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JP2016032481A - Method for producing dispensed liquid coating sheet - Google Patents

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JP2016032481A
JP2016032481A JP2015238714A JP2015238714A JP2016032481A JP 2016032481 A JP2016032481 A JP 2016032481A JP 2015238714 A JP2015238714 A JP 2015238714A JP 2015238714 A JP2015238714 A JP 2015238714A JP 2016032481 A JP2016032481 A JP 2016032481A
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京谷  均
達彦 岩瀬
Tatsuhiko Iwase
達彦 岩瀬
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文彦 斉藤
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累 齋藤
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琢磨 馬塲
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Mai Nozawa
麻衣 野澤
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a dispensing method which can deal with various composition systems such as a dispersed system and a highly viscous system, and can collectively form uniform thickness to desired regions, thereby can be suitably used, for example, for formation of culture layer of a microorganism culture sheet.SOLUTION: The invention relates to a method for producing a dispensing liquid coated sheet comprising transcriptionally coating the substrate surface with dispensing liquid 35 in which 20-50% of solid component is contained by discharging from a nozzle composing porous nozzle 125 so that the amount of coating is 250 g/m-1050 g/m, when a clearance h between the discharging face of the porous nozzle 125 composed of a plurality of nozzles with a pore size of 0.9-1.6 mm and the substrate surface of a substrate sheet 10 is 0.3-1.0 mm.SELECTED DRAWING: Figure 5

Description

本発明は、例えば、微生物検査を迅速に且つ正確に行うことができる微生物培養シートなどのディスペンス液塗布シートの製造方法に関する。   The present invention relates to a method for producing a dispensing liquid-coated sheet such as a microorganism culture sheet capable of performing a microorganism test quickly and accurately, for example.

微生物の存在を確認したり、微生物数を測定したりする方法としては、寒天平板混釈法がある。この方法では、培地としてあらかじめ滅菌したシャーレに形成した寒天培地を使用するため、寒天培地を高圧蒸気滅菌するためのオートクレーブや、微生物検査を無菌的に行うことができる検査室が必要となる。また、微生物のサンプリングから試料液の調製、分注、培地との混釈、培養、計数に至る微生物検査の操作には熟練を要する。そこで、高度の熟練を必要とすることなく、簡便に微生物検査を行うことができる乾燥した培養層を備える微生物培養シートの開発が進められてきた。   As a method for confirming the presence of microorganisms or measuring the number of microorganisms, there is an agar plate mixing method. In this method, since an agar medium formed in a petri dish sterilized in advance is used as a medium, an autoclave for high-pressure steam sterilization of the agar medium and a laboratory capable of performing microbial inspection aseptically are required. Moreover, skill is required for the operation of the microorganism test from the sampling of the microorganism to the preparation of the sample solution, dispensing, mixing with the medium, culture, and counting. Therefore, development of a microorganism culture sheet having a dried culture layer that can be easily tested for microorganisms without requiring a high degree of skill has been promoted.

これまで、報告されているシート状の微生物培養器としては、例えば、支持体の上部表面上に形成された水ベース接着剤組成物層と、該接着剤組成物層に付着されたゲル化剤を含む冷水溶解性粉末と、該冷水溶解性粉末を被覆するカバーシートとからなる培養器装置がある(特許文献1参照)。また、方形の粘着シート上に円形の水溶性高分子化合物層と多孔質マトリックス層とを積層し、上部に方形の透明フィルムを配設した微生物培養器がある(特許文献2参照)。   So far, as a sheet-shaped microorganism incubator reported so far, for example, a water-based adhesive composition layer formed on the upper surface of a support and a gelling agent attached to the adhesive composition layer There is an incubator device comprising a cold water-soluble powder containing a cover sheet and a cover sheet covering the cold water-soluble powder (see Patent Document 1). In addition, there is a microorganism incubator in which a circular water-soluble polymer compound layer and a porous matrix layer are laminated on a square pressure-sensitive adhesive sheet, and a square transparent film is disposed on the top (see Patent Document 2).

特許第3383304号公報Japanese Patent No. 3383304 国際公開第01/044437号International Publication No. 01/044437

このような微生物培養シートにおける乾燥した培養層の形成方法としては、微生物を適切に発育させるために培養層にある程度の厚みが必要となる点を考慮して、スクリーン印刷などの各種の印刷方式やコーティング方式が用いられている。   As a method for forming a dried culture layer in such a microorganism culture sheet, various printing methods such as screen printing, etc. are considered in consideration of the fact that a certain thickness is required for the culture layer in order to properly grow microorganisms. A coating method is used.

しかしながら、塗布する培地液が非相溶の分散系であったり、粘度が高い培地液を塗布する場合などでは、印刷方式やコーティング方式が適さない場合があり、塗布領域の平滑性が低下する場合がある。微生物培養シートにおける培養層の厚さや平滑性は検査結果に大きな影響を与えるので、測定精度の低下に繋がる。   However, if the medium to be applied is an incompatible dispersion system or a medium with a high viscosity is applied, the printing method or coating method may not be suitable, and the smoothness of the application area may be reduced. There is. The thickness and smoothness of the culture layer in the microorganism culture sheet have a great influence on the test results, leading to a decrease in measurement accuracy.

本発明は、上記問題点に鑑みてなされたものであって、微生物の発育に必要十分で、且つ、均一な厚みの培養層を備え、正確な微生物検査を行うことが可能な微生物培養シートを、精度良く、且つ、連続的に製造することができる製造方法を提供することを目的とする。   The present invention has been made in view of the above problems, and is a microorganism culture sheet that is necessary and sufficient for the growth of microorganisms, has a culture layer of uniform thickness, and can perform an accurate microorganism test. An object of the present invention is to provide a manufacturing method that can be manufactured accurately and continuously.

本発明者らは、基材シート上の所定の領域に対して、微生物の発育に必要な成分を含む培地液を多孔ノズルを用いてディスペンス(分注)し、ディスペンスの際に、ノズルと基材とのクリアランスと、培地液の表面張力と、を利用した間接転写方式を用いることで、培地液が非相溶の分散系であったり高粘度であっても、培養層の厚さや平滑性を均一にでき、かつ、塗布領域への同時ディスペンスが可能となることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には、本発明は以下のものを提供する。   The present inventors dispense a medium solution containing components necessary for the growth of microorganisms to a predetermined region on the base sheet using a porous nozzle, and at the time of dispensing, the nozzle and the base are dispensed. By using an indirect transfer method that utilizes the clearance between the medium and the surface tension of the culture medium, even if the culture medium is an incompatible dispersion or high viscosity, the thickness and smoothness of the culture layer Has been found to be uniform, and simultaneous dispensing to the coating area is possible, and the present invention has been completed. Specifically, the present invention provides the following.

(1) 孔径が0.9mm〜1.6mmのノズルで構成される多孔ノズルの吐出面と、基材面との離間距離を0.3mm〜1.0mmとして、
固形分が20%〜50%のディスペンス液を、前記多孔ノズルを構成するノズルからの塗布量が250g/m〜1050g/mとなるように吐出させ、前記基材面に転写塗布するディスペンス液塗布シートの製造方法。
(1) The separation distance between the discharge surface of the porous nozzle composed of nozzles having a hole diameter of 0.9 mm to 1.6 mm and the substrate surface is set to 0.3 mm to 1.0 mm.
The solid content of 20% to 50% of the dispensing liquid, dispensing the coating amount of the nozzle constituting the porous nozzle ejected so as to 250g / m 2 ~1050g / m 2 , to transfer coating to the substrate surface A method for producing a liquid-coated sheet.

(2) 前記ディスペンス液の粘度が100〜2000cpである請求項1記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。 (2) The method for producing a dispensing liquid-coated sheet according to claim 1, wherein the viscosity of the dispensing liquid is 100 to 2000 cp.

(3) 前記多孔ノズルを構成するノズルからの塗布量が、乾燥後で50g/m〜410g/mである請求項1又は2に記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。 (3) the coating amount of the nozzle constituting the porous nozzle, the manufacturing method of dispensing liquid coating sheet according to claim 1 or 2 is a 50g / m 2 ~410g / m 2 after drying.

(4) 前記乾燥後の厚さが100μm〜500μmである請求項3記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。 (4) The method for producing a dispensed liquid-coated sheet according to claim 3, wherein the thickness after drying is 100 μm to 500 μm.

(5) 前記ディスペンス液塗布シートが微生物培養シートであり、前記ディスペンス液が前記微生物培養シートの培養層を形成するための培地液である請求項1から4いずれか記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。 (5) The dispense liquid-coated sheet according to any one of claims 1 to 4, wherein the dispense liquid-coated sheet is a microorganism culture sheet, and the dispense liquid is a medium liquid for forming a culture layer of the microorganism culture sheet. Method.

本発明の製造方法によれば、例えば、微生物培養シートの製造の際に微生物の発育に必要十分で、且つ、均一な厚みの培養層を形成できるので、コロニーが滲み難く、また、コロニーの形成速度に差が生じ難くなり、コロニー数の計測等の微生物検査を正確に行うことが可能となる。   According to the production method of the present invention, for example, when a microorganism culture sheet is produced, it is necessary and sufficient for the growth of microorganisms, and a culture layer having a uniform thickness can be formed. Differences in speed are unlikely to occur, and it is possible to accurately perform microbial tests such as counting the number of colonies.

本発明の製法に好適に使用できるディスペンス装置を、微生物培養シートの製造例に適用した一例を示す全体概略構成図である。It is a whole schematic block diagram which shows an example which applied the dispensing apparatus which can be used conveniently for the manufacturing method of this invention to the manufacture example of a microorganism culture sheet. 図1におけるディスペンス部の全体動作を示す概略図である。It is the schematic which shows the whole operation | movement of the dispensing part in FIG. 図1における上下ディスペンス部可動手段の動作を示す概略図である。It is the schematic which shows operation | movement of the up-and-down dispense part moving means in FIG. 図1における多孔ノズルの吐出孔を示す図である。It is a figure which shows the discharge hole of the porous nozzle in FIG. 図1における上下ディスペンス部可動手段の動作の詳細を示す概略図である。It is the schematic which shows the detail of operation | movement of the upper-and-lower dispense part moving means in FIG. 微生物培養シートの製造方法を順次示す平面図である。It is a top view which shows the manufacturing method of a microorganism culture sheet | seat sequentially. 微生物培養シートの部分透視平面図(A)及び断面図(B)である。It is the partial perspective top view (A) and sectional drawing (B) of a microorganism culture sheet. 実施例における塗布圧力(吐出圧)と塗布量との関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the application pressure (discharge pressure) and the application quantity in an Example.

以下、本発明の具体的な実施形態について、本発明におけるディスペンス液塗布シートの一例である微生物培養シートの製造例を一例として挙げて詳細に説明するが、本発明は、以下の実施形態に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。   Hereinafter, specific embodiments of the present invention will be described in detail with reference to an example of production of a microorganism culture sheet, which is an example of a dispensing liquid-coated sheet in the present invention, but the present invention is not limited to the following embodiments. The present invention is not limited, and can be implemented with appropriate modifications within the scope of the object of the present invention.

<ディスペンス装置の構成>
[ディスペンス装置の全体構成]
図1に示すように、このディスペンス装置100は、基材シート10上の所定の領域に、培養層30を形成するための培地液となるディスペンス液35を注入するための装置である。このディスペンス装置100は、ディスペンス液35を供給するディスペンス液供給手段110と、このディスペンス液供給手段110に接続され末端に多孔ノズル125を有するディスペンス部120と、このディスペンス部120を基材シート10の水平面に対して上下方向(図1におけるZ方向)に移動可能なZ方向可動手段130と、ディスペンス部120を基材シート10の水平面方向の一方向(図1におけるX方向)に移動可能なX方向可動手段140と、ディスペンス部120を基材シート10の水平面方向の他方向(図1におけるY方向)に移動可能なY方向可動手段150と、を備える。
<Configuration of dispensing device>
[Overall configuration of dispensing device]
As shown in FIG. 1, the dispensing apparatus 100 is an apparatus for injecting a dispensing liquid 35 serving as a medium for forming the culture layer 30 into a predetermined region on the base sheet 10. The dispensing apparatus 100 includes a dispensing liquid supply unit 110 that supplies the dispensing liquid 35, a dispensing unit 120 that is connected to the dispensing liquid supply unit 110 and has a porous nozzle 125 at the end thereof, and the dispensing unit 120 is connected to the base sheet 10. A Z-direction movable means 130 that can move in the vertical direction (Z direction in FIG. 1) relative to the horizontal plane, and an X that can move the dispensing unit 120 in one direction (X direction in FIG. 1) in the horizontal plane direction of the base sheet 10. The direction movable means 140 and the Y direction movable means 150 capable of moving the dispensing unit 120 in the other direction (Y direction in FIG. 1) in the horizontal direction of the base sheet 10 are provided.

[ディスペンス液供給手段]
この実施形態におけるディスペンス液供給手段110は、ディスペンス液35を収容可能な中空筒状の容器本体111と、バルブ117と吐出圧制御装置116とからなる吐出圧制御システム118とから主に構成されている。
[Dispensing liquid supply means]
The dispense liquid supply means 110 in this embodiment is mainly composed of a hollow cylindrical container main body 111 that can store the dispense liquid 35, and a discharge pressure control system 118 including a valve 117 and a discharge pressure control device 116. Yes.

容器本体111内には、容器内部のディスペンス液35を攪拌するための攪拌羽根113が略中央部の底部に配置されており、攪拌羽根113を回転させるための回転軸がモーター112に接続されている。   In the container main body 111, a stirring blade 113 for stirring the dispensing liquid 35 inside the container is disposed at the bottom of the substantially central portion, and a rotating shaft for rotating the stirring blade 113 is connected to the motor 112. Yes.

容器本体111とバルブ117とは液送可能な中空チューブ114を介して接続されており、バルブ117とディスペンス部120とは同じく液送可能な中空チューブ115を介して接続されている。   The container main body 111 and the valve 117 are connected via a hollow tube 114 capable of liquid feeding, and the valve 117 and the dispensing unit 120 are connected via a hollow tube 115 capable of liquid feeding similarly.

吐出圧制御システム118を構成する一例であるバルブ117と吐出圧制御装置116は、いずれも公知のものが使用でき特に限定されない。また、吐出圧制御システム118は必ずしも圧力制御に限定されず、例えば流量計量式の流量制御であってもよく、容量計量式の容量制御であってもよい。   As the valve 117 and the discharge pressure control device 116, which are examples of the discharge pressure control system 118, any known one can be used and is not particularly limited. Further, the discharge pressure control system 118 is not necessarily limited to the pressure control, and may be, for example, a flow rate measurement type flow rate control or a capacity measurement type capacity control.

[ディスペンス部]
中空チューブ115の他端が接続されるディスペンス部120の先端には、多孔ノズル125が配置されている。この多孔ノズル125は、図4に示すように吐出面が全体として円形をなしており、吐出面には多数の吐出孔Kが形成されている。ノズルの吐出孔は、各々が等間隔で配置されていてもよいし、部分的に密に配置されていてもよい。本実施形態では、多孔ノズルの吐出孔Kの配置密度は、培養層30の外周付近に該当する箇所で部分的に高くなっている。このような態様によれば、培養層30の外周に枠層20を形成した場合に、枠層20と培養層30との間に隙間なく培地液を拡げることができる。
[Dispensing part]
A multi-hole nozzle 125 is disposed at the tip of the dispensing unit 120 to which the other end of the hollow tube 115 is connected. As shown in FIG. 4, the porous nozzle 125 has a circular discharge surface as a whole, and a large number of discharge holes K are formed on the discharge surface. The discharge holes of the nozzles may be arranged at regular intervals or may be arranged partially densely. In the present embodiment, the arrangement density of the discharge holes K of the multi-hole nozzle is partially increased at a location corresponding to the vicinity of the outer periphery of the culture layer 30. According to such an aspect, when the frame layer 20 is formed on the outer periphery of the culture layer 30, the medium solution can be spread without a gap between the frame layer 20 and the culture layer 30.

[X方向/Y方向/Z方向可動手段]
ディスペンス部120は、図1のXYZ直交空間において、Zステージ上に配置されるとともに、Z方向可動手段130によって、Z方向にスライド可動可能となっており、これが本発明における上下ディスペンス部可動手段に相当する。さらに、この実施形態においては、ディスペンス部120を含むZ方向可動手段130自体が、X方向可動手段140、Y方向可動手段150によってX方向、Y方向にもスライド移動可能となっており、結果としてXYZ空間上の任意の点にディスペンス部120が移動可能となっている。この移動制御を行うのが可動制御手段160である。この実施態様においては、Z方向のみならず、XY方向への制御もこの可動制御手段160で行うことができる。Z方向可動手段130、X方向可動手段140、Y方向可動手段150、可動制御手段160はそれぞれ従来公知のステージ装置などを用いることができ特に限定されない。
[X direction / Y direction / Z direction movable means]
The dispense unit 120 is arranged on the Z stage in the XYZ orthogonal space of FIG. 1 and is slidable in the Z direction by the Z direction movable unit 130. This is the upper and lower dispense unit movable unit in the present invention. Equivalent to. Furthermore, in this embodiment, the Z-direction movable means 130 including the dispensing unit 120 itself can be slid in the X direction and the Y direction by the X-direction movable means 140 and the Y-direction movable means 150. As a result, The dispensing unit 120 can move to an arbitrary point on the XYZ space. The movement control means 160 performs this movement control. In this embodiment, not only the Z direction but also the XY direction can be controlled by this movable control means 160. The Z-direction movable means 130, the X-direction movable means 140, the Y-direction movable means 150, and the movement control means 160 can be each a known stage device, and are not particularly limited.

[枠部形成手段]
後述する図2の工程S1に示すように、基材シート10上には微生物培養シートの培養層30の範囲を画定するために、ホットメルト樹脂からなる円周状の枠層20があらかじめ形成される。このため、このディスペンス装置100においてはディスペンス部120とは別に、ホットメルトガン200が装着されている。このホットメルトガン200はディスペンス部120と同様にX方向/Y方向/Z方向に可動となっており、ホットメルト樹脂(図2におけるHM)が外部から供給可能であるとともに、先端に単独の吐出ノズル210を有し、図示しないガン制御部によって任意の箇所、形状にホットメルト樹脂を塗布可能であり、これによって円周状の枠層20を形成できる。なお、本発明においては、枠層20は培養層30の範囲を画定するための枠部、すなわち段差部であればよく、枠層20はホットメルト樹脂には限定されず、例えば紫外線硬化樹脂であってもよい。また、枠部を所定の厚さのシートによって形成して培養層30の範囲を凹部としてもよい。
[Frame part forming means]
As shown in step S1 of FIG. 2, which will be described later, a circumferential frame layer 20 made of hot melt resin is previously formed on the base sheet 10 in order to delimit the range of the culture layer 30 of the microorganism culture sheet. The For this reason, in the dispensing apparatus 100, a hot melt gun 200 is mounted separately from the dispensing unit 120. The hot melt gun 200 is movable in the X direction / Y direction / Z direction, like the dispensing unit 120, and hot melt resin (HM in FIG. 2) can be supplied from the outside, and a single discharge at the tip. The nozzle 210 is provided, and a hot melt resin can be applied to any location and shape by a gun control unit (not shown), whereby the circumferential frame layer 20 can be formed. In the present invention, the frame layer 20 may be a frame portion for defining the range of the culture layer 30, that is, a step portion, and the frame layer 20 is not limited to hot melt resin, for example, UV curable resin. There may be. Alternatively, the frame portion may be formed by a sheet having a predetermined thickness, and the range of the culture layer 30 may be a recess.

<ディスペンス液塗布シートの製造方法>
[前準備段階]
微生物培養シートの製造を一例として、このディスペンス装置100を用いたディスペンス液塗布シートの製造方法について説明する。まず、例えば、アルコール系溶媒に、バインダー、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤等を溶解又は分散させて、ディスペンス液35を調製して容器本体111内に投入し、攪拌羽根113を回転させて沈降を防ぐ。ここまでが前準備段階である。
<Manufacturing method of dispense liquid coating sheet>
[Preparation stage]
Taking a production of a microorganism culture sheet as an example, a method for producing a dispensing liquid coating sheet using the dispensing apparatus 100 will be described. First, for example, a binder, a gelling agent, a nutritional component, a coloring indicator, a selective agent, etc. are dissolved or dispersed in an alcohol solvent to prepare a dispensing liquid 35 and put it into the container body 111. Rotate to prevent settling. This is the preparatory stage.

バインダーとは、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤等の他の成分を、基材に固着させる役割を有するものであり、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンオキサイド、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール等が挙げられ、特に、ポリビニルピロリドンが好ましい。ポリビニルピロリドンによれば、アルコール系溶媒に可溶であるので、培地液の粘度を容易に調整することができる。また、ポリビニルピロリドンによれば、アルコール系溶媒を使用することができるので、ゲル化剤を溶解させずに、分散させた培地液を調製することができる。これにより、ゲル化剤による培地液の著しい粘度上昇の抑制が可能となる。更に、パターン形成後においては、高温加熱することなく溶媒を除去することができる。そして、ポリビニルピロリドンによれば、皮膜性が高いので、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤等の他の成分を取り込んで成膜することができ、また、基材との密着性に優れる。   The binder has a role of fixing other components such as a gelling agent, a nutritional component, a coloring indicator, and a selective agent to the base material. For example, polyvinylpyrrolidone, polyethylene oxide, hydroxypropylcellulose, polyvinyl alcohol, etc. In particular, polyvinylpyrrolidone is preferable. Since polyvinylpyrrolidone is soluble in an alcohol solvent, the viscosity of the medium solution can be easily adjusted. Moreover, according to polyvinylpyrrolidone, an alcohol-based solvent can be used, so that a dispersed medium solution can be prepared without dissolving the gelling agent. As a result, it is possible to suppress a significant increase in the viscosity of the medium solution by the gelling agent. Furthermore, after the pattern formation, the solvent can be removed without heating at a high temperature. And since polyvinylpyrrolidone has a high film property, it can be formed into a film by incorporating other components such as a gelling agent, a nutritional component, a coloring indicator, a selective agent, etc. Excellent.

ゲル化剤としては、例えば、カラギーナン、グアーガム、キタンサンガム、ローカストビーンガム、アルギン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等が挙げられる。これらは、単独又は2種以上を混合して使用することができる。これらのゲル化剤によれば、被検液の滴下により培養層が増粘又はゲル化し、微生物の発育に適した環境となる。そして、培養層が増粘又はゲル化すると、カバーシートとの密着性が向上するので、培養時の水分の蒸発を抑制することもできる。   Examples of the gelling agent include carrageenan, guar gum, chitansan gum, locust bean gum, algin, carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose and the like. These can be used individually or in mixture of 2 or more types. According to these gelling agents, the culture layer is thickened or gelled by dropping the test solution, and an environment suitable for the growth of microorganisms is obtained. And if a culture layer becomes thickened or gelatinized, since adhesiveness with a cover sheet will improve, evaporation of the water | moisture content at the time of culture | cultivation can also be suppressed.

栄養成分は、微生物の種類に応じて、適宜選択することができる。例えば、一般生菌検査用としては、酵母エキス・ペプトン・ブドウ糖混合物、肉エキス・ペプトン混合物、ペプトン・大豆ペプトン・ブドウ糖混合物等や、これらにリン酸二カリウム及び/又は塩化ナトリウムを加えた混合物が挙げられる。大腸菌・大腸菌群検査用としては、デソキシコール酸ナトリウム・ペプトン・クエン酸鉄アンモニウム・塩化ナトリウム・リン酸二カリウム・乳糖混合物、ペプトン・乳糖・リン酸二カリウム混合物等が挙げられる。ブドウ球菌用としては、肉エキス・ペプトン・塩化ナトリウム・マンニット・卵黄混合物、ペプトン・肉エキス・酵母エキス・ピルビン酸ナトリウム・グリシン・塩化リチウム・亜テルル酸卵黄液混合物等が挙げられる。ビブリオ用としては、酵母エキス・ペプトン・蔗糖・チオ硫酸ナトリウム・クエン酸ナトリウム・コール酸ナトリウム・クエン酸第2鉄・塩化ナトリウム・牛胆汁混合物等が挙げられる。腸球菌用としては、牛脳エキス・ハートエキス・ペプトン・ブドウ糖・リン酸二カリウム・窒化ナトリウム混合物等が挙げられる。真菌用としては、ペプトン・ブドウ糖混合物、酵母エキス・ブドウ糖混合物、ポテトエキス・ブドウ糖混合物等が挙げられる。これらの中から、発育させようとする微生物の種類に応じて、1種類又はそれ以上を選択し、混合して使用することができる。   The nutrient component can be appropriately selected according to the type of microorganism. For example, for the inspection of general viable bacteria, yeast extract / pepton / glucose mixture, meat extract / pepton mixture, peptone / soybean peptone / glucose mixture, etc., and mixtures obtained by adding dipotassium phosphate and / or sodium chloride to these Can be mentioned. Examples of the test for Escherichia coli and coliform group include sodium desoxycholate / peptone / ammonium iron citrate / sodium chloride / dipotassium phosphate / lactose mixture, and peptone / lactose / dipotassium phosphate mixture. Examples of staphylococci include meat extract, peptone, sodium chloride, mannitol, egg yolk mixture, peptone, meat extract, yeast extract, sodium pyruvate, glycine, lithium chloride, tellurite egg yolk mixture, and the like. For vibrio use, yeast extract, peptone, sucrose, sodium thiosulfate, sodium citrate, sodium cholate, ferric citrate, sodium chloride, bovine bile mixture and the like can be mentioned. Examples of enterococci include bovine brain extract, heart extract, peptone, glucose, dipotassium phosphate and sodium nitride. Examples of fungi include peptone / glucose mixture, yeast extract / glucose mixture, potato extract / glucose mixture, and the like. From these, one or more types can be selected and mixed for use according to the type of microorganism to be grown.

発色指示薬は、培養過程で発育する微生物の代謝により産出される特異物質との反応、pH変化の認識、酵素との反応等によって発色してコロニーを着色するため、コロニー数の計数を極めて容易にする効果がある。発色指示薬としては、例えば、トリフェニルテトラゾリウムクロライド(以下、TTCとする)、p−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ペテトリルテトラゾリウムブルー等のテトラゾリム塩や、ニュートラルレッド混合物、フェノールレッド、ブロムチモールブルー、チモールブルー混合物等のpH指示薬が挙げられる。   The color indicator is colored by coloring with the reaction with specific substances produced by metabolism of microorganisms that grow during the culture process, recognizing pH changes, reaction with enzymes, etc., so counting the number of colonies is extremely easy There is an effect to. Examples of the color development indicator include tetrazorim salts such as triphenyltetrazolium chloride (hereinafter referred to as TTC), p-tolyltetrazolium red, tetrazolium violet, petetylyltetrazolium blue, neutral red mixtures, phenol red, bromthymol blue, and thymol. PH indicator such as blue mixture.

その他、検出目的以外の微生物の発育を抑える選択剤を含有させてもよい。このような選択剤としては、メチシリン、セフタメタゾール、セフィキシム、セフタジジム、セフスロジン、バシトラシン、ポリミキシンB、リファンピシン、ノボビオシン、コリスチン、リンコマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン等の抗生物質、サルファ剤、ナリジクス酸、オラキンドックス等の合成抗菌剤、クリスタルバイオレット、ブリリアントグリーン、マラカイトグリーン、メチレンブルー等の静菌又は殺菌作用を有する色素、Tergitol7、ドデシル硫酸塩、ラウリル硫酸塩等の界面活性剤、亜セレン酸塩、亜テルル酸塩、亜硫酸塩、窒化ナトリウム、塩化リチウム、シュウ酸塩、高濃度の塩化ナトリウム等の無機塩等が挙げられる。   In addition, you may contain the selective agent which suppresses the growth of microorganisms other than the detection objective. As such a selective agent, methicillin, ceftamezole, cefixime, ceftazidime, cefsulosin, bacitracin, polymyxin B, rifampicin, novobiocin, colistin, lincomycin, chloramphenicol, tetracycline, streptomycin and other antibiotics, sulfa drugs, nalidixic acid, Synthetic antibacterial agents such as olaquindox, dyes having bacteriostatic or bactericidal activity such as crystal violet, brilliant green, malachite green, methylene blue, surfactants such as Tergitol 7, dodecyl sulfate, lauryl sulfate, selenite, Examples thereof include inorganic salts such as tellurite, sulfite, sodium nitride, lithium chloride, oxalate, and high-concentration sodium chloride.

溶媒としては、選択した構成成分を溶解又は分散し得るものであれば、特に限定されるものではないが、アルコール系溶媒を使用することが好ましい。アルコール系溶媒は、水やトルエン等の高沸点溶媒のように、パターン形成後の溶媒除去の際に高温加熱する必要がないので、培養層に含まれる成分が熱分解するおそれが生じず、また、溶媒除去に長時間を要しないので、生産効率に優れる点において好ましい。アルコール系溶媒としては、炭素数1〜5のアルコールが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等が挙げられる。これらの中でも、沸点が低く、乾燥による溶媒除去が容易であって、且つ、微生物の発育を阻害しないメタノールが最も好ましい。なお、上記溶媒は、単独又は2種以上を混合して使用することができる。   The solvent is not particularly limited as long as it can dissolve or disperse the selected components, but an alcohol solvent is preferably used. Alcohol-based solvents do not need to be heated at a high temperature when removing the solvent after pattern formation, as in high-boiling solvents such as water and toluene, so that the components contained in the culture layer are not likely to be thermally decomposed. Since it does not take a long time to remove the solvent, it is preferable in terms of excellent production efficiency. As the alcohol solvent, an alcohol having 1 to 5 carbon atoms is preferable, and examples thereof include methanol, ethanol, isopropyl alcohol and the like. Among these, methanol is most preferable because it has a low boiling point, can be easily removed by drying, and does not inhibit the growth of microorganisms. In addition, the said solvent can be used individually or in mixture of 2 or more types.

本発明においては、ディスペンス液35の固形分が20%〜50%である。これにより、吐出後に滴下体を形成して基材面への転写が可能となり、また、その後にレベリングして平滑な塗布面を形成することができる。固形分が20%未満であると、表面張力が不充分で滴下体を形成しにくく、ノズルあたりの塗布量がばらつくので好ましくなく、50%を超えると粘度も高くなってノズルからの吐出性、転写性、レベリング性のいずれも低下するので好ましくない。   In the present invention, the solid content of the dispensing liquid 35 is 20% to 50%. Thereby, a drop body can be formed after discharge and transferred onto the surface of the substrate, and leveling can be performed thereafter to form a smooth coated surface. If the solid content is less than 20%, the surface tension is insufficient and it is difficult to form a drop, and the coating amount per nozzle varies. Since both transferability and leveling property are lowered, it is not preferable.

ディスペンス液35の粘度としては、100〜2000cp(mPa・s)の範囲が好ましく、より好ましくは100〜1200cp、特に好ましくは150〜300cpである。100cp未満であると、表面張力が不充分で滴下体を形成しにくく、ノズルあたりの塗布量がばらつくので好ましくなく、1200cpを超えると粘度も高くなってノズルからの吐出性、転写性、レベリング性のいずれも低下するので好ましくない。なお、粘度装置及び測定条件の一例を挙げれば、E型粘度計である英弘精機株式会社製のViscotester550を用い、20℃/500rpm時の測定値である。   The viscosity of the dispensing liquid 35 is preferably in the range of 100 to 2000 cp (mPa · s), more preferably 100 to 1200 cp, and particularly preferably 150 to 300 cp. If it is less than 100 cp, the surface tension is insufficient and it is difficult to form a drop, and the coating amount per nozzle varies. This is not preferred, and if it exceeds 1200 cp, the viscosity increases and the ejection from the nozzle, transferability, and leveling properties Since both of them are lowered, it is not preferable. In addition, if an example of a viscosity apparatus and measurement conditions is given, it will be a measured value at the time of 20 degreeC / 500 rpm using Viscotester550 by Eihiro Seiki Co., Ltd. which is an E-type viscosity meter.

このような高粘度のディスペンス液35であっても本発明の製造方法を用いることで、厚さムラのない平滑な培養層30を形成できる点に本発明の特徴の一つがある。   One feature of the present invention is that even with such a high-viscosity dispensing liquid 35, a smooth culture layer 30 having no thickness unevenness can be formed by using the production method of the present invention.

[枠層形成]
次に、図2の工程S1に示すように、本発明における基材に相当する基材シート10をXY面上に配置する。ここでいう基材シート10の塗布面が本発明における基材面に相当する。このとき図6を併せて参照すると、微生物培養シートは図6(A)の状態である。なお、図2における各工程の上段はX方向から見た正面図であり、下段は基材シート10をZ方向から見た平面図である。そして、ホットメルトガン200のX方向稼動手段/Y方向稼動手段/Z方向稼動手段(図示せず)の、いずれか又は複数を可動させることで、所望の位置にホットメルトガン200を配置し、例えばガン制御部からの制御によりホットメルトを吐出しながらノズル210を回転移動させることで円周状の枠層20を形成する。微生物培養シートは図6(B)の状態である。
[Frame layer formation]
Next, as shown in step S1 of FIG. 2, a base sheet 10 corresponding to the base in the present invention is placed on the XY plane. The application surface of the base material sheet 10 here corresponds to the base material surface in the present invention. At this time, referring also to FIG. 6, the microorganism culture sheet is in the state of FIG. In addition, the upper stage of each process in FIG. 2 is the front view seen from the X direction, and the lower stage is the top view which looked at the base material sheet 10 from the Z direction. Then, by moving any one or more of the X-direction operation means / Y-direction operation means / Z-direction operation means (not shown) of the hot melt gun 200, the hot melt gun 200 is arranged at a desired position, For example, the circumferential frame layer 20 is formed by rotating the nozzle 210 while discharging hot melt under the control of the gun controller. The microorganism culture sheet is in the state shown in FIG.

なお、図2の工程S1の下段に示すように、一の枠層20の形成後に、ホットメルトガン200のX方向稼動手段及び/又はY方向稼動手段を可動させ、基材シート10上におけるXY座標位置を変更することで、複数の枠層20をあらかじめ形成してもよい。   2, after the formation of the one frame layer 20, the X-direction operation means and / or the Y-direction operation means of the hot melt gun 200 is moved so that XY on the base sheet 10 is obtained. A plurality of frame layers 20 may be formed in advance by changing the coordinate position.

[ディスペンス工程]
次に、ディスペンス装置100のX方向可動手段140、Y方向可動手段150のいずれか又は双方を可動させることで、所望の枠層20のXY座標位置と、多孔ノズル125のXY座標位置が重なるように調整する。このときZ方向のディスペンス部120の位置は充分に基材シート10から離間している(図3(a)の状態)。
[Dispensing process]
Next, by moving one or both of the X-direction movable unit 140 and the Y-direction movable unit 150 of the dispensing apparatus 100, the desired XY coordinate position of the frame layer 20 and the XY coordinate position of the porous nozzle 125 overlap each other. Adjust to. At this time, the position of the dispense portion 120 in the Z direction is sufficiently separated from the base material sheet 10 (the state shown in FIG. 3A).

このとき、基材シート10上の枠層20と、多孔ノズル125の吐出面とは互いに対向するように配置されており、図6(C)に示すように基材シート10上の枠層20に囲まれた凹部領域を複数の分割領域Pに仮想分画し、それぞれの分割領域Pに対応して割り当てられている吐出孔Kを有する多孔ノズル125、言い換えれば分割領域の数と同数の吐出孔Kを有する多孔ノズル125が配置される。   At this time, the frame layer 20 on the base sheet 10 and the discharge surface of the porous nozzle 125 are arranged to face each other, and the frame layer 20 on the base sheet 10 as shown in FIG. The recessed area surrounded by the virtual area is divided into a plurality of divided areas P, and the porous nozzles 125 having the discharge holes K assigned to the divided areas P, in other words, the same number of discharges as the divided areas. A multi-hole nozzle 125 having a hole K is disposed.

本発明においては多孔ノズルの各吐出孔Kの孔径は、0.1〜3.0mm/個であることが好ましく、0.3〜2.0mm/個であることがより好ましく、0.5〜2.0mm/個であることが特に好ましく、0.9mm〜1.6mm/個であることが最も好ましい。上記範囲であれば、培地液の液ダレや詰まりが生じ難い。特に、分散系の培地液の場合には、孔が3.0mmを超えると液ダレや塗布後のムラが生じやすく、基材面への転写性やレベリング性が低下する。0.1mm未満では分散する栄養成分等の粒径によっては詰まりが生じやすくなり、また、滴下体が大きくなるので離間距離が長くなり、やはり転写性が低下する。   In the present invention, the diameter of each discharge hole K of the porous nozzle is preferably 0.1 to 3.0 mm / piece, more preferably 0.3 to 2.0 mm / piece, 0.5 to 2.0 mm / piece is particularly preferred, and 0.9 mm to 1.6 mm / piece is most preferred. If it is the said range, it will be hard to produce the sag and clogging of a culture solution. In particular, in the case of a dispersion medium solution, if the hole exceeds 3.0 mm, liquid sag and unevenness after application are likely to occur, and transferability to the substrate surface and leveling properties are reduced. If it is less than 0.1 mm, clogging is likely to occur depending on the particle size of the dispersed nutrients and the like, and the drop body becomes large, so that the separation distance becomes long, and the transferability also decreases.

なお、個々の孔径は、上記範囲内であれば全て同じ大きさでなくてもよい。また、多孔ノズルの吐出孔Kの配置密度は、5〜20個/cmであることが好ましく、5〜16個/cmであることがより好ましく、8〜16個/cmであることが最も好ましい。配置密度が5個/cm未満であると、培地液が十分に拡がらず、均一な厚みの培養層や厚みのある培養層の形成が困難となる場合がある。配置密度が20個/cmを超えると、孔同士の隙間が狭くなるため、分注の際に培地液同士が接触し、良好に分注することができない場合がある。なお、多孔ノズルとしては、例えば、武蔵エンジニアリング社製のマルチノズルMNシリーズ等の一般に市販されているものも使用することができる。 The individual hole diameters do not have to be the same size as long as they are within the above range. It arrangement density of the discharge opening K of the porous nozzle is preferably 5 to 20 / cm 2, more preferably from 5 to 16 pieces / cm 2, is 8 to 16 / cm 2 Is most preferred. When the arrangement density is less than 5 pieces / cm 2 , the medium solution does not spread sufficiently, and it may be difficult to form a culture layer having a uniform thickness or a culture layer having a thickness. When the arrangement density exceeds 20 pieces / cm 2 , the gap between the holes becomes narrow, so that the medium solutions may come into contact with each other at the time of dispensing and cannot be dispensed satisfactorily. In addition, as a perforated nozzle, what is generally marketed, such as the multi-nozzle MN series made by Musashi Engineering, can be used, for example.

この状態で、図3(b)に示すようにZ方向可動手段130を制御してディスペンス部120を下方に移動して、図5(a)に示すようにノズル先端部と基材シート10面との距離がhとなる点で停止させる。この離間距離hは、ディスペンス液35の粘度やノズル径などによってあらかじめ設定される。本発明においてはこの離間距離hは0.3mm〜1.0mm、好ましくは0.8mm〜1.0mmである。0.3mm未満では充分な滴下体を形成できないので安定した塗布量が得られず、基材面への転写性やレベリング性が低下する。また、ノズル自体がディスペンス液で汚れるので長時間の稼動が困難になる。1.0mmを超えると滴下体が基材面に届かずに転写が困難となる。   In this state, as shown in FIG. 3 (b), the Z-direction movable means 130 is controlled to move the dispensing part 120 downward, and as shown in FIG. And stop at a point where the distance to becomes h. The separation distance h is set in advance according to the viscosity of the dispensing liquid 35, the nozzle diameter, and the like. In the present invention, the separation distance h is 0.3 mm to 1.0 mm, preferably 0.8 mm to 1.0 mm. If the thickness is less than 0.3 mm, a sufficient drop cannot be formed, so that a stable coating amount cannot be obtained, and transferability to the substrate surface and leveling properties are deteriorated. Further, since the nozzle itself is contaminated with the dispensing liquid, it is difficult to operate for a long time. When the thickness exceeds 1.0 mm, the dropping body does not reach the substrate surface, and transfer becomes difficult.

次いで、吐出制御手段115を動作させ、多孔ノズル125から図5(b)に示すように吐出を開始する。ここで、後述の実施例に示すように、吐出圧力はノズルからの吐出量(塗布量)に依存しており、例えば0.053MPaから0.058MPa、好ましくは0.054MPaから0.057MPaが例示でき、この圧に比例して140g/m(図8の塗布量0.29g・dryに相当)から205g/m(図8の塗布量0.40g・dryに相当)、好ましくは155g/m(図8の塗布量0.31g・dryに相当)から190g/m(図8の塗布量0.37g・dryに相当)の塗布量(乾燥時)となる。 Next, the discharge control means 115 is operated, and discharge is started from the porous nozzle 125 as shown in FIG. Here, as shown in the examples described later, the discharge pressure depends on the discharge amount (application amount) from the nozzle, for example, 0.053 MPa to 0.058 MPa, preferably 0.054 MPa to 0.057 MPa. In proportion to this pressure, 140 g / m 2 (corresponding to a coating amount of 0.29 g · dry in FIG. 8) to 205 g / m 2 (corresponding to a coating amount of 0.40 g · dry in FIG. 8), preferably 155 g / m 2 . From m 2 (corresponding to a coating amount of 0.31 g · dry in FIG. 8) to 190 g / m 2 (corresponding to a coating amount of 0.37 g · dry in FIG. 8) (when dried).

この図5(b)の段階では、吐出孔Kからの吐出量は最終吐出量より少ない量であり、その表面張力によってノズル先端から自重で垂れ下がった涙形の滴下体35bの状態となる。その後、吐出を続けることで、図5(c)の状態まで滴下体35cが成長する。この辺りで吐出孔Kからの吐出量が最終吐出量に近くなる。更に吐出を続けると、図5(d)のように基材シート10上に滴下体35dが接触して、滴下体は基材シート10との濡れ性の関係で基材シート10側へ移行し転写されていく。   At the stage shown in FIG. 5B, the discharge amount from the discharge hole K is smaller than the final discharge amount, and the surface tension causes a teardrop-shaped drop body 35b that hangs down from the nozzle tip under its own weight. Thereafter, by continuing the discharge, the dropping body 35c grows to the state of FIG. Around this time, the discharge amount from the discharge hole K becomes close to the final discharge amount. When the discharge is further continued, the dropping body 35d comes into contact with the base sheet 10 as shown in FIG. 5D, and the dropping body moves to the base sheet 10 side due to the wettability with the base sheet 10. It will be transcribed.

吐出孔Kからの吐出量、すなわち基材シート10上への一のノズルからの塗布量は、乾燥前で0.5g〜2.0g(250〜1050g/mに相当)である。0.5g未満では充分な滴下体を形成できないので安定した塗布量が得られず、基材面への転写性やレベリング性が低下する。特に滴下体が基材面に届かずに転写が困難となる。2.0gを超えると、逆に充分な滴下体を形成する前に転写してしまうので安定した転写が困難となる。なお、ディスペンス液35の固形分20%〜50%に応じて乾燥後の塗布量を計算でき、好ましくは0.1〜0.8g(50〜410g/mに相当)の範囲である。 The discharge amount from the discharge hole K, that is, the coating amount from one nozzle on the substrate sheet 10 is 0.5 g to 2.0 g (corresponding to 250 to 1050 g / m 2 ) before drying. If the amount is less than 0.5 g, a sufficient drop cannot be formed, so that a stable coating amount cannot be obtained, and transferability to the substrate surface and leveling properties are deteriorated. In particular, the dropping body does not reach the substrate surface, making transfer difficult. If it exceeds 2.0 g, on the contrary, transfer is performed before a sufficient drop is formed, so that stable transfer becomes difficult. The coating amount after drying can be calculated according to the solid content of 20% to 50% of the dispensing liquid 35, and is preferably in the range of 0.1 to 0.8 g (corresponding to 50 to 410 g / m 2 ).

[レベリング工程]
その後、多孔ノズル125を上方に離間させてhより大きくすることで、図5(e)や図6(D)のような半球状の滴下体35eを瞬間的に経て、拡散し、図5(f)や図6(E)のようにレベリングして平滑化する。
[Leveling process]
Thereafter, the porous nozzle 125 is separated upward to be larger than h, so that it diffuses instantaneously through the hemispherical dropping body 35e as shown in FIG. 5 (e) or FIG. 6 (D), and FIG. f) and smoothing by leveling as shown in FIG.

吐出制御手段115の動作開始タンミングとしては、図5(a)の離間距離hの状態が好ましいが、その若干前の下降段階であってもよい。吐出制御手段115の動作終了タンミングとしては、図5(d)の状態が好ましい。なお、離間距離hでの保持時間も吐出圧など条件やディスペンス液35の粘度などに応じて適宜設定可能であるが、その一例を挙げれば0.2〜3.0秒である。   As the operation start tamming of the discharge control means 115, the state of the separation distance h in FIG. 5A is preferable, but it may be in a descending stage slightly before that. As the operation end tamming of the discharge control means 115, the state of FIG. The holding time at the separation distance h can be appropriately set according to the conditions such as the discharge pressure and the viscosity of the dispensing liquid 35. For example, the holding time is 0.2 to 3.0 seconds.

このように吐出制御手段115を制御することで、ディスペンス液35の適度の粘度に主に由来する滴下体の表面張力によって滴下体の体積を所定範囲内に維持できる。これに加えて、合成紙を含む紙基材などの親水性の基材シート10への、同じく水やアルコール溶媒系などの親水性のディスペンス液35の濡れ性を利用することで、基材シート10への優れた転写性とその後のレベリング性を発揮できる優れた方式が本発明の製造方法である。   By controlling the discharge control means 115 in this way, the volume of the drop body can be maintained within a predetermined range by the surface tension of the drop body mainly derived from the appropriate viscosity of the dispensing liquid 35. In addition to this, by utilizing the wettability of hydrophilic dispensing liquid 35 such as water or alcohol solvent system to hydrophilic substrate sheet 10 such as paper substrate including synthetic paper, the substrate sheet An excellent method capable of exhibiting excellent transferability to 10 and subsequent leveling is the production method of the present invention.

[連続形成]
なお、図2の工程S2の下段に示すように、一の枠層20へのディスペンス完了後に、X方向可動手段140及び/又はY方向可動手段150を可動させ、基材シート10上におけるXY座標位置を変更することで、複数の枠層20へのディスペンスを連続的に行なうことももちろん可能である。そして工程S1と工程S2を組み合わせることで(工程S3)、基材シート10上の複数の箇所に培養層30を形成できる。
[Continuous formation]
As shown in the lower part of step S2 in FIG. 2, after the dispensing to one frame layer 20 is completed, the X-direction movable means 140 and / or the Y-direction movable means 150 are moved so that the XY coordinates on the base sheet 10 It is of course possible to continuously dispense a plurality of frame layers 20 by changing the position. And the culture layer 30 can be formed in the several location on the base material sheet 10 by combining process S1 and process S2 (process S3).

[後工程]
その後、図示しない熱風等の乾燥装置によって所定の乾燥工程を経てディスペンス液35を培養層30とする。乾燥後の塗布厚さは100μm〜500μmであることが好ましい。100μm未満であると塗布の絶対量が少なく本発明の効果が得られず、500μmを超えると使用しない培養層の割合が増えて不経済である。
[Post-process]
Thereafter, the dispense liquid 35 is made into the culture layer 30 through a predetermined drying process by a drying device such as hot air (not shown). The coating thickness after drying is preferably 100 μm to 500 μm. If it is less than 100 μm, the application amount is small and the effect of the present invention cannot be obtained. If it exceeds 500 μm, the proportion of culture layers not used increases, which is uneconomical.

その後、二軸延伸ポリプロピレンフィルム等のカバーフィルム40を、上記培養層30を形成した基材シート10上に積層し、一辺の端部を接着し、必要に応じて図示しない裁断装置で個別に裁断することで微生物培養シートを製造することができる。 Thereafter, a cover film 40 such as a biaxially stretched polypropylene film is laminated on the base material sheet 10 on which the culture layer 30 is formed, and one end is bonded, and if necessary, individually cut by a cutting device (not shown). By doing so, a microorganism culture sheet can be produced.

このようにして製造された微生物培養シートは、図7に示すように、方形の基材シート10上に培養層30を備えている。培養層30の外周には疎水性樹脂からなる円形の枠層20が形成されており、培養層30は、枠層20に囲まれた凹部領域に形成されている。また、枠層20と培養層30との間には隙間がなく、両層は接触している。そして、枠層20と培養層30とを被覆するように、方形の透明カバーシート40が設けられている。   As shown in FIG. 7, the microorganism culture sheet manufactured in this way includes a culture layer 30 on a square base sheet 10. A circular frame layer 20 made of a hydrophobic resin is formed on the outer periphery of the culture layer 30, and the culture layer 30 is formed in a recessed region surrounded by the frame layer 20. Further, there is no gap between the frame layer 20 and the culture layer 30, and both layers are in contact with each other. A rectangular transparent cover sheet 40 is provided so as to cover the frame layer 20 and the culture layer 30.

この微生物培養シートによれば、培養層30の外周に円形の枠層20が形成されているので、被検液を遺漏させることなく、所定の範囲に確実に拡げることができる。また、枠層20は疎水性樹脂で形成されているので、培養層30上に被検液を接種した場合でも、枠層20が被検液によって崩れることがない。更に、枠層20と培養層30とは接触しているので、隙間に被検液が貯留することがなく、培養層30上に被検液を均一に拡げることができる。そして、本発明のディスペンス装置を用いることで、微生物の発育に必要十分で、且つ、均一な厚みの培養層を形成できるので、コロニーが滲み難く、また、コロニーの形成速度に差が生じ難くなり、コロニー数の計測等の微生物検査を正確に行うことが可能となる。   According to this microorganism culture sheet, since the circular frame layer 20 is formed on the outer periphery of the culture layer 30, it can be reliably expanded within a predetermined range without leaking the test liquid. Moreover, since the frame layer 20 is formed of a hydrophobic resin, the frame layer 20 is not broken by the test solution even when the test solution is inoculated on the culture layer 30. Furthermore, since the frame layer 20 and the culture layer 30 are in contact with each other, the test solution is not stored in the gap, and the test solution can be spread uniformly on the culture layer 30. By using the dispensing apparatus of the present invention, a culture layer having a uniform thickness that is necessary and sufficient for the growth of microorganisms can be formed, so that colonies are difficult to bleed and a difference in colony formation speed is unlikely to occur. In addition, it is possible to accurately perform a microbial test such as measurement of the number of colonies.

以下、実施例により、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら制限を受けるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention does not receive a restriction | limiting at all by these description.

<ディスペンス液の製造>
メタノールにポリビニルピロリドン(商品名「ポリビニルピロリドン K−90」,日本触媒社製)20gを溶解し、これにグアーガム粉末(商品名「NEOVISCO G」,400メッシュタイプ,三晶社製)60gを分散した。これに、栄養成分として、トリプトン(商品名「BACT TRYPTONE」,Becton,Dickinson and Company社製)3.26g、肉エキス(商品名「Lab−Lemco」,Oxoid社製)0.82g、酵母エキス(商品名「YEAST EXTRACT」,Becton,Dickinson and Company社製)0.03g、ブドウ糖(商品名「D−(+)−GLUCOSE」,和光純薬工業社製)0.16g、塩化ナトリウム(和光純薬工業社製)0.41g、及びリン酸水素二ナトリウム(和光純薬工業社製)0.37gを添加し、メタノール量を調整して固形分比率35%のディスペンス液を調製した。ディスペンス液の粘度は150〜300cpであった。
<Manufacture of dispensing liquid>
20 g of polyvinylpyrrolidone (trade name “Polyvinylpyrrolidone K-90”, manufactured by Nippon Shokubai Co., Ltd.) was dissolved in methanol, and 60 g of guar gum powder (trade name “NEOVISCO G”, 400 mesh type, manufactured by Sanki Co., Ltd.) was dispersed therein. . As a nutrient component, tryptone (trade name “BACT TRYPTONE”, Becton, Dickinson and Company) 3.26 g, meat extract (trade name “Lab-Lemco”, Oxoid) 0.82 g, yeast extract ( Trade name “YEAST EXTRACT”, Becton, Dickinson and Company 0.03 g, glucose (trade name “D-(+)-GLUCOSE”, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.16 g, sodium chloride (Wako Pure Chemical) 0.41 g (manufactured by Kogyo Co., Ltd.) and 0.37 g of disodium hydrogen phosphate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were added, and the amount of methanol was adjusted to prepare a dispensing solution having a solid content ratio of 35%. The viscosity of the dispensing liquid was 150 to 300 cp.

次に図1から図5に示すようなディスペンス装置を用い、図4に示すような多孔ノズルを用いてディスペンス液を下記の条件で吐出し、転写とレベリングの状況を目視で非常に良好(○)、良好(△)、不良(×)の3段階で評価した。その結果を表1に示す。また、固形分40%のディスペンス液を用いた場合以外は上記と同様にして評価した結果を表2に示す。更に、塗布圧力(吐出圧)を変えて塗布量を変化させ、両者の関係を測定した結果を図8に示す。
ノズル孔径:表1,2の通り(単位mm)
ノズル孔配置密度:10から11個/cm
塗布量(wet):510g/m
塗布量(dry):180g/m
平均塗膜厚さ:250〜300μm
Next, using a dispensing apparatus as shown in FIGS. 1 to 5, a dispensing liquid is discharged under the following conditions using a porous nozzle as shown in FIG. 4, and the transfer and leveling conditions are very good visually (○ ), Good (Δ), and poor (×). The results are shown in Table 1. In addition, Table 2 shows the results evaluated in the same manner as described above except that a dispensing solution having a solid content of 40% was used. Furthermore, the result of having measured the relationship between both by changing application | coating pressure (discharge pressure) and changing application quantity is shown in FIG.
Nozzle hole diameter: as shown in Tables 1 and 2 (unit: mm)
Nozzle hole arrangement density: 10 to 11 / cm 2
Application amount (wet): 510 g / m 2
Application amount (dry): 180 g / m 2
Average coating thickness: 250-300 μm

Figure 2016032481
Figure 2016032481

Figure 2016032481
Figure 2016032481

表1、表2より、本発明の孔径が0.9mm〜1.6mmのノズルで構成される多孔ノズルを用い、基材面との離間距離を0.3mm〜1.0mmとして、固形分が20%〜50%、好ましくは20%〜30%のディスペンス液を、塗布量が250g/m〜1050g/mとなるように吐出させた場合に良好に転写してレベリングすることが理解できる。 From Table 1 and Table 2, using the porous nozzle comprised by the nozzle of the hole diameter of 0.9 mm-1.6 mm of this invention, the separation distance with a base-material surface is 0.3 mm-1.0 mm, solid content is 20% to 50%, preferably from can be seen that the leveling 20% to 30% of the dispensed liquid, favorably transferred and the case where the coating amount is ejected so as to 250g / m 2 ~1050g / m 2 .

なお、離間距離が0.3mm未満の場合には、充分な滴下体を形成できないので安定した塗布量が得られず、基材面への転写性やレベリング性が低下した。また、ノズル孔径が0.8mm以下の場合には詰まりが生じて適切に吐出できず、1.7mmの場合には液ダレや塗布後のムラが生じた。なお、固形分が60%の場合には、増粘して吐出が困難であり、固形分が10%の場合には充分な滴下体を形成できないので安定した塗布量が得られず、基材面への転写性やレベリング性が低下した。   When the separation distance was less than 0.3 mm, a sufficient amount of dripping body could not be formed, so a stable coating amount could not be obtained, and transferability to the substrate surface and leveling properties were reduced. Further, when the nozzle hole diameter is 0.8 mm or less, clogging occurs and the ink cannot be discharged properly, and when it is 1.7 mm, liquid dripping or unevenness after application occurs. If the solid content is 60%, it is difficult to discharge due to thickening, and if the solid content is 10%, a sufficient amount of dripping cannot be formed, so a stable coating amount cannot be obtained. Transferability to the surface and leveling properties decreased.

また、図8より、吐出圧力を0.054MPaから0.057MPaに変えることによって、この圧に比例して、155g/m(図8の塗布量0.31g・dryに相当)〜190g/m(図8の塗布量0.37g・dryに相当)の塗布量(乾燥時)が安定的に得られることが理解できる。 Further, from FIG. 8, by changing the discharge pressure from 0.054 MPa to 0.057 MPa, in proportion to this pressure, 155 g / m 2 (corresponding to the coating amount of 0.31 g · dry in FIG. 8) to 190 g / m. 2 (corresponding to a coating amount of 0.37 g · dry in FIG. 8) can be understood to be stably obtained.

10 基材シート
20 枠層
30 培養層
35 ディスペンス液
35b、35c、35d、35e 滴下体
40 カバーシート
100 ディスペンス装置
110 ディスペンス液供給手段110
114、115 中空チューブ
116 吐出圧制御装置
117 バルブ
118 吐出圧制御システム
120 ディスペンス部
130 Z方向可動手段
140 X方向可動手段
150 Y方向可動手段
160 可動制御手段
K 吐出孔
P 分割領域
DESCRIPTION OF SYMBOLS 10 Base material sheet 20 Frame layer 30 Culture layer 35 Dispensing liquid 35b, 35c, 35d, 35e Dropping body 40 Cover sheet 100 Dispensing apparatus 110 Dispensing liquid supply means 110
114, 115 Hollow tube 116 Discharge pressure control device 117 Valve 118 Discharge pressure control system 120 Dispensing part 130 Z direction movable means 140 X direction movable means 150 Y direction movable means 160 Movable control means K Discharge hole P Divided region

Claims (5)

孔径が0.9mm〜1.6mmのノズルで構成される多孔ノズルの吐出面と、基材面との離間距離を0.3mm〜1.0mmとして、
固形分が20%〜50%のディスペンス液を、前記多孔ノズルを構成するノズルからの塗布量が250g/m〜1050g/mとなるように吐出させ、前記基材面に転写塗布するディスペンス液塗布シートの製造方法。
The separation distance between the discharge surface of the porous nozzle composed of nozzles having a hole diameter of 0.9 mm to 1.6 mm and the substrate surface is set to 0.3 mm to 1.0 mm,
The solid content of 20% to 50% of the dispensing liquid, dispensing the coating amount of the nozzle constituting the porous nozzle ejected so as to 250g / m 2 ~1050g / m 2 , to transfer coating to the substrate surface A method for producing a liquid-coated sheet.
前記ディスペンス液の粘度が100〜2000cpである請求項1記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。   The method for producing a dispensing liquid-coated sheet according to claim 1, wherein the viscosity of the dispensing liquid is 100 to 2000 cp. 前記多孔ノズルを構成するノズルからの塗布量が、乾燥後で50g/m〜410g/mである請求項1又は2に記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。 The coating amount of the nozzle constituting the porous nozzle, the manufacturing method of dispensing liquid coating sheet according to claim 1 or 2 is a 50g / m 2 ~410g / m 2 after drying. 前記乾燥後の厚さが100μm〜500μmである請求項3記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。   The method for producing a dispensing liquid-coated sheet according to claim 3, wherein the thickness after drying is 100 μm to 500 μm. 前記ディスペンス液塗布シートが微生物培養シートであり、前記ディスペンス液が前記微生物培養シートの培養層を形成するための培地液である請求項1から4いずれか記載のディスペンス液塗布シートの製造方法。   The method for producing a dispense liquid-coated sheet according to any one of claims 1 to 4, wherein the dispense liquid-coated sheet is a microorganism culture sheet, and the dispense liquid is a medium liquid for forming a culture layer of the microorganism culture sheet.
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