JP7635554B2 - 容器、培養キット、核酸分析システム、及び細胞培養方法 - Google Patents

Description

本発明は、容器、培養キット、核酸分析システム、及び細胞培養方法に関するものである。

下記特許文献１には、メンブレンフィルターを用いて核酸を有する試料を捕集し、捕集した試料から核酸を抽出する核酸抽出方法が開示されている。メンブレンフィルターは、ファンネル及び濾過瓶を含む捕集部にセットされ、捕集部に注がれた試料を含む液体を濾過することで、試料を捕集する。

国際公開第２０１９／０４３７７９号

メンブレンフィルターは、試料を捕集した後、ピンセットなどで回収され、細胞培養用のペトリディッシュに移される。しかしながら、メンブレンフィルターをピンセットで摘まむ際、作業者のスキルによっては、メンブレンフィルターを誤って床などに落下させてしまう可能性がある。また、ピンセットを複数回使用すると、ピンセットに付着した試料が、他のメンブレンフィルターに付着し、コンタミネーションを発生させる虞がある。

本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、作業者のスキルに左右されず、コンタミネーションのリスクや操作ミスを抑制できる容器、培養キット、核酸分析システム、及び細胞培養方法の提供を目的とする。

（１）本発明の一態様に係る容器は、開口部を有する容器本体と、前記容器本体に着脱可能に取り付けられ、前記開口部を封止する蓋体と、前記蓋体に設けられ、前記容器本体の内部に向かって延びる軸体と、前記軸体に設けられ、フィルターを引っ掛けて前記軸体に固定するフィルター固定部と、を備える。

（２）上記（１）に記載された容器であって、前記フィルター固定部は、前記軸体が延びる軸方向以外の方向に延びる尖部を有してもよい。

（３）上記（１）に記載された容器であって、前記フィルター固定部は、スリットが形成されたスリット片を有してもよい。

（４）上記（１）～（３）のいずれかに記載された容器であって、前記軸体の周方向において前記フィルター固定部と異なる位置に設けられた第２のフィルター固定部を備えてもよい。

（５）上記（４）に記載された容器であって、前記第２のフィルター固定部は、前記軸体が延びる軸方向以外の方向に延びる尖部を有してもよい。

（６）上記（１）に記載された容器であって、前記尖部は、前記尖部が延びる方向以外の方向に延びる凸部を有してもよい。

（７）本発明の一態様に係る培養キットは、細胞を捕集するフィルターと、前記フィルター及び培養液が封入される上記（１）～（６）のいずれかに記載された容器と、を備える。

（８）本発明の一態様に係る核酸分析システムは、上記（１）～（６）のいずれかに記載された容器を用いて細胞を捕集し、該容器に培養液を封入して培養した細胞から核酸を抽出し、該抽出した核酸を分析する。

（９）本発明の一態様に係る核酸分析システムは、上記（７）に記載された培養キットを用いて捕集及び培養した細胞から核酸を抽出し、該抽出した核酸を分析する。

上記本発明の一態様によれば、作業者のスキルに左右されず、コンタミネーションのリスクや操作ミスを抑制できる容器、培養キット、核酸分析システムが得られる。

第１実施形態に係る核酸分析システムの概略図である。 第１実施形態に係る菌回収システムで使用する容器の縦断面図である。 図２に示す矢視ＩＩＩ－ＩＩＩ断面図である。 第１実施形態に係るサンプルの捕集から培養までの工程図である。 第１実施形態に係る菌回収システムの縦断面図である。 第１実施形態に係る菌回収システムから捕集フィルターを回収する様子を示す説明図である。 第１実施形態に係る捕集フィルターを回収した容器の縦断面図である。 図７に示す矢視ＶＩＩＩ－ＶＩＩＩ断面図である。 第２実施形態に係る容器の縦断面図である。 第２実施形態に係る軸体の縦断面図である。 第２実施形態に係る菌回収システムから捕集フィルターを回収する様子を示す説明図である。 図１１（ａ）に示す矢視Ａ図である。 第３実施形態に係る容器の縦断面図である。 図１３に示す矢視ＸＩＶ－ＸＩＶ断面図である。 第１実施形態の一変形例に係る容器の横断面図である。 第１実施形態の一変形例に係る容器の横断面図である。

以下、図面を参照して本発明の実施形態に係る容器、培養キット、核酸分析システムについて詳細に説明する。以下では、まず本発明の実施形態の概要について説明し、続いて本発明の実施形態の詳細について説明する。

〔概要〕
上述した特許文献１に記載されている核酸抽出方法は、メンブレンフィルター法により核酸を有する試料を捕集する。このメンブレンフィルター法では、フィルターファンネルと吸引システムとを使用し、フィルターファンネルにセットしたメンブレンフィルターに液体を通過させ、液体に含まれる微生物などの試料をメンブレンフィルターの表面に捕集する。

次に、ピンセットを使用して試料が捕集されたメンブレンフィルターをペトリディッシュに移し、ペトリディッシュの中で液体培地に浸した吸収パッドの上に載置する。そして、メンブレンフィルターを通して吸収パッドから吸い上げられた栄養分によって、メンブレンフィルターの表面の試料を増殖させる。

しかしながら、ピンセットでメンブレンフィルターを回収する際には、以下の課題がある。例えば、メンブレンフィルターをピンセットでつまむ際に、メンブレンフィルターを誤って落としてしまう可能性がある。また、ピンセットを複数回使用すると、ピンセットに付着した試料が、他のメンブレンフィルターに付着し、コンタミネーションを発生させる虞がある。また、メンブレンフィルターをピンセットでつまむ作業自体が煩雑である。

さらに、ペトリディッシュで試料を培養する際には、以下の課題がある。例えば、ペトリディッシュにおいて液体培養をする場合、培地の漏れを防ぐため、吸収パッドが必要になる。また、吸収パッドでの培養は、メンブレンフィルターが液体培地を吸い上げることから、試料に少しずつしか栄養分が供給されず、試料の増殖に時間がかかる。
また、後述するように、液体を分析するシステムを用いて、液体のサンプルに菌（細菌や真菌）が含まれているかを分析する場合には、メンブレンフィルターにより捕集した試料、あるいはその試料を培養により増殖させた培養物が含まれた液体をサンプルとして分析することが望ましい。しかしながら、前述のように培地の漏れを防ぐために吸収パッドなどを用いた場合には、メンブレンフィルター表面、あるいは吸収パッドに吸収された培地に含まれる試料、あるいはその培養物を液体に含まれる状態で回収することが困難であった。そこで、培地の漏れが生じることなく、捕集した試料の培養物が液中で培養されるように培地中にメンブレンフィルターを保持する容器、あるいはそれを用いた培養キットが望まれていた。

本発明の実施形態は、容器、培養キット、核酸分析システムにおいて、軸体にフィルター固定部を設け、細胞が付着した捕集フィルターを当該軸体に引っ掛け、軸体に巻き付けて回収する。そして、捕集フィルターが巻き付いた軸体を、培養液が封入された容器に収めて培養する。これにより、作業者のスキルに左右されず、コンタミネーションのリスクや操作ミスを抑制することができる。また、捕集フィルターを用いた液体培地において、効率的な培養が可能となる。さらに、捕集フィルターを含む液体培地を振盪することにより、効率的な培養が可能となる。

〔第１実施形態〕
図１は、第１実施形態に係る核酸分析システム１の概略図である。
図１に示すように、核酸分析システム１は、菌回収システム２と、核酸抽出システム３と、ハイブリダイズ反応システム４と、検出システム５と、を備えている。

菌回収システム２は、サンプル１００から、サンプル１００に含まれている菌（細菌や真菌など）を回収するシステムである。サンプル１００は、例えば、飲料を対象とした検査であれば、製造した飲料や、当該飲料を製造するための水、または、当該飲料を製造する過程の液体などである。あるいは、サンプル１００は、製造環境の菌の汚染の有無、汚染度合いを検査するために、検査環境をふき取った綿棒などから菌を回収した液体である場合もある。

菌は、例えば、回収した液体に加圧あるいは減圧を加えることで、後述する捕集フィルターで濾過して回収することができる。捕集フィルターは、例えば、細菌や真菌を回収する場合には、孔径が０．２２μｍ～０．４５μｍのメンブレンフィルターであるとよい。捕集フィルターで菌を回収した後は、捕集フィルターを菌が培養される培養液に浸し、菌が培養された培養液を、次工程（核酸抽出システム３）のサンプル１００としてもよい。あるいは菌を遠心分離などで集めた液体、あるいは遠心分離などで集めた凝集体を溶解した液体を、次工程のサンプル１００としてもよい。あるいは捕集フィルターを入れた液体を振動させ、菌が懸濁した液を次工程のサンプル１００としてもよい。

核酸抽出システム３は、サンプル１００中の細胞の膜構造を破壊（溶解）し、細胞の核酸を抽出するシステムである。なお、核酸を抽出したサンプル１００に、抽出した核酸と反応する他の核酸が含まれた液体を混ぜてもよい。また、当該他の核酸は、後述する検出工程（検出システム５）にて検出するために、特定の条件で蛍光や発光や消光作用を有する部位が付与された核酸であってもよい。これらは核酸抽出システム３にて処理をする前のサンプル１００に混ぜても良いし、核酸抽出システム３にて処理をした後のサンプル１００に対して混ぜても良い。

ハイブリダイズ反応システム４は、サンプル１００中の核酸にハイブリダイズ反応をさせるシステムである。なお、この工程にて、サンプル１００は、例えば６０℃に加熱されると共に撹拌されることにより、上述の他の核酸と合致するハイブリダイズ反応を行う。この反応にて、例えば、上述の他の核酸に付与した特定の条件で蛍光や発光や消光作用を有する部位が、サンプル１００中の核酸と反応することで、蛍光や発光や消光作用が発現する。

なお、上述の他の核酸の構造を、特定の核酸と反応するように設計することにより、例えば、サンプル１００中の特定の細菌や真菌などが持つ核酸とのみ反応させることができる。つまり、ハイブリダイズ反応システム４の処理では、当該特定の核酸と反応する他の核酸を用いることにより、サンプル１００の中に特定の細菌や真菌などが含まれている時のみ、他の核酸に付与した蛍光や発光や消光作用を発現するようにすることができる。

検出システム５は、ハイブリダイズ反応システム４で処理したサンプル１００において発現した蛍光や発光や消光作用の有無、その程度などを検出する。検出システム５は、例えば、サンプル１００の核酸で発現した蛍光作用を、励起レーザー光にて励起し、励起後の蛍光を高感度カメラにて検出する。

あるいは、検出システム５は、サンプル１００の核酸で発現した発光作用を、高感度カメラにて検出する。あるいは、検出システム５は、サンプル１００の核酸で発現した消光作用を、消光作用を付与した部位の近傍に付与した蛍光や発光が消光される程度を高感度カメラにて検出する。この検出方法に関しては、例えば、特開２０２０－７４７２６号公報に記載されているような方法を採用してもよい。

核酸分析システム１は、上述のような一連のシステムを用いることにより、サンプル１００の中に特定の菌（細菌や真菌など）が含まれているか、またはその濃度を分析する。

図２は、第１実施形態に係る菌回収システム２で使用する容器１０の縦断面図である。図３は、図２に示す矢視ＩＩＩ－ＩＩＩ断面図である。
これらの図に示すように、容器１０は、容器本体２０と、蓋体３０と、軸体４０と、フィルター固定部５０と、を備えている。

図２に示すように、容器本体２０は、有底筒状に形成されている。また、蓋体３０は、有頂筒状に形成されている。容器本体２０と蓋体３０の中心軸Ｏは、互いに一致している。また、軸体４０は、中心軸Ｏに沿って延びている。以下の説明において、中心軸Ｏが延びる方向は、軸方向という。また、軸方向から見た平面視において、中心軸Ｏに交差する方向は、径方向という。また、中心軸Ｏ回りに周回する方向は、周方向という。

容器本体２０は、上端に開口部２０ａを有する。容器本体２０は、胴部２１と、底部２２と、を備えている。胴部２１は、一定の内径及び外径で軸方向に延びている。底部２２は、半球状に形成され、胴部２１の下端に連設されている。なお、底部２２は、例えば、逆さ円錐状に形成されていても構わない。また、底部２２は、当該逆さ円錐状の先端が半球状などの曲面となっていても構わない。また、胴部２１は、一定の外径ではなく、下端に向かうに従って内径及び外径が僅かに小さくなる傾斜形状を有しても構わない。

蓋体３０は、容器本体２０に着脱可能に取り付けられ、開口部２０ａを封止する。蓋体３０は、頂壁３１と、周壁３２と、を備えている。周壁３２は、円筒状に形成され、容器本体２０の上端部の外周面に着脱可能に係合している。なお、周壁３２の内壁面には、例えば、容器本体２０の上端部の外周面に図示しない雄ねじが形成されていた場合、当該雄ねじに螺合する図示しない雌ねじが形成されていてもよい。あるいは、図示とは逆に、蓋体３０の周壁３２が、容器本体２０の開口部２０ａの内側に入るような構成であっても構わない。また、その場合、容器本体２０の上端部の内周面に、図示しない雌ねじが形成され、当該雌ねじに螺合する図示しない雄ねじが、周壁３２の外壁面に形成されていても良い。

頂壁３１は、円板状に形成されると共に周壁３２の上端に連設され、周壁３２の上端開口を閉塞する。頂壁３１の下面３１ａ（蓋体３０の内面）には、軸体４０が嵌合する嵌合孔３３が形成されている。嵌合孔３３は、頂壁３１の径方向における中心位置に形成されている。なお、蓋体３０と軸体４０は、別部品が嵌合により組み合わされるものではなく、一体であっても構わない。

軸体４０は、蓋体３０に設けられ、容器本体２０の内部に向かって直線状に延びている。軸体４０の上端部４１は、蓋体３０の嵌合孔３３に嵌合している。一方、軸体４０の下端部４２は、容器本体２０の底部２２に接触しないが、底部２２の近傍まで延びている。軸体４０は、例えば、中実のシャフトである。軸体４０は、一定の外径の円柱状に形成されている。あるいは、軸体４０は、円柱以外の棒状に形成されていても構わない。

フィルター固定部５０は、軸体４０に設けられている。フィルター固定部５０は、軸体４０の周囲に後述する捕集フィルター１０１（図６及び図７参照）を引っ掛けて固定する尖部５１を有する。尖部５１は、図３に示すように、軸体４０の周面４０ａから突出して設けられている。

尖部５１は、中心軸Ｏに対し直角に交わる径方向に延びている。尖部５１は、径方向外側に向かうに従って先細りになる円錐状に形成されている。なお、尖部５１は、先端部だけが尖った針状に形成されていても構わない。また、尖部５１は、軸体４０が延びる軸方向以外の方向であれば、例えば、中心軸Ｏに対し鋭角や鈍角で交わる、斜め方向に延びていても構わない。

尖部５１は、さらに、尖部５１が延びる方向以外の方向に延びる凸部５２を有している。凸部５２は、円錐状の尖部５１の斜面の略中腹部から、尖部５１が延びる方向と直交する方向に延びる板状に形成されている。なお、凸部５２は、尖部５１が延びる方向（径方向）以外の方向であれば、尖部５１に対しＬ字状に屈曲したエルボ形状であってもよいし、釣り針のようなフック形状であっても構わない。図３に示す凸部５２は、径方向において一定の厚みを有する板形状である。凸部５２は、図２に示すように、尖部５１が延びる方向から視て円板状に形成されている。

第１実施形態において、軸体４０、尖部５１、及び凸部５２は、一体成形品であるが、別部品が嵌合などにより組み合わされるものであっても構わない。例えば、凸部５２は、尖部５１に対し串刺し状に嵌合するリング部材であってもよい。また、尖部５１は、軸体４０の周面４０ａに植設された円錐部材、あるいは三角板などの板部材であってもよく、若しくは、三角錐、四面体などの角錐部材であってもよい。

図３に示すように、軸体４０の周面４０ａには、周方向においてフィルター固定部５０と異なる位置に、第２のフィルター固定部６０が設けられている。第２のフィルター固定部６０は、尖部６１及び凸部６２を有し、上述したフィルター固定部５０と同様の構成となっている。第２のフィルター固定部６０は、軸方向から見た平面視において、中心軸Ｏを中心に、フィルター固定部５０と点対称の位置関係を有している。なお、第２のフィルター固定部６０は、周方向においてフィルター固定部５０と異なる配置であれば、この位置関係に限定されない。

次に、上述した容器１０を使用した捕集フィルター１０１の回収方法及び細胞培養方法について説明する。
図４は、第１実施形態に係るサンプル１００の捕集から培養までの工程図である。図５は、第１実施形態に係る菌回収システム２の縦断面図である。図６は、第１実施形態に係る菌回収システム２から捕集フィルター１０１を回収する様子を示す説明図である。

先ず、図５を参照して、菌回収システム２の構成について説明する。図５に示すように、菌回収システム２は、捕集フィルター１０１を上下で挟み込むフィルター下部７０及びフィルター上部８０を備えている。捕集フィルター１０１は、平面視で円形に形成されている。フィルター下部７０及びフィルター上部８０は、捕集フィルター１０１の中心を通る中心軸Ｏ１を共通軸として、当該中心軸Ｏ１が延びる軸方向に、連結部９０を介して連結されている。

フィルター下部７０は、有底筒状の濾過液回収容器７１と、濾過液回収容器７１の上端開口に装着されたベースプレート７２と、を備えている。なお、濾過液回収容器７１とベースプレート７２は、一体となっていても構わない。濾過液回収容器７１の側壁には、吸引ポート７１ａが設けられている。吸引ポート７１ａには、減圧吸引チューブ７３が接続されている。減圧吸引チューブ７３には、図示しない真空ポンプなどの吸引装置本体が接続されている。

ベースプレート７２には、濾過液回収容器７１の内部に連通する複数の貫通孔７２ａが形成されている。複数の貫通孔７２ａの一部には、拡径部７２ｂが形成されている。拡径部７２ｂは、貫通孔７２ａよりも口径が広くなった溝である。拡径部７２ｂは、上述したフィルター固定部５０及び第２のフィルター固定部６０の尖部５１，６１及び凸部５２，６２が挿入可能な口径及び深さを有している。なお、拡径部７２ｂは、貫通孔７２ａとは連通しない独立した溝として、ベースプレート７２の上面に形成されていても構わない。

ベースプレート７２の上面には、複数の貫通孔７２ａ及び拡径部７２ｂの周囲を取り囲むフィルター位置決め部７２ｃが形成されている。図５に示すフィルター位置決め部７２ｃは、中心軸Ｏ１を中心とする環状に設けられている。また、フィルター位置決め部７２ｃは、捕集フィルター１０１の外径よりも僅かに大きい内径を有する。

フィルター位置決め部７２ｃは、ベースプレート７２の上面に対し、捕集フィルター１０１の厚み以上の高さで設けられた環状突起である。なお、フィルター位置決め部７２ｃは、中心軸Ｏ１を中心とする周方向に円環として形成されていても良いし、円環として形成されておらず、周方向に間隔をあけて複数設けられた突起群であってもよい。また、フィルター位置決め部７２ｃは、ベースプレート７２の上面に対し、相対的に凹んだ溝であっても構わない。

フィルター上部８０は、中心軸Ｏ１が延びる軸方向に貫通する貫通孔８１ａが形成されたサポートプレート８１と、サポートプレート８１に取り付けられ、内部が貫通孔８１ａに連通する筒状のサンプル注入部８２と、を備えている。サポートプレート８１の貫通孔８１ａは、ベースプレート７２の複数の貫通孔７２ａのそれぞれと捕集フィルター１０１を挟んで対向して配置されている。

サポートプレート８１の下面には、捕集フィルター１０１の外周縁をベースプレート７２の上面に押え付ける封止部が配置されている。封止部は、例えば、サポートプレート８１上に設けられた環状の凸部であっても良いし、サポートプレート８１より弾性率の低い管状の凸部であっても良い。あるいは、封止部は、本実施形態のように、サポートプレート８１の下面の溝部に配設されたＯリング８３であっても良い。Ｏリング８３は、ベースプレート７２のフィルター位置決め部７２ｃの径方向内側に配置されている。Ｏリング８３は、ベースプレート７２とサポートプレート８１との間に挟まれ、フィルター下部７０とフィルター上部８０との連結部分からのサンプル１００の漏れが無いように隙間をシールする。なお、Ｏリング８３は、サポートプレート８１側ではなく、ベースプレート７２側に設けられていても構わない。

サンプル注入部８２は、円筒状に形成されている。なお、サンプル注入部８２は、ファンネル状（漏斗状）に形成されていても構わない。サンプル注入部８２の内部は、サポートプレート８１の貫通孔８１ａに連通している。また、サンプル注入部８２は、サポートプレート８１と一体となっていてもかなわない。

連結部９０は、例えば、ベースプレート７２及びサポートプレート８１のいずれか一方に設けられた図示しない雄ねじ部と、ベースプレート７２及びサポートプレート８１の他方に設けられた図示しない雌ねじ部と、を含む。この連結部９０によれば、ベースプレート７２とサポートプレート８１とを相対的に回転させることで、フィルター下部７０とフィルター上部８０とを連結できる。なお、連結部９０は、マグネットを有し、ベースプレート７２とサポートプレート８１とを磁力により連結してもよい。

上記構成の菌回収システム２によるサンプル１００のフィルタリング（図４に示すステップＳ１）は、次のように行う。先ず、サンプル注入部８２にサンプル１００を入れる。次に、減圧吸引チューブ７３によって濾過液回収容器７１の内部を減圧する。そうすると、サンプル注入部８２に入れられたサンプル１００が、濾過液回収容器７１の減圧によって、捕集フィルター１０１を通過し、その液体分が濾過液回収容器７１に濾過液１０２として回収される。その際に、サンプル１００中の混濁物（固体分）は、捕集フィルター１０１の濾過径に応じて捕集フィルター１０１にトラップ（捕集）される。

次に、フィルタリング後の捕集フィルター１０１の回収方法について説明する。先ず、図６（ａ）に示すように、菌回収システム２のフィルター上部８０を取り外した状態とする。なお、この際に、必要に応じて連結部９０も取り外すとよい。

次に、上述した図２に示す容器１０から蓋体３０を取り外すと共に当該蓋体３０を把持し、図６（ａ）に示すように、軸体４０に設けられたフィルター固定部５０を、捕集フィルター１０１に押し付け、捕集フィルター１０１に引っ掛ける（ステップＳ２）。具体的には、軸体４０の尖部５１を捕集フィルター１０１に突き刺すことにより、捕集フィルター１０１の一端部を軸体４０に固定（ホック）する。

次に、図６（ｂ）及び図６（ｃ）に示すように、軸体４０を回転させ、軸体４０に捕集フィルター１０１を巻き付ける（ステップＳ３）。具体的には、軸体４０をベースプレート７２に近接させた状態で回転させながら捕集フィルター１０１を丸めていく。その後、捕集フィルター１０１の他端部（尖部５１を突き刺した端部と反対側の端部）まで丸めたら、上述した尖部５１あるいは、別途設けた尖部６１によって捕集フィルター１０１を突き刺すことにより、捕集フィルター１０１の他端部を軸体４０に固定する。なお、捕集フィルター１０１のサイズによって、軸体４０に対する巻き数は異なるため、適時好適な巻き数にて巻けばよい。

ここで、尖部５１，６１には、凸部５２，６２が設けられているため、突き刺した捕集フィルター１０１の落下や巻き戻しを抑制できる。また、ベースプレート７２には、拡径部７２ｂが設けられているため、尖部５１，６１及び凸部５２，６２を含むフィルター固定部５０あるいは第２のフィルター固定部６０が、捕集フィルター１０１を貫通し易くなる。また、図６では、尖部６１に捕集フィルター１０１を刺した例を示したが、尖部６１に捕集フィルター１０１を刺す際に拡径部７２ｂが無い場合、尖部６１には必ずしも捕集フィルター１０１を刺さなくても構わない。

図７は、第１実施形態に係る捕集フィルター１０１を回収した容器１０の縦断面図である。図８は、図７に示す矢視ＶＩＩＩ－ＶＩＩＩ断面図である。
図７に示す容器１０には、培養液１０３が入れられている。培養液１０３は、液体培地であって捕集フィルター１０１が捕集した細菌や真菌を培養するための栄養源となる。なお、培養液１０３は、捕集フィルター１０１と容器１０とを含む培養キット１１に含まれていても良いし、培養キット１１と別に用意する構成であっても構わない。

上述したように捕集フィルター１０１を回収したら、容器本体２０に培養液１０３（液体培地）を添加する（ステップＳ４）。次に、培養液１０３を入れた状態の容器本体２０に、捕集フィルター１０１が巻き付いた軸体４０を挿入し、蓋体３０で開口部２０ａを封止する（ステップＳ５）。そして、捕集フィルター１０１を収容した図７に示す容器１０を振盪培養器にかけ、捕集した細菌や真菌を振盪培養する（ステップＳ６）。あるいは一定温度に保たれた培養器に入れ、静置培養を行っても良い。以上により、菌回収システム２におけるサンプル１００のフィルタリング、及び捕集フィルター１０１の回収から細胞培養までが終了する。

上述したように、第１実施形態の容器１０によれば、軸体４０にフィルター固定部５０を設けられているため、細胞が付着した捕集フィルター１０１を軸体４０に引っ掛け、軸体４０に巻き付けて回収することができる。このように、作業者は、簡単な操作で捕集フィルター１０１を回収することができる。そこで、捕集フィルター１０１を培養のための容器１０に入れる際に、誤って捕集フィルター１０１を培養のための容器１０以外の作業者が意図しない部位に触れさせてしまい、捕集フィルター１０１に、意図しない部位に付着した菌などを付着させてしまうコンタミネーションの発生を抑制することができる。また、フィルター固定部５０があることで、作業者のスキルに左右されずに、捕集フィルター１０１の落下を抑制できる。また、軸体４０を容器本体２０に挿入したままで、振盪培養することが可能となり、振盪培養中に培養液が容器本体２０からこぼれるリスクや、外部から意図しない菌などが混入するコンタミネーションのリスクが低くなる。

このように、上述した第１実施形態の容器１０は、開口部２０ａを有する容器本体２０と、容器本体２０に着脱可能に取り付けられ、開口部２０ａを封止する蓋体３０と、蓋体３０に設けられ、容器本体２０の内部に向かって延びる軸体４０と、軸体４０に設けられ、捕集フィルター１０１を引っ掛けて軸体４０に固定するフィルター固定部５０と、を備える。この構成によれば、作業者のスキルに左右されず、コンタミネーションのリスクや操作ミスを抑制することができる。

また、本実施形態では、フィルター固定部５０は、軸体４０が延びる軸方向以外の方向に延びる尖部５１を有する。この構成によれば、軸体４０の尖部５１を捕集フィルター１０１に突き刺すことにより、捕集フィルター１０１を容易に固定（ホック）できる。

また、本実施形態では、軸体４０の周方向においてフィルター固定部５０と異なる位置に設けられた第２のフィルター固定部６０を備える。この構成によれば、捕集フィルター１０１の巻き始めと巻き終えの位置に、フィルター固定部５０が位置していなくても、第２のフィルター固定部６０によって捕集フィルター１０１を突き刺し、捕集フィルター１０１の巻き戻しを抑制できる。

また、本実施形態では、第２のフィルター固定部６０は、軸体４０が延びる軸方向以外の方向に延びる尖部６１を有する。この構成によれば、軸体４０の尖部６１を捕集フィルター１０１に突き刺すことにより、捕集フィルター１０１の巻き戻しをより確実に抑制できる。

また、本実施形態では、尖部５１，６１は、尖部５１，６１が延びる方向以外の方向に延びる凸部５２，６２を有する。この構成によれば、尖部５１，６１に突き刺された捕集フィルター１０１が凸部５２，６２に引っ掛かるため、捕集フィルター１０１の落下のリスクが低くなる。また、図８に示すように、例えば凸部６２が、捕集フィルター１０１の巻きによる重なる部分に隙間を形成するスペーサ的な役割を果たすことで、巻き取られた捕集フィルター１０１の隙間にも培養液１０３の流れを形成できるようになり、細胞培養を効果的に行えるようになる。
このような目的に鑑み、前述の例では凸部５２，６２は、それぞれ尖部５１，６１に１つ形成された例を示したが、凸部５２，６２はそれぞれに１つである必要は無く、尖部５１，６１に複数の凸部５２，６２を形成する構成としても良い。

また、本実施形態の培養キット１１は、細胞を捕集する捕集フィルター１０１と、捕集フィルター１０１及び培養液１０３が封入される容器１０と、を備える。この構成によれば、容器１０に捕集フィルター１０１を収容し、細胞培養が可能となる。

また、本実施形態の核酸分析システム１は、上記容器１０を用いて細胞を捕集し、該容器１０に培養液を封入し培養した細胞、若しくは、上記培養キット１１を用いて捕集及び培養した細胞から核酸を抽出し、該抽出した核酸を分析する。この構成によれば、コンタミネーションのリスクが低くなっているため、核酸の分析精度が向上する。

また、本実施形態の捕集フィルター回収方法は、細胞が付着した捕集フィルター１０１を、軸体４０に引っ掛け、軸体４０に巻き付けて回収する。この構成によれば、作業者のスキルに左右されず、コンタミネーションのリスクや操作ミスを抑制することができる。

また、本実施形態の細胞培養方法は、細胞が付着した捕集フィルター１０１を、軸体４０に引っ掛け、軸体４０に巻き付けて回収し、捕集フィルター１０１が巻き付いた軸体４０を培養液１０３に漬け、細胞を振盪培養する。作業者のスキルに左右されず、コンタミネーションのリスクや操作ミスを抑制することができる。また、捕集フィルター１０１に付着した細胞の効率的な振盪培養が可能となる。

〔第２実施形態〕
次に、本発明の第２実施形態について説明する。以下の説明において、上述の実施形態と同一又は同等の構成については同一の符号を付し、その説明を簡略若しくは省略する。

図９は、第２実施形態に係る容器１０の縦断面図である。図１０は、第２実施形態に係る軸体４０の縦断面図である。
図９に示すように、第２実施形態のフィルター固定部５０は、スリット５３ａが形成されたスリット片５３を有している。

スリット片５３は、例えば、弾性変形可能なフィルム部材であって、軸体４０の周面４０ａに取り付けられている。軸体４０の周面４０ａには、図１０に示すように、スリット片５３の径方向の厚みに応じた深さを有する取付溝４０ｂが形成されている。取付溝４０ｂには、底面から径方向に立ち上がった複数の圧入ピン４３が、軸方向に間隔をあけて複数形成されている。圧入ピン４３は、図９に示すように、スリット片５３に設けられた取付孔５３ｂに圧入され、スリット片５３を軸体４０に固定する。

スリット片５３は、軸体４０から周面４０ａの接線方向に沿って延びている。スリット片５３の接線方向に延びた先端部には、軸方向に間隔をあけて複数のスリット５３ａが形成されている。複数のスリット５３ａは、スリット片５３の先端部からスリット片５３の固定位置に向かって平行に延びている。第２実施形態のスリット５３ａは、２本平行に形成され、スリット片５３の先端部を弾性変形可能な３つの舌部に分離している。以下、２本のスリット５３ａの軸方向外側に配置された一対の舌部を、第１の舌部５３Ａという。また、２本のスリット５３ａに挟まれた舌部を、第２の舌部５３Ｂという。

図１１は、第２実施形態に係る菌回収システム２から捕集フィルター１０１を回収する様子を示す説明図である。図１２は、図１１（ａ）に示す矢視Ａ図である。
図１１（ａ）及び図１２に示すように、第２実施形態では、スリット片５３のスリット５３ａに、捕集フィルター１０１の端部を引っ掛けて、捕集フィルター１０１を回収する。

具体的には、図１２に示すように、スリット片５３の２本のスリット５３ａに捕集フィルター１０１の端部を差し込む。そして、２本のスリット５３ａで分離した第１の舌部５３Ａと第２の舌部５３Ｂとで、捕集フィルター１０１の端部を挟み込む。なお、第２の舌部５３Ｂを捕集フィルター１０１の下に差し込み易くするために、第２の舌部５３Ｂの長さを第１の舌部５３Ａよりも長くしてもよい。また、第２の舌部５３Ｂを捕集フィルター１０１の下に差し込み易くするために、第１の舌部５３Ａは予め上向きに曲がって（例えばカールして）いてもよい。

次に、図１１（ｂ）に示すように、軸体４０に固定（ホック）した捕集フィルター１０１を持ち上げて、上述した第１実施形態と同様に、軸体４０を回転させ、軸体４０に捕集フィルター１０１を巻き付ける。その後、捕集フィルター１０１の他端部（スリット５３ａに差し込んだ端部と反対側の端部）まで丸めたら、上述した尖部６１によって捕集フィルター１０１を突き刺すことにより、捕集フィルター１０１の他端部を軸体４０に固定する。

このように第２実施形態のフィルター固定部５０は、スリット５３ａが形成されたスリット片５３を有する。この構成によれば、スリット５３ａに捕集フィルター１０１の端部を挟んで固定することにより、上述した第１実施形態と同様に捕集フィルター１０１を丸めながら回収することが可能となる。よって、上述した第１実施形態に記載した同様の効果を得ることができる。

〔第３実施形態〕
次に、本発明の第３実施形態について説明する。以下の説明において、上述の実施形態と同一又は同等の構成については同一の符号を付し、その説明を簡略若しくは省略する。

図１３は、第３実施形態に係る容器１０の縦断面図である。図１４は、図１３に示す矢視ＸＩＶ－ＸＩＶ断面図である。
図１３に示すように、第３実施形態では、フィルター固定部５０及び第２のフィルター固定部６０が、軸体４０の周面４０ａに軸方向に間隔をあけて複数形成されている。なお、図１３，１４に図示した第３実施形態の尖部５１，６１は、上述した凸部５２，６２を有していないが、上述した凸部５２，６２を有していても構わない。

また、第３実施形態の軸体４０は、中空軸である。軸体４０には、上端部４１から下端部４２まで貫通する中空空間４４が形成されている。また、軸体４０の周面４０ａには、複数の貫通孔４５が形成されている。貫通孔４５は、軸体４０の中空空間４４と連通している。貫通孔４５は、軸体４０の軸方向に間隔をあけて複数形成されている。また、貫通孔４５は、図１４に示すように、軸体４０の周方向において異なる二カ所に形成されている。

上記構成の第３実施形態によれば、軸体４０の下端部４２から中空空間４４に入った培養液１０３を、軸体４０の貫通孔４５から流出させることができる。これにより、軸体４０に巻き付けた捕集フィルター１０１に対して径方向内側からも培養液１０３を供給でき、捕集フィルター１０１に付着した細胞の効率的な振盪培養が可能となる。

以上、図面を参照しながら本発明の好適な実施形態について説明したが、本発明は上記実施形態に限定されるものではない。上述した実施形態において示した各構成部材の諸形状や組み合わせ等は一例であって、本発明の主旨から逸脱しない範囲において設計要求等に基づき種々変更可能である。

例えば、図１５及び図１６に示すような変形例を採用してもよい。

図１５は、第１実施形態の一変形例に係る容器１０の横断面図である。
図１５に示すように、尖部５１，６１は、軸体４０の中心軸Ｏに対し直角に交わる径方向ではない斜め方向（例えば、軸体４０の接線方向）に伸びていても構わない。

図１６は、第１実施形態の一変形例に係る容器１０の横断面図である。
図１６に示すように、尖部５１，６１は、軸体４０の中心軸Ｏに対し直角に交わる径方向に直線状に延びておらず、軸体４０の周方向に湾曲して伸びていても構わない。

１ 核酸分析システム
１０ 容器
１１ 培養キット
２０ 容器本体
２０ａ 開口部
３０ 蓋体
４０ 軸体
５０ フィルター固定部
５１ 尖部
５２ 凸部
６１ 尖部
６２ 凸部
１００ サンプル
１０１ 捕集フィルター（フィルター）
１０３ 培養液

Claims (10)

1. 開口部を有する容器本体と、
   前記容器本体に着脱可能に取り付けられ、前記開口部を封止する蓋体と、
   前記蓋体に設けられ、前記容器本体の内部に向かって延びる軸体と、
   前記軸体の周面に設けられ、前記軸体に巻き付け固定されるフィルターを引っ掛ける引っ掛け部を有するフィルター固定部と、を備える、容器。
2. 前記引っ掛け部は、前記軸体が延びる軸方向以外の方向に延びる尖部である、請求項１に記載の容器。
3. 前記引っ掛け部は、スリットが形成されたスリット片である、請求項１に記載の容器。
4. 前記軸体の周方向において前記フィルター固定部と異なる位置に設けられた第２のフィルター固定部を備える、請求項１～３のいずれか一項に記載の容器。
5. 前記第２のフィルター固定部は、前記軸体が延びる軸方向以外の方向に延びる尖部を有する、請求項４に記載の容器。
6. 前記尖部は、前記尖部が延びる方向以外の方向に延びる凸部を有する、請求項２または５に記載の容器。
7. 細胞を捕集するフィルターと、
   前記フィルター及び培養液が封入される請求項１～６のいずれか一項に記載の容器と、
   を備える、培養キット。
8. 請求項１～６のいずれか一項に記載の容器を用いて細胞を捕集し、該容器に培養液を封入して培養した細胞から核酸を抽出し、該抽出した核酸を分析する、核酸分析システム。
9. 請求項７に記載の培養キットを用いて捕集及び培養した細胞から核酸を抽出し、該抽出した核酸を分析する、核酸分析システム。
10. 請求項１～６のいずれか一項に記載の容器から取り外された前記蓋体に設けられた前記軸体の前記引っ掛け部に前記フィルターを引っ掛け、前記軸体を回転させて前記フィルターを前記軸体に巻き付け固定し、
    培養液が添加された前記容器本体に、前記フィルターが巻き付け固定された前記軸体を挿入して前記蓋体で前記容器本体の前記開口部を封止して前記フィルターに捕集された細胞を培養する、
    細胞培養方法。

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