JP5565913B2 - 三環性ピラゾロピリミジン誘導体 - Google Patents

Description

本発明は、熱ショック蛋白質９０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ９０、ＨＳＰ９０）の作用を阻害する三環性ピラゾロピリミジン骨格を有する化合物に関する。

ＨＳＰ９０は、細胞内の主要なシャペロン蛋白質である。シャペロン蛋白質とは、種々の蛋白質に結合し、結合した蛋白質のフォールディング（ｆｏｌｄｉｎｇ）を補助する蛋白質である。フォールディングにＨＳＰ９０を必要とする蛋白質群は、総称してＨＳＰ９０クライアント蛋白質（ＨＳＰ９０ ｃｌｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）と呼ばれている。

ＨＳＰ９０によるクライアント蛋白質のフォールディング機構には、ＨＳＰ９０以外にも、コシャペロン（ｃｏｃｈａｐｅｒｏｎｅ）、パートナー蛋白質（ｐａｒｔｎｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）およびイムノフィリン（Ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ）等の複数の蛋白質が関与し、これらが協働してＨＳＰ９０クライアント蛋白質のフォールディングを補助すると考えられている（非特許文献１）が、その詳細は未だ十分に解明されていない。

ＨＳＰ９０クライアント蛋白質は、ＨＳＰ９０やコシャペロン等と複合体を形成し、その後コンフォメーション変化を起こし、成熟型になると考えられており、ＨＳＰ９０等によって正常にフォールディングされなかった場合は、ユビキチン化されプロテアソームにより分解されると考えられている（非特許文献１〜非特許文献４）。

近年、ＨＳＰ９０阻害剤は、種々の疾患（例えば、癌、アルツハイマー病等の神経変性疾患、心血管疾患、感染症、自己免疫疾患またはアポトーシスによる細胞傷害が関連する疾患等）の治療剤の候補として期待されている（非特許文献２）。

特に、抗癌剤分子標的を含む癌関連蛋白質の多くがＨＳＰ９０クライアント蛋白質であるので、ＨＳＰ９０阻害剤は、抗癌剤の候補として期待されている。例えば、Ｈｅｒ２、Ｒａｆ、Ａｋｔ、テロメラーゼなど癌の発生や亢進に関与する複数の蛋白質が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質として知られている（非特許文献１）。これらの癌関連蛋白質は、ＨＳＰ９０をシャペロン蛋白質として利用することにより、それぞれ、未成熟型から成熟型の蛋白質となり、細胞の癌化に作用するようになると考えられている。ＨＳＰ９０は、癌細胞のみでなく正常細胞にも存在する蛋白質であるが、正常細胞の場合と比較して、癌細胞において、クライアント蛋白質との親和性が高く、そのシャペロン活性に必要なＡＴＰａｓｅ活性も活性化されていることが報告されている（非特許文献１〜３）。従って、ＨＳＰ９０阻害剤は、癌細胞特異的に、複数の癌関連蛋白質を同時に不活化することができると考えられ、強力かつ広範囲な抗腫瘍スペクトルを有する抗癌剤の候補として期待されている。

ＨＳＰ９０阻害剤として、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、ハービマイシン（ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ）、１７−アリルアミノゲルダナマイシン（１７−ａｌｌｙｌａｍｉｎｏｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ、１７−ＡＡＧ）等が旧来より知られている（非特許文献１〜非特許文献４）。これらの化合物は、ＨＳＰ９０のＮ末端側にあるＡＴＰ結合ポケットに結合し、ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合を阻害することによってＨＳＰ９０のシャペロン蛋白質としての機能を阻害する。また、上記以外にもＨＳＰ９０を阻害する化合物として、種々の化合物が報告されており（特許文献１、特許文献２、特許文献３、非特許文献５および非特許文献６）、三環性ピラゾロピリミジン誘導体の報告もなされている（特許文献４）。

また、三環性ピラゾロピリミジン誘導体、および、同様に３つの複素環で構成された縮合環構造を有する化合物については、抗癌関連等の用途に関して複数の報告がなされている（特許文献５〜９、非特許文献７および非特許文献８）。

国際公開第２００５／２８４３４号パンフレット 国際公開第２００８／０４９１０５号パンフレット 国際公開第２００８／０９３０７５号パンフレット 国際公開第２００８／０３５６２９号パンフレット 国際公開第２００４／０４７７５５号パンフレット 国際公開第２００６／０１５２６３号パンフレット 国際公開第２００５／０２１５６８号パンフレット 国際公開第１９９８／０４３９９１号パンフレット 国際公開第２００８／１００４４７号パンフレット

Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００６）Ｖｏｌ．２６、Ｎｏ．３、３１０−３３８ ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００４）Ｖｏｌ．１０、Ｎｏ．６、２８３−２９０ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００５）１４６、７６９−７８０ ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２００６）Ｍａｒ、３１（３）、１６４−１７２ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００５）Ｖｏｌ．４８、Ｎｏ．１３、４２１２−４２１５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００６）Ｖｏｌ．４９、Ｎｏ．１、３８１−３９０ Ｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３）Ｖｏｌ．１、Ｎｏ．２３、４１６６−４１７２ Ｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００６）Ｖｏｌ．４、Ｎｏ．９、１７２３−１７２９

ＨＳＰ９０阻害剤は、医薬、特に、抗癌剤としての利用が期待されているものの、実際に医薬として使用されるに到った化合物は未だない。

本発明者らは、鋭意検討を行った結果、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性を阻害し、抗腫瘍活性を有する新規化合物として、下記一般式（１）で表される化合物を見出し、本発明を完成させた。さらに、本発明者らは、本発明の化合物について、ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍試験、安全性試験、代謝安定性試験、代謝酵素に対する阻害試験等を実施し、本発明の化合物は医薬に求めらる種々の資質を具備していることを見出した。

すなわち、本発明は、
[１]一般式（１）

［式（１）中、
Ｒ^１は、１〜３個のハロゲン原子を置換基として有していてもよいＣ_１〜Ｃ_６アルキル基または水素原子を示し、
Ｒ^２は、ハロゲン原子を示し、
Ｒ^３は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシ基を示し、
Ｒ^４は、１〜３個のハロゲン原子を置換基として有していてもよいＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、シアノ基、ハロゲン原子または水素原子を示し、
Ｘは、単結合またはメチレン基を示す。］
で表される化合物またはその塩。
[２]２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド。
[３]２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド。
[４]２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−ｙｌ｝アセタミド。
[５]２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド。
[６]４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−カルボキサミド。
[７][２]から[６]のいずれか1に記載の化合物の臭化水素酸塩。
[８] [２]から[６]のいずれか1に記載の化合物の塩酸塩。
[９] [２]から[６]のいずれか1に記載の化合物のメタンスルホン酸塩。
[１０] [２]から[６]のいずれか1に記載の化合物のエタン−１，２−ジスルホン酸塩。
[１１][１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩を含有するＨＳＰ９０阻害剤。
[１２] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩を含有するＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性阻害剤。
[１３] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩を含有するＨＳＰ９０とＡＴＰの結合阻害剤。
[１４] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有する医薬。
[１５] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有する抗癌剤。
[１６] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩、および薬学的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
[１７] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩を投与することを特徴とする癌の治療方法。
[１８] [１]から[１０]のいずれか１に記載の化合物またはその塩の、医薬製造のための使用。
[１９]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が過剰発現している癌である[１５]に記載の抗癌剤。
[２０]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が過剰発現している癌である[１７]に記載の癌の治療方法。
[２１]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の変異がみられる癌である[１５]に記載の抗癌剤。
[２２]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の変異がみられる癌である[１７]に記載の癌の治療方法。
[２３]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の活性化がみられる癌である[１５]に記載の抗癌剤。
[２４]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の活性化がみられる癌である[１７]に記載の癌の治療方法。
[２５]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が属する細胞内シグナル伝達経路の活性化がみられる癌である[１５]に記載の抗癌剤。
[２６]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が属する細胞内シグナル伝達経路の活性化がみられる癌である[１７]に記載の癌の治療方法。
[２７]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質に依存している癌である[１５]に記載の抗癌剤。
[２８]癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質に依存している癌である[１７]に記載の癌の治療方法。

本発明によって、ＨＳＰ９０阻害活性を有する、上記一般式（１）で表される新規ピラゾロピリミジン誘導体が提供される。本発明の化合物は、抗腫瘍剤として有用である。

本発明において、「熱ショック蛋白質９０」、「ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ９０」または「ＨＳＰ９０」は、特に限定しない限り、ＨＳＰ９０ファミリーのいずれかまたは全てを示す。ＨＳＰ９０ファミリーとしては、例えば、ＨＳＰ９０α、ＨＳＰ９０β、９４ｋＤａ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＲＰ９４）およびＨｓｐ７５／ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ １（ＴＲＡＰ１）が挙げられる。

本発明において、「ＨＳＰ９０阻害剤」とは、ＨＳＰ９０の作用を一部もしくは完全に阻害する化合物または組成物をいい、例えば、ＨＳＰ９０の発現を一部もしくは完全に阻害する化合物または組成物、または、ＨＳＰ９０のシャペロン蛋白質としての機能を一部もしくは完全に阻害する化合物または組成物が挙げられる。

ここで、「ＨＳＰ９０のシャペロン蛋白質としての機能」とは、ＨＳＰ９０がクライアント蛋白質のフォールディングを補助してクライアント蛋白質をその機能する形態に導くこと、または、ＨＳＰ９０がクライアント蛋白質を安定化させる機能等をいう。

従って、ＨＳＰ９０阻害剤として、具体的には、例えば、ＨＳＰ９０の発現を阻害する化合物、ＨＳＰ９０とクライアント蛋白質の結合を阻害する化合物、ＨＳＰ９０とコシャペロンやイムノフィリン類の結合を阻害する化合物、ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合を阻害する化合物、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性を阻害する化合物またはＨＳＰ９０のコンフォメーション変化を阻害する化合物が挙げられる。ＨＳＰ９０阻害剤は、ＨＳＰ９０の作用に起因する疾患の治療剤として使用することができる。

ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質としては、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｍｅｔ、ＫＤＲ、Ｆｌｔ３、ＩＧＦ−１Ｒ、ＰＤＧＦ等の増殖因子受容体キナーゼ、ＰＤＫ１、Ａｋｔ、Ｒａｆ、Ｓ６、Ｃｄｋ４、Ｃｄｋ６、Ｃｈｋ１、ＰＬＫ１、Ｓｒｃ、Ａｕｒｏｒａ Ｂ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ＧＳＫ３β、ＥＲＫ５等の細胞内キナーゼ、ＧＲ、ＥＲα、ＰＲ、ＡＲなどのステロイド受容体、その他として、ＨＩＦ−１、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、Ｔｅｒｔ、Ｂｃｌ−６、ｐ５３等が挙げられる。

本発明において、「ＨＳＰ９０の作用に起因する疾患」としては、例えば、癌、アルツハイマー病等の神経変性疾患、心臓血管疾患、感染症、自己免疫疾患またはアポトーシスによる細胞傷害が関連する疾患等が挙げられる。本発明において、用語「腫瘍」および「癌」は交換可能に使用される。また、本発明において、腫瘍、悪性腫瘍、癌、悪性新生物、癌腫、肉腫等を総称して、「腫瘍」または「癌」と表現する場合がある。

以下に、本発明の一般式（１）中の各置換基について説明する。

Ｒ^１は、１〜３個のハロゲン原子を置換基として有していてもよいＣ_１〜Ｃ_６アルキル基または水素原子を示す。

ここで、「１〜３個のハロゲン原子を置換基として有していてもよいＣ_１〜Ｃ_６アルキル基」とは、無置換であるか、または１〜３個のハロゲン原子を置換基として有している炭素数１〜６の直鎖、分岐鎖または環状のアルキル基を意味する。炭素数１〜６のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチルまたはシクロヘキシルエチル基等が挙げられる。アルキル基に置換するハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられ、置換基の位置はアルキル基上のいずれの炭素原子上であってもよく、複数個の置換基を有する場合、該置換基は同一の炭素上の置換基であっても異なる炭素上の置換基であってもよい。アルキル基に置換するハロゲン原子としては、フッ素原子または臭素原子が好ましく、フッ素原子がより好ましい。

Ｒ^１としては、無置換のＣ_１〜Ｃ_３アルキル基、フッ素原子を置換基として有するＣ_１〜Ｃ_３アルキル基であるかまたは水素原子であることが好ましくメチル基、エチル基、フルオロエチル基、ジフルオロエチル基または水素原子であることがより好ましい。

Ｒ^２は、ハロゲン原子を示す。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。

Ｒ^２としては、フッ素原子、塩素原子または臭素原子が好ましく、塩素原子または臭素原子がより好ましい。

Ｒ^３は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基またはＣ_１〜Ｃ_６アルコキシ基を示す。

ここで、「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基」は、上記Ｒ^２における定義と同義である。「Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ基」とは、上記「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基」をアルキル部分に有するＣ_１〜Ｃ_６アルコキシ基を意味する。

Ｒ^３としては、Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_３アルコキシ基が好ましく、メチル基、エチル基またはメトキシ基がより好ましい。

Ｒ^４は、１〜３個のハロゲン原子を置換基として有していてもよいＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、シアノ基、ハロゲン原子または水素原子を示す。

ここで、「１〜３個のハロゲン原子を置換基として有していてもよいＣ_１〜Ｃ_６アルキル基」は、上記Ｒ^１における定義と同義である。

Ｒ^４としては、Ｃ_１〜Ｃ_３アルキル基、シアノ基、フッ素原子または水素原子が好ましい。

Ｘは、単結合であるか、メチレン基であることが好ましい。

本発明の式（１）で表される化合物には、立体異性体あるいは不斉炭素原子に由来する光学異性体が存在することもあるが、これらの立体異性体、光学異性体およびこれらの混合物のいずれも本発明に含まれる。

本発明の式（１）で表される化合物は、次に記載の群から選ばれるいずれか１の化合物が特に好ましい。

２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド、
２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド、
２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−ｙｌ｝アセタミド、
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド、
４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−カルボキサミド。

本発明の一般式（１）で表される化合物は、所望により医薬的に許容される塩とすることができる。そのような塩としては、例えば塩酸塩、ヨウ化水素酸塩等のハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩等の低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のアリ−ルスルホン酸塩；ギ酸、酢酸、りんご酸、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；およびオルニチン酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等のアミノ酸塩；を挙げることができ、ハロゲン化水素酸塩および有機酸塩が好ましく、臭素酸塩、塩酸塩、メタンスルホン酸塩またはエタン−１，２−ジスルホン酸塩がより好ましい。

本発明の一般式（１）で表される化合物またはその塩は、遊離体、水和物もしくは溶媒和物として存在することもある。空気中の水分を吸収すること等により水和物、含水塩等として存在することもある。溶媒和物としては、医薬的に許容し得るものであれば特に限定されないが、具体的には、水和物、エタノール和物等が好ましい。また、一般式（１）で表される本発明化合物中に窒素原子が存在する場合にはＮ−オキシド体となっていてもよく、これら溶媒和物、水和物、含水塩およびＮ−オキシド体も本発明の範囲に含まれる。

本発明の一般式（１）で表される化合物は、置換基の種類や組み合わせによって、シス体、トランス体等の幾何異性体、互変異性体又はｄ体、ｌ体等の光学異性体等の各種異性体が存在し得るが、本発明の化合物は、特に限定していない場合はそれら全ての異性体、立体異性体及びいずれの比率のこれら異性体及び立体異性体混合物をも包含するものである。

本発明の一般式（１）で表される化合物は、構成する原子の一つまたは複数で非天然の比率の原子同位体を含むこともある。原子同位体としては、例えば、重水素（^２Ｈ)、トリチウム（^３Ｈ)、ヨウ素−１２５、（^１２５Ｉ）または炭素−１４（^１４Ｃ）などが挙げられる。これらの化合物は、治療又は予防剤、研究試薬、例えば、アッセイ試薬、及び診断剤、例えば、インビボ画像診断剤として有用である。一般式（１）で表される化合物のすべての同位体変種は、放射性であるかどうかにかかわらず、本発明の範囲内に含まれる。

また、本発明は、生体内における生理条件下で酵素や胃酸等による反応により本発明の医薬組成物の有効成分である化合物（１）に変換される化合物、すなわち、酵素的に酸化、還元、加水分解等を起こして化合物（１）に変化される化合物又は胃酸等により加水分解等を起こして化合物（１）に変化される「医薬的に許容されるプロドラッグ化合物」も本発明に包含する。

上記プロドラッグとしては、化合物（１）のアミノ基がアシル化、アルキル化、リン酸化された化合物（例えば、そのアミノ基がエイコサノイル化、アラニル化、ペンチルアミノカルボニル化、（５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メトキシカルボニル化、テトラヒドロフラニル化、ピロリジルメチル化、ピバロイルオキシメチル化、ｔｅｒｔ−ブチル化された化合物等である）等を挙げることができる。

本発明の化合物のプロドラッグは公知の方法によって化合物（１）から製造することができる。また、本発明の化合物のプロドラッグは、広川書店１９９０年刊「医薬品の開発」第７巻分子設計１６３頁〜１９８頁に記載されているような、生理的条件で化合物（１）に変化するものも含まれる。

次に、一般式（１）で表される化合物の代表的な製造方法を説明する。なお、各反応は、必要に応じて、適当な保護基を用いてもよいし、通常の有機化学的反応で所望の変換を用いてもよく、保護基の種類および各置換基の変換順序は、特に限定されない。
［主工程１］
一般式（１）中のＸが、メチレン基である化合物の製造方法を説明する。

スキーム 1

［各式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は、上記と同様に定義され、Ｒ^５は、１個または２個の炭素数１〜６個のアルキル基が置換していてもよいメチレン基を示し、Ｒ^６は、置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよい複素環基を示し、Ｒ^７は、保護基を有するアミノ基を示し、ＬＧ¹およびＬＧ^２は脱離基を示す。脱離基ＬＧ¹およびＬＧ^２としては、ハロゲン原子、トルエンスルホニルオキシ基、メタンスルホニルオキシ基およびトリフルオロメタンスルホニルオキシ基等が挙げられる。アミノ基の保護基としては、ベンジルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジル基等が挙げられる。］
アルデヒド誘導体（１）（市販品として入手可）を溶媒中、アリルブロミドとインジウム粉末で処理することにより化合物（２）を得ることができる。アルケン誘導体（２）は、アルデヒド誘導体（１）とアリルマグネシウムブロミド等のグリニャール試薬を用いても得ることができ、溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフランまたはジメチルスルホキシド等が好ましい。反応温度は、−７０℃〜１００℃が好ましく、−２０℃〜５０℃がより好ましい。反応時間は、１時間〜４８時間が好ましい。

アルケン誘導体（２）の１，２−ジオール化反応を行うことにより、トリオール誘導体（３）を得ることができる。アルケンのジオール化反応としては、過マンガン酸カリウムを用いる反応、水銀塩存在下での水の付加（Ｋｕｃｈｅｒｏｖ−Ｄｅｎｉｇｅｓ法）反応、触媒量の四酸化オスミウムと共酸化剤としてアミンオキシドとを用いるオスミウム酸化反応またはヨウ素を用いるジヒドロキシ化反応（Ｐｒｅｖｏａｔ法またはＷｏｏｄｗａｒｄ法）等が挙げられる。これらの反応の溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、塩化メチレン、アセトン、ｔ-ブタノール、水もしくはそれらの混合溶媒等が挙げられる。反応温度は、０℃〜１００℃であればよく、１０℃〜５０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜７２時間が好ましい。

トリオール誘導体（３）はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフランまたはジメチルスルホキシド等の溶媒中、２，２−ジメトキシプロパンと触媒量の酸で処理することにより、あるいはアセトン中、酸触媒で処理することにより、アセタール誘導体（４）に変換することができる。酸触媒としては、ｐ−トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸、塩化亜鉛に代表されるルイス酸等が挙げられる。反応温度は、０℃〜１００℃が好ましく、１０℃〜５０℃がより好ましい。反応時間は、１時間〜４８時間が好ましい。

化合物（４）は、適当な酸化反応条件下で処理することによりケトン誘導体（５）に導くことができる。その場合の酸化反応としては、ジメチルスルホキシド等を活性化する向山酸化、Ｓｗｅｒｎ酸化、その変法として塩化オキザリルに代えてジシクロヘキシルカルボジイミド、トリフルオロ無水酢酸、無水酢酸もしくは三酸化硫黄ピリジン錯体を用いる方法、または、二酸化マンガンを用いる酸化反応が挙げられる。溶媒としては、ジオキサン、テトラヒドロフランまたは塩化メチレン等が挙げられる。反応温度は、−７０℃〜５０℃が好ましい。反応時間は、１時間〜４８時間が好ましい。

ケトン誘導体（５）は、溶媒中、ヒドラジン誘導体（Ｒ^６−Ｒ^５−ＮＨＮＨ_２）（化合物（Ａ））と処理することにより化合物（６）へと変換することができる。化合物（Ａ）は、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９５，１１７，４２２８−４２３９等に記載されている方法により製造することができる。この反応に用いる溶媒としては、アルコール、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ジオキサン等またはこれらの混合溶媒が挙げられる。反応温度は、−２０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜３０℃がより好ましい。化合物（Ａ）に換えてそれらの塩を用いる場合は、塩と当量または過剰量の塩基を用いればよい。塩基としては、トリエチルアミン等が挙げられる。反応時間は、１時間〜４８時間が好ましい。

化合物（６）の６位アミノ基をベンジルオキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等の適当な保護基で保護して化合物（７）に変換した後、アセタール誘導体（７）を硫酸、塩酸、酢酸等の酸で処理することによりジオール誘導体（８）を得ることができる。この反応に用いる溶媒としては、アルコール、水、ジオキサン等またはこれらの混合溶媒が挙げられる反応温度は、-１０℃〜７０℃が好ましく、０℃〜４０℃がより好ましい。反応時間は、１時間〜４８時間が好ましい。

化合物（８）の水酸基を有機化学の通常の知識に基づいて、例えば、塩基存在下に塩化チオニル、臭化チオニル、トルエンスルホニルクロリド、メタンスルホニルクロリドまたはトリフルオロメタンスルホニルクロリド等で処理して、ハロゲン原子、トルエンスルホニルオキシ基、メタンスルホニルオキシ基またはトリフルオロメタンスルホニルオキシ基等の脱離基ＬＧ^１に変換して化合物（９）を得ることができる反応温度は、-７８℃〜３０℃が好ましく、−２０℃〜１０℃がより好ましい。反応時間は、１時間〜４８時間が好ましい。

化合物（９）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中で硫化水素ナトリウムと反応させた後、塩基で処理することにより、化合物（１０）を得ることができる。または、化合物（９）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中でチオ酢酸カリウムと反応させることによっても、化合物（１０）を得ることができる。塩基としては、炭酸カリウムまたは炭酸水素カリウム等が挙げられ、炭酸カリウムが好ましい。反応温度は、−３０℃〜１００℃であればよく、−１０℃〜７０℃が好ましい。

水酸基のオキソ基への変換（化合物（１０）から化合物（１１）への変換）方法としては、向山酸化、Ｓｗｅｒｎ酸化またはその変法として塩化オキザリルに換えてＤＣＣ、トリフルオロ無水酢酸、無水酢酸もしくは三酸化硫黄ピリジン錯体を用いる酸化反応を挙げることができる。それらの方法は日本化学会編第４版実験化学講座２３巻，有機合成Ｖ（丸善株式会社、１９９２年）等に記載されている。

酢酸エステル誘導体（１２）は、所望のＲ^１基を得るためにそれぞれ選択された市販の試薬とケトン誘導体（１１）とのＷｉｔｔｉｇ反応を代表とする増炭素反応により製造ができる。増炭素反応は、公知の反応が好ましく、実験化学講座（第四版、Ｖｏｌ．２２．日本化学会編、丸善株式会社）「有機合成Ｉ：炭化水素・ハロゲン化合物、Ｐ５７〜Ｐ６９」等を挙げることができる。

酢酸アミド誘導体（１３）は、酢酸エステル誘導体（１２）にモノアルキルアミンをアルコール中で直接作用させ導くか、酢酸エステル誘導体（１２）を加水分解して酢酸誘導体とした後、各種アミン（市販品として入手可）との縮合反応により導くことができる。エステル加水分解反応は、公知のアルカリ加水分解が好ましく、参考文献としては、実験化学講座（第四版、Ｖｏｌ．２２．日本化学会編、丸善株式会社）「有機合成ＩＶ：酸・アミノ酸・ペプチド、Ｐ６〜Ｐ１１」等を挙げることができる。アミンとの縮合反応には、ペプチド合成法として一般的に用いられる方法を適用すればよい。ペプチド合成法としては、例えば、アジド法、酸クロリド法、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）法、活性エステル法、カルボニルジイミダゾール法、水溶性カルボジイミドを使用する方法またはジエチルシアノホスフェートを使用する方法等を挙げることができる。これらの方法は、Ｍ．Ｂｏｎｄａｎｓｋｙ，Ｙ．Ｓ．ＫｌａｕｓｎｅｒおよびＭ．Ａ．Ｏｎｄｅｔｔｉ著“Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ａ Ｗｉｌｅｙ−ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７６年）、Ｇ．Ｒ．Ｐｅｔｔｉｔ著“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７６年）または日本化学会編第４版実験化学講座２２巻，有機合成ＩＶ（丸善株式会社、１９９２年）等に記載されている。各種アミンとの縮合反応に用いる溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ピリジン、クロロホルム、塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル等またはこれらの混合溶媒を挙げることができる。反応温度は、−２０℃〜５０℃であればよく、−１０℃〜３０℃が好ましい。

化合物（１３）は、そのＲ^６−Ｒ^５−基が例えば４−メトキシベンジル基などの保護基である場合には、酸処理、酸化処理または加水素分解した後、保護基を有するアミノ基（Ｒ^４）の保護基に適った脱保護反応条件で処理することにより、化合物（１３ａ）へ変換することができる。保護基に適った脱保護反応条件として、代表的な例を以下に述べる。例えば、保護基で置換されたアミノ基がアルカノイルアミノ基またはアロイルアミノ基である場合には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたはアンモニア等の水溶液を用いて加水分解することによりアミノ基とすることができる。保護基で置換されたアミノ基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ基またはジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ基である場合には、塩酸またはトリフルオロ酢酸等の酸で処理することによりアミノ基とすることができる。

化合物（１３ａ）は、溶媒中で塩基の存在下にＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９２，３５，４３８−４５０等に記載されている方法により調製したピリジン誘導体（化合物（Ｂ））と処理することにより、化合物（１４）へ導くことができる。溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフランまたはジメチルスルホキシド等が挙げられる。塩基としては、水素化ナトリウム、ナトリウムエトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、水酸化カリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム等が挙げられる。反応温度は、０℃〜１００℃であればよい。反応時間は、１時間〜４８時間であればよい。

一方、化合物（１３）のＲ^６−Ｒ^５−基が保護基ではなく、目的の置換基である場合、保護基を有するアミノ基（Ｒ^７）を上記の脱保護反応条件で処理することにより、化合物（１４）を得ることができる。

［主工程２］
一般式（１）中のＸが単結合である化合物の製造方法を説明する。

スキーム 2

［各式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７およびＬＧ^２は、それぞれ上記と同様に定義される。］
ケトン誘導体（１１）を無水トリフルオロメタンスルホン酸と塩基存在下で処理することにより、トリフレート体（１５）へ変換できる。溶媒としては、塩化メチレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が好ましく、塩化メチレンがより好ましい。塩基としては、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、ピリジン、トリエチルアミン、ＤＢＵ、ジイソプロピルエチルアミン等が好ましく、トリエチルアミンがより好ましい。反応温度は、−８０℃〜１５０℃が好ましく、−１０℃〜４０℃がより好ましい。

トリフレート体（１５）は、アルコール中で金属触媒及び塩基の存在下、一酸化炭素とのカップリング反応を行うことにより、エステル体（１６）へ変換できる。アルコールとしては、メタノール、エタノールが好ましい。金属触媒としてはパラジウム触媒が好ましく、例えば［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）／ジクロロメタン錯体（１：１）、又はジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）等を挙げることができる。金属触媒の使用量としては、トリフレート体（１５）に対して０．０１〜０．２倍モル当量の範囲が好ましい。塩基としては、例えばリン酸三カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナリウム、炭酸セシウム等の無機塩基類が好ましく、リン酸三カリウム及び炭酸ナリウムがより好ましい。塩基の使用量としては、トリフレート体（１５）に対して１〜１００倍モル当量の範囲が好ましい。添加剤としては、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、トリフェニルホスフィン等の有機リン化合物が挙げられ、添加剤の使用量としては、トリフレート体（１５）に対して０．０５〜０．２モル当量の範囲が好ましい。反応温度としては、−１０℃〜溶媒の沸点の範囲が好ましく、０℃〜１００℃の範囲がより好ましい。反応時間は、通常１〜５０時間程度である。

以後の工程（化合物（１７）から化合物（１８）への変換）は、スキーム１で示した方法（化合物（１３）から化合物（１４）への変換）と同様な処理を行うことにより製造することができる。

本発明の化合物またはその塩は、ＨＳＰ９０を阻害するので、ＨＳＰ９０阻害剤、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性阻害剤、ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合阻害剤として用いることができ、本発明の化合物またはその塩を含有する医薬、特に好ましくは抗癌剤として用いることができる。

ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性は、当業者に通常用いられるＡＴＰａｓｅアッセイを用いて調べることができる。例えば、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性は、下記の試験例１に記載されるように、試験化合物の存在下または非存在下で、組換えＨＳＰ９０蛋白質およびＡＴＰを用いて検出することができる。あるいは、ＡＴＰａｓｅアッセイは、例えば、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２７，１７６−１８３（２００４）あるいはＮａｔｕｒｅ ４２５，４０７−４１０（２００３）に記載されている方法を実施すればよい。

ＨＳＰ９０の発現の阻害は、当業者に通常用いられるノーザンブロッティング、ウェスタンブロッティングまたはＥＬＩＳＡ等を用いて調べることができる。例えば、試験化合物の存在下または非存在下で培養した細胞からｍＲＮＡを回収してノーザンブロッティングを行い、試験化合物の非存在下と比較して試験化合物の存在下で培養した細胞から回収したｍＲＮＡにおけるＨＳＰ９０ ｍＲＮＡ量が減少している場合、該試験化合物をＨＳＰ９０の発現を阻害する化合物であると同定する。あるいは、例えば、Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．６５，６４０１−６４０８（２００５）に記載されている方法でウェスタンブロッティングを実施し、ＨＳＰ９０の蛋白質量を調べればよい。

ＨＳＰ９０とクライアント蛋白質の結合の阻害は、例えば、当業者に通常用いられる免疫沈降およびウェスタンブロッティングを用いて調べることができる。免疫沈降およびウェスタンブロッティングは、例えば、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，１０３４６−１０３５３（２００２）に記載されている方法を実施すればよい。

ＨＳＰ９０とコシャペロンやイムノフィリン類の結合を阻害する化合物は、例えば、当業者に通常用いられる免疫沈降およびウェスタンブロッティングを用いて調べることができる。例えば、Ｎａｔｕｒｅ ４２５，４０７−４１０（２００３）に記載されている方法を実施し、試験化合物の存在下または非存在下で、ＨＳＰ９０とコシャペロンやイムノフィリン類の結合を調べればよい。

ＨＳＰ９０とＡＴＰの結合の阻害は、例えば、標識したＡＴＰとＨＳＰ９０との結合試験を用いて調べることができる。例えば、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，１８６０８−１８６１３（１９９７）に記載されている方法を実施し、試験化合物の存在下または非存在下で、ＨＳＰ９０と標識ＡＴＰの結合を調べればよい。

ＨＳＰ９０のコンフォメーション変化の阻害は、例えば、ｂｉｓ−ＡＮＳ（１，１’−ｂｉｓ（４−ａｎｉｌｉｎｏ−５−ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ）を利用したコンフォメーショナルアッセイ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ａｓｓａｙ）を用いて調べることができる。コンフォメーショナルアッセイは、例えば、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７，３８６５−３８７３（２００４）に記載されている方法を実施すればよい。

細胞の増殖阻害活性は、当業者に通常用いられる増殖阻害試験法を用いて調べることができる。細胞の増殖阻害活性は、例えば、下記の試験例２に記載されるように、試験化合物の存在下または非存在下における細胞（例えば、腫瘍細胞）の増殖の程度を比較することによって実施することができる。増殖の程度は、例えば、生細胞を測定する試験系を用いて調べることができる。生細胞の測定方法としては、例えば、［^３Ｈ］−チミジンの取り込み試験、ＢｒｄＵ法またはＭＴＴアッセイ等が挙げられる。

また、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性は、当業者に通常用いられる抗腫瘍試験法を用いて調べることができる。例えば、マウス、ラット等に各種腫瘍細胞を移植し、移植細胞の生着が確認された後に、本発明の化合物を経口投与、静脈内投与等し、数日〜数週間後に、薬剤無投与群における腫瘍増殖と化合物投与群における腫瘍増殖とを比較することにより本発明のｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性を確認することができる。

本発明の化合物は、腫瘍または癌、例えば、肺癌、消化器癌、卵巣癌、子宮癌、乳癌、肝癌、頭頚部癌、血液癌、腎癌、睾丸腫瘍、前立腺癌、多発性骨髄腫、悪性黒色腫等の皮膚癌、肉腫等の治療に使用することができる。

本発明の化合物は、ＨＳＰ９０阻害作用を有するので、ＨＳＰ９０依存性が上昇している癌の治療に用いることができる。ＨＳＰ９０への依存性が上昇している癌としては、ＨＳＰ９０クライアント蛋白質に依存している癌、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が過剰発現している癌、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の変異がみられる癌等が挙げられ、より具体的には、例えば、Ｈｅｒ２、ｃ−Ｍｅｔ、Ｆｌｔ３等が過剰発現している癌やｃ−ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ、Ｒａｆ等の変異がみられる癌が挙げられるがこれらに限定されない。

さらには、ＨＳＰ９０クライアント蛋白質が属する細胞内シグナル伝達経路には、癌に関与しているとされる因子群（ＲＡＳ−ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ、テロメレース等）が多く存在し、ＨＳＰ９０を阻害すれば、これら因子へのシグナル伝達が阻害され、結果として上記細胞内シグナル伝達経路の活性化をも阻害することとなるので、ＨＳＰ９０阻害剤である本発明の化合物は、当該観点からも様々な癌の治療に好適に用いることができる。

本発明の医薬組成物は、本発明の化合物と薬学的に許容し得る担体を含み、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射等の各種注射剤として、あるいは、経口投与または経皮投与等の種々の方法によって投与することができる。薬学的に許容し得る担体とは、本発明の化合物または本発明の化合物を含む組成物を、ある器官または臓器から他の器官または臓器に輸送することに関与する、薬学的に許容される材料（例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、溶媒等）を意味する。

製剤の調製方法としては投与法に応じ適当な製剤（例えば、経口剤または注射剤）を選択し、通常用いられている各種製剤の調製法にて調製できる。経口剤としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または油性ないし水性の懸濁液等を例示できる。経口投与の場合では遊離体のままでも、塩の型のいずれでもよい。水性製剤は薬学的に許容される酸と酸付加物を形成させるか、ナトリウム等のアルカリ金属塩とすることで調製できる。注射剤の場合は製剤中に安定剤、防腐剤または溶解補助剤等を使用することもできる。これらの補助剤等を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によって固形製剤として用時調製の製剤としてもよい。また、一回投与量を一の容器に収納してもよく、また複数回投与量を一の容器に収納してもよい。

固形製剤としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、またはトローチ剤が挙げられる。これらの固形製剤は、本発明の化合物とともに薬学的に許容し得る添加物を含んでもよい。添加物としては、例えば、充填剤類、増量剤類、結合剤類、崩壊剤類、溶解促進剤類、湿潤剤類または滑沢剤類が挙げられ、これらを必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。

液体製剤としては、例えば、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または懸濁剤が挙げられる。これらの液体製剤は、本発明の化合物とともに薬学的に許容し得る添加物を含んでもよい。添加物としては、例えば、懸濁化剤または乳化剤が挙げられ、これらを必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。

本発明の化合物は、哺乳類、特にヒトの癌治療に用いることができる。投与量および投与間隔は、疾患の場所、患者の身長、体重、性別または病歴によって、医師の判断により適宜選択され得る。本発明の化合物をヒトに投与する場合、投与量の範囲は、１日当たり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。ヒトに投与する場合、好ましくは、１日あたり１回、あるいは２から４回に分けて投与され、適当な間隔で繰り返すのが好ましい。また、１日量は、医師の判断により必要によっては上記の量を超えてもよい。

本発明の化合物は他の抗腫瘍剤と併用して用いてもよい。例えば、抗腫瘍抗生物質、抗腫瘍性植物成分、ＢＲＭ（生物学的応答性制御物質）、ホルモン、ビタミン、抗腫瘍性抗体、分子標的薬、その他の抗腫瘍剤等が挙げられる。

より具体的に、アルキル化剤としては、例えば、ナイトロジェンマスタード、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシドもしくはクロラムブチル等のアルキル化剤、カルボコンもしくはチオテパ等のアジリジン系アルキル化剤、ディブロモマンニトールもしくはディブロモダルシトール等のエポキシド系アルキル化剤、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ニムスチンハイドロクロライド、ストレプトゾシン、クロロゾトシンもしくはラニムスチン等のニトロソウレア系アルキル化剤、ブスルファン、トシル酸インプロスルファンまたはダカルバジン等が挙げられる。

各種代謝拮抗剤としては、例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニンもしくはチオイノシン等のプリン代謝拮抗剤、フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル、カルモフール、ドキシフルリジン、ブロクスウリジン、シタラビン若しくはエノシタビン等のピリミジン代謝拮抗剤、メトトレキサートもしくはトリメトレキサート等の葉酸代謝拮抗剤等が挙げられる。

抗腫瘍性抗生物質としては、例えば、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ペプロマイシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、ＴＨＰ−アドリアマイシン、４ ’−エピドキソルビシンもしくはエピルビシン等のアントラサイクリン系抗生物質抗腫瘍剤、クロモマイシンＡ３またはアクチノマイシンＤ等が挙げられる。

抗腫瘍性植物成分としては、例えば、ビンデシン、ビンクリスチン若しくはビンブラスチン等のビンカアルカロイド類、パクリタキセル、ドセタキセル等のタキサン類、またはエトポシドもしくはテニポシド等のエピポドフィロトキシン類が挙げられる。

ＢＲＭとしては、例えば、腫瘍壊死因子またはインドメタシン等が挙げられる。

ホルモンとしては、例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プラステロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、オキシメトロン、ナンドロロン、メテノロン、ホスフェストロール、エチニルエストラジオール、クロルマジノンまたはメドロキシプロゲステロン等が挙げられる。

ビタミンとしては、例えば、ビタミンＣまたはビタミンＡ等が挙げられる。

抗腫瘍性抗体、分子標的薬としては、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ニモツズマブ、デノスマブ、ベバシズマブ、インフリキシマブ、メシル酸イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ソラフェニブ等が挙げられる。

その他の抗腫瘍剤としては、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、タモキシフェン、カンプトテシン、イホスファミド、シクロホスファミド、メルファラン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセクラトン、シゾフィラン、ピシバニール、プロカルバジン、ピポブロマン、ネオカルチノスタチン、ヒドロキシウレア、ウベニメクスまたはクレスチン等が挙げられる。

本発明には、本発明化合物又はその塩を投与することを特徴とする癌の予防方法及び／または治療方法も含まれる。

さらに、本発明には、前記医薬を製造するための本発明の化合物、その塩又はそれらの溶媒和物の使用も含まれる。

以下に示す実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではなく、これらはいかなる意味においても限定的に解釈されない。また、本明細書において、特に記載のない試薬、溶媒および出発材料は、市販の供給源から容易に入手可能である。

（実施例１）
（１）１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−３−ブテン−１−オール

市販の２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−カルボアルデヒド（１．９２ｇ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）からなる混合物に、インジウム粉末（０．２３ｇ）と亜鉛粉末（１．３１ｇ）を加えた後、室温でヨウ化ナトリウム（０．１５ｇ）とアリルブロミド（１．７３ｍｌ）を加え、３時間撹拌した。反応混合物をセライト濾過し、濾液に酢酸エチルを加え、１Ｎ塩酸、飽和食塩水の順で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮し、残渣にヘキサンを加え析出物を濾取し、標題化合物（１．７５ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ_６）δ：２．５５−２．６９（２Ｈ，ｍ），４．９５−５．０９（３Ｈ，ｍ），５．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），５．６７−５．７７（１Ｈ，ｍ），７．４２（２Ｈ，ｓ）．

（２）１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オール

１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−３−ブテン−１−オール（５７．２４ｇ）、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（１４７．６ｇ）、テトラヒドロフラン（５００ｍｌ）、アセトン（５００ｍｌ）、水（５００ｍｌ）および四酸化オスミウム（６２ｍｇ）からなる混合物を室温で２日間撹拌した。原料消失を確認した後、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（１Ｌ）を加え、反応混合物を減圧下で約１．５Ｌまで濃縮した。残渣に塩化ナトリウムを加えて飽和させ、テトラヒドロフランで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過後、濾液を減圧下で濃縮して溶媒を留去した。得られた残渣にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００ｍｌ）、２，２−ジメトキシプロパン（２１０ｍｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１８．６１ｇ）を加え、室温にて１４時間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水（１Ｌ）と水（１Ｌ）を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾液を減圧下で約１００ｍｌまで濃縮し、残渣にヘキサンを加え析出物を濾取し、標題化合物（５３．８８ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ_６）δ：１．２２−１．３２（６Ｈ，ｍ），１．７２−２．２３（２Ｈ，ｍ），２．５０（１Ｈ，ｓ），３．５０（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝１４．２，６．９Ｈｚ），４．２２−３．９２（２Ｈ，ｍ），５．０６−５．３６（２Ｈ，ｍ），７．４３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：３０８（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（３）１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オン

氷浴冷却下、１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オール（７４．７０ｇ）とジメチルスルホキシド（６００ｍｌ）からなる混合物に無水酢酸（１４９ｍｌ）を室温で１５分かけて滴下し、同温で１８時間撹拌した。原料消失を確認した後、反応液を氷水にあけ、析出する固体を濾取し、標題化合物（６８．２６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３７（３Ｈ，ｓ），１．４２（３Ｈ，ｓ），２．９８−３．０６（１Ｈ，ｍ），３．３２−３．４０（１Ｈ，ｍ），３．６７−３．７２（１Ｈ，ｍ），４．２５−４．３０（１Ｈ，ｍ），４．５７−４．６４（１Ｈ，ｍ），５．７２（２Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：３０６（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（４）４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン

氷浴冷却下、１−（２−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン−５−イル）−２−（２，２−ジメチル−［１，３］ジオキソラン−４−イル）エタン−１−オン（６１．２３ｇ）、米国特許ＵＳ２００３／１８１９７号に記載の方法により製造した（４−メトキシベンジル）−ヒドラジン 塩酸塩（４１．５０ｇ）およびジクロロメタン（６００ｍｌ）からなる混合物に、トリエチルアミン（８３．６８ｍｌ）を３０分間かけて加えた。徐々に昇温させて１７時間撹拌した後、反応混合物に１０％クエン酸水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して得られた残渣に５％クエン酸水溶液を加え、析出物を濾取、水で洗浄して、標題化合物（７３．８４ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３６（３Ｈ，ｓ），１．４３（３Ｈ，ｓ），３．１１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．７，８．１Ｈｚ），３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１４．７，５．２Ｈｚ），３．７３−３．７８（４Ｈ，ｍ），４．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，６．０Ｈｚ），４．５４−４．６１（１Ｈ，ｍ），４．７７（２Ｈ，ｂｒ ｓ），５．２２（２Ｈ，ｓ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４０４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（５）ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ｛４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝イミドジカーボネート

４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−アミン（７２．８３ｇ）とテトラヒドロフラン（７００ｍｌ）からなる混合物に、４−ジメチルアミノピリジン（２．２０ｇ）とジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（８６．５９ｇ）を加えた後、室温にて１２時間撹拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を減圧下で濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製することにより、標題化合物（７０．００ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３７（３Ｈ，ｓ），１．４０（３Ｈ，ｓ），１．４４−１．４６（１８Ｈ，ｍ），３．２１−３．２９（１Ｈ，ｍ），３．４８−３．５５（１Ｈ，ｍ），３．７４−３．８１（４Ｈ，ｍ），４．０９−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．５８−４．６６（１Ｈ，ｍ），５．４８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．３，１５．１Ｈｚ），６．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２７−７．３０（２Ｈ，ｍ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：６０４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（６）ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［４−クロロ−３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］イミドジカーボネート

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ｛４−クロロ−３−［（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝イミドジカーボネート（５３．８５ｇ）をアセトニトリル（５００ｍｌ）に溶かし、塩化銅（ＩＩ）二水和物（３０．３９ｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製することにより、標題化合物（３７．７０ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４６（１８Ｈ，ｓ），３．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），３．２３−３．３３（２Ｈ，ｍ），３．６２−３．８２（５Ｈ，ｍ），４．２６−４．３４（１Ｈ，ｍ），５．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．２５−７．３０（２Ｈ，ｍ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５６４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（７）ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［８−ヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジル）−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート

氷浴冷却下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［４−クロロ−３−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−１−（４−メトキシベンジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］イミドジカーボネート（２８．００ｇ）、２，４，６−コリジン（１６．５３ｍｌ）および脱水ジクロロメタン（４００ｍｌ）からなる混合物に、メタンスルホニルクロリド（４．２３ｍｌ）を滴下して加えた後、４℃で１５時間撹拌した。反応混合物に１０％クエン酸水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下濃縮した。得られた残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３００ｍｌ）に溶解させ、氷浴冷却下、硫化水素ナトリウム一水和物（５．５２ｇ）を加えた後、室温で１．５時間撹拌した。反応混合物に炭酸カリウム（１０．２９ｍｇ）を加え、５０℃に加熱してさらに５時間撹拌した。反応混合物に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水の順に洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製して、標題化合物（２０．５９ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４５（１８Ｈ，ｓ），２．３９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．２９−３．５１（４Ｈ，ｍ），４．５８（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．７６（３Ｈ，ｓ），５．４２−５．４９（２Ｈ，ｍ），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（８）４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル アセテート

窒素雰囲気下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［８−ヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジル）−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート（８．１７ｇ）、ジメチルスルホキシド（７４ｍｌ）およびピリジン（１２ｍｌ）からなる混合物に無水酢酸（１４ｍｌ）を氷冷下で滴下し、３０分間撹拌した後、室温で１５時間撹拌した。原料消失を確認した後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）で精製して、標題化合物（６．１５ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４４（１８Ｈ，ｓ），２．２６（３Ｈ，ｓ），３．７７（３Ｈ，ｓ），３．８８（２Ｈ，ｓ），５．５０（２Ｈ，ｓ），６．６８（１Ｈ，ｓ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．３１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５８４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（９）ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［２−（４−メトキシベンジル）−８−オキソ−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート

氷浴冷却下、４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル アセテート（６．１５ｇ）、メタノール（２００ｍｌ）および炭酸カリウム（０．７３ｇ）の混合物を１．５時間撹拌した。原料消失を確認した後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下で濃縮して標題化合物（５．７０ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．４６（１８Ｈ，ｓ），３．８４（２Ｈ，ｓ），３．７７（３Ｈ，ｓ），４．２３（２Ｈ，ｓ），５．４８（２Ｈ，ｓ），６．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４２（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（１０）エチル ｛４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセテート

ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ［２−（４−メトキシベンジル）−８−オキソ−２，７，８，９−テトラヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］イミドジカーボネート（５．１９ｇ）、エチル（トリフェニルホスファニリデン）アセテート（３．５１ｇ）およびトルエン（３００ｍｌ）からなる混合物を６５℃にて１３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−へキサン）で精製することにより、標題化合物（３．７８ｇ）をアモルファスとして得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６９−１．７７（１Ｈ，ｍ），２．３７−２．４０（１Ｈ，ｍ），２．４６−２．５２（１Ｈ，ｍ），２．６８−２．７１（２Ｈ，ｍ），４．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．１０−５．１３（１Ｈ，ｍ），５．２０（２Ｈ，ｂｒ ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：６１２（Ｍ＋Ｈ）^＋

（１１）２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−メチルアセタミド トリフルオロ酢酸塩

エチル ｛４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセテート（２．２ｇ）を４０％メチルアミン／メタノール溶液（４０ｍｌ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。反応完結をＬＣ−ＭＳにて確認し、溶媒を減圧留去した。得られた残渣にアニソール（２ｍｌ）とトリフルオロ酢酸（４０ｍｌ）を加え、６５℃で１５時間撹拌した。反応液を減圧下で濃縮し、残渣にイソプロピルエーテル−エーテル混合液を加え、析出物を濾取し、標題化合物（１．５３ｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２７７（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（１２）５−クロロ−４−ヒドロキシ−６−メチルニコチニック アシッド

市販の４−ヒドロキシ−６−メチル−ニコチニック アシッド（３００ｍｇ）をアセトニトリル３ｍｌに懸濁し、Ｎ−クロロスクシンイミド（３８０ｍｇ）を加え、室温で３０分間撹拌した後、４５分間加熱還流した。原料消失を確認した後、反応液を氷冷し、析出物を濾取し標題化合物（３２４ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ：２．５６（３Ｈ，ｓ），８．５０（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（１３）メチル ４，５−ジクロロ−６−メチルニコチネート

５−クロロ−４−ヒドロキシ−６−メチルニコチニック アシッド（３２０ｍｇ）にオキシ塩化リン（１．１３ｍｌ）を加え、２時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、残渣に氷冷下メタノール（３ｍｌ）を滴下し、室温で３０分間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣に飽和重曹水を氷冷中加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物の粗体（４３６ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２２０（Ｍ＋Ｈ）＋

（１４）メチル ５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルニコチネート

粗メチル ４，５−ジクロロ−６−メチルニコチネート（３８０ｍｇ）をメタノール３ｍｌに溶解し、窒素気流下、氷冷にてナトリウムメトキシド（１２０ｍｇ）を加えた。徐々に室温まで昇温し、１８時間撹拌した。原料消失を確認した後、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムにて抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去してシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）にて精製し標題化合物（２１０ｍｇ）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６７（３Ｈ，ｓ），３．９５（４Ｈ，ｓ），４．００（３Ｈ，ｓ），８．７６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２１６（Ｍ＋Ｈ）＋

（１５）（５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルピリジン−３−イル）メタノール

メチル ５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルニコチネート（１．０ｇ）をメタノール３０ｍｌに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１．７５ｇ）を加え、１時間加熱還流した。氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムにて３回抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物（０．９２ｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６３（３Ｈ，ｓ），４．００（３Ｈ，ｓ），４．７１（２Ｈ，ｂｒ ｓ），８．３３（１Ｈ，ｓ）
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（１６）３−クロロ−５−（クロロメチル）−４−メトキシ−２−メチルピリジン

（５−クロロ−４−メトキシ−６−メチルピリジン−３−イル）メタノール（５２０ｍｇ，）をクロロホルム２０ｍｌに溶解し、氷冷下、塩化チオニル（０．３８ｍｌ）を加え、同温で３時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルを加え、飽和重曹水、水、飽和食塩水の順で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去してシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）にて精製し、標題化合物（５５０ｍｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６４（３Ｈ，ｓ），４．０５（３Ｈ，ｓ），４．６１（２Ｈ，ｓ），８．３５（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２０６（Ｍ＋Ｈ）＋

（１７）３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン

３−クロロ−５−（クロロメチル）−４−メトキシ−２−メチルピリジン（５５０ｍｇ）をメタノール１０ｍｌに溶解し、１０％Ｐｄ炭素（５０ｍｇ）を加え、氷冷下、３時間常圧接触水素添加を行った。触媒を濾別し、メタノールを減圧下留去した。クロロホルムにて抽出し、有機層を飽和重曹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去してシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン）にて精製し、標題化合物（３６５ｍｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２５（３Ｈ，ｓ），２．５９（３Ｈ，ｓ），３．８９（３Ｈ，ｓ），８．１６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１７２（Ｍ＋Ｈ）＋

（１８）３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン １−オキシド

３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン（１８１ｍｇ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解し、過酸化尿素（１６９ｍｇ）と無水フタル酸（２１９ｍｇ）を加えた。室温で２．５時間撹拌した。氷冷にて飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで希釈し、水層をクロロホルムで２回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物（１８１ｍｇ）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２４（３Ｈ，ｓ），２．６２（３Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ），８．０７（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（１９）（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メタノール

３−クロロ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン １−オキシド（５３０ｍｇ）をジクロロメタン１５ｍｌに懸濁し、氷冷にて無水トリフルオロ酢酸（０．３９ｍｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。クロロホルムで希釈し飽和重曹水で洗浄し、水槽をクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥した後、溶媒を留去して標題化合物（５２１ｍｇ）を油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：２．２９（３Ｈ，ｓ），３．９３（３Ｈ，ｓ），４．２９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．７２−４．７４（２Ｈ，ｍ），８．２６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１８８（Ｍ＋Ｈ）＋

（２０）３−クロロ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−メチルピリジン 塩酸塩

（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メタノール（５３０ｍｇ）をクロロホルム２０ｍｌに溶解し、氷冷下、塩化チオニル（１．０３ｍｌ）を滴下し、室温で３時間撹拌した。反応液を濃縮し、エーテル−へキサンの混合溶媒洗浄により標題化合物（４１０ｍｇ）を固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．４７（３Ｈ，ｓ），４．３２（３Ｈ，ｓ），５．０９（２Ｈ，ｓ），８．５４（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２０６（Ｍ＋Ｈ）＋

（２１）２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド

２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−メチルアセタミド トリフルオロ酢酸塩（２８ｍｇ）、３−クロロ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−メチルピリジン 塩酸塩（３６ｍｇ）および炭酸カリウム（６９ｍｇ）にジメチルホルムアミド（１ｍｌ）を加え、６０℃で２時間３０分撹拌した。不溶物を濾別後、溶媒を窒素気流下留去した。得られた残渣をジメチルスルホキシド（１ｍｌ）に溶解して分取逆相ＨＰＬＣにて精製し、溶媒を減圧留去することにより標題化合物（２７．０ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２４（４Ｈ，ｓ），２．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．２７（２Ｈ，ｓ），３．８０（２Ｈ，ｓ），３．９１（３Ｈ，ｓ），５．２１（２Ｈ，ｓ），５．６５（２Ｈ，ｓ），５．８７（１Ｈ，ｓ），６．７０（１Ｈ，ｓ），８．１６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４４６（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（実施例２）
（１）５−ブロモ−２，３−ジメチル−４−ニトロピリジン １−オキサイド

米国特許ＵＳ５２５０５２７号に記載の方法により製造した５−ブロモ−２，３−ジメチルピリジン １−オキサイド（４．６１ｇ）を濃硫酸（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷撹拌下発煙硝酸（２４ｍｌ）と発煙硫酸（１３ｍｌ）の混液を滴下した。そのまま３０分撹拌後９０℃で１時間撹拌した。反応液を放冷後氷水中に投入し、氷水浴撹拌下、ジクロロメタンを加え、アンモニア水を添加して中和した。ジクロロメタンで抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、粗製の標題化合物（４．８０ｇ）を固体として得た。

（２）５−ブロモ−４−メトキシ−２，３−ジメチルピリジン １−オキサイド

５−ブロモ−２，３−ジメチル−４−ニトロピリジン １−オキサイド（４．８０ｇ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に、氷水浴下、１Ｍナトリウムメトキシド−メタノール溶液（３０ｍｌ）を加えて、室温にて一晩撹拌した。反応液を濃縮して、残渣をジクロロメタンおよび水に分配して、分液した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮して、粗製の標題化合物（４．９１ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．３０（３Ｈ，ｓ），２．４７（３Ｈ，ｓ），３．８４（３Ｈ，ｓ），８．３６（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２３２（Ｍ＋Ｈ）^＋

（３）（５−ブロモ−４−メトキシ−３−メチルピリジン−２−イル）メタノール

５−ブロモ−４−メトキシ−２，３−ジメチルピリジン １−オキサイド（４．９１ｇ）をジクロロメタン（６０ｍｌ）に溶解し、室温にて無水トリフルオロ酢酸（２０ｍｌ）を加え、一晩撹拌した。反応液を濃縮後、メタノール（５０ｍｌ）に溶解し、５０℃にて１時間撹拌した。反応液を濃縮後、残渣をジクロロメタンに溶解し、飽和重曹水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）にて精製し、標題化合物（３．４３ｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．１７（３Ｈ，ｓ），３．８９（３Ｈ，ｓ），４．６２（２Ｈ，ｓ），８．５０（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２３２（Ｍ＋Ｈ）^＋

（４）５−ブロモ−２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−メトキシ−３−メチルピリジン

（５−ブロモ−４−メトキシ−３−メチルピリジン−２−イル）メタノール（５００ｍｇ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解し、氷水浴下、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（４８７ｍｇ）、トリエチルアミン（０．４８ｍｌ）、ジメチルアミノピリジン（３０ｍｇ）を加えて、室温にて一晩撹拌した。反応液をジクロロメタンにて希釈して、飽和重曹水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）にて精製し、標題化合物（７４３ｍｇ）を油状物質として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：０．０７（６Ｈ，ｓ），０．８９（９Ｈ，ｓ），２．３７（３Ｈ，ｓ），３．８７（３Ｈ，ｓ），４．７７（２Ｈ，ｓ），８．４３（１Ｈ，ｓ）．

（５）２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン

５−ブロモ−２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−４−メトキシ−３−メチルピリジン（７３４ｍｇ）をテトラヒドロフラン（３０ｍｌ）に溶解し、−１１０℃にてブチルリチウム（１．５９Ｍ溶液、２．４２ｍｌ）を滴下した。そのまま１時間撹拌後、同温にてＮ−フルオロベンゼンスルホンイミド（３．０３ｇ）のテトラヒドロフラン（５ｍｌ）溶液を滴下した。徐々に３時間で−６８℃まで昇温して、その後、室温にて３０分間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、ジクロロメタンにて抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）にて精製し、標題化合物（３５３ｍｇ）を油状物質として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：０．０６（６Ｈ，ｓ），０．８９（９Ｈ，ｓ），２．２８（３Ｈ，ｓ），４．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），４．７５（２Ｈ，ｓ），８．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２８６（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（６）（５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン−２−イル）メタノール

２−（｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝メチル）−５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン（３５３ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液に、氷水浴下、フッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍ溶液、１．４９ｍｌ）を加えて、室温にて１時間撹拌した。反応液をジクロロメタンにて希釈して、水洗した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、標題化合物（１５０ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．０８（３Ｈ，ｓ），４．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｓ），４．６１（２Ｈ，ｓ），８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１７２（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（７）２−（クロロメチル）−５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン 塩酸塩

（５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン−２−イル）メタノール（１３５ｍｇ）を用いて実施例１（２０）と同様の方法で合成し、標題化合物（１５４ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１９０（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（８）２−｛４−アミノ−２−［（５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド

２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−メチルアセタミド トリフルオロ酢酸塩（６０ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム（８５ｍｇ）および２−（クロロメチル）−５−フルオロ−４−メトキシ−３−メチルピリジン 塩酸塩（５２ｍｇ）を加え、５０℃にて３．５時間撹拌した。不溶物を濾別後、ろ液を濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール）にて精製し、標題化合物（３０ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２７（３Ｈ，ｓ），２．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），３．２７（２Ｈ，ｓ），３．７８（２Ｈ，ｓ），４．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），５．１３（２Ｈ，ｓ），５．４９（２Ｈ，ｓ），５．７４（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．７０（１Ｈ，ｓ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４３０（Ｍ＋Ｈ）^＋．
元素分析値 Ｃ_１９Ｈ_２０ＦＮ_７Ｏ_２Ｓ・０．５Ｈ_２Ｏとして
計算値：Ｃ，５２．０５；Ｈ，４．８２；Ｎ，２２．３６；Ｆ，４．３３；Ｓ，７．３２．
実測値：Ｃ，５２．２７；Ｈ，４．７９；Ｎ，２２．１０；Ｆ，４．４４；Ｓ，７．０５．

（実施例３）
（１）３−ブロモ−２，５−ジメチル−４−ニトロピリジン １−オキサイド

市販の３−ブロモ−２，５−ジメチルピリジン １−オキサイド（２．３５ｇ）を用いて実施例２（１）と同様の方法で合成し、標題化合物（１．０８ｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２４７（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（２）３−ブロモ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン １−オキサイド

３−ブロモ−２，５−ジメチル−４−ニトロピリジン １−オキサイド（１．０８ｇ）を用いて実施例２（２）と同様の方法で合成し、粗製の標題化合物（９９０ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２３４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（３）（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メタノール

３−ブロモ−４−メトキシ−２，５−ジメチルピリジン １−オキサイド（９９０ｍｇ）を用いて実施例２（３）と同様の方法で合成し、標題化合物（９３１ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．３３（３Ｈ，ｓ），３．９０（３Ｈ，ｓ），４．３８（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．６９（２Ｈ，ｓ），８．２８（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２３４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（４）３−ブロモ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ‐５−ピリジン 塩酸塩

（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メタノール（１５０ｍｇ）を用いて実施例１（２０）と同様の方法で合成し、標題化合物（１６１ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．５０（３Ｈ，ｓ），４．２１（３Ｈ，ｓ），５．１８（２Ｈ，ｓ），８．４７（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２５０ａｎｄ２５２（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（５）２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド

２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−メチルアセタミド トリフルオロ酢酸塩（１５０ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム（１６０ｍｇ）および３−ブロモ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−ピリジン 塩酸塩（１６６ｍｇ）を加え、５０℃にて一晩撹拌した。反応液をジクロロメタンで希釈して水洗した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール）にて精製し、標題化合物（１０５ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２７（３Ｈ，ｓ），２．８３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），３．２８（２Ｈ，ｓ），３．８１（２Ｈ，ｓ），３．８８（３Ｈ，ｓ），５．０８−５．１４（２Ｈ，ｂｒ ｍ），５．６６（２Ｈ，ｓ），５．７７（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．７２（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４９２（Ｍ＋Ｈ）^＋．
元素分析値 Ｃ_１９Ｈ_２０ＢｒＮ_７Ｏ_２Ｓ・０．２５Ｈ_２Ｏ・０．２ジオキサンとして
計算値：Ｃ，４６．４０；Ｈ，４．３４；Ｎ，１９．１３；Ｂｒ，１５．５９；Ｓ，６．４５．
実測値：Ｃ，４６．２１；Ｈ，４．０７；Ｎ，１９．１６；Ｂｒ，１５．７０；Ｓ，６．２７．

（実施例４）
（１）ｔｅｒｔ−ブチル ［８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］カルバメート

エチル ｛４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセテート（６００ｍｇ）のエタノール（５ｍｌ）溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３ｍｌ）加えて、室温にて一晩撹拌した。反応液に１Ｎ塩酸（３ｍｌ）を加えて、溶液を濃縮して、残渣にジクロロメタンを加えて抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮してカルボン酸（５７６ｍｇ）を得た。カルボン酸（５７６ｍｇ）をアセトニトリル（１０ｍｌ）に溶解し、塩化アンモニウム（１５７ｍｇ）、トリエチルアミン（０．２ｍｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド 塩酸塩（２８２ｍｇ）を加えて室温で３日間撹拌した。反応液をジクロロメタンにて希釈して、水を加え、分液操作をおこなった。有機層を飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール）にて精製し、標題化合物（２５２ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４８３（Ｍ＋Ｈ）^＋

（２）２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）アセタミド トリフルオロ酢酸塩

ｔｅｒｔ−ブチル ［８−（２−アミノ−２−オキソエチル）−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−４−イル］カルバメート（２５６ｍｇ）を用いて実施例１（１１）と同様の方法で合成し、標題化合物（１６２ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２６３（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（３）２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−8−ｙｌ｝アセタミド メタンスルホン酸塩

２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）アセタミド トリフルオロ酢酸塩（１００ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム（１１０ｍｇ）および３−ブロモ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−ピリジン 塩酸塩（１１４ｍｇ）を加え、５０℃にて一晩撹拌した。反応液をジクロロメタンで希釈して水洗した。有機層を無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、ろ液を濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール）にて精製し、２−｛４−アミノ−２−［（３−ブロモ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセタミド（９０ｍｇ）を固体として得た。獲得した固体（２７ｍｇ）をジオキサンに溶解し、氷水浴下、０．２Ｍメタンスルホン酸水溶液（０．２８３ｍｌ）を加え、凍結乾燥して、標題化合物（３２ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．３０（３Ｈ，ｓ），２．８４（３Ｈ，ｓ），３．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ），３．９２（３Ｈ，ｓ），３．９５（２Ｈ，ｓ），５．４６（１Ｈ，ｂｒ ｓ），５．６８（２Ｈ，ｓ），５．９７（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．７５（１Ｈ，ｓ），８．１９（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４７６ａｎｄ４７８（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（実施例５）
（１）２−［４−アミノ−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル］−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド

エチル ｛４−［ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝アセテート（５２６ｍｇ）のエタノール（１０ｍＬ）溶液に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２．７ｍＬ）を加え、一晩室温にて撹拌した。溶媒を留去して、カルボン酸のナトリウム塩を得た。このものをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、氷水浴下、２−フルオロエチルアミン（１７１ｍｇ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド 塩酸塩（２４７ｍｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１０ｍｇ）を加えて室温で３日間撹拌した。反応液をジクロロメタンにて希釈して、水を加え、分液操作をおこなった。有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、標題化合物（４１９ｍｇ）を油状物質として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５２９（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（２）２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド トリフルオロ酢酸塩

２−［４−アミノ−２−（４−メトキシベンジル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル］−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド（４１８ｍｇ）を用いて実施例１（１１）と同様の方法で合成し、粗製の標題化合物（２４７ｍｇ）を固体として得た。
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：３０９（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（３）２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド

２−（４−アミノ−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル）−Ｎ−（２−フルオロエチル）アセタミド トリフルオロ酢酸塩（６０ｍｇ）と３−クロロ−２−（クロロメチル）−４−メトキシ−５−ピリジン 塩酸塩（５２ｍｇ）を用いて実施例３（５）と同様の方法で合成し、標題化合物（１２ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．２５（３Ｈ，ｓ），３．３１（２Ｈ，ｓ），３．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，５．０Ｈｚ），３．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５，５．０Ｈｚ），３．８１（２Ｈ，ｓ），３．９１（３Ｈ，ｓ），４．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．５６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），５．１１（２Ｈ，ｓ），５．６５（２Ｈ，ｓ），６．０９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．７３（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４７８（Ｍ＋Ｈ）^＋．
元素分析値 Ｃ_２０Ｈ_２１ＣｌＦＮ_７Ｏ_２Ｓ・０．７５ジオキサンとして
計算値：Ｃ，５０．８０；Ｈ，５．００；Ｎ，１８．０２．
実測値：Ｃ，５１．１８；Ｈ，４．８６；Ｎ，１７．９１．

（実施例６）
（１）３−クロロ−４−メトキシ−２−メチルピリジン １−オキシド

Ｐｏｌｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８６，５９，１０−１２に記載の方法により製造した３−クロロ−２−メチル−４−ニトロピリジン−１−オキシド（１．００ｇ）を０．５Ｍナトリウムメトキシド−メタノール溶液（１５．９ｍＬ）に溶解し、室温で終夜撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、メタノールを減圧留去した後クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去して標題化合物（８９７ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．６８（３Ｈ，ｓ），３．９６（３Ｈ，ｓ），６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１７４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（２）（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル アセテート

３−クロロ−４−メトキシ−２−メチルピリジン−１−オキシド（８９０ｍｇ）を無水酢酸（１２ｍＬ）に溶解し、３０分加熱還流した。室温まで放冷後減圧濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）にて精製して標題化合物（５７６ｍｇ）を油状物質として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：２．１７（３Ｈ，ｓ），３．９７（３Ｈ，ｓ），５．３３（２Ｈ，ｓ），６．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），８．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：２１６（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（３）（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メタノール

（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル アセテート（５７０ｍｇ）をメタノール（１３ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（７３１ｍｇ）を加えて５０℃で３０分撹拌した。メタノールを減圧留去し、残渣に水を加えてクロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後溶媒を減圧留去して標題化合物（４３７ｍｇ）を油状物質として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：３．９８（３Ｈ，ｓ），４．３９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），４．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），８．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１７４（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（４）３−クロロ−４−メトキシ−２−（クロロメチル）ピリジン 塩酸塩

（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メタノール（４３７ｍｇ）を用いて実施例１（２０）と同様の方法で合成し、標題化合物（５５８ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：４．２６（３Ｈ，ｓ），５．１７（２Ｈ，ｓ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），８．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：１９２（Ｍ＋Ｈ）^＋．

（５）４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシピリジン−２−イル）メチル］−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−カルボキサミド

４−アミノ−Ｎ−（２，２−ジフルオロエチル）−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−カルボキサミド トリフルオロ酢酸塩（５０ｍｇ）と３−クロロ−２−（クロロメチル）−４−メトキシピリジン（３５ｍｇ）を用いて、実施例２（８）と同様の方法で合成し、標題化合物（４８ｍｇ）を固体として得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ_６）δ：３．５５−３．６３（２Ｈ，ｍ），３．９６（３Ｈ，ｓ），４．０９（２Ｈ，ｓ），５．６０（２Ｈ，ｓ），５．９５−６．１９（１Ｈ，ｍ），７．０６（２Ｈ，ｂｒ ｓ），７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７３Ｈｚ），７．４９（１Ｈ，ｓ），８．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７３Ｈｚ），８．８２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７３Ｈｚ）．
ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ，４６８（Ｍ＋Ｈ）^＋．
元素分析値 Ｃ_１８Ｈ_１６ＣｌＦ_２Ｎ_７Ｏ_２Ｓ・０．２５Ｈ_２Ｏ・０．５ジオキサンとして
計算値：Ｃ，４６．５１；Ｈ，４．００；Ｎ，１８．９９；Ｃｌ，６．８６；Ｆ，７．３６；Ｓ，６．２１．
実測値：Ｃ，４６．４０；Ｈ，３．７２；Ｎ，１９．１０；Ｃｌ，６．９３；Ｆ，７．２９；Ｓ，６．１９．

（実施例７）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセトアミド １臭化水素酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセトアミド（２５０ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（３５０ｍｌ）に、２０％臭化水素酸エタノール溶液（２０４μｌ、０．５０５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。３時間攪拌した後、析出した固体をろ取した。得られた固体にエタノール（３ｍｌ）を加え、１日攪拌した後、固体をろ取した。その後、減圧下、室温で２日間乾燥し、表記化合物（１２８ｍｇ、０．２４３ｍｍｏｌ）を得た。
元素分析値 Ｃ_１９Ｈ_２１Ｎ_７Ｏ_２ＳＣｌＢｒ・０．４Ｈ_２Ｏとして
計算値：Ｃ，４２．９１；Ｈ，４．０１；Ｏ，７．１３；Ｎ，１８．５７；Ｃｌ，６．６８；Ｂｒ，１５．０３；Ｓ，６．０８．
実測値：Ｃ，４２．７３；Ｈ，４．１１；Ｏ，７．１９；Ｎ，１８．３６；Ｃｌ，６．６４；Ｂｒ，１４．９６；Ｓ，６．００．

（実施例８）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトアアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル}−Ｎ−メチルアセタミド １塩酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトアアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル}−Ｎ−メチルアセタミド（５２７．５２ｍｇ，１．１８３ｍｍｏｌ）のエタノール（３０ｍｌ）懸濁液に２５℃で攪拌しながら、３規定塩酸（０．７８６ｍｌ，２．３５８ｍｍｏｌ）を加え１時間攪拌した。析出固体を濾過し、エタノール（６ｍｌ）で洗浄後、減圧下４０℃にて３０分間乾燥し、表題化合物（５３１．０９ｍｇ，１．１０１ｍｍｏｌ）を得た。
元素分析値 Ｃ_１９Ｈ_２１Ｃｌ_２Ｎ_７Ｏ_２Ｓ として
計算値：Ｃ，４７．３１；Ｈ，４．３９；Ｎ，２０．３３；Ｏ，６．６３；Ｃｌ，１４．７０；Ｓ，６．６５．
実測値：Ｃ，４７．２９；Ｈ，４．４０；Ｎ，２０．０２；Ｏ，６．８７；Ｃｌ，１４．９９；Ｓ，６．８３．

（実施例９）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセトアミド １メタンスルホン酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセトアミド （１５１ｍｇ、０．３３９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１５０ｍｌ）に、メタンスルホン酸（３２ｍｇ、０．３０２ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル溶液（５０ｍｌ）を５℃で加え、２５分間、５℃で攪拌した。その後、溶媒を減圧留去し、ジエチルエーテル適量を加え、固体をろ取した。得られた固体にエタノール（１ｍｌ）を加え、室温で約1日攪拌した後、固体をろ取した。その後、減圧下、室温で１日乾燥し、表記化合物（１４５ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を得た。
元素分析値 Ｃ_２０Ｈ_２４Ｎ_７Ｏ_５Ｓ_２Ｃｌ・０．３Ｈ_２Ｏとして
計算値：Ｃ，４４．７１；Ｈ，４．６９；Ｏ，１５．４５；Ｎ，１７．８１；Ｃｌ，６．５４；Ｓ，１１．５６．
実測値：Ｃ，４３．８８；Ｈ，４．５３；Ｏ，１５．４９；Ｎ，１７．９１；Ｃｌ，６．４８；Ｓ，１１．７１．

（実施例１０）
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセトアミド １ エタン１，２−ジスルホン酸塩
２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセトアミド （１６４ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５０ｍｌ）に、エタン−１，２−ジスルホン酸塩（７０ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５０ｍｌ）を５℃で加えた。２０分間、５℃で攪拌した後、１８時間５℃で静置し、その後室温で７時間攪拌した。析出した固体をろ取し、減圧下、室温で約１日乾燥し、表記化合物（１１９ｍｇ、０．１８７ｍｍｏｌ）を得た。
元素分析値 Ｃ_２１Ｈ_２６Ｎ_７Ｏ_８Ｓ_３Ｃｌ・１．４Ｈ_２Ｏとして
計算値：Ｃ，３８．０６；Ｈ，４．６８；Ｏ，２２．２９；Ｎ，１４．９２；Ｃｌ，５．２５；Ｓ，１３．８３．
実測値：Ｃ，３８．１４；Ｈ，４．３９；Ｏ，２２．７４；Ｎ，１４．８３；Ｃｌ，５．３６；Ｓ，１４．５５．

（試験例１ Ｈｓｐ９０ ＡＴＰａｓｅアッセイ）
組換え酵母Ｈｓｐ９０蛋白質（以下、ｒＨｓｐ９０と称する）を用いてＨｓｐ９０ ＡＴＰａｓｅアッセイを行った。酵母Ｈｓｐ９０ ＤＮＡを、常法に従って、酵母ゲノムＤＮＡライブラリーからクローニングした。クローニングした酵母Ｈｓｐ９０ ＤＮＡを、大腸菌発現用プラスミドに組込み、このプラスミドを大腸菌で発現させることによって、ｒＨｓｐ９０を得た。

試験化合物をＤＭＳＯを用いて１０ｍＭになるように溶解した。溶解した溶液を、１ｍＭおよび０．２ｍＭの濃度にＤＭＳＯを用いて希釈した。アッセイバッファー（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、２０ｍＭ ＫＣｌ、６ｍＭ ＭｇＣｌ_２）を用いてさらに１０倍希釈した（各試験化合物溶液の濃度：１００μＭおよび２０μＭ。ＤＭＳＯ濃度 １０％）。

ｒＨｓｐ９０をＴＥバッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ）を用いて２．５３１ｍｇ／ｍＬの濃度に溶解した。溶液を、アッセイバッファーを用いて１２５μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルのアッセイプレートの各ウェルに４０μＬずつ分注した（終濃度１００μｇ／ｍＬ）。

試験化合物溶液を各ウェルに５μＬずつ分注し、次いで、各ウェルの溶液をプレートミキサーを用いて混和した。１００ｍＭ ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ−７６９９）を、アッセイバッファーを用いて１ｍＭに希釈し、各ウェルに５μＬずつ分注した（終濃度１００μＭ）。各ウェルの溶液をプレートミキサーを用いて混和した後、アッセイプレートを３７℃に設定したインキュベータ中で２時間静置した。

ＢＩＯＭＯＬ ＧＲＥＥＮ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＢＩＯＭＯＬ、カタログ番号ＡＫ−１１１）を各ウェルに１００μＬずつ分注し、反応を停止させた。各ウェルの溶液をプレートミキサーを用いて混和し、次いで、３４％ クエン酸ナトリウムを各ウェルに１０μＬずつ分注した。各ウェルの溶液をプレートミキサーを用いて混和した後、アッセイプレートを室温に３０分間放置した。各ウェルの６５０ｎｍの吸光度をＳｐｅｃｔｒａｍａｘＰＬＵＳ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて測定した。

試験化合物およびｒＨｓｐ９０を添加したウェルの吸光度をＡとし、ｒＨｓｐ９０のみを添加したウェルの吸光度をＢとし、試験化合物およびｒＨｓｐ９０のいずれも添加していないウェルの吸光度をＣとし、以下の計算式により試験化合物添加群と試験化合物非添加群との比（Ｔ／Ｃ値）を求めた。計算は、Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ ４．６（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いた。さらに、以下の計算式より阻害率（％）を算出した。

Ｔ／Ｃ＝（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）
実施例１〜６の化合物は、２μＭの濃度で５０％以上のＡＴＰａｓｅ阻害活性を示した。

（試験例２ 抗細胞試験）
２種類の細胞（ヒト乳癌由来細胞株ＳＫ−ＢＲ−３、ヒト肺癌由来細胞株ＮＣＩ−Ｈ４６０）を用いて抗細胞試験を実施した。

各細胞を、それぞれ培地に懸濁し、９６ウェルのマルチウェルプレートにＳＫ−ＢＲ−３は２０００細胞／１５０μＬ／ウェル、ＮＣＩ−Ｈ４６０は５００細胞／１５０μＬ／ウェルで播種した。試験化合物をＤＭＳＯに溶解後、培地で希釈して検体溶液とした（ＤＭＳＯ濃度 ０．５％以下）。播種の翌日、試験化合物を添加していないＤＭＳＯ入り培地（以下、ＤＭＳＯ希釈液と称する。ＤＭＳＯ濃度 ０．５％以下）または検体溶液を、５０μＬずつさらに添加した。検体溶液またはＤＭＳＯ希釈液を細胞に添加した直後と７２時間後に、ＭＴＴアッセイを実施した。ＭＴＴアッセイは以下のように実施した。

５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）溶液を各ウェルに２０μＬずつ添加した。その後、プレートを３７℃、５％ ＣＯ_２下で４時間培養した。プレートを１２００ｒｐｍで５分間遠心した後、培養上清をディスペンサーにて吸引除去した。ＤＭＳＯを各ウェルに１５０μＬずつ添加し、生成されたフォルマザンを溶解した。プレートミキサーを用いてプレートを攪拌することにより、各ウェルの発色を均一にした。各ウェルの吸光度をＯＤ ５４０ｎｍ、ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ６６０ｎｍの条件下、プレートリーダーを用いて測定した。

検体溶液添加の直後に測定したＯＤ値をＳとし、検体溶液添加の７２時間後に測定したＯＤ値をＴとし、ＤＭＳＯ希釈液添加の７２時間後に測定したＯＤ値をＣとし、下記の計算式より各濃度におけるＴ／Ｃ（％）を求めて用量反応曲線を描き、５０％増殖抑制濃度（ＧＩ_５０値）を算出した。
Ｔ／Ｃ（％）＝（Ｔ−Ｓ）／（Ｃ−Ｓ）×１００
以下に結果を示す。

（試験例３ ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍試験）
ＮＣＩ−Ｈ１９７５（ヒト非小細胞肺癌細胞株）を用いて抗腫瘍試験を実施した。

Ｄａｙ０に、１匹当たり４×１０^６個の細胞を雄ヌードマウスの右側腹部皮下に移植した。

Ｄａｙ１０に体重と腫瘍径を測定し、体重と推定腫瘍体積のいずれも群間に統計学的有意差がつかないように、ランダムに群分けした（推定腫瘍体積＝腫瘍長径×腫瘍短径×腫瘍短径／２）。

Ｄａｙ１１に腫瘍径を測定し、投与を開始した。

被験化合物を１．５ｍｇ／ｍＬに調製し、１５ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇで経口投与した。

投与はＤａｙ１１からＤａｙ１４に一日一回、腫瘍径の測定はＤａｙ１１からＤａｙ１４とＤａｙ１７に行った。

Ｄａｙ１７に腫瘍を摘出して、腫瘍湿重量を測定した。

Ｄａｙ１１に測定した腫瘍体積から、比重１として開始腫瘍重量を算出した。

Ｄａｙ１７に測定した腫瘍湿重量から開始腫瘍重量を差し引き、腫瘍増加重量を算出した。

コントロール群（溶媒投与群）の腫瘍増加重量（Ｃ）に対する被験化合物投与群の腫瘍増加重量（Ｔ）の比（Ｔ／Ｃ（％））から、それぞれ被験化合物の腫瘍増殖抑制率（ＧＩ％＝１００−Ｔ／Ｃ（％））を算出した。

コントロール群と被験化合物投与群との間の有意差検定はＥＸＳＡＳ ｖｅｒ．７．５．２．２ （Ａｒｍ Ｃｏｒｐ）を用いて、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｔｅｓｔで実施した。

実施例１〜６の化合物は、５０％以上の有意な腫瘍増殖阻害活性を示した。

（試験例４ ヒト肝ミクロソームによるＣＹＰ３Ａ４阻害試験）
Ｍｉｄａｚｏｌａｍ（基質、和光純薬工業（株））、１’−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｄａｚｏｌａｍ（測定対象物、日本ベクトン・ディッキンソン社）、Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ（ポジティブコントロール、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）、ＮＡＤＰＨリジェネレーションシステムは、ソリューションＡおよびソリューションＢ（日本ベクトン・ディッキンソン社）を使用した。試験化合物、基質、測定対象物およびポジティブコントロールは適当量を秤量後、ＤＭＳＯで溶解させ、必要に応じてアセトニトリルで希釈して用いた。

下記の（１）〜（５）を混合した反応溶液１８０μｌをあらかじめ３７℃にて１０分間温めた。
（１）リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ ７．４、終濃度５０ｍＭ）
（２）精製水
（３）Ｍｉｄａｚｏｌａｍ（終濃度２．５μＭ）
（４）試験化合物（終濃度１０μＭ、陰性コントロール：化合物なし、陽性コントロール：Ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ 終濃度０．１μＭ）
（５）ヒト肝ミクロソーム（終濃度０．０５ｍｇ−Ｐ／ｍｌ）
これにＮＡＤＰＨリジェネレーションシステム（ソリューションＡ／ソリューションＢ／精製水＝５／１／４）２０μｌを添加し反応を開始させた。１０分間インキュベートした後、この反応液５０μｌをサンプリングし、アセトニトリル２００μｌの中へ加えて反応を停止させ、さらに内部標準物質を含むアセトニトリル溶液５０μｌを加えた。

このサンプルの除タンパクのため、Ｃａｐｔｉｖａ（登録商標）（ＧＬサイエンス社）を用いて、９６ｗｅｌｌコレクションプレート（ウォーターズ社）へ移し、このサンプル溶液をＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる定量用サンプルとした。

別途、１’−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｄａｚｏｌａｍ既知濃度（終濃度０〜５μＭ、計５点）のサンプルを調製して、定量用検量線を作成し、サンプル中の１’−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｄａｚｏｌａｍの濃度を定量した。なお、反応はデュプリケートで行った。

陰性コントロールにおける１’−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｄａｚｏｌａｍ生成量を１００％としたとき、各化合物添加での生成の割合を算出し、ＣＹＰ３Ａ４の阻害値を求めた。

化合物１は１５％、化合物２は５８％、化合物３は５％、化合物４は４３％、化合物５は６６％、化合物６は−１８％の阻害率を示した。陽性対照であるＫｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅは８２％の阻害率を示した。

（試験例５ ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍試験）
ＮＣＩ−Ｈ１６５０（ヒト非小細胞肺癌細胞株）を用いて抗腫瘍試験を実施する。

１匹当たり１×１０^７個の細胞を雄ヌードマウスの右側腹部皮下に移植する。

３９日後に腫瘍を摘出し、一辺が２−３ｍｍの小片を作製し、雄ヌードマウスの右側腹部皮下に移植する（Ｄａｙ０）。

Ｄａｙ１４に体重と腫瘍径を測定し、体重と推定腫瘍体積のいずれも群間に統計学的有意差がつかないように、ランダムに群分けする（推定腫瘍体積＝腫瘍長径×腫瘍短径×腫瘍短径／２）。

Ｄａｙ１４に投与を開始する。

被験化合物を０．６５、０．９、１．３ｍｇ／ｍＬに調製し、１０ｍＬ／ｋｇで経口投与する。

投与はＤａｙ１４からＤａｙ３１に一日一回、腫瘍径の測定はＤａｙ１４、Ｄａｙ１７、Ｄａｙ２１、Ｄａｙ２４、Ｄａｙ２８とＤａｙ３１に行う。

Ｄａｙ３１に腫瘍を摘出して、腫瘍湿重量を測定する。

Ｄａｙ１４に測定した腫瘍体積から、比重１として開始腫瘍重量を算出する。

Ｄａｙ３１に測定した腫瘍湿重量から開始腫瘍重量を差し引き、腫瘍増加重量を算出する。

コントロール群（溶媒投与群）の腫瘍増加重量（Ｃ）に対する被験化合物投与群の腫瘍増加重量（Ｔ）の比（Ｔ／Ｃ（％））から、それぞれ被験化合物の腫瘍増殖抑制率（ＧＩ％＝１００−Ｔ／Ｃ（％））を算出する。

コントロール群と被験化合物投与群との間の有意差検定はＥＸＳＡＳ ｖｅｒ．７．５．２．２ （Ａｒｍ Ｃｏｒｐ）を用いて、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｔｅｓｔで実施する。

Claims (15)

1. 一般式（１）
   ［式（１）中、
   Ｒ^１は、メチル基を示し、
   Ｒ^２は、塩素原子を示し、
   Ｒ^３は、メトキシ基を示し、
   Ｒ^４は、メチル基を示し、
   Ｘは、メチレン基を示す。］
   で表される化合物またはその塩。
2. ２−｛４−アミノ−２−［（３−クロロ−４−メトキシ−５−メチルピリジン−２−イル）メチル］−２，７−ジヒドロ−６−チア−１，２，３，５−テトラアザベンゾ［ｃｄ］アズレン−８−イル｝−Ｎ−メチルアセタミド。
3. 請求項２に記載の化合物の臭化水素酸塩。
4. 請求項２に記載の化合物の塩酸塩。
5. 請求項２に記載の化合物のメタンスルホン酸塩。
6. 請求項２記載の化合物のエタン−１，２−ジスルホン酸塩。
7. 請求項１に記載の化合物またはその塩を含有するＨＳＰ９０阻害剤。
8. 請求項１に記載の化合物またはその塩を含有するＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性阻害剤。
9. 請求項１に記載の化合物またはその塩を含有するＨＳＰ９０とＡＴＰの結合阻害剤。
10. 請求項１に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有する医薬。
11. 請求項１に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有する抗癌剤。
12. 請求項１に記載の化合物またはその塩、および薬学的に許容し得る担体を含有する医薬組成物。
13. 請求項１に記載の化合物またはその塩の、医薬製造のための使用。
14. 癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質が過剰発現している癌である請求項１１に記載の抗癌剤。
15. 癌が、ＨＳＰ９０のクライアント蛋白質の変異がみられる癌である請求項１１に記載の抗癌剤。