로-이소퀴놀린 (268 mg, 1.19 mmol, 2.0 eq), RuPhos (111 mg, 237 μmol, 0.40 eq), Cs2CO3 (483 mg, 1.48 mmol, 2.5 eq) 및 Pd2(dba)3 (109 mg, 118 μmol, 0.20 eq)을 25℃에서 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (5.0 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 × 5.0 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (3 × 5.0 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1 내지 석유 에테르/에틸 아세테이트/EtOH (2% NH3H2O) = 4/3/1)로 정제했다. 그 다음 조 생성물을 역상 HPLC (0.1% FA 조건)으로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 (S)-벤질-2-(시아노메틸)-4-(7-(7-플루오로이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (105 mg, 160 μmol, 27% 수율, 99% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [M+1]: 651.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름 -d) δ = 2.04 - 2.08 (m, 4 H), 2.69 (d, J=5.64 Hz, 1 H), 2.73 (d, J=5.52 Hz, 1 H), 2.81 - 2.85 (m, 3 H), 2.87 - 3.02 (m, 3 H), 3.09 - 3.19 (m, 1 H), 3.32 - 3.45 (m, 3 H), 3.45 - 3.55 (m, 1 H), 3.57 - 3.68 (m, 1 H), 3.99 (br d, J=12.52 Hz, 1 H), 4.09 - 4.17 (m, 1 H), 4.28 - 4.34 (m, 1 H), 4.31 (m, 1 H), 4.46 (dd, J=11.84, 4.31 Hz, 1 H), 4.63 - 4.74 (m, 1 H), 4.80 (br dd, J=11.32, 6.82 Hz, 1 H), 5.20 - 5.23 (m, 2H), 5.30 - 5.32 (m, 2 H), 7.35 - 7.42 (m, 5 H), 7.47 - 7.53 (m, 1 H), 7.60 (dd, J=8.68, 2.56 Hz, 1 H), 8.16 (dd, J=9.24, 5.25 Hz, 1 H), 8.22 - 8.25 (m, 1 H), 8.95 - 9.00 (m, 1 H).
단계 B: 2-(( S )-4-(7-(7-플루오로이소퀴놀린-4-일)-2-((( S )-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴. MeOH (1.0 mL) 중 (S)-벤질 2-(시아노메틸)-4-(7-(7-플루오로이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (30.0 mg, 46.1 μmol, 1.0 eq)의 용액에 NH3/MeOH (46.1 μmol, 1.5 mL, 15% 순도, 1.0 eq) 및 Pd/C (20.0 mg, 46.1 μmol, 10% 순도, 1.0 eq)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2 (93.1 ug, 46.1 μmol, 1.0 eq)로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하에서 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 MeOH (20 mL)로 세정했다. 여과물을 45℃에서 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 prep-HPLC (염기성 조건) (칼럼: Xtimate C18 150*25 mm*5 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 43%-73%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-((S)-4-(7-(7-플루오로이소퀴놀린-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (7 mg, 13.3 μmol, 28.8% 수율, 98% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [M+1]: 517.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 1.75 - 1.90 (m, 3 H), 1.99 - 2.13 (m, 1 H), 2.24 - 2.34 (m, 1 H), 2.45 - 2.51 (m, 3 H), 2.53 - 2.58 (m, 2 H), 2.64 - 2.74 (m, 1 H), 2.80 - 2.88 (m, 2 H), 2.89 - 2.96 (m, 1 H), 2.97 - 3.06 (m, 1 H), 3.07 - 3.18 (m, 3 H), 3.22 - 3.33 (m, 1 H), 3.38 - 3.48 (m, 2 H), 3.82 - 3.89 (m, 1 H), 4.03 (br d, J=12.36 Hz, 1 H), 4.18 (dd, J=10.56, 6.69 Hz, 1 H), 4.30 (s, 2 H), 4.40 (dd, J = 10.64, 4.75 Hz, 1 H), 7.49 (ddd, J=9.16, 8.35, 2.63 Hz, 1 H), 7.60 (dd, J=8.76, 2.50 Hz, 1 H), 8.17 (dd, J= 9.24, 5.38 Hz, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 8.96 (s, 1 H).
단계 C: 2-[(2 S )-4-[7-(7- 플루오로 -4- 이소퀴놀릴 ) -2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴. DMF (2 mL) 중 2-[(2S)-4-[7-(7-플루오로-4-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (90.7 mg, 175 μmol, 1.0 eq) 및 2-플루오로프로프-2-에노산 (31.6 mg, 351 μmol, 2.0 eq)의 용액에 T3P (335 mg, 526 μmol, 313 μL, 에틸 아세테이트 중 50% 순도, 3.0 eq) 및 TEA (142 mg, 1.40 mmol, 195 μL, 8.0 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 희석하고 물 (3 × 20 mL)로 세정했다. 조합된 유기층을 염수 (20 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 여과물을 감압 하에서 농축하여 잔류물을 수득했다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 에틸 아세테이트/메탄올=100/1 내지 10/1)로 정제하고, 그리고 추가로 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 mm*5 um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v) - ACN]; B%: 32% - 59%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켰다. 2-[(2S)-4-[7-(7-플루오로-4-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)피페라진-2-일]아세토니트릴 (8 mg, 13.4 μmol, 7.6% 수율, 98.3% 순도, 100% ee)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [M+1]: 589.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 8.97 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.16 (dd, J=5.2, 9.2 Hz, 1H), 7.60 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.54 - 7.40 (m, 1H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.27 (dd, J=3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.87 (br s, 1H), 4.44 - 3.94 (m, 7H), 3.72 - 3.28 (m, 4H), 3.22 - 3.06 (m, 2H), 3.04 - 2.93 (m, 2H), 2.93 - 2.74 (m, 2H), 2.72 - 2.66 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.36-2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
실시예 619
2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(5-메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴
단계 A: 벤질 (2 S )-4-[7-(1- 클로로 -5- 메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트. 톨루엔 (10 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-[2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-5,6,7,8-테트라하이드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 593 μmol, 1.0 eq), 4-브로모-1-클로로-5-메틸-이소퀴놀린 (198 mg, 771 μmol, 1.3 eq), Pd2(dba)3 (109 mg, 119 μmol, 0.2 eq) 및 Cs2CO3 (483 mg, 1.48 mmol, 2.5 eq), XantPhos (137 mg, 237 μmol, 0.4 eq)을 탈가스하고 그 다음 10시간 동안 N2 하에서 95℃로 가열했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 2/1 내지 0/1) 이어서 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 고체 NaHCO3로 중화하고, 진공 하에서 농축하여 MeCN을 제거하고 에틸 아세테이트 (2 × 15 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축하여 벤질 (2S)-4-[7-(1-클로로-5- 메틸-4-이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 209 μmol, 35% 수율, 95% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 681.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.99 (m, 1H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 5H), 5.25 - 5.17 (m, 2H), 4.74 - 4.60 (m, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 2H), 4.08 - 3.88 (m, 2H), 3.83 (br d, J = 17.6 Hz, 1H), 3.61 - 3.51 (m, 1H), 3.50 - 3.36 (m, 1H), 3.31 - 2.94 (m, 6H), 2.91 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 2.81 - 2.59 (m, 4H), 2.46 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 1H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.72 (m, 3H).
단계 B: 2-[(2 S )-4-[7-(5- 메틸 -4- 이소퀴놀릴 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. MeOH (3 mL) 중 벤질 (2S)-4-[7-(1-클로로-5-메틸-4-이소퀴놀릴) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-(시아노메틸)피페라진-1-카복실레이트 (130 mg, 191 μmol, 1 eq)의 용액에 NH3ㆍMeOH (2 mL, 20% 순도), Pd/C (65 mg, 10% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 촉매를 셀라이트의 플러그를 통한 여과로 제거했다. 용매를 감압 하에서 제거하고 80 mg의 조 생성물. 20 mg의 조 생성물을 취하여 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 28%-58%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[(2S)-4-[7-(5-메틸-4- 이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (10.8 mg, 21.0 μmol, 44% 수율, 99.9% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 513.
단계 C: 2-[(2 S )-1-(2- 플루오로프로프 -2- 에노일 )-4-[7-(5- 메틸 -4- 이소퀴놀릴 )-2- [[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4- d ]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴. DCM (1.4 mL) 중 2-플루오로프로프-2-에노산 (24.6 mg, 273 μmol, 2.0 eq) 및 DIEA (70.6 mg, 546 μmol, 95.1 μL, 4.0 eq)의 용액에 HATU (77.9 mg, 205 μmol, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가했다. 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 2-[(2S)-4-[7-(5-메틸-4- 이소퀴놀릴)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (70 mg, 137 μmol, 1.0 eq)을 혼합물에 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 40분 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고 디클로로메탄 (6 × 5 mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 크로마토그래피 (Al2O3, 석유 에테르/에틸 아세테이트 1/1 내지 에틸 아세테이트/메탄올 10/1) 이어서 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 10분)로 정제했다. 원하는 분획을 수집하고 동결건조시켜 2-[(2S)-1-(2-플루오로프로프-2-에노일)-4-[7-(5-메틸-4-이소퀴놀릴)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]피페라진-2-일]아세토니트릴 (20.6 mg, 34.3 μmol, 25% 수율, 97.3% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 585.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 9.03 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 7.83 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 2H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 5.31 - 5.18 (m, 1H), 5.09 - 4.48 (m, 1H), 4.43 - 4.34 (m, 1H), 4.32 - 4.07 (m, 4H), 4.06 - 3.81 (m, 2H), 3.64 - 3.42 (m, 2H), 3.35 - 3.26 (m, 1H), 3.25 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 2.90 - 2.73 (m, 2H), 2.72 - 2.61 (m, 2H), 2.51 - 2.42 (m, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.73 (m, 3H).
실시예 620
1-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸) -2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2- 일] 메톡시]-6,8 -디하이드로 -5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-6-플루오로-1,4-디아제판-1-일]-2-플루오로-프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 4- 벤질 -6- 플루오로 -1,4 - 디아제판 -1- 카복실레이트. tert-부틸 4-벤질 -6-플루오로 -1,4 - 디아제판-1-카복실레이트. DCM (40 mL) 중 tert-부틸 (3R)-4-벤질- 3-(하이드록시메틸) 피페라진 -1-카복실레이트 (1.5 g, 4.90 mmol, 1 eq)의 용액에 DAST (3.95 g, 24.48 mmol, 3.23 mL, 5 eq)을 0℃에서 적가하고, 혼합물을 20℃에서 5시간 동안 교반했다. 혼합물에 sat, NaHCO3 (30 mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트 (30 mL×2)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (PE: EA=20~5:1)로 정제하여 tert-부틸 4-벤질 -6-플루오로 -1,4 - 디아제판-1-카복실레이트 (980 mg, 3.18 mmol, 64.91% 수율)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 309.
단계 B: tert -부틸 6- 플루오로 -1, 4- 디아제판 -1- 카복실레이트. MeOH (20 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-6-플루오로-1,4-디아제판-1-카복실레이트 (900.00 mg, 2.92 mmol, 1 eq) 및 Pd/C (200 mg, 2.92 mmol, 10% 순도, 1 eq) 및 Pd(OH)2 (179.92 mg, 1.28 mmol, 4.39e-1 eq)의 용액에, 그리고 혼합물을 40℃에서 12시간 동안 H2 (50 psi) 하에서 교반했다. 혼합물을 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 6-플루오로-1, 4-디아제판-1-카복실레이트 (630 mg, 2.89 mmol, 98.90% 수율)을 무색 오일로서 수득했다.
단계 C: [7-(8- 클로로 -1- 나프틸 ) -2- [[(2S) -1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]- 6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트. DCM (7 mL) 중 7-(8-클로로-1-나프틸)-2 -[[(2S)-1 -메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (700 mg, 1.65 mmol, 1 eq) 및 TEA (500.09 mg, 4.94 mmol, 687.88 μL, 3 eq), 4A 분자체 (500 mg)의 용액에 Tf2O (697.18 mg, 2.47 mmol, 407.71 μL, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 0℃에서 30분 동안 교반했다. 혼합물에 물 (2 mL)을 첨가하고 DCM (5mL)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (PE: EA=10~1:1)로 정제하여 [7-(8- 클로로-1-나프틸)-2-[[(2S) -1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도 [3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (470 mg, 843.83 μmol, 51.22% 수율)을 적색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 557.
단계 D: tert -부틸 4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8 - 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d ]피리미딘 -4-일]-6- 플루오로 -1,4-디아제판-1-카복실레이트. DMAC (5 mL) 중 [7-(8-클로로-1-나프틸)-2- [[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일] 메톡시]-6,8-디하이드로- 5H-피리도[3,4-d] 피리미딘-4 -일], 트리플루오로메탄설포네이트 (440 mg, 789.97 μmol, 1 eq) 및 tert-부틸-6 -플루오로-1, 4-디아제판-1-카복실레이트 (258.64 mg, 1.18mmol, 1.5 eq)의 용액에 DIEA (306.29 mg, 2.37 mmol, 412.79 μL, 3 eq)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 역 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 칼럼 (0.001 FA)로 정제하여 tert-부틸 4-[7-(8- 클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시]-6,8 -디하이드로-5H-피리도[3,4-d ]피리미딘-4-일]-6-플루오로-1,4-디아제판-1-카복실레이트 (260 mg, 415.88 μmol, 52.65% 수율)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 625.
단계 E: 7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-4-(6- 플루오로 -1,4- 디아제판 -1-일) -2-[[(2S)-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘. DCM (3 mL) 중 tert-부틸 4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-6-플루오로-1,4-디아제판-1-카복실레이트 (240.00 mg, 383.89 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (12.32 g, 108.05 mmol, 8.00 mL, 281.45 eq)을 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 농축하고, DCM (10 mL)을 첨가하고, 포화Na2CO3 (5 mL)로 세정했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 7-(8-클로로-1- 나프틸)-4-(6-플루오로-1,4-디아제판-1-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H피리도[3,4-d] 피리미딘 (200 mg, 조물질)을 황색 고체로서 수득했다. 이러한 물질의 일부 (160 mg, 304.73 μmol)을 다음 단계에서 직접 사용했다. 40 mg의 조 생성물을 prep-HPLC (prep-HPLC (칼럼: 심팩(Shim-pack) C18 150*25*10um; 이동상: [물 (0.225%FA)-ACN];B%: 4%-34%,10분)으로 정제하고, 그 다음 잔류물을 prep-HPLC (칼럼: Xtimate C18 150*25mm*5um; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 60%-90%,10분)로 정제하여 7-(8-클로로-1-나프틸)-4-(6-플루오로-1,4-디아제판-1-일)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (9 mg, 16.99 μmol)을 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 523.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ =7.76 (d, J=8.07 Hz, 1 H) 7.61 (t, J=8.38 Hz, 1 H) 7.52 (br d, J=7.46 Hz, 1 H) 7.44 (dt, J=15.86, 7.90 Hz, 1 H) 7.34 (t, J=7.76 Hz, 1 H) 7.25-7.18 (dd, J=7.46 Hz, 1 H) 4.80 - 5.24 (m, 1 H) 4.31 - 4.46 (m, 2 H) 4.08 - 4.30 (m, 2 H) 3.71 - 4.04 (m, 3 H) 3.50 - 3.68 (m, 2 H) 2.81 - 3.37 (m, 7 H) 2.46 - 2.73 (m, 5 H) 2.25 - 2.35 (m, 1 H) 2.01 - 2.14 (m, 1 H) 1.82 - 1.91 (m, 3 H).
단계 F: 1-[4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2S)-1- 메틸피롤리딘 - 2- 일] 메톡시]-6,8 - 디하이드로 -5H- 피리도[3,4-d]피리미딘 -4-일]-6- 플루오로 -1,4- 디아제판 -1-일]-2- 플루오로 - 프로프 -2-엔-1-온. EA (2 mL) 중 7-(8-클로로-1-나프틸) -4-(6-플루오로-1,4-디아제판-1-일)-2-[[(2S)-1 -메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]- 6,8-디하이드로 -5H-피리도 [3,4-d] 피리미딘 (150.00 mg, 285.68 μmol, 1 eq) 및 2-플루오로프로프 -2-에노산 (51.45 mg, 571.36 μmol, 2 eq)의 용액에 T3P (50 M, 17.14 μL, 3 eq) 및 TEA (231.27 mg, 2.29 mmol, 318.11 μL, 8 eq)을 -40℃에서 첨가하고, 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반했다. 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (2 mL×2)로 추출했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을 prep- HPLC (칼럼: 심팩(Shim-pack) C18 150*25*10um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 18%-48%, 10분)로 정제하여 1-[4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘- 2- 일] 메톡시]-6,8 -디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-6-플루오로-1,4-디아제판-1-일]-2-플루오로- 프로프-2-엔-1-온 (90 mg, 140.78 μmol, 49.28% 수율, 93.4% 순도)을 황색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 597.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ = 7.76 (d, J=8.19 Hz, 1 H) 7.58 - 7.66 (m, 1 H) 7.50 - 7.56 (m, 1 H) 7.38 - 7.50 (m, 1 H) 7.31 - 7.37 (m, 1 H) 7.24 - 7.16 (m, 1 H) 4.90 - 5.55 (m, 3 H) 4.32 - 4.48 (m, 2 H) 3.48 - 4.27 (m, 11 H) 3.21 - 3.43 (m, 1 H) 2.80 - 3.16 (m, 2 H) 2.44 - 2.73 (m, 5 H) 2.25 - 2.36 (m, 1 H) 2.00 - 2.14 (m, 1 H) 1.77 - 1.91 (m, 3 H).
실시예 621
1-[(3R)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-일]-2-플루오로-프로프-2-엔-1-온
단계 A: tert -부틸 (3 R )-4- 벤질 -3-( 하이드록시메틸 )피페라진-1- 카복실레이트. MeCN (100 mL) 중 tert-부틸 (3R)-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (10 g, 46.2 mmol, 1 eq), BnBr (8.70 g, 50.9 mmol, 6.04 mL, 1.1 eq) 및 TEA (7.02 g, 69.36 mmol, 9.65 mL, 1.5 eq)의 반응 혼합물을 12시간 동안 80℃로 가열했다. 완료 시, 반응 혼합물을 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 물 (30 mL) 및 에틸 아세테이트 (50 mL)에 용해시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 × 50 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (30 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르: 에틸 아세테이트=5:1 내지 3:1)로 정제했다. tert-부틸 (3R)-4-벤질-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (9 g, 29.4 mmol, 64% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 307.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.28 - 7.20 (m, 5H), 3.95 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 5.6, 11.6 Hz, 1H), 3.61 (br dd, J = 3.2, 13.6 Hz, 1H), 3.52 (br dd, J = 4.0, 11.2 Hz, 2H), 3.35 (br d, J = 13.3 Hz, 2H), 3.09 (br s, 1H), 2.77 - 2.65 (m, 1H), 2.51 (br s, 1H), 2.20 (ddd, J = 3.2, 8.4, 12.0 Hz, 1H), 1.38 (s, 9H).
단계 B: tert -부틸 (3 R )-4- 벤질 -3- 포르밀 -피페라진-1- 카복실레이트. DMSO (13.8 g, 176 mmol, 13.8 mL, 6.0 eq)을 디클로로메탄 (90 mL) 중 (COCl)2 (11.2 g, 88.1 mmol, 7.71 mL, 3.0 eq)의 -65℃ 용액에 첨가했다. 10분 후, 디클로로메탄 (40 mL) 중 tert-부틸 (3R)-4-벤질-3-(하이드록시메틸)피페라진-1-카복실레이트 (9 g, 29.4 mmol, 1 eq)의 용액을 15분에 걸쳐 느리게 도입했다. -65℃에서 1시간 동안 교반한 후, TEA (29.7 g, 294 mmol, 40.9 mL, 10.0 eq)을 첨가했다. 혼합물을 30분에 걸쳐 28 ℃로 가온시키고 그 다음 추가 30분 동안 그 온도에서 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 켄칭하고 분리했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 (3R)-4-벤질-3-포르밀-피페라진-1-카복실레이트 (8.9 g, 29 mmol)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
단계 C: tert -부틸 (3 R )-4- 벤질 -3-( 디플루오로메틸 )피페라진-1- 카복실레이트. 디클로로메탄 (180 mL) 중 tert-부틸 (3R)-4-벤질-3-포르밀-피페라진-1-카복실레이트 (8.9 g, 29.2 mmol, 1.0 eq)의 용액에 DAST (9.43 g, 58.5 mmol, 7.73 mL, 2 eq)을 0℃에서 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (150 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (3 × 150 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 염수 (60 mL)로 세정하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물 (석유 에테르: 에틸 아세테이트=5:1)을 실리카겔 크로마토그래피 (석유 에테르: 에틸 아세테이트=1:0 내지 10:1)로 정제했다. tert-부틸 (3R)-4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.5 g, 4.48 mmol, 2개의 단계 15% 수율, 97.5% 순도)을 황색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:327.
단계 D: tert -부틸 (3 R )-3-( 디플루오로메틸 )피페라진-1- 카복실레이트. MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 (3R)-4-벤질-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.5 g, 4.60 mmol, 1.0 eq)의 용액에 Pd/C (150 mg, 10% 순도), Pd(OH)2/C (150 mg, 20% 순도)을 N2 하에서 첨가했다. 현탁액을 진공 하에서 탈가스하고 H2로 몇 번 퍼지했다. 혼합물을 H2 (50 psi) 하에서 40℃에서 12시간 동안 교반했다. 완료 시, 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 하에서 농축했다. tert-부틸 (3R)-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트 (1.0 g, 4.23 mmol, 92% 수율)을 황색 오일로서 수득했고, 이것을 추가 정제없이 다음 단계를 위해 사용했다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 5.91 - 5.43 (m, 1H), 4.17 - 3.78 (m, 2H), 3.13 - 2.66 (m, 5H), 1.48 (s, 9H).
단계 E: [7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일] 메톡시 ]-6,8- 디하이드로 -5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트. 디클로로메탄 (20 mL) 중 7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (1.0 g, 2.35 mmol, 1 eq), 4A 분자체 (1.0 g) 및 TEA (953 mg, 9.41 mmol, 1.31 mL, 4.0 eq)의 용액에 Tf2O (996 mg, 3.53 mmol, 582 uL, 1.5 eq)을 -40℃에서 첨가하고 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (15 mL)로 켄칭했다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과했다. 여과물을 분리하고 수성층을 디클로로메탄 (30 mL)로 추출했다. 유기층을 염수 (10 mL)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르: 에틸 아세테이트 = 5:1 내지 0:1)로 정제하여 [7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (1.0 g, 1.63 mmol, 69 % 수율, 91% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:557.
단계 F: tert -부틸 (3 R )-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트. [7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일] 트리플루오로메탄설포네이트 (1.0 g, 1.80 mmol, 1.0 eq) 및 tert-부틸 (3R)-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트 (780 mg, 3.30 mmol, 1.84 eq)의 반응 혼합물을 90℃에서 5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 MeCN (5 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 역상 플래시 [물 (0.1% FA)/아세토니트릴]로 정제했다. 분획을 고체 NaHCO3로 pH >7로 염기성화하고 진공 하에서 농축했다. 수성층을 에틸 아세테이트 (3 × 20 mL)로 추출하고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 prep-TLC (디클로로메탄 :MeOH=7:1)로 정제하여 tert-부틸 (3R)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트 (80 mg, 122 μmol, 7 % 수율, 98% 순도)을 갈색 오일로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 643.
단계 G: 7-(8-클로로-1-나프틸)-4-[(2 R )-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2 S )-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5 H -피리도[3,4-d]피리미딘. 디클로로메탄 (0.05 mL) 중 tert-부틸 (3R)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-카복실레이트 (20 mg, 31.1 μmol, 1 eq)의 용액에 TFA (70.9 mg, 622 μmol, 46.0 μL, 20 eq)을 첨가했다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 포화 Na2CO3 (4 mL)로 켄칭하고 디클로로메탄: MeOH(10: 1, 3 × 8 mL)을 첨가했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 Prep-HPLC(칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 43%-73%,10분)로 정제했다. 분획을 농축시키고 동결건조시켰다. 7-(8-클로로-1-나프틸)-4-[(2R)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (4.22 mg, 7.77 μmol, 25% 수율, 100% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]:543.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.81 - 7.74 (m, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.16 (m, 1H), 6.69 - 6.09 (m, 1H), 4.68 - 4.54 (m, 1H), 4.51 - 4.34 (m, 2H), 4.30 - 4.11 (m, 1H), 4.07 - 3.68 (m, 2H), 3.63 - 3.46 (m, 2H), 3.44 - 3.31 (m, 2H), 3.30 - 3.21 (m, 1H), 3.20 - 2.97 (m, 4H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.78 - 2.67 (m, 1H), 2.58 - 2.49 (m, 3H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.94 - 1.73 (m, 3H).
단계 H: 1-[(3 R )-4-[7-(8- 클로로 -1- 나프틸 )-2-[[(2 S )-1- 메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-일]-2-플루오로-프로프-2-엔-1-온. 에틸 아세테이트 (1 mL) 중 7-(8-클로로-1-나프틸)-4-[(2R)-2-(디플루오로메틸)피페라진-1-일]-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘-2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘 (45 mg, 82.9 μmol, 1.0 eq), 2-플루오로프로프-2-에노산 (22.4 mg, 249 μmol, 3.0 eq)의 용액에 4A 분자체 (100 mg)를 첨가했다. 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 후, TEA (126 mg, 1.24 mmol, 173 μL, 15 eq) 및 T3P (211 mg, 331 μmol, 197 μL, 50% 순도, 4 eq)을 0℃에서 첨가했다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반했다. 완료 시, 반응 혼합물을 물 (1 mL)로 켄칭하고 에틸 아세테이트 (3 × 5 mL)로 추출했다. 조합된 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공 하에서 농축했다. 잔류물을 칼럼 (Al2O3, 석유 에테르 :에틸 아세테이트= 3:1 내지 0:1), 이어서 prep-HPLC (칼럼: Waters Xbridge 150*25 5u; 이동상: [물 (0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,10분)로 정제하여 1-[(3R)-4-[7-(8-클로로-1-나프틸)-2-[[(2S)-1-메틸피롤리딘 -2-일]메톡시]-6,8-디하이드로-5H-피리도[3,4-d]피리미딘-4-일]-3-(디플루오로메틸)피페라진-1-일]-2-플루오로-프로프-2-엔-1-온 (5.98 mg, 9.72 μmol, 11% 수율, 99.4% 순도)을 백색 고체로서 수득했다. LCMS [ESI, M+1]: 615.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.81 - 7.75 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.55 (td, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.51 - 7.41 (m, 1H), 7.36 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.17 (m, 1H), 6.48 - 5.83 (m, 1H), 5.47 - 5.31 (m, 1H), 5.27 - 5.19 (m, 1H), 4.88 - 4.65 (m, 1H), 4.59 - 4.31 (m, 4H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 4.04 - 3.76 (m, 2H), 3.69 - 3.44 (m, 3H), 3.33 - 2.92 (m, 4H), 2.75 - 2.64 (m, 1H), 2.61 - 2.52 (m, 1H), 2.49-2.48 (m, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.88 - 1.72 (m, 3H).
표 1에서 열거된 실시예 622 - 678은 일반적인 반응식에서 설명된 방법 및 예시된 실시예의 교시에 따라 상업적으로 이용가능한 중간체 및/또는 본 명세서에서 개시된 중간체들을 사용하여 제조된다.
실시예 A
KRas G12C 변형 검정
본 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 KRAS G12C 및 예시적인 화합물의 공유 부가물을 검출하기 위한 LCMS 검정을 사용하여 KRas G12C에 공유적으로 결합하는 것을 설명한다.
GDP-장입된 K-Ras (1-169) G12C, C51S,C80L,C118S 및 GTP-장입된 K-Ras (1-169) G12C,C51S,C80L,C118S,Q61H의 단백질 농도는 K-Ras 검정 완충액 (pH 7.5에서 25 mM HEPES,150 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 및 10 mM 옥틸 β-글루코피라노시드)에서 2 μM로 조정되었다. 각각의 단백질 용액의 10 μL 분취액은 그 다음 384 웰 미세적정 플레이트로 이송되었다. 초기 화합물 원액은 DMSO 내 그들의 원하는 최종 검정 농도의 50배로 생성되었다.
식 (I)의 예시적인 화합물은 그들의 최종 농도의 최종 2배로 K-Ras 검정 완충액에 25-배 희석되었다. 각각의 희석된 화합물 용액의 10 μL 분취액은 그 다음 미세적정 플레이트에서 각각의 단백질 용액에 첨가되어 반응을 개시하였다. 전형적인 최종 화합물 농도는 3.0, 5.0 및 25.0 μM이었다. 각각의 시점에서, 반응은 25 mM 아세트산 용액의 20 μL로 켄칭되었다. 일반 검정 종점은 15, 180 및 1440분이었다. 일단 모든 반응이 켄칭되었다면, 플레이트는 열 밀봉되었고 샘플은 데이터 수집을 위하여 LC/MS 시스템에 주입되었다.
데이터 수집은 Agilent 6520 Q-TOF 정확 질량 분광분석기에서 이루어졌다. 샘플은 그것의 액상으로 C-3 역상 칼럼에 주입되어 검정 완충액을 제거하였고 질량 분광분석기용 샘플을 제조하였다. 단백질은 칼럼으로부터 아세토니트릴 구배를 사용하여 용출되었고 직접적으로 질량 분석기에 공급되었다. 초기 미가공 데이터 분석은 데이터 수집 직후 Agilent MassHunter 소프트웨어에서 이루어졌다.
온전한 단백질의 미가공 데이터 분석은 독점적으로 Mass Hunter에서 제공된 최대 엔트로피 디콘볼루션을 사용하여 용액내 각각의 단백질의 다중 전하 상태의 디콘볼루션이다. 복잡성을 최소화하기 위해, 제한된 질량 범위에 대해 데이터만, 최소 1 달톤 질량 단계 간격으로, 분석용으로 간주되었다. 미가공 데이터 분석 동안 확인된 모든 질량의 높이는 Spotfire® 데이터 분석 소프트웨어에서 추가로 분석되도록 유출되었다.
최종 데이터 분석은 Spotfire® 데이터 분석 소프트웨어 패키지에서 다단계 공정이었다. 간단히, 각각의 단백질 질량은 그 샘플의 총 신호의 퍼센트로서 계산되었고, 그 백분율은 그 다음 반응성 화합물의 부재 하에서 단백질의 신호의 백분율로 정규화되었다. 그들 정규화된 신호는 정규화된 대조군의 퍼센트 (POC)로서 보고되었다. 증가된 POC 값은 동일한 조건 하에서 다른 화합물과 비교하여 주어진 조건에서 더 높은 정도의 변형을 표시하는 화합물을 나타낸다. 3시간 동안 5 μM 농도에서 시험된 식 (I) 및 식 (II)의 예시적인 화합물에 대한 결과는 표 2에서 나타난다. 핵심: "A" ≤ 25% POC; "B" > 25% POC - ≤ 50% POC; "C" > 50% POC 및 ND = 결정되지 않음.
실시예 B
KRas G12C-의존적 세포 성장의 억제
본 실시예는 본 발명의 예시적인 화합물이 KRas G12C를 발현시키는 종양 세포주의 성장을 억제시킨다는 것을 설명한다.
본 발명의 예시적인 화합물에 의한 KRAs G12C의 세포 억제는 KRas 활성의 다운스트림 마커, 인산화된 ERK ("포스포-ERK")의 양을 측정함으로써 결정되었다.
NCI-H358 세포 (ATCC CRL-5807)은 KRas G12C를 발현시키고 10% 우태 혈청, 페니실린/스트렙토마이신 및 10 mM HEPES로 보충된 RPMI 배지에서 성장되었다. 세포는 50,000 세포/웰의 농도로 폴리-D-라이신 코팅된 96-웰 플레이트에서 분주되었고 8-12시간 동안 부착하게 되었다. 희석된 화합물은 그 다음 0.5 % DMSO의 최종 농도로 첨가되었다. 3시간 후, 배지는 제거되었고, 150 μL의 4% 포름알데하이드는 첨가되었고 플레이트는 20분 동안 인큐베이션되었다. 플레이트는 PBS로 세정되었고, 10분 동안 150 μL의 빙랭된 100% 메탄올을 사용하여 투과되었다. 플레이트에 결합하는 비-특이적 항체는 실온에서 1시간 동안 100 μL Licor Blocking Buffer (Li-Cor Biotechnology, Lincoln NE)를 사용하여 차단되었다. 양성 대조군 샘플 및 세포가 부족한 샘플은 표준으로서 시험 샘플로 병행 처리되었다.
포스포-ERK 양은 ERK의 인산화된 형태에 특이적인 및 GAPDH의 양에 비교된 항체를 사용하여 결정되었다. 검출에 사용된 일차 항체는 아래와 같이 첨가되었다: 1:500 희석된 포스포-ERK (Cell Signaling cs9101) 및 Licor block + 0.05% Tween 20에서 1:5000 희석된 GAPDH (Millipore MAB374). 플레이트는 실온에서 2시간 동안 인큐베이션되었다. 플레이트는 PBS + 0.05% Tween 20으로 세정되었다.
일차 항체를 시각화하는데 사용된 이차 항체는 아래와 같이: 1:1000 희석된 항-토끼-680 및 Licor Block + 0.05% Tween 20에서 1:1000 희석된 항-마우스-800 첨가되었고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션되었다. 플레이트는 PBS + 0.05% Tween 20으로 세정되었다. PBS의 100 μL 분취액은 각 웰에 첨가되었고 플레이트는 LICOR AERIUS 플레이트 리더에서 판독되었다.
pERK(Thr202/Tyr204) 신호는 GAPDH 신호로 정규화되었고 DMSO 대조군 값의 퍼센트는 계산되었다. IC50 값은 용량 반응 곡선의 4 파라미터 적합을 사용하여 생성되었다. 식 (I) 식 (II)의 예시적인 화합물에 대한 결과는 표 3에서 나타난다. 핵심: "A" ≥ 0.0001 - ≤ 1 μM; "B" > 1 μM 및 ND = 결정되지 않음.
실시예 C
전혈내 RA 또는 RB에서 치환을 가지고 있는 화합물의 개선된 시험관내 안정성
본 실시예는 RA 또는 적어도 1개의 RB에서 치환을 포함하는 본 발명의 예시적인 화합물이 RA 및 두 RB 치환체가 수소인 화합물에 비교하여 개선된 전혈 안정성을 나타낸다는 것을 설명한다.
물질: 하기 시약은 받은 대로 사용되었다: 아세토니트릴 (HPLC 등급, Burdick & Jackson, Madison, WI), 포스페이트 완충 식염수 (PBS), pH 7.4 (Sigma-Aldrich, Co., St. Louis, MO), 물 (HPLC 등급, JT Baker, Phillipsburg, NJ), DMSO (EM Science, Merck KGaA, Darmstadt, Germany) 및 이소프로판올 (IPA, 시약 등급, EMD Chemicals, Gibbstown, NJ). 프로판테린 및 에스몰롤 (Sigma-Aldrich)는 검정에서 양성 대조군 화합물로서 사용되었다. 디아제팜 (Sigma-Aldrich)는 정량화용 내부 표준으로서 사용되었다. 인간 전혈은 BioIVT (Westbury, NY)로부터 수득되었고 남성 성별이었다. 모든 다른 시약 및 용매는 Sigma (St. Louis, MO)에 의해 공급된 최고 분석 등급이었고 받은 대로 사용되었다.
혈액 인큐베이션: 전혈 존재에서 본 발명의 대표적인 KRas G12C 억제제 화합물의 시험관내 안정성은 하기 방식으로 수행되었다. 혈액 및 혈장에서 에스테라제에 의한 에스테르 가수분해를 겪는 것으로 알려지는, 에스몰롤 또는 프로판테린은 검정에서 양성 대조군으로서 사용되었다. DMSO내 프로판테린, 에스몰롤, 또는 본 발명의 화합물의 10 mM 모액은 DMSO를 이용하여 500 μM로 희석되었다. 전혈 (600 μL)의 분취액은, 3중으로, 폴리프로필렌 96-딥 웰 플레이트 (Axygen Scientific, Union City, CA)의 적절한 웰들에서 배치되었다. 혈액은 PBS, pH 7.4 (600 μL)를 사용하여 50%로 희석되었다. 희석된 혈액은 37℃에서 15분 동안 사전-인큐베이션되었다. 각각의 웰은 5 μM의 최종 시험 농도를 위하여 12 μl의 500　μM DMSO 모액과 동시에 투약되었다. 플레이트는 플레이트 진탕기 (IKA MTS 2/4 Digital Microtiter Shaker, VWR)에서 10 초 동안 600 rpm으로 혼합되었다. 전혈의 각각의 웰로부터 100 μL의 분취액은 0, 60, 또는 240분 표지된 3개의 별도 96-딥 웰 플레이트로 이송되었다. 각각의 지정된 시점의 마지막에, 적혈구는 100　μl의 물로 용해되었고, 600 rpm으로 1분 동안 혼합되었고, IS (0.625 μM 디아제팜)을 함유하는 800 μl의 아세토니트릴로 중단되었다. 플레이트는 플레이트 진탕기에서 600 rpm으로 1분 동안 혼합되었고 원심분리기에서 2095 x g로 7　분 동안 실온에서 Allegra 벤치톱 원심분리기 (Beckman Coulter, Fullerton, CA)를 사용하여 회전되었다. 상청액 (100 μL)는 액체 샘플 취급 시스템 (Apricot, Perkin-Elmer, Boston, MA)를 사용하여 얕은 96-웰 플레이트 (Costar)로 이송되었다. 100 μL의 물의 첨가는 200 μL의 최종 부피용 상청액의 각 시료에 첨가되었다. 플레이트는 밀봉되었고 각각의 웰의 함량은 LC-MS/MS에 의해 분석되었다.
분석 정량화: LC-MS/MS 시스템은 HTS-PAL 자동시료주입기 (Leap Technologies, Carrboro, NC), HP1200 HPLC (Agilent, Palo Alto, CA), API4000 삼중 사중극자 질량 분광분석기 (PE Sciex, Applied Biosystems 부문, Foster City, CA)로 구성되었다. 피분석물 및 내부 표준의 크로마토그래피 분리는 이동상 A (1% 이소프로필 알코올을 가진 수성 0.1% 포름산) 및 B (아세토니트릴내 0.1% 포름산)을 사용하여 구배 조건과 공조하여 C18 칼럼 (Kinetex®, 30 x 3.0 mm, 2.6 μm 입자 크기, Phenomenex, Torrance, CA)를 사용하여 실온에서 달성되었다. 단일 주입을 위한, 재-평형을 포함하는, 총 실행 시간은 2분이었다. 피분석물의 질량 분광분석 검출은 ESI+ 이온화 방식을 사용하여 달성되었다. 이온 전류는 프로판테린, 에스몰롤, 또는 대표적인 시험 화합물의 모액의 주입 동안 최적화되었다. IS를 포함하는, 피분석물 반응은 각각의 화합물에 독특한 이송의 다중 반응 모니터링 (MRM)에 의해 측정되었다.
계산: 데이터는 획득되었고 피크 면적은 Analyst 1.6.2 소프트웨어 (Sciex)를 사용하여 시험 화합물 및 내부 표준에 대하여 계산되었다. 평균 피크 면적 비는 각각의 샘플에 대하여 IS 그리고 각각의 시험 화합물의 피크 면적 비 (n=3) 평균화에 의해 계산되었다.
피크 면적 표는 BioAssay Enterprise (CambridgeSoft, Cambridge, MA)에 유출되었고, 여기에서 평균 피분석물-대-내부 표준 피크 면적 비는 퍼센트 나머지 (%REM) 및 반감기 (t1/ 2)를 계산하는데 사용되었다. 나머지 퍼센트 (f)는 시간-제로 샘플의 피크 면적 비에 대한 각각의 시점에서의 피크 면적 비의 비율을 결정함으로써 계산되었다. t1/ 2은 km으로 ln(2)를 분할하여 결정되었다. 시험 화합물 (km)의 손실의 비는 -ln(f(t)) 대 시간의 선형 회귀에 의해 결정되었다. 회귀는 형태 "y=mx"를 사용하였고, 따라서 모델은 나머지 100%의 절편을 강제하였고 대사가 1차 동력학을 따른다는 것을 추정하였다.
양성 대조군 화합물, 프로판테린 또는 에스몰롤, 그리고 본 발명의 대표적인 KRas G12C 억제제 화합물은 240-분 인큐베이션 기간 동안 37℃에서 인간 전혈의 존재 하에서 인큐베이션되었다. 37℃에서 240분의 인큐베이션 후 프로판테린, 에스몰롤, 및 각각의 시험 화합물의 반감기는 표 4에서 나타난다. 핵심: A ≤ 200분; B > 200분 - ≤ 1000분; C > 1000분 - ≤ 2000분; 및 D > 2000분
결과: 기대된 대로, 양성 대조군 프로판테린은 98분의 짧은 반감기를 표시하였다. 비교하자면, 인간 전혈에서 RA 또는 RB에 치환을 포함하는 예시적인 KRas G12C 억제제 화합물의 반감기는, 일부 사례에서, 비치환된 화합물, 예를 들어, 실시예 331 및 359에 비교하여 3-배 초과 또는 4-배 초과만큼 증가되어서, 더 큰 생체내 안정성 및 증가된 생체이용률을 초래하는 이들 화합물의 크게 개선된 약력학적 및 약동학적 특성을 초래하였다.
본 발명이 이의 특정 구현예에 관하여 기재되는 동안, 추가 변형을 할 수 있고 본원이, 일반적으로, 본 발명의 원리를 따르고 본 발명이 속하는 당업계에서 알려진 또는 관례적 실시 내에서의 결과로서 그리고 위에서 제시된 필수적인 특징에 적용될 수 있는 바와 같이, 그리고 첨부된 청구항들의 범위에서 아래와 같이 본 개시내용으로부터 그러한 이탈을 포함하는 본 발명의 임의의 변형, 용도, 또는 적응을 포함하기 위한 것임이 이해될 것이다.

Claims (89)

  1. 식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
    식 (II)

    식 중:
    X는 , , 또는 이되, 상기 는 하나 이상의 R8로 선택적으로 치환되고;
    Y는 결합, O, S 또는 N(CH2)2이고;
    R1은 -C(O)C(RA)=C(RB)p이고;
    R2는 -Z-NR5R10 또는 N을 포함하는 헤테로사이클릴알킬이되, 각각의 Z 및 헤테로사이클릴알킬은 하나 이상의 R9로 선택적으로 치환될 수 있고;
    각각의 Z는 C1 - C4 알킬렌이고;
    각각의 R3은 독립적으로 C1 - C3 알킬, 옥소, 할로알킬, 하이드록실 또는 할로겐이고;
    L은 결합이고;
    R4는 아릴 또는 헤테로아릴이되, 각각의 아릴 및 헤테로아릴은 하나 이상의 R6, R7 또는 R8로 선택적으로 치환될 수 있고;
    각각의 R5는 독립적으로 수소 또는 C1 - C3 알킬이고;
    R6은 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이되, 각각의 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴은 하나 이상의 R7로 선택적으로 치환될 수 있고;
    각각의 R7은 독립적으로 할로겐, 하이드록실, C1 - C6 알킬, 사이클로알킬, 알콕시, 할로알킬, 아미노, 시아노, 헤테로알킬, 하이드록시알킬 또는 Q-할로알킬이되, Q는 O 또는 S이고;
    R8은 C1 - C3 알킬이되, 상기 C1 - C3 알킬은 시아노, 할로겐 또는 -OCH3로 선택적으로 치환될 수 있고;
    각각의 R9는 독립적으로 수소, 옥소, 아실, 하이드록실, 하이드록시알킬, 시아노, 할로겐, C1 - C6 알킬, 아르알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 알콕시, 디알킬아미닐, 디알킬아미도알킬, 또는 디알킬아미닐알킬이되, 상기 C1 - C6 알킬은 사이클로알킬로 선택적으로 치환될 수 있고;
    각각의 R10은 독립적으로 수소, 아실, C1 - C3 알킬, 헤테로알킬 또는 하이드록시알킬이고;
    R11은 할로알킬이고;
    RA는 할로겐이고;
    각각의 RB는 독립적으로 수소, 중수소, 시아노, C1 - C3 알킬, 하이드록시알킬, 헤테로알킬, C1 - C3 알콕시, 할로겐, 할로알킬, -ZNR5R11, -C(O)N(R5)2, -NHC(O)C1 - C3 알킬, -CH2NHC(O)C1 - C3 알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 디알킬아미닐알킬, 또는 헤테로사이클릴알킬이되, 상기 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴 부분은 할로겐, 하이드록실, 알콕시 및 C1 - C3 알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되되, 상기 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬의 헤테로아릴 부분은 하나 이상의 R7로 선택적으로 치환되고;
    m은 제로 또는 1 내지 2의 정수이고;
    p는 2이다.
  2. 제1항에 있어서, R1-X는 하기인, 화합물:
    ,
    식 중, 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환된다.
  3. 제2항에 있어서, 각각의 RB는 수소인, 화합물.
  4. 제2항에 있어서, Y는 O인, 화합물.
  5. 제2항에 있어서, R2는 -ZNR5R10 및 헤테로사이클릴알킬로 구성된 군으로부터 선택되되, 각각의 Z 또는 헤테로사이클릴알킬은 R9로 독립적으로 선택적으로 치환되는, 화합물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 헤테로사이클릴알킬의 헤테로사이클릴은 독립적으로 아제티디닐, 메틸아제티디닐, 에틸아제티디닐, 이소프로필아제티디닐, 디플루오로아제티디닐, 사이클로펜틸아제티디닐, 테트라하이드로피라닐아제티디닐, 피롤리디닐, 메틸피롤리디닐, 디메틸피롤리디닐, 이소프로필피롤리디닐, 사이클로알킬알킬피롤리디닐, 하이드록시피롤린디닐, 플루오로피롤리디닐, 디플루오로피롤리디닐, (N-메틸)플루오로피롤리디닐, (N-메틸)디플루오로피롤리디닐, 메톡시에틸피롤리디닐, (N-메틸)메톡시피롤리디닐, 피페라지닐, 디메틸아미닐피롤리디닐, 모폴리닐, 메틸모폴리닐, 에틸모폴리닐, 이소프로필모폴리닐, 1,4-옥사제파닐, 피페리디닐, 메틸피페리디닐, 아실피페리디닐, 시아노피페리디닐, 사이클로알킬피페리디닐, 할로피페리디닐, 디할로피페리디닐, 플루오로피페리디닐, 디플루오로피페리디닐, 알콕시피페리디닐, 피롤리도닐, 티오모폴리닐-1,1-디옥사이드, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 옥사-5-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-5-일, 또는 아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일인, 화합물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 (N-메틸)디플루오로피롤리디닐은 3,3-디플루오로-1-메틸피롤리디닐인, 화합물.
  8. 제6항에 있어서, 상기 헤테로사이클릴은 N-메틸피롤리디닐인, 화합물.
  9. 제2항에 있어서, R4는 하나 이상의 R7로 선택적으로 치환된 아릴인, 화합물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 아릴은 하나 이상의 R7로 선택적으로 치환된 페닐 및 나프틸로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 페닐 및 나프틸은 각각 시아노, 할로겐, 하이드록실, C1- C6 알킬, 하이드록시알킬, Q-할로알킬, 사이클로알킬, 및 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 R7로 선택적으로 치환되는, 화합물.
  12. 제11항에 있어서, R7은 클로로, 플루오로, 브로모, 하이드록시메틸, 메틸, 에틸, 이소프로필, 메톡시, 트리플루오로메틸, 하이드록실, 사이클로프로필 및 시아노로 구성된 군으로부터 선택되는, 화합물.
  13. 제2항에 있어서, m은 제로인, 화합물.
  14. 제2항에 있어서, R8은 -OCH3 또는 시아노로 선택적으로 치환되는 C1 - C3 알킬인, 화합물.
  15. 제14항에 있어서, R8은 시아노로 선택적으로 치환된 C1 - C3 알킬인, 화합물.
  16. 제14항에 있어서, R8은 시아노메틸인, 화합물.
  17. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 하기 식 II-B의 것인, 화합물:
    식 II-B

    식 중, 상기 피페라지닐 고리는 R8로 선택적으로 치환되고, 그리고 R1, R3, R4, R8, L 및 m은 청구항 1에서 정의된 바와 같다.
  18. 제17항에 있어서, 각각의 RB는 수소인, 화합물.
  19. 하기 화합물들로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 화합물:

















































    ,

















    및 .
  20. 하기 구조의 화합물:
    .
  21. 하기 구조의 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염:
    .
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제의 치료 유효량을 포함하는 KRas G12C-매개된 암의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  23. KRas G12C 활성의 억제가 요구되는 시험관 내(in vitro)의 세포를, 제1항 내지 제 21항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 시험관 내(in vitro)의 세포에서 암을 예방 또는 치료하기 위해 KRas G12C 활성을 억제하는 방법.
  24. KRas G12C 활성의 억제가 요구되는 시험관 내(in vitro)의 세포를 제22항의 약제학적 조성물의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 시험관 내(in vitro)의 세포에서 KRas G12C 활성을 억제하는 방법.
  25. 제22항에 있어서, 상기 화합물의 치료 유효량은 하루에 0.01 내지 100 mg/kg인, 약제학적 조성물.
  26. 제22항에 있어서, 상기 암은
    심장: 혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종 및 지방육종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 육종, 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종 또는 기형종;
    폐: 기관지 암종, 폐포 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골성 과오종 또는 중피종으로서, 여기서 상기 기관지 암종은 편평상피 세포, 미분화된 소세포, 미분화된 대세포 및 선암종으로 이루어진 그룹으로부터 선택됨;
    위장: 편평상피 세포 암종, 선암종, 평활근육종 및 림프종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 식도암,
    암종, 림프종 및 평활근육종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 위암,
    관상 선암종, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 유암종 및 비포마로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 췌장암,
    선암종, 림프종, 유암종, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종 및 섬유종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 소장암,
    선암종, 관형 샘종, 융모 샘종, 과오종 및 평활근종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 대장암;
    비뇨생식관: 선암종, 윌름스 종양 ,신모세포종, 림프종 및 백혈병으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 신장암,
    편평상피 세포 암종, 이행 세포 암종 및 선암종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방광 및 요도,
    선암종 및 육종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 전립선암,
    정상피종, 기형종, 배아 암종, 기형암종, 융모막암종, 육종, 간질성 세포 암종, 섬유종, 섬유선암종, 샘종 종양 및 지방종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 고환암;
    간: 간종양, 간세포 암종, 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 샘종, 또는 혈관종;
    담관: 담낭 암종, 팽대부 암종 또는 담관암종;
    뼈: 골원성 육종, 골육종, 섬유육종, 악성 섬유질 조직구종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 림프종, 세망 세포 육종, 다발성 골수종, 악성 거대세포 종양 척색종, 골연골종, 골연골성 외골종증, 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액유사 섬유종, 골모양 골종 또는 거대세포 종양;
    신경계: 골종, 혈관종, 육아종, 황색종 및 골염 변형성으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 두개골,
    수막종, 수막육종, 및 교종증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 수막암,
    별아교세포종, 수모세포종, 신경아교종, 뇌실막세포종, 종자세포종, 송과체종, 다형상 교모세포종, 희소돌기아교세포종, 신경집종, 망막모세포종, 선천성 종양, 척수 신경섬유종, 신경아교종 및 육종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 뇌암;
    부인과: 자궁내막 암종, 장액 낭샘암종, 점액성 낭샘암종, 및 미분류된 암종, 과립 난포막 세포 종양, 세르톨리-라이디히 세포 종양, 난소고환종, 악성 기형종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 자궁암,
    편평상피 세포 암종, 상피내 암종, 선암종, 섬유육종 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 외음부암,
    투명 세포 암종, 편평상피 세포 암종, 포도형 육종 및 배아 횡문근육종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 질암, 또는
    나팔관암;
    혈액성: 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질환, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 호지킨 질환, 비-호지킨 림프종, 및 악성 림프종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 혈액암;
    피부: 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 편평상피 세포 암종, 카포시 육종, 점 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부섬유종, 켈로이드, 또는 건선; 또는
    부신: 신경교세포종으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  27. 제22항에 있어서, 상기 암은 비-소세포성 폐암인, 약제학적 조성물.
  28. 제22항에 있어서, 상기 암은 대장암인, 약제학적 조성물.
  29. 제22항에 있어서, 상기 암은 자궁내막암인, 약제학적 조성물.
  30. 제22항에 있어서, 상기 암은 췌장암인, 약제학적 조성물.
  31. 제22항에 있어서, 상기 암은 난소암인, 약제학적 조성물.
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