JPH0711524B2 - プロトロンビン時間測定用試薬 - Google Patents
プロトロンビン時間測定用試薬Info
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- JPH0711524B2 JPH0711524B2 JP60072846A JP7284685A JPH0711524B2 JP H0711524 B2 JPH0711524 B2 JP H0711524B2 JP 60072846 A JP60072846 A JP 60072846A JP 7284685 A JP7284685 A JP 7284685A JP H0711524 B2 JPH0711524 B2 JP H0711524B2
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明はトロンビン用の色原体基質を用いるプロトロン
ビン時間測定のための試薬に関する。
ビン時間測定のための試薬に関する。
プロトロンビン時間（以下PTと略記する）の測定は最も
しばしば行われる凝固試験の一つである。クマリン誘導
体を用いる経口により血液凝固阻止物質療法を監視する
のにPTを用いることにより、この試験は特に療法の成果
が治療範囲保持の監視に決定的に依存するという事実ゆ
えに重要性が増大してきている。
しばしば行われる凝固試験の一つである。クマリン誘導
体を用いる経口により血液凝固阻止物質療法を監視する
のにPTを用いることにより、この試験は特に療法の成果
が治療範囲保持の監視に決定的に依存するという事実ゆ
えに重要性が増大してきている。
PT測定においては血漿試料または血液試料を動物または
人間の組織からの組織トロンボプラスチンを用いて活性
化する。組織トロンボプラスチンは外因性凝固系の第VI
I因子を活性化し、この因子が第Ｘ因子の活性化を介し
てプロトロンビンからトロンビンを遊離させる。次に保
存的凝固分析においてはトロンビン測定は天然の基質フ
イブリノゲンを用いる凝固時間測定により行われる。組
織トロンボプラスチンが外因性凝固経路のすべてのビタ
ミンＫ依存性凝固因子II、VIIおよびＸに対し高い感度
を有することが決定的に重要である。何故ならこれらは
クマリン療法により低下されるからである。国際標準と
して受容されているブリテイツシユコンパラテイブトロ
ンボプラスチン（British Comparative Thromboplasti
n）は高い感度でこれら因子を検出する。
人間の組織からの組織トロンボプラスチンを用いて活性
化する。組織トロンボプラスチンは外因性凝固系の第VI
I因子を活性化し、この因子が第Ｘ因子の活性化を介し
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存的凝固分析においてはトロンビン測定は天然の基質フ
イブリノゲンを用いる凝固時間測定により行われる。組
織トロンボプラスチンが外因性凝固経路のすべてのビタ
ミンＫ依存性凝固因子II、VIIおよびＸに対し高い感度
を有することが決定的に重要である。何故ならこれらは
クマリン療法により低下されるからである。国際標準と
して受容されているブリテイツシユコンパラテイブトロ
ンボプラスチン（British Comparative Thromboplasti
n）は高い感度でこれら因子を検出する。
血液凝固阻止物質療法を監視するにはいわゆる第II、第
VII及び第Ｘ因子試薬が用いられる。これらトロンボプ
ラスチン試薬にはこれら因子の含量における変動を排除
するための第Ｖ因子およびフイブリノゲンが添加され
る。PTに決定的に影響する第Ｖ因子は速やかに活性を失
うので、前記した措置により血漿または血液試料はまた
それらを調べる前にある時間保存されることもできる。
VII及び第Ｘ因子試薬が用いられる。これらトロンボプ
ラスチン試薬にはこれら因子の含量における変動を排除
するための第Ｖ因子およびフイブリノゲンが添加され
る。PTに決定的に影響する第Ｖ因子は速やかに活性を失
うので、前記した措置により血漿または血液試料はまた
それらを調べる前にある時間保存されることもできる。
第VII因子は生物学的半滅期が最も短いので、クマリン
誘導体を用いる療法に最も速やかに応答する。それゆえ
第VII因子感受性のトロンボプラスチンは患者の凝固阻
止の初期相を監視するのにも特に適当であると見做され
る。初期相における第Ｘ因子の監視も同様に指示され
〔アイヤー・エム（Aiach M.）氏他、「トロンブ・レス
（Thromb.Res.）」第47巻き第69〜71頁（1982年）参
照〕、従って第Ｘ因子感受性も熱望される。凝固カスケ
ードの活性化された因子にとつての低分子色原体性ペプ
チド基質の開発により近来古典的な凝固基質としてのフ
イブリノゲンとの置換が可能である。従つて今日ではビ
タミンＫ依存性第Ｘおよび第II因子に対する比較的特異
的な基質が存在する。血漿中の第Ｘ、第VIIおよび第II
因子の感度の良い測定法が開発され、そしてPT測定と個
々の因子測定との間に比較的好都合な相関を達成するこ
とができた。この個々の因子測定すべての欠点は、それ
らがビタミンＫ依存性因子の１種のみを検出しそしてそ
れゆえ３因子すべて低下した患者の病態生理学的状況を
反映しないことである。特に、臨界的な第VII因子は今
日でも特異的な色原体基質を用いて直接ではなく、第Ｘ
因子を介してのみ測定されうる。
誘導体を用いる療法に最も速やかに応答する。それゆえ
第VII因子感受性のトロンボプラスチンは患者の凝固阻
止の初期相を監視するのにも特に適当であると見做され
る。初期相における第Ｘ因子の監視も同様に指示され
〔アイヤー・エム（Aiach M.）氏他、「トロンブ・レス
（Thromb.Res.）」第47巻き第69〜71頁（1982年）参
照〕、従って第Ｘ因子感受性も熱望される。凝固カスケ
ードの活性化された因子にとつての低分子色原体性ペプ
チド基質の開発により近来古典的な凝固基質としてのフ
イブリノゲンとの置換が可能である。従つて今日ではビ
タミンＫ依存性第Ｘおよび第II因子に対する比較的特異
的な基質が存在する。血漿中の第Ｘ、第VIIおよび第II
因子の感度の良い測定法が開発され、そしてPT測定と個
々の因子測定との間に比較的好都合な相関を達成するこ
とができた。この個々の因子測定すべての欠点は、それ
らがビタミンＫ依存性因子の１種のみを検出しそしてそ
れゆえ３因子すべて低下した患者の病態生理学的状況を
反映しないことである。特に、臨界的な第VII因子は今
日でも特異的な色原体基質を用いて直接ではなく、第Ｘ
因子を介してのみ測定されうる。
ヨーロッパ特許出願EP−Ａ−0,014,039号にはPTを色原
体基質を用いて測定する方法が記載されている。しかし
ながら合理的な測定時間を得るためにはカルシウム再添
加された血漿からトロンボプラスチン活性化による得ら
れるいわゆる血清試薬が必要である。血清の前記した処
理はすべての因子、特に外因性凝固経路の完全な除去を
保証しない。それゆえ前記した方法で調製された血清と
組み合せて使用されるトロンボプラスチンは、この特許
明細書に提案されているように、試薬に直接トロンビン
を添加する場合に特に何ら高い因子感度を有し得ない。
体基質を用いて測定する方法が記載されている。しかし
ながら合理的な測定時間を得るためにはカルシウム再添
加された血漿からトロンボプラスチン活性化による得ら
れるいわゆる血清試薬が必要である。血清の前記した処
理はすべての因子、特に外因性凝固経路の完全な除去を
保証しない。それゆえ前記した方法で調製された血清と
組み合せて使用されるトロンボプラスチンは、この特許
明細書に提案されているように、試薬に直接トロンビン
を添加する場合に特に何ら高い因子感度を有し得ない。
西ドイツ特許Ａ第3,113,350号には色原体基質を用いて
プロトロンビン時間を測定するためのもう一つの方法お
よび試薬が提案されている。充分に安定した試薬を得る
ためには、特別に調製されたトロンボプラスチンを使用
することが必要である。この出願で使用されているトロ
ンビン基質はすなわち既にトロンボプラスチン中に含有
されるプロテアーゼによる非特異的加水分解を受け易
い。しかしながらトロンボプラスチンについての修正さ
れた調製法によりこれらプロテアーゼは大部分が除去さ
れて、従つて試薬は相当により良好な安定性を示す。し
かしながらプロトロンビン時間を測定するための凝固測
定による方法を用いて測光測定的に比較しうるゆえに、
両方の型の試薬を同じトロンボプラスチンから調製する
ことが望ましい。さらに、トロンボプラスチンの１個の
処理から測光測定試薬および凝固測定試薬が同じく得ら
れうる。
プロトロンビン時間を測定するためのもう一つの方法お
よび試薬が提案されている。充分に安定した試薬を得る
ためには、特別に調製されたトロンボプラスチンを使用
することが必要である。この出願で使用されているトロ
ンビン基質はすなわち既にトロンボプラスチン中に含有
されるプロテアーゼによる非特異的加水分解を受け易
い。しかしながらトロンボプラスチンについての修正さ
れた調製法によりこれらプロテアーゼは大部分が除去さ
れて、従つて試薬は相当により良好な安定性を示す。し
かしながらプロトロンビン時間を測定するための凝固測
定による方法を用いて測光測定的に比較しうるゆえに、
両方の型の試薬を同じトロンボプラスチンから調製する
ことが望ましい。さらに、トロンボプラスチンの１個の
処理から測光測定試薬および凝固測定試薬が同じく得ら
れうる。
驚くべきことに、トロンビンに対する比較的高い特異性
を有する色原体基質例えばＨ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−
（５−アミノ−２−ニトロ安息香酸）−イソプロピルア
ミドまたは他の５−アミノ−２−ニトロ安息香酸誘導体
例えば５−アミノ−２−ニトロ安息香酸−グリシンエチ
ルエステルまたは５−アミノ−２−ニトロ安息香酸−ネ
オペンチルアミドを用いるならば慣用のトロンボプラス
チンを用いてかかる試薬が調製されうる。本発明はかか
る試薬に関する。
を有する色原体基質例えばＨ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−
（５−アミノ−２−ニトロ安息香酸）−イソプロピルア
ミドまたは他の５−アミノ−２−ニトロ安息香酸誘導体
例えば５−アミノ−２−ニトロ安息香酸−グリシンエチ
ルエステルまたは５−アミノ−２−ニトロ安息香酸−ネ
オペンチルアミドを用いるならば慣用のトロンボプラス
チンを用いてかかる試薬が調製されうる。本発明はかか
る試薬に関する。
第１表には、現在技術水準のトロンボプラスチン製剤に
よる種々のプロテアーゼのための色原体基質の加水分解
結果を示す。405nmでの吸光を測定することにより、構
造Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ
安息香酸）−Ｒ、Tos−Gly−Pro−Arg−（５−アミノ−
２−ニトロ安息香酸）−ＲまたはBoc−Gly−Pro−Arg−
（５−アミノ−２−ニトロ−安息香酸）−Ｒを有するト
ロンビン基質がトロンボプラスチンによつてほんのとる
に足らぬ程度にした加水分解されず、一方大抵の他の基
質およびまたは西ドイツ特許第3,113,350A1号で使用さ
れているトロンビン用の基質であるTos−Gly−Pro−Arg
−ｐ−ニトロアニリンにおいても基質の速やかな消費が
記録されることが認識された。かくの如くすべてのトロ
ンボプラスチンは高い蛋白分解活性を示す。実質におい
ては、Tos−Gly−Pro−Arg−ｐ−ニトロアニリンのよう
な基質を有するかかる試薬は非常に短時間のみしか安定
でないことを意味する、何故なら用いられた基質量が速
やかに減少するからである。これに対し例えばＨ−Ｄ−
Phe−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ−安息香
酸）−イソプロピルアミドを有する試薬は相当により長
期間安定でありそしてその安定性は基質の加水分解によ
つてではなくトロンボプラスチンの安定性により限定さ
れる。
よる種々のプロテアーゼのための色原体基質の加水分解
結果を示す。405nmでの吸光を測定することにより、構
造Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ
安息香酸）−Ｒ、Tos−Gly−Pro−Arg−（５−アミノ−
２−ニトロ安息香酸）−ＲまたはBoc−Gly−Pro−Arg−
（５−アミノ−２−ニトロ−安息香酸）−Ｒを有するト
ロンビン基質がトロンボプラスチンによつてほんのとる
に足らぬ程度にした加水分解されず、一方大抵の他の基
質およびまたは西ドイツ特許第3,113,350A1号で使用さ
れているトロンビン用の基質であるTos−Gly−Pro−Arg
−ｐ−ニトロアニリンにおいても基質の速やかな消費が
記録されることが認識された。かくの如くすべてのトロ
ンボプラスチンは高い蛋白分解活性を示す。実質におい
ては、Tos−Gly−Pro−Arg−ｐ−ニトロアニリンのよう
な基質を有するかかる試薬は非常に短時間のみしか安定
でないことを意味する、何故なら用いられた基質量が速
やかに減少するからである。これに対し例えばＨ−Ｄ−
Phe−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ−安息香
酸）−イソプロピルアミドを有する試薬は相当により長
期間安定でありそしてその安定性は基質の加水分解によ
つてではなくトロンボプラスチンの安定性により限定さ
れる。
それゆえかかる試薬の性質は同じトロンボプラスチンを
有する凝固試薬と良く匹敵しうる。
有する凝固試薬と良く匹敵しうる。
それゆえ本発明はトロンビン用の色原体基質が水性懸濁
液中でカルシウムイオンの存在下に37℃で１時間当り初
期濃度の0.00125倍より少ない程度しか蛋白分解作用を
有するトロンボプラスチンにより変換されないことから
なる、蛋白分解作用を有するトロンボプラスチンおよび
トロンビン用の色原体基質を少くとも含有するプロトロ
ンビン時間を測光測定するための試薬に関する。
液中でカルシウムイオンの存在下に37℃で１時間当り初
期濃度の0.00125倍より少ない程度しか蛋白分解作用を
有するトロンボプラスチンにより変換されないことから
なる、蛋白分解作用を有するトロンボプラスチンおよび
トロンビン用の色原体基質を少くとも含有するプロトロ
ンビン時間を測光測定するための試薬に関する。
トロンボプラスチンは人間の胎盤から得られるのが望ま
しい。
しい。
構造Tos−Gly−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ−
安息香酸）−ＲまたはＨ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−（５−
アミノ−２−ニトロ−安息香酸）−Ｒ〔これら式中Ｒは
NH−CnH2n+1（ここでｎは１〜７である）であるか、NH
−ベンジルであるかまたはα−アミノ基を介して結合し
たアミノ酸またはそのアルキルエステルの残基である〕
を有する色原体基質が使用されるのが好ましい。
安息香酸）−ＲまたはＨ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−（５−
アミノ−２−ニトロ−安息香酸）−Ｒ〔これら式中Ｒは
NH−CnH2n+1（ここでｎは１〜７である）であるか、NH
−ベンジルであるかまたはα−アミノ基を介して結合し
たアミノ酸またはそのアルキルエステルの残基である〕
を有する色原体基質が使用されるのが好ましい。
前記した試薬は0.5〜10ミリモル/l好ましくは５ミリモ
ル/lの濃度のカルシウムイオンを含有しうる。
ル/lの濃度のカルシウムイオンを含有しうる。
このものはさらにpH7〜8.5好ましくは7.6を有する0.005
〜0.1モル/l好ましくは0.025モル/lの濃度の緩衝溶液例
えばトリス（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）、
HEPES（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−
Ｎ′−２−エタンスルホン酸）、グリシルグリシン、EP
PS（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプ
ロパンスルホン酸）およびイミダゾールなかんずくHEPE
Sを含有しうる。
〜0.1モル/l好ましくは0.025モル/lの濃度の緩衝溶液例
えばトリス（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）、
HEPES（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−
Ｎ′−２−エタンスルホン酸）、グリシルグリシン、EP
PS（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプ
ロパンスルホン酸）およびイミダゾールなかんずくHEPE
Sを含有しうる。
このものはまた0.01〜0.2モル/l好ましくは0.05モル/l
の濃度の中性塩好ましくは塩化ナトリウムが添加されう
る。
の濃度の中性塩好ましくは塩化ナトリウムが添加されう
る。
かかる試薬はまた0.01〜0.5mg/l好ましくは0.25mg/lの
濃度のヘパリン抑制剤例えばプロタミン塩または臭化ヘ
キサジメスリン〔ポリブレン（Polybren） 〕、なかん
ずくポリビレン、をも含有しうる。
濃度のヘパリン抑制剤例えばプロタミン塩または臭化ヘ
キサジメスリン〔ポリブレン（Polybren） 〕、なかん
ずくポリビレン、をも含有しうる。
試薬にはさらに人間または動物の第Ｖ図因子が添加され
ることもできる。
ることもできる。
前記した試薬は第II、第VII、第Ｘおよび第Ｖ因子が欠
乏した血漿を使用して第II、第VII、第Ｘおよび第Ｖ因
子の測定に、または第II、第VIIおよび第Ｘ因子が欠乏
した血漿を使用して第II、第VIIおよび第Ｘ因子の測定
に使用されうる。
乏した血漿を使用して第II、第VII、第Ｘおよび第Ｖ因
子の測定に、または第II、第VIIおよび第Ｘ因子が欠乏
した血漿を使用して第II、第VIIおよび第Ｘ因子の測定
に使用されうる。
下記第１表においてANBAは５−アミノ−２−ニトロ安息
香酸の、Tosはトリエンスルホニルの、そしてSucはスク
シニルの略語である。
香酸の、Tosはトリエンスルホニルの、そしてSucはスク
シニルの略語である。
実施例１に従い調製された試薬の吸光差は室温で92時間
後である。基質濃度は50μモル/lであり、トロンボプラ
スチンは製造者の記述に従い溶解させそして濃度５％で
添加された。
後である。基質濃度は50μモル/lであり、トロンボプラ
スチンは製造者の記述に従い溶解させそして濃度５％で
添加された。
以下の実施例により本発明をさらに説明する。
実施例１ 色原体基質を用いるプロトロンビン時間測定用試薬の調
製 pH7.6の１中にNaCl5844g、CaCl21.47g、HEPES11.92
g、ポリブレン250μｇおよびＨ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−
（５−アミノ−２−ニトロ安息香酸）−イソプロピルア
ミド−HCl67.1mgを含有する水溶液70mlにヒトのトロン
ボプラスチン４〜20mlを加えそしてこの混合物を凍結乾
燥した。
製 pH7.6の１中にNaCl5844g、CaCl21.47g、HEPES11.92
g、ポリブレン250μｇおよびＨ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−
（５−アミノ−２−ニトロ安息香酸）−イソプロピルア
ミド−HCl67.1mgを含有する水溶液70mlにヒトのトロン
ボプラスチン４〜20mlを加えそしてこの混合物を凍結乾
燥した。
添加されたトロンボプラスチンの量および活性に応じ水
200mlを用いての再構成後に正常血漿において405nmでの
吸光変化0.1に対し20〜40秒なる時間が得られた。
200mlを用いての再構成後に正常血漿において405nmでの
吸光変化0.1に対し20〜40秒なる時間が得られた。
実施例２ （１） 参考曲線 試薬混合物は実施例１におけると同様である。生理食塩
溶液を用いて血漿の連続希釈物を調製しそしてプロトロ
ンビン時間を測光測定した。
溶液を用いて血漿の連続希釈物を調製しそしてプロトロ
ンビン時間を測光測定した。
血漿または希釈された血漿50μｌに予熱したプラスチツ
クセル中試薬500μｌを加えそして405nmでの吸光を時間
の函数として記録いた。グラフから吸光増大0.1に達す
る時間を測定した。この時間を血漿濃度の相関としてプ
ロツトした。凝固法と同様にして正常値の100〜５％の
間の直線が得られた。希釈されてない血漿の正常値は2
9.4秒であつた。病的な血漿では時間はかなり長くな
る。
クセル中試薬500μｌを加えそして405nmでの吸光を時間
の函数として記録いた。グラフから吸光増大0.1に達す
る時間を測定した。この時間を血漿濃度の相関としてプ
ロツトした。凝固法と同様にして正常値の100〜５％の
間の直線が得られた。希釈されてない血漿の正常値は2
9.4秒であつた。病的な血漿では時間はかなり長くな
る。
（２） 因子感度 第II、第VII、第Ｘおよび第Ｖ因子に対する実施例１記
載の試薬の感度を第２表に示す。血漿を相当する欠乏血
漿で希釈しそして前記（１）項におけるようにして分析
した。
載の試薬の感度を第２表に示す。血漿を相当する欠乏血
漿で希釈しそして前記（１）項におけるようにして分析
した。
試薬は示されている因子の減少に感度よく対応すること
が第２表から知られうる。
が第２表から知られうる。
Claims (10)
- 【請求項１】トロンビン用色原体基質が水性懸濁液中で
カルシウムイオンの存在下に37℃で１時間当り初期濃度
の0.00125倍より少ない程度しかトロンボプラスチンに
より変換されないことからなる、蛋白分解作用を有する
トロンボプラスチンおよびトロンビン用の色原体基質を
少くとも含有するプロトロンビン時間を測光測定するた
めの試薬であって、前記色原体基質が構造Ｈ−Ｄ−Phe
−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ安息香酸）−Ｒ
またはTos−Gly−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ
安息香酸）−Ｒ〔これら式中ＲはNH−CnH2n+1（ここで
ｎは１〜７である）であるか、NH−ベンジルであるかま
たはα−アミノ基を介して結合したアミノ酸またはその
アルキルエステルの残基である〕を有することからなる
前記試薬。 - 【請求項２】トロンボプラスチンが人間の胎盤から得ら
れることからなる前記特許請求の範囲第１項記載の試
薬。 - 【請求項３】試薬が0.5〜10ミリモル/l好ましくは５ミ
リモル/lの濃度のカルシウムイオンを含有することから
なる前記特許請求の範囲第１項記載の試薬。 - 【請求項４】pH7〜8.5好ましくは7.6を有する0.005〜0.
1モル/l好ましくは0.025モル/lの濃度の緩衝溶液好まし
くはトリス（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）、
HEPES（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−
Ｎ′−２−エタンスルホン酸）、グリシルグリシン、EP
PS（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプ
ロパンスルホン酸）またはイミダゾールなかんずくHEPE
Sを含有することからなる前記特許請求の範囲第１項記
載の試薬。 - 【請求項５】0.01〜0.2モル/l好ましくは0.05モル/lの
濃度の中性塩好ましくは塩化ナトリウムを含有すること
からなる前記特許請求の範囲第１項記載の試薬。 - 【請求項６】試薬臭化ヘキサジメスリンを0.01〜0.5mg/
l好ましくは0.25mg/lの濃度で含有することからなる前
記特許請求の範囲第１項記載の試薬。 - 【請求項７】添加された人間または動物の第Ｖ因子を含
有することからなる前記特許請求の範囲第１項記載の試
薬。 - 【請求項８】pH7〜8.5を有する緩衝溶液に、水性懸濁液
中でカルシウムイオンの存在下に37℃で１時間当り初期
濃度の0.00125倍より少ない程度しかトロンボプラスチ
ンにより変換されないトロンビン用の色原体基質であっ
て構造Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニ
トロ安息香酸）−ＲまたはToS−Gly−Pro−Arg−（５−
アミノ−２−ニトロ安息香酸）−Ｒ〔これら式中ＲはNH
−CnH2n+1（ここではｎは１〜７である）であるか、NH
−ベンジルであるかまたはα−アミノ基を介して結合し
たアミノ酸またはそのアルキルエステルの残基である〕
を有するもの、蛋白分解作用を有するトロンボプラスチ
ンならびに適当な場合は0.5〜10ミリモル/lの濃度の容
性カルシウム塩を加えそして場合によりその混合物を凍
結乾燥することからなる、蛋白分解作用を有するトロン
ボプラスチンおよびトロンビン用の色原体基質を含有す
るプロトロンビン時間を測光的に測定するための試薬の
製法。 - 【請求項９】血漿の連結希釈物を調製し、蛋白分解作用
を有するトロンボプラスチン、カルシウムイオンの存在
下に37℃で１時間当り初期濃度の0.00125倍より少ない
程度しかトロンボプラスチンにより変換されないトロン
ビン用の色原体基質であって構造II−Ｄ−Phe−Pro−Ar
g−（５−アミノ−２−ニトロ安息香酸）−ＲまたはTos
−Gly−Pro−Arg−（５−アミノ−２−ニトロ安息香
酸）−Ｒ〔これら式中ＲはNH−CnH2n+1（ここでｎは１
〜７である）であるか、NH−ベンジルであるかまたはα
−アミノ基を介して結合したアミノ酸またはそのアルキ
ルエステルの残基である〕を有するもの、ならびに適当
な場合は0.5〜10ミリモル/lの濃度のカルシウムイオン
を含有する溶液を加え、そして定められた吸収増大に到
達する時間を測定することからなる、血漿中のプロトロ
ンビン時間の測光測定法。 - 【請求項１０】血漿を欠乏血漿で希釈することからなる
前記特許請求の範囲第９項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3413311.9 | 1984-04-09 | ||
| DE19843413311 DE3413311A1 (de) | 1984-04-09 | 1984-04-09 | Reagenz zur bestimmung der thromboplastinzeit |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60230066A JPS60230066A (ja) | 1985-11-15 |
| JPH0711524B2 true JPH0711524B2 (ja) | 1995-02-08 |
Family
ID=6233070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60072846A Expired - Lifetime JPH0711524B2 (ja) | 1984-04-09 | 1985-04-08 | プロトロンビン時間測定用試薬 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4784944A (ja) |
| EP (1) | EP0158254B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0711524B2 (ja) |
| AT (1) | ATE35000T1 (ja) |
| AU (1) | AU582570B2 (ja) |
| CA (1) | CA1258221A (ja) |
| DE (2) | DE3413311A1 (ja) |
| DK (1) | DK163671C (ja) |
| ES (1) | ES8700323A1 (ja) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3616496A1 (de) * | 1986-05-16 | 1987-11-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Analyseelement zur bestimmung von gerinnungsparametern |
| US5190862A (en) * | 1987-04-01 | 1993-03-02 | Boehringer Mannheim Gmbh | Chromogenic compounds and the use thereof as enzyme substrates |
| SE8702556D0 (sv) * | 1987-06-18 | 1987-06-18 | Kabivitrum Ab | Bestemning av vid proteolys aktiva komponenter |
| US5312745A (en) * | 1987-06-18 | 1994-05-17 | Chromogenix Ab | Determination of components active in proteolysis |
| US5093237A (en) * | 1988-03-03 | 1992-03-03 | Nippon Shoji Kabushiki Kaisha | Method and reagent for determining the biological activity of antithrombin iii by measuring coagulation time |
| JPH0650999B2 (ja) * | 1988-09-12 | 1994-07-06 | 日本商事株式会社 | 血液凝固因子安定化法 |
| US5169786A (en) * | 1989-12-19 | 1992-12-08 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Method of determining levels of extrinsic and intrinsic clotting factors and protein c |
| DE4006634A1 (de) * | 1990-03-03 | 1991-09-05 | Behringwerke Ag | Funktioneller test zur bestimmung der protein s-aktivitaet |
| US5254350A (en) * | 1991-07-22 | 1993-10-19 | Helena Laboratories Corporation | Method of preparing a thromboplastin extract |
| JP3180824B2 (ja) * | 1991-08-30 | 2001-06-25 | シスメックス株式会社 | 血液凝固試薬 |
| JP3524120B2 (ja) * | 1992-05-08 | 2004-05-10 | 生化学工業株式会社 | 前処理剤、前処理方法、前処理された試料による測定法、測定用キット及び試料の判定方法 |
| WO1995030154A1 (en) * | 1994-04-28 | 1995-11-09 | Dade International Inc. | Calibrator for prothrombin time (pt) assays |
| US5602037A (en) * | 1994-06-30 | 1997-02-11 | Dade International, Inc. | Combination reagent holding and test device |
| ATE208493T1 (de) * | 1994-06-30 | 2001-11-15 | Dade Behring Inc | Bioaktive poröse trennteile |
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