JP7799975B2 - 皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤 - Google Patents

Description

NPMD NITE BP-03818

本発明は、皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤に関する。

シワは、加齢、ストレス、紫外線暴露などの要因により引き起こされる皮膚の老化症状のひとつであり、見た目に分かりやすいことから顔の印象に大きく影響する。そのため、シワとその改善方法に対する関心は非常に高い。

従来、ムコ多糖類やコラーゲン等の保水力を有する高分子を含有する皮膚外用剤による保湿という手段が、シワを改善するために採られてきた。しかしながら、それだけではシワを十分に改善する事はできなかった。
しかしながら、シワが形成されるメカニズムは複雑で、実験的に再現することも困難であるため、現在においてもそのメカニズムは完全に解明されるには至っていない。それでも、近年の研究では、皮膚の老化症状は、加齢が重要な因子であることに加えて、乾燥、酸化、糖化、紫外線なども大きく関与する因子であることが分かってきた。具体的には、前記因子、とりわけ紫外線曝露が、細胞の損傷とそれにより亢進する細胞のアポトーシス、真皮における主要な細胞である線維芽細胞の増殖活性やコラーゲン等の合成機能の低下によるコラーゲン等の線維成分のターンオーバー速度の低下、炎症性サイトカインの亢進による線維束の崩壊、血管系の減少による老廃物の蓄積、栄養供給の低下などを引き起こし、その結果として皮膚の弾力がなくなり、シワが発生すると考えられる。

特許文献１には、特定の構造を有するアミノカルボン酸誘導体及びその酸付加塩が、優れたシワ改善作用を発揮することが記載されている。
特許文献２には、メタクリル酸エチルベタイン／アクリレーツコポリマーとポリビニルピロリドンを組み合わせることにより、塗布膜の肌への付着性と柔軟性が向上することが記載されている。

特許文献３には、イヌリンを有効成分として含む、肌状態改善剤又は肌状態改善用食品組成物が記載されている。
特許文献４には、α－グリコシルヘスペリジンを利用した経口投与・摂取用の皮膚粘弾性低下抑制剤が記載されている。

特許文献５には、葛のつる由来の乳酸菌 （Leuconostoc mesenteroides）を有効成分とする経皮水分蒸散量抑制剤が記載されている。

特開２０１９－２０６４８３号公報 特開２０２０－１６４４３１号公報 特開２０２２－７２５１５号公報 特開２０１０－１００６３４号公報 特開２０２２－７２４３３号公報

本発明は、皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、所定の乳酸菌及び／又は所定の乳酸菌由来成分に、皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）及び肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）があることを新たに見出し、本発明を完成させた。

即ち、本発明は、下記に掲げる態様の発明を提供する。
項１． フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び／又は前記乳酸菌の抽出物を含有する、皮膚バリヤ機能改善剤。
項２． 前記乳酸菌がフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）である、項１に記載の皮膚バリヤ機能改善剤。
項３． 前記乳酸菌がフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ） ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）である、項１に記載の皮膚バリヤ機能改善剤。
項４． 皮膚乾燥改善用、経皮水分蒸散量抑制用、皮膚肥厚化抑制用のいずれかである、項１に記載の皮膚バリヤ機能改善剤
項５． 項１に記載の皮膚バリヤ機能改善剤を含む、飲食品、化粧品又は医薬品。
項６． フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び／又は前記乳酸菌の抽出物を含有する、肌状態改善剤。
項７． 前記乳酸菌がフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）である、項６に記載の肌状態改善剤。
項８． 前記乳酸菌がフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ） ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）である、請求項６に記載の肌状態改善剤。
項９． 皮膚粘弾性改善又は低下抑制用、肌のシワ改善又は抑制用、肌のたるみ改善又は抑制用、肌のハリ及び弾力改善用のいずれかである、項６に記載の肌状態改善剤。
項１０． 項６に記載の肌状態改善剤を含む、飲食品、化粧品又は医薬品。

本発明によれば、皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤の有効成分として有用な新規の素材が提供される。具体的には、本発明によれば、フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び／又は前記乳酸菌の抽出物が、皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤の有効成分として提供される。

Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅ（以下ＶＡＳとする）アンケート各項目のスコア変化量を示す図である。

本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤は、いずれも、フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び／又は前記乳酸菌の抽出物を、有効成分として含有することを特徴とする。以下、皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤について詳述する。

［１．有効成分］
本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤の有効成分は、フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び／又は前記乳酸菌の抽出物である。

［１－１．フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌］
フルクトバシラス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌（以下において、「所定の乳酸菌」とも記載する。）は、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）及び／又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）を産生する微生物である。また、フルクトバシラス属に属する乳酸菌は、好ましくは、少なくともＮＡＤを産生する微生物であり、より好ましくは、ＮＭＮ及びＮＡＤの両方を産生する微生物である。

フルクトバシラス属に属する乳酸菌としては、例えば、フルクトバシラス・ドゥリオニス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ）、フルクトバシラス・トロパエオイル（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ）、及びフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）が挙げられる。

フルクトバシラス属に属する乳酸菌のより具体的な例としては、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＲＤ０１１７２７株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＮＢＲＣ１１３２３９株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５３株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５４株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株が挙げられる。

Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＲＤ０１１７２７株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２０年１０月２８日付で寄託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２７６４として国際寄託されている。

Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５３株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２０年１０月２８日付で寄託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２７６５として国際寄託されている。

Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５４株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２０年１０月２８日付で寄託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０２７６６として国際寄託されている。

Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）（日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、２０２４年１月５日付で受託番号ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８として国際寄託されている。

これらのフルクトバシラス属に属する乳酸菌は１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。

皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）果をより一層効果的に向上させる観点からは、フルクトバシラス属に属する乳酸菌は、フルクトバシラス・トロパエオイル（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ）及びフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）が好ましく、フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）がより好ましい。

これらのフルクトバシラス属に属する乳酸菌の中でも、皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）をより一層効果的に向上させる観点から、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＲＤ０１１７２７株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＮＢＲＣ１１３２３９株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５３株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５４株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株が好ましく、より好ましくはＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５３株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５４株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株、さらに好ましくは、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株、特に好ましくはＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株が挙げられる。

肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）をより一層効果的に向上させる観点からは、フルクトバシラス属に属する乳酸菌は、フルクトバシラス・トロパエオイル（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ）及びフルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）が好ましく、フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）がより好ましい。

これらのフルクトバシラス属に属する乳酸菌の中でも、肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）をより一層効果的に向上させる観点から、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＲＤ０１１７２７株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｕｒｉｏｎｉｓ ＮＢＲＣ１１３２３９株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５３株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５４株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株が好ましく、より好ましくはＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５３株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｒｏｐａｅｏｉｌ ＲＤ０１２３５４株、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株、さらに好ましくは、Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓＮＢＲＣ３５１６株、及びＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株、特に好ましくはＦｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ ＯＳ－１０１０株が挙げられる。

［１－２．有効成分の形態］
有効成分の形態は、上記所定の乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び前記乳酸菌の抽出物の、少なくともいずれかである。有効成分は、これらのいずれか１種の形態のものを単独で用いてもよいし、複数種の形態のものを組み合わせて用いてもよい。

［１－２－１．乳酸菌］
有効成分が乳酸菌の形態である場合、当該有効成分は、当該乳酸菌の菌体成分及び当該乳酸菌に内在する又は内在していた産生物を含む。乳酸菌は、生菌及び死菌のいずれであってもよい。また、死菌の場合、菌体が破砕されていてもよい。また、破砕菌の場合、菌体成分の一部が除去されていてもよい。さらに、乳酸菌は、凍結乾燥、棚乾燥、スプレードライ等の手段により乾燥された菌体粉末の形態であってもよい。この中でも、皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）及び肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）をより一層高める観点から、例えば、凍結乾燥等により乾燥された菌体粉末であることが好ましい。

乳酸菌は、上記の所定の乳酸菌の１種又は複数種を培養する工程、並びに菌体を分離回収する工程を含む製造方法により得ることができる。分離回収する工程で行われる方法は、固液分離及び菌体洗浄を含む。当該製造方法は、上記の工程以外に、他の工程を含むことができる。他の工程としては、休止菌体反応工程（培養する工程の後、好ましくは分離回収する工程の後に行うことができる。）、乾燥工程（分離回収する工程又は休止菌体反応の後に行うことができる。）、菌体破砕工程（分離回収する工程、休止菌体反応工程又は乾燥工程の後に行うことができる。）等が挙げられる。

培養する工程で用いることができる培地としては、拡大培養に用いられるもの（前培養培地）、及び生産培養に用いられるもの（本培養培地）が挙げられる。本培養培地は、前培養培地として用いられる培地を基本として、更に添加物を含有させて調製することができる。培地の性状については、好ましくは液体培地であるが、寒天培地であってもよい。培地は、炭素源の他、一般的には窒素源、ミネラル等を含む。

炭素源としては、糖質及び糖質材料が挙げられる。糖質としては、糖類（単糖、二糖、オリゴ糖）、多糖類、及び糖アルコールが挙げられる。糖質としては、乳糖、ショ糖、グルコース、デンプン、キシリトール、デキストロース等が挙げられる。糖質材料は、糖質を含む有機組成物であればよく、例えば、乳及びその加工品（脱脂粉乳、ホエイ、ミルクパウダー、練乳等）、豆乳及びその加工品（豆乳加水分解物等）、穀類、果実、野菜等の食品が挙げられる。乳としては、ウシ、ヤギ、ヒツジ、水牛、ラクダ、ラマ、ロバ、ヤク、ウマ、トナカイ等の任意の哺乳動物に由来するものが挙げられる。なお糖質は、単離されたものであってもよいし、糖質材料に含まれているものであってもよい。例えば、フルクトース（糖質）は、果実（糖質材料）に含まれる形態のものを用いてもよい。これらの炭素源は、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。これらの炭素源の中でも、好ましくはグルコースが挙げられる。

培地中の炭素源の濃度については特に限定されず、培地の種類や培養方式等に応じて適宜設定すればよいが、例えば、０．５～４ｗ／ｗ％、好ましくは１～３ｗ／ｗ％、より好ましくは１．５～２．５ｗ／ｗ％が挙げられる。

窒素源としては、任意の無機窒素源又は有機窒素源を使用することができる。例えば、酵母エキス（ビール酵母等）、肉エキス、カゼイン等のタンパク質；ペプトン（プロテアーゼペプトン等）等のタンパク質加水分解物、ペプチド等のペプチド類；アンモニウム塩（クエン酸アンモニウム等）、硝酸塩等の含窒素塩等が挙げられる。これらの窒素源は、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。

培地中の窒素源の濃度については特に限定されず、培地の種類や培養方式等に応じて適宜設定すればよいが、タンパク質の場合、例えば、０．３～４ｗ／ｗ％、好ましくは０．５～３ｗ／ｗ％、より好ましくは１～２ｗ／ｗ％が挙げられ；ペプチド類の場合、例えば、０．１～２ｗ／ｗ％、好ましくは０．３～１．８ｗ／ｗ％、より好ましくは０．５～１．５ｗ／ｗ％が挙げられ；含窒素塩の場合、例えば、０．０３～１．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．０５～１ｗ／ｗ％、より好ましくは０．１～０．５ｗ／ｗ％が挙げられる。

ミネラルとしては、例えば、マンガン（例えば、硫酸マンガン等のマンガン塩）、亜鉛、鉄、ナトリウム（例えば、酢酸ナトリウム等のナトリウム塩）、カリウム（例えば、硫酸水素二カリウム、リン酸水素二カリウム等のカリウム塩）、マグネシウム（例えば、硫酸マグネシウム等のマグネシウム塩）、カルシウム、リン（例えば、リン酸水素二カリウム等のリン酸塩）、硫黄（例えば、硫酸マンガン、硫酸水素カリウム、硫酸マグネシウム等の硫酸塩）、微量元素等が挙げられる。これらのミネラルは、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。これらのミネラルの中でも、好ましくは、マンガン、ナトリウム、マグネシウム、カリウムが挙げられる。

培地中のミネラルの濃度については特に限定されず、培地の種類や培養方式等に応じて適宜設定すればよいが、マンガン塩の場合、例えば、０．００１～０．０１ｗ／ｗ％、好ましくは０．００３～０．００８ｗ／ｗ％が挙げられ；ナトリウム塩の場合、例えば、０．０５～１．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．１～１ｗ／ｗ％が挙げられ；マグネシウム塩の場合、例えば、０．００１～０．０２ｗ／ｗ％、好ましくは０．００５～０．０１５ｗ／ｗ％が挙げられ；カリウム塩の場合、例えば、０．０５～１ｗ／ｗ％、好ましくは０．１～０．５ｗ／ｗ％が挙げられ；リン酸塩の場合、例えば、０．０５～１ｗ／ｗ％、好ましくは０．１～０．５ｗ／ｗ％が挙げられ；硫酸塩の場合、０．００１～０．０４ｗ／ｗ％、好ましくは０．００５～０．０２ｗ／ｗ％が挙げられる。

培地は、上記成分以外に、ビタミン（ビタミンＢ群等）、界面活性剤（非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ等）、陰イオン性界面活性剤（ＳＤＳ等）等）、抗菌剤（トリクロサン等）、抗生物質（モネシン等）等の他の成分を含んでもよい。これらの他の成分は、１種を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。これらの他の成分の中でも、好ましくは界面活性剤、より好ましくは非イオン性界面活性剤が挙げられる。

培地中の他の成分の濃度については特に限定されず、他の成分の種類、培地の種類、培養方式等に応じて適宜設定すればよいが、界面活性剤を含む場合、界面活性剤の濃度として、例えば、０．０１～０．５ｗ／ｗ％、好ましくは０．０５～０．３ｗ／ｗ％が挙げられる。

培養条件としては、フルクトバシラス属に属する乳酸菌が生育できる条件下であれば特に限定されない。

培養温度としては、培養対象となるフルクトバシラス属に属する乳酸菌の至適温度であればよく、例えば、２６～４０℃、好ましくは２７～３８℃、より好ましくは２８～３６℃、更に好ましくは２９～３４℃が挙げられる。培養時間としては、実際に培養するフルクトバシラス属に属する乳酸菌の種類等に合せて適宜設定すればよく、例えば、４～４８時間、好ましくは８～３６時間、より好ましくは１２～２４時間が挙げられる。

培養中の操作については、培養中における培養液の攪拌の要否は問わない。また、具体的な培養手順の例については、上述の培養を一定時間生産培養（本培養）として行い、その前に、少量（例えば、体積比で本培養培地の１／６～１／４）の培地で拡大培養を（前培養）行うことができる。前培養の培養条件は、フルクトバシラス属に属する乳酸菌の種類等に合せて適宜設定すればよく、上述の条件を採用することができる。また、本培養においては、前培養で得られた培養物を、ＯＤ６６０が例えば、０．０１～０．０４、好ましくは０．０１～０．０３となるように本培養培地に植菌することができる。

分離回収工程においては、ろ紙を用いたろ過、遠心分離、デカンテーション、スクリュープレス、ローラープレス、ロータリードラムスクリーン、ベルトスクリーン、振動スクリーン、多重板振動フィルター、真空脱水、加圧脱水、ベルトプレス、遠心濃縮脱水、多重円板脱水等によって培養液の固液分離を行い、得られた菌体を洗浄することができる。

休止菌体工程では、乳酸菌中のニコチンアミドモノヌクレオチド含有比率を増大させることができる。

休止菌体反応工程で用いる液体としては、フルクトバシラス属に属する乳酸菌が休止菌体反応できるものであれば、特に制限なく用いることができる。例えば、水、緩衝液、有機溶剤等を用いることができる。

休止菌体反応に用いる液体のｐＨとしては、例えば、４．０～１０．０、好ましくはｐＨ５．０～９．０、より好ましく５．５～７．５が挙げられる。

休止菌体反応に用いる液体が緩衝液である場合、緩衝液としては、例えば、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、炭酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、ＨＥＰＥＳ衝液等が挙げられる。

緩衝液のより具体的な例としては、ＫＨＣ_８Ｈ_４Ｏ_４－ＮａＯＨ (ｐＨ４．０)、ＣＨ_３ＣＯＯＨ－ＣＨ_３ＣＯＯＮａ（ｐＨ４.０）、ＭＥＳ－ＮａＯＨ (ｐＨ５．０)、ＣＨ_３ＣＯＯＨ－ＣＨ_３ＣＯＯＮａ（ｐＨ５.０）、ＫＨ_２ＰＯ_４－Ｋ_２ＨＰＯ_４（ｐＨ６．０）、ＭＥＳ－ＮａＯＨ(ｐＨ６．０)、 ＫＨ_２ＰＯ_４－Ｋ_２ＨＰＯ_４（ｐＨ７．０）、ＰＩＰＥＳ－ＮａＯＨ (ｐＨ７．０)、ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ(ｐＨ８．０)、Ｈ_３ＢＯ_４－ＮａＯＨ（ｐＨ８.０）、ＣＨＥＳ－ＮａＯＨ(ｐＨ９．０)、Ｈ_３ＢＯ_４－ＮａＯＨ（ｐＨ９.０）、Ｈ_２ＣＯ_３－ＮａＨＣＯ_３（ｐＨ１０.０）、ＣＨＥＳ-ＮａＯＨ(ｐＨ１０．０)等が挙げられ、好ましくはＣＨ_３ＣＯＯＨ－ＣＨ_３ＣＯＯＮａ、ＫＨ_２ＰＯ_４－Ｋ_２ＨＰＯ_４、Ｈ_３ＢＯ_４－ＮａＯＨ、より好ましくはＫＨ_２ＰＯ_４－Ｋ_２ＨＰＯ_４が挙げられる。

休止菌体反応に用いる液体が有機溶剤である場合、有機溶剤としては、例えば、ベンゼン、ベンゾニトリル等の芳香族化合物、アセトン、アセチルアセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、酢酸エチル、酢酸ブチル、酪酸エチル、蟻酸エチル等の脂肪酸エステル類、ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４-ジオキサン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、１，２-プロパンジオール、１，２-ブタンジオール、１，３-ブタンジオール、１，４-ブタンジオール、２，３-ブタンジオール、１，２-ヘキサンジオール、１，６-ヘキサンジオール、１，２-ペンタンジオール、１，５-ペンタンジオール、２-メチル-２，４-ペンタンジオール、３-メチル-１，５-ペンタンジオール等のジオール類、炭素数１～７の直鎖又は分岐アルキルを有するアルコール、シクロヘキサノール、３-メトキシ-３-メチル-１-ブタノール、３-メトキシ-１-ブタノール等のアルコール類等が挙げられる。

休止菌体反応に用いる液体としては、上記の液体の中でも、好ましくは水、緩衝液が挙げられる。

休止菌体反応における反応温度としては、例えば、２１～３７℃、好ましくは２４～２８℃が挙げられる。反応時間としては、例えば、０．１～２４時間、好ましくは６～１２時間が挙げられる。

休止菌体反応は、フルクトバシラス属に属する乳酸菌を上記の液体に懸濁し、静置、攪拌または振盪することで行うことができる。

また、休止菌体反応は、上記の液体を用いることなく、フルクトバシラス属に属する乳酸菌を含む培養液のｐＨを４．０～１０．０、好ましくは５．０～９．０、より好ましくは５．５～７．５の範囲に調整することにより行ってもよい。

乾燥工程では、凍結乾燥、棚乾燥、スプレードライ等の工程の乾燥方法を用いて菌体を乾燥させることができる。

菌体破砕工程では、乾燥菌体を任意の方法で破砕することができる。菌体破砕工程では、破砕された菌体は菌体成分の一部を除去してもよい。

［１－２－２．乳酸菌の培養物］
有効成分が乳酸菌の培養物の形態である場合、当該有効成分は、乳酸菌とともに、当該乳酸菌の産生物を含む培地成分を含む。乳酸菌の培養物は、上記の所定の乳酸菌の１種を単独で用いて製造した培養物であってもよいし、複数種を組み合わせて用いて製造した培養物であってもよいし、ある１種を単独で用いて製造した培養物と他の１種を単独で用いて製造した培養物との混合物であってもよい。

培養物に含まれる培地成分は、当該乳酸菌の培養に用いた培地成分の一部が除去されていてもよい。また、培養物に含まれる乳酸菌は、生菌及び死菌のいずれであってもよい。また、死菌の場合、菌体は破砕されていてもよい。また、菌体が破砕されている場合、菌体成分の一部が除去されていてもよい。

乳酸菌の培養物は、上記の所定の乳酸菌の１種又は複数種を培養する工程を含む製造方法により得ることができる。当該製造方法は、上記の工程以外に、他の工程を含むことができる。他の工程としては、培地成分の一部を除去する工程、乳酸菌を休止菌体反応に供する工程、及び／又は、乾燥工程を含んでもよい。それぞれの工程の詳細は、上記「１－２－１．乳酸菌」で述べた通りである。

［１－２－３．乳酸菌の培養上清］
有効成分が乳酸菌の培養上清の形態である場合、当該有効成分は、当該乳酸菌の産生物を含む培地成分を含む。乳酸菌の培養上清は、上記の所定の乳酸菌の１種を単独で用いて製造した培養上清であってもよいし、複数種を組み合わせて用いて製造した培養上清でもあってよいし、ある１種を単独で用いて製造した培養上清と他の１種を単独で用いて製造した培養上清との混合物であってもよい。

培養上清に含まれる培地成分は、当該乳酸菌の培養に用いた培地成分の一部が除去されていてもよい。

乳酸菌の培養上清は、上記の所定の乳酸菌の１種又は複数種を培養する工程、並びに培養上清を分離回収する工程を含む製造方法により得ることができる。当該製造方法は、上記の工程以外に、他の工程を含むことができる。他の工程としては、培地成分の一部を除去する工程、乳酸菌を休止菌体反応に供する工程、及び／又は、乾燥工程を含んでもよい。それぞれの工程の詳細は、上記「１－２－１．乳酸菌」で述べた通りである。

［１－２－４．乳酸菌の抽出物］
有効成分が乳酸菌の抽出物の形態である場合、当該有効成分は、上記乳酸菌又は乳酸菌の培養物を抽出処理に供して得られる多成分系の組成物である。当該抽出物の調製に用いられる抽出溶媒としては、例えば、水；エタノール、イソプロパノール等の炭素数１～４の１価低級アルコール；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；これらの混合液等の極性溶媒が挙げられる。また、抽出時の温度条件としては、室温（例えば、５～３５℃、好ましくは２０～３０℃）であることが好ましい。抽出物の具体的な調製方法としては、例えば、記乳酸菌又は乳酸菌の培養物若しくはそれらの粉砕物を抽出溶媒中に含む懸濁液を調製し、当該懸濁液を固液分離することで抽出液（エキス液）を得る方法、又は必要に応じて当該抽出液を乾燥させることで粉末（エキス末）を得る方法が挙げられる。

［１－３．有効成分に含まれる成分］
本発明で用いられる有効成分であるフルクトバシラス属に属する乳酸菌、前記乳酸菌の培養物、前記乳酸菌の培養上清、及び前記乳酸菌の抽出物は、いずれも、当該乳酸菌が産生したＮＭＮ及び／又はＮＡＤ）だけでなく、当該乳酸菌が産生した（ＮＭＮ、ＮＡＤ以外の）他の代謝物、及び／又は菌体成分等も含む。本発明による皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）及び肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）は、これらの成分が相まって奏されると考えられる。

本発明で用いられる有効成分がＮＡＤ及びＮＭＮを含む場合、ＮＭＮの含有量は特に限定されないが、ＮＡＤ１重量部あたりのＮＭＮの含有量（含有比率）は、例えば、０．００１重量部以上１０重量部以下である。皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）及び肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）をより一層効果的に向上させる観点からは、ＮＡＤ１重量部あたりのＮＭＮの含有量は、好ましくは０．００５重量部以上５．０重量部以下、より好ましくは０．００５重量部以上３．０重量部以下、さらに好ましくは０．００８重量部以上２．０重量部以下、特に好ましくは０．０１重量部以上１．５重量部以下、一層好ましくは０．０３重量部以上１．０重量部以下が挙げられる。

また、ＮＡＤ１モルあたりのＮＭＮの含有量（含有比率）は特に限定されないが、例えば、０．００１モル以上１０モル以下、好ましくは０．００５モル以上５モル以下が挙げられる。さらに好ましい形態において、ＮＡＤ１モルあたりのＮＭＮの含有量としては、好ましくは０．０１モル以上３モル以下、より好ましくは０．０２モル以上２モル以下、さらに好ましくは０．０３モル以上１．５モル以下が挙げられる。

［１－４．有効成分の含有量］
本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤それぞれに含まれる有効成分の量としては特に限定されず、付与すべき皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）又は肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）に応じて適宜決定することができる。

本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤それぞれに含まれる有効成分の含有量としては、例えば、フルクトバシラス属に属する乳酸菌の乾燥重量換算量で、０．００００１～１０重量％、好ましくは０．０００１～１重量％が挙げられる。上記の乾燥重量換算量とは、有効成分が、乳酸菌、乳酸菌の培養物である場合は、有効成分の乾燥重量を指し、有効成分が乳酸菌の培養上清である場合は、培養上清の取得に用いた乳酸菌の乾燥重量を指し、有効成分が抽出物である場合は、抽出物の取得に用いた乳酸菌の乾燥重量を指す。

［２．他の成分］
本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤は、上記の有効成分以外に、必要に応じて、他の薬理成分を含有していてもよいし、含有していなくてもよい。このような薬理成分としては、例えば、抗炎症剤、抗酸化剤、殺菌剤、清涼化剤、ビタミン類、ムコ多糖類等が挙げられる。

また、本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤は、所望の製剤形態にするために、必要に応じて、基剤及び／又は添加剤が含まれていてもよいし、含有していなくてもよい。このような基剤及び／又は添加剤については、薬学的に許容されることを限度として特に制限されないが、例えば、水、炭素数１～４の１価低級アルコール（エタノール、イソプロパノール等）等の水性基剤；天然由来油（植物油、動物油、それらの加工油）、鉱物油、エステル油、脂肪酸アルキルエステル、脂肪酸、脂肪酸エステル、高級アルコール等の油性基剤；界面活性剤；多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール等）；清涼化剤、防腐剤、着香剤、着色剤、粘稠剤、ｐＨ調整剤、湿潤剤、安定化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、キレート剤、粘着剤、緩衝剤、溶解補助剤、可溶化剤、保存剤等の添加剤が挙げられる。

［３．製剤形態及び製品分類］
本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤の製剤形態については、特に制限されず、液状、半固形状（クリーム状、ゲル状、軟膏状、ペースト状）、固形状（顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤）等のいずれであってもよい。また、本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤は、水性製剤、油性製剤等の非乳化製剤であってもよく、また水中油型乳化製剤、油中水型乳化製剤等の乳化製剤であってもよい。

また、本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤の製品分類としては、飲食品、化粧品、医薬品が挙げられる。

飲食品としては特に限定されないが、例えば、発酵乳（ドリンクヨーグルト等）、乳酸菌飲料、乳飲料（コーヒー牛乳、フルーツ牛乳等）、茶系飲料（緑茶、紅茶及び烏龍茶等）、果物・野菜系飲料（オレンジ、りんご、ぶどう等の果汁、トマト、ニンジン等の野菜汁を含む飲料）、アルコール性飲料（ビール、発泡酒、ワイン等）、炭酸飲料、清涼飲料、水ベースの飲料等の飲料；及び発酵乳（セットタイプヨーグルト、ソフトヨーグルト等）、菓子、インスタント食品、調味料等の加工食品等の食品が挙げられる。

また、飲食品としては、機能性食品も挙げられる。機能性食品は、生体に対して一定の機能性を有する食品を意味し、例えば、特定保健用食品（条件付きトクホ［特定保健用食品］を含む）及び栄養機能食品等の保健機能食品、機能性表示食品、特別用途食品、栄養補助食品、健康補助食品、サプリメント（例えば、錠剤、被覆錠、糖衣錠、カプセル及び液剤等の各種剤形のもの）及び美容食品（例えば、ダイエット食品）等が挙げられる。更に、機能性食品は、病者用食品、妊産婦・授乳婦用粉乳、乳児用調製粉乳、高齢者用食品、介護用食品等の特別用途食品であってもよい。

化粧品としては、皮膚外用剤及び粘膜外用剤を含む外用剤が挙げられ、より具体的には、化粧水、乳液、クリーム、エッセンス、ゲル、パック、シートマスク、リップクリーム等の基礎化粧料；洗顔料、メイク落とし（クレンジング剤を含む）、角質除去剤、ボディーシャンプー等の皮膚洗浄料；サンスクリーン剤、ボディー用ジェル、ボディー用マッサージ剤、抑汗剤、防臭剤、除毛剤、入浴剤等のボディーケア化粧料；ファンデーション、おしろい、口紅、頬紅、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、眉墨等のメークアップ化粧料；マネキュア、ネイルリムーバー等の爪用化粧料；ヘアスタイリング剤、シャンプー、コンディショナー、リンス、育毛剤等の毛髪化粧料；液体歯磨、練歯磨、洗口液、マウススプレー等の口腔用化粧料等が挙げられる。

医薬品としては、経口剤、並びに、皮膚外用剤及び粘膜外用剤を含む外用剤（医薬部外品を含む）が挙げられる。経口剤の剤形としては、錠剤、被覆錠、糖衣錠、カプセル及び液剤等が挙げられ、外用剤の剤型としては、液剤（ローション剤、スプレー剤、エアゾール剤、及び乳液剤を含む）、フォーム剤、軟膏剤、クリーム剤、ジェル剤、貼付剤等が挙げられる。

これらの製品分類の中でも、皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）又は肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）をより一層高める観点から、好ましくは経口剤及び飲食品が挙げられる。

［４．用途］
本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤は、それぞれ、皮膚バリヤ機能を改善する効果（皮膚バリヤ機能改善）又は肌の状態を改善させる効果（肌状態改善効果）を目的とした用途に用いられる。

皮膚バリヤ機能改善剤の用途としては、皮膚乾燥改善用、経皮水分蒸散量抑制用、皮膚肥厚化抑制用が挙げられる。中でも、経皮水分蒸散量抑制用が好ましい。従って、皮膚バリヤ機能改善剤を摂取することにより肌の乾燥状態を改善（ドライスキンの改善）したり、肌の乾燥を予防（ドライスキンの予防）したり、肌の角層バリヤ機能を向上・改善したりする効果が期待できる。このような作用に伴い、乾燥による肌荒れの防止乃至改善作用も期待できる。
皮膚乾燥改善とは、例えば、皮膚の乾燥状態が続いた場合、潤いを補うために過剰分泌された皮脂が毛穴に詰まることで、皮膚表面に皮脂膜が形成されず、さらに乾燥が進行することを抑制するものである。
経皮水分蒸散量抑制とは、例えば、皮膚（肌）表面の水分蒸散量を抑制する効果を意味し、肌の保湿作用、または水分を保持する効果を含むものである。
皮膚肥厚化抑制とは、例えば、表皮及び／又は真皮及び／又は皮膚の皮下層（例えば、皮下脂肪又は筋肉）において、角質の厚みが増すことを抑制し、皮膚細胞のターンオーバーを促進するものである。

肌状態改善剤の用途としては、皮膚粘弾性改善又は低下抑制用、肌のシワ改善又は抑制用、肌のたるみ改善又は抑制用、肌のハリ及び弾力改善用が挙げられる。中でも、皮膚粘弾性改善又は抑制用または、肌のシワ改善又は抑制用が好ましい
皮膚粘弾性改善又は低下抑制とは、例えば、皮膚の粘弾性を改善や肌の柔軟性を改善、または、低下を抑制するものである。また、対象となる皮膚は、特に限定されず、例えば、顔面（例えば、額、頬、口元、目尻等）や、腕、肘、手の甲、指先、足、膝、脛、かかと、首、脇、背中等が挙げられる。
肌のシワ改善又は抑制とは、例えば、肌のシワの増加を抑制またはシワの減少を促進させることにより、外見上の肌の老化を防止するものである。
肌のたるみ改善又は抑制とは、例えば、加齢等により失われてしまった肌の張り回復、加齢等により生じてしまった肌のたるみ改善や抑制するものである。
肌のハリ及び弾力改善とは、例えば、皮下脂肪の肥厚やセルライトでハリの低下した肌のハリ改善効果や加齢に伴う肌の老化現象の抑制、紫外線や活性酸素により生じるシミ、肌の弾力改善するものである。

［５．用量］
本発明の皮膚バリヤ機能改善剤、及び肌状態改善剤が内用される場合、有効成分量が、例えば、０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ／日となる量で、１日に１～５回、内用することができる。

以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

［ＯＳ－１０１０株乾燥菌体粉末（死菌）の調製］
フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株を、Ｄｉｆｃｏ社製のＭＲＳ培地（前培養培地）３０ｍｌに植菌し、３０℃で２４時間、静置で拡大培養した。得られた培養液をＯＤ６６０が０.０２となるように、ＭＲＳ培地（本培養培地）１Lに植菌し、３０℃で１２時間、ｐＨ６．０～７．０で攪拌培養した。得られた培養液を遠心分離に供して菌体を回収した。回収した菌体を１Lの０.８５ｗ／ｗ％ＫＣｌ水溶液で洗浄した。洗浄した菌体を再度遠心分離に供し、菌体を回収した。回収した菌体を５０ｍｌの蒸留水に懸濁し、６５℃で３０分間殺菌後に凍結乾燥を行い。ＯＳ－１０１０株乾燥菌体粉末（死菌）を得た。ＯＳ－１０１０株乾燥菌体粉末（死菌）を用いて、錠剤を作成し、評価試験に用いた。

後述するＨＰＬＣ分析条件を用い、回収した乳酸菌粉末中のニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）及びニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）生産量を測定したところ、ＮＡＤ１重量部あたりのＮＭＮの比率は０．０３重量部（ＮＡＤ１モルあたりのＮＭＮの比率としては０．０６モル）であった。

（ＭＲＳ培地の組成）
２ｗ／ｗ％ グルコース
１ｗ／ｗ％ プロテアーゼペプトン
１ｗ／ｗ％ 牛肉エキス
０．５ｗ／ｗ％ 酵母エキス
０．２ｗ／ｗ％ クエン酸アンモニウム
０．１ｗ／ｗ％ Ｔｗｅｅｎ８０
０．５ｗ／ｗ％ 酢酸ナトリウム
０．０１ｗ／ｗ％ 硫酸マグネシウム
０．００５ｗ／ｗ％ 硫酸マンガン
０．２ｗ／ｗ％ リン酸水素二カリウム

（ＨＰＬＣ分析条件）
・ＮＭＮの測定方法
カラム：ＤａｉｓｏＰａｋ ＳＰ－１００－５－ＯＤＳ－Ｐ（４．６×１５０ｍｍ）×２本
カラム温度：２５℃
溶離液 ：７５ｍＭ リン酸アンモニウム水溶液（ｐＨ６．０）
流速 ：０．６ｍｌ／ｍｉｎ
検出器 ：ＵＶ検出器（２６０ｎｍ）
検出時間 ：１４．５分
・ＮＡＤの測定方法
カラム：ＤＡＩＳＯＰＡＫ ＳＰ－１００－５－ＯＤＳ－Ｐ（４．６×２５０ｍｍ）×２本
カラム温度：２５℃
溶離液 ：７５ｍＭ リン酸アンモニウム水溶液（ｐＨ６．０）：メタノール＝９５：５（ｗ：ｗ）
流速 ：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ：ＵＶ検出器（２６０ｎｍ）
検出時間 ：３３分

（ＮＭＮ及びＮＡＤの定量方法）
購入したＮＭＮ及びＮＡＤを標準試料として用いて検量線を作成し、ＯＳ－１０１０株乾燥菌体粉末（死菌）中のＮＭＮ及びＮＡＤの生産量をそのＨＬＰＣのピーク面積比から定量した。

ヒトに対する試験を実施して、フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株乾燥菌体粉末（死菌）を含有する錠剤の摂取による皮膚状態の改善効果ついて検証した。

（１）試験内容
本試験は、３０～５９歳の健常者男女６０名を対象にして行った。被験者を下記の２群にランダムに分けた。
(錠剤ａ) プラセボ群：プラセボ錠剤（即ち、フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株の乾燥菌体粉末（死菌）含まない錠剤）を摂取する群
（錠剤ｂ）ＯＳ－１０１０株摂取群（乳酸菌接種群）：フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株の乾燥菌体粉末（死菌）を含む錠剤を摂取する群（乳酸菌含有量 １２０億個/錠）を摂取する群

試験に用いた錠剤中の各組成は、次に記載する通りである。
プラセボ群が接種する錠剤は、錠剤aと、乳酸菌接種群が接種する錠剤は、錠剤bとした。錠剤ｂには、フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株の死菌体が１２０億個／錠含まれている。
プラセボ群、乳酸菌接種群のいずれの群でも被験者あたり、１日１錠、８週間摂取させた。錠剤の摂取前、摂取後８週で、経皮水分蒸散量、皮膚粘弾性、シワ面積率、総シワ平均深さ、最大シワ平均深さをそれぞれ測定した。

錠剤a（プラセボ群用）組成
デキストリン；１３２ｍｇ
粉末セルロース；１６ｍｇ
微粒二酸化ケイ素；４ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル；４ｍｇ
麦芽糖；２４ｍｇ
乳糖；２０ｍｇ
合計（１錠）；２００ｍｇ

錠剤ｂ（乳酸菌接種群用）組成
デキストリン；１２９ｍｇ
粉末セルロース；１６ｍｇ
微粒二酸化ケイ素；４ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル；４ｍｇ
麦芽糖；２４ｍｇ
乳糖；２０ｍｇ
フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株の乾燥菌体粉末（死菌）；３ｍｇ
合計（１錠）；２００ｍｇ

（２）実施例１： 経皮水分蒸散量に関する試験
Tewameter（株式会社インテグラル）を使用して、腕（前腕部内側）を対象に５回測定した。摂取前及び摂取８週後のそれぞれについて、被験者３０名の経皮水分蒸散量を測定し、各群の平均値を求めた。摂取前の平均値を１００とした場合の値を表１に示す。数値が低いほど効果が高いことを示す。

プラセボ群と比較し、乳酸菌摂取群では経皮水分蒸散量の増加が抑制されており、肌の乾燥状態を改善（ドライスキンの改善）や肌の乾燥を予防（ドライスキンの予防）等、皮膚のバリヤ機能が改善する効果のあることが確認された。

（３）実施例２：皮膚の粘弾性に関する試験
Cutometer（株式会社インテグラル）を用いて頬を対象に５回測定した。
摂取前及び摂取８週後のそれぞれについて、被験者３０名の粘弾性（Ｒ０；柔軟性、Ｒ２；総弾性、Ｒ５；正味の弾性、Ｒ７；回復弾性）を測定し、各群の平均値を求めた。摂取前の平均値を１００とした場合の値を表２に示す。数値が大きいほど効果が高いことを示す。

プラセボ群と比較し、乳酸菌摂取群ではＲ０（柔軟性）及びＲ７（回復弾性）が向上しており、乳酸菌株の摂取により、皮膚の弾力性を向上させ、肌のはり等を改善する効果があることが確認された。

（４）実施例３ 皮膚の粘弾性に関する試験（サブグループ解析）
実施例２の結果について、さらに摂取開始前の肌の皮脂量が中央値以上の被験者によるサブグループ解析を実施した。摂取前及び摂取８週後のそれぞれについて、被験者（プラセボ群：１７名、乳酸菌摂取群：１５名）の粘弾性（Ｒ０；柔軟性、Ｒ２；総弾性、Ｒ５；正味の弾性、Ｒ７；回復弾性）の平均値を基に、摂取前の平均値を１００とした場合の値を表３に示す。数値が大きいほど効果が高いことを示す。

プラセボ群と比較し、乳酸菌摂取群ではＲ２（総弾性）、Ｒ５（正味の弾性）及びＲ７（回復弾性）が向上しており、乳酸菌株の摂取により、皮膚の弾力性を向上させ、肌のはり等を改善する効果があることが確認された。

（５）実施例４：目尻シワに関する試験
PRIMOS（株式会社インテグラル）を使用して、目尻を対象に測定した。
摂取前及び摂取８週後のそれぞれについて、被験者３０名の目尻シワについて、シワ面積率、総シワ平均深さ、最大シワ平均深さを測定した。摂取前の平均値を１００とした場合の値を表４に示す。数値が小さいほど効果が高いことを示す。

プラセボ群と比較し、乳酸菌摂取群において、シワ面積率、総シワ平均深さ、最大シワ平均深さの全ての値が改善しており、ＯＳ－１０１０株の摂取により、皮膚のシワを改善する効果があることが確認された。

（５）実施例５；Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅアンケート
年齢が２０歳以上６４歳以下の健常な男性及び女性を被験者として以下の試験を実施した。以下に示す錠剤ｃを、被験者あたり、１日２錠、１２週間摂取させた。錠剤の摂取前、摂取後４週、８週、１２週で、肌状態に対する体感性について、Ｖｉｓｕａｌ Ａｎａｌｏｇｕｅ Ｓｃａｌｅ（以下ＶＡＳとする）アンケートに記入させた。

錠剤c（ＯＳ－１０１０株配合）組成
デキストリン；１２ｍｇ
粉末セルロース；２４ｍｇ
微粒二酸化ケイ素；４ｍｇ
ショ糖脂肪酸エステル；４ｍｇ
麦芽糖；４０ｍｇ
乳糖；１６ｍｇ
フルクトバシラス・フルクトサスＯＳ－１０１０株の乾燥菌体粉末（死菌）；１００ｍｇ
合計（１錠）；２００ｍｇ

ＶＡＳアンケート項目は「肌の調子」「肌のしっとり感（うるおい）」「肌のキメ」「目尻の小じわ」「肌のツヤ」「肌の透明感」「肌のハリ・弾力」の７項目とした。
ＶＡＳアンケートは、１００ｍｍ線分上に、左端が最も良い状態（症状なし）、右端が最も悪い状態（過去最大の症状）として被験者が自己の状態を記した位置の、左端からの距離（ｍｍ）であり、数字が小さいほど、良い評価となる。
図１にＶＡＳアンケートのスコア変化量を示す。
体感性に関するＶＡＳアンケートにおいて、乳酸菌摂取前と比較しスコアが低下しており、乳酸菌摂取による肌状態の体感の改善が確認された。

Claims (10)

1. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、皮膚乾燥改善剤。
2. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、経皮水分蒸散量抑制剤。
3. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、皮膚肥厚化抑制剤。
4. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、皮膚粘弾性改善又は低下抑制剤。
5. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、肌のシワ改善又は抑制剤。
6. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、肌のたるみ改善又は抑制剤。
7. フルクトバシラス・フルクトサス（Ｆｒｕｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｒｕｃｔｏｓｕｓ）ＯＳ－１０１０株（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０３８１８）乳酸菌を含有する、肌のハリ及び弾力改善剤。
8. 請求項１～７に記載のいずれかの剤を含む、飲食品。
9. 請求項１～７に記載のいずれかの剤を含む、化粧品。
10. 請求項１～７に記載のいずれかの剤を含む、医薬品。