JP2018108081A5

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Publication number: JP2018108081A5
Application number: JP2018018375A
Authority: JP
Filing date: 2018-02-05
Publication date: 2019-06-20
Anticipated expiration: 2029-06-25

Description

４つの免疫化戦略を以下のように行った。
Ａ．コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長ヒトＶＥＧＦＡ_１６５を用いるウサギのプレ免疫化（ｐｒｅ−ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）。ａａ長１６−_ＫＦＭ _ＤＶＹ _ＱＲＳＹ _ＣＨＰ−２８（下線：受容体相互作用、二重下線、ウサギにおける不一致、Ｃｙｓは結晶構造によるジスルフィド結合に関与する）由来のペプチドでの第２追加免疫。ペプチド配列中に含まれるＣｙｓは、ＫＬＨとのカップリングに使用できるので、したがって、遊離Ｃｙｓとして露出しない。最終ペプチドは、ＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹ−Ｃｙｓ−ＫＬＨと思われる。
Ｂ．コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長ＶＥＧＦＡ_１６５を用いるマウスのプレ免疫化。ａａ長１６−_ＫＦＭ _ＤＶＹ _ＱＲＳＹ _ＣＨＰ−２８（Ｃｙｓは、結晶構造によるジスルフィド結合に関与する）由来のペプチドでの第２追加免疫。ペプチド配列中に含まれるＣｙｓは、ＫＬＨとのカップリングに使用できるので、したがって、遊離Ｃｙｓとして露出しない。最終ペプチドは、以下と思われる：ＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹ−Ｃｙｓ−ＫＬＨ。
Ｃ．ａａ長１６−_ＫＦＭ _ＤＶＹ _ＱＲＳＹＣ_ＨＰ−２８（最終ペプチド：ＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹ−Ｃｙｓ−ＫＬＨ）由来のペプチドを用いるウサギ／マウスのプレ免疫化。コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長ＶＥＧＦＡ_１６５を用いる第２追加免疫。

Claims

可変重鎖（ＶＨ）と可変軽鎖（ＶＬ）を含むヒト化抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、
該ＶＨが、それぞれ配列番号８、配列番号２０および配列番号３２のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３配列を含み、該ＶＬが、配列番号４３、配列番号５５および配列番号６６のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３配列を含み、
該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、１×１０ ^−９Ｍ以下の親和性（Ｋ _ｄ）でヒトＶＥＧＦ _１６５に結合する、ヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、またはＦ（ａｂ’） _２フラグメントである、請求項１に記載の抗原結合性フラグメント。
請求項１に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
局所投与、眼内投与、経口投与、経鼻投与、直腸投与、または、非経口投与のために処方される、請求項３に記載の組成物。
配列番号１６４の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域フレームワーク配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
前記重鎖可変領域フレームワークが、配列番号１６４と１００％の同一性を有する配列を含む、請求項５に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
配列番号８７の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域フレームワーク配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
前記軽鎖可変領域フレームワークが、配列番号８７と１００％の同一性を有する配列を含む、請求項７に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
ヒトＶＥＧＦ媒介性疾患を有する被験体において、ヒトＶＥＧＦ媒介性の内皮細胞増殖および血管性透過を阻害するための組成物であって、請求項１に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメントを含み、その結果、該被験体がＶＥＧＦ媒介性疾患について処置される、組成物。
可変重鎖（ＶＨ）と可変軽鎖（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする単離された核酸分子であって、以下：
ａ．該ＶＨが、配列番号２、配列番号１５および配列番号２７からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号３８、配列番号５０および配列番号６１からなる群のＣＤＲを含む；
ｂ．該ＶＨが、配列番号３、配列番号１５および配列番号２７からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号３８、配列番号５０および配列番号６１からなる群のＣＤＲを含む；
ｃ．該ＶＨが、配列番号４、配列番号１６、配列番号２８からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号３９、配列番号５１および配列番号６２からなる群のＣＤＲを含む；
ｄ．該ＶＨが、配列番号５、配列番号１７、配列番号２９からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４０、配列番号５２および配列番号６３からなる群のＣＤＲを含む；
ｅ．該ＶＨが、配列番号６、配列番号１８および配列番号３０からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４１、配列番号５３および配列番号６４からなる群のＣＤＲを含む；
ｆ．該ＶＨが、配列番号７、配列番号１９および配列番号３１からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４２、配列番号５４および配列番号６５からなる群のＣＤＲを含む；
ｇ．該ＶＨが、配列番号８、配列番号２０および配列番号３２からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４３、配列番号５５および配列番号６６からなる群のＣＤＲを含む；
ｈ．該ＶＨが、配列番号９、配列番号２１および配列番号３３からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４４、配列番号５６および配列番号６７からなる群のＣＤＲを含む；
ｉ．該ＶＨが、配列番号１０、配列番号２２および配列番号３４からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４５、配列番号５７および配列番号６８からなる群のＣＤＲを含む；
ｊ．該ＶＨが、（ｉ）配列番号１１、配列番号２３および配列番号３５からなる群；（ｉｉ）配列番号１１、配列番号２５および配列番号３５からなる群；（ｉｉｉ）配列番号１３、配列番号２３および配列番号３５からなる群；もしくは（ｉｖ）配列番号１３、配列番号２５および配列番号３５からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、配列番号４６、配列番号５８および配列番号６９からなる群のＣＤＲを含む；または
ｋ．該ＶＨが、配列番号１２、配列番号２４および配列番号３６からなる群のＣＤＲを含み、該ＶＬが、（ｉ）配列番号４７、配列番号５９および配列番号７０からなる群のＣＤＲ；もしくは（ｉｉ）配列番号４８、配列番号５９および配列番号７０からなる群のＣＤＲを含む、
単離された核酸分子。
前記抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１６４の配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖を含み、該抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号８７の配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む、請求項１０に記載の単離された核酸分子。
前記可変重鎖が配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、前記可変軽鎖が配列番号８７のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された核酸分子。
前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域が、配列番号１８１の配列によって連結される、請求項１２に記載の単離された核酸分子。
請求項１０に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
請求項１１に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
請求項１２に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
請求項１４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
請求項１５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
請求項１６に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
前記抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号１６４の配列を含む可変重鎖を含み、該抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号８７の配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域を連結する配列番号１８１の配列を有するリンカー配列をさらに含む、請求項２０に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
単鎖抗体（ｓｃＦｖ）である、請求項２１に記載の抗原結合性フラグメント。
前記抗原結合性フラグメントを発現する発現ベクターに存在する開始コドンに由来するＮ末端メチオニンを含む、請求項２２に記載の抗原結合性フラグメント。
前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、１×１０ ^−１０Ｍ以下の親和性（Ｋ _ｄ）でヒトＶＥＧＦ _１６５に結合する、請求項１、５、６、７、８、２０、２１、２２または２３に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
請求項２４に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。