JPH11106399A - ペプチド誘導体および抗真菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 抗真菌活性に優れ安全で新規な抗真菌性ペプ
チド誘導体と、これを有効成分とする抗真菌剤を提供す
る。 【解決手段】 一般式１のＤ体もしくはＬ体のアミノ酸
配列を有し、その配列の一部に非天然型のアミノ酸残基
を有する抗真菌性ペプチド誘導体、並びにこの誘導体を
有効成分とする抗真菌剤。 ［Ｘａａは一般式２ （Ｒは水素、低級アルキル基、低級アルコキシ基または
ハロゲンを示す。）のアミノ酸残基を示す。］

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この出願の発明は、新規なペ
プチド誘導体またはそれらの薬理学的に許容される塩
類、およびそれらの用途に関するものである。さらに詳
しくは、この出願の発明は、医薬品、特に抗真菌剤とし
て使用し得る安全なペプチド誘導体に関するものであ
る。

【０００２】

【従来の技術】侵襲性カンジダ症等の重篤な深在性真菌
症はしばしば致死的疾患となり、その発症率は全世界的
に上昇の傾向にある。本来、カンジダ等の真菌に対する
宿主生体側の主要な防御機構は、好中球による非特異免
疫によると考えられており、この防御機構が正常に機能
している場合には真菌に感染する危険性は少ない。しか
しながら、近年、この生体の免疫機能の低下をもたらす
悪性腫瘍（特に、急性白血病、悪性リンパ腫等の造血器
系悪性腫瘍）、ＡＩＤＳ等の基礎疾患の患者数が増加し
つつあり、このことが深在性真菌症の発症率上昇の一因
とされている。また、制癌剤、免疫抑制剤等の医療処置
の繁用等も真菌感染を容易にしている要因の一つである
と考えられている。さらに、抗菌抗生物質、ステロイド
ホルモンの多用、長期にわたる中心静脈栄養、静脈カテ
ーテルの使用等も深在性真菌症に罹患する危険因子とさ
れている（例えば、臨床と微生物、第17巻、第 265ペー
ジ、1990年）。

【０００３】このような深在性真菌症の治療に最も有効
な手段は抗真菌剤による化学療法であるが、現在、深在
性真菌症治療薬として実用化されている薬剤は、抗菌剤
と比較してはるかに少なく、アンホテリシン、フルシト
シン、ミコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾー
ル、およびケトコナゾールの６種類にすぎない。一方、
種々の微生物に対して抗菌作用、抗真菌作用等を有する
ペプチドまたはその誘導体については、多数の報告がな
されており［例えば、ビオキミカ・エト・ビオフィジカ
・アクタ（Biochimica et Biophysica Acta ）、第1197
巻、第109 ページ、1994年］、その中の一つにラクトフ
ェリンがある。

【０００４】ラクトフェリンは、涙、唾液、末梢血、乳
汁等に含まれている天然の鉄結合性蛋白質であり、大腸
菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に
対して抗菌作用および抗真菌作用を示すことが知られて
いる［例えば、ジャーナル・オブ・ペディアトリクス
（Journal of Pediatrics ）、第94巻、第１ページ、19
79年；アーカイブズ・オブ・ディジーズ・イン・チャイ
ルドフッド（ Archivesof Disease in Childhood ）、
第67巻、第 657ページ、1992年］。

【０００５】また、ラクトフェリンの分解物、ラクトフ
ェリンに由来するペプチド類、これらとホモロジーを有
するペプチド類にも抗菌作用、抗真菌作用等のあること
が知られている。例えば、ラクトフェリン分解物を有効
成分とする抗菌剤（特開平５−３２００６８号公報）、
少なくとも２０個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチ
ド（特開平５−９２９９４号公報）、５個のアミノ酸残
基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９６号
公報）、３〜６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチ
ド（特開平５−１４８２９７号公報）、ラクトフェリン
類の分解物、ラクトフェリン類の分解物から単離される
ペプチド、ラクトフェリン類の分解物から単離されるペ
プチドと同一のアミノ酸配列を有する合成されたペプチ
ドを有効成分とする抗酸化剤（特開平６−１９９６８７
号公報）、ペプチド誘導体と、その用途（特開平８−１
７６１９０号公報）等が知られている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】前記のとおり、深在性
真菌症の治療に用いられる抗真菌剤は僅かに６種類のみ
であり、様々な種類の真菌感染に対して有効に対処する
ためには、新しい機序に基づく新規な抗真菌剤が待望さ
れていた。この発明は、以上のとおりの現状に鑑みてな
されたものであり、抗真菌活性に優れ、安全であり、か
つ全く新しい機序に基づく新規な抗真菌性ペプチド誘導
体と、この抗菌性ペプチド誘導体を有効成分とする新規
な抗真菌剤を提供することを目的としている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】この出願の発明者らは、
前記従来技術の発明に開示されているラクトフェリンに
由来するペプチド類およびその誘導体の抗真菌作用につ
いて詳細に検討した結果、ウシラクトフェリンを構成す
るアミノ酸配列のうちの特定の６アミノ酸残基（Ａｒｇ
−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ）と同一の
アミノ酸配列を有し、Ｃ末端がアミド化された誘導体
が、強い抗真菌作用を有することを見い出した。

【０００８】さらに、この出願の発明者らは、この事実
を基礎としてより強力な抗真菌活性を発現するペプチド
誘導体を追及した結果、その配列の一部に、従来にない
非天然型のアミノ酸残基を組み込むことにより、顕著な
抗真菌活性を示す一連のペプチド誘導体の創製に成功し
た。すなわち、この出願は、前記課題を解決する第１の
発明として、次の式（１）

【０００９】

【化５】

【００１０】［ただし、式中Ｘａａは次式（２）

【００１１】

【化６】

【００１２】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子を示す。）
で示されるアミノ酸残基を示す。］で示されるＤ体もし
くはＬ体のアミノ酸配列を有するペプチド誘導体または
それらの薬理学的に許容される塩類を提供する。この出
願はまた、第２の発明として、次の式（１）

【００１３】

【化７】

【００１４】［ただし、式中Ｘａａは次式（２）

【００１５】

【化８】

【００１６】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子を示す。）
で示されるアミノ酸残基を示す。］で示されるＤ体もし
くはＬ体のアミノ酸配列を有するペプチド誘導体または
それらの薬理学的に許容される塩類からなる群より選択
される化合物の１種または２種以上の混合物を有効成分
として含有する抗真菌剤を提供する。

【００１７】

【発明の実施の形態】この出願の第１の発明に係るペプ
チド誘導体は、固相法、液相法等の公知の方法によって
合成することができる。固相法による場合は、ペプチド
合成用固相樹脂を用いて、各アミノ酸ブロックを順次縮
合させ、ペプチド鎖を延長する。各アミノ酸ブロックは
Ｎ末端および側鎖の反応性基を適当な保護基で保護した
該アミノ酸誘導体を用い、Ｃ端側から縮合反応、Ｎ末端
脱保護基反応を反復して目的のペプチド鎖を構築する。
次いで、Ｎ末端および側鎖の反応性基が保護されたまま
のペプチドを樹脂から切断して取出し、Ｃ末端のアミド
化を行い、更に脱保護反応を行うことにより、目的とす
るペプチド誘導体を得ることができる。

【００１８】この発明のペプチド誘導体は、全てＣ末端
がアミド化された誘導体であるので、通常の固相樹脂の
代わりに、Ｃ末端アミドペプチド合成用固相樹脂を用い
ることもできる。この場合は、工程を簡略化できる上
に、保護基の選び方によっては脱樹脂、脱保護を同時に
行うこともできるので便利である。以上の操作を機械化
または自動化した、いわゆるペプチド自動合成装置を利
用することもできる。

【００１９】液相法による場合も、通常の公知のペプチ
ド合成法により、基本的にはＮ末端、またはＣ末端およ
び側鎖の反応性基を適当な保護基で保護したアミノ酸誘
導体を各アミノ酸ブロックとし、これを用いて縮合反
応、Ｎ末端またはＣ末端の脱保護基反応を反復しなが
ら、目的のペプチド鎖を構築することができる。液相法
においては、Ｃ末端側またはＮ末端側から順次ペプチド
鎖の延長を行う逐次鎖長延長法に加えて、目的のペプチ
ド鎖を適当なフラグメントに分けて、各々のフラグメン
ト鎖を合成し、各々を縮合させて最終的なペプチド鎖を
構築する、いわゆるフラグメント縮合法を適用すること
もできる。

【００２０】この発明のペプチド誘導体は、非天然型の
アミノ酸残基を含むことを特徴としているが、このアミ
ノ酸残基部分に相当するアミノ酸、またはその保護化さ
れた誘導体は、いずれも公知の方法により合成すること
ができる。そのいくつかを例示すれば次のとおりであ
る。次の反応式のとおり、まずα位のカルボキシル基の
みが選択的にｔｅｒｔブチルエステル化され、９−フル
オレニルメトキシカルボニル基（以下、Ｆｍｏｃと略記
する。）を結合したグルタミン酸モノｔｅｒｔブチルエ
ステル（Ａ）を、カルボジイミド類等の適当な縮合剤共
存下に、所望のアニリン誘導体（Ｂ）とを反応させ、Ｆ
ｍｏｃグルタミン酸モノｔｅｒｔブチルエステルγ−ア
ニリド誘導体（Ｃ）を得る。この際、１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミド（ＨＯＳｕ）等の縮合添加剤を併用することも
できる。

【００２１】次に、Ｆｍｏｃグルタミン酸モノｔｅｒｔ
ブチルエステル γ−アニリド誘導体（Ｃ）をトリフル
オロ酢酸等の強酸中で脱ｔｅｒｔブチルエステル化を行
い、一般式（Ｄ）で示されるＦｍｏｃグルタミン酸γ−
アニリド誘導体を合成することができる。

【００２２】

【化９】

【００２３】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子を示す。） この発明のペプチド誘導体は、液体クロマトグラフィ
ー、カラムクロマトグラフィー、再結晶等の公知の方法
により精製することができる。また、この発明のペプチ
ド誘導体の製造に使用する合成中間体、合成原料等も同
様の方法により精製することができる。

【００２４】また、この発明のペプチド誘導体を構成す
る各アミノ酸残基は、Ｌ体のみならずＤ体を含むもので
ある。すなわち、この発明のペプチド誘導体の抗真菌作
用は、この発明化合物を構成するアミノ酸残基がＬ体で
あるか、またはＤ体であるかには影響されない。なお、
後記の実施例では、ペプチド誘導体は、ペプチド合成機
を用いて、Ｆｍｏｃを結合したアミノ酸を合成原料とし
て合成しているが、個々のＦｍｏｃアミノ酸は合成目的
に応じて、Ｌ体またはＤ体を用いているので、これらの
区別を明示する必要がある場合にはＬまたはＤの記号を
アミノ酸を示す記号の前に記載している。

【００２５】また、原料として用いた個々のＦｍｏｃア
ミノ酸に対応して得られる実施例のペプチド誘導体につ
いて、これを特定表示する手段として、例えば、次式に
示すとおり表示する。

【００２６】

【化１０】

【００２７】この例の場合は、Ｘａａ部分についてはＬ
体のＦｍｏｃアミノ酸を、他の５つのアミノ酸残基相当
部分についてはＤ体のＦｍｏｃアミノ酸を用いて合成さ
れたペプチド誘導体であることを示している。この発明
のペプチド誘導体は、非天然型のアミノ酸残基を含有す
ることを特徴としているが、これらのアミノ酸残基は形
式的には天然型アミノ酸残基の一つであるグルタミンの
側鎖末端アミド基の窒素原子上の水素原子がフェニル基
（置換基を有している場合がある）で置換されたものと
考えることができるので、次式に示すとおり略記法を用
いて表示する。

【００２８】

【化１１】

【００２９】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子を示す。） また、これの具体的な構造式を示せば次式に示すとおり
である。

【００３０】

【化１２】

【００３１】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子を示す。） この発明のペプチド誘導体の薬理学的に許容される塩類
についてさらに説明すると、無毒性の塩としては金属錯
体、酸付加塩等を例示することができる。金属錯体とし
ては、例えば亜鉛、鉄、カルシウム、マグネシウムもし
くはアルミニウム等の錯体である。酸付加塩としては、
塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、タンニン酸
塩、シュウ酸塩、フマール酸塩、グルコン酸塩、アルギ
ン酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、
クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、ア
スコルビン酸塩、酒石酸塩等を例示することができる。
更に、カルボン酸塩、例えばアルカリ金属とのナトリウ
ム塩、カリウム塩等、アルカリ土類金属とのカルシウム
塩、マグネシウム塩等、アンモニウム塩であってもよ
い。

【００３２】次にこの出願の第２の発明に係る抗真菌剤
について説明する。この発明の抗真菌剤は、前記のペプ
チド誘導体およびそれらの薬理学的に許容される塩類か
らなる群より選択された任意の１種の化合物または２種
以上の混合物を有効成分として含有している。また、こ
の発明の抗真菌剤は、前記の有効成分の他に、公知の抗
真菌剤を含有していてもよい。

【００３３】この発明の抗真菌剤は、常法により例え
ば、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、噴霧剤、懸濁
剤、乳剤、シロップ剤、錠剤、糖剤、カプセル剤、粒
剤、粉剤等として加工することもできる。この発明の抗
真菌剤の投与量は、治療対象、症状、年齢等により異な
るが、好適には通常１回につき、約０．１〜５０ｍｇを
１日１〜３回程度投与する。表在性真菌症を対象とする
場合には、０．０１〜５％（重量。以下特に断りのない
限り同じ。）含有軟膏として１日１〜３回程度局所に塗
布することもできる。

【００３４】なお、この出願の明細書においては、抗菌
活性（抗菌剤）と、抗真菌活性（抗真菌剤）の意味を区
別して用いている。次に、試験例を示し、この発明の抗
真菌性ペプチド誘導体の作用効果についてさらに詳しく
説明する。 試験例１ この試験は、この発明のペプチド誘導体の真菌に対する
感受性を調べるために行った。 （１）試験菌株 試験菌として次の４菌株を用いた。

【００３５】 Candida albicans ATCC 90028 Candida tropicalis ATCC 750 Candida parapsilosis ATCC 90018 Candida glabrata ATCC 90030 なお、これらの菌株は、いずれもアメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から容易に入手
可能である。 （２）試験方法 １）培地の調製 バクト・ペプトン（ディフコ社製）２ｇおよびＤ−グル
コース（和光純薬工業社製）４ｇを注射用蒸留水（大塚
製薬工場社製。以下、蒸留水と記載する。）に溶解して
全量を２００ｍｌに調整し、１２１℃で１５分間オート
クレーブで滅菌し、使用するまで４℃に保存した。 ２）被検物質の調製 実施例１ないし実施例３、実施例６および実施例７と同
一の方法により製造したこの発明のペプチド誘導体、比
較例１および比較例２と同一の方法により製造した化合
物を全て蒸留水に溶解し、１ｍｇ／ｍｌ濃度の溶液を調
製し、これを基準液とした。この基準液は、使用するま
で−２０℃以下で凍結して保存した。 ３）陽性対照薬の調製 陽性対照薬として用いたアンホテリシンＢ（シグマ社
製）、ミコナゾール（シグマ社製）、およびフルコナゾ
ール（ファイザー社製。ジフルカンカプセルの内容物を
エタノール抽出し、その減圧濃縮残渣を酢酸エチル−ヘ
キサンから再結晶して得た。）は、ジメチルスルホキシ
ド（シグマ社製；細胞培養用）に溶解し、１０ｍｇ／ｍ
ｌ濃度の溶液を調製し、これを保存液とした。この保存
液は、使用するまで−２０℃以下で凍結して保存し、使
用時に蒸留水で１０倍希釈（１ｍｇ／ｍｌ）し、これを
基準液とした。 ４）接種菌液の調製 培養液中の菌数の算定 スラントからの一かきを前記培地（２ｍｌ）に接種し、
３５℃で１９時間培養し、分光光度計を用いて、波長６
６０ｎｍのＯＤ値を測定した。一方、培地の一部（５０
μｌ）を新しい前記培地（５ｍｌ）に植え継ぎ、３５℃
で６時間培養し、菌液のＯＤ値と生菌数の測定を行っ
た。生菌数の測定は、菌液を１０³ 、１０⁴ 、１０⁵ お
よび１０⁶ 倍希釈し、各々の０．１ｍｌをＳＤＡ寒天培
地に塗抹して培養し、翌日出現したコロニー数を測定
し、ＯＤ値／菌数濃度の検量線を求め、菌液１ｍｌ当た
りの菌数を算出した。

【００３６】接種菌液の調製 スラントからの一かきを前記培地（２ｍｌ）に接種し、
３５℃にて１９時間培養し、その一部を無菌的に採取
し、分光光度計で波長６６０ｎｍのＯＤ値を測定した
（ＯＤ値が約１．０で、菌数は約１×１０⁷ 個／ｍｌで
あった。）。

【００３７】この菌液の１／１００量の菌液を、新しい
前記培地（１０〜１５ｍｌ）に接種し、３５℃にて６時
間培養し、波長６６０ｎｍのＯＤ値を測定した結果、
０．１〜０．２で、菌数が約１×１０⁶ 個／ｍｌと算定
された。この培養物を前記培地を用いて初め５０倍希
釈、次いで１０倍希釈して接種菌液（２×１０³ 個／ｍ
ｌ）を調製した。調製後１５分以内に使用できない場合
は、４℃で保存し、２時間以内には使用した。 ５）薬剤希釈液の調製 培地を、96穴平底マイクロプレートにマルチピペット
を用いて、１列目には１６０μｌを、２列目から１０列
目までは１００μｌずつ分注した。１１列目の上４段
（発育対照）には１００μｌずつ、また下４段（陰性対
照）には２００μｌずつ分注した。

【００３８】上記２）および３）で調製した被検物質
および対照薬物の希釈液（濃度：１ｍｇ／ｍｌ）４０μ
ｌを１列目に添加して混合し、そのうち１００μｌを２
列目に添加した。この操作を順次１０列目まで行って２
倍系列希釈した。尚、最後の１０列目は１００μｌを分
取して廃棄した。 ６）菌接種と培養 前記４）において調製した接種菌液を１列目から１０列
目および１１列目上４段の全穴に１００μｌずつ分注
し、３５℃で２日間培養した。 ７）判定 終末点は、マイクロプレートビュアーで肉眼的に発育が
完全阻止されている濃度を最小生育阻止濃度（以下、Ｍ
ＩＣ値と記載する。）とした。 （３）試験結果 この試験の結果は表１に示すとおりである。表中の各実
施例と同一の方法により製造された試料はこの発明のペ
プチド誘導体であり、比較例と同一の方法により製造さ
れた試料は前記のウシラクトフェリンを構成するアミノ
酸配列のうちの特定の６アミノ酸残基（Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ）と同一のアミノ酸
配列を有し、Ｃ末端がアミド化された誘導体であり、か
つ抗菌作用または抗真菌作用を有するペプチド誘導体と
して公知の化合物である。

【００３９】比較例１の化合物は６つのアミノ酸残基は
すべてＬ体のものからなっており、 LArg-LArg-LTrp-LGln-LTrp-LArg-NH2 で示される化合物である。比較例２の化合物は前記比較
例１の鏡像体であり、６アミノ酸残基がすべてＤ体のも
のからなっており、 DArg-DArg-DTrp-DGln-DTrp-DArg-NH2 で示される化合物である。

【００４０】比較例１の化合物および比較例２の化合物
の抗真菌作用の差、すなわち、Ｌ体およびＤ体間での差
は、いずれの真菌に対しても認められなかった。Candid
a albicans ATCC 90028 に対しては、比較例の化合物
は、いずれもＭＩＣ値が１２．５μｇ／ｍｌであった。
これに対して、この発明のペプチド誘導体は、いずれも
ＭＩＣ値が６．２５〜１２．５μｇ／ｍｌであり、比較
例の化合物に比べて同等ないし２倍の抗真菌作用が認め
られた。

【００４１】Candida tropicalis ATCC 750 に対して
は、比較例の化合物は、いずれもＭＩＣ値が３．１３μ
ｇ／ｍｌであった。これに対して、この発明のペプチド
誘導体は、いずれもＭＩＣ値が１．５６〜３．１３μｇ
／ｍｌであり、比較例の化合物に比べて同等ないし２倍
の抗真菌作用が認められた。Candida parapsilosis ATC
C 90018 に対しては、比較例の化合物は、いずれもＭＩ
Ｃ値が５０μｇ／ｍｌであった。これに対して、この発
明のペプチド誘導体は、いずれもＭＩＣ値が１２．５〜
２５μｇ／ｍｌであり、比較例の化合物に比べて２倍な
いし４倍の抗真菌作用が認められた。

【００４２】Candida glabrata ATCC 90030 に対して
は、比較例の化合物は、いずれもＭＩＣ値が５０μｇ／
ｍｌであった。これに対して、この発明のペプチド誘導
体は、いずれもＭＩＣ値が１２．５〜５０μｇ／ｍｌで
あり、比較例の化合物に比べて同等ないし４倍の抗真菌
作用が認められた。これらの試験結果から明らかなとお
り、総じてこの発明のペプチド誘導体にはいずれも公知
のペプチド類を上回る抗真菌作用が認められた。なお、
他のペプチド誘導体についても同様の試験を行ったが、
ほぼ同等の結果が得られた。

【００４３】

【表１】

【００４４】試験例２ この試験は、この発明のペプチド誘導体の急性毒性を調
べる目的で行った。 （１）試験動物 ４週齢のｄｄＹ系雄性マウス（日本ＳＬＣより購入）を
１週間以上馴化し、のち４群（１群５匹）に分けて使用
した。 （２）試験方法 実施例１と同一の方法により製造したこの発明のペプチ
ド誘導体を体重１ｋｇ当り１００ｍｇまたは５００ｍｇ
の割合で蒸留水に溶解し、単回強制経口投与し、急性毒
性を試験した。 （３）試験結果 １００ｍｇ／ｋｇ体重、および５００ｍｇ／ｋｇ体重の
割合で投与した群に、死亡例は認められなかった。従っ
て、この発明のペプチド誘導体のＬＤ₅₀値は５００ｍｇ
／ｋｇ体重以上であり、毒性は極めて低いことが判明し
た。なお、他のペプチド誘導体についても同様の試験を
行ったが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００４５】次に、実施例を示してこの発明をさらに詳
細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定
されるものではない。

【００４６】

【実施例】

実施例１ ペプチド合成装置（パーキン・エルマー社アプライド・
バイオシステムズ事業部製。４３３Ａ型。以下、ＰＥ社
製と略記する。）を使用し、同装置の使用説明書および
シェパード等による固相ペプチド合成法［ジャーナル・
オブ・ケミカル・ソサイエティー・パーキンＩ（Journa
l of Chemical Society Perkin Ｉ）、第538 ページ、1
981年］に基づいて次のとおりペプチドを合成した。

【００４７】まず、Ｃ末端アミドペプチド合成用固相樹
脂であるＦｍｏｃアミドレジン（ＰＥ社製）３９７ｍｇ
（０．２５ｍｍｏｌ）を用い、前記ペプチド合成装置の
合成プログラムにより脱保護基反応および縮合反応を反
復してペプチド鎖を延長した。すなわち、最初に２０％
ピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン（ＰＥ社製。以下
Ｎ−メチルピロリドンをＮＭＰと略記する。）により、
前記固相樹脂のアミノ基の保護基であるＦｍｏｃを切断
除去し、ＮＭＰで洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃアミノ酸
［Fmoc-D-Arg(Pmc)-OH（渡辺化学工業社製）］をFastMo
c （登録商標）リージェントキット（ＰＥ社製）を用い
て縮合させ、ＮＭＰで洗浄した。以下、前記Ｆｍｏｃ基
の切断からＦｍｏｃアミノ酸の縮合洗浄までの操作を反
復した。

【００４８】ただし、次の工程以降、Ｆｍｏｃアミノ酸
は工程順に、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH（渡辺化学工業社
製）、Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH （後記参考例１と同一の
方法により合成）、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH（渡辺化学工業
社製）およびFmoc-D-Arg(Pmc)-OH（渡辺化学工業社製）
を用いた。いずれのＦｍｏｃアミノ酸も１．０ｍｍｏｌ
に相当する量を専用カートリッジに詰めて使用した。縮
合反応の条件および脱保護条件は、同装置に付随するフ
ィードバックモニタリングシステムにより自動的に制御
させた。ペプチド鎖の伸張反応が全て終了した後、２０
％ピペリジン含有ＮＭＰによりＮ末端のＦｍｏｃ基を切
断し、ＮＭＰおよびジクロロメタン（ＰＥ社製）で洗浄
し、真空乾燥し、保護ペプチド樹脂７６４ｍｇ（収率９
５％）を得た。

【００４９】前記の保護ペプチド樹脂３２２ｍｇ（０．
１ｍｍｏｌ）にエタンジチオール（渡辺化学工業社製）
１．２ｍｌ、メタクレゾール（渡辺化学工業社製）０．
４ｍｌおよびチオアニソール（渡辺化学工業社製）２．
４ｍｌを、室温でアルゴン気流下１５分間撹拌し、氷冷
し、さらに１０分間撹拌した。これにトリフルオロ酢酸
（渡辺化学工業社製。以下、ＴＦＡと略記する。）１５
ｍｌを添加し、１０分間撹拌し、トリメチルシリルブロ
ミド（渡辺化学工業社製）２．７ｍｌを添加して５０分
間撹拌した。のちグラスフィルターで樹脂を濾別し、濾
液を手早く減圧濃縮した。残渣にあらかじめ冷却した無
水ジエチルエーテル（国産化学製）を添加し、ペプチド
を白色粉末化した。

【００５０】次いで遠沈管に移し、遠心分離（２５００
ｒｐｍ、１０分間）し、上清を廃棄し、冷ジエチルエー
テルを新たに添加し、充分撹拌して再び遠心分離する操
作を４回反復した。のち、ペプチド沈殿物を真空乾燥
し、水に溶解して凍結乾燥し、目的とする粗製のペプチ
ド誘導体約４２ｍｇを得た。前記粗製ペプチド誘導体の
全量を水に溶解し、遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分
間）し、上清を０. ４５μｍフィルターで濾過し、次の
条件により高速液体クロマトグラフィーにより精製し
た。カラムは、逆相系の Lichrospher 100 RP-18(e) ２
５０×１０ｍｍ（メルク社製）を用いた。溶離液は０.
１％ＴＦＡ／水をＡ液、８０％アセトニトリル／Ａ液を
Ｂ液として、Ａ液からＢ液への濃度直線勾配により溶出
した。主ピーク分画を再度凍結乾燥し、次式

【００５１】

【化１３】

【００５２】により示される白色粉末のこの発明のペプ
チド誘導体約１７．４ｍｇ（収率約１６％）を得た。 実施例２ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、後記参考例２と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(4Br-Ph)-OH ５２３
ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１
と同一の方法により、次式

【００５３】

【化１４】

【００５４】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２３．０ｍｇ（収率約２０％）を得た。 実施例３ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、後記参考例３と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(4F-Ph)-OH４６２ｍ
ｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１と
同一の方法により、次式

【００５５】

【化１５】

【００５６】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約３５．７ｍｇ（収率約３３％）を得た。 実施例４ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、後記参考例４と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(Ph)-OH ４４４ｍｇ
（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１と同
一の方法により、次式

【００５７】

【化１６】

【００５８】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２１．９ｍｇ（収率約２０％）を得た。 実施例５ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、後記参考例５と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(4Me-Ph)-OH ４５８
ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１
と同一の方法により、次式

【００５９】

【化１７】

【００６０】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２６．０ｍｇ（収率約２３％）を得た。 実施例６ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、後記参考例６と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(3Me-Ph)-OH ４５８
ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１
と同一の方法により、次式

【００６１】

【化１８】

【００６２】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２３．８ｍｇ（収率約２１％）を得た。 実施例７ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、後記参考例７と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(4OMe-Ph)-OH４７５
ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１
と同一の方法により、次式

【００６３】

【化１９】

【００６４】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約１１．６ｍｇ（収率約１１％）を得た。 実施例８ 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体約１０
ｍｇを、０．０２ｍｏｌ／ｌの塩酸５ｍｌに溶解し、さ
らに水で２０ｍｌに希釈し、そのまま凍結乾燥し、白色
粉末状の実施例１の化合物の塩酸塩約１０ｍｇ得た。 実施例９ 常法により、次の組成の錠剤を製造した。

【００６５】 乳糖（和光純薬工業社製） ７８．２（％） 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体 １．２ ステアリン酸マグネシウム（和光純薬工業社製） ２０．０ 実施例１０ 常法により、次の組成の注射剤を製造した。実施例１と
同一の方法により得たペプチド誘導体を、生理食塩水
（大塚製薬社製）に６．０ｍｇ／ｍｌの割合で溶解し、
滅菌濾過フィルターを通させ、注射剤を製造した。 実施例１１ 常法により、次の組成の軟膏を製造した。なお、ペプチ
ド誘導体を除き、全て市販品を使用した。

【００６６】 ワセリン ２６．３（％） パラフィン ５．３ セトステアリルアルコール ２．１ プロピレングリコール １０．５ ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン グリコールエーテル ３．２ 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体 ０．５ 精製水 ５２．１ 実施例１５ 常法により、次の組成の皮膚外用剤を製造した。なお、
ペプチド誘導体を除き、全て市販品を使用した。

【００６７】 パラオキシ安息香酸エチル ０．１（％） パラオキシ安息香酸ブチル ０．１ ラウロマクロゴール ０．５ セタノール ２０．０ 白色ワセリン ４０．０ 精製水 ３４．３ 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体 ５．０ 次に、この発明のペプチド誘導体と比較するための化合
物の製造例を比較例として示す。 比較例１ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、Fmoc-L-Gln(Trt)-
OH（ＰＥ社製）５９７ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いた
ことおよびその他のアミノ酸ブロックを全てＤ体の代わ
りに、Ｌ体（全てＰＥ社製）を用いたことを除き、実施
例１と同一の方法により、次式

【００６８】

【化２０】

【００６９】により表わされる白色粉末状の化合物約４
３．２ｍｇ（収率約４４％）を得た。 比較例２ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の代わりに、Fmoc-D-Gln(Trt)-
OH（渡辺化学工業社製）５９７ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）
を用いたことを除き、実施例１と同一の方法により、次
式

【００７０】

【化２１】

【００７１】により表わされる白色粉末状の化合物約４
９．０ｍｇ（収率約５０％）を得た。次に、この発明の
ペプチド誘導体を製造するための中間体の製造例を参考
例として示す。 参考例１［Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu の製造］ Fmoc-D-Gln-OtBu （渡辺化学工業社製）１２７６ｍｇ
（３．０ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル・一水塩（島津製作所製）５５１ｍｇ（３．６ｍｍｏ
ｌ）および塩化メチレン（国産化学社製）２０ｍｌの混
合物を氷冷し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ
プロピル）カルボジイミド・塩酸塩（国産化学社製）６
９０ｍｇ（３．６ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。添加
完了後、しばらく氷冷下で、次いで室温で２時間撹拌し
た。反応混合物を再度氷冷し、４−クロロアニリン（東
京化成工業社製）３８３ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）の塩化
メチレン溶液を滴下した。滴下完了後、暫時氷冷下で、
さらに室温で一夜間撹拌した。溶媒を留去し、残渣に酢
酸エチルおよび１Ｎ−塩酸を添加して有機層を分取し、
重曹水で１回、次いで飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。減圧下に溶媒を留去し、残渣
をシリカゲル−カラムクロマトグラフィにより精製し
（溶媒として酢酸エチル：ヘキサン＝１：５０〜１：２
を使用。）、次式

【００７２】

【化２２】

【００７３】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
Cl-Ph)-OtBu 約１０５１ｍｇ（収率約６５．５％）を得
た。 参考例２［Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OH の製造］ 参考例１のFmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu ８０３ｍｇ（１．
５ｍｍｏｌ）に、氷冷下でトリフルオロ酢酸（渡辺化学
工業社製）６ｍｌを添加して溶解し、塩化カルシウム管
保護下、室温で４時間撹拌した。過剰のトリフルオロ酢
酸を室温下で減圧留去し、残渣にエーテルを添加して処
理し、結晶化させた。結晶を濾取し、エーテルで数回洗
浄し、さらにヘキサンで洗浄し、乾燥し、次式

【００７４】

【化２３】

【００７５】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
Cl-Ph)-OH 約５９８ｍｇ（収率約８３．３％）を得た。 参考例３［Fmoc-D-Gln(4Br-Ph)-OtBu の製造］ ４−クロロアニリンの代わりに、４−ブロモアニリン
（東京化成工業社製）５１６ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を
用いたことを除き、参考例１と同一の方法により、次式

【００７６】

【化２４】

【００７７】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
Br-Ph)-OtBu 約１１７９ｍｇ（収率約６７．８％）を得
た。 参考例４［Fmoc-D-Gln(4Br-Ph)-OH の製造］ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu の代わりに、参考例３と同一
の方法により製造したFmoc-D-Gln(4Br-Ph)-OtBu ８６９
ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、参考例２
と同一の方法により、次式

【００７８】

【化２５】

【００７９】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
Br-Ph)-OH 約６８３ｍｇ（収率約８７．０％）を得た。 参考例５［Fmoc-D-Gln(4F-Ph)-OtBuの製造］ ４−クロロアニリンの代わりに、４−フルオロアニリン
（東京化成工業社製）３３３ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を
用いたことを除き、参考例１と同一の方法により、次式

【００８０】

【化２６】

【００８１】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
F-Ph)-OtBu約１１２３ｍｇ（収率約７２．２％）を得
た。 参考例６［Fmoc-D-Gln(4F-Ph)-OHの製造］ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu の代わりに、参考例５と同一
の方法により製造したFmoc-D-Gln(4F-Ph)-OtBu７７８ｍ
ｇ（１．５ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、参考例２と
同一の方法により、次式

【００８２】

【化２７】

【００８３】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gl n
(4F-Ph)-OH 約６３８ｍｇ（収率約９１．９％）を得
た。 参考例７［Fmoc-D-Gln(Ph)-OtBu の製造］ ４−クロロアニリンの代わりに、アニリン（アルドリッ
チ社製）２７９ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を用いたことを
除き、参考例１と同一の方法により、次式

【００８４】

【化２８】

【００８５】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(P
h)-OtBu 約１１３８ｍｇ（収率約７５．８％）を得た。 参考例８［Fmoc-D-Gln(Ph)-OH の製造］ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu の代わりに、参考例７と同一
の方法により製造したFmoc-D-Gln(Ph)-OtBu ７５１ｍｇ
（１．５ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、参考例２と同
一の方法により、次式

【００８６】

【化２９】

【００８７】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(P
h)-OH 約６０１ｍｇ（収率約９０．２％）を得た。 参考例９［Fmoc-D-Gln(4Me-Ph)-OtBu の製造］ ４−クロロアニリンの代わりに、ｐ−トルイジン（東京
化成工業社製）３２１ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を用いた
ことを除き、参考例１と同一の方法により、次式

【００８８】

【化３０】

【００８９】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
Me-Ph)-OtBu 約１０９０ｍｇ（収率約７０．６％）を得
た。 参考例１０［Fmoc-D-Gln(4Me-Ph)-OH の製造］ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu の代わりに、参考例９と同一
の方法により製造したFmoc-D-Gln(4Me-Ph)-OtBu ７７２
ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、参考例２
と同一の方法により、次式

【００９０】

【化３１】

【００９１】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
Me-Ph)-OH 約６４９ｍｇ（収率約９４．４％）を得た。 参考例１１［Fmoc-D-Gln(3Me-Ph)-OtBu の製造］ ４−クロロアニリンの代わりに、ｍ−トルイジン（東京
化成工業社製）３２１ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を用いた
ことを除き、参考例１と同一の方法により、次式

【００９２】

【化３２】

【００９３】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(3
Me-Ph)-OtBu 約９８３ｍｇ（収率約６３．７％）を得
た。 参考例１２［Fmoc-D-Gln(3Me-Ph)-OH の製造］ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph)-OtBu の代わりに、参考例３と同一
の方法により製造したFmoc-D-Gln(3Me-Ph)-OtBu ７７２
ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、参考例２
と同一の方法により、次式

【００９４】

【化３３】

【００９５】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(3
Me-Ph)-OH 約６４２ｍｇ（収率約９３．４％）を得た。 参考例１３［Fmoc-D-Gln(4OMe-Ph)-OtBuの製造］ ４−クロロアニリンの代わりに、ｐ−アニシジン（東京
化成工業社製）３６９ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を用いた
ことを除き、参考例１と同一の方法により、次式

【００９６】

【化３４】

【００９７】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
OMe-Ph)-OtBu約１４３７ｍｇ（収率約９０．３％）を得
た。 参考例１４［Fmoc-D-Gln(4OMe-Ph)-OHの製造］ Fmoc-D-Gln(4Cl-Ph )-OtBuの代わりに、参考例１３と同
一の方法により製造したFmoc-D-Gln(4OMe-Ph)-OtBu７９
６ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、参考例
２と同一の方法により、次式

【００９８】

【化３５】

【００９９】により表わされる白色結晶のFmoc-D-Gln(4
OMe-Ph)-OH約６７６ｍｇ（収率約９５．０％）を得た。

【０１００】

【発明の効果】以上、詳しく説明したとおり、この出願
の発明によって、抗真菌活性に優れ、しかも安全である
新規ペプチド誘導体と、これを有効成分とする抗真菌剤
が提供される。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の式（１） 【化１】 ［ただし、式中Ｘａａは次式（２） 【化２】 （ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級ア
   ルコキシ基またはハロゲン原子を示す。）で示されるア
   ミノ酸残基を示す。］で示されるＤ体もしくはＬ体のア
   ミノ酸配列を有するペプチド誘導体またはそれらの薬理
   学的に許容される塩類。
2. 【請求項２】 次の式（１） 【化３】 ［ただし、式中Ｘａａは次式（２） 【化４】 （ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級ア
   ルコキシ基またはハロゲン原子を示す。）で示されるア
   ミノ酸残基を示す。］で示されるＤ体もしくはＬ体のア
   ミノ酸配列を有するペプチド誘導体またはそれらの薬理
   学的に許容される塩類からなる群より選択される化合物
   の１種または２種以上の混合物を有効成分として含有す
   る抗真菌剤。