JP2019030308A

JP2019030308A - ＩＬ−２２ポリペプチド及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質並びに使用方法

Info

Publication number: JP2019030308A
Application number: JP2018185857A
Authority: JP
Inventors: ジャスティンシーア，; Scheer Justin; ウェンジュンオーヤン，; Wenjun Ouyang; エリックゲイリーステファニ，; Gary Stefanich Eric; リチャードヴァンドレン，; Vandlen Richard; フィリップイー．ハース，; e haas Philip; ガネーシュ，エー．コルマム，; A Kolumam Ganesh; シアオティンワン，; Xiaoting Wang; ジェドロス，; Ross Jed; ブリュッゲン，ニコラスヴァン; Van Bruggen Nicholas; ワインピー．リー，; P Lee Wyne
Original assignee: Genentech Inc
Current assignee: Genentech Inc
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2018-09-28
Publication date: 2019-02-28
Anticipated expiration: 2034-03-14
Also published as: US11130791B2; BR112015023140A8; US9815880B2; US11136365B2; PH12015502125A1; EP2970422A2; AU2018223004A1; JP7245021B2; US20230063741A1; WO2014145016A3; CL2015002654A1; US20170008942A1; US20190177389A1; US10544198B2; ZA201506297B; SG10201808523RA; CA2903587A1; US20190177386A1; LT2970422T; EA201591515A1

Abstract

【課題】ＩＬ−２２ポリペプチド及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質並びに使用方法の提供。【解決手段】ＩＬ−２２受容体に結合するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質であって、該ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、該Ｆｃ領域はヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含む。ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ−２２アゴニスト、同物質を含有する組成物、該組成物を製造する方法、疾患の治療のために該組成物を使用する方法、また、ＩＬ−２２受容体関連試薬及びその使用方法にも関する。【選択図】なし

Description

本出願は、全てが２０１３年３月１５日に出願した米国仮出願第６１／８００１４８号、第６１／８００７９５号及び第６１／８０１１４４号、２０１３年５月８日に出願した米国仮出願第６１／８２１０６２号、及び２０１３年７月３０日に出願した米国仮出願第６１／８６０１７６号に対して優先権の利益を主張するもので、これら全出願の内容の全体を出典明示によりここに援用する。

配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由でＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含んでおり、出典明示によってその全体がここに援用される。２０１４年３月１４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーはＰ５５８０Ｒ１ＷＯ＿Ｓｅｑ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔとの名前が付けられ、サイズは１０６７６３バイトである。

分野
本発明はＩＬ−２２及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２２アゴニスト、これを含有する組成物、並びにこれを作製する方法及び使用する方法に関する。

インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）は、Ｔｈ２２細胞、ＮＫ細胞、リンパ組織インデューサー（ＬＴｉ）細胞、樹状細胞及びＴｈ１７細胞によって産生されるＩＬ−１０ファミリーのサイトカインのメンバーである。ＩＬ−２２はＩＬ−２２Ｒ１／ＩＬ−１０Ｒ２受容体複合体に結合し、該複合体は、自然細胞、例えば上皮細胞、肝細胞、及びケラチノサイトにおいて、また真皮、膵臓、腸及び呼吸器系を含む数種の器官のバリア上皮組織において発現される。
ＩＬ−２２は、付着し消える病原性微生物に対する初期の宿主防御を媒介する粘膜免疫において重要な役割を担っている。Zheng等, 2008, Nat. Med. 14:282-89を参照のこと。ＩＬ−２２は上皮細胞からの抗微生物ペプチド及び炎症誘発性サイトカインの生産を促進し、腸内における結腸上皮細胞の増殖及び遊走を刺激する。Kumar等, 2013, J. Cancer, 4:57-65を参照のこと。細菌感染の際、ＩＬ−２２ノックアウトマウスは腸の上皮再生障害、高細菌負荷及び死亡率増加を示した。上掲のKumar等。同様に、ＩＬ−２２ノックアウトマウスのインフルエンザウイルス感染は深刻な体重減少と気管及び気管支上皮細胞の再生障害を生じさせた。よって、ＩＬ−２２は、微生物感染抑制において炎症促進性の役割と炎症反応における上皮再生において抗炎症的保護の役割を担っている。病理的炎症及び組織修復を促進するＩＬ−２２の生物学的作用の多くは確定されていない。上皮細胞に対するＩＬ−２２の効果についての矛盾すると思われる報告は未だ完全には理解されていない。上掲のKumar等。

細菌複製及び転移を制限する抗微生物デフェンシンの調節は、引き続いてのＬＰＳ生産を減少させ、粘膜構造を維持することにより腸の微生物叢を安定化するのに役立つであろう。ＩＬ−２２は、ＳＡＡを含む急性期タンパク質の発現をアップレギュレートし、ＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦ、及びＩＬ−１ａを含む急性炎症反応に関連する様々な遺伝子の発現に寄与する。健康なマウスへのＩＬ−２２の全身的投与は、またＬＰＳ結合タンパク質を、細菌感染に応答してＬＰＳを中和させるために生理学的に関連した濃度まで調節する。
ＩＬ−２２の発現増加は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）患者において検出されている。例えばWolk等, 2007, J. Immunology, 178:5973；Andoh等, 2005, Gastroenterology, 129:969を参照のこと。ＩＢＤ、例えばクローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は腸内に存在する共生微生物叢に対する免疫応答調節不全から生じていると考えられる。Cox等, 2012, Mucosal Immunol. 5:99-109。ＵＣもＣＤも双方とも、はっきりとはまだ定まっていない環境刺激に曝露された遺伝的に影響を受けやすい個体において生じる複雑な疾患である。ＣＤ及びＵＣは共通でまた異なる双方の機序によって媒介され、異なる臨床的特徴を示す。Sugimoto等 2008, J. Clinical Investigation, 118:534-544を参照のこと。

ＵＣでは、炎症が主に結腸及び直腸の粘膜に生じ、下痢、直腸出血、及び体重減少を含む衰弱性状態を生じる。ＵＣは損傷した上皮障壁を通って侵入する腸微生物に対する宿主による不適切な炎症反応によって主に引き起こされると考えられている（Xavier及びPodolsky, 2007, Nature 448:427-434）。クローン病は、活性化された免疫細胞の腸浸潤及び腸構造の歪みによって特徴付けられる。上掲のWolk等を参照。
近年、ステロイド、免疫調節物質、及び炎症性サイトカインに対する抗体を含む、免疫反応を調節するための様々な方策に基づく多くの薬剤がＩＢＤ治療のために試験されており、様々な成功度である（Pastorelli等, Expert opinion on emerging drugs, 2009, 14:505-521）。腸細菌叢の複雑な多様性が疾患の不均一性に寄与している。従って、ＩＢＤの良好な治療剤に対して必要性が存在する。

心血管疾患（ＣＶＤ）は、部分的には大血管のアテローム性動脈硬化疾患から生じる死因の主要原因である。アテローム性動脈硬化症はＣＶＤイベントにおける主要な原因であり、高コレステロール血症及び慢性的に炎症を起こした血管から生じる遅い及び進行性の疾患である。アテローム硬化性病巣は、免疫細胞、特にマクロファージ及びＴ細胞の浸潤を伴った脂質として特徴付けられる。自然及び適応免疫機構双方がアテローム生成的プラークの進行及び最終的な血栓症に寄与すると今は考えられている（Ross, Am Heart J. 1999 Nov;138 (5 Pt 2):S419-20；Hansson 2005 N Engl J Med 352(16): 1685-95；Hansson及びHermansson 2011 Nature Immunology 12(3): 204-12）。

急性膵炎（ＡＰ）は膵臓の急性炎症過程である。急性腎損傷（ＡＫＩ）は、尿及び他の窒素含有老廃物の滞留や細胞外容量及び電解質の調節不全を生じる、腎臓機能の突然の消失である。ＡＫＩは急性腎不全として過去には知られていた。その変更は、明白な臓器不全を生じない腎機能の更に少しの減少が相当の臨床的関連性を持ち、罹患率及び死亡率に関連しているという最近の認識を反映している。ＡＰ及びＡＫＩに対する良好な治療法の必要性が残っている。

メタボリック症候群は、血栓症、高血圧、脂質異常症、及び炎症に寄与する一連の危険因子によって特徴付けられる複雑な状態である。インスリン耐性及び肥満はメタボリック症候群の元となる主要な病理機構である。
インスリン耐性は、アテローム生成的脂質異常症、炎症、及び高血圧との組み合わせで、冠動脈疾患（ＣＡＤ）からの死亡率に寄与する内皮機能不全を誘導するので、ＣＶＤリスクを増大させる。持続するインスリン耐性はまた２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）の発症の機会を増加させるが、Ｔ２ＤＭの発病前にはアテローム生成的状態が長年生じる。従って、ＣＡＤの自然経過はＴ２ＤＭと同じ経路にあるが、無症候性形態で人生の更に早期に始まり、糖尿病を伴うか伴わないで、臨床的に徴候が現れるには時間がかかると思われる。

メタボリック内毒血症なる用語は、例えば、高脂肪高カロリーの食餌（ＨＦＤ）によって誘導される血漿ＬＰＳが増加した状態を説明するために造られた（Cani等 2007. Diabetes 56(7): 1761-72）。ＨＦＤ給餌マウスは増加した血漿レベルの細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）を有しており、この上昇は増加した食餌の脂肪の直接の結果であると思われる（上掲のCani等 2007；Cani等 2008 Diabetes 57(6): 1470-81；Ghoshal等 2009, J Lipid Res 50(1): 90-7）。腸微生物叢が、腸粘膜上皮細胞機能の調節を通して宿主のエネルギーバランス及び食餌栄養分の収集及び炭水化物代謝に不可欠な役割を果たしているという納得できる証拠がある（Turnbaugh等 2009, J Physiol (Lond) 587(Pt 17): 4153-8；Manco等 2010, Endocr Rev 31(6): 817-44）。不均衡な食餌脂肪組成物又は過剰な食餌カロリー消費によって生じる腸微生物叢の変化は、心血管疾患の樹立された続発症である肥満及びインスリン耐性の認められている発動因子である。リポ多糖類はグラム陰性細菌の外膜に見出され、強い免疫反応を誘発しうる内毒素源として作用する（Barcia等 Clin Infect Dis 41 Suppl 7: S498-503）。腸微生物叢の集団、種及び領域的分布の変更はＬＰＳの異化反応の変化を生じ得、高脂肪食餌が腸障壁を経るＬＰＳの吸着を容易にするであろう。これらの条件下で、体循環におけるＬＰＳの増加は、低度の慢性炎症を誘導し、内因性保護宿主応答を活性化させて、血漿脂質を上昇させ、これが、慢性状態で、食餌誘発性肥満、インスリン耐性及びアテローム性動脈硬化症、そして最終的なＣＶＤイベントに寄与する。

糖尿病は、慢性的に上昇した血糖レベルの存在 (高血糖症)によって定義される深刻な代謝疾患である。この高血糖症の状態はペプチドホルモンであるインスリンの相対的又は絶対的活性欠如の結果である。インスリンは膵臓のβ細胞によって生産され分泌される。インスリンは、グルコース利用、タンパク質合成、及びグリコーゲンとしての炭水化物エネルギーの生成と貯蔵を促進することが報告されている。グルコースは、代謝の要求に沿うためにグルコースに逆転換されうる重合グルコースの形態であるグリコーゲンとして体内に貯蔵される。正常な状態では、インスリンは、全てグリコーゲンへのグルコースの転換によって代謝恒常性を維持するために、グルコース刺激に続いて基礎速度及び亢進速度の双方で分泌される。アテローム性動脈硬化症のための新規な治療枠組み及びＣＶＤイベント、メタボリック症候群、急性内毒血症及び敗血症、及びインスリン関連疾患の予防の必要性が残っている。

創傷治癒は、炎症期、肉芽組織形成期、及び組織改造期を含む複雑な過程である（例えばSinger及びClark, Cutaneous Wound Healing, N. Engl. J. Med. 341:738-46 (1999)を参照）。これらのイベントは損傷部位に放出されるサイトカイン及び増殖因子によって惹起される。多くの因子が正常で十分な創傷治癒を複雑化させ又は妨害しうる。例えば、そのような因子は、年齢、感染、栄養不足、免疫抑制、投薬、放射線、糖尿病、末梢血管疾患、全身疾患、喫煙、及びストレスを含む。

糖尿病、慢性、衰弱性疾患の対象では、糖尿病性足部潰瘍（創傷とも称される）の発症はよく見られる合併症である。慢性潰瘍は、解剖学的及び機能的完全性をつくるために順序正しく時機のよい修復過程を通して進行するものではない創傷として定義される（例えばLazarus等, Definitions and guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing, Arch. Dermatol. 130:489-93 (1994)を参照）。その性質によって、糖尿病性足部潰瘍は慢性創傷である（American Diabetes Association, Consensus development conference on diabetic foot wound care, Diabetes Care, 22(8):1354-60 (1999)）。皮膚は環境に対して主要な障壁となるので、開放難治性創傷は破局的でありうる；大きな身体障害(四肢欠損を含む）及び死さえも生じうる。足潰瘍は、糖尿病のヒトの下肢切断の約８５％に対する前疾患である。（例えばApelqvist等, What is the most effective way to reduce incidence of amputation in the diabetic foot? Diabetes Metab Res. Rev., 16(1 Suppl.): S75-S83 (2000)を参照）。よって、糖尿病性創傷治癒を含む、創傷治癒を促進し又は改善する必要性が存在する。

一態様では、本発明はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、これを含有する組成物、及びこれを使用する方法を提供する。
一態様では、本発明は、ＩＬ−２２受容体に結合するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質において、該ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、ここでＦｃ領域はヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含み、ここで、Ｌ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｆｃ領域はグリコシル化されていない、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。所定の実施態様では、ＣＨ２ドメインのＮ２９７残基はグリシン又はアラニンに変わっている。所定の他の実施態様では、Ｎ２９７残基はＧｌｙに変わっており；他の実施態様では、Ｎ２９７残基はＡｌａに変わっている。所定の実施態様では、ＩＬ−２２受容体への結合が、ＳＴＡＴ３の活性化を含むＩＬ−２２受容体下流のシグナル伝達を惹起させる。

所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８のアミノ酸に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：１２のアミノ酸に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／又は活性は、インビトロ又はインビボ法、例えば、ＩＬ−２２受容体結合アッセイ、Ｓｔａｔ３ルシフェラーゼレポーター活性アッセイ等々によってアッセイすることができる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：８のアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、本発明は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程を含む方法によって生産されるＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。所定の実施態様では、該方法は細胞培養物又は培養培地からＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を得る工程を更に含む。所定の実施態様では、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞であり；他の実施態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。

他の態様では、本発明は、リンカーによってＩｇＧＦｃ領域に連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、ここでＦｃ領域がヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含み、Ｆｃ領域はグリコシル化されていない、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。所定の実施態様では、ヒンジ領域はＣＰＰＣＰのアミノ酸配列（配列番号：３１）を含む。所定の他の実施態様では、Ｆｃ領域中のＮ２９７残基が変化し、及び／又はＦｃ領域中のＴ２９９残基が変化している。所定の実施態様では、ＣＨ２ドメイン中のＮ２９７残基が、好ましくはグリシン又はアラニンに変えられている。ある特定の実施態様では、Ｎ２９７残基がグリシンに変えられている。所定の他の実施態様では、Ｎ２９７残基がアラニンに変えられている。更に他の実施態様では、Ｔ２９９残基はＡｌａ、Ｇｌｙ又はＶａｌに変えられている。所定の他の実施態様では、リンカーは８−２０アミノ酸長、８−１６アミノ酸長、又は１０−１６アミノ酸長である。

所定の実施態様では、Ｆｃ領域はＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。ある特定の実施態様では、リンカーはアミノ酸配列ＤＫＴＨＴ（配列番号：３２）を含む。所定の実施態様では、リンカーはアミノ酸配列ＧＧＧＤＫＴＨＴ（配列番号：４１）を含む。所定の実施態様では、リンカーは少なくとも１１アミノ酸長であり、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３３）を含む。所定の他の実施態様では、リンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３４）、ＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３５）、ＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３６）、ＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３７）、ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３８）、又はＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３９）を含む。ある特定の実施態様では、リンカーはアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：４０）を含む。所定の実施態様では、リンカーは、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６７）、ＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６８）、ＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６６）、ＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６４）、ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６９）、又はＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６５）を含む。ある特定の実施態様では、リンカーは、ＧＧＳ（配列番号：４５）、ＧＧＧＳ（配列番号：４６）又はＧＧＧＧＳ（配列番号：４７）のアミノ酸配列を含まない。別の実施態様では、ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質はＧＧＧＳＴＨＴ（配列番号：６３）のリンカー配列を含む。他の特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：１２又は配列番号：１４のアミノ酸配列を含む。ある他の特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：１２のアミノ酸配列を含む。

所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。所定の他の実施態様では、リンカーはアミノ酸配列ＳＫＹＧＰＰ（配列番号：４３）を含む。ある特定の実施態様では、リンカーはアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号：４４）を含む。所定の実施態様では、リンカーの何れもアミノ酸配列ＧＧＳ（配列番号：４５）、ＧＧＧＳ（配列番号：４６）又はＧＧＧＧＳ（配列番号：４７）を含まない。他の特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：８又は配列番号：１０のアミノ酸配列を含む。特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：８のアミノ酸配列を含む。他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程を含む方法によって生産される。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を更に含む方法によって生産される。所定の実施態様では、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。所定の他の実施態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。

更に他の態様では、本発明は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物であって、前記ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、Ｆｃ領域がヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含み、該組成物は５％以下のＣＨ２ドメインのアフコシル化レベルである、組成物を提供する。所定の実施態様では、アフコシル化レベルは２％以下、より好ましくは１％未満である。所定の実施態様では、アフコシル化レベルは質量分析法によって測定される。所定の実施態様では、Ｆｃ領域はＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。所定の実施態様では、Ｆｃ領域はＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。所定の他の実施態様では、ヒンジ領域はＣＰＰＣＰのアミノ酸配列（配列番号：３１）を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：２４又は配列番号：２６のアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：２４のアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、組成物は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞をＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養し、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を含む方法によって製造され、ここで、組成物は５％以下のＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるアフコシル化レベルを有する。所定の実施態様では、アフコシル化レベル２％以下、より好ましくは１％未満である。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、精製によって、好ましくはフコシル化種をアフコシル化種から精製することによって、得られる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はアフィニティクロマトグラフィーによって精製される。所定の実施態様では、宿主細胞がＣＨＯ細胞である。

更なる態様では、本発明はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物を提供し、該ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞をＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程を含む方法によって生産される。所定の実施態様では、該方法はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を更に含む。所定の実施態様では、宿主細胞がＣＨＯ細胞であり；他の実施態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。

更なる態様では、本発明はここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物を提供する。更に他の態様では、本発明はここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質と少なくとも一の薬学的に許容可能な担体を含有する薬学的組成物を提供する。所定の実施態様では、組成物又は薬学的組成物は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：２４又は配列番号：２６のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する。ある特定の実施態様では、組成物又は薬学的組成物は配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は大腸菌によって生産される。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されない。所定の更なる実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導しない。所定の実施態様では、薬学的組成物は準最適な量の、デキサメタゾンのような治療剤を更に含有する。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチドは配列番号：４のアミノ酸配列を含む。

更に、本発明のそれぞれのかつあらゆる態様によれば、所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は二量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−２２に関して）であり得；他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は単量体Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ２２に関して）でありうる。

更なる態様では、本発明は単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。ある特定の実施態様では、単量体融合タンパク質はＩＬ−２２Ｆｃ融合アームとＦｃアームを含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合アーム及びＦｃアームはＦｃ領域にノブ又はホールの何れかを含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合アームのＦｃ領域（単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合体）はノブを含み、ＦｃアームのＦｃ領域（ＩＬ−２２への結合を伴わない単量体Ｆｃ）はホールを含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合アームのＦｃ領域（単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合体）はホールを含み、ＦｃアームのＦｃ領域（ＩＬ−２２への連結を伴わない単量体Ｆｃ）はノブを含む。所定の他の実施態様では、単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：６１及び配列番号：６２のアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、両アームのＦｃ領域はＮ２９７Ｇ変異を更に含む。所定の実施態様では、単量体ＩＬ−２２Ｆｃは、配列番号：６１のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドと配列番号：６２のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを発現することができる一又は複数の核酸分子を含む一又は複数の宿主細胞を培養する工程を含む方法によって生産される所定の他の実施態様では、該方法は単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を更に含む。所定の実施態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。関連した態様では、本発明は単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物又は薬学的組成物を提供する。

更に他の態様では、本発明はここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸を提供する。所定の実施態様では、核酸は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：２４又は配列番号：２６、好ましくは配列番号：８又は配列番号：１２、より好ましくは配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする。所定の他の実施態様では、核酸は、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：２３又は配列番号：２５のポリヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施態様では、核酸は、配列番号：７又は配列番号：１１、好ましくは配列番号：７のポリヌクレオチド配列を含む。所定の実施態様では、単離された核酸は、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３；配列番号：２３又は配列番号：２５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性であるポリヌクレオチド配列を含む。所定の実施態様では、単離された核酸は、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３；配列番号：２３又は配列番号：２５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性であるポリヌクレオチド配列を含み、ここで単離された核酸は、ＩＬ−２２Ｒに結合することができ及び／又はＩＬ−２２Ｒ活性を惹起させることができるＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードすることができ、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていない。所定の実施態様では、単離された核酸は、配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３；配列番号：２３又は配列番号：２５のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性であるポリヌクレオチド配列を含み、ここで単離された核酸は配列番号：８、１０、１２、又は１４のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードすることができる。関連した態様では、本発明は上に記載の核酸を含むベクターと該ベクターを含む宿主細胞を提供する。所定の実施態様では、宿主細胞は原核細胞又は真核細胞である。ある特定の実施態様では、宿主細胞は、限定なしで大腸菌細胞を含む原核細胞である。所定の他の実施態様では、宿主細胞は、限定なしでＣＨＯ細胞を含む真核細胞である。所定の実施態様では、宿主細胞は配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターを含む。

更なる関連した態様では、本発明は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で宿主細胞を培養する工程を含む、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の作製方法を提供する。所定の実施態様では、該方法は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を更に含む。ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、限定しないが、培養培地の収集、凍結／解凍、遠心分離、細胞溶解、均質化、硫酸アンモニウム沈殿、ＨＰＬＣ、及びアフィニティ、ゲル濾過、及びイオン交換カラムクロマトグラフィーを含む、当該分野において知られている任意のタンパク質単離又は精製方法によって、細胞培養物又は培養培地から得ることができる。所定の実施態様では、該方法はアフコシル化ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を除去する工程を更に含む。所定の他の実施態様では、アフコシル化ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はアフィニティカラムクロマトグラフィーによって除去される。所定の実施態様では、宿主細胞は大腸菌細胞である。他の実施態様では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。

更に他の態様では、本発明は、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質と少なくとも一の薬学的に許容可能な担体を含有する組成物又は薬学的組成物を提供する。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：２４、又は配列番号：２６のアミノ酸配列を含む。他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていない。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていないが、ＩＬ−２２ポリペプチドはグリコシル化される。所定のそのような実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＣＨＯ細胞中で生産される。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は抗体依存性細胞傷害性を誘導しない。更に他の実施態様では、薬学的組成物はデキサメタゾン又はＴＮＦアンタゴニストを更に含有する。ある特定の実施態様では、デキサメタゾン又はＴＮＦアンタゴニストは準最適な量で存在する。

所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物は、５％以下、好ましくは２％以下、より好ましくは１％未満の、ＣＨ２ドメイン中のアフコシル化レベルを有する。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：２４又は配列番号：２６、好ましくは配列番号：２４のアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＣＨＯ細胞中で生産される。ある特定の実施態様では、対象はヒトである。所定の実施態様では、薬学的組成物は全身的に又は局所的に投与される。所定の他の実施態様では、薬学的組成物は、静脈内、皮下、腹腔内又は局所投与される。

更なる態様では、本発明は、ここに記載のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質と少なくとも一の薬学的に許容可能な担体とを含有する薬学的組成物を提供する。所定の実施態様では、薬学的に許容可能な担体はゲル化剤である。所定の実施態様では、ゲル化剤は多糖類である。幾つかの実施態様では、ゲル化剤は、限定しないが、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＰＯＥ−ＰＯＰブロックポリマー、アルギネート、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、ヒドロキシエチルメチルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースである。幾つかの実施態様では、多糖類はセルロース剤、例えば限定しないが、ヒドロキシエチルメチルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースである。所定の実施態様では、ゲル化剤はヒドロキシプロピルメチルセルロースである。幾つかの実施態様では、薬学的組成物は局所投与用である。所定の実施態様では、局所投与用の薬学的組成物はＩＬ−２２ポリペプチドを含有する。幾つかの実施態様では、局所投与用の薬学的組成物はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する。所定の実施態様では、局所投与用の薬学的組成物はＦｃ融合体を伴わないＩＬ−２２ポリペプチドを含有する。

他の態様では、本発明は、治療を必要とする対象におけるＩＢＤを治療する方法において、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。所定の実施態様では、ＩＢＤは潰瘍性大腸炎である。所定の他の実施態様では、ＩＢＤはクローン病である。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていない。所定の実施態様では、Ｆｃ領域のＮ２９７残基及び／又はＴ２９９残基が変えられる。所定の実施態様では、Ｆｃ領域のＮ２９７残基が変えられる。所定の他の実施態様では、Ｎ２９７残基がＧｌｙ又はＡｌａ、好ましくはＧｌｙに変えられる。所定の他の実施態様では、Ｔ２９９残基が、好ましくはＶａｌ、Ｇｌｙ又はＡｌａに変えられる。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２又は配列番号：１４、好ましくは配列番号：８のアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は大腸菌又はＣＨＯ細胞において生産される。所定の実施態様では、対象はヒトである。所定の他の実施態様では、薬学的組成物は、静脈内、皮下、腹腔内又は局所投与される。

他の態様では、本発明は、この発明のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を使用して次の疾患の何れか一つ又は組み合わせを治療する方法を提供する：ＩＩ型糖尿病、病的肥満を伴うＩＩ型糖尿病、創傷（糖尿病性創傷及び糖尿病性潰瘍を含む）、火傷、潰瘍（褥瘡及び静脈潰瘍を含む）、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、メタボリック症候群、内毒血症（急性及び軽度）、敗血症、急性冠動脈性心疾患、高血圧、脂質異常症、肥満症、高血糖症、脂質代謝障害、肝炎、急性肝炎、腎不全、急性腎不全、急性腎損傷、腎移植不全（renal draft failure）、献腎移植後臓器機能障害（post cadaveric renal transplant delayed graft function）、造影剤誘発性腎症、膵炎、急性膵炎、肝線維症及び肺線維症。所定の実施態様では、急性膵炎は軽症から中等症から重症でありうる。所定の実施態様では、急性膵炎はＥＲＣＰ（内視鏡的逆行性胆管膵管造影）後疾患を含む。幾つかの更なる実施態様では、上記の疾患について治療される患者は自身のＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要としており、これをＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が患者において変化させ、ＨＤＬを増加させＬＤＬを減少させることができる。関連した態様では、本発明は上記の疾患の何れか一つ又は組み合わせの治療のための医薬の調製におけるＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の使用を提供する。

更なる態様では、本発明は、必要とする対象における、腸の微生物感染を阻害し、又は微生物感染時に腸の杯細胞を維持する方法であって、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物を対象に投与する工程を含む方法を提供する。他の関連した態様では、本発明は、必要とする対象における、腸における上皮細胞完全性、粘膜治癒、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走又は上皮創傷治癒を亢進させる方法であって、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物を対象に投与する工程を含む方法を提供する。所定の実施態様では、上皮細胞は腸の上皮細胞である。

他の態様では、動脈硬化プラーク形成の病変を症状が含む心血管疾患を予防し又は治療する方法が提供される。該方法は治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む。心血管疾患は、例えば、冠動脈疾患、冠動脈微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、及び慢性腎疾患を含む。該方法は、動脈硬化プラーク形成の進行を更に遅延させることを含みうる。該方法は心血管疾患の予防又は治療のために対象に一又は複数の更なる治療剤を投与することを更に含みうる。

他の態様では、メタボリック症候群を治療する方法が提供される。該方法は治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む。該方法は、腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧の一又は複数を含む、メタボリック症候群に伴う一又は複数の危険因子を減少させることを更に含みうる。該方法は対象における細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）のレベルを減少させることを更に含みうる。該方法はメタボリック症候群の予防又は治療のために対象に一又は複数の更なる薬剤を投与することを更に含みうる。
他の態様では、アテローム性動脈硬化症の進行を遅延させ又は遅くする方法が提供される。該方法は、治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、それを必要とする対象に投与することを含む。該方法は、アテローム性動脈硬化症の進行を遅延させ又は遅くするために対象に一又は複数の更なる薬剤を投与することを更に含みうる。

他の態様では、アテローム性動脈硬化症の徴候を予防する方法が提供される。該方法は、治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をアテローム性動脈硬化症のリスクのある対象に投与することを含み、ここで、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２ポリペプチドはアテローム性動脈硬化症の徴候の発症に対して効果的である。所定の実施態様では、対象は心血管疾患を発症するリスクがあることが同定されている。所定の実施態様では、対象は遺伝的に心血管疾患を発症するリスクがある。一又は複数の実施態様では、アテローム性動脈硬化症の徴候はプラーク蓄積を含む。幾つかの実施態様では、アテローム性動脈硬化症の徴候は血管炎症を含む。該方法はアテローム性動脈硬化症の徴候を予防するために対象に一又は複数の更なる薬剤を投与することを更に含みうる。

更に他の態様では、急性内毒血症及び敗血症の一又は複数を治療する方法が提供される。該方法は、治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をそれを必要とする対象に投与することを含む。該方法は、急性内毒血症及び敗血症の一又は複数の治療のために対象に一又は複数の更なる薬剤を投与することを更に含みうる。

他の一態様では、対象における創傷治癒を促進し又は改善するため、あるいは双方のための方法が提供される。該方法は、治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストを、それを必要とする対象に投与することを含む。所定の実施態様では、創傷は慢性創傷である。所定の他の実施態様では、創傷は感染創である。所定の実施態様では、対象は糖尿病患者で、ＩＩ型糖尿病の対象を含む。一又は複数の実施態様では、創傷は糖尿病性足部潰瘍である。所定の実施態様では、治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストが完全創縫合（創傷閉鎖）（complete wound closure）となるまで投与される。幾つかの実施態様では、投与は全身性であり；他の実施態様では、投与は局所的である。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストは局所投与用の製剤中にある。所定の実施態様では、局所用製剤は、Ｆｃ融合体を含まないＩＬ−２２ポリペプチドを含有する。所定の実施態様では、ＩＬ２２アゴニストは、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２２アゴニスト、ＩＬ−１９ポリペプチド、ＩＬ−１９Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−１９アゴニスト、ＩＬ−２０ポリペプチド、ＩＬ−２０Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２０アゴニスト、ＩＬ−２４ポリペプチド、ＩＬ−２４Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２４アゴニスト、ＩＬ−２６ポリペプチド、ＩＬ−２６Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２６アゴニスト、及びＩＬ−２２Ｒ１アゴニストからなる群から選択される。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２２アゴニスト、ＩＬ−２０ポリペプチド、ＩＬ−２０Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２０アゴニスト、ＩＬ−２４ポリペプチド、ＩＬ−２４Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２４アゴニスト及びＩＬ−２２Ｒ１アゴニストからなる群から選択される。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｒ１アゴニストは抗ＩＬ２２Ｒ１アゴニスト抗体である。

更なる態様では、本発明は、治療的有効量の一又は複数のＩＬ−２２アゴニストをそれを必要とする対象に投与する工程を含む、メタボリック症候群の治療方法を提供する。所定の実施態様では、ＩＬ２２アゴニストは、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２２アゴニスト、ＩＬ−１９ポリペプチド、ＩＬ−１９Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−１９アゴニスト、ＩＬ−２０ポリペプチド、ＩＬ−２０Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２０アゴニスト、ＩＬ−２４ポリペプチド、ＩＬ−２４Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２４アゴニスト、ＩＬ−２６ポリペプチド、ＩＬ−２６Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２６アゴニスト、及びＩＬ−２２Ｒ１アゴニストからなる群から選択される。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２２アゴニスト、ＩＬ−２０ポリペプチド、ＩＬ−２０Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２０アゴニスト、ＩＬ−２４ポリペプチド、ＩＬ−２４Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−２４アゴニスト及びＩＬ−２２Ｒ１アゴニストからなる群から選択される。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｒ１アゴニストは抗ＩＬ２２Ｒ１アゴニスト抗体である。所定の他の実施態様では、メタボリック症候群は糖尿病である。ある特定の実施態様では、メタボリック症候群はＩＩ型糖尿病である。

他の実施態様によれば、対象に本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が投与される。所定の実施態様では、対象はヒトである。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ２２Ｆｃ融合タンパク質は静脈内、皮下、腹腔内、全身又は局所投与される。

これらの態様の所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はグリコシル化されていない。所定の実施態様では、Ｆｃ領域のＮ２９７残基及び／又はＴ２９９残基が変えられる。所定の実施態様では、Ｆｃ領域のＮ２９７残基が変えられる。所定の他の実施態様では、Ｎ２９７残基がＧｌｙ又はＡｌａ、好ましくはＧｌｙに変えられる。所定の他の実施態様では、Ｔ２９９残基が、好ましくはＶａｌ、Ｇｌｙ又はＡｌａに変えられる。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２又は配列番号：１４、好ましくは配列番号：８のアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は大腸菌中で生産される。所定の実施態様では、対象はヒトである。所定の他の実施態様では、薬学的組成物は静脈内、皮下又は局所投与される。

所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物は、５％以下、好ましくは２％以下、より好ましくは１％未満の、ＣＨ２ドメイン中のアフコシル化レベルを有している。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：２４又は配列番号：２６、好ましくは配列番号：２４のアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＣＨＯ細胞中で生産される。ある特定の実施態様では、対象はヒトである。所定の他の実施態様では、薬学的組成物は静脈内、皮下又は局所投与される。
上記態様の更に他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域に結合したＮ−グリカンは解糖酵素によって酵素的に除去される。所定の実施態様では、解糖酵素はペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）である。ある特定の実施態様では、対象はヒトである。

また更なる態様では、本発明は、治療を必要とする対象における、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤの治療のための医薬の調製におけるここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の使用をまた提供する。関連した態様では、本発明は、治療を必要とする対象における、腸における微生物感染を阻害し、又は微生物感染時の腸の杯細胞を維持するための医薬の調製におけるここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の使用を提供する。更に他の態様では、本発明は、治療を必要とする対象における、腸の上皮細胞完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走又は上皮創傷治癒を亢進するための医薬の調製におけるここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の使用を提供する。他の関連した態様では、本発明は、治療を必要とする対象における、心血管疾患、メタボリック症候群、アテローム性動脈硬化症、急性腎損傷、急性膵炎を治療し、限定しないが、慢性創傷、糖尿病性創傷、感染創、褥瘡又は糖尿病性足部潰瘍を含む創傷治癒を加速し、促進し又は改善するための医薬の調製におけるＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の使用を提供する。

それぞれのまたあらゆる実施態様は、文脈が明らかに別のことを示唆していない限り、組み合わせることができる。それぞれのまたあらゆる実施態様は、文脈が明らかに別のことを示唆していない限り、本発明のそれぞれのまたあらゆる態様に適用することができる。
本発明の特定の実施態様は、所定の好ましい実施態様の次のより詳細な説明と特許請求の範囲から明らかになるであろう。

異なる哺乳動物種：ヒト（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｑ９ＧＺＸ６，配列番号：４）、チンパンジー（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＸＰ＿００３３１３９０６，配列番号：４８）、オランウータン（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＸＰ＿００２８２３５４４，配列番号：４９）、マウス（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｑ９ＪＪＹ９，配列番号：５０）及びイヌ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＸＰ＿５３８２７４，配列番号：５１）由来の成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列アラインメントを示す。典型的なヒトモノクローナルＩｇＧ１Ｆｃ（パネルＡ）、リンカー配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３３，パネルＢ）を含むＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体のＦｃ領域のグリコシル化状態の質量分析結果を示す。リンカー配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：４０，パネルＣ）、及びＧＧＧＤＫＴＨＴ（配列番号：４１，パネルＤ）を含むＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体のＦｃ領域のグリコシル化状態の質量分析結果を示す。Ｎ２９７Ｇ変異を伴わないか伴うリンカー配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰを含むＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合体（配列番号：４４，それぞれパネルＥ及びＦ）のＦｃ領域のグリコシル化状態の質量分析結果を示す。Ｎ２９７Ｇ変異を伴うリンカー配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴを含むＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体（配列番号：４０）（パネルＧ）のＦｃ領域のグリコシル化状態の質量分析結果を示す。ヒトＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合体（Ｎ２９７Ｇ，全長Ｆｃ配列でＣ末端Ｌｙｓを含む，配列番号：１６，Ｌｙｓなし配列番号：８）、ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体（Ｎ２９７Ｇ，全長Ｆｃ配列でＣ末端Ｌｙｓを含む，配列番号：２０，Ｌｙｓなし配列番号：１２）及びＩＬ−２２（配列番号：４）の配列アラインメントを示す。示されたＩＬ−２２配列はリーダー配列のない成熟型である。ヒンジ配列ＣＰＰＣＰ（配列番号：３１）はボックスに示され、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインが続く。Ｎ２９７Ｇ置換及び任意のＣ末端Ｌｙｓ残基はマークされる。ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼアッセイの結果を示すグラフを表す。ＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合体又はＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体によって刺激されたルシフェラーゼ活性をヒトＩＬ−２２Ｒを発現する２９３細胞において測定した。結果は、ＩＬ−２２ＩｇＧ４及びＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体が同様のインビトロ活性を示したことを示している。デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発マウスＩＢＤモデルにおけるマウスＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の治療効果を示す。ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質での治療は、このモデルにおいて現在最善の標準的治療であるデキサメタゾンと比較して、治療中のマウスの体重減少を低下させた（図５Ａ）。デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発マウスＩＢＤモデルにおけるマウスＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の治療効果を示す。マウスＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＤＳＳ誘発ＩＢＤマウスにおいて結腸組織像を改善した（図５Ｂ）。デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発マウスＩＢＤモデルにおけるマウスＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の治療効果を示す。マウスＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＤＳＳ誘発ＩＢＤマウスにおいて結腸組織像を改善し、改善は結腸組織スコアの減少に変換された（図５Ｃ）。０日目及び７日目に０．１５ｍｇ／ｋｇ及び１．５ｍｇ／ｋｇを投与したカニクイザルにおけるヒトＩＬ−２２ＩｇＧ４及びＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質の血清クリアランス速度を示す。１日目及び８日目に０．１５ｍｇ／ｋｇ及び１．５ｍｇ／ｋｇ（図６の０日目及び７日目と同じ投薬レジメン）で投薬した後のカニクイザルにおける３つのＩＬ−２２Ｒ下流の遺伝子の血清レベルを示す。図７ＡはｈＩＬ−２２Ｆｃ投与後の血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）の用量依存的増加を示す。１日目及び８日目に０．１５ｍｇ／ｋｇ及び１．５ｍｇ／ｋｇ（図６の０日目及び７日目と同じ投薬レジメン）で投薬した後のカニクイザルにおける３つのＩＬ−２２Ｒ下流の遺伝子の血清レベルを示す。図７ＢはｈＩＬ−２２Ｆｃ投与後のリポ多糖結合タンパク質（ＬＰＳ−ＢＰ）の用量依存的増加を示す。１日目及び８日目に０．１５ｍｇ／ｋｇ及び１．５ｍｇ／ｋｇ（図６の０日目及び７日目と同じ投薬レジメン）で投薬した後のカニクイザルにおける３つのＩＬ−２２Ｒ下流の遺伝子の血清レベルを示す。図７ＣはｈＩＬ−２２Ｆｃ投与後のＲｅｇＩＩＩ／膵炎関連タンパク質（ＰＡＰ又はＰａｎｃｒｅＰＡＰ）の用量依存的増加を示す。高脂肪食餌での８ヶ月齢のＬｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスの大動脈弓及び腕頭動脈中の動脈硬化プラーク負荷を示す高分解能マイクロＣＴを示す。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスは食餌負荷に感受性であり、ｍｉｃｒｏＣＴ（Ａ）から測定して実質的に増加したレベルのアテローム性動脈硬化症を示したが、血清ＬＤＬレベルは僅かに増加していた（Ｂ）ことを示す。急性で低度の炎症刺激に対するＬｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスの応答を示し、ｗｔＣ５７マウスでの観察よりも大きく、血流依存性血管拡張及びニトログリセリンの注入（Ｃ）によって評価した血管機能の喪失を伴う、血清ＭＣＰ−１（Ａ）及びＩＬ−６（Ｂ）の増加を示す。慢性内毒素曝露が脂質異常症（Ａ）及び大きなプラーク体積（Ｂ）及び不安定性（Ｃ）を生じることを示す。空腹時グルコースがコントロールと比較してＩＬ−２２−Ｆｃ処置群で減少したこと（Ａ）及びグルコースクリアランスが耐糖性試験から分かるように、ＩＬ−２２−Ｆｃ処置で改善されたこと（Ｂ、Ｃ）を示す。ＩＬ−２２−Ｆｃでの処置後に起こる総コレステロールの減少を示す。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスにおいて、総コレステロールは、空腹及び摂食条件の双方において上昇し、処置期間の終わりに測定したコントロールと比較してＩＬ−２２−Ｆｃ群では減少した（Ａ）。血漿トリグリセリドレベルもまたＩＬ−２２−Ｆｃ処置時に減少し、摂食状態において顕著な減少であった（Ｂ）。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスに見られる高脂血症がＩＬ−２２−Ｆｃ処置後に減少したことを示す。ＬＤＬは空腹及び摂食状態の双方において減少し（Ａ）、ＨＤＬは上昇し（Ｂ）、及びＬＤＬ／ＨＤＬ比は空腹及び摂食時双方において減少した（Ｃ）。ｖＬＤＬは摂食条件下で減少した（Ｄ）。２回用量が投与されたマウスで５日後のＨＤＬ（Ｅ）、ＬＤＬ（Ｆ）及びＬＤＬ／ＨＤＬ比（Ｇ）の結果を示した。血漿ＬＰＳレベルがＩＬ−２２−Ｆｃ処置後に減少したことを示す。ＩＬ−２２−Ｆｃ処置後に血管反応性によって測定された内皮機能の改善を示す。解剖大動脈弓、上行及び下行大動脈（Ａ）、腕頭動脈（Ｂ）及び大動脈弁（Ｃ）の死後試料に対して造影マイクロＣＴを使用して実施されたプラーク量の定量分析を示す。ＩＬ−２２−Ｆｃ処置後の体重（Ａ）及び食物摂取（Ｂ）を示す。糖尿病マウスモデルの治療レジメンの概略を示す。ＩＬ−２２−Ｆｃが肥満マウスのグルコースを有意に減少させたことを証明する、ｄｂ／ｄｂマウスの体重及び血清グルコースレベルを示す。ＩＬ−２２Ｆｃ処置が、グルコース負荷試験（ＧＴＴ）に基づく耐糖性及びインスリン感受性を改善することを示す。ｐ＜０．０５ＩＬ−２２Ｆｃ処置が、ｍｇ／ｄＬグルコースレベル（Ａ）及びグルコース減少％（Ｂ）によって測定されたインスリン負荷試験（ＩＴＴ）に基づくインスリン感受性を改善したことを示す。ＩＬ−２２Ｆｃが島中のインスリン発現を増加させたことを示す。（Ａ）緑はグルカゴンを示し、赤はインスリンを示す。赤い線で囲まれた環状領域は島領域を示す。バーは５０μｍである。ＩＬ−２２Ｆｃが島中のインスリン発現を増加させたことを示す。（Ｂ）平均インスリン染色強度。（Ｃ）平均グルカゴン染色強度。（Ｄ）ＨＦＤ給餌マウス中の給餌時インスリンレベル。（Ｅ）ＨＦＤ給餌マウス中の空腹時インスリンレベル。（Ｆ）ＩＬ−２２ＦｃはＨＦＤ給餌マウスにおいてインスリン非感受性を逆転させた。^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１。エラーバー、標準誤差。ＩＬ−２２−Ｆｃ処置動物におけるインスリン−シグナル強度の定量分析を示す。コントロールと比較してＩＬ−２２−Ｆｃ処置動物においてインスリン陽性面積が増加したことを示す。コントロール（Ａ）と比較した場合のＩＬ−２２−Ｆｃ処置（Ｂ）での門脈周囲脂肪肝の減少を証明する組織切片を示す。ＨＦＤ誘発耐糖性におけるＩＬ−２２Ｒの評価を示す。（Ａ）グルコースのｉｐ注射後の経時的なグルコースレベル（ｍｇ／ｄＬ）。（Ｂ）曲線下の総面積（ＡＵＣ）の計算。同腹仔コントロールと比較したＩＬ−２２受容体ＫＯマウスの体重を示す。Ｌｄｌｒ−／−，Ａｐｏｂｅｃ１−／−（ｄｋｏ）マウスを５０ｕｇのＩＬ−２２Ｆｃ又は５０ｕｇの抗ブタクサ（１群当たりｎ＝６）で４８時間処置した。ＩＬ−２２Ｆｃ処置マウスにおいて、血清ＬＰＳは５０％（ｐ＝０．００５２）減少し、血清ＬＤＬ／ＨＤＬは３０％（ｐ＝０．０４９）減少した。天然ヒトＩＬ−２２をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す（配列番号：７０）。図３０に示されたコード配列から得られたアミノ酸配列を示す（配列番号：７１）。図３２ＡはマウスＩＬ−２２−マウス−ＩｇＧ２ａ融合タンパク質のアミノ酸配列を示す（配列番号：７３）。図３２ＢはマウスＩＬ−２２−マウスＩｇＧ２ａ融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を示す（配列番号：７２）。ＩＬ−２２Ｒを経るシグナル伝達の欠如が創傷治癒の遅延を生じることを示す。ＩＬ−２２ＲＫＯマウスの創傷は、ＷＴ同腹仔コントロールマウスと比較して治癒が有意に遅延した（１０日目でｐ＝０．００１８及び１２日目でｐ＝０．００５）。１０日目、１２日目及び１５日目での個々のマウス（ｎ＝１０）の創傷傷口を表す。１４日目でのＩＬ−２２ＲＫＯマウス及びＷＴ双方に対する創傷の代表的な写真画像を示す（Ｄ）。コントロールＷＴマウス（ＢＫＳ）と糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスとの間の創傷治癒の比較を例示する。（Ａ）ｄｂ／ｄｂマウスにおける創傷治癒は試験期間全体を通してかなり遅延し、２８日目においてさえ充分に治癒しなかった。（Ｂ）の棒グラフは、創傷切除後の野生型又はｄｂ／ｄｂマウスにおけるＩＬ−２２発現レベルを倍数変化として示す。全３群（ｎ＝７）のｄｂ／ｄｂマウスにおいてＩＬ−２２−Ｆｃを試験するための研究デザインの模式図である。抗ブタクサをコントロールＦｃタンパク質に対して使用し、抗ＦＧＦＲ１抗体をグルコース調節のための陽性コントロールとして使用した。４日目から２７日目までコントロールと比較した処置マウスのＩＬ−２２Ｆｃ規準化グルコースレベルを示す。グルコースレベルはワンタッチ（登録商標）グルコメータ−を使用して記録した。抗ブタクサ及び抗ＦＧＦＲ１の２つのコントロール抗体と比較してのＩＬ−２２−Ｆｃのグラフで比較した創傷傷口測定値を示す。各データポイントは７マウス／群の平均を表す。１５、１９、２１日目、及び２７日目における個々の創傷傷口測定値を示す。２７日目の代表的なマウスの写真を示す（Ｅ）。ｄｂ／ｄｂマウスにおいてコントロール抗体処置と比較しての、ＩＬ−２２−Ｆｃの局所対全身性投与を試験するための研究デザインの模式図である；全３群（ｎ＝７）。コントロールＦｃの局所処置とグラフにより比較したＩＬ−２２−Ｆｃ局所対全身性投与の創傷傷口測定値を示す。抗ブタクサ抗体をＦｃコントロール抗体として使用した。各データポイントは７マウス／群の平均を表す。ＩＬ−２２−Ｆｃ（Ｂ）及びコントロール抗体（Ａ）からの２２日目の上面及び背面双方を示す代表的マウスの外科的に除去された創傷組織の写真を示す。図４３ＡはＩＬ−２２ＲＫＯマウスの作製方策を示す。図４３ＢはＩＬ−２２ＲＫＯ及びＷＴマウスからの結腸におけるＩＬ−２２Ｒａ１ｍＲＮＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ結果を示す。図４３Ｃは、ＩＬ−２２Ｆｃ又はコントロールＩｇＧの単一用量注射２日後のＩＬ−２２ＲＫＯ及びＷＴマウスからの結腸におけるＲｅｇ３ｂｍＲＮＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ結果を示す。^＊＊＊Ｐ＜０．００１。エラーバー，標準誤差。肥満マウスが欠陥のあるＩＬ−２２応答を開始したことを証明する結果を示す。（Ａ−Ｄ）ＯＶＡ／ＣＦＡで免疫されたｄｂ／ｄｂ（Ａ−Ｂ）、ＤＩＯ（Ｃ−Ｄ）及びコントロールマウスの流入領域リンパ節中のリンパ球について７日目にフローサイトメトリーによってＩＬ−２２の発現を分析した。（Ａ，Ｃ）中のＦＡＣＳプロット上の数はＣＤ４^＋Ｔ細胞内のＩＬ−２２^＋細胞のパーセントである。示されたデータは３回（Ａ−Ｂ）の独立した実験の代表的なものである。全実験においてＮ＝４。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。肥満マウスが欠陥のあるＩＬ−２２応答を開始したことを証明する結果を示す。（Ｅ−Ｆ）ｄｂ／ｄｂ、痩身コントロール、ＨＦＤ及び飼料給餌正常マウスにフラゲリン又はＰＢＳを注射した。血清を２時間後に収集した。ｄｂ／ｄｂ及び痩身コントロール（Ｅ）、及びＨＦＤ及び飼料給餌マウス（Ｆ）からのＩＬ−２２のＥＬＩＳＡ。示されたデータは２回（Ｃ−Ｆ）の独立した実験の代表的なものである。全実験においてＮ＝４。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。レプチンシグナル欠損マウスにおけるＩＬ−１７及びＩＬ−２２生産の欠陥を示す。（Ａ−Ｂ）ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−２２発現を、ＣＤ４＋細胞ＯＶＡ／ＣＦＡで免役したｄｂ／ｄｂ及びｏｂ／ｏｂマウスにおいて７日目に分析した。（Ｃ）組換えマウスレプチン（１μｇ／ｍｌ）を伴うか伴わないＩＬ−２２産生条件下で刺激された精製ナイーブＷＴＣＤ４＋Ｔ細胞の培養上清からのＩＬ−２２ＥＬＩＳＡ。（Ｄ）組換えマウスレプチン（１μｇ／ｍｌ）を伴うか伴わないＩＬ−２３で刺激されたＲａｇ２ＫＯ脾細胞の培養上清からのＩＬ−２２ＥＬＩＳＡ。（Ｅ）フラゲリン刺激の２時間後のｏｂ／ｏｂ又は痩身コントロールからの血清ＩＬ−２２のＥＬＩＳＡ。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー、標準誤差。シトロバクター・ローデンチウム感染に対するｄｂ／ｄｂ（ｏｂ／ｏｂ）マウスの感受性が欠陥のあるＩＬ−２２生産に関連しており、外因性ＩＬ−２２−Ｆｃによってレスキューされることを証明する結果を示す。（Ａ）シトロバクター・ローデンチウム感染後のＷＴ、ｄｂ／ｄｂ及びｏｂ／ｏｂマウス（ｎ＝５）からの結腸中のＩＬ−２２ｍＲＮＡ発現。（Ｂ）体重及び（Ｃ）シトロバクター・ローデンチウムに感染したｄｂ／ｄｂ及び痩身コントロールマウス（ｎ＝１０）の生存率。（Ｄ−Ｅ）上皮肥厚、腸管内中への腸細胞排出、細菌コロニー（矢印）及び粘膜下浮腫（垂直バー）を示す１０日目の痩身コントロール（Ｄ）及びｄｂ／ｄｂ（Ｅ）マウスの結腸組織診断。水平バー，２００μｍ。（Ｆ）結腸組織診断により決定された臨床スコア（ｎ＝５）。（Ｇ−Ｈ）１０日目でのｄｂ／ｄｂ及び痩身コントロールマウス（ｎ＝５）の肝臓（Ｇ）及び脾臓（Ｈ）中の細菌負荷。（Ｉ）１０日目での痩身コントロール及びｄｂ／ｄｂマウス（ｎ＝５）中の抗シトロバクター・ローデンチウムＩｇＧのＥＬｉＳＡ。（Ｊ）感染後にＩＬ−２２−Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置された痩身コントロール又はｄｂ／ｄｂマウス（ｎ＝１０）の生存率。データは３回の独立の実験の代表的なものである。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。糖尿病性疾患がＩＬ−２２−Ｆｃ処置によって減少したことを証明する結果を示す。（Ａ−Ｄ）ＨＦＤ給餌マウスを週２回ＩＬ−２２−Ｆｃで処置した（ｎ＝１０）。（Ａ）２０日目（給餌）及び２１日目（１６時間絶食）の血糖。（Ｂ）３０日目の体重。（Ｃ）２１日目のグルコース負荷試験。（Ｄ）２８日目のインスリン負荷試験。データは２回の独立の実験の代表的なものである。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。ＩＬ−２２がＨＦＤ給餌マウスの糖尿病性疾患を予防することを証明する結果を示す。（Ａ）体重、（Ｂ）血糖。（Ｃ）２３日目のグルコース負荷試験。（Ｄ）２３日目の１６時間絶食後の血糖、及び（Ｅ）２５日目の腹部脂肪パッド。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。ＩＬ−２２が複数の機序を通してメタボリック症候群を調節することを証明する結果を示す。（Ａ−Ｃ）２群のｄｂ／ｄｂマウス（ｎ＝８）に自由に食物を給餌し、週２回コントロールＩｇＧ又はＩＬ−２２−Ｆｃで処置した。１群のｄｂ／ｄｂマウス（ｎ＝８）にＩＬ−２２−Ｆｃ処置群の食物摂取と一致した制限された食物を給餌し、コントロールＩｇＧで処置した。自由に給餌したマウスの最初の８日間の蓄積的食物摂取を（Ａ）に示し、血糖を（Ｂ）に示し、２５日目のグルコース負荷試験を（Ｃ）に示す。（Ｄ−Ｅ）は０日目及び２日目のＩＬ−２２−Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置されたｄｂ／ｄｂ（Ｄ）及びＨＦＤ（Ｅ）マウスにおけるＰＹＹレベルを示す。血清を第２回目の処置の前の２日目及び５日目に集め、ＰＹＹを分析した。（Ｄ−Ｅ）は０日目及び２日目のＩＬ−２２−Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置されたｄｂ／ｄｂ（Ｄ）及びＨＦＤ（Ｅ）マウスにおけるＰＹＹレベルを示す。血清を第２回目の処置の前の２日目及び５日目に集め、ＰＹＹを分析した。（Ｆ）は３週間の間ＩＬ−２２−Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置されたｄｂ／ｄｂマウスの血清ＬＰＳを示す。（Ｇ−Ｉ）ＩＬ−２２ＲＫＯ（ｎ＝９）及びＷＴマウス（ｎ＝６）に６週齢で始めてＨＦＤを給餌した。体重の結果を（Ｇ）に示し、ＨＦＤを用いた３ヶ月でのグルコース負荷試験の結果を（Ｈ）に示す。ＨＦＤを用いた４ヶ月でのインスリン負荷試験の結果を（Ｉ）に示す。示されたデータは２回（Ａ−Ｃ）又は３回（Ｄ−Ｉ）の独立の実験の代表的なものである。＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。ペアフィードの制限された食物摂取の結果を示す。３群のｄｂ／ｄｂマウスに図４９Ａにおけるように給餌し、処置した。蓄積的食物摂取を測定した。ＩＬ−２２が肝機能を改善し脂肪パッドを減少させたことを証明する結果を示す。（Ａ）図２０ＡにおけるようにＩＬ−２２Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置されたｄｂ／ｄｂマウス。肝臓酵素を１ヶ月で測定した。（Ｂ−Ｃ）ＨＦＤ給餌マウスを、図４７ＡにおけるようにＩＬ−２２Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置した。肝臓酵素（Ｂ）及び腹部脂肪パッド（Ｃ）を１ヶ月で測定した。^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１，エラーバー，標準誤差。（Ｄ−Ｈ）マウスにＨＦＤを１０週間給餌した後、６週間の間、週２回ＩＬ−２２Ｆｃ又はコントロールで処置した。（Ｄ）白色脂肪組織からの脂質代謝遺伝子発現。（Ｅ）血清トリグリセリド、グリセロール及び遊離脂肪酸。（Ｆ）肝臓トリグリセリド。（Ｇ）肝臓コレステロール。（Ｈ）白色脂肪組織トリグリセリド。（Ｉ−Ｊ）４週間ＩＬ−２２Ｆｃ又はコントロールＩｇＧで処置されたｄｂ／ｄｂマウス。（Ｉ）肝臓トリグリセリド。（Ｊ）白色脂肪組織トリグリセリド。^＊Ｐ＜０．０５，エラーバー，標準誤差。ＩＬ−２２がβ細胞のインスリン分泌を増加させたことを証明する結果を示す。ｄｂ／ｄｂマウスを図２０ＡにおけるようにＩＬ−２２Ｆｃで処置し、パンクレアーゼを３０日目に集め、インスリン及びグルカゴンについて染色した。（Ａ）総膵臓面積内の島面積のパーセント。（Ｂ）総島面積内のβ細胞面積のパーセント。（Ｃ）総島面積内のα細胞面積のパーセント。ＩＬ−２２ＫＯマウスはＨＦＤでグルコース不耐性を発症しなかった。ＩＬ−２２ＫＯマウスに６週齢で開始してＨＦＤが給餌された。グルコース負荷試験をＨＦＤの３ヶ月後に行った。エラーバー，標準誤差。シトロバクター・ローデンチウム感染に対するｏｂ／ｏｂマウスの感受性を証明する結果を示す：シトロバクター・ローデンチウムに感染したｏｂ／ｏｂ及び痩身マウス（ｎ＝１０）の（Ａ）体重及び（Ｂ）生存率。シトロバクター・ローデンチウム感染に対するｏｂ／ｏｂマウスの感受性を証明する結果を示す：（Ｃ−Ｄ）上皮肥厚、腸管内腔中への腸細胞排出、細菌コロニー（矢印）及び粘膜下浮腫（垂直バー）（水平バー，２００μｍ）を示す８日目の痩身コントロール（Ｃ）及びｏｂ／ｏｂマウス（Ｄ）の結腸組織；（Ｅ）結腸組織診断により決定された臨床スコア（ｎ＝５）；及び（Ｆ−Ｇ）８日目の肝臓（Ｆ）及び脾臓（Ｇ）におけるｏｂ／ｏｂ及び痩身コントロールマウス（ｎ＝５）の細菌負荷。^＊Ｐ＜０．０５，^＊＊Ｐ＜０．０１，^＊＊＊Ｐ＜０．００１。エラーバー、標準誤差。処置２０日目の（Ａ）体重、（Ｂ）血清グルコース及び（Ｃ）グルコース負荷試験におけるＩＬ−２２Ｆｃ、ＩＬ−２０Ｆｃ又はＩＬ−２４Ｆｃで処置されたｄｂ／ｄｂマウスの結果を示す。ＶＥＧＦ又はＩＬ−２２Ｆｃで処置されたｄｂ／ｄｂマウスにおける創傷治癒効果を比較する結果を示す。再構成された表皮におけるＩＬ−２２Ｆｃによるサイトカイン又はケモカインを示す。再構成された表皮におけるＩＬ−２２Ｆｃによるサイトカイン又はケモカインを示す。再構成された表皮におけるＩＬ−２２Ｆｃによるサイトカイン又はケモカインを示す。黄色ブドウ球菌感染を伴うか伴わない野生型マウス及びｄｂ／ｄｂマウスにおいて副子支持創傷モデルを使用する創縫合を比較する結果を示す。副子支持感染創傷モデルにおけるＶＥＧＦ及びＩＬ−２２Ｆｃ間の創傷治癒効果を比較する結果を示す。副子支持感染創傷モデルにおける異なった濃度のＶＥＧＦ及びＩＬ−２２Ｆｃ間の創傷治癒効果を比較する結果を示す。副子支持感染創傷モデルにおける異なった濃度のＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ及びＩＬ−２２Ｆｃ間の創傷治癒効果を比較する結果を示す。ＩＬ−２２Ｆｃが、副子支持創傷モデルにおいて溶液並びにゲル製剤における創傷治癒を加速させたことを示す。

ここで引用される全ての刊行物、特許及び特許出願はあらゆる目的のために出典明示によりここに明示的に援用される。
一態様では、本発明は、ＩＬ−２２タンパク質又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、同物質を含有する組成物、及び同物質を使用する方法に関する。特に、本発明は、ＩＢＤ、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患と動脈硬化プラーク形成によって特徴付けられる症状、メタボリック症候群、軽症及び急性内毒血症及び敗血症、急性腎損傷、急性膵炎、中等症急性膵炎、及びインスリン関連疾患の予防と治療におけるＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２ポリペプチドの使用に関する。更に、本発明は、糖尿病性足部潰瘍の予防と治療、創傷治癒、特に糖尿病性創傷治癒の促進におけるＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２ポリペプチドの使用に関する。

一態様では、これは、心血管疾患自体を治療するＩＬ−２２ポリペプチドを示す最初の開示であると考える。ここでのデータはＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が動脈硬化プラークの成長を低減し、動脈硬化プラークの破裂頻度を低減し、及び内毒血症を減じることができるという知見を裏付ける。この発明は、医師又は臨床医によって決定されうるような、メタボリック症候群、軽症もしくは急性内毒血症、敗血症及びインスリン関連疾患、例えば自身のＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要とするインスリン抵抗性（インスリンに対して応答性なし）に罹患している対象を治療するのに特に有用である。本出願は、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がメタボリック症候群に罹患している対象において高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を増加させ、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を減少させることができることを示しているデータを示す。該データは、理論に束縛されるものではないが、腸由来ＬＰＳが内毒血症及びアテローム性動脈硬化症の背後の推進体であることをまた示している。ｍＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質で処置されたマウスは高脂血症を減少させ、血管機能の回復と共に耐糖性を改善し、これらの変化は結果的に動脈硬化プラークを減少させた。ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は心血管疾患の進行を減弱させることができる。

更に、糖尿病は動物における炭水化物、脂肪及びタンパク質代謝を冒す慢性疾患である。糖尿病は、成人における失明、腎不全、及び下肢切断の主な原因であり、心血管疾患及び脳卒中の主要な危険因子である。Ｉ型糖尿病（又はインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）又は若年発症糖尿病）は、全糖尿病症例の約１０％を構成する。糖尿病は、膵臓β細胞によるインスリン分泌機能の進行性消失により特徴付けられる。この特徴はまた、その起源を膵臓疾患に有する非特発性又は「二次的」糖尿病により共有される。Ｉ型糖尿病は、次の臨床的徴候又は症候、例えば、継続的に上昇した血漿糖濃度又は高血糖症；多尿症；多飲症及び／又は過食症；網膜症、腎障害及び神経障害等の慢性の微小血管合併症；並びに失明、終期腎疾患、肢切断及び心血管梗塞を引き起こし得る高脂血症及び高血圧等の大血管性合併症を伴う。

ＩＩ型真性糖尿病（ＩＩ型糖尿病とも称されるインスリン非依存性糖尿病又はＮＩＤＤＭ）は、糖代謝の調節不全及びインスリン感受性の障害に関連する代謝障害（又はメタボリック症候群）である。ＩＩ型糖尿病は通常成人で発症し、身体の十分なインスリンの利用又は産生の不能性を伴う。標的組織において観察されるインスリン耐性に加えて、ＩＩ型糖尿病を患う患者は相対的なインスリン不足を有し、つまり、患者は所定の血漿糖濃度に対して予想されるよりも低いインスリンレベルを有する。ＩＩ型糖尿病は、次の臨床的徴候又は症候、例えば、継続的に上昇した血漿糖濃度又は高血糖症；多尿症；多飲症及び／又は過食症；網膜症、腎障害及び神経障害等の慢性の微小血管合併症；並びに失明、終期腎疾患、肢切断及び心血管梗塞を引き起こし得る高脂血症及び高血圧等の大血管性合併症を伴う。

Ｉ．定義
他の定義がなされていない限り、ここで使用される当該分野の全ての用語、記号、及び他の科学的用語は、本発明が関係する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有することが意図される。ある場合には、一般的に理解される意味の用語を、明確さ及び／又は即時の参照のためにここで定義するが、ここにこのような定義を含むことは、当該分野で一般的に理解される定義に対して実質的な差異を表すとは必ずしも解釈されるべきでない。
この出願において、他の説明がなされていない限り、用いられる技術は、Molecular Cloning: A Laboratory Manual（Sambrook等, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press）、PCR Protocols: A Guide to Methods及びApplications（Innis等 1990. Academic Press, San Diego, CA）、及びHarlow及びLane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14（Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY）のような幾つかのよく知られた文献の何れかにおいて見出されうる。
適切な場合には、市販のキット及び試薬の使用を含む手順は、特段の説明がない場合は、製造業者が定めたプロトコル及び／又はパラメータに従って一般的に実施される。従って本方法及び使用が記載される前に、この発明は記載される特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物種又は属、コンストラクト、及び試薬に限定されるものではなく、それらは当然変わりうるものと理解されなければならない。またここで使用される技術用語は特定の実施態様のみを説明するためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定する意図はない。

ここで使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他の定義を示すものでない限り複数形を含む。例えば「an isolated peptide」（単離ペプチド）はまた一又は複数の単離ペプチドを含む。
この明細書及び特許請求の範囲を通して、「含む（comprise）」なる語又は「含む（comprises）」又は「含む（comprising）」のような変形語は、述べられた整数又は整数群を含むが他の整数又は整数群を排除するものではないことを意味するものと理解されるであろう。

ここで使用される「ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質」又は「ＩＬ−２２融合タンパク質」又は「ＩＬ−２２Ｉｇ融合タンパク質」は、ＩＬ−２２タンパク質又はポリペプチドがＩｇＧＦｃ領域に直接的に又は間接的に連結している融合タンパク質を意味する。所定の好ましい実施態様では、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はヒトＩｇＧＦｃ領域に連結したヒトＩＬ−２２タンパク質又はポリペプチドを含む。所定の実施態様では、ヒトＩＬ−２２タンパク質は配列番号：４のアミノ酸配列を含む。しかしながら、ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／又は活性に影響を及ぼさない挿入、欠失、置換、特にＩＬ−２２又はＦｃの保存的アミノ酸置換のようなマイナーな配列多様性はまた本発明によって考慮されることが理解される。本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２受容体に結合することができ、それがＩＬ−２２受容体下流のシグナル伝達を生じうる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２受容体に結合することができ、及び／又はＩＬ−２２受容体下流のシグナル伝達を生じさせることができる。ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の機能及び／又は活性は、限定されないが、ＥＬＩＳＡ、リガンド・受容体結合アッセイ及びＳｔａｔ３ルシフェラーゼアッセイを含む、当該分野で知られている方法によってアッセイできる。所定の実施態様では、本発明は、ＩＬ−２２受容体に結合するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供し、該結合はＩＬ−２２受容体下流のシグナル伝達を生じさせることができ、該ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここでＦｃ領域はグリコシル化されていない。ある特定の実施態様では、ＩＬ−２２融合タンパク質のＦｃ領域はエフェクター活性を持たないか（例えばＦｃｇＩＩＩＲに結合せず）、あるいは全（例えば野生型）ＩｇＧ抗体より実質的に低いエフェクター活性を示す。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）のような細胞傷害性を惹起させない。他の説明がなされない限り、「ＩＬ−２２融合タンパク質」、「ＩＬ−２２Ｆｃ融合体」、「ＩＬ−２２Ｉｇ融合タンパク質」、「ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質」又は「ＩＬ−２２Ｆｃ」はこの出願を通して交換可能に使用される。

ここで使用される「ＩＬ−２２」又は「ＩＬ−２２ポリペプチド」又は「ＩＬ−２２タンパク質」なる用語は、特段の記載がない限り、霊長類（例えばヒト）及び齧歯類（例えばマウス及びラット）を含む任意の哺乳動物由来の任意の天然ＩＬ−２２を意味する。該用語は「完全長」の未加工ＩＬ−２２並びに細胞中のプロセシングから生じる任意の形態のＩＬ−２２を包含する。例えば、Ｎ末端リーダー配列を含む完全長ＩＬ−２２と成熟型ＩＬ−２２の双方が本発明に包含される。リーダー配列(又はシグナルペプチド)は外因性ＩＬ−２２リーダー配列又は他の哺乳動物分泌タンパク質の外因性リーダー配列でありうる。所定の実施態様では、リーダー配列は真核又は原核生物分泌タンパク質由来でありうる。該用語はまたＩＬ−２２の天然に生じる変異体、例えばスプライスバリアント又はアレル変異体を包含する。例示的なヒトＩＬ−２２のアミノ酸配列は配列番号：４（成熟型、シグナルペプチドなし）に示す。所定の実施態様では、内因性リーダー配列を伴う完全長ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列は配列番号：７１に与えられ；他の実施態様では、外因性リーダー配列を伴う成熟ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列は配列番号：２に与えられる。マイナーな配列多様性、特にＩＬ−２２の機能及び／又は活性（例えば、ＩＬ−２２受容体への結合）に影響を及ぼさないＩＬ−２２の保存的アミノ酸置換もまた本発明によって考慮される。図１は幾つかの例示的な哺乳動物種由来の成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列アラインメントを示す。アステリスクはＩＬ−２２の機能及び／又は活性に重要であると思われる種にわたって高度に保存されたアミノ酸残基を示す。従って、所定の実施態様では、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は配列番号：４に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ−２２ポリペプチドを含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２タンパク質は配列番号：７１に対して９５％以上の配列同一性、配列番号：７１に対して９６％以上の配列同一性、配列番号：７１に対して９７％以上の配列同一性；配列番号：７１に対して９８％以上の配列同一性；配列番号：７１に対して９９％以上の配列同一性を有する。ここに記載のＩＬ−２２ポリペプチドは様々な供給源、例えばヒト組織又は他の供給源から単離されるか、あるいは組換え又は合成法によって調製されうる。

「ＩＬ−２２受容体」又は「ＩＬ−２２Ｒ」なる用語は、ＩＬ−２２Ｒ１及びＩＬ−１０Ｒ２からなるヘテロ二量体又はその天然に生じるアレル変異体を意味する。Ouyang等, 2011, Annu. Rev. Immunol. 29:159-63を参照。ＩＬ−１０Ｒ２は多くの細胞型によって遍在性に発現され、ＩＬ−２２Ｒ１は上皮細胞、肝細胞及びケラチノサイトのような自然細胞においてのみ発現される。ＩＬ−２２Ｒ１はまたＩＬ−２２Ｒａ１又はＩＬ−２２Ｒａ１として知られている。ＩＬ−２２Ｒ１は他のポリペプチドと対にされて、他のＩＬ−１０ファミリーメンバー、例えばＩＬ−２０又はＩＬ−２４に対するヘテロ二量体受容体を形成しうる。例えば上掲のOuyang 等, 2011を参照のこと。

「天然配列ＩＬ−２２ポリペプチド」又は「天然配列ＩＬ−２２Ｒポリペプチド」は、天然由来の対応するＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチドと同じアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。そのような天然配列ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチドは自然から単離することもでき、あるいは組換え又は合成手段により生産することができる。該用語は、特異的ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチドの天然に生じる切断又は分泌型（例えばその付随するシグナルペプチドを欠くＩＬ−２２）、天然に生じる変異型（例えば選択的スプライス型）、及びポリペプチドの天然に生じるアレル変異体を特に包含する。本発明の様々な実施態様では、ここに開示された天然配列ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチドは成熟又は完全長天然配列ポリペプチドである。例示的な完全長天然ヒトＩＬ−２２は図３０（ＤＮＡ，配列番号：７０）及び図３１（タンパク質，配列番号：７１）に示す。開始及び停止コドンは図３０に太字のフォント及び下線で示す。添付図に開示されたＩＬ−２２及びＩＬ−２２Ｒポリペプチド配列はアミノ酸位置１とここに標示されたメチオニン残基で始まることが示されているが、図中アミノ酸位置１から上流又は下流に位置する他のメチオニン残基をＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチドに対する開始アミノ酸残基として用いることができることが考えうるし可能である。

「ＩＬ−２２変異体」、「ＩＬ−２２Ｒ変異体」、「ＩＬ−２２変異体ポリペプチド」又は「ＩＬ−２２Ｒ変異体ポリペプチド」は、完全長天然配列ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチド配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する、上に定義された活性なＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチドを意味する。通常、ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチド変異体は、完全長又は成熟天然配列ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒポリペプチド配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するであろう。

「Ｆc領域」、「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ」なる用語は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端非抗原結合領域を意味する。該用語は、天然Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。所定の実施態様では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６から重鎖のカルボキシ末端まで延びる。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、Ｆｃ領域の構造又は安定性に影響を及ぼすことなく、存在していても存在していなくともよい。ここで別の記載がない限り、ＩｇＧ又はＦｃ領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されているように、ＥＵインデクスとも呼ばれる、抗体に対するＥＵ番号付けシステムに従う。

所定の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒンジ領域（Ｃｙｓ２２６で始まる）、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む免疫グロブリンＩｇＧ重鎖定常領域を意味する。ここで使用される「ヒンジ領域」又は「ヒンジ配列」なる用語はリンカーとＣＨ２ドメインの間に位置するアミノ酸配列を意味する。所定の実施態様では、ヒンジ領域はアミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号：３１）を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質に対するヒンジ領域は、二量体化を容易にする、天然ＩｇＧ１ヒンジ領域中に見出される配列であるＣＰＰＣＰ配列（配列番号：３１）を含む。所定の他の実施態様では、Ｆｃ領域はヒンジ領域で始まり、ＩｇＧ重鎖のＣ末端まで延びる。ある特定の実施態様では、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域を含む。ある特定の実施態様では、Ｆｃ領域はＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。ある他の特定の実施態様では、Ｆｃ領域はＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。実施例セクションに記載されるように、ＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質がＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質よりも更に優れた薬物動態特性を示すことが本出願人によって意外にも発見された。

所定の実施態様では、ＩｇＧＣＨ２ドメインはＡｌａ２３１で始まる。所定の他の実施態様では、ＣＨ３ドメインはＧｌｙ３４１で始まる。ヒトＩｇＧのＣ末端Ｌｙｓ残基は場合によっては存在しない場合があることが理解される。Ｆｃの所望の構造及び／又は安定性に影響を与えないＦｃ領域の保存的アミノ酸置換は本発明の範囲内であることがまた理解される。

所定の実施態様では、ＩＬ−２２はリンカーを介してＦｃ領域に連結される。ある特定の実施態様では、リンカーはここに記載のＦｃ領域にＩＬ−２２のＣ末端を連結するペプチドである。所定の実施態様では、天然ＩｇＧ配列がリンカー及び／又はヒンジ領域に存在し免疫原性のリスクを最小にし、及び／又は回避する。他の実施態様では、製造を容易にするためにマイナーな配列変異を天然配列に導入することができる。高活性（例えばルシフェラーゼアッセイによって測定して）を示す外因性リンカー又はヒンジ配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合コンストラクトもまた本発明の範囲内である。所定の実施態様では、リンカーは、８−２０アミノ酸、８−１６、８−１５、８−１４、８−１３、８−１２、８−１１、８−１０、８−９、１０−１１、１０−１２、１０−１３、１０−１４、１０−１５、１０−１６、１１−１６、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６アミノ酸長であるアミノ酸配列を含む。所定の他の実施態様では、リンカーはアミノ酸配列ＤＫＴＨＴ（配列番号：３２）を含む。

ある特定の実施態様では、リンカーは、配列Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号：４５）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号：４６）又はＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号：４７）を含まない。
所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含む。「連結された」又は「融合した」なる用語は二つの部分間に形成される共有結合、例えばペプチド結合を意味する。

「アフコシル化（afucosylation）」、「アフコシル化された（afucosylated）」、「脱フコシル化（defucosylation）」又は「脱フコシル化された（defucosylated）」なる用語はＦｃのＣＨ２ドメインに結合したＮ−グリカンからのコア−フコースが存在せず又は除去されていることを意味する。

ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質は、他のＦｃ融合タンパク質又はＦｃを含む抗体とは異なり、Ｆｃ領域に結合したＮ−グリカンに高レベル（例えば３０％）のアフコシル化を示すことが予期せぬことに本出願人によって発見された。ＦｃのＣＨ２ドメインに結合したＮ−グリカンは異種性である。ＣＨＯ細胞中で生成される抗体又はＦｃ融合タンパク質はフコシルトランスフェラーゼ活性によってフコシル化される。Shoji-Hosaka等, J. Biochem. 2006, 140:777-83を参照のこと。通常、少ない割合の天然に生じるアフコシル化ＩｇＧがヒト血清中で検出されうる。ＦｃのＮ−グルコシル化はＦｃｇＲへの結合に重要であり；Ｎ−グリカンのアフコシル化はＦｃｇＲＩＩＩａへのＦｃの結合能を増加させる。ＦｃｇＲＩＩＩａ結合の増加は抗体依存性細胞細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を亢進させうるが、これは細胞傷害性が望まれるある種の抗体治療用途において有利な場合がある。上掲のShoji-Hosaka等を参照のこと。しかしながら、そのようなエフェクター機能の亢進は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合体の場合におけるようにＦｃ媒介細胞傷害性が望ましくない場合は有害なことがある。

ＩｇＧ４ＦｃはＩｇＧ１Ｆｃよりも少ないエフェクター活性を示すことが知られている。本出願人は、ＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質がまたＦｃ領域において高レベルのアフコシル化を示すことを意外にも発見した。ＩｇＧ４のＦｃ領域に結合した高レベルのアフコシル化Ｎ−グリカンは望ましくないエフェクター活性を増大させうる。
よって、一態様では、本発明は、Ｆｃ領域又はＣＨ２ドメインがグリコシル化されていないＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。所定の実施態様では、ＣＨ２ドメイン中のＮ−グリコシル化部位がグリコシル化を防ぐように変異される。

所定の他の実施態様では、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメイン中のグリコシル化は、グリコシル化コンセンサス部位、つまり２９７位のＡｓｎと続く任意のアミノ酸残基（ヒトＩｇＧの場合、Ｓｅｒ）及びＴｈｒ（図３を参照）を変えることによって排除されうる。グリコシル化部位はアミノ酸挿入、欠失及び／又は置換によって変えることができる。例えば、一又は複数のアミノ酸残基をＡｓｎとＳｅｒの間又はＳｅｒとＴｈｒの間に挿入して元のグリコシル化部位を変えることができ、該挿入はＮ−グリコシル化部位を再生しない。ある特定の実施態様では、ヒトＩｇＧＦｃのＣＨ２ドメイン内のＮ２９７残基（例えばＦｃのＮ−グリコシル化部位，図３を参照）が変異されてグリコシル化部位が消失させられる。ある特定の実施態様では、Ｎ２９７残基がＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕに変えられる。幾つかの特定の実施態様では、Ｎ２９７残基がＧｌｙ又はＡｌａに変えられる。他の特定の実施態様では、Ｎ２９７残基がＧｌｙに変えられる。所定の他の実施態様では、Ｔ２９９残基は他のアミノ酸、例えばＡｌａ、Ｖａｌ又はＧｌｙで置換されうる。ある特定の実施態様では、アグリコシル化Ｆｃを生じる変異はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の構造及び／又は安定性に影響を及ぼさない。

関連した態様では、本発明は、Ｆｃ領域がグリコシル化されていないＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物を患者に投与することを含む、それを必要とする患者における、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤを治療する方法、腸内の細菌感染を阻害する方法、及び腸における上皮完全性、上皮増殖、分化及び／又は遊走を改善する方法、及び代謝疾患又はメタボリック症候群、ＩＩ型糖尿病、アテローム性動脈硬化症及び糖尿病性創傷治癒を治療する方法を提供する。

更なる態様では、本発明は、Ｆｃ領域に低レベルのアフコシル化を有するか又はアフコシル化がないＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物を提供する。すなわち、本発明は、１０％以下、好ましくは５％以下、より好ましくは２％以下、最も好ましくは１％未満のＦｃ領域の全アフコシル化レベルを有するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物を提供する。他の態様では、本発明は、１０％以下、好ましくは５％以下、より好ましくは２％以下、最も好ましくは１％未満のＦｃ領域のアフコシル化レベルを有するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物を患者に投与することを含む、それを必要とする患者における、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤを治療する方法、腸内の細菌感染を阻害する方法、及び腸における上皮完全性、上皮増殖、分化及び／又は遊走を改善する方法、及び代謝疾患、ＩＩ型糖尿病、病的肥満を伴うＩＩ型糖尿病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、メタボリック症候群、内毒血症(急性及び軽症)、敗血症、急性冠動脈性心疾患、高血圧症、脂質異常症、肥満、高血糖症、脂質代謝障害、肝炎、急性肝炎、腎不全、急性腎不全、急性腎損傷、腎移植不全（renal draft failure）、膵炎、急性膵炎、肝線維症及び肺線維症、創傷、感染創傷を治療し、糖尿病性創傷治癒を含む創傷治癒を促進する方法を提供する。

「アフコシル化％」なる用語は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の組成物のＦｃ領域におけるアフコシル化レベルを意味する。アフコシル化％は、質量分析法（ＭＳ）によって測定し、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の集団全体に対するアフコシル化グリカン種（一つのＦｃドメイン（マイナス１）及び組合わされた双方のＦｃドメイン（マイナス２）上のフコースを伴わない種）のパーセントとして表すことができる。例えば、アフコシル化％は、例えば図２及び以下に示される実施例に記載されたＡｇｉｌｅｎｔ６５２０ＢＴＯＦ質量分析計によって決定されたような、ＭＳによって分析された全グリカン種の総面積に対するマイナス１フコースピーク及びマイナス２フコースピーク下の組合わせた面積のパーセントとして計算することができる。アフコシル化レベルは、限定されないがＨＰＬＣ−ＣｈｉｐＣｕｂｅＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ）及び逆相ＨＰＬＣを含む、当該分野で知られている任意の他の適切な方法によって測定することができる。ＩＬ−２２Ｆｃ組成物のアフコシル化％は、組成物が意図された目的に対して不適切な許容できないレベルのＡＤＣＣを惹起する可能性があるかどうかを決定するための指標として使用することができる。従って、ある特定の実施態様では、組成物は１０％以下、好ましくは５％以下、より好ましくは３％以下、最も好ましくは１％以下のアフコシル化レベルを有するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む。所定の実施態様では、組成物は、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、又は１％以下のアフコシル化レベルを有するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む。

所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ組成物の所望のレベルのアフコシル化は、限定されないが精製を含む、当該分野で知られた方法によって達成することができる。例えば、組成物中のフコシル化種は、フコース結合部分、例えばフコース、特に１−６連鎖中に存在するフコースに対して特異的な抗体又はレクチンを結合した樹脂を有するアフィニティクロマトグラフィーによって富化させることができる。例えばKobayashi等, 2012, J. Biol. Chem. 287:33973-82を参照のこと。所定の他の実施態様では、フコシル化種は、アフィニティカラム中で抗フコース特異的抗体を使用してアフコシル化種から富化分離させることができる。別法では又は追加的に、アフコシル化種は、アフィニティクロマトグラフィーを使用してＦｃｇＲＩＩＩａに対する差次的結合親和性に基づいてフコシル化種から分離することができる。

所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、ＣＨ２ドメイン中のＮ２９７残基が変異されているＦｃ領域を含む。所定の実施態様では、Ｎ２９７残基はＧｌｙ又はＡｌａ、好ましくはＧｌｙに変えられる。所定の他の実施態様では、Ｎ２９７残基は欠失される。所定の実施態様では、Ｎ２９７にアミノ酸置換を有するＦｃを含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がアグリコシル化され又はグリコシル化されない。ここで使用される「アグリコシル化された（aglycosylated）」なる用語は、グリコシル化されていない興味あるタンパク質又はタンパク質の一部を意味する。例えば、アグリコシル化Ｆｃ領域を伴うＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメイン中のＮ２９７残基を突然変異させることによって作製することができる。
他の実施態様では、野生型Ｎ２９７残基に結合したＮ−グリカンは酵素的に、例えば脱グリコシル化によって除去することができる。適切な解糖酵素は限定されないがペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）を含む。

「二量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質」なる用語は、各単量体がＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む二量体を意味する。「単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質」なる用語は、一つの単量体がＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質（ＩＬ−２２Ｆｃアーム）を含む一方、他の単量体がＩＬ−２２ポリペプチドを伴わないＦｃ領域（Ｆｃアーム）を含む二量体を意味する。従って、二量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２Ｒ結合に対して二価である一方、単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２Ｒ結合に対して一価である。単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のヘテロ二量体化は、限定されないがノブ−インツウ−ホール技術によるヘテロ二量体化を含む、当該分野で知られた方法により容易にできる。ノブ−インツウ−ホール技術の構造及びアセンブリ法は、ここにその全体を出典明示により援用する例えば米国特許第５８２１３３３号、第７６４２２２８号、米国特許出願公開第２０１１／０２８７００９号及びＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５９８１０に見出すことができる。この技術は、一つのＦｃのＣＨ３ドメイにおいて小さいアミノ酸残基を大きなもので置き換えることによって「ノブ」（突起）を導入し、他のＦｃのＣＨ３ドメイン中に一又は複数の大きなアミノ酸残基を小さいもので置き換えることによって「ホール」（キャビティ）を導入することによって開発された。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合アームはノブを含み、Ｆｃ単独アームはホールを含む。

ノブ形成のための好ましい残基は一般に天然に生じるアミノ酸残基であり、好ましくはアルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）から選択される。最も好ましいものはトリプトファン及びチロシンである。一実施態様では、ノブ形成のための元の残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン又はバリンのように小さい側鎖体積を有する。ノブ形成のためのＣＨ３ドメイン中の例示的なアミノ酸置換は、限定されないがＴ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｙ又はＦ４０５Ｗ置換を含む。

ホール形成のための好ましい残基は通常は天然に生じるアミノ酸残基であり、好ましくはアラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）及びバリン（Ｖ）から選択される。一実施態様では、ホール形成のための元の残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン又はトリプトファンのように大きな側鎖体積を有する。ホール作製のためのＣＨ３ドメイン中の例示的なアミノ酸置換は、限定されないがＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｔ及びＹ４０７Ｖ置換を含む。所定の実施態様では、ノブはＴ３６６Ｗ置換を含み、ホールはＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ置換を含む。ある特定の実施態様では、単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域はＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。ある特定の実施態様では、単量体ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体はＩＬ−２２Ｆｃノブアーム及びＦｃホールアームを含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ＦｃノブはＴ３６６Ｗ置換（配列番号：６１）を含み、ＦｃホールアームはＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ（配列番号：６２）を含む。所定の他の実施態様では、双方のアームのＦｃ領域はＮ２９７Ｇ又はＮ２９７Ａ変異を更に含む。所定の実施態様では、単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は大腸菌細胞中で発現される。ヘテロ二量体化を容易にする当該分野で知られているＦｃ領域に対する他の修飾もまた考慮され、本出願に包含される。

「創傷」なる用語は、損傷、特に皮膚又は他の外表面が引き裂かれ、穿孔され、切断され、又はその他の破壊がなされているものを意味する。
「潰瘍」なる用語は、しばしば組織の死の膿の形成によって特徴付けられ、頻繁に炎症反応が伴う皮膚又は粘膜に対する損傷部位である。
ここで使用される「腸（intestine又はgut）」は、小腸及び大腸を広く包含する。
「創傷治癒を加速する」又は「創傷治癒の加速」なる用語は治癒速度の増加、例えば完全創縫合が生じるまでの時間の低減又は創傷面積のある％減少が生じるまでの時間の低減を意味する。
「糖尿病性創傷」は糖尿病に関連する創傷である。
「糖尿病性潰瘍」は糖尿病に関連する潰瘍である。

「慢性創傷」とは治癒しない創傷を指す。例えば例えばLazarus等, Definitions and guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing, Arch. Dermatol. 130:489-93 (1994)を参照。慢性創傷は、限定しないが、例えば動脈潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡、静脈潰瘍等を含む。急性創傷は慢性創傷に発展する場合がある。急性創傷は、限定しないが、例えば熱傷（例えば火傷）により生じた創傷、外傷、手術、広範な皮膚癌の切除、深部の真菌及び細菌感染、血管炎、硬皮症、天疱瘡、毒性表皮壊死疾患等を含む。例えばBuford, Wound Healing and Pressure Sores, HealingWell.com, published on: October 24, 2001を参照のこと。よって、所定の実施態様では、慢性創傷は感染創傷である。「正常な創傷」とは正常な創傷治癒修復が起こる創傷を指す。

ここでの目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義されるヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「から由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むか、又はそれはアミノ酸配列変化を含んでいてもよい。幾つかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下又は２以下である。幾つかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。

「親和性」とは、分子（例えば、リガンド又は抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、受容体又は抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。ここで使用される場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質とＩＬ−２２受容体）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、ここに記載されたものを含む、当該技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例証的かつ例示的実施態様は、以下で説明される。

ここでの「抗体」なる用語は最も広義に使用され、限定されないがモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）を含む様々な抗体構造、及びそれらが所望の生物活性を示す限り抗体断片を包含する。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を意味する。抗体断片の例は、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、５０％又はそれ以上で、参照抗体のその抗原への結合を遮断する抗体を意味し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、５０％又はそれ以上で、該抗体がその抗原に結合するのを遮断する。例示的な競合アッセイはここに提供される。
「キメラ」抗体なる用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来する一方、重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なった供給源又は種に由来する抗体を意味する。
抗体の「クラス」はその重鎖が有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを意味する。５つの主要な抗体のクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらの幾つかは更にサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１及びＩｇＡ_２に分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。

ここで使用される「細胞傷害剤」なる用語は、細胞の機能を阻害し又は防ぎ、及び／又は細胞死又は細胞破壊をもたらす物質を意味する。細胞傷害剤は、限定されないが、放射性同位体(例えば、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２及びＬｕの放射性同位体)、化学療法剤又は薬（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）、増殖阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；抗生物質；毒素、例えば小分子毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を含む。

「エフェクター機能」又は「エフェクター活性」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例は、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合性；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；貪食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；及びＢ細胞活性化を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は如何なるエフェクター機能も又は如何なる検出可能なエフェクター機能も示さない。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は実質的に減少したエフェクター機能、例えば約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少したエフェクター機能を示す。

薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」又は「治療的有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。
例えば、心血管疾患又は病態の場合、ＩＬ−２２ポリペプチド、融合タンパク質又はアゴニストの治療的有効量は、動脈硬化プラークの形成度合いを減少させ；動脈硬化プラークのサイズを減少させ；動脈硬化プラークを阻害し（つまり、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させる）；血栓症又は動脈硬化プラークの破裂を阻害し（つまり、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させる）；及び／又は該疾患又は病態に伴う徴候の一又は複数をある程度まで軽減することができる。
「低減又は阻害する」とは、好ましくは２０％又はそれ以上、より好ましくは５０％又はそれ以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の全体的な減少を生じさせる能力を意味する。低減又は阻害は、治療されている疾患の徴候、動脈硬化プラークの存在又はサイズ、又は動脈硬化プラークの数を意味しうる。

「準最適な量（最適以下の量）」とは所定の治療に対して典型的に使用される治療剤の最適量よりも少ない量を指す。二種の治療剤が同時に又は逐次的に対象に投与される場合、各治療剤は、各治療剤が単独で投与される場合の治療と比較して準最適な量で投与されうる。例えば、所定の実施態様では、ＩＢＤ治療を必要とする対象に、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質とデキサメタゾンを準最適な量で含有する薬学的組成物が投与される。

「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、高頻度可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般にＶＨ（又はＶＬ）中に次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、ここでは交換可能に使用されて、天然抗体と実質的に同様な構造を有するか又はここで定義したＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」なる用語は互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫を含む。形質転換細胞は一過性に又は安定に形質転換された細胞を含む。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれないが、突然変異を含む場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異子孫がここに含まれる。所定の実施態様では、宿主細胞は外因性核酸で一過性に形質転換される。所定の他の実施態様では、宿主細胞は外因性核酸で安定に形質転換される。

「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞によって生産された、あるいはヒト抗体レパートリー又は他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト源から由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、特に非ヒト抗原結合残基を含んでなるヒト化抗体を除く。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選別において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選別は、可変ドメイン配列のサブグループからなされる。一般に、配列のサブグループはKabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, ５版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vol 1-3におけるようなサブグループである。一実施態様では、ＶＬについて、サブグループは上掲のKabat等におけるようなサブグループカッパＩである。一実施態様では、ＶＨについて、サブグループは上掲のKabat等におけるようなサブグループＩＩＩである。

「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基とヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けている抗体を指す。

ここで使用される「高頻度可変領域」又は「ＨＶＲ」なる用語は、配列において高頻度可変であり（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）、及び／又は構造的に定まったループを形成し（「高頻度可変ループ」）及び／又は抗原接触残基を含む（「抗原接触」）抗体可変ドメインの領域の各々を意味する。一般に、抗体は６つのＨＶＲを含み；ＶＨに３つ(Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３)、ＶＬに３つ(Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３)である。ここでの例示的なＨＶＲは次を含む：
（ａ）アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）に生じる高頻度可変ループ（Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；
（ｂ）アミノ酸残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）、８９−９７（Ｌ３）、３１−３５ｂ（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）、及び９５−１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ−３６（Ｌ１）、４６−５５（Ｌ２）、８９−９６（Ｌ３）、３０−３５ｂ（Ｈ１）、４７−５８（Ｈ２）、及び９３−１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（MacCallum等 J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６−５６（Ｌ２）、４７−５６（Ｌ２）、４８−５６（Ｌ２）、４９−５６（Ｌ２）、２６−３５（Ｈ１）、２６−３５ｂ（Ｈ１）、４９−６５（Ｈ２）、９３−１０２（Ｈ３）、及び９４−１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ。
別の記載がない限り、可変ドメインのＨＶＲ残基及び他の残基（例えばＦＲ残基）はここでは上掲のＫａｂａｔ等に従って番号付けされる。

「イムノコンジュゲート」は、限定されないが、細胞傷害剤を含む一又は複数の異種分子にコンジュゲートした抗体又は断片である。
「個体」、「対象」又は「患者」は哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。所定の実施態様では、個体、対象又は患者はヒトである。

「単離された」ＩＬ−２２融合タンパク質は、融合タンパク質を組換え的に生産する宿主細胞の環境から分離されたものである。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２融合タンパク質は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により定量されて、９５％を越え又は９９％の純度に精製される。
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。

「ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸」は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする一又は複数の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子、宿主細胞中に一過性に又は安定に形質転換されたそのような核酸分子及び宿主細胞の一又は複数の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
「コントロール配列」なる用語は、特定の宿主生物において作用可能に結合したコード化配列を発現させるために必要なＤＮＡ配列を意味する。原核生物に好適なコントロール配列は、例えば、プロモーター、場合によってはオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核生物細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。

核酸は、他の核酸配列と機能的な関係に置かれるときに「作用可能に結合し」ている。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているなら、ポリペプチドのＤＮＡに作用可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、それが翻訳を容易にする位置にあるなら、コード配列と作用可能に結合している。一般に、「作用可能に結合している」とは、結合しているＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。結合は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、一般的な手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。

ここで使用される「モノクローナル抗体」なる用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味する。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、例えば自然に生じる変異を含むか又はモノクローナル抗体調製物の生産中に生じる可能な変異抗体（そのような変異体は一般に少量で存在する）を除いて、同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基(エピトープ)に対する異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。よって、「モノクローナル」との修飾語句は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の性質を示しており、抗体が何か特定の方法で生産しなければならないことを意味するものではない。例えば、本発明において使用されるモノクローナル抗体は、限定されないがハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージ−ディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン座の全て又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するそのような方法及び他の例示的方法はここに記載される。

「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を持つ天然に生じる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に向けて、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に向けて、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプの一つに割り当てることができる。

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、限定されないが、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域（非Ａ−及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域；並びにその天然に生じる変異体を含む。
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも一のアミノ酸修飾、好ましくは一又は複数のアミノ酸置換により、天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも一つのアミノ酸置換、例えば天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１から約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１から約５のアミノ酸置換を有する。ここでの変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有するであろう。所定の実施態様では、変異体Ｆｃ領域はグリコシル化されない。

「炎症性腸疾患」、「炎症性腸疾病」又はＩＢＤなる用語はここでは最も広義で使用され、その病因が小腸及び結腸を含む腸内に再発性炎症を含むあらゆる疾患及び病態を含む。一般的に見られるＩＢＤは潰瘍性大腸炎とクローン病を含む。ＩＢＤはＵＣ及びＣＤには限定されない。疾患の所見は限定されないが腸内の炎症及び上皮完全性の減少を含む。
「心血管疾患」又は「心血管疾病」なる用語はここでは最も広義で使用され、その病因が血管の異常、例えば動脈硬化プラーク形成（安定又は不安定（unstable/vulnerable）プラークを含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露上昇を含むあらゆる疾患及び病態を含む。該用語はまた動脈硬化プラークの形成阻害から恩恵を受ける疾患及び病態を含む。心血管疾患は、限定されないが、冠動脈アテローム性動脈硬化症、冠動脈微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、虚血、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、急性冠動脈症候群（ＡＣＳ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、ＣＡＤ及びＣＨＤに関連する症状、脳血管疾患、末梢血管疾患、動脈瘤、血管炎、静脈血栓症、糖尿病、及びメタボリック症候群慢性腎疾患、虚血及び血流再開後の既往（remote）組織損傷、心肺バイパス術を含む。この群に特に含められるものはその発生、発達、又は進行が動脈硬化プラーク形成の阻害によって制御できるあらゆる心血管疾患である。

「心血管病態」なる用語はここでは最も広義で使用され、その病因が動脈硬化プラーク形成（安定又は不安定（unstable/vulnerable）プラークを含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露上昇を含むあらゆる心血管病態及び疾患を含む。この群に特に含められるものは、その発生、発達、又は進行が動脈硬化プラーク形成の阻害によって制御できる動脈硬化プラーク形成に関連したあらゆる心血管病態及び疾患である。該用語は動脈硬化プラークの形成阻害から恩恵を受ける疾患及び病態を特に含む。心血管病態は、限定されないが、冠動脈アテローム性動脈硬化症、冠動脈微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、虚血、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、ＣＡＤ及びＣＨＤに関連する症状、脳血管疾患及び脳血管疾患に関連する症状、末梢血管疾患及び末梢血管疾患に関連する症状、動脈瘤、血管炎、静脈血栓症、糖尿病、及びメタボリック症候群慢性腎疾患、虚血及び血流再開後の既往組織損傷、心肺バイパス術を含む。ここで使用される「脳血管疾患に関連する症状」は、例えば、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）及び脳卒中を含む。ここで使用される「末梢血管疾患に関連する症状」は、例えば跛行を含む。この群に特に含められるものはその発生、発達、又は進行がアテローム硬化性プラーク形成の阻害によって制御できるあらゆる心血管疾患及び病態である。

アテローム硬化性プラーク形成は、腸微生物叢に由来する全身性リポ多糖（ＬＰＳ）のレベル上昇と腸粘膜障壁における機能的完全性の消失によって特徴付けられる、代謝内毒血症に対する自然免疫応答の結果として起こりうる。内毒血症に対する自然免疫応答は、プラーク形成の原因である低悪性度の慢性炎症を生じる。

「メタボリック症候群」なる用語はここでは最も広義で使用される。メタボリック症候群は、次の５つの特色の少なくとも３つを含む幾つかの代謝危険因子の成人対象における同時発生を含む：腹部肥満（例えば、男性では９０ｃｍ以上で女性では８０ｃｍ以上の胴回りでありうる）；高血清トリグリセリド（例えば、１５０ｍｇ／ｄＬ以上でありうるか、又は高トリグリセリドのために薬剤治療）；減少した血清ＨＤＬコレステロールレベル（例えば、男性で４０ｍｇ／ｄＬ未満、女性で５０ｍｇ／ｄＬ未満でありうるか、又は低ＨＤＬコレステロールのために薬剤治療）；高血圧（例えば、１３０ｍｍＨｇを越える収縮期血圧及び８５ｍｍＨｇを越える拡張期血圧でありうるか、又は高血圧のために薬剤治療）；及び空腹時血糖値上昇（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上でありうるか、又は高血糖のために薬剤治療、又は過去に２型糖尿病と診断）。また出典明示によりここに援用されるMeigs, the Metabolic Syndrome (Insulin Resistance Syndrome or Syndrome X), http://www.uptodate.com/contents/the-metabolic-syndrome-insulin-resistance-syndrome-or-syndrome-xを参照のこと。

１６歳を越える子供では、成人に対する上記基準を使用することができる。１０−１６歳間の子供では、メタボリック症候群は次の５つの特色の少なくとも３つを含む幾つかの代謝危険因子の対象における同時発生を含む：腹部肥満（例えば９０パーセンタイルを越える胴回りでありうる）；高血清トリグリセリド（例えば１１０ｍｇ／ｄＬ以上、パーセンタイルを越えるか、又は高トリグリセリドのために薬剤治療）；減少した血清ＨＤＬコレステロールレベル（例えば、４０ｍｇ／ｄＬ未満、５パーセンタイル未満、又は低ＨＤＬコレステロールのために薬剤治療）；高血圧（例えば、１３０ｍｍＨｇを越える収縮期血圧及び８５ｍｍＨｇを越える拡張期血圧、９０パーセンタイルを越えるか、又は高血圧のために薬剤治療）；及び空腹時血糖値上昇（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ以上でありうるか、耐糖能障害、高血糖のために薬剤治療、又は過去に２型糖尿病と診断）。

一般的に言えば、メタボリック症候群において同時発生する危険因子は、肥満（例えば腹部肥満）、高血糖症、脂質異常症、インスリン抵抗性、及び／又は高血圧を含む。これらの危険因子は全てアテローム性動脈硬化性心血管疾患、糖尿病、又は双方の発症を促進する。メタボリック症候群はまた慢性的な脂肪組織炎症を特徴としうる。
メタボリック症候群は炎症誘発性、血栓形成促進性状態（prothrombic state）として認識することができ、上昇レベルの一又は複数のＣ反応性タンパク質、ＩＬ−６、ＬＰＳ、及びプラスミノーゲン活性化因子阻害因子１を伴う場合がある；そのようなマーカーはアテローム性動脈硬化性心血管疾患、糖尿病、又は双方の続く発症のリスク増加を伴う場合がある。

メタボリック症候群は、脂肪肝を伴う脂肪肝疾患、線維症、及び硬変、肝細胞性及び肝内胆管がん、慢性腎疾患、多嚢胞性卵巣症候群、睡眠呼吸障害、例えば閉塞性睡眠時無呼吸、及び高尿酸血症及び痛風の一又は複数を含む幾つかの肥満症関連疾患に関連している場合がある。
「インスリン関連疾患」なる用語は耐糖能障害によって特徴付けられた疾患又は病態を包含する。一実施態様では、インスリン関連疾患は、限定されないがＩ型（インスリン依存性糖尿病又はＩＤＤＭ）、ＩＩ型（非インスリン依存性糖尿病又はＮＩＤＤＭ）糖尿病、妊娠糖尿病、及びインスリン分泌を刺激する薬剤によって恩恵が得られうる任意の他の疾患を含む糖尿病である。他の実施態様では、インスリン関連疾患はインスリン抵抗性によって特徴付けられる。

「敗血症」なる用語はその最も広い意味で使用され、重篤な感染によって引き起こされる全身性の炎症状態を包含しうる。敗血症は、重篤な感染、最も一般的には血液、尿路、肺、皮膚、又は他の組織中の細菌で、しかしまた真菌、ウイルス、及び寄生虫に対する免疫系の反応によって引き起こされうる。
「急性内毒血症」なる用語はその最も広い意味で使用され、増加した血漿細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）の症状を包含しうる。急性内毒血症は次に敗血症を生じうる。体循環中の増加したＬＰＳは低度の慢性炎症を誘発し、内因性保護的宿主応答を活性化して血漿脂質を上昇させ、これが慢性状態において食餌誘発性肥満症、インスリン抵抗性及びアテローム性動脈硬化症、及び最終的なＣＶＤイベントに寄与する。

ここで使用される場合、「治療」（及び「治療する（treat）」、又は「治療する（treating）などのその文法的変形例）は、治療されている個体の自然の過程を変更する試みでの臨床的介入を意味し、予防のため又は臨床的病理の過程中に実施されうる。治療の所望される効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発の防止、症状の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的病理結果の縮小、転移の防止、疾患進行速度の低減、疾患状態の回復又は緩和、及び寛解又は改善された予後を含む。
例えば、ＩＢＤに関して、「治療」は、ＩＢＤ発症の可能性の低減、ＩＢＤに罹る速度の減少及び疾患の重篤度の減少を意味しうる。他の例として、動脈硬化プラーク形成に関しては、「治療」は動脈硬化プラーク沈着を発生する可能性の減少、沈着の発生速度の減少、既存の沈着の数又はサイズの減少、又はプラーク安定性の改善を意味しうる。治療を必要とする者は、疾患を既に持つ者並びに疾患が予防されなければならない者を含む。治療の所望される効果は、限定されないが、疾患の発生又は再発の防止、症状の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的病理結果の縮小、疾患の防止、疾患進行速度の低減、疾患状態の回復又は緩和、及び寛解又は改善された予後を含む。幾つかの実施態様では、本発明のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は疾患の発症を遅延させ又は疾患の進行を遅らせるために使用される。

所定の実施態様では、心血管疾患を予防し又は治療する文脈での「それを必要とする対象」は、心血管疾患又は心血管病態（ＣＶＤ）又はメタボリック症候群と診断された、あるいはＣＶＤ又はメタボリック症候群に関連した一又は複数の症状を示す対象、過去にＣＶＤ又はメタボリック症候群と診断され又はＣＶＤ又はメタボリック症候群に関連する一又は複数の症状を示した対象、あるいは遺伝又は環境因子のために将来ＣＶＤ又はメタボリック症候群又はＣＶＤ又はメタボリック症候群に関連する症状を発症するリスクがあると見なされた対象を意味する。従って、所定の実施態様では、それを必要とする対象は、ＣＶＤ又はメタボリック症候群又はＣＶＤ又はメタボリック症候群に関連する症状を示す対象あるいはＣＶＤ又はメタボリック症候群又はＣＶＤ又はメタボリック症候群に関連する症状を過去に示したか又はＣＶＤ又はメタボリック症候群又はＣＶＤ又はメタボリック症候群に関連する症状を将来発症するリスクがあると思われた対象でありうる。

心血管疾患又は病態の治療において、治療剤は、免疫応答の成分の応答の大きさを直接変え、又は疾患を他の治療剤、例えば抗生物質、抗真菌薬、抗炎症剤、化学療法剤等による治療に対してより感受性にしうる。動脈疾患の治療では、治療は、例えば疾患の進行を防止又は遅くするかもしれない。よって、動脈疾患の治療は、症状の発生、又はある段階から他のより進行した段階への、又はより重篤な関連症状への進行の防止、阻害、又は遅延化を特に含む。

疾患又は病態の「病理状態」には、対象の満足いく状態を損なうあらゆる現象が含まれる。心血管疾患又は病態の場合には、限定されるものではないが、動脈硬化プラーク形成（安定又は不安定（unstable/vulnerable）プラークを含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、細動脈硬化症、及び全身性リポ多糖（ＬＰＳ）曝露上昇が含まれる。
「軽減」、「軽減する」又はその均等語は、治癒的処置及び予防又は防止手段の双方を意味し、目的は疾患又は病態、例えば動脈硬化プラークの形成を、軽減し、防止し、遅延させ（少なくし）、減少又は阻害することである。治療を必要とする者は、既に疾患又は病態を患っている者、並びに疾患又は病態を患う傾向がある者又は疾患又は病態が予防されるべき者を含む。

「慢性」投与とは、初期の治療効果を長期間にわたって維持するようにするために、急性態様とは異なり連続的な態様で薬剤を投与することを意味する。「間欠」投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ本質的に周期的になされる治療である。
「パッケージ挿入物」なる用語は、かかる治療用製品の使用に関する効能、使用法、用量、投与、併用療法、禁忌及び／又は注意についての情報を含む、治療用製品の市販パッケージに常套的に含まれる指示を意味するために使用される。

参照ポリペプチド配列に関する「パーセント(％)アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して得られる。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって著作され、そのソースコードは米国著作権庁（ワシントンD.C., 20559）に使用者用書類と共に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはジェネンテック社、サウスサンフランシスコ, カリフォルニアから公的に入手可能であり、又はソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされなければならない。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変動しない。

アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対するある程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２のＡ及びＢのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることが認識されるであろう。特に断らない限りは、ここで使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを用いて直ぐ上の段落に記載されるようにして得られる。

この方法を使用する％アミノ酸配列同一性の計算の更なる例として、以下は、「ＩＬ−２２」と標記されたアミノ酸配列に対する「比較タンパク質」又は「参照タンパク質」と標記されたアミノ酸配列の％アミノ酸配列同一性を如何にして計算するかを証明するもので、ここで、「ＩＬ−２２」は興味あるＩＬ−２２ポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」は興味ある「ＩＬ−２２」ポリペプチドが比較されているポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」はそれぞれ異なったアミノ酸残基を表す。
この方法を使用する％アミノ酸配列同一性の計算の例として、表１及び２は、「ＩＬ−２２」と標記されたアミノ酸配列に対する「比較タンパク質」と標記されたアミノ酸配列の％アミノ酸配列同一性を如何にして計算するかを証明するもので、ここで、「ＩＬ−２２」は興味あるＩＬ−２２ポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」は興味ある「ＩＬ−２２」ポリペプチドが比較されているポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」はそれぞれ異なったアミノ酸残基を表す。

ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者によって容易に決定され、一般にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングに必要な温度が高くなる一方、プローブが短くなると必要な温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般に、相補鎖がその融点より低い環境に存在する場合に、変性ＤＮＡの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション配列の間で所望される相同性の程度が高くなればなるほど、用いることができる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をよりストリンジェントにする傾向がある一方、低い温度はストリンジェントを低下させることになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーの更なる詳細及び説明については、Ausubel等, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers(1995)を参照のこと。

ここで定義される「ストリンジェントな条件」又は「高度にストリンジェントな条件」は、（１）例えば５０℃の０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムと、洗浄に低イオン強度及び高温度を用いる；（２）例えば４２℃の５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドに０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウムバッファー、及び７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭのクエン酸ナトリウムと、ホルムアミド等の変性剤をハイブリダイゼーション中に用いる；又は（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％の硫酸デキストラン溶液を４２℃で用い、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）での４２℃での１０分の洗浄に、５５℃でのＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる１０分の高ストリンジェンシー洗浄が続くものによって特定されうる。

「中程度にストリンジェントな条件」は、Sambrook等, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989に記載されているように特定され得、上述のものより低いストリンジェンシーの洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）の使用を含む。中程度にストリンジェントな条件の例は、２０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト液、１０％硫酸デキストラン、及び２０ｍｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で３７℃での終夜インキュベーションの後、１×ＳＳＣ中で約３７−５０℃でのフィルターの洗浄が続くものである。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させるために必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかは分かるであろう。

「アゴニスト」なる用語は最も広い意味で使用され、ＩＬ−２２ポリペプチドの生物学的活性を部分的又は完全に模倣する任意の分子を含む。「アゴニスト」によってまた包含されるものはそのポリペプチドをコードするｍＲＮＡの転写又は翻訳を刺激する分子である。
適切なアゴニスト分子は、例えば、アゴニスト抗体又は抗体断片；天然ポリペプチド；天然ポリペプチドの断片又はアミノ酸配列変異体；ペプチド；アンチセンスオリゴヌクレオチド；小有機分子；及びポリペプチドアゴニスト又は抗体をコードする核酸を含む。「一（ａｎ）」アゴニストとの標記は単一のアゴニスト又は二以上の異なったアゴニストの組み合わせを包含する。

「ＩＬ−２２アゴニスト」なる用語は最も広義で使用され、天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドの定量的生物学的活性（上に定義）を模倣する任意の分子を含む。ＩＬ−２２アゴニストはＩＬ−２２−Ｆｃ又はＩＬ−２２Ｉｇポリペプチド（イムノアドへシン）を特に含むが、少なくとも一のＩＬ−２２生物学的活性を模倣する小分子もまた含む。好ましくは、生物学的活性はＩＬ−２２受容体の結合、ＩＬ−２２ＢＰとの相互作用、自然免疫応答経路の促進、あるいは心血管疾患又は病態の場合には、動脈硬化プラークの形成への影響、特に動脈硬化プラーク形成の形成阻害である。プラーク形成の阻害は当業者に知られている任意の適切な造影法によって評価することができる。

ＩＬ−２２Ｒ１は他のタンパク質と対をなして、ある種のＩＬ−１０ファミリーメンバーの受容体としてヘテロ二量体を形成する。上掲のQuyang等, 2011を参照のこと。よって、所定の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは、ＩＬ−２２Ｒ１に結合しその下流のシグナル伝達を惹起させるサイトカイン（又はその融合タンパク質又はアゴニスト）を含む、ＩＬ−２２受容体アゴニストを含みうる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは、限定されないがＩＬ−２２Ｒ１アゴニスト抗体を含むＩＬ−２２Ｒ１アゴニスト；限定されないがＩＬ−２０ポリペプチド又はＩＬ−２０Ｆｃ融合タンパク質を含む、ＩＬ−２０アゴニスト；及び限定されないがＩＬ−２４ポリペプチド又はＩＬ−２４融合タンパク質を含むＩＬ−２４アゴニストを含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２２Ｒ１アゴニストは、限定されないがＩＬ−１９ポリペプチド又はＩＬ−１９Ｆｃ融合タンパク質を含むＩＬ−１９アゴニスト；及び限定されないがＩＬ−２６ポリペプチド又はＩＬ−２６Ｆｃ融合タンパク質を含むＩＬ−２６アゴニストを含む。ＩＬ−１９（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＧ１６７５５．１，配列番号：７７）、ＩＬ−２０（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ６９３１１．１，配列番号：７８）、ＩＬ−２４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＨ０９６８１．１，配列番号：７９）及びＩＬ−２６（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０６０８７２．１，配列番号：８０）の例示的配列がここに提供される。所定の実施態様では、ＩＬ−１９ポリペプチドは、配列番号：７７のアミノ酸配列又はシグナルペプチドを伴わない成熟タンパク質を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２０ポリペプチドは配列番号：７８のアミノ酸配列又はシグナルペプチドを伴わない成熟タンパク質を含む。更に他の実施態様では、ＩＬ−２４ポリペプチドは、配列番号：７９のアミノ酸配列又はシグナルペプチドを伴わない成熟タンパク質を含む。所定の他の実施態様では、ＩＬ−２６ポリペプチドは、配列番号：８０のアミノ酸配列又はシグナルペプチドを伴わない成熟タンパク質を含む。

「小分子」は約６００未満、好ましくは約１０００ダルトン未満の分子量を有するものとここでは定義される。
ここで使用される「アゴニスト抗体」はＩＬ−２２ポリペプチドの生物学的活性を部分的に又は完全に模倣する抗体である。

「薬学的製剤」又は「薬学的組成物」なる用語は、そこに含まれる活性成分の生物学的活性が効果的であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に毒性が許容されない更なる成分を含まない調製物を意味する。
「薬学的に許容可能な担体」とは、活性成分以外の、対象に非毒性である薬学的製剤中の成分を意味する。薬学的に許容可能な担体は、限定しないが、バッファー、賦形剤、安定剤、又は保存料を含む。

「可変領域」又は「可変ドメイン」なる用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）と３つの高頻度可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持つ、類似構造を一般に有する。（例えば、Kindt等 Kuby Immunology, 6版, W.H. Freeman and Co., p91 (2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分な場合がある。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano等, J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson等, Nature 352:624-628 (1991)を参照。

ここで使用される「ベクター」なる用語は、それが連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。該用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが作用可能なように連結されている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターはここでは「発現ベクター」と称される。

ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、ＩＬ−２２活性又はシグナル伝達を増加させることによってＩＬ−２２関連疾病又は疾患を軽減する治療剤を含有する組成物に部分的に基づく。所定の実施態様では、ＩＬ−２２受容体に結合しこれを活性化させるＩＬ−２２ポリペプチド及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が提供される。本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、例えばＩＬ−２２関連疾患、例えば炎症性腸疾患の診断又は治療及び創傷治癒の促進に有用である。また、他のＩＬ−２２関連疾患、例えば心血管疾患、メタボリック症候群の治療及び糖尿病性創傷治癒の促進のためのＩＬ−２２ポリペプチド及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がまた提供される。

Ａ．例示的ＩＬ−２２ポリペプチド
ここで使用されるＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号：７１を含むアミノ酸配列を含むポリペプチド（内因性ＩＬ−２２リーダー配列を伴うヒトＩＬ−２２）（図３１を参照）、又は配列番号：７１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、配列番号：４を含むアミノ酸配列（リーダー配列を伴わないヒトＩＬ−２２）を含むか又は少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチドは配列番号：４のアミノ酸配列を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチドはＦｃ融合体を含まない。
その核酸及びポリペプチド配列と共に、天然ＩＬ−２２分子の調製は、当業者に知られた方法によって達成できる。例えば、ＩＬ−２２ポリペプチドは、ＩＬ−２２核酸を含むベクターで形質転換又はトランスフェクトした細胞を培養することによって生産することができる。当該分野でよく知られている代替方法を用いてＩＬ−２２を調製することができることももちろん考慮される。例えば、ＩＬ−２２配列又はその一部を、固相技術を使用する直接的ペプチド合成によって生産することができる（例えばStewart等, 1969, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, Calif. (1969)；Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85:2149-2154を参照）。インビトロタンパク質合成を、手作業の技術を使用して又は自動化によって実施することができる。自動化合成は、例えば製造者の指示書を用いてＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓペプチドシンセサイザー（Foster City, Calif.）を使用して達成することができる。ＩＬ−２２の様々な部分を別個に化学的に合成し、化学的又は酵素的方法を使用して組み合わせて、完全長ＩＬ−２２を生産することができる。

ＩＬ−２２変異体は、天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドをコードするＤＮＡに適切なヌクレオチド変化を導入するか、所望のＩＬ−２２ポリペプチドの合成により、調製することができる。当業者であれば、アミノ酸変化がＩＬ−２２の翻訳後プロセスを変化させることができ、例えばグリコシル化部位の数又は位置を変化させもしくは膜アンカー特性を変化させることが分かるであろう。
ここに記載される天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドにおける変異は、例えば米国特許第５３６４９３４号に記載された保存的あるいは非保存的変異のための技術とガイドラインの任意のものを使用して作製することができる。変異は、対応する天然配列又は変異体ＩＬ−２２と比較してそのアミノ酸配列に変化を生じさせる、天然配列又は変異体ＩＬ−２２をコードする一又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入でありうる。場合によっては、変異は、天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドのドメインの一又は複数における、少なくとも一つのアミノ酸の他の任意のアミノ酸との置換による。
どのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失され得るかを確かめる指針は、ＩＬ−２２の配列を既知の相同タンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域内で生じたアミノ酸配列変化の数を最小にすることによって見出されうる。アミノ酸置換は、一のアミノ酸を類似した構造及び／又は化学特性を持つ他のアミノ酸で置換すること、例えばロイシンのセリンでの置換、つまり保存的アミノ酸置換の結果でありうる。挿入又は欠失は、場合によっては１から５のアミノ酸の範囲内でありうる。許容される変異は、配列にアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に作製し、生じた変異体を以下の実施例に記載されるインビトロアッセイでの活性について試験することによって、決定できる。

特定の実施態様では、興味ある保存的置換が、好ましい置換の項目で表１に示される。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表１に例示的置換と名付けた又は以下にアミノ酸クラスで更に記載されるように、より実質的な変化が導入され、生成物がスクリーニングされる。
変異は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びＰＣＲ突然変異誘発等のこの分野で知られた方法を用いて作製することができる。部位特異的突然変異誘発（Carter等, 1986, Nucl. Acids Res, 13:4331；Zoller等, 1987, Nucl. Acids Res., 10:6487）、カセット突然変異誘発（Wells等, 1985, Gene, 34:315）、制限的選択突然変異誘発（Wells等., 1986, Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317:415）又は他の知られた技術をクローニングしたＤＮＡに実施して、ＩＬ−２２変異体ＤＮＡを作製することができる。

本発明のＩＬ−２２ポリペプチドの断片もここに提供される。このような断片は例えば全長天然タンパク質と比較した場合、Ｎ末端又はＣ末端で切断されている場合があり、あるいは内部残基を欠いている場合がある。ある種の断片は本発明のＩＬ−２２ポリペプチドの所望の生物活性に対して必須ではないアミノ酸残基を欠いている。従って、所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチドの断片は生物学的に活性である。所定の実施態様では、全長ＩＬ−２２の断片はＮ末端シグナルペプチド配列を欠く。

天然配列及び変異体ＩＬ−２２ポリペプチドの共有結合的修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の一型には、ＩＬ−２２の標的とするアミノ酸残基を、ＩＬ−２２ポリペプチドの選択された側鎖又はＮ又はＣ末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることが含まれる。二官能性試薬による誘導体化は、例えばＩＬ−２２を、例えばＩＬ−２２抗体の精製方法で用いる水不溶性支持体マトリクス又は表面と架橋させるために有用である。通常用いられる架橋剤には、例えば、１，１−ビス（ジアゾ−アセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４−アジドサリチル酸のエステル、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミダート等が含まれる。
他の修飾には、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（T. E. Creighton, 1983, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86i）、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。

本発明の範囲内に含まれるＩＬ−２２ポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。ここで意図される「天然グリコシル化パターンの変更」とは、天然配列ＩＬ−２２に見出される一又は複数の糖鎖を欠失させること、及び／又は天然配列抗ＩＬ−２２に存在しない一又は複数のグリコシル化部位を付加すること、及び／又はグリコシル化部位に結合される糖残基の比及び／又は組成を変化させることを意味する。
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合の何れかである。Ｎ結合グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖への糖鎖部分の結合を意味する。アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここでＸはプロリンを除く任意のアミノ酸）のトリペプチド配列は、アスパラギン側鎖への糖鎖部分の酵素的結合のための認識配列である。Ｏ結合グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに、糖類Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの一つが結合することを意味するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンもまたＯ結合グリコシル化に関与する場合がある。ＩＬ−２２ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を変化させることによって達成することができる。該変化は、例えば、天然配列ＩＬ−２２への一又は複数のセリン又はスレオニン残基の付加又は置換（Ｎ結合グリコシル化部位の場合）により、あるいはＯ結合グリコシル化では認識配列の付加によってなされうる。ＩＬ−２２アミノ酸配列は、場合によってはＤＮＡレベルの変化によって、特にＩＬ−２２ポリペプチドをコードするＤＮＡを、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンが作製されるような予め選択された塩基で変異させることによって、変化させることができる。

ＩＬ−２２ポリペプチド上の糖鎖の数を増加させる他の手段は、該ポリペプチドへのグリコシドの化学的又は酵素的結合による。このような方法は、例えば１９８７年９月１１日公開の国際公開第８７／０５３３０号及びAplin及びWriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)に記載されている。
ＩＬ−２２ポリペプチド上に存在する糖鎖の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグリコシル化の標的となるアミノ酸残基をコードするコドンの突然変異的置換によりなされる。化学的脱グリコシル化技術は、当該技術分野において知られており、例えばHakimuddin等, Arch. Biochem. Biophys., 259:52 (1987)及びEdge等, Anal. Biochem., 118:131 (1981)により記載されている。ポリペプチド上の糖鎖の酵素的開裂は、Thotakura等, Meth. Enzymol., 138:350 (1987)に記載されているように、様々なエンド及びエキソグリコシダーゼの使用により達成することができる。

ＩＬ−２２の共有結合的修飾の他のタイプは、米国特許第４６４０８３５号；第４４９６６８９号；第４３０１１４４号；第４６７０４１７号；第４７９１１９２号又は第４１７９３３７号に記載されているように、ＩＬ−２２ポリペプチドを、様々な非タンパク性ポリマーの一つ、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンに結合させることを含む。天然配列及び変異体ＩＬ−２２は、他の異種性ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合させたＩＬ−２２の断片を含む、ＩＬ−２２を含むキメラ分子を形成するように修飾することもまたできる。

一実施態様では、そのようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合するエピトープを提供するタグポリペプチドとのＩＬ−２２の融合体を含む。エピトープタグは一般にＩＬ−２２ポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に位置させられる。ＩＬ−２２ポリペプチドのこのようなエピトープタグ型の存在はタグポリペプチドに対する抗体を使用して検出することができる。また、エピトープタグの提供は、ＩＬ−２２ポリペプチドを抗タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の種類のアフィニティーマトリックスを使用するアフィニティー精製によって直ぐに精製することを可能にする。様々なタグポリペプチドとその各抗体は従来から良く知られている。例として、ポリ−ヒスチジン（ｐｏｌｙ−ｈｉｓ）又はポリ−ヒスチジン−グリシン（ｐｏｌｙ−ｈｉｓ−ｇｌｙ）タグ；ｆｌｕＨＡタグポリペプチドとその抗体１２ＣＡ５（Field等, 1988, Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165）；ｃ−ｍｙｃタグとそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、及び９Ｅ１０抗体（Evan等, 1985, Molecular及びCellular Biology, 5:3610-3616）；及び単純ヘルペスウィルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグとその抗体（Paborsky等, 1990, Protein Engineering, 3(6):547-553）が含まれる。他のタグポリペプチドは、フラッグ−ペプチド（Hopp等, 1988, BioTechnology, 6:1204-1210）；ＫＴ３エピトープペプチド（Martin等, 1992, Science, 255:192-194）；αチューブリンエピトープペプチド（Skinner等, 1991, J. Biol. Chem., 266:15163-15166）；及びＴ７遺伝子１０タンパクペプチドタグ（Lutz-Freyermuth等, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397）を含む。

他の実施態様では、キメラ分子はＩＬ−２２ポリペプチド又はその断片の免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定領域との融合体を含む。キメラ分子の二価型では、そのような融合体はＩｇＧ分子のＦｃ領域に対してでありうる。これらの融合ポリペプチドは異種性タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性を免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能と組み合わせる抗体様分子であり、しばしばイムノアドヘシンと称される。構造的には、イムノアドヘシンはＩＬ−２２又はその変異体のアミノ酸配列と免疫グロブリン定常ドメイン配列の融合体を含む。イムノアドヘシン分子のアドヘシン部分は典型的には受容体又はリガンドの結合部位を少なくとも含む近接アミノ酸配列である。イムノアドヘシン中の免疫グロブリン定常ドメイン配列は、任意の免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭから得ることができる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は改変されたエフェクター活性を示す。

ＩＬ−２２ポリペプチド、又はその断片を、例えば免疫グロブリン重鎖定常領域配列に融合させて、ＩＬ−２２−Ｉｇ融合タンパク質（例えばＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質）を作製することができる。ＩＬ−２２ポリペプチドはヒト又はマウスＩＬ−２２でありうる。免疫グロブリン重鎖定常領域配列はヒト又はマウス免疫グロブリン重鎖定常領域配列でありうる。

Ｂ．例示的ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質
一態様では、本発明は、単離されたＩＬ−２２融合タンパク質を提供する。所定の実施態様では、ＩＬ−２２融合タンパク質はＩＬ−２２受容体に結合し、ＩＬ−２２受容体の活性又はシグナル伝達を誘導し、及び／又はＩＬ−２２受容体活性のアゴニストである。
他の態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。他の実施態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２受容体への結合能を保持している。所定の実施態様では、配列番号：８、１０、１２、１４、２４又は２６において全部で１から１０のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。所定の実施態様では、置換、挿入、又は欠失はＩＬ２２の外の領域において（つまり、Ｆｃにおいて）起こる。ある特定の実施態様では、ＦｃのＣ末端Ｌｙｓ残基が欠失される。所定の他の実施態様では、ＦｃのＣ末端Ｇｌｙ及びＬｙｓ残基が双方とも欠失される。

所定の実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換を有するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質変異体が提供される。保存的置換は、「好ましい置換」との項目で表１に示される。より実質的な変化は「例示的置換」との項目で表１に提供され、アミノ酸側鎖クラスに関して以下に更に記載される。アミノ酸置換がＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質に導入され得、生成物が所望の活性、例えば保持された／改善されたＩＬ−２２受容体結合性、低減した免疫原性、改善されたＩＬ−２２受容体シグナル伝達について、スクリーニングされる。

アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいて群に分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの一つのメンバーを他のクラスに交換することを必要とするであろう。

突然変異誘発に対して標的とされうるタンパク質の残基又は領域を同定するために有用な方法は、Cunningham及びWells (1989) Science, 244:1081-1085に記載されているように「アラニンスキャンニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又は群が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）、中性又は負荷電アミノ酸（例えばアラニン又はポリアラニン）に置換され、タンパク質のその結合パートナーとの相互作用が影響を受けるかどうかが決定される。更なる置換が、最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されうる。あるいは又は加えて、タンパク質複合体（例えばサイトカイン−受容体複合体）の結晶構造を使用して、タンパク質とその結合パートナーとの間の接触点を特定することができる。そのような接触残基及び隣接する残基を、置換候補として標的にし又は削除することができる。変異体をスクリーニングして、それらが所望の性質を含んでいるかどうかを決定することができる。
アミノ酸配列挿入は、長さが一残基から百以上の残基を含むポリペプチドにわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。

ａ）グリコシル化変異体
所定の実施態様では、ここで提供されるＦｃ融合タンパク質は、融合タンパク質、特に融合タンパク質のＦｃ部分がグリコシル化される程度を増加又は減少するように改変される。タンパク質へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、一又は複数のグリコシル化部位が作り出され又は除去されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
融合タンパク質がＦｃ領域を含む場合、それに結合する炭水化物を変えることができる。哺乳動物細胞によって生産される天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合により一般的に結合した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWright等 TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様では、抗体又は抗体のＦｃ領域におけるオリゴ糖の改変を、一定の改善された特性を有するＦｃ変異体を作り出すために行うことができる。

Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインに結合したフコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７又はＮ２９７に結合している全ての糖構造の合計（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域でおよそ２９７の位置（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す；しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流又は下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に位置されうる。このようなフコシル化変異体は改善されたＡＤＣＣ機能を有する場合がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Presta, L.）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Kyowa Hakko Kogyo社）を参照。「フコース非修飾（defucosylated）」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；国際公開第２００３／０８４５７０号；国際公開第２００５／０３５５８６号；国際公開第２００５／０３５７７８号；国際公開第２００５／０５３７４２号；国際公開第２００２／０３１１４０号；Okazaki等 J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki等 Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。フコース非修飾抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ripka等 Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓ等、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki等 Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004);Kanda, Y.等, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。

抗体変異体には、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖が更に提供される。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Jean-Mairet等）；米国特許第６６０２６８４号（Umana等）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Umana等）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも一つのガラクトース残基を持つ抗体変異体もまた提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば国際公開第１９９７／３００８７号（Patel等）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Raju, S.）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Raju, S.）に記載されている。

ｂ）Ｆｃ領域変異体
所定の実施態様では、一又は複数のアミノ酸修飾を、ここで提供されるFc融合タンパク質のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を作製する。Ｆｃ領域の変異体は、一又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含みうる。

所定の実施態様では、本発明は、インビボでの抗体又はＦｃ領域を含む融合タンパク質の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）が不要ないしは有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有するＦｃ変異体を考慮している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを、抗体又はＦｃがＦｃγＲ結合性を欠くが（よって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために実施することができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞のＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲの発現は、Ravetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４ページの表３に要約されている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I.等 Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I等, Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；同第５８２１３３７号（Bruggemann, M.等, J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ^ＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（CellTechnology社 Mountain View, CA；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Promega, Madison, WI）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又は追加的に、目的分子のＡＤＣＣ活性は、例えばClynes等 Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されるもののような動物モデルにおいて、インビボで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを、抗体又はＦｃがＣ１ｑに結合することができず、よってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために実施することもまたできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Gazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S.等, Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, M.S.及びM.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定をまた、当該分野で知られている方法を使用して実施することができる（例えば、Petkova, S.B.等, Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。

エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の一又は複数の置換を伴うものを含む（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を伴う、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を伴うＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した所定の抗体又はＦｃ変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields等, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)）
所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＤＣＣを減少させる一又は複数のアミノ酸置換、例えばＮグリコシル化部位を除去するが、ＦｃＲｎ結合活性を保持するためにＦｃ領域の位置２９７に置換を伴うＦｃ変異体を含む（ＥＵの残基番号付け）。

幾つかの実施態様では、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie等 J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に記載されるように、減少したＣ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる改変がＦｃ領域においてなされる。
増加した半減期及び胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim等, J. Immunol. 24:249 (1994)）が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Hinton等）に記載されている。その抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一又は複数の置換を伴うＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の一又は複数に置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を伴うものを含む（米国特許第７３７１８２６号）。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Duncan及びWinter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号もまた参照のこと。

ｃ）システイン改変抗体変異体
所定の実施態様では、抗体のＦｃ領域の一又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン改変Ｆｃ融合タンパク質を作製することが望ましい場合がある。特定の実施態様では、置換された残基は、Ｆｃのアクセス可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基を、Ｆｃのアクセス可能な部位に配置し、ここで更に記載されるように、イムノコンジュゲートを作製するために、例えば薬物部分又はリンカー−薬剤部分などの他の部分にＦｃをコンジュゲートするために使用することができる。例えば重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）をシステインで置換することができる。例えば、米国特許第７５２１５４１号を参照。

Ｃ．組換え方法及び組成物
ＩＬ−２２ポリペプチドは、常套的な組換え方法によって、例えばＩＬ−２２ポリペプチド、その断片又は変異体、又はそれを含む融合タンパク質をコードする核酸を含むベクターで形質転換又はトランスフェクトした細胞を培養することにより調製することができる。任意のそのようなベクターを含む宿主細胞もまた提供される。例を挙げると、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、大腸菌、又は酵母でありうる。ここに記載のポリペプチドの何れかを生産する方法が更に提供され、所望のポリペプチドの発現に適した条件下で宿主細胞を培養し、細胞培養物から所望のポリペプチドを回収することを含む。

宿主細胞を、ここに記載したＩＬ−２２ポリペプチド生産のための発現又はクローニングベクターでトランスフェクト又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、ｐＨ等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、Mammalian Cell Biotechnology: A Practical Approach, M.Butler編 (IRL Press, 1991)及び上掲のSambrook等に見出すことができる。

トランスフェクションの方法、例えば、ＣａＰＯ_４及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。使用される宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を使用して形質転換はなされる。上掲のSambrook等に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションは、原核生物又は実質的な細胞壁障壁を含む他の細胞に対して用いられる。アグロバクテリウム・トゥメファシエンスによる感染が、Shaw等, Gene, 23:315 (1983)及び１９８９年６月２９日公開の国際公開第８９／０５８５９号に記載されたように、ある種の植物細胞の形質転換に使用される。そのような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvan der Eb, Virology, 52:456-457 (1978)のリン酸カルシウム沈降法を用いることができる。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第４３９９２１６号に記載されている。酵母中への形質転換は、典型的には、Van solingen等, J. Bact, 130:946 (1977)及びHsiao等, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 76:3829 (1979)の方法に従って実施される。しかしながら、ＤＮＡを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、インタクトな細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた使用することもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための様々な技術については、Keown等, Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990)及び Mansour等,Nature, 336:348-352 (1988)を参照のこと。

本発明の組換え的に発現されたポリペプチドは、培養培地又は宿主細胞可溶化物から回収することができる。次の手順は適切な精製手順の例である：すなわち、イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥでのクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えばセファデックスＧ−７５を用いるゲル濾過；ＩｇＧのような汚染物を除くためのプロテインＡセファロースカラム；及び本発明のポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。様々なタンパク質精製方法を用いることができ、そのような方法は当該分野で知られ、例えば、Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990)；Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)に記載されている。選ばれる精製過程は、例えば、用いられる生産方法及び生産される特定のポリペプチドの性質に依存する。

当該分野でよく知られている他の方法を用いて、本発明のポリペプチドを調製することができる。例えば、ポリペプチド又はその一部をコードする配列を、固相技術を使用する直接ペプチド合成によって生産することができる（例えば、Stewart等, 1969, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA；Merrifield, J. 1963,Am. Chem. Soc., 85:2149-2154を参照）。手動技術を使用して又は自動によりインビトロタンパク質合成を実施することができる。自動合成は、例えば、アプライド・バイオシステムズ・ペプチド合成機（Foster City, CA）を使用し、製造者の指示を使用して達成できる。本発明のポリペプチドの様々な部分を、別々に化学的に合成し、化学的又は酵素的方法を使用して組み合わせて完全長ポリペプチド又はその一部を生産することができる。

他の実施態様では、本発明は、異種性ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合させたここに記載のポリペプチドの何れかを含むキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例は、限定されないが、エピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合させたここに記載のポリペプチドの何れかを含む。
ここに記載のベクターにＤＮＡをクローニングあるいは発現させるために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば大腸菌のような腸内細菌科を含む。様々な大腸菌株が公に利用可能であり、例えば、大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ３１４４６）；大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１５３７）；大腸菌株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７３２５）及びＫ５７７２（ＡＴＣＣ５３６３５）である。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＩＬ−２２コード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシアは、一般的に用いられる下等真核生物宿主微生物である。

グリコシル化ＩＬ−２２の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、ショウジョウバエＳ２及びスポドスペラＳｆ９等の昆虫細胞並びに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）及びＣＯＳ細胞を含む。より詳細な例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７，ＡＴＣＣＣＲＬ１６５１）；ヒト胚腎臓株（２９３又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された２９３細胞、Graham等, J. Gen Virol., 36:59 (1977)）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（CHO, Urlaub及びChasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)）；マウスのセルトリ細胞（ＴＭ４，Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)）ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２，ＨＢ８０６５）；及びマウス乳房腫瘍細胞（ＭＭＴ０６０５６２，ＡＴＣＣＣＣＬ５１）を含む。適切な宿主細胞の選択は、この分野の技術常識内にあると考えられる。

ＩＬ−２２をコードする核酸（例えば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ）は、クローニング（ＤＮＡの増幅）又は発現のために複製可能なベクター内に挿入されうる。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、様々な手法によってベクターに挿入されうる。一般に、ＤＮＡは当該分野で知られている技術を使用して適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入できる。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、一又は複数のシグナル配列、複製開始点、一又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の一又は複数を含む適当なベクターの構築には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。

ＩＬ−２２ポリペプチドは直接的に組換え的に生産できるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質又はポリペプチドのＮ末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドでありうる異種性ポリペプチドとの融合ペプチド、並びにＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質としても生産されうる。一般に、シグナル配列はベクターの成分でありうるか、ベクター中に挿入されるＩＬ−２２ＤＮＡの一部でありうる。シグナル配列は、例えばアルカリフォスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択された原核生物シグナル配列でありうる。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、例えば酵母インベルターゼリーダー、アルファ因子リーダー（サッカロミセス（Saccharomyces）及びクルイベロマイシス（Kluyveromyces）α因子リーダーを含み、後者は米国特許第５０１０１８２号に記載されている）、又は酸ホスファターゼリーダー、カンジダ・アルビカンス（C.albicans）グルコアミラーゼリーダー（１９９０年４月４日公開のＥＰ３６２１７９）、又は１９９０年１１月１５日公開の国際公開第９０／１３６４６号に記載されているシグナルでありうる。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列を、同一又は関連する種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用することができる。

発現及びクローニングベクターは、共に一又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は様々な細菌、酵母及びウイルスに対してよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、２μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ）は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。

発現及びクローニングベクターは、典型的には、選べるマーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、（ａ）アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセート又はテトラサイクリンのような抗生物質又は他の毒素に耐性を与え、（ｂ）栄養要求性欠陥を補い、又は（ｃ）複合培地から得られない重要な栄養素、例えば桿菌のＤ−アラニンラセマーゼをコードしている遺伝子を供給する、タンパク質をコードする。

哺乳動物細胞に適切な選択マーカーの例は、ＤＨＦＲ又はチミジンキナーゼのようにＩＬ−２２核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするものである。野生型ＤＨＦＲを用いた場合の好適な宿主細胞は、Urlaub等によりProc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)に記載されているように調製され増殖された、ＤＨＦＲ活性に欠陥のあるＣＨＯ細胞株である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Stinchcomb等, Nature, 282:39 (1979)；Kingsman等, Gene, 7:141 (1979)；Tschemper等, Gene, 10:157 (1980)を参照］。ｔｒｐ１遺伝子は、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４−１のようなトリプトファン内で成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する［Jones, Genetics, 85:12 (1977)］。

発現及びクローニングベクターは、通常、ＩＬ−２２核酸配列に作用可能に結合し、ｍＲＮＡ合成を指示するプロモーターを含む。様々な可能な宿主細胞により認識されるプロモーターがよく知られている。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターはβ−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系［例えばChang等, Nature, 275:615 (1978)；Goeddel等, Nature, 281:544 (1979)を参照］、アルカリフォスファターゼ、トリプトファン(trp)プロモーター系［例えばGoeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP36776を参照］、及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター［例えばdeBoer等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)を参照］を含む。細菌系で使用されるプロモーターもまたＩＬ−２２をコードするＤＮＡに作用可能に連結されたシャイン−ダルガーノ（Ｓ．Ｄ．）配列を含むであろう。

酵母宿主での使用に好適なプロモーター配列の例としては、３−ホスホグリセラートキナーゼ［例えばHitzeman 等, J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)を参照］又は他の糖分解酵素［例えばHess 等, J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968)；Holland, Biochemistry, 17:4900(1987)を参照］、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。
他の酵母プロモーターは、成長条件によって転写が制御される付加的利点を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸フォスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母での発現に好適に用いられるベクターとプロモーターはＥＰ７３６５７に更に記載されている。

哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからのＩＬ−２２転写は、例えば、ポリオーマウイルス、伝染性上皮腫ウイルス（１９８９年７月５日公開のＵＫ２２１１５０４）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びサルウイルス４０（ＳＶ４０）のようなウイルスのゲノムから得られるプロモーター、異種性哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り、制御される。
より高等の真核生物によるＩＬ−２２ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強されうる。エンハンサーは、通常は約１０から３００塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するＤＮＡのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）。しかしながら、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（１００−２７０塩基対）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ＩＬ−２２コード配列の５’又は３’位でベクター中にスプライシングされうるが、好ましくはプロモーターから５’位に位置している。

また、真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞）に使用される発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの通常は５’、時には３’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、ＩＬ−２２をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
組換え脊椎動物細胞培養でのＩＬ−２２の合成に適応化させるのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、Gething等, Nature, 293:620-625 (1981)；Mantei等, Nature, 281:40-46 (1979)；ＥＰ１１７０６０；及びＥＰ１１７０５８に記載されている。

遺伝子の増幅及び／又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを使用し、例えば、一般的なサザンブロット法、ｍＲＮＡの転写を定量化するノーザンブロット法［例えばThomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:5201-5205 (1980)を参照］、ドットブロット法（ＤＮＡ分析）、又はインサイツハイブリダイゼーション法によって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖及びＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二本鎖又はＤＮＡ−タンパク質二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。ついで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合しており、その結果二本鎖の表面での形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。
あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び／又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列ＩＬ−２２ポリペプチドに対して、又はここで提供されるＤＮＡ配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はＩＬ−２２ＤＮＡに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製されうる。

ＩＬ−２２の形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液（例えばトリトン−Ｘ１００）又は酵素的切断を用いて膜から引き離すことができる。ＩＬ−２２の発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの様々な化学的又は物理的手段によって破壊することができる。
ＩＬ−２２を組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい場合がある。次の手順は適切な精製手順の例である：すなわち、イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥによるクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えばセファデックスＧ−７５を使用するゲル濾過；ＩｇＧのような汚染物を除くプロテインＡセファロースカラム；及びＩＬ−２２ポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。タンパク質精製の様々な方法を用いることができ、そのような方法は当該分野で知られ、例えば、Deutscher, Methodes in Enzymology, 182 (1990)；Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)に記載されている。選ばれる精製工程は、例えば、使用される製造方法及び製造される特定のＩＬ−２２の性質に依存する。上述の一般方法はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の調製にも同様に適用することができる。

同様に、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、例えばMolecular Cloning: A Laboratory Manual（Sambrook等, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press）及びPCR Protocols: A Guide to Methods及びApplications（Innis等1990. Academic Press, San Diego, CA）に記載されたように、組換え方法及び組成物を使用して生産することができる。一実施態様では、ここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする単離された核酸が提供される。更なる実施態様では、そのような核酸を含む一又は複数のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。更なる実施態様では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施態様では、宿主細胞は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターを含む（例えばベクターで形質転換されている）。ある実施態様では、ベクターは発現ベクターである。一実施態様では、宿主細胞は真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球系細胞（例えばＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法が提供され、ここで該方法は、上で提供されたＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞を、Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養し、場合によってはＦｃ融合タンパク質を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することを含む。

ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の組換え生産では、例えばここに記載されたようなＦｃ融合タンパク質をコードする核酸が単離され、宿主細胞での更なるクローニング及び／又は発現のために一又は複数のベクター中に挿入される。このような核酸は、直ちに単離され、一般的な手順を使用して（例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定されうる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を調製する場合、ＩＬ−２２ポリペプチド又はその断片をコードする核酸を、定常ドメイン上の特定の位置において免疫グロブリン定常ドメイン配列をコードする核酸にライゲートさせて、ＩＬ−２２のＣ末端にＦｃ融合体を生じさせることができる；しかしながら、Ｎ末端融合体もまた可能である。

ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を構築する例として、ＩＬ−２２をコードするＤＮＡを、ＩＬ−２２をコードするＤＮＡの３’末端又はその近位において、及び成熟ポリペプチドのＮ末端をコードするＤＮＡの点又はその近くで（異なるリーダーの使用が考慮される）あるいはＩＬ−２２全長タンパク質のＮ末端コード領域又はその近位で（天然シグナルが用いられる）制限酵素によって切断する。ついで、このＤＮＡ断片を、免疫グロブリン軽鎖又は重鎖定常領域をコードするＤＮＡ中に直ぐに挿入し、必要ならば、欠失変異誘発によって目的に合わせる。好ましくは、融合タンパク質がヒトのインビボ療法用に意図されている場合、これはヒト免疫グロブリンである。

幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２−免疫グロブリンキメラは単量体として、又はヘテロもしくはホモ多量体として、又は二量体又は四量体として構築される。一般に、これらの構築された免疫グロブリンは次の図によって表される既知の単位構造を有しているであろう。基本的な４鎖構造単位は、ＩｇＧ、ＩｇＤ及びＩｇＥが存在する形態である。４鎖単位は高分子量免疫グロブリンにおいて反復されており；ＩｇＭはジスルフィド結合によって一緒に保たれた４基本単位の五量体として一般的に存在する。ＩｇＡグロブリン、時にはＩｇＧグロブリンもまた血清中に多量体形態で存在しうる。多量体の場合、４つの鎖単位の各々は同じないし異なっていてもよい。その全体が出典明示によりここに援用されるCapon等の米国特許第５１１６９６４号をまた参照のこと。

ここの図において、「Ａ」はそのリガンド又は受容体（例えばＩＬ−２２Ｒ）に結合することができる結合部位を含む結合パートナー（例えばＩＬ−２２）の少なくとも一部を意味し；Ｘは、他の機能的結合パートナー（Ａと同じか異なっている）、上述のような複数のサブユニット（鎖）のポリペプチド（例えばインテグリン）、天然又はキメラ免疫グロブリン可変領域を含む可変領域又は可変領域様ドメインのような免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの一部、シュードモナス外毒素又はリシンのような毒素、又は定常ドメインと通常は結合していないポリペプチド治療剤でありうる、更なる薬剤であり；Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ及びＣ_Ｈは免疫グロブリンの軽鎖又は重鎖の可変又は定常ドメインを表す。これらの図は、一般的な集合（assembled）免疫グロブリン構造の単なる例示であり、全ての可能性を包含するものではないことは理解される。例えば、これらのコンストラクトの何れかにおいて望ましくは幾つかの異なった「Ａ」又は「Ｘ」が存在するかも知れないことが理解されるであろう。

これらの図は単に例証であり、多量体の鎖は天然免疫グロブリンと同じ様式でジスルフィド結合している考えられることが理解されるであろう。この発明によれば、ハイブリッド免疫グロブリンは適切な核酸で形質転換させた哺乳動物細胞から直ぐに分泌される。分泌型は、結合パートナーエピトープが重鎖二量体、軽鎖単量体又は二量体、及び重鎖及び軽鎖ヘテロ四量体で存在しているもの、結合パートナーエピトープが一又は複数の軽鎖又は重鎖に融合して存在していて、ヘテロ四量体を含むもの、４つを含み４つまでの全ての可変領域アナログが置換されているものを含む。軽鎖重鎖の非結合パートナー可変様ドメインが存在している場合、ヘテロ機能性抗体がよって提供される。

様々な構造の鎖又は基本単位を利用して、この発明の単量体、ヘテロ及びホモ多量体並びに免疫グロブリンを集合化させることができる。これらの基本単位の特定の例を以下に模式図化し、（式を簡略化するための）その均等物を示す。

この発明に従って生産される様々な例示的な新規集合免疫グロブリンを以下に模式的に表す。上で定義した符号に加えて、ｎは整数を表し、Ｙは共有結合的架橋部分を表す。
（ａ）ＡＣ_Ｌ；
（ｂ）ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｌ；
（ｃ）ＡＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｄ）ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ,ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｅ）ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｆ）Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ,ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｇ）[Ａ−Ｙ]_ｎ−[Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ]_２；
（ｈ）ＸＣ_Ｈ又はＸＣ_Ｌ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ］；
（ｉ）ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｊ）ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｋ）ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｌ）ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
（ｍ）ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ−[ＡＣＨ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，又はＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ]；
Ａ、Ｘ、Ｖ又はＣを共有結合的架橋部分(Ｙ)で、(Ａ−Ｙ)_ｎ、(Ｘ−Ｙ)_ｎなどになるように改変してもよい。

結合パートナーＡ（例えばＩＬ−２２）は、例えば任意にＡ_α及びＡ_βと表される鎖を有する複数鎖分子でありうる。一単位としてのこれらの鎖を、上で単一鎖「Ａ」と示された部位に置く。複数鎖の１本を（残りの鎖が正常な様式で、共有結合的又は非共有結合的に融合鎖と結合されている状態で)、免疫グロブリン鎖の一本に融合するか、あるいは、リガンド結合パートナーが２つの鎖を含む場合には、１本の鎖を別個に免疫グロブリン軽鎖に融合し、もう１つの鎖を免疫グロブリン重鎖に融合する。

以下に模式化する構造を有する基本単位は、複数鎖リガンド結合パートナーを伴う単量体、ヘテロ及びホモ多量体、特に二量体及び三量体を作製するために使用されるものの例である：

上記の単位構造に利用される２鎖リガンド結合パートナー（「Ａ_α及びＡ_β」）を有する様々な例示的な新規集合抗体を以下に模式的に表す。

（ｎ）Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ,Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｏ）Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣＨ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｐ）Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｑ）Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｒ）Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｓ）Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｔ）Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣＨ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ,Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]；
（ｕ）Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−[ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，Ｖ_ＬＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，ＸＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，ＸＣ_Ｌ−ＡＣ_Ｈ，ＡＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ，Ａ_αＣ_Ｌ−Ａ_βＣ_Ｈ，Ａ_βＣ_Ｌ−Ａ_αＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−Ｖ_ＨＣ_Ｈ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｈ−Ｖ_ＬＣ_Ｌ，Ａ_αＡ_βＣ_Ｌ−ＸＣ_Ｈ，又はＡ_αＡ_βＣ_Ｈ−ＸＣ_Ｌ]
上の表に示された構造は単に重要な特徴を示すだけであり、例えば上記の構造は免疫グロブリンの結合（Ｊ）ドメインや他のドメインを示すものではないし、またジスルフィド結合も示されない。これらを簡潔化のために省略される。しかし、そのようなドメインが結合活性にとって必要な場合には、その場合に応じて結合パートナー又は免疫グロブリン分子中でそれらが占める通常の位置にそれらが存在すると見なされるべきである。

免疫グロブリン軽鎖又は重鎖定常領域をコードするＤＮＡは既知であるか、もしくはｃＤＮＡライブラリーから容易に入手可能であるか、あるいは合成される。例えばAdams等, Biochemistry 19:2711-2719(1980)；Gough等, Biochemistry 19:2702-2710(1980)；Dolby等, P.N.A.S.USA,77:6027-6031(1980)；Rice等, P.N.A.S.USA 79:7862-7865(1982)；Falkner等, Nature 298:286-288(1982)；及びMorrison等, Ann.Rev.Immunol.2:239-256(1984)を参照のこと。内因性リーダー配列を伴うヒトＩＬ−２２をコードするＤＮＡ配列がここに提供される（配列番号：７０）。既知の、あるいはｃＤＮＡライブラリーから容易に入手可能な他の望ましい結合パートナーをコードするＤＮＡ配列も本発明の実施に適している。

この本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを、発現用の宿主細胞中にトランスフェクトする。多量体を望まれる場合には宿主細胞を、その多量体を構成する各鎖をコードするＤＮＡで形質転換するが、この際、その多量体の鎖を目的の様式で組み立て得るように宿主細胞を最適に選択する。宿主細胞がトランスフェクション前に免疫グロブリンを産出している場合には、軽鎖又は重鎖に融合した結合パートナーでトランスフェクションするだけでヘテロ抗体を生産することができる。
結合パートナードメインを保持する一又は複数のアームと、付随の可変領域を保持する一又は複数のアームを有する前記免疫グロブリンは、結合パートナーリガンドと抗原又は治療的部分に対して二重特異性を生じる。多重に同時形質転換した細胞を上述の組換え法で使用することによって、例えば上述のヘテロ四量体免疫グロブリンなど、多重特異性を有するポリペプチドが生産される。

免疫グロブリン軽鎖の存在は本発明のイムノアドヘシンにおいて必要ではないけれども、免疫グロブリン軽鎖はＩＬ−２２−免疫グロブリン重鎖融合ポリペプチドに共有結合されて存在しているかもしれない。この場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは典型的にはＩＬ−２２−免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡと同時発現される。分泌時にハイブリッド重鎖及び軽鎖が共有結合的に結合されて、二つのジスルフィド結合免疫グロブリン重鎖−軽鎖対を含む免疫グロブリン様構造が提供される。そのような構造の調製に好適な方法は、例えば１９８９年３月２８日に発行された米国特許第４８１６５６７号に開示されている。標的タンパク質をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、ここに記載の原核生物又は真核細胞を含む。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ないか又は有害である場合には、ＩＬ−２２融合タンパク質は細菌中で生産することができる。細菌中でのポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号及び第５８４０５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体断片の発現を記載している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248（B.K.C. Lo編, Humana Press, Totowa, NJ, 2003）,pp245-254も参照。）発現後、Ｆｃ融合タンパク質は可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。実施例のセクションにおいて例証されるように、更なる精製方法は、限定しないが、プロテインＡカラムを使用する精製を含む。

原核生物に加えて、糸状菌又は酵母のような真核微生物は、そのグリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的又は完全なヒトのグリコシル化パターンを持つ抗体の生成をもたらす菌類や酵母菌株を含み、適切なクローニング又は発現宿主である。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLi等, Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照のこと。
グリコシル化タンパク質の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特にヨトウガ（スポドプテラ・フルギペルダ）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる多数のバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞培養を宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ^ＴＭ技術を記載）を参照。

脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合化されている哺乳動物細胞系は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株（例えばGraham等, J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３又は２９３細胞；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞（例えばMather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばMather等, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ⁻ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Urlaub等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216(1980)）；及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した所定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki及びWu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo編, Humana Press, Totowa, NJ), 255-268頁(2003)を参照のこと。

Ｄ．ＩＬ−２２アゴニスト
一態様では、本発明は方法の実施態様のためのＩＬ−２２アゴニストを提供する。ＩＬ−２２アゴニストはここで定義されたＩＬ−２２の生物学的活性を有する。一実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは抗体である。所定の実施態様では、抗ＩＬ−２２抗体はＩＬ−２２ＲとのＩＬ−２２の相互作用を促進するアゴニスト抗体である。特定の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは、ＩＬ−２２ＢＰに結合し、ＩＬ−２２へのＩＬ−２２ＢＰの結合を阻止又は阻害し、それによってＩＬ−２２活性（例えばＩＬ−２２Ｒへの結合性）を誘導又は増加させる抗体である。他の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストはＩＬ−２２に結合するオリゴペプチドである。オリゴペプチドは、既知のオリゴペプチド合成方法を使用して化学的に合成することができ、あるいは組換え技術を使用して調製及び精製することができる。そのようなオリゴペプチドは通常、少なくとも約５のアミノ酸長であり、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００のアミノ酸長である。そのようなオリゴペプチドは、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定することができる。この点において、ポリペプチド標的に特異的に結合する能力のあるオリゴペプチドのオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングする技術は当該分野でよく知られていることに留意されたい（例えば、米国特許第５５５６７６２号、同第５７５０３７３号、同第４７０８８７１号、同第４８３３０９２号、同第５２２３４０９号、同第５４０３４８４号、同第５５７１６８９号、同第５６６３１４３号；ＰＣＴ公開第８４／０３５０６号、及び同第８４／０３５６４号；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984)；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985)；Geysen等, in Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)；Geysen等, J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)；Schoofs等, J. Immunol., 140:611-616 (1988), Cwirla,S.E.等(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378；Lowman,H.B.等 (1991) Biochemistry, 30:10832；Clackson,T.等 (1991) Nature, 352:624；Marks,J.D.等 (1991) J. Mol. Biol., 222:581；Kang,A.S.等 (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363、及びSmith, G.P. (1991) Current Opin. Biotechnol., 2:668参照）。

更に別の実施態様では、本発明のＩＬ−２２アゴニストは、ここに記載のオリゴペプチド又は抗体以外の、ＩＬ−２２に結合する有機分子である。有機分子は例えば小分子でありうる。ＩＬ−２２に結合する有機分子は既知の方法（例えばＰＣＴ公開第００／００８２３号及び同第００／３９５８５号参照）を使用して同定され、化学的に合成されうる。そのような有機分子は通常、約２０００ダルトン未満のサイズであり、あるいは約１５００、７５０、５００、２５０又は２００ダルトン未満のサイズであり、本発明のＩＬ−２２に結合する能力のあるこのような有機分子は、よく知られた技術を用いて過度の実験をすることなしに同定されうる。この点において、ポリペプチド標的に結合する能力のある分子の有機分子ライブラリーをスクリーニングする技術は当該分野でよく知られていることに留意されたい（例えばＰＣＴ公開第００／００８２３号及び同第００／３９５８５号参照）。特定の実施態様では、ＩＬ−２２アゴニストは、ＩＬ−２２ＢＰに結合し、ＩＬ−２２へのＩＬ−２２ＢＰの結合を阻止又は阻害し、それによってＩＬ−２２活性（例えばＩＬ−２２Ｒへの結合性）を誘導又は増加させる有機分子である。更に他の実施態様では、ＩＬ−２２のアゴニストが提供される。例示的なアゴニストは、限定されないが、天然ＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒ；天然ポリペプチドの少なくとも一つの活性を保持するＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒの断片、変異体、又は修飾形態；ＩＬ−２２Ｒに結合しそれを活性化させることができる薬剤；及びＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒ又はＩＬ−２２又はＩＬ−２２Ｒをコードする核酸の過剰発現を誘導する薬剤を含む。

Ｅ．アッセイ
ここに提供されるＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、同定され、当該技術分野で知られている様々なアッセイによってその物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性についてスクリーニングされ、又は特徴づけることができる。

１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様では、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット分析、スキャッチャードによる細胞表面結合、表面プラズモン共鳴などの既知の方法によって、その受容体結合活性について試験される。他の態様では、競合アッセイを使用して、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質とＩＬ−２２受容体への結合について競合する抗体を同定することができる。更なる態様では、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、生物学的試料中に存在するＩＬ−２２受容体又はＩＬ２２結合タンパク質（可溶性受容体）の存在又は量を検出するために使用することができる。更なる態様では、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、生物学的試料中に存在するＩＬ−２２受容体の存在又は量を検出するために使用することができる。所定の実施態様では、生物学的試料は試料中の任意のＦｃ受容体を飽和させるために非特異的アイソタイプコントロール抗体で最初にブロックされる。

２．活性アッセイ
一態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の生物学的活性を同定するためのアッセイが提供される。ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の生物学的活性には、例えば、ＩＬ−２２受容体への結合、ＩＬ−２２シグナル伝達の刺激、及びＳＴＡＴ３、ＲｅｇＩＩＩ及び／又はＰａｎｃｒｅＰＡＰの発現の誘導が含まれる。更に、心血管疾患又は病態の場合、生物学的活性は動脈硬化プラークの形成への影響、特に動脈硬化プラーク形成の形成阻害を含みうる。プラーク形成の阻害は、当業者に知られている任意の適切な造影法によって評価されうる。

Ｆ．コンジュゲート
本発明はまた検出、製剤、半減期延長、免疫原性の緩和又は組織浸透のための一又は複数の薬剤にコンジュゲートされたここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含むコンジュゲートを提供する。例示的なコンジュゲーションは、限定されないが、ペグ化及び放射性同位体への結合を含む。
他の実施態様では、コンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートされたここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産に利用できる。例としては、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２及びＬｕの放射性同位体が含まれる。放射性コンジュゲートが検出に使用される場合、それはシンチグラフィー検査のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、あるいは核磁気共鳴（ＮＭＲ）造影法（磁気共鳴画像法，ｍｒｉとしても知られている）のためのスピン標識、例えばまたヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含みうる。

Ｇ．検出のための方法及び組成物
所定の実施態様では、ここで提供されるＩＬ−２２Ｆｃ融合体の何れも、生物学的試料中におけるＩＬ−２２受容体の存在を検出するのに有用である。所定の実施態様では、該方法は、非特異的アイソタイプコントロール抗体で試料中の任意のＦｃ受容体をブロックする工程を更に含む。ここで使用される「検出」なる用語は、定量的又は定性的検出を包含する。所定の実施態様では、生物学的サンプルは、上皮組織などの細胞又は組織を含む。

一実施態様では、検出方法で使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が提供される。更なる態様では、生物学的試料中のＩＬ−２２受容体の存在を検出する方法が提供される。所定の実施態様では、本方法は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＩＬ−２２受容体への結合を許容する条件下で、ここに記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質と生物学的試料を接触させ、複合体がＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質とＩＬ−２２受容体の間に形成されているかどうかを検出することを含む。所定の実施態様では、該方法は非特異的アイソタイプコントロール抗体で試料中の任意のＦｃ受容体をブロックする工程を更に含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボ方法でありうる。一実施態様では、例えばＩＬ−２２受容体が患者の選択のためのバイオマーカーであるなど、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質による治療にふさわしい対象を選択するために使用される。

所定の実施態様では、標識されたＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が提供される。標識は、限定されるものではないが、（例えば、蛍光、発色、高電子密度、化学発光、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば酵素反応や分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素やリガンドのような部分が含まれる。このような標識の例には、限定されないが、放射性同位体^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈ、及び^１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセインとその誘導体、ローダミンとその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシェフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環式オキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼで、色素前駆体を酸化するために過酸化水素を利用する酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼとカップリングされたもの、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定なフリーラジカルなどが含まれる。

Ｈ．薬学的製剤
ここでのＩＬ−２２ベース組成物（これは、所定の実施態様では、所定の実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、及びＩＬ−２２ポリペプチド又はアゴニストを含む）は、良好な医療行為と一致した様式にて、製剤化、用量決定及び投与されるであろう。ここで考慮される要因には、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の対象の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医師に知られている他の要因が含まれる。一実施態様では、組成物は、疾患又は病態に罹りやすいか又は罹患と診断されたヒト対象の生存期間を増加させるために使用することができる。生存期間は最初の薬剤投与から死までの時間として定義される。

薬学的製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分を一又は複数の任意成分の薬学的に許容される担体（Remington's Pharmaceutical Sciences 16版, Osol, A.編(1980)及びRemington's Pharmaceutical Sciences 20版, A. FGennaro編, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa）と、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、混合することによって、当該分野で知られた標準的方法を使用して調製される。薬学的に許容される担体は、用いられる投薬量及び濃度で一般にレシピエントに非毒性であり、限定されないが、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存料（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；単糖、二糖、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。ここでの例示的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Baxter International社.）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、所定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの一又は複数の追加のグルコサミノグリカンと組合わされる。

場合によっては、しかし好ましくは、製剤は、薬学的に許容可能な塩、好ましくは塩化ナトリウムを、好ましくはおよそ生理的な濃度で含む。
場合によっては、本発明の製剤は薬学的に許容可能な保存料を含みうる。幾つかの実施態様では、保存料の濃度は０．１から２．０％（典型的にはｖ／ｖ）の範囲である。好適な保存料は薬学の分野で知られているものを含む。ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、メチルパラベン、塩化ベンザルコニウム及びプロピルパラベンが好ましい保存料である。場合によっては、本発明の製剤は、０．００５から０．０２％の濃度で薬学的に許容可能な界面活性剤を含みうる。
ここでの製剤は、また、治療される特定の適応症に必要な一を越える活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含みうる。そのような分子は、好適には、意図された目的に有効な量で組合せて存在する。

例示的な凍結乾燥製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
また、ここでの製剤は治療される特定の適応症に必要な一を越える活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものを含みうる。例えば、ステロイド、ＴＮＦアンタゴニスト又は他の抗炎症治療剤を更に提供することが望ましい場合がある。そのような活性成分は意図される目的のために効果的である量で組合わせて適切に存在する。
活性成分は、例えばコアセルベーション技術あるいは界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに、コロイド状ドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）に、あるいはマクロエマルションに捕捉させてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16版, Osol, A.編(1980)に開示されている。

徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の適切な例には、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが含まれ、該マトリックスは成形品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌグルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴ^ＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注入可能なミクロスフィア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸等のポリマーは分子を１００日に渡って放出することができるが、ある種のヒドロゲルはより短時間でタンパク質を放出する。カプセル化された抗体が身体内に長時間残ると、それらは３７℃の水分に露出されることにより変性又は凝集し、その結果、生物活性の喪失及び起こりうる免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法を、関与する機構に応じて安定化について工夫することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合形成であると発見された場合、安定化はスルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加剤の使用、及び特定のポリマーマトリクス組成物の開発によって達成されうる。

局所投与用の薬学的組成物は、例えば、局所用ゲルの形態で製剤化されうる。例えば米国特許第４７１７７１７号、同第５１３０２９８号、同第５４２７７７８号、同第５４５７０９３号、同第５７０５４８５号、同第６３３１３０９号及び国際公開第２００６／１３８４６８号を参照のこと。所定の実施態様では、組成物はセルロース誘導体の存在下で製剤化することができる。所定の他の実施態様では、局所用製剤は投与前に十分な緩衝液又は希釈剤を用いて凍結乾燥製剤から再構成することができる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、上皮創傷治癒に欠陥のある対象への局所投与用に製剤化される。ある特定の実施態様では、上皮創傷治癒は皮膚において生じる。ある他の特定の実施態様では、対象は創傷治癒に欠陥を有するヒトである。所定の他の実施態様では、本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する局所用製剤を、内部又は外部の外科的切開後の創傷治癒を改善するために使用することができる。

本発明の一実施態様では、創傷治癒を加速させ、促進し又は改善する際に使用されるＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、例えば予め充填されたシリンジ又は容器中の、局所用ゲルの製剤に含まれ、あるいは本発明の化合物は患者への局所投与の直前にゲルマトリックスと混合されうる。所定の実施態様では、更なる治療剤が、同時に又は逐次的に、また局所的に投与される。他の投与経路もまた場合によっては使用され、例えば、限定されないが、非経口、皮下、腹腔内、肺内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、及び鼻腔内投与を含む任意の適切な手段によって投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。

創傷治癒のために典型的には、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は部位特異的デリバリー用に製剤化される。局所に適応される場合、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合体は、担体及び／又はアジュバントなどの他の成分と適切に組み合わされる。そのような他の成分の性質に制限はないが、意図する投与のために効果的かつ薬学的に許容可能でなければならず、組成物の活性成分の活性を劣化させることができないものである。適切なビヒクルの例は、精製コラーゲンの有無にかかわらず、軟膏、クリーム、ゲル、スプレー又は懸濁液を含む。また、組成物は、場合によっては液体又は半液体形態で、滅菌包帯、経皮パッチ、絆創膏及び包帯にしみ込ませてもよい。また、酸化再生セルロース／コラーゲンマトリクス、例えば、ＰＲＯＭＯＧＲＡＮＭａｔｒｉｘ創傷ドレッシング又はＰＲＯＭＯＧＲＡＮＰＲＩＳＭＡＭＡＴＲＩＸを使用することができる。

徐放性調製物を調製することができる。徐放性調製物の適切な例には、本発明のポリペプチドを含む固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが含まれ、該マトリックスは成形品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌグルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮＤＥＰＯＴ^ＴＭ（乳酸-グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注入可能なミクロスフィア）、ポリ−乳酸−コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマー、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸等のポリマーは分子を１００日に渡って放出することができるが、ある種のヒドロゲルはより短時間でタンパク質を放出する。カプセル化されたポリペプチドは身体内に長時間残ると、それらは３７℃の水分に露出されることにより変性又は凝集し、その結果、生物活性の喪失及び起こりうる免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法を、関与する機構に応じて安定化について工夫することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換による分子間Ｓ−Ｓ結合形成であると発見された場合、安定化はスルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加剤の使用、及び特定のポリマーマトリクス組成物の開発によって達成されうる。

ゲル製剤を得るため、液体組成物で調製されたＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、有効量の水溶性多糖類又は合成ポリマーと混合して、例えばポリエチレングリコールのようにゲル（例えばゲル化剤）を形成し、局所的に適用される適切な粘性の製剤を形成することができる。使用されうる多糖類又はゲル化剤には、例えば、エーテル化されたセルロース誘導体などのセルロース誘導体、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、及びアルキルヒドロキシアルキルセルロース、例えばメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース；ナトリウムカルボキシメチルセルロース；ＰＯＥ−ＰＯＰブロックポリマー；様々な等級のポロキサマーＵＳＰ；ヒアルロン酸；ポリアクリル酸、例えばカルボポール９４０；澱粉及び分画澱粉；寒天；アルギン酸及びアルギネート；アラビアゴム；プルラン；アガロース；カラギーナン；デキストラン；デキストリン；フルクタン；イヌリン；マンナン；キシラン；アラビナン；キトサン；グリコーゲン；グルカン；及び合成バイオポリマー；並びにガム、例えばキサンタンガム；グアガム；ローカストビーンガム；アラビアゴム；トラガカントゴム；及びカラヤガム；及びその誘導体、組合わせ及び混合物が含まれる。本発明の一実施態様では、ここでのゲル化剤は、例えば、生物系に不活性で、非毒性で、調製がしやすく、及び／又はあまり流れやすくないか粘性が高すぎなくて、その中に保たれるＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合体を不安定にしないものである。

本発明のある実施態様では、多糖はエーテル化セルロース誘導体であり、他の実施態様では、十分に明確化され、精製され、ＵＳＰに列挙されるもの、例えばメチルセルロース及びヒドロキシアルキルセルロース誘導体、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチルセルロースである（全てをセルロース剤と称す）。幾つかの実施態様では、多糖は、ヒドロキシエチルメチルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
ゲル化に有用なポリエチレングリコールは、典型的には、適当な粘性を得るために低分子量及び高分子量ポリエチレングリコールの混合物である。この目的のために、例えば、分子量４００−６００のポリエチレングリコールと分子量１５００のものとの混合物が、ペーストを得るために適切な比率で混合される場合に有効である。

多糖類及びポリエチレングリコールに適用される「水溶性」なる用語は、コロイド溶液及び分散液を含むことを意味する。一般に、セルロース誘導体の溶解性はエーテル基の置換度によって決定され、ここで有用な安定化誘導体は誘導体を水溶性にするためにセルロース鎖中に無水グルコース単位当たり十分な量の該エーテル基を有していなければならない。無水グルコース単位当たり少なくとも０．３５のエーテル基のエーテル置換度が一般に十分である。加えて、セルロース誘導体は、アルカリ金属塩、例えばＬｉ、Ｎａ、Ｋ又はＣｓ塩類の形態であってもよい。

所定の実施態様では、メチルセルロースがゲルに使用され、例えば、ゲルの約１−５％、又は約１％、約２％、約３％、約４％又は約５％を構成し、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はゲル１ｍｌ当たり約５０−２０００μｇ、１００−２０００μｇ、又は１００−１０００μｇの量で存在する。所定の実施態様では、局所投与による創傷治癒のためのＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の有効量は、創傷部１ｃｍ^２当たり約２５μｇから約５００μｇ、約５０μｇから約３００μｇ、約１００μｇから約２５０μｇ、約５０μｇから約２５０μｇ、約５０μｇから約１５０μｇ、約７５μｇ、約１００μｇ、約１２５μｇ、約１５０μｇ、約１７５μｇ、約２００μｇ、約２２５μｇ、約２５０μｇ、約３００μｇ、又は約３５０μｇでありうる。
インビボ投与に使用される製剤は一般に無菌である。無菌は、例えば滅菌濾過膜を通した濾過により、容易に達成できる。

本発明はＩＬ−２２ベースの治療剤に対する投与量を提供する。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一又は複数の別個の投与又は連続注入の何れであれ、約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ(例えば０．１−２０ｍｇ／ｋｇ)のポリペプチドが対象への最初の候補投与量である。上述した因子に応じて、典型的な一日の投与量は約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇあるいはそれ以上の範囲であるかもしれない。数日間又はそれ以上の繰り返し投与の場合、状態によっては、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療が維持される。しかしながら、他の投与計画が有用でありうる。この治療の経過は、常套的な技術及びアッセイによって、容易にモニターされる。

疾患の予防又は治療のための、本発明のポリペプチドの適切な投与量（単独で、又は一又は複数の他の更なる治療剤との組合せで使用される場合）は、治療される疾患のタイプ、ポリペプチドのタイプ、疾病の重症度及び経過、ポリペプチドが予防目的又は治療目的のための投与かどうか、過去の治療法、対象の臨床歴及びポリペプチドへの反応、及び主治医の裁量に依存する。ポリペプチドは、一度で、又は一連の治療にわたって対象に適切に投与される。疾患のタイプ及び重症度によって、約１μｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ−１５ｍｇ／ｋｇ）のポリペプチドが対象への投与のための初回候補投与量となり、例えば、一又は複数の別個の投与か、連続投与かによる。典型的な一日投与量は、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上であり、上述の要因に依存する。何日か又はより長期にわたる反復投与では、状態に依存して、治療は、疾患徴候の望まれる抑制が生じるまで一般的に維持される。ポリペプチドの一つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの何れかの組合せ）の一又は複数用量が対象に投与されうる。所定の実施態様では、約０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ．ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇ（又はその任意の組合わせ）が対象に投与されうる。このような用量は、例えば、毎週、２週毎、又は３週毎（例えば、対象は約２から約２０、又は例えば約６用量のポリペプチドの投与を受けるように）、断続的に投与されうる。初回のより高い負荷用量の後、一又は複数の低用量を投与してもよい。例示的な投与レジメンは約４ｍｇ／ｋｇの初回負荷用量と、続く約２ｍｇ／ｋｇの抗体の毎週の維持用量を投与することを含む。しかしながら、他の投与レジメンが有用でありうる。この治療の進行は、一般的な技術及びアッセイで容易にモニターされる。

心血管疾患又は病態、メタボリック症候群、急性内毒血症又は敗血症、又は糖尿病の予防又は治療のための本発明の化合物は典型的には静脈内注射によって投与される。
他の投与方法もまた使用でき、限定されないが、局所、非経口、静脈内、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、点眼、眼内、硝子体内、病巣内、脳脊髄内、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、又は吸入投与を含む。非経口注入は筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与を含む。また、ここに記載の化合物は、既知の方法に従って、例えばボーラスとしての静脈内投与、又はある期間にわたる連続注入により、ヒト対象に投与される。

Ｉ．治療方法及び組成物
ここで提供されるＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２アゴニストの何れも治療方法において使用することができる。
ａ）炎症性腸疾患
一態様では、医薬として使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が提供される。更なる態様では、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤの治療に使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が提供される。所定の実施態様では、治療方法に使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が提供される。所定の実施態様では、本発明は有効量のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与することを含むＵＣ又はＣＤを有する個体を治療する方法において使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。そのような一実施態様では、該方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも一の更なる治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様では、本発明は、上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強する際に使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。ある特定の実施態様では、上皮組織は腸（intestinal）上皮組織である。所定の実施態様では、本発明は、上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強するために有効量のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を個体に投与することを含む、個体において上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強する方法において使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。更に他の実施態様では、本発明は、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、糖尿病性創傷治癒、メタボリック症候群及びアテローム性動脈硬化症の治療に使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。所定の実施態様では、本発明は、個体に有効量のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、個体における糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、糖尿病性創傷治癒、タボリック症候群及びアテローム性動脈硬化症を治療する方法において使用するためのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を提供する。双方とも２０１３年３月１５日に出願された「創傷治癒のためのＩＬ−２２ポリペプチドの使用」と題されたドケット番号ＰＲ５５８６、出願番号６１／８００７９５、及び「ＩＬ−２２ポリペプチドを使用する心血管疾患及びメタボリック症候群の治療方法」と題されたドケット番号ＰＲ５５９０、出願番号６１／８０１１４４のジェネンテックの出願を参照のこと。双方の出願の開示はその全体が出典明示によりここに援用される。上記実施態様の何れかに係る「個体」又は「対象」又は「患者」は好ましくはヒトである。

更なる態様では、本発明は医薬の製造又は調製におけるＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の使用を提供する。一実施態様では、医薬はＩＢＤ及び創傷治癒の治療のためのものである。更なる実施態様では、医薬は、有効量の医薬をＩＢＤを有する個体に投与することを含むＩＢＤ及び創傷治癒を治療する方法において使用するためのものである。そのような一実施態様では、該方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも一の更なる治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様では、医薬は腸（gut）上皮細胞における炎症反応を抑制するためのものである。更なる実施態様では、医薬は、上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強するために有効量の医薬を個体に投与することを含む、個体における上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強する方法において使用するためのものである。上記実施態様の何れかに係る「個体」はヒトでありうる。

更なる態様では、本発明は、ＵＣ及びＣＤを含むＩＢＤの治療方法を提供する。一実施態様では、該方法は、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の有効量を、ＩＢＤを有する個体に投与することを含む。そのような一実施態様では、該方法は、t以下に記載されるような少なくとも一の更なる治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。上記実施態様の何れかに係る「個体」はヒトでありうる。
更なる態様では、本発明は、個体において上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強する方法を提供する。一実施態様では、該方法は、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の有効量を個体に投与して上皮増殖、分化及び／又は遊走を増強させることを含む。一実施態様では、「個体」はヒトである。

ｂ）他の治療適応症
本発明は、心血管疾患及び病態、メタボリック症候群、急性内毒血症及び敗血症、及び糖尿病のためのＩＬ−２２ベースの治療剤を提供する。与えられた疾患又は病態の予防、治療又は重症度の低減に対して、本発明の化合物の適切な投与量は、上述したように、治療される疾患又は病態のタイプ、疾患又は病態の重症度及び過程、薬剤が予防目的で投与されるのか又は治療目的で投与されるのかどうか、以前の治療法、対象の臨床歴、及び化合物への反応、及び主治医の裁量に依存するであろう。化合物は適切には一回で又は一連の治療にわたって対象に投与される。好ましくは、最初にインビトロで、ついでヒトでの試験の前に有用な動物モデルで、用量−応答曲線及び本発明の薬学的組成物を決定することが望ましい。

一態様では、本発明は心血管疾患又は障害、メタボリック症候群、急性内毒血症及び敗血症、及びインスリン関連疾患の治療方法を提供する。一実施態様では、該方法は、治療的有効量のＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、又はＩＬ−２２アゴニストを必要とする対象に投与することを含む。他の態様では、本発明は、心血管疾患又は障害、メタボリック症候群、及びインスリン関連疾患の進行を遅延させ又は遅くするための方法を提供する。一実施態様では、該方法は、該疾患、症状、又は障害であると診断された対象に有効量のＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、又はＩＬ−２２アゴニストを投与することを含む。他の態様では、本発明は、心血管疾患又は障害、及びインスリン関連疾患の徴候を予防する方法を提供する。一実施態様では、該方法は、該疾患、症状、又は障害のリスクがある対象に有効量のＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、又はＩＬ−２２アゴニストを投与することを含み、ここで、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、又はＩＬ−２２アゴニストは、該疾患、症状、又は障害の徴候の発生に対して効果的である。

心血管疾患及び病態
一態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ−２２アゴニストは、対象における心血管疾患又は病態の臨床的及び／又は組織学的及び／又は生化学的及び／又は病理学的徴候（症状（symptoms）及び兆候（signs）の双方を含む）の発症又は進行に対する防止的又は予防的効果を提供する。一実施態様では、疾患又は病態はアテローム性動脈硬化症である。一実施態様では、徴候は動脈硬化プラーク形成及び／又は血管炎症を含む。他の実施態様では、対象は心血管疾患のリスクがある。一般に、リスクのある対象は過去にここに記載の心血管疾患又は病態を有していたか又は心血管疾患又は病態に対して遺伝的素因を有しているであろう。

心血管疾患及び病態の治療効果は心血管疾患の評価に通常使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、心血管の健康を評価することができる。心血管の健康は、限定されないが、例えば血液検査（例えば総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｃ反応性タンパク質、フィブリノーゲン、ホモシステイン、空腹時インスリン、フェリチン、リポタンパク質、ＬＰＳ）、血圧、聴診、心電図、心臓負荷試験、心臓画像診断（例えば冠動脈カテーテル法、心エコー図、血管内超音波法、放射断層撮影法、ＣＴ血管造影法，及び核磁気共鳴画像診断法）によって評価することができる。

メタボリック症候群
一態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ−２２アゴニストは、対象におけるメタボリック症候群（又は代謝性障害又は疾患）の臨床的及び／又は組織学的及び／又は生化学的及び／又は病理学的徴候（症状（symptoms）及び兆候（signs）の双方を含む）の発症又は進行に対する治療的、防止的又は予防的効果を提供する。一又は複数の実施態様では、対象はメタボリック症候群のリスクがある。

メタボリック症候群の治療効果はメタボリック症候群の評価に通常使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、肥満を測定することができる。更なる例として、高血糖症、脂質異常症、インスリン抵抗性、慢性脂肪組織炎症、及び／又は高血圧を測定することができる。Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ−６、ＬＰＳ、及びプラスミノーゲン活性化因子阻害因子１の一又は複数のレベルの減少を測定することができる。これらの測定は当該分野でよく知られている任意の方法によって実施することができる。

インスリン関連疾患
インスリン関連疾患では、「治療」なる用語は疾患の治療処置と予防又は防止的手段の両方を意味し、その目的は、標的とする病理症状又は疾患を防止するか又は遅くする（減らす）ことである。治療を必要とする者は、インスリン関連疾患を既に有する者、並びにそのような疾患を有しやすい者、あるいはその疾患が予防されるべきである者を含む。

一態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ−２２アゴニストは、対象におけるインスリン関連疾患の臨床的及び／又は組織学的及び／又は生化学的及び／又は病理学的徴候（症状（symptoms）及び兆候（signs）の双方を含む）の発症又は進行に対する防止的又は予防的効果を提供する。一実施態様では、疾患はＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、又は妊娠糖尿病である。一実施態様では、病理又は病理学的徴候は、膵臓（例えば島細胞）によるインスリン生産が少ないかない、インスリン抵抗性、及び高血糖症の一又は複数を含む。他の実施態様では、対象はインスリン関連疾患のリスクがある。一般に、リスクのある対象は、インスリン関連疾患に対して遺伝的素因を有しており、島細胞の自己免疫破壊を惹起するウイルス（例えばエプスタイン・バーウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス又はサイトメガロウイルス）に曝露されており、肥満であり、前糖尿病性であり（正常血糖値よりも高い）、又は妊娠糖尿病を有している。

インスリン関連疾患の治療効果は、そのような疾患の評価に通常使用される様々な評価によって測定することができる。例えば、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病の双方は次の一又は複数を用いて評価することができる：糖化ヘモグロビン検査（Ａ１Ｃ）、定期的な血糖値検査、及び空腹時血糖値検査。Ｉ型は血液中の自己抗体及び／又は尿中のケトンの検査によっても評価することもできる。ＩＩ型はまた経口的グルコース負荷の試験によっても評価できる。

急性内毒血症及び敗血症
一態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質及びＩＬ−２２アゴニストは、対象における急性内毒血症、敗血症、又は双方の臨床的及び／又は組織学的及び／又は生化学的及び／又は病理学的徴候（症状（symptoms）及び兆候（signs）の双方を含む）の発症又は進行に対する治療的、防止的又は予防的効果を提供する。一又は複数の実施態様では、対象は急性内毒血症、敗血症、又は双方のリスクがある。
急性内毒血症、敗血症、又は双方の治療効果は、急性内毒血症、敗血症、又は双方の評価に通常使用される様々な評価によって測定することができる。例えばＬＰＳ又は炎症マーカーのレベルの減少を測定することができる。これらの測定は当該分野でよく知られている任意の方法によって実施することができる。

創傷治癒
創傷治癒を測定する様々な方法がある。しばしば画像を撮って線状寸法、周長及び面積を計算する。ＮＩＨは、画像から創傷面積の測定を可能にするフリーのプログラムＩｍａｇｅＪを有している。最終の治癒予後は周囲から中心に向けての移動に基づき初期の治癒速度から外挿することができる。これは、多くの数式を使用してなされ、その最も一般的なものは修正ギルマン方程式である。視診に加えて、創傷治癒の測定は、また分光学的方法又はＭＲＩによって補助されうる。例えばDargaville等, Biosensors Bioelectronics, 2013, 41:30-42、Tan等, 2007, British J. Radiol. 80:939-48を参照のこと。治癒が遅い／不充分な場合、創縁の生検を採って感染及び悪性度を排除し又は決定することができる。所定の実施態様では、創傷治癒の加速又は改善を、ＩＬ−２２処置及びコントロール創傷における創縫合を比較することによって評価することができる。所定の実施態様では、創傷治癒の加速又は改善は、コントロールよりも少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％速いか良好である。

所定の態様では、本発明は、創傷中に活動性感染、微生物汚染又はコロニー形成を伴うか伴わない創傷の治癒を促進し／加速し／改善する方法を提供する。ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストを、感染した創傷の治療又は感染創傷の治癒の促進／加速／改善に使用することができる。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストを、感染の存在下における創傷の治療又は創傷治癒の促進／加速／改善に使用することができる。幾つかの実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストは微生物汚染又は感染のリスクを伴うコロニー形成の存在下における創傷の治療又は創傷治癒の促進／加速／改善に使用することができる。更なる実施態様では、創傷治癒を必要とする患者は糖尿病患者でありうる。従って、幾つかの実施態様では、創傷は糖尿病性創傷、例えば糖尿病性足部潰瘍である。幾つかの更なる実施態様では、創傷は感染した糖尿病性創傷、例えば感染した糖尿病性足部潰瘍である。

更なる態様では、本発明は、例えば上記治療方法の何れかに使用するための、ここで提供されたＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストを含有する薬学的製剤を提供する。一実施態様では、薬学的製剤は、ここで提供されたＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストと薬学的に許容可能な担体とを含有する。他の実施態様では、薬学的製剤は、ここで提供されたＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストと、例えば以下に記載されるような少なくとも一の更なる治療剤とを含有する。

本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は治療において単独で又は他の薬剤と組合わされて使用されうる。例えば、本発明のＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストは少なくとも一の更なる治療剤と同時投与されうる。所定の実施態様では、更なる治療剤は、限定されないが、メトトレキセート、ＴＮＦ阻害剤、ＴＮＦアンタゴニスト、メサラジン、ステロイド、デキサメタゾン、及びアザチオプリン、及びそれらの組合わせを含む炎症反応を減少させる免疫抑制剤である。炎症反応を減少させる適切な更なる治療剤は、限定されないが、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）、メルカプトプリン（６−メルカプトプリン又は６−ＭＰとも呼ばれる）又はそれらの組み合わせを含む。所定の実施態様では、ＩＬ２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合体は、ＩＢＤの治療のために炎症反応を低減する一又は複数の更なる治療剤（例えば、５−ＡＳＡ、６−ＭＰ、又はＴＮＦアンタゴニスト）と同時投与されうる。所定の他の実施態様では、ＩＬ２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合体は、ＩＢＤの治療のためにエトロリズマブのようなインテグリンアンタゴニストと同時投与されうる。一実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＩＬ−２２アゴニストと組合わせて使用される。

例えば糖尿病性足部潰瘍の治療のような慢性創傷治癒を加速するために、ＩＬ−２２ポリペプチド又はその断片又は変異体、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストの投与を一又は複数の更なる創傷治癒剤と組合わせることができる。適切な更なる創傷治癒剤は、限定されないが増殖因子（例えばＥＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ、及びＶＥＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血管形成因子（例えばＨＧＦ、ＴＮＦ−α、アンジオゲニン、ＩＬ−８、アンジオポエチン１及び２、Ｔｉｅ−２、インテグリンα５、マトリックスメタロプロテアーゼ、一酸化窒素、ＣＯＸ−２）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）ファミリーのメンバー（例えばＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ，及びＰＤＧＦ−Ｄ）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）ファミリーのメンバー（例えばＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）ファミリーのメンバー（例えばＴＧＦ−α ＴＧＦ−β）及びタンパク質同化酸素（真空療法）を含む。所定の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合体は、ここに記載の一又は複数の更なる創傷治癒剤及び／又は局所投与での使用に好適な一又は複数の抗菌剤又は抗生物質と同時投与されうる。その全体が出典明示によりここに援用される国際公開第２００６／１３８４６８号を参照のこと。そのような実施態様では、抗生物質は、限定されないがスルファジアジン銀、すなわちシルバデン（silvadeen）を含む硫黄抗生物質でありうる。同時投与される一又は複数の更なる薬剤は、ＩＬ−２２ポリペプチド、ＩＬ−２２融合タンパク質又はＩＬ２２アゴニストと同時に、交互に又は逐次的に投与されうる。

更なる例示的な実施態様では、標的が心血管疾患又は病態又はメタボリック症候群の予防又は治療である場合、ＩＬ−２２ポリペプチド又はその断片又は変異体、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストの投与は、コレステロール低下剤、例えばスタチン（例えばロバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、及びシンバスタチン）、胆汁酸結合樹脂（コレスチポール、コレスチラミンスクロース、及びコレセベラム）、エゼチミブ、又はエゼチミブ・シンバスタチン併用剤；抗血小板剤、例えばシクロオキシゲナーゼ阻害剤（アスピリン）、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体阻害剤（クロピドグレル、プラスグレル、チカグレロル、チクロピジン）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（シロスタゾール）、糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤（アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン）、アデノシン再取込み阻害剤（ジピリダモール）、トロンボキサン阻害剤（トロンボキサン合成酵素阻害剤、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、テルトロバン）；ベータ遮断薬、例えばアルプレノロール、ブシンドロール、カルテオロール、カルベジロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、トチュウ樹皮、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、セリプロロール、エスモロール、メトプロロール、ネビボロール、ブトキサミン、ＩＣＩ−１１８５５１、及びＳＲ５９２３０Ａ；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、例えばカプトプリル、ゾフェノプリル、ジカルボン酸含有剤（エナラプリル、ラミプリル、キナプリル、ペリンドプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、ゾフェノプリル）、ホスホネート含有剤（フォシノプリル）、カソキニン（casokinin）、ラクトキニン（lactokinin）、ラクトトリペプチド（プロバイオティクス・ラクトバチルス・ヘルベティカスによって生成されるか又はカゼイン由来のＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、及びＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ）；カルシウムチャンネル遮断薬、例えばジヒドロピリジン（例えば、アムロジピン、アラニジピン、アゼルニジピン、バルニジピン、ベニジピン、シルニジピン、クレビジピン、イスラジピン、エホニジピン、フェロジピン、ラシジピン、レルカニジピン、マニジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、及びプラニジピン）、フェニルアルキルアミン（例えばベラパミル）、ベンゾチアゼピン（例えばジルチアゼム）、ミベフラジル、ベプリジル、フルスピリレン、及びフェンジリン；利尿薬、例えば強力ループ利尿薬（例えば、フロセミド、エタクリン酸、トルセミド及びブメタニド）、チアジド（例えばヒドロクロロチアジド酸）、炭酸脱水酵素阻害剤（例えばアセタゾラミド及びメタゾラミド）、カリウム保持性利尿薬（例えば、アルドステロンアンタゴニスト：スピロノラクトン、及び上皮ナトリウムチャネル遮断薬：アミロリド及びトリアムテレン）、及びカルシウム保持性利尿薬、及び上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体の投与と組合わせるか又はこれらが補充される。

インスリン関連疾患又はメタボリック症候群では、ＩＬ−２２ポリペプチド又はその断片もしくは変異体、又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２アゴニストの投与は、様々な治療剤の投与と組み合わせ、又はそれらで補完することができる。Ｉ型糖尿病（インスリン依存性糖尿病又はＩＤＤＭ）の場合では、ここに記載のＩＬ−２２ポリペプチド、Ｆｃ融合タンパク質又はアゴニストは、レギュラーインスリン補充療法（速効型及び遅効型インスリンを含む）、免疫抑制治療法、膵島移植と幹細胞治療法の一又は複数と組み合わされる。一実施態様では、レギュラーインスリン補充療法としては、限定するものではないが、レギュラーインスリン（例えば、ヒューマリンＲ、ノボリンＲ）、インスリンイソフェン（例えば、ヒューマリンＮ、ノボリンＮ）、インスリンリスプロ（例えば、ヒューマログ）、インスリンアスパルト（例えば、ＮｏｖｏＬｏｇ）、インスリングラルギン（例えば、ランタス）及びインスリンデテミル（例えば、レベミル）が含まれる。他の実施形態では、インスリン補充療法はプラムリンチド（シムリン）を更に含む。

ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病又はＮＩＤＤＭ）又はメタボリック症候群の場合では、ここに記載のＩＬ−２２ポリペプチド、Ｆｃ融合タンパク質及びアゴニストを、（上で検討された）インスリン補充療法、肝臓によるグルコース産生を低下させる薬剤、インスリンの膵臓での産生及び放出を刺激する薬剤、炭水化物の酵素的崩壊を阻止し又はインスリン感受性を増加させる薬剤の一又は複数と組合わせることができる。一実施態様では、グルコース産生を低下させる薬剤はメトホルミンである（例えばGlucophage, Glumetza）。他の実施態様では、インスリンの膵臓での産生及び放出を刺激する薬剤は、グリピジド（例えば、Glucotrol, Glucotrol XL）、グリブリド（例えば、DiaBeta, Glynase）及びグリメピリド（例えば、Amaryl）である。他の一の実施態様では、炭水化物の酵素的崩壊を阻止し又はインスリン感受性を増加させる薬剤は、ピオグリタゾン（例えば、Actos）である。他の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチド、Ｆｃ融合タンパク質及びアゴニストを次のメトホルミン置換物の一つと組合わせることができる：シタグリプチン（例えば、Januvia）、サクサグリプチン（例えば、Onglyza）、レパグリニド（例えば、Prandin）及びナテグリニド（例えば、Starlix）。エクセナチド（例えば、Byetta）及びリラグルチド（例えば、Victoza）。別の実施態様では、ＩＬ−２２ポリペプチドは、Ｆｃ融合タンパク質及びアゴニストは、経口血糖降下薬、例えばスルホニル尿素と組合わせられる。

妊娠性糖尿病又はメタボリック症候群の場合には、ここに記載のＩＬ−２２ポリペプチド、Ｆｃ融合体及びアゴニストは、経口血糖コントロール医薬と組合わされる。一実施態様では、該医薬はグリブリドである。

併用療法は、「相乗効果」をもたらし、「相乗的」でありうる、つまり活性成分が併せて使用されるときに達成される効果が化合物を別個に使用して生じる効果の合計よりも大きい。相乗効果は、活性成分が：（１）同時処方され、併用された単位投薬製剤として同時に投与又は送達され；（２）別個の製剤として交互に又は平行して送達される場合；又は（３）ある種の他のレジメンによって、達成することができる。交互療法で送達される場合、相乗効果は、化合物が、例えば別個にシリンジで異なった注射によって、逐次的に投与され又は送達されるときに達成できる。一般に、交互療法の間、各活性成分の有効用量が逐次的、つまり連続的に投与される一方、併用療法では二又はそれ以上の活性成分の有効用量が一緒に投与される。
上述のそのような併用療法は、併用投与（２以上の治療剤が同一又は別個の製剤中に含まれる場合）、及び本発明のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の投与が、更なる治療剤の投与の前、同時、及び／又は後に、生じうる別個の投与を包含する。一実施態様では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の投与と更なる治療剤の投与は、互いに約１ヶ月以内、又は約１、２、又は３週間以内、又は約１、２、３、４、５、又は６日以内になされる。

本発明のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質（及び任意の更なる治療剤）は、非経口的、肺内、及び鼻腔内、そして、必要に応じて局所の治療、病巣内投与を含む任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹膜内、又は皮下投与を含む。投薬は、投与が短期のものであるか長期のものであるかに部分的に依存して、任意の好適な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射によって、なすことができる。限定されないが、単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む様々な投薬スケジュールがここで考えられる。

本発明のＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、用量決定され、投与されるであろう。こここで考慮される要因には、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医師に知られている他の要因が含まれる。ＩＬ−２２ポリペプチド又はＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、必要ではないが、場合によっては当該問題の疾患を予防又は治療するのに現在使用されている一又は複数の薬剤と共に製剤化されうる。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する融合タンパク質の量、疾患又は治療のタイプ、及び上で検討された他の要因に依存する。これらは、一般に、同じ投薬量で、ここに記載された投与経路で、又はここに記載の用量のおよそ１から９９％か、又は経験的／臨床的に適切であると決定された任意の用量及び任意の経路により、使用される。

疾患の予防又は治療に対して、（単独で又は一又は複数の他の付加的な治療剤との併用で使用される場合）本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の適切な投薬量は、治療される疾患のタイプ、Ｆｃ領域のタイプ、疾患の重篤度及び経過、融合タンパク質が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、過去の治療、患者の臨床病歴及びＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質に対する応答性、及び担当医師の裁量に依存する。ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は一度に又は一連の治療にわたって適切に患者に投与される。疾患のタイプ及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ(例えば０．１ｍｇ／ｋｇ−１０ｍｇ／ｋｇ)又は約０．１μｇ／ｋｇから１．５ｍｇ／ｋｇ(例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ−１ｍｇ／ｋｇ)のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、例えば一又は複数の分割投与でも又は連続注入でも、患者投与の初期候補用量とすることができる。ある典型的な１日投薬量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であるかもしれない。症状に応じて、数日間以上にわたる繰り返し投与では、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療が持続される。ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の例示的な一投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。所定の他の投薬量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇ、及び約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲を含む。よって、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇ（又は任意のその組合せ）の一又は複数回の用量で患者に投与することができる。局所創傷治癒に対しては、約０．００１ｍｇ／ｃｍ^２−約１０ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ^２−約５ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積、約０．０１ｍｇ／ｃｍ^２−約１ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ^２−約０．５ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積、約０．０１ｍｇ／ｃｍ^２−約０．５ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積、約０．０５ｍｇ／ｃｍ^２−約０．２ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積、又は約０．１ｍｇ／ｃｍ^２−約０．５ｍｇ／ｃｍ^２創傷面積（又は任意のその組合せ）の一又は複数回の用量で患者に投与することができる。このような用量は、間欠的、例えば毎週又は３週ごとに投与されうる（例えば患者に約２から約２０、例えば約６用量のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が投与されるように）。初期のより高い負荷投与量の後、一又は複数のより低い用量が投与されうる。しかし、他の投薬レジメンも有用でありうる。この治療法の進行は、一般的な技術及びアッセイによって容易にモニターされる。同様の投薬量範囲をＩＬ−２２ポリペプチドに適用することができる。

上記の製剤又は治療方法の何れかが、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の代わりか又はそれに加えて、本発明のコンジュゲートを使用して実施してもよいことが理解される。

Ｊ．製造品
本発明の他の態様では、上述の疾患の治療、予防及び／又は診断に有用な物質を含む製造品が提供される。該製造品は容器と容器上又は容器に付随したラベル又はパッケージ挿入物を含む。適切な容器は、例えばビン、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチックのような様々な材料から形成されうる。容器は、症状の治療、予防及び／又は診断に効果的な、それ自体であるか又は他の組成物と併用される組成物を収容し、滅菌のアクセスポートを有しうる（例えば容器は皮下注射針が突き通すことが可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルでありうる）。組成物中の少なくとも一種の活性剤は本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質である。ラベル又はパッケージ挿入物は、組成物が、選択した症状の治療のために使用されることを示す。更に、製造品は、（ａ）組成物をそこに収容し、その組成物が本発明のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含む第一の容器と；（ｂ）組成物をそこに収容し、その組成物が更なる細胞傷害性又は別の治療剤を含む第二の容器とを含みうる。本発明のこの実施態様における製造品は、組成物を、特定の症状を治療するのに使用することができることを示しているパッケージ挿入物を更に含みうる。あるいは、もしくは付加的に、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液及びデキストロース溶液を含む第二の（又は第三の）容器を更に含んでいてもよい。更に、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジを含む、商業上及び使用者の見地から望ましい他の材料を含んでもよい。
上記製造品の何れもＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の代わりに又はこれに加えて、本発明のコンジュゲートを含んでもよいことは理解される。

Ｋ．スクリーニングアッセイ及び動物モデル
実施例のセクションに例示されるように、ＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質、及びＩＬ−２２アゴニストを、ＩＢＤ、心血管疾患又は病態及びメタボリック症候群の様々な細胞ベースアッセイ及び動物モデルにおいて評価することができる。
組換え（トランスジェニック）動物モデルは、興味ある遺伝子のコード部分を、トランスジェニック動物産生のための標準的技術を用いて、対象とする動物のゲノムに導入することにより操作できる。トランスジェニック操作の標的となりうる動物は、限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、及び非ヒト霊長類、例えばヒヒ、チンパンジー及び他のサルを含む。このような動物に導入遺伝子を導入するのに当該分野で知られた技術は、前核マイクロインジェクション（Hoppe及びWanger, 米国特許第４８７３１９１号）；胚系列へのレトロウイルス媒介遺伝子導入（例えば、Van der Putten等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 6148-615 [1985]）；胚性肝細胞でのジーンターゲティング（Thompson等, Cell 56, 313-321 [1989]）；胚のエレクトロポレーション（Lo, Mol. Cel. Biol. 3, 1803-1814 [1983]）；精子媒介遺伝子導入（Lavitrano等, Cell 57, 717-73 [1989]）を含む。概説については、例えば、米国特許第４７３６８６６号を参照のこと。

本発明の目的では、トランスジェニック動物は、その細胞の一部にのみ導入遺伝子を有するもの（「モザイク動物」）を含む。導入遺伝子は、単一の導入遺伝子として、又はコンカテマー、例えば頭部と頭部又は頭部と尾部の直列型として組み込まれる。特定の細胞型への導入遺伝子の選択的導入も、例えば、Lasko等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 6232-636 (1992)の技術に従って可能である。
トランスジェニック動物における導入遺伝子の発現は、標準的技術によってモニターできる。例えば、導入遺伝子の組込みの確認にサザンブロット分析又はＰＣＲ増幅を使用することができる。ついで、ｍＲＮＡ発現のレベルを、インサイツハイブリダイゼーション、ノーザンブロット分析、ＰＣＲ、又は免疫組織化学などの技術を使用して分析することができる。

例えば動脈硬化プラーク負荷及び血管機能を決定するために組織学的検査及び／又は画像解析又は超音波解析によって、心血管疾患病理のような適当な病理の兆候に関して動物を更に調べてもよい（以下の実施例を参照）。プラーク形成のサイズ、数、及び程度を含む動脈硬化プラーク形成に対する効果の程度を確定するために、ＩＬ−２２、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又は候補アゴニストでトランスジェニック動物を処置するブロッキング実験を実施することもできる。これらの実験では、本発明のポリペプチドと結合する遮断抗体が動物へ投与され、興味ある生物学的効果がモニターされる。

あるいは、ＩＬ−２２ポリペプチドをコードする内在性の遺伝子と、動物の胚性細胞へ導入された同じポリペプチドをコードする改変ゲノムＤＮＡとの間の相同組換えの結果として、ＩＬ−２２をコードする欠陥又は改変遺伝子を有する「ノックアウト」動物を構築することができる。例えば、ＩＬ−２２をコードするｃＤＮＡを、確立されている技術によって、ＩＬ−２２をコードするゲノムＤＮＡのクローニングに利用できる。ＩＬ−２２をコードするゲノムＤＮＡの一部は、その他の遺伝子、例えば組込みをモニターするために利用できる選択可能なマーカーをコードする遺伝子によって置き換え又は除去できる。
典型的には、ベクターに無変化の数キロベースのフランキングＤＮＡ（５'と３'末端の両方）を含ませる［例えば、相同的組換えベクターの記載についてはThomas及びCapecchi, Cell, 51:503 (1987)を参照のこと］。ベクターを胚性幹細胞中に（例えば電気穿孔法によって）導入し、導入されたＤＮＡが内在性ＤＮＡと相同的に組換えられた細胞を選択する［例えば、Li等, Cell, 69:915 (1992)参照］。選択された細胞は次に動物（例えばマウス又はラット）の胚盤胞内に注入され、集合キメラを形成する［例えば、Bradley, Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson編 (IRL, Oxford, 1987), pp 113-152参照］。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、期間をおいて「ノックアウト」動物をつくり出す。その胚細胞に相同的に組換えられたＤＮＡを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたＤＮＡを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、例えばＩＬ−２２ポリペプチドが不在であることによるある種の病理的状態及びその病理的状態の発症に対するその防御能力について、特徴付けることができる。
よって、ＩＬ−２２又はその潜在的なアゴニストの生物学的活性をマウスＩＬ−２２ノックアウトマウスにおいて更に研究することができる。

前記の文書による説明は、当業者が本発明を実施することができるようにするには十分であると考えられる。次の実施例は、例示のみを目的として提供され、決して本発明の範囲の限定を意図するものではない。実際、ここで示され説明されたものに加えて、本発明の様々な改変が次の説明から当業者には明らかになるであろうし、添付の特許請求の範囲に入る。

次は本発明の方法及び組成物の実施例である。一般的な説明を上に与えたので様々な他の実施態様を実施することができ、実施例は特許請求の範囲を限定することは意図されていないことが理解される。

実施例１ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のクローニング、発現及び精製
一般的な分子クローニング及びタンパク質精製技術を次の実験において適用することができる。
ｉ．クローニング
全長ヒトＩＬ−２２をヒト結腸ｃＤＮＡライブラリー（Genentech）からクローニングした。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現するコンストラクトを、次のプライマーを使用するオーバーラッピングＰＣＲ技術を使用してこの実験のために作製した：
ＩＬ−２２Ｆｃ融合ＩｇＧ１順方向プライマー：ＴＴＧＡＡＴＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＡＣＴＧＣＡＧＧＣ（配列番号：５２）、
ＩＬ−２２Ｆｃ融合ＩｇＧ１逆方向プライマーＡＧＧＴＣＧＡＣＴＣＡＴＴＴＡＣＣＣＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＡＧＡＧＧ（配列番号：５３），
ＩＬ−２２Ｆｃ融合ＩｇＧ４順方向プライマー：ＴＴＧＡＡＴＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＣＧＣＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＣＡＣＴＧＣＡＧＧＣ（配列番号：５４），
ＩＬ−２２Ｆｃ融合ＩｇＧ４逆方向プライマー：ＡＧＧＴＣＧＡＣＴＴＡＴＴＴＡＣＣＣＡＧＡＧＡＣＡＧＧＧＡＧＡＧＧ（配列番号：５５）。ＰＣＲ産物を発現ベクターｐＲＫ５．ｓｍ（Genentech）中にクローニングした。リーダー配列（又はシグナルペプチド）は細胞中で切断され、成熟ＩＬ−２２Ｆｃ融合体はリーダー配列を含んでいなかった。人工的リンカーを有するクローンを、リンカー配列を含むプライマーでクローニングした。Ｎ２９７Ｇ変異を、次のプライマーを使用して変異誘発ＰＣＲによって更に導入した：ＩｇＧ１Ｎ２９７Ｇ順方向プライマー：ＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＧＡＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧ（配列番号：５６）、ＩｇＧ１Ｎ２９７Ｇ逆方向プライマー：ＣＣＡＣＡＣＧＧＴＡＣＧＴＧＣＴＴＣＣＧＴＡＣＴＧＣＴＣＣＴＣＣＣＧＣ（配列番号：５７）、ＩｇＧ４Ｎ２９７Ｇ順方向プライマー：ＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＧＧＡＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣ（配列番号：５８）、及びＩｇＧ４Ｎ２９７Ｇ逆方向プライマー：ＧＡＣＧＣＴＧＡＣＣＡＣＡＣＧＧＴＡＣＧＴＧＣＴＴＣＣＧＡＡＣＴＧＣＴＣＣＴＣＣＣＧＣＧＧＣＴＴＴＧＴ（配列番号：５９）。全てのＩＬ−２２Ｆｃコンストラクトの配列をＤＮＡ配列決定によって確認した。

ｉｉ．細胞培養
ＣＨＯ細胞を、３７℃及び５％ＣＯ_２のインキュベーター中で０．３×１０^６細胞／ｍｌになるまで週２回培養物を分割することによって懸濁増殖させた。

ｉｉｉ．ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＣＨＯ細胞中へのトランスフェクション及びタンパク質発現
ＣＨＯ細胞を７２０ｍＬの培養培地中に１．２３×１０^６細胞／ｍｌで播種した。トランスフェクション複合体（８０ｍＬの無血清培地中１．６ｍＬＰＥＩ＋８００ｕｇＤＮＡ）を１０分間インキュベートした後、細胞に加えた。培養物を３３℃、５％ＣＯ_２で２４時間インキュベートした。１４日間更に培養した後、培養物の上清を遠心分離によって収集した。一過性ＣＨＯ条件培地(上からの上清)を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ（GE Healthcare）プロテインＡアフィニティカラムを使用して精製した。低ｐＨの溶出液をｐＨ５．０に中和させ、ゲル濾過カラム（GE Healthcare）を通して更に精製した。溶出ピークをプールし、製剤化し、滅菌濾過した。融合タンパク質のＦｃ領域のグリコシル化状態を、以下で検討する質量分析法によって分析した。

ｉｖ．ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現する安定なクローンの樹立
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードするプラスミドを、リポフェクタミン２０００ＣＤ（Invitrogen）を使用してトランスフェクションによってＣＨＯ細胞中に導入した。トランスフェクション後、細胞を遠心分離し、無血清選択培地中に再播種した。ＩＬ−２２Ｆｃの分泌のために単離株を選択した。ＥＬＩＳＡによって同定して、最も高い力価のクローンをついでプールし、生産のためのスケールにした。

ｖ．大腸菌中でのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現
大腸菌発酵原料をホモジナイズし、０．４％ｗ／ｗのＰＥＩ（ｐＨ６．７）に条件化し、遠心分離した。遠心分離物を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ（GE Healthcare）プロテインＡアフィニティカラムを使用して精製した。低ｐＨの溶出液をｐＨ５．０に中和させ、イオン交換クロマトグラフィーによって更に精製した。画分をプールし、製剤化し、滅菌濾過した。

実施例２ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＦｃ領域中で高割合のアフコシル化を示した
この研究では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ部分のグリコシル化状態を調べた。一過性にトランスフェクトされた細胞からの精製ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の試料を３７℃で２時間トリプシン（１：２５トリプシン：ＩＬ−２２Ｆｃ，ｗ／ｗ）で消化させた。試料をトリフルオロ酢酸で酸性化して０．１％の最終濃度になるようにし、水中０．０５％ＴＦＡで平衡にされた加熱されたＣ１８カラム（ＰＬＲＰ−Ｓ，１０００Ａ８ｕｍ，Agilent）上に注入した。消化産物を２０分の時間をかけて線形アセトニトリル勾配（５から６０％）によって分離した。カラムをＡｇｉｌｅｎｔ６５２０ＢＴＯＦ質量分析計のエレクトロスプレーオリフィスに直接接続し、溶出画分の質量を陽イオンモードで決定した。これらの融合コンストラクトのＦｃ部分はこれらの消化条件下でトリプシン中で安定しているので、様々なＩＬ−２２融合体の炭水化物状態の直接の比較を行うことができる。

図２に示されるように、ＩＬ−２２ＩｇＧ１及びＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質の両方が異常に高いレベルのアフコシル化を示した。典型的なモノクローナルＩｇＧ１抗体のグリコシル化Ｆｃの予想質量は、図２においてパネルＡの５３２９６、５３４５８及び５３６２０Ｄａと標識されているものでる。典型的には、Ｆｃの各アームのコア炭水化物種は、それぞれ次の炭水化物組成からなるであろう：４Ｎ−アセチルグルコサミン、３マンノース及び１フコース糖種（パネルＡで５３２９６と標識されたピークのもの）。１又は２のガラクトース糖の添加は、それぞれ５３４５８及び５３６２０Ｄａと標識されたピークを生成するであろう（パネルＡ）。Ｆｃの一方のアーム上のなくなったフコースであった糖部分を含む無視できる量の分子が検出された（「−１フコース」）。

驚くべきことに、ＣＨ２ドメインがグリコシル化されている異なるコンストラクトのヒトＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質は、一方のアーム（「−１フコース」）及びＦｃの両アーム（「−２フコース」）にフコースが欠落した糖部分を含む、高レベルのアフコシル化を示した。図２、パネルＢ−Ｄを参照のこと。これらのアフコシル化分子は観察された全種を約３０％と多く含んでいた。アフコシル化は、ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体の望ましくないエフェクター活性を増大させることができる。
ＩｇＧ４はＩｇＧ１と比較してより少ないエフェクター機能を有することが知られている。予想外に、質量分析の結果は、ヒトＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質のトリプシン消化Ｆｃ領域に「−１フコース」及び「−２フコース」グリコシル化種をまた示した。これらのアフコシル化分子は観察された全種を５０％を超えて含んでいた。図２、パネルＥ。アフコシル化抗体は、これらのＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質では望ましくない性質である、亢進されたＡＤＣＣ又はＣＤＣ細胞傷害性活性を有している。

次に、一方はＩｇＧ１Ｆｃを、他方はＩｇＧ４Ｆｃを含む２つの更なるＩＬ−２２Ｆｃ分子で、通常はグリコシル化されるであろうＦｃ中の残基（Ｎ２９７）がグリシン（Ｎ２９７Ｇ）に変異され、これにより正常なコア糖の付着を防止する分子を構築した。これらは、そのＦｃ部分上に糖を欠くことが示され、双方がそのアミノ酸配列に基づくその予想Ｆｃ分子量を有していた（図２、パネルＦ及びＧ）。
要約すると、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４Ｆｃ融合体何れかの、ヒトＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域は、高レベルのアフコシル化を示しており、これは、ＩＬ−２２治療剤としての使用には望ましくない性質である、増加したＡＤＣＣ又はＣＤＣ活性を生じうる。よって、非グリコシル化変異体を更なる研究において試験した。

実施例３ＩＬ−２２ＩｇＧ１及びＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質のインビトロ活性アッセイ
ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２受容体複合体に結合し、ＪＡＫ−Ｓｔａｔシグナル伝達経路を活性化する。ＳＴＡＴ３活性化は、ＩＬ−２２媒介シグナル伝達経路における主要イベントである。この実験では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のインビトロ活性を、ルシフェラーゼレポーターアッセイを使用して測定した。ＨＥＫ２９３細胞を操作して、ヒトＩＬ−２２受容体複合体ＩＬ２２Ｒ１及びＩＬ１０Ｒ２を過剰発現させた。１日目に、１×１０^５の２９３細胞を２４ウェルプレートにおいて０．４ｍｌのダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）中に播種した。２日目に、細胞を０．１ｍｌの低血清培地（少なくとも５０％減少した低減血清のＧｉｂｃｏＰｏｔｉ−ＭＥＭ）中でリポフェクタミン２０００（Invitrogen）を使用して、ＳＴＡＴ３駆動ルシフェラーゼレポーター及びウミシイタケルシフェラーゼコントロールでトランスフェクトした。ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼレポーターコンストラクトは、ｓｉｓ誘導性エレメント（ＳＩＥ）及びホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子のタンデムリピートを含むＳＴＡＴ３応答性ルシフェラーゼレポーターコンストラクトを含む。３日目に、一過性又は安定ＣＨＯクローンの何れかによって産生されたＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、０．５ｍｌ培地中で異なる濃度に滴定し、トランスフェクト細胞の上に加えた。４日目に、培地を除去し、細胞を１００ｕｌの受動溶解バッファー（Ｄｕａｌ−ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅＲｅｐｏｒｔｅｒ１０００ＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍによって提供）で溶解させた。細胞溶解物の２０マイクロリットルを９６ウェルプレートに移し、ルミノメーター（Promega）上でＤｕａｌ−ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅＲｅｐｏｒｔｅｒ１０００ＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍを用いて分析した。ＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア（La Jolla, CA）で用量依存的活性に基づいて算出した。異なるＩＬ−２２Ｆｃ融合コンストラクトのＥＣ５０値を以下の表２に示す。

多数のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、異なった長さ及び配列のリンカーを用いて構築し、各デザインの活性、安定性及び収率を調べた。天然ＩｇＧ配列を持つリンカーは免疫原性の潜在的な危険性を最小限にするには好ましい；しかし、良好なインビトロ活性を示した外因性配列を持つリンカーを考慮し、本発明に包含した。
ＤＫＴＨＴリンカー（配列番号：３２）を含むＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質を、ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼアッセイにおいて試験した。表２を参照。融合タンパク質のＥＣ５０を改善するために、リンカーの長さを、天然ＩｇＧ１配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３３）を含む５から１０個のアミノ酸まで増加させた。しかし、得られたＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は減少したインビトロ活性を示した。表２を参照。驚くべきことに、一つのアミノ酸ＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３４）によるリンカー長さの増加であってもＩＬ−２２融合タンパク質の活性を改善した。リンカーの長さを更に増やすと、更なる活性の改善が生じた。表２を参照。

別の実験において、ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ中のＣｙｓをＳｅｒに変更してジスルフィド結合形成の可能性を除去した。表２に示されるように、リンカーＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：４０）を用いたＩＬ−２２Ｆｃ融合体は、Ｃｙｓ残基を有する親リンカー配列と比較して改善された活性を示した。（ＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン中へ）上流配列を導入するより長いリンカー配列は活性を更に改善した。野生型対応物と比較した場合、Ｎ２９７Ｇ変異を有するコンストラクトは同様のＥＣ５０値を示した。ＩＬ−２２ＩｇＧ１（Ｎ２９７Ｇ）Ｆｃ融合タンパク質（配列番号：１２）及びＩＬ−２２ＩｇＧ４（Ｎ２９７Ｇ）Ｆｃ融合タンパク質（配列番号：８）を更なる研究のために選択した。

安定なクローンから発現されたヒトＩＬ−２２ＩｇＧ１（Ｎ２９７Ｇ）Ｆｃ融合タンパク質（配列番号：１２）又はＩＬ−２２ＩｇＧ４（Ｎ２９７Ｇ）Ｆｃ融合タンパク質（配列番号：８）のインビトロ活性を同じアッセイにおいて試験した。図４のデータは代表的な結果を示す。
ＩＬ−２２ＩｇＧ１及びＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質の両方が用量依存的にＳＴＡＴ３活性を誘導した。両方のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は同様の効力を示した。一過性にトランスフェクトされた細胞から発現されたＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は同様の結果を示した（データは示さず）。コントロールとして、ＣＨＯ細胞において産生された天然ＩＬ−２２タンパク質を同じアッセイにおいて試験したが、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質よりも２から３倍高い効力を示した。

要約すると、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の両方が、ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼアッセイにより実証されるインビトロ活性を示した。更に、異なる長さ及び配列のリンカーを有するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ−２２Ｒ媒介性ルシフェラーゼ活性を活性化することが示された。

実施例４ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はマウスにおけるＤＳＳ誘発性大腸炎の症状を低減した
デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性大腸炎は、一般的に受け入れられたマウス大腸炎モデルである。ＤＳＳ含有水の経口投与は結腸上皮細胞を速やかに損傷させ、実質的な体重減少と、染色免疫組織化学（ＩＨＣ）又は病理学者による組織学的臨床スコアによって特徴付けられる、結腸上皮構造破壊を引き起こす。このコンセプト実証研究において、ＤＳＳ誘発性大腸炎に対するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の効果を試験した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、０日目から始めて５日間連続で３．５％ＤＳＳを含む飲料水を用いて大腸炎を誘発させた。ヒトＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の代用であるマウスＩＬ−２２ＩｇＧ２ａＦｃ（配列番号：６０）を−１日、１日、４日及び６日目に５ｍｇ／Ｋｇで腹腔内経路を介して投与した。動物の体重を毎日測定した。８日目に、全ての動物を屠殺し、結腸組織を、ＩＨＣ染色及びマニュアル組織学的スコアの両方によって研究した。
図５に示されるように、ＤＳＳ誘発性大腸炎には、劇的な体重減少（図５Ａ）、結腸上皮損傷及び結腸炎症（図５Ｂ）及び高い組織学的スコア（図５Ｃ）が伴う。ＩＬ−２２Ｆｃ処置は、体重減少を有意に防止し、上皮完全性を回復させ、炎症を減少させ、組織学的スコアを低減させた。図５を参照。ＩＬ−２２Ｆｃの効果は、本研究において有意な体重減少を生じさせた標準治療ステロイドであるデキサメタゾンの効果を超えた。

実施例５ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質薬物動態研究
カニクイザルにおけるパイロット安全性及びＰＫＰＤ研究は施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。本研究は、ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＣＲＬ）ＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌＳｅｒｖｉｃｅｓ（Reno, NV）で行われた。ＣＲＬストックからの全部で１５匹の雄のカニクイザル（４−５ｋｇ）をランダムに５群（ｎ＝３／群）に割り当てた。群１の動物に、１日目と８日目にコントロールビヒクルの静脈内用量を投与した。群２及び３の動物に、１日目と８日目に、それぞれ０．１５及び１．５ｍｇ／ｋｇでＩＬ２２−ＦｃＩｇＧ１の単回静脈内ボーラス用量を投与した。群４及び５の動物には、１日目と８日目に、それぞれ０．１５及び１．５ｍｇ／ｋｇでＩＬ２２−ＦｃＩｇＧ４の単回静脈内ボーラス用量を投与した。血清試料を４３日目までにＰＫ及びＰＤ分析のため様々な時点で集め、ＩＬ２２−Ｆｃの濃度をＥＬＩＳＡによって評価した。
カニクイザル血清中のヒトＩＬ−２２−Ｆｃの分析には、マウス抗ヒトＩＬ−２２ｍＡｂ（Genentech）をＥＬＩＳＡアッセイにおいて捕捉抗体として使用した。組換えＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を、標準曲線を展開するために使用した。プレート結合ＩＬ−２２−Ｆｃを、アッセイバッファー中で５００ｎｇ／ｍＬに希釈したＨＲＰ結合抗ヒトＦｃγパンマウスｍＡｂ（Genentech）を用いた１時間のインキュベーション中に検出した。最終の洗浄後、テトラメチルベンジジンペルオキシダーゼ基質（Moss社, Pasadena, MD）を添加し、色を１５分間発色させ、反応を１Ｍのリン酸で停止させた。プレートを、マイクロプレートリーダーを使用して６２０ｎｍの参照と共に４５０ｎｍで読み取った。ＩＬ−２２Ｆｃ融合体の濃度を、ＩＬ−２２Ｆｃ融合体標準曲線の４パラメータフィットから算出した。

ＰＫデータの計算に対しては、用量投与の開始を示すため、研究１日目をＰＫ０日目に変換した。生存中の投与後の全ての時点を研究日マイナス１として計算する。各動物の血清濃度データを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎＲ，バージョン５．２．１（Pharsight; Mountain View, CA）を用いた２コンパートメント分析を使用して解析した。
ＩＬ２２−Ｆｃの血漿中濃度は、静脈内投与（０．１５ｍｇ／ｋｇ及び１．５ｍｇ／ｋｇ）後に双指数関数的減少を示し、短い分布相と長い最終排出相があった。図６を参照。中央コンパートメントからのＩＬ−２２Ｆｃの線形排出を持つ２コンパートメントモデルは、双方の用量に対して薬物動態プロファイルをよく記述しており、これらの用量範囲での無視できる標的媒介処分を示唆している。

２コンパートメント解析により推定された最大血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）及び血清・濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）はおおよそ線形で用量に比例した。表３を参照。用量比例動態は試験された用量でのＩＬ−２２Ｒ飽和を示唆した。図６に示されるように、ＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合体は、ＩｇＧ１Ｆｃ融合体と比較して、２倍遅いＣＬと、２倍を超える高い曝露を予想外に示した。
特定のメカニズムに限定されるものではないが、ＩｇＧ１Ｆｃ融合体の速いクリアランス（ＣＬ）は、ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合体の２倍より速いＣＬが主として大きな体積の分布によって駆動されるように思われたので、ＩｇＧ１融合体コンストラクトの少ない安定性のためでありうる。４−５日のβ半減期は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４融合体の間で同様であった。

実施例６カニクイザルにおけるＩＬ−２２Fcのインビボ活性の評価
カニクイザル（Macaca fascicularis）に０．１５ｍｇ／ｋｇ又は１．５ｍｇ／ｋｇの用量で、示されたようなアイソタイプＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＩＬ−２２Ｆｃ融合体を静脈内投与した。ＩＬ−２２受容体へのＩＬ−２２の結合が、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ＲｅｇＩＩＩ／膵炎関連タンパク質（ＰａｎｃｒｅＰＡＰとも呼ばれるＰＡＰ）、及びリポ多糖結合タンパク質（ＬＰＳ−ＢＰ）を含む幾つかの遺伝子の発現を惹起する。この研究では、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のインビボ活性を、ＳＡＡ、ＰａｎｃｒｅＰＡＰ、及びＬＰＳ−ＢＰの発現を測定することによって分析した。グラフに示されるように、血清試料を、投与前後の経時的過程にわたって得た。サルＳＡＡの循環レベルを、ＬｉｆｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（West Chester, PA）から入手可能な市販の酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キット（カタログ＃３４００−２）を使用して血清中で定量した。ＲｅｇＩＩＩ／ＰＡＰの循環レベルをＤｙｎａｂｉｏ（Marseille, France）によって製造された市販のＥＬＩＳＡキット（カタログＰａｎｃｒｅＰＡＰ）を使用して血清中で定量した。

血清試料中のリポタンパク質結合タンパク質（ＬＢＰ）のレベルを、認定されたＥＬＩＳＡを使用して決定した。ビオチン化リポタンパク質（Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY）をストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート（Thermo; Rockland, IL）上にコートした。組換えヒトＬＢＰ（R&D Systems社, Minneapolis, MN）をアッセイにおいて標準として使用した。結合したＬＢＰ分析物を抗ＬＢＰマウスモノクローナル抗体（Thermo, Rockland, IL）で検出した。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合Ｆ（ａｂ’）_２断片ヤギ抗マウスＩｇＧ，Ｆｃ（Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA）を検出のために使用した。比色シグナルを、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD）の添加後に可視化した。反応を1Mリン酸の添加により停止し、吸光度をプレートリーダー（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）で参照として６５０ｎｍを使用して４５０ｎｍで測定した。全てのＥＬＩＳＡ試料は、製造業者の仕様に従って扱い、単一希釈で二通り、あるいは４連続希釈で一通り調製し、濃度を標準曲線から補間した。各試料の平均値を報告した。

図７に示されるように、ＳＡＡ、ＬＰＳ−ＢＰ、及びＲｅｇＩＩＩ／ＰＡＰ血清タンパク質レベルがインビボでＩＬ−２２Ｆｃによって誘導された。用量依存性応答が、非ヒト霊長類においてインビボで観察され、ＩＬ−２２Ｆｃ結合を示し、ＩＬ−２２Ｒによる飽和を示唆した。大部分の例では、血清タンパク質レベルの増加が第二の用量の２４時間後に観察されず、血清ＳＡＡ、ＬＰＳ−ＢＰ、及びＲｅｇＩＩＩ／ＰＡＰタンパク質が最大レベルに達したことを示唆している。３つ全てのタンパク質の血清レベルは、３５日の回復期間にかけてゆっくり減少し、殆どの動物でベースラインに戻った。例外はＩｇＧ４高用量群のＲｅｇＩＩＩ／ＰＡＰレベルで、これは４２日の期間にわたって上昇したままのようであった。これは、ＩＬ−２２ＩｇＧ１Ｆｃ融合タンパク質と比較しての、ＩＬ−２２ＩｇＧ４Ｆｃ融合タンパク質に対する改善されたＰＫとＡＵＣによる増加した暴露を反映しているかもしれない。

実施例７−アテローム生成易発性マウス（Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−）のＩＬ−２２処置
最近の研究では、病原性微生物に対する宿主防御におけるＩＬ−２２の役割が明らかになった。粘膜組織恒常性と免疫に対するその有益な効果は、ＩＬ−２２処置が、アテローム生成的脂質異常症を含む、内毒血症及びその病理的結果、全身性炎症を軽減し、最終的にはアテローム性動脈硬化疾患や糖尿病などの関連疾患の進行を遅らせると我々に推測させた。
この仮説を試験するために、アテローム生成易発性マウス（Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−）をＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクトで処置した。これらのマウスは、ＬＤＬ受容体及び排他的にアポＢ１００合成を欠く。このモデルは、それがヒトの家族性高コレステロール血症に関連した病態生理学の多くを再現する点でユニークである。具体的には、固形食餌で、これらのマウスは上昇したＬＤＬコレステロール、ヒトに類似したコレステロールの分布を伴う脂質プロファイル、及び進行性プラーク形成を発する。更に、Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ−／−マウスは、インスリン抵抗性、全身性炎症、進行性プラーク負荷、及び内皮細胞機能障害を含むその心血管疾患に寄与する測定可能な危険因子を有している。ここで我々は、ＩＬ−２２−Ｆｃ融合タンパク質での３ヶ月の処置がこれらの動物の心臓血管の健康を劇的に改善し、アテローム性動脈硬化の進行を減少させることができることを証明する。

材料及び方法
マウスＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクト。ここで使用されるＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクト及びポリペプチドは典型的には図３２Ａに示されるマウスＩＬ−２２−マウス−Ｆｃ融合タンパク質（（配列番号：７３）（及び図３２Ｂに示されるようなそれをコードするＤＮＡ配列、配列番号：７２）であった。タンパク質を、プラスミドＤＮＡの一過性トランスフェクションによってＣＨＯ細胞中で産生させた。融合タンパク質を、細胞上清をプロテインＡカラムと続いてイオン交換クロマトグラフィーに流して凝集物を除去することによって精製した。血清半減期を、Ｃ５７Ｂ６マウスに１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２２−Ｆｃの単回用量を注入した後、特定された時間間隔でマウスから血清を得ることにより推定した。ＩＬ−２２−Ｆｃの血清レベルは、抗ＩＬ−２２ｍＡｂを使用するサンドイッチＥＬＩＳＡによって決定した。Ｌｒｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−二重ＫＯマウスを使用するインビボ研究では、マウスＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクトを利用した。マウス配列が提示され実施例において使用されているが、様々な実施態様では、ヒト配列にマウス配列を置き換えることができることが予想される。

マウスの研究。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−二重ＫＯマウスはジェネンテックの飼育施設で飼育し、ＷＴＣ５７ＢＬ／６マウスはジャクソン研究所から購入した。マウスは、病原体除去動物施設において２１℃で、飼料：標準的齧歯類飼料（Labdiet 5010, １２．７％の脂肪からのカロリー）又は高脂肪、高炭水化物食餌（Harlan Teklad TD.03584, ５８．４％の脂肪からのカロリー）及び水に自由にアクセスできる状態で、標準的な１２時間明／１２時間暗のサイクル下に維持した。Ｃ５７ＢＬＫＳ／Ｊバックグラウンドのｄｂ／ｄｂマウスは雌であり、研究に使用された他のマウスは全て雄であった。マウスＩＬ−２２−Ｆｃ又はコントロールＩｇＧ抗体を６ヶ月齢で始めて３ヶ月間の間、５０μｇ／週で腹腔内（ｉｐ）経路で投与した（合計１２週の用量）。

アテローム性動脈硬化負荷の分析。高分解能ｘ線マイクロコンピュータ断層撮影法を使用してアテローム性動脈硬化病巣の体積及び動脈硬化プラークの組成を定量した。動物を二酸化炭素の吸入で安楽死させた後、１０ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩水とついで１０ミリリットルの１０パーセント中性緩衝ホルマリンを用いて心臓の左心室を経由して灌流した。大動脈を切開し、最小２４時間の間、１０パーセントの中性緩衝ホルマリンに浸漬し、最小１２時間の間、１０パーセントの中性緩衝ホルマリン中の２０％のヨード系ｘ線造影剤Ｉｓｏｖｕｅ３７０（Bracco Diagnostics Inc., Princeton, NJ）の溶液に移した。ドライブロットした後、大動脈を灌流し、低ｘ線強度のバックグラウンド画像形成媒体である大豆油（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）に浸漬した。マイクロコンピュータ断層撮影画像を、４５ｋＶの画像取得エネルギー、１６０μＡの電流、１２マイクロメートルの画像解像度と三平均と共に３００ミリ秒の積分時間を用いてμＣＴ４０（Sanco Medical, Basserdorf, Switzerland）を使用して取得した。得られた画像を、目的の体積と目的の組成を決定するために半自動形態フィルタリング及びユーザ定義領域を用いることによってＡｎａｌｙｚｅ（AnalyzeDirect Inc., Lenexa, KS）で分析した。

血管機能の評価。血流依存性血管拡張及びニトログリセリン依存性血管拡張に対する大腿動脈の超音波検査によって決定した。動物を２％のイソフルランで麻酔し、２０分の超音波検査のために３７℃に保った。Ｎａｉｒを使用して後肢の腹側表面から毛を除去し、５５メガヘルツのイメージングプローブを備えたＶｅｖｏ７７０（VisualSonics, Toronto, Canada）を使用して超音波イメージングを可能にした。血流依存性血管拡張のために、大腿動脈のベースライン画像を集めた後、ゴムバンドを一時的な被膜として使用して、４分間、大腿動脈の血流を閉塞した。その後、大腿動脈の再流のためにゴムバンドを外して、画像を４分間の間、毎分取得し、製造者が供給したソフトウェアツールを使用して大腿動脈最大径を解析した。ニトログリセリン依存性血管拡張のために、大腿動脈のベースライン画像を集めた後、２０マイクログラムのニトログリセリン（Baxter, Deerfield, IL）の腹腔内注射を行い、画像を４分間の間、毎分取得し、製造者が供給したソフトウェアツールを使用して大腿動脈最大径を解析した。

総コレステロール、トリグリセリド及びリポタンパク質の定量。新鮮な血清サンプルを使用し、ＣｈｏｌｅｓｔｅｃｈＬＤＸ分析システム（Inverness Medical, Princeton, NJ）を使用して製造者の指示に従って、総コレステロール、トリグリセリド、及びリポタンパク質分布を決定した。
血清リポ多糖の測定。凍結した血清サンプルを解凍し、エンドトキシンフリーの水で１００倍に希釈し、湯浴中で１０分間９０℃でインキュベートした。ついで、試料をＥｎｄｏｓａｆｅ−ＰＴＳシステム（Charles River Laboratories, Wilmington MA）で製造者の指示に従って流した。
ＧＴＴ：グルコース負荷試験。グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を、一晩絶食（１４時間）後の１ｇ／ｋｇの腹腔内グルコース注入を伴う投与期間の終りに実施した。グルコースレベルは、ワンタッチウルトラグルコメーターを用いて測定した。食物摂取量は、研究中、マウスを４日の順化期間、個別に収容した後、１週間の測定によって計算された。
血清サイトカインレベルの測定。血清サイトカインレベルを、自動化方法によりＬｕｍｉｎｅｘ２３Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘパネル（BioRad）を使用して測定した。結果の一部は、個々のＥＬＩＳＡキット（R＆D）により独立に確認した。総コレステロール及び遊離脂肪酸（ＦＦＡ）（Roche）は、酵素反応を使用して決定した。

結果：
Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスは、正確に、アテローム発生脂質異常をモデル化し、炎症性負荷に感受性であった。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスモデルは、ヒトにおけるアテローム性動脈硬化症に特徴的なリポタンパク質レベル及び広範なアテローム性動脈硬化病巣を示す（Powell-Braxton等 (1998). Nat Med 4(8): 934-8）。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスの大動脈弓のマイクロＣＴ分析は、上行大動脈、大動脈弓、下行大動脈及び腕頭動脈の一部を含んでいた調製試料に対して自動化画像処理技術を使用して決定して、アテローム性動脈硬化疾患の徴候を明らかにした。この技術はまた脂質コア、破裂プラーク及び石灰化の領域を含んでいたアテローム性動脈硬化症負荷の重篤度及び進行における領域的な変動を反映している高度の不均一性を証明した（図８）。ＣＴシグナルの不均一性は、ヒトの疾患の複雑なプラークの病理と一致して病変の根底にある病態を反映している。このモデルを特徴付け、食餌誘発性アテローム発生に対するその感受性を実証するために、マウスのコホートを２ヶ月間、高脂肪食餌を用いるか、又は飲料水（８％ｗ／ｖ）にフルクトースを追加して処置した。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスはこれらの食餌変化に対して感受性を示し、標準的な固形飼料でのマウスと比較して、血清ＬＤＬを僅かだけ増加させたが総アテローム性動脈硬化症の負荷では有意な増加を示した（図９）。これは、アテローム性動脈硬化症負荷の増加が、ＬＤＬ増加よりむしろ炎症による可能性があることを証明している。更に、ＬＰＳ負荷（０．０２５ｍｇ／Ｋｇ）での急性低度の炎症刺激は、ｗｔコントロールと比較してＬｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−において炎症誘発性マーカーの著しい上昇をもたらした（図１０）。Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスを、また、８週間、慢性ＬＰＳ投与（７５０ｎｇ、腹腔内）に曝露し、血清脂質プロファイル及びプラーク負荷を評価した。図１１に示されるように、慢性的なエンドトキシン曝露は、脂質異常症及びより大きなプラーク不安定性をもたらす。

ＩＬ−２２−Ｆｃでの処置で、アテローム生成的脂質異常症及びメタボリック症候群の症状の改善がＬｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−マウスで見られた。これらのマウスは、固形飼料給餌で、インスリン抵抗性を含む、メタボリック症候群の特性を発症する。ＩＬ−２２−Ｆｃ処置で、空腹時血糖値が、コントロールと比較して減少し、グルコースクリアランスがコントロール群と比較し処置群において改善した（図１２）。よって、グルコース恒常性が、耐糖能（ＧＴＴ）の正常化と空腹時血糖値の改善を伴って改善された（図１２）。給餌ＴＧレベル（図１３Ｂ）と同様に、絶食及び給餌高コレステロール血症の双方が改善され（図１３Ａ）、脂質プロファイルが改善された（図１４）。血漿中ＬＰＳレベルはＩＬ−２２−Ｆｃ処置後に減少した（図１５）。脂質異常症及びインスリン感作の低下に加えて、血管反応性によって測定される内皮機能の改善が見られた（図１６）。脂質異常症における改善と一致して、プラーク体積のＣＴ分析は、大動脈弓及び腕頭動脈及び大動脈弁における総アテローム性動脈硬化負荷に減少を示した（図１７Ａ−Ｃ）。脂質プロファイル及びインスリン抵抗性の改善は、７日間にわたって測定された食物摂取が、３ヶ月の治療中に生じた体重のささやかであるが統計的に有意な減少にもかかわらず、増加したため、カロリー摂取量の減少によるものではなかった（図１８）。コントロール群の体重は、３ヶ月の治療プロトコル中で変化せず、ＩＬ−２２−Ｆｃ処置群は、研究の開始と終了の間で体重の有意な減少を示した（図１８Ａ）。治療研究の過程において７日間にわたって測定した平均の毎日の食物摂取量は、コントロール群と比較して、ＩＬ−２２−Ｆｃ処置群で上昇した（図１８Ｂ）。

実施例８−末梢動脈疾患モデル
アテローム性動脈硬化症の進行を低減するためのＩＬ−２２−ＦｃによるＩＬ−２２調節経路の刺激は、糖尿病及び慢性腎疾患を含む心血管疾患及び関連疾患を有する対象のための潜在的に新規な治療形態である。心血管疾患は、典型的には、対象の脈管構造の一領域に限定されるものではないので、冠動脈疾患を有するかそのリスクがあると診断された対象はまた脳血管疾患、大動脈−腸骨疾患、及び末梢動脈疾患などのＣＶＤの他の形態を発症するか又は有しているリスクがあると考えられる。上記と同じ方策を使用して、マウス末梢動脈疾患モデルを使用する標的としてＩＬ−２２の有効性を確認することができる。ＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクトを調製し、上記のようにして評価する。全ての必要なコントロールも使用される。ＩＬ−２２アゴニスト／アンタゴニストが評価され、結果は、創薬と開発のための標的としてＩＬ−２２経路の有効性を裏付ける。

虚血性損傷をつくり出すために大腿動脈結紮に基づく末梢動脈疾患（ＰＡＤ）モデルが使用される。ＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクトの有効性は、過去に記載された手順と同様にして評価される（Couffinhal等, Am. J. Pathol. 152:1667 (1998)；Takeshita等, Lab. Invst. 75:487 (1996)；Isner等, Human Gene Therapy 7:959(1996)）。そのような末梢動脈疾患を調節するＩＬ−２２−Ｆｃの能力を試験するために、次の実験プロトコルが使用される：
ａ）（上述の方法におけるように）齧歯類を使用し、大腿動脈の片側を結紮して後肢の筋肉に虚血性損傷をつくり出す（他の非損傷の後肢はコントロールとして機能する）。ｂ）ＩＬ−２２−Ｆｃポリペプチド（又はその断片）を、ある範囲の投与量で２−３週間の間、少なくとも週３×動物に静脈内及び／又は筋肉内（損傷肢に）送達される；及びｃ）虚血性筋肉組織を、バイオマーカー分析及び組織検査のためにライゲーションの１、２、及び３週後に収集する。一般に、（上記のような）評価のためのパラメータは、虚血を取り囲む組織の生存性及び血管新生を決定することを含むが、より具体的な評価パラメータは、例えば、皮膚の血流、皮膚温度、及び第ＶＩＩＩ因子免疫組織化学、及び／又は内皮細胞アルカリホスファターゼ反応の測定を含みうる。虚血中のポリペプチドの発現は、任意の従来から知られているインサイツハイブリダイゼーション技術を使用して研究される。生検がまたコントロールとして分析される対側後肢の正常な筋肉の反対側について実施される。

あるいは、他のマウスモデルが使用される（Pownall等 US 2011/0118173 A1）。アテローム形成抑制を試験するために使用されるアテローム性動脈硬化症の幾つかのマウスモデルがある。これらは、アポＡＩＫＯ、アポＥＫＯ、シスタチオニンβ合成酵素及びアポリポタンパク質Ｅ及びアポＡ−Ｉ／ＳＲ−ＢＩ二重ＫＯを含む。アテローム性動脈硬化症のこれらのマウスモデルは、注射、経口投与、又はエクスビボ処理によってＩＬ−２２−Ｆｃで処置される。ＩＬ−２２−Ｆｃでの処置後の血中コレステロール値の測定は、総血漿コレステロールの即時減少及び増加量のネオＨＤＬ及びＨＤＬの成熟形態のその後の出現を示し、これは適切な期間にわたって末梢組織から抽出されたコレステロールを含む。

実施例９−糖尿病マウスモデルにおける組換えＩＬ−２２Ｆｃの効果
メタボリック症候群におけるＩＬ−２２−Ｆｃの効果を見るための我々の最初の研究では、我々は、ＩＬ−２２ＲＫＯマウスが、食餌誘発性肥満及びインスリン抵抗性に対してより感受性であったことを指摘した。その後の実験では、我々は組換えＩＬ−２２−Ｆｃでの処置後に体脂肪の減少を観察した。これらのデータに鑑みると、我々は糖尿病マウスモデルにおける組換えＩＬ−２２−Ｆｃの役割を試験する選択をした。給餌及び空腹時グルコース、体重及びグルコース及びインスリン耐性のような有効性エンドポイントをこの研究で評価した。
マウス（１０匹／群）を３週間の間、２用量／週を与えて、組換えＩＬ−２２−Ｆｃ又はアイソタイプＩｇＧコントロールとしての抗ブタクサ抗体の何れかで処置した（図１９）：
群１：ｄｂ／ｄｂマウス（ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７（ｍ）＋／＋Ｌｅｐｒ（ｄｂ）／ＪＦＡＴ）：抗ブタクサ抗体（５０μｇ）
群２：ｄｂ／ｄｂマウス：組換えＩＬ−２２−Ｆｃ（５０μｇ）
群３：食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）マウス：抗ブタクサ抗体（５０μｇ）
群４：食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）マウス：組換えＩＬ−２２−Ｆｃ（５０μｇ）
１２週齢の雌のｄｂ／ｄｂをジャクソン研究所から購入し、実験に使用した。研究前にマウスを到着後７−１０日間、順応させ（毎日ハンドリング）、実験の開始前に１匹で収容した。５日間から１日にかけて血液を毎日ベースライングルコース測定のために尾部の切り傷から収集した（３−５μｌ）。０日目にタンパク質をＰＢＳ中で腹腔内投与（１５０μｌ）し、３週間の間、週２回の用量を続けた。血液（３−５ｕｌ）を２日、４日、８日、１０日、１４日、１８日及び２１日目にグルコース測定のために尾部の切り傷から再び集めた。ｐＫを測定するために、３０ｕｌの血液を、２日、７日、１３日及び２０日目に麻酔下で眼窩採血を介して収集した。

組換えＩＬ−２２−Ｆｃ又はアイソタイプＩｇＧコントロール抗体を、３週間の間、腹腔内経路で週２回投与した。体重及び食後グルコースを２３日目の研究の終わりまで２日毎に測定し、グルコース測定は尾部の切り傷から行い、グルコメーターを使用して測定した（図２０Ａ−Ｂ）。食後及び空腹時血糖値にアクセスするために、１０日目に食後グルコース測定を午前中に行い、両群のマウスを４時間絶食させ、グルコース測定を、グルコメーターを使用して行った（図２０Ｃ）。ＩＬ−２２−Ｆｃ暴露はｄｂ／ｄｂマウスにおいて顕著なグルコース低下効果を生じた。
グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を、週２回５０μｇ／用量のＩＬ−２２−Ｆｃ又はＩｇＧコントロールを用いた２週間の処置後に実施した。マウスを一晩（１４時間）絶食させた。空腹時血糖値を午前中に測定し、ベースラインとした。体重を測定し、グルコースの測定のために尾部の切り傷から血液（３−５μｌ）を採取した。１．５ｍｇ／Ｋｇ体重でのグルコース溶液を腹腔内投与し、グルコース測定を３０分毎に行った。血糖値を、３０、１２０、１８０及び２２０分についてグラフで表した。もう一回のＧＴＴを２０日目の一晩の絶食に続いて２１日目に実施した。マウスは毎日体重を測定した。全ての群を２３日目に安楽死させ、組織を組織学検査のために収集した。ＩＬ−２２−Ｆｃ処置は、グルコース耐性とインスリン感受性において有意な改善を示した（図２１）。

インスリン負荷試験（ＩＴＴ）を、週２回５０μｇ／用量のＩＬ−２２−Ｆｃ又はＩｇＧコントロールでマウスを処置した２０日目の後に実施した。マウスを４時間絶食させ、ベースライン血糖値を取った。１ｍＵ／ｋｇ体重を腹腔内投与し、血糖値を３０分毎に尾部の切り傷からモニターした。グルコース減少％を計算するために、４時間の絶食後のベースライングルコースレベルを１００％に正規化する。ＩＬ−２２−Ｆｃ処置は、インスリン負荷試験を通して測定されたインスリン感受性を有意に改善することが示された（図２２Ａ−Ｂ）。
ＩＬ−２２Ｒは、β膵島細胞におけるその発現状態は依然として不明であるが、膵臓、特に腺房細胞において高度に発現される。ＩＬ−２２Ｆｃ又はコントロールタンパク質処置ｄｂ／ｄｂマウスの膵臓におけるインスリンシグナルを調べた。糖尿病マウスの組織学的評価をまた、膵島細胞でのインスリンの発現及びＩＬ−２２−Ｆｃ処置動物における門脈周囲脂肪肝のレベルを評価するために実施した。インスリン及びグルカゴンのための免疫組織化学検査を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５５５コンジュゲートヤギ抗ウサギ二次抗体と共にウサギ抗グルカゴン（Cell Signaling Technologies #2760）を、又はＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲートヤギ抗モルモット二次抗体と共にモルモット抗インスリン（ＤＡＫＯＡ０５６４）を使用して、以前に報告されたようにして（Wu等 2011, Science translational medicine 3, 113ra126, doi:10.1126/scitranslmed.3002669）、ホルマリン固定パラフィン包埋膵臓組織で実施した。膵島面積当たりのインスリン面積パーセントを、膵島面積マイナス核面積によってインスリン陽性面積を割ることによって計算した。

ＩＬ−２２−Ｆｃはｄｂ／ｄｂマウスの膵島におけるインスリン発現を増加させるようであり（図２３Ａ）、定量分析は、ＩＬ−２２−Ｆｃ処置動物におけるインスリンシグナル強度（図２３Ｂ及び図２４）とインスリン陽性面積（図２５）の双方の有意な増加を明らかにしたが、ＩＬ−２２Ｆｃはグルカゴンシグナル強度を増加させなかった（図２３Ｃ）。インスリン陽性面積は、ハーセプチンコントロールでの処置と比較して、ＩＬ−２２−Ｆｃ処置で２．１６倍の増加を示した（９５％信頼区間１．２５から３．７２）。膵島の数及び面積は、ＩＬ−２２Ｆｃ処置によって影響を受けなかった。しかし、ＩＬ−２２Ｆｃ処置膵臓からの膵島当たりのβ細胞面積とインスリン染色の強度は有意に上昇した（図２３及び５２）。
肥満マウスの膵臓β細胞は脱顆粒及び変性の徴候を示した（データは示さず）。未処置の肥満マウスと比較して、統計的に有意に高いインスリン染色が、ＩＬ２２で処置した肥満マウスのβ細胞において観察された（図２３Ａ、Ｂ）。該増加は、おそらくＩＬ２２処置群での増加したインスリン貯蔵によるものであった。ＩＬ２２処置肥満マウスで見られる膵臓インスリンのより高いレベルにもかかわらず、これらのマウスにおける血清インスリンレベルは、食後又は空腹状態の何れかで、ＩＬ２２処置なしの肥満マウスと比較して実際に減少した（図２３Ｄ、Ｅ）。しかし、ＩＬ２２処置肥満マウスは、未処置肥満マウスと比較して、固形飼料食餌で野生型マウスにより類似したパターンでインスリンを放出することによってグルコースに応答した（図２３Ｆ）。従って、ＩＬ２２は、顆粒化を増加させ、肥満マウスにおけるインスリン放出の制御機構を改善することにより潜在的に肥満マウスにおけるグルコース恒常性を改善した。

次に、インスリン恒常性に対するＩＬ−２２Ｆｃの効果を調べた。ＨＦＤ給餌マウスを８週間の間、週２回、ＩＬ−２２Ｆｃで処置した。結果はそれを示している（図２３Ｄ及びＥ）。図２３Ｆに示されるデータは、グルコース注射後０又は３０分のマウス中のインスリンレベルを示している。コントロールＨＦＤマウスではなく、ＩＬ−２２Ｆｃで処置したＨＦＤ給餌マウスが、固形食餌（正常食餌）での野生型マウスと同様に血清インスリンレベルを増加させることにより、グルコース注射に応答した。図２３Ｆを参照のこと。従って、ＩＬ−２２は肥満マウスにおけるグルコース恒常性を改善し、グルコースに応答してインスリン分泌を改善した。

比較として、我々はＩＬ−２２受容体ＫＯマウスと食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）及びインスリン抵抗性に対するその感受性を調べた。ＩＬ−２２ＲＫＯマウスは、図４３と以下に記載されている。ＩＬ−２２受容体ＫＯマウス及び同腹仔コントロールマウスに、１０週間の間、７週齢から６０％高脂肪食餌が供された。高脂肪食餌（ＨＦＤ）誘発性グルコース負荷を評価するために、マウスを一晩絶食させ、グルコース負荷試験を次の日の朝に実施した。この実験では、７週齢のＩＬ−２２ＲＫＯマウスと同腹仔の週齢が一致したコントロール動物（ＷＴ：野生型の意）に１０週間の間６０％ＨＦＤが供された。マウスに１．５ｍｇ／ｋｇ体重のグルコースを腹腔内注射し、血中グルコースレベルを２時間の間、３０分毎にモニターした。個々のマウスの曲線下の総面積を計算し、グラフに表した。データは、グルコースレベルが曲線下の総面積に基づいてＩＬ−２２ＲＫＯマウスにおいて有意に高く（図２７Ａ−Ｂ）、ＩＬ−２２受容体がＨＦＤ誘発グルコース耐性において役割を果たしていることを示唆している。ＩＬ−２２受容体ＫＯマウスは、同腹仔ＷＴコントロールマウスと比較してＨＦＤ給餌後に実際もっと体重を増やした（図２８）。

実施例１０−血清ＬＰＳ及び血清ＬＤＬ／ＨＤＬの減少を生じるアテローム生成易発性マウス（Ｌｄｌｒ−／−Ａｐｏｂｅｃ１−／−）のＩＬ−２２処置
９ヶ月齢のＬｄｌｒ−／−，Ａｐｏｂｅｃ１−／−（ｄｋｏ）マウスに、５０ｕｇの融合タンパク質ＩＬ−２２Ｆｃ又は５０μｇの抗ブタクサコントロール抗体を腹腔内注射した（群当たりｎ＝６）。４８時間後、動物を安楽死させ、血清を収集した。脂質プロファイルはＣｈｏｌｅｓｔｅｃｈＬＤＸアッセイを使用して分析し、エンドトキシンをカブトガニアメボサイトライセートアッセイを使用して分析した。抗ブタクサＦｃコントロール抗体と比較して、ＩＬ−２２−Ｆｃで、血清ＬＰＳは５０％減少し（ｐ＝０．００５２）、血清ＬＤＬ／ＨＤＬは３０％（ｐ＝０．０４９）減少した（図２９）。
要約すると、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質で処置したマウスでは、脂質プロファイルの急速なポジティブ変化及び循環エンドトキシンにおける減少があった。

実施例１１ＩＬ−２２Ｆｃは全身性又は局所的投与の何れかにより、マウス糖尿病性創傷治癒モデルにおいて創縫合を加速させた
プロトコル
ＩＬ−２２−Ｆｃコンストラクトは、図３２Ａ−Ｂに示されるように典型的にはマウスＩＬ−２２−マウス−ＩｇＧ２ａ融合タンパク質（配列番号：７２及び７３）であった。
研究で使用されたマウス：ＩＬ−２２ＲＫＯマウス及び同腹仔コントロール野生型（ＷＴ）マウスをジェネンテックの動物施設で飼育した。ＩＬ−２２ＲＫＯマウスは、図４３と以下に記載されている。９週齢の糖尿病の雌マウスＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７（ｍ）＋／＋Ｌｅｐｒ（ｄｂ）／ＪＦＡＴ（ｄｂ／ｄｂ）及びＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７（ｍ）＋／−Ｌｅｐｒ（ｄｂ）／Ｊ痩身（コントロールＢＫＳ）を使用した。マウスを、体重及び摂食血糖値に基づいて研究においてランダム化した。
創傷治癒プロトコルは厳密にＩＡＣＵＣげっ歯類生存手術ガイドラインに従って行った。無菌技術を（滅菌手袋、マスク、ガウン、ドレープを含む）手順を通して使用した。麻酔の手術面の誘導後、（肩甲骨部から腰部へ）動物の後の背部を剃り、毛リムーバーローション（Ｎａｉｒ又は同等品）で毛を除去し、滅菌水で洗い流し、ベタジンスクラブで準備し、アルコールリンスを続けた。動物を腹側横臥に配し、ついで６ｍｍパンチを使用して除去する皮膚の領域をマークした（パンチの先端に滅菌マーカーをつけ、ついで皮膚に触れる）。一つの直径６ｍｍの全層皮膚創傷を正中線の１ｃｍ左右に形成した。下にある軟骨膜を骨膜エレベーターと細かいハサミで除去した。
これに続いて、０．５ｍｍ厚、内径１０−１２ｍｍのシリコーンフレームを瞬間接着剤で円形の創傷の周りに配した。その後、２ｃｍ平方のＴｅｇａｄｅｒｍ^ＴＭ（3M, St.Paul, MN）又はＯｐｓｉｔｅ（登録商標）（Smith & Nephew社, St. Petersburg, FL）接着剤を創傷とフレームの上に配し、動物を麻酔から回復させる。
Ｏｐｓｉｔｅ（登録商標）包帯材を一日おきに除去し、創傷を検査し、処置を局所的に適用し（２０ｕＬの試験材料又は生理食塩水）、新しい包帯材を適用した。創傷開口を、０日目から研究の終わりまで創傷直径を測定することにより算出した。
幾つかの研究では食後グルコースレベルを尾部の切り傷から市販のＯｎｅｔｏｕｃｈ（登録商標）グルコメーター（lifeScan社, Milpitas, CA）を使用して記録した。

結果
ＩＬ−２２Ｒ−／−マウスは皮膚の創傷治癒応答において欠陥を示した
皮膚の創傷治癒応答におけるＩＬ−２２シグナル伝達の役割をＩＬ−２２ＲＫＯ（ＩＬ−２２及びそのファミリーメンバーＩＬ−２０及びＩＬ−２４のシグナル伝達を欠く）で研究した。図３３は、１４日間のＩＬ−２２ＲＫＯマウス（ｎ＝１０）及びＩＬ−２２ＲＷＴコントロールマウス（ｎ＝１０）の双方の創傷傷口曲線を示す。直径６ｍｍの創傷が０日目に生成され、傷口を４日目から初めて２日ごとに測定した。ＩＬ−２２ＲＫＯマウスの創傷傷口は８日目から１４日目のＷＴ同腹仔コントロールと比較して閉鎖に有意な遅延を示した。試験終了時（１４日目）に、ＩＬ−２２ＲＫＯマウス（ｐ＝０．００５）におけるわずか３０％のマウスと比較して、１００％のＷＴマウス創傷が閉じた。ＩＬ−２２ＲＫＯとＷＴコントロールマウス間の創傷傷口の差は、Ｐ≦０．０５で統計的に有意であると見なされる。

肥満糖尿病マウスにおける創傷治癒欠陥
糖尿病状態における皮膚の創傷治癒応答を、レプチン受容体ＫＯ糖尿病マウス（ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７（ｍ）＋／＋Ｌｅｐｒ（ｄｂ）／ＪＦＡＴ）（ｄｂ／ｄｂ）及びＷＴコントロール痩身マウスを使用して前臨床研究においてモデル化した。円形創傷（６ｍｍ）をマウスの背部に形成し、創傷傷口の閉鎖を４日目から始めて２日ごとに記録した。図３４は、０日目から２７日目までに測定された創傷傷口の閉鎖（ｍｍ）を示している。研究期間を通して、糖尿病性の肥満ｄｂ／ｄｂマウスの創傷は、痩身マウスと比較して創縫合に統計学的に有意な遅延（０．０００１≦Ｐ）を示した。１４日目までにＷＴマウス創傷の１００％が閉鎖される一方、ｄｂ／ｄｂマウスの創傷の何れも２７日目においてさえ閉鎖されていない（図３５Ａ）。ＩＬ−２２の発現は、創傷切除後の日に野生型マウスでＲＮＡレベルによって測定して誘導されたが、ｄｂ／ｄｂマウスにおいては誘導されなかった。図３５Ｂを参照のこと。

ＩＬ−２２Ｆｃは糖尿病性創傷治癒モデルにおいて創縫合を加速した
ＩＬ−２２Ｒ−／−マウスは創縫合に欠陥を示すので、ＩＬ−２２が創縫合に影響を及ぼす可能性があると仮説を立てた。図３６に研究デザインの概略図を示した。９週齢の雌の肥満ｄｂ／ｄｂマウスを使用して糖尿病性創傷治癒をモデル化した。ＩＬ−２２Ｆｃ（マウス）に加えて、Ｆｃコントロールタンパク質として抗ブタクサ抗体及び抗ＦＧＦＲ１抗体をポジティブコントロールとして使用した。抗ＦＧＦＲ１抗体はこの前臨床モデルで血中グルコースレベルを正常化することが実証されているので、それをコントロール抗体として使用した。図３６に研究デザインの概略図を示す。治療群は以下の通りであった：
・抗ブタクサ抗体（腹腔内（ＩＰ）５０μｇ／用量、８用量）
・ＩＬ−２２Ｆｃ（腹腔内（ＩＰ）５０μｇ／用量、８用量）
・抗ＦＧＦＲ１抗体（０日目と１４日目に腹腔内（ＩＰ）０．５ｍｇ／ｋｇ）。
ＩＬ−２２Ｆｃと抗ＦＧＦＲ１の双方が、抗ブタクサ処置と比較して糖尿病マウスにおけるグルコースレベルの低下に統計的に有意な（Ｐ≦０．００１）効果を示した（図３７）。データ（図３８）は、ＩＬ−２２Ｆｃの全身投与が、コントロール抗ブタクサ抗体処置と比較して創縫合率において顕著な効果を有していたことを示している。創傷傷口の差は、１６日（Ｐ≦０．０５）から開始して有意であり、ＩＬ−２２Ｆｃ処置マウス中の創傷は２７日目までに完全に被覆された。Ｆｃコントロール抗体並びに抗ＦＧＦＲ１処置マウスは、２７日目においてさえ創傷を完全に閉じることができなかった。図３９は１９日、２１日及び２７日目での個々のマウスの創傷傷口の測定値を示しており、他の２群に比べてＩＬ−２２Ｆｃ処置群間の創傷傷口の差は統計的に非常に有意である（Ｐ≦０．００１）ことを示している。

ＩＬ−２２Ｆｃの局所対全身処置の比較
図４０は研究デザインの概略図を示す。この研究では、我々は２つの治療モード：局所対全身治療を比較した。群は次の通りであった：
・抗ブタクサ抗体（局所５０μｇ／用量、８用量）
・ＩＬ−２２Ｆｃ（局所５０ｕｇ／用量、８用量）
・ＩＬ−２２Ｆｃ（腹腔内５０μｇ／用量、８用量）。
図４１のグラフは、ＩＬ−２２Ｆｃの局所とＩＬ−２２−Ｆｃの全身投与の双方が、コントロール抗体処置と比較して創縫合を加速したことを示している。創傷傷口の測定値は１６日目から２２日目まで統計的に有意に（Ｐ≦０．００１）異なっていた。ＩＬ−２２Ｆｃ局所及び全身処置群間の創縫合率に有意差は観察されなかった。図４２も参照のこと。

実施例１２肥満マウスはＩＬ−２２誘導の減少を示した
次の実験では、免疫応答中のＩＬ−２２の調節を肥満マウスで調べた。ＩＬ−２２の主要な白血球源は、自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）及びＴヘルパーサブセット、特にＴｈ１７及びＴＨ２２細胞である。レプチン受容体欠損ｄｂ／ｄｂマウスにおける抗原負荷の際のＣＤ４＋Ｔ細胞からのＩＬ−２２産生を調べた。

プロトコル
ＯＶＡ及びフラゲリンでのインビボ処置。インビボでＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化するために、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に乳化させた１００μｇのＯＶＡを動物の背下部に皮下注射し、鼠径リンパ節を７日目に収集した。ＴＬＲ５を活性化させるために、３μｇの超高純度のフラゲリン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を静脈内注射し、血清試料を２時間で採取した。

マウス。レプチン受容体欠損マウス（ｄｂ／ｄｂ；ＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７^ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊ又はＢ６．ＢＫＳ（Ｄ）−Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊ）、レプチン欠損マウス（ｏｂ／ｏｂ；Ｂ６．Ｃｇ−Ｌｅｐ^ｏｂ／Ｊ）、及びその各痩身コントロールマウス、並びに高脂肪食餌マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ６０％ＤＩＯ）及び固形飼料食餌コントロールマウスをジャクソン研究所から購入した。ＩＬ−２２欠損マウス（Zheng等, 2007, Nature 445, 648-651）及びＩＬ−２２Ｒα１欠損マウス（図４３及び以下に記載）をＬｅｘｉｃｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって作製させ、１０回を超えてＣ５７ＢＬ／６染色で戻し交配した。示されている場合、マウスに、４−６週齢で開始して調整済みカロリー食餌（６０％脂肪、Ｈａｒｌａｎを含むＨＦＤ）を給餌した。代謝研究では、１２−１８週齢のマウスを使用する一方、５−６週齢のマウスをシトロバクター・ローデンチウム感染の研究に使用した。全ての動物実験は、ジェネンテック施設内動物管理使用委員会によって承認された。

ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の精製及び分化。ナイーブＣＤ４Ｔ細胞を選別し、以前に記載されているようにして（Rutz等 2011, Nature Immunol. 12:1238-45）刺激し、先に記載されている（同上）方法と同様にして、各サブセットについて特定の条件下で培養した。ＩＬ−２２誘導に対しては、抗ＩＬ−４（１０μｇ／ｍｌ）、抗ＩＦＮ−γ（１０μｇ／ｍｌ）、及び組換えＩＬ−６（２０ｎｇ／ｍｌ）を使用した；示される場合、組換えマウスレプチン（１μｇ／ｍｌ、R&D systems）を添加した。

細胞内染色及びＩＬ−２２ＥＬＩＳＡ。流入領域リンパ節から精製したリンパ球を、フィコエリトリン（ＰＥ）−抗ＩＬ−２２（１Ｈ８ＰＷＳＲ、eBioscience）及びフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−抗ＩＬ−１７Ａ（１７Ｂ７、eBiosceince）を使用し、以前に記載されているようにして（Zheng等、前出）ＩＬ−２２及びＩＬ−１７Ａに対して染色した。ＩＬ−２２ＥＬＩＳＡを、モノクローナル抗ＩＬ−２２抗体（２０Ｅ５及び１４Ｂ７、Genentech）を使用し、以前に記載されているようにして（Zheng等、前出）実施した。

ＲＮＡ単離及びリアルタイムＰＣＲ。結腸を収集し、処理し、ｍＲＮＡをＲＮｅａｓｙミニプラスキット（Qiagen）を用いて単離した。以前に報告されているように（Ota等 2011, Nature immunol. 12, 941-948）リアルタイムＰＣＲ分析を使用して、ＩＬ２２、Ｉｌ２２ｒａ１、及びＲｅｇ３ｂｍＲＮＡレベルを評価した。結果を、（リボソームタンパク質Ｌ１９をコードする）コントロールハウスキーピング遺伝子Ｒｐｌ１９のものに正規化し、２^ＤＣＴとして報告した。ＩＬ２２及びＲｅｇ３ｂのためのプライマー及びプローブ配列は以前に報告された。同上。Ｉｌ２２ｒａ１では、５’−ＡＧＧＴＣＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＣＴＧＧＴ−３’（配列番号：７４）、５’−ＴＡＧＧＴＧＴＧＧＴＴＧＡＣＧＴＧＧＡＧ−３’（配列番号：７５）及び５’−ＦＡＭ−ＣＣＡＣＣＣＣＡＣＡＣＴＣＡＣＡＣＣＧＧ−ＴＡＭＲＡ−３’（配列番号：７６）を使用した。

統計分析全ての統計解析は、両側不対スチューデントｔ検定を用いて行った。０．０５未満のＰ値を統計学的に有意とみなした。

結果
完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のオボアルブミン（ＯＶＡ）でマウスを免疫した後、ＩＬ−２２を発現するＣＤ４Ｔ細胞を、細胞内サイトカイン染色を用いてエキスビボで検出した。ＩＬ−２２^＋Ｔ細胞はｄｂ／ｄｂマウスにおいて有意に減少した（図４４Ａ−Ｂ）。以前の報告と一致して、ＩＬ−１７^＋ＣＤ４Ｔ細胞もまたｄｂ／ｄｂマウスに有意に減少した（図４５Ａ）。同様の結果がレプチン欠損ｏｂ／ｏｂマウスにおいても観察された（図４５Ｂ）。レプチンは、Ｔｈ１細胞及びＴｒｅｇ細胞のようなＴｈ細胞を調節することができる。しかし、インビトロで分化したＴｈ２２細胞内からのＩＬ−２２産生に対するレプチンの直接的な効果は観察されなかった（図４５Ｃ）。更に、ＩＬ−２２産生Ｔ細胞の同様の減少がまた免疫されたＤＩＯ（食餌誘発性肥満、又はＨＦＤ給餌）Ｃ５７ＢＬ／６において観察され（図４４Ｃ及びＤ）、レプチンシグナル伝達の欠如ではなく肥満がＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＩＬ−２２産生の減少の原因であるかもしれないことを示唆している。フラゲリンによる活性化ＴＬＲ５経路は、ＩＬＣからのＩＬ−２２産生を刺激することができた。
ｄｂ／ｄｂマウス（図４４Ｅ）、ｏｂ／ｏｂマウス（図４５Ｅ）、及びＤＩＯマウス（図４４Ｆ）において、血清ＩＬ−２２レベルは、フラゲリンのインビボ負荷時にＷＴマウスのものに比べて有意に低かった。Ｔ細胞からの結果と一致して、レプチン自体は、インビトロでのＩＬＣからのＩＬ−２２産生を増強しなかった（図４５Ｄ）。まとめると、これらのデータは、肥満マウスにおいてＩＬＣ及びＴ細胞の双方からのＩＬ−２２誘導に一般的な欠陥があることを示唆した。

実施例１３粘膜防御はレプチン欠損マウスにおいて損なわれ、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質によって修復された
ＩＬＣＳ及びＴ細胞によって産生されるＩＬ−２２は、結腸におけるシトロバクター・ローデンチウム感染に対する宿主防御のために不可欠である。シトロバクター・ローデンチウムに感染したｄｂ／ｄｂ及びｏｂ／ｏｂマウスからの結腸におけるＩＬ−２２誘導を分析した。シトロバクター・ローデンチウムを一晩培養し、記載されたようにして（Zheng等 2008, Nature medicine 14, 282-289, doi:10.1038/nm1720）、マウスに２×１０^９ＣＦＵの細菌を経口的に接種した。細菌負荷を次の通りに分析した：感染マウスの脾臓及び肝臓を採取し、重さをはかり、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（Miltenyi Biotec）を備えたＣ−チューブにおいて０．１％ＮＰ４０／ＰＢＳ中でホモジナイズした。連続希釈ホモジネートをＭａｃＣｏｎｋｅｙ寒天培地（Remel）上に蒔き、シトロバクター・ローデンチウムコロニーを３７℃で一晩のインキュベーション後にピンク色のコロニーとして同定した。示されている場合、マウスにＩＬ−２２−Ｆｃ（１５０μｇ／用量）又は等価量のマウスアイソタイプコントロールを週３回、筋肉内注射した。シトロバクター・ローデンチウムに感染したマウスからの結腸の組織学的分析を、以前に報告されているようして（Ota等 2011, Nature immunology 12, 941-948, doi:10.1038/ni.2089）実施し、上皮変化（増殖、小疱形成、腸細胞排出）、炎症、及び粘膜肥厚に対してスコア化した。臨床スコアは、４つの解剖学的領域（近位、中位、遠位結腸及び直腸）に対して０−５からのスケールで０＝正常結腸及び５＝重篤な疾患で、決定した。領域スコアを合計して、各動物のための最終の結腸疾患の重篤度スコアを取得した。

上記の結果で裏付けられて、ｄｂ／ｄｂ及びｏｂ／ｏｂマウスにおける結腸中の４日目のＩＬ−２２のピーク誘導はまた有意に減少したが、完全には消失しなかった（図４６Ａ）。シトロバクター・ローデンチウムの経口接種後のｄｂ／ｄｂマウスには、有意な体重減少はなかった（図４６Ｂ）。驚くべきことに、感染ｄｂ／ｄｂマウスは、細菌接種後１０日で死に始め、繰り返し実験中、感染の第２週中に約６０％から１００％のｄｂ／ｄｂマウスが死亡した（図４６Ｃ）。ｄｂ／ｄｂマウスからの結腸切片の組織学的分析は、炎症性細胞浸潤増加及び粘膜表面の上皮脱落を含む重篤な上皮損傷を明らかにした（図４６Ｄ−Ｆ）。また、これらのマウスは斑状の粘膜下浮腫及び多巣性細菌コロニーを示し、これらにはしばしば局所的な壊死が伴っていた。有意に上昇した細菌負荷はまたｄｂ／ｄｂマウスの肝臓及び脾臓の両方において検出された（図４６Ｇ−Ｈ）。粘膜防御における同様の欠陥は、ｏｂ／ｏｂマウスでも観察された（図５４）。特にシトロバクター・ローデンチウム感染によるＩＬ−２２誘導がこれらのマウスにおいてほんの部分的な欠陥であったことからすると（図４６Ａを参照）、ｄｂ／ｄｂマウスが、シトロバクター・ローデンチウム感染の制御においてそのような重大な欠陥を有していたことは予想外であった。

レプチン欠損マウスはまたＢ細胞機能に欠陥を有しており、シトロバクター・ローデンチウムに対する抗体は、感染の後期中に宿主から細菌を最終的に除去するために必要とされることが報告されている。よって、これらのマウスにおける抗シトロバクター・ローデンチウム抗体の産生を調べた。血清試料を、感染後１０日目に顎下静脈からの採血によって収集した。ＥＬＩＳＡプレートを、熱死滅シトロバクター・ローデンチウム又はヤギ抗マウスＩｇ捕捉抗体でコートした。コートされたプレートを洗浄バッファー（ＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で洗浄し、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ中０．５％ＢＳＡ、１５ｐｐｍプロクリン）で２時間ブロックし、連続希釈した標準マウスモノクローナルＩｇＧ（SouthernBiotech）又は血清試料の添加前に洗浄した。室温で２時間インキュベートした後、プレートを洗浄し、Ｉｇを西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（SouthernBiotech）をコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧで検出し、アッセイ希釈液（ＰＢＳ中の０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、１５ｐｐｍプロクリン）で１／４０００に希釈し、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質（Sigma-Aldrich）を各ウェルに添加した。吸光度をプレートリーダー（Molecular Devices）において６５０ｎｍで読取った。

抗シトロバクター・ローデンチウムＩｇＧ抗体の力価は、感染後１４日目に生存したｄｂ／ｄｂマウスにおいて有意に減少した（図４６Ｉ）。しかしながら、抗シトロバクター・ローデンチウムＩｇＧ産生の減少だけでは、Ｂ細胞及び抗体産生を完全に欠くＲａｇ２欠損マウスが、感染後に更に長く生存できるので（Zheng等 2008, Nature medicine 14, 282-289）、観察された早期の死亡率を生じないはずである。従って、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるシトロバクター・ローデンチウムに対する宿主防御の失敗は、適応抗体応答とＩＬＣからのＩＬ−２２の誘導の双方における欠陥によっておそらく引き起こされた。次に、外因性ＩＬ−２２−Ｆｃの投与でのシトロバクター・ローデンチウム感染中、ＩＬ−２２がｄｂ／ｄｂマウスにおいて粘膜免疫を回復させることができたかどうかを調べるために実験を実施した。図４６Ｊに示されるように、コントロールＩｇＧ処置ｄｂ／ｄｂマウスの大半が死滅した一方、ほぼ全てのＩＬ−２２Ｆｃ処置ｄｂ／ｄｂマウスは感染を生き延び（図４６Ｊ）、ＩＬ−２２Ｆｃがｄｂ／ｄｂマウスにおける粘膜免疫欠陥を治療的に回復させることができたことを裏付けている。

実施例１４ＩＬ−２２Ｆｃは肥満マウス及び高脂肪食餌給餌正常マウスにおけるグルコースレベルを減少させた
上記の実施例９に記載されたように、ＩＬ−２２Ｆｃは既に高血糖症を発症したｄｂ／ｄｂマウスにおいてグルコースレベルを減少させた（図２０Ａ）。治療上の有益性は、ＩＬ−２２−Ｆｃの投与の過程で持続的であった。３週間の治療後、これらのマウス中のグルコースレベルは、ＷＴマウスにおける正常なグルコースレベルに近い２００ｍｇ／ｄｌ未満まで低下する一方、コントロールタンパク質処置ｄｂ／ｄｂマウスはその高グルコースレベルを維持した。ＩＬ−２２Ｆｃ処置マウスにおけるグルコースの減少は、マウスを絶食させたとき、より明らかであった（図２０Ｃ）。ＩＬ−２２Ｆｃ処置はまたコントロール処置と比較して体重減少又は体重増加遅延の傾向を生じた。しかし、この研究の終わりに、２群間の体重差は、これらのマウスにおける統計的有意性に達しなかった（図２０Ｂ）。これらのデータで実証される通り、ＩＬ−２２Ｆｃ処置は、グルコース負荷試験及びインスリン負荷試験において耐糖能及びインスリン感受性を有意に改善した（それぞれ図２１及び図２２）。
代謝性疾患の調節における外因性ＩＬ−２２の一般的な有益な機能を確認するために、ＩＬ−２２Ｆｃを、グルコース不耐性を誘導するために少なくとも８週間ＨＦＤが給餌されたＣ５７ＢＬ／６マウスに４週間投与した。グルコース負荷試験（ＧＴＴ）では、マウスを一晩絶食させ、１．５ｍｇ／ｋｇでグルコース溶液を腹腔内注射した。インスリン負荷試験（ＩＴＴ）では、マウスに１．０単位／ｋｇのインスリン溶液を腹腔内注射した。血中グルコースは、注射の前後で測定した。血糖はＣｏｎｔｏｕｒ（Bayer）により測定した。

ｄｂ／ｄｂマウスからの結果と一致して、ＩＬ−２２Ｆｃ処置は、血清グルコースレベルを、特に絶食後に有意に減少させた（図４７Ａ）。研究の終了時に、ＩＬ−２２Ｆｃ処置群において体重減少（又は体重増加遅延）もあった（図４７Ｂ）。加えて、ＩＬ−２２Ｆｃは、ＨＦＤ給餌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるグルコース不耐性及びインスリン抵抗性を減少させた（図４７Ｃ及びＤ）。同様の結果が、ＨＦＤ給餌の開始時にマウスにＩＬ−２２Ｆｃを同時に投与したときに得られた（図４８）。まとめると、データは、ＩＬ−２２Ｆｃが肥満マウスにおいて血清グルコース濃度を正常化し、耐糖能障害及びインスリン抵抗性を軽減するための潜在的な治療法であることを示している。

実施例１５ＩＬ−２２Ｆｃは肥満及びＨＦＤ給餌マウスにおいて食物摂取量を減少させＰＹＹの発現を増加させた
食物摂取量の減少が糖尿病マウスにおける高血糖及びインスリン抵抗性を逆転させることができる。実際、ＩＬ−２２Ｆｃで処置されたｄｂ／ｄｂマウスは、コントロール群と比較して食物摂取量の有意な減少を示した（図４９Ａ）。ペアフィード実験を実施して、ＩＬ−２２Ｆｃ及びコントロール処置マウスにおいて同じ食物摂取量を確保した（図５０）。食物摂取量を、試験期間中に毎日自由に給餌される群に対して測定した。ペアフィード群の供給食物は、自由に給餌される群の前日の食物摂取量に一致するように制限された。対応して、ペアフィード群の処置及び測定は自由に給餌される群の１日後であった。
この条件下でさえ、ＩＬ−２２Ｆｃは、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、後の時点ではあるが血清グルコースを有意に減少させ（図４９Ｂ）、耐糖能を逆転させ（図４９Ｃ）、ＩＬ−２２による食物摂取量の調節が代謝性疾患におけるその治療効果の唯一の機序ではなかったことを示唆している。同様の結果は、ＨＦＤ給餌マウスにおいて観察された（データは示さず）。ＩＬ−２２が食物摂取及び代謝を調節したかを更に理解するために、食物摂取を阻害することが知られている腸ホルモンＰＹＹの発現を調べた。

０日目と２日目に５０μｇのＩＬ−２２−Ｆｃをマウスに腹腔内注射した。４日目にマウスを一晩絶食させ、５日目に１時間再給餌した。血液試料を処置前の２日目と給餌後５日目に採取した。全ての血清試料を採取直後にプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ）、ＤＰＰＩＶ阻害剤（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及びＰｅｆａｂｌｏｃ（Ｒｏｃｈｅ）と混合した。ＰＹＹは、製造者の指示に従ってＰＹＹＥＬＩＳＡキット（Ａｂｎｏｖａ）を用いて測定した。結果は、ＩＬ−２２Ｆｃ処置がｄｂ／ｄｂ及びＨＦＤ給餌マウスの血清中のＰＹＹ濃度を有意に増加させたことを示している（図４９Ｄ及びＥ）。食物摂取に対するＩＬ２２の効果が、ＰＹＹの産生促進を介して媒介されたことを実証するために、ＰＹＹ阻害剤ＢＩＩＥ０２４６で処置されたマウスにおける食物摂取を調べた。正常な食餌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、未処置か又は２日目と４日目にＩＬ−２２Ｆｃで処置した。一晩の絶食後、４時間の給餌中の食物摂取を測定した。結果は、ＩＬ−２２Ｆｃ処置マウスにおける食物摂取の減少がＢＩＩＥ０２４６によって逆転されており（データは示さず）、食物摂取減少に対するＩＬ−２２Ｆｃの効果がＰＹＹの誘導を介して媒介されたことを示している。

実施例１６ＩＬ−２２Ｆｃは肥満マウスにおいて血清ＬＰＳ及び肝臓ＡＬＴ及びＡＳＴを減少させ脂質代謝を増加させた
ＩＬ−２２受容体は、代謝を調節する肝臓及び膵臓を含む多くの器官で発現されるので、代謝性疾患におけるＩＬ−２２の治療効果は、おそらく様々な機構によって媒介される。代謝性内毒素血症は炎症状態及びインスリン抵抗性に寄与し、腸微生物叢はグルコース耐性を増強する。血清エンドトキシンは、製造者の指示に従って、ＬｉｍｕｌｕｓＡｍｅｂｏｃｙｔｅＬｙｓａｔｅアッセイキットのＱＣＬ−１０００（Lonza）によって測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴはＣｈｏｌｅｓｔｅｃｈＬＤＸ（Alere）により測定した。図４９Ｆに示された結果は、ＩＬ−２２Ｆｃ処置が、ｄｂ／ｄｂマウス血清中のＬＰＳ量の有意な減少をもたらしたことを示している。

ＩＬ−２２は、脂質生成に関与する遺伝子を抑制し、脂肪肝を改善することができる。血清ＡＬＴ及びＡＳＴレベルを次に調べた。血糖は、Ｃｏｎｔｏｕｒ（Bayer）により測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴはＣｈｏｌｅｓｔｅｃｈＬＤＸ（Alere）により測定した。図５１Ａ及びＢに示されるように、ＩＬ−２２Ｆｃ処置は、ｄｂ／ｄｂ（図５１Ａ）及びＨＦＤ給餌（図５１Ｂ）マウスにおいて血清中ＡＬＴ及びＡＳＴレベルを低下させた。腹部脂肪もまたＨＦＤ給餌マウス（図５１Ｃ）においてＩＬ−２２Ｆｃ処置で有意に落ちた。また、脂質代謝に関与する遺伝子は、初代脂肪細胞（図５１Ｄ）においてＩＬ−２２によって誘導された。次に、肝臓及び脂肪組織におけるトリグリセリド及びコレステロールに対するＩＬ−２２の効果を調べた。結果は、ＩＬ−２２Ｆｃが、ＨＦＤ給餌マウスにおいて、トリグリセリド、コレステロール、及び遊離脂肪酸（ＦＦＡ）（図５１Ｅ）、並びに肝臓トリグリセリド（図５１Ｆ）、肝臓コレステロール（図５１Ｇ）及び白色脂肪組織中のトリグリセリド（図５１Ｈ）を減少させたことを示している。同様に、ＩＬ−２２は、ｄｂ／ｄｂマウスにおいて肝臓及び白色脂肪組織中のトリグリセリドを減少させた（図５１Ｉ及び図５１Ｊ）。更なる実験は、ＩＬ−２２Ｆｃ処置が、肥満マウスにおいて無処理と比較して、ＴＮＦα及びＩＬ−１β等の炎症性サイトカインを減少させたことを示している（データは示さず）。肝臓切片のＨ＆Ｅ染色は、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質処置で門脈周囲脂肪肝の減少を明らかにした（図２６）。

ＩＬ−２２はＩＬ−２２Ｒ１及びＩＬ−１０Ｒ２鎖を通じてシグナル伝達する。ＩＬ−２２Ｒ１はまたＩＬ−２０Ｒ２鎖と対になり得、ＩＬ−２０及びＩＬ−２４によって利用されうる。全てのこれらのリガンドが、皮膚表皮から非常に類似した下流の生物学的効果を誘導したことが示された（Sa等, 2007, J Immunol 178, 2229-2240）。従って、ＩＬ−２２及びＩＬ−２２Ｒ１欠損マウスの双方を、ＨＦＤ誘発糖尿病における他のサイトカインの潜在的な余剰性を避けるために調べた。ＩＬ−２２Ｒノックアウトマウスの作製は図４３Ａに示される。該ＫＯマウスにおけるＩＬ−２２Ｒ１の欠損は、ＩＬ−２２ＲＫＯマウス中にＩＬ−２２Ｒ１ｍＲＮＡが存在しないこと、及びＩＬ−２２ＲＫＯマウスにおけるＩＬ−２２Ｆｃに応答するＲｅｇＩＩＩｂｍＲＮＡ発現の欠如によって確認した。図４３Ｂ及びＣを参照のこと。また、ＩＬ−２２ＲＫＯマウスへのＩＬ−２２−Ｆｃの投与はｐＳｔａｔ３を誘導しなかった（データは示さず）。

ＷＴ同腹仔コントロールのものからのＩＬ−２２欠損マウスにおいて、耐糖能及び体重に差異は観察されなかった（図５３）。しかし、ＩＬ−２２Ｒ１欠損マウスを、３ヶ月間、高脂肪食餌で処理した場合、これらのマウスは有意に多い深刻な耐糖能を生じ、より体重が重くなり（図４９Ｇ、Ｈ及びＩ）、代謝制御におけるＩＬ−２２Ｒ経路の重要な役割を支持している。
メタボリック症候群の減少におけるＩＬ−２０及びＩＬ−２４の余剰性の可能性を調べた。この実験では、ｄｂ／ｄｂマウスをＩＬ−２０Ｆｃ、ＩＬ−２２Ｆｃ又はＩＬ−２４Ｆｃで処置した。結果は、ＩＬ−２２Ｆｃが単独でｄｂ／ｄｂマウスにおいて血清グルコースレベルを減少させ（図５５Ｂ）、２０日目にＧＴＴアッセイにおいて耐糖能を改善する（図５５Ｃ）一方、ＩＬ−２０Ｆｃ又はＩＬ−２４Ｆｃでのｄｂ／ｄｂマウスの処置ではそうではなかったことを示している。体重の減少は統計的に有意ではなかった。更なる実験は、ＩＬ−２０Ｆｃ及びＩＬ−２４が、初代脂肪細胞中のｐＳｔａｔ３を誘導したが、これらのサイトカインは、インスリンに対して非感受性となったｄｂ／ｄｂマウスからの肝組織中においてｐＳｔａｔ３を誘導しなかったことを示している（データは示さず）。ＩＬ−２２ＲノックアウトマウスにおけるＩＬ−２２Ｆｃの処置は、グルコース負荷試験において効果を持たず、ＩＬ−２２Ｆｃの効果はＩＬ−２２Ｒシグナル伝達を介して発揮されたことが確認できた（データは示さず）。
ここに提示された研究は、代謝過程の調節におけるＩＬ−２２の重要な機能を示している。ＩＬ−２２Ｒ１欠損マウスにはメタボリック症候群発症の素因があった。外因性ＩＬ−２２は前臨床糖尿病モデルにおける粘膜免疫欠陥を回復させることができただけでなく、糖及び脂質代謝を正常化するのに役立った。従って、ＩＬ−２２は、ヒト代謝性疾患を治療するための新規な治療的アプローチを提供しうる。

実施例１７ｄｂ／ｄｂマウスにおける創傷治癒促進におけるＶＥＧＦ及びＩＬ−２２の比較
この実験では、創傷治癒の促進又は改善に対するＩＬ−２２の効果を分析し、ＶＥＧＦと比較した。１１週齢の雌のＢＫＳ．Ｃｇ−Ｄｏｃｋ７^ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／Ｊｄｂ／ｄｂマウスをジャクソン研究所（Bar Harbor, ME）から購入した。全ての実験動物研究は、ジェネンテック実験動物研究の施設内動物管理使用委員会の承認下で実施した。イソフルラン麻酔下で背部皮膚の毛を剃り、その後脱毛クリームを塗布して残っているひげを除去した。皮膚を洗浄し、ポビドンヨードと続いてアルコール綿棒で準備した後、円形の全層創傷を、使い捨ての６ｍｍ生検パンチ（Ｍｉｌｔｅｘ、Ｉｎｃ．）を使用して各マウスの背部皮膚につくり出した。創傷を処置の前後でＴｅｇａｄｅｒｍフィルムで覆った。
図５６の結果は、ＶＥＧＦが、ＩＬ−２２と比較して、より速い表面閉鎖を達成するようであることを示している；しかし、皮膚の真皮側を調べたところ、ＶＥＧＦで処置した創傷は、２１日においてさえ開いたままであった（図５６Ｂ）。創傷部位での血管形成を促進する際のＶＥＧＦ及びＩＬ−２２Ｆｃの能力も分析した。この実験では、２つの６ｍｍの創傷を０日目にｄｂ／ｄｂマウスにおいて切除した。２日、４日、６日、８日、１０日及び１２日目に、生理食塩水中のコントロール抗ブタクサ抗体又はＩＬ−２２Ｆｃ（５０μｇ）又はＶＥＧＦ（２０μｇ）を創傷上に局所的に投与した。６日目と１２日目に、各群からの３匹のマウスを組織学及び免疫組織化学分析及びＢｒｄＵ染色のために解剖した。１６日目に、１匹のマウスをＢｒｄＵ染色のために解剖した。１８日、２０日及び２２日目に、各群からの１匹のマウスを、免疫組織化学分析及びＣＤ３１全組織染色のために各時点で解剖した。結果は、ＣＤ３１組織免疫染色によって分析した場合、コントロール抗ブタクサ抗体ではなくＶＥＧＦ及びＩＬ２２−Ｆｃの双方が創傷部位における血管形成を促進したことを示している（データは示さず）。

次に、我々は、再構成された表皮中でのＩＬ−２２誘導性及び他のＩＬ−１０ファミリーメンバー誘導性サイトカイン及びケモカインの発現を分析した。再構成された表皮は、ＭａｔＴｅｋから購入したＥＰＩ−１００−ＮＭＭ培地中に維持されたＥｐｉＤｅｒｍＲＨＥ組織モデルであった。Sa等 2007, J. Immunol. 178:2229-2240を参照のこと。結果は、ＩＬ−２２が再構成されたヒト表皮においてＩＬ−８、ＣＸＣＬ−１、ＭＩＰ３ａ、ＤＭＣ、及びＭＣＰ−１の発現を顕著に誘導したことを示しているが、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０又はＩＬ−２４による誘導もまた観察された（図５７）。ここに記載の創傷治癒に対するＩＬ−２２の効果に鑑みると、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、及びＩＬ−２４もまた、創傷治癒の加速にある役割を果たしている場合がある。

実施例１８ＩＬ−２２はｄｂ／ｄｂマウスの副子支持創傷モデルにおいてＶＥＧＦ及びＰＤＧＦよりも感染創傷の治療に優れた効果をもたらす
マウス創傷治癒モデルでは、マウスの皮膚は動くので、収縮がマウスにおける創縫合の大部分を占める。ヒトにおける創傷治癒過程により密接に似たものにするため、シリコンリングを皮膚に接着し、創傷の周りに縫合糸で固定して局所的皮膚収縮を防いだ副子支持マウス創傷モデルを樹立した（図５９Ｂ中の代表画像を参照）。例えばZhao等, 2012, Wound Rep. Reg. 20:342-352及びBrubaker等, 2013, J. Immunol., 190:1746-57を参照のこと。このモデルでは、創傷は、ヒトにおける創傷治癒過程と同様に、肉芽形成及び再上皮形成過程を経て治癒した。創傷を副子支持するために、Ｋｒａｚｙ接着剤（Elmer's Products社）を滅菌シリコーン副子（Grace Bio-Labs社）の片面に塗布し、創傷が副子の中心にくるように接着剤側を下にして副子を創傷の周りに注意深く配した。接着剤は接触すると皮膚に接着し、研究の全過程の間、副子となった。副子を４つの中断された６．０モノフィラメントナイロン縫合糸（Ethicon社）で皮膚に更に固定した。創傷をＴｅｇａｄｅｒｍ透明フィルムで覆う前に、創傷のデジタル画像を撮影した。更に、開いた創傷の微生物感染が創傷治癒を遅らせる場合があり、糖尿病患者において観察される慢性創傷等の慢性創傷はしばしば感染創傷である。
副子支持創傷モデルを使用して、感染創傷に対するＩＬ−２２Ｆｃの効果をｄｂ／ｄｂマウスにおいて調べた。野生型又はｄｂ／ｄｂマウスにおいて上記のように切除された創傷に創傷切除の２日後に０．５×１０^６ＣＦＵ、１×１０^６ＣＦＵ（プラーク形成単位）又は２×１０^６ＣＦＵの黄色ブドウ球菌を局所的に接種した。図５８に示されるように、ｄｂ／ｄｂマウスは、野生型マウスと比較して創傷治癒の遅延を示し、創傷治癒は、創傷がこれらのマウス中の細菌に感染したときコントロールと比較して更に遅延した。

別の実験では、ＩＬ−２２の創傷治癒効果を副子支持感染創傷モデルにおいて他の薬剤と比較した。創傷切除の２日後、３０μｌの生理食塩水中１×１０^６ＣＦＵのメチシリン耐性黄色ブドウ球菌株ＵＳＡ３００ＮＲＳ３８４（NARSA）を創傷表面上に接種し、Ｔｅｇａｄｅｒｍ膜で再び覆った。局所治療を、生理食塩水３０μｌ中３０ｕｇのＩＬ２２−Ｆｃ又はＶＥＧＦ（ロット＃１１０３０８、Genentech）又はＰＤＧＦ（ロット＃０５０７ＣＹ４２０、PeproTech社）の何れかを用いて黄色ブドウ球菌感染の４８時間後に開始し、その後週３回続けた。創傷のデジタル画像を治療前と治療後の創縫合まで週２回、記録した。創縫合のパーセントを、ＮＩＨで開発されたＪａｖａベースの画像処理プログラムであるＩｍａｇｅＪを使用して、創傷画像から算出した。

図５９に示されるように、ＩＬ−２２Ｆｃは、同じ化合物量をヒト創傷治癒により近く似ている副子支持創傷モデルにおける感染創傷に適用したとき、ＶＥＧＦより速く創傷治癒を促進した。次に、異なった用量のＶＥＧＦ及びＩＬ−２２Ｆｃを感染創傷について試験した。この実験では、一つの６ｍｍ直径の副子支持切除創傷を、血糖値＞３００ｍｇ／ｄｌのｄｂ／ｄｂマウスでつくり出した。各創傷に１×１０^６ＣＦＵの黄色ブドウ球菌ＵＳＡ３００を接種した。生理食塩水中様々な用量のＶＥＧＦ又はＩＬ−２２Ｆｃを、創縫合まで週３回局所的に投与した。生理食塩水をコントロールとして使用した。創縫合時にマウスを屠殺し、試料を組織学、免疫組織化学、及びＰＣＲ分析及びＣＦＵ計数に供した。図６０の結果は、３０μｇの量のＩＬ−２２Ｆｃが６０μｇのＶＥＧＦよりも良好な感染創傷治癒効果を示したことを示す。従って、非副子支持創傷モデルにおいて観察されたＶＥＧＦによるより速い表面閉鎖はおそらくマウスの皮膚収縮によるものであり、ケラチノサイト増殖及び再上皮形成の促進に対するＩＬ−２２Ｆｃの効果がマウス皮膚収縮によってマスクされたと思われる。

同様の結果が図６１に示され、ＩＬ−２２Ｆｃは、同量（３０μｇ）の各化合物を創傷に適用したときＶＥＧＦ及びＰＤＧＦより優れた効果を有することが証明された。ＩＬ−２２Ｆｃ処置した感染副子支持創傷における完全創縫合は１５日目に見られた。しかし、ＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ処置マウスでは、感染副子支持創傷の完全閉鎖は、未処理の非感染創傷と同じ、２５日目まで見られなかった。コントロール群、すなわち、未処置の感染創傷における創縫合は２９日目まで見られなかった。特定の機序（群）に限定されるものではないが、ＶＥＧＦ又はＰＤＧＦより創傷治癒を促進する上でのＩＬ−２２Ｆｃの優位性は、再上皮形成、ケラチノサイト増殖の促進、新血管形成の誘導、組織リモデリング及び修復及び抗菌活性を容易にするプロテアーゼの誘導に対するその効果によると思われる。

次に、我々は、ＩＬ−２２Ｆｃを創傷治癒のためのゲル製剤で投与することができるかどうかを試験した。この実験で使用した例示的なゲル製剤は、０．５ｍｇ／ｇのメチオニン及び３％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（Dow ChemicalsからのＨＰＭＣＥ４Ｍプレミアム）と共にｐＨ７．１の１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含み、１ｍｇ／ｇのＩＬ−２２Ｆｃを含むか含まないものとした。ゲル溶液とＩＬ−２２Ｆｃ溶液を、副子支持創傷に局所的に適用される前に混合した。ＩＬ−２２Ｆｃを含む製剤はまた元のタンパク質製剤から運ばれた少量のスクロース（＜２０ｍＭ）及びＰ２０（＜０．００２％）を含んでいた。図６２に示された結果は、溶液とゲル製剤の双方中のＩＬ−２２Ｆｃが非感染副子支持創傷の創傷治癒を促進したことを証明している。

明細書は当業者に発明を実施させるのに十分であると考えられる。前記発明を、理解の明瞭さのために例証と実施例によってある程度詳細に説明したが、説明及び実施例は本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。実際、ここに示され記載されたものに加えて、本発明の様々な変更が、前記説明から当業者には明らかであろうし、添付の特許請求の範囲内に入る。

Claims

ＩＬ−２２受容体に結合するＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質であって、該ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質はＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、該Ｆｃ領域はヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含み、該Ｌ−２２Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、該Ｆｃ領域はグリコシル化されていない、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
アミノ酸配列が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項１に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
アミノ酸配列が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項１又は２に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
アミノ酸配列が、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項１から３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
アミノ酸配列が、配列番号：８のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項１から４の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
アミノ酸配列が、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含む、請求項１から４の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
アミノ酸配列が、配列番号：８のアミノ酸配列を含む、請求項１から６の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程を含む方法によって生産される、請求項１から７の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
前記方法が、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を更に含む、請求項８に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項８又は９に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ＩｇＧＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、該Ｆｃ領域がヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含み、該Ｆｃ領域はグリコシル化されていない、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ヒンジ領域がＣＰＰＣＰのアミノ酸配列（配列番号：３１）を含む、請求項１１に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
Ｆｃ領域において、Ｎ２９７残基が変えられ及び／又はＴ２９９残基が変えられている、請求項１１又は１２に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
Ｎ２９７残基がＧｌｙ又はＡｌａに変えられている、請求項１３に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
Ｎ２９７残基がＧｌｙに変えられている、請求項１３又は１４に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
Ｔ２９９残基がＡｌａ、Ｇｌｙ又はＶａｌに変えられている、請求項１３から１５の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーが８〜２０アミノ酸長である、請求項１１から１６の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーが８〜１６アミノ酸長である、請求項１７に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーが１０〜１６アミノ酸長である、請求項１７に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
Ｆｃ領域がＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１１から１９の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーがアミノ酸配列ＤＫＴＨＴ（配列番号：３２）を含む、請求項２０に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーが、少なくとも１１アミノ酸長であり、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３３）を含む、請求項２１に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーが、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３４）、ＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３５）、ＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３６）、ＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３７）、ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３８）、又はＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴ（配列番号：３９）を含む、請求項２２に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：４０）を含む、請求項１１から２１の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーが、アミノ酸配列ＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６７）、ＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６８）、ＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６６）、ＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６４）、ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６９）、又はＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴ（配列番号：６５）を含む、請求項２４に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーがアミノ酸配列ＧＧＳ（配列番号：４５）を含まない、請求項１１又は２１に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
配列番号：１２又は配列番号：１４のアミノ酸配列を含む、請求項１１から２１、２４、及び２６の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
配列番号：１２のアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
Ｆｃ領域がＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１１から１９の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーがアミノ酸配列ＳＫＹＧＰＰ（配列番号：４３）を含む、請求項２９に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
リンカーがアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰ（配列番号：４４）を含む、請求項３０に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
配列番号：８又は配列番号：１０のアミノ酸配列を含む、請求項１１から１９及び２９から３１の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
配列番号：８のアミノ酸配列を含む請求項３２に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で培養する工程を含む方法によって生産される、請求項１１から３３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
前記方法が、細胞培養物又は培養培地からＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を得る工程を更に含む、請求項３４に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項３４又は３５に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が二量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質である、請求項１から３６の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質である、請求項１から３６の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
ＩＬ−２２ポリペプチドが配列番号：４のアミノ酸配列を含む、請求項１から３８の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合アームと、配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＦｃアームを含む、単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合アームと配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＦｃアームとを発現することができる一又は複数の核酸分子を含む一又は複数の宿主細胞を培養する工程を含む方法によって生産される、請求項４０に記載の単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
前記方法が、細胞培養物又は培養培地から単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を得る工程を更に含む、請求項４１に記載の単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
一又は複数の宿主細胞が大腸菌細胞又はＣＨＯ細胞である、請求項４０又は４１に記載の単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質。
請求項４０から４３の何れか一項に記載の単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の作製方法であって、配列番号：６１のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合アームと配列番号：６２のアミノ酸配列を含むＦｃアームとを発現することができる一又は複数の核酸分子を含む一又は複数の宿主細胞を培養する工程を含む、方法
細胞培養物又は培養培地から単量体ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を得る工程を更に含む、請求項４４に記載の方法。
一又は複数の宿主細胞が大腸菌細胞である、請求項４７又は４８に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物であって、前記ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がＦｃ領域にリンカーによって連結されたＩＬ−２２ポリペプチドを含み、該Ｆｃ領域がヒンジ領域、ＩｇＧＣＨ２ドメイン及びＩｇＧＣＨ３ドメインを含み、該組成物は５％以下のＣＨ２ドメインのアフコシル化を有する、組成物。
アフコシル化レベルが２％以下である、請求項４７に記載の組成物。
アフコシル化レベルが１％未満である、請求項４８に記載の組成物。
アフコシル化レベルが質量分析法により測定される、請求項４７から４９の何れか一項に記載の組成物。
Ｆｃ領域がＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項４７から５０の何れか一項に記載の組成物。
Ｆｃ領域がＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項５１に記載の組成物。
Ｆｃ領域がＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項５１に記載の組成物。
ヒンジ領域がＣＰＰＣＰのアミノ酸配列（配列番号：３１）を含む、請求項４７から５３の何れか一項に記載の組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：２４又は配列番号：２６のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：２４のアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載の組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：２６のアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載の組成物。
前記組成物が、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下でＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を発現することができる宿主細胞を培養する工程、細胞培養物又は培養培地からＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を得る工程を含む方法によって生産され、前記組成物がＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおいて５％以下のアフコシル化レベルを有する、請求項４７から５７の何れか一項に記載の組成物。
アフコシル化レベルが２％以下である、請求項５８に記載の組成物。
アフコシル化レベルが１％未満である、請求項５９に記載の組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が精製によって得られる、請求項５８から６０の何れか一項に記載の組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がアフィニティクロマトグラフィーによって精製される、請求項６１に記載の組成物。
宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項５８から６２の何れか一項に記
載の組成物。
ＩＬ−２２ポリペプチドが配列番号：４のアミノ酸配列を含む、請求項４７から６３の何れか一項に記載の組成物。
請求項１から４３及び４７から６４の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする、単離された核酸。
核酸が配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：２４又は配列番号：２６のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする、請求項６５に記載の単離された核酸。
核酸が配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする、請求項６５又は６６に記載の単離された核酸。
核酸が配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質をコードする、請求項６７に記載の単離された核酸。
配列番号：７、配列番号：９、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：２３又は配列番号：２５のポリヌクレオチド配列を含む、請求項６５から６８の何れか一項に記載の単離された核酸。
配列番号：７又は配列番号：１１のポリヌクレオチド配列を含む、請求項６９に記載の単離された核酸。
配列番号：７のポリヌクレオチド配列を含む、請求項７０に記載の単離された核酸。
請求項６５から７１の何れか一項に記載の核酸を含むベクター。
請求項７２に記載のベクターを含む宿主細胞。
宿主細胞が原核細胞又は真核細胞である、請求項７３に記載の宿主細胞。
宿主細胞が大腸菌細胞又はＣＨＯ細胞である、請求項７４に記載の宿主細胞。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の発現に適した条件下で請求項７３から７５の何れか一項に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質の作製方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を細胞培養物又は培養培地から得る工程を更に含む、請求項７６に記載の方法。
アフコシル化ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を除去する工程を更に含む、請求項７７に記載の方法。
アフコシル化ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がアフィニティカラムクロマトグラフィーによって除去される、請求項７８に記載の方法。
宿主細胞が大腸菌細胞である、請求項７６又は７７に記載の方法。
宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項７６から７９の何れか一項に記載の方法。
請求項１から４３及び４７から６４の何れか一項に記載の治療的に有効な量のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質と少なくとも一の薬学的に許容可能な担体を含有する薬学的組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：２４、又は配列番号：２６のアミノ酸配列を含む、請求項８２に記載の薬学的組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含む、請求項８２又は８３に記載の薬学的組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：８のアミノ酸配列を含む、請求項８４に記載の薬学的組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質がＣＨＯ細胞中で生産される、請求項８２から８５の何れか一項に記載の薬学的組成物。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質のＦｃ領域がグリコシル化されていない、請求項８２から８６の何れか一項に記載の薬学的組成物。
更なる治療剤を更に含有する、請求項８２から８７の何れか一項に記載の薬学的組成物。
請求項１から４３及び４７から６４の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２ポリペプチドと少なくとも一の薬学的に許容可能な担体とを含有し、薬学的に許容可能な担体がゲル化剤である、薬学的組成物。
ゲル化剤が多糖類である、請求項８９に記載の薬学的組成物。
ゲル化剤がセルロース剤である、請求項８９又は９０に記載の薬学的組成物。
ゲル化剤が、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ＰＯＥ−ＰＯＰブロックポリマー、アルギネート、ヒアルロン酸、ポリアクリル酸、ヒドロキシエチルメチルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項８９から９１の何れか一項に記載の薬学的組成物。
ゲル化剤がヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請求項９２に記載の薬学的組成物。
薬学的組成物が局所投与用である、請求項８９から９３の何れか一項に記載の薬学的組成物。
治療を必要とする対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する方法において、請求項８２から８８の何れか一項に記載の薬学的組成物を該対象に投与することを含む方法。
患者のＩＢＤを治療する方法において、請求項１から４３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又は請求項４７から６４の何れか一項に記載の組成物を、治療を必要とする対象に投与することを含む方法。
ＩＢＤが潰瘍性大腸炎又はクローン病である、請求項９５又は９６に記載の方法。
ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項９７に記載の方法。
ＩＢＤがクローン病である、請求項９７に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、又は配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項９５から９９の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１００に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１０１に記載の方法。
対象に少なくとも一の更なる治療剤が併用投与される、請求項９５から１０２の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、皮下又は腹腔内投与される、請求項９５から１０３の何れか一項に記載の方法。
必要とする対象の、腸の微生物感染を阻害し、微生物感染中において腸の杯細胞を維持し、上皮細胞完全性、上皮細胞増殖、上皮細胞分化、上皮細胞遊走又は腸における上皮創傷治癒を亢進させる方法において、請求項８２から８８の何れか一項に記載の薬学的組成物を対象に投与する工程を含む、方法。
上皮細胞が腸の上皮細胞である、請求項１０５に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、又は配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１０５から１０６の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１０７に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１０８に記載の方法。
対象に少なくとも一の更なる治療剤が併用投与される、請求項１０５から１０９の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、腹腔内又は皮下投与される、請求項１０５から１１０の何れか一項に記載の方法。
治療を必要とする対象における急性腎損傷又は急性膵炎の治療方法において、請求項８２から８８の何れか一項に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む方法。
患者における急性腎損傷又は急性膵炎の治療方法において、請求項１から４３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物又は請求項４７から６４の何れか一項に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
薬学的組成物が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、又は配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８又は配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１１４に記載の方法。
薬学的組成物が、配列番号：８のアミノ酸配列を含むＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する、請求項１１５に記載の方法。
対象に少なくとも一の更なる治療剤が併用投与される、請求項１１２から１１６の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、皮下又は腹腔内投与される、請求項１１２から１１７の何れか一項に記載の方法。
対象における創傷治癒を促進し又は改善する方法において、請求項８２から９４の何れか一項に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
対象における創傷治癒を促進し又は改善する方法において、請求項１から４３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２ポリペプチドを含有する薬学的組成物又は請求項４７から６４の何れか一項に記載の組成物の治療的に有効な量を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
創傷が慢性創傷又は感染創傷である、請求項１１９から１２０に記載の方法。
対象が糖尿病患者である、請求項１１９から１２１の何れか一項に記載の方法。
糖尿病患者がＩＩ型糖尿病に罹患している、請求項１２２に記載の方法。
創傷が糖尿病性足部潰瘍である、請求項１１９から１２３の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が、完全創閉鎖となるまで投与される、請求項１１９から１２４の何れか一項に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１９から１２５の何れか一項に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：８のアミノ酸配列を含む、請求項１２６に記載の方法。
創傷治癒を促進し又は改善するための少なくとも一の更なる治療剤が対象に併用投与される、請求項１１９から１２７の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、皮下、腹腔内又は局所投与される、請求項１１９から１２８の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が局所的に投与される、請求項１２９に記載の方法。
病態が動脈硬化プラーク形成の病変を含む心血管疾患を予防し又は治療する方法において、治療的有効量の請求項８２から８８の何れか一項に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
病態が動脈硬化プラーク形成の病変を含む心血管疾患を予防し又は治療する方法において、治療的有効量の請求項１から４３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質又はＩＬ−２２ポリペプチドを含有する薬学的組成物、又は請求項４７から６４の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法。
心血管疾患が、冠動脈疾患、冠動脈微小血管疾患、脳卒中、頸動脈疾患、末梢動脈疾患、及び慢性腎疾患からなる群から選択される、請求項１３１又は１３２に記載の方法。
動脈硬化プラーク形成の進行の遅延させ又はアテローム性動脈硬化症の症状を防止することを更に含む、請求項１３１又は１３２に記載の方法。
アテローム性動脈硬化症の症状がプラーク蓄積又は血管炎症を含む、請求項１３４に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３１から１３５の何れか一項に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：８のアミノ酸配列を含む、請求項１３６に記載の方法。
少なくとも一の更なる治療剤が対象に併用投与される、請求項１３１から１３７の何れか一項に記載の方法。
対象が、心血管疾患を発症するリスクがあると同定されている、請求項１３１から１３２に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、皮下又は腹腔内投与される、請求項１３１から１３９の何れか一項に記載の方法。
メタボリック症候群の治療方法において、請求項８２から８８の何れか一項に記載の薬学的組成物の治療的有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法。
メタボリック症候群の治療方法において、請求項１から４３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物又は請求項４７から６４の何れか一項に記載の組成物の治療的有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法。
腹部肥満、高血糖症、脂質異常症、及び高血圧の一又は複数を含む、メタボリック症候群に伴う一又は複数の危険因子を減少させることを更に含む、請求項１４１から１４２に記載の方法。
対象における細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）のレベルを減少させることを更に含む、請求項１４１から１４３に記載の方法。
対象がＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要としている、請求項１４１から１４４の何れか一項に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４１から１４５の何れか一項に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：８のアミノ酸配列を含む、請求項１４６に記載の方法。
少なくとも一の更なる治療剤が対象に併用投与される、請求項１４１から１４７の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、皮下又は腹腔内投与される、請求項１４１から１４８の何れか一項に記載の方法。
急性内毒血症、敗血症、又は双方を治療する方法において、請求項８２から８８の何れか一項に記載の薬学的組成物の治療的有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法。
急性内毒血症、敗血症、又は双方を治療する方法において、請求項１から４３の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する薬学的組成物又は請求項４７から６４の何れか一項に記載のＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質を含有する組成物の治療的有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
対象がＨＤＬ／ＬＤＬ脂質プロファイルの変化を必要としている、請求項１５０又は１５１に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２及び配列番号：１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１５０から１５２の何れか一項に記載の方法。
ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質が配列番号：８のアミノ酸配列を含む、請求項１５３に記載の方法。
急性内毒血症、敗血症、又は双方を治療するための少なくとも一の更なる治療剤が対象に併用投与される、請求項１５０から１５４の何れか一項に記載の方法。
薬学的組成物が静脈内、皮下又は腹腔内投与される、請求項１５０から１５５の何れか一項に記載の方法。
対象がヒトである、請求項９５から１５６の何れか一項に記載の方法。