JPH06506705A - 再発性ｈｓｖ感染用の免疫療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

再発性Ｈ３Ｖ感染用の免疫療法 ■９発明の分野 本発明は感染症および眼科学の分野に関する。 ■３発明の背景 ヘルペスウィルス・ホミニス（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ　ｈｏｍｉｎｉｓ）とし ても公知の単純庖疹ウィルス（Ｈ３Ｖ）は２つのタイプ１および２に分類される （２）。Ｈ３Ｖ−１は接吻のごとき物理的接触によって伝播され、従って、家族 のメンバーや友達の間に広がる。米国の全ての新生児の約半分は、胎盤を通って 伝播されるこの病原に対するＩｇＧ抗体を持って誕生する。この免疫が消失する に伴い、７０％近くの人が、（はとんどの者は病気の兆候を経験することなく、 他の者は発熱性水泡または単純庖疹の１つまたはいつくかのエピソードの後に） 血清学的に陽性となる４５才までには新しい感染が獲得される。 対照的に、陰部庖疹とも呼ばれるＨ８Ｖ−２は誕生の間に、あるいは性的接触に よって伝播される。後者の出現率は性的パートナ−の数と共に上昇し、従って、 今日の社会では大いに増大した。Ｈ８Ｖ−１と比較して、陰部庖疹は総じて余り 流行しないが、同様に年令と共に累増する。加えて、陰部庖疹は考慮すべき不安 を引き起こしてきた。何故ならば、それは頚癌の原因に寄与するかも知れないと いう浅薄な証拠があり、またひどい病気を誘導する出産の間における頭頂伝播の 危険のためである。両病原での感染は防ぐのが困難で；陰部庖疹の予防用ワクチ ンは未だ出現していない。さらに、眼球Ｈ８Ｖの予防用眼ワクチンはヒトで試み られていない。 特にＨ８Ｖ−１に目を転じると、それは工業国家における失明の最も普通の感染 原因である（１）。しばしば長引く眼疾患の結果、他は健康な個人においてがな りの視覚的罹患率、医療出費および生産性の低下となる。眼球Ｈ３Ｖ−１のはｆ ！５００００ケースが米国だけでも毎年診断されており、これらのケースの２５ にないし４５％が初感染疾患エピソードの１ないし２年内に再発すると予測され 得る。注意すべきは、初感染Ｈ３Ｖと診断されたケースの大部分は、先行攻撃を 呼び戻すことができないであろうから、現実に再感染している。 Ｈ３Ｖ初感染が起こった後、当該ウィルスは神経中を三叉神経節中のニューロン まで伝播され、生涯を通じてそこに執拗に存在する。この臨界的因子は、現在、 単純庖疹感染を治癒不可能な病気とする。というのは、当該ウィルスは結局はこ れらの神経まで戻り、その神経によって支配された身体部分を再感染させるから である。外傷、発熱、太陽への暴露またはストレスのごとき種々の刺激機構は再 活性化プロセスを開始させかねない。この潜伏−再活性化−再発サイクルの結果 、当該ウィルスに対する良好な眼球１ｇＡ応答にも拘わらず、眼球ウィルスを放 出することとなる（２）。一旦、Ｈ３Ｖが眼球で再発すると、角膜疾患および間 質廠痕が続き、この結果角膜性失明が起こる。Ｈ３Ｖ廠痕の直接的結果として、 １年当たり１０００を超える角膜移植が米国で現在行われている。よって、Ｈ３ Ｖ初感染からの回復に際して、当該段階は、個人の一生の残りの間、その者自身 のヘルペスウィルスからの再感染を設定する。 再発は感染した個人の生涯を通じて継続するので、天然Ｈ８Ｖの感染はＨ３Ｖ再 発に対して不十分な保護しか与えないことは明らかである。さらに、１のＨ５Ｖ セロタイプを持つ感染個人は、他のセロタイプを持つ引き続いての感染に対して 部分的に保護されているに過ぎずニ一方、非眼球ＨＳＶ−１は引き続いての眼球 Ｈ３Ｖ−１感染に対して保護されていない。身体上の再発病巣からのウィルスは 眼に伝播され、それは眼球感染に罹る普通の態様であると考える者もいる。Ｈ８ Ｖの反復再発は、さらなる再発を防止する免疫応答を誘導しないので、天然Ｈ８ Ｖ−１の感染によって誘導されるよりも強く、あるいは恐らくはそれと異なる免 疫応答を誘導させようとする大きな要望がある。 さらに免疫保護に関して言えば、細胞媒介免疫（ＣＭＩ）はより重要な役割を果 し得るにも拘わらず、抗体およびＣＭＩ双方がＨ３Ｖ感染で重要であるらしい（ ３，４，５）。一般に、ＣＭＩを欠く患者は、液性免疫が損なわれた者よりもひ どい感染を有する（６〜１０）：その一方、しばしば再発するＨＳＶを持つ患者 は高力価の抗−Ｈ８Ｖ抗体を有する。眼科学者もまた、アトピーのごとき過剰免 疫応答を持つ患者は間質庖疹性角膜炎の最悪の臨床的発現を受けることを示して いる。対照的に、免疫抑制患者は表皮性角膜炎を多く示すが、間質性疾患は最小 である。よって、通常よりも特異的に高い細胞免疫応答を誘導できる免疫療法が 再発性眼球ＨＳＶ感染と戦うことに必要とされている。 再発性眼球Ｈ８Ｖ感染に寄与するもう１つの因子は、角膜中における血管の不存 在である。角膜は血管を欠くので、全身性免疫応答は抗原傷害からの保護を与え るに際しては不十分である（１１）。その結果、局所免疫が眼球Ｈ３Ｖに対する 保護で特に重要となり得る。従って、免疫応答を増加させ、再発性眼球ＨＳＶ感 染を制御するために局所的な眼の免疫療法が必要となる。 現在、商業的Ｈ５Ｖワクチンの開発は絶対的に陰部Ｈ３Ｖ−２の問題に向けられ ている。眼球Ｈ８Ｖ−１と戦うことに対しては最小限の努力しか払われていない 。しかしながら、治療用ワクチン、すなわち、ＨＳＶの眼球での再発を減少させ るためのワクチンの開発は、米国における最も頻繁に起こる重篤なウィルスの眼 球感染や世界中でウィルスにより誘導される失明の主要原因となるものを大いに 緩和するであろう。本発明はこの要求を満足し、関連する利点をも提供する。 本明細書中で引用するすべての文献による開示は、ここに参照して、明示的に一 体化させる。 Ｂ、ＤＮＡ技術 組換えＤＮＡおよび関連する技術が効果的に適用でき、治療または予防的Ｈ３■ ワクチンに要求される大量の高品賀な生物学的活性Ｈ３ＶＩｉタンパクおよびタ ンパクが提供される。 ＤＮＡ技術は、部分的には、複製起点、１またはそれを超える表現型選択特性、 発現プロモーター、異種遺伝子インサートおよび残りのベクターのＤＮＡ組換え によって複製可能な発現ビーイクルを作ることを含む。得られた発現ビーイクル は、形質転換および該形質転換体を増殖させることによって得られる大量の組換 えビーイクルにより細胞に導入される。暗号化されたＤＮＡ情報の転写および翻 訳を支配する部分に対して当該遺伝子が適当に挿入されると、当該発現ビーイク ルは、挿入された遺伝子がコードするポリペプチド配列を産生じ得る。該ポリペ プチドを産生ずるこのプロセスは「発現Ｊと呼ばれる。得られる産物は宿主細胞 を溶解し、次いで適当な精製法によって産物を回収することによって得られる。 原核生物および真核生物を含めた広範囲な宿主細胞を用いることができる。微生 物に加え、を椎動物または無を椎動物を問わず、多細胞生物からの細胞の培養も また宿主として使用することができる。 ｃ、ｉｓ 本開示で用いるごとく、以下の用語は続く定義との関係で理解されたい。 アジュバント：抗原に対する免疫応答を非特異的に増強させる物質。アジュバン トは通常抗原と共に投与されるが、抗原の前または後に与えることもできる。 本発明で開示するアジュバントはミョウバン、フロイントのもの、ＭＴＰ−ＰＥ 。 Ｉ　Ｓ　ＣＯＭ、　Ｑｕｉｌ＾およびリポソームを包含するが、それらに限定さ れるものではない。 ミョウバンご綿状アルミニウム塩に吸収させた抗原。ミョウバンはヒトに使用す るためにＦＤＡによって現在認可されている唯一のアジュバントである。 発現ベクター二より多くの物質または糖タンパクもしくはタンパクの産物を生産 する目的で挿入された外来性（異種’）ＤＮＡを担持するのに用いるビーイクル 。 「発現ベクターＪｌｔ、それが含有するＤＮＡ配列を発現することができるベク ターを包含し、かかる配列はその発現を行うことができる他の配列に作動可能に 連結している。当該配列に割り当てられた特定のＤＮＡ暗号を発現できるいずれ のＤＮＡ配列も当該特定の配列に適用されるごとくこの用語に包含される。一般 に、組換えＤＮＡ技術で利用される発現ベクターはしばしばプラスミドの形態で ある。 しかしながら、本発明では、同等の機能を供し、実質的に当該分野で公知となっ ている他の形態の発現ベクターも包含させる意図である。 フロイントのもの：油中水型エマルジョン。殺したマイロバクテリアの存在また は不存在に応じて、２種のフロイントのアジュバントがある。完全フロインドア ジュバントはマイコバクテリウム・チューバークロンス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ ｉｕ膳ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、または他のマイコバクテリウム株を含有す る。弱い抗原は、完全フロインドアジュバントに一体化させると免疫原性とされ 得る。不完全フロインドアジュバントはマイコバクテリウムを欠き、刺激が弱い 。 糖タンパク：蛋白を炭水化物と組み合わせた化合物のクラス。 ＭＴＰ−ＰＥ：ムラミルトリペプチドホスファチジルエタノールアミン、チバ（ ＣＩ　ＢＡ）によって開発され、カイロン（Ｃｈｉｒｏｎ）によって精製された 新しい特性のアジュバント。それは優れており、フロイントのものの十分に許容 される誘導体であり、ミョウバンよりもかなり効果的であることが判明している 。 イスコム（Ｑｕｉｌ＾）：強力なアジュバント活性を呈するハニカム様構造を形 成するための精製タンパクおよびグリコンドＱｕｉｌ＾よりなる免疫刺激複合体 。 免疫療法＝１種またはそれを超える抗原を一体化させる種々のアジュバントのい ずれかの１種またはそれを超えるものによる免疫応答の増強。 リポソーム・１またはそれを超える水性区画を囲むリン脂質二層よりなる合成脂 質粒子。抗原を免疫応答誘導のために該リポソームに埋め込むことができる。 プラスミド：ベクター形態の、染色体に結合していない環状二本鎖ＤＮＡ０プロ モーター　転写を開始させるためのＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するＤＮＡ の領域。 ワクチン　活性な免疫を生じる組成物。ワクチンは、１種またはそれを超えるア ジュバントを含むかまたは含まない、接種形態の抗原を含有する微生物からの物 質よりなる。該物質は微生物からの抗原決定基および／またはサブユニットから なるものでよく、糖タンパクまたはタンパクの形態とすることができる。 予防ワクチン：初感染を防止または緩和し、潜伏感染の確立を妨げるために抗原 未接触の個体に与えられる活性免疫誘導組成物。 治療ワクチン：再発を減少または最小化させるために潜伏または再発感染をもつ 個体に与えられる活性免疫誘導組成物。 全身ワクチン：いずれの１の個体領域からも区別される、全個体に関する活性免 疫を誘導するための組成物。 局所ワクチン：全個体から区別される、１の個体領域に関する活性免疫を誘導す るための組成物。 ■１発明の概要 本発明の目的は、組換えＤＮＡ技術によって、ＨＳＶ−１および／またはＨＳＶ −２感染から保護するためのワクチンにおける免疫源として使用できる、ｇＤ− 関連、ｇＢ−関連またはＶｍｗ６５−関連タンパクを含むがそれらに限定される ことのないＨＳＶ１１タンパクまたは非糖タンパクポリペプチドを生産すること にある。遺伝子工学による免疫源から作製したワクチンは、弱毒化ウィルスから 作製した通常のワクチンよりも安全であるはずである。何故ならば、受容者に対 して感染の危険がないからであり、また、特にヘルペスウィルスに関しては、頭 痛の危険がないはずだからである。また、遺伝子工学による糖タンパクまたはタ ンパクの産物は、受動免疫療法で用いるための抗体を生産するのに使用できる。 従って、単細胞宿主生物でＨ８Ｖ糖タンパクまたは非糖タンパク遺伝子をクロー ニングおよび発現する方法およびそのための組成物を提供する。しかしながら、 本発明は、ＣＨＯおよびＶｅｒｏ細胞系を含むがそれらに限定されることのない 、適合ベクターを複製および発現できるいずれの細胞系でも実施できる。本発明 は、また、本明細書中に記載するのと同等に機能する発現ベクターを包含させる 意図であり、これは本出願により当該分野で公知となる。また、Ｈ３Ｖ遺伝子産 物を生産するためのこれらの新規な単細胞生物の培養方法および該遺伝子産物の 精製法も記載する。 次いで、ヒト宿主を、好ましくは、全身経路、腸経路または眼経路によって、本 発明の１種またはこれを超えるＨ３Ｖ糖タンパクまたはタンパクの免疫誘導用量 よりなるワクチンで接種する。眼経路によって投与する場合、ワクチンは単独で 、または全身および／または腸ワクチン接種と組み合わせて投与することができ る。また、ワクチンは、ワクチンの糖タンパク成分と共に、その前に、またはそ の後に投与する、１種またはそれを超えるアジュバントより得る。典型的には、 各約１０〜１０００μｇの間の１回または数回の接種がヒト宿主の免疫化を行う のに十分である。 本発明のワクチンは、便宜には、プロセスの間に糖タンパクまたはタンパクを保 護するために、１種またはそれを超える適当な保存剤および保護剤と組合せ、液 体形態、フリーズドライ形態、噴霧乾燥形態または凍結乾燥形態で利用できる。 Ａ、抗原 主題の免疫療法よりなるＨ８Ｖ−１糖タンパクは、ｇＢ、ｇＣ，ｇＤ％ｇＥ１ｇ Ｇ、ｇＨ，ｇＫ、ｇＬ、ｇＩ、Ｖｍｗ６５、ＩＣＰＯおよびＩＣＰ４を包含する が、それらに限定されるものではない。Ｈ５Ｖ−１糖タンパクは天然、精製した 天然、組換えおよび／または合成のものであってもよい。組換え糖タンパクは、 後記する手法、あるいは同等の手法によって得られる。ワクチンは接種当たり１ ０〜１０００μｇの用量の１種またはそれを超えるこれらの糖タンパクよりなる 得る。 Ｂ、アジュバント しばしば、ワクチンは種々のアジュバント共にエマルジョンにて投与することが できる。アジュバントは、免疫源単独で投与するよりも少ない用量にて、より耐 久性で、高レベルの免疫を獲得するのを助ける。本発明で用いるアジュバントは ミョウバン、フロイントのもの、ＭＴＰ−ＰＥおよびＩ　Ｓ　ＣＯＭ　（Ｑｕｉ ｌ　Ａ）を包含するが、それらに限定されるものではない。加えて、ワクチンは 、細胞媒介免疫応答を誘導するための、１種またはそれを超えるアジュバントと 共にまたはそれな（して投与される１種またはそれを超えるＨ５Ｖ−１糖タンパ クよりなるリポソームまたは他の膜結合粒子からなり得る。 Ｃ８免疫化経路 眼経路は接種の好ましい経路であるが、好ましい接種経路としてのこの指定は、 いずれかの他の投与経路を排除する意図のものではない。ワクチンは、単独で、 あるいは全身（筋肉内または皮下）および腸ワクチン接種と組み合わせて、眼経 路によって投与することができる。該眼経路は、結膜下注射、表面点眼、コラー ゲンシールドのごとき徐放装置、ヒドロゲルのコンタクトレンズまたはアルザ（ ＡＬＺＡ）の「オキュサート（Ｏｃｕｓｅｒｔ）Ｊを包含するが、それらに限定 されるものではない。 結膜下ワクチン接種は、０．２〜９．５ｍｌの注射に先立って麻酔用のブロバラ 力インを用い、１０〜１０００μｇ／接種の用量にて行い、インスリンシリンジ および小ゲージ針で投与する。注射は、ワクチン物質が結膜下に止まり、漏出し ないことを保証するために下方結膜嚢に投与する。 表面点眼ワクチン接種は、アジュバントと共にまたはそれな（して発現糖タンパ クの５０μｌを結膜盲嚢に入れ、次いで、閉じた状態で眼を３０秒間軽く擦るこ とを含む。発現された糖タンパクは素早くクリアランスされるので、該手順は５ 日間、１日当たり４回繰り返して、暴露を延長させるべきであり、それらのすべ ては単一のワクチン接種よりなる。良好な保持のために、コラーゲンまたは他の 装置を用いて涙排液管を一時的にブロックさせることができる。 また、コラーゲンシールドは、糖タンパクおよびアジュバントを含有する濃厚溶 液に浸漬し、次いで、コンタクトレンズと同様に眼に入れることができる。次い で、医療グレードのシアノアクリレート接着剤を外部適用して瞼を数日間閉じ、 その間に、抗原が継続的に放出される。別法として、糖タンパクはマイクロカプ セルにカプセル化し、次いで、眼に植え込んで、継続的な抗原放出を容易とする ことができる。 Ｃ１糖タンパクの発現系 同−超厚のＨ５Ｖ〜１糖タンパクを一貫して高レベルで発現させることは、ヒト Ｈ８Ｖワクチンを開発する上で重要な因子である。最近までは、発現ベクターや 、発現された種々のＨ３Ｖ−１糖タンパクのウィルス源が多様であり、発現され た糖タンパク間での有意な比較が困難であることから、研究が妨げられてきた。 このような問題点を解消するために、本発明者らは、以下の第Ｖ節で詳述するよ うに、１つのウィルス株に由来する７種類のＨ５Ｖ−１糖タンパクを、単一のベ クター系において個別に高レベルで発現させた。 以下に記載の実施例では、バキュロウィルス、多角体プロモーター系および宿主 である昆虫細胞を使用することについて述べる。しかしながら、同様の手法を用 いて、別の宿主細胞の培養物中で所望の糖タンパクおよびタンパク産物を発現さ せるための発現ベクターを構築することは、当然、当該分野の技術範囲内にある 。 Ｄ、試験モデル ヒト眼球Ｈ５Ｖワクチンを開発するのに重要な手段は、使用される試験動物モデ ルである。我々の試験系はウサギの眼であるが、それは、ウサギの眼におけるＨ ３Ｖ感染がヒトの眼の場合と非常によく類似したことを引き起こすからである。 例えば、眼の疾患の重篤度が類似しており、潜在性が同様に確立され、自発的な 再活性化がヒトの場合とほとんど同様に起こる。 本発明は、一般的には、ヒト宿主におけるＨ５Ｖ感染を治療するための免疫療法 に関する。また、本発明は、１つのウィルス株に由来する高品質の生物活性なＨ ８Ｖ−１糖タンパクまたはタンパクを、単一のベクター系において高レベルで発 現させることに関する。 本発明のある態様は、自発的なＨ３Ｖ−１放出を低減させ、Ｈ８Ｖ−１初感染の 発生率を減少させるために、１種またはそれ以上のＨ３■−１糖タンパクまたは タンパクを含有する全身性ワクチンに関する。本発明の別の態様は、眼球におけ る自発的なＨ３Ｖ−１放出を低減させ、それによって再発性の角膜疾患を制御す るために、１種またはそれ以上のＨ８Ｖ−１糖タンパクまたはタンパクを含有す る局所的な眼球治療用ワクチンに関する。本発明の別の態様は、Ｈ８■−１初感 染の発生率を減少させるために、１種またはそれ以上のＨ５Ｖ−１糖タンパクま たはタンパクを含有する局所的な眼球予防用ワクチンに関する。 従って、本発明の一般的な目的は、宿主のＨ５Ｖを治療するための効果的な免疫 療法を開発することである。 本発明のある目的は、ヒト宿主のＨ８Ｖを治療または予防するための効果的な全 身性免疫療法を開発することである。 本発明のある目的は、ヒト宿主の眼球ＨＳＶを治療するための効果的な局所的免 疫療法を開発することである。 また、本発明のある目的は、ヒト宿主の眼球における自発的なＨ３Ｖ−１放出を 低減させ、かつ、再発性の疾患を制御するための局所的な眼球治療用ワクチンを 開発することである。 さらに、本発明のある目的は、ヒト宿主のＨ８ｖ−１初感染の発生率を減少させ るための局所的な眼球予防用ワクチンを開発することである。 さらにまた、本発明のある目的は、ヒトの目におけるＨ３Ｖ感染をよく疑似化す る動物試験モデルを利用することである。 本発明の別の目的は、１つのウィルス株に由来する７種類のＨ３Ｖ−１糖タンパ クを、単一のベクター系において個別に高レベルで発現させることに関する。 これらの目的および他の目的は、以下の説明および添付の請求の範囲から、当業 者に対して容易に明らかとなる。 ４、

【図面の簡単な説明】

本発明を以下の図面について説明する。ここで、図１は、本発明の組換え型ウィ ルス株の一例を確立するのに用いられるプラスミドｐＡＣ−ｇＤ１の構築を示す 概略図である。 図２は、昆虫細胞においてＨ８Ｖ−１糖タンパクを発現する１１種類の組換え型 バキュロウィルスのウェスタンプロット分析である。レーンＭは分子量マーカー を示す。 図３は、組換え型バキュロウィルスＤＮＡのサザンプロット分析である。ａ。 臭化エチジウム染色ゲル；ｂ、オートラジオグラム、Ｍ、マーカー（ＩＫｂ）： Ｐ、プラスミド−ＢａｍＨＩ切断ｐＡｃ−ｇＤｌ）ランスファーベクター；Ｂ、 バキュロウィルス組換え型ＢａｍＨＩ切断ＤＮＡ０矢印は、初期ベクター由来の ＢａｍＨＩ切断ｇＤ構造遺伝子（ｐＡｃ−ｇＤｌ）および組換え型バキュロウィ ルス由来のＢａｍＨＩ放出ｇＤ構造遺伝子（ｖＡｃ−ｇＤｌ）の位置を示す。 図４は、５ＤＳ−ＰＡＧＥに供した組換え型バキュロウィルス感染細胞抽出物の クーマン−ブルー染色である。Ｍ１分子量マーカー：Ｂ　野生型バキュロウィル ス感染細胞；　ｇＤ、ｖＡｃ−ｇＤｌ。右側の矢印は、ｇＤにおける主要なグリ コリル化ｇＤバンドおよびＢで目視される野生型多角体タンパクの位置を示す。 図５は、バキュロウィルス発現ｇＤのグリコジル化のウェスタンプロット分析で ある。Ｍ４４分子量マーカー１．感染多重度（Ｍｏｌ）１０で、２４時間、Ｈｓ ｖ−１に感染させたｖｅｒｏ細胞；２．４８時間後のｖＡｃ−ｇＤｌ感染細胞： ３゜７２時間後のｖＡｃ−ｇＤ１感染細胞：４．ツニカマイシン処理したｖＡｃ −ｇＤ１感染細胞：５．エンド−Ｈ処理したＶＡＣ−ｇＤｌ感染細胞；６．エン ド−Ｆ処理したｖＡｃ−ｇＤ１感染細胞。 図６は、組換え型バキュロウィルス感染細胞の免疫蛍光を示す。８１組換え型ｖ Ａｃ−ｇＤ１感染細胞、表面蛍光：ｃ、野生型バキュロウィルス感染細胞、全蛍 光。 ■　発明の詳細な説明 本発明では、Ｈ８Ｖ−１糖タンパク、タンパクまたはその一部をコードするＤＮ Ａ配列を、組換えＤＮＡ技術を利用してＤＮＡベクターに挿入するので、該ベク ターは、該糖タンパクまたはタンパクの遺伝子を、外来宿主において複製し、か つ、発現へ向けさせることができる。得られた組換え型ＤＮＡ分子を昆虫細胞に 導入すれば、この宿主細胞が糖タンパクまたはタンパクあるいはその一部または 分子変種を高レベルで生産することが可能になる。次いで、生産された糖タンパ クまたはタンパクを単離・精製し、１型および２型の両Ｈ８Ｖに対する免疫療法 に使用する。 Ａ、Ｈ５Ｖ−１糖タンパクの調製 他の手法を利用してもよいことや、本発明の範囲から逸脱することなく変形をな し得ることは、叩解されるべきである。従って、以下の詳細な説明は、本発明を 限定する意味に取るべきではなく、本発明の範囲は、添付の請求の範囲によって 最もよく定義される。 ｌ、Ｈ８Ｖ−１ｇＤのバキュロウィルス発現完全な単純ヘルペスウィルス１型（ Ｈ５Ｖ−１）糖タンパクＤ　（ｇＤ）をコードするＤＮＡ配列は、バキュロウィ ルス・オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ　ｃａｌｉｆｏ ｒｎｉｃａ）核多角体病ウィルス（ＡｃＮＰＶ）の多角体遺伝子プロモーターの 制御下にあるバキュロウィルス・トランスファーベクターに挿入された。スポド ブテラ・フルギペルダ（Ｓ　ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（Ｓ 　ｆ　９　）昆虫細胞を、野生型ＡｃＮＰＶ　ＤＮＡおよび組換え型トランスフ ァーベクターＤＮＡで同時にトランスフェクションした後、高レベルのＨ３Ｖ− １ｇＤを発現した多角体陰性の組換え体を、抗体被覆磁性粒子を用いた免疫アフ ィニティーによる選別によりて単離し、そしてプラーク精製した。これらの組換 え型バキュロウィルスは、Ｖｅｒｏ細胞において生産されたピリオンＨ５Ｖ−１ ｇＤに比べてわずかに小さいタンパクを発現した。Ｈ８Ｖ−１ｇＤ組換え型タン パクは、高レベルで発現され、グリコジル化され、Ｓｆ９細胞の膜上に見い出さ れ、ｇＤ特異的な抗体と反応した。以下、その手法について詳述する（１２）。 イルス（ＡｃＮＰＶ）（バキュロウィルス）のＥ２株およびスボドブテラ・フル ギベルダ（Ｓ　ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）クローン９（ＳＦ ３）昆虫細胞は、マックス・サマーズ（Ｍａｘ　Ｓｕｍｍｅｒｓ）博±［テキサ ス、エイ・アンド・エム（Ｔｅｘａｓ　Ａ＆Ｍ）］から贈られたちのあった。昆 虫細胞は、１０％ウシ胎児血清を含むＴＮＭ−ＦＨ培地（１３）中で増殖させた 。野生型および組換え型のバキュロウィルスは、サマーズ（Ｓ　ｕｍｍｅｒｓ） およびスミス（Ｓｗｉｔｈ）の手法（１３）に従って増殖させた。プラーク精製 したＨ８Ｖ−１（マックラエ（ＭｃＫｒａｅ）株およびＫ２Ｓ株）およびＶｅｒ ｏ細胞は、以前に報告された標準的な手法（１４）を用いて、増殖させた。 プラスミドｐｓｓ１７　（Ｈ８Ｖ−１のＫ２Ｓ株、ディー・シー・ジョンソン（ Ｄ、　Ｃ，Ｊ　ｏｈｎｓｏｎ）、オンラジオ、カナダ）は、Ａｆｌｌｌ／Ｍａｅ Ｉで２回切断し、ｇＤの完全暗号領域を含む１．２ｋｂ断片を単離し、ｐＧＥＭ ３のＨｉｎｃＩＩ部位に下情末端化した（図１を参照）。この構築物を）−１ｉ ｎｄｌ［［で線状化し、Ｂａ１３］エキソヌクレアーゼを用いてわずかに切断し て、暗号配列の最初のＡＴＧから−Ｌ浦にある所望でないヌク１ノオ千ドを除去 し、ＢａｍＨＩリンカ−を添加した１、得られた断片を川離し、多角体構造遺伝 子に代えて、（強い多角体遺伝子プロモーター・の制御下にある）ベクターｐＡ ｃＹＭ１　（１５）の単一のＢａｍＨＩ部位に結合させた。、部分的な１２列分 析によると、クローン化ｇＤは、５°末端に、６個のヌク１ノオ千ドからなる短 い非暗号領域を有している。３゛末端の終止コドレ・（ＴＡＧ）の後には、ＨＳ 　Ｖ非暗号配列は存在しない。 ｉ　組換摩７−ｙ（ヌル漫−別−男ｐ舛−算一掠チΩ分−１０ｍ１の磁性ヤギ− 抗つザギＩｇＧ（アドバンスト・マグネティクス・インタ（２八ｒｌｖａｎＣｒ ｄ　Ｍａｇｎｅｔｉｅｓ　Ｉｎｃ、）、ケンブリッジ、マサチ、−セッ′ン）を 、７５ｍ１の組織培養フラスコに移１．．５た１、（製造業者から供給された） 大きい磁石を、フラスー】の一方の平たい表面−ヒに置き、磁性ヤギ抗ウサギＩ ｇＧを引き寄せて保持し、七澄み液を傾瀉して捨てた。磁性材料を結合緩衝液（ １００ｍＭ　ＰＢＳｐＨ７，４，０１％ＢＳＡ、０．１％脱脂粉乳、および１ｍ ｇ／ｍｌ　ＡｅＮＰＶ全タシパク抽出物）で洗浄した後、９ｍｌの結合緩衝液中 のｇＤポリクローナル抗体（，４０１Ｉｇ）の１ｍｌを、バイオマグ（ＢｉｏＭ ａｇＸ磁性ヤギ−ウサギＩｇＧ）に添加しまた１、二の混合物を４℃で一晩撹拌 し、次いで、磁気的に分離した。 結合緩衝液で２回続けて洗浄し、ＴＮＭ−Ｆ）（で２回洗浄した後、バイオマグ −ｇＤ抗体複合体を、１０ｍ１のＴＮＭ−ＦＨ中に再懸濁し、４℃で保存した。 Ｎ　組換オ型ウィルスのトランスフェクションおよび選別Ｓｆ９細胞を、実質的 に報告（１３）と同様にして、精製した感染性ＡｃＮＰＶＤＮＡおよびｐＡｃ− ｇＤ１プラスミドＤＮＡで同時にトランスフェクションレこ、２８°Ｃで７１日 間インキュベーションし、ＣＰＥ力咄現した後、感染細胞を免疫アフィニティー による選別によってスクリーニングした。細胞ベレットを採取し、１ｍｌの抗ｇ Ｄ抗体被覆磁性粒子および１ｍｌの培地と共に、水上で６０分間インキュベーシ ョンした。細胞懸濁液を磁気的に分離し、新鮮な培地を磁気的に採集した細胞に 添加し、選別（洗浄）を室温で５回繰り返した。選別された材料を用いて、密集 した単層のＳｆ９細胞を感染させた。バイアルで増殖させた後、上澄み液を密集 した単層のＳｆ９細胞上に滴下した。透過型光顕微鏡で観察して閉塞体（ウィル ス多角体）が見られないプラークを回収し、Ｓｆ９細胞上に再滴下して、組換え 型の多角体−陰性ウィルスを得た。第３のプラークを選び取ることによって、高 力価（１０７〜１０’ＰＦＵ／ｍｌ）の組換え型ウィルスを得Ｓｆ９細胞を、ｌ ０ＰＦＵ／細胞の多重度にて組換え型ウィルスで感染させ、２８℃で２７時間イ ンキコベーンヨンした。感染細胞を凍結・解凍し、ｉｏｏ。 ×ｇで１０分間遠心分離して、細胞破砕物を除去した。ウィルス単離および（上 澄み液からの）ウィルスＤＮＡ抽出およびプロッティングに用いた手法は、以前 に報告されている（１６）。 ■、ウェスタンプロット ウェスタン免疫プロット分析は、変性条件下で実施した。５ＤＳ−ＰＡＧＥ用の 試料は、２％ＳＤＳおよび１０％２−メルカプトエタノールをを含む電気泳動試 料緩衝液中で破砕し、１００℃で３分間加熱した。タンパクを５ＤＳ−ＰＡＧＥ （１７）によって分離し、トウビン（Ｔｏｖｂｉｎ）らによって報告されている ように（１８）、電気泳動によってニトロセルロースペーパーに移した。移した 後、りし、次いで抗ｇＤポリクローナル抗体または全Ｈ５Ｖ−１抗体と４℃で１ 時間反応させた。プロットを１２５Ｉ−タンパクＡと２５℃で１時間反応させた 後、オートラジオグラフィーに供することによって結合した抗体を検出した。 複雑な糖がｇＤグリコシレーンヨンタンパクの一部として付加されるかどうかを 調べるために、エンドグリコンダーゼＨ（エンド−Ｈ）およびエントゲ１ノコシ ダーゼＦ（エンド−Ｆ）での処理を、溶解した感染細胞につき、製造業者（ベー ＋Ｊ　ンカ−−マンハイＬ　−ハイオケミカルズ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａ ｎｎｈｅｉｓ　Ｂｉｏｃｈｅｓｉｃａｉｓ））の説明に従って、実施した。エン ド−Ｈは高マンノース鎖を除去するのに対し、エンド−Ｆは高マンノース鎖およ びノ＼イブ１ルソド糖の両方を除去する。 蝋、ツニカマイシン処理 発現されたｇＤがＮ−グリコシレージョンを受けているかどうかを調べるために 、感染細胞の単層を、報告されているように（１９）、ＴＮＭ−ＦＨ培地中（こ おける４μｇ／ｍｌのツニカマイシン（アスノ（ラギン結合グリコシレージョン の阻害剤）で４８ｖｆ間処理した。 注、免疫蛍光法 Ｓｆ９細胞を、ｌ０ＰＦＵ／細胞の感染多重度で、野生型ＡｃＮＰＶまた（まｇ Ｄを発現する組換え型バキュロウィルスに感染させ、７２時間インキュベーショ ンさせた。全蛍光を見るために、細胞をＰＢＳで洗浄し、アセトンで固定イヒし 、（リチャードーエベール（Ｒｈｉｃｈａｒｄ　Ｅｂｅｒｌｅ）博士から提供さ 第１た）抗ｇＤポリクローナル抗体を添加し、３７℃で１時間インキュベーショ ンした。ある（旭（マ、細胞表面免疫蛍光を調べるために、固定化および透過化 されてＬ）なＬ）細胞をＰＢＳで洗浄し、抗体と共に４℃で１時間インキユベー ンコンした。洗浄後、スライドをアセトンで固定化した。次いで、全蛍光および 表面蛍光用のスライドをＰＢＳで洗浄し、フルオレセイン結合ヤギ抗つサギＩｇ Ｇ抗体で３７℃で１時間染色し、再びＰＢＳで洗浄し、蛍光を調べた。 Ｈ５Ｖ−１由来の完全なｇＤオーブンリーディングフレームを含むノ（キュロウ イルス・トランスファーベクターを構築する方法を図１１こ示す。ＢａｍＨＩ　 Ｊ断片に由来するｇＤ遺伝子の完全なりＮＡコピーを、Ａｆｌｎ／ＭａｅＩｌこ よる制限酵素切断によって単離した。大部分の５°非暗号配列は、Ｂａ１３１切 断によって除去した。次いで、得られたＤＮＡを、ｐＡｃＹＭｌのＢａｍＨＩ部 位に挿入した（図１）。制限酵素分析および部分的な配列決定によって確認した ところ、この構築物はｇＤ遺伝子の全配列を含んでいる。それは、最初のＡＴＧ の前方に、わずか６個のヌクレオチドからなる非暗号領域を有する。この後方に は、１１８２個のヌクレオチドからなる完全な暗号領域が続いている。ｇＤ遺伝 子をバキュロウィルスＡｃＮＰＶゲノム中に移入するために、Ｓｆ９細胞を、ｐ Ａｃ−ｇＤＩ　ＤＮＡおよび感染性ＡｃＮＰＶ　ＤＮＡで同時にトランスフェク ションさせた。推定の組換え型ウィルスを、免疫アフィニティー選別によって濃 縮した後、３サイクルの多角体−陰性プラーク精製を行った。この研究では、１ 通りの免疫選別によって、組換え型ウィルスを得る効率が数倍上昇し、その収率 は最初のプラーク精製サイクルでの８％より高かった。 ｂ、ウェスタンプロット分析 Ｓｆ９細胞の密集単層を、３回のプラーク精製の後で得られた１１種類の個々の 組換え型バキュロウィルスに、ｌ０ＰＦＵ／細胞の多重度で感染させ、全タンパ ク抽出物をウェスタンブロッティングで分析した。我々のｖＡｃ−ｇＤ１組換え 体は、全Ｈ５Ｖ−１ポリクローナル抗体（図２）およびｇＤポリクローナル抗体 （図５）の両方と反応する６つのタンパクバンドを生じた。見かけの分子量が４ ３ｋＤａのバンドは、予想分子量が４３，２９１．Ｄａである非グリコジル化さ れた一次ｇＤポリペプチドに相当する。２つの大きいバンド（５０ｋＤａおよび ５２ｋＤａ）は、このプロットでは分離されない非常に接近した二重物として移 動する。これら２つのバンドは、それぞれ部分的にグリコジル化された前駆体ｐ ｇＤおよび成熟ｇＤ　（２０，２１）を示すと思われる。 もっとも小さな３つのバンドは、見かけの分子量が、３３．２４、および２２ｋ Ｄａであった。同様のパターンのバンドが、免疫アフィニティーカラム（アフイ ーゲル（Ａｆｆｉ−Ｇｅｌ）　：バイオーラッド（Ｂ　１ｏ−Ｒａｄ））で（ｇ Ｄモノクローナル抗体　（ディー・ウィリー（Ｄ、Ｗｉｌｅｙ）博士から贈られ たもの）を用いて）精製したｇＤを用いて得られた。 組換え体に感染させた細胞の培地をウェスタンプロット分析したところ、ｇＤは 検出されなかった。このことは、発現されたｇＤが、Ｈ３Ｖ−１感染細胞を用い た場合のように、細胞内または細胞膜内に保持されており、培地には分泌されな いことを示唆する。 Ｃ，サザン・プロット分析 １１種の組換えウィルスの間に、発現レベルあるいはいかなるｇＤ関連バンドの サイズにおいても相違が見られないため、以下の研究のために１種の組換えウィ ルスを任意に選択し、ｖａｃ−ｇＤｌと命名した。ｖａｃ−ｇＤｌ中のＨ５Ｖ− １ｇＤ　ＤＮＡの全長にわたる存在を証明するために、バキュロウィルスＤＮＡ を制限酵素ＢａｍＨＩで消化し、ｇＤ遺伝子をプローブとしてサザン・プロット を行った（図３）。該ＤＮＡの臭化エチジウム染色（図３ａ）およびｇＤ特異的 プローブを用いたサザン・プロット分析（図３ｂ）双方に見られるように、ｇＤ 組換え体のＢａｍＨＩ消化は、期待されたサイズのバンド（約１．２　ｋ　ｂ） を生じた。これは、該発現ベクターにクローン化されたＨ５Ｖ−１ｇＤ遺伝子に 対応していた（図３）。 ｄ、５ＤＳ−ＰＡＧＥおよびクーマノ−ブルー染色による発現ｇＤの可視化野生 型バキュロウィルスおよびｖＡｃ−ｇＤ１組換えバキュロウィルスに感染した細 胞からの全細胞抽出物を５ＤＳ−ＰＡＧＥに流し、タンパクバンドをクーマン− ブルーで染色した。野生型バキュロウィルス感染細胞においては多角体タンパク のバンドが見られたが、ｖＡｃ−ｇＤ１感染細胞では消失している一方で、同程 度の強度の新たな大きなバンドがｖＡｃ−ｇＤ１感染細胞において見られた（図 ４、レーンｇＤ）。未感染細胞ではいずれのバンドも見られなかった。この新た な組換えバンドは、見掛は上約５０〜５２ｋＤａの分子量を有し、ウェスタン分 析で見られる密に重なった上方のバンドのサイズに対応しており（図２．５０〜 ５２ｋＤａのバンド）、この組換えバキュロウィルス中の王たる発現ｇＤ種であ ることを示した。 染色ゲルの可視化観察は、発現ｇＤ量が野生型バキュロウィルス感染細胞中の多 角体量と同様であることを示唆した（図４、レーンｇＤおよびＢにおけるＰとｇ Ｄを比較）。このことを確認し、ｇＤの相対的発現レベルをより正確に評価する ために、図４のクーマン−ブルー染色ゲルをレーザーデンシトメーターでスキャ ンした。ｇＤおよびｐｇＤを表している結合ピーク下面積は、野生型バキュロウ ィルス感染細胞中の多角体タンパクに関するピーク下面積と同様であった。さら なるゲルのスキャンにおいても同じ結果を得た。該多角体タンパクが全細胞タン パクの４０％にも達すると見積もられたので、この分析は、組換えｇＤが非常に 高レベルで発現されていることを示す（２２）。 ｅ、ｇＤのグリコル−ジョン 発現ｇＤがグリコシレージョンされていることを確認するために、ツニカマイノ ン処理を行い、感染５ｆ５９細胞におけるＮ−グリコシレージョンを防止した。 感染後、０〜４８時間に、感染細胞を、ｍｌ当たり４１１　ｇのツニカマイシン を含むＴＮＭ−ＦＨ培地で処理し、次いで、全細胞抽出物を、ポリクローナルな 抗−ｇＤ抗体を用いたウェスタンプロットにより分析した。ツニカマイノン処理 （図５、レーン４）は、対照に対する見掛けのｇＤのサイズを減少させた（レー ン２および３）。この結果は、天然ｇＤと同様、未処理の発現ｇＤがグリコシレ ージョンされ、Ｎ−結合糖鎖を有することを示す。 発現ｇＤが複合糖質を有するかどうかを決定するために、ｖＡｃ−ｇＤ１感染細 胞溶解物をエンドグリコシダーゼ−Ｈ（エンド−Ｈ１高マンノース型糖鎖を除去 ）または工：／ドグリコシダーゼーＦ（エンド−Ｆ１高マンノースおよび複合型 糖鎖を除去）で処理した。図５のレーン５に見られるように、ｇＤは部分的にエ ンド−Ｈによる消化に耐性を示した。対照的に、エンド−Ｆ消化は、ｇＤの見掛 けの分子量を約５４ｋＤａに減少させた（図５、レーン６）。よって、天然ｇＤ と同様、発現ｇＤは部分的にエンド−Ｈに耐性で、エンド−Ｆの作用を受ける。 それゆえ、天然ｇＤ同様、該組換えｇＤはグリコシレージョンされており、Ｎ− 結合複合型糖鎖を有する ｆ、昆虫細胞中の組換えｇＤの免疫蛍光発現ｇＤが細胞表面へ輸送されるかどう かを調べるために、ｖＡｃ−ｇＤ１感染Ｓｆ９細胞を、ポリクローナルなｇＤに 対する抗体を用いた間接免疫蛍光抗体染色により試験した。免疫蛍光はすみやか に組換え一感染細胞において観察されたく図６ａ）。ＡｃＮＰＶに感染した細胞 （図６ｃ）あるいは未感染Ｓｆ９細胞においては免疫蛍光は観察されなかった。 細胞表面上のｇＤに対する特異性を調べるために、固定（および透過性増加）前 の細胞について、間接免疫蛍光抗体染色を行った（図６ｂ）。ｖＡｃ−ｇＤ１感 染細胞の表面蛍光は、透過性の増大した固定された細胞について観察されるもの と比べて強力であった。このことは、発現ｇＤが正確に輸送され、細胞表面に定 着したことを示す。 糖タンパクｇＢ、ｇＣ，ｇＥ１ｇＧ、ｇＨおよびｇｌは同様にバキュロウィルス で発現される（２３１８）。すべ゛〔の場合において、天然糖タンパクと同様の サイズの蛋白の高レベル発現が観察された。すべての発現糖タンパクはグリコシ レーンコンされており、適当なモノクローナルまたはポリクローナルな抗血清と 反応し、正確に細胞表面に輸送された。 Ｂ接種 １、接種試験の概略 ウサギ　ニューシーラント白色種（ＮＺＷ）オスのウサギ（それぞれ約２ｋｇ） をすべての試験に用いた。上記のごとく、これらの動物は、ヒトの角膜炎に似た １次または再発性の眼球ヘルペス症を発生させる。 ウィルスおよび接種　Ｈ５Ｖ−１株を生じる高度に病原性のある間質疾患と、非 常に高度な自発的再活性化速度を有するマククレイ（ＭｃＫｒａｅ）を潜伏期の 確立に用いた。ＲＥ株またはＷ株をいくつかの実験に用い、結果が株特異的でな いことを確認した。 ０日目：潜伏期確立のための眼球感染　ウサギの両眼に２Ｘ１０５ＰＦＵ　（マ ククレイ株）をその結膜嚢中に入れ、３０秒秒間中かに擦る。このウィルス投与 量で約３０％のウサギが死亡する。この量は、すべての生存動物が潜在的に両眼 に感染されているようになる（本当に両方の三叉神経節に）最小量である。ワク チン実験のためにはウサギを犠牲にすることなしにこの時点で潜伏性を判断する ことはできないが、さらなる実験は、実質的にすべての三叉神経節がこれらの条 件下でＨ８Ｖ−１潜伏性を有することを示す。ワクチン試験の最後に、自発的あ るいは誘導による再活性化を示さないそれらの眼由来の三叉神経節を除去し、潜 伏性が確立されたことを確認するために行う同時培養に移される。本実験におい て、この株および投与の組み合わせは、最も多数の既知の潜在的に感染しており 自発的に再活性化する眼を与え（与えられた数のウサギで試験を開始）、よって 、可能な限り少数のウサギを用いることができる。この方法により、多くとも１ ％のウサギが両眼とも見えなくなる（これらのウサギをすぐに処分する）。 インスリン注入用注射筒および小ゲージ針により０．２〜０．５ｍｌのワクチン を結膜下注入する前にブロバラ力インで局部麻酔して、結膜上接種を行う。ワク チン物質が結膜下に止まり、漏出しないように上部または下部結膜嚢いずれかに 注入する。 腸内接種を、ウサギの喉から強制的に飲ませることにより行う。表面点眼および コラーゲンシールドによる接種は上記のごとくである。 糖タンパクの精製　凍結融解または界面活性剤により破壊した細胞抽出物を遠心 分離し、次いで、共有結合させたＨ３Ｖ−１抗体を付けたカラムによる免疫アフ ィニティーにより糖タンパクを精製する。 Ｑｕｉｌ−＾を伴うイスコム（ＩＳＣＯＭ）を、文献（２９，３０）に記載のよ うにして調製する。 ２１日目・すべての生存動物に潜在性が確立されたとみなされる（議論のために 以下の個々の方法参照）。ウサギを任意に試験および対照群に分け、眼に接種す る。 ３５日目：接種を繰り返す。 ４９〜１１８日目、涙の層を１週間に５日、１日１回集め、Ｈ５Ｖ再活性化を示 す自発的放出を探す。 ４９〜１１８日目・細隙灯生態顕微鏡により１週間に３回、眼を調べ、直接的に 上部角膜炎、間質疾患および搬痕をモニターする。 眼のパラメーター　眼の疾患の重篤性を、１％メチレンブルーを用いて、細隙灯 生体顕微鏡により調べることにより、マスクしたやり方で０から４のスコアをつ け、上皮潰瘍を描写する。虹彩炎および間質角膜炎も０から４のスコアを付ける 。 インビボ再活性化を、６−ヒドロキシドーパミン、ついでエピネフリンによるイ オン導入法により行う（３１）。 血液および涙の試料を、最初の感染の前（１日目）、接種前（２０および３４日 目）、２回目の接種２週間後（４９日目）および試験終了時（１１８日目）の免 疫学的分析用に採取する。 インビボ再活性化　三叉神経節の同時培養を以前記載されたようにして行う（３ ２）。血清中和抗体力価測定を、プラーク減少分析（３３）により行う。 局部的な眼のｓｌｇＡおよびｓ１ｇＧ力価測定を、ｓＩｇＡおよびＩｇＧに特異 的なウサギ（ヒトよりもむしろ）・Ｈ５Ｖ−１（Ｈ５Ｖ−２よりもむしろ）を検 出するための調節を行うことにより、ｒｓｎｏ断片Ｊ　（３４）上に集めた涙を 用いて、ヒト・ｓ１ｇＡ頚部ＨＳ　Ｖ　−２に関して行う。ＩｇＧおよびＩｇＡ 中和力任とＥＬＩ　ＳＡとの関係付けを行う。 全身的なＩｇＡおよびＩｇＧ力価測定を、ＥＬＩＳＡにより血清を用いて行う（ ３５）。 リンパ球増殖応答を、ＨＳ　Ｖ蛋白で刺激されて増殖するＴ細胞をチェックする ことによりモニターする（３６）。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、潜在的に感 染した、潜在的に感染し免疫された、および対照のウサギから、防腐剤不用のヘ パリン化シリンン中に静脈より採血し、次いで、フィコール−ハイバック（Ｆｉ ｉｃａｌ　１−ｈｙｐａｑυｅ）遠心分離により精製することにより集める。Ｐ ＢＭＣを再懸濁し、１５％熱−不活性化ウシ胎児血清および抗生物質（ＲＰＭＩ −１５％）を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中に２．５Ｘ１０’細胞／ｍ＋の 濃度とする。２００μｌのＰＢＭＣ（５Ｘ１０’）を、それぞれ４つの丸底マイ クロタイタープレートウェルに添加し、ついで、１００μｌの発現Ｈ３Ｖ−１糖 タンパクの１．０または５５−０ｕ／ｍｌ溶液、１００μｌのＵＶ光線不活化Ｈ ５Ｖ−１（ＵＶ照射前１０’ＰＦＵ／ｍｌ）　、または対照として１００μｌの ＲＰＭＩ−１５％ＰＢＳを添加する。刺激を始めてから７日後、１μＣｉの［” Ｈ］チミジン（［’Ｈ］　ＴｄＲ，マサチューセッツ州ボストンのＮＥＮ社製） を、３７℃でのインキュベーンコンの最後の６時間にわたり添加する。ついで、 細胞をマルチプル・ウェル収穫装置にて収穫し、［”Ｈ］ＴｄＲの取り込みを液 体シンチレーションカウントにより測定する。 治療的有効性を、眼からの放出、再発性上皮角膜炎、再発性間質角膜炎および虹 彩炎を、接種擬制した対照と比較することにより調べる。すべての動物実験およ び分析は、先入観を除去するためにマスクして行う。 ２・叩 すべてのワクチン試験を、接種擬制した対照に対し、眼からの流出量、再発性間 質疾患量および免疫応答レベルに関して比較して行った。 ３、角膜損傷の確実な予測としての自発的な眼からの流出通常は、角膜上皮損傷 および間質廠痕が起こる前に検出可能なレベルの眼のＨ８■放出が見られる。こ のことより、放出は、はぼ確実に再発性上皮および間質角膜炎に必ず起こる。あ らゆる点を考慮すると、放出の減少、すなわち培養により検出できる涙の中の感 染性ウィルスの減少は角膜疾患の減少を示す。それゆえ、眼からの放出を、１週 間に５日、１日１回、両目から涙の層を集め、それらを感染性ウィルスについて ４９日目（最初の接種から２週間後）から１１８日目にかけて培養することによ り測定する。 ４、誘導された眼からの放出 誘導された目からの流出を、先に文献に記載されたように６−ヒドロキジドーバ ミン、ついで、局所的なエピネフリンによるイオン導入により行う。 ５．ワクチンの選択 ７種のＨＳＶ−１糖タンパクまたはタンパクの種々の組み合わせおよび順番を作 り、用いることができる。これらの組み合わせには、ＨＳＶ−１ｇＤおよびｇＢ 、７種すべての等モルのＨＳＶ−１糖タンパクの組み合わせ、ならびに７種のＨ ＳＶ−１糖タンパクのうち１種またはそれ以上およびタンパクのいかなる組み合 わせも包含される。 ６、アジュバント ＭＴＰ−ＴＥが、結膜上接種のために選択されたアジュバントである。ＭＴＰ− ＴＥをＨＳＶ−１糖タンパク単独とともに、または他のアジュバントとともに投 与する。１種またはそれ以上のＨＳＶ−１糖タンパクあるいはタンパクと組み合 わせてリポソーム中に封入してもよい。しかしながら、既知あるいはまだ発見さ れていない他のアジュバントも好ましいアジュバントとしてＭＴＰ−ＴＨの開示 によって除外されない。 全身的接種、すなわち筋肉内（ＩＭ）または皮下（Ｓ　Ｃ）接種には、最も強力 なアジュバントを用いる。これらには、アラム（ミョウバン）、フロイントの完 全アジュバント、フロイントの不完全アジュバント、ＭＴＰ−ＴＥ、Ｉ　ＳＣＯ Ｍ（Ｑｕｉｌ　Ａ）およびこれらのいかなる組み合わせも包含されるがこれらに 限定されない。 実施例Ｉ ＨＳＶ−２ｇＢ−ｇＤによる全身治療的接種方法 培養試験したＨＳＶ−１マククレイ株で両眼を感染させた３６匹のＮＺＷウサギ に、感染後２１および３９日後、ＭＴＰ−ＴＥアジュバントを伴ったカイロン（ Ｃｈｉｒｏ口）ｇＢ２およびｇＤ２を皮下接種（０，５ｍ１）した。組織培養培 地を与えられた接種擬制群も同一のスケジュールで行った。２回目の接種後３週 間目から始めて３６日間、毎日（１週間に７日）綿棒培養物を取った。すべての 陽性培養物を中和により確認した。ＥＬＩＳＡ力価測定（Ａｇ捕獲、精製ＫＯ３ ）を、２回目の接種後５週間目に取った血液試料により行った（血清を１／２１ ｏｇずつ１／１００から１／３００，０００まで希釈）。１週間に５日、細隙灯 生体顕微鏡観察を同−期間中行った。 結果 表１．自発的な眼からの放出および全身的接種により樹状突起形成可能性のある 眼 ワクチンおよびアジュバント　珠震嬰μ１１噺　営ヤ！し７１ｅ≧　天竺ｉ　％ ｇ！　！μｍ１く晧　諭ｈイロン　皮下　１９／３８　１２４／１３６６　９． ６％　１１２／１１４０　１．９３％１１ＴＰ−ＴＥを伴った ｇＢ２＋ｇＤ２ 接ＩＩｍ　皮下　１７／３４　１５１／１２２４　１２．３４％　１９／１０２ ０　１．６６％アジゴバノトなし ＃３８日間連続して培養されたすべての眼について＃＃３０日間（１週間に５日 ）の細隙灯生体顕微鏡観察表１に示したように、接種擬制群とカイロン接種群の 間で、可能性のある培養物の数または樹状突起のある眼の数に有意な相違は見ら れない。また、（１）１回または多数回の再発を伴う眼の数；　（２）１回また は多数回の再発を伴うウサギの数：　（３）放出が起こる期間の平均；　（４） 角膜炎の重篤性；または（５）低度に再発した動物に対する高度に再発した動物 におけるＨＳＶ−１のＥＬＩＳＡ力価、には相違がないが、カイロン群の平均力 価は、僅かに接種擬制群よりも高かった。長期の廠痕にも相違がなく、眼に対す る毒性の兆候も見られなかった。 ＭＴＰ−ＴＥを伴うｇＢ２＋ｇＤ２による全身的接種による放出または樹状突起 角膜炎の増加は見られなかったが、同じ全身的接種による同じパラメーターにお いては、いずれも減少は見られなかった。従って、全身的接種はＨＳＶ−１回発 から十分な眼の保護ができなかった。 実施例２ ＨＳＶ−１ｇＤによる全身的接種 方送 ＨＳＶ−１糖タンパクｇＤを発現する遺伝子工学的に作られたワクチンウィルス 組み換え体Ｖ５２を、ウサギの皮肉接種に用いた。しかしながら、ＨＳＶ−１ｇ Ｄもまた上記またはそれと等価の方法により得ることができることに注意すべき である。有意なＨＳＶ−１中和抗体力価が得られたが、一方、それらは生きたＨ ＳＶ−１を接種することにより誘導されるものより高くはなかった。接種擬制群 はインフルエンザワクチン組み換え体Ｖ３６を与えられた。陽性の対照群は、生 きた弱毒化Ｈ３Ｖ−１ウィルス（ＫＯＳ）を皮下接種により与えられた。ウサギ の眼に２Ｘ１０’ＰＦＵのＨＳＶ−１マククレイを局所投与した。上皮角膜炎、 間質角膜炎および虹彩炎について３５日間、眼をモニターした。 桓！ ＶＳ２　ｇＤは、ＨＳＶ−１により誘導された上皮角膜炎（ｐ＝０．０２）およ び間質廠痕（ｐ＝０．０４）に対して少しの防御効果を示した。さらに、ＶＳ６ を接種したウサギ（陰性対照）の８９％が再活性化を誘導された。対照的に、Ｖ Ｓ２を接種したウサギの５５％が再活性化を誘導されたに過ぎず、中程度の防御 効果のあることを示す。ＫＯＳを皮下接種された陽性対照のウサギは、ｇＤにお いて見られるのと同じ結果を示した。これより、弱毒化生ＫＯ５ＨＳＶ−１への ＨＳＶ−１ｇＤの全身的接種は、ＨＳＶ−１回発から眼を十分に保護しなＫＯＳ による眼への局所的接種 方迭 ２０匹のＮＺＷウサギに、非病原性の生Ｈ５Ｖ−１株であるＫＯＳを接種した。 眼の中でＫＯＳは非常によく複製し、非常に高い力価となったがウサギにおいて ＫＯＳは、最小限の眼の疾患し力弓１き起こさなかった。５Ｘ１０”個のウィル スをそれぞれの眼に入れ、３０秒間目を閉じさせてウサギに接種した。１２匹の ウサギの対照群は、組織培養培地を与えられる各擬制群のウサギであった。４週 間後、ウサギをＨＳＶ−１マククレイに感染させ、２週間にわたり眼を細隙灯生 体顕微鏡観察した。症状の重篤性は０〜４のスケールで評価した。 第２表　眼初感染に対する眼のワクチン接種保護前記で示した通り、４週目の眼 の抗原投与に対して得られた保護は、はとんど完全であった。眼の接種は、劇的 に、前記実施例１および２で示された全身接種よりも効力があった。したがって 、この実験によって、局所眼ワクチンが、全身接種で欠けている、眼の抗原投与 に対する、ウサギにおいて必要な保護を与えることが示唆される。さらまた、眼 接種が眼初感染に対する保護で有力と思われるので、眼の再発に対する保護にお いても有力であると思われるという結果になる。 Ｈ３Ｖ感染のウサギの眼モデルは、ヒトの感染によ（似ているので、局所的眼接 種は、ヒトにおけるＨＳＶ−１による眼の再発からの最良の保護を与えるとも思 発現されたＨＳＶ−１ｇＢおよびｇＤによる局所結接種方法 両眼Ｈ３Ｖ−ＩＭｃＫｒａｅ感染を保証された培養を有する５匹のＮＺＷウサギ に、感染の３２日後および５４日後に角膜上接種を行った。該ワクチンは、ＭＴ Ｐ−ＰＥアジュバントと５０１５０で混合した同量の発現ｇＢ１およびｇＤｌか らなっていた。９つの眼に接種した１４匹の動物は両側、１匹は片側。第２の接 種の３週間後から開始して２２日間、毎日７日／週、スワブ培養物（第１ウサギ 腎臓）を採取した。全ての陽性培養物を中和によって確認した。毎日５日／週、 細隙灯生体顕微鏡を同じ期間にわたって行った。 結果 疑似接種した動物とは異なる、生体顕微鏡上で示された角膜または前眼房異常が あった。全ての眼は、角膜上接種の後１週間、弱い汎発性充血を示した。３個の 眼は、接種部位で持続性限局性の弱い結膜充血を示した。 下記第３表に示す結果は、興味をそそるものであり、ｇＢ１＋ｇＤｉによる眼結 膜下接種の結果として起こる放出を軽減することを示唆する。これらの実験によ って、（１）局所結膜接種が受容者に対する見かけの害なくして可能であり：　 （２）局所眼接種がＨ８Ｖ眼再発の防止において全身接種よりも有効であること が示される。 第３表　バキュロウィルス発現Ｈ５Ｖ−１ｇＢおよびｇＤによる局所角膜上接種 の結果として起こる自発的眼放出および樹枝状角膜炎Ｋ　２２日間連続して培養 された全ての眼−ＫＯ８数は、角膜下動物を培養した日数について報告する。す なわち、感染後７７〜９９日間。 ｔｘ１４日間細隙灯生体顕微鏡（５日／週）。 概略において、前記実施例によって、１）ＭＴＰ−ＰＥを含むＨＳＶ−２ｇＢ　 十ｇＤによる全身接種が、ＨＳＶ−１再発に対する充分な眼保護を生じなかった こと；　２）ＨＳＶ−１ｇＤ＊た１１弱毒化ＫＯ３ＨＳＶ−Ｈ：：よる全身系予 防接種が、Ｉ−（ＳＶ−１再発からの十分な眼保護生じなかったこと：３）生き た非病原性ＨＳＶ−１菌株による局所眼接種が、眼初感染から保護したこと；お よび４）ＨＳＶ−１ｇＢおよびｇＤによる局所眼接種が、Ｈ５Ｖ眼再発を予防す るのに有効であったことが示される。これらの実施例によって、１種類以上のＨ ＳＶ−１糖タンパクまたはタンパクからなる局所眼免疫原が、Ｈ３Ｖ眼再発、ア メリカ合衆国におけるヒトの最も頻繁な重篤なウィルス性眼感染、および世界中 のウィルス誘発性失明の主な原因を非常に軽減することが示される。 前記詳細な説明は、理解を明瞭にするためだけであり、本発明の範囲内の変形は 当業者に明らかである場合、該詳細な説明から理解または推論されるために不必 要な限定はない。 文献目録 １、ネスバーン、エイ・ビー（Ｎｅｓｂｕｒｎ、　Ａ、　Ｂ、　）、リポート・ オブ・ザ・コーニアル・ディノーズ・パネル・ビジョン・リサーチニア・ナショ ナル・プラン（Ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｒｎｅａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ 　ｐａｎｅｌ：　Ｖｉｓｉｏｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ：　Ａ　ｎａｔｉｏｎ≠■ ｐｌａｎ）　１９８３−１９８７゜第■巻、第■部、ネスバーン、エイ・ビー（ Ｎｅｓｂｕｒｎ、　Ａ、　Ｂ、　）編、ミズーリ州セントルイス。 ２、クライン、アール・ジエイ（Ｋｌｅｉｎ、　Ｒ，Ｊ、）、単純ヘルペスウィ ルス感染における再感染および部位特異的免疫（Ｒｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ａ ｎｄ　ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｉｎ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓ ｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）　ｏワクジーン（Ｖａｃｃ ｉｎｅ）、７：３８０−３８１　（１９８９）。 ３　スタンベリー・エル・アール（Ｓ　ｔａｎｂｅｒｒｙ、　Ｌ、　Ｒ，）ら、 再発性陰部ヘルペスの単純ヘルペスウィルス糖タンパク治療（Ｈｅｒｐｅｓ　ｓ ｊｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎ↑ｏｆ 　ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　ｇｅｎｉｔａｌ　ｈｅｒｐｅｓ）　ｏジャーナル・オブ ・インフエクンヤス・ディジージズ（Ｊ　、　Ｉ　ｎｆｅｃ、　Ｄｉｓ、　）、 １５７　：１５６−６３　（１９８８）。 ４　カーン、エイ・ビー（Ｋｅｒｎ、　Ａ、　Ｂ、　）ら、再発性単純ヘルペス におけるワクチン治療（Ｖａｃｃｉｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　Ｒｅｃｕｒｒ ｅｎｔ　Ｈｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ）、アーカイブス・オブ・ジーマトロジ ー（Ａ　ｒｃｈ、　Ｄ　ｅｒａ、　）、８９　：　８４４−８４５　（１９６４ ）。 ５　フレンケル、エル（Ｆ　ｒｅｎｋｅｌ、　Ｌ　、　）ら、単純ヘルペスウィ ルス精製糖タンパク（ｇＤｌ）ワクチンのランダム化二重盲ブラシーポ制御相１ 試験（Ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｄｏｕｂｌｅ　ｂｌｉｎｄ、　ｐｌａｃｅｂｏ −ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｐｈａｓｅ　１　ｔｒｉａｌ　ｏｆ　ａ　■■窒垂■ ■ ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｐｕｒｊｆｉｅｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　 （ｇＤｌ）　ｖａｃｃｉｎｅ）。Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ@Ｃｏｎｆ。 ｏｎ　Ａｎｔｉ＊１ｃｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ　＆　Ｃｈｅｍｏ、、２０６ 　（１９９０）。 ６　バーマン、ビー・ダブリュ（Ｂ　ｅｒｍａｎ、　Ｐ　、　Ｗ、　）ら、モル モットにおける２型単純ヘルペスウイルスによる一次感染、再発性感染および潜 在性陰部感染の発生に対する組換え糖タンパクＤサブユニットワクチンの効力（ Ｅｆｆｉｃａｃｙ　ｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　 Ｄ　５ｕｂｕｎｉｔ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ ｔ　盾■ Ｐｒｉｍｅｒ、　Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ、　ａｎｄ　Ｌａｔｅｎｔ　Ｇｅｎ１ｔａ ｌ　Ｉｎｆｅｎｃｔｉｏｎｓ　Ｗｉｔｈ　ＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｘ　Ｖｉｒ ｕｓ　Ｔｙｐｅ　２　ｉｎ　Ｇｕｉｎｅａ　Ｐｉｇｓ）　ｏジャーナル・オブ・ インフェクシャス・ディシーズ（Ｊ　、　Ｉ　ｎｆｅｃ、　Ｄｉｓ、　）、１５ ７　（５）：　８９７−９０２　（１９８８年５月）。 ７　ブラックロウズ、ビー（Ｂ　１ａｃｋｌａｖｓ、　Ｂ、　）ら、ワクシニア ウィルス組換え体において発現された１型単純ヘルペス糖タンパクの免疫原性（ Ｉ　ｍ−ｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　１ｙｐ ｅ　１　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｖａｃｃｉ ｎｉａ　ｖｉ窒浮■ ｒｅｃｏｉｂｉｎａｎｔｓ）　ｏバイロロノー（Ｖ　ｉｒｏｌｏｇＹ）、１７７ 　：　７２７−７３６　（１９９０）。 ８、スペア−、ビー・ジー（Ｓｐｅａｒ、Ｐ、Ｇ、）、単純ヘルペスウィルスに より特異化された糖タンパク（Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　５ｐｅｃｉｆｉｅ ｄ　ｂｙ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ）。 ザ・ヘルペスバイラシズ（Ｔｈｅ　ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ）、ロイズマン 、ビー（Ｒｏｉｚｍａｎ。 Ｂ、）編、ニューヨーク、ブレナム・プレス、第３１５頁〜第３５６頁（１９８ ５）。 ９、ナリルド、ビー（Ｎａｒｒｉｌｄ、　Ｂ、）、単純ヘルペスウィルス感染に 対する体液性応答（Ｈｕ＋＊ｏｒａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｈｅｒｐｅｓ 　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）　。ザ畷ヘルペスバイ ラシズ（Ｔｈｅ　ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ）、ロイズマン、ビー（Ｒｏｉｚ ｍａｎ、　Ｂ、）編、ニューヨーク、プレナム・プレス、第６９頁〜第８６頁（ １９８５）。 】０．サーミント、エム（Ｓ　ａｒｍｉｎｔｏ、　Ｍ、　）ら、単純ヘルペスウ ィルス■により特異化された膜タンパク。ピリオン感染性における糖タンパクＶ Ｐ７　（Ｂ２）の役割（Ｍｅ＋＊ｂｒａｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ５ｓｐｅｃｉｆｉ ｅｄ　ｂｙ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｍ、　Ｒｏｌｅ　ｏ ■ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ＶＰ　７　（Ｂ　２）　ｉｎ　ｖｉｒｉｏｎ　１ｎ ｆｅｃｔｉｖｉｔｙ）　。ジャーナル・オブ・バイｏｏジー（Ｊ　、　Ｖｉｒｏ ｌ、　）、２９：１１４９−５８　（１９７９）。 １１、スタンベリー、エル・アール（Ｓ　ｔａｎｂｅｒｒｙ、　Ｌ、　Ｒ，）ら 、再発性陰部ヘルペスの、同種に対する異種単純ヘルペスウィルス糖タンパク免 疫治療（Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　Ｖｅｒｓｕｓ　Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　Ｈ ｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ　ＶｉｒｕｓＧｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉ　ｍｍ ｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　Ｇｅｎ１ｔａｌ　Ｈｅｒｐ ｅｓ）　。ビープイアトリック・リサーチ（Ｐｅｄｉａｔｒ　Ｒｅｓ、）、２５ ：１９１Ａ、第２部（１９８９）。 １２、ギアシ、エイチ（Ｇｈｉａｓｉ、　Ｈ，）、ホスバーン。エイ・ビー（Ｎ ｅｓｂｕｒｎ、　Ａ。 Ｂ）ら、高いレベルの生物学的に活性な１型単純ヘルペスウイルス糖タンパクＤ を発現する組換えバキュロウィルスの免疫的選択（Ｉ　ｍｍｕｎｏｓｅｌｅｃｔ ｉｏｎ　ｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓ ｓｉｎｇ　ｈｉｇｈ　１ｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　≠モ狽 奄魔■ ｈｅｒｐｅｓ　５ｉｉｐｌｅｓ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１　ｇｌｙｃｏｐｒｏ ｔｅｉｎ　Ｄ）　、アーカイブスｅオブ・ノ（イロｏジー（Ａｒｃｈ、　Ｖｉｒ ｏｌ、　）　、印刷中（１９９１年１０月）。 １３　サマーズ、エム・ディ（Ｓｕ＋ｎｅｒｓ、Ｍ、Ｄ、）、スミス、ジー・イ ー（Ｓｗｉｔｈ。 Ｇ、Ｅ、）、ア・マニュアル・オブ・メソッズ・フォー・バキュロバイラス・ベ クターズ・アンド・インセクト・セル・カルチャー・ブロンージャーズ（Ａ■ａ ｎｕａｌｏｆ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏ ｒｓ　ａｎｄ　１ｎｓｅｃｔ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｒｏｃ■р浮窒■ 刀j。 ミクｏ−ンーン・システム（Ｍｉｃｒｏ　Ｇｅｎｅ　Ｓｙｓ、）、ニュー・ヘイ ブ：／　（ＮｅｗＨａｖｅｎ）（１９８８）。 １４０ツク、ディ・エル（Ｒｏｃｋ、　Ｄ、　Ｌ、　）、ホスバーン。エイ・ビ ー（Ｎｅｓｂｕｒｎ。 Ａ、Ｂ、）ら、潜在的に１型単純ヘルペスウイルスに感染したウサギの三叉神経 節における潜伏関連ウィルスＲＮＡ５の検出（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　１ａ ｔｅｎｃｙ　ｒｅｌａｔｅｄｖｉｒａｌ　ＲＮＡ５　ｉｎ　ｔｒｉｇｅｍｊｎａ ｌ　ｇａｎｇｌｉａ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　１ａｔｅｎｔｌｙ　１ｎｆｅｃｔ ｅｄ　ｗ奄狽■ ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１）。ジャーナル・オ ブ・／（イロロジー（Ｊ　、Ｖｉｒｏｌ、　）、６１”３８２０−２６　（１９ ８７）。 １５　マツウラ、ワイ（Ｍａｔｓｕｕｒａ、　’ｌ’、　）ら、バキュロウィル ス発現ベクター　糖クンバクを含むタンパクの高レベル発現に対する必要条件（ Ｂ　ａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒｓ：　ｔｈｅ　 ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｈｉｇｈ　１ｅｖｅｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉ ｏｎ　盾■ ｐｒｏｔｅｉｎｓ。ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ）、ジャ ーナルφオブ串ゼネラルｅノくイロロノー（Ｊ、Ｇｅｎ〜’　１ｒｏ１．　）、 ６８１１２３３−５０　（１９８７）。 １６　イヌマル、ニス（Ｉ　ｎｕｍａｒｕ、　Ｓ　、　）ら、バキュロウィルス ベクターによる昆虫細胞におけるブルータングウィルス群特異的抗原ＶＰ３の発 現ニブル−タングウィルス抗体の検出のためのその使用（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ 　ｏｆ　ｂｌｕｅｔｏｎｇｕｅ　ｖｉｒｕｓｇｒｏｕｐ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　ａ ｎｔｉｇｅｎ　Ｖ　Ｐ　３　ｉｎ　１ｎｓｅｃｔ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ａ　ｂａ ｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｖ■モ狽盾秩F ｉｔｓ　ｕｓｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｌｕｅｔｏｎ ｇｕｅ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）　。ジャーナ求E オブ・ゼネラル・バイオロジー（Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ、）、６８　：１６２ ７−３５　（１９８７）。 １７、レムリ、ニー・ケイ（Ｌａｅ＋ｕ＋ｌｉ、　Ｕ、　Ｋ、　）、バクテリオ ファージＴ４の頭部の構築の間の構造タンパクの切断（Ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏｆ 　５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｄｕｒｉｎｇｔｈｅ　ａｓｓｅａ ＋ｂｌｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅａｄ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　Ｔ　 ４　）　ｏネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅj、 ２２７　：　６８０−８５　（１９７０）。 １８、トウビン、エイチ・ティ　（Ｔｏｗｂｉｎ、　Ｈ，Ｔ、　）ら、ポリアク リルアミドゲルからニトロセルロースンートへのタンパクの電気泳動移動：方法 およびいくつかの応用（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ　ｔｒａｒ＋５ｆｅｒ 　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　ｇ■撃 ■ ｔｏ　ｎ１ｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ　５ｈｅｅｔｓ：　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ 　ａｎｄ　ｓｏｍｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）　、プロVーデイ ングズ・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　Ｎ ａｔ、１゜Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　）、７６　：　４３５０−５４　（１９７９ ）。 １９、ジャービス、ディ”エル（Ｊ　ａｒｖｉｓ、　Ｄ、　Ｌ、　）、サマーズ 、エム・ディ（Ｓｕｍ■ｅｒｓ、　Ｍ、　Ｄ、　）、組換えバキュロウィルス感 染昆虫細胞におけるヒト組織ブスミノーゲン活性化因子のグリコリル化および分 泌（Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ａｎｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａ ｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｉｎ　ｒｅ ｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　１ｎｆｅｃｔｅｄ　１ｎｓｅｃｔ 　ｃｅｌｌｓ）　、モレキュラー・アンド・セルーラー・バイオロジー（Ｍｏｌ 、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　）、９　：　２１４−２３　（１９８９）。 ２０、リ−，ジー・ティ（Ｌｅｅ、　Ｇ、　Ｔ、　）ら、１型単純ヘルペスウイ ルスのＳ成分における糖タンパクｇＤおよびｇＥならびに他のポリペプチドにつ いての構造遺伝子の配置（Ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　５ｔｒｕｃｔｕｒ ａｌ　ｇｅｎｅｓ　ｆｏｒ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｇＤ　ａｎｄｇＥ　 ａｎｄ　ｆｏｒ　ｏｔｈｅｒ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓ　 ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉ＋＊垂撃■■ ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　Ｉ　ＤＮＡ）　ｏジャーナル・オブ・パイロロジー（Ｊ 、Ｖｉｒｏｌ、）、４３・４１−４９　（１９８２）。 ２１、７１’、：Ｌ−ズ、ジェイ・ティ（Ｍａｔｂｅｖｓ、　Ｊ　、　Ｔ、　） ら、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ系における１型および２型単純ヘルペスウイルスの糖タン パクＤの合成およびプロセシング（Ｓｙｎｔｈｃｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｃｅｓ ｓｉｎｇ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄ　ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅ ｘ　ｖｉｒｕ■ ｔｙｐｅｓ　１　ａｎｄ　２　ｉｎ　ａｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｙｓｔｅｍ） 　ｏジャーナル・オブ・バイオロジー（Ｊ　、　Ｖ　１ｒｏ１．　）、４８：５ ２１−５３　（１９８：３）。 ２２、タケダラ、ケイ（Ｔａｋｅｄａｒａ、　Ｋ、　）ら、バキコロウィルス多 重発現ベクターを使用するＢ型肝炎表面および、１７″抗原の同時発現（Ｃｏ− ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅＨｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　５ｕｒｆａｃｅ 　ａｎｄ　ｃｏｒｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｕｓｉｎｇ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ 　ｍｕｌｔｉｐｌ■ ｅＸｐｒｅｓｓｌｏｎ　ｖｅｃｔｏｒｓ）　Ｏジャーナル０オブ８ゼネラル１パ イロｏンー（Ｊ、Ｇｅｎ。 Ｖｉｒｏｌ、）、６９：２７６３　７７７（１９８８）。 ２３ヤア２．工・イチ（Ｇｈｉａｓｉ、　Ｈ，）ら、昆虫細胞における１型単純 ヘルペスウイルスの糖タンパクＢの発世　モの生化学的および免疫学的特性の分 析（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｈ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｂ　ｏｆ　ｈｅ ｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１　１ｎｉｎｓｅｃｔ　ｃ Ｃｌｌｓ：　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｂｉｏ：ｈｅ＋＊１ｃａｌ　ａ ｎｄ　ｉｍｗｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒ盾垂■窒狽奄■刀j　。 バイラス−りづ−チ（Ｖｉｒｕｓ　Ｒｅｓ、）、印刷中（１９９２）。 ２４　ギアン、エイチ（Ｇｈｉａｓｉ、　Ｈ，）ら、バキュロウ・イルス発現１ 型単純ヘルペスウィルス糖タンパクＣは致死性Ｈ８Ｖ−］感染からマウスを保護 する（　Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍ ｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　ｉ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉ氏@Ｃ ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｍ１ｃｅｆｒ０１１ｅｔｈａｌ　ＨＳ　Ｖ−１１ｎｆｅｃｔ ｉｏｎ）　。アンチバイラル・リサーチ（Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃ ｈ）、印刷中（１９９２）。 ２５、ギアシ、エイチ（Ｇｈｉａｓｉ、　Ｈ，）ら、１型単純ヘルペスウイルス （Ｈ３Ｖ−１）のバキュロウィルス発現糖タンパクＥ　（ｇＥ）は致死性腹腔内 および致死性限外Ｈ５Ｖ−１抗原投与に対してマウスを保護する（　Ｂａｃｕｌ ｏｖｉｒｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｌｙｅｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅ　（ｇＥ）　 ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　５ｉｉｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１　（ＨＳ　Ｖ −１）ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｍ１ｃｅ　ａｇａｉｎｓｔ　１ｅｔｈａｌ　１ｎｔｒ ａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ａｎｄ　１ｅｔｈａｌ　ｏｃｕｌａｒ　gＳ　Ｖ　− １ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）　ｏ提出された（１９９２）。 ２６　組換えバキュロウィルスによって発現された１型単純ヘルペスウイルスの 糖タンパクＧ　（ｇＧ）の合成および免疫原性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　 ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｇ　（ｇＧ） 　ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１　ｅｘｐｒ ｅｓｓｅｄ@ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ）　。提出された（１９ ９２）。 ２７、ギアン、エイチ（Ｇｈｉａｓｉ、　Ｈ，）ら、組換えバキュロウィルス感 染細胞における】型単純ヘルペスウィルス糖タンパクＩ（の細胞表面発現（Ｃｅ ｌｌ　５ｕｒｆａｃｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｎｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌ ｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｈｉｎ　ｒｃｃ ｏ高ｂ奄獅≠獅■ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　１ｎｆｅｃｔｅｄ　ｃｅｌｌｓ）　ｏバイオロジー（ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）、１８５：１８７（９４（１９９１）。　′ ２８、ギアシ、エイチ（Ｇｈｉａｓｊ、、　Ｈ，）ら、バキュロウィルスにおけ る糖夕〉バク１　（ｇｌ）の１型単純ヘルペスウイルス（Ｈ３Ｖ−１）の発現　 予備生化学特性付けおよび保護研究（Ｅｘｐｒｅｓｓｊｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈ ｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１（ＨＳ　Ｖ−１）　ｏ ｆ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｉ　（ｇ　Ｉ　）　ｉｎ　ｂａｅｕｌｏｖｉｒ ｕｓ：　Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　５ｔｕｃＨｅｓ）　ｏジャー ナル０オブ０バイｏｏジー（Ｊ、Ｖｊｒｏｌ、）、６４（４）。印刷中（１，９ ９２）。 ２９、モレイン、ビー（Ｍｏｒｅｉｎ、　Ｂ、　）ら、イスコム（Ｉ　ｓｃｏｍ ）、包まれているウィルスから膜タンパクの抗原性提示についての新規構造（ａ 　ｎｏνｅｌ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅｆｏｒ　ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　ｐｒｅｓｅｎ ｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｅｎｖ ｅｌｏｐｅｄ　魔奄窒浮唐■刀j　、。 ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）、３０８　：　４５７−６０　（１９８４）。 ３０、ゴールドスタイン、デ４”ジェイ（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ、　Ｄ、　Ｊ　、 　）、ウエラー、ニス・ケイ（Ｗｅｌｌｅｒ、　Ｓ、　Ｋ、　）、１型単純ヘル ペスウイルス感染細胞に存在する因子はウィルス性リボヌクレオチド・レダクタ ーゼの大きいサブユニットの損失について補充することができる：　ＴＣＰ６欠 失突然変異体の特性付け（Ｆ　ａｃｔｏｒ（ｓ）ｐｒｅｓｅｎｔ　ｉｎ　ｈｅｒ ｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１１ｎｆｅｃｔｅｄ　ｃｅｌ ｌｓ　ｃａｎ　ｃｏｍｐｅｎ唐≠狽■@ｆｏｒ ｔｈｅ　１ｏｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌａｒｇｅ　５ｕｂｕｎｉｔ　ｏｆ　ｔｈｅ 　ｖｉｒａｌ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｒｅｄｕｃ狽≠唐■F ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　Ｉ　ＣＰ　６　ｄｅｌｅｔｉ ｏｎ　ｍｕｔａｎｔ）　。／＜イロロジー（Ｖ　１ｒｏ１ｏｒｙ）、１６６：４ １−５１　（１９８８）。 ３１、ンモムラ、ワイ（Ｓ　ｈｉｍｏｎｕｒａ、　Ｙ、　）ら、６−ヒトロキン ドーノくミン、次し）で、局所エピネフリンのイオン電気導入法による放出（Ｓ 　ｈｅｄｄｉｎｇ　ｂｙｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｏｆ　６−ｈｙｄｒｏｘ ｄｏｐａｍｉｎｅ　ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ｔｏｐｉｃａｌ　ｅｐｉｎｅｐｈ ｒｉ獅■j　。イ ンペスティゲイティブ・オフタルモロジー（Ｉｎｖｅｓｔ、　Ｏｐｈｔｈａｌｍ ｏｌ、　）　、２４　：　１５８８−９０　（１９８３）。 ３２、ネスバーン、エイ・ビー（Ｎｅｓｂｕｒｎ、　Ａ、　Ｂ、）ら、単純ヘル ペスウィルスの単離：再発性限外感染のエピソード間のウサギ三叉神経節からの 単離（Ｉ　５ｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｒｐｅｓ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕ ｓ：　Ｉ　５ｏｌａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｒａｂｂｉｔ　ｔｒｉ■■高奄獅≠■ ｇａｎｇｌｉａ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｅｐｉｓｏｄｅｓ　ｏｆ　ｒｅｃｕｕｒｅｎ ｔ　ｏｃｕｌａｒ　１ｎｆｅｃｔｉｏｎ）　。アーカイブスE オフ・オフタルモロジー（Ａｒｃｈ、　０ｐｈｔｈａｌｓｏ１．　）、８８：４ １２−１７　（１９７２）。 染の間のＨ５Ｖ−１ｇＤワクチンの眼性安全性および効力（Ｏｃｕｌａｒ　５ａ ｆｅｔｙ　ａｎｄｅｆｆｉｃａｃｙ　ｏｆ　ａｎ　ＨＳ　Ｖ−１ｇＤ　ｖａｃｃ ｉｎｅ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｒｉｍａｒｙ　ａｎｄ　１ａｔｅｎｔｉｎｆｅｃｔｉ ｏｎ）。インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サ イエンス（Ｉｎｖｅｓｔ、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ、Ｖｉｓ、Ｓｃｉ、）　、３１ 　：　７−８２　（１９９０）。 ３４、アシュレイ、アール（Ａｓｈｌｅｙ、　Ｒ，）、個人的情報（１９９０） 。 ３５ハス、アール・エフ（Ｐａ５ｓ、　Ｒ，Ｆ、　）ら、腎移植後の単純ヘルペ スウィルスによる感染の増大する危険性をもつ患者の同定（Ｉ　ｄｅｎｔｉｆｉ ｃａｔｉｏｎ　ｏｆＰａｔｉｅｎｔｓ　Ｗｉｔｈ　Ｉ　ｎｃｒｅａｓｅｄ　Ｒ１ ５ｋ　ｏｆ　Ｉ　ｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｈｅｒｐｅｓ　Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓ　Ａｆｔｅｒ　Ｒｅｎａｌ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、ジ ャール８オブインフエクンヤスーディジージス（Ｊ　、　Ｉ　ｎｆｅｃｔ、　Ｄ ｉｓ、　）、１４０　（４）＋４８７−４９２　（１９７９）。 ３６、ボレンスタイン、エル・エイ（Ｂｏｒｅｎｓｔｅｉｎ、　Ｌ、　Ａ、　） ら、組換え梅毒トレポネーマ表面抗原４Ｄによるウサギの免疫化は実験的梅毒の 経過を変える（　Ｉ　ｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｂｂｉｔｓ　ｗｉｔ ｈ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｐａｌｌａｄｉｕｍ@ｓｕ ｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ　４Ｄ　ａｌｔｅｒｓ　ｔｈｅ　ｃｏｕｒｓｅ　ｏｆ　ｅｘｐｅ ｒｉｍｅｎｔａｌ　５ｙｐｈｉｌｉｓ）　ｏジャーナル・オフ・イムノロジー（ Ｊ、　Ｉ＋ａｍｕｎｏ１．）　、１４０　：　２４１５　２１　（１９８８）。 プロモーター χ考宮　品羽 ・１１　・　・・ ゛　！−７ １１６，。 Ｍ１２３４５６ ＩＧ　５ フロントページの続き （７２）発明者　ウエクスラー、スチーブン・ルイスアメリカ合衆国９１３６１ カリフオルニア州ウエストレイク・ビレッジ、セブンオークス・コート４４０１ 番 （７２）発明者　ギアシ、ホメイコン アメリカ合衆国９００３４カリフォルニア州ロサンジェルス、フレスト・ドライ ブ１９０４番

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．眼への接種用の有効成分として、免疫誘導用量の、少なくとも１つのＨＳＶ −１タンパクからなる、宿主における眼球単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染 に対する免疫療法用組成物。
2. ２．ＨＳＶ−１タンパクがｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＥ、ｇＧ、ｇＨ、ｇＩ、ｇＫ、 ｇＬ、Ｖｍｗ６５、ＩＣＰＯ、１ＣＰ４および２種類以上の該ＨＳＶ−１タンパ クの組合せから選択される請求項１記載の免疫療法用組成物。
3. ３．さらに、免疫刺激有効量の、少なくとも１つのアジュバントからなる請求項 １記載の組成物。
4. ４．アジュバントがミョウバン、ＭＴＰ−ＰＥおよびリポゾームからなる群から 選択される請求項３記載の組成物。
5. ５．有効成分が同量部のＨＳＶ−１ｇＤおよびＨＳＶ−１ｇＢの混合物および免 疫刺激有効量のＭＴＰ−ＰＥからなる請求項１記載の組成物。
6. ６．免疫刺激有効量の少なくとも１つのアジュバントと混合した有効成分として の少なくとも１つのＨＳＶ−１タンパクの免疫誘導量を眼経路によって宿主に接 種する工程からなる眼球ＨＳＶ感染に対するヒト宿主の免疫化方法。
7. ７．接種の眼経路が、結膜下注射、表面点眼および徐放性コラーゲンシールドか らなる群から選択される請求項６記載の方法。
8. ８．ａ）少なくとも１つのＨＳＶ−１タンパクの免疫誘導用量を眼経路によって 宿主に接種し、次いで、 ｂ）少なくとも１つのアジュバントで眼経路によって宿主に接種する工程からな るヒト宿主における眼球ＨＳＶ感染の予防または治療方法。
9. ９．ＨＳＶ−１タンパクがｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、ｇＥ、ｇＧ、ｇＨ、ｇＩ、ｇＫ、 ｇＬ、Ｖｍｗ６５、ＩＣＰＯ、ＩＣＰ４および２種類以上の該ＨＳＶ−１タンパ クの組合せからなる群から選択される請求項８記載の方法。
10. １０．ＨＳＶ−１タンパクが接種当たり約１０〜１０００μｇの用量で投与され る請求項９記載の方法。
11. １１．アジュバントが、少なくとも１つのＨＳＶ−１タンパクの眼接種の前、同 時または後に眼経路によって接種される請求項８記載の方法。
12. １２．アジュバントが免疫刺激誘導量のＭＴＰ−ＰＥである請求項１１記載の方 法。
13. １３．タンパクがｇＢ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＨおよびｇＩからなる群から選択される 、バキュロウイルス発現ビーイクルによって生産された生物活性な完全長ヒトＨ ＳＶ−１タンパク。
14. １４．形質転換体細胞培養中、請求項１３記載の生物活性な完全長ヒトＨＳＶ− １タンパクを発現させることが可能なバキュロウイルス発現ビーイクル。
15. １５．請求項１３記載の生物活性な完全長ヒトＨＳＶ−１タンパクを発現させる ことが可能なバキュロウイルス発現ビーイクルで形質転換された昆虫細胞培養。
16. １６．完全長ヒトＨＳＶ−１タンパクからなる第１ＤＮＡ配列を構築し、第１Ｄ ＮＡ配列の発現を行うことが可能な多角体プロモーター配列からなる第２ＤＮＡ 配列と第１ＤＮＡ配列とを操作可能に結合させることからなる、請求項１４記載 のバキュロウイルス発現ビーイクルの製造方法。