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JP7170691B2 - 抗ｌａｇ３抗体およびその使用 - Google Patents

抗ｌａｇ３抗体およびその使用 Download PDF

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Description

発明の分野
本発明は、免疫調節性受容体であるリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）タンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片、ならびにこれらの抗体を使用する治療方法および診断方法に関する。
配列表
配列表の公式のコピーは、ファイル名「２０１６＿１０＿０７＿１０１７６ＷＯ０１＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」、作成日２０１６年１０月７日および約２４０キロバイトのサイズのＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に本明細書と同時に提出される。このＡＳＣＩＩフォーマットの書類に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参考として本明細書に援用される。
Ｔ細胞共刺激性分子およびＴ細胞共阻害性分子（まとめて、共シグナル伝達分子と名付けられる）は、Ｔ細胞の活性化、サブセットの分化、エフェクター機能、および生存の調節において、極めて重要な役割を果たす（Ｃｈｅｎら、２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３巻：２２７～２４２頁）。Ｔ細胞受容体が、抗原提示細胞上の、同族ペプチド－ＭＨＣ複合体を認識した後、共シグナル伝達受容体が、Ｔ細胞受容体と共に、免疫シナプスに共局在化し、そこで、これらの受容体は、ＴＣＲによるシグナル伝達と相乗作用して、Ｔ細胞の活性化および機能を促進または阻害する（Ｆｌｉｅｓら、２０１１年、Ｙａｌｅ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ．、８４巻：４０９～４２１頁）。最終的な免疫応答は、共刺激性シグナルと、共阻害性シグナル（「免疫チェックポイント」）との平衡により調節される（Ｐａｒｄｏｌｌ、２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ、１２巻：２５２～２６４頁）。リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）は、末梢性Ｔ細胞寛容の媒介において、１つのこのような「免疫チェックポイント」として機能する。
ＬＡＧ３（ＣＤ２２３ともまた呼ばれる）とは、活性化したＣＤ４ Ｔ細胞上およびＣＤ８ Ｔ細胞上、γδＴ細胞上、ナチュラルキラーＴ細胞上、Ｂ細胞上、ナチュラルキラー細胞上、形質細胞様樹状細胞上、および調節性Ｔ細胞上で発現する、５０３アミノ酸の膜貫通タンパク質受容体である。ＬＡＧ３は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。ＬＡＧ３の主要機能は、免疫応答を弱めることである。ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩ分子への結合は、ＬＡＧ３発現細胞への、負のシグナルの送達を結果としてもたらし、抗原依存性のＣＤ４ Ｔ細胞応答およびＣＤ８ Ｔ細胞応答を下方調節する。ＬＡＧ３は、Ｔ細胞の「疲弊」と称される通り、Ｔ細胞が増殖し、サイトカインを産生し、標的細胞を溶解させる能力を負に調節する。ＬＡＧ３はまた、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞機能の増強において役割を果たすことも報告されている（Ｐａｒｄｏｌｌ、２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ、１２巻：２５２～２６４頁）。
ＬＡＧ３は、腫瘍免疫および感染免疫において、重要な役割を果たすので、免疫療法にとって理想的な標的である。モノクローナル抗体を含むアンタゴニストによるＬＡＧ３の遮断は、がんおよび慢性ウイルス感染の処置において研究されている（Ｔｕｒｎｉｓら、２０１５年、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４５巻：１８９２～１９０５頁）。
当技術分野では、ＬＡＧ３に対するモノクローナル抗体が公知であり、例えば、米国特許／公開第５９７６８７７号、同第６１４３２７３号、同第６１９７５２４号、同第８５５１４８１号、同第２０１１００７０２３８号、同第２０１１０１５０８９２号、同第２０１３００９５１１４号、同第２０１４００９３５１１号、同第２０１４０１２７２２６号、同第２０１４０２８６９３５号、ならびにＷＯ９５／３０７５０、ＷＯ９７／０３６９５、ＷＯ９８／５８０５９、ＷＯ２００４／０７８９２８、ＷＯ２００８／１３２６０１、ＷＯ２０１０／０１９５７０、ＷＯ２０１４／００８２１８、ＥＰ０５１００７９Ｂ１、ＥＰ０７５８３８３Ｂ１、ＥＰ０８４３５５７Ｂ１、ＥＰ０９７７８５６Ｂ１、ＥＰ１８９７５４８Ｂ２、ＥＰ２１４２２１０Ａ１、およびＥＰ２３２０９４０Ｂ１において記載されている。
米国特許第５９７６８７７号明細書 米国特許第６１４３２７３号明細書 米国特許第６１９７５２４号明細書
ヒトを処置するための免疫療法を開発する場合、低免疫原性、適切な結合動態パラメータ、サル標的との交差反応性、適切なｉｎ ｖｉｔｒｏ活性および／または適切なｉｎ ｖｉｖｏ活性などの特性を呈示する抗体が必要とされる。
本発明は、ＬＡＧ３に結合する抗体およびそれらの抗原結合性断片を提供する。本発明の抗体は、とりわけ、ＬＡＧ３を発現する免疫細胞をターゲティングし、ＬＡＧ３活性をモジュレートするのに有用である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、Ｔ細胞により媒介される殺滅が有益または所望である状況下で、ＬＡＧ３活性を阻害もしくは中和し、かつ／またはＴ細胞の活性化を刺激するのに有用である。ある特定の実施形態では、抗体は、調節性Ｔ細胞の機能を阻害し、かつ／または疲弊したＴ細胞のアネルギー状態を逆転させるのに有用である。本発明の抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性部分を、多特異性の抗原結合性分子の一部として含めて、例えば、免疫応答をモジュレートし、かつ／または抗体を、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞など、特定の細胞型へとターゲティングすることができる。抗体は、がんおよびウイルス感染などの疾患または障害の処置において有用である。
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体）の場合もあり、抗原結合性部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはｓｃＦｖ断片）だけを含む場合もあり、機能性に影響を及ぼす、例えば、残留するエフェクター機能を消失させるように修飾することができる（Ｒｅｄｄｙら、２０００年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６４巻：１９２５～１９３３頁）。ある特定の実施形態では、抗体は、二特異性でありうる。
第１の態様では、本発明は、ＬＡＧ３に特異的に結合する、単離組換えモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。
本発明の例示的な抗ＬＡＧ３抗体を、本明細書の表１～３に列挙する。表１は、例示的な抗ＬＡＧ３抗体の、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列の識別子を明示する。表２は、例示的な抗ＬＡＧ３抗体の、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の核酸配列の識別子を明示する。表３は、例示的な抗ＬＡＧ３抗体の、重鎖配列および軽鎖配列のアミノ酸配列の識別子を明示する。
本発明は、表１に列挙したＨＣＶＲのアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＶＲのアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＶＲのアミノ酸配列のうちのいずれかと対合させた、表１に列挙したＨＣＶＲのアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣＶＲとＬＣＶＲとのアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態に従い、本発明は、表１に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの中に含有される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対は、配列番号３８６／３９４（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４１８／４２６（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）、または５３８／５４６（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）のうちの１つから選択される。ある特定の実施形態では、本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＨＣＶＲが、５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、表１に列挙したアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＶＲが、５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、表１に列挙したアミノ酸配列を含む、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。例えば、本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＨＣＶＲが、５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＶＲが、５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列を含む、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。別の例示的な実施形態では、本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＨＣＶＲが、少なくとも１カ所のアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＶＲが、１カ所のアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列を含む、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＨＣＤＲ１のアミノ酸配列、またはこれらと実質的に類似する配列であって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＨＣＤＲ２のアミノ酸配列、またはこれらと実質的に類似する配列であって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＨＣＤＲ３のアミノ酸配列、またはこれらと実質的に類似する配列であって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ１のアミノ酸配列、またはこれらと実質的に類似する配列であって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ２のアミノ酸配列、またはこれらと実質的に類似する配列であって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ３のアミノ酸配列、またはこれらと実質的に類似する配列であって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のうちのいずれかと対合させた、表１に列挙したＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣＤＲ３とＬＣＤＲ３とのアミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態に従い、本発明は、表１に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの中に含有される、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列対を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列対は、配列番号３９２／４００（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４２４／４３２（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）、および５４４／５５２（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）からなる群より選択される。
本発明はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＨＣＶＲが、表１に列挙したアミノ酸配列と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、表１に列挙したアミノ酸配列と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および表１に列挙したアミノ酸配列と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＬＣＶＲが、表１に列挙したアミノ酸配列と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、表１に列挙したアミノ酸配列と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および表１に列挙したアミノ酸配列と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。例えば、本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＨＣＶＲが、配列番号４２０のアミノ酸配列、または配列番号４２０と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４２２のアミノ酸配列、または配列番号４２２と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号４２４のアミノ酸配列、または配列番号４２４と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。別の例示的な実施形態では、本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、前記ＬＣＶＲが、配列番号４２８のアミノ酸配列、または配列番号４２８と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３０のアミノ酸配列、または配列番号４３０と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４３２のアミノ酸配列、または配列番号４３２と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。
本発明は、表３に列挙したＨＣのアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。
本発明はまた、表３に列挙したＬＣのアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、表３に列挙したＬＣのアミノ酸配列のうちのいずれかと対合させた、表３に列挙したＨＣのアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣおよびＬＣのアミノ酸配列対（ＨＣ／ＬＣ）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態に従い、本発明は、表３に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの中に含有される、ＨＣ／ＬＣのアミノ酸配列対を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣ／ＬＣのアミノ酸配列対は、配列番号５７７／５７８、５７９／５７８、および５８０／５８１からなる群より選択される。
本発明はまた、表１に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかの中に含有される、６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットは、配列番号３８８－３９０－３９２－３９６－３９８－４００（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）、および５４０－５４２－５４４－５４８－５５０－５５２（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）からなる群より選択される。
関連する実施形態では、本発明は、表１に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかにより規定される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対内に含有される、６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を提供する。例えば、本発明は、配列番号３８６／３９４（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４１８／４２６（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）、および５３８／５４６（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）からなる群より選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対内に含有されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットを含む、抗体またはそれらの抗原結合性断片を含む。当技術分野では、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法が周知であり、本明細書で開示される、指定されたＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲのアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するのに使用することができる。ＣＤＲの境界を同定するのに使用しうる、例示的な常套手段は、例えば、Ｋａｂａｔによる定義、Ｃｈｏｔｈｉａによる定義、およびＡｂＭによる定義を含む。一般に、Ｋａｂａｔによる定義という用語は、配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａによる定義という用語は、構造的なループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義とは、Ｋａｂａｔ法とＣｈｏｔｈｉａ法との折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２７３巻：９２７～９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８６巻：９２６８～９２７２頁（１９８９年）を参照されたい。公表のデータベースもまた、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
本発明は、グリコシル化パターンの修飾を有する抗ＬＡＧ３抗体を含む。一部の実施形態では、所望されないグリコシル化部位を除去する修飾が、例えば、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増大させるのに有用な場合もあり、オリゴ糖鎖内に存在するフコース部分を欠く抗体が、これに有用な場合もある（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２年）、ＪＢＣ、２７７巻：２６７３３頁を参照されたい）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために、ガラクトシル化の修飾を施すことができる。
本発明は、Ｆｃドメインを含む抗ＬＡＧ３抗体を含み、この場合、Ｆｃドメインは、本明細書の別の箇所で記載される、ＩｇＧ１アイソタイプまたはＩｇＧ４アイソタイプを含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号５６９、５７０、５７１、５７２、および５７３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
本発明はまた、ＬＡＧ３への特異的結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々が、表１に列挙したＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗体およびそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断する、単離抗体およびそれらの抗原結合性断片も提供する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３の結合を遮断する抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３上の、ＭＨＣクラスＩＩと同じエピトープに結合する場合もあり、ＬＡＧ３上の、ＭＨＣクラスＩＩと異なるエピトープに結合する場合もある。
本発明はまた、ヒトまたは他の種に由来するＬＡＧ３に特異的に結合する、抗体およびそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＬＡＧ３および／またはサルＬＡＧ３に結合しうる。
本発明はまた、ＬＡＧ３への結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む基準抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々が、表１に列挙したＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と交差競合する抗体およびそれらの抗原結合性断片も提供する。
本発明はまた、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む基準抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々が、表１に列挙したＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と同じエピトープに結合する、抗体およびそれらの抗原結合性断片も提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む基準抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対が、配列番号４１８／４２６を有する抗体またはその抗原結合性断片と同じエピトープに結合する、抗体およびそれらの抗原結合性断片を提供する。
本発明はまた、ヒトＬＡＧ３の細胞外ドメイン（配列番号５８８）内に含有される、１または複数のアミノ酸と相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体も含む。ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号５８８のアミノ酸２８～６９；（ｂ）配列番号５８８のアミノ酸２８～７１；（ｃ）配列番号５８８のアミノ酸３１～５２；および（ｄ）配列番号５８８のアミノ酸３２～６９からなる群より選択されるアミノ酸配列と相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体およびそれらの抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号５８９内に含有される、１または複数のアミノ酸と相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体およびそれらの抗原結合性断片を提供し、例えば、本発明は、配列番号５８９内に含有される、少なくとも５アミノ酸、少なくとも１０アミノ酸、または少なくとも２０アミノ酸と相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体およびそれらの抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号５８９のアミノ酸配列（配列番号５８８のアミノ酸２８～７１に対応する）と相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体およびそれらの抗原結合性断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、以下の特徴：（ａ）ヒトＬＡＧ３および／またはカニクイザルＬＡＧ３に特異的に結合すること；（ｂ）ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；（ｃ）ＬＡＧ３により誘導されるＴ細胞の下方調節を遮断し、Ｔ細胞によるシグナル伝達をレスキューすること；および（ｄ）腫瘍の増殖を抑制し、がんを伴う被験体における生存を増大させることのうちの１または複数を有する、組換えヒトモノクローナル抗体または抗原結合性断片を提供する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストの様式で、ＬＡＧ３に特異的に結合しうる、すなわち、ＬＡＧ３の結合および／または活性を増強するか、または刺激することが可能であり、他の実施形態では、抗体は、アンタゴニストの様式で、ＬＡＧ３に特異的に結合しうる、すなわち、ＬＡＧ３が、そのリガンドに結合することを遮断しうる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＬＡＧ３への第１の結合特異性と、第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性とを含む二特異性である。第２の標的エピトープは、ＬＡＧ３上の別のエピトープの場合もあり、異なるタンパク質上の別のエピトープの場合もある。ある特定の実施形態では、第２の標的エピトープは、異なるＴ細胞、Ｂ細胞、腫瘍細胞、またはウイルス感染細胞を含む、異なる細胞上のエピトープでありうる。
第２の態様では、本発明は、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの部分をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、表１に列挙したＨＣＶＲのアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＨＣＶＲの核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＶＲのアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＬＣＶＲの核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＨＣＤＲ１のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＨＣＤＲ１の核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＨＣＤＲ２のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＨＣＤＲ２の核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＨＣＤＲ３の核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ１のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＬＣＤＲ１の核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ２のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＬＣＤＲ２の核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、表１に列挙したＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供するが、ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＬＣＤＲ３の核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
本発明はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子であって、ＨＣＶＲが、３つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）のセットを含み、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが、表１に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかにより規定される核酸分子も提供する。
本発明はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子であって、ＬＣＶＲが、３つのＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）のセットを含み、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のセットが、表１に列挙した、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかにより規定される核酸分子も提供する。
本発明はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子であって、ＨＣＶＲが、表１に列挙したＨＣＶＲのアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲが、表１に列挙したＬＣＶＲのアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙したＨＣＶＲの核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、および表２に列挙したＬＣＶＲの核酸配列、またはそれらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それらと実質的に類似する配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列を含む。本発明のこの態様に従う、ある特定の実施形態では、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのいずれも、表１に列挙した、同じ抗ＬＡＧ３抗体に由来する。
本発明は、表３で列挙した重鎖アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供する。本発明はまた、表３で列挙した軽鎖アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子も提供する。
本発明はまた、重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）の両方をコードする核酸分子であって、ＨＣが、表３で列挙したＨＣアミノ酸配列のうちのいずれかを含み、ＬＣが、表３で列挙したＬＣアミノ酸配列のうちのいずれかを含む核酸分子も提供する。
関連する態様では、本発明は、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することが可能な組換え発現ベクターを提供する。例えば、本発明は、上記で言及した核酸分子のうちのいずれか、すなわち、表１で明示されるＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を含む組換え発現ベクターを含む。本発明はまた、抗ＬＡＧ３抗体の重鎖または軽鎖を含むポリペプチドを発現することが可能な組換え発現ベクターも提供する。例えば、本発明は、上記で言及した核酸分子のうちのいずれか、すなわち、表３で明示される重鎖配列または軽鎖配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を含む組換え発現ベクターを含む。本発明の範囲内にはまた、このようなベクターを導入した宿主細胞のほか、抗体または抗体断片の産生を可能とする条件下で宿主細胞を培養し、このようにして作製された抗体および抗体断片を回収することにより、抗体またはその部分を作製する方法も含まれる。
第３の態様では、本発明は、ＬＡＧ３に特異的に結合する、組換えヒト抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。関連する態様では、本発明は、抗ＬＡＧ３抗体と、第２の治療剤との組み合わせである組成物を特色とする。一実施形態では、第２の治療剤は、抗ＬＡＧ３抗体と有利に組み合わせた、任意の薬剤である。抗ＬＡＧ３抗体と有利に組み合わせうる、例示的な薬剤は、限定なしに述べると、ＬＡＧ３に結合し、かつ／もしくはＬＡＧ３によるシグナル伝達をモジュレートする他の薬剤（他の抗体またはその抗原結合性断片などを含む）、および／またはＬＡＧ３に直接結合しないが、それにも拘らず、免疫細胞の活性化をモジュレートする薬剤を含む。本発明の抗ＬＡＧ３抗体を伴うさらなる組み合わせ療法および共製剤（ｃｏ－ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）については、本明細書の別の箇所で開示する。
第４の態様では、本発明は、被験体における免疫応答をモジュレートする方法であって、治療有効量の、本発明の抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を、それを必要とする被験体へと投与するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、被験体における免疫応答を増強する方法であって、被験体へと、有効量の、本発明の抗体またはその断片であって、ＬＡＧ３に結合する抗体またはその断片を投与するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、本発明は、被験体におけるＴ細胞の活性化を刺激するかまたは増強する方法を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞の活性をレスキューする方法であって、Ｔ細胞の活性がレスキューされるように、Ｔ細胞を、有効量の、本発明の抗体と接触させるステップを含む方法を提供する。一実施形態では、本発明は、被験体における調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を阻害する方法であって、治療有効量の、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を、それを必要とする被験体へと投与するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、それを必要とする被験体は、がんまたはウイルス感染などの疾患または障害を患っている場合がある。ある特定の実施形態では、本発明は、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害をレスキューする方法であって、Ｔ細胞を、有効量の、本発明の抗体と接触させるステップを含む方法を提供する。
第５の態様では、本発明は、本発明の抗ＬＡＧ３抗体または抗原結合性部分を使用して、被験体におけるがんまたはウイルス感染などの疾患または障害を処置するための治療法であって、本発明の抗体または抗体断片を含む、治療有効量の医薬組成物を、それを必要とする被験体へと投与するステップを含む治療法を提供する。処置される障害は、ＬＡＧ３の活性またはシグナル伝達の刺激または阻害により、改善されるか、好転される（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）か、阻害されるか、または防止される、任意の疾患または状態である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を、第２の治療剤と組み合わせて、それを必要とする被験体へと投与する。第２の治療剤は、別のＴ細胞共阻害剤に対する抗体、腫瘍細胞抗原に対する抗体、Ｔ細胞受容体に対する抗体、ウイルス感染細胞上のエピトープに対する抗体、細胞傷害剤、抗がん薬、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド）、化学療法剤、放射線療法、免疫抑制剤、および当技術分野で公知の、任意の他の薬物または治療からなる群より選択することができる。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、そのような副作用が生じる場合に、本発明の抗体またはその抗原結合性断片と関連する、任意の可能な副作用に拮抗するかまたはこれを低減する一助となる薬剤でありうる。
ある特定の実施形態では、本発明は、腫瘍の増殖を抑制するための方法を提供する。例えば、本発明は、被験体における、原発性腫瘍または転移性腫瘍に起因する、腫瘍の増殖の抑制を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、がんを伴う被験体の生存（例えば、無進行生存または全生存）を増強する方法を提供する。がんの例は、血液がん（例えば、リンパ腫、骨髄腫、または白血病などの血液悪性疾患）、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、頭頚部扁平上皮がん、肝細胞癌、腎細胞癌、黒色腫、中皮腫、卵巣がん、膀胱がん、乳がん、骨がん、結腸直腸がん、前立腺がん、および結腸がんを含む、原発がんおよび／または再発がんを含むがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、本発明は、確立された腫瘍の増殖を阻害または抑制するための方法を提供する。方法は、それを必要とする被験体へと、治療有効量の、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を含む医薬組成物を投与するステップを含む。ある特定の実施形態では、抗体を、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）阻害剤（例えば、ニボルマブまたはＲＥＧＮ２８１０などの抗ＰＤ－１抗体）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト、ベバシズマブ）、アンギオポエチン２（Ａｎｇ２）阻害剤（例えば、ネスバクマブ（ｎｅｓｖａｃｕｍａｂ）などの抗Ａｎｇ２抗体）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＣＤ２０×ＣＤ３二特異性抗体、細胞毒素、化学療法剤、および放射線療法からなる群より選択される第２の治療剤と組み合わせて投与する。がんを処置するための使用において、本発明の抗ＬＡＧ３抗体と組み合わせて使用されうるさらなる治療／治療剤のさらなる例については、本明細書の別の箇所で記載する。
抗体またはその断片は、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋内、または頭蓋内投与することができる。抗体またはその断片は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１００ｍｇの用量で投与することができる。
本発明はまた、がんなど、ＬＡＧ３の結合および／またはシグナル伝達の遮断から利益を得る疾患または障害を処置するための医薬の製造における、本発明の抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片の使用も含む。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）タンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、水素／重水素交換により決定される通り、ＬＡＧ３の細胞外ドメイン内に含有される、１または複数のアミノ酸（配列番号５８８のアミノ酸２８～７１）と相互作用する、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
水素／重水素交換により決定される通り、配列番号５８９内に含有される、１または複数のアミノ酸と相互作用する、項目１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３）
（ａ）配列番号５８８のアミノ酸２８～６９；（ｂ）配列番号５８８のアミノ酸２８～７１；（ｃ）配列番号５８８のアミノ酸３１～５２；および（ｄ）配列番号５８８のアミノ酸３２～６９からなる群より選択されるアミノ酸配列と相互作用する、項目１に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４）
配列番号５８９内に含有される、少なくとも１０のアミノ酸と相互作用する、項目２に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５）
配列番号５８９内に含有される、少なくとも２０のアミノ酸と相互作用する、項目２または４に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６）
配列番号５８９のアミノ酸配列と相互作用する、項目１から５のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７）
前記抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含有される、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含有される、３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）とを含み、前記ＨＣＶＲが、
（ｉ）配列番号４１８のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号４１８に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号４１８に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列
を含み；前記ＬＣＶＲが、
（ｉ）配列番号４２６のアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号４２６に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｉｉｉ）配列番号４２６に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｉｖ）５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列
を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の単離抗体。
（項目８）
（ａ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１．５ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｂ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約２ｎＭ未満のＫＤで、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｃ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約２０ｐＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｄ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約９０ｐＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｅ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約２ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合すること；
（ｆ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合すること；
（ｇ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約２０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；
（ｈ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約１５ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、マウスＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；
（ｉ）細胞接着アッセイにより決定される通り、ｈＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を９０％超遮断すること；
（ｊ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて決定される通り、約２．５ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害をレスキューすること；および
（ｋ）蛍光アッセイにおいて決定される通り、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合すること
からなる群より選択される、１または複数の特性を有する、項目１から７のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目９）
５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む、項目７または８に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０）
５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、項目７から９のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１）
５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、および５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、項目７から９のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１２）
配列番号４２０のアミノ酸配列、または配列番号４２０と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４２２のアミノ酸配列、または配列番号４２２と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４２４のアミノ酸配列、または配列番号４２４と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４２８のアミノ酸配列、または配列番号４２８と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３０のアミノ酸配列、または配列番号４３０と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４３２のアミノ酸配列、または配列番号４３２と１アミノ酸異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、項目７または８に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１３）
配列番号４１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、項目７から１２のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１４）
配列番号４２６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、項目７から１３のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１５）
配列番号４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３を含む、項目７または８に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１６）
配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目１５に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１７）
重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号５７９のアミノ酸配列を含む、項目１６に記載の単離抗体。
（項目１８）
重鎖および軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号５７８のアミノ酸配列を含む、項目１６に記載の単離抗体。
（項目１９）
配列番号５７９／５７８の重鎖／軽鎖アミノ酸配列対を含む、項目１７または１８に記載の単離抗体または抗原結合性断片。
（項目２０）
ＬＡＧ３への結合について、配列番号４１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲの３つのＣＤＲ、および配列番号４２６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲの３つのＣＤＲを含む抗体と競合する、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２１）
ＬＡＧ３上の、配列番号４１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲの３つのＣＤＲ、および配列番号４２６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲの３つのＣＤＲを含む抗体と同じエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２２）
（ａ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１．５ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｂ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約２ｎＭ未満のＫＤで、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｃ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約２０ｐＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｄ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約９０ｐＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；
（ｅ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約２ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合すること；
（ｆ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合すること；
（ｇ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約２０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；
（ｈ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約１５ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、マウスＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；
（ｉ）細胞接着アッセイにより決定される通り、ｈＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を９０％超遮断すること；
（ｊ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて決定される通り、約２．５ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害をレスキューすること；および
（ｋ）蛍光アッセイにおいて決定される通り、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合すること
からなる群より選択される、１または複数の特性を有する、項目２０または２１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２３）
項目１から２２のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む、医薬組成物。
（項目２４）
項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離ポリヌクレオチド分子。
（項目２５）
項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離ポリヌクレオチド分子。
（項目２６）
項目２４または２５に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
（項目２７）
項目２６に記載のベクターを発現する細胞。
（項目２８）
被験体における腫瘍または腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、それを必要とする前記被験体へと、治療有効量の、項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
（項目２９）
前記腫瘍が、原発性腫瘍または再発性腫瘍である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記腫瘍が、確立された腫瘍である、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
前記腫瘍が、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、および黒色腫からなる群より選択される疾患または障害を伴う被験体に存在する、項目２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記抗体またはその抗原結合性断片を、初期用量、その後に１回または複数回の二次用量として投与し、各回の二次用量を、直前の用量の１～４週間後に投与する、項目２８から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記抗体または抗原結合性断片を、前記被験体の体重１ｋｇ当たり約１、３、または１０ｍｇの用量で投与する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記抗体またはその抗原結合性断片を、前記被験体へと、第２の治療剤と組み合わせて投与する、項目２８から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記第２の治療剤が、ＣＴＬＡ阻害剤、腫瘍特異抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二特異性抗体、抗酸化剤などの栄養補助食品、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、および前記疾患または前記障害と関連する少なくとも１つの症状を好転させるのに有用な、任意の他の治療からなる群より選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記第２の治療剤が、ＰＤ－１阻害剤である、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記ＰＤ－１阻害剤が、ＲＥＧＮ２８１０、ニボルマブ、またはペンブロリズマブである、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記ＰＤ－１阻害剤を、前記被験体の体重１ｋｇ当たり１、３、または１０ｍｇの用量で投与する、項目３６または３７に記載の方法。
（項目３９）
前記抗体またはその抗原結合性断片を、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋内、または頭蓋内投与する、項目２８から３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
ＬＡＧ３をアンタゴナイズすることにより処置可能な疾患または障害を処置するための方法であって、それを必要とする被験体へと、治療有効量の、項目１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
（項目４１）
前記疾患または前記障害が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群より選択されるウイルスにより引き起こされる慢性ウイルス感染である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記疾患または前記障害が、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、および黒色腫からなる群より選択される、項目４０に記載の方法。
他の実施形態は、以下の詳細な説明の再検討から明らかとなるであろう。
図１は、本明細書の実施例８で記載される、ルシフェラーゼベースのＬＡＧ３バイオアッセイについての概略図である。パネル（Ａ）：「二特異性」方式：不活性のＪｕｒｋａｔ由来のＴ細胞を、ＣＤ３×ＣＤ２０二特異性抗体を介してクラスタリングする、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）により活性化させる。パネル（Ｂ）：「ペプチド」方式：この方式では、不活性のＪｕｒｋａｔ由来のＴ細胞を、特異的ＭＨＣ／ペプチド複合体により活性化させる（ＭＢＰ８５－９９ペプチドと複合体化したＭＨＣＩＩタンパク質である、ＨＬＡ－ＤＲ２ＡＢとの、Ｏｂ２Ｆ３ ＴＣＲヘテロ二量体）。ＬＡＧ３の、ＤＲ２への結合は、活性化したＪｕｒｋａｔ由来のＴ細胞内の応答を弱める。ＬＡＧ３遮断抗体は、活性化したＪｕｒｋａｔ由来のＴ細胞内の応答をレスキューする。
図２Ａ～２Ｂは、単独および抗マウスＰＤ－１抗体と組み合わせた抗マウスＬＡＧ３抗体の、確立されたＣｏｌｏｎ ２６腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性の結果（実施例１０において記載する）についてまとめる。図２Ａ：各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）を、腫瘍植込み後、複数の時点において測定した。処置は、平均腫瘍容量が５０ｍｍ３に到達した、１４日目に開始した。処置日を、矢印で指し示す。全ての抗体は、１０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。図２Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後３５日目に測定した。統計学的有意性は、ダネットの検定後多重比較を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図２Ａ～２Ｂ：処置群：アイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａ＋マウスＩｇＧ１対照抗体（丸）；抗マウスＰＤ－１抗体＋マウスＩｇＧ１対照（上向きの三角）；抗マウスＬＡＧ３抗体＋ラットＩｇＧ２ａ対照（四角）；抗マウスＰＤ－１抗体＋抗マウスＬＡＧ３抗体（下向きの三角）。 図２Ａ～２Ｂは、単独および抗マウスＰＤ－１抗体と組み合わせた抗マウスＬＡＧ３抗体の、確立されたＣｏｌｏｎ ２６腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性の結果（実施例１０において記載する）についてまとめる。図２Ａ：各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）を、腫瘍植込み後、複数の時点において測定した。処置は、平均腫瘍容量が５０ｍｍ３に到達した、１４日目に開始した。処置日を、矢印で指し示す。全ての抗体は、１０ｍｇ／ｋｇで、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。図２Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後３５日目に測定した。統計学的有意性は、ダネットの検定後多重比較を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図２Ａ～２Ｂ：処置群：アイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａ＋マウスＩｇＧ１対照抗体（丸）；抗マウスＰＤ－１抗体＋マウスＩｇＧ１対照（上向きの三角）；抗マウスＬＡＧ３抗体＋ラットＩｇＧ２ａ対照（四角）；抗マウスＰＤ－１抗体＋抗マウスＬＡＧ３抗体（下向きの三角）。
図３Ａ～３Ｂは、単独および抗マウスＰＤ－１抗体と組み合わせた抗マウスＬＡＧ３抗体の、確立されたＭＣ３８に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性の結果（実施例１１において記載する）についてまとめる。図３Ａ：各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）を、腫瘍植込み後、複数の時点において測定した。処置は、平均腫瘍容量が４５ｍｍ３に到達した、８日目に開始した。処置日を、矢印で指し示す。図３Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２３日目に測定した。統計学的有意性は、ダネットの検定後多重比較を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。図３Ａ～３Ｂ：処置群：アイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａ＋マウスＩｇＧ１（丸）、抗マウスＰＤ－１抗体＋ｍＩｇＧ１対照（上向きの三角）、抗マウスＬＡＧ３抗体＋ラットＩｇＧ２ａ対照（四角）、および抗マウスＰＤ－１＋抗マウスＬＡＧ３抗体（下向きの三角）。 図３Ａ～３Ｂは、単独および抗マウスＰＤ－１抗体と組み合わせた抗マウスＬＡＧ３抗体の、確立されたＭＣ３８に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性の結果（実施例１１において記載する）についてまとめる。図３Ａ：各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）を、腫瘍植込み後、複数の時点において測定した。処置は、平均腫瘍容量が４５ｍｍ３に到達した、８日目に開始した。処置日を、矢印で指し示す。図３Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２３日目に測定した。統計学的有意性は、ダネットの検定後多重比較を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。図３Ａ～３Ｂ：処置群：アイソタイプ対照ラットＩｇＧ２ａ＋マウスＩｇＧ１（丸）、抗マウスＰＤ－１抗体＋ｍＩｇＧ１対照（上向きの三角）、抗マウスＬＡＧ３抗体＋ラットＩｇＧ２ａ対照（四角）、および抗マウスＰＤ－１＋抗マウスＬＡＧ３抗体（下向きの三角）。
図４Ａ～４Ｂは、実験の終了時において、（実施例１１において記載する）腫瘍を保有するマウスから回収された、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）内（Ａ）および脾臓内（Ｂ）で、Ｔａｑｍａｎ解析により検討された、マウスＩＦＮγ遺伝子およびＣＤ８ｂ遺伝子の発現レベル（マウスシクロフィリンＢの発現に対して正規化された）を示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。 図４Ａ～４Ｂは、実験の終了時において、（実施例１１において記載する）腫瘍を保有するマウスから回収された、流入領域リンパ節（ＤＬＮ）内（Ａ）および脾臓内（Ｂ）で、Ｔａｑｍａｎ解析により検討された、マウスＩＦＮγ遺伝子およびＣＤ８ｂ遺伝子の発現レベル（マウスシクロフィリンＢの発現に対して正規化された）を示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
図５Ａ～５Ｂは、抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性（実施例１２において記載する）についてまとめる。図５Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図５Ｂ：各群内の個々の腫瘍容量は、２４日間にわたりモニタリングした。２４日目における、各群内の無腫瘍マウスの数を示す。図５Ａ～５Ｂ：処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（四角）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）、および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照抗体（丸）。 図５Ａ～５Ｂは、抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性（実施例１２において記載する）についてまとめる。図５Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図５Ｂ：各群内の個々の腫瘍容量は、２４日間にわたりモニタリングした。２４日目における、各群内の無腫瘍マウスの数を示す。図５Ａ～５Ｂ：処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（四角）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）、および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照抗体（丸）。
図６Ａ～６Ｃは、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性（実施例１３において記載する）についてまとめる。図６Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図６Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２２日目に測定した。統計学的有意性は、テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１）。図６Ａ～６Ｂ：処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（四角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。図６Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（下向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。 図６Ａ～６Ｃは、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性（実施例１３において記載する）についてまとめる。図６Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図６Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２２日目に測定した。統計学的有意性は、テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１）。図６Ａ～６Ｂ：処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（四角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。図６Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（下向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。 図６Ａ～６Ｃは、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性（実施例１３において記載する）についてまとめる。図６Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図６Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２２日目に測定した。統計学的有意性は、テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１）。図６Ａ～６Ｂ：処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（四角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。図６Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（下向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。
図７Ａ～７Ｃは、第１の実験（実施例１４において記載する）における、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性についてまとめる。図７Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図７Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２２日目に測定した。統計学的有意性は、テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図７Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊ｐ＜０．０１９７）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（六角形）；１ｍｇ／ｋｇにおけるＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（四角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１ｍｇ／ｋｇにおけるＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（下向きの三角）；および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。 図７Ａ～７Ｃは、第１の実験（実施例１４において記載する）における、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性についてまとめる。図７Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図７Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２２日目に測定した。統計学的有意性は、テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図７Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊ｐ＜０．０１９７）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（六角形）；１ｍｇ／ｋｇにおけるＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（四角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１ｍｇ／ｋｇにおけるＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（下向きの三角）；および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。 図７Ａ～７Ｃは、第１の実験（実施例１４において記載する）における、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性についてまとめる。図７Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。図７Ｂ：各処置群内の個々の腫瘍容量は、植込み後２２日目に測定した。統計学的有意性は、テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図７Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊ｐ＜０．０１９７）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（六角形）；１ｍｇ／ｋｇにおけるＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（四角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１ｍｇ／ｋｇにおけるＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（下向きの三角）；および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。
図８Ａ～８Ｃは、第２の実験（実施例１４において記載する）における、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性についてまとめる。図８Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、二元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図８Ｂ：植込み後２３日目に測定される、各処置群内の個々の腫瘍容量。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊＊ｐ＜０．０１）。図８Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、多重比較のためのボンフェローニ補正を伴う、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（六角形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（四角）；５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（下向きの三角）；および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。 図８Ａ～８Ｃは、第２の実験（実施例１４において記載する）における、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性についてまとめる。図８Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、二元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図８Ｂ：植込み後２３日目に測定される、各処置群内の個々の腫瘍容量。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊＊ｐ＜０．０１）。図８Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、多重比較のためのボンフェローニ補正を伴う、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（六角形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（四角）；５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（下向きの三角）；および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。 図８Ａ～８Ｃは、第２の実験（実施例１４において記載する）における、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、ＭＣ３８腫瘍に対する、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性についてまとめる。図８Ａ：腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）。処置日を、矢印で指し示す。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、二元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊ｐ＜０．０５）。図８Ｂ：植込み後２３日目に測定される、各処置群内の個々の腫瘍容量。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した（＊＊ｐ＜０．０１）。図８Ｃ：処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセント。統計学的有意性は、多重比較のためのボンフェローニ補正を伴う、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１）。処置群：２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（菱形）；５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（六角形）；１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（上向きの三角）；２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（四角）；５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）と、１０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ（下向きの三角）；および２５ｍｇ／ｋｇのヒトアイソタイプ対照（丸）。
図９は、単独および抗ヒトＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた抗ヒトＬＡＧ３抗体（「ｍＡｂ１」）の、確立されたＭＣ３８腫瘍に対する有効性について評価する実験（本明細書の実施例１５において記載する）の、腫瘍植込み後、複数の時点における、各処置群内の平均腫瘍容量（ｍｍ３±ＳＥＭ）を示す。処置日を、矢印で指し示す。
図１０は、実施例１５において記載される実験において、植込み後２２日目に測定される、各処置群内の個々の腫瘍容量を示す。統計学的有意性は、ダネットの多重比較検定を伴う、一元ＡＮＯＶＡにより決定した。
図１１は、本明細書の実施例１５において記載される実験で処置されたマウスにおける、無腫瘍生存パーセントを示す。統計学的有意性は、多重比較のためのボンフェローニ補正を伴う、ログランク（マンテル－コックス）検定により決定した（＊＊ｐ＜０．０１）。
図１２は、雌カニクイザルにおける、ｍＡｂ１の単回静脈内注入後の時間と対比した、血清中の平均値（＋ＳＤ）機能的なｍＡｂ１濃度についてのグラフ（実施例１６において記載する）を示す。
本方法について記載する前に、このような方法および条件は、変動しうるので、本発明は、記載される特定の方法および実験条件に限定されるものではないことを理解されたい。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態だけについて記載することを目的とするものであり、限定的であることを意図するものではないことも理解されたい。
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される技術用語および科学用語は全て、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本発明の実施または試行では、本明細書で記載される方法および材料と同様または同等の、任意の方法および材料を使用しうるが、ここでは、好ましい方法および材料について記載する。本明細書で言及される刊行物は全て、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
「ＬＡＧ３」という用語は、ＣＤ２２３としてもまた公知の、免疫チェックポイント受容体またはＴ細胞共阻害剤である、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質を指す。全長ＬＡＧ３のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋで、受託番号：ＮＰ＿００２２７７．４として提供されており、本明細書ではまた、配列番号５８２とも称する。「ＬＡＧ３」という用語はまた、配列番号５７４、５７５、または５７６のアミノ酸配列を有する、ＬＡＧ３のタンパク質改変体も含む。「ＬＡＧ３」という用語は、組換えＬＡＧ３またはその断片を含む。用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスＦｃもしくはヒトＦｃ、またはＲＯＲ１などのシグナル配列へとカップリングさせた、ＬＡＧ３またはその断片も包含する。例えば、用語は、配列番号５７５により例示される配列であって、Ｃ末端において、全長ＬＡＧ３のアミノ酸残基２９～４５０へとカップリングさせた、マウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）を含む配列を含む。配列番号５７４により例示されるタンパク質改変体は、Ｃ末端において、全長ＬＡＧ３のアミノ酸残基２９～４５０へとカップリングさせたヒスチジンタグを含む。非ヒト種に由来することが指定されない限りにおいて、「ＬＡＧ３」という用語は、ヒトＬＡＧ３を意味する。
ＬＡＧ３は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。ＬＡＧ３は、４つの細胞外Ｉｇ様ドメインであるＤ１～Ｄ４を伴う、５０３アミノ酸の１型膜貫通タンパク質であり、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、形質細胞様樹状細胞、および調節性Ｔ細胞上で発現する。ＬＡＧ３受容体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に存在するＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する。
本明細書で使用される「Ｔ細胞共阻害剤」という用語は、Ｔ細胞の活性化または抑制を介して、免疫応答をモジュレートする、リガンドおよび／または受容体を指す。Ｔ細胞共シグナル伝達分子としてもまた公知である、「Ｔ細胞共阻害剤」という用語は、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（Ｂ ａｎｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）（ＢＴＬＡ）、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチン３（Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｍｕｃｉｎ ３）（ＴＩＭ３）、免疫グロブリンおよびＩＴＩＭを有するＴ細胞免疫受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ ＩＴＩＭ）（ＴＩＧＩＴ；ＶＳＩＧ９としてもまた公知である）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １）（ＬＡＩＲ１；ＣＤ３０５としてもまた公知である）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ）（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８としてもまた公知である）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（Ｖ－ｄｏｍａｉｎ Ｉｇ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）（ＶＩＳＴＡ）、およびＣＤ１６０を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、ジスルフィド結合により相互接続された、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖である、４つのポリペプチド鎖から構成される免疫グロブリン分子（すなわち、「全長抗体分子」）、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）、またはそれらの抗原結合性断片を指すことを意図する。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインから構成される）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲまたは「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する超可変性領域であって、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する、より保存的な領域を散在させた領域へと、さらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端から、カルボキシ末端へと、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される、３つのＣＤＲと、４つのＦＲとから構成される。本発明のある特定の実施形態では、抗体のＦＲ（またはそれらの抗原結合断片）は、ヒト生殖細胞系列の配列と同一の場合もあり、天然で修飾されている場合もあり、人工的に修飾される場合もある。アミノ酸のコンセンサス配列は、２つまたはこれを超えるＣＤＲの照合解析に基づき規定することができる。
１もしくは複数のＣＤＲ残基の置換、または１もしくは複数のＣＤＲの省略もまた可能である。科学文献では、結合のために、１つまたは２つのＣＤＲを可欠とした抗体について記載されている。Ｐａｄｌａｎら（１９９５年、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、９巻：１３３～１３９頁）は、公表された結晶構造に基づき、抗体とそれらの抗原との接触領域について解析し、ＣＤＲ残基のうちで、実際に抗原に接触するのは、約５分の１～３分の１だけであると結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた、１つまたは２つのＣＤＲが、抗原と接触するアミノ酸を有さない、多くの抗体も見出した（Ｖａｊｄｏｓら、２００２年、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０巻：４１５～４２８頁もまた参照されたい）。
抗原に接触しないＣＤＲ残基は、先行研究に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外部に存在するＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から、分子的モデル化および／または経験により同定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２内の残基Ｈ６０～Ｈ６５は、多くの場合、要求されない）。ＣＤＲまたはその残基を省略する場合は通例、別のヒト抗体配列内の対応する位置を占有するアミノ酸、またはこのような配列のコンセンサス配列で置換する。ＣＤＲ内の置換のための位置、および置換するアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。経験的置換は、保存的置換の場合もあり、非保存的置換の場合もある。
本明細書で開示される完全ヒト抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域内および／またはＣＤＲ領域内に、対応する生殖細胞系列の配列と比較して、１または複数のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含みうる。このような変異は、本明細書で開示されアミノ酸配列を、例えば、公表の抗体配列データベースから入手可能な生殖細胞系列の配列と比較することにより、たやすく確認することができる。本発明は、本明細書で開示されるアミノ酸配列のうちのいずれかに由来する、抗体およびそれらの抗原結合性断片を含むが、この場合、１または複数のフレームワーク領域内および／またはＣＤＲ領域内の、１または複数のアミノ酸を、抗体が由来した生殖細胞系列の配列の対応する残基、または別のヒト生殖細胞系列の配列の対応する残基、または対応する生殖細胞系列残基の保存的アミノ酸置換（本明細書では、このような配列変化をまとめて、「生殖細胞系列変異」と称する）に照らして変異させる。当業者は、本明細書で開示される、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列から始めて、１カ所または複数カ所の個々の生殖細胞系列変異またはそれらの組み合わせを含む、多数の抗体および抗原結合性断片を容易に作製することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワーク残基および／またはＣＤＲ残基の全てを、抗体が由来した、元の生殖細胞系列の配列内で見出される残基へと復帰変異させる。他の実施形態では、ある特定の残基だけを、元の生殖細胞系列の配列へと復帰変異させる、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸内に見出される残基だけを変異させるか、またはＣＤＲ１内、ＣＤＲ２内、もしくはＣＤＲ３内に見出される残基だけを変異させる。他の実施形態では、フレームワーク残基および／またはＣＤＲ残基のうちの１または複数を、異なる生殖細胞系列の配列（すなわち、抗体が元来由来した生殖細胞系列の配列と異なる、生殖細胞系列の配列）の対応する残基に変異させる。さらに、本発明の抗体は、フレームワーク領域内および／またはＣＤＲ領域内の、２カ所またはこれを超える生殖細胞系列変異の任意の組み合わせを含有することが可能であり、この場合、例えば、ある特定の個々の残基を、特定の生殖細胞系列の配列の対応する残基に変異させる一方で、元の生殖細胞系列の配列と異なる、ある特定の他の残基を維持するか、または異なる生殖細胞系列の配列の対応する残基に変異させる。１カ所または複数カ所の生殖細胞系列変異を含有する抗体および抗原結合性断片が得られたら、これらを、結合特異性の改善、結合アフィニティーの増大、アンタゴニスト性またはアゴニスト性の生物学的特性（場合により）の改善または増強、免疫原性の低減など、１または複数の所望の特性について容易に調べることができる。この一般的な方式で得られた、抗体および抗原結合性断片は、本発明の中に包含される。
本発明はまた、本明細書で開示されるＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列であって、１カ所または複数カ所の保存的置換を有するアミノ酸配列のうちのいずれかの改変体を含む、完全ヒト抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体も含む。例えば、本発明は、本明細書で開示される、ＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、例えば、１０カ所またはこれより少数、８カ所またはこれより少数、６カ所またはこれより少数、４カ所またはこれより少数などの数の保存的アミノ酸置換を伴う、ＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＬＡＧ３抗体を含む。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ内および特定のＣＤＲ３内に、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発、またはｉｎ ｖｉｖｏにおける体細胞変異により導入された変異）を含みうる。しかし、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列を、ヒトＦＲ配列へとグラフトしたｍＡｂを含むことを意図しない。用語は、非ヒト哺乳動物において、または非ヒト哺乳動物の細胞内で、組換えにより作製される抗体を含む。用語は、ヒト被験体から単離されるか、またはヒト被験体において発生する抗体を含むことを意図しない。
本明細書で使用される「組換え」という用語は、当技術分野において、組換えＤＮＡ技術として公知の技術または方法であって、例えば、ＤＮＡスプライシングおよびトランスジェニック発現を含む技術または方法により、創出されるか、発現するか、単離されるか、または得られる、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を指す。用語は、非ヒト哺乳動物（トランスジェニック非ヒト哺乳動物、例えば、トランスジェニックマウスを含む）発現系、もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現するか、または組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体を指す。
本明細書で使用される「多特異性の抗原結合性分子」という用語は、二特異性、三特異性、または多特異性の抗原結合性分子およびそれらの抗原結合性断片を指す。多特異性抗原結合性分子は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的な場合もあり、１つを超える標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合性ドメインを含有する場合もある。多特異性の抗原結合性分子は、単一の多機能性ポリペプチドの場合もあり、２つまたはこれを超えるポリペプチドの多量体の複合体であって、互いと共有結合的または非共有結合的に会合する複合体の場合もある。「多特異性の抗原結合性分子」という用語は、別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質へと連結する場合もあり、これと共発現させる場合もある、本発明の抗体を含む。例えば、抗体またはその断片は、第２の結合特異性を伴う、二特異性または多特異性の抗原結合性分子を作製するように、タンパク質またはその断片など、１または複数の他の分子的実体へと、機能的に連結する（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合的会合によるか、または他の形で）ことができる。本発明に従い、「多特異性の抗原結合性分子」という用語はまた、二特異性抗体、三特異性抗体、もしくは多特異性抗体またはこれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体を、別の抗体またはその抗原結合性断片へと機能的に連結して、第２の結合特異性を伴う、二特異性抗体を作製する。本発明の二特異性抗体および多特異性抗体については、本明細書の別の箇所で記載する。
「～に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」または「～に特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｔｏ）」などという用語は、抗体またはその抗原結合性断片が、生理学的条件下で、抗原と、比較的安定的な複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０－８Ｍまたはこれ未満の平衡解離定数（例えば、小さなＫＤは、緊密な結合を描示する）により特徴づけることができる。当技術分野では、２つの分子が特異的に結合するのかどうかを決定するための方法が周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書で記載される通り、ＬＡＧ３に特異的に結合する抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により同定されている。さらに、ＬＡＧ３内の１つのドメインと、１または複数のさらなる抗原とに結合する多特異性抗体、またはＬＡＧ３の２つの異なる領域に結合する二特異性抗体は、そうであるにも拘らず、本明細書で使用される通り、「～に特異的に結合する」抗体であると考えられる。
「高アフィニティー」抗体という用語は、ＬＡＧ３に対する結合アフィニティーであって、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液アフィニティーＥＬＩＳＡにより測定される、少なくとも１０－８Ｍ、好ましくは、１０－９Ｍ、より好ましくは、１０－１０Ｍ、なおより好ましくは、１０－１１Ｍ、なおより好ましくは、１０－１２ＭのＫＤとして表される結合アフィニティーを有するｍＡｂを指す。
「スローオフ速度（ｓｌｏｗ ｏｆｆ ｒａｔｅ）」、「Ｋｏｆｆ」、または「ｋｄ」という用語は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により決定される通り、１×１０－３秒－１またはこれ未満、好ましくは、１×１０－４秒－１またはこれ未満の速度定数で、ＬＡＧ３から解離する抗体を意味する。
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、任意の、天然に存在するか、酵素的に得られるか、合成であるか、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質であって、抗原に特異的に結合して、複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書で使用される抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、ＬＡＧ３に結合する能力を保持する抗体の、１または複数の断片を指す。
具体的な実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、リガンドなどの部分、あるいは細胞毒素、第２の抗ＬＡＧ３抗体、腫瘍特異抗原に対する抗体、抗がん薬物、またはがんもしくは慢性ウイルス感染を含むウイルス感染を含む、疾患もしくは状態を処置するのに有用な任意の他の治療用部分などの治療用部分へとコンジュゲートさせることができる（「免疫コンジュゲート」）。
本明細書で使用される「単離抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すことを意図する（例えば、ＬＡＧ３に特異的に結合する単離抗体またはその断片は、ＬＡＧ３以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
本明細書で使用される「遮断抗体」または「中和抗体」（または「ＬＡＧ３活性を中和する抗体」または「アンタゴニスト抗体」）とは、そのＬＡＧ３への結合が、ＬＡＧ３の、少なくとも１つの生物学的活性の阻害を結果としてもたらす抗体を指すことを意図する。例えば、本発明の抗体は、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を防止するかまたは遮断しうる。
本明細書で使用される「活性化抗体」または「増強抗体」（または「アゴニスト抗体」）とは、そのＬＡＧ３への結合が、ＬＡＧ３の、少なくとも１つの生物学的活性の増大または刺激を結果としてもたらす抗体を指すことを意図する。例えば、本発明の抗体は、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を増大させうる。
本明細書で使用される「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス中のタンパク質濃度の変更を検出することにより、リアルタイムの生体分子の相互作用についての解析を可能とする光学現象を指す。
本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、特定の抗体－抗原間相互作用についての平衡解離定数を指すことを意図する。
「エピトープ」という用語は、パラトープとして公知の、抗体分子の可変領域内の特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、１つを超えるエピトープを有しうる。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合する可能性があり、異なる生物学的効果を及ぼしうる。「エピトープ」という用語はまた、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。「エピトープ」という用語はまた、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造的エピトープとして規定することもでき、機能的エピトープとして規定することもできる。機能的エピトープは一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用のアフィニティーに直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、コンフォメーションエピトープ、すなわち、非線形アミノ酸から構成されるエピトープでもありうる。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基など、化学的に活性の表面分子の群分けである決定基を含む場合があり、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造特徴、および／または特異的な電荷特徴を有しうる。
本明細書で使用される「交差競合する」という用語は、抗体またはその抗原結合性断片が、抗原に結合し、別の抗体またはその抗原結合性断片の結合を、阻害または遮断することを意味する。用語はまた、２つの抗体の間の、いずれの向きの競合も含む、すなわち、第１の抗体が、第２の抗体に結合し、その結合を遮断する場合、およびこの逆の場合を含む。ある特定の実施形態では、第１の抗体と第２の抗体とは、同じエピトープに結合しうる。代替的に、第１の抗体と第２の抗体とは、１つの抗体の結合が、例えば、立体障害を介して、第２の抗体の結合を阻害または遮断するように、異なるが重複するエピトープに結合しうる。抗体の間の交差競合は、当技術分野で公知の方法、例えば、リアルタイムの、無標識バイオレイヤー干渉アッセイ（ｌａｂｅｌ－ｆｒｅｅ ｂｉｏ－ｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ ａｓｓａｙ）により測定することができる。２つの抗体の間の交差競合は、第２の抗体の結合であって、自己間結合（この場合、第１の抗体と第２の抗体とは、同じ抗体である）に起因する、バックグラウンドシグナル未満の結合として表すことができる。２つの抗体の間の交差競合は、例えば、第２の抗体の結合％であって、ベースラインの自己間のバックグラウンド結合（この場合、第１の抗体と第２の抗体とは、同じ抗体である）未満の結合％として表すことができる。
核酸またはその断片に言及する場合の、「実質的な同一性」または「実質的に同一な」という用語は、適切なヌクレオチドの挿入または欠失を伴って、別の核酸（またはその相補鎖）と、最適な形でアライメントされた場合に、下記で論じられる、配列同一性についての、任意の周知のアルゴリズムにより測定される通り、ヌクレオチド塩基のうちの少なくとも約９０％、そしてより好ましくは、少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％においてヌクレオチド配列の同一性がすることを指し示す。ある特定の場合には、基準核酸分子に対する実質的な同一性を有する核酸分子は、基準核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じであるかまたは実質的に類似するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。
配列同一性は、アルゴリズム、例えば、全域的アライメントのためのニードルマン－ブンシュアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、４８巻：４４３～４５３頁）、または局所的アライメントのためのスミス－ウォーターマンアルゴリズム（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、１４７巻：１９５～１９７頁）を使用して計算することができる。別の好ましいアルゴリズムは、Ｄｕｆｒｅｓｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００２年（２０巻、１２６９～７１頁）により記載されており、ＧｅｎｅＰＡＳＴソフトウェア（ＧＱ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）において使用されている。
ポリペプチドに適用される場合の、「実質的な類似性」または「実質的に類似する」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトのギャップの重みを使用する、ＧＡＰプログラムまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムなどにより、最適な形でアライメントされた場合に、少なくとも９０％の配列同一性、なおより好ましくは、少なくとも９５％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基を、同様の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を伴う側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換する置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的な特性を実質的に変化させないであろう。２つまたはこれを超えるアミノ酸配列が、互いと、保存的置換により異なる場合は、置換の保存的性格について補正するように、類似性のパーセントまたは程度を、上方に調整することができる。当業者には、この補正を行うための手段が周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２４巻：３０７～３３１頁を参照されたい。類似する化学的特性を伴う側鎖を有するアミノ酸の群の例は、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンを含む。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リシン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、およびアスパラギン－グルタミンである。代替的に、保存的置きかえは、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６巻：１４４３～４５頁において開示されている、ＰＡＭ２５０対数尤度行列で、正の値を取る任意の変化である。「中程度に保存的な」置きかえとは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列で、負でない値を取る任意の変化である。
ポリペプチドの配列類似性は、配列解析ソフトウェアを使用して測定することが典型的である。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、多様な置換、欠失、および他の修飾へと割り当てられる、類似性の尺度を使用して、類似する配列をマッチさせる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物に由来する、相同なポリペプチドなど、近縁のポリペプチドの間の配列相同性もしくは配列同一性、または野生型タンパク質とその変異タンパク質との配列相同性もしくは配列同一性を決定するのに、デフォルトのパラメータで使用しうる、ＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１内のプログラムであるＦＡＳＴＡを、デフォルトのパラメータまたは推奨されるパラメータで使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリー配列と、検索配列との最良の重複領域についての、アライメントおよび配列同一性パーセントを提示する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年）、前出）。本発明の配列を、異なる生物に由来する多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の、別の好ましいアルゴリズムは、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴ、とりわけ、デフォルトのパラメータを使用するＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それらの各々が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２１５巻：４０３～４１０頁；および（１９９７年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９～３４０２頁を参照されたい。
「治療有効量」という語句は、投与に所望される効果をもたらす量を意味する。正確な量は、処置の目的に依存し、公知の技法を使用して、当業者に確認可能である（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）「Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ」を参照されたい）。
本明細書で使用される「被験体」という用語は、ウイルス感染またはがんなど、疾患または障害の、好転、防止、および／または処置を必要とする動物、好ましくは哺乳動物を指す。用語は、がん、転移性がん、またはウイルス感染を有するか、またはこれらを有する危険性があるヒト被験体を含む。
本明細書で使用される「抗がん薬」とは、がんを処置するか、または好転させるか、または阻害するのに有用な任意の薬剤であって、細胞毒素および薬剤、たとえば、代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、抗有糸分裂剤、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、シクロホスファミド、ミトタン（ｍｙｔｏｔａｎｅ）（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、生物製剤（例えば、抗体およびインターフェロン）、および放射性薬剤を含むがこれらに限定されない薬剤を意味する。本明細書で使用される「細胞毒素または細胞傷害剤」はまた、化学療法剤も指し、細胞に対して有害な任意の薬剤も意味する。例は、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｉｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにこれらの類似体または相同体を含む。
本明細書で使用される「抗ウイルス薬」という用語は、宿主被験体におけるウイルス感染を処置するか、防止するか、または好転させるのに使用される、任意の薬物または治療を指す。「抗ウイルス薬」という用語は、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノフォビル、リルピビリン、鎮痛剤、およびコルチコステロイドを含むがこれらに限定されない。本発明の文脈では、ウイルス感染は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含むがこれらに限定されないウイルスにより引き起こされる、長期にわたる感染または慢性感染を含む。
本明細書で使用される「免疫応答を増強すること」という用語は、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞に対する、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞の活性の増大を指す。本発明の文脈では、用語は、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害の遮断、またはＴ細胞の疲弊状態のレスキューもしくは逆転を含む。「免疫応答を増強すること」という用語はまた、調節性Ｔ細胞活性の阻害も含む。本発明の文脈で使用される、免疫応答の増強は、腫瘍細胞の殺滅の増大および／または腫瘍の増殖の阻害を結果としてもたらす。
本発明の抗体および抗原結合性断片は、ＬＡＧ３に特異的に結合し、Ｔ細胞の活性化を増強する。抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ３に、高アフィニティーで結合する場合もあり、低アフィニティーで結合する場合もある。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、遮断抗体であることが可能であり、この場合、抗体は、ＬＡＧ３に結合し、ＬＡＧ３によるシグナル伝達を阻害しうる。一部の実施形態では、本発明の抗体は、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断し、かつ／またはＴ細胞の活性化を刺激もしくは増強する。一部の実施形態では、抗体は、ＬＡＧ３に結合し、疲弊したＴ細胞のアネルギー状態を逆転させる。ある特定の実施形態では、抗体は、ＬＡＧ３に結合し、調節性Ｔ細胞の活性を阻害する。一部の実施形態では、抗体は、免疫応答を刺激もしくは増強し、かつ／またはがんもしくはウイルス感染を患う被験体を処置するのに有用でありうる。抗体は、それを必要とする被験体へと投与されると、被験体におけるＨＩＶ、ＬＣＭＶ、またはＨＢＶなどのウイルスによる慢性感染を低減しうる。抗体を使用して、被験体における腫瘍細胞の増殖を阻害することができる。抗体は、単独で使用することもでき、がんまたはウイルス感染を処置するための、当技術分野で公知の、他の治療用部分または治療モダリティーを伴う補助治療として使用することもできる。
ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、多特異性の抗原結合性分子であることが可能であり、ＬＡＧ３に対する第１の結合特異性と、別のＴ細胞共阻害剤およびＬＡＧ３の異なるエピトープからなる群より選択される抗原に対する第２の結合特異性とを含む。
以下のうちのいずれか１つを含む免疫原を使用して、ＬＡＧ３に対する抗体を作出することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体を、全長の、天然ＬＡＧ３（ＮＣＢＩ受託番号：ＮＰ＿００２２７７．４を参照されたい）（配列番号５８２）、または組換えＬＡＧ３ペプチドで免疫化されたマウスから得る。代替的に、ＬＡＧ３またはその断片は、標準的な生化学法を使用して作製することができ、免疫原として修飾（配列番号５７４～５７６）および使用することができる。
ある特定の実施形態では、免疫原は、ＬＡＧ３の、１または複数の細胞外ドメインである。本発明の一実施形態では、免疫原は、配列番号５８２の、アミノ酸残基約２９～４５０の範囲である、ＬＡＧ３の断片である。
一部の実施形態では、免疫原は、Ｅ．ｃｏｌｉまたはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞など、任意の他の真核動物細胞もしくは哺乳動物細胞において発現させた、組換えＬＡＧ３ペプチドでありうる。
ある特定の実施形態では、ＬＡＧ３に特異的に結合する抗体は、上記で言及した領域の断片、または指示された領域を越えて、本明細書で記載される領域のＮ末端およびＣ末端の一方または両方から、約５～約２０アミノ酸残基だけ伸長するペプチドを使用して調製することができる。ある特定の実施形態では、上記で言及した領域またはその断片の任意の組み合わせを、ＬＡＧ３特異的抗体の調製において使用することができる。
ペプチドは、タグ付けのために、またはＫＬＨなどの担体分子へのコンジュゲーションを目的として、ある特定の残基の付加または置換を含むように修飾することができる。例えば、システインを、ペプチドのＮ末端またはＣ末端に添加することもでき、リンカー配列を付加して、例えば、免疫化のためのＫＬＨへのコンジュゲーションのためのペプチドを調製することもできる。
本発明のある特定の抗ＬＡＧ３抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイにより決定される通り、ＬＡＧ３に結合し、その活性を中和することが可能である。本発明の抗体が、ＬＡＧ３に結合し、その活性を中和する能力は、当業者に公知の、任意の標準的な方法であって、本明細書で記載される結合アッセイまたは活性アッセイを含む方法を使用して測定することができる。
結合活性を測定するための、非限定的な、例示的ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを、本明細書の実施例に例示する。実施例３では、ヒト抗ＬＡＧ３抗体の、ヒトＬＡＧ３に対する結合アフィニティーおよび動態定数（ｋｉｎｅｔｉｃ ｃｏｎｓｔａｎｔ）を、表面プラズモン共鳴により決定し、測定は、Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００測定器上またはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００測定器上で行った。実施例４では、遮断アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体の間の交差競合を決定した。実施例５および６は、抗体の、ＬＡＧ３を過剰発現する細胞への結合について記載する。実施例７では、結合アッセイを使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、抗ＬＡＧ３抗体が、ＬＡＧ３のＭＨＣクラスＩＩ結合能を遮断する能力を決定した。実施例８では、ルシフェラーゼアッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体が、Ｔ細胞内の、ＬＡＧ３によるシグナル伝達をアンタゴナイズする能力を決定した。実施例９では、蛍光アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体が、活性化サルＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合する能力を決定した。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、がんを伴う被験体、またはＬＣＭＶなどのウイルスに感染した被験体において、Ｔ細胞の活性を増強または刺激することが可能である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体を、被験体における免疫応答を増強し、腫瘍の増殖を阻害するように、第２のＴ細胞共阻害剤に対する抗体など、第２の治療剤と組み合わせて使用する。
ＬＡＧ３に特異的な抗体は、さらなる標識も部分も含有しない場合もあり、Ｎ末端またはＣ末端の標識または部分を含有する場合もある。一実施形態では、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイでは、標識（存在する場合）の位置は、ペプチドが結合する表面と比べた、ペプチドの配向性を決定しうる。例えば、表面を、アビジンでコーティングする場合、ペプチドのＣ末端の部分が、表面に対して遠位となるように、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドを配向させる。一実施形態では、標識は、放射性核種、蛍光色素、またはＭＲＩ検出用標識でありうる。ある特定の実施形態では、このような標識抗体を、イメージングアッセイを含む診断アッセイにおいて使用することができる。
本発明の例示的な実施形態
ある特定の実施形態では、本発明は、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）タンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、（ａ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｂ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約８ｎＭ未満のＫＤで、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｃ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｄ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１ｎＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｅ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｆ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｇ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；（ｈ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、マウスＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；（ｉ）細胞接着アッセイにより決定される通り、ｈＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を９０％超遮断すること；（ｊ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにより決定される通り、約９ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害をレスキューすること；および（ｋ）蛍光アッセイにおいて測定される通り、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合することからなる群より選択される特性を有する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、表１に列挙した重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つの中に含有される、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）；および表１に列挙した軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つの中に含有される、３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む。ある特定の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、表１に列挙したＨＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。ある特定の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、表１に列挙したＬＣＶＲ配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
ある特定の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６０、４６８、４７６、４８４、４９２、５００、５０８、５１６、５４０、および５５６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４６２、４７０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、５１８、５４２、および５５８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４６４、４７２、４８０、４８８、４９６、５０４、５１２、５２０、５４４、および５６０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、５２４、５３２、５４８、および５６４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、５２６、５３４、５５０、および５６６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、５２８、５３６、５５２、および５６８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の単離抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群より選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対を含む。
ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号３８６／３９４、４１８／４２６、および５３８／５４６からなる群より選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対を含む、単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断する単離抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＶＲの３つのＣＤＲであり、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８、および５５４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ；ならびにＬＣＶＲの３つのＣＤＲであり、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６、および５６２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、単離抗体または抗原結合性断片は、配列番号３８６／３９４、４１８／４２６、および５３８／５４６からなる群より選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対を含む。
ある特定の実施形態では、本発明は、ＬＡＧ３への結合について、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群より選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群より選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲのアミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合性断片と同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。前記抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体またはヒトＩｇＧ４抗体などのＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体でありうる。これらの抗体の定常領域は、野生型定常領域に対応する場合もあり、変異を導入した定常領域に対応する場合もあろう。
ある特定の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含む単離抗体であって、重鎖が、配列番号５７７、５７９、および５８０からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、重鎖および軽鎖を含む単離抗体であって、軽鎖が、配列番号５７８、および５８１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、配列番号５７７／５７８、５７９／５７８、および５８０／５８１からなる群より選択される、重鎖／軽鎖のアミノ酸配列対を含む、単離抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一態様では、本発明は、ＬＡＧ３に特異的に結合する、第１の抗原結合特異性と、第２の標的エピトープに特異的に結合する、第２の抗原結合特異性とを含む、多特異性の抗原結合性分子を提供する。
一態様では、本発明は、上記の実施形態のいずれかの抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。
一態様では、本発明は、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合性断片のポリヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド分子およびベクターを提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書で明示される抗体のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド分子および／またはベクターを提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書で明示される抗体のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド分子および／またはベクターを提供する。
一態様では、本発明は、被験体における免疫応答を増強する方法であって、本明細書で開示される、単離抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、被験体における調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を阻害する方法であって、本明細書で開示される、単離抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、被験体におけるＴ細胞の活性化を増強する方法であって、本明細書で開示される、単離抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、被験体は、血液がん、脳がん、腎細胞癌（例えば、腎明細胞癌）、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、および黒色腫からなる群より選択される疾患または障害を有する。ある特定の実施形態では、被験体は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群より選択されるウイルスにより引き起こされる慢性ウイルス感染を有する。ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体を、被験体へと、ＰＤ－１阻害剤、ＣＴＬＡ阻害剤、腫瘍特異抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二特異性抗体、抗酸化剤などの栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、および疾患または障害と関連する少なくとも１つの症状を好転させるのに有用な、任意の他の治療からなる群より選択される、第２の治療剤と組み合わせて投与する。
一態様では、本発明は、被験体における腫瘍または腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、それを必要とする被験体へと、治療有効量の、本明細書で開示される、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、腫瘍は、原発性または再発性である。ある特定の実施形態では、腫瘍は、確立された腫瘍である。ある特定の実施形態では、被験体は、転移性疾患を有し、かつ／または先行する治療により処置されている。ある特定の実施形態では、腫瘍は、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、リンパ腫、および黒色腫からなる群より選択される疾患または障害を伴う被験体に存在する。ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を、１回または複数回の用量として投与し、各用量を、直前の用量の１～４週間後に投与する。ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約１００ｍｇの用量で投与する。ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体を、被験体へと、ＰＤ－１阻害剤、ＣＴＬＡ阻害剤、腫瘍特異抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二特異性抗体、抗酸化剤などの栄養補助食品、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、および疾患または障害と関連する少なくとも１つの症状を好転させるのに有用な、任意の他の治療からなる群より選択される、第２の治療剤と組み合わせて投与する。一実施形態では、第２の治療剤は、ＰＤ－１阻害剤であり、この場合、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＲＥＧＮ２８１０である。ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋内、または頭蓋内投与する。
一態様では、本発明は、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害をレスキューする方法であって、Ｔ細胞を、本明細書で開示される、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップを含む方法を提供する。一実施形態では、Ｔ細胞を、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ＲＥＧＮ２８１０）と組み合わせた、本発明の抗ＬＡＧ３抗体と接触させる。
抗体の抗原結合性断片
そうでないことが具体的に指し示されない限りにおいて、本明細書で使用される「抗体」という用語は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「全長抗体分子」）ならびにこれらの抗原結合性断片を包含すると理解されるものとする。本明細書で使用される、抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、任意の、天然に存在するか、酵素的に得られるか、合成であるか、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質であって、抗原に特異的に結合して、複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。本明細書で使用される、抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、ＬＡＧ３に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１または複数の断片を指す。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含有する断片、または単離ＣＤＲを含みうる。ある特定の実施形態では、「抗原結合性断片」という用語は、多特異性の抗原結合性分子のポリペプチド断片を指す。このような実施形態では、「抗原結合性断片」という用語は、例えば、ＬＡＧ３に特異的に結合する、ＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。抗体の抗原結合性断片は、例えば、タンパク質分解性消化、または抗体の可変ドメインおよび（任意選択で）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作（ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）および発現を伴う、組換え遺伝子操作（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）法など、任意の適切な標準的技法を使用して、全長抗体分子から導出することができる。このようなＤＮＡは、公知であり、かつ／もしくは、例えば、市販の供給源である、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）からたやすく入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、シーケンシングし、化学的に操作することもでき、分子生物学的技術を使用して、例えば、１または複数の可変ドメインおよび／または定常ドメインを、適切な構成へと配置するか、またはコドンを導入するか、システイン残基を創出するか、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失させることなどにより操作することもできる。
抗原結合性断片の非限定的な例は、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる、最小限の認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、低分子免疫医薬（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなど、他の操作分子もまた、本明細書で使用される「抗原結合性断片」という表現の中に包含される。
抗体の抗原結合性断片は典型的に、少なくとも１つの可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であることが可能であり、一般に、１または複数のフレームワーク配列と隣接するか、またはこれらとインフレームにある、少なくとも１つのＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと会合するＶＨドメインを有する抗原結合性断片内では、ＶＨドメインと、ＶＬドメインとを、互いと比べて、任意の適切な配置に置くことができる。例えば、可変領域は、二量体であることが可能であり、ＶＨ－ＶＨ二量体、ＶＨ－ＶＬ二量体、またはＶＬ－ＶＬ二量体を含有しうる。代替的に、抗体の抗原結合性断片は、単量体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを含有しうる。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインへと共有結合的に連結された、少なくとも１つの可変ドメインを含有しうる。本発明の抗体の抗原結合性断片内で見出されうる、可変ドメインおよび定常ドメインの、非限定的な例示的構成は、（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬを含む。可変ドメインおよび定常ドメインの任意の構成であって、上記で列挙した例示的な構成のうちのいずれかを含む構成では、可変ドメインおよび定常ドメインを、互いと直接連結することもでき、完全なヒンジ領域もしくはリンカー領域または部分的なヒンジ領域もしくはリンカー領域により連結することもできる。ヒンジ領域は、少なくとも２つの（例えば、５つ、１０、１５、２０、４０、６０、またはこれを超える）アミノ酸からなることが可能であり、単一のポリペプチド分子内の、隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間の、可撓性または半可撓性の連結を結果としてもたらす。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、上記で列挙した、可変ドメインおよび定常ドメインの構成であって、互いと、かつ／または１または複数の単量体のＶＨドメインまたはＶＬドメインと非共有結合的に会合させた（例えば、ジスルフィド結合による）構成のうちのいずれかの、ホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含みうる。
全長抗体分子と同様に、抗原結合性断片は、単一特異性の場合もあり、多特異性（例えば、二特異性）の場合もある。抗体の多特異性抗原結合性断片は典型的に、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、この場合、各可変ドメインは、別個の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することが可能であろう。本明細書で開示される、例示的な二特異性抗体フォーマットを含む、任意の多特異性抗体フォーマットは、当技術分野で利用可能な慣用的な技法を使用して、本発明の抗体の抗原結合性断片の文脈における使用に適合させることができる。
ヒト抗体の調製
当技術分野では、トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作出するための方法が公知である。任意のこのような公知の方法を、本発明の文脈で使用して、ＬＡＧ３に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照されたい）、またはモノクローナル抗体を作出するための、任意の他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＬＡＧ３に対する高アフィニティーのキメラ抗体を、まず単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが、抗原性刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内因性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結した、ヒト重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むゲノムを有する、トランスジェニックマウスの作出を伴う。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖定常領域およびヒト軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結する。次いで、ＤＮＡを、完全ヒト抗体を発現することが可能な細胞内で発現させる。
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、目的の抗原をチャレンジし、リンパ球（Ｂ細胞など）を、抗体を発現するマウスから回収する。リンパ球を、骨髄腫細胞系と融合させて、不死ハイブリドーマ細胞系を調製し、このようなハイブリドーマ細胞系を、スクリーニングおよび選択して、目的の抗原に特異的な抗体を産生する、ハイブリドーマ細胞系を同定する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の、所望アイソタイプの定常領域へと連結することができる。このような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞内で作製することができる。代替的に、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを、抗原特異的リンパ球から直接単離することもできる。
まず、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、高アフィニティーキメラ抗体を単離する。下記の実験セクションにおける通り、抗体を特徴づけ、アフィニティー、選択性、エピトープなどを含む、所望の特徴について選択することができる。マウス定常領域を、所望のヒト定常領域で置きかえて、本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型ＩｇＧ１もしくは野生型ＩｇＧ４または修飾ＩｇＧ１もしくは修飾ＩｇＧ４を作出する。選択される定常領域は、具体的使用に応じて変動しうるが、高アフィニティーの抗原結合性特徴および標的特異性特徴は、可変領域内に存在する。
生物学的等価物
本発明の抗ＬＡＧ３抗体および抗体断片は、記載される抗体のアミノ酸配列から変動するが、ＬＡＧ３に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このような改変体の抗体および抗体断片は、１カ所または複数カ所の、アミノ酸の付加、欠失、または置換であって、親配列と比較した場合、記載される抗体の生物学的活性と本質的に同等の生物学的活性を呈示する付加、欠失、または置換を含む。同様に、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示される配列と比較して、１カ所または複数カ所の、ヌクレオチドの付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体断片と、本質的に生物学的に同等である抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。
２つの抗原結合性タンパク質または抗体は、例えば、単回用量であれ、複数回用量であれ、同様の実験条件下、同じモル用量で投与された場合に、それらの吸収の速度および程度が有意差を示さない、医薬同等物または医薬代替物であれば、生物学的に同等であると考えられる。一部の抗体は、それらの吸収の程度において同等であるが、それらの吸収の速度において同等でないが、このような吸収速度の差違が、意図的なものであり、例えば、長期使用時において、有効な体内薬物濃度を達成するのに必須ではなく、表示に反映されており、研究される特定の薬物製品にとって、医学的に重要でないと考えられるため、生物学的に同等であると考えうるならば、同等物または医薬代替物と考えられる。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、それらの安全性、純度、または効力において、臨床的に有意義な差違が見られない場合、生物学的に同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、患者を、基準生成物と、生物学的生成物との間で、そのような切換えを伴わずに治療を持続させた場合と比較した、予測される有害作用の危険性の増大であって、免疫原性の臨床的に有意な変化、または有効性の減殺を含む有害作用の危険性の増大を伴わずに、１回または複数回にわたり切り換えうる場合、生物学的に同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、それらのいずれもが、そのような機構が公知である程度において、１または複数の使用条件に対する、１または複数の共通の作用機構により作用する場合、生物学的に同等である。
生物学的等価性は、ｉｎ ｖｉｖｏ法により裏付けることもでき、かつ／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ法により裏付けることもできる。生物学的等価性の尺度は、例えば、（ａ）ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ試験であって、抗体またはその代謝物の濃度を、血液中、血漿中、血清中、または他の生物学的流体中で、時間の関数として測定するｉｎ ｖｉｖｏ試験；（ｂ）ヒトのｉｎ ｖｉｖｏにおけるバイオアベイラビリティーデータと相関しており、その妥当な予測であるｉｎ ｖｉｔｒｏ試験；（ｃ）ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ試験であって、抗体（またはその標的）の適切な短期的薬理学効果を時間の関数として測定するｉｎ ｖｉｖｏ試験；および（ｄ）十分にコントロールされた臨床試験であって、抗体の安全性、有効性、もしくはバイオアベイラビリティー、または生物学的等価性を確立する臨床試験を含む。
本発明の抗体の生物学的に同等な改変体は、例えば、残基または配列の多様な置換を施すことにより構築することもでき、生物学的活性に必要とされない、末端または内部の残基または配列を欠失させることにより構築することもできる。例えば、生物学的活性に必須でないシステイン残基は、復元時における、不要であるかまたは不適正な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するように、欠失させるか、または他のアミノ酸で置きかえることができる。他の文脈では、生物学的に同等な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を消失させるかまたは除去する変異を含む抗体改変体を含みうる。
Ｆｃ改変体を含む抗ＬＡＧ３抗体
本発明のある特定の実施形態に従い、例えば、中性のｐＨと比較して、酸性のｐＨにおいて、抗体の、ＦｃＲｎ受容体への結合を増強または減殺する、１カ所または複数カ所の変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＬＡＧ３抗体が提供される。例えば、本発明は、Ｆｃドメインの、ＣＨ２領域内またはＣＨ３領域内に変異を含む、抗ＬＡＧ３抗体を含み、この場合、変異は、酸性環境（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲である、エンドソーム内）で、Ｆｃドメインの、ＦｃＲｎへのアフィニティーを増大させる。このような変異は、動物へと投与されると、抗体の血清半減期の延長を結果としてもたらしうる。このようなＦｃ修飾の非限定的な例は、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）；２５０および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、ならびに２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における修飾；または４２８および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）、および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、ＦまたはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、またはＮ４３４Ｙ］）における修飾；または２５０および／または４２８位における修飾；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）および４３４位における修飾を含む。一実施形態では、修飾は、４２８Ｌ修飾（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ修飾（例えば、Ｎ４３４Ｓ）；４２８Ｌ修飾、２５９Ｉ修飾（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ修飾（例えば、Ｖ３０８Ｆ）；４３３Ｋ修飾（例えば、Ｈ４３３Ｋ）、および４３４位の修飾（例えば、４３４Ｙ）；２５２、２５４、および２５６位の修飾（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）；２５０Ｑ修飾および４２８Ｌ修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／または３０８修飾（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、修飾は、２６５Ａ修飾（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ修飾（例えば、Ｎ２９７Ａ）を含む。
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａ、および４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群より選択される、変異の１または複数の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＬＡＧ３抗体を含む。一実施形態では、本発明は、二量体の安定化を促進するように、ＩｇＧ４のヒンジ領域内にＳ１０８Ｐ変異を含むＦｃドメインを含む抗ＬＡＧ３抗体を含む。前出のＦｃドメイン変異、および本明細書で開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせは、本発明の範囲内にあることが想定される。
本発明はまた、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＬＡＧ３抗体も含むが、この場合、キメラＣＨ領域は、１つを超える免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子、またはヒトＩｇＧ４分子に由来する、ＣＨ２ドメインの一部または全部であって、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子、またはヒトＩｇＧ４分子に由来する、ＣＨ３ドメインの一部または全部と組み合わされた、ＣＨ２ドメインの一部または全部を含むキメラＣＨ領域を含みうる。ある特定の実施形態に従い、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有する、キメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する、「上方ヒンジ」のアミノ酸配列（ＥＵ番号付けに従い、２１６～２２７位に由来するアミノ酸残基）であって、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「下方ヒンジ」の配列（ＥＵ番号付けに従い、２２８～２３６位に由来するアミノ酸残基）と組み合わされたアミノ酸配列を含みうる。ある特定の実施形態に従い、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４の上方ヒンジに由来するアミノ酸残基と、ヒトＩｇＧ２の下方ヒンジに由来するアミノ酸残基とを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で記載されるキメラＣＨ領域を含む抗体は、抗体の治療特性または薬物動態特性に有害な影響を及ぼさずに、Ｆｃエフェクター機能の修飾を呈示する（例えば、その開示が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１４０２４３５０４号を参照されたい）。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号５６９、５７０、５７１、５７２、および５７３からなる群より選択される配列を含む。
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、ＬＡＧ３への結合により機能する。本発明は、可溶性の単量体または二量体のＬＡＧ３分子に、高アフィニティーで結合する、抗ＬＡＧ３抗体およびそれらの抗原結合性断片を含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書の実施例３で規定されるアッセイフォーマットを使用して、表面プラズモン共鳴により測定される通り、約１０ｎＭ未満のＫＤで、単量体のＬＡＧ３（例えば、２５℃または３７℃で）に結合する抗体および抗体の抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例３で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴により測定される通り、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、約０．０５ｎＭ未満、または約０．０４ｎＭ未満のＫＤで、単量体のＬＡＧ３に結合する。
本発明はまた、例えば、本明細書の実施例３で規定されるアッセイフォーマットを使用して、表面プラズモン共鳴により測定される通り、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、二量体のＬＡＧ３（例えば、２５℃または３７℃で）に結合する抗体およびそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例３で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、表面プラズモン共鳴により測定される通り、約０．５ｎＭ未満、約０．２５ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、約０．０５ｎＭ未満、または約０．０１ｎＭ未満のＫＤで、二量体のＬＡＧ３に結合する。
本発明はまた、例えば、本明細書の実施例３で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、２５℃または３７℃で、表面プラズモン共鳴により測定される通り、約１．６分間を超える解離半減期（ｔ１／２）で、ＬＡＧ３に結合する抗体およびそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例３で規定されるアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ捕捉または抗原捕捉フォーマット）、または実質的に類似するアッセイを使用して、２５℃または３７℃で、表面プラズモン共鳴により測定される通り、約５分間を超える、約１０分間を超える、約３０分間を超える、約５０分間を超える、約６０分間を超える、約７０分間を超える、約８０分間を超える、約９０分間を超える、約１００分間を超える、約２００分間を超える、約３００分間を超える、約４００分間を超える、約５００分間を超える、約６００分間を超える、約７００分間を超える、約８００分間を超える、約９００分間を超える、約１０００分間を超える、または約１１００分間を超えるｔ１／２で、ＬＡＧ３に結合する。
本発明はまた、本明細書の実施例５で規定されるフローサイトメトリーアッセイ、または実質的に類似するアッセイにより測定される通り、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ヒトＬＡＧ３発現細胞に結合する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例５で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、フローサイトメトリーアッセイにより測定される通り、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、または約０．５ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合する。
本発明はまた、本明細書の実施例５で規定されるフローサイトメトリーアッセイ、または実質的に類似するアッセイにより測定される通り、約２．５ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザルＬＡＧ３発現細胞に結合する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例５で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、フローサイトメトリーアッセイにより測定される通り、約２ｎＭ未満、または約１ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合する。
本発明はまた、例えば、実施例７で示される細胞接着アッセイ、または実質的に類似するアッセイを使用して決定される通り、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩ（ヒトＨＬＡ－ＤＲ２）への結合を遮断する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例７で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、細胞接着アッセイにより測定される通り、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満のＩＣ５０で、ＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断する。
本発明はまた、例えば、実施例７で示される細胞接着アッセイ、または実質的に類似するアッセイを使用して決定される通り、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩ（マウスＨＬＡ－ＤＲ２）への結合を遮断する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例７で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、細胞接着アッセイにより測定される通り、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、または約５ｎＭ未満のＩＣ５０で、マウスＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断する。
本発明はまた、本明細書の実施例７で規定される細胞接着アッセイ、または実質的に類似するアッセイにより測定される通り、ＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩまたはマウスＭＨＣクラスＩＩへの結合を、９０％を超えて遮断する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。
本発明はまた、本明細書の実施例８で規定されるＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイ、または実質的に類似するアッセイにより測定される通り、９ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧにより誘導されるＴ細胞の下方調節を遮断する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例８で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、Ｔ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイにより測定される通り、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、または約０．１ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ３により誘導されるＴ細胞の下方調節を遮断する。
本発明はまた、本明細書の実施例９で規定される蛍光アッセイ、または実質的に類似するアッセイにより測定される通り、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザル活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合する抗体またはそれらの抗原結合性断片も含む。ある特定の実施形態では、抗体またはそれらの抗原結合性断片は、例えば、本明細書の実施例９で規定されるアッセイフォーマット、または実質的に類似するアッセイを使用して、蛍光アッセイにより測定される通り、約１．１ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満、または約０．１ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザル活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、そのアミノ酸配列が配列番号５８２に示される全長タンパク質の任意の他の領域または断片への結合を介して、ＬＡＧ３と関連するＭＨＣクラスＩＩ結合活性を遮断または阻害することにより機能しうる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、それを必要とする被験体へと、予防的に投与されると、腫瘍の増殖を阻害するか、またはがんの進行を遅延させるのに有用であり、被験体の生存を延長しうる。例えば、本発明の抗体の投与は、原発性腫瘍の縮小をもたらすことが可能であり、転移または続発性腫瘍の発生を防止しうる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、それを必要とする被験体へと、治療的に投与されると、腫瘍の増殖を阻害するのに有用であり、被験体の生存を延長しうる。例えば、治療有効量の、本発明の抗体の、被験体への投与は、被験体において確立された腫瘍の縮小および消滅をもたらしうる。
一実施形態では、本発明は、ＬＡＧ３に結合する単離組換えモノクローナル抗体またはそれらの抗原結合性断片であって、以下の特徴：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８、および５５４からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＨＣＶＲを含むこと；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６、および５６２からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＬＣＶＲを含むこと；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４６４、４７２、４８０、４８８、４９６、５０４、５１２、５２０、５４４、および５６０からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、５２８、５３６、５５２、および５６８からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６０、４６８、４７６、４８４、４９２、５００、５０８、５１６、５４０、および５５６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４６２、４７０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、５１８、５４２、および５５８からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、５２４、５３２、５４８、および５６４からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、５２６、５３４、５５０、および５６６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、それと実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと；（ｖ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｖｉ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約８ｎＭ未満のＫＤで、単量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｖｉｉ）２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｖｉｉｉ）３７℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される通り、約１ｎＭ未満のＫＤで、二量体ヒトＬＡＧ３に結合すること；（ｉｘ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｘ）フローサイトメトリーアッセイにおいて測定される通り、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｘｉ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；（ｘｉｉ）細胞接着アッセイにより決定される通り、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３の、マウスＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断すること；（ｘｉｉｉ）細胞接着アッセイにより決定される通り、ｈＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合を９０％超遮断すること；（ｘｉｖ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて測定される通り、約９ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ３により媒介される、Ｔ細胞活性の阻害をレスキューすること；（ｘｖ）蛍光アッセイにおいて測定される通り、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合すること；（ｘｖｉ）がんを伴う被験体における腫瘍の増殖を抑制し、生存を延長すること、ならびに（ｘｖｉｉ）完全ヒト抗体であることのうちの１または複数を呈示する抗体またはその断片を提供する。
本発明の抗体は、前述の生物学的特徴、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１または複数を有しうる。当業者には、本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書の作業例を含む、本開示についての再検討から明らかであろう。
種選択性および種交差反応性
本発明のある特定の実施形態に従い、抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に結合するが、他の種に由来するＬＡＧ３には結合しない。代替的に、ある特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３および１または複数の非ヒト種に由来するＬＡＧ３に結合する。例えば、本発明の抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に結合しうるが、マウスＬＡＧ３、ラットＬＡＧ３、モルモットＬＡＧ３、ハムスターＬＡＧ３、アレチネズミＬＡＧ３、ブタＬＡＧ３、ネコＬＡＧ３、イヌＬＡＧ３、ウサギＬＡＧ３、ヤギＬＡＧ３、ヒツジＬＡＧ３、ウシＬＡＧ３、ウマＬＡＧ３、ラクダＬＡＧ３、カニクイザルＬＡＧ３、マーモセットＬＡＧ３、アカゲザルＬＡＧ３、またはチンパンジーＬＡＧ３のうちの１または複数には、場合により、結合することもあり、結合しないこともある。ある特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３およびカニクイザルＬＡＧ３に、同じアフィニティーで結合する場合もあり、異なるアフィニティーで結合する場合もあるが、ラットＬＡＧ３およびマウスＬＡＧ３には結合しない。
エピトープマッピングおよび関連する技術
本発明は、ＬＡＧ３分子の１または複数のドメインであって、例えば、Ｄ１～Ｄ４の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含むドメイン内で見出される、１または複数のアミノ酸と相互作用する抗ＬＡＧ３抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＬＡＧ３分子の、前述のドメインのうちのいずれかに位置する、３つまたはこれを超える（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはこれを超える）アミノ酸による、単一の連続配列（例えば、ドメイン内の線形エピトープ）からなりうる。代替的に、エピトープは、ＬＡＧ３分子の、前述のドメインの一方または両方に位置する、複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）（例えば、コンフォメーションエピトープ）からなりうる。
当業者に公知の多様な技法を使用して、抗体が、ポリペプチド内またはタンパク質内の「１または複数のアミノ酸と相互作用する」のかどうかを決定することができる。例示的な技法は、例えば、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）において記載されているアッセイなど、慣用的な交差遮断アッセイを含む。他の方法は、アラニン走査変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２４８巻：４４３～６３頁）、ペプチド切断解析、結晶構造研究、およびＮＭＲ解析を含む。加えて、エピトープの切出し、エピトープの抽出、および抗原の化学修飾などの方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）、Ｐｒｏｔ． Ｓｃｉ．、９巻：４８７～４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するのに使用しうる別の方法は、質量分析により検出される、水素／重水素交換である。一般的に述べると、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質の重水素による標識化、その後に重水素により標識されたタンパク質への抗体の結合を伴う。次に、タンパク質／抗体複合体を、水へと移すと、抗体複合体により保護されているアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンより緩徐な速度で、重水素から水素への逆交換を経る。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持することが可能であるため、界面内に含まれないアミノ酸と比較して、相対的に大きな質量を呈示する。抗体を解離させた後で、標的タンパク質を、プロテアーゼによる切断および質量分析による解析にかけ、これにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する、重水素により標識された残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２６７巻：２５２～２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）、Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．、７３巻：２５６Ａ～２６５Ａ頁を参照されたい。
「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、連続アミノ酸から形成される場合もあり、タンパク質の三次フォールディングにより並置される非連続アミノ酸から形成される場合もある。連続アミノ酸から形成されるエピトープは典型的に、変性溶媒への曝露時に保持されるのに対し、三次フォールディングにより形成されるエピトープは典型的に、変性溶媒で処理すると失われる。エピトープは典型的に、固有の空間的コンフォメーション内に、少なくとも３個のアミノ酸を含み、通例、少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。
抗原構造ベースの抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としてもまた公知である、修飾支援プロファイリング（ＭＡＰ）とは、同じ抗原を指向する多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、各抗体の、化学的または酵素的に修飾された抗原表面への結合プロファイルの類似性に従い類別する方法（参照によりその全体において本明細書に具体的に組み込まれる、ＵＳ２００４／０１０１９２０を参照されたい）である。各類別は、別の類別により表されるエピトープと、顕著に異なるか、または部分的に重複する、固有のエピトープを反映しうる。この技術は、特徴づけを、遺伝的に顕著に異なる抗体に注力しうるように、遺伝的に同一な抗体の迅速なフィルタリングを可能とする。ハイブリドーマスクリーニングに適用した場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するｍＡｂを産生する、稀なハイブリドーマクローンの同定を容易とする。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を、異なるエピトープに結合する抗体の群へと選別することができる。
ある特定の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片は、ＬＡＧ３内の、例示される領域のうちの任意の１または複数の中のエピトープであって、配列番号５８２で例示される天然形態のエピトープ、もしくは配列番号５７４～５７６で例示される、組換えにより作製されたエピトープ、またはこれらの断片に結合する。一部の実施形態では、本発明の抗体は、ＬＡＧ３のアミノ酸残基２９～４５０からなる群より選択される、１または複数のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。一部の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５７６により例示される、カニクイザルＬＡＧ３のアミノ酸残基１～５３３からなる群より選択される、１または複数のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。
ある特定の実施形態では、本発明は、ＬＡＧ３の細胞外領域（配列番号５８８）内で見出される１または複数のエピトープと相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体およびそれらの抗原結合性断片を含む。エピトープは、ＬＡＧ３の細胞外領域内に位置する、３つまたはこれを超える（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはこれを超える）アミノ酸による、１または複数の連続配列からなりうる。代替的に、エピトープは、ＬＡＧ３の細胞外領域内に位置する、複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなりうる。本明細書の実施例１８に示す通り、例示的な本発明の抗体である、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐが相互作用するＬＡＧ３のエピトープは、配列番号５８８のアミノ酸２８～７１に対応するアミノ酸配列である、ＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹ（配列番号５８９）により規定される。したがって、本発明は、配列番号５８８のアミノ酸２８～７１（すなわち、配列ＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹ［配列番号５８９］）からなる領域内に含有される、１または複数のアミノ酸と相互作用する抗ＬＡＧ３抗体を含む。
本発明は、本明細書の表１で記載される、特定の例示的な抗体のうちのいずれか、または表１で記載された例示的な抗体のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と同じエピトープ、またはエピトープの部分に結合する抗ＬＡＧ３抗体を含む。同様に、本発明はまた、ＬＡＧ３またはＬＡＧ３断片への結合について、本明細書の表１で記載される、特定の例示的な抗体のうちのいずれか、または表１で記載された例示的な抗体のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と競合する抗ＬＡＧ３抗体も含む。例えば、本発明は、ＬＡＧ３への結合について、本明細書の実施例４で規定される、１または複数の抗体（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ、Ｈ４Ｈ１４８１３Ｎ、Ｈ４Ｈ１５４７９Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８２Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８３Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４９８Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７８１９Ｐ、およびＨ４Ｈ１７８２３Ｐ）と交差競合する抗ＬＡＧ３抗体を含む。
当技術分野で公知の、慣用的な方法を使用することにより、抗体が、基準抗ＬＡＧ３抗体と同じエピトープに結合するのか、これとの結合について競合するのかを容易に決定することができる。例えば、被験抗体が、本発明の基準抗ＬＡＧ３抗体と同じエピトープに結合するのかどうかを決定するために、基準抗体を、飽和条件下で、ＬＡＧ３タンパク質またはＬＡＧ３ペプチドに結合させる。次に、被験抗体が、ＬＡＧ３分子に結合する能力について評価する。被験抗体が、基準抗ＬＡＧ３抗体による飽和結合の後で、ＬＡＧ３に結合することが可能であれば、被験抗体は、基準抗ＬＡＧ３抗体と異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方、被験抗体が、基準抗ＬＡＧ３抗体による飽和結合の後で、ＬＡＧ３タンパク質に結合することができなければ、被験抗体は、本発明の基準抗ＬＡＧ３抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合しうる。
抗体が、結合について、基準抗ＬＡＧ３抗体と競合するのかどうかを決定するために、上記で記載した結合法を、２つの方向で実施する。第１の方向では、基準抗体を、飽和条件下で、ＬＡＧ３タンパク質に結合させ、その後にＬＡＧ３分子への被験抗体の結合の評価を行う。第２の方向では、被験抗体を、飽和条件下で、ＬＡＧ３分子に結合させ、その後にＬＡＧ３分子への基準抗体の結合の評価を行う。両方の方向で、第１の（飽和）抗体だけに、ＬＡＧ３分子への結合が可能であれば、被験抗体と、基準抗体とは、ＬＡＧ３への結合について競合すると結論付けられる。当業者により察知される通り、結合について、基準抗体と競合する抗体は、必ずしも、基準抗体と同一なエピトープに結合しない場合もあり、基準抗体の結合を、重複または隣接するエピトープへの結合により、立体的に遮断する場合もある。
各抗体が、他の抗体の、抗原への結合を、競合的に阻害する（遮断する）場合、２つの抗体は、同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１、５、１０、２０、または１００倍過剰量の、一方の抗体は、競合的結合アッセイにおいて測定される通り、他方の抗体の結合を、少なくとも５０％であるが、好ましくは７５％、９０％、なおまたは９９％阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９０年、５０巻：１４９５～１５０２頁を参照されたい）。代替的に、抗原内の、本質的に全てのアミノ酸変異であって、一方の抗体の結合を低減するかまたは消失させる変異が、他方の抗体の結合を低減するかまたは消失させる場合、２つの抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低減するかまたは消失させる、一部のアミノ酸変異が、他方の抗体の結合を低減するかまたは消失させる場合、２つの抗体は、重複するエピトープを有する。
次いで、さらなる慣用的な実験（例えば、ペプチド変異および結合解析）を実行して、観察される、被験抗体の結合の欠如が、実際、基準抗体と同じエピトープへの結合に起因するのか、立体遮断（または別の現象）が、観察される結合の欠如の一因をなすのかを確認することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当技術分野で利用可能な、任意の他の定量的抗体結合アッセイもしくは定性的抗体結合アッセイを使用して実施することができる。
免疫コンジュゲート
本発明は、がんを処置するのに、細胞毒素または化学療法剤などの治療用部分へとコンジュゲートさせた、ヒト抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体（「免疫コンジュゲート」）を包含する。本明細書で使用される「免疫コンジュゲート」という用語は、細胞毒素、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチドもしくはタンパク質、または治療剤へと、化学的または生物学的に連結された抗体を指す。抗体は、その標的に結合することが可能である限りにおいて、分子に沿った任意の位置において、細胞毒素、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド、または治療剤へと連結することができる。免疫コンジュゲートの例は、抗体薬物コンジュゲートおよび抗体－毒素融合タンパク質を含む。一実施形態では、薬剤は、ＬＡＧ３に対する第２の異なる抗体でありうる。ある特定の実施形態では、抗体は、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞に特異的な薬剤へとコンジュゲートさせることができる。抗ＬＡＧ３抗体へとコンジュゲートさせうる治療用部分の種類については、処置される状態と、達成される、所望の治療的効果とを考慮に入れることになる。免疫コンジュゲートを形成するのに適する薬剤の例は、当技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
多特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性の場合もあり、二特異性の場合もあり、または多特異性の場合もある。多特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的な場合もあり、１つを超える標的ポリペプチドに特異的な抗原結合性ドメインを含有する場合もある。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：６０～６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２２巻：２３８～２４４頁を参照されたい。
一態様では、本発明は、多特異性の抗原結合性分子またはそれらの抗原結合性断片を含み、この場合、免疫グロブリンの一方の特異性は、ＬＡＧ３の細胞外ドメインまたはその断片に特異的であり、免疫グロブリンの他方の特異性は、ＬＡＧ３の細胞外ドメイン外における結合、もしくは第２の治療的標的への結合に特異的であるか、または治療的部分へのコンジュゲーションに起因する。
本発明の多特異性の抗原結合性分子、またはそれらの改変体のうちのいずれかを、当業者に公知の、標準的な分子生物学的技術（例えば、組換えＤＮＡ技術およびタンパク質発現技術）を使用して構築することができる。
一部の実施形態では、ＬＡＧ３特異的抗体を、ＬＡＧ３の顕著に異なるドメインに結合する可変領域を併せて連結して、単一の結合分子内に、二重のドメイン特異性を付与する、二特異性フォーマット（「二特異性」）で作出する。適切にデザインされた二特異性剤は、特異性および結合アビディティーの両方を増大させることにより、全体的なＬＡＧ３阻害有効性を増強しうる。個々のドメイン（例えば、Ｎ末端ドメインのセグメント）に対する特異性を伴う可変領域、または１つのドメイン内の異なる領域に結合しうる可変領域を、各領域が、別個のエピトープ、または１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能とする、構造足場上で対合させる。二特異性剤についての１つの例では、１つのドメインに対する特異性を伴う結合剤に由来する重鎖可変領域（ＶＨ）を、第２のドメインに対する特異性を伴う一連の結合剤に由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）で組み換えて、そのＶＨの元の特異性を破壊せずに、元のＶＨと対合しうる、非同族のＶＬパートナーを同定する。このようにして、単一のＶＬセグメント（例えば、ＶＬ１）を、２つの異なるＶＨドメイン（例えば、ＶＨ１およびＶＨ２）と組み合わせて、２つの結合「アーム」（ＶＨ１－ＶＬ１およびＶＨ２－ＶＬ１）から構成される二特異性剤を作出することができる。単一のＶＬセグメントの使用は、系の複雑性を低減し、これにより、二特異性剤を作出するのに使用される、クローニング工程、発現工程、および精製工程を単純化し、これらの効率を増大させる（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９およびＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照されたい）。
代替的に、本明細書で記載される技法、または当業者に公知の他の技法を使用して、１つを超えるドメインおよび第２の標的に結合する抗体であって、例えば、第２の異なる抗ＬＡＧ３抗体などであるがこれらに限定されない抗体を、二特異性フォーマットで調製することができる。顕著に異なる領域に結合する抗体可変領域を、関与性の部位、例えば、ＬＡＧ３の細胞外ドメインに結合する可変領域と併せて連結して、単一の結合分子に、二重抗原特異性を付与することができる。この性質を有する、適切にデザインされた二特異性剤は、二重の機能を果たす。細胞外ドメインに対する特異性を伴う可変領域を、細胞外ドメイン外に対する特異性を伴う可変領域と組み合わせ、各可変領域が、別個の抗原に結合することを可能とする、構造足場上で対合させる。
本発明の文脈で使用されうる、例示的な二特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ ＣＨ３ドメインの使用を伴うが、この場合、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインと第２のＩｇ ＣＨ３ドメインとは、互いと、少なくとも１つのアミノ酸異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差違は、二特異性抗体の、プロテインＡへの結合を、アミノ酸差違を欠く二特異性抗体と比較して低減する。一実施形態では、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴのエクソン番号付けによる；ＥＵ番号付けによるＨ４３５Ｒ）など、プロテインＡへの結合を低減するかまたは消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含みうる。第２のＣＨ３内で見出されうる、さらなる修飾は、ＩｇＧ１抗体の場合のＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合のＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ４抗体の場合のＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）を含む。上記で記載した二特異性抗体フォーマット上の変動は、本発明の範囲内にあることが想定される。
本発明の文脈で使用されうる、他の例示的な二特異性フォーマットは、限定なしに述べると、例えば、ｓｃＦｖベースの二特異性フォーマットまたはダイアボディ二特異性フォーマット、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ＫＩＨ（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ＫＩＨ（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）を伴う共通軽鎖など）、交差Ｍａｂ、交差Ｆａｂ、（ＳＥＥＤ）ｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用型Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、およびＭａｂ２二特異性フォーマットを含む（前出のフォーマットの総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ、４巻：６号、１～１１頁、およびこれに引用されている参考文献を参照されたい）。二特異性抗体はまた、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもでき、例えば、この場合、直交性の化学反応性を伴う非天然アミノ酸を使用して、部位特異的抗体－オリゴヌクレオチドコンジュゲートを作出するが、ここで、このコンジュゲートは、規定された組成、価数、および形状を伴う、多量体の複合体へと自己アセンブルする（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：２０１２年１２月４日］を参照されたい）。
治療的投与および製剤
本発明は、本発明の抗ＬＡＧ３抗体またはそれらの抗原結合性断片を含む治療用組成物を提供する。本発明に従う治療用組成物は、適切な担体、賦形剤、および移入、送達、耐容性（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）の改善をもたらすように製剤へと組み込まれる他の薬剤などと共に投与されるであろう。大多数の適切な製剤は、全ての創薬化学者に公知の処方集：「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ中に見出すことができる。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、蝋、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油エマルジョンおよび油中水エマルジョン、ｃａｒｂｏｗａｘエマルジョン（多様な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびｃａｒｂｏｗａｘを含有する半固体混合物を含む。また、Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ＰＤＡ、（１９９８年）、Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ、５２巻：２３８～３１１頁も参照されたい。
抗体の用量は、投与される被験体の年齢およびサイズ、標的疾患、条件、投与経路などに応じて変動しうる。本発明の抗体を、成体患者における疾患または障害を処置するか、またはこのような疾患を防止するために使用する場合、本発明の抗体を、通常、体重１ｋｇ当たり約０．１～約６０ｍｇ、より好ましくは、体重１ｋｇ当たり約５～約６０、約２０～約５０、約１０～約５０、約１～約１０、または約０．８～約１１ｍｇの用量の単回投与で投与することが有利である。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続期間を調整することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも約０．１ｍｇ～約８００ｍｇ、約１～約５００ｍｇ、約５～約３００ｍｇ、または約１０～約２００ｍｇ、約１０～約１００ｍｇ、もしくは約１０～約５０ｍｇの用量の初期用量として投与することができる。ある特定の実施形態では、初期用量に続き、２回目の用量、またはその後複数回にわたる抗体もしくはその抗原結合性断片の用量を、初期用量の量とほぼ同じであるかまたはこれ未満でありうる量で行うことができるが、この場合、その後の用量を、少なくとも１日間～３日間；少なくとも１週間、少なくとも２週間；少なくとも３週間；少なくとも４週間；少なくとも５週間；少なくとも６週間；少なくとも７週間；少なくとも８週間；少なくとも９週間；少なくとも１０週間；少なくとも１２週間；または少なくとも１４週間隔てる。
多様な送達系、例えば、リポソーム内の封入、マイクロ粒子、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することが可能な組換え細胞、受容体により媒介されるエンドサイトーシスが公知であり、本発明の医薬組成物を投与するのに使用することができる（例えば、Ｗｕら（１９８７年）、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６２巻：４４２９～４４３２頁を参照されたい）。導入法は、皮内経路、経皮経路、筋内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路、および経口経路を含むがこれらに限定されない。組成物は、任意の簡便な経路、例えば、注入またはボーラス注射、上皮または粘膜皮膚内膜を介する吸収（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜、および腸粘膜など）を介して投与することができ、他の生体活性薬剤と併せて投与することができる。投与は、全身投与の場合もあり、局所投与の場合もある。医薬組成物はまた、小胞、具体的にはリポソームにより送達することもできる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻：１５２７～１５３３頁を参照されたい）。
本明細書ではまた、本発明の抗体を送達するためのナノ粒子の使用も想定される。抗体コンジュゲートナノ粒子は、治療的適用および診断的適用のいずれのためにも使用することができる。抗体コンジュゲートナノ粒子、ならびに調製および使用方法については、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｒｒｕｅｂｏ， Ｍ．ら、２００９年（「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｊ． Ｎａｎｏｍａｔ．、２００９巻、文献ＩＤ：４３９３８９、２４頁、ｄｏｉ：１０．１１５５／２００９／４３９３８９）により詳細に記載されている。腫瘍細胞または自己免疫組織細胞またはウイルス感染細胞をターゲティングするように、ナノ粒子を開発し、医薬組成物中に含有される抗体へとコンジュゲートさせることができる。薬物送達のためのナノ粒子については、例えば、各々がその全体において本明細書に組み込まれる、ＵＳ８２５７７４０またはＵＳ８２４６９９５にもまた記載されている。
ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出系を、組成物の標的の近傍に設置することができ、このため、全身用量の一部を要求するに過ぎない。
注射用調製物は、静脈内注射、皮下注射、皮内注射、頭蓋内注射、腹腔内注射、および筋内注射、点滴注入などのための剤形を含みうる。これらの注射用調製物は、公知の方法により調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、上記で記載した抗体またはその塩を、従来注射のために使用されている、滅菌水性媒体中または滅菌油性媒体中で、溶解させるか、懸濁させるか、または乳化させることにより調製することができる。注射用の水性媒体としては、例えば、生理食塩液、グルコース、およびアルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］など、適切な可溶化剤と組み合わせて使用しうる他の補助剤などを含有する等張性溶液がある。油性媒体としては、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用しうる、ゴマ油、ダイズ油などが使用される。このようにして調製された注射剤は、適切なアンプルに充填することが好ましい。
本発明の医薬組成物は、標準的な注射針およびシリンジにより皮下送達することもでき、静脈内送達することもできる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスも、本発明の医薬組成物の送達に、たやすく適用される。このようなペン型送達デバイスは、再使用可能な場合もあり、使い捨ての場合もある。再使用可能ペン型送達デバイスは一般に、医薬組成物を含有する交換型カートリッジを活用する。カートリッジ内の医薬組成物の全てが投与され、カートリッジが空となったら、空のカートリッジをたやすく廃棄し、医薬組成物を含有する新たなカートリッジで置きかえることができる。こうして、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスでは、交換型カートリッジは存在しない。そうではなくて、使い捨てのペン型送達デバイスには、デバイス内のレザバー内に保持された医薬組成物が、あらかじめ充填される。レザバーの医薬組成物が空になったら、デバイス全体を廃棄する。
本発明の医薬組成物の皮下送達では、多数の再使用可能なペン型送達デバイスおよび自動注射（ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ）送達デバイスが適用される。例は、少数を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むが、当然ながらこれらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達で適用される、使い捨てのペン型送達デバイスの例は、少数を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）を含むが、当然ながらこれらに限定されない。
上記で記載した、経口使用または非経口使用のための医薬組成物は、有効成分の用量に適する単位用量の剤形へと調製すると有利である。単位用量にあるこのような剤形は、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射剤（アンプル）、坐剤などを含む。含有される抗体の量は一般に、単位用量にある剤形１つ当たり約５～約５００ｍｇであり、とりわけ、注射剤の形態では、抗体は、約５～約１００ｍｇで含有されることが好ましく、他の剤形では、約１０～約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
抗体の治療的使用
本発明の抗体は、とりわけ、ＬＡＧ３の発現、シグナル伝達、もしくは活性と関連するか、もしくはこれらにより媒介されるか、または、ＬＡＧ３と、ＬＡＧ３のリガンドであるＭＨＣクラスＩＩの相互作用を遮断するか、あるいはＬＡＧ３の活性および／またはシグナル伝達を他の形で阻害することにより処置可能な、任意の疾患または障害を、処置する、防止する、および／または好転させるのに有用である。例えば、本発明は、本明細書で記載される抗ＬＡＧ３抗体（または抗ＬＡＧ３抗体を含む医薬組成物）を、このような処置を必要とする患者へと投与することにより、がんを処置し（腫瘍増殖を阻害し）、かつ／またはウイルス感染を処置するための方法、ならびにがんの処置（腫瘍増殖の阻害）および／またはウイルス感染の処置における使用のための、抗ＬＡＧ３抗体（または抗ＬＡＧ３抗体を含む医薬組成物）を提供する。本発明の抗体は、がんもしくはウイルス感染などの疾患もしくは障害もしくは状態の、処置、防止、および／もしくは好転、ならびに／またはこのような疾患、障害、もしくは状態と関連する、少なくとも１つの症状を好転させるのに有用である。本明細書で記載される処置法の文脈では、抗ＬＡＧ３抗体は、単剤療法として（すなわち、唯一の治療剤として）投与することもでき、１または複数のさらなる治療剤（それらの例については、本明細書の別の箇所で記載する）と組み合わせて投与することもできる。
本発明の一部の実施形態では、本明細書で記載される抗体は、血液がん、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）、腎細胞癌（例えば、明細胞腎がん）、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、および黒色腫を含むがこれらに限定されない、原発がんまたは再発がんを患う被験体を処置するのに有用である。
本明細書で使用される「血液がん」という用語は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ系に影響を及ぼす血液悪性疾患を含む。それ自体として、用語は、リンパ性細胞系統および骨髄系細胞系統に由来する細胞の悪性疾患を含む。骨髄細胞系は通常、顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、マスト細胞を産生し、リンパ細胞系は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、形質細胞を産生する。したがって、用語は、上記で言及された細胞の悪性疾患、すなわち、リンパ腫、骨髄腫、リンパ性白血病、および骨髄性白血病を含む。例は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性単球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、および骨髄腫（多発性骨髄腫を含む）を含むがこれらに限定されない。
抗体を使用して、がんの早期または後期の症状を処置することができる。一実施形態では、本発明の抗体またはその断片を使用して、進行がんまたは転移性がんを処置することができる。抗体は、充実性腫瘍および血液がんのいずれの腫瘍の増殖も、低減または阻害または縮小するのに有用である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片による処置は、被験体における腫瘍の、４０％を超える退縮、５０％を超える退縮、６０％を超える退縮、７０％を超える退縮、８０％を超える退縮、または９０％を超える退縮をもたらす。ある特定の実施形態では、抗体を使用して、腫瘍の再発を防止することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、がんを伴う被験体における無進行生存または全生存を延長するのに有用である。一部の実施形態では、抗体は、がんを患う患者における長期にわたる生存を維持しながら、化学療法または放射線治療に起因する毒性を軽減するのに有用である。
ある特定の実施形態では、被験体は、がんを患う患者であり、
・過去に、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１による治療を施されていないが、抗ＰＤ－１ベースの治療を施すのに適切な候補者である患者；および／または
・過去に、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの治療を施され、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法時の、少なくとも３カ月間にわたり、客観的応答（ＣＲまたはＰＲ）もしくはＳＤを確認したが、その後、その治療時に進行した患者、または最良の応答として、ＳＤもしくはＰＲを示し、その後、６カ月間にわたり安定的応答を示した患者；および／または
・標準治療の候補者ではないか、もしくは臨床有益性をもたらすことが予測される実施可能な治療が存在せず、かつ、ｍＡｂ１単剤療法に適切な患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、病期ＩＩＩＢもしくはＩＶのＮＳＣＬＣを患う患者であって、転移性疾患のための既往の治療を伴わないか、もしくは１つの白金含有レジメンの後で、疾患の進行／再発を伴う患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た、病期ＩＩＩＢもしくはＩＶのＮＳＣＬＣを患う患者であって、転移性疾患のための、２つを超えない既往の治療を伴う患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、明細胞の構成要素を伴う、進行ｃｃＲＣＣもしくは転移性ｃｃＲＣＣを患う患者であって、抗血管新生治療の、１つ～２つの既往のレジメンを施された患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た＊、明細胞の構成要素を伴う、進行ｃｃＲＣＣもしくは転移性ｃｃＲＣＣを患う患者であって、抗血管新生治療の、１つ～２つの既往のレジメンを施された患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、転移性ＴＮＢＣ（エストロゲン、プロゲステロン、およびヒト表皮増殖因子受容体２陰性である）を患う患者であって、５つもしくはこれより少ない、既往の一連の治療を施された患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、進行黒色腫もしくは転移性黒色腫を患う患者であって、転移性疾患のための、２つを超えない既往のレジメンを施された患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た、進行黒色腫もしくは転移性黒色腫を患う患者であって、転移性疾患のための、２つを超えない既往のレジメンを施された患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、再発性／不応性のＤＬＢＣＬを患う患者であって、自家幹細胞移植の後で進行しているか、もしくはその候補者ではない患者；および／または
・抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た＊、再発性／不応性のＤＬＢＣＬを患う患者であって、自家幹細胞移植の後で進行しているか、もしくはその候補者ではない患者
である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、慢性ウイルス感染を患う被験体を処置するのに有用である。一部の実施形態では、本発明の抗体は、宿主内のウイルス力価を低下させ、かつ／または疲弊したＴ細胞をレスキューするのに有用である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片を使用して、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）による慢性ウイルス感染を処置することができる。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）またはＢ型肝炎ウイルス／Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ／ＨＣＶ）に感染した患者へと、治療用量で投与することができる。関連する実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を使用して、カニクイザルなど、サル被験体におけるサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）による感染を処置することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の遮断抗体は、治療有効量で、がんまたはウイルス感染を患う被験体へと投与することができる。
１または複数の、本発明の抗体を投与して、疾患または障害の症状または状態のうちの１または複数を、緩和することもでき、防止することもでき、これらの重症度を低下させることもできる。
本明細書ではまた、がんおよびウイルス感染などの疾患または障害を発症する危険性がある患者へと、１または複数の、本発明の抗体を、予防的に使用することも想定される。
本発明のさらなる実施形態では、本抗体を、がんまたはウイルス感染を患う患者を処置するための医薬組成物を調製するために使用する。本発明の別の実施形態では、本抗体を、がんまたはウイルス感染を処置するのに有用な、当業者に公知の、任意の他の薬剤または任意の他の治療を伴う補助治療として使用する。
組み合わせ療法および組み合わせ製剤
組み合わせ療法は、本発明の抗ＬＡＧ３抗体と、本発明の抗体、または本発明の抗体の生物学的に活性の断片と有利に組み合わせうる、任意のさらなる治療剤とを含みうる。
本発明の抗体は、例えば、血液がん、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）、腎細胞癌、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、および黒色腫を含むがんを処置または阻害するのに使用される、１または複数の抗がん薬または抗がん治療と、相乗作用的に組み合わせることができる。本明細書では、腫瘍の増殖を阻害し、かつ／またはがん患者の生存を延長するように、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、免疫刺激療法および／または免疫支持療法と組み合わせて使用することが想定される。免疫刺激療法は、抑制された免疫細胞に対する「ブレーキを解除する」か、または免疫応答を活性化させるように「アクセルを踏む」ことにより、免疫細胞活性を増進させる、直接的な免疫刺激療法を含む。例は、他のチェックポイント受容体のターゲティング、ワクチン接種、およびアジュバントを含む。免疫支持モダリティーは、免疫原性の細胞死、炎症を推進することにより、腫瘍の抗原性を増大させる場合もあり、抗腫瘍免疫応答を促進する、他の間接的効果を及ぼす場合もある。例は、放射線、化学療法、抗血管新生剤、および手術を含む。
多様な実施形態では、１または複数の、本発明の抗体は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＧＢ－Ａ３１７、またはＲＥＧＮ２８１０などの抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、またはＲＥＧＮ３５０４などの抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはＴ細胞リガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０、またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のアンタゴニスト［例えば、アフリベルセプトなど、「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ」、もしくはＵＳ７，０８７，４１１で明示されている、他のＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異抗原［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９］に対する抗体、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌ワクチン、がんワクチン）、抗原提示を増大させるアジュバント（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、二特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二特異性抗体）、細胞毒素、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線治療、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５などのサイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイドおよび非ステロイド系抗炎症薬）、抗酸化剤などの栄養補助食品、またはがんを処置するための任意の他の治療ケアと組み合わせて使用することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体は、抗腫瘍応答を増進させるように、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含むがんワクチンと組み合わせて使用することができる。本発明の抗ＬＡＧ３抗体と組み合わせて使用しうるがんワクチンの例は、黒色腫および膀胱がんのためのＭＡＧＥ３ワクチン、乳がんのためのＭＵＣ１ワクチン、脳がん（多形神経膠芽腫を含む）のためのＥＧＦＲｖ３（例えば、Ｒｉｎｄｏｐｅｐｉｍｕｔ）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋がんのための）を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、長期にわたる永続的な抗腫瘍応答を発生させ、かつ／またはがんを伴う患者の生存を増強する方法において、放射線療法と組み合わせて投与することができる。一部の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、放射線療法を、がん患者へと投与する前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、この後で投与することもできる。例えば、放射線療法を、１回または複数回の用量で、腫瘍病変へと実施し、その後に１回または複数回の用量の本発明の抗ＬＡＧ３抗体を投与することができる。一部の実施形態では、放射線療法を、腫瘍病変へと、患者の腫瘍の局所的免疫原性を増強するように（補助的照射（ａｄｊｕｖｉｎａｔｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））、かつ／または腫瘍細胞を死滅させるように（アブレーション的照射（ａｂｌａｔｉｖｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））局所投与し、その後に本発明の抗ＬＡＧ３抗体を全身投与することができる。例えば、頭蓋内照射を、脳がん（例えば、多形神経膠芽腫）を伴う患者へと、本発明の抗ＬＡＧ３抗体の全身投与と組み合わせて投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、放射線療法および化学療法剤（例えば、テモゾロミド）またはＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）と組み合わせて投与することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、ＬＣＭＶ、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、またはＨＣＶにより引き起こされる慢性ウイルス感染を処置するように、１または複数の抗ウイルス薬と組み合わせて投与することができる。抗ウイルス薬の例は、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノフォビル、リルピビリン、およびコルチコステロイドを含むがこれらに限定されない。
さらなる治療活性薬剤／成分を、本発明の抗ＬＡＧ３抗体の前に投与することもでき、これと共時的に投与することもでき、この後で投与することもできる。本開示の目的では、このような投与レジメンを、第２の治療活性成分「と組み合わせた」抗ＬＡＧ３抗体の投与と考える。
さらなる治療活性成分を、被験体へと、本発明の抗ＬＡＧ３抗体の投与の前に投与することができる。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の、１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分間未満前に投与される場合、第１の成分は、第２の成分「の前に」投与されるとみなすことができる。他の実施形態では、さらなる治療活性成分を、被験体へと、本発明の抗ＬＡＧ３抗体の投与の後で投与することができる。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の、１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与される場合、第１の成分は、第２の成分「の後で」投与されるとみなすことができる。さらに他の実施形態では、さらなる治療活性成分を、被験体へと、本発明の抗ＬＡＧ３抗体の投与と共時的に投与することができる。本発明の目的のための「共時的」投与は、例えば、抗ＬＡＧ３抗体およびさらなる治療活性成分の、被験体への、単一の剤形（例えば、共製剤化剤形）または被験体へと、互いから約３０分間またはこれ未満の内に投与される別個の剤形での投与を含む。別個の剤形で投与される場合、各剤形は、同じ経路（例えば、抗ＬＡＧ３抗体およびさらなる治療活性成分の両方を、静脈内、皮下などに投与することができる）を介して投与することもでき、代替的に、各剤形は、異なる経路（例えば、抗ＬＡＧ３抗体は、静脈内投与し、さらなる治療活性成分は、皮下投与することができる）を介して投与することもできる。いずれにせよ、成分を、単一の剤形で投与するのであれ、同じ経路により、別個の剤形で投与するのであれ、異なる経路により、別個の剤形で投与するのであれ、いずれも、本開示の目的での「共時的投与」と考えられる。本開示の目的では、さらなる治療活性成分の投与「の前における」、「と共時的な」、または「の後における」（これらの用語については、本明細書の上記で規定した）、抗ＬＡＧ３抗体の投与は、さらなる治療活性成分「と組み合わせた」、抗ＬＡＧ３抗体の投与と考えられる。
本発明は、様々な投与量の組み合わせを使用して、本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、本明細書の別の箇所で記載されるさらなる治療活性成分のうちの１または複数と共製剤化する医薬組成物を含む。
本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、ＰＤ－１阻害剤（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１５／０２０３５７９において開示されている抗ＰＤ－１抗体）と組み合わせて投与する、例示的な実施形態であって、抗ＬＡＧ３抗体と、ＰＤ－１阻害剤とを含む共製剤の投与を含む実施形態では、個々の成分を、被験体へと投与することもでき、かつ／または様々な投与量の組み合わせを使用して共製剤化することもできる。こうして、本発明は、がんまたはウイルス感染の処置における、同時的使用、別個の使用、および／または逐次的使用のための、（ｉ）本発明の抗ＬＡＧ３抗体と、（ｉｉ）ＰＤ－１阻害剤（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１５／０２０３５７９において開示されている抗ＰＤ－１抗体）との組み合わせを含む。例えば、抗ＬＡＧ３抗体およびＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）の各々は、０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．５ｍｇ、５．０ｍｇ、６．０ｍｇ、７．０ｍｇ、８．０ｍｇ、９．０ｍｇ、および１０．０ｍｇからなる群より選択される量で、被験体へと投与することもでき、かつ／または共製剤中に含有させることもできる。組み合わせ／共製剤は、被験体へと、本明細書の別の箇所で開示される投与レジメンのうちのいずれかであって、例えば、毎週２回、毎週１回、隔週１回、３週間ごとに１回、１カ月ごとに１回、２カ月ごとに１回、３カ月ごとに１回、４カ月ごとに１回、５カ月ごとに１回、６カ月ごとに１回などを含むレジメンに従い投与することができる。本発明の抗ＬＡＧ３抗体は、例えば、約０．８～約１１、約１～約１０、約３～約１０、約１、約３、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で、約３～５、または約３．０ｍｇ／ｋｇの用量のＰＤ－１阻害剤（例えば、ＵＳ２０１５／０２０３５７９において開示されている抗ＰＤ－１抗体）と同時に投与しうるであろう。同時投与は、例えば、１４日ごと、２１日ごと、または２８日ごとに行いうるであろう。
本発明の抗ＬＡＧ３抗体を、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトなどのＶＥＧＦトラップ）と組み合わせて投与する、例示的な実施形態であって、抗ＬＡＧ３抗体と、ＶＥＧＦアンタゴニストとを含む共製剤の投与を含む実施形態では、個々の成分を、被験体へと投与することもでき、かつ／または様々な投与量の組み合わせを使用して共製剤化することもできる。例えば、抗ＬＡＧ３抗体は、０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．５ｍｇ、２．０ｍｇ、２．５ｍｇ、３．０ｍｇ、３．５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．５ｍｇ、５．０ｍｇ、６．０ｍｇ、７．０ｍｇ、８．０ｍｇ、９．０ｍｇ、および１０．０ｍｇからなる群より選択される量で、被験体へと投与することもでき、かつ／または共製剤中に含有させることもでき、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプトなどのＶＥＧＦトラップ）は、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２．０ｍｇ、２．１ｍｇ、２．２ｍｇ、２．３ｍｇ、２．４ｍｇ、２．５ｍｇ、２．６ｍｇ、２．７ｍｇ、２．８ｍｇ、２．９ｍｇ、および３．０ｍｇからなる群より選択される量で、被験体へと投与することもでき、かつ／または共製剤中に含有させることもできる。組み合わせ／共製剤は、被験体へと、本明細書の別の箇所で開示される投与レジメンのうちのいずれかであって、例えば、毎週２回、毎週１回、隔週１回、３週間ごとに１回、１カ月ごとに１回、２カ月ごとに１回、３カ月ごとに１回、４カ月ごとに１回、５カ月ごとに１回、６カ月ごとに１回などを含むレジメンに従い投与することができる。
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態に従い、複数回用量の抗ＬＡＧ３抗体（または本明細書で言及される抗ＬＡＧ３抗体と、さらなる治療活性薬剤のうちのいずれかとの組み合わせを含む医薬組成物）を、被験体へと、規定された時間経過にわたり投与することができる。本発明のこの態様に従う方法は、被験体へと、複数回用量の本発明の抗ＬＡＧ３抗体を逐次的に投与するステップを含む。本明細書で使用される「逐次的に投与するステップ」とは、各用量の抗ＬＡＧ３抗体を、被験体へと、異なる時点、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間、または数カ月間）だけ隔てた、異なる日において投与することを意味する。本発明は、患者へと、単回の初期用量の抗ＬＡＧ３抗体、その後に１回または複数回の二次用量の抗ＬＡＧ３抗体、任意選択で、その後に１回または複数回の三次用量の抗ＬＡＧ３抗体を逐次的に投与するステップを含む方法を含む。抗ＬＡＧ３抗体は、被験体の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ～１００ｍｇの間の用量で投与することができる。
「初期用量」、「二次用量」、および「三次用量」という用語は、本発明の抗ＬＡＧ３抗体の投与の時間的順序を指す。したがって、「初期用量」とは、処置レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」ともまた称する）であり、「二次用量」とは、初期用量の後で投与される用量であり、「三次用量」とは、二次用量の後で投与される用量である。初期用量、二次用量、および三次用量はいずれも、同じ量の抗ＬＡＧ３抗体を含有しうるが、一般に、投与頻度の点で、互いと異なりうる。しかし、ある特定の実施形態では、初期用量、二次用量、および／または三次用量に含有される抗ＬＡＧ３抗体の量は、処置の経過中に、互いに変動する（例えば、必要に応じて、上方調整または下方調整される）。ある特定の実施形態では、２回またはこれを超える（例えば、２、３、４、または５回にわたる）用量を、処置レジメンの開始時に、「負荷用量」として投与し、その後により低い頻度で後続の用量（例えば、「維持用量」）を投与する。
ある特定の実施形態では、初期用量、二次用量、および／または三次用量に含有される抗ＬＡＧ３抗体の量は、最適量未満または治療量未満でありうる。本明細書で使用される「治療量未満」または「最適量未満」という用語は、治療効果をもたらすには低過ぎるレベル、またはがんなどの疾患を処置するのに必要なレベルを下回るレベルで投与される抗体の用量を指す。
本発明のある特定の例示的な実施形態では、各二次用量および／または三次用量を、直前の投与の、１～２６週間（例えば、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５、２１、２１．５、２２、２２．５、２３、２３．５、２４、２４．５、２５、２５．５、２６、２６．５週間、またはこれを超える期間）後に投与する。本明細書で使用される「直前の用量」という語句は、複数回投与の順序における、抗ＬＡＧ３抗体の用量であって、介在する用量が存在しない順序において、すぐ次の用量を実施する前に、患者へと投与される、抗ＬＡＧ３抗体の用量を意味する。
本発明のこの態様に従う方法は、患者へと、抗ＬＡＧ３抗体の、任意の数の二次用量および／または三次用量を投与するステップを含みうる。例えば、ある特定の実施形態では、単回の二次用量だけを、患者へと投与する。他の実施形態では、２回またはこれを超える（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、またはこれを超える）二次用量を、患者へと投与する。同様に、ある特定の実施形態では、単回の三次用量だけを、患者へと投与する。他の実施形態では、２回またはこれを超える（例えば、２、３、４、５、６、７、８回、またはこれを超える）三次用量を、患者へと投与する。
複数回の二次用量を伴う実施形態では、各回の二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各回の二次用量は、患者へと、直前の用量の１～２週間後、または１～２カ月間後に投与することができる。同様に、複数回の三次用量を伴う実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量は、患者へと、直前の用量の２～１２週間後に投与することができる。本発明のある特定の実施形態では、二次用量および／または三次用量を、患者へと投与する頻度は、処置レジメンの経過にわたり変動しうる。投与頻度はまた、処置の経過中に、臨床検査後の個々の患者の必要に応じて、医師が調整することもできる。
抗体の診断的使用
本発明の抗ＬＡＧ３抗体を使用して、例えば、診断目的で、試料中のＬＡＧ３を検出および／または測定することができる。一部の実施形態は、１または複数の、本発明の抗体の、がん、自己免疫疾患、またはウイルス感染などの疾患または障害を検出するためのアッセイにおける使用を想定する。ＬＡＧ３についての例示的な診断アッセイは、例えば、被験体（例えば、患者）から得られた試料を、本発明の抗ＬＡＧ３抗体と接触させることを含みうるが、この場合、抗ＬＡＧ３抗体を、検出可能な標識またはレポーター分子で標識するか、またはＬＡＧ３を、対象試料から選択的に単離する、捕捉リガンドとして使用する。代替的に、非標識の抗ＬＡＧ３抗体を、診断的適用において、それ自体が検出可能な形で標識された二次抗体と組み合わせて使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉなどの放射性同位元素；イソチオシアン酸フルオレセインまたはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素でありうる。試料中のＬＡＧ３を検出または測定するのに使用しうる、具体的な例示的アッセイは、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。
本発明に従うＬＡＧ３診断的アッセイにおいて使用しうる試料は、被験体から得られる、任意の組織試料または体液試料であって、正常状態下または病理学的状態下で、検出可能な数量のＬＡＧ３タンパク質またはその断片を含有する試料を含む。一般に、健常患者（例えば、がんまたは自己免疫疾患に罹患していない患者）から得られる、特定の試料中のＬＡＧ３レベルを測定して、まず、ベースラインのＬＡＧ３レベルまたは標準ＬＡＧ３レベルを確立する。次いで、このベースラインのＬＡＧ３レベルを、がんに関連する状態、またはこのような状態と関連する症状を有することが疑われる個体から得られる試料中で測定されるＬＡＧ３レベルと比較することができる。
ＬＡＧ３に特異的な抗体は、さらなる標識または部分を含有しない場合もあり、Ｎ末端またはＣ末端の標識または部分を含有する場合もある。一実施形態では、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイでは、標識（存在する場合）の位置は、ペプチドが結合する表面と比べた、ペプチドの配向性を決定しうる。例えば、表面を、アビジンでコーティングする場合、ペプチドのＣ末端の部分が、表面に対して遠位となるように、Ｎ末端のビオチンを含有するペプチドを配向させる。
本発明の態様は、開示された抗体の、患者におけるがんまたはウイルス感染の予後を予測するためのマーカーとしての使用に関する。本発明の抗体は、患者におけるがんの予後について評価し、生存を予測する診断アッセイにおいて使用することができる。
以下の実施例は、当業者に、本発明の方法および組成物を、どのようにして作製および使用するのかについての、完全な開示および記載をもたらすように明示されるものであり、本発明者らが、自らの発明と考えるものの範囲を限定することを意図するものではない。使用される数（例えば、量、温度など）に関しては、精度を確保するように努めているが、一部の実験の誤差および偏差については、説明するものとする。そうでないことが指し示されない限りにおいて、部は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度は、摂氏度であり、室温は、約２５℃であり、圧力は、大気圧または大気圧付近である。
（実施例１：ＬＡＧ３に対するヒト抗体の作出）
ＬＡＧ３に対するヒト抗体は、マウスＦｃ領域へとカップリングさせた、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２７７．４（配列番号５８２）のうちの、ほぼアミノ酸２９～４５０の範囲のＬＡＧ３の断片を使用して作出した。免疫原は直接、免疫応答を刺激するアジュバントと共に、ＵＳ８５０２０１８Ｂ２に記載されている、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリンの重鎖可変領域およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む操作マウス）またはＷＯ２０１３０２２７８２に記載されている、ヒト化Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ（ＵＬＣ）ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスへと投与した。抗体の免疫応答は、ＬＡＧ３特異的イムノアッセイによりモニタリングした。所望の免疫応答を達成したら、脾臓細胞を採取し、それらの生存度を保存し、ハイブリドーマ細胞系を形成するように、マウス骨髄腫細胞と融合させた。ＬＡＧ３特異的抗体を産生する細胞系を同定するように、ハイブリドーマ細胞系をスクリーニングおよび選択した。この技法および上記で記載した免疫原を使用して、いくつかの抗ＬＡＧ３キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインと、マウス定常ドメインとを保有する抗体）を得、このようにして、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスから作出した例示的な抗体を、Ｈ１Ｍ１４９８５Ｎ、Ｈ１Ｍ１４９８７Ｎ、Ｈ２Ｍ１４８１１Ｎ、Ｈ２Ｍ１４８８５Ｎ、Ｈ２Ｍ１４９２６Ｎ、Ｈ２Ｍ１４９２７Ｎ、Ｈ２Ｍ１４９３１Ｎ、Ｈ２Ｍ１８３３６Ｎ、Ｈ２Ｍ１８３３７Ｎ、およびＨ４Ｈ１４８１３Ｎと命名した。
抗ＬＡＧ３抗体はまた、参照によりその全体において本明細書に具体的に組み込まれる米国特許第７，５８２，２９８号において記載されている通り、骨髄腫細胞への融合を伴わずに、抗原陽性Ｂ細胞（免疫化されたマウスのいずれかに由来する）からも直接単離した。この方法を使用して、いくつかの完全ヒト抗ＬＡＧ３抗体（すなわち、ヒト可変ドメインと、ヒト定常ドメインとを保有する抗体）を得、この方式で作出した例示的な抗体を、以下：Ｈ４Ｈ１５４７７Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８３Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８４Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４９１Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２３Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７８２８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４６０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６３Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６４Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６６Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６７Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７５Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８８Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４９６Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５０５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５１８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５２３Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５３０Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５６７Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７８１９Ｐの通りに命名した。
例示的な抗体であるＨ４ｓＨ１５４９６Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５０５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５１８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５２３Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５３０Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５８Ｐ２、およびＨ４ｓＨ１５５６７Ｐ２は、ＵＬＣ Ｖｅｌｏｃｉｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスに由来するＢ細胞から作出した。
本実施例の方法に従い作出される、例示的な抗体の生物学的特性を、下記に明示される実施例に詳細に記載する。
（実施例２：重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列）
表１は、本発明の選択された抗ＬＡＧ３抗体の、重鎖可変領域および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲの、アミノ酸配列の識別子を明示する。対応する核酸配列の識別子は、表２に明示する。
Figure 0007170691000001
Figure 0007170691000002
Figure 0007170691000003
Figure 0007170691000004
本明細書では、以下の命名法：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ４ｓＨ」、「Ｈ４Ｈ」など）、その後に数字による識別子（例えば、表１に示す、「１４８１３」、「１７８２８」など）、その後に「Ｐ」、「Ｐ２」、または「Ｎ」の接尾辞に従い、抗体に言及することが典型的である。こうして、本明細書では、この命名法に従い、抗体に、例えば、「Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ」、「Ｈ４Ｈ１７８１９Ｐ」、「Ｈ４Ｈ１７８２８Ｐ２」などとして言及することができる。本明細書で使用される抗体の呼称における、Ｈ４ｓＨおよびＨ４Ｈの接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域のアイソタイプを指し示す。例えば、「Ｈ４ｓＨ」抗体は、ＵＳ２０１４０２４３５０４（その全体において本明細書に組み込まれる）において開示されている通り、２つまたはこれを超えるアミノ酸変化を伴うヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有し、「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒンジ領域内にセリンからプロリンへの変異（Ｓ１０８Ｐ）を伴うヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ１Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２ Ｆｃ（抗体呼称中の第１の「Ｈ」により表示される通り、全ての可変領域は、完全ヒト可変領域である）を有する。当業者により察知される通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを伴う抗体へと転換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを伴う抗体は、ヒトＩｇＧ４を伴う抗体へと転換することができるなど）が、いずれにせよ、可変ドメイン（ＣＤＲを含む）（表１に、数字による識別子で示す）は、依然として同じであり、抗原への結合特性は、Ｆｃドメインの性質に拘わらず、同一であるかまたは実質的に同様であることが予測される。
ある特定の実施形態では、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを伴う、選択された抗体を、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを伴う抗体へと転換した。ある特定の実施形態では、抗体は、ＵＳ２０１００３３１５２７（その全体において本明細書に組み込まれる）において開示される通り、２つまたはこれを超えるアミノ酸変化を伴うヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。一実施形態では、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、二量体の安定化を促進するように、ヒンジ領域内にセリンからプロリンへの変異（Ｓ１０８Ｐ）を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体のＦｃ領域は、配列番号５６９、５７０、５７１、５７２、または５７３のアミノ酸配列を含む。表３は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを伴う、選択された抗ＬＡＧ３抗体の、重鎖配列および軽鎖配列のアミノ酸配列の識別子を明示する。
Figure 0007170691000005
表３中の各重鎖配列は、可変領域（ＶＨまたはＨＣＶＲ；ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む）および定常領域（ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む）を含んだ。表３中の各軽鎖配列は、可変領域（ＶＬまたはＬＣＶＲ；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む）および定常領域（ＣＬ）を含んだ。配列番号５７７は、アミノ酸１～１２３を含むＨＣＶＲと、アミノ酸１２４～４４９を含む定常領域とを含んだ。配列番号５７８は、アミノ酸１～１０７を含むＬＣＶＲと、アミノ酸１０８～２１４を含む定常領域とを含んだ。配列番号５７９は、アミノ酸１～１２３を含むＨＣＶＲと、アミノ酸１２４～４５０を含む定常領域とを含んだ。配列番号５８０は、アミノ酸１～１１９を含むＨＣＶＲと、アミノ酸１２０～４４５を含む定常領域とを含んだ。配列番号５８１は、アミノ酸１～１０７を含むＬＣＶＲと、アミノ酸１０８～２１４を含む定常領域とを含んだ。
以下の実施例で使用される対照構築物
比較を目的として、以下の実験には、２つの対照構築物（抗ＬＡＧ３抗体）：「対照薬（ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ）１」：ＷＯ２０１０／０１９５７０に従い、抗体「２５Ｆ７」のＶＨ／ＶＬ配列を有する、ＬＡＧ３に対するヒトモノクローナル抗体；および「対照薬２」：ＵＳ２０１４／００９３５１１に従い、抗体「ｖ３．５」のＶＨ／ＶＬ配列を有する、ＬＡＧ３に対するヒトモノクローナル抗体を含めた。
（実施例３：表面プラズモン共鳴により決定される、抗体の、ＬＡＧ３への結合）
抗原の、精製抗ＬＡＧ３抗体への結合についての、結合の会合速度定数および解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）、平衡解離定数および解離半減期（それぞれ、ＫＤおよびｔ１／２）は、ＢｉａＣｏｒｅ ４０００測定器上またはＢｉａＣｏｒｅ Ｔ２００測定器上の、リアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを使用して決定した。それぞれ、マウスＦｃまたはヒトＦｃと共に発現させる、約５０～８５ＲＵの抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体を捕捉するのに、ＢｉａＣｏｒｅセンサー表面を、ウサギ抗マウスポリクローナル抗体（ＧＥ；型番ＢＲ－１００８－３８）、またはマウス抗ヒトＦｃモノクローナル抗体（ＧＥ；型番ＢＲ－１００８－３９）で誘導体化した。抗ＬＡＧ３抗体への結合について試験されるＬＡＧ３試薬は、Ｃ末端のｍｙｃ－ｍｙｃ－ヘキサヒスチジンタグ（ｈＬＡＧ３－ｍｍｈ；配列番号５７４）と共に発現させる、組換えヒトＬＡＧ３、およびＣ末端のマウスＩｇＧ２ａ ｍＦｃタグ（ｈＬＡＧ３－ｍＦｃ；配列番号５７５）と共に発現させる組換えヒトＬＡＧ３を含んだ。異なる濃度（５０、２５、１２．５、および６．２５ｎＭ）のＬＡＧ３試薬を、ＢｉａＣｏｒｅ Ｔ２００上の流量５０μＬ／分で、抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体を捕捉した表面上に注入した。ＬＡＧ３試薬の、捕捉されたモノクローナル抗体への結合は、４分間にわたりモニタリングし、ＨＢＳＴランニングバッファー（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖのＳｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）中でそれらの抗体からの解離は、８分間にわたりモニタリングした。実験は、２５℃および３７℃で実施した。動力学的な会合速度定数（ｋａ）および解離速度定数（ｋｄ）は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ｃ曲線当てはめソフトウェアを使用して、１：１結合モデルに照らして、データを加工し、これに当てはめることにより決定した。次いで、結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝［ｌｎ２／（６０＊ｋｄ）］としての動力学的な速度定数から計算した。
２５℃および３７℃における、異なる抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体の、単量体（ｍｍＨでタグ付けした）または二量体（ｍＦｃでタグ付けした）のＬＡＧ３試薬への結合についての結合動態パラメータを、表４～７に示す。
Figure 0007170691000006
表４は、２５℃において、本発明の全ての抗ＬＡＧ３抗体が、４９ｐＭ～１０ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＡＧ３－ｍｍｈに結合したのに対し、比較薬は、０．５８ｎＭおよび０．８ｎＭのＫＤ値で結合したことを示す。
Figure 0007170691000007
表５は、３７℃において、本発明の全ての抗ＬＡＧ３抗体が、３２ｐＭ～７．６６ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＡＧ３－ｍｍｈに結合したのに対し、比較薬は、２．１ｎＭおよび３．０ｎＭのＫＤ値で結合したことを示す。
表４および５のデータは、全ての抗ＬＡＧ３抗体が、２５℃および３７℃のいずれにおいても、単量体のｈＬＡＧ３－ｍｍｈに、極めて類似したアフィニティーで結合することを指し示す。
Figure 0007170691000008
表６は、２５℃において、本発明の全ての抗ＬＡＧ３抗体が、４．３ｐＭ～１．０ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＡＧ３二量体タンパク質に結合したのに対し、比較薬は、９７ｐＭおよび０．１６ｎＭのＫＤ値で結合したことを示す。
Figure 0007170691000009
表７は、３７℃において、本発明の全ての抗ＬＡＧ３抗体が、４．０ｐＭ～０．９ｎＭの範囲のＫＤ値で、ｈＬＡＧ３二量体タンパク質に結合したのに対し、比較薬は、０．２６ｎＭおよび０．４５ｎＭのＫＤ値で結合したことを示す。
表６および７のデータは、全ての抗ＬＡＧ３抗体が、２５℃および３７℃のいずれにおいても、ｈＬＡＧ３二量体試薬に、類似したアフィニティーで結合することを指し示す。
（実施例４：Ｏｃｔｅｔによる、抗ＬＡＧ３抗体の間の交差競合）
２つの抗体が、単量体ヒトＬＡＧ３（ｈＬＡＧ３．ｍｍｈ）への結合について、互いと競合するのかどうかについて評価するため、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ３８４バイオセンサー（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．）上の、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体の間の結合の競合を決定した。交差競合実験は、１０００ｒｐｍの速度でプレートを振とうさせながら、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤であるＴｗｅｅｎ－２０、０．１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ（Ｏｃｔｅｔ ＨＢＳ－Ｐ緩衝液）中、２５℃で行った。全ての被験抗ＬＡＧ３抗体および被験ｈＬＡＧ３溶液は、Ｏｃｔｅｔ ＨＢＳ－Ｐ緩衝液中で処方した。２つの抗体が、ｈＬＡＧ３への結合について、互いと競合することが可能であるのかどうかについて評価するため、まず、約０．６～０．８５ｎＭのｈＬＡＧ３．ｍｍｈを、５μｇ／ｍＬのｈＬＡＧ３を含有するウェルから、抗ＨｉｓでコーティングされたＯｃｔｅｔバイオセンサーチップ上に、７５秒間にわたり捕捉した。ｈＬＡＧ３を捕捉したＯｃｔｅｔバイオセンサーチップを、５０ｕｇ／ｍｌの、第１の抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体（本実施例では、ｍＡｂ－１と称する）を含有するウェル内に、５分間にわたり浸漬し、その後に第２の抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体（本実施例では、ｍＡｂ－２と称する）を含有するウェル内に浸漬することにより飽和させた。各ステップの間に、Ｏｃｔｅｔバイオセンサーチップを、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液中で、３０秒間にわたり洗浄した。
リアルタイムの結合応答を、実験の経過中にモニタリングし、あらゆるステップの終了時における結合応答を記録した。ｈＬＡＧ３の、ｍＡｂ－１への結合の応答、次いで、遮断ｍＡｂへの結合の応答を、バックグラウンドの結合に照らして補正し、比較し、異なる抗Ｌａｇモノクローナル抗体の競合的／非競合的挙動を決定した。
表８は、結合の順序に依存しない、いずれの方向にも競合する抗体の関連性を明白に規定する。
Figure 0007170691000010
（実施例５：フローサイトメトリーにより決定される、抗体の、ＬＡＧ３を過剰発現する細胞への結合）
組換えｈＬＡＧ３（ＮＣＢＩ受託番号：ＮＰ＿００２２７７．４）、またはサルＬＡＧ３（ｍｆＬＡＧ３）［アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔａ）配列：ＮＣＢＩ受託番号：ＸＰ＿００１１０８９２３．１に基づき、アミノ酸７４位における「Ｘ」を、プロリンで置きかえるように、カニクイザル配列：ＮＣＢＩ受託番号：ＸＰ＿００５５７００１１．１をさらに修飾した］（配列番号５７６）を、細胞表面において発現する安定的な細胞系である、ＨＥＫ２９３細胞（ＨＥＫ２９３；ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ－１５７３）を開発し、本発明の抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体の結合特異性を、フローサイトメトリー解析により決定するのに使用した。
抗ＬＡＧ３抗体の結合を、以下の通りに評価した。ｈＬＡＧ３またはｍｆＬＡＧ３を発現する、安定的なＨＥＫ２９３細胞を、Ｄ－ＰＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ型番９２４０）で１回洗浄し、トリプシン処理し（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｍｅｄｉａ型番ＳＭ－２００４－Ｃ）、ＨＥＫ２９３細胞の培養培地（ＤＭＥ＋１０％ＦＢＳ＋Ｐ／Ｓ／Ｇ＋非必須アミノ酸）でブロッキングした。遠心分離の後、細胞を、染色緩衝液（Ｄ－ＰＢＳ＋２％のＦＢＳ）中１ｍＬ当たりの細胞２．０×１０６個で再懸濁させた。抗体なしで緩衝液だけの対照を含む、抗ＬＡＧ３抗体およびアイソタイプ対照を、染色緩衝液中に、５ｐＭ～１００ｎＭの範囲の用量で系列希釈した。系列希釈された抗体を、細胞懸濁物へと添加し、氷上で１５～３０分間にわたりインキュベートした。細胞を遠心分離し、ペレットを、染色緩衝液で洗浄して、結合しなかった抗体を除去した。その後、細胞を、ヒトＦｃを認識するアロフィコシアニンコンジュゲート二次Ｆ（ａｂ’）２（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ；型番１０９－１３６－１７０）と共に、氷上で、１５～３０分間にわたりインキュベートした。細胞を遠心分離し、ペレットを、染色緩衝液で洗浄して、結合しなかった二次Ｆ（ａｂ’）２を除去し、Ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；型番５５４６５５）と、染色緩衝液との１：１希釈物で一晩にわたり固定した。翌日、固定された細胞を遠心分離し、ペレットを、染色緩衝液で洗浄し、再懸濁させ、濾過した。蛍光測定値を、ＨｙｐｅｒＣｙｔ（登録商標）血球計算器上で収集し、ＦｏｒｅＣｙｔ（商標）（ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ；Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ、ＮＭ）により解析して、平均値蛍光強度（ＭＦＩ）を決定した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、１１点の反応曲線についての、４パラメータのロジスティック方程式から計算した。ＥＣ５０は、最大結合シグナルの５０％が検出される抗体濃度として規定した。各抗体についてのＭＦＩ比は、抗体濃度を１００ｎＭとするときのＭＦＩを、抗体濃度を０ｎＭとするときのＭＦＩで除することにより計算した。
Figure 0007170691000011
表９に示される通り、比較薬およびアイソタイプ対照は、ＦＡＣＳ解析により測定可能な、野生型の親ＨＥＫ２９３細胞への結合を何ら実証しなかった。計算されたＭＦＩ比は、１．０～１．６倍の間の範囲であった。野生型細胞上で大きな比を示す抗ＬＡＧ３抗体は少数であったことから、非特異的結合が示唆され、計算されたＭＦＩ比は、０．９～８．２倍の間の範囲であった。これらの染色条件下では、抗ＬＡＧ３抗体ならびに比較薬についてのＥＣ５０値は、決定されなかった。
Figure 0007170691000012
表１０に示される通り、アイソタイプ対照は、測定可能な、ＨＥＫ２９３／ｈＬａｇ３細胞への結合を何ら実証しなかった。本発明の１５の抗ＬＡＧ３抗体全ては、３００ｐＭ～７．９ｎＭの範囲のＥＣ５０値で、ＨＥＫ２９３／ｈＬａｇ３細胞への著明な結合を示した。計算されたＭＦＩ比は、６２～４１４倍の範囲であった。比較薬のＥＣ５０値は、結合アッセイにおいて、０．６５ｎＭおよび０．７５ｎＭであり、ＭＦＩ比は、いずれの抗体についても、２００倍未満であった。
Figure 0007170691000013
表１１に示される通り、アイソタイプ対照は、測定可能な、ＨＥＫ２９３／ｍｆＬａｇ３細胞への結合を何ら実証しなかった。本発明の１５の抗ＬＡＧ３抗体のうちの合計１３は、９００ｐＭ～１０ｎＭを超える範囲のＥＣ５０値で、ＨＥＫ２９３／ｍｆＬＡＧ３細胞への著明な結合を示した。計算されたＭＦＩ比は、８．８倍～２１．５倍の範囲であった。比較薬のＥＣ５０値は、１０ｎＭを超え、計算されたＭＦＩ比は、６．７倍および８．６倍であった。
（実施例６：電気化学発光イムノアッセイにより決定される、抗体の、ＬＡＧ３を過剰発現する細胞への結合）
抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体のパネルが、細胞表面において発現したＬＡＧ３に結合する能力について調べるため、電気化学発光ベースの検出プラットフォーム［Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｏｎｏｓｔｉｃｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ；ＭＳＤ］内で、ヒトおよびサルのＬＡＧ３を発現する細胞系を活用するｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイを開発した。
安定的なＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ－１５７３）細胞系は、組換えｈＬＡＧ３（ＮＣＢＩ受託番号：ＮＰ＿００２２７７．４）、またはサルＬＡＧ３（ｍｆＬＡＧ３）［アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔａ）配列：ＮＣＢＩ受託番号：ＸＰ＿００１１０８９２３．１に基づき、アミノ酸７４位における「Ｘ」を、プロリンで置きかえるように、カニクイザル配列Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ：ＮＣＢＩ受託番号：ＸＰ＿００５５７００１１．１を修飾した］（配列番号５７６）を発現するレンチウイルスの形質導入により作出した。蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）により検出可能なＬＡＧ３の発現をもたらさない親ＨＥＫ２９３細胞系を、バックグラウンド結合対照として、実験に含めた。非類縁のヒトＩｇＧ４およびｈＩｇＧ４を、アイソタイプ対照抗体として含めた。
実験は、以下の手順に従い実行した。上記で記載した３つの細胞系に由来する細胞を、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を伴わない、１倍濃度のＰＢＳ緩衝液中で１回すすぎ、その後にＥｎｚｙｍｅ Ｆｒｅｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎと共に、３７℃で１０分間にわたるインキュベーションを行った。剥がした細胞を、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋を伴う、１倍濃度のＰＢＳで、１回洗浄し、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ（商標）Ａｕｔｏ Ｔ４細胞カウンター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でカウントした。細胞洗浄緩衝液中、ウェル１つ当たりの細胞約１０，０００個を、９６ウェル炭素電極プレート（ＭＵＬＴＩ－ＡＲＲＡＹ ｈｉｇｈ ｂｉｎｄ ｐｌａｔｅ；ＭＳＤ）へと播種し、３７℃で１時間にわたりインキュベートして、細胞の接着を可能とした。非特異的結合部位を、ＰＢＳ中に２％のＢＳＡ（ｗ／ｖ）により、室温で、１時間にわたりブロッキングした。プレートに結合した細胞へと、系列希釈物中１．７ｐＭ～１００ｎＭの範囲の抗ＬＡＧ３抗体の溶液と、抗体の存在しない溶液とを、二連で添加し、プレートを、室温で１時間にわたりインキュベートした。次いで、ＡｑｕａＭａｘ２０００プレート洗浄機（ＭＤＳ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、結合しなかった抗体を除去するように、プレートを洗浄した。プレートに結合した抗体は、室温で１時間にわたる、ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ（商標）コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体（ＭＳＤ）により検出した。洗浄の後、製造元の推奨する手順に従い、Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ（ＭＳＤ）によりプレートを展開し、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ６０００（ＭＳＤ）測定器により発光シグナルを記録した。直接的な結合シグナル（相対光単位：ＲＬＵによる）を、抗体濃度の関数として解析し、データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用する、Ｓ字型用量反応モデル（４パラメータのロジスティックモデル）により当てはめた。各抗体の効力は、ＥＣ５０を計算することにより決定した。ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞およびＨＥＫ２９３－ｍｆＬＡＧ３細胞への結合についてのＥＣ５０は、最大結合シグナルの５０％が検出される抗体濃度として規定した。１００ｎＭの抗体の、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞またはＨＥＫ２９３－ｍｆＬＡＧ３細胞への結合により検出されるシグナルの、ＨＥＫ２９３親細胞への結合により検出されるシグナルと比較した比を、ＬＡＧ３結合の特異性の指標として記録した。最高抗体濃度（１００ｎＭ）で、比が２倍より小さい場合、抗体を、非特異的（ＮＳ）として結論付けた。
結合結果を、表１２にまとめる。
Figure 0007170691000014
表１２に示す通り、抗体の効力は、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞への結合についてのＥＣ５０値を６９０ｐＭ～５２ｎＭとする範囲であり、抗体の全ては、１００ｎＭの抗体による結合で、ヒトＬＡＧ３を発現する細胞への、親ＨＥＫ２９３細胞と比較して、＞２倍の結合である特異的結合をもたらした。抗体のうちの７つだけが、７．９ｎＭ～７４ｎＭの範囲のＥＣ５０値で、ＨＥＫ２９３－ｍｆＬＡＧ３細胞に特異的に結合した。比較薬の、ＨＥＫ２９３－ｈＬａｇ３細胞上の結合効力は、約４．０ｎＭおよび７．０ｎＭであった。比較薬は、ＨＥＫ２９３－ｍｆＬａｇ３細胞への特異的結合を示さなかった。非関与性対照の、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞およびＨＥＫ２９３－ｍｆＬＡＧ３細胞への結合は、Ｈ４Ｈアイソタイプ対照およびＨ４ｓＨアイソタイプ対照結合により予測される通り、非特異的であり、比を、ＨＥＫ２９３親細胞の、０．７～１．１倍の範囲とする結合であった。
（実施例７：細胞接着アッセイにおける、ＬＡＧ３の、ＭＨＣクラスＩＩへの結合の遮断）
細胞接着アッセイを活用して、抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体が、ヒトＭＨＣＩＩまたはマウスＭＨＣＩＩを発現する細胞（それぞれ、ＲＡＪＩ細胞およびＡ２０細胞）の、マイクロタイタープレート上に付着させたｈＬＡＧ３発現ＨＥＫ２９３細胞への接着を遮断する能力を測定した（Ｈｕａｒｄらによる、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９５年、２５巻：２７１８～２１頁において記載されているアッセイに基づく）。
安定的なＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ－１５７３）細胞系は、組換えｈＬＡＧ３（ＮＣＢＩ受託番号：ＮＰ＿００２２７７．４）、またはマウスＬＡＧ３（ｍＬＡＧ３）（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＮＰ＿０３２５０５．１）を発現するレンチウイルスの形質導入により作出した。親ＨＥＫ２９３細胞系は、蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）技術により検出可能なヒトＬＡＧ３の発現をもたらさず、ＭＨＣＩＩを発現するＲＡＪＩ細胞およびＡ２０細胞の接着についてのＬＡＧ３の要求を裏付けるのに使用した。
実験は、以下の手順に従い実行した。コンフルエンシー未満のＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３発現細胞を、１倍濃度のＰＢＳで１回洗浄し、トリプシン処理し、１，２００ｒｐｍで５分間にわたり遠心分離した。細胞ペレットを、１倍濃度のＰＢＳ中に再懸濁させ、その後、細胞数を決定するようにカウントした。適切な数の細胞を単離し、各ウェルが、１００μＬの細胞１．２×１０４個を含有するように、完全培地（ＤＭＥ＋１０％ＦＢＳ＋ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン）中に再懸濁させた。細胞を、滅菌のＮｕｎｃｌｏｎ（商標）Ｄｅｌｔａ ９６－Ｗｅｌｌ ＭｉｃｒｏＷｅｌｌ（商標）Ｂｌａｃｋ
Ｏｐｔｉｃａｌ Ｂｏｔｔｏｍ Ｐｌａｔｅｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）へと播種した。辺縁効果を回避するように、プレートの縁辺のウェルは、アッセイデザインに含めなかった。ウェルの縁辺へは、細胞の代わりに、１倍濃度のＰＢＳ １００μＬを添加した。播種されたＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞は、３７℃、５％のＣＯ２で、一晩にわたりインキュベートした。インキュベーションの後、これらの細胞を、抗ＬＡＧ３抗体およびアイソタイプ対照で処置した。
処置日には、全ての抗体を、ＲＰＭＩ培地（ＦＢＳまたは補充物質を添加しない）中で系列希釈（１：３）した。９点の希釈物を、４５ｐＭ～３００ｎＭの間の範囲とし、最後の希釈点は、ｍＡｂを含有しなかった。ＲＡＪＩ細胞を使用する接着アッセイにおいて、Ｈ４ｓＨ抗体について調べるために、９点の希釈物を、２３ｐＭ～１５０ｎＭの間の範囲とし、最後の希釈点は、ｍＡｂを含有しなかった。最終容量を５０μＬとする抗ＬＡＧ３抗体またはアイソタイプ対照を、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞へと添加し、３７℃、５％ＣＯ２で、１時間にわたりインキュベートした。播種したＨＥＫ２９３－ＬＡＧ３細胞を、被験抗体または対照抗体と共にインキュベートする一方、以下の手順を使用して、非接着性Ｂ細胞（ＲＡＪＩ細胞またはＡ２０細胞）を、Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭで標識した。ＲＡＪＩ懸濁細胞およびＡ２０懸濁細胞を採取し、１，２００ｒｐｍで、５分間にわたり遠心分離した。細胞ペレットを、１倍濃度のＰＢＳ中に再懸濁させ、カウントした。細胞を、ＲＰＭＩで洗浄し、ＲＰＭＩ中に、１ｍｌ当たりの細胞１０６個の濃度で再懸濁させた。細胞懸濁物１ｍｌ当たりのＣａｌｃｅｉｎ ＡＭ ５μＬを添加することにより、細胞を標識し、３７℃、５％のＣＯ２で、３０分間にわたりインキュベートした。標識された細胞を、ＲＰＭＩで１回洗浄し、遠心分離し、１倍濃度のＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中に１ｍｌ当たりの細胞５×１０６個の濃度で再懸濁させた。その後、Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭで標識された細胞１ｍｌ当たり１０μＬのＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（０．５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、これを、ＲＴで、１０分間にわたりインキュベートした。Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭで染色され、Ｆｃを遮断されたＲＡＪＩ細胞またはＡ２０細胞を、ＲＰＭＩ中に、１ｍｌ当たりの細胞３×１０６個の最終濃度まで再懸濁させ、その後、接着アッセイにおいて使用した。
１時間にわたる、ＬＡＧ３抗体によるＨＥＫ２９３－ＬＡＧ３細胞の処置の終了時に、標識されたＲＡＪＩ細胞またはＡ２０細胞５０μｌを、各ウェルへと、ウェル１つ当たりの細胞１．５×１０５個の密度で添加した。標識された懸濁細胞を、ＨＥＫ２９３単層と共に、３７℃、５％のＣＯ２で、１時間にわたりインキュベートした。ウェルを、ＲＰＭＩで４回にわたり、静かに洗浄し、各回の洗浄後に、プレートを、ペーパータオルで拭い、その後にＰＢＳで２回にわたり洗浄することにより、接着しなかった細胞を洗い落とした。最終容量を２００μｌとするＰＢＳを、各ウェルへと添加し、励起／発光波長を４８５ｎｍ／５３５ｎｍとして、ＶＩＣＴＯＲ（商標）Ｘ５ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ上で、Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭ蛍光を読み取った。ＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、９点の反応曲線についての、４パラメータのロジスティック方程式を使用して計算した。ＩＣ５０は、ＨＥＫ細胞の、ＲＡＪＩ細胞またはＡ２０細胞への接着の５０％遮断が観察される抗体濃度として規定した。
細胞ベースの接着アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体が、ＬＡＧ３の、ヒトＭＨＣＩＩおよびマウスＭＨＣＩＩの両方への結合を遮断する能力について評価した。アッセイは、蛍光標識されたＭＨＣＩＩを内因的に発現する細胞［ヒトＭＨＣＩＩ（ＲＡＪＩ）またはマウスＭＨＣＩＩ（Ａ２０）］の、ヒトＬＡＧ３を発現するように操作された細胞への結合のフォーマットを活用した。ＬＡＧ３抗体が、この相互作用を遮断する能力を評価し、結果を、表１３に示す。
Figure 0007170691000015
表１３に示す通り、アイソタイプ対照は、ＲＡＪＩ細胞またはＡ２０細胞の、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞への結合の、測定可能な遮断を何ら実証しなかった。本発明の全てのＬＡＧ３抗体は、最高の抗体濃度で、ＲＡＪＩ細胞またはＡ２０細胞の、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞への接着のうちの９２～９８％を遮断し、ＩＣ５０値は、ＲＡＪＩ細胞接着については、２．５ｎＭ～３１ｎＭの範囲であり、Ａ２０細胞の、ＨＥＫ２９３－ｈＬＡＧ３細胞への接着については、３．６ｎＭ～３０ｎＭの範囲であった。比較薬のＩＣ５０値は、ＲＡＪＩ細胞の接着については、３．４ｎＭおよび７．２ｎＭであり、Ａ２０細胞の、ＨＥＫ２９３－Ｌａｇ３細胞への接着については、５．１ｎＭおよび９．６ｎＭであった。
（実施例８：Ｔ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイにおける、ＬＡＧ３により誘導されるＴ細胞の下方調節の遮断）
Ｔ細胞活性化は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の、主要組織適合性複合体クラスＩまたはＩＩ（ＭＨＣＩまたはＭＨＣＩＩ）タンパク質により提示される特定のペプチドを認識する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を刺激することにより達成される（Ｇｏｌｄｒａｔｈら、１９９９年、Ｎａｔｕｒｅ、４０２巻、２５５～２６２頁）。活性化したＴＣＲは、今度はアクチベータータンパク質１（ＡＰ－１）、活性化Ｔ細胞の核因子（ＮＦＡＴ）、または活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦκＢ）などの転写因子により駆動されるレポーター遺伝子によりモニタリングされうる、シグナル伝達イベントのカスケードを誘発する。Ｔ細胞の応答は、Ｔ細胞上で構成的または誘導的に発現する、共受容体の関与を介して精緻化される。１つのこのような受容体は、Ｔ細胞活性の負の調節因子である、ＬＡＧ３である。ＬＡＧ３は、そのリガンドであるＭＨＣＩＩであって、ＡＰＣまたはがん細胞を含む標的細胞上で発現するＭＨＣＩＩと相互作用し、ＴＣＲシグナロソーム（ｓｉｇｎａｌｏｓｏｍｅ）により誘発される正のシグナルを断絶させることにより、Ｔ細胞の活性化を阻害する（Ｗｏｒｋｍａｎら、２００２年、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６９巻：５３９２～５３９５頁）。
抗ＬＡＧ３抗体が、Ｔ細胞内でＬＡＧ３により媒介されるシグナル伝達をアンタゴナイズする能力を特徴付けるために、２つの哺乳動物細胞系：Ｊｕｒｋａｔ由来Ｔ細胞（下記で記載される、クローンＪＲＴ３．Ｔ３．５）およびＨＥＫ２９３バックグラウンド内の操作ＡＰＣ（下記で記載される）に由来する混合培養物を活用することにより、ＡＰＣとＴ細胞との相互作用により誘導されるＴ細胞シグナル伝達を測定するように、ＬＡＧ３Ｔ細胞／ＡＰＣレポーターアッセイを開発した（図１）。
第１の構成要素には、ＬＡＧ３Ｔ細胞／ＡＰＣレポーターバイオアッセイのためのＴ細胞系を、以下の通りに開発した。Ｊｕｒｋａｔ由来のＴ細胞クローンである、ＪＲＴ３．Ｔ３．５（ＡＴＣＣ番号：ＴＩＢ－１５３）にまず、製造元の指示書に従い、Ｃｉｇｎａｌ Ｌｅｎｔｉ ＡＰ－１ Ｌｕｃ ｒｅｐｏｒｔｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ（Ｓａｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；型番ＣＬＳ－０１１Ｌ）を形質導入した。レンチウイルスは、最小ＣＭＶプロモーターの制御下にあるホタルルシフェラーゼ遺伝子、ＴＰＡ誘導性転写応答エレメント（ＴＲＥ）のタンデムリピート、およびピューロマイシン耐性遺伝子をコードする。抗生物質による選択の後、レポーター細胞のピューロマイシン耐性プールを、ヒトＣＤ２８（ＮＰ＿００６１３０．１）、Ｏｂ２Ｆ３ ＴＣＲのアルファサブユニットおよびベータサブユニット（アルファ：ＡＧＡ９２５５０．１、ベータ：ＡＡＡ６１０２６．１）、ヒトＬＡＧ３キメラ（ヒトＬＡＧ３の細胞外ドメイン（ＮＰ＿００２２７７．４）と、ヒトＣＤ３００ａの膜貫通／細胞質ドメイン（１８１～２９９のアミノ酸；受託番号ＮＰ００９１９２．２）とを含む）、およびヒトＰＤ－１（受託番号ＮＰ＿００５００９．２）の形質導入によりさらに操作した。タンパク質の発現は、各ラウンドの形質導入の後における、ＦＡＣＳ解析により確認した。その後、単一のクローンである、ＪＲＴ３．Ｔ３／ＡＰ１－Ｌｕｃ／ＣＤ２８／ｈＬＡＧ３－ＣＤ３００ａキメラ／ｈＰＤ－１クローン２Ｄ２を作出し、Ｔ細胞／ＡＰＣレポーターバイオアッセイにおいて使用した。細胞系は、本実施例では選択培地と称する、１００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシン＋５００ｕｇ／ｍＬのＧ４１８＋１ｕｇ／ｍＬのピューロマイシンを補充した、ＲＰＭＩ＋１０％のＦＢＳ＋ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン（Ｐ／Ｓ／Ｇ）中で維持した。本明細書では、これらの細胞を、レポーターＴ細胞と称する。
第２の構成要素には、ＬＡＧ３Ｔ細胞／ＡＰＣレポーターバイオアッセイのためのＡＰＣ細胞系を、以下の通りに作出した。ヒトＣＤ２０（番号：ＮＰ＿０６８７６９．２）を発現する、安定的なＨＥＫ２９３細胞系（ＡＴＣＣ番号：ＣＲＬ－１５７３）に、ヒトＭＨＣＩＩサブユニットである、ＨＬＡ－ＤＲ２Ａ（ＮＰ＿０６１９８４．２）およびＨＬＡ－ＤＲ２Ｂ（ＮＰ＿００２１１５）を形質導入した。ＨＬＡ－ＤＲ２陽性細胞を、ＦＡＣＳにより単離し、結果として得られる細胞系である、ＨＥＫ２９３／ＣＤ２０／ＨＬＡ－ＤＲ２を、本実施例では選択培地と称する、ＤＭＥ＋１０％＋Ｐ／Ｓ／Ｇ＋非必須アミノ酸（１００ｕｇ／ｍＬのハイグロマイシン＋５００ｕｇ／ｍＬのＧ４１８を補充した）中で維持した。本明細書では、これらの細胞を、ＡＰＣ細胞と称する。
ＴＣＲによるシグナル伝達を誘発するために、Ｔ細胞とＡＰＣとを係合させるのに、２つの手法：（１）二特異性方式；および（２）ペプチドパルシング方式を使用した。このバイオアッセイでは、抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ３／ＭＨＣＩＩ間の相互作用を遮断し、ＣＤ３００ａ分子の細胞質ゾルテールにより送達される阻害性シグナル伝達を失効化させることにより、Ｔ細胞活性をレスキューし、その後、ＡＰ１－Ｌｕｃシグナル伝達を増大させた。Ｔ細胞活性化は、ルシフェラーゼ読み出しによりモニタリングした。
二特異性方式：この方式では、Ｔ細胞上のＣＤ３に結合する１つのＦａｂアームと、ＨＥＫ２９３細胞上のＣＤ２０に結合する第２のＦａｂとから構成される、二特異性抗体（ＣＤ３×ＣＤ２０二特異性抗体；例えば、ＵＳ２０１４００８８２９５に開示されている）を活用した。二特異性分子の存在は、免疫学的シナプスの形成と、操作Ｔ細胞上のＣＤ３分子のクラスタリングに起因する、ＴＣＲ複合体の活性化とを結果としてもたらす。
スクリーニングの前日に、操作レポーターＴ細胞を、選択培地中、１ｍＬ当たりの細胞５×１０５個へと培養し、翌日のバイオアッセイで試験した。抗ＬＡＧ３抗体のＥＣ５０値は、一定濃度のＣＤ３×ＣＤ２０二特異性抗体（１００ｐＭ）の存在下で決定した。以下の順序で、試薬を添加した。抗Ｌａｇ３抗体およびアイソタイプ対照を、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミンを補充した、ＲＰＭＩ１６４０（アッセイ培地）中で系列希釈した。１０点の希釈物を、１５ｐＭ～１００ｎＭの間の範囲とし、最後の希釈点は、ｍＡｂを含有しなかった（緩衝液単独の対照）。系列希釈した抗体を、一定濃度（１００ｐＭ）の二特異性抗体を含有する、９６ウェル白色平底プレート内の、対応するウェルへと添加した。一晩にわたり培養したレポーターＴ細胞を、アッセイ培地中、１ｍＬ当たり２×１０６個で再懸濁させ、二特異性抗体を加えた抗ＬＡＧ３抗体を含有するプレートへと添加し、３７℃／５％のＣＯ２で、３０分間にわたりインキュベートした。レポーターＴ細胞の最終濃度は、ウェル１つ当たり５×１０４個であった。
次に、ＡＰＣ細胞を、Ｄ－ＰＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；型番９２４０）で１回洗浄し、トリプシン処理し（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｍｅｄｉａ；型番ＳＭ－２００４－Ｃ）、アッセイ培地でブロッキングした。遠心分離の後、細胞を、アッセイ培地中、１ｍＬ当たり４×１０５個で再懸濁させ、レポーターＴ細胞を含有するプレートへと添加し、二特異性抗体を加えた抗ＬＡＧ３抗体と共にインキュベートした。ＡＰＣ細胞の最終濃度は、ウェル１つ当たり１×１０４個であった。プレートを、３７℃、５％のＣＯ２で、４～６時間にわたりインキュベートした。ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ；型番Ｅ６０５１）試薬を添加した後で、ＡＰ１－Ｌｕｃ活性を検出し、相対光単位（ＲＬＵ）を、Ｖｉｃｔｏｒ照度計上で捕捉した。全ての試料を、二連で試験した。
ＭＢＰ８５－９９を使用するペプチドパルシング方式：ＴＣＲは、特定のＭＨＣ／ペプチド複合体を認識し、Ｔ細胞の活性化をもたらす。このアッセイで使用されるＯｂ２Ｆ３ ＴＣＲヘテロ二量体は、ＭＢＰ８５－９９ペプチド（ミエリン塩基性タンパク質：ＮＰ＿００１０２０２７２；配列番号５８３）と複合体形成させた、ＭＨＣＩＩタンパク質である、ＨＬＡ－ＤＲ２ＡＢと相互作用することが報告されている。
スクリーニングの前日に、操作レポーターＴ細胞を、二特異性方式について上記で記載した通りに調製した。ＡＰＣ細胞を、対応する抗生物質含有細胞培養培地中、３７℃／５％のＣＯ２で、０．２μＭのＭＢＰ８５－９９ペプチド（Ｃｅｌｔｅｋ ＨＬＡ－ＤＲ２ ＭＢＰ８５－９９（ＤＭＳＯ中）；ＥＲ－１５；ロット番号：１４０４１１；分子量：１７９７．１ｇ／モル）により、一晩にわたりパルシングした。抗ＬＡＧ３抗体のＥＣ５０値は、パルシングされたＡＰＣ１×１０４個の存在下で決定した。以下の順序で、試薬を添加した。抗ＬＡＧ３抗体および対照を、アッセイ培地中で系列希釈した。抗ＬＡＧ３抗体の１０点の系列希釈物を、１５ｐＭ～１００ｎＭの間の範囲とし、最後の希釈点は、ｍＡｂを含有しなかった。抗体を、９６ウェル白色平底プレート内の、対応するウェルへと添加した。一晩にわたり培養したレポーターＴ細胞を、アッセイ培地中、１ｍＬ当たり２×１０６個で再懸濁させ、プレートへと添加し、３７℃、５％のＣＯ２で、３０分間にわたりインキュベートした。レポーターＴ細胞の最終濃度は、ウェル１つ当たりのＴ細胞５×１０４個であった。次に、ＭＢＰ８５－９９ペプチドでパルシングされたＡＰＣ細胞を、Ｄ－ＰＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；型番９２４０）で１回洗浄し、トリプシン処理し（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｍｅｄｉａ；型番ＳＭ－２００４－Ｃ）、アッセイ培地でブロッキングした。遠心分離の後、細胞を、アッセイ培地中、１ｍＬ当たり４×１０５個で再懸濁させ、抗ＬＡＧ３に、ペプチドでパルシングされたレポーターＴ細胞を加えたプレートへと添加した。ＡＰＣ細胞の最終濃度は、ウェル１つ当たり１×１０４個であった。アッセイプレートを、３７℃／５％のＣＯ２で、４～６時間にわたりインキュベートした。ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ；型番Ｅ６０５１）試薬を添加した後で、ＡＰ１－Ｌｕｃ活性を検出し、相対光単位（ＲＬＵ）を、Ｖｉｃｔｏｒ照度計上で捕捉した。全ての試料を、二連で試験した。
ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、１０点の反応曲線についての、４パラメータのロジスティック方程式から決定した。スクリーニングされた各抗体のＲＬＵ値は、対照である、ｍＡｂを含有しない最後の系列希釈物を、１００％とすることにより正規化したものであるが、これは、理論的には、二特異性分子（二特異性方式における）、またはＭＢＰ８５－９９ペプチドでパルシングされたＡＰＣにより誘発される、最大のＡＰ１－Ｌｕｃ応答を提示するはずである。結果を表１４にまとめる。
Figure 0007170691000016
表１４に示す通り、Ｔ細胞／ＡＰＣバイオアッセイで試験した、本発明の全ての抗Ｌａｇ３ ｍＡｂは、ＬＡＧ３／ＨＬＡ－ＤＲ２による阻害を、アッセイのペプチド方式では、１３５ｐＭ～８．８３ｎＭの範囲のＥＣ５０値でレスキューし、アッセイの二特異性方式では、８７ｐＭ～１００ｎＭを超える範囲のＥＣ５０値でレスキューしたが、比較薬は、２８０ｐＭおよび３５０ｐＭのＥＣ５０値を呈示した。被験アイソタイプ対照は、バイオアッセイにおいて、著明なレスキュー活性を示さなかった。さらなる実験では、抗ＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０；本明細書の実施例１２に記載される）添加は、Ｔ細胞活性化のレスキューを増強しなかった。
第２の実験では、ＨＥＫ２９３／ＣＤ２０／ＨＬＡ－ＤＲ２細胞系に、レンチウイルス（ｐＬＶＸ）ベクター系へとクローニングした、ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子（受託番号ＮＰ＿０５４８６２．１のアミノ酸１～２９０）を形質導入した。上記で記載した通り、ｈＬＡＧ－３およびＡＰ－１により駆動されるルシフェラーゼレポーターを発現する、Ｊｕｒｋａｔ由来のＴ細胞を、ヒトＭＨＣＩＩ／ペプチド複合体を発現する、ＰＤ－Ｌ１陽性抗原提示細胞と共にインキュベートした。このアッセイでは、抗ＬＡＧ－３抗体は、Ｔ細胞の活性を、抗ＰＤ－１抗体（ＲＥＧＮ２８１０；本明細書の実施例１２で記載される）の存在下に限りレスキューし、抗ＰＤ－１抗体の非存在下では、レスキューしなかった。まとめると、抗ＬＡＧ－３抗体は、このＴ細胞アッセイでは、ＬＡＧ－３／ＭＨＣＩＩ阻害性シグナル伝達を遮断することにより、Ｔ細胞の活性化をレスキューし、抗ＰＤ－１抗体と相乗的に作用した。
（実施例９：抗ＬＡＧ３抗体は、刺激されたカニクイザルＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞への結合を提示する）
本実施例では、ＦＡＣＳを介して、選択された抗ＬＡＧ３抗体が、ＬＡＧ３を発現するカニクイザルＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋ Ｔ細胞に結合する能力について評価した。
まず、Ｔ細胞を、カニクイザル全血液（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹ）から単離した。略述すると、２匹のカニクイザルドナーに由来する全血液を、ＰＢＳ中で１：１に希釈し、８５％のＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ溶液上に重層させた。標準的な手順に従い、赤血球を単核細胞から分離し、汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して、Ｔ細胞を単離した。
Ｔ－ｃｅｌｌ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ／Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｋｉｔ ｆｏｒ ｎｏｎ－ｈｕｍａｎ ｐｒｉｍａｔｅ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して、単離されたＴ細胞を活性化させた。細胞－ビーズ混合物を、完全培地中、１ｍＬ当たりの細胞１×１０６個の濃度で再懸濁させた。７２時間のインキュベーション後、ビーズを除去し、活性化させたＴ細胞を、完全培地中、９６時間にわたり拡大した。
次に、ＦＡＣＳを介して、生細胞と死細胞とを識別するように、上記で記載した、各ドナーに由来する、刺激したカニクイザルＴ細胞を、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で染色した。その後、ＣＤ４およびＣＤ８について陽性および陰性の細胞集団の検出を可能とするように、細胞を、ＰＥコンジュゲート抗ＣＤ８およびＦＩＴＣコンジュゲート抗ＣＤ４と共に、氷上で１５分間にわたり共インキュベートした。
抗ＬＡＧ３抗体の、既に単離されたカニクイザルＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞への結合について評価するために、抗ＬＡＧ３抗体およびアイソタイプ対照を、ブロッキング緩衝液中で系列希釈し、１００ｎＭ～５０ｐＭの範囲の最終用量を含む９６ウェルＶ字底プレート内に播種した。次に、Ｚｅｎｏｎ Ａｌｅｘａ－Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して、系列希釈された抗体を直接標識し、カニクイザルＣＤ４＋／ＣＤ８＋ Ｔ細胞懸濁物と共に、氷上で、１５～３０分間にわたりインキュベートした。細胞を遠心分離し、ペレットを、染色緩衝液で洗浄して、結合しなかった抗体を除去し、Ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と染色緩衝液との１：１希釈物で１２時間にわたり固定した。インキュベーション時間後、固定緩衝液を除去し、ペレットを、染色緩衝液中で再懸濁させ、濾過し、蛍光測定のために使用した。
蛍光測定値を、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上で収集し、データを、ＦｌｏｗＪｏにより解析して、平均値蛍光強度（ＭＦＩ）を決定した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、１１点の反応曲線についての、４パラメータのロジスティック方程式から計算した。各抗体についてのＭＦＩ比は、抗体濃度を１１．１ｎＭとするときのＭＦＩを、抗体濃度を０ｎＭとするときのＭＦＩ（陰性対照）で除することにより計算した。
Figure 0007170691000017
既に示した通り、抗ＬＡＧ３抗体である、Ｈ４ｓＨ１５４８２ＰおよびＨ４ｓＨ１４８１３Ｎは、操作カニクイザルＬＡＧ３－ＨＥＫ２９３細胞系への結合を提示した。本実施例では、Ｈ４ｓＨ１５４８２ＰおよびＨ４ｓＨ１４８１３Ｎは、ＣＤ４＋ ＬＡＧ３発現カニクイザルＴ細胞およびＣＤ８＋ ＬＡＧ３発現カニクイザルＴ細胞への特異的な結合を、１．１ｎＭ～８５ｐＭの範囲のＥＣ５０で裏付けた（表１５）。まとめると、本実施例で記載した、選択された抗ＬＡＧ３抗体は、カニクイザル活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋ Ｔ細胞上で発現するＬＡＧ３との交差反応性を示す。これに対し、比較薬１は、カニクイザルＣＤ８＋ Ｔ細胞に対する結合だけを裏付けた。
（実施例１０：ｉｎ ｖｉｖｏにおける、抗ＬＡＧ３抗体の、Ｃｏｌｏｎ ２６腫瘍に対する有効性）
単独の抗マウスＬＡＧ３抗体および抗マウスＰＤ－１抗体と組み合わせた抗マウスＬＡＧ３抗体の、ｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性について、Ｃｏｌｏｎ ２６前臨床相乗作用腫瘍モデルにおいて研究した。
ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。ＢＡＬＢ／ｃマウス系統に由来するマウス腺癌細胞系である、Ｃｏｌｏｎ ２６は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。０日目、５０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下に、Ｃｏｌｏｎ ２６細胞（ＢＡＬＢ／ｃ系統に由来する、マウス腺癌系）１×１０６個を植え込んだ。８日目に、平均腫瘍容量を５０ｍｍ３とするマウス４０匹を選択し、４つの処置群（群１つ当たりのＮ＝１０）へと無作為化した。１４、１７、２１、２４、および２８日目に、マウスに、以下の抗体：群１：ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体（クローン２Ａ３、ＢｉｏＸＣｅｌｌ；型番ＢＥ００８９）およびｍＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（クローンＭＯＰＣ－２１、ＢｉｏＸＣｅｌｌ；型番ＢＥ００８３）；群２：抗マウスＰＤ－１抗体（ラットＩｇＧ２ａ抗マウスＰＤ－１抗体、クローンＲＰＭＩ－１４、ＢｉｏＸＣｅｌｌ；型番ＢＥ００８９）およびｍＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体；群３：抗マウスＬＡＧ３抗体（ラットＩｇＧ１抗マウスＬＡＧ３抗体、クローンＣ９Ｂ７Ｗ、ＢｉｏＸＣｅｌｌ；型番ＢＥ０１７４）およびラットＩｇＧ２ａ対照抗体；群４：抗マウスＰＤ－１抗体および抗マウスＬＡＧ３抗体を投与した。全ての抗体は、腹腔内注射により、１０ｍｇ／ｋｇで投与した。腫瘍容量は、毎週２回ずつ、実験の持続期間（４２日間）にわたるカリパー測定によりモニタリングした。
抗マウスＰＤ－１抗体で処置されたマウスでは、腫瘍の増殖の有意な低減が観察され（図２Ａ～２Ｂ）、１０匹中５匹のマウスが、実験の終了時の４５日目までに、無腫瘍となった。抗マウスＬＡＧ３抗体で処置されたマウスのサブセットでもまた、腫瘍の増殖の低減が観察され、１０匹中３匹のマウスが、４５日目までに、無腫瘍となった。これと対照的に、抗ＬＡＧ３と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせ処置は、いずれの単剤療法よりも優れており、１０匹中８匹のマウスが、実験の終了時に、無腫瘍となったことから、抗ＬＡＧ３および抗ＰＤ－１による処置の強力な相加効果が示唆される。対照群では、実験の終了時において、無腫瘍マウスは見られなかった。組み合わせ療法で処置されたマウスでは、３５日目までに、腫瘍容量の、統計学的に有意な低減（ｐ＜０．０５、図２Ｂ）が見られたが、単剤療法で処置されたマウスでは、これが見られなかった。効果的な腫瘍の排除にも拘らず、体重減少の証拠は観察されなかった（示していない）。こうして、確立されたＣｏｌｏｎ ２６腫瘍モデルでは、抗ＰＤ－１抗体と抗ＬＡＧ３抗体との組み合わせレジメンは、対応する単剤療法より有意に有効であった。
ｉｎ ｖｉｖｏにおける、抗マウスＰＤ－１抗体および抗マウスＬＡＧ３抗体の活性はまた、４Ｔ１、ＲＥＮＣＡ、およびＡ２０による前臨床相乗作用腫瘍モデルでも研究した。両方の抗体による組み合わせ処置は、単一の抗体処置と比較して、少なくとも相加的な抗腫瘍効果を結果としてもたらした（データは示さない）。
（実施例１１：ｉｎ ｖｉｖｏにおける、抗マウスＬＡＧ３抗体の、ＭＣ３８腫瘍に対する有効性）
抗マウスＰＤ－１遮断抗体および抗マウスＬＡＧ３遮断抗体を使用して、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて確立されたＭＣ３８腫瘍に対する、ＰＤ－１およびＬＡＧ３の二重遮断の効果を検討した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス系統に由来するマウス腺癌細胞系である、ＭＣ３８は、米国国立保健研究所への寄託物から得た。抗ＬＡＧ３抗体および抗ＰＤ－１抗体ならびに対照は、実施例１０で記載した通りに得た。
０日目、５０匹のＣ５７ＢＬ／６マウスの脇腹の皮下に、ＭＣ３８細胞３×１０５個を植え込んだ。８日目に、平均腫瘍容量を４５ｍｍ３とするマウス４０匹を選択し、４つの処置群（群１つ当たりのＮ＝１０）へと無作為化した。８、１２、１５、１９、および２３日目に、マウスに、以下の抗体：群１：ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体およびｍＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体；群２：抗マウスＰＤ－１抗体およびｍＩｇＧ１抗体；群３：抗マウスＬＡＧ３抗体およびラットＩｇＧ２ａ抗体；群４：抗マウスＰＤ－１抗体および抗マウスＬＡＧ３抗体を投与した。全ての抗体は、腹腔内注射により、１０ｍｇ／ｋｇで投与した。腫瘍容量は、毎週２回ずつ、実験の持続期間（２８日間）にわたるカリパー測定によりモニタリングした。
抗ＰＤ－１抗体療法は、マウスのサブセット内の腫瘍の増殖を著明に低減し（ｐ＜０．０００１；２３日目）（図３Ａ～３Ｂ）、１０匹中２匹のマウスが、実験の終了時に、無腫瘍となった。抗ＬＡＧ３抗体による単剤療法が、有意な抗腫瘍効果を示さなかった（実験終了時に無腫瘍のマウスは、１０匹中０匹であった）のに対し、抗ＬＡＧ３抗体と、抗ＰＤ－１抗体との組み合わせは、抗ＰＤ－１療法単独より優れていたことから、相乗効果が指し示される。
組み合わせた抗ＰＤ－１抗体および抗ＬＡＧ３抗体の免疫調節特性について調べるため、処置されたマウスの脾臓内および流入領域リンパ節（ＤＬＮ）内のＴ細胞マーカーを検討した（図４）。腫瘍保有マウスの脾臓および流入領域リンパ節を、切除により除去し、１５ｍＬのＲＰＭＩ１６４０ Ｇｌｕｔａｍａｘ Ｉ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に入れた。全ＲＮＡを単離し、マウスＣＤ８β［プローブ：ＡＧＣＡＧＣＴＣＴＧＣＣＣＴＣＡＴ（配列番号５８４）、フォワードプライマー：ＧＣＴＣＴＧＧＣＴＧＧＴＣＴＴＣＡＧＴＡＴＧ（配列番号５８５）、リバースプライマー：ＴＴＧＣＣＧＴＡＴＧＧＴＴＧＧＴＴＴＧＡＡＣ（配列番号５８６）］およびマウスＩＦＮγ（Ｍｍ０１１６８１３４＿ｍ１、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に特異的なプライマー／プローブミックスを使用して、ＲＴ－ＰＣＲ Ｔａｑｍａｎ解析を実施した。マウスシクロフィリンＢ転写物発現レベルに対して、試料を正規化した。ＴａｑＭａｎ解析は、組み合わせ処置群における、マウスのＤＬＮ内および脾臓内の両方のＣＤ８＋ Ｔ細胞の拡大、ならびに組み合わせで処置された動物および単一の抗ＰＤ－１で処置された動物の両方における、Ｔ細胞エフェクター分子であるＩＦＮγの産生の増大を裏付けたことから、ＰＤ－１およびＬＡＧ３の遮断は、Ｔ細胞の増殖およびエフェクター機能を増大させることが指し示される。
（実施例１２：ｉｎ ｖｉｖｏにおける、抗ヒトＬＡＧ３抗体の、ＭＣ３８腫瘍に対する有効性）
この実験では、本発明の例示的な抗ヒトＬＡＧ３抗体の、ＭＣ３８腫瘍に対する有効性について研究した。抗ヒトＬＡＧ３ ｍＡｂは、マウスＬＡＧ３に結合しない。したがって、これらの抗体の、マウスのｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍特性について研究するために、ヒトＬＡＧ３タンパク質を発現するようにヒト化されたマウスを使用した。本明細書の実験のために、ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）技術（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら、２００３年、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２１巻：６５２～６５９頁）を使用して、ヒトＰＤ－１およびヒトＬＡＧ３の細胞外部分、ならびにこれらのタンパク質のマウス形の膜貫通部分および細胞内部分を発現する二重ヒト化マウスを作出した。
ＶｅｌｏｃｉＧｅｎｅ（登録商標）技術を使用して、マウスＰｄｃｄ１遺伝子およびマウスＬａｇ３遺伝子の細胞外ドメインを、ヒトＰＤ－１遺伝子およびヒトＬＡＧ３遺伝子の対応する領域で置きかえるように、二重ヒト化ＬＡＧ３／ＰＤ－１マウスを操作した（２０１５年１１月２０日に出願された、米国特許出願第６２／２５８，１８１号）。ヒト化ＰＤ－１およびヒト化ＬＡＧ３の発現は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体による刺激の後における、ヒト化マウスＴ細胞上のＰＤ－１タンパク質およびＬＡＧ３タンパク質の発現を検討することにより確認した。ヒトＰＤ－１タンパク質およびＬＡＧ３タンパク質の、対応するマウスリガンドとの相互作用は、細胞接着アッセイにおいて、ヒトＬＡＧ３の、マウスＭＨＣＩＩへの結合について調べることにより検証し、ＳＰＲ－Ｂｉａｃｏｒｅ結合研究において、ヒトＰＤ－１の、マウスＰＤ－Ｌ１への結合について調べることにより検証した。
本研究のために使用される、例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合する完全ヒト抗体であり、配列番号４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３、および配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ（Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐとしてもまた公知であり、本明細書の下記では、「ｍＡｂ１」と称する）を含む。
抗ヒトＰＤ－１抗体は、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第ＵＳ２０１５０２０３５７９号において開示されている。本実施例で使用される抗ＰＤ－１抗体は、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ（ＵＳ２０１５０２０３５７９において開示されている；ＲＥＧＮ２８１０としてもまた公知である。より具体的には、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎは、ＵＳ２０１５０２０３５７９において開示されている、配列番号３３０の重鎖と、配列番号３３１の軽鎖とを含む）である。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）は、高アフィニティーで、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断する。
腫瘍の免疫原性を増大させるために、ニワトリオボアルブミンを発現するように、マウス結腸腺癌細胞を操作した（ＭＣ３８．Ｏｖａ）。
０日目、ＬＡＧ３ｈｕｍ／ｈｕｍＰＤ－１ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの皮下に、ＭＣ３８．Ｏｖａ細胞１．５×１０６個を植え込み、３つの処置群へと無作為化した（群１つ当たりのＮ＝７）。３、６、１０、１４、および１７日目に、腹腔内注射により、マウスに、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（２５ｍｇ／ｋｇ）、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（１０ｍｇ／ｋｇ）、またはアイソタイプ対照抗体（２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。腫瘍容量は、毎週２回ずつ、実験の持続期間（２４日間）にわたるカリパー測定によりモニタリングした。
０日目、ＬＡＧ３ｈｕｍ／ｈｕｍＰＤ－１ｈｕｍ／ｈｕｍ二重ヒト化マウスに、ＭＣ３８．Ｏｖａ細胞を接種し、３、６、１０、１４、および１７日目に、腹腔内経路を介して、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（２５ｍｇ／ｋｇ）、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（１０ｍｇ／ｋｇ）、またはアイソタイプ対照（２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）は、部分的な腫瘍増殖の阻害を示し（図５）、７匹中２匹のマウスで腫瘍退縮が観察されたのに対し、アイソタイプ対照群では、いずれのマウスも無腫瘍ではなかった。２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）による単剤療法は、腫瘍の増殖に対して著明な効果を示さず、実験の終了時までに無腫瘍となったマウスは、７匹中１匹だけであった。マウスの体重は、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）処置、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）処置、またはアイソタイプ対照処置による影響を受けなかった。
（実施例１３：ｉｎ ｖｉｖｏにおける、抗ヒトＬＡＧ３抗体と抗ヒトＰＤ－１抗体との組み合わせの、ＭＣ３８腫瘍に対する有効性）
この実験では、二重ヒト化ＬＡＧ３ｈｕｍ／ｈｕｍＰＤ－１ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおける、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）と組み合わせたｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）の、ＭＣ３８．Ｏｖａ腫瘍に対する有効性について研究した。二重ヒト化マウスについては、本明細書の実施例１２に記載されている。
本研究のために使用される、例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合する完全ヒト抗体であり、配列番号４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３、および配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ（Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐとしてもまた公知であり、本明細書の下記では、「ｍＡｂ１」と称する）を含む。
本実施例で使用される抗ＰＤ－１抗体は、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ（ＵＳ２０１５０２０３５７９において開示されている；ＲＥＧＮ２８１０としてもまた公知である）。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）は、高アフィニティーで、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断する。
０日目、マウスの皮下に、ＭＣ３８．Ｏｖａ細胞１×１０６個を植え込み、４つの処置群（対照群では、Ｎ＝７であり、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）処置群、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）処置群、およびｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）＋ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）組み合わせ処置群では各々、Ｎ＝１２である）へと無作為化した。３、７、１０、１４、および１７日目に、腹腔内注射により、マウスに、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（２５ｍｇ／ｋｇ）、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（１０ｍｇ／ｋｇ）、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（２５ｍｇ／ｋｇ）とＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（１０ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせ、またはアイソタイプ対照（２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。腫瘍容量は、毎週２回ずつ、実験の持続期間（３２日間）にわたるカリパー測定によりモニタリングし、無腫瘍動物を、腫瘍の再発の非存在について、最長で８０日間にわたりモニタリングした。
ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）単剤療法は、腫瘍の増殖阻害を結果としてもたらし（図６Ａ～６Ｂ）、動物１２匹中２匹（１７％）において腫瘍の退縮をもたらしたのに対し、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）は、それほど有効ではなく、先行する実験の所見を確認した。腫瘍の退縮は、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）で処置されたマウス１２匹中１匹だけで観察された。アイソタイプ対照群では、３２日目においても、無腫瘍マウスは見られなかった。これに対し、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）とＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせは、ＭＣ３８．Ｏｖａ腫瘍の増殖の頑健な阻害を裏付け、実験の終了時までに、１２匹中５匹（４２％）の無腫瘍マウスを結果としてもたらした。無腫瘍マウスのいずれも、植込み後８０日間にわたり、腫瘍の再発を示さなかったことから、長期にわたり持続する組み合わせ免疫療法の効果が指し示される。テューキーの検定後多重比較を伴う一元ＡＮＯＶＡは、２２日目の、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）とＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ処置群における腫瘍容量の、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）単剤療法（ｐ＜０．０５）またはアイソタイプ対照（ｐ＜０．０１）と比較した有意差を明らかにした（図６Ｂ）。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）単剤療法もまた、腫瘍の増殖の、アイソタイプ対照と比べた有意な低減を示した（ｐ＜０．０５）。ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）とＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせ処置はまた、ログランク（マンテル－コックス）検定により解析される通り、動物の生存率の有意な改善（ｐ＜０．０００１）も結果としてもたらした（図６Ｃ）。組み合わせ療法の有効性の改善にも拘らず、体重減少の証拠は観察されなかった（データは示さない）。まとめると、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）とＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）との組み合わせは、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）単剤療法またはｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）単剤療法と比較した、腫瘍増殖の低減、腫瘍排除の改善、および生存の改善を含む有効性の改善を結果としてもたらした。
（実施例１４：ＭＣ３８腫瘍に対する、抗ＬＡＧ３抗体と抗ＰＤ－１抗体との組み合わせについての用量設定研究）
本実施例は、ｉｎ ｖｉｖｏの二重ヒト化ＬＡＧ３ｈｕｍ／ｈｕｍＰＤ－１ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおける、ＭＣ３８．Ｏｖａ腫瘍に対する、抗ヒトＰＤ－１と抗ヒトＬＡＧ３抗体との組み合わせの有効性を測定する用量設定実験のセットについて記載する。二重ヒト化マウスについては、本明細書の実施例１２に記載されている。
本研究のために使用される、例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合する完全ヒト抗体であり、配列番号４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３、および配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ（Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐとしてもまた公知であり、本明細書の下記では、「ｍＡｂ１」と称する）を含む。
本実施例で使用される抗ＰＤ－１抗体は、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ（ＵＳ２０１５０２０３５７９において開示されている；ＲＥＧＮ２８１０としてもまた公知である）である。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）は、高アフィニティーで、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断する。
第１の実験では、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）を滴定し、１０ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、いずれの用量群も、単剤およびｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）（２５ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせとして調べた。両方の組み合わせ処置群の結果を、ＲＥＧＮ２８１０（１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）またはｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）の単剤療法と比較して、相加的／相乗的な抗腫瘍効果が観察されるのかどうかを決定した。また、アイソタイプ対照抗体（２５ｍｇ／ｋｇ）による処置についても調べた。０日目、ＬＡＧ－３ ｈｕｍ／ｈｕｍ ＰＤ－１ ｈｕｍ／ｈｕｍマウスに、ＭＣ３８．Ｏｖａ細胞を植え込み、６つの処置群（アイソタイプ対照群では、Ｎ＝６であり、ｍＡｂ１処置群、ＲＥＧＮ２８１０処置群、またはＲＥＧＮ２８１０＋ｍＡｂ１処置群では、Ｎ＝１２である）へと無作為化した。３、７、１０、１４、および１７日目に、腹腔内注射により、マウスに、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）；ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）；ＲＥＧＮ２８１０（１ｍｇ／ｋｇ）；ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１ｍｇ／ｋｇ）；またはアイソタイプ対照（２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。腫瘍容量は、３６日間にわたりモニタリングし、無腫瘍動物を、最長で８０日間にわたりモニタリングした。
表１６は、研究中の多様な時点における平均値腫瘍容量を示し、３６日目における無腫瘍マウスの数を、表１７に示す。
Figure 0007170691000018
Figure 0007170691000019
１ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０単剤療法は、３６日間にわたり最小限の腫瘍退縮を示すにとどまり、アイソタイプ対照処置群についての結果と同様であった（図７Ａ～７Ｂ）。３６日目に無腫瘍のマウスは、ＲＥＧＮ２８１０（１ｍｇ／ｋｇ）群およびアイソタイプ対照群のそれぞれにおいて、１２匹中２匹（約１６％）および６匹中０匹（０％）であった。これに対し、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）処置群、ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）処置群、およびＲＥＧＮ２８１０（１ｍｇ／ｋｇ）＋ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）処置群は、２２日間にわたり、腫瘍の増殖の同様の低減を裏付けた（図７Ａ）。３６日目に、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）処置が、１２匹中１匹（約８％）の無腫瘍マウスを結果としてもたらしたのに対し、ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）群およびＲＥＧＮ２８１０（１ｍｇ／ｋｇ）＋ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）群のそれぞれでは、１２匹中４匹（約３３％）および１２匹中３匹（２５％）のマウスが無腫瘍であった。全体では、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）が、ＭＣ３８．Ｏｖａ腫瘍の増殖の最も頑健な低減を裏付け、１２匹中６匹（５０％）のマウスが、３６日目までに無腫瘍となった。無腫瘍マウスのいずれも、処置の中止にも拘らず、植込み後８０日間にわたり、腫瘍の再発を示さなかったことから、長期にわたり持続する組み合わせ免疫療法の効果が指し示される。ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）処置はまた、ログランク（マンテル－コックス）検定により解析される通り、動物の生存率の有意な改善（ｐ＝０．０１９７）も結果としてもたらした（図７Ｃ）。体重減少の証拠もまた、観察されなかった。
第２の実験では、ｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）を滴定し、２５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、いずれの用量群も、単剤およびＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）（１０ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせとして調べた。両方の組み合わせ処置群の結果を、ｍＡｂ１（５ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇ）、またはＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）の単剤療法と比較して、相加的／相乗的な抗腫瘍効果が観察されるのかどうかを決定した。また、アイソタイプ対照抗体（２５ｍｇ／ｋｇ）による処置についても調べた。０日目、ＬＡＧ－３ ｈｕｍ／ｈｕｍ ＰＤ－１ ｈｕｍ／ｈｕｍマウスに、ＭＣ３８．Ｏｖａ細胞を植え込み、６つの処置群（アイソタイプ対照群では、Ｎ＝６であり、ｍＡｂ１処置群、ＲＥＧＮ２８１０処置群、またはＲＥＧＮ２８１０＋ｍＡｂ１処置群では、Ｎ＝１２である）へと無作為化した。３、７、１０、１４、および１７日目に、腹腔内注射により、マウスに、ｍＡｂ１（５ｍｇ／ｋｇ）；ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）；ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｍＡｂ１（５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）；ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）；またはアイソタイプ対照（２５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。腫瘍容量は、３１日間にわたりモニタリングした。
５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１単剤療法は、アイソタイプ対照処置群と同様の、最小限の腫瘍退縮を示すにとどまった。ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせは、最も頑健な腫瘍の低減を示した（図８Ａ）。強力な組み合わせ効果はまた、ｍＡｂ１（５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）処置群によっても裏付けられた。２３日目に測定された腫瘍容量を、図８Ｂに示す。抗ＬＡＧ－３抗体とＲＥＧＮ２８１０との組み合わせもまた、動物の生存の有意な改善を示した（ｐ＜０．００１；マンテル－コックスによるログランク検定により解析される）（図８Ｃ）。結果は、強力な組み合わせ効果が、低用量の抗ＬＡＧ３抗体でもなおみられることを示す。本明細書に示される結果に基づくと、腫瘍に対する処置レジメンにおいて、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせた、高用量の抗ＬＡＧ３抗体を使用する必要はない可能性がある。
まとめると、二重ヒト化ＬＡＧ３／ＰＤ－１マウスによるＭＣ３８．ｏｖａ腫瘍モデルにおける、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）とｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）との組み合わせであって、マウス受容体と交差しない臨床抗体についての試験を可能とする組み合わせは、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）単剤療法およびｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）単剤療法と比較して、腫瘍増殖の低減および生存の改善を含む用量依存的な有効性の改善を裏付けた。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）およびｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）の組み合わせの、前臨床状況における、頑健な抗腫瘍有効性は、組み合わせがん免疫療法としての、それらの臨床開発を支持する。
（実施例１５：ｉｎ ｖｉｖｏにおける、抗ヒトＬＡＧ３抗体と抗ヒトＰＤ－１抗体との組み合わせの、確立されたＭＣ３８腫瘍に対する有効性）
この実験では、二重ヒト化ＬＡＧ３ｈｕｍ／ｈｕｍＰＤ－１ｈｕｍ／ｈｕｍマウスにおける、ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）と組み合わせたｍＡｂ１（抗ｈＬＡＧ３）の、確立されたＭＣ３８．Ｏｖａ腫瘍に対する有効性について検討した。二重ヒト化マウスについては、本明細書の実施例１２に記載されている。
本研究のために使用される、例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合する完全ヒト抗体であり、配列番号４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３、および配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ（Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐとしてもまた公知であり、本明細書の下記では、「ｍＡｂ１」と称する）を含む。
本実施例で使用される抗ＰＤ－１抗体は、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ（ＵＳ２０１５０２０３５７９において開示されている；ＲＥＧＮ２８１０としてもまた公知である）。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）は、高アフィニティーで、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断する。
０日目、ＬＡＧ－３ｈｕｍ／ｈｕｍＰＤ－１ｈｕｍ／ｈｕｍマウスの皮下に、ＭＣ３８．Ｏｖａ細胞を接種した。１０日目に、平均腫瘍容量を１００ｍｍ３とするマウスを選択し、４つの処置群へと無作為化した。１０、１４、１７、２２日目に、ＩＰ注射により、マウスに、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ；Ｎ＝９）、ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ；Ｎ＝１０）、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）組み合わせ（Ｎ＝１１）、またはアイソタイプ対照抗体（２５ｍｇ／ｋｇ；Ｎ＝７）を投与した。腫瘍容量は、腫瘍植込み後２８日間にわたりモニタリングした。
ＭＣ３８．ｏｖａ腫瘍を保有するヒト化マウスの、抗ｈＰＤ－１抗体と抗ｈＬＡＧ－３抗体との組み合わせによる処置は、腫瘍内Ｔ細胞および末梢Ｔ細胞の活性化を惹起した。ＲＥＧＮ２８１０単剤療法が、部分的な腫瘍増殖の阻害を結果としてもたらしたのに対し、ｍＡｂ１単剤療法は、アイソタイプ対照で処置されたマウスと比較して、平均値腫瘍容量の低減を示さなかった（図９）。これに対し、ｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）とＲＥＧＮ２８１０（１０ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせは、ＭＣ３８．Ｏｖａ腫瘍の増殖の頑健な阻害を裏付けた。ボンフェローニによる検定後多重比較を伴う、一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）は、ｍＡｂ１とＲＥＧＮ２８１０との組み合わせ群における平均値腫瘍容量の、ｍＡｂ１単剤療法（ｐ＜０．０１）またはアイソタイプ対照（ｐ＜０．０５）と比較した有意差を明らかにした（図１０）。組み合わせ療法を、ＲＥＧＮ２８１０単剤療法と比較したところ、実験経過にわたる全体的な平均値腫瘍容量は、組み合わせ療法で小さかったが、この差違は、統計学的有意性に到達しなかった。抗ＬＡＧ－３抗体とＲＥＧＮ２８１０との組み合わせはまた、動物の生存率の有意な増大ならびに生存の持続期間の有意な延長も結果としてもたらした（ｐ＜０．０１；マンテル－コックスによるログランク検定により解析される）。２５日目には、対照および単剤療法と比較して、組み合わせ療法で処置されたマウスのうちの５０％が生存してした（図１１）。この結果に基づくと、組み合わせ処置は、それぞれの単剤療法と比較して、相加的で用量依存的な抗腫瘍効果を呈示した。
（実施例１６：カニクイザルにおける、抗ＬＡＧ－３抗体の薬物動態）
雌カニクイザル（用量群１つ当たりの動物５匹）への１．０、５．０、または１５．０ｍｇ／ｋｇの単回の静脈内（ＩＶ）用量の後で、抗ＬＡＧ３抗体ｍＡｂ１の薬物動態（ＰＫ）を特徴づけた。機能的なｍＡｂ１濃度を決定するための血液試料を、多様な時点において、全ての動物から回収した。血清中の機能的なｍＡｂ１の濃度は、酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して決定した。血清中の抗ｍＡｂ１抗体は、電気化学発光ベースの架橋イムノアッセイを使用して解析した。ＰＫパラメータは、ノンコンパートメント解析（ＮＣＡ）を使用して推定した。平均値濃度－時間プロファイルは、短い初期分布相、その後の線形ベータ排出相により特徴づける（図１２）。標的により媒介されるクリアランス相は、８週間の研究持続期間にわたり観察されなかった。平均値ＡＵＣｉｎｆは、被験用量レベルにわたり同等のＡＵＣｉｎｆ／用量値により裏付けられる通り、用量に比例して増大した。平均値全身クリアランス（ＣＬ）値が、３つの用量群について同等であったことは、この所見と符合する。加えて、３つの用量群のベータ相半減期（ｔ１／２）も、１０．８～１１．５日間の範囲で同等であった。結果に基づき、最大で５０ｍｇ／ｋｇの無有害作用量（ｎｏ－ｏｂｓｅｒｖｅｄ－ａｄｖｅｒｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｌｅｖｅｌ）（ＮＯＡＥＬ）を確立することができた。これらの結果は、ｍＡｂ１が、本研究の条件下で、線形動態を裏付けることを指し示した。
（実施例１７：カニクイザルにおける、抗ＬＡＧ３抗体の毒物学評価）
ｍＡｂ１についての、ｉｎ ｖｉｖｏ毒物学および毒物動態学（ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃ）プロファイルを、雄および雌のカニクイザルによる、４週間、反復用量、ＧＬＰ準拠の毒物学研究時に評価した。サル（群１つ当たり性別当たりの動物５匹）には、ＩＶ注入により、毎週０、２、１０、または５０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１を施した。毒性の評価は、死亡、瀕死状態、臨床観察、体重、食物消費、眼科検査、ＥＣＧの評価、呼吸数、パルスオキシメトリー、体温、および血圧の評価、神経科検査に基づいた。臨床病理学パラメータ（血液学、凝固、臨床化学、および尿検査）および免疫表現型解析もまた評価した。肉眼的剖検検査（ｇｒｏｓｓ ｎｅｃｒｏｐｓｙ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）、臓器重量の測定、および組織病理学的評価も行った。完全剖検は、投与期間の終了時、または８週間にわたる回復期間の終了時において実施した。選択された臓器を秤量し、組織を肉眼的に検討し、顕微鏡的にも検討した。
ｍＡｂ１は、カニクイザルへの毎週のＩＶ注入を介して投与される場合、評価される全ての用量レベルで十分に耐容性を示した。ｍＡｂ１は、十分に耐容性を示し、評価される安全性パラメータのいずれにおいても、ｍＡｂ１に関連する変化が存在しなかったため、研究についての無有害作用量（ＮＯＡＥＬ）は、本研究で投与された最高用量である、１用量当たり５０ｍｇ／ｋｇであると考えられる。
（実施例１８：抗ＬＡＧ３抗体であるＨ４ｓＨ１５４８２Ｐの、ｈＬＡＧ３の細胞外ドメインへの結合についての、水素／重水素交換（Ｈ／Ｄ）ベースのエピトープマッピング）
ヒトＬＡＧ３細胞外ドメイン（ヒトＬＡＧ３のアミノ酸Ｌｅｕ２３～Ｌｅｕ４５０；ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号：Ｐ１８６２７；Ｃ末端にヒトＩｇＧ１タグを伴って作製された（「ｈＬａｇ３．Ｆｃ」）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）（配列番号５８７）であって、抗ＬＡＧ３抗体Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐが相互作用するヒトＬＡＧ３細胞外ドメインのアミノ酸残基を決定するように、実験を行った。この目的で、質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を伴う、水素／重水素（Ｈ／Ｄ）交換エピトープマッピングを活用した。ＨＤＸ法についての一般的な記載は、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２６７巻（２号）：２５２～２５９頁；およびＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）、Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．、７３巻：２５６Ａ～２６５Ａ頁において明示されている。
実験手順
ＨＤＸ－ＭＳ実験は、重水素を標識化するためのＬｅａｐｔｅｃ ＨＤＸ ＰＡＬシステム、試料の消化およびローディングのためのＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｍ－Ｃｌａｓｓ（Ａｕｘｉｌｉａｒｙ ｓｏｌｖｅｎｔ ｍａｎａｇｅｒ）、解析用カラム勾配のためのＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｍ－Ｃｌａｓｓ（μＢｉｎａｒｙ ｓｏｌｖｅｎｔ ｍａｎａｇｅｒ）、ならびに消化したペプチドの質量測定のためのＳｙｎａｐｔ Ｇ２－Ｓｉ質量分析計からなる統合型Ｗａｔｅｒｓ ＨＤＸ／ＭＳプラットフォーム（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）上で実施した。
標識化溶液は、Ｄ２Ｏ下、ｐＤ７．０、１０ｍＭのＰＢＳ緩衝液中で調製した。重水素による標識化のために、抗Ｌａｇ３抗体である、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐと共に、１：１のモル比であらかじめ混合された、３．８μＬのｈＬＡＧ３．Ｆｃ（１μＬ当たり５ピコモル）またはｈＬＡＧ３．Ｆｃを、５６．２μＬのＤ２Ｏ標識化溶液と共に、多様な時点でインキュベートした（例えば、非重水素化対照＝０秒間、重水素による標識化：１分間および２０分間）。重水素化は、５０μＬの試料を、あらかじめ冷却したクエンチ緩衝液（１００ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ２．５中、０．２ＭのＴＣＥＰ、６Ｍのグアニジン塩酸塩）５０μＬへと移すことによりクエンチした。混合物を、１．０℃で、４分間にわたりインキュベートした。次いで、クエンチされた試料を、オンラインの、ペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化のための、Ｗａｔｅｒｓ ＨＤＸ Ｍａｎａｇｅｒへと注入した。消化されたペプチドを、０℃で、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ、２．１×５ｍｍ ＶａｎＧｕａｒｄ ｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）へと捕捉し、５％～４０％のＢ相（移動相Ａ：水中に０．１％のギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル中に０．１％のギ酸）による、９分間にわたる勾配分離のために、解析用カラムＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ １．７μｍ、１．０×５０ｍｍへと溶出させた。質量分析計は、コーン電圧を３７Ｖ、走査時間を０．５秒間に設定し、質量／電荷範囲を５０～１７００トムソン単位（Ｔｈ）に設定した。
Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐが相互作用するヒトＬａｇ３のペプチド残基を同定するために、非重水素化試料に由来するＬＣ－ＭＳＥデータを加工し、ヒトＬＡＧ３の配列を含むデータベースに照らして検索し、配列を、ペプシンで消化し、Ｗａｔｅｒｓ ＰｒｏｔｅｉｎＬｙｎｘ Ｇｌｏｂａｌ Ｓｅｒｖｅｒ（ＰＬＧＳ）ソフトウェアを使用してランダム化した。同定されたペプチドを、ＤｙｎａｍＸソフトウェアへとインポートし、２つの基準：１）アミノ酸１つ当たりの最小限の産物＝０．２、および２）複製ファイル閾値＝３によりフィルタリングした。次いで、ＤｙｎａｍＸソフトウェアにより、各時点において、三連で、複数の時点にわたり、保持時間および高質量精度（＜１０ｐｐｍ）に基づき、各ペプチドによる重水素の取込みを、自動的に決定した。
結果
ＭＳＥデータの収集とカップリングさせた、オンラインのペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラムを使用して、ヒトＬＡＧ３に由来する、合計１２３ペプチドを、抗体の非存在下または存在下で、再現可能に同定し、７８．３％の配列カバレッジを表示した。４つのＬａｇ－３ペプチドは、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐに結合すると、重水素の取込みを著明に低減した（ｐ値＜０．０５として、セントロイドデルタ値＞０．８ダルトン）。記録されたペプチド質量は、３つの複製物に由来する、セントロイドＭＨ＋質量の平均値に対応する。ｈＬＡＧ３．Ｆｃ（配列番号５８７）のアミノ酸３４～７７に対応するこれらのペプチドは、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐに結合すると、重水素化速度を低下させた。これらの同定された残基はまた、Ｕｎｉｐｒｏｔ登録番号：Ｐ１８６２７（ＬＡＧ３＿ＨＵＭＡＮ；配列番号５８８）により規定され、表１８でも例示される、ヒトＬＡＧ３の残基２８～７１にも対応する。
Figure 0007170691000020
（実施例１９：進行性悪性疾患を有する患者における、抗ＬＡＧ３抗体についての臨床試験）
本実施例は、進行性悪性疾患を有する患者における、単剤療法としての抗ＬＡＧ３抗体、および抗ＰＤ－１抗体と組み合わせた抗ＬＡＧ３抗体の安全性、耐容性、および抗腫瘍活性について評価する臨床試験について記載する。
本研究のために使用される、例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合する完全ヒト抗体であり、配列番号４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３、および配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ（Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐとしてもまた公知であり、本明細書の下記では、「ｍＡｂ１」と称する）を含む。
本実施例で使用される抗ＰＤ－１抗体は、Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ（ＵＳ２０１５０２０３５７９において開示されている；ＲＥＧＮ２８１０としてもまた公知である）である。ＲＥＧＮ２８１０（抗ｈＰＤ－１）は、高アフィニティーで、ヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２との相互作用を遮断する。
研究の目的
研究の主要目的は、以下の通りである。
用量漸増フェーズにおいて：リンパ腫を含む、進行性悪性疾患を有する患者における、単剤療法としてのｍＡｂ１およびＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１の、フェーズ２のための用量を決定するために、安全性および薬物動態（ＰＫ）について評価すること。エンドポイントは、用量制限毒性（ＤＬＴ）率、有害事象（ＡＥ）（免疫関連ＡＥを含む）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、死、および検査室異常（有害事象共通用語規準（Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ）［ＣＴＣＡＥ］にしたがってグレード３またはこれを超える）、ならびに薬物動態を含む。
用量拡大フェーズにおいて：ＯＲＲにより測定される、単独およびＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１の予備的な抗腫瘍活性について評価する（コホートごとに個別に）こと。エンドポイントは、充実性腫瘍における応答評価基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）１．１に基づく全奏効率（ＯＲＲ）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒら、２００９年、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ、４５巻：２２８～２４７頁）（充実性腫瘍）、およびルガノ基準（Ｃｈｅｓｏｎら、２０１４年、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．、３２巻：３０５９～３０６８頁）（リンパ腫）を含む。
副次的目的は、（ａ）充実性腫瘍における免疫関連応答評価基準（ｉｍｍｕｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）に基づくＯＲＲ（Ｗｏｌｃｈｏｋら、２００９年、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１５巻：７４１２～７４２０頁；Ｎｉｓｈｉｎｏら、２０１３年、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９巻：３９３６～３９４３頁）、最良全奏効（ｂｅｓｔ ｏｖｅｒａｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＢＯＲ）、応答持続期間（ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＤＯＲ）、病勢コントロール率（ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒａｔｅ）、ならびにＲＥＣＩＳＴ、ｉｒＲＥＣＩＳＴ、およびルガノ基準に基づくＰＦＳ（Ｃｈｅｓｏｎら、２０１４年、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．、３２巻：３０５９～３０６８頁）により測定される、単独およびＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１の予備的な抗腫瘍活性について評価する（コホートごとに個別に）こと；（ｂ）用量漸増フェーズで決定した、各拡大コホート内の安全性プロファイルを特徴付けること；（ｃ）単剤療法としてのｍＡｂ１、ならびに組み合わせて施される場合のｍＡｂ１およびＲＥＧＮ２８１０のＰＫを特徴付けること；および（ｄ）ｍＡｂ１およびＲＥＧＮ２８１０に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）により測定される免疫原性について評価することである。
研究の探索的目的は、（ａ）腫瘍容量について評価すること；（ｂ）ベースラインにおいて、処置の間に、および進行時に、単剤療法としてのｍＡｂ１またはＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１で処置された患者から得られた、血清、血漿、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、および腫瘍組織試料（保管腫瘍組織を含む）における、ＲＥＧＮ２８１０の薬力学効果を探索すること；および（ｃ）（ｉ）循環腫瘍核酸；（ｉｉ）ＰＢＭＣサブセットの分布ならびに目的の免疫チェックポイント分子および他のバイオマーカーの発現；（ｉｉｉ）腫瘍ＲＮＡの発現；（ｉｖ）腫瘍浸潤リンパ球（ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋
Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、およびＢ細胞、骨髄由来細胞、ＮＫ細胞など、他の、組織透過性の亜型）の数および分布；（ｖ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ３、および、おそらく、他のチェックポイントモジュレーターの発現レベル（メッセンジャーＲＮＡおよび／またはタンパク質）；（ｖｉ）公知のがん遺伝子および潜在的な腫瘍ネオ抗原における変異；ならびに（ｖｉｉ）腫瘍の変異負荷を含みうるがこれらに限定されない、目的のバイオマーカーについて、予測可能性および臨床応答との相関について評価することである。
研究デザイン
これは、進行性悪性疾患を有する患者において、単剤療法として投与されるｍＡｂ１またはＲＥＧＮ２８１０と組み合わせて投与されるｍＡｂ１の、安全性、耐容性、活性、およびＰＫについてのフェーズ１、ファースト・イン・ヒューマン（ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ）（ＦＩＨ）、オープンラベル、多施設の用量漸増研究である。単剤療法としてのｍＡｂ１および３．０ｍｇ／ｋｇの用量のＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１の、３つの用量レベル（１．０、３．０、および１０ｍｇ／ｋｇ）を調べる。
最長で２８日間にわたるスクリーニング期間の後、患者に、２１日間ずつの処置サイクルを、最大で１７サイクルにわたり（最大で、のべ５１週間にわたる処置）施し、その後に２４週間にわたる追跡期間を設けた。各患者には、２１日ごとに、ｍＡｂ１（±ＲＥＧＮ２８１０）を施す。
処置は、５１週間にわたる処置期間が完了するか、または疾患の進行、許容されない毒性、同意の取下げが生じるまで、もしくは研究の中止基準が満たされるまで継続される。応答評価は、研究薬の投与の遅延に関わらず、最初の２４週間は６週間ごとであり、次いで、その後の２７週間は９週間ごとである。最短で２４週間にわたる処置（最小で８処置サイクル）の後、完全寛解（ＣＲ）が確認された患者は、処置を中断し、全ての関与性の研究評価を継続するように選び出すことができる。同様に、医師による診察の後、最短で２４週間にわたり処置された患者であって、安定病態（ＳＤ）または部分奏効（ＰＲ）が３回連続の腫瘍評価にわたり維持されている患者も、処置は中断するが、全ての関与性の研究評価を継続するように選び出すことができる。奏効を経ているが、その後、進行している患者には、進行時において、腫瘍生検が要求される。４用量のｍＡｂ１単剤療法に耐容性を示し、少なくともＳＤの初回腫瘍評価を有するが、その後、進行性疾患（ＰＤ）を実証している患者は、リンパ球活性化遺伝子２（ＬＡＧ－３）の遮断とプログラム細胞死１（ＰＤ－１）の遮断との組み合わせによる応答「をレスキューし」ようとする試みにおいて、３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０を、その時点まで安全に投与されている、最高用量（既知の場合）のｍＡｂ１に追加する選択肢を有する。安全性の評価は、各研究薬を投与する来院時に行う。
用量漸増
３つの、用量漸増による、単剤療法コホートおよび組み合わせ療法コホートを登録するように計画する（３ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０を伴うかまたは伴わない、１．０、３．０、および１０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１）。登録される第１のコホートには、ｍＡｂ１単剤療法を、１．０ｍｇ／ｋｇで施す。その後における、さらなる各コホートの登録は、先行するコホート内で観察される用量制限毒性（ＤＬＴ）の数により制限されうる。必要な場合は、用量漸減コホート（３ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０を伴うかまたは伴わない、０．３ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１）を登録する。
用量漸増の規則
ｍＡｂ１単剤療法コホートおよびｍＡｂ１＋ＲＥＧＮ２８１０コホートの両方で、全ての用量レベルについて評価するために、従来の３＋３デザインの改変形（「４＋３」）を使用する。各用量レベルにおいて、最小で３例の患者は、ＤＬＴについて評価可能であることが要求されるが、患者が、ＤＬＴについて評価可能となる前に中止する場合、患者の安全性を維持しながら、フェーズ１における用量漸増の効率を最大化するには、各用量レベルにおいて、４例の患者を登録する。ＤＬＴの評価期間は、２８日間である。用量レベルの耐容性は、全ての潜在的なＤＬＴ評価可能患者が、２８日間のＤＬＴ期間を、ＤＬＴを伴わずに（３例中０例、または４例中０例）完了した場合に限り達成される。３例の患者が、ＤＬＴを経ずにＤＬＴ期間を完了したが、４例目の患者が、ＤＬＴ評価期間内にある場合、用量レベルの耐容性は、４例目の患者が、ＤＬＴ評価期間を完了するか、またはＤＬＴについて評価可能となる前に治療を中断した場合に限り達成される。ＤＬＴ評価可能患者３または４例のうち、１例にＤＬＴが見られる場合は、合計７例の患者となるように、４または３例のさらなる患者（それぞれ）を登録する。同様に、６例中１例または７例中１例のＤＬＴも、耐容性を示し得ると考えられる。評価可能患者２～７例中２例のＤＬＴは、最大耐量（ＭＴＤ）を超えているであろう。耐容性を示した最高用量レベルで、安全性についてさらに評価するために、ＤＬＴ評価可能患者がのべ６～１０例となるように、さらなる患者３～４例を登録する。６～８例中０～１例、または９～１０例中２例のＤＬＴは、許容可能であると考えられるであろう。安全性についてさらに評価するために、後援者の裁量（研究者による診察）により、さらなる患者３例を、任意の用量レベルで登録することができる。
１．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（用量レベル１；ＤＬ１）が安全（患者３～７例の後で）であるとみなされる場合、登録は、３．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（ＤＬ２）で開始されるであろう。ＤＬ２における患者４例の登録後、第１の組み合わせコホート（１．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１＋３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０；ＤＬ３）における登録を始めることができる。３．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（ＤＬ２）が安全であるとみなされたら、１０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１（ＤＬ４）への用量漸増を開始することができる。第２の組み合わせコホート（３．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１＋３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０；ＤＬ５）は、ＤＬ２およびＤＬ３の両方が安全であるとみなされた後に限り登録される。第３の組み合わせコホート（１０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１＋３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０；ＤＬ６）は、ＤＬ４およびＤＬ５の両方が安全であるとみなされた後に限り登録される。複数のコホートを同時に開く場合は、番号の小さなコホート（すなわち、ＤＬ３よりもＤＬ２またはＤＬ４よりもＤＬ３）を優先する。
用量制限毒性
用量漸増または新たな組み合わせ療法を開始するために、安全性を決定するためのＤＬＴ観察期間を、サイクル１、１日目から始まる２８日間であって、研究薬（必要に応じて、ＲＥＧＮ２８１０を伴うかまたは伴わないｍＡｂ１）の最初の２用量の安全性および耐容性をモニタリングすることを意図する２８日間と規定する。ＤＬＴについて評価可能であるには、患者は、ＤＬＴ期間を完了する前に、研究薬の、少なくとも最初の２用量（すなわち、１日目および２２日目）を施され、初回の投与の後、少なくとも２８日間にわたりモニタリングされ、２回目の投与から、またはＤＬＴ（下記で規定する）を経てから、少なくとも７日間にわたりモニタリングされなければならない。研究薬の２回目の用量の、３５日目を越えた投与における遅延、および／または研究薬の中断は、研究薬関連であるならば、ＤＬＴと考えられる。したがって、その２回目の用量が遅延した患者、およびＡＥを経た患者では、ＤＬＴ観察期間の持続期間が長くなり、事象がＤＬＴであったのかどうかを決定するためには、持続期間も評価しなければならない。
用量＃２を、ウィンドウ（ｗｉｎｄｏｗ）内で投与できない（研究薬の毒性に起因して）ことに加えて、ＤＬＴは一般に、研究薬に関連する以下の毒性のうちのいずれかとしても規定される。
非血液学的毒性：
・グレード≧２のブドウ膜炎
・グレード≧３の任意の非血液学的毒性（アミラーゼまたはリパーゼ無症状性の上昇など、臨床的に重要でない検査室異常を除く）
血液学的毒性：
・＞７日間にわたり持続する、グレード４の好中球減少症
・グレード４の血小板減少症
・出血を伴う、グレード３の血小板減少症
・グレード≧３の発熱性好中球減少症、または感染症の記録を伴う、グレード≧３の好中球減少症
ＤＬＴの定義を満たすｉｒＡＥおよび非ｉｒＡＥのいずれも、ＤＬＴであると考えられる。
最大耐量
ＭＴＤとは、評価可能患者６～７例中２例またはこれを超えるＤＬＴに起因して、投与を停止させるレベルのすぐ下の用量レベルと規定され、単剤療法および組み合わせ療法について個別に決定される。しかし、ＲＥＧＮ２８１０および他のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体による単剤療法に起因して、ＡＥの既知の発生のために、組み合わせコホートについて、ＭＴＤを決定し、用量レベルにおける、さらなる患者の追加を決定するときに、組み合わせ毒性の強度、頻度、および新規性を考慮することができる。ＤＬＴのために用量漸増を停止させない場合、ＭＴＤは、決定されていないと考えられる。最高用量レベルに耐容性を示すとみなされた単剤療法コホートおよび組み合わせコホートの各々には、さらに３例の患者を登録する（すなわち、これらのコホートの各々における患者は６～１０例となる）。ｍＡｂ１の単剤療法またはＲＥＧＮ２８１０との組み合わせ療法のための用量漸増を、ＤＬＴのために、１．０ｍｇ／ｋｇで停止させる場合、コホートを、０．３ｍｇ／ｋｇの用量で登録する。ｍＡｂ１の単剤療法または組み合わせ療法のための用量漸増を、ＤＬＴのために、３．０または１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで停止させる場合、新たに登録された患者（それぞれ、単剤療法コホートまたは組み合わせ療法コホートにおける）には、ｍＡｂ１の用量を、既に調べた用量レベルへと低減する。いかなる患者も、組み合わせ療法を、単剤療法として耐容性を示すことができなかったｍＡｂ１の用量で開始することを許容されない。
推奨フェーズ２用量
拡大コホートのためのＲＰ２Ｄは、ＭＴＤまたは被験最高用量より高用量ではなく、単剤療法コホートおよび組み合わせ療法コホートで異なりうる。ＲＰ２Ｄの決定は、安全性データおよびＰＫデータに基づく。
単剤療法コホート内の患者であって、４用量のｍＡｂ１に耐容性を示し、少なくともＳＤの初回腫瘍評価を有するが、その後、ＰＤを実証している患者は、ＬＡＧ－３の遮断とＰＤ－１の遮断との組み合わせによる応答「をレスキューし」ようとする試みにおいて、３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０を、その時点まで安全に投与されている、最高用量（既知の場合）のｍＡｂ１に追加する選択肢を有する。
拡大コホート
ｍＡｂ１の耐容性を、単独およびＲＥＧＮ２８１０との組み合わせで確立したら、えり抜きの適応［非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、明細胞腎臓がん（ｃｃＲＣＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）、黒色腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）］において、単剤療法または組み合わせ療法を使用する複数の拡大コホートを登録し、安全性についてさらに評価し、ＬＡＧ３を発現または過剰発現することが公知であり；単独であるかまたはＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１の抗腫瘍活性が生じうる腫瘍における抗腫瘍活性についての予備的な証拠を得る。拡大コホートへの登録は、用量漸増が完了した後で始める。ＲＰ２Ｄを確認した後で、サイモン（Ｓｉｍｏｎ、１９８９年、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ、１０巻：１～１０頁）による２段階のデザインを活用する、さらなる、１０の拡大コホート（表１９）を登録する。患者を、患者の腫瘍型、既往の抗ＰＤ－１／抗プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）療法の存在または非存在、治療レジメンの、その患者への適切性についての研究者の評価、割りつけられた処置コホートにおける患者枠の利用可能性に基づき、具体的な処置コホートへと割りつける。サイモンによる２段階のデザインの第１段階で、個々の拡大コホートにおいて、安全性問題が発生した場合は、登録を中止することができる。研究者と、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ社との議論の後、同用量または低用量のｍＡｂ１で、登録を再開することができる。中止を惹起する安全性問題は、早期の安全性事象を含む場合もあり、後期の安全性事象を含む場合もあろう。患者を、ｍＡｂ１（用量漸増所見により決定された用量）の単剤療法またはｍＡｂ１と３ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０との組み合わせで、Ｑ３Ｗで、最大で５１週間にわたり処置する。各拡大コホートのための第２段階の登録は、第１段階で、最小数の腫瘍応答が観察された場合に限り行う。
Figure 0007170691000021
研究集団
用量漸増フェーズにおける研究集団：進行性悪性疾患を有する患者であって、抗ＬＡＧ３薬および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤による既往の治療を施されておらず、かつ、標準治療の候補者ではないか、または臨床有益性をもたらすことが予測される実施可能な治療が存在しない患者、および治癒不能であり、標準治療（ｓｔａｎｄａｒｄ ｔｈｅｒａｐｙ）にも拘わらす、応答しなかったか、または腫瘍の進行を示した悪性疾患を伴う患者。
用量拡大コホートにおける研究集団：えり抜きの悪性疾患を伴う患者であって、抗ＬＡＧ３薬による既往の治療を施されておらず、
・過去に、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１による治療を施されていないが、抗ＰＤ－１ベースの治療を施すのに適切な候補者である患者（コホート１、３、５、６、および９）；
または
・過去に、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの治療を施され、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法時の、少なくとも３カ月間にわたり、客観的応答（ＣＲまたはＰＲ）もしくはＳＤを確認したが、その後、その治療時に進行した患者、または最良の応答として、ＳＤもしくはＰＲを示し、その後、６カ月間にわたり安定的応答を示した患者（コホート２、４、７、および１０）；
または
・標準治療の候補者ではないか、または臨床有益性をもたらすことが予測される実施可能な治療が存在せず、かつ、ｍＡｂ１単剤療法に適切な患者（コホート８）。
組入れ基準：患者は、研究への組入れに適格であるためには、以下の基準：
１．≧１８歳の男女であること；
２．用量漸増コホート：腫瘍の進行が実証された悪性疾患（リンパ腫を含む）についての、組織学的または細胞学的に確認された診断を伴う患者であって、標準治療（ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ ｃａｒｅ）による、代替的な治療的選択肢が存在しないか、または治癒の潜在的可能性を伴う、代替的な標準治療（ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ ｃａｒｅ）が存在せず（すなわち、標準治療（ｓｔａｎｄａｒｄ ｔｈｅｒａｐｙ）にも拘わらす、腫瘍進行に応答できなかったか、またはこれを発症し）、かつ、過去に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤で処置されていない患者。これらの患者は、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準またはルガノ基準に従う、測定可能な疾患を要求しない。
３．用量拡大コホート：ＲＥＣＩＳＴ １．１基準またはルガノ基準に従う、測定可能な疾患を伴う以下の腫瘍のうちの１つについての、組織学的または細胞学的に確認された診断を伴う患者であって、以下の基準を満たす患者。
ｉ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、病期ＩＩＩＢまたはＩＶのＮＳＣＬＣを患う患者であって、転移性疾患のための既往の治療を伴わないか、または１つの白金含有レジメンの後で、疾患の進行／再発を伴う患者（コホート１）；
ｉｉ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た＊、病期ＩＩＩＢまたはＩＶのＮＳＣＬＣを患う患者であって、転移性疾患のための、２つを超えない既往の治療を伴う患者（コホート２）；
ｉｉｉ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、明細胞の構成要素を伴う、進行ｃｃＲＣＣまたは転移性ｃｃＲＣＣを患う患者であって、抗血管新生治療の、１つ～２つの既往のレジメンを施された患者（コホート３）；
ｉｖ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た＊、明細胞の構成要素を伴う、進行ｃｃＲＣＣまたは転移性ｃｃＲＣＣを患う患者であって、抗血管新生治療の、１つ～２つの既往のレジメンを施された患者（コホート４）；
ｖ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、転移性ＴＮＢＣ（エストロゲン、プロゲステロン、およびヒト表皮増殖因子受容体２陰性である）を患う患者であって、５つまたはこれより少ない、既往の一連の治療を施された患者（コホート５）；
ｖｉ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、進行黒色腫または転移性黒色腫を患う患者であって、転移性疾患のための、２つを超えない既往のレジメンを施された患者（コホート６）；
ｖｉｉ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た＊、進行黒色腫または転移性黒色腫を患う患者であって、転移性疾患のための、２つを超えない既往のレジメンを施された患者（コホート７）；
ｖｉｉｉ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経ていない、再発性／不応性のＤＬＢＣＬを患う患者であって、自家幹細胞移植の後で進行しているか、またはその候補者ではない患者（コホート８および９）
ｉｘ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た＊、再発性／不応性のＤＬＢＣＬを患う患者であって、自家幹細胞移植の後で進行しているか、またはその候補者ではない患者（コホート１０）；
注：＊抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経たとは、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に耐容性を示したか、または耐容性を示しつつあり（すなわち、毒性のために中断せず）、
ａ．イメージングの反復により確認されるＣＲ／ＰＲ、または疾患進行の前における、初回用量から、少なくとも１２週間にわたるＳＤ。疾患進行は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１による治療中であるか、または最終回の用量から１２週間以内に起こったものでなければならない。
ｂ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法中における、その後６カ月間にわたる安定的な応答（ベースラインから、７０％を超えない低下）を伴う、最良の応答としてのＳＤまたはＰＲのいずれかにより病勢コントロールを示していることと規定される。
４．Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔａｔｕｓが０または１であること；
５．平均余命が少なくとも３カ月間であること；
６．以下の通りの、十分な臓器機能および骨髄機能：（ａ）ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ；（ｂ）１Ｌ当たりの絶対好中球カウント≧１．５×１０９個；（ｃ）１Ｌ当たりの血小板カウント≧７５×１０９個；（ｄ）血清クレアチニン≦１．５×正常上限（ＵＬＮ）または１．７３ｍ２当たり１分間当たりの推定糸球体濾過率＞５０ｍＬ；（ｅ）総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ；（ｆ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦３×ＵＬＮ、または肝転移の場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦５×ＵＬＮ；および／または（ｇ）アルカリホスファターゼ≦２．５×ＵＬＮ（または肝転移または骨転移の場合、アルカリホスファターゼ≦５．０×ＵＬＮ）；
７．診療所への来院および研究に関連する手順を遵守する意思があり、そうすることが可能であること；
８．署名したインフォームドコンセントを提出すること
を満たさなければならない。
除外基準：以下の基準：１．別の研究で、現在処置を施されているか、または研究治療の初回用量から４週間以内に、治験薬についての研究に参加し、処置を施されたか、もしくは治験デバイスを使用したか、または研究治療の初回用量から３週間以内に、承認されている全身療法による処置を施されたか、または研究治療の初回用量から５半減期以内に、任意の既往の全身療法を施された（いずれかより長期の期間内に施された）こと。拡大コホート２、４、７、１０（抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を経た）に限り、薬物の半減期または承認状態に関わらず、既往の抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法が、研究治療の初回の投与から３週間以内に施されていてはいけない；２．ＬＡＧ－３をターゲティングする、任意の生物学的分子または低分子による既往の処置；３．無作為化の前２週間以内の放射線療法、および放射線に起因する任意のＡＥから、ベースラインへと回復していないこと；４．拡大コホートだけ：進行しているか、または能動的な処置を要求する、別の悪性疾患であって、治癒をもたらす可能性のある治療を受けた非黒色腫性皮膚がん（ｎｏｎ－ｍｅｌａｎｏｍａｔｏｕｓ ｓｋｉｎ ｃａｎｃｅｒ）、もしくは原位置子宮頸癌、または登録前の少なくとも２年間にわたり、効果的に処置され、決定的な局所コントロールを伴うとみなされた、任意の他の腫瘍を除く悪性疾患；５．処置されていないか、または活性の中枢神経系転移。中枢神経系転移を過去に処置された患者も、安定であり（すなわち、研究処置の初回用量の前、少なくとも６週間にわたり、イメージングによる進行の証拠を伴わず、いかなる神経学的症状も、ベースラインに戻っており）、新たな中枢神経系転移の証拠または中枢神経系転移の拡大の証拠がみられず、ＲＥＧＮ２８１０の初回用量の前４週間以内に、中枢神経系転移の管理のために、全身コルチコステロイドを要求しないという条件で参加しうる；６．インフォームドコンセントの前年における、脳炎、髄膜炎、またはコントロール不能の発作；７．ｉｒＡＥの危険性を示唆しうる、全身免疫抑制処置による処置を要求した、著明な自己免疫疾患の、進行中の証拠または近年（５年以内）の証拠。以下：白斑、消散した小児喘息、ホルモン置換法だけを要求した甲状腺機能低下症、全身処置を要求しない１型糖尿病または乾癬は、除外を要さない；８．研究薬の初回用量前１週間以内の、コルチコステロイド治療（１日当たり＞１０ｍｇのプレドニゾンまたは同等物）。短期クールのステロイドを要求する患者は、除外されない；９．間質性肺疾患または活動性の非感染性肺炎の、既知の既往歴または任意の証拠（過去５年間における）；１０．コントロール不能の、ヒト免疫不全ウイルス感染、Ｂ型肝炎の感染、もしくはＣ型肝炎の感染；または免疫不全症の診断；１１．全身療法を要求する、活動性の感染；１２．研究投薬の開始予定の３０日以内における、生ワクチンの施与；１３．スクリーニングの前４週間以内における、大手術、直視下生検、または著明な外傷損傷；１４．研究治療の初回用量の前９カ月以内の心筋梗塞；１５．既往の同種幹細胞移植；１６．研究者の見解では、研究への参加を、患者の最良の利益としない、任意の医学的状態；１７．抗体処置に帰せられる、アレルギー性過敏性反応または急性過敏性反応の記録；１８．ドキシサイクリンまたは他のテトラサイクリン抗生物質に対する既知のアレルギー；１９．研究の要件に適う参加を妨げる、公知の精神科障害または物質乱用障害；２０．研究中に避妊を行うことを望まない、性的に活動的な男性または出産の潜在的可能性がある女性。研究の計画された期間（スクリーニング来院～研究薬の最終用量の１８０日後）内に、妊娠しているか、授乳しているか、もしくは妊娠が予想される女性、または子供の父親となる予定の男性；２１．初回の処置の開始前、研究の間、および研究薬の最終用量を投与した後、少なくとも６カ月間にわたり、適切な避妊を行うことを望まない、性的に活動的な男性または出産の潜在的可能性がある女性であることのうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外されるであろう。
研究処置
単剤療法：ｍＡｂ１を、外来患者の状況において、以下の単剤療法用量：
・ＤＬ１：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、１．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１のＩＶ注入
・ＤＬ２：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、３．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１のＩＶ注入
・ＤＬ４：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、１０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１のＩＶ注入
・ＤＬ－１ｍ：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、０．３ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１のＩＶ注入（必要な場合）
で、最大５１週間まで、２１日ごとに３０分間にわたるｍＡｂ１の静脈内（ＩＶ）注入により投与する。
組み合わせ療法：組み合わせ療法のための、研究薬投与の順序は、最初にｍＡｂ１、その後に同日のＲＥＧＮ２８１０である。研究薬を、外来患者の状況において、最大５１週間まで、２１日ごとに各々３０分間にわたるＩＶ注入により投与する。割りつけが予定される組み合わせレジメンは、
・ＤＬ３：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、１．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１、および３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０のＩＶ注入
・ＤＬ５：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、３．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１、および３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０のＩＶ注入
・ＤＬ６：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、１０．０ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１、および３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０のＩＶ注入
・ＤＬ－１ｃ：５１週間にわたり、２１日ごとに３０分間にわたる、０．３ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１、および３．０ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０のＩＶ注入（必要な場合）
を含む。
研究エンドポイント
主要エンドポイント
用量漸増フェーズにおける主要エンドポイント：ＤＬＴ率、有害事象（ＡＥ；免疫関連ＡＥを含む）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、死、および検査室異常（有害事象共通用語規準［ＣＴＣＡＥ］にしたがってグレード３またはこれを超える）、ならびにＰＫ
用量拡大フェーズにおける主要エンドポイント：ＲＥＣＩＳＴ １．１（充実性腫瘍）およびルガノ基準（リンパ腫）に基づく客観的奏効率（ＯＲＲ）
副次的エンドポイント
充実性腫瘍における免疫関連応答評価基準（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）に基づくＯＲＲ；ＲＥＣＩＳＴ、ｉｒＲＥＣＩＳＴ、およびルガノ基準に基づく、最良全奏効（ＢＯＲ）、応答持続期間（ＤＯＲ）、病勢コントロール率、および無増悪生存（ＰＦＳ）；ＡＥ（免疫関連ＡＥを含む）、ＳＡＥ、死、および検査室異常（ＣＴＣＡＥにしたがってグレード３またはこれを超える）；ＰＫおよびＡＤＡ
手順および評価
ｍＡｂ１単独またはＲＥＧＮ２８１０と組み合わせたｍＡｂ１の安全性および耐容性を、ＡＥについての臨床評価、ならびにバイタルサイン（体温、血圧、脈、および呼吸）、身体検査（完全検査および限定検査）、１２リード式心電図（ＥＣＧ）、および標準的な血液学、化学、および尿検査を含む検査室評価を含む臨床評価の測定の繰り返しによりモニタリングする。
血清試料中およびＡＤＡ（抗ｍＡｂ１または抗ＲＥＧＮ２８１０）試料中の、機能的なｍＡｂ１および機能的なＲＥＧＮ２８１０を決定するための血液試料を回収する。血清試料および血漿試料を、さらなるバイオマーカーの解析のために回収する。ｍＡｂ１処置およびＲＥＧＮ２８１０処置への曝露、臨床活性、または基礎疾患に関する、推定薬力学バイオマーカー、予測バイオマーカー、および予後診断バイオマーカーを、血清中、血漿中、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中、および腫瘍組織中で調べる。抗腫瘍活性について、ＣＴおよびＭＲＩにより評価する。ゲノムＤＮＡ試料を、任意選択の薬理遺伝学的副次研究に同意した患者から回収する。
結果
研究では、ｍＡｂ１の投与は、安全であり、進行性悪性疾患を有する患者により、十分に耐容性を示すことが予測される。３ｍｇ／ｋｇのＲＥＧＮ２８１０との組み合わせは、非小細胞肺がん、黒色腫、明細胞腎臓がん、Ｂ細胞リンパ腫、または乳がんなどの充実性腫瘍を伴う患者におけるＯＲＲにより評価される通り、腫瘍退縮をもたらすことが予測される。
本発明の範囲は、本明細書で記載される具体的実施形態により限定されない。実際、本発明前出の記載および添付の図面から、当業者には、本明細書で記載される改変に加えて、多様な改変が明らかとなるであろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に収まることが意図される。

Claims (27)

  1. 腫瘍または腫瘍細胞の増殖の阻害を必要とする被験体における腫瘍または腫瘍細胞の増殖を阻害するための医薬組成物であって、該組成物が、治療有効量の、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）タンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片を含み、該抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２０のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１）、配列番号４２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み、該抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号４２６に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む、医薬組成物。
  2. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、
    （ｉ）配列番号４１８のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号４１８に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
    （ｉｉｉ）５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列
    を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （ｉ）配列番号４２６のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号４２６に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
    （ｉｉｉ）５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列
    を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と
    を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物。
  4. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号５７７のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖および軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号５７８のアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号５７７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号５７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記腫瘍が、原発性腫瘍または再発性腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
  9. 前記腫瘍が、確立された腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
  10. 前記腫瘍が、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、および黒色腫からなる群より選択される疾患または障害を伴う被験体に存在する、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 前記医薬組成物が、初期用量、その後に１回または複数回の二次用量として投与され、各回の二次用量が、直前の用量の１～４週間後に投与されることを特徴とする、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 前記抗体または抗原結合性断片が、前記被験体の体重１ｋｇ当たり１、３、または１０ｍｇの用量で投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
  13. 前記医薬組成物が、第２の治療剤と組み合わせて前記被験体へと投与されることを特徴とする、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
  14. 前記第２の治療剤が、ＣＴＬＡ４阻害剤、腫瘍特異抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二特異性抗体、抗酸化剤などの栄養補助食品、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、および前記疾患または前記障害と関連する少なくとも１つの症状を好転させるのに有用な、任意の他の治療からなる群より選択される、請求項１０に従属する場合の請求項１３に記載の組成物。
  15. 前記第２の治療剤が、ＰＤ－１阻害剤である、請求項１３に記載の組成物。
  16. 前記ＰＤ－１阻害剤が、ＲＥＧＮ２８１０、ニボルマブ、またはペンブロリズマブである、請求項１５に記載の組成物。
  17. 前記ＰＤ－１阻害剤が、前記被験体の体重１ｋｇ当たり１、３、または１０ｍｇの用量で投与されることを特徴とする、請求項１５または１６に記載の組成物。
  18. 前記医薬組成物が、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋内、または頭蓋内投与されることを特徴とする、請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物。
  19. 疾患または障害の処置を必要とする被験体におけるＬＡＧ３をアンタゴナイズすることにより処置可能な疾患または障害を処置するための組成物であって、該組成物が、治療有効量の抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合断片を含み、該抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４２０のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１）、配列番号４２２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号４２４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号４２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み、該抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号４２６に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む、組成物。
  20. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、
    （ｉ）配列番号４１８のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号４１８に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
    （ｉｉｉ）５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４１８のアミノ酸配列
    を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
    （ｉ）配列番号４２６のアミノ酸配列、
    （ｉｉ）配列番号４２６に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列；または
    （ｉｉｉ）５カ所を超えないアミノ酸置換を有する、配列番号４２６のアミノ酸配列
    を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と
    を含む、請求項１９に記載の組成物。
  21. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項１９または２０のいずれか一項に記載の組成物。
  22. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の組成物。
  23. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号５７７のアミノ酸配列を含む、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の組成物。
  24. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖および軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号５７８のアミノ酸配列を含む、請求項１９～２３のいずれか一項に記載の組成物。
  25. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号５７７のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号５７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１９～２４のいずれか一項に記載の組成物。
  26. 前記疾患または前記障害が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）からなる群より選択されるウイルスにより引き起こされる慢性ウイルス感染である、請求項１９に記載の組成物。
  27. 前記疾患または前記障害が、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頚部扁平上皮がん、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、および黒色腫からなる群より選択される、請求項１９に記載の組成物。
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