[go: up one dir, main page]

JP2010042011A - ヒト胚性幹細胞の造血分化 - Google Patents

ヒト胚性幹細胞の造血分化 Download PDF

Info

Publication number
JP2010042011A
JP2010042011A JP2009229464A JP2009229464A JP2010042011A JP 2010042011 A JP2010042011 A JP 2010042011A JP 2009229464 A JP2009229464 A JP 2009229464A JP 2009229464 A JP2009229464 A JP 2009229464A JP 2010042011 A JP2010042011 A JP 2010042011A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
cells
hematopoietic
human
embryonic stem
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2009229464A
Other languages
English (en)
Inventor
Dan S Kaufman
ダン エス カウフマン
James A Thomson
ジェイムズ エイ トムソン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wisconsin Alumni Research Foundation
Original Assignee
Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wisconsin Alumni Research Foundation filed Critical Wisconsin Alumni Research Foundation
Publication of JP2010042011A publication Critical patent/JP2010042011A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/122—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells for inducing tolerance or supression of immune responses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/115—Basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF-2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/13—Coculture with; Conditioned medium produced by connective tissue cells; generic mesenchyme cells, e.g. so-called "embryonic fibroblasts"
    • C12N2502/1394—Bone marrow stromal cells; whole marrow
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
    • C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

【課題】ヒト胚性幹細胞からヒト造血細胞を作り出す方法を提供する。
【解決手段】血液系細胞を作り出すためにヒト胚性幹細胞を用いること、及び様々な用途のためのその血液系細胞の使用に関し、試験管内ヒト胚性幹細胞培養物を哺乳動物造血間質細胞に暴露してヒト造血細胞を作り出し、そのように作り出された該ヒト造血細胞の少なくとも一部がメチルセルロース培地内で赤芽球形成単位を作る段階を含むことを特徴とする方法。また、該細胞培養物の少なくとも一部の造血細胞がCD34+である方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、血液系細胞を作り出すためにヒト胚性幹細胞を用いること、及び様々な用途のためのその血液系細胞の使用に関する。
最近、ヒト胚性幹細胞の安定な培養物を分離する方法が我々の研究室により記載された。米国特許第5,843,780号及びJ. Thomsonら, 282 Science 1145-1147(1998)を参照されたい。これらの文献とその中に記載されている他の文献すべての開示内容は、本願明細書に含まれるものとする。
我々は、2種類のヒト胚性幹細胞系をアメリカン・タイプ・カルチュア・コレクション、10801ブルーバード大学、マナッサス、バージニア州20110-2209米国に1999年7月7日と1999年7月15日にそれぞれ寄託した。これらの寄託物の分類学に関する説明は、それぞれヒト胚性幹細胞系H1とH9である。そのような細胞系は、特に、研究、移植又は他の用途に指定された様々なタイプの細胞系の供給源を与えるために用いることができることがこれらの文献に提唱されている。
これらの文献に記載された貯蔵条件と培養条件下の細胞系は、特定の細胞型に分化せずに長期間維持されている。その後、細胞系を免疫不全マウスに注射した場合、奇形腫となり多重組織型に分化する。
所望の細胞を与えるためにES細胞が用いられる場合、特定の細胞型に対して分化を最適化することはしばしば好ましいことである。造血細胞の場合には、そのことにより多重造血系列となるために分離され使用され得る造血細胞が得られることは望ましいことである。それらの細胞には、造血幹細胞が含まれてもよいがそれに限定されない。
造血幹細胞集団は、骨髄から直接分離されている。C. Baumら, 89 PNAS USA 2804-2808(1992)を参照されたい。しかしながら、これは、細胞を得る骨髄の供給に依存している。
マウス胚細胞集団を造血細胞に特定する試みがいくつかある。例えば、米国特許第5,914,268号; G. Keller, 7細胞生物学における現在の見解, 862-869(1995); 及びT. Nakanoら, 265 Science 1098-1101(1994)を参照されたい。また、M. Weiss, 11再生不良性貧血と幹細胞生物学, 1185-1195(1997); 及びS. Morrisonら, 11 Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 35-71(1995)も参照されたい。
しかしながら、これらの教示を霊長類に適用するには、困難がある。例えば、F. Liら, 92 Blood 368a(1998)には、間質細胞系と外因性サイトカインを用いたアカゲザル胚性幹細胞系の分化の方法が論じられた。しかしながら、最近、その方法はコロニーの形成が不十分であったことがそのグループによって報告されている。
様々な疾患の組織移植による治療は日常的になってきた。しかしながら、ぴったりの供与臓器、細胞、又は組織を得る順番待ち名簿があり得る。ぴったりの提供物質が利用できる場合でさえ、しばしば拒絶による問題がある。受容個体の免疫応答を抑制する従来の方法には欠点がある。例えば、免疫抑制剤は、費用がかかり、しばしば副作用がある。
国際出願第98/07841号には、選ばれた提供者とMHC適合する胚性幹細胞を誘導する方法が論じられている（例えば、供与核を除核卵母細胞に移植し、続いて幹細胞を誘導する）。この出願は、得られた細胞が骨髄移植を必要としている医療に用いられるMHC適合性造血幹細胞を得るために使用し得ることを示している。
しかしながら、1型糖尿病又は多発性硬化症のような疾患は、自己免疫応答を含んでいる。例えば、破壊した膵島を置き換えるために膵島（罹患した個体にMHC適合する）を単に移植すると、ホストの免疫系が移植した島になお作用するので、1型糖尿病が長期間まったく軽減しなくなる。
従って、ヒト胚性幹細胞培養物を所望の造血コロニーに分化させる方法が求められていることがわかる。更に、造血細胞のために改善された使用を開発することが求められている。
本発明は、ヒト造血細胞を得る方法を提供する。ヒト胚性幹細胞培養物を哺乳動物造血間質細胞に暴露してヒト造血細胞を作り出す。そのように作り出されるヒト造血細胞の少なくとも一部は、CD34+ である、及び/又はメチルセルロース培地（culture)内で造血細胞コロニー形成単位を作ることができる。
CD34は、C. Baumら, 89 PNAS USA 2804-2808(1992)及びS. Morrisonら, 11 Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 35-71(1995) に記載されているように、造血幹細胞の標準マーカーである。コロニー形成単位を作る能力の性質は、該細胞が分化した造血系となる所望の特性をもつことを示している。
間質細胞は、好ましくは骨髄細胞又は胚卵黄嚢細胞から誘導される。マウス間質細胞は、このために用いることができる。しかしながら、霊長類の間質細胞又は他の哺乳動物の間質細胞も適していなければならない。
別の態様においては、本発明は、試験管内でヒト胚性幹細胞培養物から誘導され、かつメチルセルロース培養内で造血細胞コロニー形成単位となることができるヒト造血細胞を提供する。本出願に用いられる『誘導』という用語は、直接又は間接に（例えば、1つ以上の中間体又は継代によって）得られることを意味するものである。
更に、本発明は、ヒト細胞物質をヒト受容ホストに移植する方法を提供する。胚性幹細胞培養物から試験管内で誘導されたヒト造血細胞を得るものである。次に、造血細胞に対して主要組織適合複合体適合性をもつ、造血細胞以外の選択ヒト非造血細胞物質を得るものである。次に、該造血細胞と該選択ヒト非造血細胞物質の両方をヒトホストに移植するものである。
例えば、胚性幹細胞培養物から試験管内で誘導されたヒト造血細胞を得ることができる（例えば、後述される手法を用いる）ものである。また、造血細胞にMHC適合性をもつヒト膵島を得るものである。次に、造血細胞と膵島の両方がヒトに移植される（好ましくは受容個体自体の骨髄を不活性化した後に）ものである。
膵島は、胚性幹細胞培養物を作り出すために細胞が用いられる提供者から直接得ることができる。また、単一の胚性幹細胞培養物は2種類の経路に沿って分化され得る。1つの過程においては、上記方法は造血幹細胞を作り出すために使用し得る。これらの細胞は、適切なホストに移植される場合に多重造血系列に発育しなければならない。これらの系列は、同じ親の胚性幹細胞から誘導された他の細胞に対して寛容であるリンパ球を含まなければならない。他の過程においては、幹細胞は膵島に対して向けられる。
別の態様においては、多発性硬化症状をもつヒトに希突起膠細胞を供給し得るものである。胚性幹細胞培養物から試験管内で誘導されたヒト造血細胞を得るものである（例えば、後述される手法を用いて）。また、骨髄細胞に対してMHC適合性をもちかつ骨髄細胞と希突起膠細胞の両方をヒトに移植するヒト希突起膠細胞を得るものである。
遺伝物質を用いて胚性幹細胞を作り出したそのヒトは、希突起膠細胞の提供者であり得る。また、その胚性幹細胞培養物は、2つの別の経路に沿って分化されて2つの移植可能な物質を得ることができる。
いずれかの疾患（及び潜在的な他の自己免疫疾患）については、免疫及び自己免疫拒絶の問題は、本方法によって減少させなければならない。この点で、受容個体のはじめの骨髄は、移植前に放射線又は化学的手段によって全部又は部分的に不活性化し得る。その後、移植した造血細胞によって少なくとも部分的に置き換えられる。はじめの骨髄の除去/減少は、体内の自己免疫応答を作り出す能力を低下させる。置換骨髄と第2の移植可能物質のMHCの組合せは、第2物質が移植した骨髄によって拒絶されないことを保証する。
更に、造血細胞と他の組織の同時移植は、第2組織の許容を促進させるために行われ得る（例えば、心疾患を治療するためには心筋細胞＋造血細胞; 肝疾患を治療するためには肝細胞＋造血細胞）。造血キメラを作ることにより、同様に適合したMHC型をもつ組織許容の改善を得ることができる。
本発明は、赤芽球細胞、顆粒球細胞、マクロファージ、リンパ球前駆細胞、単球、B細胞、T細胞等の問題の様々な造血細胞を得るのに適していなければならない。この点で、分化したES細胞のコロニーは、収集し、単一細胞に分離し、適切な培養にプレーティングした場合、造血コロニーに発育する。これらのコロニーは、コロニー形成単位（コロニー形成単位-赤芽球（CFU-E）、芽球形成単位-赤芽球（BFT-E）、コロニー形成単位-マクロファージ（CFU-M）、コロニー形成単位-顆粒球/マクロファージ（CFU-GM）又はコロニー形成単位-高増殖能を含む）に増殖するコロニー形成細胞の発育を示している。コロニー形成細胞を同定すると、胚性幹細胞が特定条件下で特定造血系列に増殖することができる造血細胞に分化することが示される。
従って、本発明の目的は、
（a）造血細胞を得る上記種類の方法;
（b）それらの方法を用いて誘導された細胞; 及び
（c）それらの誘導された細胞を移植、注入又は他の用途に用いる方法
を提供することを含んでいる。本発明のこれらの及び他の目的は、次の好適実施態様の説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の完全な範囲を判断するためには特許請求の範囲を見なければならない。
胚性幹細胞培養
大部分の実験に前述のヒトES細胞系H1を用いたが、次の実験の一部を前述のES細胞系H9（又はH9.2）を用いて同じ結果で行われた。最初の分離増殖細胞系から誘導された細胞の凍結（液体窒素）株からこれらの細胞を取り出した。H1 ES細胞を6ウェル培養皿（ヌンクロン(Nunclon)、フィッシャ）で増殖した。
その皿を、まず、0.1％ゼラチン液（シグマ）で1日以上37℃/5％CO2のインキュベータ内で被覆した。その1日以上後に、ゼラチン液を除去し、次に、プレートのウェルを照射マウス胚線維芽細胞（MEF）細胞で被覆した。MEF細胞は、10％ウシ胎児血清（ハイクローン(Hyclone)又はハーラン(Harlan)）、2 mM l-グルタミン（ギブコBRL）、及び100単位/mlペニシリン、100mg/mlストレプトマイシン（シグマ）で補足したDMEM（ギブコBRL）からなる培地中で胎生12〜13日のマウス胚から誘導した。
MEF細胞を、ウェルにプレーティングする前にセシウム源からの5500 cGyで照射した。MEFを5×104細胞/ml、2.5 ml/ウェルの密度で添加した。次に、MEFで被覆したプレートを、ES細胞を添加するまで37℃/5％CO2のインキュベータに1日以上入れた。
ES細胞を新しいMEFで約5〜8日間隔で継代した。時間は、細胞密度と分化の形態学的外観に左右される。継代については、ES細胞のウェル内の培養液を取り出し、DMEM（ギブコBRL）中1 mg/mlのコラゲナーゼIVを含有する1〜2 mlの培養液を添加した。次に、ES細胞のコロニーが集まり始めるまで37℃/5％CO2に5〜20分間入れた。
次に、ウェルを5 mlのピペットで削り、プレートからES細胞を剥離した。収集したウェルの内容物を15 mlの三角チューブ（フィッシャ）に入れ、1000 rpmで5分間遠心分離機で回転させた。培養液を除去し、10 mlの新しい培養液を添加した。このES細胞培養液は、20％血清置換培養液（ギブコBRL）、8 ng/mlのbFGF（ギブコBRL）、1％非必須アミノ酸溶液（ギブコBRL）、1 mM l-グルタミン（ギブコBRL）、及び0.1 M β-メルカプトエタノールで補足したF12/DMEMからなる。
細胞を再び回転（5分間/1000 rpm）させ、培養液を除去し、それぞれについて2.5 mlの培養液の濃度で再懸濁した（典型的には15 mlの培養液を6つの新しいウェルにプレーティングする、これにより1:6継代となる）。次に、上記のように予めMEFで被覆したプレートのウェルに細胞をピペットで加えた。細胞を各ウェルに一様に配分し、プレートを37℃/5％CO2のインキュベータに入れた。
細胞継代前に分化の形態学的外観を示すES細胞のコロニーがある場合には、吸込式ガラスピペットで弱く削ることによりコロニーを取り出した。これを解剖顕微鏡で観察しつつ行った。分化した細胞を除去した後、残っているコロニーを上記のように継代した。
継代後、各ウェルのES細胞に新鮮な培養液を24〜48時間間隔で『供給』した。ここで、各ウェルの培養液を除去し、2.5 mlの新鮮なES培養液を加えた。ES細胞の供給と継代はすべて無菌条件で行った。
ES細胞の分化
ヒトES細胞の造血分化を促進させるために、ES細胞を上記のように収集した。次に、哺乳動物間質細胞で被覆した6ウェルプレートに細胞をプレーティングした。実験においては、我々は、2500 cGyで予め照射したC166細胞を用いた。C166は、マウスの卵黄嚢から胎生12日目に得られたものであり、Dr. Robert Auerbach（UW-マディソン）から恵与された。
他の実験においては、S17細胞を用いた。もともとマウス骨髄から得られたものであり、Dr. Kenneth Dorshkind（当時はUC-リバーサイド、現在はUCLA）から恵与された。
C166細胞又はS17細胞を1×105細胞/ml、2.5 ml/ウェルの濃度でプレーティングした。次に、S17細胞か又はC166細胞にプレーティングしたES細胞を20％ウシ胎児血清（ハイクローン）、1％非必須アミノ酸溶液、0.1 Mβ-メルカプトエタノール、及び1 mM l-グルタミンからなる培養液で補足したDMEM（ギブコBRL）からなる培養液中で増殖した。この培養液を各ウェルにおいて新鮮な培養液で24〜72時間間隔で置き換えた。適切な培養液を選択する際には、細胞発育に慣用的な条件を与えることが求められているだけであるが、指定された間質細胞で補足される。
S17細胞又はC166細胞にプレーティングした3〜7日後に、未分化ES細胞がMEF支持細胞に維持されたのと同じ均一な外観をもたないという点で分化されたように目に見え始めた。ES細胞のコロニーは、異なる多重細胞型となり始めた。これらのコロニーの一部は、初期造血前駆細胞のコロニーを示す敷石形態学をもつ細胞からなると思われる領域を有した。
血液系細胞を確認する
適切な造血細胞の存在を求める方法は、半固体メチルセルロース含有培養液中で造血コロニー形成細胞（CFC）を分析することである。ここで、ES細胞を、上記のように維持された2〜3週間C166細胞か又はS17細胞上で分化させた。直後に培養液を除去した。2.5 mlのカルシウムとマグネシウムを含まないリン酸塩緩衝食塩水（PBS）を2〜5分間添加し、除去し、1.5 mlのトリプシン(ｂ0.125％)-EDTA（1 mM）培養液を添加した。
次に、細胞を37℃/5％CO2に10分間置いた。直後に、コロニーは解離し始めた。細胞を、更に、ピペットで取りウェルを削ることにより解離した。細胞を15 mlの三角チューブに入れ、5分間/1000 rpm回転させ、培養液を除去し、10 mlの新鮮な培養液（DMEM＋10％FBS＋l-グルタミン＋ペニシリン/ストレプトマイシン）を添加し、再び回転させた。次に、細胞を5 mlの培養液に懸濁し、100 mMナイテックスフィルタを通過させて細胞の凝塊を除去した。
フィルターを、更に5 mlの培養液で洗浄した。次に、解離/ろ過した細胞を血球計で計数し、1×106（通常は、多くのこの細胞とは限らない）細胞を新しい15 mlの三角チューブに入れた。次に、これらの細胞を回転させ、培養液を除去し、2％ウシ胎児血清（ハイクローン）で補足したIMDM（ギブコBRL）からなる5 mlの培養液を添加した。細胞を回転させ、培養液を除去し、250μlの培養液（IMDM＋2％FBS）を添加した。
指定された試験条件に従って、これらの細胞を2.5 mlのメソカルト(Methocult) GF+H4435培養液（ステムセルテクノロジーズ）に添加した。この培養液は、30％FBS、3単位/mlエリスロポエチン、20 ng/ml GM-CSF、20 ng/ml G-CSF、2 mM l-グルタミン、0.1 mM b-メルカプトエタノール、1％ウシ胎児血清アルブミンからなる。次に、メチルセルロース中の細胞を激しく撹拌し、1.1 mlのその混合液をP35プラスチック皿（ステムセルテクノロジーズ）上にプレーティングし、皿上に一様に伸展させ、37℃/5％CO2に置いた。
各試料の2回の実験のプレートを、典型的には4×105細胞/プレートでプレーティングした。14〜21日後、プレートについて造血コロニーの存在を顕微鏡下で分析した。コロニーをコロニーアトラス（ステムセルテクノロジーズ）又は書籍: 造血細胞の培養、RI Freshney, IB Pragnell, MG Freshney, eds., Wiley-Liss, Inc. 1994と比較することにより同定した。コロニーは、次の1種: コロニー形成単位-赤芽球（CFU-E）、芽形成単位-赤芽球（BFU-E）、コロニー形成単位-マクロファージ（CFU-M）、コロニー形成単位-顆粒球/マクロファージ（CFU-GM）又はコロニー形成単位-高増殖能（CFU-HPP）として同定された。
所望の造血細胞の存在は、フローサイトメトリーで確認することができる。フローサイトメトリーにより指定された細胞表面抗原を探し得る。ここで、14〜21日間上記のようにS17細胞又はC166細胞で分化したES細胞を上記のようにトリプシン/EDTAで収集し、100 mMナイテックス(nytex)フィルターを通過させた。ろ過した細胞を血球計で計数し、次に15×75プラスチックチューブ（フィッシャ）に約1×105細胞/チューブで分注した。次に、細胞を回転させ、培養液を除去し、2〜3 mlのFACS培養液を添加した。（FACS培養液は0.5％BSA（シグマ）、0.1％アジ化ナトリウム（シグマ）を含むPBSである。）
細胞を再び回転させ、培養液を除去した。次に、蛍光マーカー（FITC又はPE）に直接結合した抗体を供給業者が奨める濃度でウェルに添加した。細胞を次の抗体: CD34-FITC（イムノテック(Immunotech)）、CD45-PE（ファルミンゲン(Pharmingen)）で分析した。IgG1-FITC及びIgG1-PEを細胞の非特異的染色のイソタイプの対照として用いた。細胞を、氷上で約30分間適切な抗体とインキュベートし、2〜3 mlのFACS培養液で1〜2回洗浄し、約0.5 mlのFACS培養液に再懸濁した。
次に、抗体標識細胞を製造業者の推奨のとおりFACScan（ベクトンディッキソン）を用いて分析した。死んだ細胞の存在は、ヨウ化プロピジウム（1 mg/ml溶液、5μl/チューブを添加した）又は7-AAD（カルビオケム）(0.2 mg/ml、5μl/チューブ)を添加することにより求めた。分析のソフトウェアは、PC Lysisか又はCellquestとした。
次の実験法を用いて免疫組織化学（IHC）により抗原発現を分析した。ここで、C166か又はS17と共存培養した分化したES細胞を、上記のようにトリプシン/EDTAで収集した。細胞を、10％FBSで補足したDMEM含有培養液に約1×104〜1×105の濃度で再懸濁した。次に、これらの細胞の『サイトスピン』標品を、1×103〜1×104細胞をガラススライド（スーパーフロスト/プラス、フィッシャ）上でサイトスピンII遠心機（シャンドン）により回転させることにより作った。
次に、これらのスライドを冷アセトンで固定し、-20℃で凍結貯蔵した。IHC染色については、スライドを室温で解凍し、細胞沈降物をワックスペン（DAKO）で示した。次に、細胞をベクタステインABCキット（ベクターラボラトリーズ、カリフォルニア州バーリンガム）を用いて次のように染色した。インキュベーションはすべて室温でした。細胞に100〜200μlのPBSを5分間添加し、次に除去した。次に、細胞にベクタステイン阻止抗体溶液（ウマ血清）を15分間添加した。次に、細胞を乾燥ブロットし、100〜200μlの一次抗体溶液を添加した。一次抗体は、IgG1（1μg/試料、シグマ）、抗CD34（0.5μg/試料、イムノテック）、抗CD45（1μg/試料、DAKO）、抗クラスI（1μg/試料、Dr. Paul Leibson、メイヨー(Mayo)クリニックからの贈与）、抗CD14（1μg/試料、ファーミンジェン）、抗CD31（1μg/試料、ファーミンジェン）とした。
一次抗体を30分間添加し、次にPBSを10分間添加した。次に、ビオチニル化抗IgG抗体（ベクタステインキット、溶液B）を30分間添加し、続いてPBSを10分間添加した。次に、ベクタステインABC溶液を室温で30分間添加し、続いてPBSを10分間添加した。次に、DAB溶液（ベクタステイン）を5分間添加し、続いて水道の流水で10分間洗浄した。実験においては、次にスライドをギルのヘマトキシリン溶液（ベクターラブ）で3分間対比染色し、続いて水道の流水で10分間洗浄する。次に、スライドを風乾した。正に染色する細胞は、褐色になる。
2〜3週間後に細胞の混合集団の中にCE34+ が示された（約1％）。更に重要なことに、分化したES細胞は、収集し、細胞に分離し、メチルセルロース（半固体）培養にプレーティングした場合、造血コロニーに発育することがわかった。
移植
現在、造血細胞移植は、臨床的には主に悪性を治療するために高用量化学療法を受けた患者に行われる。これらの患者は、典型的には、オートロガスか又は同種異系供給源からの造血細胞の不均一混合物を受ける。ヒトES誘導造血幹細胞は、最低でも造血細胞移植に均一な細胞集団を与える。
更に、上記のように、移植のMHC特性を現在は制御することができ、自己免疫疾患の治療が可能である。例えば、造血幹細胞（HSC）と第2系列（例えば、糖尿病の膵島又は多発性硬化症の希突起膠細胞）の両方を同じ親のES細胞系から誘導することができる。利用できる両系列においては、まず、完全な同種異系造血細胞移植（HCT）を行うことにより造血キメラを作ることができる。樹立したキメリズム状態により、受容個体の免疫系が後続の第2細胞型（例えば、膵島細胞又は希突起膠細胞）の移植体を『自己』として『見る』ことができ、拒絶しないに違いない。
例えば、希突起膠細胞がマウスES細胞（O. Brustleら, 285 Science 754-6(1999)）から心筋細胞（M. Klugら, 98 J. Clin. Invest. 216-224(1996)）をもつように得られていることに留意されたい。
造血キメラを作る本方法は、自己免疫以外の理由で移植した組織の受容を促進する。この点で、同種異系造血幹細胞を受け入れるマウスは、造血細胞と遺伝的背景が同じ他の組織を拒絶しないが、第三者の移植片は拒絶する。K. Gandyら, 65移植295-304(1998)を参照されたい。
動物実験のほかに、造血細胞移植体を予め受け入れた後に固体臓器（腎臓）移植体を必要とするヒト患者の臨床例が現在は報告されている。これらの場合、骨髄移植体を予め供給した同じ人からの腎臓移植体は免疫抑制せずに免疫学的に受容されている。T. Spitzerら, 68移植480-484(1999) を参照されたい。
イヌモデル、最近ではヒト臨床試験における研究から、緩和な非骨髄切除条件方式を用いてホストを同種異系HCTに良好に準備し得ることがわかった。ここで、同種異系HCTを受け入れる前に中程度線量のみの全身照射と短い過程の免疫抑制を用いてホストを準備する。
好適実施態様を上で記載してきたが、他の変更が本発明の範囲内で行われ得ることは当業者によって理解されるであろう。例えば、2つの特定の間質型細胞が使用に選ばれたが、他の多くのものも適している。例えば、公に利用できる間質細胞系は、ATCC指定No. CRL-1972をもつM2-10B4細胞系である。
更に、上記説明は、赤血球と骨髄の前駆体の作出に集中しているが、問題の他の様々な血液系細胞を上記手法を用いて多量に得ることができる。米国特許第5,914,268号も参照されたい。従って、本発明の完全な範囲を判断するためには特許請求の範囲を見なければならない。
産業上の利用性
本発明は、移植、研究又は他の用途に用いられる血液系細胞を提供する。

Claims (6)

  1. ヒト造血細胞を得る方法であって、ヒト胚性幹細胞培養物を哺乳動物造血間質細胞に暴露してヒト造血細胞を作り出す段階を含むことを特徴とする方法。
  2. そのように作り出された該ヒト造血細胞の少なくとも一部がCD34+ である、請求項1記載の方法。
  3. そのように作り出された該ヒト造血細胞の少なくとも一部がメチルセルロース培地内で造血細胞コロニー形成単位を作る、請求項1記載の方法。
  4. 該間質細胞が骨髄細胞及び胚卵黄細胞からなる群より選ばれる、請求項1記載の方法。
  5. ヒト造血細胞を得る方法であって、試験管内ヒト胚性幹細胞培養物を哺乳動物造血間質細胞に暴露してヒト造血細胞を作り出し、そのように作り出された該ヒト造血細胞の少なくとも一部がメチルセルロース培地内で赤芽球形成単位を作る段階を含むことを特徴とする方法。
  6. 該細胞培養物の少なくとも一部の造血細胞がCD34+ である、請求項5記載の方法。
JP2009229464A 1999-11-08 2009-10-01 ヒト胚性幹細胞の造血分化 Pending JP2010042011A (ja)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/435,578 US6280718B1 (en) 1999-11-08 1999-11-08 Hematopoietic differentiation of human pluripotent embryonic stem cells

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001537473A Division JP2003513664A (ja) 1999-11-08 2000-08-25 ヒト胚性幹細胞の造血分化

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2013210318A Division JP2014000096A (ja) 1999-11-08 2013-10-07 ヒト胚性幹細胞の造血分化

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2010042011A true JP2010042011A (ja) 2010-02-25

Family

ID=23728955

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001537473A Pending JP2003513664A (ja) 1999-11-08 2000-08-25 ヒト胚性幹細胞の造血分化
JP2009229464A Pending JP2010042011A (ja) 1999-11-08 2009-10-01 ヒト胚性幹細胞の造血分化
JP2013210318A Pending JP2014000096A (ja) 1999-11-08 2013-10-07 ヒト胚性幹細胞の造血分化

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001537473A Pending JP2003513664A (ja) 1999-11-08 2000-08-25 ヒト胚性幹細胞の造血分化

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2013210318A Pending JP2014000096A (ja) 1999-11-08 2013-10-07 ヒト胚性幹細胞の造血分化

Country Status (13)

Country Link
US (3) US6280718B1 (ja)
EP (1) EP1228194A1 (ja)
JP (3) JP2003513664A (ja)
KR (2) KR20030022766A (ja)
CN (1) CN1228443C (ja)
AU (1) AU784928B2 (ja)
BR (1) BR0015374A (ja)
CA (1) CA2390281C (ja)
IL (2) IL149387A0 (ja)
IS (1) IS6373A (ja)
NO (1) NO20022180L (ja)
SE (1) SE526490C2 (ja)
WO (1) WO2001034776A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014000096A (ja) * 1999-11-08 2014-01-09 Wisconsin Alumni Res Found ヒト胚性幹細胞の造血分化

Families Citing this family (192)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7410798B2 (en) * 2001-01-10 2008-08-12 Geron Corporation Culture system for rapid expansion of human embryonic stem cells
US6875607B1 (en) * 1998-11-09 2005-04-05 Es Cell International Pte Ltd Embryonic stem cells
WO2002064748A2 (en) * 2001-02-14 2002-08-22 Furcht Leo T Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof
US10638734B2 (en) 2004-01-05 2020-05-05 Abt Holding Company Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof
US7015037B1 (en) 1999-08-05 2006-03-21 Regents Of The University Of Minnesota Multiponent adult stem cells and methods for isolation
US8252280B1 (en) 1999-08-05 2012-08-28 Regents Of The University Of Minnesota MAPC generation of muscle
US20030129745A1 (en) 1999-10-28 2003-07-10 Robl James M. Gynogenetic or androgenetic production of pluripotent cells and cell lines, and use thereof to produce differentiated cells and tissues
US6602711B1 (en) * 2000-02-21 2003-08-05 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of making embryoid bodies from primate embryonic stem cells
US6607720B1 (en) 2000-09-05 2003-08-19 Yong-Fu Xiao Genetically altered mammalian embryonic stem cells, their living progeny, and their therapeutic application for improving cardiac function after myocardial infarction
US6534052B1 (en) 2000-09-05 2003-03-18 Yong-Fu Xiao Cardiac function comprising implantation of embryonic stem cell in which differentiation has been initiated
EP2206772A3 (en) 2000-12-06 2010-08-04 Robert J. Hariri Method of collecting placental stem cells
US20030032179A1 (en) 2000-12-06 2003-02-13 Hariri Robert J. Post-partum mammalian placenta, its use and placental stem cells therefrom
US7311905B2 (en) 2002-02-13 2007-12-25 Anthrogenesis Corporation Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells
JP2005503759A (ja) * 2001-01-24 2005-02-10 アメリカ合衆国 幹細胞の膵臓内分泌細胞への分化方法
US20030211605A1 (en) * 2001-05-01 2003-11-13 Lee Sang-Hun Derivation of midbrain dopaminergic neurons from embryonic stem cells
EP1421182A4 (en) 2001-07-24 2005-03-23 Es Cell Int Pte Ltd PROCESS FOR INDUCING DIFFERENTIATION OF STEM CELLS
US20030224345A1 (en) * 2001-08-24 2003-12-04 Advanced Cell Technology Screening assays for identifying differentiation-inducing agents and production of differentiated cells for cell therapy
DE10144326B4 (de) * 2001-09-10 2005-09-22 Siemens Ag Verfahren und System zur Überwachung eines Reifenluftdrucks
US6759244B2 (en) * 2001-11-08 2004-07-06 Art Institute Of New York And New Jersey, Inc. Composite blastocysts (CBs) from aggregates of dissociated cells of non-viable pre-embryos
EP1451300A4 (en) * 2001-11-09 2007-01-10 Artecel Sciences Inc METHODS AND COMPOSITIONS IN WHICH STROMAL CELLS ARE USED TO SUPPORT EMBRYONIC AND ADULT STEM CELLS
US20040224403A1 (en) * 2001-12-07 2004-11-11 Robarts Research Institute Reconstituting hematopoietic cell function using human embryonic stem cells
AU2016206280B2 (en) * 2001-12-07 2018-05-17 Asterias Biotherapeutics, Inc. Hematopoietic cells from human embryonic stem cells
AU2012258384B2 (en) * 2001-12-07 2016-04-21 Asterias Biotherapeutics, Inc. Hematopoietic cells from human embryonic stem cells
CN102008503B (zh) * 2001-12-07 2018-10-09 阿斯特利亚斯生物治疗股份公司 人胚胎干细胞衍生的造血细胞
US7799324B2 (en) * 2001-12-07 2010-09-21 Geron Corporation Using undifferentiated embryonic stem cells to control the immune system
WO2003060083A2 (en) * 2002-01-15 2003-07-24 Advanced Cell Technology, Inc. Cloning b and t lymphocytes
US20050170506A1 (en) * 2002-01-16 2005-08-04 Primegen Biotech Llc Therapeutic reprogramming, hybrid stem cells and maturation
US20050090004A1 (en) * 2003-01-16 2005-04-28 Sayre Chauncey B. Stem cell maturation for all tissue lines
US20030134422A1 (en) * 2002-01-16 2003-07-17 Sayre Chauncey Bigelow Stem cell maturation for all tissue lines
US7700090B2 (en) 2002-02-13 2010-04-20 Anthrogenesis Corporation Co-culture of placental stem cells and stem cells from a second source
US20040076617A1 (en) * 2002-03-18 2004-04-22 Lieber Jonathan Gregory Method for production of neutrophils and uses therefor
US7498171B2 (en) * 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
GB0210741D0 (en) * 2002-05-10 2002-06-19 Medical Res Council Methods of therapy
US20040091936A1 (en) * 2002-05-24 2004-05-13 Michael West Bank of stem cells for producing cells for transplantation having HLA antigens matching those of transplant recipients, and methods for making and using such a stem cell bank
EP1513928B1 (en) 2002-05-24 2019-08-21 Advanced Cell Technology, Inc. A bank of stem cells for producing cells for transplantation having hla antigens matching those of transplant recipients, and methods for making and using such a stem cell bank
CA2488013A1 (en) * 2002-05-30 2003-12-11 Celgene Corporation Methods of using jnk or mkk inhibitors to modulate cell differentiation and to treat myeloproliferative disorders and myelodysplastic syndromes
EP1534068A4 (en) * 2002-08-08 2006-08-23 Univ Georgia Res Found COMPOSITIONS AND METHODS FOR NEURONAL DIFFERENTIATION OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS
WO2004035748A2 (en) * 2002-10-16 2004-04-29 Advanced Cell Technology, Inc. Methods using gene trapped stem cells for marking pathways of stem cell differentiation and making and isolating differentiated cells
GB0224415D0 (en) * 2002-10-21 2002-11-27 Medical Res Council Compositions
CN1717177A (zh) 2002-11-26 2006-01-04 人类起源公司 细胞治疗剂、细胞治疗单元及其用于治疗的方法
WO2004050827A2 (en) * 2002-12-05 2004-06-17 Technion Research & Development Foundation Ltd. Cultured human pancreatic islets, and uses thereof
US20040110286A1 (en) * 2002-12-06 2004-06-10 The John P. Robarts Research Institute Method for making hematopoietic cells
AU2004212009B2 (en) * 2003-02-13 2010-07-29 Celularity Inc. Use of umbilical cord blood to treat individuals having a disease, disorder or condition
WO2004085616A2 (en) * 2003-03-24 2004-10-07 The Uab Research Foundation Regulation of self-renewal in stem cells
CA2520023C (en) 2003-04-08 2013-02-05 Yeda Research And Development Co. Ltd Stem cells having increased sensitivity to sdf-1 and methods of generating and using same
FR2853551B1 (fr) 2003-04-09 2006-08-04 Lab Francais Du Fractionnement Formulation stabilisante pour compositions d'immunoglobulines g sous forme liquide et sous forme lyophilisee
AU2004242091C1 (en) * 2003-05-07 2009-12-24 La Jolla Institute For Molecular Medicine Administration of hyaluronic acid to enhance the function of transplanted stem cells
JP2007508026A (ja) * 2003-10-16 2007-04-05 ザ・ユニバーシティ・コート・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・エディンバラ Ｅｓ細胞の自己再生および系統仕様の制御ならびにそのための培地
IL158868A0 (en) 2003-11-13 2004-05-12 Yeda Res & Dev Methods of generating and using stem cells enriched with immature primitive progenitor
AU2004291559B2 (en) * 2003-11-19 2008-10-16 Australian Stem Cell Centre Limited Methods for producing blood products from pluripotent cells in cell culture
US20070269412A1 (en) 2003-12-02 2007-11-22 Celavie Biosciences, Llc Pluripotent cells
JP4676442B2 (ja) * 2003-12-02 2011-04-27 セラヴィー バイオサイエンシズ エルエルシー 神経前駆細胞を増殖させるための組成物および方法
WO2005080551A2 (en) * 2004-02-12 2005-09-01 University Of Newcastle Upon Tyne Stem cells
US20050232905A1 (en) * 2004-03-26 2005-10-20 Yeh Edward T Use of peripheral blood cells for cardiac regeneration
US20050221482A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-06 Burt Richard K Methods and compositions for obtaining hematopoietic stem cells derived from embryonic stem cells and uses thereof
CA2563518C (en) * 2004-04-23 2014-09-02 Bioe, Inc. Multi-lineage progenitor cells
US7622108B2 (en) * 2004-04-23 2009-11-24 Bioe, Inc. Multi-lineage progenitor cells
JP2007536936A (ja) * 2004-05-14 2007-12-20 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー 幹細胞集団および使用方法
EP2267116B1 (en) 2004-07-13 2017-05-31 Asterias Biotherapeutics, Inc. Growth medium for primate embryonic stem cells
CA2504451A1 (en) * 2004-08-10 2006-02-10 Geron Corporation Dendritic cell vaccines for treating cancer made from embryonic stem cells
US8354277B2 (en) * 2004-10-12 2013-01-15 Technion Research & Development Foundation Ltd. Isolated primate embryonic cells derived from extended blastocysts
US20070077654A1 (en) * 2004-11-01 2007-04-05 Thomson James A Platelets from stem cells
MX2007005200A (es) * 2004-11-01 2007-05-11 Wisconsin Alumni Res Found Plaquetas a partir de celulas germinales.
WO2006073911A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-13 Stemlifeline, Inc. Methods and compositions relating to embryonic stem cell lines
WO2006073966A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-13 Stemlifeline, Inc. Methods and systems relating to embryonic stem cell lines
US8178349B2 (en) * 2005-02-09 2012-05-15 Burnham Institute For Medical Research Homogeneous neural precursor cells
US8071367B2 (en) 2005-05-04 2011-12-06 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Selecting, culturing and creating lineage committed hematopoietic stem cells
SE531979C2 (sv) * 2005-06-01 2009-09-22 Wisconsin Alumni Res Found Metod för att framställa dendritiska celler från mänskliga embryonala stamceller, samt odlingar framställda med metoden
US8034613B2 (en) 2005-06-01 2011-10-11 Wisconsin Alumni Research Foundation Multipotent lymphohematopoietic progenitor cells
EP1910518B1 (en) 2005-06-22 2019-05-08 Asterias Biotherapeutics, Inc. Differentiation of primate pluripotent stem cells to cardiomyocyte-lineage cells
CN107189980B (zh) 2005-06-22 2021-07-09 阿斯特利亚斯生物治疗股份公司 人胚胎干细胞的悬浮培养物
US20070041948A1 (en) * 2005-07-20 2007-02-22 Seoul National University Industry Foundation Method for culturing and proliferating hematopoietic stem cells and progenitor cells using human endometrial cells
AU2006304277B2 (en) 2005-10-13 2012-07-05 Celularity Inc. Immunomodulation using placental stem cells
US8129187B2 (en) 2005-12-13 2012-03-06 Kyoto University Somatic cell reprogramming by retroviral vectors encoding Oct3/4. Klf4, c-Myc and Sox2
US8278104B2 (en) 2005-12-13 2012-10-02 Kyoto University Induced pluripotent stem cells produced with Oct3/4, Klf4 and Sox2
EP4223769A3 (en) 2005-12-13 2023-11-01 Kyoto University Nuclear reprogramming factor
US20090227032A1 (en) 2005-12-13 2009-09-10 Kyoto University Nuclear reprogramming factor and induced pluripotent stem cells
KR101900809B1 (ko) 2005-12-29 2018-09-20 안트로제네시스 코포레이션 태반 줄기 세포 집단
WO2007121443A2 (en) * 2006-04-17 2007-10-25 Bioe, Inc. Differentiation of multi-lineage progenitor cells to respiratory epithelial cells
US8809052B2 (en) * 2006-08-28 2014-08-19 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of generating mature oligodendrocytes
US20080108044A1 (en) * 2006-11-08 2008-05-08 Deepika Rajesh In vitro differentiation of hematopoietic cells from primate embryonic stem cells
WO2008063675A2 (en) * 2006-11-24 2008-05-29 Regents Of The University Of Minnesota Endodermal progenitor cells
US7883698B2 (en) * 2007-01-17 2011-02-08 Maria Michejda Isolation and preservation of fetal hematopoietic and mesencymal system cells from non-controversial materials and/or tissues resulting from miscarriages and methods of therapeutic use
EP2687220A3 (en) 2007-02-12 2014-05-14 Anthrogenesis Corporation Treatment of inflammatory diseases using placental stem cells
JP2008307007A (ja) 2007-06-15 2008-12-25 Bayer Schering Pharma Ag 出生後のヒト組織由来未分化幹細胞から誘導したヒト多能性幹細胞
US9213999B2 (en) 2007-06-15 2015-12-15 Kyoto University Providing iPSCs to a customer
US9029147B2 (en) * 2007-06-15 2015-05-12 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for enhanced differentiation from embryonic stem cells
US20090029463A1 (en) * 2007-07-25 2009-01-29 Bioe, Inc. Differentiation of Multi-Lineage Progenitor Cells to Chondrocytes
KR20230065354A (ko) 2007-09-28 2023-05-11 셀룰래리티 인코포레이티드 인간 태반 관류액 및 인간 태반-유래 중간체 천연 킬러 세포를 사용한 종양 억제 방법
US9683232B2 (en) 2007-12-10 2017-06-20 Kyoto University Efficient method for nuclear reprogramming
AU2008286249B2 (en) 2007-12-10 2013-10-10 Kyoto University Efficient method for nuclear reprogramming
CA2722044C (en) 2008-04-30 2017-09-26 Sanbio, Inc. Neural regenerating cells with alterations in dna methylation
SG10201400329YA (en) 2008-05-02 2014-05-29 Univ Kyoto Method of nuclear reprogramming
CA2724839A1 (en) * 2008-05-21 2009-11-26 Bioe Llc Differentiation of multi-lineage progenitor cells to pancreatic cells
EP3539380A3 (en) 2008-08-20 2019-12-18 Celularity, Inc. Improved cell composition and methods of making the same
JP5950577B2 (ja) 2008-08-20 2016-07-13 アンスロジェネシス コーポレーション 単離胎盤細胞を使用した脳卒中の治療
ES2426241T3 (es) 2008-08-22 2013-10-22 Anthrogenesis Corporation Métodos y composiciones para el tratamiento de defectos óseos con poblaciones de células placentarias
WO2010059828A1 (en) 2008-11-19 2010-05-27 Anthrogenesis Corporation Amnion derived adherent cells
US20100209399A1 (en) * 2009-02-13 2010-08-19 Celavie Biosciences, Llc Brain-derived stem cells for repair of musculoskeletal system in vertebrate subjects
EP2420563A4 (en) 2009-02-24 2013-02-20 Kanazawa Medical University METHOD FOR THE DENUKLEATION OF NUCLEARED ERYTHROCYTES AND THE DEKULATION DERIVATIVES
WO2011005326A1 (en) 2009-07-09 2011-01-13 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for increased safety of stem cell-derived populations
NZ598457A (en) 2009-08-03 2014-06-27 Recombinetics Inc Methods and compositions for targeted gene modification
US8415155B2 (en) 2009-10-19 2013-04-09 Cellular Dynamics International, Inc. Cardiomyocyte production
AU2011209819A1 (en) 2010-01-26 2012-08-16 Anthrogenesis Corporation Treatment of bone-related cancers using placental stem cells
TW202011974A (zh) 2010-04-07 2020-04-01 美商安瑟吉納西斯公司 利用胎盤幹細胞之血管新生
JP2013523823A (ja) 2010-04-08 2013-06-17 アントフロゲネシス コーポレーション 胎盤幹細胞を用いるサルコイドーシスの治療
WO2011159797A2 (en) 2010-06-15 2011-12-22 Cellular Dynamics International, Inc. A compendium of ready-built stem cell models for interrogation of biological response
AU2011279201B2 (en) 2010-07-13 2016-01-21 Celularity Inc. Methods of generating natural killer cells
CA2806858C (en) 2010-08-04 2021-06-15 Cellular Dynamics International, Inc. Reprogramming immortalized b cells
CA2838330C (en) 2010-08-23 2021-01-26 President And Fellows Of Harvard College Optogenetic probes for measuring membrane potential
EP2625264B1 (en) 2010-10-08 2022-12-07 Terumo BCT, Inc. Methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system with control conditions
CA2814860C (en) 2010-10-22 2020-08-25 Biotime Inc. Methods of modifying transcriptional regulatory networks in stem cells
AR093183A1 (es) 2010-12-31 2015-05-27 Anthrogenesis Corp Aumento de la potencia de celulas madre de placenta usando moleculas de arn moduladoras
CA2829006A1 (en) 2011-03-04 2012-09-13 The Regents Of The University Of California Locally released growth factors to mediate motor recovery after stroke
CA2829804A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Geron Corporation Enriched populations of cardiomyocyte lineage cells from pluripotent stem cells
CA2832356C (en) 2011-04-06 2017-12-19 Sanbio, Inc. Methods and compositions for modulating peripheral immune function
AU2012262273B2 (en) 2011-06-01 2017-09-14 Celularity Inc. Treatment of pain using placental stem cells
US10865383B2 (en) 2011-07-12 2020-12-15 Lineage Cell Therapeutics, Inc. Methods and formulations for orthopedic cell therapy
US20130058905A1 (en) 2011-08-23 2013-03-07 Igor Slukvin Angiohematopoietic Progenitor Cells
WO2013055476A1 (en) 2011-09-09 2013-04-18 Anthrogenesis Corporation Treatment of amyotrophic lateral sclerosis using placental stem cells
EP2594295A1 (en) 2011-11-16 2013-05-22 Servicio Andaluz De Salud Nerve implants based on a compacted biomaterial containing cells
US9447378B2 (en) 2012-04-27 2016-09-20 Massachusetts Institute Of Technology Method for differentiating human embryonic stem cells into β-cells for the treatment of type I diabetes
JP5432322B2 (ja) 2012-05-08 2014-03-05 株式会社大塚製薬工場 トレハロース含有肺塞栓形成予防用哺乳動物細胞懸濁液
EP2716751A1 (en) 2012-10-08 2014-04-09 BioTime, Inc. Differentiated progeny of clonal progenitor cell lines
US9763983B2 (en) 2013-02-05 2017-09-19 Anthrogenesis Corporation Natural killer cells from placenta
EP2987852A4 (en) 2013-04-17 2016-09-07 Nissan Chemical Ind Ltd MEDIA COMPOSITION AND METHOD FOR THE PRODUCTION OF ERYTHROCYTES THEREWITH
US10961531B2 (en) 2013-06-05 2021-03-30 Agex Therapeutics, Inc. Compositions and methods for induced tissue regeneration in mammalian species
US9816070B2 (en) 2013-06-14 2017-11-14 Massachusetts Institute Of Technology Articles and methods for stem cell differentiation
HK1220225A1 (zh) 2013-06-28 2017-04-28 株式会社大塚制药工场 含有海藻糖及葡聚糖的哺乳动物细胞移植用溶液
EP3068866B1 (en) 2013-11-16 2018-04-25 Terumo BCT, Inc. Expanding cells in a bioreactor
CN103740642A (zh) * 2014-01-28 2014-04-23 娄彩玲 一种生产人红细胞的方法
US11078462B2 (en) 2014-02-18 2021-08-03 ReCyte Therapeutics, Inc. Perivascular stromal cells from primate pluripotent stem cells
CN106232800B (zh) 2014-03-25 2020-07-03 泰尔茂比司特公司 介质的被动替代
US10240127B2 (en) 2014-07-03 2019-03-26 ReCyte Therapeutics, Inc. Exosomes from clonal progenitor cells
EP3198006B1 (en) 2014-09-26 2021-03-24 Terumo BCT, Inc. Scheduled feed
JP6682446B2 (ja) 2014-10-24 2020-04-15 大日本住友製薬株式会社 網膜組織の製造方法
US10286009B2 (en) * 2015-05-16 2019-05-14 Asterias Biotherapeutics, Inc. Pluripotent stem cell-derived oligodendrocyte progenitor cells for the treatment of spinal cord injury
WO2017004592A1 (en) 2015-07-02 2017-01-05 Terumo Bct, Inc. Cell growth with mechanical stimuli
KR102675213B1 (ko) 2015-09-08 2024-06-13 스미토모 파마 가부시키가이샤 망막 색소 표피 세포의 제조 방법
CA3202332A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Agex Therapeutics, Inc. Methods for the re-derivation of diverse pluripotent stem cell-derived brown fat cells
EP3423158B1 (en) 2016-02-24 2023-11-15 The Rockefeller University Embryonic cell-based therapeutic candidate screening systems, models for huntington's disease and uses thereof
EP3436567A4 (en) 2016-03-30 2019-10-30 Asterias Biotherapeutics, Inc. COMPOSITIONS FROM OLIGOD DRO CYTOMATOR CELLARS
EP3464565A4 (en) 2016-05-25 2020-01-01 Terumo BCT, Inc. CELL EXPANSION
US11104874B2 (en) 2016-06-07 2021-08-31 Terumo Bct, Inc. Coating a bioreactor
US11685883B2 (en) 2016-06-07 2023-06-27 Terumo Bct, Inc. Methods and systems for coating a cell growth surface
EP3564356A4 (en) 2016-11-04 2020-05-06 The University Of Tokyo SOLUTION FOR CRYOPRESERVATION, CRYOGENIZATION PRODUCT, AND METHOD FOR CRYOPRESERVATION OF ANIMAL CELLS OR ANIMAL TISSUES
EP3546571A4 (en) 2016-11-25 2020-06-03 Riken CELL POPULATION FOR TRANSPLANTATION AND METHOD FOR PRODUCING IT
JP6353615B1 (ja) 2016-12-14 2018-07-04 株式会社大塚製薬工場 哺乳動物細胞凍結保存液
JP7007686B2 (ja) 2017-03-08 2022-01-25 大日本住友製薬株式会社 網膜色素上皮細胞の製造方法
US11624046B2 (en) 2017-03-31 2023-04-11 Terumo Bct, Inc. Cell expansion
US12234441B2 (en) 2017-03-31 2025-02-25 Terumo Bct, Inc. Cell expansion
WO2018184028A2 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Terumo Bct, Inc. Cell expansion
CN110945115A (zh) 2017-07-20 2020-03-31 国立研究开发法人理化学研究所 神经组织的保存方法
JP7150281B2 (ja) 2017-07-20 2022-10-11 国立研究開発法人理化学研究所 連続的な上皮を含む網膜組織の成熟化方法
WO2019050015A1 (ja) 2017-09-08 2019-03-14 国立研究開発法人理化学研究所 網膜組織を含む細胞凝集体及びその製造方法
CA3075883A1 (en) 2017-09-14 2019-03-21 Riken Method for amplifying cone photoreceptors or rod photoreceptors using dorsalization signal transmitter or ventralization signal transmitter
EP3683306A4 (en) 2017-09-14 2021-06-09 Riken METHOD FOR MANUFACTURING RETINAGE TISSUE
JP7297674B2 (ja) 2017-11-24 2023-06-26 住友化学株式会社 下垂体組織を含む細胞塊の製造方法及びその細胞塊
EP3715452A4 (en) 2017-11-24 2021-08-18 Sumitomo Chemical Company, Limited METHOD OF MANUFACTURING A CELL MASS WITH NEURAL CELLS / TISSUE AND NON-NEURAL EPITHELIAL TISSUE AND CELL MASS FROM THEM
JP7414530B2 (ja) 2018-02-19 2024-01-16 住友ファーマ株式会社 細胞凝集体、細胞凝集体の混合物及びそれらの製造方法
CA3110464A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Sumitomo Chemical Company, Limited Cell cluster including olfactory neuron or precursor cell thereof, and method for producing same
KR20210068050A (ko) 2018-09-19 2021-06-08 리니지 셀 테라퓨틱스, 인크. 동적 현탁 배양에서 만능 줄기 세포를 분화시키는 방법
KR20210045443A (ko) 2018-09-28 2021-04-26 가부시기가이샤오오쓰까세이야꾸고오죠오 아카보즈 또는 스타키오스를 포함하는 포유동물 세포 보존용 액
JP7410518B2 (ja) 2018-11-15 2024-01-10 Jsr株式会社 脳オルガノイドの製造方法
JP7446242B2 (ja) 2018-12-20 2024-03-08 住友化学株式会社 胚型赤芽球を含む細胞集団及びその製造方法、細胞培養組成物並びに化合物試験法
CA3122791A1 (en) 2018-12-28 2020-07-02 Riken Therapeutic drug for disease accompanied by disorders in retinal cells or retinal tissue
WO2020154533A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Asterias Biotherapeutics, Inc. Dorsally-derived oligodendrocyte progenitor cells from human pluripotent stem cells
WO2020184720A1 (ja) 2019-03-13 2020-09-17 大日本住友製薬株式会社 移植用神経網膜の品質を評価する方法及び移植用神経網膜シート
JP6830294B1 (ja) 2019-04-26 2021-02-17 株式会社大塚製薬工場 トレハロースを含む哺乳動物細胞保存用液
CN113766937B (zh) 2019-04-26 2022-08-30 国立研究开发法人理化学研究所 包含神经视网膜、视网膜色素上皮细胞和水凝胶的复合体及其制造方法
US12533383B2 (en) 2019-09-06 2026-01-27 Keio University Method for producing cell aggregate including glial progenitor cells
CA3162268A1 (en) 2019-11-20 2021-05-25 Sumitomo Pharma Co., Ltd. Method for freezing neural cells
EP4063495A4 (en) 2019-11-20 2023-12-27 Sumitomo Pharma Co., Ltd. METHOD FOR FREEZING CELL AGGREGATE
US20230313133A1 (en) 2020-09-11 2023-10-05 Riken Complex Containing Neural Retina-Containing Cell Aggregates and Matrix, and Method for Manufacturing Same
EP4201428A4 (en) 2020-09-11 2024-09-11 Sumitomo Pharma Co., Ltd. MEDIUM FOR TISSUE INTENDED FOR TRANSPLANTATION
US20240158742A1 (en) 2021-03-09 2024-05-16 Riken Method for producing hypoimmunogenic retinal pigment epithelial cells
WO2022204315A1 (en) 2021-03-23 2022-09-29 Terumo Bct, Inc. Cell capture and expansion
IL309344A (en) 2021-06-17 2024-02-01 Univ Kyoto Method for producing cerebral cortical cell preparation derived from human pluripotent stem cells
US20230078230A1 (en) 2021-09-13 2023-03-16 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Methods for the production of committed cardiac progenitor cells
WO2023049826A1 (en) 2021-09-23 2023-03-30 President And Fellows Of Harvard College Genetically encoded voltage indicators and uses thereof
US20240400983A1 (en) 2021-09-30 2024-12-05 Sumitomo Pharma Co., Ltd. Cell aggregate including pituitary hormone-producing cells and method for producing same
JPWO2023054396A1 (ja) 2021-09-30 2023-04-06
KR20240103018A (ko) 2021-11-19 2024-07-03 고쿠리쓰 겐큐 가이하쓰 호징 리가가쿠 겐큐소 시트상 망막 조직의 제조 방법
WO2023127824A1 (ja) 2021-12-27 2023-07-06 住友ファーマ株式会社 神経堤細胞の培養方法及び製造方法
US12152699B2 (en) 2022-02-28 2024-11-26 Terumo Bct, Inc. Multiple-tube pinch valve assembly
US20250188412A1 (en) 2022-03-16 2025-06-12 Sumitomo Pharma Co., Ltd. Transplantation medium
WO2023199641A1 (ja) 2022-04-12 2023-10-19 株式会社大塚製薬工場 哺乳動物細胞凍結保存液
USD1099116S1 (en) 2022-09-01 2025-10-21 Terumo Bct, Inc. Display screen or portion thereof with a graphical user interface for displaying cell culture process steps and measurements of an associated bioreactor device
JP2025532957A (ja) 2022-09-30 2025-10-03 フジフィルム セルラー ダイナミクス，インコーポレイテッド 心臓線維芽細胞の作製方法
JPWO2024172043A1 (ja) 2023-02-14 2024-08-22
EP4685230A1 (en) 2023-03-20 2026-01-28 Kyoto University Method for producing neural organoids and use of same
JPWO2024204596A1 (ja) 2023-03-29 2024-10-03

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5635386A (en) * 1989-06-15 1997-06-03 The Regents Of The University Of Michigan Methods for regulating the specific lineages of cells produced in a human hematopoietic cell culture
CZ307995A3 (en) * 1993-05-24 1996-10-16 Immunex Corp Ligands for flt3 receptors
US5914268A (en) 1994-11-21 1999-06-22 National Jewish Center For Immunology & Respiratory Medicine Embryonic cell populations and methods to isolate such populations
US5843780A (en) 1995-01-20 1998-12-01 Wisconsin Alumni Research Foundation Primate embryonic stem cells
IL128348A (en) 1996-08-19 2008-08-07 Univ Massachusetts Method of producing embryonic or stem like cell lines by transplantation of cell nuclei from animal or mammal, such cells and uses thereof
US6280718B1 (en) * 1999-11-08 2001-08-28 Wisconsin Alumni Reasearch Foundation Hematopoietic differentiation of human pluripotent embryonic stem cells

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN5002011775; ＬＩ　ＦＥＩ: ＢＬＯＯＤ Ｖ９２　Ｎ１０, 19981115, Ｐ３６８Ａ *
JPN6012029930; Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ　Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．， Ｖｏｌ．３８, 1998, ｐ．１３３-１６５ *
JPN6012029932; ＢＩＯＴＨＥＲＡＰＹ Ｖｏｌ．４，　Ｎｏ．３, 1990, ｐ．３５９-３６３ *
JPN6015004977; Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｖｏｌ．２８２, 1998, ｐ．１１４５-１１４７

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014000096A (ja) * 1999-11-08 2014-01-09 Wisconsin Alumni Res Found ヒト胚性幹細胞の造血分化

Also Published As

Publication number Publication date
AU6940400A (en) 2001-06-06
IL149387A (en) 2008-08-07
US6613568B2 (en) 2003-09-02
US20020015694A1 (en) 2002-02-07
IS6373A (is) 2002-05-06
KR20070047850A (ko) 2007-05-07
CN1228443C (zh) 2005-11-23
US20040043484A1 (en) 2004-03-04
IL149387A0 (en) 2002-11-10
CN1387565A (zh) 2002-12-25
NO20022180D0 (no) 2002-05-07
CA2390281A1 (en) 2001-05-17
CA2390281C (en) 2005-10-25
SE526490C2 (sv) 2005-09-27
US6280718B1 (en) 2001-08-28
SE0201328D0 (sv) 2002-05-03
BR0015374A (pt) 2002-12-24
JP2003513664A (ja) 2003-04-15
EP1228194A1 (en) 2002-08-07
KR20030022766A (ko) 2003-03-17
WO2001034776A1 (en) 2001-05-17
JP2014000096A (ja) 2014-01-09
AU784928B2 (en) 2006-07-27
NO20022180L (no) 2002-06-03
SE0201328L (sv) 2002-07-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2010042011A (ja) ヒト胚性幹細胞の造血分化
US20110312091A1 (en) Pluripotent stem cells, method for preparation thereof and uses thereof
JPWO2008056779A1 (ja) 霊長類動物胚性幹細胞の培養及び継代方法、並びにその分化誘導方法
EP1458854A2 (en) Cellular compositions and methods of making and using them
US20230374458A1 (en) Compositions and methods for generating human yolk sac-like hematopoietic cells
WO2012133948A1 (ja) 生体組織から単離できるssea-3陽性の多能性幹細胞を含む他家移植用細胞治療用組成物
JP2025511968A (ja) 人工多能性幹細胞から製造される骨髄オルガノイド及びこれらのオルガノイドの使用
Miao et al. Megakaryocyte–bone marrow stromal cell aggregates demonstrate increased colony formation and alkaline phosphatase expression in vitro
US20250297222A1 (en) Xeno-free generation of tissue-specific progenitor cells
WO2005097979A2 (en) Methods and compositions for obtaining hematopoietic stem cells derived from embryonic stem cells and uses thereof
Nakatsuka et al. Identification and characterization of lineage− CD45− Sca-1+ VSEL phenotypic cells residing in adult mouse bone tissue
CN113557296A (zh) 造血干细胞的扩增
KR20120006386A (ko) 1기 태반조직 유래 줄기세포 및 이를 함유하는 세포치료제
KR100677054B1 (ko) 제대혈로부터 다분화능 전구세포를 분리하여 배양하는 방법 및 이의 분화 유도방법
Gronthos Features of mesenchymal stem cells
Kelley et al. Collection and Expansion of Stem Cells
Bianco et al. Cell source
JPWO1999003980A1 (ja) Ａｇｍ領域由来ストローマ細胞
HK1199905B (en) Culturing of mesenchymal stem cells
HK1199905A1 (en) Culturing of mesenchymal stem cells

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20120614

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20120914

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20120920

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20121214

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20130605

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20150511