JP2018145204A - チピラシル塩酸塩の安定形結晶及びその結晶化方法 - Google Patents

Abstract

【課題】医薬品の有効成分として有用なチピラシル塩酸塩の安定形結晶を提供すること。
【解決手段】粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩の結晶、及び、粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩の結晶。
【選択図】なし

Description

本発明は、優れた保存安定性を有し、医薬品の有効成分として有用なチピラシル塩酸塩の安定形結晶及びその結晶化方法に関する。

一般的に、医薬品の有効活性成分として化合物が使用されるとき、品質を安定に保持するために及び／又は保管管理を容易にするために、化合物の化学的及び物理学的な安定性が必要である。このため、得られた化合物は安定形結晶であることが好ましく、通常、医薬品用の原薬としては最安定形結晶が選択される例が多い。また、ＩＣＨ（日米ＥＵ医薬品規制調和国際会議）ガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインでは、各種溶媒の使用可否及びその許容量が勧告されている。医薬品の製造に用いられる溶媒は毒性を有していることがあり、安全性の観点から、製造工程で残留してしまう溶媒はできるだけ少ないことが望ましい。さらに、医薬品は、その製造工程において静電気を帯びることがある。帯電した医薬品は製造機械や分包装置等に付着してしまい、歩留まりの悪化や均等に包装できないといった問題が発生するため、帯電性の低い医薬品が好ましい。

ところで、特許文献１には、ウラシル誘導体の一つとして、下記式（１）
で表されるチピラシル塩酸塩（化学名：５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩、以下、「ＴＰＩ」とも称す。また、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンを「チピラシル」とも称す。）が、ヒト由来のチミジンホスホリラーゼ阻害作用を有し、トリフルリジン（以下、「ＦＴＤ」とも称す。）の抗腫瘍効果増強作用を有することが記載されている。現在、ＦＴＤとＴＰＩをモル比１：０．５で配合した抗腫瘍剤「ＴＡＳ−１０２」は経口投与可能な製剤として開発中であり、日本では進行・再発の結腸直腸癌の治療剤として承認されている（非特許文献１及び２）。

チピラシル塩酸塩の製造方法として、５−クロロ−６−クロロメチルウラシル、２−イミノピロリジン及びナトリウムエトキシドのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を室温下１４時間攪拌後、晶出物を濾取し水に懸濁、酢酸で中和後、不溶物を濾取、１Ｎ−塩酸に溶解、活性炭を加えて濾過後、濾液を減圧下濃縮し、得られた残渣をエタノールで洗浄、濾取することにより、一塩酸塩・１／１０水和物として得る方法が報告されている（特許文献１）。また、２−イミノピロリジン塩酸塩、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）及び５−クロロ−６−（クロロメチル）ピリミジン−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）−ジオンをメタノール中で反応し得られた沈殿物を２Ｎ−塩酸に９０℃で加熱溶解した後、その反応液にエタノールを加え室温で放置することで白色結晶を得る方法が報告されている（非特許文献３）。しかしながら、これら方法で得られた白色結晶は、後記する結晶ＩＩＩを含む混合結晶であることが後日判明した。

以上のように、無水形態で高純度なチピラシル塩酸塩の安定形結晶を再現性よく得る方法は現在のところ知られていない。

国際公開ＷＯ９６／３０３４６号公報

Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２５ ： ５７１−５７８， ２００４ Ｉｎｖｅｓｔ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ ２６（５）： ４４５−５４， Ｏｃｔ ２００８． Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １２ （２００４） ３４４３−３４５０

本発明は医薬品の有効成分として有用なチピラシル塩酸塩の安定形結晶を提供することを目的とする。

発明を解決するための手段

本発明者らは、鋭意研究した結果、チピラシル塩酸塩には３種の結晶形（結晶Ｉ、結晶ＩＩ、結晶ＩＩＩ）が存在し、そのうち結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩは結晶ＩＩより保存安定性に優れていること、結晶Ｉは結晶ＩＩＩより残留溶媒が少なく医薬品として安全であり且つ帯電電荷量が少なく取扱いしやすいこと、さらに、溶媒の種類、温度、濃度、冷却放置時間、撹拌時間及び撹拌速度等極めて多数の組み合わせ条件の設定を行い、試行錯誤の実験を遂行することにより、特定の条件下において純度の高い結晶Ｉを有利に得る製造方法を見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、以下の（１）〜（１４）に係るものである。
（１）粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩の結晶。
（２）粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°にピークを認める上記（１）に記載の結晶。
（３）示差熱−熱重量同時測定により決定した吸熱ピークが２６２℃付近である、上記（１）又は（２）に記載の結晶。
（４）単結晶解析による結晶データが以下に示される、上記（１）乃至（３）のいずれかに記載の結晶。
晶系：単斜晶系
空間群：Ｐ２_１／ｎ（Ｎｏ．１４）
格子定数：ａ＝１１．６００６（９）Å
ｂ＝１０．３１０６（１１）Å
ｃ＝１０．３０３６（１０）Å
α＝９０°
β＝１０１．９５１（７）°
γ＝９０°
単位格子の体積：１２０５．７（２）Å^３
（５）結晶が無水形態である上記（１）乃至（４）のいずれかに記載の結晶。
（６）結晶の純度が９０質量％以上である上記（１）乃至（５）のいずれかに記載の結晶。
（７）４０℃で６ヶ月保存する安定性試験後の測定値として、粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める上記（１）乃至（６）のいずれかに記載の結晶。
（８）粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩の結晶。
（９）粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°にピークを認める上記（８）に記載の結晶。
（１０）示差熱−熱重量同時測定により決定した吸熱ピークが２４５℃付近である、上記（８）又は（９）に記載の結晶。
（１１）単結晶解析による結晶データが以下に示される、上記（８）乃至（１０）のいずれかに記載の結晶。
晶系：単斜晶系
空間群：Ｐ２_１
格子定数：ａ＝１０．３２２１（１４）Å
ｂ＝９．８６３４（１３）Å
ｃ＝１１．６６４３（１６）Å
α＝９０°
β＝１００．３１７°
γ＝９０°
単位格子の体積：１１６９．５（３）Å^３
（１２）結晶が無水形態である上記（８）乃至（１１）のいずれかに記載の結晶。
（１３）５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩を水−エタノール混合溶媒にて加熱溶解し、４０℃以上で晶析し、その後冷却することを特徴とする、上記（１）〜（７）のいずれかに記載の結晶の製造方法。
（１４）上記（１）〜（１２）のいずれか１項記載の結晶及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。

本発明のチピラシル塩酸塩の結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩは、優れた保存安定性を有しているので、例えば純度、取り扱い性（より低い吸湿性）、流動性、粉砕性及び／又は品質管理性等の観点から、他の結晶形態と比較して優れており、製剤化に適した結晶として有用である。
本発明の結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩは、上記した本発明特有の顕著な保存安定性はもちろん、熱、光、酸素、湿気又は他の分子（例えばＦＴＤ）との接触に対しても優れた安定性を具有する。又さらに本発明の結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩは、濾過性、乾燥性、流動性に優れていて工業的に有利に製造できる。
また、本発明の結晶Ｉは残留溶媒がＩＣＨ（日米ＥＵ医薬品規制調和国際会議）ガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインで定められた基準値以下であり医薬品として安全である。さらに結晶Ｉは、結晶ＩＩＩと比較して帯電電荷量が少なく、医薬品の製造や包装において取扱いがしやすい。

図１は結晶Ｉの粉末Ｘ線回折チャートを示す。 図２は結晶ＩＩの粉末Ｘ線回折チャートを示す。 図３は結晶ＩＩＩの粉末Ｘ線回折チャートを示す。

本発明の結晶Ｉを無水形態で高純度に製造することは、チピラシル塩酸塩（以下、「化合物（１）」ともいう。）を水−エタノール混合溶媒にて加熱溶解し、４０℃以上で晶析し、その後冷却することを特長とする方法によって可能である。

本発明結晶化方法に使用される化合物（１）としては、例えば、国際公開ＷＯ９６／３０３４６号公報に記載の方法に従って、化合物（１）のフリー体に塩酸付加することにより製造したものを使用することができる。化合物（１）を合成後、結晶として取り出さないままのもの、又は一旦結晶（粗結晶）として取り出したものを使用することが可能であるが、更に結晶純度を向上させるために、一旦結晶として取り出したものを使用することが好ましい。結晶としては、結晶Ｉ、結晶ＩＩ又は結晶ＩＩＩのいずれも使用することが可能である。

水−エタノール混合溶媒の混合比は適宜選択できるが、好ましくは水：エタノール（ｖ／ｖ）が１：１〜１０であり、より好ましくは１：２〜６であり、特に好ましくは１：４である。水−エタノール混合溶媒の利用に際して、化合物（１）を水に加熱溶解した溶解液を、上述の比の量になるように設定したエタノールに加えることが好ましい。化合物（１）の濃度は、特に限定されないが、水−エタノール混合溶液中、１〜１５（ｗ／ｖ）％であるのが好ましい。

結晶Ｉを高純度に製造するためには、化合物（１）を溶解した水−エタノール混合溶液の晶析時の温度コントロールが極めて重要である。晶析時の溶液温度としては４０℃以上であり、好ましくは４４〜６３℃である。晶析時間は適宜設定でき、温度が低い場合は長く、高い場合は短く設定できる。例えば、４４〜５０℃では１．５時間以上、５０〜６３℃では０．５時間以上とすることが可能であるが、製造効率の観点から、４４〜５０℃で１．５〜７時間（より好ましくは１．５〜３時間）、５０〜６３℃で０．５〜７時間（より好ましくは０．５〜３時間）保持するのがより好ましい。なお、４０℃以下では、長期保存安定性が低い結晶ＩＩが晶析し、６３℃以上では化合物（１）の分解物が増加するため、効率的に不純物の少ない結晶Ｉを製造するためには、６３℃以上の温度は好ましくない。

結晶化を促すために種晶として適当量の化合物（１）の結晶Ｉ又は結晶Ｉを含む混合結晶を加えてもよい。加える種晶は、溶媒量の０．０１〜５（ｗ／ｖ）％であり、好ましくは０．０３〜１（ｗ／ｖ）％である。この結晶Ｉを含む混合結晶とは、結晶Ｉの含有量が２５％以上である。また、晶析時間の短縮と粒子径のコントロールのために攪拌しながら晶析させてもよい。

即ち、本発明者らは化合物（１）の結晶Ｉの製造について結晶Ｉ生成に影響を与えるかもしれない、例えば、ｐＨ、濃度、温度、撹拌時間等の多数の要素についての組合せについて試行錯誤を繰り返した結果、下記の方法が工程管理、所要時間、結晶の純度、再現性等の点で特に工業的に好ましいことを見出した。もちろん種晶の使用を必須としない。好ましい結晶Ｉの製造方法について詳述すると、化合物（１）の結晶を水に加熱溶解し、水：エタノール（ｖ／ｖ）が１：１〜１０となるよう溶解液をエタノールに加えて、４４〜６３℃以上で攪拌し、その後冷却することにより製造する方法であり；更に好ましくは化合物（１）の結晶を水に加熱溶解し、水：エタノール（ｖ／ｖ）が１：２〜６となるよう溶解液をエタノールに加えて、４４〜５０℃で１．５〜７時間或いは５０〜６３℃で０．５〜７時間攪拌し、その後０．５時間以上冷却することにより結晶Ｉを採取することによって製造することができる。上記の結晶化方法により、無水状態で高純度の化合物（１）の結晶Ｉを効率的に偶然に支配されることなく製造することができる。一般的に、良好な新規結晶を得ることは、多くの努力にも関わらず偶然によらねば達成できないとすることが化学分野の常識であることが付言される。

また、化合物（１）の結晶ＩＩＩは、実施例２に従って、高純度の結晶ＩＩＩとして製造することができる。
本発明において「高純度」とは、化合物（１）の結晶の少なくとも９０、好ましくは９５、より好ましくは９９重量％が、本発明の結晶であることを意味する。

本発明において「冷却」とは、溶液の温度を４０℃以下に保つことであり、好ましくは１５℃以下に保つことを意味する。好ましい冷却時間は、０．５時間以上であり、より好ましくは１時間以上である。

析出した結晶は、例えば、ろ過、有機溶剤による洗浄、減圧乾燥等の公知の分離精製手段によって、前記溶解溶液や混合溶液から単離精製することができる。洗浄に使用される有機溶剤としては、例えば、低級アルコール、アセトン、アセトニトリル等が挙げられる。

このようにして得られた本発明の結晶（結晶Ｉ）の粉末Ｘ線回折パターンは、図１に示すように、回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°、１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°に特徴的なピークが認められる。よって、本発明の結晶（結晶Ｉ）は 粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認めるチピラシル塩酸塩の結晶であり、好ましくは粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる３つ以上のピークを認めるチピラシル塩酸塩の結晶であり、特に好ましくは粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°にピークを認めるチピラシル塩酸塩の結晶である。また、示差熱−熱重量同時測定（ＴＧ／ＤＴＡ）の結果では、２６２℃付近に吸熱ピークを示す。

これに対し、結晶ＩＩの粉末Ｘ線回折パターンは、図２に示すように、回折角（２θ±０．１°）として６．５°、２０．６°、２５．５°、２６．１°、２７．０°及び３０．２°に特徴的なピークが認められる。また、ＴＧ／ＤＴＡの結果では、明確な吸熱ピークは示さない。

結晶ＩＩＩの粉末Ｘ線回折パターンは、図３に示すように、粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°に特徴的なピークが認められる。よって、本発明の結晶（結晶ＩＩＩ）は 粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認めるチピラシル塩酸塩の結晶であり、好ましくは粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°からなる群から選ばれる３つ以上のピークを認めるチピラシル塩酸塩の結晶であり、特に好ましくは粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°にピークを認めるチピラシル塩酸塩の結晶である。また、ＴＧ／ＤＴＡの結果では、２４５℃付近に吸熱ピークを示す。
粉末Ｘ線回折スペクトルにおけるピーク値は、測定機器により、もしくはピークの読み取り条件等の測定条件により、多少の誤差を生じることがある。本明細書においてピーク値は、±０．２°程度の範囲で測定誤差を有し得うる。
ＴＧ／ＤＴＡにおいて、測定される吸熱ピーク（ピークトップ値）は、１分あたりの昇温の幅や試料の純度等により測定温度が変化することがある。本明細書において「付近」という用語は±５．０℃を意味する。

本発明の結晶は、保存安定性が非常に高く、品質管理上も有利であり、取り扱い性も優れた結晶である。特に、後記実施例に示すように、結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩは、高温高湿条件下で長期間保管しても、総類縁物質含量は殆どなく、結晶形変化も見られない。これに対し、結晶ＩＩは、長期保存安定性が悪く医薬品として利用するには問題があり、好ましくない。また、本発明の結晶Ｉは、残留溶媒の少なさ及び帯電電荷量の少なさの観点から、結晶ＩＩＩよりも優れている。後記実施例に示すように、結晶ＩＩＩは、製造で用いた溶媒がＩＣＨガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインで定められた基準値以上に残留しており、医薬品として好ましくない。一方、結晶Ｉは残留溶媒が上記基準値以下であり、安全性が高く医薬品として好ましい。また、後記実施例に示すように、結晶Ｉは、結晶ＩＩＩと比較して帯電電荷量が少なく、医薬品の製造、包装又は使用において、製造装置や包装への付着が少なく、製造及び取扱いが容易である。

本発明の結晶は、粉砕するかまたは粉砕することなく、種々の形態の医薬組成物、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、ドライシロップ剤等の経口剤、坐剤、吸入剤、点鼻剤、軟膏剤、硬膏剤、エアゾール剤等の外用剤、注射剤に加工することができるが、経口剤に利用することが好ましい。これらの医薬組成物は、薬学的に許容される担体を用いて当業者の公知慣用の製剤方法により製造できる。経口用固形製剤を調製する場合は、有効成分に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、ドライシロップ剤、カプセル剤等を製造することができる。経口液状製剤を調製する場合には、有効成分に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により、内服液剤、シロップ剤等を製造することができる。注射剤を調製する場合には、有効成分にｐＨ 調整剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により、皮下、筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができる。直腸坐剤を調製する場合には、有効成分に賦形剤、さらに必要に応じて界面活性剤等を加えた後、常法により坐剤を製造することができる。軟膏剤、例えばペースト、クリーム及びゲルの形態に調製する際には、通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。基剤として例えば白色ワセリン、パラフィン、グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト等を使用できる。保存剤としては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が使用できる。貼付剤を製造する場合には、通常の支持体に上記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すればよい。支持体としては、綿、スフ、化学繊維からなる織布、不織布や軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるいは発泡体シートが適当である。

これらの医薬組成物は、トリフルリジン（ＦＴＤ）の抗腫瘍効果増強剤、化学療法に起因する副作用軽減剤、抗ＨＩＶ剤、炎症性腸疾患治療薬、放射線治療増強剤、として有用である（ＷＯ９６／３０３４６号、ＷＯ００／５６３３７号、ＷＯ０１／３４１６２号、ＷＯ０７／１２２８１２号、ＷＯ２００８／００１５０２号）。

上記の医薬組成物中に配合されるべき結晶Ｉの量はこれを適用すべき患者の症状により或いはその剤型等により一定でないが、一般に投与単位形態当り経口剤では約５〜１,０００ｍｇ、注射剤では約０．１〜５００ｍｇ、坐剤又は外用剤では約５〜１,０００ｍｇとするのが望ましい。又、上記医薬組成物における結晶Ｉの１日当りの投与量も症状、投与ルート、患者の年齢等に応じ一概に決定できず医師の処方により決定される、通常約０．１〜５,０００ｍｇとするのが好ましい。

以下に、実施例、参考例及び試験例を挙げ本発明の製造方法を具体的に説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。

なお、粉末Ｘ線回折データは、試験物質適量を必要に応じてメノウ製乳鉢で軽く粉砕した後、次の試験条件に従い測定を行った。
ターゲット：Ｃｕ
Ｘ線菅電流：４０ｍＡ
Ｘ線菅電圧：４５ｋＶ
走査範囲 ：２θ＝３．０〜４０．０°
ステップ ：２θ＝０．０１６７１
平均時間／ステップ：１０．１６０ｓ
可変発散スリット：照射長＝１５ｍｍ

また、示差熱−熱重量同時測定（ＴＧ／ＤＴＡ）は、試験物質約１０ｍｇにつき、次の試験条件に従い試験を行った。
試料容器：アルミニウム製
昇温速度：２５℃で５分間保持し、２５〜３００℃まで１０℃／分で昇温
雰囲気ガス：窒素（１００ｍｌ／分）
対照物質：α−アルミナ
また、赤外吸収スペクトル（ＩＲ）は、次の試験条件に従い測定を行った。
積算回数 ：２０回
分解能 ：２ｃｍ^−１
透過範囲 ：０〜１００％
測定法 ：ＫＢｒ錠剤法

実施例１ チピラシル塩酸塩の結晶Ｉの製造
（１）ＷＯ９６／３０３４６号公報記載の方法に従って得られたチピラシル９５．１ｇを６Ｎ−塩酸１００ｍｌと水２２０ｍｌとの混合液に加熱溶解させ、６０℃付近で熱時濾過後、エタノール１２８０ｍｌを加え、混合物を加温により２時間６０℃付近に維持した後、氷冷し、生じた結晶を濾取し、無水形態の標記結晶を８９．３ｇ（回収率８２％）得た。得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、図１と同様に、回折角（２θ±０．１°）として１１．６°、１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°に特徴的なピークを示した。また、得られた結晶における^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６、テトラメチルシラン（ＴＭＳ））では、エタノールの残留はＩＣＨガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインで定められた基準値（５０００ｐｐｍ）以下であった。

（２）ＷＯ９６／３０３４６号公報記載の方法に従って得られたチピラシル塩酸塩を水に加熱溶解させ、６０℃付近で熱時濾過後、エタノール及び上記（１）で得られた種晶（結晶Ｉ）を加え、加温して２時間６０℃付近に維持した後、生じた結晶を濾取し、無水形態の標記結晶を得た。得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、図１に示すように、回折角（２θ±０．１°）として、１１．６°、１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°に特徴的なピークを示した。また、ＴＧ／ＤＴＡの結果、２６２．２℃に吸熱ピークを示した。

実施例２ チピラシル塩酸塩の結晶ＩＩＩの製造
（１）ＷＯ９６／３０３４６号公報記載の方法に従って得られたチピラシル２２．０ｇを６Ｎ−塩酸２０ｍｌ及び水２３０ｍｌに溶解させ、濾過後濃縮し室温でエタノール１００ｍｌ加え生じた結晶を濾取し、標記結晶１９．７ｇ（回収率７８％） 得た。得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、図３と同様に、回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２° に特徴的なピークを示した。また、得られた結晶における^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６、ＴＭＳ）では、１６０００ｐｐｍのエタノールが確認された。この値は、ＩＣＨガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインで定められたエタノールの基準値（５０００ｐｐｍ）を上回るものである。

（２）ＷＯ９６／３０３４６号公報記載の方法に従って得られたチピラシルをメタノールに溶解させ、濃塩酸を投入した。６４℃で１時間攪拌後、３０℃に冷却、生じた結晶を濾取し、メタノールで洗浄することにより、標記結晶を得た。得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、図３に示すように、回折角（２θ±０．１°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．３°及び３１．３° に特徴的なピークを示した。また、ＴＧ／ＤＴＡの結果、２４５．１℃に吸熱ピークを示した。 また、得られた結晶におけるガスクロマトグラフィー（ヘッドスペース法）では、４９８６２ｐｐｍのメタノールが確認された。この値は、ＩＣＨガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインで定められたメタノールの濃度限度値（３０００ｐｐｍ）を上回るものである。

参考例１ チピラシル塩酸塩の結晶ＩＩの製造
（１）ＷＯ９６／３０３４６号公報記載の方法に従って得られたチピラシル６１．５ｇを６Ｎ−塩酸５０ｍｌと水５００ｍｌとの混合液に溶解させ、活性炭処理、濾過後濃縮し室温でエタノール２００ｍｌ加え濾取し、水和形態の標記結晶５７．９ｇ（回収率７７％）を得た。得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、図２と同様に回折角（２θ±０．１°）として、６．５°、２０．６°、２５．５°２６．１°、２７．０°及び３０．２° に特徴的なピークを示した。また、得られた結晶における^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ６、ＴＭＳ）では、エタノールの残留はＩＣＨガイドラインにおける医薬品の残留溶媒ガイドラインで定められた基準値（５０００ｐｐｍ）以下であった。

（２）ＷＯ９６／３０３４６号公報記載の方法に従って得られたチピラシル塩酸塩を水に加え、６０℃で溶解させた。濾過後、氷冷したエタノールに加え生じた結晶を濾取し、標記結晶を得た。得られた結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、図２に示すように、回折角（２θ±０．１°）として、６．５°、２０．６°、２５．７°、２６．２°、２７．０°及び３０．２° に特徴的なピークを示した。また、ＴＧ／ＤＴＡの結果、明確な吸熱ピークは示さなかった。

実施例３ 安定性試験
実施例１、２又は参考例１に従って得られたチピラシル塩酸塩の結晶Ｉ、結晶ＩＩ及び結晶ＩＩＩの保存安定性を４０℃、６ヶ月保存により試験した。
結果、結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩでは、粉末Ｘ線回折パターンの変化は認められず、極めて安定な結晶であることが判明した。また、結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩともに類縁物質量が少なく、６ヶ月経過後も類縁物質量の増加は認められなかった。

また、結晶ＩＩでは、粉末Ｘ線回折パターンの変化が認められ、不安定な結晶であることが判明した。

実施例４ 晶析条件検討
結晶の精製工程における晶析温度と晶析時間が、チピラシル塩酸塩の結晶形に及ぼす影響を検討した。即ち、実施例１、２又は参考例１に従って得られたチピラシル塩酸塩の結晶６０ｇを水２４０ｍｌで加熱溶解し、３分割後、エタノール３２０ｍｌ加えた後、種々の晶析温度（３２〜６３℃）及び晶析時間（０．５〜３時間）を検討し、ＩＲ及びＤＳＣ（示差走査熱量測定）を測定することにより得られた結晶形を確認した。結果を表１に示す。

結果、晶析温度が３５℃以下では、保存安定性の低い結晶ＩＩが得られた。晶析温度を４４℃以上に維持することにより、保存安定性の高い結晶Ｉを高純度に、効率的に得ることができた。

実施例５ 結晶Ｉの単結晶解析
チピラシル塩酸塩に蒸留水１ｍｌを加え溶解後、室温下エタノールを蒸気拡散で徐々に混和させた。２週間後に結晶Ｉの析出を確認した。
結晶のサイズ：０．１０×０．２０×０．２５ｍｍ
結晶の色：無色
結晶形状：板状
以下の測定条件にて測定を実施し、データ処理はリガク電気株式会社製構造解析ソフトウェアｔｅＸｓａｎ（Ｖｅｒ．２．０）を使用して実施した。
Ｘ線源：ＣｕＫα線
結晶モノクロメータ（グラファイト）使用
出力 ５０ｋＶ、１５０ｍＡ
コリメータ径：０．５ｍｍφ検出器：シンチレーションカウンターアッテネーター：Ｎｉ箔（ｆａｃｔｏｒ＝９．１５）受光スリット：水平スリット
スキャン方法：ω-２θスキャン
スキャン速度：１６．０°／ｍｉｎ（ｉｎ ｏｍｅｇａ）
最大繰り返しスキャン回数：３回（Ｉ＜１５．０σ（Ｉ））
スキャン幅：（１．５８＋０．３０ｔａｎθ）°
２θｍａｘ：１４９．９°
測定反射数：４６９７
独立な反射数：２４７４（Ｒｉｎｔ＝０．０２０）
データ補正：ローレンツ因子、偏光因子
吸収補正：Ψスキャンによる補正（補正係数：０．６４−１．００）
測定温度：１８−１９℃
標準反射の測定頻度：１５０反射毎
結晶データを以下に示す。
晶系：単斜晶系
空間群：Ｐ２_１／ｎ（Ｎｏ．１４）
格子定数：ａ＝１１．６００６（９）Å
ｂ＝１０．３１０６（１１）Å
ｃ＝１０．３０３６（１０）Å
α＝９０°
β＝１０１．９５１（７）°
γ＝９０°
単位格子の体積：１２０５．７（２）Å^３

実施例６ 結晶ＩＩＩの単結晶解析
７０℃のアルミブロック型精密恒温槽内（ＩＷＡＫＩ ＣＨＩＬＬ ＨＥＡＴＣＨＴ−１００）でチピラシル塩酸塩１９．６μｇに３００μＬのメタノール水溶液（ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ＝１／１（ｖ／ｖ））を加えて溶解させた。この溶液を室温まで徐冷した後、プロコン低温恒温器内（Ｙａｍａｔｏ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ ＩＮ６１）に２０℃で静置したところ、８日後に菱形板状結晶を得た。
結晶のサイズ：０．４５×０．４×０．１５ｍｍ
結晶形状：菱形板状
得られた単結晶をマウント用ピンに固定し、Ｘ線回折強度を測定した。結晶構造解析のための測定は、Ｂｒｕｋｅｒ社製２次元Ｘ線回折装置ＳＭＡＲＴ１０００（ＭｏＫα、５０ｋＶ；４０ｍＡ）、０．５ｍｍのコリメータを用い、室温、ωスキャン、スキャン幅０．３°、露光時間１０秒で行った。結晶構造決定はプログラムＳＨＥＬＸＬ−９７を用いて直接法で行い、構造の精密化はプログラムＳＨＥＬＸＬ−９７を用いてｆｕｌｌ−ｍａｔｒｉｘ最小二乗法で行った。

結晶データを以下に示す。
晶系：単斜晶系
空間群：Ｐ２_１
格子定数：ａ＝１０．３２２１（１４）Å
ｂ＝９．８６３４（１３）Å
ｃ＝１１．６６４３（１６）Å
α＝９０°
β＝１００．３１７°
γ＝９０°
単位格子の体積：１１６９．５（３）Å^３

実施例７ 帯電電荷量測定試験
実施例１又は２に従って得られた結晶Ｉ及び結晶ＩＩＩの帯電電荷量を空送法により測定した。帯電管（ＳＵＳ製 ２４.６φ×５００ｍｍ）の粉体供給部に結晶Ｉ又は結晶ＩＩＩを投入し１０分間放置した。流量１３０Ｌ/ｍｉｎの空気により試料を輸送し、その時の帯電管から得られる電流値から帯電電荷量を算出した(式１)。また、測定は５回行い、そのうち安定して得られた３回の結果を平均して測定値とした。結果を以下に示す。

Ｑ：帯電電荷量［Ｃ］
Ｉ：測定中の発生電流［Ａ］
ｔ：測定時間［ｔ］

表２と表３のとおり、結晶ＩＩＩは結晶Ｉよりも電荷量が３倍多く、帯電しやすいことが判明した。

Claims (14)

1. 粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩の結晶。
2. 粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°にピークを認める請求項１記載の結晶。
3. 示差熱−熱重量同時測定により決定した吸熱ピークが２６２℃付近である、請求項１又は２記載の結晶。
4. 単結晶解析による結晶データが以下に示される、請求項１乃至３のいずれかに記載の結晶。
   晶系：単斜晶系
   空間群：Ｐ２_１／ｎ（Ｎｏ．１４）
   格子定数：ａ＝１１．６００６（９）Å
   ｂ＝１０．３１０６（１１）Å
   ｃ＝１０．３０３６（１０）Å
   α＝９０°
   β＝１０１．９５１（７）°
   γ＝９０°
   単位格子の体積：１２０５．７（２）Å^３
5. 結晶が無水形態である請求項１乃至４のいずれかに記載の結晶。
6. 結晶の純度が９０質量％以上である請求項１乃至５のいずれかに記載の結晶。
7. ４０℃で６ヶ月保存する安定性試験後の測定値として、粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１１．６°，１７．２°、１７．８°、２３．３°、２７．１°及び２９．３°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める請求項１乃至６のいずれかに記載の結晶。
8. 粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°からなる群から選ばれる２つ以上のピークを認める、５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩の結晶。
9. 粉末Ｘ線回折による回折角（２θ±０．２°）として、１０．５°、１９．６°、２３．７°、２６．２°及び３１．２°にピークを認める請求項８に記載の結晶。
10. 示差熱−熱重量同時測定により決定した吸熱ピークが２４５℃付近である、請求項８又は９記載の結晶。
11. 単結晶解析による結晶データが以下に示される、請求項８乃至１０のいずれかに記載の結晶。
    晶系：単斜晶系
    空間群：Ｐ２_１
    格子定数：ａ＝１０．３２２１（１４）Å
    ｂ＝９．８６３４（１３）Å
    ｃ＝１１．６６４３（１６）Å
    α＝９０°
    β＝１００．３１７°
    γ＝９０°
    単位格子の体積：１１６９．５（３）Å^３
12. 結晶が無水形態である請求項８乃至１１のいずれかに記載の結晶。
13. ５−クロロ−６−［（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル］ピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン・一塩酸塩を溶解した水−エタノール混合溶液を、４０℃以上で晶析し、その後冷却することを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の結晶の製造方法。
14. 前記請求項１〜１２のいずれか１項記載の結晶及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。