JPH0198487A - 新規プラスミドおよびそれにより形質転換された新規微生物およびそれを用いたｓ−ラクトイルグルタチオンの酵素的製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［Ｉｌｌ上上利用分野］ 本発明は、新規なプラスミドおよびそれにより形質転換
された新規微生物、ならびにそれを用いたＳ−ラクトイ
ルグルタチオンの製造法に関する。

［従来の技術］ 本発明により有利に生産されるグリオキサラーゼＩ　（
ｇｌｒｏｘａｌａｓａ　＋）は、国際生化学連合酵素委
員会の酵素番号Ｅ１．４．４．１．５に分類され、系統
名では、ラクトイルグルタチオンリアーゼ（Ｌａｃｔｏ
ｙｌｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｓ　１２ａｊｅ　）と呼称さ
れる酵素である。

本酵素は、下記の反応式のごとく、メチルグリオキサー
ルとグルタチオンからＳ−ラクトイルグルタチオンへの
変換反応を触媒する。

メチルグリオキサール＋グルタチオン−ヘミメルカプタ
ール　→　Ｓ・ラクトイルグルタチオン該酵素 本酵素は、ヒト、ラット等の諸臓器、酵母、カビ、放線
菌、シュードモナス菌、大腸菌等の細菌に存在すること
が報告されている［蛋白質・核酸・酵素；　３１．１０
１０．　　（１９８８）　］、］＠一方、上記グリオキ
サラーゼの作用で生合成されるＳ−ラクトイルグルタチ
オンは生理作用として、グルタチオンと同等以上の優れ
た抗炎症作用を有しており抗炎症剤として宥用な物質で
ある（特願昭　８２−１０１０１１４）　。

Ｓ−ラクトイルグルタチオンを製造する方法としては、
微生物が生産するグリオキサラーゼＩの触媒によりグル
タチオンとメチルグリオキサールから生合成させる方法
が最も簡便であると考えられる。

［発明が解決しようとする問題点］ しかしながら、微生物の生産するグリオキサラーゼ！は
活性が低いために直接面体あるいは菌体処理物を反応に
利用できず、Ｓ−ラクトイルグルタチオンを効率良く生
産させるためには、ラッカーの報告［Ｊ、ＢＩｏｌ、Ｃ
ｈｅ＊、、　Ｉ旦旦４．参照］に見られるように、−旦
、菌体抽出物からグリオキサ−ゼエを精製し、活性を上
げる必要があった。

本発明者らは、かかる状況に鑑み、グリオキサラーゼ！
生産能の優れた微生物を見い出すべく種々研究を重ねた
結果、比較的高いグリオキサラーゼＩ活性を有するシュ
ードモナス・プチダの染色体ＤＮＡよりグリオキサラー
ゼＩの遺伝情報を担うＤＮＡ断片を単離し、次いでこの
グリオキサラーゼＩの遺伝情報を担うＤＮＡ断片をベク
ターに組み込ませ、この組み換えＤＮＡをエシェリヒア
争コリに導入することにＩａ、功すると共に、かくして
得られた微生物が優れたグリオキサラーゼ！生産能を有
することを見出し、本発明を完成するに至った。

［問題点を解決するための手段］ すなわち１本発明は（１）シュードモナス・プチダから
取得したグリオキサラーゼＩの遺伝情報を担うＤＮＡ断
片を含むプラスミド、（２）８Ａプラスミドをエシェリ
ヒアやコリに含有せしめた微生物、および（３）該微生
物を培養し、得られた２体もしくは２体の処理物をメチ
ルグリオキサールおよびグルタチオンを含有する基質溶
液と接触させてＳ−ラクトイルグルタチオンを製造する
方法に関する。

以下、本発明につき詳細に説明する。

（ａ）プラスミドおよびその調製 本発明の新規プラスミドは１例えば、エシェリヒア属に
属する微生物の染色体外遺伝子（プラスミド）として知
られるコリシンＥ１因子等のように培養された細胞内で
増殖し得る形式をとるプラスミド（染色体外ＤＮＡすな
わちベクターＤＮＡ）にグリオキサラーゼ！を生成する
微生物の染色体ＤＮＡから調製されたグリオキサラーゼ
Ｉの生成に関与するＤＮＡ断片を組み込んでなるプラス
ミドであり、前記ベクターＤＮＡとしては、天然に存在
するものを抽出したものの他、増殖に必須な部分以外の
ＤＮＡの部分が一部欠落しているものでも良く１例えば
Ｃｏ１Ｅ＋の系統、　９Ｍ８９の系統、　ＰＢＲ３２２
の系統、ｐｓｃＩｏｌの系統、Ｒ８にの系統、ラムダフ
ァージの系統等が挙げられる。

グリオキサラーゼ！の生産に関与するＤＮＡ断片は、前
記の酵母、カビ、放線菌、大腸１及びシュードモナス菌
等から調製することができるが、特にシュードモナス菌
から調製された染色体ＤＮＡ断片が有利に用いられる０
例えば、シュードモナス・プチダＩＦＯ３７３８の染色
体ＤＮＡより調製されたＤＮＡ断片を用いることができ
る。

また前記ベクターＤＮＡに前記染色体ＤＮＡ断片を組み
込む方法は、既知のいずれの方法も適用し得る０例えば
、適当な制限酵素（Ｅｎｄｏｎｕａｌｅａ−ｉａ）で処
理して染色体ＤＮＡを特定部位で切断し１次いで同様に
処理したベクターＤＮＡと混合し、リガーゼによって再
結合する方法が用いられる。　ベクターＤＮＡとして、
　ｐＢＲ３２２プラスミドを用い、これに前記シュード
モナス・プチダＩＦＯ３７３８から調製された染色体Ｄ
ＮＡ断片を組み込むことにより、新規プラスミドｐａｒ
　３１８が得られる。

ｐＧｌ　３１８プラスミドの制限酵素切断地図を第１図
に示す、第１図から明らかなように２このプラスミドは
、ｐＢＲ３２２プラスミドＤＮＡの制限酵素サイトのＢ
ａ鵬ロサイトに前記シュードモナス・プチダｒＦＯ３７
３８のグリオキサラーゼ！の生産に関与する遺伝情報を
担うＤＮＡ断片が組み込まれている目、８ｋｂの塩基対
を有する環状分子である（第２図参照）、さらにｐＧｌ
　３１８プラスミドＤＮＡを制限酵素）ｔｉｎ　　ｄＩ
ｌｌで処理し、ＨｉｎｄｌＩ＋サイトにはさまれた５、
３ｋ　ｂの複製およびグリオキサラーゼ！遺伝子の発現
に不必要なりＮＡ断片を欠失させ、ｐｃｒ　３１８の縮
小プラスミド、　ｐＧｌ　４２３を作製した（第１図参
照）。

（ｂ）微生物の調製 このようにして得られた前記染色体ＤＮＡ断片とベクタ
ーＤＮＡの結合物を既知の形質転換法。

、例えば、ショット・ガン法（５ｈｏｔ　ｇｕｎ　ｍｅ
ｔｂｃ＋ｄ　）により受容菌の微生物菌体中に導入する
と、所望の遺伝形質とベクターＤＮＡの形質を併せもつ
形質転換株が得られる。

受容菌としては、エシェリヒア・コリａｅｏｏ、同ＨＢ
ＩＯ＋　、同ＯＰ、　５ｕｐＦ、同ｘｌ？７８　、同Ｌ
Ｅ３９２等［モレキュラー・クローニング・エイ・ラボ
ラトリ−・マニュアル（Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎ
ｉｎｇ　Ａ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｔＸａｎｕａｌ）　ｐ
５０４（１１１Ｂ２）参照］の通常この種の技術分野で
用いられる微生物が有利に用いられる。七の典型的な例
としてエシェリヒア・コリｃｅｏｏ株が上げられる〔モ
レキュラー・クローニング・エイ・ラボラトリ−’　マ
ニ！アル（Ｎｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏ＋＋−ｉｎｇ　
　＾しａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ）　　ｐ５Ｇ
４（＋１１８２）参照；遺伝形質Ｆ−，ｔｂｉ−１，ｔ
ｈｒ−１，ＩｅｕＢ６，１ａｃＹＩ、ｔａｎＡ２１゜ｍ
ｕｐＥ４４．１−　Ｌ このエシェリヒア・コリｃｅｏｏ株に、前記プラスミド
ｐｃ！３１８あるいはｐｃ＋　４２３を導入して形質転
換法により得られる微生物は、新規微生物であり、それ
ぞれエシェリヒア・コリ　０８００　（ｐｏ！３１８）
［！５ｃｈｓｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　０８００　（ｐ
Ｇｌ　３１８）］、　ｚシェリヒ　　７　　◆コ　　　
リ　　　Ｃ［ｌＱＯ（ｐＧｌ　　　４２Ｇ　　　）［Ｅ
ｎｃｈ＊ｒｉｃ　　ｈ　Ｉａ　　　ｃ。

０６００　（ｐＧＩ　４２３　）１ト呼称され昭和８２
年１０月　７Ｅｉ付にて工業技術院微生物工業技術研究
所へ寄託され、その受託番号は、それぞれ微工研菌寄第
８６３８号（Ｆ！Ｒ）Ｉ　Ｐ−１１１１３８）　オヨび
ｆｉ　９１１３１１号（Ｆｌ！ＲＭ　Ｐ−９６３９）で
ある、このようにして得られたエシェリヒア・コリ０８
００（ＰＣＩ　３１８）およびエシェリヒア・コリ　Ｃ
８００（Ｐ（ｉｌ　４２３）の菌学的性質をＤＮＡ受容
直であるエシェリヒア・コリｃｅｏｏ株の性質と比較す
ると、前者２株がグリオキサラーゼＩの高生産能および
アンピシリン耐性を有するのに対し、後者がこれらの特
性を有しない点以外は全く同一である。

（ｃ）Ｓ−ラクトイルグルタチオンの生産工程Ｃｂ）で
得られた形質転換株は強いグリオキサラーゼ！活性を有
しているので、菌体もしくは該菌体の処理物を酵素源と
し、該酵素源をメチルグリオキサールおよびグルタチオ
ンを含有する基質溶液と接触させて酵素反応をさせるこ
とによりＳ−ラクトイルグルタチオンを製造することが
できる。

未発明徴生物の培養に際して用いられる培地としては１
通常、エシェリヒア・コリの生育培地として用いられる
炭素源、窒素源、無機物を含有する合成培地または天然
培地のいずれも使用できる。炭青源としては１例えばグ
ルコース、スクロース、フラクトース、でん粉、でん扮
加水分解物、糖みつなどの種々の炭水化物が使用でき、
その使用量は、０．５〜５．ＯＸ程度が好ましい、また
、窒素源としては、例えば硫酸アンモニウム、リン醜ア
ンモニウム、炭醜アンモニウム、酢／ｆ食アンモニウム
などの各種の無機および有機アンモニウム類、あるいは
ペプトン、酵母エキス、コーンステイープリカー、カゼ
イン加水分解物などの窒素性有機物などが使用でき、そ
の使朋量は０．５〜２．０！程度が好ましい、さらに無
機物としては１例えばリン醜第−水素カリウム、リン酸
第二水素カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸マンガンな
どが使用でき、その使用量は０．００５〜１．０ｚ程度
が好ましい、　　培養方法は、ｐＨ，温度、酸素供給量
等の条件として通常エシェリヒア属の微生物の生育に適
した条件を取り得るが、前記微生物が生育してその菌体
量が最大に達したとき、即ち対数増殖ｖｋ期まで生育さ
せるのが好ましい、培１Ｉｌ１１度は通常３０〜３７℃
、ＰＨ条件はＰ）１５〜８の範囲、特に中性付近が通出
である。

上記酵素反応に用いられる菌体の処理物としては１例え
ば生菌体を乾燥あるいはトルエン等の有機溶媒で処理し
て得られる菌体処理物、生菌体を超音波処理して得られ
る細胞抽出液、該抽出液より精製して得られる酵素など
のほか、菌体あるいは酵素を例えばポリアクリルアミド
ゲル包括法、カラギーナンゲル包括法のごとき公知固定
化法によって得られる固定化菌体あるいは固定化酵素な
ども用いることができる。

Ｓ−ラクトイルグルタチオン生成のための反応液として
は５〜１０１１１履にメチルグリオキサール、５〜１０
０ｍにグルタチオン、　２０〜１００ｍＮ　緩衝液（Ｐ
Ｈ６〜９）に酵素源として菌体処理物を加える。度広温
度は２５〜４０℃２反応時間は３０〜１２０分で十分あ
る。

反応液に対して０．５〜１．０％のトリクロロ詐酸を加
えて反応を止めた後、その上清中のＳ−ラクトイルグル
タチオンは２４０ｎｎ＞の吸光度の増大あるいはグリオ
キサラーゼ■を用いる酵素法によって測定できる。

かくして反応終了液中にＳ−ラクトイルグルタチオンが
生成蓄積するが、生成したＳ−ラクトイルグルタチオン
はイオン交換樹脂処理のごとき公知の方法で単離するこ
とができる０例えば１反応終了液をカチオン交換樹脂（
例えばローム・アンド・ハース社製アンバーライトｆＲ
１２０Ｂ、Ｉ（型）に導通する。吸着したＳ−ラクトイ
ルグルタチオンを０．１規定水酸化ナトリウムで溶出し
、溶出液に５０％エタノールを加え、析出した結晶を単
離することにより、Ｓ−ラクトイルグルタチオンを取得
することができる。

以下、本発明を実施例により、更に詳細に説明するが、
本発明は何らこれに限定されるものではない。

実施例　１ （１）グリオキサラーゼＩ生成能の遺伝情報をもつ染色
体ＤＮＡの調製。

グリオキサラーゼＩを生成する能力を有するンユードモ
ナス・プチダＩＦＯ３７３８をＬＢ培地［（ｇ／ｌ）：
ペプトン１０．０　、酵母エキス　５．０．　Ｍａｉｌ
　５．０゜グルコース　１．０をｐＨ７，０に調整した
もの］　２００ｍ１中、３０℃で５時間振盪培養を行な
い対数増殖後期の菌体を集菌後、フェノール法によるＤ
ＮＡ抽出法によって染色体ＤＮＡを抽出、精製し、染色
体Ｄ　Ｎ　Ａ　９００　終ｇを得た。

（２）ベクターＤＮＡの調製 ベクターとして用いるアンピシリン耐性及びテトラサイ
クリン耐性を有するｐＢＲ３２２プラスミドのＤＮＡを
下記のごとくして調製した。

ｐＢＲ，３２２をプラスミドとして持つエシェリヒア−
＋５０ｅｇ／腸Ｉのクロラムフェニコールヲ添加して−
た。その上清を２−ブタノールで処理してＤＮＡを濃縮
後、リボ核醜分解酵素で３７℃、３時間処理し１次いで
セシウム・クロライド−エチジウムブロマイド平衡密度
勾配遠心を行ない、ｐＢＲ３２２プラスミドＤ　Ｎ　Ａ
　４５０　ルｇを得た。

（３）染色体ＤＮＡ断片のベクター挿入（１）で得た染
色体ＤＮＡ１．５ｐ、をとり制限酵素Ｓａｕ　３＾■を
加え３７℃で１．５時間反応させて切断した。一方、（
２）で得たベクターＤ　Ｎ　Ａ　１．０μｇを制限酵素
Ｂａｇ　Ｈｌで完全に切断した６両反応液を各々８５℃
、１０分間加熱処理した後、両反応液を混合し、Ｔ４　
ファージ由来のＤＮＡリガーゼによって１０℃、１６時
間ＤＮＡ鎖の連結反応を行なった６次いで６５℃、５分
の熱あ理後、反応液に２倍容のエタノールを加え一２０
℃で１時間放［１３５，０ＯＯＸ　ｇで遠心して沈澱を
集め、これを５．０■に。

トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ１７，５）　０．１５鳳１に
溶解し。

ＤＮＡ溶液とした。

（４）グリオキサラーゼＩの生産に関与した遺伝子を担
うプラスミドによる形質転換 エシェリヒア拳コリＣ８００をＬＢｌａ地５０麿ｌにて
対数増殖中期（００，、。−〇、３）まで生育させた後
、塩化カルシウム５０ｓにを含むトリス緩衝液（５０ｍ
ｌｌ、ｐＨ７，０）で２回洗浄後、同じ緩衝液１．５１
に再懸濁させた。この懸濁液０．２ｍｌに（３）で得た
ＤＮＡ溶液Ｑ、１ｍｌ　を加え、０℃にて３０分間保持
した後、直ちに４２℃、２分間の熱パルスを与えて、前
記プラスミドＤＮＡを細胞内に取り込ませた０次いで、
この細胞懸濁液を別途前記ＬＢ培地に接種し、３７℃、
３時間振盪培養して形質転換反応を行なった後、７ンピ
シリン耐性を有し、かつグリオキサラーゼエ活性の高い
株を分離し、エシェリヒア拳：Ｉ　ＩＪ　０８００（ｐ
ＧＩ　３１８）（微工研菌寄第　９１１３８号）を得た
。

実施例　２ （１）　ｐＧＩ　３１８の調製 実施例１に記載した形質転換株エシェリヒアーコリｃｅ
ｏｏ（ｐａｒ　３１Ｂ）から、実施例１（２）に記載の
方法によりｐＧＩ　３１８プラスミドＤＮＡを調製した
。

（２）　ｐＧＩ　４２３の構築及び該プラスミドによる
形質転換 （１）で得たｐａｔ　３１８プラスミドＤＮＡを制限酵
素Ｈ＋ａａｌ［で完全に切断した後、この溶液を７ガロ
ースゲル電気泳動（アガロース０．０．９０Ｖ）にかけ
、グリオキサラーゼエ遺伝子部分を含む８．５ｋｂのＤ
ＮＡバンドを紫外線照射下で切り出し、このゲルを透析
チューブに入れて再度電気泳動を行ない、ゲルよりＤＮ
Ａを抽出した。抽出液を２−ブタノールで処理してＤＮ
Ａの濃縮とエチジウムプロミドの除去を行なった後、Ｔ
４ファージ由来のＤＮＡリガーゼによって１０℃、１６
時間ＤＮＡｆｉの連結反応を行ない、ｐＧＩ　４２３プ
ラスミドを構築した０次いで、実施例！（４）と同様に
してエシェリヒア・コリｃｅｏｏにＤＮＡ取り込み能を
持たせた後、上記ｐＧＩ　４２３を取り込ませた。かく
して得られる菌株を７ンピシリン５０ｐｇ／ｍｌを含む
ＬＢ培地に培養し、生じてくるコロニーを分離すること
により形質転換株エシェリヒア・コリ０８００（ｐＧｌ
　４２３）　　（微工研Δ寄第　９６３９号）を取得し
た。

実施例３ 実施例２に記載した形質転換株エシェリヒア・コリＣ８
００（ＰＯＴ　４２３）　　（、微工研菌寄第１１１１
３９号）。

エシェリヒア・コリＣＩＩＧＯ（ｐＢＲ３２２）及びシ
ュードモナス・プチダＩＦＯ３７３８をデービスーミン
ギオリの最小培地Ｃ（ｇ／Ｉ）ニゲルコース５．Ｏｌに
Ｈ，ＰＯ４３，０，Ｋ２　１（ＰＯ４７，０、（１１１
１，）２Ｌｓｏ４　＋、０、　Ｍｇ５Ｏ＋　・　７Ｈλ
００．１］　１００腸１を含む５００　ｍｌ容のフラス
コで３０℃にて１８時間振盪培養を行なった。これを遠
心分離にて集菌、洗浄後、　ｐＨ７，０に調整したｌＯ
−阿すン醜緩衝液１（１＋＋１に懸濁し、０℃で５分間
、超音波破砕した。　２５，０ＯＯＸ　ｇで３０分間遠
心して上清をとり、そのグリオキサラーゼ！活性を測定
した。その結果を表１に示した。

表１ 表１のグリオキサラーゼ！活性は、経腸ｏ１ｅ／腸ｉｎ
／ｍｇ　ｐｒｏｔｓｉｎを示している。

エシェリヒア・コリ０８００（ｐＧＩ３１８）（微工研
Δ寄ｊＦｌ　９４１３８号）においても、ニジエリとア
ΦコリＣθＧｏ（ｐＧｌ　４２３）とほぼ同程度の結果
（１，７０３μ膳０１／ｓｉｎ／ａｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ
　）を得た。

実施例　４ 実施例２において調製した無細胞抽出液を７．２、　／
Ｉメチルグリオキサール、　３０．７ｇ／　Ｉグルタチ
オン、５０膳にリンＨ１ｓ衝液（ｐＨ７，ｏ　）　と共
にインキエベートし、Ｓ−ラクトイルグルタチオンの生
合成を行なった０反応液中のタンパク濃度はＯ，ｌｓｇ
／−１、反応時間ＢＯ分間１反応温度は３７℃とした。

その結果を表２に示す。

表２ 表２においてＳ−ラクトイルグルタチオンのグルタチオ
ンに対する変換率は、シュードモナスプチダｒＦＯ３７
３８及びエシェリヒア・コリＣ８００（ｐＢＲ３２２）
がそれぞれ７．８及び１．３駕と低いのに対し、エシェ
リヒア・コリ０８００（ｐＧ［４２３）では８２．３駕
となり掻Ｉ災に向上した。

エシェリヒア・コリＣ８００（ｐＧＩ　３１８）におい
ても、エシェリヒアΦコリ０１！００（ｐＧＩ　４２３
）とほぼ同程度の交換率（９０，０りでＳ−ラクトイル
グルタチオンを生産することができた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ｐＧＩ　３１８プラスミド及びｐＧＩ　４２
３プラスミドの調製工程を示す図であり、第２図はｐＧ
Ｉ　３１８　プラスミド及びｐＧＩ　４２３　プラスミ
ドの制限酵素切断点地図を示すものである。（便宜的に
直線で示しである。）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. （１）グリオキサラーゼＩを生成する能力を有する微生
   物の染色体ＤＮＡを制限酵素で処理して得られるＤＮＡ
   断片、該ＤＮＡ断片に対してヌクレオチドの置換、ヌク
   レオチドの欠失、ヌクレオチドの挿入およびヌクレオチ
   ド配列の逆位、その他の突然変異によって関連づけられ
   ている天然のＤＮＡ断片、もしくは前記グリオキサラー
   ゼＩをコードするＤＮＡ断片であって半合成によって得
   られるＤＮＡ断片を含むプラスミドであってグリオキサ
   ラーゼＩを生産する能力を宿主に与えるプラスミド。
2. （２）宿主がエシェリヒア属に属する微生物である特許
   請求の範囲第１項記載のプラスミド。
3. （３）エシェリヒア属に属する微生物がエシェリヒア・
   コリＣ８００である特許請求の範囲第２項記載のプラス
   ミド。
4. （４）ＤＮＡ断片がシュードモナス属に属する微生物の
   染色体ＤＮＡから調製されたＤＮＡ断片である特許請求
   の範囲第１項記載のプラスミド。
5. （５）シュードモナス属に属する微生物が シュードモナス・ブチダＩＦＯ３７２８である特許請求
   の範囲第４項記載のプラスミド。
6. （６）プラスミドがｐＧＩ３１８プラスミドである特許
   請求の範囲第１項記載のプラスミド。
7. （７）プラスミドがｐＧＩ４２３プラスミドである特許
   請求の範囲第１項記載のプラスミド
8. （８）グリオキサラーゼＩを生産する能力を有する微生
   物の染色体ＤＮＡを制限酵素で処理して得られるＤＮＡ
   断片、もしくは該ＤＮＡ断片に対してヌクレオチドの置
   換、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの挿入およびヌ
   クレオチド配列の逆位その他の突然変異によって関連づ
   けられており、前記グリオキサラーゼＩをコードするＤ
   ＮＡ断片であって天然もしくは半合成によって得られる
   ＤＮＡ断片を含むプラスミドであって、グリオキサラー
   ゼＩを生産する能力を宿主に与えるプラスミドによって
   形質転換された微生物。
9. （９）形質転換された微生物がエシェリヒア・コリＣ６
   ００（ｐＧＩ３１８）である特許請求の範囲第８項記載
   の微生物。
10. （１０）形質転換された微生物がエシェリヒア・コリＣ
    ６００（ｐＧＩ４２３）である特許請求の範囲第８項記
    載の微生物。
11. （１１）グリオキサラーゼＩを生産する能力を有する微
    生物の染色体ＤＮＡを制限酵素で処理して得られるＤＮ
    Ａ断片、もしくは該ＤＮＡに対してヌクレオチドの置換
    、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの挿入およびヌク
    レオチド配列の逆位その他の突然変異によって関連づけ
    られており前記グリオキサラーゼＩをコードするＤＮＡ
    断片であって天然もしくは半合成によって得られるＤＮ
    Ａ断片を含むプラスミドであってグリオキサラーゼＩを
    生産する能力を宿主に与えるプラスミドによって形質転
    換された微生物を培養し、かくして得られた菌体もしく
    は該菌体の処理物をメチルグリオキサールおよびグルタ
    チオンを含有する基質溶液と接触させ、生成したＳ−ラ
    クトイルグルタチオンを採取することを特徴とするＳ−
    ラクトイルグルタチオンの製造法。