JP2018111700A - 急性骨髄性白血病（ａｍｌ）のための新規併用治療 - Google Patents

Abstract

【課題】がん、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの増殖性疾患の治療のための併用療法に関する。
【解決手段】上記治療における逐次又は同時使用のための組み合わせ調製物として、ａ）第１の成分としてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤；及びｂ）第２の成分としてシタラビンを含む、医薬製品に関する。
【選択図】図１

Description

本発明は、がん、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの増殖性疾患の治療のための併用療法に関する。さらに具体的には、本発明は、ＡＭＬにおける現行の脊柱療法、化合物シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）と、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤として作用する化合物との組み合わせを開示する。驚くべきことに、このような組み合わせが相加効果を超える（相乗）効果を示すことが見出された。

ｐ５３は、がんの発症の予防における中心的役割を果たす腫瘍抑制タンパク質である。これは、増殖の停止又はアポトーシスの誘発により、細胞の完全性を保護し、かつ、回復不能な損傷を受けた細胞クローンの増殖を妨げる。分子レベルでは、ｐ５３は、細胞周期及びアポトーシスの調節に関与している遺伝子のパネルを活性化することができる転写因子である。ｐ５３は、細胞レベルでは、ＭＤＭ２によってしっかりと調節された強力な細胞周期阻害剤である。ＭＤＭ２及びｐ５３はフィードバック制御ループを形成する。ＭＤＭ２はｐ５３に結合することができ、かつ、ｐ５３−調節遺伝子を転写活性化する能力を阻害する。加えて、ＭＤＭ２はｐ５３のユビキチン依存性分解を仲介する。ｐ５３は、ＭＤＭ２遺伝子の発現を活性化することができ、よって、ＭＤＭ２タンパク質の細胞レベルを高めることができる。このフィードバック制御ループは、ＭＤＭ２及びｐ５３の両方が、正常な増殖細胞において低レベルに保たれることを保証する。ＭＤＭ２はまた、細胞周期制御において中心的役割を果たす、Ｅ２Ｆの補助因子でもある。

ＭＤＭ２のｐ５３に対する比は多くのがんにおいて無調節（dysregulated）である。ｐ１６ＩＮＫ４／ｐ１９ＡＲＦ遺伝子座において頻繁に発生する分子欠陥は、例えば、ＭＤＭ２タンパク質分解に影響を及ぼすことが示されている。機能性のｐ５３を用いた、腫瘍細胞におけるＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害は、ｐ５３の蓄積、細胞周期の停止及び／又はアポトーシスをもたらすはずである。したがって、ＭＤＭ２アンタゴニストは、単剤として、又は広範囲の他の抗腫瘍治療と組み合わせて、がん治療に新規な手法をもたらしうる。この戦略の実現可能性は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害のための様々な高分子ツール（例えば、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド）の使用によって示されている。ＭＤＭ２はまた、ｐ５３としての保存結合領域を通してＥ２Ｆに結合し、かつ、サイクリンＡのＥ２Ｆ依存性の転写を活性化し、このことは、ＭＤＭ２アンタゴニストが、機能性のｐ５３シグナル伝達を伴うｐ５３変異細胞において、効果を有しうることを示唆している。

ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤は、ＭＤＭ２を過剰発現する、確立されたヒトＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１３において、アポトーシスを誘導することが示されている（K. Kojima, et. al., Blood 2005, 106(9):3150-9）。現在では、式（Ｉ）の化合物とＡｒａ−Ｃとの組み合わせが、免疫不全マウスの播種性のＭＯＬＭ−１３ ＡＭＬモデルにおいて相加効果以上のものをもたらすことが見出されている。式（Ｉ）の化合物及びそれらの調製物は国際出願公開第２０１３／１３５６４８号に開示されている。これらの化合物は、化合物

（Ａ）
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸（本明細書における化合物Ａ）のプロドラッグとして作用する。

化合物Ａは、例えば米国特許第８，３５４，４４４号及び国際出願公開第２０１１／０９８３９８号に開示されている。

本発明は、がんの治療における逐次又は同時使用のための組み合わせ調製物として、ａ）第１の成分としてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤（「ＭＤＭ２阻害剤」ともいう）；及びｂ）第２の成分としてシタラビンを含む、医薬製品に関する。

本発明はさらに、患者に上述の組み合わせを投与することを含む、がんに罹患している患者の治療方法にも関する。

本発明はまた、ａ）活性薬剤としてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤を含む第１の成分；及びｂ）活性薬剤として化合物シタラビンを含む第２の成分を含む、キットにも関する。

加えて、本発明は、がんの治療のためのＭＤＭ２阻害剤及びシタラビンの使用に関する。

本発明のさらなる態様は、がんの治療のための医薬の調製物のためのＭＤＭ２阻害剤、及びシタラビンの使用である。

一実施態様では、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤は、式（Ｉ）の化合物：

（Ｉ）、
から選択され、それによって式（Ｉ）の化合物は本明細書においてさらに特定される。

生物発光の定量化による、ＳＣＩＤベージュマウスのＭＯＬＭ−１３−ｌｕｃ．ｃ４（ＡＭＬ）腫瘍負荷における化合物Ｉ−Ｂとシタラビンとの組み合わせの抗腫瘍有効性を示す。

式（Ｉ）の化合物、及び特に本明細書に開示されるＩ−Ａ及びＩ−Ｂは、活性な親分子化合物（Ａ）の静脈内（ｉｖ）用製剤に必要とされる溶解度をもたらすように合成された、化合物（Ａ）のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）プロドラッグである。静脈内製剤は、用量を制限してしまう胃腸不耐性及び曝露変動性を改善すること、ならびに、血液悪性腫瘍の治療のため及び小児への投与のための許容可能な投与経路を提供することが望ましい。

週１回の化合物Ｉ−Ｂの静脈内投与及び化合物（Ａ）の経口（ｐｏ）投与の抗腫瘍活性を、ＭＯＬＭ−１３モデルにおいて、単剤療法及びＡＭＬの標準治療であるシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）との組み合わせと比較した。化合物Ｉ−Ｂ及び（Ａ）の両方とも、単剤療法として有意な寿命の増加（ＩＬＳ）を誘発し、ビヒクル対照動物と比較して最大３７％のＩＬＳが観察された。Ａｒａ−Ｃでは単剤療法の活性がないにもかかわらず、Ａｒａ−Ｃは、化合物Ｉ−Ｂ又は（Ａ）との組み合わせで生存期間を有意に引き延ばし、それぞれ５４％又は６８％の最大ＩＬＳが観察された。本データによって実証された相乗効果は、ＭＤＭ２阻害剤を用いたＭＤＭ２−ｐ５３の標的化と、及びシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）を用いたＳ期の停止の誘発との組み合わせが、ＡＭＬの治療のための効果的な戦略でありうることを示唆している。これらのデータはまた、化合物（Ａ）の有効性が、式（Ｉ）の化合物及び、特にＩ−Ａ 及び／又はＩ−Ｂを使用するプロドラッグ手法によって維持することができることを実証している。

したがって、一実施態様では、本発明は、ＡＭＬの治療における逐次又は同時使用のための組み合わせ調製物として、ａ）第１の成分としてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤；及びｂ）第２の成分としてシタラビンを含む医薬製品に関する。

別の実施態様では、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤は、式（Ｉ）：

（Ｉ）
の化合物から選択され、式中、ｎは３から７０である。

一実施態様では、ｎは３０から６０である。

別の実施態様では、ｎは４０から５０である。

さらに別の実施態様では、ｎは４１、４２、４３、４４、４６、４７、４８又は４９である。

別の実施態様では、式（Ｉ）の化合物は：
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ，平均ＭＷ，〜２０００）である。この化合物は、本明細書では化合物Ｉ−Ａと表される。

別の実施態様では 式（Ｉ）の化合物は：
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ、平均ＭＷ、〜２２００）である。この化合物は、本明細書では化合物Ｉ−Ｂと表される。

さらに別の実施態様では、本発明に従ったＭＤＭ２阻害剤は化合物（Ａ）でありうる。この実施態様内では、好ましくは、化合物（Ａ）は、化合物（Ａ）及び、化合物（Ａ）を非晶質の形態で安定化させるポリマー、好ましくはＨＰＭＣＡＳを含む、非晶質固体分散体、好ましくは微細沈殿バルク粉末（ＭＢＰ）を含む、経口投与のための調製物として提供される。経口用調製物は、Ｋｌｕｃｅｌ／Ｔｗｅｅｎ中の懸濁液として、投与の直前に再構成される。化合物（Ａ）は、例えば米国特許第８，３５４，４４４号又は国際出願公開第２０１１／０９８３９８号に開示される方法に従って調製することができる。現在の研究における投与量の選択は、前臨床（動物）及び臨床（フェーズ１）試験における化合物（Ａ）の先に決定された至適用量に基づくものであった。

本発明に従った医薬製品又は方法は、白血病などの血液系腫瘍の治療又は制御に特に有用であり、とりわけ急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療に有用である。それらはまた、がん、さらに具体的には、例えば、乳房、結腸、肺、メラノーマ、前立腺、腎臓、頭頸部、又は肉腫などの固形腫瘍のようなＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の調節不全によって生じる他の細胞増殖性疾患の治療にも有用でありうる。

一実施態様では、本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療のための医薬製品及び／又は方法を提供する。

別の実施態様では、本発明は、がん、さらに具体的には、例えば、乳房、結腸、肺、メラノーマ、前立腺、腎臓、頭頸部、又は肉腫などの固形腫瘍のようなＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の調節不全によって生じる細胞増殖性疾患の治療のための医薬製品及び／又は方法を提供する。

式（Ｉ）の化合物の製剤は、経口、鼻腔及び／又は非経口又は静脈内投与に適したものを含む。製剤は、簡便には単位投与形態で提示されて差し支えなく、薬学の技術分野で周知のいずれかの方法により調製されて差し支えない。

一実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、約０．１ｍｇから約１００ｍｇの化合物（Ｉ）、約１０ｍＭから約１００ｍＭの緩衝剤、約２５ｍｇから約１２５ｍｇの凍結乾燥増量剤及び、等張性のビルディング剤を含む、静脈内投与のための安定な凍結乾燥製剤で提供される。結果として得られる製剤は、ＨＣｌ又はＮａＯＨでの調整により約５〜７のｐＨを有しなければならない。

別の実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、攪拌により、滅菌水中０．９％塩化ナトリウムに溶解され、次いでフィルタを通して濾過されて、静脈内投与のための隔壁封止されたバイアル内に入れられる。

本明細書において使用される用語「緩衝剤」は、薬学的調製物のｐＨを安定させる、薬学的に許容可能な賦形剤を意味する。適切な緩衝剤は、当技術分野で周知であり、文献に見出すことができる。好ましい薬学的に許容可能な緩衝剤には、限定されないが、ヒスチジン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、酢酸緩衝剤及びリン酸緩衝剤が含まれ、特にコハク酸（２０〜５０ｍＭ）及びリン酸（１０〜５０ｍＭ）が好ましい。最も好ましい緩衝剤には、クエン酸塩、Ｌ−ヒスチジン又はＬ−ヒスチジンとＬ−ヒスチジン塩酸塩との混合物が含まれる。他の好ましい緩衝剤は、酢酸緩衝剤である。使用される緩衝剤から独立して、ｐＨは、当技術分野で既知の酸又は塩基、例えば塩酸、酢酸、リン酸、硫酸及びクエン酸、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムを用いて調整することができる。

好ましい「増量剤」はトレハロース２水和物であるが、ラクトース、スクロース、ソルビトール、グルコース、ラフィノース（rafffinose）、マンニトール、デキストラン及び、グリシン、バリン及びアルギニン等のより低分子量のアミノ酸、ならびに科学文献に記載される他の増量剤も利用して差し支えない。

凍結乾燥粉末の調合液又は再構成溶液のための希釈剤として、塩化ナトリウム（０．９％）、５％デキストロース、注射用水、乳酸リンゲル液又は１／２生理食塩水／食塩水などの希釈剤を使用してもよい。増量剤が等張性のビルディング剤としても機能することは認識されるべきである。

担体材料と組み合わせて単一投与形態を製造することができる活性成分の量は、治療されている宿主、ならびに特定の投与様式によって様々であろう。担体材料と組み合わせて単一投与形態を製造することができる活性成分の量は一般に、治療効果を生じさせる式Ｉの化合物の量であろう。一般に、１００パーセントのうち、この量は、約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲となるであろう。典型的な製剤は、本発明の化合物と担体又は賦形剤とを混合することにより調製される。適切な担体及び賦形剤は当業者に周知であり、例えば、Ansel, Howard C., et al., Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al.Remington: The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000及び、Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago, Pharmaceutical Press, 2005に詳細に開示されている。

シタラビンは、静脈内（ｉｖ）注入用の滅菌液（１００ｍｇ／ｍｌ）として、Ｌａｋｅ Ｆｏｒｅｓｔ，ＩＬ ６００４５ ＵＳＡ所在のＨｏｓｐｉｒａ，Ｉｎｃ．から購入した。

式（Ｉ）の化合物並びにシタラビンは、それらの治療的有効量で投与される。さらに具体的には、式（Ｉ）の化合物、とりわけ式Ｉ−Ａ及びＩ−Ｂは、治療的に活性な量の化合物Ａを患者に送達する目的で投与される。本発明に従った治療的有効量の化合物とは、疾患の症状を予防、緩和又は改善する、若しくは、治療されている対象の生存期間を引き延ばすために有効な化合物の量を意味する。所望の量の主活性成分、例えば化合物Ａを患者に送達するために、プロドラッグ、例えばＩ−Ａ又はＩ−Ｂなどの式（Ｉ）の化合物の量を決定することは、薬学の当業者の日常的作業の範囲内にある。本発明の一実施態様では、４３７ｍｇ／ｋｇの式Ｉ−Ｂのプロドラッグの用量は、プロドラッグ中、２２．８８％の活性化合物負荷であることから、１００ｍｇ／ｋｇの親ＭＤＭ２阻害剤の化合物（Ａ）に相当する。

本発明に従った化合物の治療的有効量又は用量は、広い制限内で可変であってよく、当該技術分野で既知の方法で決定されうる。このような用量は、投与される特定の化合物、投与経路、治療される条件、ならびに治療される患者を含め、各特定の事例における個別の要求に対して調整されるであろう。一般に、およそ７０ｋｇの体重の成人への経口又は非経口投与の場合、指示された場合には上限を超える場合があるかもしれないが、日用量が約１０ｍｇから約３０００ｍｇ、好ましくは約８０ｍｇから約１６００ｍｇの化合物（Ａ）が適切なはずである。日用量は、単回投与として、又は分割投与で投与することができ、又は、非経口投与で、連続的注入として与えられうる。

一実施態様では、本医薬製品は式（Ｉ）の化合物を含み、それらは、２８日の治療周期のうち最長で約７日間、好ましくは最長で約５日間の投与期間の１〜７日目、又は好ましくは１〜５日目に、約５０から約３０００ｍｇ／日、又は約８０から約２５００ｍｇ／日、又は約８０から約１６００ｍｇ／日、又は約２００から約１６００ｍｇ／日、又は約４００から約１６００ｍｇ／日、又は約４００から約１２００ｍｇ／日、又は約４００から約１０００ｍｇ／日、又は約４００から約８００ｍｇ／日、又は約４００から約６００ｍｇ／日の量で化合物（Ａ）を送達するように投与され、続いて約２１から約２３日間、好ましくは最長で約２３日間を休止期間とすることを特徴とする。日用量、すなわちｍｇ／日で表した化合物（Ａ）の量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与されうる。２回投与の場合、それらは好ましくは等量で、午前中に１回、及び午後に１回、投与される。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約４００から約１２００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約４００から約８００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約４００から約６００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約８００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約４００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

別の実施態様では、本医薬製品は、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物を含み、それらが２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とすることを特徴とする。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

この発明に従ったシタラビンの治療的有効量（又は「有効量」）とは、本明細書に開示されるデータによって実証されるような相乗効果、すなわち相加効果を上回る効果を達成するのに効果的な量を意味する（例えば図１参照）。シタラビンは、何年にもわたり、ＡＭＬのための脊柱治療として用いられていることから、ヒトにおける有効量かつ耐性用量について、多くの情報が、例えば臨床医などの当業者にとって利用可能である。例えば、シタラビンは、ＡＭＬの治療（導入療法）において単剤として、１〜６日目に１２時間毎に２時間以上、最大３ｇ／ｍ^２（静脈内）などの高用量で投与することができることが分かっている。白血病の治療におけるシタラビンの使用についての考察は、例えば「Nicholas D. Reese, Gary J. Schiller; Curr Hematol Malig Rep, 2013, 8:141-148」に提供されている。ある特定の併用療法（例えば急性非リンパ性白血病の導入療法）では、他の抗がん剤と組み合わせた通常のシタラビン用量は、連続的静脈内点滴によって１００ｍｇ／ｍ^２／日（１〜７日目）、又は１２時間毎に静脈内に１００ｍｇ／ｍ^２（１〜７日目）である。（例えばwww.hospira.com参照）。

したがって、一実施態様では、本発明は、がん、好ましくはＡＭＬの同時又は連続治療のための組み合わせ調製物として、ａ）ＭＤＭ２阻害剤として式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物であって、該化合物は、２８日間の治療周期の１〜５日目に、１日当たり１回又は２回、静脈内に（ｉｖ）投与され、その後、２３日間を休止期間とする、化合物と；ｂ）第２の成分として有効量の化合物シタラビンと、を含む、医薬製品を提供する。この実施態様内では 化合物Ｉ−Ａ及びＩ−Ｂが好ましく、約５０から約３０００ｍｇ／日、又は約８０から約２５００ｍｇ／日、又は約８０から約１６００ｍｇ／日、又は約２００から約１６００ｍｇ／日、又は約４００から約１６００ｍｇ／日、又は約４００から約１２００ｍｇ／日、又は約４００から約１０００ｍｇ／日、又は約４００から約８００ｍｇ／日、又は約４００から約６００ｍｇ／日の量で化合物（Ａ）を送達するように投与される。用量は、単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与される。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。また、この実施態様内では、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約４００から約１２００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約４００から約８００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約４００から約６００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約８００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与される、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約６００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日から約４００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与される、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする；又は
式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、１日の総量で約１２００ｍｇの化合物（Ａ）を患者に送達するために、６００ｍｇの用量で１日に２回（ＢＩＤ）投与される。
また、これらの実施態様の範囲内では、及び他に明確に記載されていない場合には、用量は単回投与（ｑｄ）として、又は２回投与（ＢＩＤ）で投与され、化合物Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂが好ましい化合物である。

別の実施態様では、シタラビンは、２つの特定の患者集団に必要とされる以下の投薬計画に従って、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物と組み合わされる、すなわち：
１）Ｅｕｒｏｐｅａｎ ＬｅｕｋｅｍｉａＮｅｔガイドラインに従った予後不良因子（adverse features）を有する再発性／難治性のＡＭＬ又は新生ＡＭＬを有する患者；又は血液学的疾患を先行して有しており、それからＡＭＬに進展した患者。この実施態様内では、シタラビンは１ｇ／ｍ^２で単回投与（ｑｄ）として６日間、１〜３時間の静脈内（ｉ．ｖ．）点滴により投与される。

２）標準用量のシタラビン及びアントラサイクリン（ダウノルビシン又は イダルビシン）投薬計画（「７＋３ 導入療法」）を用いた集中的な化学療法治療の候補者とみなされる、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ＬｅｕｋｅｍｉａＮｅｔガイドラインに従った予後不良因子を有する患者。この実施態様内では、シタラビンは、１日に１００〜２００ｍｇ／ｍ^２の用量で７日間、連続静脈内注入＋ダウノルビシンを４５から６０ｍｇ／ｍ^２；又は＋イダルビシンを１日に１２ｍｇ／ｍ^２、静脈内に３日間、投与される。

上記１）又は２）のいずれかの実施態様内では、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、本明細書で先に定義されたように投与される。また、上記１）又は２）のいずれかの実施態様内では、式（Ｉ）、Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの化合物は、それらが、２８日の治療周期の最長５日間の投与期間の１〜５日目に、約１２０から約１２００ｍｇ／日；又は約４００から約１２００ｍｇ／日の量で化合物Ａを送達するように投与され、続いて２３日間を休止期間とする。この実施態様内では、化合物Ｉ−Ｂが好ましい。

さらに別の実施態様では、本発明は、先に定義された医薬製品をがんの治療を必要とする患者に投与することを含む、がんの治療方法を提供する。この実施態様内では、ＭＤＭ２阻害剤は好ましくは化合物Ｉ−ＡまたはＩ−Ｂから選択される。化合物Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂ及びシタラビンの投与形態、用量及び治療スケジュールは好ましくは上述のようになる。また、この実施態様内では、がんは固形又は非固形腫瘍であり、好ましくは、がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。

別の実施態様では、本発明は、がん、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療用の医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物、好ましくはＩ−Ａ又はＩ−Ｂ、及びシタラビンの使用を提供する。

別の実施態様では、本発明は、ａ）第１の成分として式（Ｉ）の化合物；及び、ｂ）第２の成分として化合物シタラビンを含む、医薬製品を提供し、両方とも、がんの治療における同時又は逐次使用のための組み合わせ調製物として１日１回又は２回、静脈内投与され；式（Ｉ）の化合物の用量は、約５０から約３０００ｍｇ／日、又は約８０から約２５００ｍｇ／日、又は約８０から約１６００ｍｇ／日、又は約２００から約１６００ｍｇ／日、又は約４００から約１６００ｍｇ／日、又は約４００から約１２００ｍｇ／日、又は約４００から約１０００ｍｇ／日、又は約４００から約８００ｍｇ／日、又は約４００から約６００ｍｇ／日の範囲内の化合物（Ａ）の用量に対応することを特徴とする。この実施態様内では、式（Ｉ）の化合物は、好ましくは化合物Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂであり、がんはＡＭＬであり、１日用量は約２００から約１６００ｍｇを１日１回又は２回与えられ、化合物Ｉ−Ａ又はＩ−Ｂの投薬計画は、２８日間の治療周期の１日目から５日目であり、続いて２３日間を休止期間とする。さらに好ましくは、この実施態様内では、式（Ｉ）の化合物は化合物Ｉ−Ｂであり、がんはＡＭＬであり、１日用量は、２８日間の治療周期の１日目から５日目に、約１２００ｍｇを１日１回又は２回与えられ（ＢＩＤ，６００ｍｇ）、続いて２３日間を休止期間とする。

本発明は、以下に随伴する実施例によってさらに例証される。

材料及び方法
動物
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）から入手したメスのＳＣＩＤベージュマウス（１０／群）を、およそ８−１２週齢で、体重がおよそ２０〜２５グラムのときに、使用した。マウスの健康状態を、巨視的観察、及び共用のシェルフラックに収容された歩哨動物から採取した血液試料の分析によって評価した。すべての動物は、実験に使用する前に最短でも７２時間、順応させ、かつ輸送に関するストレスから回復させた。加熱滅菌した水及び放射線照射食品（５０５８−ｍｓ Ｐｉｃｏ Ｌａｂ ｍｏｕｓｅ ｃｈｏｗ、Ｐｕｒｉｎａ Ｍｉｌｌｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＩＮ）が不断供給され、動物は１２時間の明暗サイクルに維持された。ケージ、床敷及び採水器は使用前に加熱滅菌し、１週間ごとに交換した。すべての動物実験は、実験動物のケアと使用に関する指針、地方条例、及びＲｏｃｈｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅが承認したプロトコルに準拠して、ＡＡＡＬＡＣ認証施設において行われた。

腫瘍
ＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬの親細胞にＬｕｃ２レンチウイルス粒子を、ポリブレン（８μｇ／ｍｌ）の存在下で２４時間、安定にトランスフェクトし、その後、細胞をブラストサイジンの存在下で３週間、選択した。続いて、０．１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８の存在下で単細胞プレーティングによって１つのクローンを選択し、これは指定されたＭＯＬＭ−１３．ｌｕｃ．ｃ４であった。Ｌｕｃ２遺伝子（Ｐｒｏｍｅｇａ）をｐＬＯＣレンチウイルスプラスミド骨格（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に取り込むことによって、レンチウイルスＬｕｃ２発現プラスミドを構築した。推奨通りにトランスレンチウイルスパッケージングシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、Ｌｕｃ２レンチウイルス粒子を調製した。

ＭＯＬＭ−１３．ｌｕｃ．ｃ４を、１０％熱失活ウシ胎児血清（ＨＩ−ＦＢＳ； ＧＩＢＣＯ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、及び１％ １００ｍＭピルビン酸ナトリウムを補充した、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）添加ＲＰＭＩ １６４０培地（ＧＩＢＣＯ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を用いて維持した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に懸濁させた、新たに解離させたＭＯＬＭ１３−Ｌｕｃ．ｃ４細胞（１×１０６又は５×１０６）を、メスのＳＣＩＤベージュマウス内へと尾静脈を介して静脈内接種した。

試験薬剤
４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ，平均ＭＷ，〜２２００）、すなわち化合物Ｉ−Ｂを、攪拌することにより、滅菌水中０．９％塩化ナトリウムに溶解させた。次いで、それを、０．２２ミクロンのフィルタを通じて静脈内投与のための隔壁封止されたバイアル内へと濾過した。４３７ｍｇ／ｋｇの薬物の用量は、プロドラッグ中、２２．８８％の活性化合物負荷であることから、１００ｍｇ／ｋｇの親ＭＤＭ２阻害剤に相当する。原液のシタラビン（Ａｒａ−Ｃ注入、１００ｍｇ／ｍｌ）を、製造業者の指示書に従って、滅菌した０．９％塩化ナトリウム中４４ｍｇ／ｍｌまで希釈し、２００ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に週２回投与した。

化合物Ｉ−Ｂ及びシタラビンを、それぞれ、４３７ｍｇ／ｋｇ（９ｍｌ／ｋｇ）で週１回（ｑ７ｄ）及び２００ｍｇ／ｋｇ（４．５ｍｌ／ｋｇ）で週２回（２×／週）、１ｃｃのシリンジ及び２６ゲージの針を使用して静脈内投与した。同時投与の日には、化合物Ｉ−Ｂは午前中に投与され、静脈内投与のためのＩＡＣＵＣの規則に従って、シタラビンは６時間後に投与された。治療期間は３週間であった。

監視
生存期間の増加（ＩＬＳ）の評価では、動物の体重を週に２から３回測定し、毒性又は過度の腫瘍負荷（すなわち後肢まひ又は罹患率）のいずれかの臨床兆候について、毎日動物を監視した。加えて、ＩＶＩＳ（登録商標）スペクトラムシステムを用いて、疾患の進行をインビボの生物発光画像（ＢＬＩ）によって監視した。各ＢＬＩ期間の間、マウスに、１００ｍｇ／ｋｇのＤ−ルシフェリン（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）の腹腔内注入を受けさせ、ルシフェリン注入後２０分の時点で、５秒又は１０秒の露光時間で撮像した。画像をＩＶＩＳ（登録商標）スペクトラムシステムで撮像し、データを回収し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．２．０ソフトウェア（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ）を用いて分析した。個別のマウスの全腫瘍に及ぶ、対象とする各固定領域（ＲＯＩ）内のルシフェラーゼ活性を表す全光子束（ｐｈ／ｓ）が決定された。マウスの実際の画像は本明細書には開示されていない。この監視から得られた生物発光の定量化のデータは、図１に提供されている。

計算及び統計解析
体重減少は、式：（（Ｗ−Ｗ_０）／Ｗ_０）×１００ ［式中、「Ｗ」はある特定の日の治療群の平均体重を表し、「Ｗ_０」は同じ治療群の治療開始時の平均体重を表している］を用いて群の平均体重におけるパーセント変化として図式で表示した。最大の体重減少も上記式を用いて表したが、これは特定の群についての実験全体を通して随時観察された、体重減少の最大パーセントを示した。毒性は、≧２０％の体重減少及び／又は死亡を例証する所定の群におけるマウスの≧２０％として定義される。

生物発光の定量化は、代替死亡エンドポイントに達する前の治療群間の腫瘍負荷の直接的な縦比較を可能にした。腫瘍負荷を平均ＢＬＩ光子束＋平均（ＳＥＭ）の標準誤差として図式で表示し、生存期間中央値をカプランマイヤー生存時間解析を利用して決定した。群間の比較の統計解析は２要因ＡＮＯＶＡ、及びポストホックボンフェローニ検定（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ ４．３）によって解析した。群間の差は、確率値（ｐ）が≦０．０５の場合に有意であるとみなされた。

生存期間の評価のため、罹患率又は後肢まひをエンドポイントとして監視し、結果を腫瘍の生着後の日数に対する生存期間のパーセンテージとしてプロットした（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ ４．３）。後肢まひ、罹患率、又は≧２０％の体重減少を死亡の代わりに用いた。％ＩＬＳは、１００×［（治療群の生存日数中央値−対照群の生存日数中央値）／対照群の生存日数中央値］として計算した。生存期間中央値はカプランマイヤー生存時間解析を利用して決定した。ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ，ｖｅｒｓｉｏｎ ４．３）により、治療群の生存期間をビヒクル群と比較した。群間の差は確率値（ｐ）が≦０．０５の場合に有意とみなされた。

結果
毒性
動物の体重減少又は臨床兆候の総計によって評価される毒性は、現在の研究では観察されなかった。しかしながら、化合物Ｉ−Ｂの静脈内投与の直後に、原因不明の散発的な死亡が発生した（証明はされていないが、技術的可能性あり、表１参照）。

抗腫瘍有効性及び生存期間／生存期間の増加（ＩＬＳ）の評価
マウスに５００万の細胞を接種し、３日目に薬物治療を開始した。ＢＬＩは、化合物Ｉ−Ｂの単剤療法を受けたマウスの光子カウント数は有意に減少しているが、それに対してシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）自体ではビヒクル処理した対照マウスと比較して差異が見られなかったことを実証した（図１参照）。ＢＬＩによって評価した腫瘍負荷のこれらの明らかな減少は結果的に有意な生存期間の増加につながり、ｑ７ｄで４３７ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉ−Ｂを用いて治療された群では３７％のＩＬＳが観察された。シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）は、腫瘍負荷（ＢＬＩ）又はＩＬＳによる評価では抗腫瘍活性がないことが実証された。他方では、Ａｒａ−Ｃと化合物Ｉ−Ｂとの組み合わせは、ビヒクル群又は単剤治療群と比較して統計的に有意な％ＩＬＳを誘発し、組合せにおける抗腫瘍活性の明らかな増強が実証された。これらのデータは下記表２にまとめられており、経口投与した化合物（Ａ）との比較も含まれている。

Claims (20)

1. がんの治療における逐次又は同時使用のための組み合わせ調製物として、ａ）第１の成分としてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤；及びｂ）第２の成分としてシタラビンを含む、医薬製品。
2. ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤が、式（Ｉ）の化合物
   
   （Ｉ）
   ［式中、ｎは３から７０である］から選択される、請求項１に記載の医薬製品。
3. ｎは３０から６０である、請求項２に記載の医薬製品。
4. ｎは４０から５０である、請求項２に記載の医薬製品。
5. ｎは、４１、４２、４３、４４、４６、４７、４８又は４９である、請求項２に記載の医薬製品。
6. ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤が、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ，平均ＭＷ，〜２０００）である、請求項１に記載の医薬製品。
7. ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の阻害剤が、４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ，平均ＭＷ，〜２２００）である、請求項１に記載の医薬製品。
8. 急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療のための請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬製品。
9. 固形腫瘍の治療のための請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬製品。
10. がんの治療方法であって、有効量の請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬製品を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
11. がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１０に記載の方法。
12. がんが固形腫瘍である、請求項１０に記載の方法。
13. がんの治療、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療のための医薬の製造のための請求項２から７のいずれか一項に記載の化合物及びシタラビンの使用。
14. ａ）第１の成分として請求項２から７のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物；及びｂ）第２の成分として化合物シタラビンを含む、医薬製品であって、両成分は、がんの治療における同時又は逐次使用のための組み合わせ調製物として、静脈内に投与され；式（Ｉ）の化合物の用量が、約２００から約１６００ｍｇ／日の範囲内の化合物（Ａ）：
    
    （Ａ）、
    の用量に対応することを特徴とする、医薬製品。
15. 式（Ｉ）の化合物が、化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ，平均ＭＷ，〜２０００）である、請求項１４に記載の医薬製品。
16. 式（Ｉ）の化合物が、化合物４−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−３−（３−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−４−シアノ−５−（２，２−ジメチル−プロピル）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−３−メトキシ−安息香酸 １−ｍＰＥＧ−カルボニルオキシ−エチルエステル（ｍＰＥＧ，平均ＭＷ，〜２２００）である、請求項１４に記載の医薬製品。
17. 式（Ｉ）の化合物が、２８日間の治療サイクルの１から５日目に投与され、その後、２３日間を休止期間とする、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の医薬製品。
18. 式（Ｉ）の化合物が１日に１回（ｑｄ）又は１日に２回（ＢＩＤ）投与される、請求項１７に記載の医薬製品。
19. がんが急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の医薬製品。
20. 実質的に本明細書に記載の通りである新規の製品、方法及び使用。