JPH07178A - 細胞培養用担体 - Google Patents
細胞培養用担体Info
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 安価で、かつ調製が容易な新規有用な細胞培
養用担体を提供する。 【構成】 本細胞培養用担体は、糖脂質を細胞接着促進
物質とする。好ましい糖脂質としては、炭素数８〜２２
のアシル基を有するグリセロ等脂質が提示される。
養用担体を提供する。 【構成】 本細胞培養用担体は、糖脂質を細胞接着促進
物質とする。好ましい糖脂質としては、炭素数８〜２２
のアシル基を有するグリセロ等脂質が提示される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞培養用担体に関す
る。
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、動物細胞の培養には牛胎仔血清添
加培地が使用されてきたが、当該培地は高価であり、且
つロット間のばらつきがあることから、血清を使用しな
い無血清培地の利用が増加しつつある。
加培地が使用されてきたが、当該培地は高価であり、且
つロット間のばらつきがあることから、血清を使用しな
い無血清培地の利用が増加しつつある。
【０００３】しかし、接着性細胞を無血清培養するに
は、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲンやポリリ
ジンといった接着因子を必要とし、これらを添加した培
地や、予めこれらの接着因子で表面をコーティングした
組織培養器具の利用が必要となっている。
は、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲンやポリリ
ジンといった接着因子を必要とし、これらを添加した培
地や、予めこれらの接着因子で表面をコーティングした
組織培養器具の利用が必要となっている。
【０００４】又、オリゴ糖鎖やスフィンゴ糖脂質は、細
胞間の特異的相互作用発現に関与していると考えられて
おり、これらの物質が細胞接着効果を有していることも
実験的に証明されている。
胞間の特異的相互作用発現に関与していると考えられて
おり、これらの物質が細胞接着効果を有していることも
実験的に証明されている。
【０００５】更に、培養器具の素材を改良し、器具の表
面に電荷を与えることにより、接着効果をもたせる方法
も実用化されている。
面に電荷を与えることにより、接着効果をもたせる方法
も実用化されている。
【０００６】しかしながら、これらのタンパク質やスフ
ィンゴ糖脂質等の接着因子はいずれも高価格であった
り、培養器具の改良単独では効果が不十分であった。
ィンゴ糖脂質等の接着因子はいずれも高価格であった
り、培養器具の改良単独では効果が不十分であった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、コラーゲン
等のタンパク性接着因子、スフィンゴ糖脂質系の接着因
子と比べて非常に安価であり、かつ調製が容易な細胞培
養用担体を提供することを目的になされたものである。
等のタンパク性接着因子、スフィンゴ糖脂質系の接着因
子と比べて非常に安価であり、かつ調製が容易な細胞培
養用担体を提供することを目的になされたものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を達成すべく鋭意検討の結果、特定の構造を有する糖脂
質にコラーゲン等の接着性タンパク質に相当する細胞接
着作用のあることを見いだし、かかる知見に基づいて本
発明を完成するに至った。
を達成すべく鋭意検討の結果、特定の構造を有する糖脂
質にコラーゲン等の接着性タンパク質に相当する細胞接
着作用のあることを見いだし、かかる知見に基づいて本
発明を完成するに至った。
【０００９】即ち、本発明に係る細胞培養用担体は、糖
脂質、特に炭素数８〜２２のアシル基を有するグリセロ
糖脂質を細胞接着促進物質とすることを特徴とする。
脂質、特に炭素数８〜２２のアシル基を有するグリセロ
糖脂質を細胞接着促進物質とすることを特徴とする。
【００１０】本発明で用いられるグリセロ糖脂質は、分
子内に糖とグリセリンとがグリコシド結合しており、こ
の分子に脂肪酸がエステル結合した構造を有する。
子内に糖とグリセリンとがグリコシド結合しており、こ
の分子に脂肪酸がエステル結合した構造を有する。
【００１１】かかるグリセロ糖脂質は、例えば酸触媒の
存在下、糖とグリセリンより糖グリセロールを調製し、
ついで適当な脂肪酸を用いてアシル化することにより得
ることができる。更には、先に本出願人が提案したリパ
ーゼを用いる糖脂質の合成方法（特願平３−１０２０８
２号）が好適に採用される。
存在下、糖とグリセリンより糖グリセロールを調製し、
ついで適当な脂肪酸を用いてアシル化することにより得
ることができる。更には、先に本出願人が提案したリパ
ーゼを用いる糖脂質の合成方法（特願平３−１０２０８
２号）が好適に採用される。
【００１２】当該糖としては、例えばグルコース、ガラ
クトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルグルコ
サミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン等の単糖が挙げら
れる。一般に動物細胞には種特異性、臓器特異性が存在
するため、培養する細胞に親和性の強い糖鎖を選択する
ことが可能である。
クトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルグルコ
サミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン等の単糖が挙げら
れる。一般に動物細胞には種特異性、臓器特異性が存在
するため、培養する細胞に親和性の強い糖鎖を選択する
ことが可能である。
【００１３】脂肪酸としては、炭素数８〜２２の飽和若
しくは不飽和の脂肪酸であり、特に炭素数１２〜２０程
度の脂肪酸が好ましい。当該脂肪酸として、具体的に
は、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸等が例示される。中でも上記炭素数を
有する不飽和脂肪酸が推奨される。
しくは不飽和の脂肪酸であり、特に炭素数１２〜２０程
度の脂肪酸が好ましい。当該脂肪酸として、具体的に
は、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸等が例示される。中でも上記炭素数を
有する不飽和脂肪酸が推奨される。
【００１４】本発明に係る糖脂質としては、１個のアシ
ル基を有する糖脂質が推奨されるが、このものに２個以
上のアシル基を有する糖脂質が混在していてもよい。
ル基を有する糖脂質が推奨されるが、このものに２個以
上のアシル基を有する糖脂質が混在していてもよい。
【００１５】脂肪酸がエステル結合している部位は、糖
グリセロール中のいずれでもよいが、好ましくはグリセ
リンの末端アルコール若しくは糖の６位がよい。又、エ
ステル結合の部位が一定していない混合物を使用するこ
とも可能である。
グリセロール中のいずれでもよいが、好ましくはグリセ
リンの末端アルコール若しくは糖の６位がよい。又、エ
ステル結合の部位が一定していない混合物を使用するこ
とも可能である。
【００１６】このようにして得られた糖脂質を担体に利
用するには、種々の方法がある。例えば、糖脂質をエタ
ノール等の溶剤に溶かし、この溶液を細胞培養容器に加
え、溶剤を風乾して除くことにより、糖脂質でコーティ
ングされた細胞培養容器を得ることができる。
用するには、種々の方法がある。例えば、糖脂質をエタ
ノール等の溶剤に溶かし、この溶液を細胞培養容器に加
え、溶剤を風乾して除くことにより、糖脂質でコーティ
ングされた細胞培養容器を得ることができる。
【００１７】使用する糖脂質の濃度としては、１〜１０
０μg/cm2程度が良く、より望ましくは５〜５０μg/cm2
程度である。
０μg/cm2程度が良く、より望ましくは５〜５０μg/cm2
程度である。
【００１８】使用する培養器具の素材はいずれでも良い
が、糖脂質の疎水基が吸着しやすいようなポリスチレ
ン、ポリエチレン等の樹脂が好ましい。
が、糖脂質の疎水基が吸着しやすいようなポリスチレ
ン、ポリエチレン等の樹脂が好ましい。
【００１９】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を詳しく説明す
る。尚、担体へのコーティングは、各濃度の糖脂質のエ
タノール溶液１００μlをマルチウェルプレート上に注
ぎ静置、風乾することにより行った。
る。尚、担体へのコーティングは、各濃度の糖脂質のエ
タノール溶液１００μlをマルチウェルプレート上に注
ぎ静置、風乾することにより行った。
【００２０】実施例１ ハムスター肺ＣＨＬ／ＩＵ細胞（およそ２×１０4）を
懸濁させた成長因子添加無血清培地０．５mlを、脂肪酸
としてオレイン酸を選択して調製されるグリセロ糖脂質
（濃度１μg/cm2）でプレコートした細胞培養用マルチ
ウェルプレート(48well)に加え、５％ＣＯ2存在下、３
７℃で７日間培養した。この細胞の成長状態の顕微鏡観
察下での写真を図１に示す。更に、この細胞数をニュー
トラルレッドアッセイ法により測定したところ、３×１
０3であった。
懸濁させた成長因子添加無血清培地０．５mlを、脂肪酸
としてオレイン酸を選択して調製されるグリセロ糖脂質
（濃度１μg/cm2）でプレコートした細胞培養用マルチ
ウェルプレート(48well)に加え、５％ＣＯ2存在下、３
７℃で７日間培養した。この細胞の成長状態の顕微鏡観
察下での写真を図１に示す。更に、この細胞数をニュー
トラルレッドアッセイ法により測定したところ、３×１
０3であった。
【００２１】実施例２ グリセロ糖脂質濃度を５μg/cm2とした他は実施例１と
同様にして培養した。このとき得られた細胞状態の顕微
鏡写真を図２に示す。又、この細胞数を実施例１と同様
にして測定したところ、３×１０4であった。
同様にして培養した。このとき得られた細胞状態の顕微
鏡写真を図２に示す。又、この細胞数を実施例１と同様
にして測定したところ、３×１０4であった。
【００２２】実施例３ グリセロ糖脂質濃度を１０μg/cm2とした他は実施例１
と同様にして培養した。このとき得られた細胞状態の顕
微鏡写真を図３に示す。又、この細胞数を実施例１と同
様にして測定したところ、６×１０4であった。
と同様にして培養した。このとき得られた細胞状態の顕
微鏡写真を図３に示す。又、この細胞数を実施例１と同
様にして測定したところ、６×１０4であった。
【００２３】比較例１ 糖脂質でプレコートしないプレートを用いて培養した他
は実施例１と同様にして培養した。このとき得られた細
胞状態の顕微鏡写真を図４に示す。又、この細胞数を実
施例１と同様にして測定したところ、１×１０3であっ
た。
は実施例１と同様にして培養した。このとき得られた細
胞状態の顕微鏡写真を図４に示す。又、この細胞数を実
施例１と同様にして測定したところ、１×１０3であっ
た。
【００２４】比較例２ １０％牛胎仔血清含有培地（Eagle's minimal essentia
l medium）を用いて培養した他は実施例１と同様にして
培養した。このとき得られた細胞状態の顕微鏡写真を図
５に示す。又、この細胞数を実施例１と同様にして測定
したところ、２×１０5であった。
l medium）を用いて培養した他は実施例１と同様にして
培養した。このとき得られた細胞状態の顕微鏡写真を図
５に示す。又、この細胞数を実施例１と同様にして測定
したところ、２×１０5であった。
【００２５】比較例３ ０．０３％コラーゲンでプレコートしたプレートを用い
た他は実施例１と同様にして培養した。このとき得られ
た細胞状態の顕微鏡写真を図６に示す。又、この細胞数
を実施例１と同様にして測定したところ、６×１０3で
あった。
た他は実施例１と同様にして培養した。このとき得られ
た細胞状態の顕微鏡写真を図６に示す。又、この細胞数
を実施例１と同様にして測定したところ、６×１０3で
あった。
【００２６】
【発明の効果】本発明に係る糖脂質は、従来用いられて
きた接着性タンパク質と遜色のない細胞の接着効果を示
す。この糖脂質をコーティングして得られる細胞培養用
担体はより安価に調製が可能であり、コラーゲン等の接
着性タンパク質に代わる細胞の接着促進物質としての担
体として有効に利用することができる。
きた接着性タンパク質と遜色のない細胞の接着効果を示
す。この糖脂質をコーティングして得られる細胞培養用
担体はより安価に調製が可能であり、コラーゲン等の接
着性タンパク質に代わる細胞の接着促進物質としての担
体として有効に利用することができる。
【００２７】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【００２８】
第１図は、実施例１で得られたＣＨＬ／ＩＵ細胞の増殖
状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
【００２９】第２図は、実施例２で得られたＣＨＬ／Ｉ
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
【００３０】第３図は、実施例３で得られたＣＨＬ／Ｉ
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
【００３１】第４図は、比較例１で得られたＣＨＬ／Ｉ
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
【００３２】第５図は、比較例２で得られたＣＨＬ／Ｉ
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
Ｕ細胞の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）であ
る。
【手続補正書】
【提出日】平成６年５月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】削除
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は実施例１で得られたＣＨＬ／ＩＵ細胞
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
【図２】 図２は実施例２で得られたＣＨＬ／ＩＵ細胞
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
【図３】 図３は実施例３で得られたＣＨＬ／ＩＵ細胞
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
【図４】 図４は比較例１で得られたＣＨＬ／ＩＵ細胞
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
【図５】 図５は比較例２で得られたＣＨＬ／ＩＵ細胞
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
の増殖状態を示す顕微鏡写真（１００倍）である。
Claims (2)
- 【請求項１】 糖脂質を細胞接着促進物質とすることを
特徴とする細胞培養用担体。 - 【請求項２】 糖脂質が炭素数８〜２２のアシル基を有
するグリセロ糖脂質である請求項１に記載の細胞培養用
担体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5166175A JPH07178A (ja) | 1993-06-11 | 1993-06-11 | 細胞培養用担体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5166175A JPH07178A (ja) | 1993-06-11 | 1993-06-11 | 細胞培養用担体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07178A true JPH07178A (ja) | 1995-01-06 |
Family
ID=15826473
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5166175A Pending JPH07178A (ja) | 1993-06-11 | 1993-06-11 | 細胞培養用担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07178A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003074099A1 (en) * | 2002-03-06 | 2003-09-12 | Japan Tissue Engineering Co.,Ltd | Base material for tissue regeneration, transplantation material and process for producing the same |
| WO2003074691A1 (fr) * | 2002-03-01 | 2003-09-12 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Cellules et liposomes immobilises et procede d'immobilisation correspondant |
| JP2010187680A (ja) * | 1998-11-19 | 2010-09-02 | Organogenesis Inc | 生物工学的組織構築物およびそれを生成および使用する方法 |
| JP2010536350A (ja) * | 2007-08-20 | 2010-12-02 | エバーハルト・カールス・ユニバーシタット テュービンゲン ユニバーシタットスクリニクム | コラーゲン含有細胞担体 |
-
1993
- 1993-06-11 JP JP5166175A patent/JPH07178A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010187680A (ja) * | 1998-11-19 | 2010-09-02 | Organogenesis Inc | 生物工学的組織構築物およびそれを生成および使用する方法 |
| WO2003074691A1 (fr) * | 2002-03-01 | 2003-09-12 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Cellules et liposomes immobilises et procede d'immobilisation correspondant |
| US7501280B2 (en) | 2002-03-01 | 2009-03-10 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Immobilized cells and liposomes and method of immobilizing the same |
| WO2003074099A1 (en) * | 2002-03-06 | 2003-09-12 | Japan Tissue Engineering Co.,Ltd | Base material for tissue regeneration, transplantation material and process for producing the same |
| JP2010536350A (ja) * | 2007-08-20 | 2010-12-02 | エバーハルト・カールス・ユニバーシタット テュービンゲン ユニバーシタットスクリニクム | コラーゲン含有細胞担体 |
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