JP3113665B2 - 微生物乾燥培地 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、微生物を培養するのに有用な装置に関す
る。特に、水によって再構成しうる乾燥培地に関する。
更には、酸素を要求する多くのカビ類のような微生物を
生育するための装置の使用に関する。

［従来の技術］ 微生物培地は、栄養素及び他の微生物の生育に必要な
他の成分を含む水性溶液にゲル化剤を分散することによ
って製造することができる。

残念なことに、ゲル化剤を使用する従来のものは、最
終の使用者にとって不便であった。例えば、水とかミル
クのような液体中の微生物の数を決定するために標準の
プレート計測（plate count）又は、ポアプレート（pou
r plate）法を実施するときに、ゲル化剤として寒天を
使用することは、特に不便であり、また時間が掛かる。
寒天を含む培地は、これは一般的には、塊状（bluk）で
製造されてきており、早目に殺菌されているが、沸騰水
又は、蒸気中で溶融しなければならない。この熱い培地
はそれから注意深く冷却され、約45℃とする。一連の希
釈した試験サンプルの培地を作り、それらの希釈したも
ののアリコートをペトリ皿に入れる。一部冷却されてい
るが、なお液状の培地は、それから各皿に注がれ、試験
サンプルのアリコートと混ぜ合わされ、固化する。培養
後、各皿で生育しているコロニーは、可視的観察により
計測される。試験サンプル中に元々存在していたコロニ
ー形成単位（“CFU"即ち、コロニーを形成できる微生
物）の数が、決定される。

最終の使用者が寒天含有培地を操作する必要の無いも
っと簡単な方法が存在する。そしてこれは、重要なこと
に、より少量の培地ですむ。例えば、米国特許第456578
3号は、細菌試験において使用者が寒天含有培地を操作
することなしに標準プレートカウントを行うことのでき
る装置を開示している。この装置は、耐水性基質にさき
だって、粉末乾燥培地を含んでいる。この装置を微生物
を含んでいる疑いのある水性サンプルで培養したとき、
この培地は、再構成（reconstituted）されて、サンプ
ルに存在する微生物の定量培養に適切な均一ゲル状培地
となる。そのような装置のひとつ（Petrifilm（登録商
標）生育培地、3M社ミネソタ州セントポール）は、細菌
試験にとくに有用である。

製酪業、フルーツジュース、ワイン及びビールのよう
な種々の業界では、細菌だけではなく、カビも又試験す
る必要がある。業界では、微生物測定装置を論ずると
き、細菌試験とカビ試験とを通常は区別していないが、
当業者にとってカビ試験は、細菌試験よりもしばしばよ
り困難であることが知られている。困難である理由の一
つは、カビの中には細菌よりももっと酸素を要求するも
のがあることである。したがって、装置（例えば、覆わ
れている装置又はそうでなければ、外界から密封されて
いるもの）のなかにはカビ試験に不適切なものがある。
更に、カビの中には個々に数えられるコロニーではなく
培地全面に均一に生育する傾向があるものがあるからで
ある。

当業者に知られている微生物の生育装置及び方法は、
一般に、培地へ空気を適当に供給するために外界に解放
された環境下（例えば、ペトリ皿中）でか、または、培
地の乾燥を防ぐため密封された環境下で培養することを
含んでいる。どちらの方法も大量の水及び培地を使用す
るときには一般的には問題ない。しかしながら、ペトリ
フィルム（登録商標）生育培地のような比較的少量の水
及び培地が使用されるときには、使用者は以下の問題に
当面することになる。すなわち、適当な空気の供給がさ
れるようになっている装置は、水が蒸発することがで
き、したがって培養中に培地が乾燥してしまう。一方、
装置が密封されているときは、酸素を要求する微生物の
生育を維持するのに空気の供給が不十分となる。

この問題に対するひとつの解決方法は、水性溶液の分
析に使用される“Yeast and Mold Swab Sampler"Millip
ore Corp.社（マサチュセッツ州ベドホード）に見られ
る。この装置は、水和栄養培地を含む吸収性のパッドに
結合した微小な孔を有するフィルターを支持しているプ
ラスチックのタブからなっている。水性のサンプルは、
フィルターを通過してパッドに入り、これによって、微
生物をフィルター上に分離し、一方、吸収性のパッド及
び培地を水和する。この装置はその後、コンテナを密封
するようになっているプラスチックのタブと共にコンテ
ナに乗せる。コンテナ中には酵母及びカビの生育をさせ
る十分な空気が存在する。養分は、培地からフィルター
を通過するようにされていて、微生物をフィルター中で
生育させる。

微生物に対する水又は養分の透過障壁（例えば、膜）
を含む装置及び方法のいくつかは、微生物の生育に有用
であることが知られている。例えば、米国特許第3,814,
670号、第3,843,452号及び第4,250,256にはそのような
装置が開示されている。しかしながら、いずれの装置に
も障壁そのものが生育する微生物に空気を適切に供給す
るのに使用されているようには思えない。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、微生物、特にカビのような好気性微生物を
生育するのに有用な装置に関する。比較的少量の培地を
採用するときには、培地の乾燥及び汚染を防止するため
に装置を密閉することができる一方、さらに培地中の好
気性微生物の生育を助けるために培地への空気の適切な
供給を与える。

本発明の装置は、好気性微生物を生育する生育域を有
する本体要素から成り、この本体要素は、 （１） 上面及び下面を有する防水物質 （２） 上面及び下面を有しており、下面は、前記物質
の上面の少なくとも生育域に固定されており、かつ生育
域を覆っている、その端を空気に実質的にさらしている
空気透過性膜、 及び （３） 前記膜の上面の少なくとも生育域に固定されて
おり、かつ生育域を覆っており、一つ以上のゲル化剤及
び一つ以上の微生物生育成分からなる群から選ばれた少
なくとも一つの成分を含んでいる冷水で再構成しうる乾
燥培地 から成っている。

好ましくは、本装置は、乾燥培地の生育域を覆って、
生育域の汚染及び乾燥を防止する覆い手段を更に含む。

本発明装置中の空気透過性膜の存在は、上層の培地に
空気を適切に供給することによって前記問題を解決す
る。本発明装置は、容易に手工業的に実験室器具を用い
て製造することができる。本発明の好ましい装置は、米
国特許第4565783号に開示された装置と同様の方法で使
用できる。すなわち、本装置の生育域中の培地は、微生
物を汚染する疑いがあると見られている水性サンプルで
乾燥培地を再構成するために水和することができる。本
装置は、それから覆い手段で覆い、培養し、可視的に観
察して生育したコロニーの数を決定することができる。

本装置は、従来のペトリ皿中の寒天培地に生育するコ
ロニーと同様の方法で、培地中で生育しているカビのコ
ロニーのようなコロニーの計測ができる。更には、本発
明の装置を使用した分析で得られたコロニー数は、標準
寒天試験で得られたコロニー数とよく一致する。この装
置は、標準の寒天試験で使用されるよりもはるかに少な
い培地を使用しており、小型で軽量という特徴を更に有
している。

更には、好ましい装置は、使用後より安全で、より迅
速に清掃可能なディスポーザブルのものである。

本明細書においては、“空気透過性”とは、その端を
空気に実質的にさらしたとき、水平方向に（すなわち、
その表面に平行に）空気を完全に透過することができ
て、培地中の好気性微生物の生育を助けるために上層の
培地に空気を適切に供給する膜を意味する。

“冷水再構成可能”とは、水中で懸濁可能の物質例え
ば、室温の水で分散、溶液又はゲルを形成するものを意
味する。

“冷水可溶”とは、室温の水で溶液又はゲルを形成す
る冷水再構成可能の物質を意味する。

“生育域”とは、そこで微生物が生育する装置の各部
品の領域を意味する。

“粉末”とは、例えば、養分及び／又はゲル化剤の粒
子の物質で本発明の装置の使用に適当な平均粒径例え
ば、平均粒径約400μｍ未満の粒径を有する物質を意味
する。

“再構成培地”とは、水又は水性試験サンプルで再度
水和された冷水再構成可能培地を意味する。

“微生物及び水蒸気に実質的に不透過”とは、 ｉ）船荷、貯蔵及び装置の使用の間における、下層の培
地の好ましくない汚染を防止し、及び ii）培地の乾燥を防止する、即ち、再構成された培地に
おいて、培養期間中微生物の生育を助けるのに適当な水
和の水準を維持する、覆い手段を意味する。

“実質的に無水”とは、おおよその周辺の水分量以下
の水分量を意味する。

第１図を参照して本発明の好ましい装置を３つの特
徴、即ち、防水物質12、空気透過性膜14、及び乾燥培地
16を有する本体10として示す。これらは、いかなる適当
な関係に調整できるけれども、第１図は、これらの部品
の一つの好ましい実施例を示す。ここで、空気透過性膜
14は、物質12の上面のすくなくとも生育域に結合し、か
つこれを覆っている。乾燥培地16は、膜14の上面のすく
なくとも生育域に結合し、かつこれを覆っている。乾燥
培地の船荷、貯蔵及び培養期間中覆っている覆い手段18
も又、第１図に示すように、本体10の一つの端にそって
ヒンジ様に接合している。

覆い手段は、任意のものであるが、本発明の装置にお
いてはあるほうが好ましい。適当な防水物質、乾燥培地
及び覆い手段は、米国特許第4,565,783号に開示されて
いるものを含む。

物質12は、好ましくは、ポリエステル、ポリプロピレ
ン、ポリスチレンのような物質でできた比較的堅い防水
フィルムであり、これは吸収せず、そうでなければ、水
によって悪影響を受けないものである。厚さ約100μｍ
から約180μｍのポリエステルフィルム、厚さ約100μｍ
から約200μｍのポリプロピレンフィルム、厚さ約300μ
ｍから約380μｍのポリスチレンフィルムが良く機能す
ることが分かった。他の適当な物質は、ポリエチレン又
は他の防水被覆を有する紙を含む。ポリエチレン被覆紙
物質の適当な例は、“Schoeller Type MIL"フォトプリ
ント紙（Schoeller Pulaski、ニューヨーク）である。
物質を通してコロニーを観察しようとするならば、物質
12は透明であっても良い。

空気透明性膜14は、覆い手段が培地上に位置するとき
培地16に適当な空気の供給を許す。

このため、膜14は、培地中の好気性微生物の生育を助
けるのに役立つ。生育に加えて又は生育以外の理由で微
生物が空気を必要とする場合にも又有用である。例え
ば、以下に詳細に述べるように、微生物コロニーを顕わ
す染料を酸化するような場合である。膜は空気透過性で
あり、及び実質的にその端を空気にさらしているため
に、空気は膜の端から入って、水平的に膜を通って、培
地中に入り込むことが可能である。特定の膜にとって、
空気の水平的通過は、膜の空気垂直透過性（即ち、膜の
上面及び下面への正常方向での透過性）を評価すること
によって最も便利に予測できる。空気垂直透過性は、い
かなる適切な手段でも決定することができる。本明細書
のためには、空気透過性は、Gurley densometerを使っ
て50mlの空気を膜を通過させるのに要する時間秒を測定
するASTM−Ｄ−726−58方法Ａによって決定する（即
ち、一般的には膜それ自体で、いかなる接着被覆、培
地、物質無しで）。この透過性をここではガーレイポロ
シティ（Gurley porosity）値と呼ぶ。膜は、Gurley po
rosity値約100秒未満を有するのが好ましく、更には、5
0秒未満が好ましく、最も好ましくは、25秒未満であ
る。

当業者であれば、適切な膜の厚さの範囲は、膜の空気
及び水の透過性に部分的に依存するということを認める
であろう。一般的には一様な厚さ約10μｍから約500μ
ｍが適切である。一様な厚さ約20μｍから約100μｍが
好ましい。一様な厚さ約40μｍから約80μｍが特に好ま
しい。

適切な膜には、これに限定される事なく、微小な孔を
有するフィルム及び微小な孔を有する合成及び天然材料
の不織布を含む。このような膜は、容易に入手可能であ
り、これらの製造方法は、当業者によく知られている。
本発明の装置に使用される好ましい膜は、例えば、米国
特許第4,539,256号の実施例23に開示されているように
製造された微小な孔を有する膜を含む。これらの好まし
い膜は前記米国特許第4,539,256号に開示されている製
造方法中で使用に適切ないかなるポリマーでできていて
もよい。特に好ましいものは、ポリプロピレン、ポリエ
チレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテ
レフタレート、ナイロン、弗化ポリビニリジン及びこれ
らの共重合体又は配合物である。好ましい膜の例は、Ex
xaire（登録商標）空気透過性ポリオレフィンフィルム
（厚さ50μｍ、Gurley porosity値約50秒、エクソン社
（Exxon Chemical Co.）ポリマー部門製造番号10B04と
して入手可能）;Exxaire（登録商標）空気透過性ポリオ
レフィンフィルム（厚さ50μｍ、Gurley porosity値約1
00秒、エクソン社ポリマー部門製造番号7B03として入手
可能）；微小な孔を有するポリエチレンフィルム（厚さ
20μｍ、Gurley porosity値約25秒）及びバッキングと
してレイヨン不織布を有し、テープとして即ち、接着剤
を有して厚さ125μｍで、Gurley porosity値約0.1秒の3
M Micropore（登録商標）テープ（ミネソタ州セントポ
ール、3M社製製造番号1530）を含む。

この膜は好ましくは、第５図に示すように、微生物コ
ロニーの計測を容易にするため、その上に可視的な格子
模様を有する。

乾燥培地16に関しては、冷水再構成可能ないかなる適
切な形態の乾燥培地も使用できる。そのような培地はよ
く知られている。一般的には、本発明の装置においては
冷水再構成可能な乾燥培地には一つ以上のゲル化剤及び
微生物を生育する一つ以上の養分からなる群から選ぶ少
なくとも一つの成分を含む。

乾燥培地16で使用する適切なゲル化剤は、冷水可溶な
天然及び合成ゲル化剤を含む。アルギン、カルボキシメ
チルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、グアガ
ム、ローカストビーンガム（locust bean gim）、キサ
ンタンガムのような天然ゲル化剤、ポリアクリルアミド
のような合成ゲル化剤が一般的には適当である。ゲル化
剤の選択は、本発明の装置がカビ試験で使用するときに
は特に重要である。

グアガムのようないくつかのゲル化剤は、ある種のカ
ビ試験で用いるいときはゲル化剤を代謝するカビの能力
のために適切ではない。適切なゲル化剤は、装置の使用
目的と矛盾せず本発明が教示するところにしたがって選
択することができる。

好ましいゲル化剤は、ローカストビーンガム及びキサ
ンタンガムであり個別でも有用であり、好ましくはこれ
らの組み合わせを含む。

前述したとおり乾燥培地は、ゲル化剤のみを含んで、
養分を含まなくても良い。微生物を含んでいる疑いのあ
る水性サンプルの添加の前に、使用者は生育する微生物
の型に仕立てられた養分を添加することができる。例え
ば、乾燥粉末養分をエタノール、気体クロロフルオロカ
ーボンのような急速に蒸発する液体で添加することがで
きる。他の例においては、乾燥粉末養分を水性溶液に添
加、例えば、分散又は溶解することができる。どちらの
場合にも、養分懸濁液又は溶液のアリコートが、培地の
表面に添加されたとき溶液は、ゲル化剤に豊富な養分を
残して蒸発してしまう。

逆に、乾燥培地は養分のみを含み、ゲル化剤を含まな
いことができる。ゲル化剤は、一般に、個別のコロニー
を可視化し、計測し、単離するのを望む場合に必要なだ
けである。最近同定試験又は抗生物質感応試験（antibi
otics susceptibility）のような多くの微生物試験にお
いて、ブイヨン培地が使用される。粘性ゲルは必要では
ない。このような試験を実施する装置において、ゲル化
剤は、省略される。

乾燥培地で使用に適した特別の養分は、その装置で生
育する微生物に依存するであろうし、当業者は容易に選
択するであろう。一般的には、そのような養分は冷水可
溶である。

乾燥培地は染料、架橋試薬又は抗生物質のような試薬
のような、どのような他の成分を含むことができる。例
えば、ある場合には、乾燥培地又は、以下に詳細に述べ
るように、接着乾燥培地の接着剤に染料を含めておくこ
とは好ましい。適当な染料は、生育する微生物に代謝さ
れるか、そうでなければ微生物と反応するものを含む。
そのため、容易に可視化するためにコロニーを発色し、
又は、蛍光させる。このような染料には、トリフェニル
テトラゾリウムクロライド、ｐ−トリルテトラゾリウム
レッド、テトラゾリウムバイオレット、ベラトリルテト
ラゾリウムブル−及び関連する染料並びに５−ブロモ−
４−クロロインドリルホスフェート二ナトリウム塩を含
む。他の適当な染料はニュートラルレッドのような微生
物の生育期間中のpH変化に敏感なものを含む。

幾つかの場合において、再構成したときに、ストリー
クによって培養するのに十分な堅さを有する乾燥培地を
形成することが好ましい。ストリークしうる培地を形成
するために有効量を適切な架橋試薬をゲル化剤を含む乾
燥培地中に添加することができる。適切な架橋試薬は、
実質的には目的の微生物の生育に影響を与えない。適切
な架橋試薬の型及び量は、当業者に容易に選択可能であ
る。例えば、グアガムとともに、ポタシウムテトラボレ
ート、アルミニウム塩、又はカルシウム塩のような架橋
試薬が好ましく、有効量、例えば、乾燥培養地の1.0パ
ーセント未満添加することができる。乾燥培地は、任意
にある種の微生物試薬を実行するのに必要な試薬を含め
る事ができる。例えば、抗生物質感応試薬を実行するた
めに抗生物質を含める事ができる。微生物同定にとっ
て、特定の型の微生物の存在下、色変化を受ける試薬を
含めることができる。酵母やカビのサンプルを細菌の干
渉なしに生育するためにクロラムフェニコール、クロル
テトラサイクリン、酒石酸又は適当なペニシリンのよう
な細菌静菌剤又は細菌殺菌剤を乾燥培地中に含めること
ができる。

本発明の装置は、好ましくは、第１図に示すような培
地のすくなくとも生育域を覆うようにされているカバー
シート18のような覆い手段を有する。覆い手段は好まし
くは、コロニーを計測できるようにするため透明であ
り、微生物及び水蒸気に不透過である。一般的に、物質
12を作るのに使用されるのと同様の材質でできている。
空気は、空気透過性膜14を通って培地に供給されるの
で、覆い手段は、空気を培地に移動できるように選択す
る必要はない。現在好ましい覆い手段としての物質とし
ては、ポリプロピレン、例えば、40μｍ厚さの二軸配向
ポリプロピレンフィルムである。

覆い手段は、被覆なしでもよいし、例えば、培地上の
覆い手段を密閉するよう乾燥培地に面している表面上
を、感圧接着剤層で被覆していても良い。更に、第２図
に示すようなカバーシート18のような覆い手段は、乾燥
培地に面する表面上を接着剤20′及び粉末22′で被覆し
てもよく、これらは、接着粉末培地（以下に詳述する）
の接着剤20及び粉末22と同じであっても良く、異なって
いても良い。カバーシート18を被覆するには、乾燥培地
に面している全面を覆っても良いが、好ましくは、培地
の生育域を覆おうとするすくなくとも一部分の表面を覆
う。このような被覆されたカバーシートは、乾燥培地単
独よりもゲル化剤を有している装置のほうが特に好まし
い。

本発明の装置は、また培地と覆い手段との間に、培地
の生育域を形成し、水性サンプルを培地の生育域に閉じ
込めるための両方に役立つウェル（well）を形成するた
めにスペサー手段を含んでもよい。スペサー手段は、第
２図に円形のウェル26を形成しているスペサー24として
示す。穴26の壁は、培地の生育域を覆う事前に決定され
た大きさ及び形のウェルを提供する。スペサー24は、生
育域の大きさ及び培地に乗せるサンプルの大きさに応じ
た所望の容量、例えば、1,2,3ml、ウェルを形成するの
に十分な厚さを有するべきである。好ましくは、スペサ
ー24は、泡入りポリエチレン密閉容器でできているが、
疎水性（濡れない）で、微生物に不活性で、殺菌可能な
物質が使用できる。

本発明の装置は、種々の技術を用いて製造することが
できる。一般的には、装置は、手工業的に普通の実験用
器具を用いて以下に詳細に述べるとおり製造することが
できる。

第２及び第４図は、本発明の装置を開示する。装置28
は、上面及び下面に防水物質12を有する本体要素（memb
er）10′を含む。膜14の底面は、物質12のすくなくとも
生育域に固定し（例えば、接着剤によって固定し、そう
でなければ、接触し）ている。好ましくは、物質12の上
面は、膜14を固定するのに使用される接着層30によって
覆われている。接着層30は、好ましくは、感圧接着剤で
あり、水に不溶であり、実質的に目的とする微生物の生
育を阻害しない。好ましい接着剤は、接着層20及び20′
に関連して以下に述べるものを含む。しばしば、適切な
物質は、既に入手可能であり、適切な接着剤で被覆され
ている。しかしながら、もし希望するならば、適切な物
質を選択し、適切な接着剤で被覆（例えば、ナイフコー
ターknife coater）することができる。膜14を物質12に
固定する方法は、接着層30の性質に依存する。例えば、
もし、接着層が感圧接着剤であれば、膜14は、接着層30
の上に位置し、圧し下げられ、それによって、その場所
に接着することができない。

乾燥培地16は、いかなる適切な方法でも膜14の少なく
とも生育域に固定し、被覆することができる。以下にも
っと述べる接着粉末培地及び被覆培地は、培地16の好ま
しい形態であり、培地16を膜14に固定する方法は、培地
16の形態による。

第２及び３図に示す接着粉末培地は、接着剤の層20を
膜14の上表面の少なくとも生育域に形成することによっ
て、製造し、固定する。接着剤は、好ましくは、感圧接
剤剤であり、水不溶で、実質的に目的とする微生物の生
育を阻害しない。好ましくは、接着層20は、湿ったとき
に微生物コロニーを観察することができるよう完全に透
明である。

好ましい感圧接着剤は、モル比90/10の２−メチルブ
チルアクリレート／アクリル酸の共重合体（3M社スペシ
ャリティ−ケミカル部門セントポール、ミネソタ州）で
ある。他の使用し得る好ましい感圧接着剤は、モル比95
/5のイソオクチルアクリレート／アクリル酸の共重合体
（3M社スペシャリティ−ケミカル部門セントポール、ミ
ネソタ州）及びシリコーンゴムである。水にさらしたと
き、ミルク状になる接着剤は、あまり好ましくはない
が、不透明物質と組み合わせて又はコロニー可視化が不
要の場合には使用することができる。

前記したように、コロニーの可視化のために染料を含
めるときには、一般的には、粉末中によりも接着剤中に
含めることが好ましい。接着剤は、膜14の上表面に被覆
（例えば、ナイフコーター）され、好ましくは、粉末粒
子20の平均直径未満である厚さで、層20を形成する。一
般的には、十分な接着剤は被覆されて粒子を膜14に接着
するが、粒子が完全に接着剤中に埋め込まれる程たくさ
んではない。一般的には、厚さ５μｍから12μｍまでの
接着層が適切である。

接着粉末培地を形成するために、冷水可溶粉末22の層
は、それから実質的に一様に接着層20のすくなくとも生
育域に接着される。

粉末22は、乾燥培地に関して、前記した成分を含んで
も良い。好ましくは、ゲル化剤が粉末22中で培養される
とき、培地に置かれた水又は水性サンプルの事前に決定
された量、例えば１から3mlの量が適切な粘度、例えばB
rookfield Model LVFビスコメーター25℃60rpmで約1500
cps以上を有する再構成培地を形成するような量で培養
される。

この粘度をもつ培地は、培養中の装置の取り扱い及び
組み立てが便利で、培地中に顕著なコロニー形成を提供
する。例えば、表面積20.3cm²で実質的に一様に広げら
れた粉末グアガム0.025gから0.050gが、１から3mlの水
性サンプルで再構成したとき、完成な粘性培地を提供す
る。粉末粒子の大きさは、単位面積当たりの被覆重量を
制御するのに使用することができる。例えば、100メッ
シュグアガムは、約0.05g/20.3cm²の重量を被覆し、400
メッシュグアガムは、約0.025g/20.3cm²の重量を被覆す
る。

接着粉末培地中での好ましいゲル化剤対養分の比は、
装置で生育する微生物によって決定される。しかしなが
ら、一般的な目的のためには、約４対１から約５対１
（重量比で全体のゲル化剤対全体の養分）が好ましい。

接着粉末培地中での粉末22は、実質的に一様な層の適
用に適切ないかなる手段によっても接着層20に適用する
ことができる。好ましい方法は、Shaker型装置又は粉末
被覆器の使用を含む。

他の好ましい型の乾燥培地、即ち、被覆培地は、実質
的に無水被覆として製造され、直接膜の上表面のすくな
くとも生育域に被覆する。被覆培地は、一般的には、膜
へ自己接着性であり、膜と培地とのあいだに接着層を必
要としない。

被覆培地は、ゲル化剤及び／又は養分を含む溶液を作
ること、その溶液を膜に被覆する（例えば、ナイフコー
ナーを使用すること）こと、及び溶液の被覆を乾燥させ
ることによって製造することができる。前記した適切な
ゲル化剤に加えて、寒天が、被覆培地で使用するための
適切な冷水再構成可能ゲル化剤である。ゲル化剤は又、
膜へのその被覆を容易にするために培地溶液を厚くする
のに役立つ。実施上の目的のためには、ゲル化剤の量
は、培地に被覆させるのに実際的ではない点まで溶液を
厚くさせるよりも少ない量が好ましい。

本発明の装置は、スペサー手段及び好ましくは、覆い
手段を含んでも良い。

任意のスペサー手段は、膜16とカバーシート18の間に
適切な手段によって固定する事ができる。例えば、それ
は、接着層20に介して膜14に接着することができる。こ
のスペサーは、それを感圧接着層20を対して押し付ける
ことによって固定することができる。

カバーシート18は、好ましくは、ヒンジ様にスペサー
24の一端によって、接着することができ、任意に、接着
層20′及び粉末22′で被覆する。反対に、カバーシート
18は、第３図に示すように、物質12に直接接着すること
ができる。

本発明の装置は、生育する好気性微生物、特に好気性
カビに特に有用である。一般的には、本発明の装置を使
用することは、従来の接種、培養及び単離及び／又は分
析を含む。

本発明の好ましい装置を第２及び４図の装置、ここで
培地は、粉末／接着型である、を参照して以下に述べ
る。

第２及び４図の装置を使用するために、透明カバーシ
ート18は、使用者によって引き戻され、次に事前に決定
された量の水又は水性試験サンプルを培地の生育域内の
乾燥培地上に置く、例えば、ピペットする。この培地
は、示した例においては、スペーサー24によってつくら
れた穴26として示す。この乾燥培地は、再構成される。
カバーシート18は、それから再構成培地に再度置かれ、
サンプルを生育域に平らに（例えば、重みのあるプレー
トを被覆された装置の上面に置くことによって）広げ
る。装置はそれから、微生物コロニーを生育させるため
に適切な温度及び適切な時間培養させる。培地中で生育
中のコロニーは、透明カバーシート18を通して計測する
ことができる。もし、望むならば、後の同定及び／又は
分析のために、コロニーを培地から除去することができ
る。

第３図に示す装置11の例は、スペサー24が第３図に現
れていない点を除けば、第２図のそれと同一である。こ
の例を使用するために、テンプレート（例えば、生育域
を形作る円形のリング）を一時的に、カバーシート18の
上に適用することができる。

以下の例は、発明を説明するためのものである。これ
らは、本発明を限定するものではない。

［実施例］ 実施例１ 装置の製造 ストレップの微小孔を有するポリエチレン膜、巾20.3
cm長さ30.5cm及び厚さ約50μｍ［微小孔を有するポリエ
チレン、Advent（登録商標）フィルム製造番号70−0000
−4011−６、3M社、セントポール、ミネソタ州として入
手できる］を手でポリエチレンバックの感圧接着テープ
（巾19.7cm長さ30.5cm及び厚さ約100μｍ、クレープテ
ープ製造番号70−0000−4011−６、3M社、セントポー
ル、ミネソタ州）の細片の接着面に薄板状に積み重ね
た。培地を膜に固定する接着溶液を以下のとおり作っ
た。即ち、 染料５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフ
ェート二ナトリウム塩（0.2g）、クロラムフェニコール
（0.03g）、及びクロールテトラサイクリン（0.03g）を
メタノール（40ml）に溶解した。得られた溶液を100ml
の48重量％の２−メチルブチルアクリレートとアクリル
酸の90/10のモル比で65/35ヘプタン／アセトン共重合体
（3M社 スペシャルティ ケミカルズ部門、セントポー
ル、ミネソタ州）の溶液に加えた。この溶液を均一に見
えるまで撹拌した。

接着溶液をそれから実験室用ナイフコータを使ってラ
ミネートの膜表面上に最終の乾燥被覆重量24.5mg/100cm
²で被覆した。被覆したラミネートを空気中で乾燥させ
た。

粉末化養分及び粉末化ゲル化剤の1:4比（重量）の混
合物を作った。この養分はAcumedia Corp.バルチモア、
メリランドから入手可能である。この0.455Kgは、200g
の脳心臓混和物、200gのグルコース、54gのネオペプト
ン1.0gの塩化カルシウム、0.2gの水を含む。ゲル化剤
は、キサンタンガム（Kelco社サンディエゴ、カルフォ
ルニア州）とローカストビーンガム（Hi−Tech Polimer
s,Inc.ルイスビル、ケンタッキー州）の混合物であっ
た。この養分とゲル化剤粉末混合物をエチレンオキサイ
ドで殺菌し、完全に空気を注いで、すべての痕跡量の残
留殺菌剤を除去し、100−メッシュスクリーンを90％が
通過する大きさにふるいをかけた。この粉末混合物を接
着被覆の上に粉末被覆器で約40mg/100cm²の重量で固定
した。この粉末被覆物は、本装置の本体要素として役立
った。透明感圧テープ（Transparent Box Sealing Tap
e,3M社、セントポール、ミネソタ州）厚さ約40μｍ長さ
35.5cm巾20.3cm、を本装置の覆い手段として使用した。
このテープをその接着面を前記した本体要素と同様の粉
末で、同様の方法で、同様の被覆重量で被覆した。

本体要素の粉末表面の中心に沿って、二重被覆感圧テ
ープ（No.1522 Double Coated Tape,3M社、セントポー
ル、ミネソタ州）の細片を置き、覆い手段を注意深くこ
の粉末側上に置き、二重被覆テープの細片に沿って二つ
のシートを手で押えて装置を組み立てた。このようにし
て得られた物は、二重被覆テープの中心を鋏で切った。
得られた二片のそれぞれを８つの装置、各7.6cm×10.2c
mを得るために7.6cm間隔に鋏で切った。

得られた装置を使用前ガンマ放射（３メガラド）によ
って殺菌し、プレートとしてここに参照する。

実施例２ カビ生育についての膜有孔性効果の評価 プレートは、異なる膜物質を使用した上記実施例１の
方法に従って製造した。この膜は、以下の表Ａに掲げ
た。プレートNo.1のテープは、その接着面を物質の方に
向けて使用し、Gurley porosity値は、テープそれ自体
の値（即ち、裏面に接着を有する膜）であった。

膜有孔性の結果は、幾つかのカビを、上記したそれぞ
れのプレート上で生育させようとすることによって評価
した。種々のカビのカルチャーを作り、標準の方法を用
いて、水性懸濁液とした。

プレート１−５は、前記したとおり、通常の殺菌処理
を行った。各例において、プレートのカバーシートを引
き戻した。そしてカビ懸濁液1mlのアリコートをプレー
トの中心に添加した。サンプルで培地を再構成した後
（数秒程度）、カバーシートを折り返し完全に培地を被
覆した。このプレートを５日間25℃で培養し、それから
Quebec counterを使用して可視的に試験した。結果を表
Ｂに示す。

表Ｂは、５日25℃の培養後計測されたコロニーの数を
示す。幾つかの場合、コロニーは計測されず、生育の型
だけを以下の通り注記した。即ち、 NB−カビの生育なし EG−エッジ（edge）生育 カビのコロニーは、接種
領域のペリメーターの周囲を生育した。培地の中心への
空気供給の不十分性の指示 として取り扱う。

表Ｂから分かるように、カビの生育は、本発明の装置
において改良した。プレート１及び２は、Gurley poros
ity値約0.1から約25の膜であった。これらのプレートは
同様の結果を示した。より少ない孔の膜であるプレート
３及び４は、一般的に、より少ないコロニー、エッジ生
育、又は無生育を示した。膜を有しないプレート５は、
一般的には、生育を示さなかった。従って、カビ生育
は、膜がGurley porosity値約25未満であるとき最も改
良された生育が見られたことからすると、一般的に、相
対的な膜の有孔性に依存しているものと考えられる。プ
レート５の特に高水準の生育（膜無し）であるAspergil
lus candidaの結果は、説明できないが、人為的な結果
であるようには思えない。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の装置の断面図であり、特徴部分を示
した。 第２図は、本発明の装置の部分的に断面図である平面透
視図である。 第３図は、本発明の装置の別の例の平面透視図である。 第４図は、本発明の第２図の装置の線４−４にそった断
面図である。 第５図は、微小孔を有する膜に写された格子状模様を示
す本発明の第２図の装置の平面図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−148977（ＪＰ，Ａ) 特表 昭57−502200（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12M 1/34 C12M 1/16

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】微生物用生育域を有する本体要素を有し、 その本体要素は、 1.上面及び下面を有する防水物質； 2.その端を空気に実質的にさらし、上面と下面を有し、
   その下面は物質の上表面のすくなくとも生育域に固定さ
   れ、かつ生育域を覆っている空気透過性膜； 及び 3.該膜の上表面のすくなくとも生育域に固定され、かつ
   生育域を覆っている冷水再構成乾燥培地で、ひとつ以上
   のゲル化剤及びひとつ以上の微生物生育用の養分からな
   る群から選ばれた少なくとも一つの成分を含んでいる冷
   水再構成乾燥培地からなる 微生物生育用装置。
2. 【請求項２】前記膜がガーレイポロシティー値約100秒
   未満を有する請求項１の装置。
3. 【請求項３】前記膜が、厚さ約20μｍと約100μｍの間
   である請求項１の装置。