JP2015108015A - Ｉｌ−１７ａ／ｆヘテロ二量体ポリペプチドおよびその治療上の使用 - Google Patents

Abstract

【課題】ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体ポリペプチドおよびその治療上の使用の提供。
【解決手段】本発明は、本明細書においてインターロイキン１７Ａ／Ｆ（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）と記載されたインターロイキン−１７およびインターロイキン−１７Ｆのヘテロ二量体から構成される新規な天然に存在するヒトサイトカインに関する。これらの核酸配列を含むベクターおよび宿主細胞、異種ポリペプチド配列に融合された本発明のポリペプチドを含むキメラポリペプチド分子、本発明のポリペプチドに結合する特異的抗体、ならびに本発明のポリペプチドを産生するための方法もまた本明細書において提供される。変性軟骨障害および他の炎症性疾患を治療するための方法が本明細書においてさらに提供される。
【選択図】なし

Description

発明の分野
本発明は、概して、本明細書においてインターロイキン−１７Ａ／Ｆ（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）と称する新規なヒトサイトカインの同定および単離に関する。

発明の背景
細胞外タンパク質は、とりわけ、多細胞生物の形成、分化、および持続において重要な役割を果たしている。多くの個々の細胞の運命、例えば、増殖、移動、分化、または他の細胞との相互作用は、典型的には、他の細胞から受け取る情報および／または周辺の環境によって支配される。この情報は、しばしば、分泌ポリペプチド（例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞傷害性因子、分化因子、神経ペプチド、およびホルモン）によって伝達され、これらは次には、多様な細胞受容体または膜結合タンパク質によって受容および解釈される。これらの分泌ポリペプチドまたはシグナル伝達分子は、通常、細胞分泌経路を通って細胞外環境におけるそれらの作用部位に到達する。

分泌タンパク質は、医薬、診断薬、バイオセンサー、およびバイオリアクタとして含まれる種々の工業的用途を有する。血栓溶解剤、インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、コロニー刺激因子、および種々の他のサイトカインなどの現在利用可能な多くのタンパク質は分泌タンパク質である。膜タンパク質であるこれらの受容体もまた、治療剤または診断剤としての潜在能力を有する。

膜結合タンパク質および受容体は、とりわけ、多細胞生物の形成、分化、および持続において重要な役割を果たし得る。多くの個々の細胞の運命、例えば、増殖、移動、分化、または他の細胞との相互作用は、典型的には、他の細胞から受け取る情報および／または周辺の環境によって支配される。この情報は、しばしば、分泌ポリペプチド（例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞傷害性因子、分化因子、神経ペプチド、およびホルモン）によって伝達され、これらは次には、多様な細胞受容体または膜結合タンパク質によって受容および解釈される。これらの膜結合タンパク質および細胞受容体には、サイトカイン受容体、受容体キナーゼ、受容体ホスファターゼ、細胞−細胞相互作用に関与する受容体、ならびにセレクチンおよびインテグリンのような細胞接着分子が含まれるがこれらに限定されない。例えば、細胞の増殖および分化を調節するシグナルの伝達は、種々の細胞タンパク質のリン酸化によって部分的に調節される。このプロセスを触媒する酵素であるタンパク質チロシンキナーゼもまた、増殖因子受容体として作用し得る。例としては、線維芽細胞増殖因子受容体および神経増殖因子受容体が含まれる。

分泌タンパク質と同様に、膜結合タンパク質および受容体分子は、医薬および診断薬として含まれる種々の工業的用途を有する。例えば、受容体イムノアドヘシンは、受容体−リガンド相互作用を遮断するための治療剤として利用できる。膜結合タンパク質はまた、関連する受容体／リガンド相互作用の潜在的なペプチドまたは低分子阻害剤のスクリーニングに利用できる。

新規でネイティブな分泌タンパク質およびネイティブな受容体または膜結合タンパク質を同定するための試みが、産業界および学会の両方によって行われている。多くの試みは、新規な分泌タンパク質のコード配列を同定するための哺乳動物組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに焦点を当てている。スクリーニング方法および技術の例は文献に記載されている［Ｋｌｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，９３：７１０８−７１１３（１９９６）；特許文献１）］。

この点に関して、本発明は、免疫媒介性または炎症性疾患に関連することが示されてきたインターロイキン−１７（ＩＬ−１７）ファミリーの新規な分泌ポリペプチドを同定することに関する。免疫関連および炎症性疾患は、極めて複雑な、しばしば複数の相互接続した生物学的経路の徴候または結果であり、この経路は、正常な生理学において、損傷または傷害への応答、損傷または傷害からの修復の開始、ならびに異物に対する先天的および後天的な防御の開始に不可欠である。疾患または病理は以下のような場合に起こる：これらの正常な生理学的経路が、応答の強度と直接関連して、異常な調節もしくは過度の刺激の結果として、自身に対する反応として、またはこれらの組み合わせとしてのいずれかで、さらなる損傷または傷害を引き起こす場合。

これらの疾患の発生は、しばしば、多段階経路、およびしばしば、複数の異なる生物学的系／経路を含むが、これらの経路の１つ以上における臨界点での介入は、寛解または治療の効果を有し得る。治療的介入は、有害なプロセス／経路の拮抗作用、または有益なプロセス／経路の刺激のいずれかによって行われ得る。

多くの免疫関連疾患は、公知でありかつ広範に研究されてきた。このような疾患には、免疫媒介性炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、免疫介在性腎疾患、肝胆汁性疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、および喘息）、非免疫媒介性炎症性疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、新生物形成などが含まれる。

Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は、哺乳動物の免疫応答の重要な構成要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）内で遺伝子によってコードされる自己分子と会合する抗原を認識する。抗原は、抗原提示細胞、ウイルス感染した細胞、癌細胞、移植片などの表面上のＭＨＣ分子とともに提示され得る。Ｔ細胞系は、宿主哺乳動物に健康の脅威を課すこれらの変化した細胞を排除する。Ｔ細胞には、ヘルパーＴ細胞および細胞傷害性Ｔ細胞が含まれる。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細胞上の抗原−ＭＨＣ複合体の認識後に広範に増殖する。ヘルパーＴ細胞は、種々のサイトカイン、すなわち、リンホカインもまた分泌し、これは、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的な役割を果たす。

体液性および細胞媒介性の両方の免疫応答における中心的な事象は、ヘルパーＴ細胞の活性化およびクローン性拡大である。ヘルパーＴ細胞活性化は、抗原提示細胞の表面上での抗原−ＭＨＣとのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）−ＣＤ３複合体の相互作用によって開始される。この相互作用は、休止ヘルパーＴ細胞が細胞周期に入ること（Ｇ０からＧ１への移行）を誘導する生化学的な事象のカスケードを媒介し、ＩＬ−２、および時折、ＩＬ−４について高い親和性受容体の発現をもたらす。活性化Ｔ細胞は、増殖ならびに記憶細胞およびエフェクタ細胞への分化を行う周期を通して進行する。

ＴＣＲを通して媒介されるシグナルに加えて、Ｔ細胞の活性化は、抗原提示細胞によって放出されるサイトカインによって、または抗原提示細胞およびＴ細胞上の膜結合分子との相互作用を通して誘導されるさらなる同時刺激を含む。サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６は、同時刺激シグナルを提供することが示されてきた。また、抗原提示細胞の表面上で発現されるＢ７分子と、Ｔ細胞表面上で発現されるＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４分子との間の相互作用は、Ｔ細胞活性化をもたらす。活性化Ｔ細胞は、ＩＣＡＭ−１、インテグリン、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ５６などの細胞接着分子の増加数を発現する。

混合リンパ球培養中のＴ細胞増殖、または混合リンパ球反応（ＭＬＲ）は、化合物が免疫系を刺激する能力の確立された指標である。多くの免疫応答において、炎症性細胞は傷害または感染の部位に浸潤する。移行細胞は、罹患した組織の組織学的検査によって決定可能であるような、好中球、好酸球、単球、またはリンパ球であり得る。Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ編，１９９４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．
免疫関連疾患は、免疫応答を抑制することによって治療可能である。免疫刺激活性を有する分子を阻害する中和抗体を使用することは、免疫媒介疾患および炎症性疾患の治療において有益である。免疫応答を阻害する分子を利用して（タンパク質を直接、または抗体アゴニストの使用を介して）免疫応答を阻害し、ゆえに、免疫関連疾患を寛解させることができる。

インターロイキン１７（ＩＬ−１７）は、上皮細胞、内皮細胞、および線維芽細胞を刺激して、ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦ、およびＭＣＰ−１を含む他の炎症性のサイトカインおよびケモカインを産生する、Ｔ細胞誘導性炎症誘発性分子である［以下を参照のこと：非特許文献１；Ｙａｏ，Ｚ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３（６）：８１１−８２１（１９９５）；Ｆｏｓｓｉｅｚ，Ｆ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８３（６）：２５９３−２６０３（１９９６）；Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１６（８）：６１１−７（１９９６）；Ｃａｉ，Ｘ．Ｙ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ，６２（１）：５１−８（１９９８）；Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ，Ｄ．Ｖ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０（７）：３５１３−２１（１９９８）；Ｌａａｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２（４）：２３４７−５２（１９９９）；Ｌｉｎｄｅｎ，Ａ．ら、Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ，１５（５）：９７３−７（２０００）；ならびにＡｇｇａｒｗａｌ，Ｓ．およびＧｕｒｎｅｙ，Ａ．Ｌ．，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ，７１（１）：１−８（２００２）］。ＩＬ−１７はまた、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βを含む他のサイトカインと相乗作用を発揮して、ケモカイン発現をさらに誘導する（非特許文献２）。インターロイキン１７（ＩＬ−１７）は、種々の細胞型に対して多面的な生物学的活性を示す。ＩＬ−１７はまた、ＩＣＡＭ−１表面発現、Ｔ細胞の増殖、ならびにＣＤ３４^＋ヒト前駆細胞の増殖および好中球への分化を誘導する能力も有する。ＩＬ−１７はまた、骨代謝に関与しており、活性化Ｔ細胞の存在およびＴＮＦ−α産生によって特徴付けられる病理学的状態、例えば、関節リウマチおよび骨移植物のゆるみにおいて重要な役割を果たすことが示唆されてきた（非特許文献３）。関節リウマチの患者に由来する滑膜組織の活性化Ｔ細胞は、正常個体または変形性関節症患者に由来するものよりも、より大量のＩＬ−１７を分泌することが見出された（Ｃｈａｂａｕｄら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４２：９６３−９７０［１９９９］）。この炎症誘発性サイトカインは、関節リウマチにおける滑膜炎に活発に寄与していることが示唆された。その炎症誘発性の役割を別として、ＩＬ−１７は、なお別のメカニズムによって関節リウマチの病理に寄与しているようである。例えば、ＩＬ−１７は、骨芽細胞における破骨細胞分化因子（ＯＤＦ）ｍＲＮＡの発現を誘導することが示されてきた（Ｋｏｔａｋｅら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０３：１３４５−１３５２［１９９９］）。ＯＤＦは、骨再吸収に関与する細胞である破骨細胞への前駆細胞の分化を刺激する。ＩＬ−１７のレベルは関節リウマチ患者の滑液中で有意に増加しているので、ＩＬ−１７誘導性の破骨細胞形成は、関節リウマチにおける骨再吸収で決定的な役割を果たしているようである。ＩＬ−１７はまた、多発性硬化症などの特定の他の自己免疫疾患（非特許文献４；Ｋｕｒａｓａｗａ，Ｋ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕ ４３（１１）：２４５５−６３（２０００））および乾癬（Ｔｅｕｎｉｓｓｅｎ，Ｍ．Ｂ．ら、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１１（４）：６４５−９（１９９８）；Ａｌｂａｎｅｓｉ，Ｃ．ら、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １１５（１）：８１−７（２０００）；およびＨｏｍｅｙ，Ｂ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（１２：６６２１−３２（２０００））において鍵となる役割を果たしていると考えられている。

ＩＬ−１７はさらに、細胞内シグナル伝達によって、ヒトマクロファージにおけるＣａ^２＋流入および［ｃＡＭＰ］_ｉの減少を刺激することが示されてきた（Ｊｏｖａｎｏｖｉｃら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０：３５１３［１９９８］）。ＩＬ−１７で処理された線維芽細胞はＮＦ−κＢの活性化を誘導するのに対して［Ｙａｏら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：８１１（１９９５）、Ｊｏｖａｎｏｖｉｃら、前出］、これで処理されたマクロファージは、ＮＦ−κＢおよびマイトジェン活性化プロテインキナーゼを活性化する（Ｓｈａｌｏｍ−Ｂａｒｅｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：２７４６７［１９９８］）。加えて、ＩＬ−１７はまた、骨および軟骨の成長に関与する哺乳動物サイトカイン様因子７と配列類似性を共有している。ＩＬ−１７ポリペプチドが配列類似性を共有している他のタンパク質は、ヒト胎児由来インターロイキン関連因子（ＥＤＩＲＦ）およびインターロイキン−２０である。

ＩＬ−１７の広範な効果と一致して、ＩＬ−１７の細胞表面受容体は、多くの組織および細胞型において広範に発現されることが見出されてきた（Ｙａｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，９：７９４［１９９７］）。ヒトＩＬ−１７受容体のアミノ酸配列（８６６アミノ酸）は単一の膜貫通ドメインおよび長い５２５アミノ酸の細胞内ドメインを有するタンパク質を予測するが、受容体配列は独特であり、かつサイトカイン／増殖因子受容体ファミリーからのいずれの受容体の配列とも類似していない。このことは、他の既知のタンパク質とのＩＬ−１７それ自体の類似性の欠如と合わせて、ＩＬ−１７およびその受容体が、新規なシグナル伝達タンパク質および受容体のファミリーの一部であり得ることを示す。ＩＬ−１７活性はその独特な細胞表面受容体（本明細書ではヒトＩＬ−１７Ｒと称する）への結合を通して媒介されることが実証されてきた。ここで、以前の研究は、可溶型ＩＬ−１７受容体ポリペプチドとＴ細胞を接触させることが、ＰＨＡ、コンカナバリンＡ、および抗ＴＣＲモノクローナル抗体によって誘導されるＴ細胞増殖およびＩＬ−２産生を阻害したことを示してきた（Ｙａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：５４８３−５４８６［１９９５］）。このようなものとして、既知のサイトカイン受容体、特に、ＩＬ−１７受容体に対する相同性を有する新規なポリペプチドを同定および特徴付けする際に顕著な関心が存在している。

インターロイキン１７は、現在では、新生サイトカインファミリーのプロトタイプメンバーとして認識されている。ヒトおよび他の脊椎動物の大規模配列決定は、ＩＬ−１７に明確に関連するタンパク質をコードするさらなる遺伝子の存在を明らかにし、従って、新規なファミリーのサイトカインを定義してきた。ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、およびＩＬ−１７Ｆを含むヒトおよびマウスにおけるＩＬ−１７ファミリーの少なくとも６種のメンバー、ならびに新規受容体ＩＬ−１７ＲＨ１、ＩＬ−１７ＲＨ２、ＩＬ−１７ＲＨ３、およびＩＬ−１７ＲＨ４が存在する（２００１年６月２８日に公開された特許文献２を参照のこと）。１つのこのようなＩＬ−１７メンバー（ＩＬ−１７Ｆと呼ばれる）は、ヒトＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）に結合することが実証されてきた（Ｙａｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，９（１１）：７９４−８００（１９９７））。初期の特徴付けは、ＩＬ−１７と同様に、これらの新規に同定された分子のいくつかが、免疫機能を調節する能力を有することを示唆している。これらの因子のいくつかについて同定された強力な炎症作用および主要なヒト疾患に伴って生じてくる関連性は、これらのタンパク質が、炎症性プロセスにおいて有意な役割を有する可能性があり、そして治療的介入のための機会を提供する可能性があることを示唆している。

ヒトＩＬ−１７Ｆをコードする遺伝子はＩＬ−１７に隣接して位置している（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ，Ｓ．Ｇ．ら、Ｅｍｂｏ Ｊ，２０（１９）：５３３２−４１（２００１））。ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆは４４％のアミノ酸同一性を共有しているのに対して、ＩＬ−１７ファミリーの他のメンバーはより限定された１５〜２７％のアミノ酸同一性を共有し、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７ファミリー内の独特なサブグループを形成することを示唆している（Ｓｔａｒｎｅｓ，Ｔ．ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６７（８）：４１３７−４０（２００１）；Ａｇｇａｒｗａｌ，Ｓ．およびＧｕｒｎｅｙ，Ａ．Ｌ．、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ，７１（１）：１−８（２００２））。ＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７と同様の生物学的作用を有するようであり、広範な種々の細胞からのＩＬ−６、ＩＬ−８、およびＧ−ＣＳＦの産生を促進可能である。ＩＬ−１７と同様に、軟骨基質放出を誘導し、新規な軟骨基質合成を阻害することが可能である（２００２年１１月２８日に公開された特許文献３を参照のこと）。従って、ＩＬ−１７と同様に、ＩＬ−１７Ｆは、炎症性障害の病理に潜在的に寄与し得る。最近、これらの著者らは、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆの両方がインターロイキン２３（ＩＬ−２３）の作用によってＴ細胞中で誘導されることが観察している（Ａｇｇａｒｗａｌ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３）：１９１０−４（２００３））。ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆが、同様の染色体局在および有意な配列類似性を共有するという観察は、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆが特定の刺激に応答して同じ細胞集団を用いて誘導されるようであるという観察と同様に、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆの共有結合性ヘテロ二量体（本明細書ではＩＬ−１７Ａ／Ｆと称する）から構成される新規なヒトサイトカインの同定に導いた。ヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆは、タンパク質構造および細胞ベースの活性アッセイの両方において、ヒトＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆから区別可能である独特に新規なサイトカインである。標準としての精製組換えヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆの使用を通して、ヒトＩＬ−１７ＡＦ特異的ＥＬＩＳＡが開発された。この特異的ＥＬＩＳＡの使用を通して、ヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現の誘導が検出され、ＩＬ−１７Ａ／Ｆが培養中の活性化ヒトＴ細胞から天然に産生されることを確証した。従って、ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、単離された活性化ヒトＴ細胞の天然産物として検出可能である、独特な新規サイトカインであり、その組換え型が、関連するサイトカインとは異なりかつそれらから区別可能であるとして、タンパク質構造および細胞ベースのアッセイの両方において特徴付けられてきた。従って、これらの研究は、以前には免疫学的に活性ではない可能性があった特定の抗原に応答するように免疫系を追加免疫できる新規免疫刺激剤（すなわち、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）を提供および同定する。このようなものとして、新規に同定された免疫刺激剤は、重要な臨床的応用を有する。この新規なＩＬ−１７Ａ／Ｆサイトカインまたはそのアゴニストは、それゆえに、免疫刺激剤としての実用的な有用性を見出すのに対して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ活性を阻害する分子（アンタゴニスト）は、免疫応答の阻害が所望される場合、例えば、自己免疫疾患において、実務的な有用性を見出すことが期待される。具体的には、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの免疫学的活性を模倣するか（アゴニスト抗体）または阻害するか（アンタゴニスト抗体）のいずれかであるこの新規なサイトカインに対する抗体は、治療的品質を有する。この新規なサイトカインの活性を阻害するように作用する小分子もまた、潜在的な治療的用途を有する。

米国特許第５，５３６，６３７号明細書 国際公開第０１／４６４２０号パンフレット 米国特許出願公開第２００２／０１７７１８８号明細書

Ｙａｏ，Ｚ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，（１９９５）１２２（１２）：５４８３−５４８６ Ｃｈａｂａｕｄ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９８）１６１（１）：４０９−１４ Ｖａｎ Ｂｅｚｏｏｉｊｅｎら、Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，（１９９９）１４：１５１３−１５２１ Ｍａｔｕｓｅｖｉｃｉｕｓら、Ｍｕｌｔ．Ｓｃｌｅｒ．，（１９９９）５：１０１−１０４

Ａ．実施形態
本発明は、ヒトを含む哺乳動物における免疫関連疾患の診断および治療のために有用である組成物および方法に関する。本発明は、哺乳動物における免疫応答を刺激または阻害するタンパク質（アゴニストおよびアンタゴニスト抗体を含む）の同定に基づく。免疫関連疾患は、免疫応答を抑制または増強することによって治療できる。免疫応答を増強する分子は、抗原に対する免疫応答を刺激または強化する。免疫応答を刺激する分子は治療的に使用することができ、ここで、免疫応答の増強は有益である。代替的には、免疫応答を抑制し、抗原に対する免疫応答を減弱または減少する分子（例えば、中和抗体）は治療的に使用することができ、ここで、免疫応答の減弱は有益である（例えば、炎症）。従って、本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドならびにそのアゴニストおよびアンタゴニストもまた、免疫関連疾患および炎症性疾患の治療のための医薬および薬剤を調製するために有用である。特定の態様において、このような医薬および薬剤には、薬学的に許容可能な担体とともに、治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、そのアゴニスト、またはアンタゴニストが含まれる。好ましくは、この混合物は滅菌されている。

さらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドのアゴニストおよびＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに対するアンタゴニストを同定する方法であって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを候補分子と接触させる工程、および上記ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって媒介される生物学的活性をモニタリングする工程を包含する方法に関する。好ましくは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドはネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドである。特定の態様において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニストまたはアンタゴニストは、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体である。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む組成物、担体または賦形剤との混合物中のポリペプチドに結合するアゴニストまたはアンタゴニスト抗体に関する。１つの態様において、この組成物は、治療有効量のポリペプチドまたは抗体を含む。別の態様において、組成物が免疫刺激分子を含む場合、組成物は、（ａ）その必要がある哺乳動物の組織への炎症性細胞の浸潤を増強し、（ｂ）その必要がある哺乳動物における免疫応答を刺激もしくは増強し、（ｃ）抗原に応答して、その必要がある哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖を増加させ、（ｄ）Ｔリンパ球の活性を刺激し、または（ｅ）血管透過性を増加させるのに有用である。さらなる態様において、組成物が免疫阻害分子を含む場合、組成物は、（ａ）その必要がある哺乳動物の組織への炎症性細胞の浸潤を減少させ、（ｂ）その必要がある哺乳動物における免疫応答を阻害もしくは減少させ、（ｃ）Ｔリンパ球の活性を減少させ、または（ｄ）抗原に応答して、その必要がある哺乳動物におけるＴリンパ球の増殖を減少させるのに有用である。別の態様において、組成物はさらなる活性成分を含み、これは、例えば、さらなる抗体または細胞傷害性因子もしくは化学療法剤であり得る。好ましくは、この組成物は滅菌されている。

別の実施形態において、本発明は、治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、そのアゴニスト、またはそのアンタゴニストを哺乳動物に投与する工程を包含する、その必要がある哺乳動物において免疫関連障害を治療する方法に関する。好ましい態様において、免疫関連障害は、以下からなる群より選択される：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発神経障害またはギラン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、例えば、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、およびホイップル病、以下を含む自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、および接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症（ｆｏｏｄ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）、および蕁麻疹、肺の免疫疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、および過敏性肺炎、以下を含む移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病。

別の実施形態において、本発明は、上記または下記に記載されたポリペプチドのいずれかに特異的に結合する抗体を提供する。選択的に、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント、または単鎖抗体である。１つの態様において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合する単離された抗体に関する。別の態様において、抗体は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの活性を模倣するか（アゴニスト抗体）、または逆に、抗体は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの活性を阻害もしくは中和する（アンタゴニスト抗体）。別の態様において、抗体はモノクローナル抗体であり、これは、好ましくは、非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）残基およびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）残基を有する。抗体は、標識されてもよく、固体支持体上に固定化されてもよい。さらなる態様において、抗体は抗体フラグメント、モノクローナル抗体、単鎖抗体、または抗イディオタイプ抗体である。別の態様において、この抗体フラグメントまたは単鎖抗体は、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８，配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４．配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１，および配列番号４２として図６に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるＦａｂフラグメントを含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、配列番号９〜４２のアミノ酸残基７〜１６からなるＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９〜４２のアミノ酸残基３０〜４６からなるＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号９〜４２のアミノ酸残基７８〜少なくともアミノ酸残基９６からなるＣＤＲ−Ｈ３を含む３つの重鎖可変領域をさらに含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である。別の態様において、抗体フラグメントまたは単鎖抗体は、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２として図６に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるＦａｂフラグメントを含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、配列番号９〜４２のアミノ酸残基７〜１６からなるＣＤＲ−Ｈ１、および配列番号９〜４２のアミノ酸残基３０〜４６からなるＣＤＲ−Ｈ２を含む少なくとも重鎖可変領域をさらに含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である。別の態様において、抗体フラグメントまたは単鎖抗体は、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１，および配列番号４２として図６に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるＦａｂフラグメントを含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、配列番号９〜４２のアミノ酸残基７〜１６からなるＣＤＲ−Ｈ１、および配列番号９〜４２のアミノ酸残基７８〜少なくともアミノ酸残基９６からなるＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも重鎖可変領域をさらに含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である。別の態様において、抗体フラグメントまたは単鎖抗体は、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１，および配列番号４２として図６に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるＦａｂフラグメントを含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、配列番号９〜４２のアミノ酸残基３０〜４６からなるＣＤＲ−Ｈ２、および配列番号９〜４２のアミノ酸残基７８〜少なくともアミノ酸残基９６からなるＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも重鎖可変領域をさらに含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である。別の態様において、抗体フラグメントまたは単鎖抗体は、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２として図６に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるＦａｂフラグメントを含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、配列番号９〜４２のアミノ酸残基７〜１６からなるＣＤＲ−Ｈ１、配列番号９〜４２のアミノ酸残基３０〜４６からなるＣＤＲ−Ｈ２、または配列番号９〜４２のアミノ酸残基７８〜少なくともアミノ酸残基９６からなるＣＤＲ−Ｈ３を含む少なくとも１つの重鎖可変領域をさらに含み、ここで、該Ｆａｂフラグメントは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である。別の態様において、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、もしくは、配列番号４２の前記ＣＤＲ−Ｈ１領域は、アミノ配列ＧＦＴＩ（本明細書では配列番号７７と称する）に対応する少なくともアミノ酸残基７〜１０を含み、ここで、該配列番号７７はＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合可能である。別の態様において、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１または配列番号４２の前記ＣＤＲ−Ｈ２領域は、アミノ酸配列ＹＡＤＳＶＫ（本明細書では配列番号７８と称する）に対応する少なくともアミノ酸残基４１〜４６を含み、ここで、該配列番号７８はＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合可能である。

なお別の実施形態において、本発明は、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５および配列番号７６のヌクレオチド配列からなる群より選択される単離された核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号９、配列番号１０；配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、もしくは、配列番号４２として示されるＦａｂフラグメントをコードし、該Ｆａｂフラグメントが、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である核酸分子に関する。

別の態様において、本発明は、上記のようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされるＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合可能である単離されたＦａｂフラグメントを提供する。このフラグメントを産生するためのプロセスもまた本明細書に記載され、ここで、これらのプロセスは、前記Ｆａｂフラグメントの発現のために適切な条件下で、適切なコード核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養する工程、および細胞培養から前記Ｆａｂフラグメントを回収する工程を包含する。

なお別の実施形態において、本発明は、薬学的に許容可能な担体と混合した抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む組成物を提供する。１つの態様において、組成物は、治療有効量の抗体を含む。好ましくは、組成物は滅菌されている。組成物は、液体医薬製剤型で投与されてもよく、これは、拡張された貯蔵安定性を達成するために保存されてもよい。代替的には、抗体は、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、ヒト化抗体、または単鎖抗体である。

さらなる実施形態において、本発明は、以下を備える製造品に関する：
（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、またはそのポリペプチドに特異的に結合するアゴニスト、アンタゴニスト、もしくは抗体を含む組成物；
（ｂ）該組成物を含む容器；および
（ｃ）免疫関連疾患の治療における該ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニストもしくはアンタゴニストの使用に言及する、該容器に貼付されたラベル、または該容器に含まれるパッケージインサート。組成物は、治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを含んでもよい。

なお別の実施形態において、本発明は、（ａ）哺乳動物から得られた組織細胞の試験サンプル中で、および（ｂ）同じ細胞型の公知の正常組織の対照サンプル中で、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードする遺伝子の発現のレベルを検出する工程を包含する、哺乳動物における免疫関連疾患を診断する方法であって、対照サンプルと比較した試験サンプル中のより高いまたはより低い発現レベルが、試験組織細胞が得られた哺乳動物における免疫関連疾患の存在を示す方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、（ａ）抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を哺乳動物から得られた組織細胞の試験サンプルと接触させる工程、および（ｂ）試験サンプル中で、抗体とＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドとの間の複合体の形成を検出する工程を包含する、哺乳動物における免疫疾患を診断する方法であって；該複合体の形成が、該疾患の存在または不在を示す方法に関する。検出は、定性的または定量的であり得、同じ細胞型の公知の正常組織細胞の対照サンプル中で複合体形成をモニタリングすることと比較して実施されてもよい。試験サンプル中で形成された大量の複合体は、試験組織細胞が得られた哺乳動物における免疫疾患の存在または不在を示す。抗体は、好ましくは、検出可能な標識を有する。複合体形成は、例えば、光学顕微鏡、フローサイトメトリー、フルオリメトリー、または当該分野において公知である他の技術によってモニタリングすることが可能である。試験サンプルは、通常、免疫系の欠損または異常を有する疑いがある個体から入手される。

別の実施形態において、本発明は、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体にＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含むことが疑われる細胞の試験サンプルを暴露する工程、および該細胞サンプへの該抗体の結合を決定する工程を包含する、サンプル中のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在を決定するための方法を提供する。特定の態様において、サンプルには、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含むことが疑われている細胞、およびこの細胞に結合する抗体が含まれる。抗体は、好ましくは、検出可能に標識され、および／または固体支持体に結合される。

別の実施形態において、本発明は、適切な包装中に抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体および担体を含む、免疫関連疾患の診断キットに関する。キットは、好ましくは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在を検出するために抗体を使用するための指示書を含む。好ましくは、担体は、薬学的に許容可能である。

別の実施形態において、本発明は、適切な包装中に抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む診断キットに関する。キットは、好ましくは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを検出するために抗体を使用するための指示書を含む。

別の実施形態において、本発明は、哺乳動物から得られた組織細胞の試験サンプル中のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在または不在を検出する工程を包含する、該哺乳動物における免疫関連疾患を診断する方法であって、該試験サンプル中のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在または不在が、該哺乳動物における免疫関連疾患の存在を示す方法に関する。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストを同定するための方法であって、以下の工程を包含する：
（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって天然に誘導される細胞応答の誘導のために適切な条件下で、細胞およびスクリーニングされる試験化合物を接触させる工程；ならびに（ｂ）試験化合物が有効なアゴニストであるか否かを決定するために該細胞応答の誘導を決定し、ここで、該細胞応答の誘導は、該試験化合物が有効なアゴニストであることを示す工程。

別の実施形態においで、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと候補化合物との相互作用を可能にするのに十分である条件下および時間の間、これら２成分を接触させる工程、ならびにＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの活性が阻害されるか否かを決定する工程を包含する、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの活性を阻害可能である化合物を同定するための方法に関する。特定の態様において、候補化合物またはＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのいずれかが固体支持体上に固定化されている。別の態様において、非固定化成分が検出可能な標識を有する。好ましい態様において、この方法は以下の工程を包含する：
（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在下、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって通常誘導される細胞応答の誘導に適切である条件下で、細胞およびスクリーニングされる試験化合物を接触させる工程；ならびに
（ｂ）試験化合物が有効なアンタゴニストであるか否かを決定するために、該細胞応答の誘導を決定する工程。

別の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを正常に発現する細胞中でこのポリペプチドの発現を阻害する化合物を同定するための方法であって、細胞を試験化合物と接触させる工程、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの発現が阻害されるか否かを決定する工程を包含する方法を提供する。好ましい態様において、この方法は以下の工程を包含する：
（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの発現を可能にするのに適切である条件下で、細胞およびスクリーニングされる試験化合物を接触させる工程；ならびに（ｂ）該ポリペプチドの発現の阻害を決定する工程。

なお別の実施形態において、本発明は、免疫関連障害に罹患している哺乳動物における免疫関連障害を治療するための方法であって、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニスト、または（ｃ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアンタゴニストのいずれかをコードしている核酸分子を哺乳動物に投与する工程を包含し、該アゴニストまたはアンタゴニストが、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体であってよい方法に関する。好ましい実施形態において、哺乳動物はヒトである。別の好ましい実施形態において、核酸を、エキソビボ遺伝子治療を介して投与する。さらに好ましい実施形態において、核酸はベクター中に、より好ましくは、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクター内に含まれる。

なお別の態様において、本発明は、プロモータ、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストポリペプチド、または（ｃ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアンタゴニストポリペプチドをコードする核酸、およびポリペプチドの細胞分泌のためのシグナル配列から本質的になるウイルスベクターを含む組換えウイルス粒子であって、ウイルスベクターがウイルス構造タンパク質と関連している組換えウイルス粒子を提供する。好ましくは、シグナル配列は哺乳動物由来であり、例えば、ネイティブＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド由来である。

なおさらなる実施形態において、本発明は、レトロウイルス構造タンパク質を発現する核酸構築物を含み、プロモータ、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストポリペプチド、または（ｃ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアンタゴニストポリペプチドをコードする核酸、およびポリペプチドの細胞分泌のためのシグナル配列から本質的になるレトロウイルスベクター、ならびにポリペプチドの細胞内分泌のためのシグナル配列も含むエキソビボ生成細胞であって、構造タンパク質と関連する組換えレトロウイルス粒子をパッケージングして組換えレトロウイルス粒子を産生する生成細胞に関する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストを、哺乳動物に投与する工程を包含する、血管系から哺乳動物の組織への炎症性細胞の浸潤を増強するための方法であって、哺乳動物における血管系からの炎症性細胞の浸潤を増強する方法を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアンタゴニストを、哺乳動物に投与する工程を包含する、血管系から哺乳動物の組織への炎症性細胞の浸潤を減少させるための方法であって、哺乳動物における血管系からの炎症性細胞の浸潤を減少する方法を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストを、哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の活性を増加させる方法であって、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の活性を増加させる方法を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアンタゴニストを、哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の活性を減少させる方法であって、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の活性を減少させる方法を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストを、哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の増殖を増加させる方法であって、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の増殖を増加させる方法を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは（ｂ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアンタゴニストを、哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の増殖を減少させる方法であって、哺乳動物におけるＴ−リンパ球の増殖を減少させる方法を提供する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニストもしくはアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）に応答性である状態の治療に有用である医薬の調製のための、上記のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、またはそのアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の使用に関する。特定の態様において、本発明は、変性軟骨障害を治療するための方法における、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニストもしくはアンタゴニストの使用に関する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、治療有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、そのアゴニスト、またはアンタゴニストを、変性軟骨障害に罹患している哺乳動物に投与する工程を包含する、哺乳動物における変性軟骨障害を治療する方法に関する。

なおさらなる実施形態において、本発明は、薬学的に許容可能な担体と混合した、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、またはそのアゴニストもしくはアンタゴニストを含む組成物；該組成物を含む容器；および変性軟骨障害の治療における該組成物の使用に言及する、該容器に貼付されたラベルを含むキットに関する。

別の態様において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド中のＩＬ−１７Ａ（配列番号３）とＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方を阻害可能である１種以上のアンタゴニストの治療有効量を哺乳動物に投与する工程を包含する、その必要がある哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法に関する。好ましい実施形態において、哺乳動物はヒト被験体である。

１つの実施形態において、この方法は、治療有効量のＩＬ−１７ＡアンタゴニストおよびＩＬ−１７Ｆアンタゴニストの投与を包含する。

別の実施形態において、ＩＬ−１７Ａアンタゴニストは、ＩＬ−１７Ａ（配列番号３）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである。

さらに別の実施形態において、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、ＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである。

さらなる実施形態において、ＩＬ−１７ＡアンタゴニストはＩＬ−１７Ａ（配列番号３）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであり、ＩＬ−１７Ｆアンタゴニストは、ＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）に特異的を結合する抗体またはそのフラグメントである。

なおさらなる実施形態において、アンタゴニストは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド中のＩＬ−１７Ａ（配列番号３）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである。

異なる実施形態において、抗体は、ＩＬ−１７Ａ（配列番号３）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方に存在する同一のまたは類似のエピトープを認識する交差反応性抗体である。

さらなる実施形態において、抗体は、ＩＬ−１７Ａ特異性およびＩＬ−１７Ｆ特異性を有する二重特異性抗体またはそのフラグメントである。

すべての実施形態において、抗体はモノクローナル抗体であり得、これは、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であってもよい。

別の実施形態において、本発明は、その必要がある哺乳動物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を包含する、該哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、哺乳動物への、治療有効量の２種の異なった抗体の同時投与を包含し、ここで、１つの抗体がＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、他方の抗体がＩＬ−１７Ｆに特異的に結合する方法に関する。免疫関連障害は以下であり得る：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病。

別の実施形態において、本発明は、その必要がある哺乳動物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を含む、該哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、哺乳動物への、治療有効量の交差反応性抗体の投与を包含し、ここで、該抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するポリペプチドであるＩＬ−１７Ａと、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドであるＩＬ−１７Ｆとの両方に存在する同一のまたは類似のエピトープを認識する方法に関する。免疫関連障害は以下であり得る：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病。

別の実施形態において、本発明は、その必要がある哺乳動物においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を含む、該哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、該哺乳動物への、治療有効量の二重特異的抗体の投与を包含し、ここで、該抗体は、一方のアームがＩＬ−１７Ａを認識し、他方のアームがＩＬ−１７Ｆを認識する２つのアームからなる方法に関する。免疫関連障害には以下が含まれ得る：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病。

別の実施形態において、本発明は、その必要がある哺乳動物においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を含む、該哺乳動物における免疫関連障害を治療するであって、該哺乳動物への、治療有効量の二重特異的抗体の投与を包含し、ここで、該抗体は、ＩＬ−１７Ａを認識する重鎖およびＩＬ−１７Ｆを認識する軽鎖からなる方法に関する。免疫関連障害には以下が含まれ得る：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病。

別の実施形態において、本発明は、その必要がある哺乳動物においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を含む、該哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、該哺乳動物への、治療有効量の二重特異的抗体の投与を包含し、ここで、該抗体は、ＩＬ−１７Ｆを認識する重鎖およびＩＬ−１７Ａを認識する軽鎖からなる方法に関する。免疫関連障害は以下が含まれ得る：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病。

Ｂ．さらなる実施形態
本発明の他の実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子を提供する。

１つの態様において、単離された核酸分子は、（ａ）本明細書に開示される全長アミノ酸配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、もしくは本明細書に開示される全長アミノ酸配列の任意の他の特異的に規定されるフラグメントを有するＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡ分子に対して、または（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補物に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、または少なくとも約８１％の核酸配列同一性、または少なくとも約８２％の核酸配列同一性、または少なくとも約８３％の核酸配列同一性、または少なくとも約８４％の核酸配列同一性、または少なくとも約８５％の核酸配列同一性、または少なくとも約８６％の核酸配列同一性、または少なくとも約８７％の核酸配列同一性、または少なくとも約８８％の核酸配列同一性、または少なくとも約８９％の核酸配列同一性、または少なくとも約９０％の核酸配列同一性、または少なくとも約９１％の核酸配列同一性、または少なくとも約９２％の核酸配列同一性、または少なくとも約９３％の核酸配列同一性、または少なくとも約９４％の核酸配列同一性、または少なくとも約９５％の核酸配列同一性、または少なくとも約９６％の核酸配列同一性、または少なくとも約９７％の核酸配列同一性、または少なくとも約９８％の核酸配列同一性、または少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

他の態様において、単離された核酸分子は、（ａ）本明細書に開示される全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのコード配列ｃＤＮＡ、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのコード配列、もしくは本明細書に開示される全長アミノ酸配列の任意の他の特異的に規定されるフラグメントのコード配列を含むＤＮＡ分子に対して、または（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補物に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、または少なくとも約８１％の核酸配列同一性、または少なくとも約８２％の核酸配列同一性、または少なくとも約８３％の核酸配列同一性、または少なくとも約８４％の核酸配列同一性、または少なくとも約８５％の核酸配列同一性、または少なくとも約８６％の核酸配列同一性、または少なくとも約８７％の核酸配列同一性、または少なくとも約８８％の核酸配列同一性、または少なくとも約８９％の核酸配列同一性、または少なくとも約９０％の核酸配列同一性、または少なくとも約９１％の核酸配列同一性、または少なくとも約９２％の核酸配列同一性、または少なくとも約９３％の核酸配列同一性、または少なくとも約９４％の核酸配列同一性、または少なくとも約９５％の核酸配列同一性、または少なくとも約９６％の核酸配列同一性、または少なくとも約９７％の核酸配列同一性、または少なくとも約９８％の核酸配列同一性、または少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

さらなる態様において、本発明は、（ａ）本明細書に開示される、ＡＴＣＣに寄託されたヒトタンパク質ｃＤＮＡのいずれかによってコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子に対して、または（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補物に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、または少なくとも約８１％の核酸配列同一性、または少なくとも約８２％の核酸配列同一性、または少なくとも約８３％の核酸配列同一性、または少なくとも約８４％の核酸配列同一性、または少なくとも約８５％の核酸配列同一性、または少なくとも約８６％の核酸配列同一性、または少なくとも約８７％の核酸配列同一性、または少なくとも約８８％の核酸配列同一性、または少なくとも約８９％の核酸配列同一性、または少なくとも約９０％の核酸配列同一性、または少なくとも約９１％の核酸配列同一性、または少なくとも約９２％の核酸配列同一性、または少なくとも約９３％の核酸配列同一性、または少なくとも約９４％の核酸配列同一性、または少なくとも約９５％の核酸配列同一性、または少なくとも約９６％の核酸配列同一性、または少なくとも約９７％の核酸配列同一性、または少なくとも約９８％の核酸配列同一性、または少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子に関する。

別の実施形態は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード配列またはその相補物のフラグメントに向けられ、これは、例えば、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の結合部位を含むポリペプチドを選択的にコードし得るＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのコードフラグメントのためのハイブリダイゼーションプローブとして、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブとしての使用を見出し得る。このような核酸フラグメントは、通常、少なくとも約２０ヌクレオチド長、または少なくとも約３０ヌクレオチド長、または少なくとも約４０ヌクレオチド長、または少なくとも約５０ヌクレオチド長、または少なくとも約６０ヌクレオチド長、または少なくとも約７０ヌクレオチド長、または少なくとも約８０ヌクレオチド長、または少なくとも約９０ヌクレオチド長、または少なくとも約１００ヌクレオチド長、または少なくとも約１１０ヌクレオチド長、または少なくとも約１２０ヌクレオチド長、または少なくとも約１３０ヌクレオチド長、または少なくとも約１４０ヌクレオチド長、または少なくとも約１５０ヌクレオチド長、または少なくとも約１６０ヌクレオチド長、または少なくとも約１７０ヌクレオチド長、または少なくとも約１８０ヌクレオチド長、または少なくとも約１９０ヌクレオチド長、または少なくとも約２００ヌクレオチド長、または少なくとも約２５０ヌクレオチド長、または少なくとも約３００ヌクレオチド長、または少なくとも約３５０ヌクレオチド長、または少なくとも約４００ヌクレオチド長、または少なくとも約４５０ヌクレオチド長、または少なくとも約５００ヌクレオチド長、または少なくとも約６００ヌクレオチド長、または少なくとも約７００ヌクレオチド長、または少なくとも約８００ヌクレオチド長、または少なくとも約９００ヌクレオチド長、または少なくとも約１０００ヌクレオチド長であり、ここで、この状況において、「約」という用語は、言及されたヌクレオチド配列長プラスまたはマイナス言及された長さの１０％を意味する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の新規なフラグメントは、多数の周知の配列アラインメントプログラムのいずれかを使用して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を他の公知のヌクレオチド配列とアラインすることによって、およびポリペプチドをコードするどのヌクレオチド配列フラグメントが新規であることを決定することによって、慣用的な方法において決定され得ることが注目される。すべてのこのようなポリペプチドコードヌクレオチド配列が本明細書で意図される。これらのヌクレオチド分子フラグメント、好ましくは、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の結合部位を含むこれらＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドフラグメントによってコードされるポリペプチドフラグメントもまた意図される。

別の実施形態において、本発明は、上記で同定される単離された核酸配列のいずれかによってコードされる単離されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを提供する。

特定の態様において、本発明は、本明細書に開示される全長アミノ酸配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、もしくは本明細書に開示される全長アミノ酸配列の任意の他の特異的に規定されるフラグメントを有するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに関する。

さらなる態様において、本発明は、本明細書に開示される、ＡＴＣＣに寄託されたヒトタンパク質ｃＤＮＡのいずれかによってコードされるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに関する。

さらなる態様において、本発明は、本明細書に開示される全長アミノ酸配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、または本明細書に開示される全長アミノ酸配列の任意の他の特異的に規定されるフラグメントを有するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアミノ酸配列と比較した場合に、少なくとも約８０％ポジティブ、または少なくとも約８１％ポジティブ、または少なくとも約８２％ポジティブ、または少なくとも約８３％ポジティブ、または少なくとも約８４％ポジティブ、または少なくとも約８５％ポジティブ、または少なくとも約８６％ポジティブ、または少なくとも約８７％ポジティブ、または少なくとも約８８％ポジティブ、または少なくとも約８９％ポジティブ、または少なくとも約９０％ポジティブ、または少なくとも約９１％ポジティブ、または少なくとも約９２％ポジティブ、または少なくとも約９３％ポジティブ、または少なくとも約９４％ポジティブ、または少なくとも約９５％ポジティブ、または少なくとも約９６％ポジティブ、または少なくとも約９７％ポジティブ、または少なくとも約９８％ポジティブ、または少なくとも約９９％ポジティブを計上するアミノ酸配列を含む、単離されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに関する。

特定の態様において、本発明は、Ｎ末端シグナル配列および／または開始メチオニンを有さず、ならびに上記のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる、単離されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを提供する。このポリペプチドを産生するためのプロセスも本明細書に記載され、これらのプロセスは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの発現に適切である条件下で、適切なコード核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養する工程、および該細胞培養からＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを回収する工程を包含する。

なお別の実施形態において、本発明は、本明細書に定義されるネイティブなＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストに関する。特定の実施形態において、このアゴニストおよびアンタゴニストは抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体または小分子である。

さらなる実施形態において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを候補分子と接触させる工程、および該ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって媒介される生物学的活性をモニタリングする工程を包含する、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに対するアゴニストまたはアンタゴニストを同定する方法に関する。好ましくは、ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドはネイティブＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドである。

なおさらなる実施形態において、本発明は、担体と組み合わせた、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、または本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む組成物に関する。選択的に、担体は薬学的に許容可能な担体である。

本発明の別の実施形態は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、そのアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体に応答性である状態の治療に有用である医薬の調製のための、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、または上記のアゴニストもしくはアンタゴニスト、または抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の使用に関する。

本発明のさらなる実施形態において、本発明は、本明細書に記載されるポリペプチドのいずれかをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。任意のこのようなベクターを含む宿主細胞もまた提供される。例として、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、大腸菌、酵母、またはバキュロウイルス感染した昆虫細胞であってもよい。本明細書に記載されるポリペプチドのいずれかを産生するためのプロセスであって、所望のポリペプチドの発現に適切である条件下で宿主細胞を培養する工程、および細胞培養から所望のポリペプチドを回収する工程を包含するプロセスを提供する。

他の実施形態において、本発明は、異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合された、本明細書に記載されたポリペプチドのいずれかを含むキメラ分子を提供する。このようなキメラ分子の例には、エピトープタグ配列または免疫グロブリンのＦｃ領域に融合された、本明細書に記載されるポリペプチドのいずれかが含まれる。

なお別の実施形態において、本発明は、上記または下記のポリペプチドのいずれかに特異的に結合する抗体を提供する。選択的に、抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント、または単鎖抗体である。

なお他の実施形態において、本発明は、ゲノムおよびｃＤＮＡのヌクレオチド配列を単離するのに有用なオリゴヌクレオチドプローブ、またはアンチセンスプローブを提供し、ここで、これらのプローブは、上記または下記のヌクレオチド配列のいずれかから誘導されてもよい。
本発明の好ましい実施形態では、以下が提供される：
（項目１）
ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド中のＩＬ−１７Ａ（配列番号３）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方を阻害可能である１種以上のアンタゴニストの治療有効量を哺乳動物に投与する工程を包含する、免疫関連障害の治療を必要とする哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法。
（項目２）
前記哺乳動物がヒト被験体である、項目１に記載の方法。
（項目３）
治療有効量のＩＬ−１７ＡアンタゴニストおよびＩＬ−１７Ｆアンタゴニストを前記ヒト被験体に投与する工程を包含する、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ＩＬ−１７ＡアンタゴニストがＩＬ−１７Ａ（配列番号３）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＩＬ−１７ＦアンタゴニストがＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記ＩＬ−１７ＡアンタゴニストがＩＬ−１７Ａ（配列番号３）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントであり、前記ＩＬ−１７ＦアンタゴニストがＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである、項目３に記載の方法。
（項目７）
前記アンタゴニストが、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド中のＩＬ−１７Ａ（配列番号３）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントである、項目２に記載の方法。
（項目８）
前記抗体が、ＩＬ−１７Ａ（配列番号３）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方に存在する同一または類似のエピトープを認識する交差反応性抗体である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記抗体が、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆへの特異性を有する二重特異性抗体、またはそのフラグメントである、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメントである、項目３〜９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記モノクローナル抗体または抗体フラグメントがキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記免疫関連障害が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記免疫関連障害が多発性硬化症（ＭＳ）または関節リウマチ（ＲＡ）である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
哺乳動物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を包含する、免疫関連障害の治療を必要とする哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、該方法は、治療有効量の交差反応性抗体または該抗体のフラグメントの該哺乳動物への投与を包含し、該抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するポリペプチドであるＩＬ−１７Ａと、配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドであるＩＬ−１７Ｆとの両方に存在する同一のまたは類似のエピトープを認識する、方法。
（項目１５）
前記免疫関連障害が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記免疫関連障害が多発性硬化症（ＭＳ）または関節リウマチ（ＲＡ）である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
哺乳動物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を包含する、免疫関連障害の治療を必要とする哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、該方法は、治療有効量の二重特異的抗体の該哺乳動物への投与を包含し、該抗体は２つのアームからなり、該抗体の一方のアームがＩＬ−１７Ａを認識し、該抗体の他方のアームがＩＬ−１７Ｆを認識する、方法。
（項目１８）
前記免疫関連障害が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記免疫関連障害が多発性硬化症（ＭＳ）または関節リウマチ（ＲＡ）である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
哺乳動物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を包含する、免疫関連障害の治療を必要とする哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、該方法は、治療有効量の二重特異的抗体の該哺乳動物への投与を包含し、該抗体は、ＩＬ−１７Ａを認識する重鎖およびＩＬ−１７Ｆを認識する軽鎖からなる、方法。
（項目２１）
前記免疫関連障害が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病である、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記免疫関連障害が多発性硬化症（ＭＳ）または関節リウマチ（ＲＡ）である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
哺乳動物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの同時標的化を包含する、免疫関連障害の治療を必要とする哺乳動物における免疫関連障害を治療する方法であって、該方法は、治療有効量の二重特異的抗体の該哺乳動物への投与を包含し、該抗体は、ＩＬ−１７Ｆを認識する重鎖およびＩＬ−１７Ａを認識する軽鎖からなる、方法。
（項目２４）
前記免疫関連障害が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性筋障害、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、特発性脱髄性多発神経障害、ギラン−バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、感染性または自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、グルテン感受性腸症、ホイップル病、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、蕁麻疹、肺の免疫疾患、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、過敏性肺炎、移植関連疾患、移植拒絶または対宿主性移植片病である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記免疫関連障害が多発性硬化症（ＭＳ）または関節リウマチ（ＲＡ）である、項目２４に記載の方法。

図１は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆと称する新規なヒトサイトカインの発現および単離の結果を示す。ヒト２９３腎臓細胞は、図１Ａおよび図１Ｂに示されるように、ヒトＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆを単独でまたは組み合わせてコードするｃＤＮＡ発現ベクターを用いてトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞からの馴化培地は、図１Ａおよび図１Ｂに示されるように、ＩＬ−１７（レーン１〜５）またはＩＬ−１７Ｆ（レーン６〜１０）を認識可能である抗体を利用して免疫沈殿（ＩＰ）した。ウェスタンブロット分析を示し、これは、図１Ａのレーン８および図１Ｂのレーン３における二量体ＩＬ−１７Ａ複合体の存在を実証する。二量体ＩＬ−１７Ａ／Ｆ複合体は、ＩＬ−１７の１つのポリペプチド鎖およびＩＬ−１７Ｆの１つのポリペプチド鎖から構成される共有結合性ヘテロ二量体種とサイズが一致している。 図２は、組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製を示す。図２Ａは、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上での初期のＩＬ−１７Ａ／Ｆ画分からのタンパク質画分の銀染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果を示す。画分３１および３２は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆと一致する約３３ｋＤの見かけの分子量を有するタンパク質を含む。 図２は、組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製を示す。図２Ｂは、Ｖｙｄａｃ Ｃ４カラムクロマトグラフィを使用するＩＬ−１７Ａ／Ｆのさらなる精製の結果を示す。２１４ｎｍおよび２８０ｎｍにおいて測定した溶出タンパク質のクロマトグラフを示す。 図２は、組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製を示す。図２Ｂは、Ｖｙｄａｃ Ｃ４カラムクロマトグラフィを使用するＩＬ−１７Ａ／Ｆのさらなる精製の結果を示す。２１４ｎｍおよび２８０ｎｍにおいて測定した溶出タンパク質のクロマトグラフを示す。 図２は、組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製を示す。図２Ｃは、Ｖｙｄａｃ Ｃ４精製カラムからの精製ＩＬ−１７Ａ／Ｆタンパク質画分がＴＫ−１０細胞中でＩＬ−８産生を誘導することを実証する。 図３は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆのアミノ酸配列分析の結果を示す。図３Ａは、精製ＩＬ−１７Ａ／Ｆの非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。解析されたタンパク質はＰＶＤＦメンブレンに転写し、クマシーブルータンパク質色素で染色した。分子量マーカーの位置は右側に示す。図３Ｂは、単離したＩＬ−１７Ａ／ＦのＮ末端配列分析の結果を示す（図３Ａに示したバンドのＮ末端配列分析から検出されたアミノ酸残基）。配列分析は、２つのＮ末端配列を明らかにしている（それぞれ、配列１は配列番号１と称し、配列２は配列番号２と称する）。図３Ｃは、ヒトＩＬ−１７のアミノ酸配列（図３Ｃおよび図８の両方に示し、配列番号３と称する）およびヒトＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列（図３Ｃおよび図１０の両方に示し、配列番号４と称する）を示す。ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆのシグナル配列に下線を付している。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに存在する２つのＮ末端ペプチド配列（配列番号１および配列番号２）に対する同一性を有する配列は、示されるＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆポリペプチド配列について、太字で協調している。 図３は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆのアミノ酸配列分析の結果を示す。図３Ａは、精製ＩＬ−１７Ａ／Ｆの非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。解析されたタンパク質はＰＶＤＦメンブレンに転写し、クマシーブルータンパク質色素で染色した。分子量マーカーの位置は右側に示す。図３Ｂは、単離したＩＬ−１７Ａ／ＦのＮ末端配列分析の結果を示す（図３Ａに示したバンドのＮ末端配列分析から検出されたアミノ酸残基）。配列分析は、２つのＮ末端配列を明らかにしている（それぞれ、配列１は配列番号１と称し、配列２は配列番号２と称する）。図３Ｃは、ヒトＩＬ−１７のアミノ酸配列（図３Ｃおよび図８の両方に示し、配列番号３と称する）およびヒトＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列（図３Ｃおよび図１０の両方に示し、配列番号４と称する）を示す。ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆのシグナル配列に下線を付している。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに存在する２つのＮ末端ペプチド配列（配列番号１および配列番号２）に対する同一性を有する配列は、示されるＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆポリペプチド配列について、太字で協調している。 図３は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆのアミノ酸配列分析の結果を示す。図３Ａは、精製ＩＬ−１７Ａ／Ｆの非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。解析されたタンパク質はＰＶＤＦメンブレンに転写し、クマシーブルータンパク質色素で染色した。分子量マーカーの位置は右側に示す。図３Ｂは、単離したＩＬ−１７Ａ／ＦのＮ末端配列分析の結果を示す（図３Ａに示したバンドのＮ末端配列分析から検出されたアミノ酸残基）。配列分析は、２つのＮ末端配列を明らかにしている（それぞれ、配列１は配列番号１と称し、配列２は配列番号２と称する）。図３Ｃは、ヒトＩＬ−１７のアミノ酸配列（図３Ｃおよび図８の両方に示し、配列番号３と称する）およびヒトＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列（図３Ｃおよび図１０の両方に示し、配列番号４と称する）を示す。ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆのシグナル配列に下線を付している。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに存在する２つのＮ末端ペプチド配列（配列番号１および配列番号２）に対する同一性を有する配列は、示されるＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆポリペプチド配列について、太字で協調している。 図４は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析を示す。図４Ａは、成熟ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体のその鎖間および鎖内のジスルフィド結合を伴ってアミノ酸配列を示す模式図である（配列番号７７）。ジスルフィド結合に関与するシステインは黒丸（・）および残基番号によって示す。ジスルフィド結合は、太字のシステインを接続する黒線によって示す。鎖間ジスルフィド連結を形成するジスルフィド結合は太い黒線によって協調している。 図４は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析を示す。図４Ｂは、トリプシンを用いるＩＬ−１７Ａ／Ｆの消化によって産生されることが予測される、ＩＬ−１７鎖とＩＬ−１７Ｆ鎖との間のジスルフィド結合を含むＩＬ−１７Ａ／Ｆペプチドフラグメント番号１および番号２の模式図を示す［それぞれ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１は配列番号７と称し；ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２は配列番号８と称する］。これらのフラグメント内に含まれるアミノ酸は、各鎖の開始メチオニンに対して相対的に示し、番号付けしている。質量スペクトル測定によって観察されることが予想されるこれらのフラグメントの計算したおよその分子量もまた示す。 図４は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析を示す。図４Ｃは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆのマトリクス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間質量スペクトル測定（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）ペプチドマップを示す。得られるペプチドマップは、ジスルフィド連結ペプチドと一致する［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４２０．１２Ｄａおよび３４１０．６０Ｄａを有するピークを含む。 図４は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析を示す。図４Ｄは、液体クロマトグラフィエレクトロスプレーイオン化イオントラップ質量スペクトル分析（ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ）によるＩＬ−１７Ａ／Ｆの非還元サンプルのさらなる特徴付けを実証する。イオンクロマトグラムは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１［Ｍ＋２Ｈ］３＋の再構築したイオンクロマトグラム（ＲＩＣ）である、（上端から下端までの）全体のイオンクロマトグラムを表す。両方のヘテロ二量体と一致するピークが観察されたが、バックグラウンド化学ノイズより上のピークは、ヘテロ二量体ペプチドについての予測される分子量では観察されなかった。 図４は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析を示す。図４Ｄは、液体クロマトグラフィエレクトロスプレーイオン化イオントラップ質量スペクトル分析（ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ）によるＩＬ−１７Ａ／Ｆの非還元サンプルのさらなる特徴付けを実証する。イオンクロマトグラムは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１［Ｍ＋２Ｈ］３＋の再構築したイオンクロマトグラム（ＲＩＣ）である、（上端から下端までの）全体のイオンクロマトグラムを表す。両方のヘテロ二量体と一致するピークが観察されたが、バックグラウンド化学ノイズより上のピークは、ヘテロ二量体ペプチドについての予測される分子量では観察されなかった。 図４は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析を示す。図４Ｄは、液体クロマトグラフィエレクトロスプレーイオン化イオントラップ質量スペクトル分析（ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ）によるＩＬ−１７Ａ／Ｆの非還元サンプルのさらなる特徴付けを実証する。イオンクロマトグラムは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１［Ｍ＋２Ｈ］３＋の再構築したイオンクロマトグラム（ＲＩＣ）である、（上端から下端までの）全体のイオンクロマトグラムを表す。両方のヘテロ二量体と一致するピークが観察されたが、バックグラウンド化学ノイズより上のピークは、ヘテロ二量体ペプチドについての予測される分子量では観察されなかった。 図５Ａは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１７Ｆによって誘導される炎症誘発性応答を比較する用量反応曲線を示す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１７Ｆは、２４時間の間の示された濃度において、ＴＫ−１０細胞とともにインキュベートした。ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、ｎＭ以下の濃度で見られる実質的な活性で、強力なＩＬ−８誘導活性を有することが示された。図５Ｂは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１７ＦによるＩＬ−６誘導を比較する用量反応曲線を示す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１７Ｆは、２４時間の間の示された濃度において、ＴＫ−１０細胞とともにインキュベートした。ＴＫ−１０馴化培地を収集し、ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡによって分析した。 図６は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合するＦａｂからのＣＤＲ Ｈ１−Ｈ３を含む重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合可能である識別可能な抗体重鎖配列をコードする３４個のクローン（それぞれ、配列番号９〜配列番号４２）の推定アミノ酸配列の領域のアラインメントを示す。３つの重鎖ＣＤＲ領域（ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３）に影を付けている。 図７は、ネイティブ配列ＩＬ−１７ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号５）を示す。 図８は、図７に示される配列番号５のコード配列から誘導されるアミノ酸配列（配列番号３）を示す。 図９は、ネイティブ配列ＩＬ−１７ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号６）を示す。 図１０は、図９に示される配列番号６のコード配列から誘導されるアミノ酸配列（配列番号４）を示す。 図１１は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８活性化ヒトＴ細胞から産生されたＩＬ−１７Ａ／ＦのＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＥＬＩＳＡ測定を示す。 図１２は、並行してアッセイした３つの画分番号３１〜３３がほぼ等価量のＩＬ−１７Ａ／Ｆを含むことを示した、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＥＬＩＳＡの特異性を示す（ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは対照として使用した）。 図１３は、Ｔ細胞がＩＬ−６およびＴＧＦβを用いて誘導されるときのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方の産生の増加レベルを示す。 図１４は、ＩＬ−１７ファミリーのサイトカインおよび複雑なパターンの重複する受容体−リガンド特異性を示す。左から右にかけて、図１４は、ＩＬ−１７リガンドがＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ；本明細書ではＰＲＯ１と称する）に結合し；ＩＬ−１７Ｂリガンド（ＰＲＯ１０３１）がＩＬ−１７ＲＨ１受容体（ＰＲＯ５８０１）に結合し；ＩＬ−１７Ｅリガンド（ＰＲＯ１０２７２）がＩＬ−１７ＲＨ１受容体（ＰＲＯ５８０１）に結合し；ＩＬ−１７Ｆリガンド（ＰＲＯ２０１１０）がＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ、本明細書ではＰＲＯ１と称する）ならびにＩＬ−１７ＲＨ２受容体（ＰＲＯ２００４０）の両方に結合し；ＩＬ−１７Ｃリガンド（ＰＲＯ１１２２）およびＩＬ−１７Ｄリガンド（ＰＲＯ２１１７５）が、ＩＬ−１７Ｒ受容体、ＩＬ−１７ＲＨ１受容体、またはＩＬ−１７ＲＨ２受容体と相互作用しないことを実証する。 図１５はＩＬ−１７Ｆの構造を示す。図１５ＡはＩＬ−１７Ｆ単量体のリボントレースを示す。鎖に標識している。ジスルフィドはボールおよびスティック表示で示し、硫黄原子は黄色に着色している。さらなるシステインのおよその位置は橙色のボールで示す。挿入図は、標準の節構造の漫画表示を示す。図１５Ｂは、赤色および青色でのＩＬ−１７Ｆ二量体のリボントレースを示す。ジスルフィドは図１５Ａと同様に示される。図１５ＣはＮＧＦ−ＴｒｋＡ複合体からのＮＧＦの構造を示す（Ｗｅｉｓｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４０１：１８４−１８８（１９９９））。不規則なループが鎖２および３を接続している。 図１６は、他のＩＬ−１７ファミリーメンバーとのＩＬ−１７Ｆの配列アラインメントを示す。ＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｆとの間の同一性および保存配列の領域は、それぞれ、緑色および黄色で強調している。他のファミリーメンバーもまたこれらの領域において保存性または同一の残基を有する場合には、これらは同様に着色している。システイン残基は橙色で示す。標準の節構造のシステインを置き換える保存性セリンは、白文字で強調している。すべてのＩＬ−１７で保存性であることが予想されるジスルフィド結合は、結合したシステインを接続する黒線によって示される。ＩＬ−１７Ｆ中で鎖間ジスルフィドを形成する２つのシステインは星印で印を付けている。ＩＬ−１７Ｆの二次構造エレメントは、青色の矢印（β鎖）または円筒形（αヘリックス）として配列の上に示す。残基の番号付けは、成熟配列の開始点からである。 図１７は、ＩＬ−１７（ＰＲＯ２０１１０）およびＩＬ−１７の分子構造の比較を示す。図１６に示すＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｆとの間の配列保存性に従って着色したＩＬ−１７Ｆの分子表面の２つの直交する図、「側面」（Ａ）および「前面」（Ｂ）。２つのタンパク質間で同一である残基の表面は緑色に着色し、相同性残基は黄色に着色しているのに対して、有意に異なる残基は白色に着色している。（Ｂ）の図は図１５（Ｂ）の図から約１５°回転した方向である。空洞を形成する残基は標識している。図１７Ｃは、ＩＬ−１７Ｆのいずれかの側面の大きな空洞が二量体の本体にいかにして深く突き抜けているかを示す、図１７Ｂの表面の「断面」図である。 図１８は、ＮＧＦ上のＩＬ−１７Ｆ表面およびＴｒｋＡ結合部位の比較を示す。図１８Ａおよび１８Ｂは、ＩＬ−１７Ｆの分子構造が図１７におけるものと同様に配向していることを示す。ＩＬ−１７Ｆは、静電表面電位に従って着色している：赤色、−５ｋＴ；白色、０ｋＴ；および青色、＋５ｋＴである。空洞の位置は円で示している。図１８Ｃはパネル（Ｂ）のＩＬ−１７Ｆと同じ配向であるＮＧＦの分子構造を示す；ＴｒｋＡのドメイン５は緑色リボンとして示される（Ｗｅｉｓｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４０１：１８４−１８８（１９９９）；ｐｄｂ ｃｏｄｅ １ＷＷＷ）。 図１９は、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）のマウスモデルにおける抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の効力を示す。 図２０は、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）のマウスモデルにおける抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の効力を示す。

好ましい実施形態の詳細な説明
Ｉ．定義
「ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド」には、自然界由来の対応するＩＬ−１７Ａ／Ｆと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。このようなネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、自然界から単離することができるか、または組換えもしくは合成手段によって産生することができる。「ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド」という用語には、具体的には、特定のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの天然に存在する短縮型または分泌型（例えば、細胞外ドメイン配列）、天然に存在する変異体型（例えば、選択的スプライシング型）、および天然に存在する、ポリペプチドの対立遺伝子多型が包含される。本発明の種々の実施形態において、本明細書に開示されるネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、付随する図面に示される全長アミノ酸配列を含む成熟配列または全長ネイティブ配列のポリペプチドである。開始コドンおよび終止コドンは、図面の太字フォントで示し、下線を付している。しかし、付随する図面に開示されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、図面の１位のアミノ酸と本明細書で称されるメチオニン残基で開始することが示されるが、図面の１位のアミノ酸の上流または下流のいずれかに位置している他のメチオニン残基が、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの開始アミノ酸残基として利用され得ることは、考えられ得ることであり、かつ可能なことである。

本明細書に開示される種々のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの「シグナルペプチド」の適切な位置は、本明細書および／または付随する図面に示される。しかし、シグナルペプチドのＣ末端境界は変化する可能性があるが、最も可能性があるものとしては、最初に本明細書で同定されるものとしてのシグナルペプチドＣ末端境界のいずれかの側において約５アミノ酸を超えないことに注目するべきであり、ここで、シグナルペプチドのＣ末端境界は、アミノ酸エレメントの型を同定するために、当該分野において日常的に利用される判断基準に従って同定されてもよい（例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．，１０：１−６（１９９７）およびｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，１４：４６８３−４６９０（１９８６））。さらに、ある場合において、分泌ポリペプチドからのシグナル配列の切断は完全に均一ではなく、複数の分泌種を生じることもまた認識される。シグナルペプチドが、本明細書で同定されるシグナルペプチドのＣ末端境界のいずれかの側で約５アミノ酸を超えない範囲内で切断される、これらの成熟ポリペプチド、およびこれらをコードするポリヌクレオチドが、本発明によって意図される。

「ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド変異体」とは、本明細書に開示される全長ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、または本明細書に開示される全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列の任意の他のフラグメントと、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する、上記または下記の活性なＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを意味する。このようなＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド変異体には、例えば、全長ネイティブアミノ酸配列の−またはＣ末端において、１つ以上のアミノ酸残基が付加または欠失されているＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドが含まれる。通常、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド変異体は、本明細書に開示される全長ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、または本明細書に開示される全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列の任意の他の具体的に定義されるフラグメントに対して、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する。通常、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長、または少なくとも約２０アミノ酸長、または少なくとも約３０アミノ酸長、または少なくとも約４０アミノ酸長、または少なくとも約５０アミノ酸長、または少なくとも約６０アミノ酸長、または少なくとも約７０アミノ酸長、または少なくとも約８０アミノ酸長、または少なくとも約９０アミノ酸長、または少なくとも約１００アミノ酸長、または少なくとも約１５０アミノ酸長、または少なくとも約２００アミノ酸長、または少なくとも約３００アミノ酸長、またはそれ以上である。

本明細書に同定されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列同一性パーセントを達成するために、配列をアラインし、そして必要な場合、ギャップを導入した後の、特定のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列中のアミノ酸配列と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義され、配列同一性の一部として、いかなる保存性残基も考慮しない。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の範囲内にある種々の方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって、最大アラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムに含まれる、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、本発明の目的のために、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムであるＡＬＩＧＮ−２を使用して生成され、ここで、ＡＬＩＧＮ−２プログラムの完全なソースコードは以下の表１に提供される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作製され、以下の表１に示すソースコードは、米国著作権局（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９にユーザ文書とともに提出され、これは、米国著作権登録番号（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｎｏ．）ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａを通して公的に利用可能であり、または以下の表１に提供されるソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄ上での使用のためにコンパイルされる必要がある。すべての配列比較パラメータはＡＬＩＧＮ−２によって設定され、変更しない。

ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較のために利用される状況において、所定のアミノ酸配列Ａの、所定のアミノ酸配列Ｂアミノ酸への、それとの、またはそれに対するアミノ酸配列同一性％（これは、代替的には、所定のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する特定のアミノ酸配列同一性％を有するかまたはそれを含む所定のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２でのＡおよびＢのアラインメントにおける、そのプログラムによって同一であると一致して点数付けされるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％には等しくないことが認識される。この方法を使用する、アミノ酸配列同一性％の計算の例として、表２および３は、目的の仮想ポリペプチドのアミノ酸配列に対する、指定されたアミノ酸配列「比較タンパク質」のアミノ酸配列同一性％を、いかにして計算するかを実証し、「比較タンパク質」は、目的のポリペプチドが比較されるポリペプチドのアミノ酸配列を表し、そして「Ｘ」、「Ｙ」、および「Ｚ」は、各々、異なる仮想のアミノ酸残基を表す。

他に具体的に言及しない限り、本明細書で使用されるすべてのアミノ酸配列同一性％は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、すぐ前の段落に記載されるように得られる。しかし、アミノ酸配列同一性％の値はまた、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２コンピュータプログラムを使用することによって、以下に記載されるように得られてもよい（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０−４８０（１９９６））。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２検索パラメータの多くはデフォルト値に設定されている。デフォルト値には設定しない値、すなわち、調節可能なパラメータは以下の値に設定する：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１、およびスコアリングマトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２が利用される場合、アミノ酸配列同一性％の値は、（ａ）ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２によって決定される、ネイティブポリペプチド由来の配列を有する目的のポリペプチドのアミノ酸配列と、目的の比較アミノ酸配列（すなわち、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリペプチドであり得る目的のポリペプチドがそれに対して比較され得る配列）との間の同一のアミノ酸残基の一致の数を、（ｂ）目的のポリペプチドのアミノ酸残基の総数によって除算することによって決定される。例えば、「アミノ酸配列Ｂに対する少なくとも８０％アミノ酸配列同一性を有するかまたは有しているアミノ酸配列Ａを含むポリペプチド」という言及において、アミノ酸配列Ａは、目的の「比較タンパク質」の比較アミノ酸配列であり、アミノ酸配列Ｂは、目的のポリペプチドのアミノ酸配列である。

アミノ酸配列同一性パーセントはまた、配列比較プログラムＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７））を使用して決定されてもよい。ＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２配列比較プログラムは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖからダウンロードされてもよく、または、米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ
Ｈｅａｌｔｈ），Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤから入手されてよい。ＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２はいくつかの検索パラメータを使用し、ここで、これらの検索パラメータのすべてをデフォルトパラメータに設定し、これには、例えば、以下が含まれる：アンマスク＝あり（ｙｅｓ）、鎖＝すべて（ａｌｌ）、予測出現＝１０、最小低複雑性長さ＝１５／５、マルチパスｅ値＝０．０１、マルチパス定数＝２５、最終ギャップアラインメントのドロップオフ＝２５、およびスコアリングマトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２。

ＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２がアミノ酸配列比較のために利用される状況において、所定のアミノ酸配列Ａの、所定のアミノ酸配列Ｂアミノ酸への、それとの、またはそれに対するアミノ酸配列同一性％（代替的には、所定のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する特定のアミノ酸配列同一性％を有するかまたはそれを含む所定のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２でのＡおよびＢのアラインメントにおける、そのプログラムによって完全な一致であると点数付けされるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％には等しくないことが認識される。

「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリヌクレオチド」または「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体核酸配列」は、以下に定義されるような活性なＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードし、かつ本明細書に開示される全長ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠く全長ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、または本明細書に開示される全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列の任意の他のフラグメントをコードする核酸配列と、少なくとも約８０％の核酸配列同一性を有する、核酸分子を意味する。通常、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリヌクレオチドは、本明細書に開示される全長ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠く全長ネイティブ配列のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列、または本明細書に開示される全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド配列の任意の他のフラグメントをコードする核酸配列と、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、または少なくとも約８１％の核酸配列同一性、または少なくとも約８２％の核酸配列同一性、または少なくとも約８３％の核酸配列同一性、または少なくとも約８４％の核酸配列同一性、または少なくとも約８５％の核酸配列同一性、または少なくとも約８６％の核酸配列同一性、または少なくとも約８７％の核酸配列同一性、または少なくとも約８８％の核酸配列同一性、または少なくとも約８９％の核酸配列同一性、または少なくとも約９０％の核酸配列同一性、または少なくとも約９１％の核酸配列同一性、または少なくとも約９２％の核酸配列同一性、または少なくとも約９３％の核酸配列同一性、または少なくとも約９４％の核酸配列同一性、または少なくとも約９５％の核酸配列同一性、または少なくとも約９６％の核酸配列同一性、または少なくとも約９７％の核酸配列同一性、または少なくとも約９８％の核酸配列同一性、または少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有する。変異体はネイティブな核酸配列を包含しない。

通常、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリヌクレオチドは、少なくとも約３０ヌクレオチド長、または少なくとも約６０ヌクレオチド長、または少なくとも約９０ヌクレオチド長、または少なくとも約１２０ヌクレオチド長、または少なくとも約１５０ヌクレオチド長、または少なくとも約１８０ヌクレオチド長、または少なくとも約２１０ヌクレオチド長、または少なくとも約２４０ヌクレオチド長、または少なくとも約２７０ヌクレオチド長、または少なくとも約３００ヌクレオチド長、または少なくとも約４５０ヌクレオチド長、または少なくとも約６００ヌクレオチド長、または少なくとも約９００ヌクレオチド長、またはそれ以上である。

本明細書に同定されるＩＬ−１７Ａ／Ｆコード核酸配列に関する「核酸配列同一性パーセント（％）」は、最大配列パーセント同一性を達成するために、配列をアラインし、そして必要な場合、ギャップを導入した後の、目的のＩＬ−１７Ａ／Ｆ核酸配列におけるヌクレオチドと同一である候補配列におけるヌクレオチドのパーセンテージとして定義される。核酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の範囲内にある種々の方法で達成することができる。しかし、本発明の目的のために、核酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムであるＡＬＩＧＮ−２を使用して生成され、ここで、ＡＬＩＧＮ−２プログラムの完全なソースコードは以下の表１に提供される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作製され、以下の表１に示すソースコードは、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９にユーザ文書とともに提出され、これは、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａを通して公的に利用可能であり、または以下の表１に提供されるソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄ上での使用のためにコンパイルされる必要がある。すべての配列比較パラメータはＡＬＩＧＮ−２によって設定され、変更しない。

ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較のために利用される状況において、所定の核酸配列Ｃの、所定の核酸配列Ｄへの、それとの、またはそれに対する核酸配列同一性％（代替的には、所定の核酸配列Ｄへの、それとの、またはそれに対する特定の核酸配列同一性％を有するかまたはそれを含む所定の核酸配列Ｄと言い換えることができる）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｗ／Ｚ
式中、Ｗは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２でのＣおよびＤのアラインメントにおける、そのプログラムによって完全な一致であると点数付けされるヌクレオチドの数であり、Ｚは、Ｄにおけるヌクレオチドの総数である。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さに等しくない場合、Ｄに対するＣの核酸配列同一性％は、Ｃに対するＤの核酸配列同一性％には等しくないことが認識される。核酸配列同一性％の計算の例として、表４および５は、「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ−ＤＮＡ」と称する核酸配列に対する、指定された核酸配列「比較タンパク質」の核酸配列同一性％を、いかにして計算するかを実証し、「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ−ＤＮＡ」は、目的の仮想ＩＬ−１７Ａ／Ｆ−をコードする目的の核酸配列を表し、「比較ＤＮＡ」は、目的の「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ−ＤＮＡ」核酸分子が比較される核酸分子のヌクレオチド配列を表し、「Ｎ」、「Ｌ」、および「Ｖ」は、各々、異なる仮想ヌクレオチドを表す。

他に具体的に言及しない限り、本明細書で使用されるすべての核酸配列同一性％は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、すぐ前の段落に記載されるように得られる。しかし、核酸配列同一性％の値はまた、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２コンピュータプログラムを使用することによって、以下に記載されるように得られてもよい（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０−４８０（１９９６））。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２検索パラメータの多くはデフォルト値に設定されている。デフォルト値には設定しない値、すなわち、調節可能なパラメータは以下の値に設定する：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１、およびスコアリングマトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２が利用される場合、核酸配列同一性％の値は、（ａ）ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２によって決定される、ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード核酸由来の配列を有する目的のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード核酸分子の核酸配列と、目的の比較核酸分子（すなわち、目的のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード核酸分子が比較され、変異体ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリヌクレオチドであり得る配列）との間の同一のヌクレオチドの一致の数を、（ｂ）目的のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード核酸分子のヌクレオチドの総数によって除算することによって決定される。例えば、「核酸配列Ｂに対する少なくとも８０％核酸配列同一性を有するかまたは有している核酸配列Ａを含む単離された核酸分子」という言及において、核酸配列Ａは、目的の比較核酸分子であり、核酸配列Ｂは、目的のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードする核酸分子の核酸配列である。

核酸配列同一性パーセントはまた、配列比較プログラムＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７））を使用して決定されてもよい。ＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２配列比較プログラムは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖからダウンロードされてもよく、または、米国国立衛生研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤから入手されてよい。ＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２はいくつかの検索パラメータを使用し、ここで、これらの検索パラメータのすべてをデフォルト値に設定し、これには、例えば、以下が含まれる：アンマスク＝あり（ｙｅｓ）、鎖＝すべて（ａｌｌ）、予測出現＝１０、最小低複雑性長さ＝１５／５、マルチパスｅ値＝０．０１、マルチパス定数＝２５、最終ギャップアラインメントのドロップオフ＝２５、およびスコアリングマトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２。

ＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２が配列比較のために利用される状況において、所定の核酸配列Ｃの、所定の核酸配列Ｄ核酸への、それとの、またはそれに対する核酸配列同一性％（代替的には、所定の核酸配列Ｄへの、それとの、またはそれに対する特定の核酸配列同一性％を有するかまたはそれを含む所定の核酸配列Ｃと言い換えることができる）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｗ／Ｚ
式中、Ｗは、配列アラインメントプログラムＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ２でのＣおよびＤのアラインメントにおける、そのプログラムによって完全な一致であると点数付けされるヌクレオチドの数であり、Ｚは、Ｄにおけるヌクレオチドの総数である。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さに等しくない場合、Ｄに対するＣの核酸配列同一性％は、Ｃに対するＤの核酸配列同一性％には等しくないことが認識される。

他の実施形態において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリヌクレオチドは、活性なＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードし、かつ好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーションおよび洗浄条件下で、本明細書に開示される全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコードヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である核酸分子である。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリペプチドは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ポリヌクレオチドによってコードされているものであり得る。

「単離された」は、本明細書に開示されている種々のポリペプチドを説明するために使用される場合、その天然の環境の成分から、同定ならびに分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。その天然の環境の夾雑成分は、典型的には、そのポリペプチドについての診断的または治療的な用途と干渉する物質であり、これには、酵素、ホルモン、および他のタンパク質または非タンパク質性の溶質が含まれる可能性がある。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、（１）スピニングカップシークエネータ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用により、Ｎ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで精製され、または（２）クマシーブルーもしくは好ましくは銀染色を使用して、非還元条件もしくは還元条件下で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、均質まで精製される。単離されたポリペプチドには、組換え細胞中、インサイチュでポリペプチドが含まれる。なぜなら、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないからである。しかし、通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１の精製工程によって調製される。

「単離された」ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード核酸または他のポリペプチドコード核酸は、同定されており、ならびにそのポリペプチドコード核酸の天然の供給源において通常は付随している少なくとも１種の夾雑核酸分子から同定および分離された核酸分子である。単離されたポリペプチドコード核酸分子は、天然に見出される形態または設定以外のものである。それゆえに、単離されたペプチドコード核酸分子は、それが天然の細胞中に存在する場合の特定のポリペプチドコード核酸分子とは区別される。しかし、単離されたポリペプチドコード核酸分子には、通常ではポリペプチドを発現する細胞中に含まれるポリペプチドコード核酸分子が含まれ、例えば、ここで、この核酸分子は、天然の細胞とは異なる染色体位置にある。

「制御配列」という用語は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要であるＤＮＡ配列をいう。原核生物に適切である制御配列には、例えば、プロモータ、任意に、オペレータ配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核生物細胞は、プロモータ、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサを利用することが知られている。

核酸は、別の核酸配列との機能的な関連性に置かれる場合に、「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結される；プロモータもしくはエンハンサは、配列の転写に影響を与える場合に、コード配列に作動可能に連結される；またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するために配置される場合に、コード配列に作動可能に連結される。一般的に、「作動可能に連結される」は、連結されるＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的でありかつ読み枠にあることを意味する。しかし、エンハンサは、連続的である必要はない。連結は、便利な制限部位におけるライゲーションによって達成される。このような部位が存在しない場合には、合成オリゴヌクレオチドアダプタまたはリンカーが、従来的な実務に従って使用される。

ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者によって容易に決定可能であり、一般的には、プローブの長さ、洗浄温度、および塩濃度に依存する経験的な計算である。一般的には、より長いプローブはより正確なアニーリングのためにより高い温度を必要とするのに対して、より短いプローブはより低い温度を必要とする。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補鎖がそれらの融解温度よりも下の環境に存在する場合に、変性ＤＮＡが再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイズ可能な配列との間の望ましい相同性の程度が高いほど、使用することができる相対温度は高くなる。結果として、より高い相対温度は反応条件をよりストリンジェントにする傾向があるのに対して、より低い温度はより低くストリンジェントにするということになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーのさらなる詳細および説明については、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，（１９９５）を参照のこと。

「ストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、本明細書に定義されるように、以下によって同定されてもよい：（１）洗浄のために、低イオン強度および高温を利用する条件、例えば、５０ＥＣの０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウム；（２）ハイブリダイゼーションの間に、ホルムアミドなどの変性剤を利用する条件、例えば、４０ＥＣの７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムとともに、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ６．５）を伴う５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミド；または（３）４２ＥＣの５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、および１０％硫酸デキストランであって、５５ＥＣの０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）および５０％ホルムアミド中での４２ＥＣにおける洗浄、続いてＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる５５ＥＣにおける高ストリンジェンシー洗浄を伴う条件。

「中程度のストリンジェント条件」は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，１９８９によって記載されるように同定されてもよく、上記よりも低ストリンジェントである洗浄溶液およびハイブリダイゼーションの条件（例えば、温度、イオン強度、およびＳＤＳ％）の使用が含まれる。中程度のストリンジェント条件の例は、２０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ溶液、１０％硫酸デキストラン、および２０ｍｇ／ｍｌ 変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中での３７ＥＣにおける一晩のインキュベーション、続いて、約３７〜５０ＥＣでの１×ＳＳＣ中でのフィルタの洗浄である。当業者は、プローブ長などの要因に適応する必要に応じて、温度、イオン強度などをいかにして調整するかを理解している。

「エピトープタグ化」という用語は、本明細書で使用される場合、「タグポリペプチド」に融合されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含むキメラポリペプチドをいう。タグポリペプチドは、抗体がそれに対して作製され得るエピトープを供給するのに十分な残基を有し、それにも関わらず、融合されるポリペプチドの活性と干渉しないように十分に短い。タグポリペプチドはまた、抗体が他のエピトープと実質的に交差反応しないように、極めて独特である。適切なタグポリペプチドは、一般的には、少なくとも６個のアミノ酸残基、通常は約８個から５０個の間のアミノ酸残基（好ましくは、約１０個から２０個の間のアミノ酸残基）を有する。

本明細書で使用される場合、「イムノアドヘシン」という用語は、異種タンパク質（アドヘシン）の結合特異性を、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクタ機能と組み合わせる抗体様分子を意味する。構造的には、イムノアドヘシンは、抗体の抗原認識および結合部位以外である（すなわち、「異種である」）所望の結合特異性を有するアミノ酸配列、ならびに免疫グロブリン定常ドメイン配列の融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドヘシン部分は、典型的には、受容体およびリガンドの少なくとも結合部位を含む連続するアミノ酸配列である。イムノアドヘシンにおける免疫グロブリン定常ドメイン配列は、任意の免疫グロブリン、例えば、サブタイプＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、またはＩｇＧ−４、ＩｇＡ（ＩｇＡ−１およびＩｇＡ−２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭから得られてもよい。

「アンタゴニスト」という用語は、その最も広い意味で使用され、これには、本明細書に記載されるネイティブなＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全に遮断、阻害、または中和する任意の分子が含まれる。同様の様式で、「アゴニスト」という用語は、その最も広い意味で使用され、これには、本明細書に記載されるネイティブなＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子が含まれる。具体的には、適切なアゴニストまたはアンタゴニスト分子には、アゴニストまたはアンタゴニスト抗体または抗体フラグメント、ネイティブなＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのフラグメントまたはアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、小有機分子などが含まれる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するための方法は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを候補アゴニストまたはアンタゴニスト分子と接触させる工程、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと通常は関連する１つ以上の生物学的活性の検出可能な変化を測定する工程を包含し得る。

「治療」とは、治療的処置と、予防的または回避的な手段との両方をいい、ここで、その目的は、標的とされる病理学的な状態または障害を妨害するかまたは遅延させる（減少する）ことである。治療の必要がある人には、障害をすでに有する人、ならびに障害を有する傾向がある人またはその人において障害が予防されるべきである人が含まれる。

「長期」投与とは、長期間にわたって、初期の治療的効果（活性）を維持するために、急性様式とは反対に、連続的様式での薬剤の投与をいう。「断続」投与は、中断を伴うことなく非連続的に行われるが、むしろ事実上周期的である治療である。

治療の目的のための「哺乳動物」は、哺乳動物として分類される任意の動物をいい、これには、ヒト、家畜および農業用動物、ならびに動物園の動物、競技用動物、またはペット動物、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどが含まれる。好ましくは、この哺乳動物はヒトである。

１種以上のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与には、同時（並行）投与および任意の順番での連続投与が含まれる。

「担体」には、本明細書で使用される場合、利用される投薬量および濃度においてそれに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤が含まれる。しばしば、生理学的に許容可能な担体は、水性ｐＨ緩衝化溶液である。生理学的に許容可能な担体の例には以下が含まれる：リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤。

「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、例えば、単一の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆモノクローナル抗体（アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、および中和抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体組成物（例えば、所望の生物学的活性を示す限り、二特異性抗体）、ポリクローナル抗体、単鎖ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、および、所望の生物学的または免疫学的な活性を示す限り、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体のフラグメント（以下を参照のこと）を具体的に網羅する。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書では、抗体と交換可能に使用される。

「単離された抗体」は、同定され、ならびに、その天然の環境の成分から分離および／または回収されているものである。その天然の環境の夾雑成分は、抗体にとっての診断的または治療的な用途と干渉しない物質であり、これには、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれてもよい。好ましい実施形態において、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定されるように、抗体の９５重量％よりも多く、（２）スピニングカップシークエネータの使用により、Ｎ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、もしくは銀染色を使用して、還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質まで、精製される。抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、単離された抗体には、組換え細胞中のインサイチュの抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１の精製工程によって調製される。

基本的な４個の鎖である抗体ユニットは、２個の同一の軽（Ｌ）鎖および２個の同一の重（Ｈ）鎖から構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である（ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれるさらなるポリペプチドとの基本的なヘテロ四量体単位５個からなり、それゆえに、１０個の抗原結合部位を有するのに対して、分泌性ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖との基本的な４鎖単位を２〜５個含む多価集合体を形成するように重合できる）。ＩｇＧの場合においては、４個の鎖単位は一般的に約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は１つの共有結合性ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結されているのに対して、２個のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに依存して、１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ鎖およびＬ鎖はまた、規則的に間隔の空いた鎖間のジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端、可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）、続いてα鎖およびγ鎖については各々３つの定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）、ならびにμおよびεアイソタイプについては４つのＣ_Ｈドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端、可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）、続いて他のその端に定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）を有する。ＶＬはＶ_Ｈとともに整列し、Ｃ_Ｌは重鎖の最初の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）とともに整列する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖の可変ドメインの間の界面を形成すると考えられている。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌの対合は、単一の抗原結合部位を一緒に形成する。異なるクラスの抗体の構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第８版，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（編），Ａｐｐｌｅｔｏｎ
＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ．１９９４，７１頁および第６章を参照のこと。

任意の脊椎動物種からのＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に別個の型のうちの１つに割り当てることができる。それらの重鎖（Ｃ_Ｈ）の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。５つの免疫グロブリンのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在する。これらは、それぞれ、α、δ、ε、およびμと称する重鎖を有する。γおよびαクラスは、Ｃ_Ｈの配列および機能の比較的わずかな違いに基づいて、さらにサブクラスに分けられ、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現する。

「可変」という用語は、可変ドメインの特定のセグメントが抗体間の配列において広範に異なるという事実をいう。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、その特定の抗原についての特定の抗体の特異性を規定する。しかし、可変性は、可変ドメインの１１０アミノ酸の全長にわたって均一に分布してはいない。代わりに、Ｖ領域は、各９〜１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極度な可変性のより短い領域によって分けられている１５〜３０アミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチからなる。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変ドメインは、４つのＦＲを含み、これらは大部分がβ−シート配置を採っており、３つの超可変領域によって接続されており、この領域は、接続するループを形成し、ある場合においては、β−シート構造の一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲによって密接に近接して、他の鎖からの超可変領域と一緒に保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接的には関与しないが、しかし、種々のエフェクタ機能、例えば、抗体依存的な細胞の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への抗体の関与などを示す。

「超可変領域」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、一般的に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、Ｖ_Ｌにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、および８９〜９７（Ｌ３）のほぼ周辺、ならびにＶ_Ｈにおける残基１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３）のほぼ周辺；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））および／または「超可変ループ」からの残基（例えば、Ｖ_Ｌにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、および９１〜９６（Ｌ３）、ならびにＶ_Ｈにおける残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体をいい、すなわち、この集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する変異の可能性以外は同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原性部位に指向されている。さらに、種々の決定基（エピトープ）に対して指向される種々の抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗体において単一の決定基に対して指向されている。これらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体によって夾雑されることなく合成され得るという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されない。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ方法論によって調製されてもよく、または細菌、真核生物である動物もしくは植物の細胞中での組換えＤＮＡ法を使用して作製されてもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）において記載される技術を使用するファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。

モノクローナル抗体は、本明細書では、「キメラ」抗体を含み、これは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるかまたは相同であるのに対して、鎖の残りの部分が、別の種に由来するか、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにこのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一であるかまたは相同であり、但しこのことは、これらの抗体が所望の生物学的活性を示す限りにおいてのことである（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本発明における目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル）から誘導された可変ドメイン抗原結合配列およびヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体が含まれる。

「インタクト」抗体は、抗原結合部位、ならびにＣ_Ｌおよび少なくとも重鎖定常ドメイン、ＣＨ_１、ＣＨ_２、およびＣＨ_３を含むものである。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であってもよい。好ましくは、インタクト抗体は１つ以上のエフェクタ機能を有する。

「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部、好ましくは、インタクト抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］を参照のこと）；単鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成された多特異的抗体が含まれる。

抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」と呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、および残りの「Ｆｃ」フラグメントを生じ、呼称は容易に結晶化する能力を反映している。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖（Ｖ_Ｈ）の可変ドメインとともに全体のＬ鎖、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは抗原結合に関して一価であり、すなわち、これは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大きなＦ（ａｂ’）_２フラグメントを生じ、これは、二価の抗原結合活性を有する、２つのジスルフィド連結Ｆａｂフラグメントに概して相当し、抗原を架橋することが可能である。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端におけるさらなる少数の残基を有することにより、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を有するＦａｂ’についての本明細書での呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体フラグメントは、もともとは、Ｆａｂ’フラグメントの対として生じ、これらは、これらの間にヒンジシステインを有する。抗体フラグメントの他の化学結合もまた知られている。

Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドによって一緒に保持されている両方のＨ鎖のカルボキシ末端部を含む。抗体のエフェクタ機能はＦｃ領域における配列によって決定され、この領域はまた、特定の細胞型で見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小限の抗体フラグメントである。このフラグメントは、強固な非共有結合性の会合状態である、１つの重鎖可変領域および１つの軽鎖可変領域の二量体からなる。これらのフォールディングから、２つのドメインは、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、かつ抗体に対する抗原結合特異性を付与する、６個の超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖から各々３個のループ）を生じる。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的である３個のみのＣＤＲを含むＦｖの半分）でさえもが、抗原を認識および結合する能力を有するが、全体の結合部位よりも低い親和性である。

「単鎖Ｆｖ」もまた、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と略記され、これは、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶ_ＨおよびＶ_Ｌを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはさらに、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、Ｖ_ＨとＶ_Ｌとの間のポリペプチドリンカーを含む。ｓＦｖの概説としては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２６９−３１５頁（１９９４）；Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ １９９５，下記を参照のこと。

「ダイアボディ」という用語は、鎖間であるが鎖内ではないＶドメインの対合が達成され、二価フラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメントを生じるように、Ｖ_ＨとＶ_Ｌとの間の短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓＦｖフラグメント（先の段落を参照のこと）を構築することによって調製される小さな抗体フラグメントをいう。二特異性ダイアボディは、２つの「交差」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体であり、ここで、２つの抗体のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインが、異なるポリペプチド鎖上に存在している。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）により十分に記載されている。

非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト抗体から誘導された最小配列を含むキメラ抗体である。多くの部分については、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の抗体の特異性、親和性、および容量を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって置き換えられている免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体の性能をさらに精密にするために作製される。一般的には、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのそれと一致し、そしてＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のそれである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含む。ヒト化抗体はまた、選択的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。

「種依存性抗体」、例えば、哺乳動物抗ヒトＩｇＥ抗体は、第１の哺乳動物種からの抗原に対して、第２の哺乳動物種からのその抗原のホモログが有するよりも、より強い結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原に「特異的に結合する」（すなわち、約１×１０^−７Ｍを超えない、好ましくは約１×１０^−８Ｍを超えない、最も好ましくは約１×１０^−９Ｍを超えない結合親和性（Ｋｄ）値を有する）が、ヒト抗原についてのその結合親和性よりも、少なくとも約５０倍、または少なくとも約５００倍、または少なくとも約１０００倍弱い、第２の非ヒト哺乳動物種からの抗原のホモログについての結合親和性を有する。種依存性抗体は、先に定義したような種々の型の抗体のいずれかであり得るが、好ましくは、ヒト化抗体またはヒト抗体である。

「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド」は、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合するオリゴペプチドである。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合ポリペプチドは、公知のオリゴペプチド合成方法論を使用して化学的に合成されてもよく、または組換え技術を使用して調製および精製されてもよい。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合ポリペプチドは、通常、少なくとも約５アミノ酸長、代替的には、少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６．２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００アミノ酸長、またはそれ以上であり、ここで、このようなポリペプチドは、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合ポリペプチドに、好ましくは特異的に結合可能である。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチドは、周知の技術を使用して、過度の実験なしに同定されてもよい。この点に関して、ポリペプチド標的に特異的に結合可能であるオリゴペプチドについてオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該分野において周知であることが注目される（例えば、米国特許第５，５５６，７６２号、同第５，７５０，３７３号、同第４，７０８，８７１号、同第４，８３３，０９２号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６８９号、同第５，６６３，１４３号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８４／０３５０６およびＷＯ８４／０３５６４；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：３９９８−４００２（１９８４）；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２：１７８−１８２（１９８５）；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｇｅｎｓ所収，１３０−１４９（１９８６）；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１０２：２５９−２７４（１９８７）；Ｓｃｈｏｏｆｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４０：６１１−６１６（１９８８）、Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ら、（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３７８；Ｌｏｗｍａｎ，Ｈ．Ｂ．ら（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．３０：１０８３２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ら（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１；Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８８：８３６３、およびＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８を参照のこと）。

「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子」は、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合する、本明細書において定義されるオリゴペプチドまたは抗体以外の有機分子である。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、公知の方法論を使用して、同定および化学的に合成されてもよい（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／００８２３およびＷＯ００／３９５８５を参照のこと）。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、約２０００ダルトン未満のサイズ、代替的には、約１５００、７５０、５００、２５０、または２００ダルトン未満のサイズであり、ここで、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合可能であるこのような有機分子は、周知の技術を使用して、過度の実験なしで同定されてもよい。この点に関して、ポリペプチド標的に特異的に結合可能である分子についてオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該分野において周知であることが注目される（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／００８２３およびＷＯ００／３９５８５を参照のこと）。

目的の抗原、例えば、腫瘍関連ポリペプチド抗原標的「を結合する」抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子は、この抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子が、抗原を発現する細胞または組織を標的とする際に診断剤および／または治療剤として有用であり、かつ他のタンパク質と有意に交差反応しないように、十分な親和性で抗原に結合するものである。このような実施形態において、「非標的」タンパク質への、この抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子の結合の程度は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析または放射性免疫沈降法（ＲＩＡ）によって決定されるように、その特定の標的タンパク質への、その抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子の結合の約１０％未満である。標的タンパク質への、抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子の結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープの「特異的結合」またはそれに「特異的に結合する」またはそれに「特異的である」という用語は、結合が、非特異的結合とは測定可能に異なることを意味する。特異的結合は、例えば、一般的には、結合活性を有さない類似の構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と類似している対照分子、例えば、過剰の非標識標的との競合によって、決定することができる。この場合において、プローブに対する標識された標的の結合が過剰の非標識標的によって競合的に阻害されるとき、特異的結合が示される。本明細書で使用される、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープの「特異的結合」またはそれに「特異的に結合する」またはそれに「特異的である」という用語は、例えば、少なくとも約１０^−４Ｍ、または少なくとも約１０^−５Ｍ、または少なくとも約１０^−６Ｍ、または少なくとも約１０^−７Ｍ、または少なくとも約１０^−８Ｍ、または少なくとも約１０^−９Ｍ、または少なくとも約１０^−１０Ｍ、または少なくとも約１０^−１１Ｍ、または少なくとも約１０^−１２Ｍ、またはそれ以上の、標的に対するＫｄを有する分子によって示すことができる。１つの実施形態において、「特異的結合」という用語は、分子が、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープへの実質的な結合なしで、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープに結合する場合の結合をいう。

「ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド」を発現する腫瘍細胞の増殖を「阻害する」抗体、オリゴペプチド、もしくは他の有機分子、または「増殖阻害」抗体、オリゴペプチド、もしくは他の有機分子は、適切なＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを発現または過剰発現する癌細胞の測定可能な増殖阻害を生じるものである。好ましい増殖阻害抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、オリゴペプチド、もしくは他の有機分子は、適切な対照と比較した場合に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ発現腫瘍細胞の増殖を、２０％より多く、好ましくは、約２０％〜約５０％、およびなおより好ましくは、５０％より多く（例えば、約５０％〜約１００％）阻害し、この対照は、典型的には、試験される抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子で処理されていない腫瘍細胞である。１つの実施形態において、増殖阻害は、細胞培養中で、約０．１〜３０μｇ／ｍｌまたは約０．５ｎＭ〜２００ｎＭの抗体濃度で測定でき、ここで、増殖阻害は、抗体への腫瘍細胞の曝露の１〜１０日後に決定される。インビボでの腫瘍細胞の増殖阻害は、種々の方法で決定することができる。抗体は、約１μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重での抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の投与が、抗体の最初の投与から５日〜３ヶ月以内、好ましくは、約５〜３０日以内に腫瘍サイズまたは腫瘍細胞増殖の減少を生じる場合に、インビボで増殖阻害性である。

「アポトーシスを誘導する」抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞の断片化、および／または膜ベシクル（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成によって決定されるようなプログラムされた細胞死を誘導するものである。細胞は、通常、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを過剰発現するものである。好ましくは、細胞は、腫瘍細胞、例えば、前立腺、乳房、卵巣、胃、子宮内膜、肺、腎臓、結腸、膀胱の細胞である。種々の方法が、アポトーシスに関連する細胞事象を評価するために利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）移行は、アネキシン結合によって測定できる；ＤＮＡ断片化は、ＤＮＡラダー化によって評価することができる；そしてＤＮＡ断片化に伴う核／クロマチン凝縮は、低二倍体細胞のある程度の増加によって評価することができる。好ましくは、アポトーシスを誘導する抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子は、アネキシン結合アッセイにおいて、未処理細胞と比較して、約２〜５０倍、好ましくは、約５〜５０倍、および最も好ましくは、約１０〜５０倍のアネキシン結合の誘導を生じるものである。

抗体「エフェクタ機能」とは、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性をいい、抗体アイソタイプによって変化する。抗体エフェクタ機能の例には以下が含まれる：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害性；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；およびＢ細胞活性化。

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に提示される、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌型Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクタ細胞が抗原保持標的細胞に特異的に結合することを可能にし、続いて、細胞毒素を用いて標的細胞を殺傷する、細胞傷害の型をいう。抗体は細胞傷害性細胞を「武装させ」、このような殺傷のために絶対的に必要である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対して、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイが実施されてもよい。このようなアッセイのために有用なエフェクタ細胞には、末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的には、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価されてもよい。

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）を結合するものであり、これには、サブクラスＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変異体、および代替的スプライシング型も含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦＣγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは、その細胞質ドメインが主として異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインの中に、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインの中に、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（概説Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲはＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５−３４（１９９４）；ならびにｄｅ Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書の「ＦｃＲ」という用語に含まれる。この用語は、胎児への母体のＩｇＧの移動の原因である、新生児受容体、ＦｃＲｎも含む（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。

「ヒトエフェクタ細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクタ機能を遂行する白血球である。好ましくは、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクタ機能を遂行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、および好中球が含まれ；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。エフェクタ機能はネイティブな供給源、例えば、血液から単離されてもよい。

「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解をいう。古典的な補体経路の活性化は、それらのコグネイト抗原に結合した抗体（適切なサブクラス）への補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイが実施されてもよい。

「標識」という言葉は、本明細書で使用される場合、「標識化」抗体を生成するために、直接的または間接的に抗体に結合体化される検出可能な化合物または組成物をいう。標識は、それ自体が検出可能であってもよく（例えば、放射性同位元素標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合には、検出可能である基質化合物もしくは組成物の化学変化を触媒してもよい。

「固相」は、本明細書の抗体が付着できる非水性マトリクスを意味する。本明細書に含まれる固相の例には、ガラス（例えば、制御ポアガラス）、多糖類（例えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール、およびシリコーンで部分的または全体的に形成されるものが含まれる。特定の実施形態において、状況に依存して、固相は、アッセイのウェルを含むことができ；他の実施形態において、これは精製カラムである（例えば、アフィニティクロマトグラフィカラム）。この用語はまた、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されているものなどの、別個の粒子の不連続的な固相もまた含む。

「リポソーム」は、哺乳動物への薬物（例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはその抗体）の送達のために有用である、種々の型の脂質、リン脂質、および／または界面活性剤から構成される小胞である。リポソームの構成成分は、生体膜の脂質配置と類似する、二重層形成で一般的に配置される。

「小分子」は、本明細書では、約５００ダルトンより下の分子量を有すると定義される。

「調節する」という用語は、シグナル伝達経路のレベルに影響を与える（例えば、アップレギュレートする、ダウンレギュレートする、または制御する）ことを意味する。シグナル伝達の制御下にある細胞プロセスには、特定の遺伝子の転写、正常な細胞機能、例えば、代謝、増殖、分化、付着、アポトーシス、および生存、ならびに異常なプロセス、例えば、形質転換、分化の遮断、および転移が含まれるがこれらに限定されない。

本明細書での目的のための「活性な」または「活性」は、ネイティブなまたは天然に存在するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの生物学的活性および／または免疫学的活性を保持するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの型をいい、ここで、「生物学的」活性とは、ネイティブなまたは天然に存在するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって保有される抗原性エピトープに対して抗体の産生を誘導する能力以外の、ネイティブなまたは天然に存在するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって引き起こされる生物学的機能（阻害性または刺激性のいずれか）をいい、また、「免疫学的」活性は、ネイティブまたは天然に存在するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって保有される抗原性エピトープに対して抗体の産生を誘導する能力をいう。１つの好ましい生物学的活性には、ＮＦ−κＢの活性化の誘導ならびに炎症性ケモカインＩＬ−８およびＩＬ−６の産生の刺激が含まれる。別の好ましい生物学的活性には、末梢血単核細胞またはＣＤ４^＋細胞の刺激が含まれる。別の好ましい生物学的活性には、Ｔリンパ球の増殖の刺激が含まれる。別の好ましい生物学的活性には、例えば、ＴＨＰ１細胞からのＴＮＦ−αの放出が含まれる。別の活性には、関節軟骨中でのマトリクス合成の増強が含まれる。または、別の活性には、関節軟骨マトリクスの分解を促進すること、ならびにマトリクス合成を阻害することが含まれる。別の好ましい生物学的活性には、軽度から重度までの段階の炎症性腸疾患の間、または脳卒中の間に、インターロイキン−１７シグナル伝達経路のレベルを調節することが含まれる。

「免疫学的活性」とは、ネイティブなまたは天然に存在するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドによって保有される抗原性エピトープに対する抗体の産生を誘導する能力のみをいう。

「変性軟骨障害」は、軟骨マトリクスの破壊によって主に特徴付けられる障害の宿主をいう。さらなる病理には、一酸化窒素産生およびプロテオグリカン分解の上昇が含まれる。この定義中に含まれる例示的な障害には、例えば、関節炎（例えば、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎）が含まれる。

「免疫関連疾患」という用語は、哺乳動物の免疫系の構成要素が、その哺乳動物の病的状態を引き起こし、これを媒介し、またはさもなければこれに寄与する疾患を意味する。免疫応答の刺激または介入が、疾患の進行に対して改善効果を有する疾患も含まれる。免疫媒介性炎症性疾患、非免疫媒介炎症性疾患、感染性疾患、免疫欠損性疾患、新生物形成などがこの用語に含まれる。

「Ｔ細胞媒介性疾患」という用語は、Ｔ細胞が、直接的または間接的に、その哺乳動物の病的状態を引き起こし、これを媒介し、またはさもなければこれに寄与する疾患を意味する。Ｔ細胞媒介性疾患は、Ｂ細胞が、例えば、Ｔ細胞によって分泌されるリンホカインにおって刺激される場合に、細胞媒介される効果、リンホカイン媒介性効果など、およびＢ細胞に関連する効果さえにも関連し得る。

そのいくつかが免疫媒介性またはＴ細胞媒介性である、本発明に従って治療することができる免疫関連疾患および炎症性疾患の例には以下が含まれる：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）、甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発神経障害またはギラン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、例えば、感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、および他の非肝臓指向性のウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン感受性腸症、およびホイップル病、以下を含む自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、および接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、および蕁麻疹、肺の免疫疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、および過敏性肺炎、以下を含む移植関連疾患、移植拒絶および対宿主性移植片病。感染性疾患には、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、ヘルペスなど、細菌感染、真菌感染、原生動物感染、および寄生生物感染が含まれる。「有効量」という用語は、特定の言及した目的の達成をもたらす、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドおよび／またはそのアゴニスト／アンタゴニストの濃度または量である。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニストまたはアンタゴニストの「有効量」は経験的に決定されてもよい。さらに、「治療有効量」は、言及した治療効果を達成するために有効である、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドおよび／またはそのアゴニスト／アンタゴニストの濃度または量である。この量もまた経験的に決定されてもよい。

「細胞傷害性因子」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の機能を阻害もしくは妨害し、そして／または細胞の破壊を引き起こす物質をいう。この用語は、放射性同位元素（例えば、Ｉ^１３１、Ｉ^１２８、Ｙ^９０、およびＲｅ^１８６）、化学療法剤、および毒素、例えば、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメントを含むことが意図される。

「化学療法剤」は、癌の治療において有用である化学化合物である。化学療法剤の例には、アドリアマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、ブスルファン、サイトキシン、タキソイド、例えば、パクリタキセル（タキソール（Ｔａｘｏｌ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（タキソテレ（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、トキソテレ、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラマイシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照のこと）、メルファラン、および他の関連するナイトロジェンマスタード。タモキシフェンおよびオナプリストンなどの、腫瘍上のホルモン作用を調節または阻害するように作用するホルモン剤もまたこの定義に含まれる。

「増殖阻害剤」は、インビトロまたはインビボで、細胞、とりわけ、本明細書に同定される任意の遺伝子を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する化合物または組成物をいう。従って、増殖阻害剤は、Ｓ期にあるこのような遺伝子を過剰発現する細胞の割合を有意に減少するものである。増殖阻害剤の例には、細胞周期の進行（Ｓ期以外の場所における）を遮断する薬剤、例えば、Ｇ１停止およびＭ期停止を誘導する薬剤が含まれる。古典的なＭ期遮断剤には、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキソール、およびトポＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンが含まれる。Ｇ１を停止するこれらの薬剤はまた、Ｓ期停止にも波及し、これは例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、およびａｒａ−ＣなどのＤＮＡアルキル化剤である。さらなる情報は、Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編、第１章、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる「Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」という標題、とりわけ、１３頁（ＷＢ
Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）において見出され得る。

「サイトカイン」という用語は、細胞間メディエータとして別の細胞に対して作用する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質についての一般的な用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中には以下が含まれる：ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびブタ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよびβ；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−βなどの神経成長因子；血小板増殖因子；ＴＧＦαおよびＴＧＦβトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−α、−β、および−γなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；ならびに顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−Ｉａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、またはＩＬ−１７などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；ならびに白血病阻害因子およびキットリガンドを含む他のポリペプチド因子。本明細書で使用される場合、サイトカインという用語は、天然の供給源または組換え細胞培養からのタンパク質、およびネイティブ配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。

アミノ酸配列同一性％＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つのポリペプチド配列間で完全に一致するアミノ酸残基の数）÷（ＩＬ−１７Ａ／Ｆタンパク質のアミノ酸残基の総数）＝
５÷１５＝３３．３％

アミノ酸配列同一性％＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つのポリペプチド配列間で完全に一致するアミノ酸残基の数）÷（ＩＬ−１７Ａ／Ｆタンパク質のアミノ酸残基の総数）＝
５÷１０＝５０％

核酸配列同一性％＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つの核酸配列間で完全に一致するヌクレオチドの数）÷（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ−ＤＮＡ核酸配列のヌクレオチドの総数）＝６÷１４＝４２．９％

核酸配列同一性％＝
（ＡＬＩＧＮ−２によって決定される２つの核酸配列間で完全に一致するヌクレオチドの数）÷（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ−ＤＮＡ核酸配列のヌクレオチドの総数）＝
４÷１２＝３３．３％ 。

ＩＩ．本発明の組成物および方法
Ａ．全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド
本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドとして本願において言及されるポリペプチドをコードする新規に同定および単離されたヌクレオチド配列を提供する。特に、種々のＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするｃＤＮＡが、以下の実施例でさらに詳細に開示されるように、同定および単離された。

Ｂ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド変異体
本明細書に記載される全長ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに加えて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体が調製できることが意図される。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡに適切なヌクレオチドの変化を導入することによって、および／または所望のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの合成によって調製することができる。当業者は、アミノ酸の変化が、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの翻訳後プロセスを変化させ得ること、例えば、グリコシル化部位の数もしくは位置を変化させること、または膜アンカリング特性を変えることを認識している。

本明細書に記載される、ネイティブな全長配列ＩＬ−１７Ａ／ＦまたはＩＬ−１７Ａ／Ｆの種々のドメインの変形体は、例えば、保存性および非保存性変異のための技術およびガイドラインのいずれか、例えば、米国特許第５，３６４，９３４号に記載されているものを使用して作製できる。変形体は、ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆと比較して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆのアミノ酸配列の変化を生じるＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、または挿入であり得る。選択的に、変形体は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの１つ以上のドメインにおける任意の他のアミノ酸との、少なくとも１つのアミノ酸の置換による。どのアミノ酸残基が所望の活性を有害に変化させることなく挿入、置換、または欠失され得るかを決定する際の指針は、ＩＬ−１７ＡＦの配列を、相同な公知のタンパク質分子と比較すること、および高い相同性の領域中で作製されたアミノ酸配列の変化の数を最小化することによって見出されてもよい。アミノ酸置換は、類似の構造的および／または化学的な特性を有する別のアミノ酸による１つのアミノ酸の置き換え、例えば、セリンによるロイシンの置き換え、すなわち、保存性アミノ酸置換の結果であり得る。挿入または欠失は、任意に、約１〜５アミノ酸の範囲であり得る。可能である変形体は、配列中のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を合成的に作製すること、および得られる変異体を、全長またはネイティブな成熟配列によって示される活性について試験することによって決定されてもよい。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドフラグメントが本発明で提供される。このようなフラグメントは、Ｎ末端またはＣ末端で短縮されてもよく、または、例えば、全長ネイティブ配列と比較した場合に、内部の残基を欠いていてもよい。特定のフラグメントは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの所望の生物学的活性のために必須ではないアミノ酸残基を欠いている。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆフラグメントは、多数の従来的な技術のいずれかによって調製されてもよい。所望のペプチドフラグメントは化学的に合成されてもよい。代替的なアプローチには、酵素消化によって、例えば、特定のアミノ酸残基によって規定される部位においてタンパク質を切断することが知られている酵素を用いてタンパク質を処理することによって、または適切な制限酵素でＤＮＡを消化し、そして所望のフラグメントを単離することによって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆフラグメントを生成することが含まれる。なお別の適切な技術には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、所望のポリペプチドフラグメントをコードするＤＮＡフラグメントを単離および増幅することが含まれる。ＤＮＡフラグメントの所望の末端を規定するオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲの５’プライマーおよび３’プライマーにおいて利用される。好ましくは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドフラグメントは、本明細書に開示されるネイティブなＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと、少なくとも１つの生物学的および／または免疫学的な活性を共有する。

特定の実施形態において、目的の保存性置換は、好ましい置換の見出しの下に表６において示される。このような置換が生物学的活性の変化を生じる場合、表６において例示的置換と命名され、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載されるような、より実質的な変化が導入され、生成物がスクリーニングされる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの機能または免疫学的同一性の実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートまたはヘリックスコンホメーションとしての、置換の領域中のポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩高さを維持することに対する修飾の効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖の構造に基づいて、以下のグループに分けられる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
（６）芳香族性：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ 。

非保存性置換は、１つのこれらのクラスのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。このような置換残基はまた、保存性置換部位に、または、より好ましくは、残りの（非保存性）部位に導入されてもよい。

変形体は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）変異誘発、アラニンスキャニング、およびＰＣＲ変異誘発などの当該分野において公知である方法を使用して作製することができる。部位特異的変異誘発［Ｃａｒｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３：４３３１（１９８６）；Ｚｏｌｌｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１０：６４８７（１９８７）］、カセット変異誘発（Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ，３４：３１５［１９８５］）、制限選択変異誘発（Ｗｅｌｌｓら、Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄｏｎ ＳｅｒＡ，３１７：４１５［１９８６］）、または他の公知の技術は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ変異体ＤＮＡを産生するために、クローン化ＤＮＡに対して実施することができる。

スキャニングアミノ酸分析は、連続する配列に沿って、１つ以上のアミノ酸を同定するために利用することができる。好ましいスキャニングアミノ酸の中には、比較的小さな中性アミノ酸がある。このようなアミノ酸には、アラニン、グリシン、およびシステインが含まれる。アラニンは、典型的には、このグループの中で好ましいスキャニングアミノ酸である。なぜなら、これは、ベータ炭素の向こう側の側鎖を排除しており、変異体の主鎖のコンホメーションを変化させる可能性が少ないからである（ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５［１９８９］）。アラニンもまた、これが最も一般的なアミノ酸であるため、典型的には好ましい。さらに、これは、埋没した位置および曝露された位置の両方において頻繁に見出される（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５０：１［１９７６］）。アラニン置換が適切な量の変異体を生じない場合、等比体積（ｉｓｏｔｅｒｉｃ）アミノ酸が使用できる。

Ｃ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆの修飾
ＩＬ−１７Ａ／Ｆの共有結合性修飾は本明細書の範囲内に含まれる。１つの型の共有結合性修飾には、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの選択した側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端の残基と反応することが可能である有機誘導体化試薬と、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの標的化アミノ酸残基とを反応させることが含まれる。二官能性試薬を用いる誘導体化は、例えば、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を精製するための方法における使用のために、水不溶性支持体マトリクスまたは表面にＩＬ−１７Ａ／Ｆを架橋するために、またはその逆のために有用である。一般的に使用される架橋剤には、例えば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドトキシスクシンイミドエステル、例えば、４−アジドサリチル酸を伴うエステル、３，３’−ジイチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）などのジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなどの二官能性マレイミド、およびメチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの試薬が含まれる。

他の修飾には、グルタミニル残基およびアスパラギニル残基の、それぞれ対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基への脱アミド化、プロリンおよびリジンの水酸化、セリル残基およびスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジンの側鎖のαアミノ基のメチル化［Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，７９−８６頁（１９８３）］、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。

本発明の範囲内に含まれるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの別の型の共有結合性修飾には、ポリペプチドのネイティブなグリコシル化パターンを変化させることが含まれる。「ネイティブなグリコシル化パターンを変化させること」は、ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆにおいて見出される１つ以上の炭水化物部分を除去すること（根底にあるグリコシル化を取り除くこと、または化学的および／もしくは酵素的手段によってグリコシル化を除去することのいずれかによって）を意味することが、本明細書の目的のために意図される。加えて、この語句は、存在する種々の炭水化物部分の性質および割合の変化を含む、ネイティブタンパク質のグリコシル化の定性的な変化を含む。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドへのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を変化させることによって達成されてもよい。この変化は、例えば、ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆに、１つ以上のセリン残基またはスレオニン残基の付加、またはそれによる置換によって作製されてもよい（Ｏ−連結グリコシル化部位について）。ＩＬ−１７Ａ／Ｆアミノ酸配列は、所望のアミノ酸に翻訳するコドンが生成されるように、特に、あらかじめ選択した塩基において、ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させることによって、ＤＮＡレベルでの変化を通して、任意に変化されてもよい。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド上の炭水化物部分の数を増加させる別の手段は、ポリペプチドに対するグリコシドの化学的または酵素的なカップリングによる。このような方法は、当該分野において、例えば、１９８７年９月１１日に公開されたＷＯ８７／０５３３０、ならびにＡｐｌｉｎおよびＷｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５９−３０６頁（１９８１）において記載されている。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに存在する炭水化物部分の除去は、化学的または酵素的に、またはグリコシル化のための標的として働くアミノ酸残基をコードするコドンの変異による置換によって、達成されてもよい。化学的脱グリコシル化技術は、当該分野において公知であり、例えば、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２（１９８７）およびＥｄｇｅら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１（１９８１）によって記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１３８：３５０（１９８７）によって記載されるように、種々のエンド−およびエキソ−グリコオキシダーゼの使用によって達成することができる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆの別の型の共有結合性修飾には、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号、または同第４，１７９，３３７号に記載された様式で、種々の非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンに、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを連結することが含まれる。

本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆは、別の異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列に融合されたＩＬ−１７Ａ／Ｆを含むキメラ分子を形成するための方法においてもまた修飾されてもよい。

１つの実施形態において、このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドとのＩＬ−１７Ａ／Ｆの融合物を含む。エピトープタグは、一般的に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆのアミノ末端またはカルボキシ末端に配置されている。このようなエピトープ−タグ型のＩＬ−１７Ａ／Ｆの存在は、タグポリペプチドに対する抗体を使用して検出できる。また、エピトープタグの提供は、抗タグ抗体またはエピトープタグに結合する別の型のアフィニティマトリクスを使用して、アフィニティ精製によって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆが容易に精製されることを可能にする。種々のタグポリペプチドおよびそれらのそれぞれの抗体は当該分野において周知である。例には以下が含まれる；ポリ−ヒスチジン（ポリ−ｈｉｓ）またはポリ−ヒスチジン−グリシン（ポリ−ｈｉｓ−ｇｌｙ）タグ；ｆｌｕ ＨＡタグポリペプチドおよびその抗体１２ＣＡ５［Ｆｉｅｌｄら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８：２１５９−２１６５（１９８８）］；ｃ−ｍｙｃタグならびにそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７、および９Ｅ１０抗体［Ｅｖａｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５：３６１０−３６１６（１９８５）］；ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよびその抗体［Ｐａｂｏｒｓｋｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，３（６）：５４７−５５３（１９９０）］。他のタグポリペプチドには以下が含まれる：Ｆｌａｇ−ペプチド［Ｈｏｐｐら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６：１２０４−１２１０（１９８８）］；ＫＴ３エピトープペプチド［Ｍａｒｔｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５５：１９２−１９４（１９９２）］；α−チューブリンエピトープペプチド［Ｓｋｉｎｎｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６：１５１６３−１５１６６（１９９１）］；およびＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ［Ｌｕｔｚ−Ｆｒｅｙｅｒｍｕｔｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３９３−６３９７（１９９０）］。

代替的な実施形態において、キメラ分子は、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンの特定の領域とのＩＬ−１７Ａ／Ｆの融合物を含んでもよい。二価型のキメラ分子（「イムノアドヘシン」とも呼ばれる）については、このような融合物は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域であり得る。Ｉｇ融合物は、Ｉｇ分子中の少なくとも１つの可変領域の代わりに、可溶型（膜貫通ドメインが欠失されているかまたは不活性化されている）のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの置換を含む。特に好ましい実施形態において、免疫グロブリン融合物には、ＩｇＧ１分子の、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３、またはヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３領域が含まれる。免疫グロブリン融合物の産生については、１９９５年６月２７日に発行された米国特許第５，４２８，１３０号を参照のこと。

なおさらなる実施形態において、本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、ロイシンジッパーに融合されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含むキメラ分子を形成する様式で修飾されてもよい。種々のロイシンジッパーポリペプチドが当該分野において記載されてきた。例えば、Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１７５９（１９８８）；ＷＯ９４／１０３０８；Ｈｏｐｐｅら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３４４：１９９１（１９９４）；Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３４１：２４（１９８９）を参照のこと。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに融合されたロイシンジッパーの使用は、溶液中で可溶性ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを二量体化または三量体化する際に補助するために所望されると考えられている。当業者は、ロイシンジッパーが、ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかにおいて融合され得ることを認識している。

Ｄ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆの調製
以下の説明は、主として、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ核酸を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトした細胞を培養することによるＩＬ−１７Ａ／Ｆの産生に関する。当然のこととして、当該分野において周知である代替方法がＩＬ−１７Ａ／Ｆを調製するために利用されてもよいことが意図される。例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ配列またはその一部は、固相技術を使用する直接的ペプチド合成によって産生されてもよい［例えば、Ｓｔｅｗａｒｔら、Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９６９）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５４（１９６３）を参照のこと］。インビトロタンパク質合成は、手動技術または自動化を使用して実施されてもよい。自動化合成は、例えば、製造業者の指示書を使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用して達成されてもよい。ＩＬ−１７Ａ／Ｆの種々の部分は、全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆを産生するために、別々に化学的に合成し、化学的または酵素的な方法を使用して合わせてもよい。

１．ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡの単離
ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ｍＲＮＡを保有し、検出可能なレベルでこれを発現すると考えられている組織から調製されたｃＤＮＡライブラリーから入手されてもよい。従って、ヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡは、実施例に記載されるように、ヒト組織から調製したｃＤＮＡライブラリーから便利に得ることができる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする遺伝子はまた、ゲノムライブラリーから、または公知の合成手順（例えば、自動化核酸合成）によって入手されてもよい。

ライブラリーは、目的の遺伝子またはそれによってコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブ（ＩＬ−１７Ａ／Ｆに対する抗体または少なくとも約２０〜８０塩基のオリゴヌクレオチドなど）を用いてスクリーニングすることができる。選択されたプローブを用いてｃＤＮＡまたはゲノムのライブラリーをスクリーニングすることは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）に記載されている標準的な手順を使用して行われてもよい。ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする遺伝子を単離するための代替手段は、ＰＣＲ方法論［Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出；Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈら、ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９５）］を使用することである。

以下の実施例はｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングための技術を説明している。プローブとして選択されるオリゴヌクレオチド配列は、十分に長くかつ十分にあいまいでないものである必要があり、このことが偽陽性を最小化する。オリゴヌクレオチドは、好ましくは、これが、スクリーニングされるライブラリー中のＤＮＡへのハイブリダイゼーションの際に検出できるように、標識される。標識の方法は周知であり、これには、^３２Ｐ−標識ＡＴＰのような放射線標識、ビオチン化、または酵素標識の使用が含まれる。中程度のストリンジェンシーおよび高ストリンジェンシーを含むハイブリダイゼーション条件は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出において提供される。

このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、ＧｅｎＢａｎｋなどの公的なデータベースまたは他の民間の配列データベースに寄託されかつ利用可能である他の公知の配列と、比較およびアラインすることができる。分子の所定の領域内の、または全長配列にわたる配列同一性（アミノ酸またはヌクレオチドのいずれかのレベルで）は、当該分野において公知であり、本明細書に記載されるような方法を使用して決定することができる。

タンパク質コード配列を有する核酸は、最初に本明細書で開示された推定アミノ酸配列を使用することによって、および、必要な場合、前駆体を検出するためにＳａｍｂｒｏｏｋら、前出に記載されている従来的なプライマー伸長手順を使用することによって、選択されたｃＤＮＡまたはゲノムのライブラリーをスクリーニングすることによって、および、ｃＤＮＡに逆転写され得なかったｍＲＮＡの中間体を処理することによって、入手されてもよい。

２．宿主細胞の選択および形質転換
ＩＬ−１７Ａ／Ｆ産生のために、宿主細胞は、本明細書に記載される発現ベクターまたはクローニングベクターでトランスフェクトまたは形質転換され、そして、プロモータを誘導し、形質転換を選択し、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適切である従来的な栄養培地中で培養される。培地、温度、ｐＨなどの培養条件は、過度の実験を伴うことなく、当業者によって選択可能である。一般的には、細胞培養の生産性を最大化するための原理、プロトコール、および実用的な技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ編（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９９１）およびＳａｍｂｒｏｏｋら、前出において見出すことができる。

真核生物細胞のトランスフェクションおよび原核生物細胞の形質転換の方法、例えば、ＣａＣｌ_２、ＣａＰＯ_４、リポソーム媒介、およびエレクトロポレーションは、当業者に公知である。使用する宿主細胞に依存して、形質転換は、このような細胞に適切である標準的な技術を使用して実施される。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出に記載されるような塩化カルシウムを利用するカルシウム処理、またはエレクトロポレーションは、一般的に、原核生物のために使用される。アクロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）による感染は、Ｓｈａｗら、Ｇｅｎｅ，２３：３１５（１９８３）および１９８９年６月２９日に公開されたＷＯ８９／０５８５９によって記載されるように、特定の植物細胞の形質転換のために使用される。このような細胞壁を有さない哺乳動物細胞については、Ｇｒａｈａｍおよびｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２：４５６−４５７（１９７８）のリン酸カルシウム沈殿法が利用できる。哺乳動物細胞宿主系トランスフェクションの一般的態様は、米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。酵母への形質転換は、典型的には、Ｖａｎ Ｓｏｌｉｎｇｅｎら、Ｊ．Ｂａｃｔ．，１３０：９４６（１９７７）およびＨｓｉａｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），７６：３８２９（１９７９）の方法に従って行われる。しかし、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、インタクト細胞との細菌プロトプラスト融合、またはポリカチオン、例えば、ポリブレン、ポリオルニチンによるなどの、細胞にＤＮＡを導入するための他の方法も使用されてよい。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、Ｋｅｏｗｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８５：５２７−５３７（１９９０）およびＭａｎｓｏｕｒら、Ｎａｔｕｒｅ，３３６：３４８−３５２（１９８８）を参照のこと。

本明細書のベクター中でＤＮＡをクローニングまたは発現するための適切な宿主細胞には、原核生物、酵母、または高等真核生物の細胞が含まれる。適切な原核生物には、グラム陰性生物またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、大腸菌などの腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）が含まれるがこれに限定されない。種々の大腸菌株、例えば、大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）；大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）；大腸菌株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）およびＫ５７７２（ＡＴＣＣ５３，６３５）が公的に利用可能である。他の適切な原核生物宿主細胞には、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば、大腸菌、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウイニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、変形菌属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば、サルモネラ・チフィリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、および赤痢菌属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ならびにバシラス・サブティリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）およびバシラス・リケニホルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、１９８９年４月に公開されたＤＤ２６６，７１０に開示されているバシラス・リケニホルミス４１Ｐ）などのバシラス属（Ｂａｃｉｌｌｉ）、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）などのシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ならびにストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）などの腸内細菌科が含まれる。これらの例は限定ではなく例示である。Ｗ３１１０株は、組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆダクト発酵のための一般的な宿主株であるので、１つの特に好ましい宿主または親の宿主である。好ましくは、宿主細胞は、最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、Ｗ３１１０株は、宿主に対して内因性であるタンパク質をコードする遺伝子における遺伝子変異に影響を与えるように修飾されてもよく、このような宿主の例には以下が含まれる：大腸菌Ｗ３１１０株１Ａ２、これは、完全な遺伝子型ｔｏｎＡを有する；大腸菌Ｗ３１１０株９Ｅ４、これは、完全な遺伝子型ｔｏｎＡ ｐｔｒ３を有する；大腸菌Ｗ３１１０株２７Ｃ７（ＡＴＣＣ５５，２４４）、これは、完全な遺伝子型ｔｏｎＡ ｐｔｒ３ ｐｈｏＡ Ｅ１５（ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９ ｄｅｇＰ ｏｍｐＴ ｋａｎ^ｒを有する；大腸菌Ｗ３１１０株３７Ｄ６、これは、完全な遺伝子型ｔｏｎＡ ｐｔｒ３ ｐｈｏＡ Ｅ１５（ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９ ｄｅｇＰ ｏｍｐＴ
ｒｂｓ７ ｉｌｖＧ ｋａｎ^ｒを有する；大腸菌Ｗ３１１０株４０Ｂ４、これは、非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠損変異を有する株３７Ｄ６である；および１９９０年８月７日に発行された米国特許第４，９４６，７８３号において開示された、変異型ペリプラズムプロテアーゼを有する大腸菌株。または、クローニングのインビトロ方法、例えば、ＰＣＲまたは他の核酸ポリメラーゼ反応が適切である。

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物が、ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードするベクターの適切なクローニング宿主または発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）は、一般的に使用される下等真核生物宿主微生物である。その他としては以下が含まれる：シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）［ＢｅａｃｈおよびＮｕｒｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ，２９０：１４０（１９８１）；１９８５年５月２日に公開されたＥＰ１３９，３８３］；クリベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）宿主（米国特許第４，９４３，５２９号；Ｆｌｅｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：９６８−９７５［１９９１］）例えば、クリベロミセス・ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）（ＭＷ９８−８Ｃ，ＣＢＳ６８３，ＣＢＳ４５７４；Ｌｏｕｖｅｎｃｏｕｒｔら、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１５４（２）：７３７−７４２［１９８３］）、クリベロミセス・フラギリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ１２，４２４）、クリベロミセス・ブルガリクス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ１６，０４５）、クリベロミセス・ウィケラミイ（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ２４，１７８）、クリベロミセス・ワルチイ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ ５６，５００）、クリベロミセス・ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ３６，９０６；Ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：１３５［１９９０］）、クリベロミセス・サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、およびクリベロミセス・マルキシアナス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）など；ヤロウイア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）（ＥＰ１８３，０７０；Ｓｒｅｅｋｒｉｓｈｎａら、Ｊ．Ｂａｓｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２８：２６５−２７８［１９８８］）；カンジダ菌；トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）（Ｃａｓｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：５２５９−５２６３［１９７９］）；シュワニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）などのシュワニオミセス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）（１９９０年１０月３１日に公開されたＥＰ３９４，５３８）；および糸状菌、例えば、ニューロスポラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラディウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）など（１９９１年１月１０日に公開されたＷＯ９１／００３５７）、およびアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、アスペルギルス・ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）（Ｂａｌｌａｎｃｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１２：２８４−２８９［１９８３］；Ｔｉｌｂｕｒｎら、Ｇｅｎｅ，２６：２０５−２２１［１９８３］；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：１４７０−１４７４［１９８４］）およびアスペルギルス・ニゲル（Ａ．ｎｉｇｅｒ）（ＫｅｌｌｙおよびＨｙｎｅｓ，ＥＭＢＯ Ｊ．，４：４７５−４７９［１９８５］）など。メチロトローフ酵母は本明細書において適切であり、これには、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ、およびＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａからなる属から選択されるメタノール上で増殖が可能な酵母が含まれるがこれらに限定されない。このクラスの酵母の例である特定の種のリストは、Ｃ．Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｔｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｓ，２６９（１９８２）において見出され得る。

グリコシル化ＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現のために適切な宿主細胞は、多細胞生物から導き出される。無脊椎動物細胞の例には、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９またはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｈｉｇｈ ５細胞などの昆虫細胞、ならびに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞およびＣＯＳ細胞が含まれる。より特定の例には、ＳＶ４０によって改質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎臓細胞腎臓系統（懸濁培養中の増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６［１９８０］）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１［１９８０］）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ ８０６５）；およびマウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２，ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）。適切な宿主細胞の選択は当業者の範囲内にあると見なされる。

３．複製可能なベクターの選択および使用
ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする核酸（例えば、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ）は、クローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または発現のために複製ベクターに挿入されてもよい。種々のベクターが公的に利用可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージの型であってもよい。適切な核酸配列は、種々の手順によってベクターに挿入されてもよい。一般的には、ＤＮＡは、当該分野において公知の技術を使用して、適切な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクターの構成要素には、一般的には、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサエレメント、プロモータ、および転写終止配列が含まれるがこれらに限定されない。これらの構成要素の１つ以上を含む適切なベクターの構築は、当業者に公知である標準的なライゲーション技術を利用する。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、直接的のみならず、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしてもまた産生されてもよく、この異種ポリペプチドは、成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端における特異的切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドであり得る。一般的に、シグナル配列は、ベクターの構成要素であってもよく、またはこれは、ベクターに挿入されるＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡの一部であり得る。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列であり得る。酵母分泌のために、シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー（サッカロミセスおよびクリベロミセスα因子リーダーを含み、後者は米国特許第５，０１０，１８２号に記載されている）、または酸性ホスファターゼリーダー、カンジダ・アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）グルコアミラーゼリーダー（１９９０年４月４日に公開されたＥＰ３６２，１７９）、または１９９０年１１月１５日に公開されたＷＯ９０／１３６４６に記載されているシグナル。哺乳動物細胞発現において、哺乳動物シグナル配列は、タンパク質の分泌を指向するために使用されてもよく、これは例えば、同じかまたは関連する種の分泌ポリペプチドからのシグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダーである。

発現ベクターおよびクローニングベクターの両方は、１つ以上の選択された宿主細胞においてベクターを複製可能にする核酸配列を含む。このような配列は、細菌、酵母、およびウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２からの複製起点は多くのグラム陰性細菌に適切であり、２μプラスミド起点は酵母に適切であり、そして種々のウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、またはＢＰＶ）は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。

発現ベクターおよびクローニングベクターは、典型的には、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含む。典型的には、選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、またはテトラサイクリンに対する耐性を付与する、（ｂ）栄養要求性欠損を相補する、または（ｃ）複合培地からの利用可能でない決定的な栄養素を供給する、タンパク質をコードし、例えば、バシラスのためにＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子である。

哺乳動物細胞のための適切な選択マーカーの例は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆコード核酸を取り上げるため能力がある細胞の同定を可能にするものであって、例えば、ＤＨＦＲまたはチミジンキナーゼである。適切な宿主細胞は、野生型ＤＨＦＲが利用される場合には、Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０）に記載されるように調製および増殖された、ＤＨＦＲ活性が欠損しているＣＨＯ細胞株である。酵母における使用のための適切な選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら、Ｎａｔｕｒｅ，２８２：３９（１９７９）；Ｋｉｎｇｓｍａｎら、Ｇｅｎｅ，７：１４１（１９７９）；Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒら、Ｇｅｎｅ，１０：１５７（１９８０）］。ｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖する能力を欠く酵母の変異株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６またはＰＥＰ４−１［Ｊｏｎｅｓ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，８５：１２（１９７７）］のための選択マーカーを供給する。

発現ベクターおよびクローニングベクターは、通常、ｍＲＮＡ合成を指向するために、ＩＬ−１７Ａ／Ｆコード核酸配列に作動可能に連結されたプロモータを含む。種々の潜在的な宿主細胞によって認識されるプロモータが周知である。原核生物宿主を用いる使用に適切なプロモータには、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモータ系［Ｃｈａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ，２７５：６１５（１９７８）；Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｎａｔｕｒｅ，２８１：５４４（１９７９）］、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモータ系［Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，８：４０５７（１９８０）；ＥＰ３６，７７６］、およびｔａｃプロモータなどのハイブリッドプロモータ［ｄｅＢｏｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０：２１−２５（１９８３）］が含まれる。細菌系における使用のためのプロモータはまた、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡに作動可能に連結されたシャイン−ダルガルノ（Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ）（Ｓ．Ｄ．）配列を含む。

酵母宿主を用いる使用に適切なプロモータ配列の例には、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ［Ｈｉｔｚｅｍａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５５：２０７３（１９８０）］または他の解糖系酵素［Ｈｅｓｓら、Ｊ．Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇ．，７：１４９（１９６８）；Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：４９００（１９７８）］、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、およびグルコキナーゼのプロモータが含まれる。

増殖条件によって制御される転写のさらなる利点を有する誘導性プロモータである他の酵母プロモータは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸性ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用の原因である酵素のプロモータ領域である。酵母発現における使用に適切なベクターおよびプロモータは、ＥＰ７３，６５７においてさらに記載されている。

哺乳動物宿主細胞におけるベクターからのＩＬ−１７Ａ／Ｆ転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス（１９８９年７月５日に公開されたＵＫ２，２１１，５０４）、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、などのウイルスのゲノムから得られたプロモータによって、異種哺乳動物プロモータ、例えば、アクチンプロモータまたは免疫グロブリンプロモータから、および熱ショックプロモータから、このようなプロモータが宿主細胞系と適合性であるという条件で制御される。

より高等な真核生物によるＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡの転写は、ベクターにエンハンサ配列を挿入することによって増加されてもよい。エンハンサは、その転写を増加させるためにプロモータに対して作用する、通常は約１０〜３００ｂｐのＤＮＡのシス作用性エレメントである。現在、多くのエンハンサ配列が哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトタンパク質、およびインスリン）から公知である。しかし、典型的には、真核生物細胞ウイルスからのエンハンサを使用する。例には、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサ（ｂｐ１００−２７０）、サイトメガロウイルス初期プロモータエンハンサ、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサ、およびアデノウイルスエンハンサが含まれる。エンハンサは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆコード配列に対して５’または３’の位置でベクターにスプライシングされてもよいが、好ましくは、プロモータから５’の部位に位置している。

真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物からの有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要である配列もまた含む。このような配列は、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および時折３’の非翻訳領域から一般的に利用可能である。これらの領域は、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分においてポリアデニル化フラグメントとして転写されるヌクレオチドセグメントを含む。

組換え脊椎動物細胞培養におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆの合成への適合に適切であるさらに他の方法、ベクター、および宿主細胞は、Ｇｅｔｈｉｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ，２９３：６２０−６２５（１９８１）；Ｍａｎｔｅｉら、Ｎａｔｕｒｅ，２８１：４０−４６（１９７９）；ＥＰ１１７，０６０；およびＥＰ１１７，０５８に記載されている。

４．遺伝子増幅／発現の検出
遺伝子増幅および／または発現の検出は、例えば、従来的なサザンブロッティング、ｍＲＮＡの転写を定量するためのノーザンブロッティング（Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５２０１−５２０５［１９８０］）、ドットブロッティング（ＤＮＡ分析）、またはインサイチュハイブリダイゼーションによって、本明細書に提供される配列に基づく適切な標識プローブを使用して、サンプル中で直接的に測定されてもよい。または、ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖、およびＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二重鎖、またはＤＮＡ−タンパク質二重鎖を含む特定の二重鎖を認識し得る抗体が利用されてもよい。これらの抗体は、次には、標識されてもよく、二重鎖が表面に結合されるアッセイが実行されてもよく、その結果、表面上の二重鎖の形成に際して、二重鎖に結合した抗体の存在が検出できる。

または、遺伝子発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量するために、細胞または組織切片の免疫組織化学的染色および細胞培養または体液のアッセイなどの免疫学的方法によって測定されてもよい。免疫組織化学的染色および／またはサンプル体液のアッセイに有用な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであってもよく、任意の哺乳動物で調製されてもよい。好都合には、抗体は、ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに対して、または本明細書に提供されるＤＮＡ配列に基づく合成ペプチドに対して、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡに融合され、特定の抗体エピトープをコードしている外因性配列に対して調製されてもよい。

５．ポリペプチドの精製
ＩＬ−１７Ａ／Ｆの型は、培養培地から、または宿主細胞溶解物から回収されてもよい。膜結合している場合、これは、適切な界面活性剤溶液（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００）を使用して、または酵素的切断によって、膜から遊離させることができる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現において利用される細胞は、種々の物理的または化学的な手段、例えば、凍結−融解サイクリング、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤などによって破壊することができる。

組換え細胞タンパク質またはポリペプチドから、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを精製することが所望され得る。以下の手順は適切な精製手順の例示である：イオン交換カラム；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカまたはＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂上でのクロマトグラフィ；等電点電気泳動；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−７５を使用するゲル濾過；ＩｇＧなどの夾雑物を除去するためのプロテインＡセファロースカラム；およびエピトープタグ化型のＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合するための金属キレートカラムによる分画。タンパク質精製の種々の方法が利用されてもよく、このような方法は当該分野において公知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２（１９９０）；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載されている。選択される精製工程は、例えば、使用される精製プロセスの性質および産生される特定のＩＬ−１７Ａ／Ｆに依る。

Ｅ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆの用途
ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードするヌクレオチド配列（またはそれらの相補物）は、分子生物学の当該分野において種々の応用を有し、これには、ハイブリダイゼーションプローブとしての用途、染色体および遺伝子のマッピングにおける用途、ならびにアンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡの生成としての用途が含まれる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ核酸はまた、本明細書に記載される組換え技術によるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの調製に有用である。

全長ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆ遺伝子またはその部分は、本明細書に開示されるネイティブＩＬ−１７Ａ／Ｆ配列と所望の配列同一性を有する、全長ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ｃＤＮＡを単離するため、または、なお他のｃＤＮＡ（例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの天然に存在する変異体または他の種からのＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードするもの）を単離するためのハイブリダイゼーションプローブとして使用されてもよい。選択的に、プローブの長さは約２０〜約５０塩基である。ハイブリダイゼーションプローブは、全長ネイティブヌクレオチド配列の少なくとも部分的に新規な領域から誘導されてもよく、ここで、これらの領域は、過度の実験なしで決定されてもよく、またはネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆのプロモータ、エンハンサエレメント、およびイントロンを含むゲノム配列からであってもよい。例として、スクリーニング方法は、約４０塩基の選択したプローブを合成するために、公知のＤＮＡ配列を使用して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ遺伝子のコード領域を単離する工程を包含する。ハイブリダイゼーションプローブは、^３２Ｐもしくは^３５Ｓなどの放射性核種、またはアビジン／ビオチン共役系を経由してプローブに結合されるアルカリホスファターゼなどの酵素標識を含む種々の標識によって標識されてもよい。本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ遺伝子の配列と相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトのｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングするために使用することができ、このようなライブラリーのどのメンバーにプローブが結合するかを決定する。ハイブリダイゼーション技術は、以下の実施例においてさらに詳細に記載される。

本願に開示されるＥＳＴ配列は、本明細書に記載される方法を使用して、同様にプローブとして利用されてもよい。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆ核酸の他の有用なフラグメントには、標的ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ｍＲＮＡ配列に結合可能である配列（センス）またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡ配列（アンチセンス）に結合可能である配列である一本鎖核酸配列（ＲＮＡまたはＤＮＡのいずれか）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。本発明に従うアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドには、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡのコード領域のフラグメントが含まれる。このようなフラグメントには、一般的には、少なくとも約１４ヌクレオチド、好ましくは、約１４〜３０ヌクレオチドが含まれる。所定のタンパク質をコードしているｃＤＮＡ配列に基づいて、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドを誘導する能力は、例えば、ＳｔｅｉｎおよびＣｏｈｅｎ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４８：２６５９，［１９８８］）ならびにｖａｎ ｄｅｒ Ｋｒｏｌら（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，６：９５８，［１９８８］）に記載されている。

標的核酸配列へのアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドの結合は、二重鎖の分解の増強、転写もしくは翻訳の未成熟な終結を含むいくつかの手段によって、または他の手段によって、標的配列の転写または翻訳を遮断する二重鎖の形成を生じる。このように、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆタンパク質の発現を遮断するために使用されてもよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドは、修飾された糖−ホスホジエステル骨格（またはＷＯ９１／０６６２９に記載されるもののような他の糖連結）を有するオリゴヌクレオチドをさらに含み、ここで、このような糖連結は内因性ヌクレアーゼに耐性がある。このような耐性がある糖連結を有するオリゴヌクレオチドは、インビボで安定であるが（すなわち、酵素的分解に対して抵抗性を有し得る）、標的ヌクレオチド配列に結合可能である配列特異性を保持している。

アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドの他の例には、ＷＯ９０／１００４８に記載されているものなどの有機部分に共有結合されているオリゴヌクレオチド、およびポリ−（Ｌ−リジン）などの、標的核酸配列に対するオリゴヌクレオチドの親和性を増加する他の部分が含まれる。なお、さらに、エリプチシンなどの挿入剤、およびアルキル化剤または金属錯体が、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドに結合されて、標的ヌクレオチド配列のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドの結合特異性を修飾することができる。

アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、ＣａＰＯ_４媒介ＤＮＡトランスフェクション、エレクトロポレーションを含む任意の遺伝子移入方法によって、またはエプスタイン−バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルスなどの遺伝子移入ベクターを使用することによって、標的核酸を含む細胞に導入されてもよい。好ましい手順において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはセンスオリゴヌクレオチドは、適切なレトロウイルスベクターに挿入される。標的核酸配列を含む細胞は、インビボまたはエキソビボのいずれかで、組換えレトロウイルスベクターを接触される。適切なレトロウイルスベクターには、マウスレトロウイルスＭ−ＭｕＬＶ、Ｎ２（Ｍ−ＭｕＬＶから誘導されたレトロウイルス）、またはＤＣＴ５Ａ、ＤＣＴ５Ｂ、およびＤＣＴ５Ｃと称する二重コピーベクター（ＷＯ９０／１３６４１を参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない。

センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、ＷＯ９１／０４７５３に記載されるように、リガンド結合分子との結合体の形成によって、標的ヌクレオチド配列を含む細胞に導入されてもよい。適切なリガンド結合分子には、細胞表面受容体、増殖因子、他のサイトカイン、または細胞表面受容体に結合する他のリガンドが含まれるがこれらに限定されない。好ましくは、リガンド結合分子の結合体化は、その対応する分子もしくは受容体に結合し、またはセンスオリゴヌクレオチドもしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはその結合体化バージョンの細胞への侵入を遮断する、リガンド結合分子の能力と実質的に干渉しない。

または、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９０／１０４４８に記載されるように、オリゴヌクレオチド−脂質複合体の形成によって、標的核酸配列を含む細胞に導入されてもよい。センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド−脂質複合体は、好ましくは、内因性リパーゼによって細胞内で解離される。

アンチセンスまたはセンスＲＮＡまたはＤＮＡ分子は、一般的には、少なくとも約５塩基長、約１０塩基長、約１５塩基長、約２０塩基長、約２５塩基長、約３０塩基長、約３５塩基長、約４０塩基長、約４５塩基長、約５０塩基長、約５５塩基長、約６０塩基長、約６５塩基長、約７０塩基長、約７５塩基長、少なくとも約８０塩基長、少なくとも約８５塩基長、少なくとも約９０塩基長、少なくとも約９５塩基長、少なくとも約１００塩基長、またはそれ以上である。

プローブは、ＰＣＲ技術に利用して、密接に関連するＩＬ−１７Ａ／Ｆコード配列の同定のための配列のプールを生成することもできる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードするヌクレオチド配列はまた、ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする遺伝子をマッピングするため、および遺伝的障害を有する個人の遺伝子分析のために、ハイブリダイゼーションプローブを構築するために使用することができる。本明細書に提供されるヌクレオチド配列は、インサイチュハイブリダイゼーション、公知の染色体マーカーに対する連鎖解析、およびライブラリーを用いるハイブリダイゼーションなどの公知の技術を使用して、染色体および染色体の特定の領域にマッピングされてもよい。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆのコード配列が別のタンパク質に結合するタンパク質をコードする場合（例えば、そのタンパク質が受容体である場合）、そのタンパク質は、結合相互作用に関与する他のタンパク質または分子を同定するためのアッセイにおいて使用することができる。このような方法によって、受容体／リガンド結合相互作用の阻害剤を同定することができる。このような結合相互作用に関与するタンパク質はまた、結合相互作用のペプチドまたは小分子の阻害剤またはアゴニストについてスクリーニングするために使用することができる。また、受容体タンパク質は、相関するリガンドを単離するために使用することができる。スクリーニングアッセイは、ネイティブなＩＬ−１７Ａ／ＦまたはＩＬ−１７Ａ／Ｆの受容体の生物学的活性を模倣するリード化合物を見出すために設計することができる。このようなスクリーニングアッセイには、化学ライブラリーの高スループットスクリーニングが受け入れ可能であるアッセイが含まれ、これらを、小分子薬物候補を同定するために特に適切にする。意図される小分子には、合成の有機または無機化合物が含まれる。これらのアッセイは、当該分野において十分に特徴付けられる、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、および細胞ベースのアッセイを含めた、種々の形式で実施することができる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆまたはその修飾型をコードする核酸は、トランスジェニック動物または「ノックアウト」動物を生成するために使用することもでき、これは、次には、治療的に有用な試薬の開発およびスクリーニングにおいて有用である。トランスジェニック動物（例えば、マウスまたはラット）は、導入遺伝子を含む細胞を有する動物であり、この導入遺伝子は、出生前、例えば、胚形成期の動物または先祖に導入された。導入遺伝子は、トランスジェニック動物がそこから発生した細胞のゲノムに組込まれたＤＮＡである。１つの実施形態において、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするｃＤＮＡは、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡを発現する細胞を含むトランスジェニック動物を生成するために使用される確立された技術およびゲノム配列に従って、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用することができる。トランスジェニック動物、特に、マウスまたはラットなどの動物を生成するための方法は、当該分野において慣用的になっており、例えば、米国特許第４，７３６，８６６号および同第４，８７０，００９号において記載されている。典型的には、特定の細胞は、組織特異的エンハンサを伴うＩＬ−１７Ａ／Ｆ導入遺伝子の組込みのために標的化される。胚形成期における動物の生殖系列に導入されるＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物は、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡの発現の増加の効果を試験するために使用することができる。このような動物は、例えば、その過剰発現と関連する病理学的状態からの保護を付与すると考えられている試薬についての試験動物として使用することができる。本発明のこの面に従って、動物は試薬で処理され、そして未処理動物と比較した、病理学的状態の発生の減少は、病理学的状態のための潜在的な治療的介入を示す。

または、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの非ヒトホモログは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする内因性遺伝子と、動物の胚性幹細胞に導入されたＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする変化したゲノムＤＮＡとの間の相同組換えの結果として、ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする欠損性または変化した遺伝子を有する、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ「ノックアウト」動物を構築するために使用することができる。例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするｃＤＮＡは、確立された技術に従って、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用することができる。ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするゲノムＤＮＡの部分は、欠失させるか、または組込みをモニタリングするために使用することができる選択マーカーをコードする遺伝子などの別の遺伝子で置き換えることができる。典型的には、数キロベースの変化していない隣接ＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方）がベクターに含まれる［相同組換えベクターの説明については、例えば、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ，５１：５０３（１９８７）を参照のこと］。このベクターは、胚性幹細胞株に導入され（例えば、エレクトロポレーションによって）、導入されたＤＮＡが内因性ＤＮＡと相同組換えされた細胞が選択される［例えば、Ｌｉら、Ｃｅｌｌ，６９：９１５（１９９２）を参照のこと］。次いで、選択された細胞は、動物（例えば、マウスまたはラット）の胚盤胞に注入され、凝集キメラを形成する［例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７）所収，１１３−１５２頁を参照のこと］。次いで、キメラ胚は、適切な偽妊娠雌性里親動物に移植でき、胚は、出産にまで至らせ、「ノックアウト」動物を作製する。それらの胚細胞に相同組換えＤＮＡを有する子孫は、標準的な技術によって同定でき、動物を繁殖させるために使用でき、ここで、動物のすべての細胞は相同組換えされたＤＮＡを含む。ノックアウト動物は、例えば、特定の病理学的状態に対して防御するそれらの能力について、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの不在に起因する病理学的状態のそれらの発症について、特徴付けすることができる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードする核酸は、遺伝子治療においてもまた使用されてもよい。遺伝子治療の応用において、遺伝子は、例えば、欠損遺伝子の置き換えのための、治療的に有効な遺伝子産物のインビボ合成を達成するために、細胞に導入される。「遺伝子治療」には、継続する効果が単回治療によって達成される従来的な遺伝子治療、および、治療的に有効なＤＮＡまたはｍＲＮＡの１回または反復投与を含む遺伝子治療剤の投与の両方が含まれる。アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡは、インビボでの特定の遺伝子の発現を遮断するための治療剤として使用できる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞膜による制限された取り込みによって引き起こされるそれらの低い細胞内濃度にも関わらず、それらが阻害剤として作用する細胞に移入され得ることはすでに示されている（Ｚａｍｅｃｎｉｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３：４１４３−４１４６［１９８６］）。オリゴヌクレオチドは、例えば、それらの負に荷電したホスホジエステル基を、電荷を有さない基によって置換することによって、それらの取り込みを増強するように修飾され得る。

核酸を生存可能な細胞に導入するための利用可能な種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が、インビボで培養細胞に、またはインビトロで意図した宿主の細胞に移入される。インビトロでの哺乳動物細胞への核酸の移入のために適切な技術には、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などの使用が含まれる。現在好ましいインビボ遺伝子移入技術には、ウイルス（典型的には、レトロウイルス）ベクターを用いるトランスフェクションおよびウイルスコードタンパク質−リポソーム媒介トランスフェクションが含まれる（Ｄｚａｕら、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１１：２０５−２１０［１９９３］）。ある状況においては、標的細胞を標的とする薬剤、例えば、細胞表面膜タンパク質または標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上の受容体のリガンドなどとともに、核酸供給源を提供することが所望される。リポソームが利用される場合、エンドサイトーシスと関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質が、標的化のため、および／または取り込みを容易にするために使用されてもよく、これは、例えば、特定の細胞型のために向性であるキャプシドタンパク質またはそのフラグメント、周期で内部化を受けるタンパク質の抗体、細胞内局在化を標的としかつ細胞内半減期を増強するタンパク質である。受容体媒介エンドサイトーシスの技術は、例えば、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２：４４２９−４４３２（１９８７）；およびＷａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：３４１０−３４１４（１９９０）によって記載されている。遺伝子作製および遺伝子治療のプロトコールの概説としては、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：８０８−８１３（１９９２）を参照のこと。

本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドはまた、タンパク質電気泳動の目的のために分子量マーカーとして利用されてもよく、単離された核酸配列は、これらのマーカーを組換え的に発現するために使用されてもよい。

本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのフラグメントをコードする核酸分子は、染色体の同定に有用である。この点に関して、現在利用可能である実際の配列データに基づいて、染色体マーキング試薬が比較的少数であるので、新規な染色体マーカーを同定する、継続的な必要性が存在している。本発明の各ＩＬ−１７Ａ／Ｆ核酸分子は、染色体マーカーとして使用できる。

本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドおよび核酸分子はまた、組織適合検査のために診断的に使用されてもよく、ここで、本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、別の組織と比較して、１つの組織で、好ましくは、同じ組織型の正常組織と比較して、罹患組織で、示差的に発現されてもよい。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ核酸分子は、ＰＣＲ、ノーザン分析、サザン分析、およびウェスタン分析のための用途を見出す。

本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドはまた、治療剤として利用されてもよい。本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法に従って製剤化することができ、それによって、そのＩＬ−１７Ａ／Ｆ産物は、薬学的に許容可能な担体ビヒクルと混合して合わされる。治療製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、任意の生理学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤と、所望の純度を有する活性成分とを混合することによって保存用に調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０））。許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、利用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これには以下が含まれる：リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはＰＥＧなどの非イオン性界面活性剤。

インビボ投与のために使用される製剤は滅菌されている必要がある。これは、凍結乾燥および再構築の前またはその後に、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。

治療組成物は、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアル中に配置される。

投与の経路は公知の方法に従い、例えば、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼球内、動脈内、または病巣内の経路による注射もしくは注入、局所的投与、または持続放出系である。

本発明の薬学的組成物の投薬量および所望の薬物濃度は、想定される特定の用途に依存して変化し得る。投与の適切な投薬量または経路の決定は、十分に通常の医師の範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効用量の決定のための信頼できる指針を提供する。有効用量の種間でのスケール変更は、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．およびＣｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．「Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｓｃａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ」Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ所収，Ｙａｃｏｂｉら編，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９，４２−９６頁によって規定された原理に従って実施することができる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニストまたはアンタゴニストのインビボ投与が利用される場合、通常の投薬量は、投与の経路に依存して、１日あたり哺乳動物体重の約１０ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日まで変化してもよい。特定の投薬量および送達の方法に関する指針は文献に提供されており；例えば、米国特許第４，６５７，７６０号；同第５，２０６，３４４号；または同第５，２２５，２１２号を参照のこと。異なる処方が、異なる治療化合物および異なる疾患に有効であることが予想され、例えば、１つの器官または組織を標的とする投与は、別の器官または組織へのものとは異なる様式の送達を必要とし得る。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの持続放出投与が、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの投与を必要とする任意の疾病または疾患の治療に適切である放出の特徴を有する製剤中で所望される場合、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドのマイクロカプセル化が意図される。持続放出のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン−（ｒｈＩＦＮ−）、インターロイキン−２、およびＭＮ ｒｇｐ１２０を用いて首尾よく実施されてきた。Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，２：７９５−７９９（１９９６）；Ｙａｓｕｄａ，Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．，２７：１２２１−１２２３（１９９３）；Ｈｏｒａら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：７５５−７５８（１９９０）；Ｃｌｅｌａｎｄ，「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ」Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ所収，ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ編（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５），４３９−４６２頁；ＷＯ９７／０３６９２、ＷＯ９６／４００７２、ＷＯ９６／０７３９９；および米国特許５，６５４，０１０号。

これらのタンパク質の持続放出製剤は、その生体適合性および広範な生分解性特性に起因して、ポリ−乳酸−コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを使用して開発された。ＰＬＧＡの分解産物、乳酸およびグリコール酸は、ヒトの身体内で迅速に除去され得る。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成に依存して、数ヶ月から数年まで調整可能である。Ｌｅｗｉｓ「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ ｐｏｌｙｍｅｒ」Ｍ．ＣｈａｓｉｎおよびＲ．Ｌａｎｇｅｒ（編），Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ所収（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９０），１−４１頁。

本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを模倣するもの（アゴニスト）、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの効果を妨害するもの（アンタゴニスト）を同定するための化合物をスクリーニングする方法を包含する。アンタゴニスト薬物候補のスクリーニングアッセイは、本明細書で同定される遺伝子によってコードされるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合し、もしくはそれと複合体を形成する化合物、または他の細胞タンパク質とのコードされたポリペプチドの相互作用と干渉する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイには、化学ライブラリーの高スループットスクリーニングに適用可能であるアッセイが含まれ、小分子薬物候補を同定するために特に適切にする。

アッセイは、当該分野において十分に特徴付けられている、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、および細胞ベースのアッセイを含めた、種々の形式で実施することができる。

アンタゴニストのためのすべてのアッセイは、これらが、薬物候補および本明細書で同定される核酸によってコードされるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを相互作用させるために十分な条件下および時間の間、これらの成分を接触させることを要求するという点で共通である。

結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成される複合体は、反応混合物中で単離または検出できる。特定の実施形態において、本明細書で同定される遺伝子によってコードされるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたは薬物候補は、共有結合または共有結合以外の結合によって、固相、例えば、マイクロタイタープレート上に固定化される。共有結合以外の結合は、一般的には、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの溶液で固体表面をコートすること、および乾燥によって達成される。または、固定化されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えば、モノクローナル抗体は、このポリペプチドを固体表面に固着するために使用することができる。アッセイは、固定化成分に、検出可能な標識によって標識されてもよい固定化されていない成分を加えることによって実施され、例えば、コートされた表面は、固着した成分を含む。反応が完了するときに、未反応成分は、例えば、洗浄によって除去され、固体表面上に固着された複合体が検出される。もともと固定化されていない成分が検出可能な標識を有する場合、表面に固定化された標識の検出は、複合体化が起こったことを示す。もともと固定化されていない成分が標識を有さない場合、複合体化は、例えば、固定化複合体を特異的に結合する標識抗体を使用することによって検出することができる。

候補化合物が、本明細書で同定される遺伝子によってコードされる特定のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと相互作用するが、これに結合しない場合、このポリペプチドとの相互作用は、タンパク質−タンパク質相互作用を検出するために、周知の方法によってアッセイすることができる。このようなアッセイには、例えば、架橋、同時免疫沈殿、および勾配またはクロマトグラフィカラムを通しての同時精製などの伝統的なアプローチが含まれる。加えて、タンパク質−タンパク質相互作用は、Ｆｉｅｌｄｓおよび共同研究者（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４０：２４５−２４６［１９８９］）；Ｃｈｉｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：９５７８−９５８２［１９９１］）によって記載され、ＣｈｅｖｒａｙおよびＮａｔｈａｎｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５７８９−５７９３（１９９１）によって記載されている酵母ベースの遺伝子系を使用することによってモニタリングすることができる。酵母ＧＡＬ４などの多くの転写活性化因子は、２つの物理的に区別可能であるモジュラードメインからなり、１つはＤＮＡ結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。前述の刊行物に記載されている酵母発現系は（一般的には「ツーハイブリッドシステム」と呼ばれる）、この特性を巧みに利用し、２つのハイブリッドタンパク質を利用し、１つのタンパク質は、標的タンパク質がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合され、別のタンパク質は、候補活性化タンパク質が活性化ドメインに融合されている。ＧＡＬ４活性化プロモータの制御下にあるＧＡＬ１−ｌａｃＺレポータ遺伝子の発現は、タンパク質−タンパク質相互作用を介して、ＧＡＬ４活性の再構築に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、β−ガラクトシダーゼの発色性基質を用いて検出される。ツーハイブリッド技術を使用して２つの特異的タンパク質間のタンパク質−タンパク質相互作用を同定するための完全なキット（ＭＡＴＣＨＭＡＫＥＲ（商標））はＣｌｏｎｔｅｃｈから市販されている。この系はまた、特異的タンパク質相互作用に関与するタンパク質ドメインをマッピングするため、ならびにこれらの相互作用のために決定的であるアミノ酸残基を特定するために拡張することができる。

本明細書で同定されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードする遺伝子および他の細胞内または細胞外成分の相互作用と干渉する化合物は、以下のようにして試験することができる：通常、２つの生成物の相互作用および結合を可能にする条件下および時間の間、その遺伝子の産物および他の細胞内または細胞外成分を含む反応混合物が調製される。候補化合物が結合を阻害する能力を試験するために、反応は、試験化合物の不在下および存在下で実行される。加えて、陽性対照として働くために、プラセボが第３の混合物に加えられてもよい。混合物中に存在する、試験化合物と、他の細胞内または細胞外成分との間の結合（複合体形成）は、本明細書の上記のようにモニタリングされる。対照反応においてであるが、しかし、試験化合物を含む反応混合物中ではない複合体の形成は、試験化合物が、試験化合物とその反応パートナーとの相互作用と干渉することを示す。

アンタゴニストのアッセイのために、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、特定の活性についてスクリーニングされる化合物とともに細胞に加えられてもよく、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在下で、化合物が目的の活性を阻害する能力は、その化合物がＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに対するアンタゴニストであることを示す。または、アンタゴニストは、競合阻害アッセイのために適切な条件下で、膜結合型ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド受容体または組換え受容体と、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドおよび潜在的なアンタゴニストとを合わせることによって検出されてもよい。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、例えば、放射能によって標識することができ、その結果、受容体に結合するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド分子の数は、潜在的なアンタゴニストの有効性を決定するために使用することができる。受容体をコードする遺伝子は、当業者に公知である多数の方法、例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳ選別によって同定することができる。Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎ．，１（２）：第５章（１９９１）。好ましくは、発現クローニングが利用され、ここでは、ポリアデニル化ＲＮＡが、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに応答性である細胞から調製され、このＲＮＡから作製されたｃＤＮＡライブラリーは、プールに分割され、ＣＯＳ細胞またはＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに応答性ではない他の細胞をトランスフェクトするために使用される。ガラススライド上で増殖させたトランスフェクト細胞は、標識したＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに曝露される。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、ヨウ素化または部位特異的タンパク質キナーゼの認識部位の包含を含めた、種々の手段によって標識することができる。固定およびインキュベーションの後、スライドは、オートラジオグラフ分析に供される。陽性プールを同定し、サブプールを調製し、そして相互作用的なサブプールおよび再スクリーニングプロセスを使用して再トランスフェクトし、最終的に、推定の受容体をコードする単一クローンを得る。

受容体同定のための代替的なアプローチとして、標識したＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、細胞膜と光親和性連結することができ、または受容体分子を発現する抽出調製物であり得る。架橋物質はＰＡＧＥによって分離され、Ｘ線フィルムに曝露される。受容体を含む標識された複合体は、切除し、ペプチドフラグメントに分解し、そしてタンパク質マイクロシークエンシングに供すことができる。マイクロシークエンシングから得られたアミノ酸配列は、ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングして、推定の受容体をコードする遺伝子を同定するために、縮重オリゴヌクレオチドプローブのセットを設計するために使用される。

アンタゴニストのための別のアッセイにおいて、受容体を発現する哺乳動物細胞または膜調製物は、候補化合物の存在下で、標識されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドとともにインキュベートされる。次いで、この化合物がこの相互作用を増強または遮断する能力を測定することができる。

潜在的なアンタゴニストのより特定の例には以下が含まれる：ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと免疫グロブリンとの融合物に結合するオリゴヌクレオチド、および、特に、以下を含むがこれらに限定されない抗体：ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体および抗体フラグメント、単鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、およびこのような抗体またはフラグメントのキメラまたはヒト化バージョン、ならびにヒト抗体および抗体フラグメント。または、潜在的なアンタゴニストは、密接に関連するタンパク質、例えば、受容体を認識するがその効果に影響を与えず、それによって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの採用を競合的に阻害する、変異型のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドであり得る。

別の潜在的なＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドアンタゴニストは、アンチセンス技術を使用して調製された、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡであり、ここでは、例えば、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ分子が、標的とされたｍＲＮＡにハイブリダイズすること、およびタンパク質翻訳を妨害することによって、ｍＲＮＡの翻訳を直接的に遮断するように作用する。アンチセンス技術は、アンチセンスＤＮＡまたはＤＮＡの三重ヘリックス形成を通して、遺伝子発現を制御するために使用でき、これらの方法の両方が、ＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づいている。例えば、本明細書の成熟ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の５’コード部分は、約１０〜４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計するために使用される。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に対して相補的であるように設計され（三重ヘリックス−Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：４５６（１９８８）；Ｄｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：１３６０（１９９１）を参照のこと）、それによって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの転写および産生を妨害する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡにハイブリダイズし、ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を遮断する（アンチセンス−Ｏｋａｎｏ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９８８）。上記のオリゴヌクレオチドはまた、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡがＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの産生を阻害するようにインビボで発現され得るように、細胞に送達させることができる。アンチセンスＤＮＡが使用される場合、翻訳−開始部位、例えば、標的遺伝子ヌクレオチド配列の約−１０位から＋１０位の間から誘導されるオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。

潜在的なアンタゴニストには、活性部位、受容体結合部位、または増殖因子もしくはＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの他の関連する結合部位に結合し、それによって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの正常な生物学的活性を遮断する小分子が含まれる。小分子の例には、小ペプチドまたはペプチド様分子、好ましくは、可溶性ペプチド、および合成ペプチジル有機または無機化合物が含まれるがこれらに限定されない。

リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒可能である酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは、相補性標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイゼーションによって、続いて、エンドヌクレアーゼによる切断によって作用する。潜在的なＲＮＡ標的中での特異的リボザイム切断部位は、公知の技術によって同定することができる。さらなる詳細については、例えば、Ｒｏｓｓｉ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４：４６９−４７１（１９９４、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開））を参照のこと。

転写を阻害するために使用される三重ヘリックス形成における核酸分子は、一本鎖であり、デオキシヌクレオチドから構成される。これらのオリゴヌクレオチドの塩基組成は、これがＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成規則を介して三重ヘリックス形成を促進するように設計される。この規則は、一般的に、二重鎖の一方の鎖のプリンまたはピリミジンのある程度の大きさのストレッチを必要とする。さらなる詳細については、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／３３５５１、前出を参照のこと。

これらの小分子は、本明細書にて議論されたスクリーニングアッセイの任意の１つ以上によって、および／または当業者に周知である任意の他のスクリーニング技術によって同定することができる。

本明細書に開示される分子の診断的および治療的用途はまた、以下に開示および記載されるポジティブ機能アッセイヒットに基づき得る。

Ｆ．組織分布
ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを発現する組織の位置は、種々のヒト組織においてｍＲＮＡ発現を決定することによって同定することができる。このような遺伝子の位置は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド活性を刺激および阻害することによって、どの組織が最も影響を受ける可能性があるかに関する情報を提供する。特定の組織における遺伝子の位置は、以下に議論する活性遮断アッセイのサンプル組織も提供する。

注記されるように、種々の組織中での遺伝子発現は、適切に標識されたプローブを使用して、本明細書に提供される配列に基づいて、従来的なサザンブロッティング、ｍＲＮＡの転写を定量するためのノーザンブロッティング（Ｔｈｏｍａｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：５２０１−５２０５［１９８０］）、ドットブロッティング（ＤＮＡ分析）、またはインサイチュハイブリダイゼーションによって測定されてもよい。または、ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖、およびＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド二重鎖またはＤＮＡ−タンパク質二重鎖を含む特定の二重鎖を認識できる抗体が利用されてもよい。

あるいは、種々の組織中での遺伝子発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量するために、組織切片の免疫組織化学的染色および細胞培養または体液のアッセイなどの免疫学的方法によって測定されてもよい。免疫組織化学的染色および／またはサンプル体液のアッセイのために有用な抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであってもよく、任意の哺乳動物で調製されてもよい。好都合には、抗体は、ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに対して、またはＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に基づく合成ペプチドに対して、またはＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡに融合され、特定の抗体エピトープをコードしている外因性配列に対して調製されてもよい。抗体を生成するための一般的な技術、ならびにノーザンブロッティングおよびインサイチュハイブリダイゼーションのための特別なプロトコールは以下に提供される。

Ｇ．抗体結合研究
ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの活性は、抗体結合研究によってさらに検証することができ、ここでは、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体がＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの効果を阻害する能力が、それぞれ、組織細胞に対して試験される。例示的な抗体には、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二特異的、およびヘテロ結合体化抗体が含まれ、その調製は本明細書中以下に記載される。

抗体結合研究は、競合的結合アッセイ、直接的および間接的サンドイッチアッセイ、および免疫沈殿アッセイなどの任意の公知の方法において実行され得る。Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１４７−１５８頁（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７）。

競合結合アッセイは、標識した標準が、限定量の抗体との結合について、試験サンプル分析物と競合する能力に依存する。試験サンプル中の標的タンパク質の量は、抗体に結合するようになる標準の量に反比例する。結合するようになる標準の量の決定を容易にするために、抗体は、好ましくは、競合の前後で不溶化され、その結果、標準および抗体に結合している分析物は、未結合のままである標準および分析物から便利に分離されてもよい。

サンドイッチアッセイは、検出されるタンパク質の異なる免疫原性部分、またはエピトープに各々が結合可能である、２つの抗体の使用を包含する。サンドイッチアッセイにおいて、試験サンプル分析物は、固体支持体に固定化された第１の抗体によって結合され、その後、第２の抗体が分析物に結合し、従って、不溶性の三成分複合体を形成する。例えば、米国特許第４，３７６，１１０号を参照のこと。第２の抗体は、検出可能な部分でそれ自体標識されてもよく（直接サンドイッチアッセイ）、または検出可能な部分で標識されている抗免疫グロブリン抗体を使用して測定されてもよい（間接サンドイッチアッセイ）。例えば、サンドイッチアッセイの１つの型はＥＬＩＳＡアッセイであり、この場合、検出可能な部分は酵素である。免疫組織化学のために、組織サンプルは新鮮であるかもしくは凍結されてもよく、またはパラフィン中に包埋され、そして例えば、ホルマリンなどの保存剤で固定されてもよい。

Ｈ．細胞ベースのアッセイ
免疫関連疾患のための細胞ベースのアッセイおよび動物モデルは、本明細書で同定される遺伝子およびポリペプチドと、免疫関連疾患の発生および発病機序との間の関連性をさらに理解するために使用することができる。

異なるアプローチにおいて、特定の免疫関連疾患に関与することが知られている細胞または細胞型は、本明細書に記載されるｃＤＮＡでトランスフェクトされ、これらのｃＤＮＡが免疫機能を刺激または阻害する能力が分析される。適切な細胞は、所望の遺伝子でトランスフェクトでき、そして免疫機能活性についてモニタリングできる。次いで、このようなトランスフェクトされた細胞株は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体または抗体組成物が免疫機能を阻害または刺激する能力、例えば、Ｔ細胞増殖または炎症性細胞浸潤を調節する能力を試験するために使用することができる。本明細書に同定された遺伝子のコード配列でトランスフェクトされた細胞は、免疫関連疾患の治療のための薬物候補を同定するために、さらに使用することができる。

加えて、トランスジェニック動物（以下に記載されるようなもの）に由来する初代培養物は、本明細書の細胞ベースのアッセイにおいて使用できるが、安定な細胞株が好ましい。トランスジェニック動物から継続的な細胞株を導き出すための技術は当該分野において周知である（例えば、Ｓｍａｌｌら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：６４２−６４８［１９８５］を参照のこと）。

１つの適切な細胞ベースのアッセイは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）である。Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３．１２部；Ｊ Ｅ Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ Ｍ Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ Ｈ Ｍａｒｇｌｉｅｓ，Ｅ Ｍ Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ編，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．刊。このアッセイにおいて、試験化合物が、活性化Ｔ細胞の増殖を刺激または阻害する能力がアッセイされる。応答Ｔ細胞の懸濁物は、同種異系刺激細胞とともに培養され、Ｔ細胞の増殖は、トリチウム化チミジンの取り込みによって測定される。このアッセイは、Ｔ細胞反応性の一般的な尺度である。活性化の際に、Ｔ細胞の大部分がＩＬ−２に応答しかつこれを産生するので、このアッセイにおける応答性の違いは、部分的には、応答細胞によるＩＬ−２産生の違いを反映している。ＭＬＲは、標準リンホカイン（ＩＬ−２）検出アッセイによって検証することができる。Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、３．１５，６．３。

ＭＬＲアッセイにおける増殖性Ｔ細胞応答は、アッセイされた分子の直接的な分裂促進的な特性、または外部抗原によって誘導される活性化に起因する可能性がある。ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドのＴ細胞刺激活性のさらなる検証は、同時刺激アッセイによって得ることができる。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を通して媒介される抗原特異的シグナル、および第２のリガンド結合相互作用、例えば、Ｂ７（ＣＤ８０、ＣＤ８６）／ＣＤ２８結合相互作用を通して媒介される同時刺激シグナルを必要とする。ＣＤ２８架橋は、活性化Ｔ細胞によるリンホカイン分泌を増加する。Ｔ細胞活性化は、ネガティブまたはポジティブな効果を有するリガンドの結合を通して、ネガティブおよびポジティブの両方の制御を有する。ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４は、Ｂ７に結合するＩｇスーパーファミリーの関連糖タンパク質である。Ｂ７へのＣＤ２８の結合は、Ｔ細胞活性化のポジティブな同時刺激効果を有し；逆に、Ｂ７へのＣＴＬＡ−４の結合は、ネガティブなＴ細胞不活性化効果を有する。Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｃ．Ａ．およびＡｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，（１９９７）９：３９６．Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．，Ｃｅｌｌ（１９９２）７１：１０６５；Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｐ．Ｓ．およびＬｅｄｂｅｔｔｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）１１：１９１；Ｊｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ（１９９４）１５：３２１；Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｍ．Ｋ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９４）１：４０５。同時刺激アッセイにおいて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、Ｔ細胞同時刺激または阻害活性についてアッセイされる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、ならびに、例えば、ＭＬＲおよび同時刺激アッセイによって決定されるような、Ｔ細胞増殖の刺激因子（同時刺激因子）およびアゴニスト、例えば、それに対するアゴニスト抗体である本発明の他の化合物は、乏しい、最適以下の、または不十分な免疫機能によって特徴付けられる免疫関連疾患を治療する際に有用である。これらの疾患は、Ｔ細胞（およびＴ細胞媒介免疫）の増殖および活性化を刺激することによって、ならびに、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを刺激することなどの、刺激性化合物の投与を通しての哺乳動物における免疫応答を増強することによって、治療される。刺激ポリペプチドは、例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのアゴニスト抗体であり得る。

本発明におけるような刺激化合物の直接的使用は、初回刺激されたＴ細胞上で発現されるリガンド（４−１ＢＢＬ）に結合し、Ｔ細胞活性化および増殖をシグナル伝達する、腫瘍壊死因子受容体ファミリーのメンバーである、４−１ＢＢ糖タンパク質を用いる実験において確証されてきた。Ａｌｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２２１９（１９９４）。

アゴニスト刺激化合物の使用もまた、実験的に確証されてきた。アゴニスト抗４−１ＢＢ抗体を用いる処理による４−１ＢＢの活性化は、腫瘍の根絶を増強する。Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｋ．Ｅ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８：１（１９９８）。以下により詳細に記載される、腫瘍の治療のための免疫アジュバント治療は、本発明の刺激化合物の使用の別の例である。免疫刺激または増強効果はまた、ＭＬＲアッセイにおいて阻害性であることが見出されているＩＬ−１７Ａ／Ｆの活性に拮抗またはこれを遮断することによって達成することができる。化合物の阻害活性を打ち消すことは、正味の刺激効果を生じる。適切なアンタゴニスト／遮断化合物は、阻害タンパク質を認識し、それに結合する抗体またはそのフラグメントであり、それによって、タンパク質のその受容体との有効な相互作用を遮断し、そして受容体を通してシグナル伝達を阻害する。この効果は、推定されるように、ＣＴＬＡ−４結合によって引き起こされる阻害シグナルの除去によって、Ｔ細胞増殖を増強する抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用する実験において確証されてきた。Ｗａｌｕｎａｓ，Ｔ．Ｌ．ら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：４０５（１９９４）。

または、免疫刺激または増強効果はまた、血管透過性増強特性を有するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの投与によって達成することもできる。増強された液胞透過性は、免疫細胞（例えば、単球、好酸球、ＰＭＮ）の局所的浸潤および炎症によって減弱され得る疾患に対して有益である。

一方、Ｔ細胞増殖／活性化、リンホカイン分泌、および／または血管透過性の直接阻害剤であるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドならびに本発明の他の化合物は、免疫応答を抑制するために直接的に使用することができる。これらの化合物は、免疫応答の程度を減少するため、および機能亢進性、最適以上、または自己免疫応答によって特徴付けられる免疫関連疾患を治療するために有用である。本発明の化合物のこの使用は、受容体Ｂ７へのＣＴＬＡ−４の結合がＴ細胞を不活性化する上記の実験によって確証されてきた。直接阻害性の本発明の化合物は、類似の様式で機能する。血管透過性を抑制する化合物の使用は、炎症を減少することが予測される。このような使用は、過度の炎症と関連する状態を治療する際に有益である。

または、刺激性ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合し、そしてこれらの分子の刺激効果を遮断する化合物、例えば、抗体は正味の阻害効果を生じ、Ｔ細胞増殖／活性化および／またはリンホカイン分泌を阻害することによって、Ｔ細胞媒介免疫応答を抑制するために使用できる。ポリペプチドの刺激効果を遮断することは、哺乳動物の免疫応答を抑制する。これは、抗ＩＬ−２抗体を使用する実験において確証されてきた。これらの実験において、抗体はＩＬ−２に結合し、その受容体へのＩＬ２の結合を遮断して、Ｔ細胞阻害効果を達成する。

Ｉ．動物モデル
細胞ベースのインビトロアッセイの結果は、インビボ動物モデルおよびＴ細胞機能のアッセイを使用してさらに確証することができる。種々の公知の動物モデルは、免疫関連疾患の発生および発病機序における本明細書に同定される遺伝子の役割をさらに理解するため、ならびに、抗体を含む候補治療剤および小分子アンタゴニストを含むネイティブポリペプチドの他のアンタゴニストの効力を試験するために使用することができる。このようなモデルのインビボ性質は、これらのモデルにヒト患者における応答を予測性にする。免疫関連疾患の動物モデルには、非組換え動物および組換え（トランスジェニック）動物の両方が含まれる。非組換え動物モデルには、例えば、齧歯類、例えば、マウスモデルが含まれる。このようなモデルは、標準的な技術、例えば、皮下注射、尾静脈注射、脾臓移植、腹腔内移植、腎被膜下移植などを使用して、同系マウスに細胞を導入することによって生成することができる。

対宿主性移植片病は、免疫担当細胞が、免疫抑制された患者または寛容性の患者に移植されるときに起こる。ドナー細胞は、宿主抗原を認識し、かつこれに応答する。この応答は、生命を脅かす重篤な炎症から、軽度の下痢および体重減少まで変化し得る。対宿主性移植片病モデルは、ＭＨＣ抗原および微量の移植抗原に対するＴ細胞反応性を評価する手段を提供する。適切な手段は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、４．３部において詳細に記載されている。

皮膚同種移植片拒絶の動物モデルは、インビボ組織破壊を媒介するＴ細胞の能力を試験する手段であり、そして移植拒絶におけるそれらの役割の尺度である。最も一般的かつ受け入れられているモデルは、マウス尾−皮膚移植を使用する。反復実験は、皮膚同種移植片拒絶が、Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、およびキラーエフェクタＴ細胞によって媒介され、抗体によっては媒介されないことを示してきた。Ａｕｃｈｉｎｃｌｏｓｓ，Ｈ．Ｊｒ．およびＳａｃｈｓ，Ｄ．Ｈ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第２版，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ編，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，８８９−９９２（１９８９）。適切な手順は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、４．４部により詳細に記載されている。本発明の化合物を試験するために使用できる他の移植拒絶モデルは、Ｔａｎａｂｅ，Ｍ．ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，５８：２３（１９９４）およびＴｉｎｕｂｕ，Ｓ．Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４３３０−４３３８（１９９４）によって記載された同種異系心臓移植モデルである。

遅延型過敏症の動物モデルは、細胞媒介性免疫機能のアッセイを同様に提供する。遅延型過敏症反応は、抗原でのチャレンジ後に一定の時間が経過する後まではピークに達しない炎症によって特徴付けられる、Ｔ細胞媒介性インビボ免疫応答である。これらの反応は、多発性硬化症（ＭＳ）および実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ、ＭＳのモデル）などの組織特異的な自己免疫疾患においてもまた起こる。適切な手順は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、４．５部において詳細に記載されている。

ＥＡＥは、Ｔ細胞および単核細胞炎症ならびに引き続く中枢神経系の軸索の脱髄によって特徴付けられるＴ細胞媒介自己免疫疾患である。ＥＡＥは、一般的には、ヒトにおけるＭＳの関連動物モデルであると見なされている。Ｂｏｌｔｏｎ，Ｃ．，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１：１４３（１９９５）。急性モデルおよび再発−寛解モデルの両方が開発された。本発明の化合物は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、１５．１および１５．２部に記載されているプロトコールを使用して、免疫媒介性脱髄疾患に対して、Ｔ細胞刺激活性または阻害活性について試験することができる。Ｄｕｎｃａｎ，Ｉ．Ｄ．ら、Ｍｏｌｅｃ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ，５５４−５６１（１９９７）において記載されている、乏突起膠細胞またはシュワン（Ｓｃｈｗａｎｎ）細胞が中枢神経系に移植されているミエリン疾患のモデルもまた参照のこと。

接触過敏症は、細胞媒介性免疫機能の単純な遅延型過敏症インビボアッセイである。この手順において、外因性ハプテンへの皮膚曝露は、測定および定量される遅延型過敏症反応を生じる。接触過敏症は、初期の感作相、その後の誘発相を含む。誘発相は、Ｔリンパ球が、以前に接触した抗原に遭遇するときに起こる。膨潤および炎症が起こり、これをヒトアレルギー性接触皮膚炎の優秀なモデルにする。適切な手順は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｏｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ、およびＷ．Ｓｔｒｏｂｅｒ編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，４．２部（１９９４）に、Ｇｒａｂｂｅ，Ｓ．およびＳｃｈｗａｒｚ，Ｔ，Ｉｍｍｕｎ．Ｔｏｄａｙ，１９ （１）：３７−４４（１９９８）にもまた、詳細に記載されている。

関節炎の動物モデルは、コラーゲン誘導性関節炎である。このモデルは、ヒト自己免疫性関節リウマチの臨床的、組織学的、および免疫学的な特徴を共有し、ヒト自己免疫性関節炎の許容可能なモデルである。マウスおよびラットモデルは、滑膜炎、軟骨の浸食、および軟骨下骨によって特徴付けられる。本発明の化合物は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上記、１５．５部に記載されているプロトコールを使用して、自己免疫性関節炎に対する活性について試験できる。Ｉｓｓｅｋｕｔｚ，Ａ．Ｃ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８８：５６９（１９９６）に記載されている、ＣＤ１８およびＶＬＡ−４に対するモノクローナル抗体を使用するモデルもまた参照のこと。

抗原誘導性の気道の過敏症、肺好酸球増加症、および炎症が、オボアルブミンを用いて動物を感作すること、次いで、エアロゾルによって送達される同じタンパク質で動物をチャレンジすることによって誘導される、喘息のモデルが記載されてきた。いくつかの動物（モルモット、ラット、非ヒト霊長類）は、エアロゾル抗原を用いるチャレンジの際にヒトにおけるアトピー性喘息に類似の徴候を示す。マウスモデルは、ヒト喘息の特徴の多くを有する。喘息の治療において、活性および有効性の適切な手順について本発明の化合物を試験するための適切な手順は、Ｗｏｌｙｎｉｅｃ，Ｗ．Ｗ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１８：７７７（１９９８）およびそこに引用される参考文献によって記載されている。

加えて、本発明の化合物は、乾癬様疾患の動物モデルで試験することができる。証拠は、感染についてのＴ細胞発病機序を示唆する。本発明の化合物は、Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，３：１８３（１９９７）によって記載されるｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスモデルにおいて試験することができ、ここでは、マウスは乾癬に類似する組織病理学的な皮膚病変を実証する。別の適切なモデルは、Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ，Ｂ．Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．，１４６：５８０（１９９５）によって記載されているヒト皮膚／ｓｃｉｄマウスキメラである。

組換え（トランスジェニック）動物モデルは、トランスジェニック動物を産生するための標準的な技術を使用して、目的の動物のゲノムに、本明細書で同定される遺伝子のコード部分を導入することによって操作することができる。トランスジェニック操作のための標的として働き得る動物には、非限定的に、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、および非ヒト霊長類、例えば、ヒヒ、チンパンジー、およびサルが含まれる。このような動物に導入遺伝子を導入するための当該分野で公知の技術には、前核マイクロインジェクション（ＨｏｐｐｅおよびＷａｎｇｅｒ，米国特許第４，８７３，１９１号）；生殖細胞系列へのレトロウイルス媒介遺伝子移入（例えば、Ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｕｔｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２，６１４８−６１５［１９８５］）；胚性幹細胞への遺伝子標的化（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｃｅｌｌ，５６，３１３−３２１［１９８９］）；胚のエレクトロポレーション（Ｌｏ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌ．Ｂｉｏｌ．，３，１８０３−１８１４［１９８３］）；精子媒介性の遺伝子移入（Ｌａｖｉｔｒａｎｏら、Ｃｅｌｌ，５７，７１７−７３［１９８９］）が含まれる。概説としては、例えば、米国特許第４，７３６，８６６号を参照のこと。

本発明の目的のために、トランスジェニック動物は、それらの細胞の導入遺伝子を部分的にのみ有するもの（「モザイク動物」）が含まれる。導入遺伝子は、単一の導入遺伝子として、またはコンカテマー（ｃｏｎｃａｔａｍｅｒｓ）中、例えば、頭−頭または頭−尾タンデムのいずれかで組込むことができる。特定の細胞型への導入遺伝子の選択的導入もまた、例えば、Ｌａｓｋｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９，６２３２−６３６（１９９２）に従うことによって可能である。

導入遺伝子の発現は、標準的な技術によってモニタリングすることができる。例えば、サザンブロット分析またはＰＣＲ増幅は、導入遺伝子の組込みを確証するために使用できる。次いで，ｍＲＮＡ発現のレベルは、インサイチュハイブリダイゼーション、ノーザンブロット分析、ＰＣＲ、または免疫細胞化学などの技術を使用して分析できる。

動物は、例えば、特定の組織への免疫細胞の浸潤を決定するために、組織学的試験によって、免疫疾患の病理の徴候についてさらに調べられてもよい。遮断実験はまた、化合物のＴ細胞増殖または阻害の程度を決定するために、本発明の化合物で処理される。これらの実験において、上記のように調製され、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合する遮断抗体が動物に投与され、免疫機能に対する効果が決定される。

または、「ノックアウト」動物を構築することができ、これは、ポリペプチドをコードする内因性遺伝子と、動物の胚細胞に導入された同じポリペプチドをコードする変化されたゲノムＤＮＡとの間の相同組換えの結果として、本明細書に同定されるポリペプチドをコードする欠損性または変化した遺伝子を有する。例えば、特定のポリペプチドをコードするｃＤＮＡは、確立された技術に従って、そのポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡをクローニングするために使用できる。特定のポリペプチドをコードするゲノムＤＮＡの一部は、欠失させるか、または、別の遺伝子、例えば、組込みをモニタリングするために使用できる選択マーカーをコードする遺伝子で置き換えることができる。典型的には、数キロベースの変化していない隣接ＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方）がベクターに含まれる［例えば、相同組換えベクターの説明については、ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，Ｃｅｌｌ，５１：５０３（１９８７）を参照のこと］。このベクターは、胚性幹細胞株に導入され（例えば、エレクトロポレーションによって）、導入されたＤＮＡが内因性ＤＮＡと相同組換えされている細胞が選択される［例えば、Ｌｉら、Ｃｅｌｌ，６９：９１５（１９９２）を参照のこと］。次いで、選択された細胞は、動物（例えば、マウスまたはラット）の胚盤胞に注入され、凝集キメラを形成する［例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，編（ＩＲＬ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８７）所収，１１３−１５２頁を参照のこと］。次いで、キメラ胚は、適切な偽妊娠雌性里親動物に移植でき、胚は、出産にまで至らせ、「ノックアウト」動物を作製する。それらの胚細胞に相同組換えＤＮＡを有する子孫は、標準的な技術によって同定でき、動物を繁殖させるために使用でき、ここで、動物のすべての細胞は相同組換えされたＤＮＡを含む。ノックアウト動物は、例えば、特定の病理学的状態に対して防御するそれらの能力について、および本発明のポリペプチドの不在に起因する病理学的状態のそれらの発症について、特徴付けすることができる。

Ｊ．免疫アジュバント治療
１つの実施形態において、本発明の免疫刺激化合物は、腫瘍（癌）の治療のために免疫アジュバント治療において使用することができる。Ｔ細胞がヒトの腫瘍特異的抗原を認識することは、現在、十分に確立されている。ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ、およびＧＡＧＥファミリーの遺伝子によってコードされている腫瘍抗原の１つのグループは、すべての正常組織においてサイレントであるが、黒色腫、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、および膀胱癌などの腫瘍においては有意な量で発現される。ＤｅＳｍｅｔ，Ｃ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：７１４９（１９９６）。Ｔ細胞の同時刺激は、腫瘍の緩解および抗腫瘍応答をインビトロおよびインビボの両方で誘導することが示されてきた。Ｍｅｌｅｒｏ，Ｉ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３：６８２（１９９７）；Ｋｗｏｎ，Ｅ．Ｄ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：８０９９（１９９７）；Ｌｙｎｃｈ，Ｄ．Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３：６２５（１９９７）；Ｆｉｎｎ，Ｏ．Ｊ．およびＬｏｔｚｅ，Ｍ．Ｔ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２１：１１４（１９９８）。本発明の刺激化合物は、アジュバントとして、単独でまたは増殖調節剤、細胞傷害性因子、または化学療法剤と一緒に投与することができ、Ｔ細胞増殖／活性化および腫瘍抗原に対する抗腫瘍応答を刺激する。増殖調節剤、細胞傷害性因子、または化学療法剤は、公知の投与レジメを使用して、従来的な量で投与されてもよい。本発明の化合物による免疫刺激活性は、増殖調節剤、細胞傷害性因子、または化学療法剤の量の減少を可能にし、それによって、患者への毒性を潜在的に低下させる。

Ｋ．薬物候補のスクリーニングアッセイ
薬物候補のスクリーニングアッセイは、本明細書で同定される遺伝子もしくはその生物学的に活性なフラグメントによってコードされるポリペプチドに結合し、もしくはそれと複合体を形成する化合物、または他の細胞タンパク質とのコードされたポリペプチドの相互作用と干渉する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイには、化学ライブラリーの高スループットスクリーニングに適用可能であるアッセイが含まれ、小分子薬物候補を同定するために特に適切にする。意図される小分子には、合成の有機または無機化合物が含まれ、これには以下が含まれる：ペプチド、好ましくは、可溶性ペプチド、（ポリ）ペプチド−免疫グロブリン融合物、および、特に、非限定的に以下を含む抗体：ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体および抗体フラグメント、単鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、およびこのような抗体またはフラグメントのキメラまたはヒト化バージョン、ならびにヒト抗体および抗体フラグメント。これらのアッセイは、当該分野において十分に特徴付けられる、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、および細胞ベースのアッセイが含まれる、種々の形式で実施することができる。すべてのアッセイは、これらが、薬物候補および本明細書で同定される核酸によってコードされるポリペプチドが相互作用するために十分な条件下および時間の間、これらの成分を接触させることを要求するという点で共通である。

結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成される複合体は、反応混合物中で単離または検出できる。特定の実施形態において、本明細書で同定される遺伝子によってコードされるポリペプチドまたは薬物候補は、共有結合または共有結合以外の結合によって、固相、例えば、マイクロタイタープレート上に固定化される。共有結合以外の結合は、一般的には、ポリペプチドの溶液で固体表面をコートすること、および乾燥によって達成される。または、固定化されるポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えば、モノクローナル抗体は、このポリペプチドを固体表面に固着するために使用することができる。アッセイは、固定化成分に、検出可能な標識によって標識されてもよい固定化されていない成分を加えることによって実施され、例えば、コートされた表面は、固着した成分を含む。反応が完了するとき、未反応成分は、例えば、洗浄によって除去され、固体表面上に固着された複合体が検出される。もともと固定化されていない成分が検出可能な標識を有する場合、表面に固定化された標識の検出は、複合体化が起こったことを示す。もともと固定化されていない成分が標識を有さない場合、複合体化は、例えば、固定化複合体を特異的に結合する標識抗体を使用することによって検出することができる。

候補化合物が、本明細書で同定される遺伝子によってコードされる特定のタンパク質と相互作用するが、これに結合しない場合、このタンパク質との相互作用は、タンパク質−タンパク質相互作用を検出するために、周知の方法によってアッセイすることができる。このようなアッセイには、例えば、架橋、同時免疫沈殿、および勾配またはクロマトグラフィカラムを通しての同時精製などの常套的なアプローチが含まれる。加えて、タンパク質−タンパク質相互作用は、Ｆｉｅｌｄｓおよび共同研究者（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ），３４０：２４５−２４６［１９８９］）；Ｃｈｉｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：９５７８−９５８２［１９９１］）によって記載され、ＣｈｅｖｒａｙおよびＮａｔｈａｎｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５７８９−５７９３（１９９１）によって開示される酵母ベースの遺伝子系を使用することによってモニタリングすることができる。酵母ＧＡＬ４などの多くの転写活性化因子は、２つの物理的別個のモジュラードメインからなり、１つはＤＮＡ結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。前述の刊行物に記載されている酵母発現系は（一般的にはツーハイブリッドシステムと呼ばれる）、この特性を利用し、２つのハイブリッドタンパク質を使用し、１つのタンパク質は、標的タンパク質がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合され、別のタンパク質は、候補活性化タンパク質が活性化ドメインに融合されている。ＧＡＬ４活性化プロモータの制御下にあるＧＡＬ１−ｌａｃＺレポータ遺伝子の発現は、タンパク質−タンパク質相互作用を介して、ＧＡＬ４活性の再構築に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、β−ガラクトシダーゼの発色性基質を用いて検出される。ツーハイブリッド技術を使用して２つの特異的タンパク質間のタンパク質−タンパク質相互作用を同定するための完全なキット（ＭＡＴＣＨＭＡＫＥＲ（商標））はＣｌｏｎｔｅｃｈから市販されている。この系はまた、特異的タンパク質相互作用に関与するタンパク質ドメインをマッピングするため、ならびにこれらの相互作用のために決定的であるアミノ酸残基を特定するために拡張することもできる。

本明細書で同定される遺伝子および他の細胞内または細胞外成分の相互作用と干渉する化合物を見出すために、以下のようにして試験することができる：通常、２つの生成物の相互作用および結合を可能にする条件下および時間の間、その遺伝子の産物および細胞内または細胞外成分を含む反応混合物が調製される。候補化合物が結合を阻害する能力を試験するために、反応は、試験化合物の不在下および存在下で実行される。加えて、陽性対照として働くために、プラセボが第３の混合物に加えられてもよい。混合物中に存在する、試験化合物と、細胞内または細胞外成分との間の結合（複合体形成）は、上記のようにモニタリングされる。対照反応においてであるが、しかし、試験化合物を含む反応混合物中ではない複合体の形成は、試験化合物が、試験化合物とその反応パートナーとの相互作用と干渉することを示す。

Ｌ．免疫関連疾患の治療のための組成物および方法
免疫関連疾患の治療において有用な組成物には、免疫機能、例えば、Ｔ細胞増殖／活性化、リンホカイン放出、または免疫細胞浸潤を阻害または刺激する、タンパク質、抗体、小有機分子、ペプチド、リンペプチド、アンチセンスおよびリボザイム分子、三重ヘリックス分子などが非限定的に含まれる。

例えば、アンチセンスＲＮＡおよびＲＮＡ分子は、標的化ＲＮＡにハイブリダイズすること、およびタンパク質翻訳を妨害することによって、ｍＲＮＡの翻訳を直接遮断するように作用する。アンチセンスＤＮＡが使用される場合、翻訳開始部位、例えば、標的遺伝子ヌクレオチド配列の約−１０位から＋１０位の間から誘導されたオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。

リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒可能である酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは、相補性標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリダイゼーションによって、続いて、エンドヌクレアーゼによる切断によって作用する。潜在的なＲＮＡ標的中での特異的リボザイム切断部位は、公知の技術によって同定することができる。さらなる詳細については、例えば、Ｒｏｓｓｉ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４：４６９−４７１（１９９４、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開））を参照のこと。

転写を阻害するために使用される三重ヘリックス形成における核酸分子は、一本鎖であり、デオキシヌクレオチドから構成される。これらのオリゴヌクレオチドの塩基組成は、これがＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成規則を介して三重ヘリックス形成を促進するように設計される。この規則は、一般的に、二重鎖の一方の鎖のプリンまたはピリミジンの相当な大きさのストレッチを必要とする。さらなる詳細については、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／３３５５１、前出を参照のこと。

これらの分子は、上で議論されたスクリーニングアッセイのいずれかまたは任意の組み合わせによって、および／または当業者に周知である任意の他のスクリーニング技術によって同定することができる。

Ｍ．抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体
１つの実施形態において、本発明は、治療剤および／または診断剤として本発明における用途を見出し得る抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を提供する。例示的な抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体、およびヘテロ結合体抗体を提供する
１．ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原およびアジュバントの頻回皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物内で生じる。関連する抗体を、免疫される種において免疫原性であるタンパク質と結合体化すること（とりわけ、合成ペプチドが使用される場合）が有用であり得る。例えば、抗原は、二官能性または誘導体化試薬、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通しての結合体化）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を通して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ_２、またはＲ^１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ^１は異なるアルキル基である）を使用して、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤に結合体化することができる。

動物は、例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質または結合体（それぞれ、ウサギまたはマウスについて）を、３体積のフロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’）完全アジュバントと合わせること、および複数の部位にこの溶液を注射することによって、抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して免疫される。１ヶ月後、動物は、複数の部位への皮下注射によって、フロイント完全アジュバント中のもともとの量の１／５〜１／１０のペプチドまたは結合体で追加免疫される。数日〜１４日後、動物から採血し、抗体力価について血清をアッセイする。力価がプラトーに達するまで動物を追加免疫する。結合体はまた、タンパク質融合物として組換え細胞培養中で作製することができる。また、ミョウバンなどの凝集剤が、免疫応答を増強するために適切に使用される。

２．モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって調製されてもよく、または組換えＤＮＡ法を使用して作製されてもよい（米国特許第４，８１６，５６７号）。

ハイブリドーマ法において、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えば、ハムスターは、免疫のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生し、または産生可能であるリンパ球を誘発するために、上記のように免疫される。または、リンパ球は、インビトロで免疫されてもよい。免疫後、リンパ球は単離され、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用してミエローマ細胞株に融合されて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，５９−１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。

このように調製したハイブリドーマ細胞は、適切な培養培地に播種し、そして増殖させる。この培地は、好ましくは、融合していない親のミエローマ細胞（融合パートナーとも呼ばれる）の増殖または生存を阻害する１種以上の物質を含む。例えば、親のミエローマ細胞は酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠き、ハイブリドーマのための選択培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨害する。

好ましい融合パートナーミエローマ細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定な高レベルの抗体の産生を補助し、そして融合していない細胞に対して選択する選択培地に感受性である細胞である。好ましいミエローマ細胞株はマウスミエローマ株であり、例えば、ｔｈｅ Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＵＳＡから利用可能であるＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍から誘導されたもの、ならびにＳＰ−２および誘導体、例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ），Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡから利用可能であるＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒトミエローマ細胞株およびマウスヒトヘテロミエローマ細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生のために記載されてきた（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；およびＢｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，５１−６３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。

ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地は、抗原に対して指向されるモノクローナル抗体の産生のためにアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈殿によって、またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。

モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）によって記載されているスキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）分析によって決定することができる。

所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が一旦同定されると、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ、標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，５９−１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））によって増殖されてもよい。この目的のための適切な培養培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、例えば、マウスへの細胞のｉ．ｐ．注射によって、動物中の腹水腫瘍としてインビボで増殖させてもよい。

サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、従来的な抗体生成手順、例えば、アフィニティクロマトグラフィ（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧ−セファロースを使用する）またはイオン交換クロマトグラフィ、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析などによって、培養培地、腹水、または血清から適切に分離される。

モノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、容易に単離され、従来的な手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子に対して特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として働く。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置されてもよく、このベクターは、組換え宿主細胞中でのモノクローナル抗体の合成を得るために、大腸菌細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの宿主細胞、または抗体タンパク質を産生しないミエローマ細胞にトランスフェクトされる。抗体をコードするＤＮＡの細菌中での組換え発現に関する総論には、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−１８８（１９９２）が含まれる。

さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載される技術を使用して生成される抗体ファージライブラリーから単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、ファージライブラリーを使用する、マウス抗体およびヒト抗体の単離を記載している。続く刊行物は、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしてのコンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３））による高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生を記載している。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための常套的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替である。

抗体をコードしているＤＮＡは、例えば、相同マウス配列の代わりに、ヒト重鎖および軽鎖の定常ドメイン（Ｃ_ＨおよびＣ_Ｌ）の配列で置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または免疫グロブリンでないポリペプチド（異種ポリペプチド）のコード配列のすべてまたは一部と免疫グロブリンコード配列を融合させることによって、キメラまたは融合抗体ポリペプチドを産生するように修飾されてもよい。免疫グロブリンでないポリペプチド配列は、抗体の定常ドメインの代わりに置換することができ、またはこれらは、抗原に特異性を有する１つの抗原組み合わせ部位、および異なる抗原に特異性を有する別の抗原組み合わせ部位を含むキメラ二価抗体を作製するために、抗体の１つの抗原組み合わせ部位の可変ドメインによって置き換えることができる。

３．ヒト抗体およびヒト化抗体
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体をさらに含んでもよい。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンから誘導される最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、または他の抗原結合サブ配列）である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および容量を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種のＣＤＲ（ドナー抗体）からの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。ある場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基で置き換えられている。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体中でも、または移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列においても、見出されていない残基を含む可能性がある。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的には２つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、ここで、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの領域と一致し、そしてＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の領域である。ヒト化抗体はまた免疫グロブリン、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含む［Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）］。

非ヒト抗体をヒト化するための方法は当該分野において周知である。一般的には、ヒト化抗体は、ヒトではない供給源からそれに導入した１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には、「移入」可変ドメインから引き継がれている「移入」残基としばしば呼ばれる。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者［Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８）］の方法に従って、ヒト抗体の対応する配列によって、齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列を置換することによって実施することができる。従って、このような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、ここで、実質的に、インタクトなヒト可変ドメインに満たないものが、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。実務上、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体中の類似の部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。

ヒト化抗体を作製する際に使用される、軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗体がヒト治療用途のために意図されている場合には、抗原性およびＨＡＭＡ反応（ヒト抗マウス抗体）を減少することが非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法に従って、齧歯類抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列の全体のライブラリーに対してスクリーニングされる。齧歯類の配列に最も近いヒトＶドメイン配列が同定され、その中のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）がヒト化抗体として受容される（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導される特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用されてもよい（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３））。

抗体が、抗原のための高い結合親和性および他の好ましい生物学的特性の保持を伴ってヒト化されることがさらに重要である。この目的を達成するために、好ましい方法に従って、ヒト化抗体は、親の配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親の配列および種々の概念的なヒト化産物の分析のプロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、市販されており、当業者にはよく知られている。選択した候補免疫グロブリン配列の可能性がある三次元コンホメーション構造を例示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検討は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の役割の可能性の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原を結合する能力に影響を与える残基の分析を可能にする。このような方法で、ＦＲ残基は、所望の抗体特性、例えば、標的抗原への親和性の増加が達成されるように、レシピエントから選択および組み合わせられ、配列を移入することができる。一般的に、超可変領域残基は、抗原結合に影響を与えることに直接的かつ最も実質的に関与する。

種々の型のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体が意図される。例えば、ヒト化抗体は、免疫結合体を生成するために、１つ以上の細胞傷害性因子と任意に結合体化されている、Ｆａｂなどの抗体フラグメントであってもよい。または、ヒト化抗体は、インタクトなＩｇＧ１抗体などのインタクトな抗体であってもよい。

ヒト化に対する代替として、ヒト抗体を生成することができる。例えば、現在、内因性免疫グロブリン産生の不在下で、免疫の際に、ヒト抗体の全体のレパートリーを産生することが可能であるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが可能である。例えば、キメラおよび生殖細胞系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（Ｊ_Ｈ）遺伝子のホモ接合性欠失が、内因性抗体産生の完全な阻害を生じることが記載されてきた。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイの、このような生殖細胞系列変異体マウスへの移入は、抗原チャレンジ濃縮の際に、ヒト抗体の産生を生じる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６号，同第５，５６９，８２５号，同第５，５９１，６６９号（すべてＧｅｎＰｈａｒｍ）；同第５，５４５，８０７号；およびＷＯ９７／１７８５２号を参照のこと。

または、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５３［１９９０］）は、免疫していないドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体および抗体フラグメントを産生するために使用することができる。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージの主要なまたは微量のいずれかのコートタンパク質にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能的抗体フラグメントとして提示される。糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的特性に基づいた選択はまた、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択を生じる。従って、ファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５６４−５７１（１９９３）に概説されるように、種々の形式で実施することができる。Ｖ遺伝子のいくつかの供給源は、ファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫したマウスの脾臓から誘導したＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーから、抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。免疫していないヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、抗原の多様なアレイ（自己抗原を含む）に対する抗体は、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載される技術に本質的に従って単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号もまた参照のこと。

上記に議論したように、ヒト抗体はまた、インビトロで活性化したＢ細胞によって生成されてもよい（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照のこと）。

４．抗体フラグメント
特定の状況において、全体の抗体よりも、抗体フラグメントを使用することの利点が存在する。フラグメントのより小さなサイズは、迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍への接近の改善をもたらし得る。

種々の技術が、抗体フラグメントの産生のために開発されてきた。常套的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解的消化を介して誘導された（Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７−１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５））。しかし、これらのフラグメントは、現在、組換え宿主細胞によって直接的に産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体フラグメントは、すべて、大腸菌中で発現され、これから分泌され得、従って、大量のこれらのフラグメントの容易な製造を可能にする。抗体フラグメントは、上で議論したように、抗体ファージライブラリーから単離することができる。または、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、大腸菌から直接回収され、化学的に結合されてＦ（ａｂ’）_２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、組換え宿主細胞培養から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボ半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２フラグメントは、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体フラグメントの産生のための他の技術は当業者に明らかである。他の実施形態において、選択される抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号を参照のこと。ＦｖおよびｓＦｖは、定常領域を欠いているインタクトな組み合わせ部位を有する唯一の種であり；従って、これらは、インビボ使用の間の非特異的結合の減少のために適切である。ｓＳｖ融合タンパク質は，ｓＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端においてエフェクタタンパク質の融合物を生じるように構築されてもよい。Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編，前出を参照のこと。抗体フラグメントはまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるように、「直鎖状抗体」であり得る。このような直鎖状抗体は、一特異的または二特異的であり得る。

５．二特異的抗体
二特異的抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープについての結合特異性を有する抗体である。例示的な二特異的抗体は、本明細書に記載されたようなＩＬ−１７Ａ／Ｆタンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、別のタンパク質の結合部位と、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合部位とを組み合わせ得る。または、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆアームは、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ３）などの白血球上の誘発分子またはＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に結合するアームと組み合わせ得、その結果、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ発現細胞への細胞防御機構を集中しかつ局在化する。二特異的抗体はまた、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを発現する細胞に細胞傷害性因子を局在化するために使用されてもよい。これらの抗体は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合アームおよび細胞傷害性因子（例えば、サポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性同位元素ハプテン）を結合するアームを有する。二特異的抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二特異的抗体）として調製することができる。

ＷＯ９６／１６６７３は、二特異的抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩＩＩ抗体を記載し、米国特許第５，８３７，２３４号は、二特異的抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩ抗体を開示している。二特異的抗ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体はＷＯ９８／０２４６３に示されている。米国特許第５，８２１，３３７号は、二特異的抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３抗体を教示している。

二特異的抗体を作製するための方法は当該分野において公知である。全長二特異的抗体の常套的な製造は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づき、ここでは、２つの鎖が異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の潜在的な混合物を生じ、その１つのみが正しい二特異的構造を有する。通常はアフィニティクロマトグラフィ工程によってなされる、正しい分子の精製は、むしろ扱いにくく、生成物の収率は低い。同様の手順は、ＷＯ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５−３６５９（１９９１）において開示されている。

異なるアプローチに従って、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原組み合わせ部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合されている。好ましくは、この融合物は、少なくともヒンジ、ＣＨ_２、およびＣＨ_３の領域の部分を含む、Ｉｇ重鎖定常ドメインを有する。融合物の少なくとも一方に存在する、軽鎖結合のために必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物、および所望される場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、そして適切な宿主細胞に同時トランスフェクトされる。このことは、構築物中で使用される３つのポリペプチド鎖の等しくない比率が、所望の二特異的抗体の最適な収量を提供する実施形態において、３つのポリペプチドフラグメントの相互の割合を調節する際のより大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい割合である少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高い収量を生じる場合、またはこれらの比率が所望の鎖の組み合わせの収量に有意な影響を有さない場合には、２つまたはすべてのポリペプチド鎖のコード配列を単一の発現ベクターに挿入することが可能である。

このアプローチの好ましい実施形態において、二特異的抗体は、一方のアーム中の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアーム中のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）から構成される。この非対称構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせからの、所望の二特異的化合物の分離を容易にすることが見出された。なぜなら、二特異的分子の半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は、分離の容易な方法を提供するからである。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二特異的抗体を生成することのさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。

米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている別のアプローチに従って、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大化するように操作することができる。好ましい界面には、少なくともＣ_Ｈ３ドメインが含まれる。この方法において、第１の抗体分子の界面からの１つ以上の小さなアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。大きな側鎖と同一または類似のサイズの代償的「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはスレオニン）と置き換えることによって、第２の抗体分子の界面上で作製される。これは、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物よりもヘテロ二量体の収量を増加させる機構を提供する。

二特異的抗体には、架橋抗体または「ヘテロ結合体」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ結合体中の１つの抗体はアビジンに結合することができ、他の抗体はビオチンに結合することができる。このような抗体は、例えば、望ましくない細胞に免疫系細胞を標的化するため（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の治療のために（ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３、およびＥＰ０３０８９）提案されてきた。ヘテロ結合体抗体は、任意の便利な架橋方法を使用して作製されてもよい。適切な架橋剤は当該分野において周知であり、多数の架橋技術とともに、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。

抗体フラグメントから二特異的抗体を生成するための技術は、文献にもまた記載されている。例えば、二特異的抗体は、化学結合を使用して調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体がタンパク質分解的に切断されて、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントを生成する手順を記載している。これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤、亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、隣接ジチオールを安定化し、分子内ジスルフィド形成を妨害する。次いで、形成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に転換される。Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、メルカプトエチルアミンを用いる還元によってＦａｂ’−チオールに再転換され、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合され、二特異的抗体を形成する。生じた二特異的抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用することができる。

最近の進歩は、大腸菌からのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接的な回収を容易にしており、これは、化学的にカップリングされて、二特異的抗体を形成することができる。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二特異的抗体Ｆ（ａｂ’）_２分子の製造を記載している。各Ｆａｂ’フラグメントは、大腸菌から別々に分離され、インビトロで指向性化学カップリングに供され、二特異的抗体を形成する。このように形成された二特異的抗体は、ＥｒｂＢ２受容体および正常ヒトＴ細胞を過剰発現する細胞に結合可能であり、ならびにヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発可能である。組換え細胞培養から二特異的抗体フラグメントを作製および直接的に単離するための種々の技術もまた記載されている。例えば、二特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されてきた。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモ二量体はヒンジ領域で還元されて単量体を形成し、次いで、再酸化されて、抗体ヘテロ二量体を形成した。この方法はまた、抗体ホモ二量体の産生のためにもまた利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ」技術は、二特異的抗体フラグメントを作製するための代替機構を提供してきた。これらのフラグメントは、同じ鎖の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによってＶ_Ｌに接続されたＶ_Ｈを含む。従って、１つのフラグメントのＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインは、別のフラグメントの相補的なＶ_ＬドメインおよびＶ_Ｈドメインと対合することが強いられ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）の使用による二特異的抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーもまた報告されてきた。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。

２価より多くの価数を有する抗体が意図される。例えば、三特異的抗体が調製できる。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。

６．ヘテロ結合体抗体
ヘテロ結合体抗体もまた、本明細書の範囲内にある。ヘテロ結合体抗体は、２つの共有結合的に結合した抗体から構成される。このような抗体は、例えば、望ましくない細胞に免疫系細胞を標的化するために［米国特許第４，６７６，９８０号］、およびＨＩＶ感染の治療のために［ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９］提案されてきた。これらの抗体は、架橋剤を含む方法を含む、合成タンパク質化学における公知の方法を使用して、インビトロで調製されてもよい。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエステル結合を形成することによって、構築されてもよい。この目的のための適切な試薬の例には、イミノチオエートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート、および例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されるものが含まれる。

７．多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞による二価抗体よりも迅速に内在化（および／または異化）され得る。本発明の抗体は、３箇所以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）（ＩｇＭクラス以外である）であり得、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生させることができる。多価抗体は、二量体化ドメインおよび３箇所以上の抗原結合部位を含み得る。好ましい二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはこれらからなる）。このシナリオにおいて、抗体は、Ｆｃ領域、およびＦｃ領域に対してアミノ末端である３つ以上の抗原結合部位を含む。本発明における好ましい多価抗体は、３〜８箇所であるが、好ましくは、４箇所の抗原結合部位を含む（またはこれらからなる）。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（および好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含み、ここで、このポリペプチド鎖は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖は、ＶＤ１−（Ｘ１）_ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）_ｎ−Ｆｃを含んでもよく、ここで、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチドであり、Ｘ１およびＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、そしてｎは０または１である。例えば、ポリペプチド鎖は、ＶＨ−ＣＨ１−可撓性リンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含んでもよい。本発明における多価抗体は、好ましくは、少なくとも２つの（および好ましくは４つの）軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本発明における多価抗体は、例えば、約２〜約８個の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含み得る。本発明で意図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは軽鎖可変ドメインを含み、選択的に、さらにＣＬドメインを含む。

８．エフェクタ機能の操作
例えば、抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を増強するために、エフェクタ機能に関して、本発明の抗体を修飾することが所望され得る。これは、抗体のＦｃ領域において、１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成され得る。代替的に、または加えて、システイン残基がＦｃ領域に加えられてもよく、それによって、この領域中での鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。このようにして生成したホモ二量体抗体は、内在化能力の改善および／または補体媒介性細胞殺傷および抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増加を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。抗腫瘍活性の増加を伴うホモ二量体抗体もまた、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるように、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製されてもよい。または、二重Ｆｃ領域を有する抗体を操作でき、それによって、補体溶解およびＡＤＣＣ能力の増強を有し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、抗体（とりわけ、抗体フラグメント）にサルベージ受容体結合エピトープを組み込んでもよい。本明細書で使用される場合、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させる原因である、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、またはＩｇＧ_４）のＦｃ領域のエピトープをいう。

９．免疫結合体
本発明はまた、化学療法剤、増殖阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメント）、または放射性同位元素（すなわち、放射性結合体）などの細胞傷害性因子に結合体化された抗体を含む免疫結合体に関する。

このような免疫結合体の生成において有用である化学療法剤は上に記載されている。使用され得る酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントには以下が含まれる：ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセン。種々の放射性核種が放射性結合体抗体の製造のために利用可能である。例には、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙ、および^１８６Ｒｅが含まれる。抗体および細胞傷害性因子の結合体は以下を使用して作製される：種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアネートなど）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性核種の結合体化のための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。

抗体、ならびに毒素活性を有する１種以上の小分子毒素、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、およびＣＣ１０６５、およびこれらの誘導体の結合体もまた、本発明において意図される。

メイタンシンおよびメイタンシノイド
１つの好ましい実施形態において、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体（全長またはフラグメント）は、１つ以上のメイタンシノイド分子に結合体化される。

メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することによって作用する、有糸分裂（ｍｉｔｏｔｏｔｉｃ）阻害剤である。メイタンシンは、東アフリカ産の低木メイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３，８９６，１１１号）。続いて、特定の微生物もまた、メイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステルなどのメイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノールおよびその誘導体およびアナログは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号；同第４，２４８，８７０号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２６０，６０８号；同第４，２６５，８１４号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３０８，２６８号；同第４，３０８，２６９号；同第４，３０９，４２８号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３１７，８２１号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４２４，２１９号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３６２，６６３号；および同第４，３７１，５３３号に記載されており、これらの開示はその全体が参照により明確に組み込まれる。

メイタンシノイド−抗体結合体
それらの治療指数を改善する試みにおいて、メイタンシンおよびメイタンシノイドは、腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体に結合体化されてきた。メイタンシノイドを含む免疫結合体およびそれらの治療的使用は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、および欧州特許ＥＰ０４２５２３５Ｂ１に開示されており、これらの開示はその全体が参照により明確に組み込まれる。Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３（１９９６）は、ヒト結腸直腸癌に対して指向されるモノクローナル抗体Ｃ２４２に連結されたＤＭ１と称するメイタンシノイドを含む免疫結合体を記載している。この結合体は、培養結腸癌細胞に対して高度に細胞傷害性であることが見出され、インビボ腫瘍増殖アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）は、メイタンシノイドがジスルフィドリンカーを介してヒト結腸癌株上の抗原に結合するマウス抗体Ａ７に、またはＨＥＲ−２／ｎｅｕオンコジーンを結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１に結合体化された免疫結合体を記載している。ＴＡ．１−メイタンシノイド結合体の細胞傷害性は、細胞あたり３×１０^５ ＨＥＲ−２表面抗原を発現する、ヒト乳房細胞株ＳＫ−ＢＲ−３においてインビトロで試験された。薬物結合体は、遊離のメイタンシノイド薬物と同様である一定の程度の細胞傷害性を達成し、これは、抗体分子あたりのメイタンシノイド分子の数を増加させることによって、増加させることができた。Ａ７−メイタンシノイド結合体は、マウスにおいて低い全身性細胞傷害性を示した。

抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド抗体−メイタンシノイド結合体（免疫結合体）
抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体−メイタンシノイド結合体は、抗体またはメイタンシノイド分子のいずれかの生物学的活性を有意に減少することなく、メイタンシノイド分子に抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を化学的に連結することによって調製される。抗体分子あたり、平均で３〜４分子の結合体化されたメイタンシノイド分子が、抗体の機能または可溶性にネガティブな影響を与えることなく標的細胞の細胞傷害性を増強する際の効力を示したが、１分子の毒素／抗体さえもが、裸の抗体の使用を超えて細胞傷害性を増強することが予測される。メイタンシノイドは当該分野において周知であり、公知の技術によって合成でき、または天然の供給源から単離できる。適切なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号および本明細書に引用される他の特許および非特許刊行物に開示されている。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、およびメイタンシノール分子の芳香環または他の位置が修飾されているメイタンシノールアナログ、例えば、種々のメイタンシノールエステルである。

抗体−メイタンシノイド結合体を作製するための当該分野で公知である多くの連結基が存在し、これには、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号またはＥＰ特許０４２５２３５Ｂ１、およびＣｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）に開示されているものが含まれる。連結基には、ジスルフィド基、チオエステル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基、またはエステラーゼ不安定基が含まれ、上記に同定される特許に開示されるように、ジスルフィド基およびチオエステル基が好ましい。

抗体およびメイタンシノイドの結合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製されてもよく、このカップリング剤には、例えば：Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）である。特に好ましいカップリング剤には、ジスルフィド連結を提供するための、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７［１９７８］）、およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエートが含まれる。

リンカーは、連結の型に依存して、種々の位置でメイタンシノイド分子に結合されてもよい。例えば、エステル連結は、従来的なカップリング技術を使用して、ヒドロキシル基との反応によって形成されてもよい。反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、およびヒドロキシル基で修飾されたＣ−１４位において起こり得る。好ましい実施形態において、連結は、メイタンシノールまたはメイタンシノール誘導体のＣ−３位において形成される。

カリケアマイシン
目的の別の免疫結合体には、１分子以上のカリケアマイシン分子に結合体化されたＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体が含まれる。カリケアマイシンファミリーの抗生物質は、ピコモル濃度以下の濃度で、二本鎖ＤＮＡの切断を生じることが可能である。カリケアマイシンファミリーの結合体の調製については、米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、同第５，８７７，２９６号（すべてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を参照のこと。使用され得るカリケアマイシンの構造的アナログには、γ_１ ^Ｉ、α_２ ^Ｉ、α_３ ^Ｉ、Ｎ−アセチル−γ_１ ^Ｉ、ＰＳＡＧおよびθ^Ｉ _１（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
５３：３３３６−３３４２（１９９３），Ｌｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８：２９２５−２９２８（１９９８）、およびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄへの上述の米国特許）が含まれるがこれらに限定されない。抗体が結合体化できる別の抗腫瘍薬物は、葉酸拮抗薬であるＱＦＡである。カリケアマイシンおよびＱＦＡの両方は、細胞内の作用部位を有し、原形質膜を容易には横切らない。従って、抗体が媒介する内在化を通してのこれらの薬剤の細胞取り込みは、これらの細胞傷害性効果を増強する。

他の細胞傷害性因子
本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体と結合体化できる他の抗腫瘍薬剤には、ＢＣＮＵ、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｉｃｉｎ）、ビンクリスチン、および５−フルオロウラシル、米国特許第５，０５３，３９４号、同第５，７７０，７１０号に記載されるＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として集合的に知られる薬剤のファミリー、ならびにエスペラマイシン（米国特許第５，８７７，２９６号）が含まれる。

使用できる酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントには以下が含まれる：ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖（シュードモナス・エルギノーサ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセン。例えば、１９９３年１０月２８日に公開されたＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。

本発明はさらに、抗体と核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えば、デオキシヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）との間で形成された免疫結合体を意図する。

腫瘍の選択的破壊のために、抗体は、高度に放射活性の原子を含んでもよい。種々の放射性同位元素が、放射結合体化抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２、およびＬｕの放射性同位元素が含まれる。結合体が診断のために使用される場合、これは、シンチグラフィ研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ^９９ｍもしくはＩ^１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化、ｍｒｉとしても知られている）のためのスピンラベル、例えば、ヨウ素−１２３、さらに、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、または鉄を含み得る。

放射性標識または他の標識は、公知の方法で結合体に取り込まれ得る。例えば、ペプチドは、生合成されてもよく、または、例えば、酸素の代わりにフッ素−１９を含む、適切なアミノ酸前駆体を使用してアミノ酸化学合成によって合成されてもよい。ｔｃ^９９ｍまたはＩ^１２３、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８およびＩｎ^１１１などの標識は、ペプチド中のシステイン残基を介して結合できる。イットリウム−９０は、リジン残基を介して結合できる。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒら（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７）を使用してヨウ素−１２３を取り込むことができる。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８９）は、他の方法を詳細に説明している。

抗体および細胞傷害性因子の結合体は以下を使用して作製される：種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣＬなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアネートなど）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性核種の結合体化のための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。リンカーは、細胞中での細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定リンカー、ペプチダーゼ不安定リンカー、光不安定リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）が使用されてもよい。

または、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体および細胞傷害性因子を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはペプチド合成によって作製されてもよい。ＤＮＡの長さは、互いに隣接するか、または、結合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分けられるかのいずれかである、結合体の２つの部分をコードするそれぞれの領域を含み得る。

なお別の実施形態において、抗体は、抗体−受容体結合体が患者に投与される、標的とされる前の腫瘍中での利用のために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）に結合体化されてもよく、続いて、クリアリング剤を使用しての循環からの未結合結合体の除去、次いで、細胞傷害性因子（例えば、放射性核種）に結合体化されている「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。

１０．免疫リポソーム
本明細書に開示される抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はまた、免疫リポソームとして製剤化されてもよい。「リポソーム」は、哺乳動物への薬物の送達に有用である、種々の型の脂質、リン脂質、および／または界面活性剤から構成される小胞である。リポソームの構成成分は、生体膜の脂質配置と類似する、二層形成で一般的に配置される。抗体を含むリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号；および１９９７年１０月２３日に公開されたＷＯ９７／３８７３１に記載される、当該分野において公知の方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。

特に有用なリポソームは、逆相エバポレーション法によって生成することができ、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成を有する。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを得るために、所定のポアサイズのフィルタを通して押し出される。本発明のＦａｂ’フラグメントは、ジスルフィド交換反応を介して、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されるリポソームに結合体化できる。化学療法剤は、任意にリポソーム中に含まれる。Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８１（１９）：１４８４（１９８９）を参照のこと。

Ｎ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド
本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチドは、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合するオリゴヌクレオチドである。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチドは、公知のオリゴペプチド合成方法論を使用して化学合成されてもよく、または組換え技術を使用して調製および精製されてもよい。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチドは、通常、約５アミノ酸長、または少なくとも約６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２，３３，３４，３５，３６，３７，３８，３９，４０，４１，４２，４３，４４，４５，４６，４７，４８，４９，５０，５１，５２，５３，５４，５５，５６，５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３，６４，６５，６６，６７，６８，６９，７０，７１，７２，７３，７４，７５，７６，７７，７８，７９，８０，８１，８２，８３，８４，８５，８６，８７，８８，８９，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９、もしくは１００アミノ酸長またはそれ以上であり、ここで、このようなオリゴポリペプチドは、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチドは、周知の技術を使用して、過度の実験を伴うことなく、同定されてもよい。この点に関して、ポリペプチド標的に特異的に結合可能であるオリゴペプチドのオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングする技術は、当該分野において周知である（例えば、以下を参照のこと：米国特許第５，５５６，７６２号、同第５，７５０，３７３号、同第４，７０８，８７１号、同第４，８３３，０９２号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６８９号、同第５，６６３，１４３号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８４／０３５０６およびＷＯ８４／０３５６４；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：３９９８−４００２（１９８４）；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２：１７８−１８２（１９８５）；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｇｅｎｓ所収，１３０−１４９（１９８６）；Ｇｅｙｓｅｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１０２：２５９−２７４（１９８７）；Ｓｃｈｏｏｆｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４０：６１１−６１６（１９８８）；Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３７８；Ｌｏｗｍａｎ，Ｈ．Ｂ．ら（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：１０８３２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ら（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１；Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：８３６３、およびＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８）。

この点に関して、バクテリオファージ（ファージ）ディスプレイは、ポリペプチド標的に特異的に結合可能であるライブラリーのメンバーを同定するために大きなオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングすることを可能にする１つの周知の方法である。ファージディスプレイは、変異体ポリペプチドが、バクテリオファージの表面上のコートタンパク質への融合タンパク質として提示される技術である（Ｓｃｏｔｔ，Ｊ．Ｋ．およびＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６）。ファージディスプレイの有用性は、選択的にランダム化されたタンパク質変異体（またはランダムにクローニングされたｃＤＮＡ）の大きなライブラリーが、高い親和性で標的分子に結合する配列について迅速かつ効率的に選別され得るという事実にある。ファージ上でのペプチド（Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３７８）またはタンパク質（Ｌｏｗｍａｎ，Ｈ．Ｂ．ら（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：１０８３２；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ら（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１；Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．ら（１９９１） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：８３６３）のライブラリーのディスプレイは、特異的な結合特性を有するものについての数百万ものポリペプチドまたはオリゴペプチドのスクリーニングに使用されてきた（Ｓｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８）。ランダム変異体のファージライブラリーの選別は、大量の変異体を構築および増殖するためのストラテジー、標的受容体を使用するアフィニティ精製の手順、ならびに結合の豊富さの結果を評価する手段を必要とする。米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６８９号、および同第５，６６３，１４３号を参照のこと。

多くのファージディスプレイ法は糸状ファージを使用してきたが、ラムダファージディスプレイ系（ＷＯ９５／３４６８３；米国特許第５，６２７，０２４号）、Ｔ４ファージディスプレイ系（Ｒｅｎ，Ｚ−Ｊ．ら（１９９８）Ｇｅｎｅ ２１５：４３９；Ｚｈｕ，Ｚ．（１９９７）ＣＡＮ ３３：５３４；Ｊｉａｎｇ，Ｊ．ら（１９９７）ｃａｎ １２８：４４３８０；Ｒｅｎ，Ｚ−Ｊ．（１９９７）ＣＡＮ １２７：２１５６４４；Ｒｅｎ，Ｚ−Ｊ．（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：１８３３；Ｅｆｉｍｏｖ，Ｖ．Ｐ．ら（１９９５）Ｖｉｒｕｓ Ｇｅｎｅｓ １０：１７３）、およびＴ７ファージディスプレイ系（Ｓｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．およびＳｃｏｔｔ，Ｊ．Ｋ．（１９９３）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２１７，２２８ ２５７；米国特許第５，７６６，９０５号）も公知である。

基本的なファージディスプレイ概念の多くの他の改善および変形が、現在、開発されている。これらの改善は、ディスプレイ系が、選択された標的分子への結合のためにペプチドライブラリーをスクリーニングする能力、および所望の目的のためにこれらのタンパク質をスクリーニングする潜在能力を用いて機能的タンパク質を提示する能力を増強する。ファージディスプレイ反応のためのコンビナトリアル反応デバイスが開発されており（ＷＯ９８／１４２７７）、ファージディスプレイライブラリーは、二分子相互作用（ＷＯ９８／２０１６９；ＷＯ９８／２０１５９）および制限されたヘリックスペプチドの特性（ＷＯ９８／２００３６）を分析および制御するために使用されてきた。ＷＯ９７／３５１９６は、ファージディスプレイライブラリーが、結合リガンドを選択的に単離するために、リガンドが標的分子と結合する１つの溶液、および親和性リガンドが標的分子とは結合しない第２の溶液と接触している、親和性リガンドを単離する方法を説明している。ＷＯ９７／４６２５１は、アフィニティ精製された抗体を用いるランダムファージライブライリーのバイオパニングの方法を記載し、次いで、結合ファージを単離し、その後、高親和性結合ファージを単離するために、マイクロプレートウェルを使用するマイクロパニングプロセスを行った。親和性タグとしての黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｌｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）プロテインＡの使用もまた報告されている（Ｌｉら（１９９８）Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，９：１８７）。ＷＯ９７／４７３１４は、ファージディスプレイライブラリーであり得るコンビナトリアルライブラリーを使用する、酵素特異性を区別するための基質差し引きライブラリーの使用を説明している。ファージディスプレイを使用する、界面活性剤中での使用に適切である酵素を選択するための方法は、ＷＯ９７／０９４４６に記載されている。特異的結合タンパク質を選択するさらなる方法は、米国特許第５，４９８，５３８号、同第５，４３２，０１８号、およびＷＯ９８／１５８３３に記載されている。

ペプチドライブラリーを生成し、そしてこれらのライブラリーをスクリーニングする方法は、米国特許第５，７２３，２８６号、同第５，４３２，０１８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，４９８，５３０号、同第５，７７０，４３４号、同第５，７３４，０１８号、同第５，６９８，４２６号、同第５，７６３，１９２号、および同第５，７２３，３２３号にもまた開示されている。

Ｏ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子
ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合する、本明細書に定義されるオリゴペプチドまたは抗体以外の有機分子である。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、公知の方法論を使用して、同定および化学的に合成されてもよい（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／００８２３およびＷＯ００／３９５８５を参照のこと）。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、通常、少なくとも約２０００ダルトン未満のサイズ、または約１５００、７５０、５００、２５０、または２００ダルトン未満のサイズであり、ここで、好ましくは特異的に、本明細書に記載されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合可能であるこのような有機分子は、周知の技術を使用して過度の実験を伴うことなく同定されてもよい。この点に関して、ポリペプチド標的に結合可能である分子について有機分子ライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該分野において周知であることが注目される（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／００８２３およびＷＯ００／３９５８５を参照のこと）。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、例えば、以下であり得る：アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、一級アミン、二級アミン、三級アミン、Ｎ置換ヒドラジン、ヒドラジン、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバメート、カーボネート、ケタール、アセタール、チオアセタール、アリールハライド、アリールスルホネート、アルキルハライド、アルキルスルホネート、芳香族化合物、複素環式化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアネート、スルホニルクロリド、ジアゾ化合物、酸塩化物など。

Ｐ．所望の特性を有する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子のスクリーニング
ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合する抗体、オリゴペプチド、および有機分子を生成する技術は、上に記載されている。所望により、特定の生物学的特性を有する抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子がさらに選択され得る。

本発明の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子の増殖阻害効果は、例えば、内因性で、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ遺伝子を用いるトランスフェクション後のいずれかで、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを発現する細胞を使用して、当該分野で公知の方法によって評価されてもよい。例えば、適切な腫瘍細胞株およびＩＬ−１７Ａ／Ｆトランスフェクト細胞が、種々の濃度の本発明の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆモノクローナル抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子で数日間（例えば、２〜７日間）処理され、そしてクリスタルバイオレットまたはＭＴＴで染色され、またはある他の比色アッセイによって分析されてもよい。増殖を測定する別の方法は、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、または他のＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子の存在下または不在下で処理した細胞による^３Ｈ−チミジンの取り込みを比較することによる。処理後、細胞は収集され、ＤＮＡに取り込まれた放射能の量が、シンチレーションカウンタで定量される。適切な陽性対照には、選択された細胞株の増殖を阻害することが知られている増殖阻害抗体を用いるその細胞株の処理が含まれる。インビボでの腫瘍細胞の増殖阻害は、当該分野において公知である種々の方法で決定することができる。好ましくは、腫瘍細胞は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを過剰発現するものである。好ましくは、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、未処理の腫瘍細胞と比較して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ発現腫瘍細胞の細胞増殖をインビトロまたはインビボで約２５〜１００％阻害し、より好ましくは、約３０〜１００％、そしてさらにより好ましくは約５０〜１００％または約７０〜１００％阻害し、１つの実施形態において、約０．５〜３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で阻害する。増殖阻害は、細胞培養中で、約０．５〜３０μｇ／ｍｌまたは約０．５ｎＭ〜２００ｎＭの抗体濃度で測定することができ、ここで、増殖阻害は、抗体への腫瘍細胞の曝露の１〜１０日後に決定される。約１μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の投与が、抗体の最初の投与から約５日間〜３ヶ月以内、好ましくは、約５〜３０日以内に、腫瘍サイズの減少または腫瘍細胞増殖の減少をもたらす場合、抗体はインビボで増殖阻害性である。

細胞死を誘導する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子を選択するために、例えば、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー、または７ＡＡＤの取り込みによって示される膜の完全性の喪失が、対照と比較して評価されてもよい。ＰＩ取り込みアッセイは、補体および免疫エフェクタ細胞の不在下で実施することができる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド発現腫瘍細胞は、培地単独と、または適切な抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体（例えば、約１０μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子を含む培地とともにインキュベートされる。細胞は、３日の期間にわたってインキュベートされる。各処理の後、細胞は洗浄され、細胞クランプの取り出しのために、３５ｍｍストレイナ−キャップ付き１２×７５チューブ（１ｍｌ／チューブ、３チューブ／処理群）内にアリコートされた。次いで、チューブにＰＩ（１０μｇ／ｍｌ）を加える。サンプルは、ＦＡＣＳＣＡＮ（登録商標）フローサイトメータおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（登録商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して分析され得る。ＰＩ取り込みによって決定される統計学的に有意な細胞死のレベルを誘導するこれらの抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子は、細胞死を誘導する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合オリゴペプチド、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合有機分子として選択され得る。

目的の抗体によって結合されたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド上のエピトープに結合する抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）において記載されるような慣用的なクロス−ブロッキングアッセイを実施することができる。このアッセイは、試験抗体、オリゴペプチド、または他の有機分子が、公知の抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体と同じ部位またはエピトープを結合するか否か決定するために使用できる。代替的に、または加えて、エピトープマッピングを、当該分野に公知の方法によって実施することができる。例えば、抗体配列は、接触残基を同定するために、アラニンスキャニングなどによって変異誘発させることができる。変異抗体は、最初に、正しいフォールディングを確認するために、ポリクローナル抗体との結合について試験される。異なる方法において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの異なる領域に対応するペプチドは、試験抗体を用いるか、または試験抗体および特性決定されたもしくは公知のエピトープを有する抗体を用いる競合アッセイにおいて使用することができる。

Ｑ．薬学的組成物
本発明の活性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ分子（例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、および／または各々の変異体）ならびに上に開示されるスクリーニングアッセイによって同定された他の分子は、薬学的組成物の形態で、免疫関連疾患の治療のために投与することができる。

本発明の活性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ分子、好ましくは、ポリペプチドまたは抗体の治療製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、任意の生理学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤と、所望の純度を有する活性成分とを混合することによって調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０））。許容可能な担体、賦形剤、または安定剤は、利用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、これには以下が含まれる：リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムなどの）保存剤：塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖質；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。

本明細書に開示されるスクリーニングアッセイによって同定される化合物は、当該分野において周知である標準的な手順を使用して、類似の様式で製剤化できる。

リポフェクションまたはリポソームもまた、細胞にＩＬ−１７Ａ／Ｆ分子を送達するために使用できる。抗体フラグメントが使用される場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の阻害フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列を結合する能力を保持しているペプチド分子が設計できる。このようなペプチドは、化学的に合成でき、および／または組換えＤＮＡ技術によって産生できる（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３［１９９３］を参照のこと）。

本発明における製剤はまた、治療される特定の徴候に必要である１つより多くの活性化合物を含んでもよく、好ましくは、互いに悪影響を与えない相補活性を有するものである。代替的に、または加えて、組成物は、細胞傷害性因子、サイトカイン、または増殖阻害因子を含んでもよい。このような分子は、意図される目的のために有効な量で、適切に組み合わせて存在する。

活性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ分子はまた、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中の、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に包括されてもよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。

インビボ投与に使用される製剤は滅菌されている必要がある。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆ分子の持続放出調製物が調製されてもよい。持続放出調製物の適切な例には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、そのマトリクスは成型品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリクスの例には以下が含まれる：ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号））、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタミンのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用マイクロスフェア）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは１００日間を超える分子の放出を可能にするのに対して、特定のハイドロゲルはより短い期間の間、タンパク質を放出する。カプセル化した抗体が長時間体内に残る場合、これらは、３７℃の湿気への曝露の結果として変性または凝集する可能性があり、生物学的活性の損失および免疫原性の変化の可能性を生じる。合理的なストラテジーは、関係する機構に依存して、安定化のために工夫することができる。例えば、凝集の機構が、チオ−ジスルフィド交換を通しての分子間Ｓ−Ｓ結合形成であることが発見されている場合、安定化は、スルフヒドリル残基を修飾すること、酸性溶液からの凍結乾燥、湿度の制御、適切な添加物の使用、および特定のポリマーマトリクス組成物の開発によって達成され得る。

Ｒ．治療の方法
本発明のポリペプチド、抗体、および他の活性化合物が、種々の免疫関連疾患および状態、例えば、組織への炎症性細胞の浸潤によって特徴付けられるもの、Ｔ細胞増殖の刺激、Ｔ細胞増殖の阻害、血管透過性の増加もしくは減少、またはこれらの阻害を含む、Ｔ細胞媒介疾患、例えば、自己免疫疾患を治療するために使用されてもよいことが意図される。

本発明のポリペプチド、抗体、および他の活性化合物で治療される例示的な状態または疾患には、以下が含まれるがこれらに限定されない：全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、変形性関節症、脊椎関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症性筋障害（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）、甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、真性糖尿病、免疫介在性腎疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発神経障害またはギラン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発神経障害、肝胆汁性疾患、例えば、感染性肝炎（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、および他の非肝臓指向性のウイルス）、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎：クローン病）、グルテン感受性腸症、およびホイップル病、以下を含む自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、および接触性皮膚炎、乾癬、アレルギー性疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食品過敏症、および蕁麻疹、肺の免疫疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、および過敏性肺炎、以下を含む移植関連疾患、移植拒絶および対宿主性移植片病。

全身性エリテマトーデスにおいて、疾患の中心的なメディエータは、自己タンパク質／組織に対する自己反応性抗体の産生、および引き続く免疫媒介炎症の生成である。抗体は、直接的または間接的に組織損傷を媒介する。Ｔリンパ球は組織損傷に直接的に関与していることが示されていないので、Ｔリンパ球は、自己反応性抗体の発生のために必要とされる。従って、この疾患の起源は、Ｔリンパ球依存性である。複数の器官および系が臨床的に影響を受け、これには、腎臓、肺、筋骨格系、粘膜皮膚、眼、中枢神経系、心臓血管系、胃腸管、骨髄、および血液が含まれる。

関節リウマチ（ＲＡ）は、関節軟骨に損傷が生じている複数の関節の滑膜を主として含む慢性全身性自己免疫炎症性疾患である。発病機序は、Ｔリンパ球依存性であり、リウマチ因子、自己ＩｇＧに対する自己抗体の産生と関連し、滑液および血液中で高レベルに達する免疫複合体の形成を生じる。関節におけるこれらの複合体は、滑膜へのリンパ球および単球の顕著な浸潤、続いて、顕著な滑膜の変化を誘導し得；関節腔／滑液は、多数の好中球の付加を伴って類似の細胞によって浸潤される。影響を受ける組織は、主として関節であり、しばしば、対称的なパターンである。しかし、関節外疾患もまた、２つの主要な形態で起こる。１つの形態は、関節外病変の発症であり、進行している進行性関節疾患および典型的な肺線維症、血管炎、および皮膚潰瘍の病変を伴う。関節外疾患の第２の形態は、いわゆるフェルティ（Ｆｅｌｔｙ’ｓ）症候群であり、これは、ＲＡ疾患の経過の後期に起こり、時折、関節疾患の後で鎮静期になり、好中球減少症、血小板減少症、および脾腫の存在を含む。これは、多数の器官における血管炎が付随し得、梗塞、皮膚潰瘍、および壊疽の形成を伴う。患者はまた、しばしば、罹患した関節の上にある皮下組織にリウマチ結節を発症し；この結節の後期段階は、混合炎症性細胞浸潤によって取り囲まれる壊死中心を有する。ＲＡにおいて起こり得る他の徴候には以下が含まれる：心外膜炎、冠動脈炎、肺線維症を伴う間質性肺炎、乾性角結膜炎、およびリウマチ結節。

若年性慢性関節炎は、１６歳よりも若い年齢でしばしば開始する慢性突発性炎症性疾患である。その表現型は、ＲＡとある程度の類似性を有する；正のリウマチ因子を有するある患者は、若年性関節リウマチとして分類される。この疾患は、３つの主要なカテゴリーに下位分類される：少関節性（ｐａｕｃｉａｒｔｉｃｕｌａｒ）、多関節性（ｐｏｌｙａｒｔｉｃｕｌａｒ）、またな全身性。関節炎は重篤であり得、典型的には破壊的であり、関節強直および成長遅延をもたらす。他の徴候には、慢性前部ブドウ膜炎および全身性アミロイドーシスが含まれ得る。

脊椎関節症は、いくつかの共通の臨床的特徴、およびＨＬＡ−Ｂ２７遺伝子産物の発現と共通の関連性を有する障害の一群である。この障害には以下が含まれる：強直性脊椎炎、ライター（Ｒｅｉｔｅｒ’ｓ）症候群（反応性関節炎）、炎症性腸疾患に関連する関節炎、乾癬に関連する脊椎炎、若年発症脊椎関節症、および未分化脊椎関節症。異なる特徴には以下が含まれる：脊椎炎の有無；炎症性非対称関節炎；ＨＬＡ−Ｂ２７との関連（クラスＩ ＭＨＣのＨＬＡ−Ｂ遺伝子座の血清学的に規定された対立遺伝子）；眼の炎症；および他のリウマチ疾患と関連する自己抗体の不在。この疾患の誘導に対する鍵として最も関連付けられている細胞は、クラスＩ ＭＨＣ分子によって提示される抗原を標的とする細胞であるＣＤ８^＋Ｔリンパ球である。ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、これがあたかもＭＨＣクラスＩ分子によって発現された外来性ペプチドであるかのように、クラスＩ ＭＨＣ対立遺伝子ＨＬＡ−Ｂ２７に対して反応し得る。ＨＬＡ−Ｂ２７のエピトープは、細菌または他の微生物の抗原性エピトープを模倣し得、従って、ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導することが仮定されている。

全身性硬化症（強皮症）は病因が未知である。この疾患の顕著な特徴は皮膚の硬化であり；おそらく、これは、活性炎症プロセスによって誘導される。強皮症は、局在化または全身性であり得；血管病変は共通であり；微小血管構造における内皮細胞損傷は、全身性強皮症の発症における初期のかつ重要な事象であり；血管損傷は免疫媒介性であり得る。免疫学的な基礎は、皮膚病変における単核細胞の浸潤の存在、および多くの患者における抗核抗体の存在によって暗示される。ＩＣＡＭ−１は、しばしば、皮膚病変中の線維芽細胞の細胞表面でアップレギュレートされ、このことは、これらの細胞とＴ細胞との相互作用が、疾患の発病機序における役割を有し得る。関係する他の器官には以下が含まれる：胃腸管；異常な蠕動／運動性を生じる平滑筋萎縮および線維症；腎臓；小さな弓状動脈および小葉間動脈に影響を与え、腎臓皮質血流の減少を生じ、タンパク尿、高窒素血症、および高血圧を生じる、中心性内皮下内膜増殖；骨格筋；萎縮、間質性線維症；炎症；肺；間質性肺炎および間質性線維症；および心臓；収縮帯壊死、瘢痕／線維症。

皮膚筋炎、多発性筋炎、およびその他を含む特発性炎症性筋障害は、病因が未知である慢性筋肉炎症の障害であり、筋衰弱を生じる。筋損傷／炎症は、しばしば、全身性および進行性である。自己抗体は、多くの型と関連する。これらのミオシン特異的自己抗体は、タンパク質合成に関与する成分、タンパク質およびＲＮＡの機能に対して指向され、およびこれを阻害する。

シェーグレン症候群は、免疫媒介性炎症、引き続く涙腺および唾液腺の機能の破壊に起因する。この疾患は、炎症性結合組織疾患と関連し、またはこれに付随し得る。この疾患は、両方ともが小ＲＮＡ−タンパク質複合体であるＲｏ抗原およびＬａ抗原に対する自己抗体産生と関連する。病変は、硬変、末梢または感覚神経障害、および明白な紫斑病を含む他の徴候または関連とともに、乾性角結膜炎、口内乾燥を生じる。

全身性脈管炎は、主要な病変が炎症であり、引き続く血管への損傷が、罹患した血管によって供給される組織に虚血／壊死／変性を生じ、ある場合には、最終的には末端組織の機能不全を生じる疾患である。血管炎はまた、二次病変として発症し得、特に、免疫複合体の形成ともまた関連する疾患において、関節リウマチ、全身性硬化症などの他の免疫−炎症性媒介疾患まで続発し得る。原発性全身性脈管炎の群における疾患としては以下が含まれる：全身性壊死性血管炎；結節性多発性動脈炎、アレルギー性血管炎、および肉芽腫症、多発性血管炎；ウェーゲナー肉芽腫症；リンパ腫様肉芽腫症；および巨細胞性動脈炎。他の血管炎には以下が含まれる：粘膜皮膚リンパ節症候群（ＭＬＮＳまたは川崎病）、単離されたＣＮＳ血管炎、ベーチェット（Ｂｅｈｅｔ’ｓ）病、閉塞性血栓血管炎（バージャー病）、および皮膚壊死性小静脈炎。列挙された血管炎の型の大部分の病因機序は、主として、血管壁中での免疫グロブリン複合体の沈着、および引き続いて、ＡＤＣＣ、補体活性化、またはその両方のいずれかを介する炎症性応答の誘導に起因すると考えられている。

サルコイドーシスは、体中のほぼ任意の組織における類上皮細胞肉芽腫の存在によって特徴付けられる、病因が未知である状態である；肺の関与が最も一般的である。発病機序には、疾患の部位における活性化マクロファージおよびリンパ細胞の持続が含まれ、続いて、これらの細胞型によって放出された局所的および全身性の活性産物の放出から、慢性続発症が生じる。

自己免疫性汎血球減少症および発作性夜間血色素尿症を含む自己免疫性溶血性貧血は、赤血球細胞（ある場合においては、同様に血小板を含む他の血球細胞）の表面上で発現された抗原と反応する抗体の産生の結果であり、補体媒介溶解および／またはＡＤＣＣ−受容体媒介機構を介する、抗体でコートされた細胞の除去の反映である。

他の臨床設定における、特発性血小板減少性紫斑病および免疫媒介性血小板減少症を含む自己免疫性血小板減少症において、血小板の破壊／除去は、血小板への抗体または補体のいずれかの結合、およびその後の、補体溶解、ＡＤＣＣまたはＦｃ−受容体媒介機構による除去の結果として起こる。

グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、および萎縮性甲状腺炎を含む甲状腺炎は、甲状腺に存在し、しばしばこれに特異的であるタンパク質と反応する抗体の産生を伴う、甲状腺抗原に対する自己免疫応答の結果である。以下を含む実験モデルが存在する：自発的モデル：ラット（ＢＵＦおよびＢＢラット）およびニワトリ（肥満ニワトリ系統）；誘導モデル：サイログロブリン、甲状腺ミクロソーム抗原（甲状腺ペルオキシダーゼ）を用いる動物の免疫。

Ｉ型真性糖尿病またはインスリン依存性糖尿病は、膵臓島細胞の自己免疫破壊である；この破壊は、自己抗体および自己反応性Ｔ細胞によって媒介される。インスリンまたはインスリン受容体に対する抗体はまた、インスリン非応答性の表現型を生じることができる。

糸球体腎炎および尿細管間質性腎炎を含む免疫介在性腎疾患は、腎臓抗原に対する自己反応性抗体もしくはＴ細胞の産生の結果として直接的であるか、または他の非腎臓抗原に対して反応性である抗体および／もしくは免疫複合体の腎臓における沈着の結果として間接的であるかのいずれかでの、腎臓組織に対する抗体またはＴリンパ球媒介損傷の結果である。従って、免疫複合体の形成を生じる他の免疫媒介疾患もまた、間接的な続発症として免疫媒介疾患を誘導し得る。直接的および間接的の両方の免疫機構が、腎臓組織における病変の発症を産生／誘導する炎症性応答を生じ、器官の機能障害を生じ、ある場合においては、腎不全の発病機序に含まれ得る。体液性および細胞性の両方の免疫機構が、病変の病因に関与し得る。

多発性硬化症、特発性脱髄性多発神経障害、またはギラン−バレー症候群；および慢性炎症性脱髄性多発神経障害を含めた、中枢神経系または末梢神経系の脱髄疾患は、自己免疫の基礎を有すると考えられており、乏突起膠細胞またはミエリンに直接的に引き起こされた損傷の結果として神経脱髄を生じる。ＭＳにおいて、疾患の誘導および進行がＴリンパ球に依存しているという証拠が存在している。多発性硬化症は、Ｔリンパ球依存性であり、再発−寛解過程または慢性進行過程のいずれかを有する脱髄疾患である。病因は未知である；しかし、ウイルス感染、遺伝的素因、環境、および自己免疫のすべてが寄与している。病変には、主に、Ｔリンパ球媒介性の、ミクログリア細胞および浸潤性マクロファージの浸潤が含まれ；ＣＤ４^＋Ｔリンパ球は、病変において優勢な細胞株である。乏突起膠細胞の細胞死およびその後の脱髄の機構は知られていないが、おそらくＴ細胞によって駆動されている。

好酸球性肺炎；特発性肺線維症、および過敏性肺炎を含む、炎症性および線維性肺疾患は、調節されない免疫−炎症応答が含まれ得る。この応答の阻害は、治療的利点があるものである。

水疱性皮膚疾患、多形性紅斑、および接触性皮膚炎を含む、自己免疫性または免疫媒介性皮膚疾患は自己抗体によって媒介され、その起源は、Ｔリンパ球依存性である。

乾癬は、Ｔリンパ球媒介性炎症性疾患である。病変は、Ｔリンパ球、マクロファージ、および抗原プロセシング細胞、およびある程度の好中球の浸潤を含む。

喘息；アレルギー性鼻炎；アトピー性皮膚炎；食品過敏症；および蕁麻疹を含むアレルギー性疾患は、Ｔリンパ球依存性である。これらの疾患は、主に、Ｔリンパ球誘導性炎症、ＩｇＥ媒介性炎症、または両方の組み合わせによって媒介される。

移植拒絶および対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）を含む移植関連疾患はＴリンパ球依存性である。Ｔリンパ球機能の阻害は寛解性である。

免疫および／または炎症応答の介入が利点を有する他の疾患は以下である：ウイルス感染（ＡＩＤＳ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、およびヘルペスが含まれるがこれらに限定されない）、細菌感染、真菌感染、ならびに原生動物および寄生生物感染（分子（または誘導体／アゴニスト）、これは、ＭＬＲを刺激し、感染性因子に対する免疫応答を増強するために治療的に利用することができる）が含まれるがこれらに限定されない感染性疾患、ＭＬＲを刺激し、遺伝の、後天的な、感染性の、誘導性の（ＨＩＶ感染におけるように）、または医原性の（すなわち、化学療法から）の免疫不全の状態のための免疫応答を増強するように治療的に利用され得る、免疫不全疾患（分子／誘導体／アゴニスト）、および新生物形成。

あるヒト癌患者は、新生物細胞上の抗原に応答して、抗体および／またはＴリンパ球応答を発生することが実証されてきた。新生物形成の動物モデルにおいて、免疫応答の増強が、特定の新生物の拒絶または後退を生じ得ることもまた示されてきた。ＭＬＲにおけるＴリンパ球応答を増強する分子は、新生物に対する免疫応答を増強する際にインビボで有用性を有する。ＭＬＲにおけるＴリンパ球増殖応答を増強する分子（またはアゴニスト様式で同じ受容体に影響を与える小分子アゴニストまたはアンタゴニスト）は、癌を治療するために治療的に使用することができる。ＭＬＲにおけるＴリンパ球応答を阻害する分子もまた、新生物に対する免疫応答を抑制するために、新生物形成中にインビボで作用する；このような分子は、それ自体、新生物細胞によって発現され得るか、またはこれらの発現は、他の細胞の新生物によって誘導され得る。このような阻害分子の拮抗は（抗体、小分子アンタゴニスト、または他の手段のいずれかとの）、免疫媒介性の腫瘍拒絶を増強する。

加えて、炎症誘発性特性を有する分子の阻害は、再灌流傷害；脳卒中；心筋梗塞；アテローム性動脈硬化症；急性肺損傷；出血性ショック；熱傷；敗血症／敗血症性ショック；急性腎尿細管壊死；子宮内膜症；変性関節疾患および膵炎において治療的な利点を有し得る。本発明の化合物、例えば、ポリペプチドまたは抗体は、公知の方法、例えば、ボーラスとしての静脈内投与に従って、または、一定の時間にわたる連続注入によって、筋肉内、腹腔内、脳内、脊髄、皮下、関節内、滑膜内、くも膜下腔内、経口、局所的、または吸入（鼻内、肺内）経路によって、哺乳動物、好ましくは、ヒトに投与される。ポリペプチドおよび抗体の静脈内または吸入投与が好ましい。

免疫アジュバント治療において、他の治療レジメン、抗癌剤のこのような投与は、本発明のタンパク質、抗体、または化合物の投与と組み合わせてもよい。例えば、本発明の免疫アジュバントで治療される患者はまた、抗癌剤（化学療法剤）または放射線治療を受容してもよい。このような化学療法剤の調製および投薬スケジュールは、製造業者の指示書に従って、または経験の豊富な実務者によって決定されるように使用されてもよい。このような化学療法剤の調製および投薬スケジュールは、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ編，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ（１９９２）においてもまた記載されている。化学療法剤は、免疫アジュバントの投与の前もしくは後であり得、またはそれと同時に与えてもよい。加えて、タモキシフェンなどの抗エストロゲン化合物またはオナプリストン（ＥＰ６１６８１２を参照のこと）などの抗プロゲステロンが、このような分子について知られている投薬量で与えられてもよい。

ＣＤ２０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８、ＥｒｂＢ２、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、または血管内皮因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体などの、他の免疫疾患関連抗原または腫瘍関連抗原に対する抗体も投与することが所望され得る。代替的に、または加えて、本明細書に開示される同じかまたは２つ以上の異なる抗原を結合する２つ以上の抗体が患者に同時投与されてもよい。時折、１種以上のサイトカインも患者に投与することが有益であり得る。１つの実施形態において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、増殖阻害剤とともに同時投与される。例えば、増殖阻害剤が最初に投与されてもよく、続いて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドが投与される。しかし、同時投与または最初の投与もまた意図される。増殖阻害剤の適切な投薬量は、現在使用されているものであり、増殖阻害剤およびＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの組み合わせ作用（相乗作用）に起因して、少なくされる可能性がある。

免疫関連疾患の治療またはその重篤度の減少のために、本発明の化合物の適切な投薬量は、上に定義したような、治療される疾患の型、疾患の重篤度および経過、薬剤が予防目的で投与されるか、または治療目的で投与されるか、以前の治療、患者の病歴、ならびに化合物に対する応答、ならびに担当医の方針に依存する。化合物は、一度に、または一連の治療にわたって患者に適切に投与される。

例えば、疾患の型および重篤度に依って、約１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）のポリペプチドまたは抗体は、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または連続注入によるかに関わらず、患者への投与のための最初の候補投薬量である。典型的な１日の用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得、これは上述の要因に依存する。数日間またはそれ以上の反復投与については、状態に依って、治療は、疾患の徴候の所望の抑制が起こるまで持続される。しかし、他の投薬量レジメンが有用であり得る。この治療の進行は、従来的な技術およびアッセイによって容易にモニタリングされる。

Ｓ．製造品
本発明の別の実施形態において、上記の疾患の診断または治療のために有用である物質を含む製造品（例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む）が提供される。この製造品は、容器および指示書を含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。容器は、状態を診断または治療するために有効である組成物を保持し、そして滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈用溶液バッグ、または皮下注射用針によって貫通可能なストッパを有するバイアルであり得る）。組成物中の活性薬剤は、通常、本発明のポリペプチドまたは抗体である。容器上のまたはそれに付随する指示書またはラベルは、その組成物が、選択された状態を診断または治療するために使用されることを示す。この製造品は、さらに、薬学的に許容可能な緩衝剤、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー液、およびデキストロース溶液を含む第２の容器を含んでもよい。これはさらに、他の緩衝剤、希釈剤、充填剤、針、シリンジ、および使用のための指針を有するパッケージング挿入物を含む、商業的および使用者の視点から所望される他のものをさらに含んでもよい。

Ｔ．免疫関連疾患の診断および予後診断
特定の免疫関連疾患において過剰発現されているタンパク質などの細胞表面タンパク質は、薬物候補または疾患治療のための優れた標的である。同じタンパク質は、免疫関連疾患状態において増幅されている遺伝子によってコードされている分泌タンパク質とともに、これらの疾患の診断および予後診断においてさらなる用途を見出す。例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、または別の免疫関連疾患において増幅されている遺伝子のタンパク質産物に対する抗体は、診断剤または予後診断剤として使用することができる。

例えば、抗体フラグメントを含む抗体は、増幅または過剰発現された遺伝子（「マーカー遺伝子産物」）によってコードされるタンパク質の発現を定性的にまたは定量的に検出するために使用することができる。この抗体は、好ましくは、検出可能な、例えば，蛍光標識を備え、結合は、光学顕微鏡、フローサイトメトリー、フルオリメトリー、または当該分野で公知である他の技術によってモニタリングすることができる。これらの技術は、本質的に上記のように実施される。

マーカー遺伝子産物への抗体結合のインサイチュ検出は、例えば、免疫蛍光または免疫電子顕微鏡によって実施することができる。この目的のために、組織学的試料が患者から取り出され、標識抗体が、好ましくは、生物学的サンプル上に抗体を重層することによってその試料に適用される。この手順はまた、試験される組織中のマーカー遺伝子産物の分布を決定することを可能にする。広範な種々の組織学的方法がインサイチュ検出に容易に利用可能であることが当業者には明らかである。

以下の実施例は、例示目的のみのために提供され、いかなる場合においても、本発明の範囲を限定することを意図していない。

本明細書において引用されるすべての特許および引用文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

実施例において言及される市販の試薬は、他に示されない限りは、製造業者の指示書に従って使用した。ＡＴＣＣ受託番号によって、以下の実施例および明細書を通して同定される細胞の供給源は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡである。

（実施例１）
ＩＬ−１７Ａ／Ｆとして同定された新規なＩＬ−１７サイトカインの組換え発現
ＩＬ−１７およびＩＬ−１７ＦをコードするｃＤＮＡ発現ベクターを用いるヒト２９３腎臓細胞トランスフェクション
ヒト２９３腎臓細胞は、リン酸カルシウム沈殿手順を使用して、ヒトＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｃ、およびＩＬ−１７Ｆ遺伝子をコードする等量のプラスミドを用いてトランスフェクトした。各々の５０〜８０％コンフルエントであるＴ−１５０フラスコについて、５０μｇの各プラスミドを混合して、細胞上に重層するための沈殿を形成した。トランスフェクションの１日後に、１０％ ＦＣＳ、５ｍＭ Ｌ−グルタミン、ペニシリン−ストレプトマイシンを含む５０：５０ Ｆ１２：ＤＭＥＭを取り出し、無血清ＰＳ２４培地と置き換え、さらに４日間培養した。４日後、馴化培地を遠心分離して収集し、濾過滅菌し、その後精製した。

組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製
Ａ．初期分画工程１：
ヒト２９３腎臓細胞一過性培養からの２．５リットルの組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆ馴化培地を、４８０ミリリットルの１０キロダルトンカットオフメンブレンを使用して濃縮し、２０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０、１ｍＭ アジ化ナトリウム（緩衝液Ａ）に対して透析し、次いで、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＨｉＬｏａｄ Ｓ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ２６／１０カラムに６ｍｌ／分で適用した。カラムは１００％緩衝液Ｂ（２０ｍＭ酢酸ナトリウム、１Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭアジ化ナトリウム、ｐＨ５．０）までの１％／分の変化率の直線勾配を用いて６ｍｌ／分の流速で溶出させ、１２ｍｌ画分を収集した。このカラムから収集した画分に対してＳＤＳ ＰＡＧＥ分析を実施した。タンパク質を銀染色で顕在化させた。分子量マーカーは、画分２５〜３７を含むゲルについて添付した（図２）。画分３１および３２は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆに一致する約３３ｋＤａの見かけの分子量を有するタンパク質を含んだ。

Ｂ．ＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製
画分３２（図２）の４ｍｌを、０．１％トリフルオロ酢酸で酸性化し、次いで、０．１％トリフルオロ酢酸（緩衝液Ｃ）で平衡化したＶｙｄａｃ Ｃ４カラムに０．５ｍｌ／分で適用し、そして３段階勾配（１０分間にわたって０〜３５％ Ｄ、３５分間にわたって３５〜５０％ Ｄ、１０分間にわたって５０〜１００％ Ｄ）を用いて、１００％緩衝剤Ｄ（１００％アセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸）に勾配溶出した。図２は、２１４ｎｍおよび２８０ｎｍで測定した溶出タンパク質のクロマトグラフを示す。アセトニトリル段階勾配は、プロフィール上に重ねて示す。画分３８のタンパク質濃度は、アミノ酸分析によって０．５３６ｍｇ／ｍｌであることが見出された。ゲル、ブロット、アミノ酸配列、および活性アッセイをこの画分で実行した。

ＨｉＬｏａｄ Ｓセファロースからの画分３１および残りの体積の画分３２をプールし、１０ｋＤカットオフメンブレンを使用して８時間、緩衝剤Ａに対して透析し、そして０．２ミクロンフィルタを通過させた。この材料を、緩衝剤Ａで平衡化したＭｏｎｏ Ｓカラムに１ｍｌ／分の流速で負荷し、そして１ｍｌ／画分を収集しながら、１００％緩衝剤Ｂまでの３段階勾配（１０分間にわたって０〜３０％ Ｂ、４５カラム体積にわたって３０〜７５％ Ｂ、１０分間にわたって７５〜１００％ Ｂ）を用いて溶出させた。画分２６〜４３をアッセイし、タンパク質濃度はアミノ酸分析によって決定した。画分３１、３２、および３３の濃度は、それぞれ、０．２５８、０．３５９、および０．２９１ｍｇ／ｍｌであった。ゲル、ブロット、アミノ酸配列、質量スペクトル、および活性アッセイは、主として画分３２および３３に対して行った。クロマトグラフィによって生成した画分は、ウェスタンブロッティングの使用を通して、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆ含量についてアッセイした。ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかに対して指向される１μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体を使用して、サンプル中のＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかの存在を検出した。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆの質量スペクトル分析
成熟ＩＬ−１７Ａ／Ｆのアミノ酸配列および鎖間ジスルフィド結合は、質量スペクトル分析によって決定した（図４Ａを参照のこと；ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体性ポリペプチドは、鎖間および鎖内のジスルフィドとともに示される）。２つの鎖間ジスルフィド結合は、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７のポリペプチド鎖間［それぞれ、残基４７_{ＩＬ−１７Ｆ}と残基１２９_{ＩＬ−１７}との間；および残基１３７_{ＩＬ−１７Ｆ}と残基３３_{ＩＬ−１７}との間（図４Ａの黒太線）］で検出した。加えて、２つの鎖間ジスルフィド結合は、ホモ二量体ポリペプチド鎖ＩＬ−１７［残基１０２と１５２との間、および残基１０７から１５４との間］ならびにＩＬ−１７Ｆ［残基９４と１４４との間；および残基９９と１４６との間］の各々において形成する（図４Ａの明るい黒色線）。アミノ酸は、各前駆体ポリペプチド鎖中の開始メチオニンと関連して番号が付けられている（図４Ａ）。図４Ｂは、トリプシンを用いるＩＬ−１７Ａ／Ｆの消化によって予期される、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆ鎖間のジスルフィド結合を含むＩＬ−１７Ａ／Ｆペプチドフラグメントの図解を示す［それぞれ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１は配列番号７と称し；ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２は配列番号８と称する］。これらのフラグメント中に含まれるアミノ酸は、各鎖の開始メチオニンと関連して、示されかつ番号付けされる。

質量スペクトル分析によって観察されるこれらのフラグメントの計算されたおよその分子量は、図４Ｂにおいて、３４１０．５８および２４２０．０５に示される［それぞれ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１および２］。飛行時間型質量分析のマトリクス支援レーザー脱離／イオン化時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）のペプチドマッピングを実施した（図４Ｃ）。４００ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＮａＯＡＣ緩衝液、ｐＨ５の緩衝液中の５５ｐｍｏｌのＩＬ−１７Ａ／Ｆを、Ｐｒｏｍｅｇａ配列決定グレードのトリプシンを用いて、３７ＥＣにて一晩消化した。飛行時間型質量分析のマトリクス支援レーザー脱離／イオン化時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）は、２’，４’，６’−トリヒドロキシアセトフェノンマトリクスを使用して、陽イオン反射モードにおける遅延抽出を用いて実施した。得られたペプチドマップは、フラグメント番号２の［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４２０．１２ Ｄａおよびフラグメント番号１の３４１０．６０ Ｄａを有するピークを含み、ジスルフィド結合ペプチドと一致した（図４Ｃ）。第２のサンプルアリコートは、ジチオスレイトールを用いるジスルフィド結合の還元、およびヨードアセトアミドを用いるスルフヒドリル基のアルキル化後にｐＨ８で消化した。このサンプルのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルは問題のピークを欠いており、このことは、ジスルフィド結合しているというそれらの割り当てを指示している。非還元サンプルは、液体クロマトグラフィエレクトロスプレーイオン化イオントラップ質量スペクトル分析（ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ）によってさらに特性決定した（図４Ｄ）。イオンクロマトグラムは、（上部から下部まで）全体のイオンクロマトグラム、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２［Ｍ＋２Ｈ］２＋、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１［Ｍ＋２Ｈ］３＋の再構築されたイオンクロマトグラムを表す。両方のヘテロ二量体と一致するピークを観察したのに対して、ホモ二量体ペプチドの予想分子量においては、バックグランドの化学ノイズより上のピークは検出されなかった。従って、このことは、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのホモ二量体の不在を示す。次いで、ジスルフィド連結ヘテロ二量体の組成を、タンデム質量スペクトル分析によって確認した。ｍ／ｚ １２１０．９における二重荷電前駆体の衝突誘起解離はＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号２に対応し、ｍ／ｚ １１３８．０における三重荷電前駆体はＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１に対応する。予測ｂ−およびｙ−イオン系列フラグメントピークは、対応するスペクトルにおいて観察された。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合する抗体についてのファージライブラリースクリーニング
ＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合する抗体を同定するために、合成Ｆａｂ抗体のファージライブラリーをスクリーニングした。個々のＦａｂ抗体配列をコードする３４個の独立したクローンを同定した。これは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆへの結合を媒介可能であった。ヒト抗体配列のファージライブラリーは、以前に記載されたものと同様の様式で（Ｇｅｒｓｔｎｅｒ，Ｒ．Ｂ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３２１（５）：８５１−６２（２００２））調製し、抗原特異的Ｆａｂについてスクリーニングした。手短に述べると、ヒト化モノクローナル抗体４Ｄ５、抗ＨＥＲ２抗体を骨格として使用して、ファージディスプレイされるＦａｂライブラリーを構築した。これらのＦａｂは、一価で、および／またはホモ二量体化可能なロイシンジッパーへの融合によって二価で、ファージ上でディスプレイされる。ライブラリーの多様性を生成するために、本発明者らは、天然の抗体配列のＫａｂａｔデータベースにおいて高度に多様であることも見出された、表面に曝露している重鎖ＣＤＲ残基をランダム化すること、および連続するパッチを形成することを選択する。さらに、本発明者らは、各ＣＤＲ部位において天然の免疫レパートリーを模倣する、アミノ酸多様性を生じるために調整した縮重コドンを用いて、部位特異的変異誘発を使用した。重鎖の最初の２つのＣＤＲ、Ｈ１およびＨ２は、ハーセプチンと同じ長さの限定された多様性を許容されたのに対して、Ｈ３は７〜１９までの範囲の長さを有する高い縮重度を有するように設計されている。最初のライブラリー選択から生成されるすべての抗体は、同一の軽鎖を有する。全長ＩｇＧまたはＦａｂは、ベクターへの重鎖可変ドメインの１段階クローニングによって生成でき、所望のアイソタイプ特異的定常領域配列を提供する。重鎖ライブラリーからのバインダーの親和性をさらに改善するために、第２段階の軽鎖ＣＤＲのランダム化が利用できる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合するＦａｂからの３つのＣＤＲ［Ｈ１−Ｈ３］を含む重鎖の可変ドメインの領域のアミノ酸配列は図６に示す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合可能である個々の抗体重鎖配列をコードする３４個のＦａｂクローンの予想アミノ酸配列の領域のアラインメントを示す。３つの重鎖ＣＤＲ領域は、それぞれ、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３として示され、影を付けている。各クローンについての対応する配列番号は以下の通りである：
それぞれ、クローン番号１＝配列番号９；クローン番号２＝配列番号１０；クローン番号３＝配列番号１１；クローン番号４＝配列番号１２；クローン番号５＝配列番号１３；クローン番号６＝配列番号１４；クローン番号７＝配列番号１５；クローン番号８＝配列番号１６；クローン番号９＝配列番号１７；クローン番号１０＝配列番号１８；クローン番号１１＝配列番号１９；クローン番号１２＝配列番号２０；クローン番号１３＝配列番号２１；クローン番号１４＝配列番号２２；クローン番号１５＝配列番号２３；クローン番号１６＝配列番号２４；クローン番号１７＝配列番号２５；クローン番号１８＝配列番号２６；クローン番号１９＝配列番号２７；クローン番号２０＝配列番号２８；クローン番号２１＝配列番号２９；クローン番号２２＝配列番号３０；クローン番号２３＝配列番号３１；クローン番号２４＝配列番号３２；クローン番号２５＝配列番号３３；クローン番号２６＝配列番号３４；クローン番号２７＝配列番号３５；クローン番号２８＝配列番号３６；クローン番号２９＝配列番号３７；クローン番号３０＝配列番号３８；クローン番号３１＝配列番号３９；クローン番号３２＝配列番号４０；クローン番号３３＝配列番号４１；クローン番号３４＝配列番号４２。

加えて、３４個のクローンの各々についての対応するコードＤＮＡ配列は、以下の表７に示される（それぞれ、配列番号４３〜配列番号７６）。

細胞ベースのアッセイ−ＩＬ−１７Ａ／ＦはＩＬ−８およびＩＬ−６の産生を誘導する
上記のＶｙｄａｃ Ｃ４精製段階から単離した画分（図３）を、ＩＬ−１７Ａ／ＦがＩＬ−８の産生を誘導する能力についてアッセイした。画分は、ＴＫ−１０細胞と一緒の２４時間のインキュベーションによって試験した（０．０３３マイクロリットル画分／ｍｌ細胞培養培地）。次いで、馴化培地を収集し、ＩＬ−８およびＩＬ−６の濃度測定を、ＥＬＩＳＡによって各画分に対して実施した。画分３８は、強固な活性を有することが見出された。画分３８のタンパク質濃度は、アミノ酸分析により、０．５３６ｍｇ／ｍｌであることが見出された。ゲル、ブロット、アミノ酸配列、および活性アッセイをこの画分に対して実施した（図３）。または、ＨｉＬｏａｄ Ｓセファロースからの画分３１および画分３２の残りの量をプールし、そして緩衝剤Ａに対して１０ｋＤカットオフメンブレンを使用して８時間透析し、０．２ミクロンフィルタを通過させた。この材料を、緩衝剤Ａで平衡化したＭｏｎｏ Ｓカラムに、１ｍｌ／分の流速でロードし、１００％緩衝剤Ｂまで３段階の濃度勾配（１０カラム体積にわたって０〜３０％ Ｂ、４５カラム体積にわたって３０〜７５％ Ｂ、１０カラム体積にわたって７５〜１００％ Ｂ）を用いて、１ｍｌ／画分で収集しながら溶出した。画分２６〜４３をアッセイし、タンパク質濃度をアミノ酸分析によって決定した。純粋なＩＬ−１７Ａ／Ｆは、画分３１〜３３において、３０〜３５ｋＤの見かけの分子量を有する単一タンパク質として同定した。画分３１、３２、および３３の濃度は、それぞれ、０．２５８、０．３５９、および０．２９１ｍｇ／ｍｌであった。ゲルおよびタンパク質配列分析は、この物質が、Ｃ４カラムによって精製したＩＬ−１７Ａ／Ｆと同一であることを示した。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１７ＦによるＩＬ−８およびＩＬ−６誘導を比較する用量応答曲線は図５に示す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７、およびＩＬ−１７Ｆは、２４時間、示された濃度で、ＴＫ−１０細胞とともにインキュベートした。ＴＫ−１０馴化培地を収集し、ＩＬ−８ ＥＬＩＳＡおよびＩＬ−６ ＥＬＩＳＡによって分析した。

考察
ＩＬ−１７およびＩＬ−１７ＦのｍＲＮＡの同時発現は、ＩＬ−１７に結合可能である特定の抗体およびＩＬ−１７Ｆに結合可能である特定の抗体の両方と結合可能である新規なタンパク質種の分泌をもたらす。この新規なタンパク質種は、本明細書では、インターロイキン−１７Ａ／Ｆ（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）と称する。この種は、ヒト腎臓２９３細胞が、単離しているＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかを発現するように作製される場合には観察されない。トランスフェクトされた細胞からの馴化培地は、図１Ａおよび図１Ｂに示されるように、ＩＬ−１７（レーン１〜５）またはＩＬ−１７Ｆ（レーン６〜１０）を認識可能である抗体を利用して免疫沈殿（ＩＰ）した。次いで、免疫沈殿したタンパク質を、ウェスタンブロット分析によって分離し、ＩＬ−１７（図１Ａ）またはＩＬ−１７Ｆ（図１Ｂ）に対する抗体でブロットした。ＩＬ−１７Ａ／Ｆの検出は、ＩＬ−１７Ｆとの二量体複合体中のＩＬ−１７の存在により、図１Ａのレーン８および図１Ｂのレーン３に示される。この種の分子量は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定されるように、約３０〜３５ｋＤであり、共有結合によって結合された１分子のＩＬ−１７および１分子のＩＬ−１７Ｆから構成される種と一致する。この新規な種（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）の存在は、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかが単離されて発現される場合に観察されるものとは異なる電気泳動の移動度のタンパク質として認識することもできる。このようにして、この新規な種はまた、従来的なタンパク質染色技術などの他のタンパク質検出方法の使用を通して、抗体の使用を伴わずに可視化することもできる。

ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆの同時発現によって生じた新規なタンパク質種の存在はまた、逆相クロマトグラフィを用いて、馴化培地中に存在する分泌タンパク質を分離することによって観察した。ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかを産生する細胞を用いて観察されたパターンとの、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆを同時発現する細胞によって産生された分泌タンパク質から観察されたタンパク質画分の比較は、さらなるタンパク質種の存在を明らかにした。このタンパク質種、ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、カラムクロマトグラフィによって均質にまで精製および単離した（図２および３）。

精製タンパク質は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、約３０〜３５ｋＤの単一バンドとして泳動した（図３Ａ）。しかし、還元条件下では、約１５〜１８ｋＤの見かけの分子量を有する、２つの明確に異なるバンドが明らかにされた（示さず）。従って、ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、共有結合二量体である。新規なタンパク質の組成を評価する独立した手段、Ｎ末端ペプチド配列分析もまた、単離されたＩＬ−１７Ａ／Ｆが、ＩＬ−１７ペプチドおよびＩＬ−１７Ｆペプチドの両方を含むことを明確に示した（図３Ｂ）。検出されたペプチド配列は、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７ＦのＮ末端に含まれる配列を同一である（図３Ｃ）。ウェスタンブロット分析は、この新規なタンパク質種がまた、ＩＬ−１７に結合可能な抗体およびＩＬ−１７Ｆに結合可能な抗体の両方と相互作用可能であることを示した。これらの観察の各々、および新規な単離されたタンパク質種の個々の分子量は、単離されたタンパク質ＩＬ−１７Ａ／Ｆが、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆの共有結合的な会合から構成される新規なタンパク質種であることを示唆する。

ＩＬ−１７Ａ／ＦのＩＬ−１７鎖およびＩＬ−１７Ｆ鎖を連結するジスルフィド結合の存在および位置は、質量スペクトル分析の使用によってさらに特徴付けした。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ内のジスルフィド結合の位置は、図解的な図４Ａにおいて示す。２つの鎖間ジスルフィド結合は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ中のＩＬ−１７鎖およびＩＬ−１７Ｆ鎖を連結する。トリプシンでのＩＬ−１７Ａ／Ｆの消化は、鎖間ジスルフィド結合を含む２つの個々のペプチドフラグメントを生じることが予想される（それぞれ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆジスルフィド結合フラグメント番号１および番号２；配列番号７および８）。これらのペプチドは、それぞれの予想分子量と一緒に図解的に示される（図４Ｂ）。これらのペプチドは、マトリクス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間質量スペクトル測定（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）によって（図４Ｃ）、および液体クロマトグラフィエレクトロスプレーイオン化イオントラップ質量スペクトル分析（ＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ）によって（図４Ｄ）観察した。ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのホモ二量体に対応するペプチドピークは検出されなかった。このことは、精製されたＩＬ−１７Ａ／Ｆが、ＩＬ−１７鎖およびＩＬ−１７Ｆ鎖の共有結合性ヘテロ二量体から構成され、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかの検出可能なレベルのホモ二量体を含まなかったことを示す。

加えて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合する抗体は、合成Ｆａｂ抗体のファージライブラリーをスクリーニングすることによって同定された。個々のＦａｂ抗体配列をコードする３４個の独立したコロニーを同定した。これは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆへの結合を媒介可能であった。ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合するＦａｂからの３個のＣＤＲ［Ｈ１〜Ｈ３］を含む重鎖の可変ドメインの領域のアミノ酸配列を図６に示す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合可能である個々の抗体重鎖配列をコードする３４個のＦａｂクローンの予想アミノ酸配列の領域のアラインメントを示す。３個の重鎖ＣＤＲ領域は、それぞれ、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３と示され、黄色で強調している。３４個のクローンの各々についての対応するアミノ酸配列は、配列番号９〜４２として同定される。加えて、同定された３４個のクローンの各々についての対応するコードＤＮＡ配列は、以下の表７に示す（それぞれ、配列番号４３〜７６）。従って、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの新規なヘテロ二量体複合体に選択的に結合する特異的抗体が同定され、これは、この新規なサイトカインの活性を調節するように働き得る。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、ＴＫ−１０ヒト腎臓細胞株を使用して、炎症誘発性応答を刺激する能力について分析した（図５）。この細胞株は、ＩＬ−８の産生によって、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆの両方に応答する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆはまた、この細胞株において、ＩＬ−８産生を強固に誘導した（図５Ａ）。ますます、ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれかのそれとは異なる独特な効力を有することが観察された。活性の違いは、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆで異なり、各々の場合で、およそ１オーダーの違いであった。このアッセイにおいて、ＩＬ−１７ＦよりもＩＬ−１７Ａ／Ｆの活性が実質的により大きいことは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆが、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子産物から生じるサイトカイン活性の決定的な成分を含み得ることを示唆する。この独特な効力は、分子がインビボで明瞭な作用の範囲を有することを可能にし得る。ＩＬ−１７Ａ／Ｆはまた、この細胞株からＩＬ−６の産生を誘導した（図５Ｂ）。加えて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、インビボで反応速度論および受容体サブユニットの利用を変化させ得るその新規なヘテロ二量体組成の結果として、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｆのいずれにも存在しないさらなる特徴を有している可能性があり、結果として独特の生物学的影響をもたらす。

（実施例２）
活性化ヒトＴ細胞において産生された新規なＩＬ−１７サイトカインの同定
新規なヒトＩＬ−１７サイトカイン（本明細書ではヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆと同定する）は、活性化ヒトＴリンパ球細胞において天然に産生されるとして、本明細書で最初に記載される。ヒトＴリンパ球細胞の単離および活性化を実施して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ産生を、以下に実証されるように、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＥＬＩＳＡによって検出し、定量的に測定した。

ヒトＴ細胞の単離および活性化
正常健常ドナーから新鮮に取り出したヘパリン処理した（０．５ｍｌ／５０ｃｃ）血液を生理食塩水で１：１に希釈し、次いで、ＬＳＭリンパ球（Ｌｙｍｐｈｃｙｔｅ）分離培地（ＩＣＮ）に重層し、製造業者（ＩＣＮ）が推奨するように遠心分離した。回収した単核リンパ球は、単球を取り除くために、１時間、３７℃で、組織培養フラスコ中の完全ＲＰＭＩ（ＲＰＭＩ、１０％ＦＣＳ、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ））にプレートした。培養上清を遠心分離して、残りの細胞をペレット化した。次いで、ヒトＴリンパ球を、ＣＤ４＋Ｔ細胞単離キット（ＭＡＣＳ）を使用してネガティブ選択によって単離した。単離したＴリンパ球を活性化するために、組織培養フラスコを、ＰＢＳ中の各５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）および抗ＣＤ２８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で、一晩４℃でコートした。コート培地を除去後、単離したＴリンパ球を、完全ＲＰＭＩ中に、ミリリットル培地あたり２００万細胞のおよその密度でプレートした。培地のサンプルを、プレーティング後の様々な時点で収集し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１７Ａ／Ｆをアッセイした。非活性化対照上清は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８でコートしていないフラスコからの細胞上清から収集した。

抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８活性化ヒトＴ細胞中でのヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆ産生のＥＬＩＳＡ測定
ヒトＩＬ−１７Ａ／ＦレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。マウス抗ヒトＩＬ−１７をコート緩衝剤（０．０５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ９．６）で希釈し、１２〜１５時間、２〜８℃で９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）上にコートした。後のすべての段階を室温で実施した。非特異的結合を、ウェルを空にすること、および遮断緩衝剤（ＰＢＳ、０．５％ ＢＳＡ、１０ｐｐｍ Ｐｒｏｃｌｉｎ３００）を加えることによって遮断した。１時間のインキュベーション後、ウェルを洗浄緩衝剤（ＰＢＳ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、１０ｐｐｍ Ｐｒｏｃｌｉｎ３００）で洗浄した。次いで、アッセイ緩衝剤（ＰＢＳ、０．５％ ＢＳＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、１０ｐｐｍ Ｐｒｏｃｌｉｎ３００）中で希釈したヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆ参照標準およびサンプルを加えた。２時間のインキュベーション後、ウェルを洗浄緩衝剤で洗浄した。アッセイ緩衝剤中で希釈したビオチン化マウス抗ヒトＩＬ−１７Ｆを加え、１時間インキュベートさせた。洗浄緩衝剤でプレートを洗浄後、アッセイ緩衝剤中で希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を加え、１時間インキュベートさせた。洗浄緩衝剤でプレートを洗浄後、基質溶液、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）−ペルオキシダーゼ（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加えた。発色は、２Ｎ硫酸を加えることによって停止した。次いで、プレートを、マイクロプレートリーダ（ＳＬＴ）で、４５０ｎｍにおいて、５４０ｎｍの減算ブランクを用いて読み取った。４パラメータの曲線適合プログラムを使用して標準曲線を生成し、サンプル濃度を曲線の直線部分からの外挿によって導き出した。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆについてのアッセイ特異性を例証するために、ＥＬＩＳＡにおける対照として含めた（図１２）。

結果：
ＩＬ−１７Ａ／Ｆ産生のＥＬＩＳＡ測定の結果を図１１に示す。これらの研究は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの産生が検出されなかった非活性化ヒトＴ細胞と比較して、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８活性化ヒトＴリンパ球細胞からの新規なサイトカインＩＬ−１７Ａ／Ｆの産生を実証する。これらの結果は、ヒトＴリンパ球の活性化に応答して産生および放出される新規なサイトカインの天然の発生を初めて示す。加えて，ＥＬＩＳＡアッセイの特異性は、並行してアッセイする場合、３つのサンプル（番号３１〜番号３３）におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆのほぼ等価な量を観察することによって実証された。無視できる量のＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆが、このＩＬ−１７Ａ／Ｆ特異的ＥＬＩＳＡにおいて検出された（図１２）。

実施例１および２の両方において本明細書に記載された研究は、組換えヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆが明確に新規なサイトカインであり、タンパク質構造および細胞ベースの活性アッセイの両方においてヒトＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆから区別可能であることを確立する。標準としての精製組換えヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆの使用を通して、ヒトＩＬ−１７ＡＦ特異的ＥＬＩＳＡを開発した（図１１に示す）。この特異的ＥＬＩＳＡの使用を通して、ヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆの誘導された発現が検出され、ＩＬ−１７Ａ／Ｆが培養中の活性化ヒトＴ細胞から天然に産生されることを確認した。従って、ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、明確に新規なサイトカインであり、単離されたヒトＴ細胞の天然産物として検出可能であり、その組換え型は、タンパク質構造および細胞ベースのアッセイの両方において、関連するサイトカインとは異なっていて、区別可能であると特徴付けられた。

この新規なサイトカインは、インビボでＩＬ−１７の活性を調節でき、ＩＬ−１７または他の関連するサイトカインの結合部位への競合阻害剤として作用する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆはまた、それ自体の結合部位および／または他の関連するサイトカインの結合部位のダウンレギュレーションによって、他の関連するサイトカインの活性を調節できる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、それ自体のシグナル伝達活性または他の関連するサイトカインのそれに影響を与えるように作用する細胞内アダプタまたはシグナル伝達分子を通して活性を示し得る。ＩＬ−１７Ａ／Ｆは、細胞の表面で、または細胞内区画内で見出される受容体および補助受容体の対合に影響を与える能力を有する。

従って、これらの研究は、以前に免疫学的に活性であった可能性がある特定の抗原に応答するように免疫系を追加免疫できる、新規な免疫刺激因子（すなわち、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ）を提供および同定する。このようにして、新規に同定された免疫刺激因子は、重要な臨床的応用を有する。ＩＬ−１２などの他の公知の免疫刺激因子が同定されている［Ｇｕｂｌｅｒら、ＰＮＡＳ ８８，４１４３（１９９１）を参照のこと］。最近の癌ワクチン試験において、ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏおよび Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ （Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）の研究者達は、黒色腫の治療のために、ＩＬ−１２の免疫刺激活性に頼っている［Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２１（１２）．２３４２−４８（２００３）］。彼らは、黒色腫細胞の１つ以上のマーカーを有する循環白血球細胞を抽出し、単離し、そして患者に戻した。正常患者は、彼または彼女自身のヒト抗原に対して免疫応答を有さない。次いで、患者は、樹状細胞によって同時刺激されたＴ細胞の増殖を誘導可能である免疫刺激因子である、ＩＬ−１２の異なる用量で治療された。ＩＬ−１２の免疫刺激効果によって、治療は、以前の研究との比較において、優れた結果を提供し、ここで、患者自身の樹状細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から調製され、抗原で処理され、次いでインビトロで培養されて、抗癌応答を刺激するために患者に戻された［Ｔｈｕｒｎｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（１１），１６６９−７８（１９９９）］。同様に、この新規なＩＬ−１７Ａ／Ｆサイトカインまたはそのアゴニストは、それゆえに、免疫刺激因子としての実用的な有用性を見出す。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ活性を阻害する分子（アンタゴニスト）は、免疫応答の阻害が所望される場合に実用的な有用性を見出すことが期待される一方で、自己免疫疾患などの免疫応答の阻害が所望される。

従って、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの免疫学的活性を模倣するか（アゴニスト抗体）または阻害するか（アンタゴニスト抗体）のいずれかであるこの新規なサイトカインに対する抗体は、治療品質を有する。この新規なサイトカインの活性を阻害するように作用する小分子もまた、潜在的な治療用途を有する。

（実施例３）
ハイブリダイゼーションプローブとしてのＩＬ−１７Ａ／Ｆの使用
以下の方法は、ハイブリダイゼーションプローブとしてのＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードするヌクレオチド配列の使用を説明する。

本明細書に開示される全長または成熟ＩＬ−１７Ａ／Ｆのコード配列を含むＤＮＡは、ヒト組織ｃＤＮＡライブラリーまたはヒト組織ゲノムライブラリーにおいて相同ＤＮＡ（例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの天然に存在する変異体をコードするもの）をスクリーニングするためのプローブとして利用される。

いずれかのライブラリーＤＮＡを含むフィルタのハイブリダイゼーションおよび洗浄を、以下の高ストリンジェンシー条件下で実施する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆ由来のプローブのフィルタへのハイブリダイゼーションを、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、２×デンハート液、および１０％硫酸デキストランの溶液中で、４２℃で２０時間、実施する。フィルタの洗浄を、０．１×ＳＳＣおよび０．１％ ＳＤＳの水溶液中で、４２℃で実施する。

次いで、全長ネイティブ配列ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡとの所望の配列同一性を有するＤＮＡを、当該分野において公知である標準的な技術を使用して同定することができる。

（実施例４）
大腸菌におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現
本実施例は、大腸菌における組換え発現によってＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの非グリコシル形態の調製を例証する。

ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、選択されたＰＣＲプライマーを使用して最初に増幅する。プライマーは、選択された発現ベクター上の制限酵素部位に対応する制限酵素を含んでいる必要がある。種々の発現ベクターを利用してよい。適切なベクターの例はｐＢＲ３２２であり（大腸菌から誘導される；Ｂｏｌｉｖａｒら、Ｇｅｎｅ，２：９５（１９７７）を参照のこと）、これは、アンピシリンおよびテトラサイクリン耐性遺伝子を含む。ベクターを、制限酵素で消化し、脱リン酸化する。次いで、ＰＣＲ増幅配列をベクターにライゲートする。ベクターは、好ましくは、抗生物質耐性遺伝子、ｔｒｐプロモータ、ポリＨｉｓリーダー（最初の６個のＳＴＩＩコドン、ポリＨｉｓ配列、およびエンテロキナーゼ切断部位を含む）、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドコード領域、ラムダ転写ターミネータ、およびａｒｇＵ遺伝子を含む。

次いで、ライゲーション混合物を使用して、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出に記載される方法を使用して大腸菌株を形質転換する。形質転換体を、ＬＢプレート上で増殖するそれらの能力によって同定し、次いで、抗生物質耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離でき、制限分析およびＤＮＡ配列決定によって確認できる。

選択されたクローンを、抗生物質を補充したＬＢブロスなどの液体培養培地で一晩増殖させることができる。一晩培養物を使用して、次に、より大スケールの培養に接種することができる。次いで、細胞は、発現プロモータが作動している間、所望の光学密度まで増殖させる。

さらに数時間細胞を培養した後、細胞を遠心分離によって収集することができる。遠心分離によって得られた細胞ペレットは、当該分野において公知の種々の薬剤を使用して可溶化でき、次いで、可溶化されたＩＬ−１７Ａ／Ｆタンパク質は、タンパク質の強固な結合を可能にする条件下で、金属キレートカラムを使用して精製することができる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを、以下の手順を使用して、大腸菌中で、ポリ−Ｈｉｓタグ化形態で発現させてよい。ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡは、最初に、選択されたＰＣＲプライマーを使用して増幅する。プライマーは、選択された発現ベクター上の制限酵素部位に対応する制限酵素部位、ならびに、効率的かつ信頼できる翻訳開始、金属キレートカラム上での迅速な精製、およびエンテロキナーゼを用いるタンパク質分解的除去を提供する他の有用な配列を含む。次いで、ＰＣＲ増幅したポリ−Ｈｉｓタグ化配列を発現ベクターにライゲートし、これを使用して、５２株（Ｗ３１１０ ｆｕｈＡ（ｔｏｎＡ） ｌｏｎ ｇａｌＥ ｒｐｏＨｔｓ（ｈｔｐＲｔｓ）ｃｌｐＰ（ｌａｃＩｑ）に基づく大腸菌宿主を形質転換する。形質転換体を、最初に、５０ｍｇ／ｍｌ カルベニシリンを含むＬＢ中３０ＥＣで、Ｏ．Ｄ．６００が３〜５に達するまで振盪しながら増殖させる。次いで、培養物を、ＣＲＡＰ培地（以下を混合することによって調製：３．５７ｇ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４、０．７１ｇクエン酸ナトリウム・２Ｈ２Ｏ、１．０７ｇ ＫＣｌ、５．３６ｇ酵母抽出物、水５００ｍＬ中５．３６ｇのＳｈｅｆｆｉｅｌｄ ｈｙｃａｓｅ ＳＦ、ならびに１１０ｍＭ ＭＰＯＳ、ｐＨ７．３、０．５５％（ｗ／ｖ）グルコースおよび７ｍＭ ＭｇＳＯ_４）中で５０〜１００倍に希釈し、そして約２０〜３０時間、３０ＥＣで振盪しながら増殖させる。サンプルを取り出してＳＤＳ−ＰＡＧＥによって発現を確認し、バルク培養物を遠心分離して細胞をペレット化する。細胞ペレットを、精製および再フォールディングまで凍結させる。

０．５〜１Ｌの発酵からの大腸菌ペースト（６〜１０ｇペレット）を、１０倍量の７Ｍグアニジン、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８緩衝液中に再懸濁する。固体亜硫酸ナトリウムおよびテトラチオン酸ナトリウムを加えて、それぞれ０．１Ｍおよび０．０２Ｍの最終濃度にし、この溶液を４ＥＣで一晩攪拌する。この工程は、変性タンパク質を生じ、すべてのシステイン残基をスルフィト化によってブロックする。この溶液を、Ｂｅｃｋｍａｎ超遠心分離機において４０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する。上清を３〜５倍量の金属キレートカラム緩衝剤（６Ｍグアニジン、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．４）で希釈し、０．２２ミクロンフィルタを通して濾過して清澄化する。清澄化した抽出物を、金属キレートカラム緩衝剤で平衡化した５ｍｌ Ｑｉａｇｅｎ Ｎｉ−ＮＴＡ金属キレートカラムにロードする。カラムを、５０ｍＭイミダゾール（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｕｔｒｏｌグレード）、ｐＨ７．４を含むさらなる緩衝剤で洗浄する。タンパク質を、２５０ｍＭイミダゾールを含む緩衝剤で溶出する。所望のタンパク質を含む画分をプールし、４ＥＣで保存する。タンパク質濃度は、そのアミノ酸配列に基づく計算した吸光係数を使用して、２８０ｎｍにおけるその吸収によって見積もる。

タンパク質を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．６、０．３Ｍ ＮａＣｌ、２．５Ｍ尿素、５ｍＭシステイン、２０ｍＭグリシン、および１ｍＭ ＥＤＴＡからなる、新鮮に調製した再フォールディング緩衝剤でサンプルをゆっくりと希釈することによって再フォールディングする。再フォールディングの体積は、最終タンパク質濃度が５０〜１００マイクログラム／ｍｌであるように選択する。再フォールディング溶液を４ＥＣで１２〜３６時間、穏やかに攪拌する。再フォールディング反応を、０．４％の最終濃度のＴＦＡ（約３のｐＨ）の添加によってクエンチする。タンパク質のさらなる精製の前に、溶液を、０．２２ミクロンフィルタを介して濾過し、アセトニトリルを２〜１０％最終濃度で加える。再フォールディングしたタンパク質を、Ｐｏｒｏｓ Ｒ１／Ｈ逆相カラム上で、０．１％
ＴＦＡの移動相緩衝剤を１０〜８０％のアセトニトリルの濃度勾配とともに使用して、クロマトグラフィを行う。Ａ２８０吸収を有する画分のアリコートをＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で分析し、均質に再フォールディングしたタンパク質を含む画分をプールする。一般的に、正しく再フォールディングした大部分のタンパク質の種を最低濃度のアセトニトリルで溶出する。なぜなら、これらの種は、逆相樹脂との相互作用から保護された、それらの疎水性内部構造を伴って最もコンパクトであるからである。凝集した種は、通常、より高いアセトニトリル濃度で溶出する。所望の形態から、誤ってフォールディングした形態のタンパク質を分けることに加えて、逆相段階は、サンプルからエンドトキシンも除去する。

所望のフォールディングしたＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む画分をプールし、溶液に向けられた穏やかな窒素流を使用してアセトニトリルを除去する。タンパク質は、透析によって、または製剤化緩衝剤で平衡化して濾過滅菌したＧ２５ Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）樹脂を使用するゲル濾過によって、０．１４Ｍ塩化ナトリウムおよび４％マンニトールを含む２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ６．８中に製剤化する。

（実施例５）
哺乳動物細胞におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現
本実施例は、哺乳動物細胞中での組換え発現によるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの潜在的なグリコシル化形態の調製を例証する。

ベクター、ｐＲＫ５（１９８９年３月１５日に公開された、ＥＰ３０７，２４７を参照のこと）を発現ベクターとして利用する。選択的に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡを、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出において記載されているライゲーション方法を使用して、選択された制限酵素でｐＲＫ５にライゲートし、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡの挿入を可能にする。得られるベクターをｐＲＫ５−ＩＬ−１７Ａ／Ｆと呼ぶ。

１つの実施形態において、選択された宿主細胞は、２９３細胞であり得る。ヒト２９３細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ １５７３）は、ウシ胎仔血清、ならびに選択的に、栄養成分および／または抗生物質を補充したＤＭＥＭなどの培地中で、組織培養プレート中でコンフルエンスまで増殖させる。約１０μｇ ｐＲＫ５−ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡを、ＶＡ ＲＮＡ遺伝子をコードする１μｇのＤＮＡと混合し［Ｔｈｉｍｍａｐｐａｙａら、Ｃｅｌｌ，３１：５４３ １９８２）］、５００μｌの１ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．１ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．２２７Ｍ ＣａＣｌ_２に溶解する。この混合物に、５００μｌの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３５）、２８０ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＮａＰＯ_４を滴加し、２５℃にて１０分間で沈殿を形成させる。沈殿を２９３細胞に懸濁および添加し、３７℃で約４時間静置する。培養培地を吸引して除き、２ｍｌのＰＢＳ中２０％グリセロールを３０秒間で加える。次いで、２９３細胞を無血清培地で洗浄し、新鮮な培地を加え、細胞を約５日間インキュベートする。

トランスフェクションの約２４時間後、培養培地を除去し、培養培地（単独）または２００μＣｉ／ｍｌ ^３５Ｓ−システインおよび２００μＣｉ／ｍｌ ^３５Ｓ−メチオニンを含む培養培地で置き換える。１２時間のインキュベーション後、馴化培地を収集し、スピンフィルタ上で濃縮し、１５％ ＳＤＳゲルにロードする。処理されたゲルを乾燥させ、そして選択された期間の間フィルムに曝露して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在を示してもよい。トランスフェクト細胞を含む培養物は、さらなるインキュベーションを受けてもよく（無血清培地中で）、培地を選択されたバイオアッセイで試験する。

代替的な技術において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを、Ｓｏｍｐａｒｙｒａｃら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１２：７５７５（１９８１）によって記載される硫酸デキストラン法を使用して、２９３細胞に一過性に導入してもよい。２９３細胞をスピナーフラスコ中で最大密度まで増殖させ、７００μｇ ｐＲＫ５−ＩＬ−１７Ａ／Ｆ ＤＮＡを加える。細胞を、最初に遠心分離によってスピナーフラスコから濃縮し、そしてＰＢＳで洗浄する。ＤＮＡ−デキストラン沈殿を、４時間の間、細胞ペレット上でインキュベートする。細胞を２０％グリセロールで９０秒間処理し、組織培養培地で洗浄し、そして組織培養培地、５μｇ／ｍｌウシインスリンおよび０．１μｇ／ｍｌウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再導入する。約４日後、馴化培地を遠心分離し、濾過して、細胞および細片を除去する。次いで、発現したＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含むサンプルを濃縮し、任意の選択された方法、例えば、透析および／またはカラムクロマトグラフィによって精製することができる。

別の実施形態において、ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをＣＨＯ細胞中で発現することができる。ｐＲＫ５−ＩＬ−１７Ａ／Ｆを、ＣａＰＯ_４またはＤＥＡＥ−デキストランなどの公知の試薬を使用してＣＨＯ細胞にトランスフェクトすることができる。上記のように、細胞培養物をインキュベートでき、培地を、培養培地（単独）または^３５Ｓ−メチオニンなどの放射性標識を含む培地で置き換える。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの存在を決定した後で、培養培地を無血清培地で置き換えてもよい。好ましくは、培養物を約６日間インキュベートし、次いで、馴化培地を収集する。次いで、発現したＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む培地を濃縮し、任意の選択された方法によって精製することができる。

エピトープ−タグ化ＩＬ−１７Ａ／Ｆもまた、種種ＣＨＯ細胞中で発現させてもよい。ＩＬ−１７Ａ／ＦをｐＲＫ５からサブクローニングしてもよい。このサブクローン挿入物はＰＣＲに供され、ポリ−Ｈｉｓタグなどの選択されたエピトープタグと、インフレームで、バキュロウイルス発現ベクターに融合できる。次いで、ポリ−Ｈｉｓタグ化ＩＬ−１７Ａ／Ｆ挿入物を、安定なクローンの選択のためのＤＨＦＲなどの選択マーカーを含むＳＶ４０駆動ベクター内にサブクローニングできる。最後に、ＣＨＯ細胞は、ＳＶ４０駆動ベクターでトランスフェクトできる。発現を確認するために、上記のように、標識を実施してもよい。次いで、発現したポリ−Ｈｉｓタグ化ＩＬ−１７Ａ／Ｆを含む培養培地を、任意の選択された方法によって、例えば、Ｎｉ^２＋−キレートアフィニティクロマトグラフィによって濃縮および精製できる。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを、一過性発現手順によってＣＨＯおよび／もしくはＣＯＳ細胞中で、または別の安定な発現手順によってＣＨＯ細胞中で発現してもよい。

ＣＨＯ細胞中での安定な発現は、以下の手順を使用して実施する。タンパク質をＩｇＧ構築物（イムノアドヘシン）として発現し、ここで、それぞれのタンパク質の安定型（例えば、細胞外ドメイン）のコード配列は、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ２ドメインを含むＩｇＧ定常領域配列に融合されているか、そして／またはポリ−Ｈｉｓタグ化形態である。

ＰＣＲ増幅後、それぞれのＤＮＡを、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３．１６部，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９７）に記載される標準的な技術を使用して、ＣＨＯ発現ベクターにサブクローニングする。ＣＨＯ発現ベクターを、ｃＤＮＡの便利なシャトリングを可能にするために、目的のＤＮＡの５’および３’の適合性制限部位を有するように構築する。ＣＨＯ細胞における発現において使用されるベクターは、Ｌｕｃａｓら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２４：９（１７７４−１７７９（１９９６）において記載されるようなものであり、目的のｃＤＮＡおよびジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）の発現を駆動するために、ＳＶ４０初期プロモータ／エンハンサを使用する。ＤＨＦＲ発現は、トランスフェクション後のプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。

１２マイクログラムの所望のプラスミドＤＮＡを、市販のトランスフェクション試薬、Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（登録商標）（Ｑｉａｇｅｎ）、Ｄｏｓｐｅｒ（登録商標）またはＦｕｇｅｎｅ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を使用して、約１００万個のＣＨＯ細胞に導入する。細胞は、Ｌｕｃａｓら、前出に記載されるように増殖させる。約３×１０^７個の細胞を、以下に記載されるさらなる増殖および産生のためにアンプル中で凍結させる。

プラスミドＤＮＡを含むアンプルを水浴中に配置して解凍し、そしてボルテックスによって混合する。この内容物を、１０ｍＬの培地を含む遠心分離管にピペッティングし、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離する。上清を吸引し、細胞を１０ｍＬの選択培地（５％ ０．２μｍ 透析濾過したウシ胎仔血清を伴う、０．２μｍ濾過ＰＳ２０）に再懸濁する。次いで、細胞を、９０ｍＬの選択培地を含む１００ｍＬスピナー内にアリコートする。１〜２日後、細胞を１５０ｍＬ選択培地で満たした２５０ｍＬスピナーに移し、３７℃でインキュベートする、さらに２〜３日後、２５０ｍＬ、５００ｍＬ、および２０００ｍＬスピナーに、３×１０^５細胞／ｍＬで播種する。細胞培地は、遠心分離および産生培地中での再懸濁によって、新鮮な培地と交換する。任意の適切なＣＨＯ培地を利用してもよいが、１９９２年６月１６日に発行された米国特許第５，１２２，４６９号に記載されている産生培地を実際に使用してもよい。３Ｌ産生スピナーに、１．２×１０^６細胞／ｍＬで播種する。０日目に、細胞数、ｐＨを決定する。１日目に、スピナーをサンプリングし、濾過空気の散布を開始する。２日目に、スピナーをサンプリングし、温度を３３℃にシフトさせ、そして３０ｍＬの５００ｇ／Ｌ グルコースおよび０．６ｍＬの１０％消泡剤（例えば、３５％ポリジメチルシロキサンエマルジョン、Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６５
医薬品グレードエマルジョン）を加える。産生を通してｐＨを必要に応じて調整して７．２前後に保つ。１０日後、または生存度が７０％より下に低下したら、細胞培養を遠心分離によって収集し、０．２２μｍフィルタを通して濾過する。濾液を４℃で保存し、または精製のためにすぐにカラムにロードした。

ポリ−Ｈｉｓタグ化構築物については、タンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製する。精製前に、イミダゾールを５ｍＭの濃度まで馴化培地に加える。馴化培地を、４℃にて４〜５ｍｌ／分の流速で、０．３Ｍ ＮａＣｌおよび５ｍＭ イミダゾールを含む２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４緩衝剤で平衡化した６ｍｌ Ｎｉ−ＮＴＡカラムに注入する。ローディング後、カラムをさらなる平衡化緩衝剤で洗浄し、０．２５Ｍイミダゾールを含む平衡化緩衝剤でタンパク質を溶出する。高度に精製されたタンパク質を、続いて、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、０．１４Ｍ ＮａＣｌ、および４％マンニトール、ｐＨ６．８を含む同じ保存緩衝剤中で、２５ｍｌ Ｇ２５ Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カラムを用いて脱塩し、−８０℃で保存する。

イムノアドヘシン（Ｆｃ−含有）構築物は、以下のように馴化培地から精製する。馴化培地を、２０ｍＭ リン酸Ｎａ緩衝剤、ｐＨ６．８で平衡化した５ｍｌプロテインＡカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に注ぐ。ローディング後、カラムを平衡化緩衝剤で広範に洗浄し、その後、１００ｍＭクエン酸、ｐＨ３．５で溶出する。溶出されたタンパク質を、２７５μＬの１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ９を含むチューブ内に１ｍｌ画分を収集することによってすぐに中和させる。次に、この高度に精製されたタンパク質を、ポリ−Ｈｉｓタグ化タンパク質のために、上記のように、保存緩衝剤中で脱塩する。均一性は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲルによって、およびエドマン（Ｅｄｍａｎ）分解によるＮ末端アミノ酸シークエンシングによって評価する。

（実施例６）
酵母におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現
以下の方法は、酵母におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの組換え発現を説明する。

最初に、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモータからのＩＬ−１７Ａ／Ｆの細胞内産生または分泌のために、酵母発現ベクターを構築する。ＩＬ−１７Ａ／ＦポリペプチドをコードするＤＮＡおよびプロモータを、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの細胞内発現を指向するように、選択されたプラスミド中で適切な制限酵素部位内に挿入する。分泌のために、ＩＬ−１７Ａ／ＦをコードするＤＮＡを、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモータをコードするＤＮＡ、ネイティブＩＬ−１７Ａ／Ｆシグナルペプチドもしくは他の哺乳動物シグナルペプチド、または、例えば、酵母アルファ因子もしくはインベルターゼ分泌シグナル／リーダー配列、およびＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現のためのリンカー配列（必要な場合）とともに、選択したプラスミドにクローニングすることができる。

次いで、酵母株ＡＢ１１０などの酵母細胞を上記の発現プラスミドで形質転換でき、そして選択された発酵培地中で培養できる。形質転換された酵母上清は、１０％ トリクロロ酢酸を用いる沈殿、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分離によって分析でき、続いて、クマシーブルー染色を用いるゲルの染色を行う。

組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを、続いて、遠心分離によって発酵培地から酵母細胞を取り出すこと、次いで、選択されたカートリッジフィルタを使用して培地を濃縮することによって、単離および精製することができる。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む濃縮物を、選択されたカラムクロマトグラフィ樹脂を使用してさらに精製してよい。

（実施例７）
バキュロウイルス感染昆虫細胞中でのＩＬ−１７Ａ／Ｆの発現
以下の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞におけるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの組換え発現を説明する。

ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクター中に含まれるエピトープタグの上流に融合させる。このようなエピトープタグには、ポリ−Ｈｉｓタグおよび免疫グロブリンタグ（ＩｇＧのＦｃ領域のような）が含まれる。ｐＶＬ１３９３（Ｎｏｖａｇｅｎ）などの市販のプラスミドから誘導されたプラスミドを含む、種々のプラスミドを利用してもよい。手短に述べると、ＩＬ−１７Ａ／Ｆをコードする配列またはＩＬ−１７Ａ／Ｆのコード配列の所望の部分、例えば、タンパク質が細胞外である場合には膜貫通タンパク質の細胞外部分をコードする配列または成熟タンパク質をコードする配列は、５’領域および３’領域に相補的なプライマーを用いるＰＣＲによって増幅する。５’プライマーは、隣接する（選択された）制限酵素部位を組み込んでもよい。次いで、生成物は、選択された制限酵素で消化し、発現ベクターにサブクローニングする。

組換えバキュロウイルスは、リポフェクチン（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬから市販されている）を使用して、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（「Ｓｆ９」）細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に、上記のプラスミドおよびＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ（商標）ウイルスＤＮＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を同時トランスフェクトすることによって生成する。２８℃で４〜５日間のインキュベーション後、放出されたウイルスを収集し、さらなる増幅のために使用する。ウイルス感染およびタンパク質発現は、Ｏ’Ｒｅｉｌｌｅｙら、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｏｘｆｏｒｄ：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９４）に記載されるように実施する。

次いで、発現されたポリ−Ｈｉｓタグ化ＩＬ−１７Ａ／Ｆを、例えば、Ｎｉ^２＋−キレートアフィニティクロマトグラフィによって、以下のように精製することができる。抽出物は、組換えウイルス感染Ｓｆ９細胞から、Ｒｕｐｅｒｔら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：１７５−１７９（１９９３）によって記載されるように調製する。手短に述べると、Ｓｆ９細胞を、洗浄し、超音波処理緩衝剤（２５ｍＬ Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．９；１２．５ｍＭ
ＭｇＣｌ_２；０．１ｍＭ ＥＤＴＡ；１０％グリセロール；０．１％ ＮＰ−４０；０．４Ｍ ＫＣｌ）中で再懸濁し、そして氷上で２０秒間、２回、超音波処理する。超音波処理物は、遠心分離によって清澄化し、そして上清を、ローディング緩衝剤（５０ｍＭリン酸、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ７．８）中で５０倍希釈し、そして、０．４５μｍフィルタを通す。Ｎｉ^２＋−ＮＴＡアガロースカラム（Ｑｉａｇｅｎから市販されている）を５ｍＬの床容積で調製し、２５ｍＬの水で洗浄し、そして２５ｍＬのローディング緩衝剤で平衡化する。濾過した細胞抽出物を、１分間あたり０．５ｍＬでカラムにロードする。カラムを、ローディング緩衝剤を用いてベースラインＡ_２８０まで洗浄し、その時点で画分収集を開始する。次に、カラムを第２の洗浄緩衝剤（５０ｍＭリン酸；３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ６．０）で洗浄し、これは、非特異的結合タンパク質を溶出する。Ａ_２８０が再度ベースラインに達した後、カラムを第２の洗浄緩衝剤中の０〜５００ｍＭイミダゾール勾配で展開する。１ｍＬ画分を収集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色、またはアルカリホスファターゼに結合体化されたＮｉ^２＋−ＮＴＡ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いるウェスタンブロットによって分析する。溶出されたＨｉｓ_１０−タグ化ＩＬ−１７Ａ／Ｆを含む画分をプールし、ローディング緩衝剤に対して透析する。

または、ＩｇＧタグ化（またはＦｃタグ化）ＩＬ−１７Ａ／Ｆの精製を、例えば、プロテインＡまたはプロテインＧカラムクロマトグラフィを含む公知のクロマトグラフィ技術を使用して実施することができる。

（実施例８）
ＩＬ−１７Ａ／Ｆを結合する抗体の調製
本実施例は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを特異的に結合し得るモノクローナル抗体の調製を例証する。

モノクローナル抗体を産生するための技術は当該分野において公知であり、例えば、例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、前出に記載されている。利用され得る免疫原には、精製ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む融合ポリペプチド、および細胞表面に組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを発現する細胞が含まれる。免疫原の選択は、過度の実験を伴うことなく当業者によって行うことができる。

ＢＡＬＢ／ｃなどのマウスを、完全フロイントアジュバント中で乳化されたＩＬ−１７Ａ／Ｆ免疫原で免疫し、１〜１００マイクログラムの量で皮下注射または腹腔内注射する。または、免疫原をＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）中で乳化し、動物の後肢の裏に注射する。次いで、免疫したマウスを、１０〜１２日後に、選択されたアジュバント中で乳化したさらなる免疫原で追加免疫する。その後、数週間の間、マウスを、さらなる免疫注射で追加免疫してもよい。抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を検出するためのＥＬＩＳＡアッセイにおける試験のために、血清サンプルを後眼窩採血によってマウスから定期的に入手してよい。

適切な抗体力価が検出された後で、抗体について「陽性」である動物に、ＩＬ−１７Ａ／Ｆの最終静脈注射を注入することができる。３〜４日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を収集する。次いで、脾臓細胞を、ＡＴＣＣ，Ｎｏ．ＣＲＬ １５９７から入手可能であるＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１などの選択されるマウスミエローマ細胞株に融合させる（３５％ポリエチレングリコールを使用する）。この融合はハイブリドーマ細胞を生じ、次いで、この細胞を、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン）培地を含む９６ウェル組織培養プレート中にプレートして、非融合細胞、ミエローマハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害することができる。

このハイブリドーマ細胞をＩＬ−１７Ａ／Ｆに対する反応性についてＥＬＩＳＡでスクリーニングする。ＩＬ−１７Ａ／Ｆに対する所望のモノクローナル抗体を分泌する「陽性」ハイブリドーマ細胞の決定は、当業者の範囲内である。

陽性ハイブリドーマ細胞を同系ＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔内注射して、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆモノクローナル抗体を含む腹水を生成することができる。または、ハイブリドーマ細胞を組織培養フラスコまたはローラーボトルにおいて増殖することができる。腹水中に生じたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈殿、続いてゲル排除クロマトグラフィを使用して達成することができる。または、プロテインＡまたはプロテインＧへの抗体の結合に基づくアフィニティクロマトグラフィを利用することができる。

（実施例９）
特異的抗体を使用するＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの精製
ネイティブまたは組換えＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドをタンパク質精製の分野における種々の標準技術によって精製してよい。例えば、プロ−ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、成熟ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、またはプレＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドは、目的のＩＬ−１７Ａ／Ｆに特異的な抗体を使用する免疫アフィニティクロマトグラフィによって精製する。一般的に、免疫アフィニティカラムは、活性化クロマトグラフィ樹脂に抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド抗体を化学カップリングすることによって構築する。

ポリクローナル免疫グロブリンを、硫酸アンモニウムを用いる沈殿、または固定化プロテインＡ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）上での精製のいずれかによって、免疫血清から調製する。同様に、モノクローナル抗体を、硫酸アンモニウム沈殿または固定化プロテインＡ上のクロマトグラフィによってマウス腹水から調製する。部分精製された免疫グロブリンを、ＣｎＢｒ−活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）などのクロマトグラフィ樹脂に共有結合させる。抗体を樹脂にカップリングし、樹脂をブロックし、誘導体樹脂を、製造業者の指示書に従って洗浄する。

このような免疫アフィニティカラムを、可溶形態のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを含む細胞からの画分を調製することによって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの精製において利用する。調製物を、界面活性剤の添加による示差的遠心分離を介して、または当該分野において周知である他の方法によって、全細胞または細胞下画分の可溶化によって誘導する。または、シグナル配列を含む可溶性ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを、細胞が増殖される培地内に有用な量で分泌することができる。

可溶性ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド含有調製物は、免疫アフィニティカラムを通過し、このカラムを、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの優先的な吸収を可能にする条件下で洗浄する（例えば、界面活性剤の存在下での高イオン強度緩衝剤）。次いで、カラムを、抗体／ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド結合を破壊する条件下で溶出し、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを収集する。

（実施例１０）
薬物スクリーニング
本発明は、任意の種々の薬物スクリーニング技術において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはその結合フラグメントを使用することによって、化合物をスクリーニングするのに特に有用である。このような試験において利用されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはフラグメントは、溶液中で遊離状態であり、固体支持体に固定され、細胞表面に保持され、または細胞内に局在化するかいずれかであってもよい。薬物スクリーニングの１つの方法は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはフラグメントを発現する組換え核酸細胞で安定に形質転換される真核生物または原核生物の宿主細胞を利用する。競合結合アッセイにおいて、このような形質転換細胞に対して薬物をスクリーニングする。このような細胞は、生存可能形態または固定形態のいずれにおいても、標準的な結合アッセイに使用できる。例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはフラグメントと、試験される薬剤との間の複合体の形成を測定することができる。または、試験される薬剤によって引き起こされる、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと、その標的細胞または標的受容体との間の複合体形成の減少を試験できる。

従って、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド関連疾患または障害に影響し得る、薬物または任意の他の因子についてスクリーニングする方法を提供する。これらの方法は、当該分野において周知である方法によって、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのフラグメントと、このような薬剤とを接触させる工程、および（ｉ）薬剤とＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドもしくはフラグメントとの間の複合体の存在について、または（ｉｉ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドもしくはフラグメントと細胞との間の複合体の存在についてアッセイする工程を包含する。このような競合結合アッセイにおいて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはフラグメントは、典型的には、標識されている。適切なインキュベーション後、遊離のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはフラグメントは、結合形態で存在するものと区別され、遊離または複合体化されていない標識の量は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに結合するか、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド／細胞複合体と干渉する、特定の薬剤の能力の尺度である。

薬物スクリーニングの別の技術は、ポリペプチドに対する適切な結合親和性を有する化合物についての高スループットスクリーニングを提供し、これは、１９８４年９月１３日に公開されたＷＯ８４／０３５６４において詳細に記載されている。手短に述べると、大量の異なる小ペプチド試験化合物をプラスチックピンまたはいくつかの他の表面などの固体支持体上で合成する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドに適用されるように、ペプチド試験化合物をＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと反応させ、洗浄する。結合したＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを当該分野で周知の方法によって検出する。精製ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを、上述の薬物スクリーニング技術における使用のためにプレートに直接的にコートすることもできる。加えて、非中和抗体を使用して、ペプチドを補足して固体支持体に固定化することができる。

本発明はまた、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを結合可能である中和抗体が、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドまたはそのフラグメントへの結合について、試験化合物と特異的に競合する競合スクリーニングアッセイの使用もまた意図する。この様式において、抗体を使用して、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドと１つ以上の抗原決定基を共有する任意のペプチドの存在を検出することができる。

（実施例１１）
合理的薬物設計
合理的薬物設計の目的は、目的の生物学的に活性なポリペプチド（すなわち、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド）またはそれが相互作用する小分子、例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、または阻害剤の構造的なアナログを産生することである。これらの例のいずれかを使用して、より活性もしくは安定な形態のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドである薬物、またはインビボでＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの機能を増強するかもしくはこれと拮抗する薬物を構築することができる（Ｈｏｄｇｓｏｎ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１９−２１（１９９１）を参照のこと）。

１つのアプローチにおいて、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド−阻害剤複合体の三次元構造は、ｘ線結晶学によって、コンピュータモデリング、または最も典型的には、これらの２つのアプローチの組み合わせによって決定する。ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの形状および電荷の両方を確認して、構造を説明し且つ分子の活性部位を決定する必要がある。頻度は低いものの、ＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドの構造に関する有用な情報は、相同タンパク質の構造に基づくモデリングによって得られる可能性がある。両方の場合において、関連する構造情報を使用して、類似のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチド様分子を設計し、または効率的な阻害剤を同定することができる。合理的薬物設計の有用な例には、ＢｒａｘｔｏｎおよびＷｅｌｌｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３１：７７９６−７８０１（１９９２）によって示される活性もしくは安定性の改善された分子、またはＡｔｈａｕｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１３：７４２−７４６（１９９３）によって示されるネイティブペプチドの阻害剤、アゴニスト、もしくはアンタゴニストとして作用する分子が含まれ得る。

上記のように、機能的アッセイによって選択される、標的特異的抗体を単離すること、次いで、その結晶構造を解析することもまた可能である。このアプローチは、原理的には、続いて行われる薬物設計が基礎を置くことができるファーマコアを生じる。機能的な、薬理学的に活性な抗体に対する抗イディオタイプ抗体（抗ｉｄ）を生成することによって、タンパク質結晶学を完全にバイパスすることが可能である。鏡像の鏡像として、抗ｉｄの結合部位は、もともとの受容体のアナログであることが予想される。次いで、抗ｉｄを使用して、化学的にまたは生物学的に産生されるペプチドのバンクからペプチドを同定および単離することができる。次いで、単離されたペプチドはファーマコアとして働く。

本発明により、十分な量のＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドを利用可能にすることで、Ｘ線結晶学のような分析的研究を実施することができる。加えて、本明細書に提供されるＩＬ−１７Ａ／Ｆポリペプチドアミノ酸配列の知見は、ｘ線結晶学の代わりに、またはそれに加えて、コンピュータモデリング技術を利用することに対する指針を提供する。

（実施例１２）
インビボ疾患モデル
自己免疫疾患の治療的処置として抗ＩＬ−１７Ａ抗体および抗ＩＬ−１７Ｆ抗体を合わせることの効果を、関節リウマチおよび多発性硬化症のついてのマウスモデルにおいて評価した。試験されたマウスモデルには以下が含まれた：コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）を誘導するためにＩＩ型コラーゲンで処理したマウス（関節リウマチ（ＲＡ）のマウスモデル）、または実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘導するためにミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）で処理したマウス（多発性硬化症（ＭＳ）のマウスモデル）。

（１）ＣＩＡ
０日目に、７〜８週齢ＤＢＡ−１Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ；Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）を、１００μｌ完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中の１００μｇウシＩＩ型コラーゲンで免疫した（Ｂａｒｃｋら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，５０：３３７７−３３８６（２００４））。ＣＦＡ中のＩＩ型コラーゲンを左側の尾の基部に皮内注射（ｉ．ｄ．）した。２１日目に、１００μｌの不完全フロイントアジュバント中の１００μｇウシＩＩ型コラーゲンを、尾の左側に皮内注射した。４５日目に、動物を以下の群に分配した：（１）７週間の間、１週間あたり３回皮下で（ＳＣ）１００μｌ生理食塩水中マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４０）、（２）７週間の間、１週間あたり２回皮下で（ＳＣ）１００μｌ生理食塩水中マウスＴＮＦＲＩＩ−Ｆｃ（Ｅｎｂｒｅｌのマウス代理）（ＭｕＴＮＦＩＩ−Ｆｃ）４ｍｇ／ｋｇ＋１００μｌ生理食塩水中メトトレキサート（ＭＴＸ）３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４０）、および（３）７週間の間、１週間あたり３回ＳＣで１００μｌ生理食塩水中ハムスター−マウスキメラ抗ＩＬ−１７Ａ（ＭｕＡｎｔｉ−ＩＬ１７）およびハムスター−マウスキメラ抗ＩＬ−１７Ｆ（ＭｕＡｎｔｉ−ＩＬ−１７Ｆ）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝４０）。

動物は、標準的な関節炎スコア付け法を使用して、３３日目から開始して、毎週２回スコア付けした。スコア付けは、足あたり０〜４で（０は疾患なしを示し、４は全体の足を含む紅斑および浮腫を表す）、動物あたり１６スコアが最大スコアであった。処理群１〜３の動物は、４５日目のスコアにより体重および疾患に基づいてランダム化した。３つの処理群は、等しい数の軽度の疾患を有するマウス（平均スコア０〜３；処理群あたり２２〜２３匹のマウス）、中程度の疾患を有するマウス（平均スコア４〜８；処理群あたり１１〜１３匹のマウス）、および重度の疾患を有するマウス（平均スコア９以上；処理群あたり４〜６匹のマウス）を含むようにバランスを取った。マイクロコンピュータ使用断層撮影（ＭｉｃｒｏＣＴ）（Ｂａｒｃｋら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，５０：３３７７−３３８６（２００４））の関節画像を、研究の最後、８１日目に撮影し、関節皮膚骨体積（Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｒｔｉｃａｌ Ｂｏｎｅ Ｖｏｌｕｍｅ）（ＪＣＢＶ）を計算した。

コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）を誘導するために、ＩＩ型コラーゲンで処理したＤＢＡ−１Ｊマウスにおいて、抗ＩＬ−１７Ａ抗体および抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせ（群３）は、対照ＩｇＧ２ａ単独で処理したマウス（群１）についての８１日目の最終臨床スコアと比較して、８１日目で最終臨床スコアの減少を生じた（ｐ＝０．０２（ダネット検定：Ｈｓｕ，Ｊ．Ｃ．，Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ Ｔｈｅｏｒｙ
ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ （１９９６））。さらに、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）を誘導するために、ＩＩ型コラーゲンで処理したＤＢＡ−１Ｊマウスにおいて、抗ＩＬ−１７Ａ抗体および抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせでの処理は、マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照ｍＡｂで処理したマウスにおける約３．７のＪＣＢＶと比較して、抗ＩＬ−１７Ａおよび抗ＩＬ−１７Ｆ処理群についてはより大きな関節皮膚骨体積、約４．５によって測定されるように、骨損傷からマウスを保護した（ｐ＜０．００１；ダネット検定）。

抗ＩＬ−１７Ａ抗体および抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせが、ＣＩＡを有するマウスにおいて最終臨床疾患スコアを減少し、かつＣＩＡを有するマウスにおいて骨損傷をブロックする能力は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの組み合わせが関節リウマチなどの自己免疫疾患の治療のための標的であり得ることを示唆している。

同様の実験において、抗ＩＬ−１７Ａ抗体単独での処理を研究に加え、第４の群を作製した。結果を図１９および２０に示す。対照は、図に「ブタクサ」として列挙される、アイソタイプが一致した抗ヒトブタクサＩｇＧ２ａ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）であった。各足あたりについての臨床スコアは以下の判断基準を使用して決定した：
０＝紅斑および膨張の証拠なし
１＝足の真ん中（足根）または足首に制限される紅斑および軽度の膨張
２＝足首から足の真ん中まで広がる紅斑および軽度の膨張
３＝足首から中足関節までに広がる紅斑および中程度の膨張
４＝足首、足、および指を含む紅斑および重度の膨張
平均スコア＝４つの足のスコアの合計
１日の臨床スコアの平均＝１日の平均スコアの平均
最終臨床スコア＝研究の最終日の平均スコア。

データは、抗ＩＬ−１７Ａ抗体および抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせが、抗ＩＬ−１７Ａ単独での処理よりも統計学的に有意な様式で、より有効であることを示す。

（２）ＥＡＥ
群あたり１５匹のマウスを有する４つの群のマウスは、以下に記載されるようなミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）で誘導され、加えて、ＣＦＡにおけるＭＯＧ３５−５５ペプチド抗原での誘導後に、各群は、１週間あたり３回、以下の抗体用量を受容した：（１）（群１）マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照ｍＡｂ（抗ＧＰ１２０抗体）、１００μｌ生理食塩水中６ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射（ＩＰ）を介して、（２）（群２）ハムスター−マウスキメラ抗ＩＬ−１７Ａ（ＭｕＡｎｔｉ−ＩＬ１７）ｍＡｂ、１００μｌ生理食塩水中６ｍｇ／ｋｇ、ＩＰを介して、（３）（群３）ハムスター−マウスキメラ抗ＩＬ−１７Ｆ（ＭｕＡｎｔｉ−ＩＬ１７Ｆ）ｍＡｂ、１００μｌ生理食塩水中 ｇ ｍｇ／ｋｇ、ＩＰを介して、ならびに（４）（群４）ハムスター−マウスキメラ抗ＩＬ−１７Ａ（ＭｕＡｎｔｉ−ＩＬ１７）ｍＡｂ、１００μｌ生理食塩水中６ｍｇ／ｋｇ、ＩＰを介して、およびハムスター−マウスキメラ抗ＩＬ−１７Ｆ（ＭｕＡｎｔｉ−ＩＬ１７Ｆ）ｍＡｂ、１００μｌ生理食塩水中６ｍｇ／ｋｇ、ＩＰを介して。

ＭＯＧでの誘導の前日（−１日目）に、上記の抗体用量を初回用量として投与した。ＭＯＧでの誘導の日（０日目）に、１００μｌのＰＢＳおよび１００μｌのＣＦＡ中の２００μｇのＭＯＧ３５−５５ペプチド（Ｌｉｕら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，４（１）：７８−８３（１９９８）；Ｓｕｅｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８６（８）：１２３３−４０（１９９７））を含む２００μｌのエマルジョンで皮内免疫し、これは、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）Ｈ３７Ａ（死滅かつ乾燥している）とともに、ＣＦＡ中２ｍｇ／ｍｌのマイコバクテリウム・ツベルクローシス濃度（マウスあたり２００μｇのマイコバクテリウム・ツベルクローシス）まで混合することによって調製した。マウスに、ＩＰを介して、１００μｌのＰＢＳ中２００ｎｇの百日咳毒素をさらに注射した。

２日目に、ＩＰを介して１００μｌのＰＢＸ中２００ｎｇの百日咳毒素をマウスにさらに注射した。

残りの研究については、１週間あたり３回、上記の抗体用量をマウスに投与した。

１日目に開始し、１週間あたり少なくとも３回、多発性硬化症スコアリング法（以下に説明する）を使用して、臨床疾患についてマウスを評価した。さらに、疾患等級４に達したマウスを毎日評価した（等級４の動物が５日までに等級３に軽減しない場合には、動物は安楽死させた）。なおさらに、脊髄および脳におけるリンパ球を研究の最後に評価した。多発性硬化症スコアリング法を、以下の等級付けシステムを使用して評価した：（１）０等級は疾患の顕性徴候を有さない正常マウスを表す、（２）１等級はだらりとした尾（ｌｉｍｐ ｔａｉｌ）（だらりとした尾は、マウスが取り上げられたときの、尾の完全な弛緩および尾の先端における巻きの不在として説明される）または後肢弱体化（後肢弱体化は、歩行の際にマウスの後肢がワイヤケージの上端を通して落下する客観的な徴候を有する、よたよた歩きとして説明される）を表すが、両方ではない、（３）２等級は、リンプテールおよび後肢弱体化を表す、（４）３等級は部分的な後肢麻痺を表す（部分的な後肢麻痺は、マウスが、後肢を使用して尻のポーズまたは歩行を維持することが不可能であるが、一方または両方の後肢をある程度動かすことがまだできる場合として説明される）、（５）４等級は、完全な後肢麻痺を表す（完全な後肢麻痺は、後肢の完全な動作の喪失であり、マウスはその前肢のみで自身を引きずることとして説明される）そして（６）５等級は、ＥＡＥによる瀕死状態および死亡を表す（人道的な理由により安楽死させる）。

ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＧＧ）−誘導性実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を有するマウスにおいて、抗ＩＬ−１７Ａ抗体および抗ＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせ（群４）は、ｇｐ１２０で処理したマウス（群１）の３４日目の最終臨床スコアと比較した場合に、最終臨床スコアの減少を生じた（ｐ＜０．０１（ダネット検定））。抗ＩＬ−１７Ａ（群２）または抗ＩＬ−１７Ｆ（群３）のいずれかのみでは、臨床スコアの減少において、抗ＩＬ−１７Ａと抗ＩＬ−１７Ｆの両方の組み合わせほどには有効ではなかった。ＭＯＡモデルおよびＣＩＡモデルからの結果は、関節リウマチ（ＲＡ）および多発性硬化症（ＭＳ）などの自己免疫疾患の治療は、ＩＬ−１７Ａ経路およびＩＬ−１７Ｆ経路の両方の遮断の組み合わせが必要であり得ることを示唆する。

ＩＬ−１７Ａ抗体およびＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせが、ＭＯＧ誘導性ＥＡＥを有するマウスにおいて最終臨床疾患スコアを減少する能力は、ＩＬ−１７Ａ抗体およびＩＬ−１７Ｆ抗体の組み合わせが多発性硬化症などの自己免疫疾患の治療の標的であり得ることを示唆する。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを標的とする組み合わせ治療には以下が含まれ得る：二重特異的／交差反応性抗体（実施例１５に記載される、配列相同性または構造相同性に基づいて、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に存在する同一または類似のエピトープを認識する抗体）、二重特異的抗体（ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方を認識するように操作された抗体、例えば、ＩＬ−１７Ａを認識する抗体の一方のアームおよびＩＬ−１７Ｆを認識する同じ抗体の別のアーム、またはＩＬ−１７Ａを認識する抗体の重鎖およびＩＬ−１７Ｆを認識する同じ抗体の軽鎖）、ならびに組み合わせて投与されるＩＬ−１７Ａ抗体＋ＩＬ−１７Ｆ抗体（２つの抗体、１つはＩＬ−１７Ａを認識し、１つはＩＬ−１７Ｆを認識する）。

（実施例１３）
インビトロＴ細胞活性化
Ｔヘルパー系統、Ｔｈ_{ＩＬ−１７}は、Ｔｈ１およびＴｈ２から区別され（米国特許出願番号１０／６９７，５９９号、ＵＳ２００４／０１５６８４９、１０／２９／０３出願を参照のこと）、ＩＬ−２３によって刺激されるＩＬ−１７（Ｈｕｎｔｅｒら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：５２１−５３１（２００５）；Ｈｏｌｓｃｈｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，６：４８９−４９５（２００５））、ならびに他のサイトカイン、例えば、ＩＬ−６およびＴＮＦβ（Ｖｅｌｄｈｏｅｎ Ｍら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２４：１７９−８９（２００６））を産生する。Ｔｈ_{ＩＬ−１７}細胞中のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの産生のレベルを決定するために、Ｔ細胞をＩＬ６およびＴＧＦβで活性化し、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦのレベルをＰＣＲ分析によって定量した。Ｔｈ_{ＩＬ−１７}細胞に関して現れたデータは、このＴ細胞サブセットが組織炎症および自己免疫を誘導可能であり、従って、自己免疫疾患において重要な役割を果たしていることを示唆する（Ｂｅｔｔｅｌｌｉら、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８：３４５−３５０（２００７））。

ＦＡＣＳ精製した未処理のＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ２５−ＣＤ４４ｈｉ（＞９９％純度）Ｔ細胞（未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団）を、αＣＤ３（抗ＣＤ３抗体）でコートしたプレート上で４８時間インキュベートした。サイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−２７、およびＴＧＦβを含む）およびαＣＤ２８（抗ＣＤ２８抗体）を、以下の群に以下のようにして溶液中に加えた：（１）サイトカインなし、（２）ＩＬ−６、（３）ＩＬ−２７、（４）ＩＬ−６＋ＩＬ−２７、（５）ＩＬ−６＋ＴＧＦβまたは（６）ＩＬ−６＋ＴＧＦβ＋ＩＬ−２７。ＩＬ−２３Ｒ、ＩＬ−１７Ａ、およびＩＬ−１７Ｆの発現は、定量的ＰＣＲ分析によって決定し、ｒｐｌ１９に標準化した（ｒｐ１１９とは何か？）。倍数誘導は、刺激前にＦＡＣＳ精製された細胞において測定された発現に対して、発現を標準化することによって計算した。

ＩＬ−６およびＴＧＦβによるインビトロＴ細胞活性化は、処理なし（群１）、ＩＬ−６単独（群２）、ＩＬ−２７単独（群３）、ＩＬ−６＋ＩＬ−２７（群４）、およびＩＬ−６＋ＴＧＦβ＋およびＩＬ−２７（群６）を用いる活性化と比較した場合に、ＩＬ−１７Ａ（約１８，０００倍の誘導）およびＩＬ−１７Ｆ（約３００，０００倍の誘導）（群５）の誘導の増加を生じた（図１３）。

ＩＬ−６およびＴＧＦβがＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方の産生を誘導するという結果は、実施例１２からのインビボの結果と組み合わせて、Ｔｈ_{ＩＬ−１７}細胞の機能を遮断することによる関節リウマチおよび多発性硬化症などの自己免疫疾患の有効な治療には、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方の阻害が含まれ得ることを示唆する。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを標的とする組み合わせ治療には以下が含まれ得る：二重特異的／交差反応性抗体（実施例１５に記載される、配列相同性または構造相同性に基づいてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に存在する同一または類似のエピトープを認識する抗体）、二重特異的抗体（ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方を認識するように操作された抗体、例えば、ＩＬ−１７Ａを認識する抗体の一方のアームおよびＩＬ−１７Ｆを認識する同じ抗体の別のアーム、またはＩＬ−１７Ａを認識する抗体の重鎖およびＩＬ−１７Ｆを認識する同じ抗体の軽鎖）、ならびに組み合わせて投与されるＩＬ−１７Ａ抗体＋ＩＬ−１７Ｆ抗体（２つの抗体、１つはＩＬ−１７Ａを認識し、１つはＩＬ−１７Ｆを認識する）。

（実施例１４）
受容体／リガンド相互作用の同定−受容体／リガンド相互作用の同定のためのＰＲＯポリペプチドのスクリーニングアッセイの概観
このアッセイにおいて、種々のＰＲＯポリペプチドを、受容体／リガンド相互作用の同定の目的のために、潜在的な受容体またはリガンド分子のパネルに結合する能力について試験する。公知の受容体のリガンド、公知のリガンドの受容体、または新規な受容体／リガンド対の同定は、種々の指標のために有用であり、これには、例えば、以下が含まれる：受容体またはリガンドを発現することが公知である細胞に生物活性分子（リガンドまたは受容体に連結されている）を標的化すること；リガンドまたは受容体が含まれていることが疑われている組成物中でリガンドまたは受容体の存在を検出するための試薬としての受容体またはリガンドの使用、ここで、組成物は、リガンドまたは受容体を発現することが疑われている細胞を含み得る；受容体またはリガンドを発現するか、またはこれに応答することが公知である細胞の増殖または別の生物学的活性もしくは免疫学的活性を調節すること；受容体もしくはリガンドを発現する細胞の、またはこれに対する免疫応答を調節すること；受容体またはリガンドを発現する細胞の増殖または生物学的活性もしくは免疫学的活性を調節する、受容体またはリガンドに対するアゴニスト、アンタゴニスト、および／または抗体の調製を可能にすること；ならびに当業者に容易に明らかである種々の他の指標。

一般的に、アッセイは以下のように実施される。受容体のリガンドであると疑われている本発明のＰＲＯポリペプチドは、ヒトＩｇＧのＦｃドメインを含む融合タンパク質（イムノアドヘシン）として発現される。受容体／リガンド結合は、候補ＰＲＯポリペプチド受容体を発現する細胞（例えば、Ｃｏｓ細胞）とイムノアドヘシンポリペプチドとの相互作用を可能にすること、ならびにＦｃ融合ドメインに指向される蛍光試薬を用いる結合イムノアドヘシンの可視化、および顕微鏡による検査によって検出される。候補受容体を発現する細胞を、受容体分子として機能し得るＰＲＯポリペプチドをコードするｃＤＮＡ発現ベクターのライブラリーの所定のサブセットの一過性トランスフェクションによって、並行して産生する。次いで、細胞を、受容体結合の可能性について試験されるＰＲＯポリペプチドイムノアドヘシンの存在下で、１時間インキュベートする。次いで、細胞を洗浄し、パラホルムアルデヒドで固定する。次いで、細胞を、ＰＲＯポリペプチドイムノアドヘシンのＦｃ部分に指向する蛍光結合体化抗体（例えば、ＦＩＴＣ結合体化ヤギ抗ヒトＦｃ抗体）とともにインキュベートする。次いで、細胞を再度洗浄し、顕微鏡により調べる。ポジティブな相互作用は、特定のＰＲＯポリペプチド受容体または受容体のプールをコードするｃＤＮＡでトランスフェクトした細胞の蛍光標識の存在、および他のｃＤＮＡまたはｃＤＮＡのプールでトランスフェクトした同様に調製した細胞の同様の蛍光標識の不在によって判断する。ｃＤＮＡ発現ベクターの所定のプールが、ＰＲＯポリペプチドイムノアドヘシンとの相互作用についてポジティブであると判断される場合、このプールを含む個々のｃＤＮＡ種を個々に試験し（プールは「破壊」される）、ＰＲＯポリペプチドイムノアドヘシンと相互作用可能である受容体をコードする特定のｃＤＮＡを決定する。

このアッセイの別の実施形態において、エピトープタグ化された潜在的なＰＲＯポリペプチド（例えば、８ヒスチジン「Ｈｉｓ」タグ）を、ヒトＩｇＧのＦｃドメインとの融合物（イムノアドヘシン）として発現された潜在的なＰＲＯポリペプチド分子のパネルと相互作用させる。エピトープタグ化ＰＲＯポリペプチドとの１時間の同時インキュベーション後、候補受容体を、プロテインＡビーズと各々免疫沈殿させ、ビーズを洗浄する。潜在的なリガンド相互作用を、エピトープタグに指向する抗体との免疫沈殿複合体のウェスタンブロット分析によって決定する。エピトープタグ化タンパク質の予想分子量のバンドが、候補受容体とのウェスタンブロット分析において観察されるが、潜在的な受容体のパネルの他のメンバーとでは生じることが観察されない場合に、相互作用が起こっていると判断する。

上記のアッセイを使用して、以下の受容体／リガンド相互作用を本明細書で同定する：（１）ＰＲＯ１０３１（本明細書ではヒトＩＬ−１７Ｂリガンドと称する）はＰＲＯ５８０１（本明細書ではヒトＩＬ−１７ＲＨ１受容体と称する）に結合する。
（２）ＰＲＯ１０２７２（本明細書ではヒトＩＬ−１７Ｅリガンドと称する）はＰＲＯ５８０１（本明細書ではヒトＩＬ−１７ＲＨ１受容体と称する）に結合する。
（３）ＰＲＯ２０１１０（本明細書ではヒトＩＬ−１７Ｆリガンドと称する）はヒトＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）［（Ｙａｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，９（１１）：７９４−８００（１９９７）；本明細書ではＰＲＯ１とも称する］およびＰＲＯ２００４０（本明細書ではヒトＩＬ−１７ＲＨ２受容体と称する）に結合する。
（４）ＰＲＯ１０３１（ＩＬ−１７Ｂリガンド）およびＰＲＯ１１２２（ＩＬ−１７Ｃリガンド）はヒトＩＬ−１７受容体には結合しない（Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９７（２）：７７３−７７８（２０００））。

（実施例１５）
ＩＬ−１７Ｆ受容体結合：ＩＬ−１７Ｆの構造決定
Ａ．方法
（１）結合測定
ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＨ１（ＰＲＯ５８０１）への結合のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｅ（ＰＲＯ１０２７２）、またはＩＬ−１７Ｆ（ＰＲＯ２０１１０）の反応速度論および親和性は、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＢＩＡｃｏｒｅ １０００装置（Ｐｈａｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）上でのＳＰＲ測定によって決定した。ＩＬ−１７リガンドまたは受容体を、製造業者によって開発されたプロトコールに従って、アミノ基へのランダムカップリング、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドケミストリーを介して、ＣＭ５センサーチップのフローセルに固定化した。ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１７ＲＨ１、およびＩＬ−１７Ｆについて約５００の共鳴単位（ＲＵ）の固定化レベルを得たのに対して、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｅの固定化レベルは、それぞれ、１２００および１５００ＲＵであった。固定化されたＩＬ−１７へのＩＬ−１７Ｒ結合については強いシグナルが得られた。しかし、ＩＬ−１７Ｒが固定化されている場合は、ＩＬ−１７結合について弱いシグナルのみが得られ、受容体固定化が結合部位を不活性化することを示唆した。エタノールアミンを用いる未反応部位のブロッキング後、結合測定を、２５μＬ／分の流速を使用して実施した。６段階、２倍で段階希釈したタンパク質溶液についてセンサーグラムを得た。使用した最高濃度は１０００または５００ｎＭタンパク質であり、溶液は、実行緩衝剤、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ中で調製した。センサーチップ表面を、０．１Ｍ酢酸、０．２Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ３の２５μＬアリコートの注入により結合サイクル間で再生させて、共有結合したタンパク質を溶出した。製造業者によって供給されるソフトウェアを使用する非線形回帰分析によって、１：１結合モデルに従ってセンサーグラムを評価した。受容体を結合することについてのＩＬ−１７変異体間での比較を測定するための別個の実験において、固定濃度の受容体を、種々の濃度のＩＬ−１７タンパク質とともにインキュベートし、次に、ＩＬ−１７タンパク質を固定化したフローセルへのこの混合物の注入を行った。結合した受容体の量を、結合相の後で得られた共鳴シグナルから決定した。

（２）結晶学
ＩＬ−１７Ｆは、１．０Ｍ硫酸リチウム、０．５Ｍ硫酸アンモニウム、１％エタノール、および１００ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．６を含むウェル溶液に対して、１９ＥＣにて懸滴中で六方晶系として結晶した。結晶を、エタノールを含まないウェル溶液からなる人工母液に収集した。結晶を、データ収集の前に、２０％グリセロールを含む人工母液に浸漬し、液体窒素で瞬間的に冷却した。初期データを施設内のＣｕＫα照射を用いる回転陽極ジェネレータで収集し、空間群はＰ６_１またはＰ６_５であることが見出され、非対称単位の２つの二量体であった。位相整合のために、結晶を、２ｍＭチメロサール（ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）を補充した人工母液中に６時間浸漬することによって誘導体化した。ネイティブデータセットおよび３回の波長Ｈｇ ＭＡＤ（多波長異常回折）実験は、スタンフォードシンクロトロン放射光研究所において、ビームライン９−２で収集した。データセットは、ＨＫＬパッケージ中のプログラムを使用して処理した（Ｏｔｗｉｎｏｗｓｋｉ，Ｚ．，およびＭｉｎｏｒ，Ｗ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７６：３０７−３２６（１９９７））。構造決定は、ＣＰＰ４スイートのプログラムを使用して実行した（ＣＣＰ４，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０：７６０−７６３（１９９４））。パターソンマップは、十分に整列されたＨｇ原子の存在を示し、その位置は、プログラムＲａｎｔａｎを使用して決定した。位相洗練は、ＭＬＰＨＡＲＥを用いて実行した。ＤＭ修飾マップの試験は、空間群がＰ６_５であったことを示し、そして非結晶学的対称（ＮＣＳ）オペレータを明らかにした。各プロトマーは、等価なＮＣＳ関連部位に単一のチメロサールを結合した。

初期構造を、４倍ＮＣＳ平均化および溶媒平坦化実験マップに構築し、プログラムＲＥＦＭＡＣ＿４．０（ＣＣＰ４，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０：７６０−７６３（１９９４））およびＢｒｕｅｎｇｅｒ，Ａ．Ｔ．（１９９２），Ｘ−ＰＬＯＲ Ｍａｎｕａｌ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３．１（Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ：Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって改変されたように使用して洗練した。遊離のＲ値を計算するために分離された反射が、薄い解像シェル中で選択された。最大尤度標的関数、全体異方性補正、およびバルク−溶媒補正は、位置の洗練、アニーリングのシミュレート、および等方性温度因子の洗練の間に使用した。初期の洗練は、２．６５Δリモートデータセットに対して行うが、Ｈｇ部位周辺の無秩序は、モデル化があまりにも困難なので、遊離のＲ反射の同じセットを使用して、２．８５Δの未処理データセットに対して実行した。この最終モデルにおいて、４つのベクトル由来残基、残基１−８、および残基１２８−１３３はプロトマーＡ、Ｂ、およびＸにおいて無秩序であるのに対して、残基１−６および１３０−１３３は、プロトマーＹにおいて無秩序である。ＸＹ二量体において、間のループ（残基Ｘ２０−Ｘ２３およびＹ２０−Ｙ２５）は無秩序であり；この同じループは、ＡＢ単量体中で秩序が乏しい。ラマチャンドランプロットは、すべての非グリシン、非プロリン残基の９０％が最も好ましい領域にあり、９．２％がさらに許容される領域中にあり、０．７％（３残基）が一般的に許容される領域にあり、そして許容されない領域には残基がないことを示す。データ収集および洗練の統計学は表８に示す。ＩＬ−１７Ｆの座標は、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋに寄託され、まだ割り当て中である。プログラムａｒｅａｉｍｏｌおよびｒｅｓａｒｅａ（ＣＣＰ４，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０：７６０−７６３（１９９４））は、接近可能表面積の計算のために使用した。プログラムＭｏｌｓｃｒｉｐｔ（Ｋｒａｕｌｉｓ，Ｐ．Ｊ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．１０３：１３４５−１３５２（１９９９））；Ｒａｓｔｅｒ３Ｄ（Ｍｅｒｒｉｔ，Ｅ．Ａ．およびＭｕｒｐｈｙ，Ｍ．Ｅ．Ｐ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０：８６９−８７３（１９９４））；Ｉｎｓｉｇｈｔ９７（ＭＳＩ）およびＧｒａｓｐ（Ｎｉｃｈｏｌｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １１：２８１−２９６（１９９１））は、分析のため、および図１５、１７、および１８を作製するために使用した。

Ｂ．結果および考察
（１）受容体結合
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、ＩＬ−１７Ｆ（ＰＲＯ２０１１０）が、ＩＬ−１７タンパク質を結合すると報告されている２つの受容体、ＩＬ−１７Ｒ（ＰＲＯ１と称する）およびＩＬ−１７ＲＨ１（ＰＲＯ５８０１）のいずれかの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を結合するか否かを決定するために使用した。しかし、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＨ１のいずれも（それぞれ、１および０．５μＭ）、固定化ＩＬ−１７Ｆへの結合は観察されなかった。対照的に、ＩＬ−１７Ｒは、適度な結合親和性で固定化ＩＬ−１７を結合し（以下の表８を参照のこと）、このことは、この相互作用の親和性に関する以前の報告と一致している（Ｙａｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９：７９４−８００（１９９７））。同様に、ＩＬ−１７ＲＨ１は、ＩＬ−１７Ｅへの高親和性結合を示し（表７）、このことは、細胞からのＩＬ−８放出の誘導について観察された効力と一致している（Ｌｅｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：１６６０−１６６４（２００１））。さらに、ＩＬ−１７ＲＨ１とＩＬ−１７との間、ＩＬ−１７ＥとＩＬ−１７とＲの間では、予想されたように、結合は観察されなかった（Ｓｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１９１６７−１９１７６（２０００）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：１６６０−１６６４（２００１））。

ＩＬ−１７ＦへのＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＨ１の結合の欠如が固定化連結活性化の結果であり得るか否かを試験するために、ＩＬ−１７Ｆ／受容体結合を競合実験で試験した。これらの実験において、固定濃度のＩＬ−１７Ｒ（５００ｎＭ）またはＩＬ−１７ＲＨ１（３１ｎＭ）を、種々の濃度のリガンドとともにインキュベートし、次いで、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ｅの表面上に注入した。可溶性ＩＬ−１７は、固定化ＩＬ−１７へのＩＬ−１７Ｒの結合を効率的にブロックできるので、２μＭ ＩＬ−１７Ｆとの競合は観察されなかった。さらに、１．３μＭ ＩＬ−１７Ｍは、固定化ＩＬ−１７ＥへのＩＬ−１７ＲＨ１の結合をブロックできなかったが、結合は、可溶性ＩＬ−１７Ｅによって完全に阻害された。これらの結果は、ＩＬ−１７Ｆが、ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＨ１のいずれかの、精製された単量体のＥＣＤに、高い親和性では結合しないことを示す。実施例１４に示されるように（図１４）、ＩＬ−１４は、新規なＩＬ−１７ＲＨ２受容体（ＰＲＯ２００４０）に結合することが示された。

ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７の活性と関連する活性を有するようであるが、ＩＬ−１７Ｆはインビトロでは高い親和性でＩＬ−１７Ｒを結合しない。しかし、ＩＬ−１７ＲでトランスフェクトされたＣｏｓへのＩＬ−１７Ｆの結合の増強は検出可能であり（示さず）、ＩＬ−１７ＦがＩＬ−１７Ｒを利用可能であり得るが、しかしこれは、高親和性シグナル伝達複合体を形成する、まだ未同定のさらなる成分との組み合わせにおいてのみであることを示唆する。同様の機構をＩＬ−１７について仮定して、受容体親和性とその生物学的活性の効力との不一致を説明している（Ｙａｏら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ９：７９４−８００（１９９７））。本実施例に提示した結果は、関与する受容体に関わらず、ＩＬ−１７Ｆシグナル伝達が、ＩＬ−１７によるＩＬ−１７Ｒの刺激と同様の下流の活性を生じることを示唆する。

（２）ＩＬ−１７Ｆの構造決定
ヒトＩＬ−１７Ｆの構造は、多波長Ｈｇ異常回折法によって解析し、２．８５Δ解像度で、それぞれ、２８．８％および２３．３％のＲ_ｆｒｅｅおよびＲ_{ｃｒｙｓｔ}まで洗練した（以下の表９を参照のこと）。ＩＬ−１７Ｆプロトマーのコアは、２対の逆並行β鎖から構成され；１つの対は鎖１（残基５２〜５９）および鎖２（残基６６〜７３および７７〜７９）を含むのに対して、他方は、鎖３（８９〜１０３）および鎖４（１１０〜１２５）を含む。鎖２は、不規則なβ構造の短いストレッチによって中断されている。２つのジスルフィド架橋（Ｃｙｓ７２／Ｃｙｓ１２２およびＣｙｓ７７／Ｃｙｓ１２４）は鎖２および鎖４を接続している。第３のジスルフィド（Ｃｙｓ１７／Ｃｙｓ１０７）は、広範な二量体接触を形成する隣接するプロトマーのＮ末端伸長に、１つのプロトマーの鎖３と鎖４との間のループを接続する（以下に議論する）。このＮ末端伸長はまた、他のプロトマー上の３’の鎖に水素結合するβ鎖（鎖０、残基２５〜３２）、および小さなαヘリックス（残基４３〜４８）を含む。さらなる電子密度は、Ａｓｎ５３で観察され、精製タンパク質の配列分析および特徴付けから予想されたような、この残基のグリコシル化と一致する。

この構造は、その異常なシスチン接続性によって名付けられたシスチンノットファミリーのタンパク質（ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｎ．Ｑ．およびＨｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｗ．Ａ．，Ｃｅｌｌ ７３：４２１−４２４（１９９３））の遠いホモログであることを示す（図５）。シスチンノットは、２対の対合したβ鎖（鎖１および鎖２、ならびに鎖３および鎖４）によって特徴付けられ、これらは、鎖２と鎖４との間でジスルフィド結合によって接続されている（図１５Ａ、挿入図）。第３のジスルフィド架橋は、大員環を通って、鎖１および鎖３を接続する。対照的に、ＩＬ−１７Ｆは、そのファミリーの名称の元となった３つの区別できるジスルフィド結合のうちの２つのみを含む。ＩＬ−１７Ｆにおいては、Ｃｙｓ７２／Ｃｙｓ１２２およびＣｙｓ７７／Ｃｙｓ１２４ジスルフィド結合は、典型的なシスチンノットの大員環を形成する。この大員環を通ることにより、「ノット」を形成する第３のジスルフィドは存在しない；その代わりに、シスチンノットタンパク質の第３のジスルフィドと同じ三次元的空間に位置している残基５０および８９は、ＩＬ−１７Ｆにおいてはセリンである。Ｓｅｒ５０は、ノットタンパク質中の対応するシステインと同じコンホメーションであるが、Ｓｅｒ８９は同じではない。第３のジスルフィドが適合可能であることを構造が示唆しているという事実にも関わらず、すべてのＩＬ−１７ファミリーメンバーにおいて、これらの位置でセリンが保存されていることは注目に値する（図１６を参照のこと）。

（３）二量体化
ＩＬ−１７Ｆは、神経成長因子（ＮＧＦ）および他のニュートロフィンと類似の平行様式で二量体化する（ＭｃＤｏｎａｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：４１１−４１４（１９９１））。しかし、二量体界面は通常大きく、ＮＧＦの全体で３４００Δ^２（単量体あたり約１７００Δ^２）と比較して、全体で６８００Δ^２（または単量体あたり約３４００Δ^２）が埋没している（ＰＤＢコード１ＷＷＷ；Ｗｅｉｓｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４０１：１８４−１８８（１９９９））。界面の約３分の１が、１つの単量体の鎖３および鎖４と、他の単量体の同じ鎖との間の相互作用によって形成され、これは、ニュートロフィンにおいて見られる二量体界面と類似している。ＩＬ−１７Ｆに独特なものは、各プロトマーのＮ末端伸長（残基８〜４８）を含む相互作用によって埋没している大量の表面領域であり、このプロトマーは、標準の二量体界面を横切って伸び、他のプロトマーの様々な部分に詰め込まれている。

ＩＬ−１７Ｆ二量体の全体の骨格構造を衣類のように説明することができ、シート１／２および１’／２’はスリーブを形成し、シスチンノットジスルフィドはカラーを並べ、シート３／４および３’／４’は体からのＮ末端伸長に沿い、これは、２つの三本鎖シート（４／３／０’および０／３’／４’）で仕上げされ、ボタン上でスカートを形成する（図１５Ｂ、寸法６５Δ×２５Δ×３０Δ）。この分子の表面上の顕著な特徴は、衣類のポケットとして本質的に配置された、二量体界面に位置する異常に大きな（１８Δ×１０Δ×１０Δ深さ）空洞である。空洞の基部は、鎖３’および鎖３’の残基（両方の鎖からのＧｌｎ９５、Ｇｌｕ９６、Ｔｈｒ９７、およびＬｅｕ９８）ならびに鎖４および４’（Ｌｙｓ１１５’、Ｖａｌ１１８，およびＶａｌ１２０’）によって形成されている。Ｎ末端の残基は、空洞の一方の側に並ぶのに対し（残基Ａｒｇ３７、Ｖａｌ３８、Ｍｅｔ４０）、他方の側は、鎖１（Ｔｙｒ５４）、鎖２（Ｖａｌ６８、Ｇｌｕ６６）、これらの鎖間のターン（Ｔｙｒ６３およびＰｒｏ６４）からの残基が並ぶ。Ｔｙｒ６３とＰｒｏ６４との間のペプチド結合は、異常なシスコンホメーションにある。このプロリンは、すべてのＩＬ−１７配列で保存されており、常に大きな疎水性残基が先行しているので、（図１６を参照のこと）、このペプチド結合は、すべてのＩＬ−１７ファミリーメンバーにおいてシスコンホメーションにあるという可能性が高い。構造の位相決定を行うために使用される水銀含有化合物、チメロサールは、この空洞の低い端に結合し（図１７において配向されるように）、空間の３０％を占める。

上で議論した構造的な特徴は、ＩＬ−１７ホモログ（ＩＬ−１７Ｆ）がシスチンノットフォールディングスーパーファミリーのメンバーであり、ＮＧＦサブファミリーのメンバーに対する類似性を二量体化することを実証する。ＩＬ−１７タンパク質は、スーパーファミリーの他のメンバーと、無視できる配列類似性を共有する。例えば、ＮＧＦとのＩＬ−１７Ｆの構造に基づく配列アラインメントは、１０残基のみの同一性を示し、これには、シスチンノットモチーフ中で保存されている４つのシステインが含まれる（示さず）。制限された配列保存性は、シスチンノットフォールディングスーパーファミリーに典型的である（ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｎ．Ｑ．およびＨｅｎｄｒｉｃｋｓｏｎ，Ｗ．Ａ．，Ｃｅｌｌ ７３：４２１−４２４（１９９３））。

ＩＬ−１７Ｆの配列は、他のＩＬ−１７ファミリーメンバーに対して一般化が可能である。βシートの位置および大員環ジスルフィド結合の位置を含むシスチンノットフォールディングは、すべてのＩＬ−１７ホモログにおいて保存性であるはずである（図１６）。特に、ＩＬ−１７は、ほぼ５０％の配列同一性を共有し、ＩＬ−１７Ｆによく似ているので、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｆがどこで表面特徴を共有しているか、ならびにこれらがどこで異なるかを予測することが可能である。図１７は、ＩＬ−１７との配列同一性に従って着色したＩＬ−１７Ｆの分子表面を示す。ＩＬ−１７Ｆ上での唯一の広範な保存性パッチは、各プロトマーの平らな表面上（図１７Ｂ）、および空洞の「上」の領域である（図１７Ａ）。プロトマー面上の保存性領域は、構造を維持するため、または共通の結合パートナーを潜在的に認識するために必要とされる保存性特徴を表し得る。従って、ＩＬ−１７Ｆの表面における大きな空洞はまた、ＩＬ−１７に存在するが、しかし保存性残基および可変残基の両方から構成される。

対照的に、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、およびＩＬ−１７Ｅの配列は、とりわけ、補助的なシスチン連結の数および位置、ならびにＮ末端伸長の長さおよび配列が、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７とは有意に異なる。この違いにも関わらず、ジスルフィド連結、および他のファミリーメンバーにおけるＮ末端伸長上で有する効果に関するいくつかの予測を行うことが可能である。例えば、ＩＬ−１７Ｂは、非共有結合性二量体として分泌され（ＣＨＯまたは昆虫細胞の両方から（Ｓｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１９１６７−１９１７６（２０００）およびデータ示さず）、このことは、８個すべてのシステインが二量体の単一鎖中で対合することを示す。ＩＬ−１７Ｂにおける２つのさらなるシステインのうちの１つ（Ｃｙｓ１０３）は、大員環に含まれる鎖２の２つのシステイン間に位置するのに対して、第２のさらなるシステインは、鎖３と鎖４との間のターンにある（図１６および図１５）。シスチンノットフォールディングがすべてのＩＬ−１７ホモログにおいて保存されるという仮定に基づいて、ＩＬ−１７Ｂの鎖２における余分のシステイン（Ｃｙｓ１０３）は、鎖３／４ループ中のいずれかのシステインに結合するには遠くに位置しすぎている。従って、ＩＬ−１７ＢのＣｙｓ１０３は、Ｎ末端伸長のＣｙｓ６４にジスルフィド結合する必要があり、鎖３／４ループ中の２つのシステインは互いに結合したままに放置される。これらの相互作用が起こるために、Ｎ末端伸長は、ＩＬ−１７Ｆよりも、ＩＬ−１７Ｂにおいて過激に異なるコンホメーションである必要がある。このことは合理的である。なぜなら、構造のこの部分の配列が、ファミリーにわたって保存されておらず、規則性が非常にまれな二次構造を形成し、そして分子の末梢に主として詰め込まれているからである。この分析に基づいて、これもまた鎖２において余分のシステインを有するＩＬ−１７ＣおよびＩＬ−１７Ｅもまた、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７とは有意に異なるコンホメーションにあるそれらのＮ末端を有することが予測される。この分析は、Ｎ末端のジスルフィド結合パターンに基づいて、このファミリーを２つのクラスに分ける。

ＩＬ−１７Ｆの構造の印象的な特徴は、別の分子を結合し得る領域であることが示唆される、二量体界面の残基（図１８）によって形成される異常に大きな空洞である。この空洞（二量体あたり２つ）は、厳密に保存性であるか、または常に同様の化学的特徴を有する残基（Ｔｙｒ５４、Ｔｙｒ６３、Ｐｒｏ６４、Ｖａｌ１２０）、ならびにＩＬ−１７ファミリーメンバー間で極度に可変性である他の残基（Ａｒｇ３７、Ｖａｌ３８、Ｍｅｔ４０、Ａｌａ９５）の組み合わせから構成され、分子間相互作用についての特異性を付与する潜在能力を提供する。この空洞は、顕著な静電的な表面特徴を有さないが、しかし、その代わりに、疎水性残基、極性残基、および帯電残基の組み合わせによって形成される（図１７Ａおよび図１８Ａを参照のこと）。配列分析に基づいて、類似の空洞は、他のＩＬ−１７ファミリーメンバーに存在することが予想される；しかし、Ｎ末端伸長の異なるコンホメーションの可能性を考えれば、空洞の特異的な特徴は、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、およびＩＬ−１７Ｅにおいて全く異なる。

ＮＧＦは、ＩＬ−１７Ｆにおける空洞の部位と類似する位置で、その高親和性受容体、ＴｒｋＡを結合する。図１８Ｂおよび図１８Ｃは、空洞およびＴｒｋＡ結合部位の位置を強調している同じ方向にあるＩＬ−１７ＦおよびＮＧＦを示す（すべてのニューロトロフィン／Ｔｒｋ複合体によって使用されると予測される；Ｗｅｉｓｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４０１：１８４−１８８（１９９９））。ニューロトロフィンホモ二量体の公知の構造（ＮＧＦ、ＮＴ３、ＮＴ４）もまた、この位置においてそれらの表面にくぼみを有するが、これは、ＩＬ−１７Ｆの空洞よりもはるかに小さく、より簡素である（ＭｃＤｏｎａｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：４１１−４１４（１９９１））；Ｂｕｔｔｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７：１６８４６−１６８５２（１９９８）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．８：２５８９−２５９７（１９９９））。Ｔｒｋファミリーメンバーは、それらの膜近接細胞外Ｉｇ様ドメインを介してニュートロフィンと相互作用する受容体チロシンキナーゼである。ＩＬ−１７ＲまたはＩＬ−１７ＲＨ１はＩｇ様フォールディングを含むことは予測されていないが、ＩＬ−１７タンパク質およびニュートロフィンは、それらの表面上の類似の領域を利用して、それらの受容体に結合することができる。

ニュートロフィンは特異的Ｔｒｋ受容体に結合するだけではなく、すべてのニュートロフィンに共通である第２の受容体、ｐ７５^ＮＴＲに同様に結合できる。ｐ７５^ＮＴＲは、腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦＲ１）または死受容体５の構造に類似することが予測されるシステインリッチな細胞外ドメインを介してそのニュートロフィンリガンドを結合する（Ｂａｎｎｅｒら、Ｃｅｌｌ ７３：４３１−４４５（１９９３）；Ｈｙｍｏｗｉｔｚら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ４：５６３−５７１（１９９９）；Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃ．Ｂｉｏｌ．６：１０４８−１０５３（１９９９））。ＮＧＦ：ｐ７５^ＮＴＲ相互作用のモデルは、変異誘発データに基づいて提案され（Ｗｅｉｓｍａｎｎ，Ｃ．およびｄｅ Ｖｏｓ，Ａ．Ｍ．，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５８：１−１２（２００１））、各プロトマーの平らな表面と同様に、リガンド二量体のいずれかの末端におけるループが、ｐ７５^ＮＴＲと相互作用することを示唆する。ＩＬ−１７ＲおよびＩＬ−１７ＲＨ１の配列は、ｐ７５^ＮＴＲとは似ておらず、ＴＮＦＲ１様フォールディングを採用することは予測されていない。しかし、ＩＬ−１７およびニュートロフィンのフォールディングの類似性を考えると、ニュートロフィンの系と類似して、ＩＬ−１７のための第２の受容体成分の可能性を考慮することは合理的である。

さらに、タンパク質ｓｐａｕｚｔｌｅもまた、ニュートロフィンのフォールディングを採用することが示唆されており（Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉら、ＴＩＢＳ ２３：２３９−２４２（１９９８））、ショウジョウバエ（ｄｒｏｓｐｈｉｌａ）Ｔｏｌｌ受容体であることが遺伝学的に示された（しかし、直接的な結合実験によってではない）（Ｍｏｒｉｓａｔｏら、Ｃｅｌｌ ７６：６７７−６８８（１９９４））。ＩＬ−１７は、ＩＬ−１およびＴｏｌｌ受容体によって使用されるものと同様の経路においてＮＦ−κＢを通してシグナル伝達し、これらの受容体は、これらの細胞外ドメインが非常に異なっているが、それらの細胞内ドメインは共通のフォールディングを共有するので、シグナル伝達複合体の未知の他の成分を含めた、ＩＬ−１７受容体の細胞内ドメインまたは細胞外ドメインのいずれかの成分が、これらの受容体の一部に構造的に類似している可能性があると予測することは合理的である。しかし、受容体の構造に関わらず、ＩＬ−１７リガンドと受容体との間の相互作用の様式は、ＩＬ−１７二量体構造の側面に深い空洞を有する可能性が最も高い。

Claims (1)

1. 本願明細書に記載された発明。

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