JP4395368B2 - 細胞殺傷活性を有するカルシウム塩 - Google Patents

Description

本発明は、細胞殺傷活性および抗腫瘍活性を有する薬物を製造するための、カルシウム塩、特にトリフルオロ酢酸カルシウムの使用に関する。

カルシウム塩、特に、グルコン酸カルシウムは、骨粗鬆症および血中カルシウムレベルの上昇が示されるすべての症状を治療するためのヒト用薬剤において使用されている。腫瘍性疾患および過剰増殖性疾患を治療するためのカルシウム塩の使用は、現在まで報告されていない。しかし、可能性のある化学的予防効果が、一部のカルシウム塩、特に、グルコン酸カルシウムについて予見されている。

現在、一部のカルシウム塩、特に、トリフルオロ酢酸カルシウムが、腫瘍細胞に対して選択的な、驚くべき細胞殺傷活性を有することが見出されている。この活性は、様々な起源（結腸、肺、膵臓、乳房、前立腺、肝臓、胃および卵巣）のヒトおよびマウス腫瘍の細胞株培養物、例えば、ＨＴ２９,Ｋａｔｏ,Ｃ-２６,Ｈ Ｇ Ｃ-２７およびＰＡ-１細胞で実証されている。

トリフルオロ酢酸および酸化カルシウムまたは、水酸化カルシウムから従来の方法で調製される。且つ、水溶液中にて範囲０．００１〜１．５ｍｇの量で各ウェル（約１０，０００細胞）に添加されるトリフルオロ酢酸カルシウムによれば、腫瘍細胞の９０〜９５％乃至それ以上が死滅する。同一条件下において、正常なヒト細胞株は、トリフルオロ酢酸カルシウムに起因しうる細胞殺傷効果にほぼ非感受性であるか、または少なくともかなり感受性が低いということが判明した。それより低い程度であるが、薬剤として許容される酸、例えば、酢酸,硝酸,塩化物等の他のカルシウム塩で同様の効果が得られている。しかし、トリフルオロ酢酸塩は、その有利な特性を考慮に入れると、好ましいと思われる。

腫瘍の治療での使用については、トリフルオロ酢酸カルシウムまたは他のカルシウム塩は、非経口的に、例えば筋肉内、静脈内または皮下経路によって、範囲０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与することが好ましいだろう。この目的のために、カルシウム塩は、任意に従来の賦形剤または溶媒を利用して、無菌懸濁液または溶液の形態で適切に配合されるだろう。しかし、経口経路または腫瘍病変部での局所注入などの他の投与経路もまた可能であるだろう。カルシウム塩、特に、トリフルオロ酢酸カルシウムは、補足的な、相乗効果的な、またはそうでなければ有用な活性を有する他の抗腫瘍薬と組み合わせて使用することができる。

また、腫瘍の他に細胞増殖の抗増殖活性または制御が必要とされる他の疾患も治療することができる。

トリフルオロ酢酸カルシウムに関して行われた実験の結果を以下に示す。
［マウスおよびラットにおける毒性］
腹腔内経路によりＢａｌｂ／ｃマウスに急性投与量２００ｍｇ／ｋｇで投与されるトリフルオロ酢酸カルシウムは、注目に値する毒性効果を全く示さない。

腹腔内経路により再度、投与量１００ｍｇ／ｋｇで４週間、亜慢性処置をしたが、病理学的効果は全く生じなかった。同様に、皮下経路による投与量１０ｍｇ／ｋｇでの４週間の処置は、十分な耐容性を示した。

ＳＤラットにおいて、静脈内経路により、トリフルオロ酢酸カルシウム２００ｍｇ／ｋｇを急性投与または亜急性投与した後に、殺傷効果は認められなかった。

［ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞殺傷性］
トリフルオロ酢酸カルシウムの細胞殺傷性が、ヒト悪性腫瘍の細胞株１３個と良性腫瘍の細胞株４個で決定された。

濃度１００、５０、３７．５、２５、１５、１２．５、１０および６．２５ｍｇ／ｍｌのＣａ（ＣＦ₃ＣＯＯ）₂溶液２０μｌを９６ウェルプレートに添加し、それぞれが培地１００μｌ中で１０，０００細胞／ウェルを含む。

それらを３７℃で一晩放置し、その後、ＭＴＴ（ジメチルチアゾール−０．２ｇ／１００ｍｌＰＢＳ）４０μｌを添加し、３７℃で４時間放置する。

吸引後、ＳＤＳ １００μｌを添加し、それらを３７℃で１時間放置する。そのプレートを５４０ｎｍおよび６９０ｎｍで読み取る。

試料の毒性を、処理細胞を有するウェルの吸光度値とコントロール細胞を有するウェルの吸光度値との比として評価する。

生細胞のミトコンドリア酵素は、ＭＩＴテトラゾリウム塩を不溶性ホルマザンに転換することができることから、ＭＴＴ試験は、生細胞のみを測定する比色定量法である。

その結果を表１にまとめる。

［結果］
異なる組織型および起源のヒト悪性細胞株によって、トリフルオロ酢酸カルシウムに対する細胞毒性反応が、用量によるが様々な細胞株間で異なり、常に非常に高い細胞死レベルに達することが実証されている：８／１４が死滅率１００％に達し、６／１４が範囲８０％〜９０％の値に達した。

これらの結果は、２４時間のインキュベーション後に得られた。その分子量が非常に低いことから、その塩の最大限に急速な代謝回転を考慮に入れて、６時間後にチェックを行った。

収集されたデータから、低濃度では抗腫瘍活性がしばらくして生じることが示されている。濃度が上昇すると、その塩の非特異的毒性が現れる。そのことから、高投与量での正常細胞に対するその低毒性の説明可能である。

［実験用マウスの腫瘍］
Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、Ｃ２６（マウスの結腸腺癌）の２５，０００細胞／マウスを接種した。

接種して４日後、動物にトリフルオロ酢酸カルシウム５ｍｇ／ｋｇを皮下投与した。対照群には生理食塩水のみを投与した。処置は毎日行った。腫瘍直径をキャリパゲージで測定した。接種して２０日目に、動物を殺し、腫瘍を取り除き、計量した。その結果を表２に示す。対照マウスにおける腫瘍の平均重量および平均サイズは、処置群の腫瘍の４倍であった。腫瘍の発生に関するデータもまた有意であった：処置マウスで４０％であるのに対し、対照サンプルでは１００％であった。

［イヌの自然発生腫瘍の処置］
家畜、特にイヌにおける自然発生腫瘍について行われる実験は、ヒトにおける活性が予測される信頼性のあるモデルであるとみなされている(D. M Vail et al., Spontaneously occurring tumors in companion animals as models for drug development. Anticancer drug development guide: preclinical screening, clinical trials and approval. Edited by B. Teicher Humana Press Inc. , Totowa, NJ)。

ペット（愛玩動物）の腫瘍は、サイズ、細胞動態および挙動の点から、齧歯類動物よりもヒト腫瘍に類似している。

乳癌を有するイヌ６匹と悪性リンパ腫を有するイヌ一匹を処置した。トリフルオロ酢酸カルシウム１００〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投与量で静脈内投与により処置した。動物間でいくらかのばらつきはあるが、副作用、特に嘔吐の発生に応じて、初めに最高投与量（１００ｍｇ／ｋｇ）を１〜３日間投与し、続いて、最低投与量（１０ｍｇ／ｋｇ）を数日間投与した。次いで、１週間に２回投与しただけであるが、最高投与量を再び導入した。回数は少ないが（約２０日で９〜１０回の投与）、数匹の動物を常に最高投与量で処置した。

その結果は、予備的な類のものであり、限定された数の動物で得られた結果であるが、トリフルオロ酢酸カルシウムのかなりの抗腫瘍有効性が示されている。実際に、実験から以下のことが報告された。

１．その初期体積の２０％〜５０％を超える体積の主な腫瘍塊の減少。この減少は、最初の数回の投与後に明らかとなり、従来用いられていた処置サイクル（一般的に３週間）の最後にピークに達した。

２．体積の減少は一般に、腫瘍塊に関わる他の現象、例えば、融解壊死，周囲組織との接触（接着）の減少，壁の被包または外部へ壊死物が漏出する破裂を伴った。

３．転移発生の阻止、場合によっては、壊死、それらの消失（吸収または石灰化）が認められた。

４．Ｃａ（ＣＦ₃ＣＯＯ）₂は、一日の静脈内投与量１００ｍｇ／ｋｇでさえ、完全に安全であることが判明した；２匹の動物で認められた唯一の副作用は、薬物を投与した直後の嘔吐であり、体温のわずかな上昇（１℃を超えない）であった。

特別な注意を払って、肝機能および腎機能パラメーターおよび凝固時間をモニターして行われる毒性試験によって、処置動物におけるそれらのパラメーターの病理学的変化（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）は示されなかった。

［臨床ケース］
進行している疾患状態の、かつ拡散転移している、乳癌（３ケース）,大腸癌（３ケース）および子宮ガン（１ケース）の５６〜６３才の患者５名に範囲１０〜２００ｍｇの投与量で、トリフルオロ酢酸カルシウムを皮下投与した。疾患状態が高度に進行していたために、患者が死に至った大腸癌の１ケースを除いては（明らかな倫理的理由から、同情的プロトコルに基づいて、すべてのケースを処置した）、治療反応は、客観的面（腫瘍塊の約１０〜４０％の減少、腹水および転移性リンパ節の減少および消失、およびＣＡ１９．９およびα−フェトプロテインなどの腫瘍マーカーの減少）、と主観的面（気分の改善、痛みの減少および消失、および仕事および社会生活への復帰）のどちらにおいても、驚くべきものであった。死亡した患者のケースでさえ、癌性悪液質および心肺合併症が悪化したために死亡したが、腫瘍塊の減少が認められた。

Claims (3)

1. 抗腫瘍剤を製造するためのトリフルオロ酢酸カルシウムの使用。
2. 活性成分としてトリフルオロ酢酸カルシウムを含有する抗腫瘍剤組成物。
3. さらに賦形剤を含む請求項２の組成物。