JP2008120749A - ネコブセンチュウ防除剤および防除方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】有害センチュウであるネコブセンチュウに対して高い抗センチュウ作用を有し、かつ、有益センチュウである自活性センチュウの活動や作物の生長を抑制しないような植物抽出物を有効成分とするネコブセンチュウの防除剤およびこれを利用したネコブセンチュウの防除方法を提供すること。
【解決手段】キク科植物の抽出物を有効成分とすることを特徴とするネコブセンチュウ防除剤およびそれを利用したネコブセンチュウ防除方法。
【選択図】なし
【解決手段】キク科植物の抽出物を有効成分とすることを特徴とするネコブセンチュウ防除剤およびそれを利用したネコブセンチュウ防除方法。
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Description
本発明はネコブセンチュウ防除剤およびこれを利用するネコブセンチュウ防除方法に関する。
ネコブセンチュウは７００種を越える植物に寄生し、生育阻害や収量低下を引き起こすため世界的に問題となっている重要害虫である。これら有害センチュウの防除は一般的に化学合成農薬を用いて行われている。
農薬は即効性があり高い防除効果を発揮することから有害センチュウの有効な防除法の１つであるが、地球環境や人畜、土壌生態系に与える影響、さらには食の安全に対する配慮から、可能な限り化学農薬の使用を低減するために環境保全型防除技術の研究がなされている。環境保全型防除技術には、植物の生物機能を活用した防除法があり、耕種的および生物的な方法が幾つか知られている。なかでも植物成分を用いた防除法としてセンダン科アザディラクタ属のニーム（学名：Azadirachta indica Juss.）の抽出液を利用する方法が知られている（非特許文献１、２）。この方法はニーム抽出液に植物の種子あるいは根を浸漬することで抽出液中に含まれる有効成分を浸透させ、ネコブセンチュウ被害を軽減するものである。
しかし、ニーム抽出液については単に根こぶ形成の抑制と土壌中の幼虫数を調査したのみであり、効果的な防除を期待するのであれば、孵化に及ぼす影響、忌避作用、抵抗性誘導効果さらには、有益センチュウである自活性センチュウ類や作物の生長に及ぼす影響についても評価を行い総合的に高い効果を示す植物種を選抜する必要がある。
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従って、本発明は有害センチュウであるネコブセンチュウに対して高い抗センチュウ作用を有し、かつ、有益センチュウである自活性センチュウの活動や作物の生長を抑制しないような植物抽出物を有効成分とするネコブセンチュウ防除剤およびこれを利用したネコブセンチュウ防除方法を提供することを課題とするものである。
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行ったところ、沖縄に自生する未利用植物のうち、特定の植物の抽出物が上記課題を解決することを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明はキク科植物の抽出物を有効成分とすることを特徴とするネコブセンチュウ防除剤である。
また、本発明は土壌中に上記防除剤を灌注することを特徴とするネコブセンチュウ防除方法である。
更に、本発明は植物の根または種子を上記防除剤に浸漬することを特徴とするネコブセンチュウ防除方法である。
本発明のネコブセンチュウ防除剤は、その有効成分である植物抽出物自体が直接ネコブセンチュウに作用し、不動化等の運動阻害、致死、孵化阻害ならびに忌避等の抗センチュウ効果を発揮するものである。そしてこれと共に、植物の抵抗性を誘導することで間接的にネコブセンチュウに対する防除効果を発揮させることもできる。また、前記防除剤は有益センチュウである自活性センチュウの活動や作物の生長を抑制しない優れたものである。
従って、本発明のネコブセンチュウ防除剤は、優れた抗センチュウ作用と安全性を有しているので、種々の作物に対する環境保全型防除技術として用いることができる。
本発明のネコブセンチュウ防除剤（以下、「本発明防除剤」という）は、キク科植物の抽出物を有効成分とするものである。本発明防除剤において有効成分として用いられる抽出物は、キク科植物から得られるものである。抽出物を得るために用いられるキク科植物としては、特に制限はないが、例えば、センダングサ属、ヒメジョオン属およびムカシヨモギ属から選ばれるキク科植物の１種または２種以上が挙げられる。具体的にキク科センダングサ属の植物としては、コセンダングサ（Bidens pilosa L.）やその変種または品種が挙げられ、具体的に変種としてはアワユキセンダングサ（Bidens pilosa.var.radiata Scherff）、タチアワユキセンダングサ（Bidens pilosa L. var. radiata Sch. Bip.）等が挙げられ、品種としてはハイアワユキセンダングサ（Bidens pilosa L. var.radiata Scherff. f.decumbens Scherff.）等が挙げられる。また、キク科ヒメジョオン属の植物としてはヒメジョオン（Stenactis annuus (L.) Cass.）等が挙げられる。更に、キク科ムカシヨモギ属の植物としては、アレチノギク（Erigeron bonariensis L.）、オオアレチノギク（Erigeron sumatrensis Retz.）等が挙げられる。上記したキク科植物の中でもアワユキセンダングサ、ヒメジョオンおよびオオアレチノギクが好ましく、特にアワユキセンダングサが好ましい。
上記したキク科植物から抽出物を得る方法としては、特に制限されるものではなく、通常植物から抽出物を得る方法のいずれもが利用できる。例えば、溶媒を用いた方法であれば、次の方法により抽出物を得ることができる。まず、採取直後の生のまたは乾燥機等により乾燥させたキク科植物の各種部位（花、葉、茎、根または全草、好ましくは根を除く全草部分、より好ましくは葉）をそのまま又は裁断、粉砕あるいは細紛した後、水や水と低級アルコールとの混合溶液等の水性溶媒をキク科植物の質量の５〜２５０倍程度添加し、常温〜溶媒の沸点付近で１０分〜数日程度抽出を行い、濾過して植物抽出物を得る。
具体的に水性溶媒として水を用いる場合には、生または乾燥させたキク科植物の花、葉、茎、根または全草の１０ｇを細かく裁断し、それを１００ｍｌのビーカーに入れた後、蒸留水５０ｍｌを入れ、３０分間煮沸状態を維持し、抽出することが好ましい。
また、水性溶媒として水を３０質量％（以下、単に「％」という）およびエタノールを７０％からなる混合溶液を用いる場合には、生または乾燥させたキク科植物の花、葉、茎、根または全草の２ｇを細かく裁断し、それを５０ｍｌの三角フラスコに入れ、前記混合溶液を３０ｍｌ入れ、２５℃で１０日間静置して抽出することが好ましい。
上記のようにしてキク科植物から抽出された抽出物は、そのままの状態で使用することもできるが、必要に応じ、その効力に影響のない範囲で更に濾過等の精製処理を加えても良い。このような精製処理としては、通常の手段を任意に選択して行えば良く、例えば濾紙等を用いた濾過等が挙げられる。
本発明防除剤は、上記のようにして得られた抽出物を有効成分とし、そのまま、あるいは希釈したり、公知の防除剤に用いられる担体と組合せることなどにより製剤化することができる。
斯くして得られる本発明防除剤は、ネコブセンチュウ、例えば、ティレンクス（Tylenchida）目メロイドギネ（Meloidogynidae）科の、アレナリアネコブセンチュウ（Meloidogyne arenaria(Neal)Chitwood）、サツマイモネコブセンチュウ（Meloidogyne incognita Cofoid et White）、キタネコブセンチュウ（Meloidogynehapla Chitwood）、ジャワネコブセンチュウ（Meloidogyne java(Treub）Chitwood）等のネコブセンチュウ、好ましくはアレナリアネコブセンチュウおよびサツマイモネコブセンチュウに不動化等の運動阻害、致死、孵化阻害ならびに忌避等の抗センチュウ作用を有する。また、この防除剤はプレクタス エスピー（Plectus sp.）、ケファロブス エスピー（Cephalobus sp.）、ラブディティス エスピー（Rhabditis sp.）、パナグロライムス エスピー（Panagrolaimus sp.）等の自活性センチュウには抗センチュウ作用を示さない。更に、この防除剤は作物の生長を抑制しない。
従って、本発明防除剤は、上記したネコブセンチュウが寄生する種々の植物、例えば、ツルレイシ、キュウリ、メロン、スイカ、カボチャ等のウリ科、ナス、トマト、トウガラシ、ピーマン、ジャガイモ等ナス科、インゲンマメ等のマメ科等の植物への被害を抑制することができる。
具体的に本発明防除剤を用いた上記植物へのネコブセンチュウの防除は、例えば、本発明防除剤を、土壌中に灌注したり、前記防除剤に植物の根や種子を浸漬すること等により行うことができる。
具体的に、本発明防除剤を土壌中に灌注するには、ジョロや灌水装置を用いて本発明防除剤を植物１株あたり栽培期間中に４０ｍｌ／１回を生育状況等を考慮しながら１〜９回程度灌注すればよい。本発明防除剤を土壌中に灌注する場合、本発明防除剤には乾燥したキク科植物の質量の５倍〜２５０倍の溶媒で抽出された抽出物が含有されていることが好ましい。
また、本発明防除剤に植物の根や種子を浸漬するには、本発明防除剤を容器に入れ、それに根や種子全体を３０〜６０分程度浸漬すればよい。本発明防除剤に植物の根や種子を浸漬する場合、本発明防除剤には、乾燥したキク科植物の質量の５０倍〜１００倍の溶媒で抽出された抽出物が含有されていることが好ましい。
上記のような方法により、上記したネコブセンチュウが寄生する種々の植物への被害を抑制することができる。
以下に実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら制限されるものではない。
本明細書の実施例において供試されたセンチュウは以下のようにして得られたものを用いた。
＜植物寄生性センチュウ＞
・サツマイモネコブセンチュウ（Meloidogyne incognita Cofoid et White）
滅菌水を入れたシャーレにキムワイプを入れ、沖縄県中頭郡うるま市与那城西原の原寄
生ナスから採取した卵のうを置き、２５℃のインキュベーターで孵化させ、孵化した２
期幼虫をパスツールピペットで回収し、ミニトマト「ちびっこ」（Lycopersicum esculentum Mill.）に接種し、増殖させたサツマイモネコブセンチュウの２期幼虫を用いた。
・アレナリアネコブセンチュウ（Meloidogyne arenaria (Neal) Chitwood）
九州沖縄農業研究センター（〒８６１−１１９２ 熊本県合志市須屋２４２１）の岩堀英晶氏から分譲して頂いたセンチュウ汚染土壌にミニトマトを植え、寄生させた後、上記と同様に卵のうを採取し、孵化させた２期幼虫をパスツールピペットで回収し、トマト「ちびっこ」に接種し、増殖させたアレナリアネコブセンチュウの２期幼虫を用いた。
＜植物寄生性センチュウ＞
・サツマイモネコブセンチュウ（Meloidogyne incognita Cofoid et White）
滅菌水を入れたシャーレにキムワイプを入れ、沖縄県中頭郡うるま市与那城西原の原寄
生ナスから採取した卵のうを置き、２５℃のインキュベーターで孵化させ、孵化した２
期幼虫をパスツールピペットで回収し、ミニトマト「ちびっこ」（Lycopersicum esculentum Mill.）に接種し、増殖させたサツマイモネコブセンチュウの２期幼虫を用いた。
・アレナリアネコブセンチュウ（Meloidogyne arenaria (Neal) Chitwood）
九州沖縄農業研究センター（〒８６１−１１９２ 熊本県合志市須屋２４２１）の岩堀英晶氏から分譲して頂いたセンチュウ汚染土壌にミニトマトを植え、寄生させた後、上記と同様に卵のうを採取し、孵化させた２期幼虫をパスツールピペットで回収し、トマト「ちびっこ」に接種し、増殖させたアレナリアネコブセンチュウの２期幼虫を用いた。
実 施 例 １
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対する植物抽出物の効果（１）：
（１）植物抽出物の製造
採取直後の、表１に示す各植物の全草２ｇをそれぞれ容器に入れ、そこに３０％の水および７０％のエタノールの混合液（以下、「７０％エタノール」という）を１５ｍｌ添加し、２５℃で１０日間静置してアルコール抽出物（生）を製造した。また、表１に示す各植物の全草を採取後、乾燥機を用い、９０℃で１時間乾燥させたものについてもアルコール抽出物（乾燥）を製造した。これらのアルコール抽出物の０.１ｍｌを以下の実験に用いた。
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対する植物抽出物の効果（１）：
（１）植物抽出物の製造
採取直後の、表１に示す各植物の全草２ｇをそれぞれ容器に入れ、そこに３０％の水および７０％のエタノールの混合液（以下、「７０％エタノール」という）を１５ｍｌ添加し、２５℃で１０日間静置してアルコール抽出物（生）を製造した。また、表１に示す各植物の全草を採取後、乾燥機を用い、９０℃で１時間乾燥させたものについてもアルコール抽出物（乾燥）を製造した。これらのアルコール抽出物の０.１ｍｌを以下の実験に用いた。
（２）サツマイモネコブセンチュウの不動化率の測定
上記（１）で製造した各植物から得られたアルコール抽出物（生および乾燥）を、１ｍｌ容量のメスピペットを使って、５ｍｌ容量の滅菌済小型試験管に０.１ｍｌ添加し、完全に乾燥するまでクリーンベンチ内で１〜２日間風乾させた。その試験管に１ｍｌピペットでサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫懸濁液（１００頭／０.１ｍｌ）を添加し、７日後に不動化した２期幼虫を計数した。実験は５反復行った。不動化率は試験に使用したサツマイモネコブセンチュウのうち、不動化（動かなくなった）したサツマイモネコブセンチュウの割合である。各植物から得られたアルコール抽出物のサツマイモネコブセンチュウの不動化率を表１に示した。
上記（１）で製造した各植物から得られたアルコール抽出物（生および乾燥）を、１ｍｌ容量のメスピペットを使って、５ｍｌ容量の滅菌済小型試験管に０.１ｍｌ添加し、完全に乾燥するまでクリーンベンチ内で１〜２日間風乾させた。その試験管に１ｍｌピペットでサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫懸濁液（１００頭／０.１ｍｌ）を添加し、７日後に不動化した２期幼虫を計数した。実験は５反復行った。不動化率は試験に使用したサツマイモネコブセンチュウのうち、不動化（動かなくなった）したサツマイモネコブセンチュウの割合である。各植物から得られたアルコール抽出物のサツマイモネコブセンチュウの不動化率を表１に示した。
（３）結果
表１より、キク科植物のアワユキセンダングサ、ヒメジョオン、オオアレチノギクのアルコール抽出物（生および乾燥のいずれも）は、サツマイモネコブセンチュウを高い割合で不動化することがわかった。
表１より、キク科植物のアワユキセンダングサ、ヒメジョオン、オオアレチノギクのアルコール抽出物（生および乾燥のいずれも）は、サツマイモネコブセンチュウを高い割合で不動化することがわかった。
実 施 例 ２
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対する植物抽出物の効果（２）：
採取直後の、表２に示す各植物の根を除く全草部分１０ｇをビーカーに入れ、それに蒸留水を５０ｍｌ添加した。次いで、これを３０分間煮沸して煮沸抽出物（生）を製造した。また、採取後の表２に示す各植物の根を除く全草部分を乾燥機で９０℃で１時間乾燥させたものについても上記と同様に煮沸抽出物（乾燥）を製造した。これらの煮沸抽出物をそれぞれ蒸留水で１／１０または１／２０に希釈したものを用いて、実施例１の（２）と同様にしてサツマイモネコブセンチュウの不動化率を測定した。
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対する植物抽出物の効果（２）：
採取直後の、表２に示す各植物の根を除く全草部分１０ｇをビーカーに入れ、それに蒸留水を５０ｍｌ添加した。次いで、これを３０分間煮沸して煮沸抽出物（生）を製造した。また、採取後の表２に示す各植物の根を除く全草部分を乾燥機で９０℃で１時間乾燥させたものについても上記と同様に煮沸抽出物（乾燥）を製造した。これらの煮沸抽出物をそれぞれ蒸留水で１／１０または１／２０に希釈したものを用いて、実施例１の（２）と同様にしてサツマイモネコブセンチュウの不動化率を測定した。
表２より、アワユキセンダングサおよびヒメジョオンの煮沸抽出物（生および乾燥のいずれも）は、１／１０や１／２０に希釈した後のものであってもサツマイモネコブセンチュウを高い割合で不動化することがわかった。
実 施 例 ３
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対するアワユキセンダングサの部位別抽出
物の効果：
表３に示すアワユキセンダングサの各部位の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）を原液のままの状態および１／１０または１／５０に蒸留水で希釈した。これらを、１ｍｌ容量のメスピペットを使って、５ｍｌ容量の滅菌済小型試験管に０.１ｍｌ添加し、完全に乾燥するまでクリーンベンチ内で１〜２日間風乾させた。その試験管にマイクロピペットでサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫懸濁液（１００頭／０.１ｍｌ）を添加し、放置した。７日経過後に、各試験間からセンチュウを含む液をパスツールピペットで採取し、滅菌水に入れ別の試験管に移した。試験管ミキサーで撹拌後、２５℃条件下に置き、不動化したセンチュウを致死と見なし、致死した２期幼虫を計数した。致死率は試験に使用したサツマイモネコブセンチュウのうち、致死したサツマイモネコブセンチュウの割合で示した。アワユキセンダングサの各部位の煮沸抽出物（乾燥）のサツマイモネコブセンチュウの致死率も表３に示した。
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫に対するアワユキセンダングサの部位別抽出
物の効果：
表３に示すアワユキセンダングサの各部位の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）を原液のままの状態および１／１０または１／５０に蒸留水で希釈した。これらを、１ｍｌ容量のメスピペットを使って、５ｍｌ容量の滅菌済小型試験管に０.１ｍｌ添加し、完全に乾燥するまでクリーンベンチ内で１〜２日間風乾させた。その試験管にマイクロピペットでサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫懸濁液（１００頭／０.１ｍｌ）を添加し、放置した。７日経過後に、各試験間からセンチュウを含む液をパスツールピペットで採取し、滅菌水に入れ別の試験管に移した。試験管ミキサーで撹拌後、２５℃条件下に置き、不動化したセンチュウを致死と見なし、致死した２期幼虫を計数した。致死率は試験に使用したサツマイモネコブセンチュウのうち、致死したサツマイモネコブセンチュウの割合で示した。アワユキセンダングサの各部位の煮沸抽出物（乾燥）のサツマイモネコブセンチュウの致死率も表３に示した。
表３より、アワユキセンダングサの葉の煮沸抽出物（乾燥）に最も致死作用があることがわかった。また、アワユキセンダングサの煮沸抽出物（乾燥）中のサツマイモネコブセンチュウは、多くの場合、体内に液胞を形成して致死していた（図１）。従って、アワユキセンダングサの煮沸抽出物（乾燥）中にはサツマイモネコブセンチュウの致死効果があることがわかった。
実 施 例 ４
サツマイモネコブセンチュウの孵化に対するアワユキセンダングサ煮沸抽出物
（乾燥）の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。これを蒸留水で１／２、１／３、１／１０、１／２０、１／１００または１／２００に希釈した。各希釈液に、サツマイモネコブセンチュウの卵のうを解剖用メスを用いて１個入れ、２５℃に維持した。卵のう浸漬後３日、６日および９日後に、パスツールピペットを用いて抽出液に含まれるサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫を計数し、孵化率を調べた。実験は５反復行い、孵化率は百分率で算出した。その結果を図２に示した。また、対照としては滅菌蒸留水を用いた。
サツマイモネコブセンチュウの孵化に対するアワユキセンダングサ煮沸抽出物
（乾燥）の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。これを蒸留水で１／２、１／３、１／１０、１／２０、１／１００または１／２００に希釈した。各希釈液に、サツマイモネコブセンチュウの卵のうを解剖用メスを用いて１個入れ、２５℃に維持した。卵のう浸漬後３日、６日および９日後に、パスツールピペットを用いて抽出液に含まれるサツマイモネコブセンチュウ２期幼虫を計数し、孵化率を調べた。実験は５反復行い、孵化率は百分率で算出した。その結果を図２に示した。また、対照としては滅菌蒸留水を用いた。
葉および花の煮沸抽出液（乾燥）では３日から９日目において滅菌水と比較して全ての処理区で孵化を抑制した。
実 施 例 ５
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫の忌避行動に対するアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）は実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）の原液のままのものおよびこれを蒸留水で１／１０に希釈したものを試料とした。次に、滅菌済シャーレに素寒天培地（寒天：２０ｇ、蒸留水：１,０００ｍｌ）を１０ｍｌ分注後、凝固させた。凝固後の平板培地裏面の中心に黒マジックで直径２ｃｍの円を描き，その円内に植物体抽出物（乾燥）の原液および１／１０希釈液をマイクロピペットで異なるシャーレに３.５μｌ滴下し、クリーンベンチ内で１０分間風乾させた。対照区として滅菌水（３.５μｌ）を滴下した。その後、それぞれの円内にマイクロピペットを用いてサツマイモネコブセンチュウ懸濁液（１００頭／３.５μｌ）を添加した後、２５℃条件下に静置し、３０、６０、１２０、１８０、２４０、３００および３６０分間後に円内の２期幼虫を計数した。実験は５反復行った。その結果を図３に示した。また、対照としては滅菌蒸留水を用いた。
サツマイモネコブセンチュウ２期幼虫の忌避行動に対するアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）は実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）の原液のままのものおよびこれを蒸留水で１／１０に希釈したものを試料とした。次に、滅菌済シャーレに素寒天培地（寒天：２０ｇ、蒸留水：１,０００ｍｌ）を１０ｍｌ分注後、凝固させた。凝固後の平板培地裏面の中心に黒マジックで直径２ｃｍの円を描き，その円内に植物体抽出物（乾燥）の原液および１／１０希釈液をマイクロピペットで異なるシャーレに３.５μｌ滴下し、クリーンベンチ内で１０分間風乾させた。対照区として滅菌水（３.５μｌ）を滴下した。その後、それぞれの円内にマイクロピペットを用いてサツマイモネコブセンチュウ懸濁液（１００頭／３.５μｌ）を添加した後、２５℃条件下に静置し、３０、６０、１２０、１８０、２４０、３００および３６０分間後に円内の２期幼虫を計数した。実験は５反復行った。その結果を図３に示した。また、対照としては滅菌蒸留水を用いた。
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）の原液および１／１０希釈液のいずれにも、サツマイモネコブセンチュウが有意に忌避している様子が認められた。最も効果が認められたのはアワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）の原液であった。
実 施 例 ６
トマトの生育および根こぶ形成に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）
の灌注処理の効果：
１／５,０００ａワグネルポットに滅菌した供試土壌（市販の島尻マージ（商品名：島尻赤土、緑土産業株式会社製）とバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）を重鎮し、これに約１０ｃｍに生育したトマト（「ちびっこ」（Lycopersicum esculentum Mill.））の苗を定植した。薬剤区としてホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ）を設置した。定植から２日後、１０ｍｌメスピペットを用いてポット当たりサツマイモネコブセンチュウ懸濁液（１,０００頭／１０ｍｌ）を接種し、実施例３では、根を除く全部位のアワユキセンダングサ煮沸抽出液（乾燥）の１／１０〜１／５０希釈液で高い殺虫効果が認められたことから、１／１０および１／２０希釈液の４０ｍｌを複数回灌注した。各処理区は以下の通りである。
トマトの生育および根こぶ形成に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）
の灌注処理の効果：
１／５,０００ａワグネルポットに滅菌した供試土壌（市販の島尻マージ（商品名：島尻赤土、緑土産業株式会社製）とバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）を重鎮し、これに約１０ｃｍに生育したトマト（「ちびっこ」（Lycopersicum esculentum Mill.））の苗を定植した。薬剤区としてホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ）を設置した。定植から２日後、１０ｍｌメスピペットを用いてポット当たりサツマイモネコブセンチュウ懸濁液（１,０００頭／１０ｍｌ）を接種し、実施例３では、根を除く全部位のアワユキセンダングサ煮沸抽出液（乾燥）の１／１０〜１／５０希釈液で高い殺虫効果が認められたことから、１／１０および１／２０希釈液の４０ｍｌを複数回灌注した。各処理区は以下の通りである。
＜処理区＞ ＜内容＞
１／１０（３）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を３回行
ったもの。
１／１０（６）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を６回行
ったもの。
１／１０（９）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を９回行
ったもの。
１／２０（６）：１／２０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を６回行
ったもの。
１／２０（９）：１／２０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を９回行
ったもの。
薬剤：ホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ）を土壌混和したもの。
無処理：アワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注および薬剤の散布のいずれもしていな
いもの
１／１０（３）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を３回行
ったもの。
１／１０（６）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を６回行
ったもの。
１／１０（９）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を９回行
ったもの。
１／２０（６）：１／２０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を６回行
ったもの。
１／２０（９）：１／２０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を９回行
ったもの。
薬剤：ホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ）を土壌混和したもの。
無処理：アワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注および薬剤の散布のいずれもしていな
いもの
トマトの栽培はサツマイモネコブセンチュウ懸濁液を接種後４５日間（２００５年９月１６日〜１０月３１日）行った後、植物体を掘り起こし、植物体の生長量（草丈、地上部重および根重）および根こぶ指数調査、土壌センチュウ数の計数を行った。実験は５反復行った。植物体の生長量は常法に従い測定した。根こぶ指数と土壌センチュウ数の計数は以下の方法に従って行った。それらの結果を表４に示した。
なお、トマトの栽培期間中には、ハモグリバエ対策としてエマメクチン安息香酸塩乳剤、殺菌剤としてＴＰＴ水和剤１,０００倍（商品名：ダコニール１,０００、成分：ＴＰＮ４０.０％、エス・ディー・エス株式会社製）、斑点細菌病としてカスガマイシン・銅水和剤、殺菌剤としてアゾキシストロビン水和剤２,０００倍（商品名：アミスター２０フロアブル、成分：アゾキシストロビン２０.０％、シンジェンタ株式会社製）を用い肩掛け敷き式噴霧器で散布した。
＜根こぶ指数の算出方法＞
根こぶの程度を以下の評価基準に従って判定し、更に以下の式により根こぶ指数を算出した。
（評価） （内容）
０： 根こぶ無し。
１： 根こぶが僅かに認められるが、被害は目立たない。
２： 一見して根こぶが認められる。大きな根こぶや連続した根こぶは少ない。
３： 大小の根こぶが多数認められる。根こぶに覆われて太くなった根も見られるが 、根域全体の５０％以下。
４： 多くの根が根こぶだらけで太くなっている。
根こぶの程度を以下の評価基準に従って判定し、更に以下の式により根こぶ指数を算出した。
（評価） （内容）
０： 根こぶ無し。
１： 根こぶが僅かに認められるが、被害は目立たない。
２： 一見して根こぶが認められる。大きな根こぶや連続した根こぶは少ない。
３： 大小の根こぶが多数認められる。根こぶに覆われて太くなった根も見られるが 、根域全体の５０％以下。
４： 多くの根が根こぶだらけで太くなっている。
＜土壌センチュウ数の計数方法＞
土壌中のセンチュウ数はベルマン法によって計数した。方法の手順としては、まず、網皿に和紙フィルターを１枚敷き、ガラス漏斗（直径９ｃｍ）にゴム管（直径１１ｍｍ）を取り付け、ピンチコックで止めた。その後、十分混合したサンプル土壌を２０ｇずつ網皿に入れ、底を床に軽く打ちつけて土壌を均等に広げた。さらに、その網皿を漏斗にセットし、網皿の下部が浸るように水を補給した。水の補給の際に空気が入ってないか確認した後、上側をポリフィルムで覆い、４８時間分離を継続した。その間不足した水は適宜補給した。分離を行う際の温度はセンチュウが活動しやすい２５℃前後とした。４８時間後にピンチコックをはずし、水を試験管に１０ｍｌ測り取り、センチュウが沈殿した後に計数した。実験は３反復行った。
土壌中のセンチュウ数はベルマン法によって計数した。方法の手順としては、まず、網皿に和紙フィルターを１枚敷き、ガラス漏斗（直径９ｃｍ）にゴム管（直径１１ｍｍ）を取り付け、ピンチコックで止めた。その後、十分混合したサンプル土壌を２０ｇずつ網皿に入れ、底を床に軽く打ちつけて土壌を均等に広げた。さらに、その網皿を漏斗にセットし、網皿の下部が浸るように水を補給した。水の補給の際に空気が入ってないか確認した後、上側をポリフィルムで覆い、４８時間分離を継続した。その間不足した水は適宜補給した。分離を行う際の温度はセンチュウが活動しやすい２５℃前後とした。４８時間後にピンチコックをはずし、水を試験管に１０ｍｌ測り取り、センチュウが沈殿した後に計数した。実験は３反復行った。
表４より、アワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）を用いて土壌に灌注を行ったところ、処理回数および処理濃度にかかわらず、トマトの草丈、地上部重に有意な差は認められないことがわかった。また、薬剤区と比較してすべての処理区および無処理区で根重が増加していた。また、サツマイモネコブセンチュウ数および細菌食性センチュウ数においては有意な差は認められなかったが、根こぶ指数は無処理区が７５に対し、処理区では３０〜４５であった。以上のことからアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）を土壌灌注した場合、トマトの生育や自活性センチュウの生存に対して悪影響を及ぼすことなく、ネコブセンチュウ被害を軽減できることが明らかとなった。
実 施 例 ７
トマトの生育および根こぶ形成に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）
の根浸漬処理の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）を原液のまままたはこの原液を滅菌蒸留水で１／２、１／１０に希釈した希釈液および滅菌蒸留水をそれぞれ３０ｍｌずつ滅菌済シャーレ（直径６ｃｍ）に入れた。次にそれらのシャーレに草丈約１０ｃｍのトマト（「ちびっこ」）の根を３０分間浸漬した後、１／５,０００ａワグネルポットに滅菌した供試土壌（市販の島尻マージとバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）を重鎮し、定植した。また、無処理区には滅菌水を設置し、薬剤区にはホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ換算）を設置した。各処理区は以下の通りである。
トマトの生育および根こぶ形成に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）
の根浸漬処理の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）を原液のまままたはこの原液を滅菌蒸留水で１／２、１／１０に希釈した希釈液および滅菌蒸留水をそれぞれ３０ｍｌずつ滅菌済シャーレ（直径６ｃｍ）に入れた。次にそれらのシャーレに草丈約１０ｃｍのトマト（「ちびっこ」）の根を３０分間浸漬した後、１／５,０００ａワグネルポットに滅菌した供試土壌（市販の島尻マージとバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）を重鎮し、定植した。また、無処理区には滅菌水を設置し、薬剤区にはホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ換算）を設置した。各処理区は以下の通りである。
＜処理区＞ ＜内容＞
原液：アワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの根を浸漬したもの。
１／２：１／２に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの根を浸漬した
もの。
１／１０：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの根を浸漬し
たもの。
薬剤：ホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ）を土壌混和したもの。
無処理：滅菌蒸留水にトマトの根を浸漬したもの。
原液：アワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの根を浸漬したもの。
１／２：１／２に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの根を浸漬した
もの。
１／１０：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの根を浸漬し
たもの。
薬剤：ホスチアゼート粒剤（２０ｋｇ／１０ａ）を土壌混和したもの。
無処理：滅菌蒸留水にトマトの根を浸漬したもの。
定植２日後、メスピペットを用い、ポット当たり１０ｍｌのサツマイモネコブセンチュウ懸濁液（１,０００頭／１０ｍｌ）を接種した。接種後４５日間（２００５年９月１６日〜１０月３１日）栽培を行った後に植物体を掘り起こし、植物体の生長量（草丈、地上部重および根重）および根こぶ指数調査、土壌センチュウ数の計数を実施例６と同様に行った。実験は５反復行った。それらの結果を表５に示した。なお、栽培期間中には実施例６と同様に植物体の地上部病の防除を行った。
表５より、アワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の原液に根を浸漬させたトマトを用いて実験を行った結果、無処理と比較して草丈また地上部重が増加したが、根重では有意な差は認められなかった。更に、根こぶ指数は無処理が６９に対し、アワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の原液、１／２、１／１０で５５〜６５とやや減少した。サツマイモネコブセンチュウ数は、アワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の濃度が高くなるにつれて増加した。以上のことから、本処理を行う場合は１／２、１／１０に希釈した抽出物でトマトの根を処理した方が好ましいことが明らかとなった。
実 施 例 ８
トマトの生育および根こぶ形成に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）
の種子浸漬処理の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）の原液のままのものおよびこの原液を滅菌蒸留水で１／２、１／１０に希釈した希釈液を試料とした。これらにトマト（「ちびっこ」）の種子を３０分間または６０分間浸漬した後、キムワイプ上で乾燥させた。比較としては、滅菌蒸留水を用いた。滅菌した供試土壌（市販の島尻マージとバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）に浸漬処理された種子を植え、人工気象器内で約２ヶ月栽培後、ビニールポットに定植した。各処理区は以下の通りである。
トマトの生育および根こぶ形成に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）
の種子浸漬処理の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）の原液のままのものおよびこの原液を滅菌蒸留水で１／２、１／１０に希釈した希釈液を試料とした。これらにトマト（「ちびっこ」）の種子を３０分間または６０分間浸漬した後、キムワイプ上で乾燥させた。比較としては、滅菌蒸留水を用いた。滅菌した供試土壌（市販の島尻マージとバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）に浸漬処理された種子を植え、人工気象器内で約２ヶ月栽培後、ビニールポットに定植した。各処理区は以下の通りである。
＜処理区＞ ＜内容＞
原液（３０）：アワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を３０分間浸漬した
もの。
原液（６０）：アワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を６０分間浸漬した
もの。
１／２（３０）：１／２に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を
３０分間浸漬したもの。
１／２（６０）：１／２に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を
６０分間浸漬したもの。
１／１０（３０）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種
子を３０分間浸漬したもの。
１／１０（６０）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種
子を６０分間浸漬したもの。
滅菌蒸留水（３０）：滅菌蒸留水にトマトの種子を３０分間浸漬したもの。
滅菌蒸留水（６０）：滅菌蒸留水にトマトの種子を６０分間浸漬したもの。
原液（３０）：アワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を３０分間浸漬した
もの。
原液（６０）：アワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を６０分間浸漬した
もの。
１／２（３０）：１／２に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を
３０分間浸漬したもの。
１／２（６０）：１／２に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種子を
６０分間浸漬したもの。
１／１０（３０）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種
子を３０分間浸漬したもの。
１／１０（６０）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物にトマトの種
子を６０分間浸漬したもの。
滅菌蒸留水（３０）：滅菌蒸留水にトマトの種子を３０分間浸漬したもの。
滅菌蒸留水（６０）：滅菌蒸留水にトマトの種子を６０分間浸漬したもの。
定植２日後、メスピペットを用い、ポット当たり１０ｍｌのサツマイモネコブセンチュウ懸濁液（１,０００頭／１０ｍｌ）を接種し、４５日間（２００５年９月１１日〜１０月２１日）栽培を行った後に植物体を掘り起こし、植物体の生長量（草丈、地上部重および根重）および根こぶ指数調査、土壌センチュウ数の計数を実施例６と同様に行った。実験は５反復行った。それらの結果を表６に示した。なお、栽培期間中には実施例６と同様に植物体の地上部病の防除を行った。
表６より、アワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）にトマトの種子を浸漬した場合、原液に３０分および６０分浸漬した時、１／２希釈液に３０分浸漬した時に草丈および地上部の重量は滅菌蒸留水区と同等であった。また、根こぶ指数において滅菌蒸留水区が６０に対し、原液処理区で４５〜５０、１／２希釈液３０分浸漬処理区で２０、６０分浸漬処理区で０、１／１０希釈液処理区で１０と減少した。更に、サツマイモネコブセンチュウ数は全処理同等であり、細菌食性センチュウ数では滅菌蒸留水区と比較して１／２希釈液３０、６０分浸漬処理区で増加した。以上のことから、本処理を行った場合は、トマトの生育に対して悪影響が無く、ネコブセンチュウのみを防除できる１／２希釈液３０分処理を行うことが好ましい。
実 施 例 ９
アレナリアネコブセンチュウの運動に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物
（乾燥）の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）の原液のままのものおよびこの原液を１／２、１／１０、１／２０および１／１００に希釈した希釈液を試料とした。この試料１ｍｌにマイクロピペット（２０〜２００μｌ）を用いてアレナリアネコブセンチュウ懸濁液（１００頭／０．１ｍｌ）を接種し、光学顕微鏡下で観察し、致死率を実施例３と同様にして算出した。それらの結果を表７に示した。実験は５反復行い、致死率は百分率で算出した。
アレナリアネコブセンチュウの運動に及ぼすアワユキセンダングサ煮沸抽出物
（乾燥）の効果：
アワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）を実施例２と同様に製造した。この煮沸抽出物（乾燥）の原液のままのものおよびこの原液を１／２、１／１０、１／２０および１／１００に希釈した希釈液を試料とした。この試料１ｍｌにマイクロピペット（２０〜２００μｌ）を用いてアレナリアネコブセンチュウ懸濁液（１００頭／０．１ｍｌ）を接種し、光学顕微鏡下で観察し、致死率を実施例３と同様にして算出した。それらの結果を表７に示した。実験は５反復行い、致死率は百分率で算出した。
表７よりアワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出液（乾燥）はサツマイモネコブセンチュウだけでなく、種の異なるアレナリアネコブセンチュウに対しても原液から１／５０希釈液で高い殺虫効果を示すことが明らかとなった。
実 施 例 １０
主要作物に対するアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の効果：
１／５,０００ａワグネルポットに滅菌した供試土壌（市販の島尻マージ（商品名：島尻赤土、緑土産業株式会社製）とバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）を重鎮した。これに、播種後１０日目の供試作物（ナス（品種名：くろすけ（Solanum melongena L.））、インゲン（品種名：丸莢プロバイダー（Phaseolus vulgaris L.））およびツルレイシ（品種名：あばしゴーヤー（Momordica charantia L.）））を定植した。この定植した作物に、実施例２と同様に製造したアワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）の原液、１／１０および１／２０希釈液の１０ｍｌを複数回灌注した。各処理区は以下の通りである。
主要作物に対するアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の効果：
１／５,０００ａワグネルポットに滅菌した供試土壌（市販の島尻マージ（商品名：島尻赤土、緑土産業株式会社製）とバーミキュライトを４：１の割合で混和し、これを元肥として有機肥料を１０ａあたり３ｔ換算で混和したもの）を重鎮した。これに、播種後１０日目の供試作物（ナス（品種名：くろすけ（Solanum melongena L.））、インゲン（品種名：丸莢プロバイダー（Phaseolus vulgaris L.））およびツルレイシ（品種名：あばしゴーヤー（Momordica charantia L.）））を定植した。この定植した作物に、実施例２と同様に製造したアワユキセンダングサの根を除く全草の煮沸抽出物（乾燥）の原液、１／１０および１／２０希釈液の１０ｍｌを複数回灌注した。各処理区は以下の通りである。
＜処理区＞ ＜内容＞
１／１０（１２）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を１２
回行ったもの。
１／２０（１２）：１／２０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を１２
回行ったもの。
滅菌蒸留水：滅菌蒸留水の灌注を１２回行ったもの。
１／１０（１２）：１／１０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を１２
回行ったもの。
１／２０（１２）：１／２０に希釈したアワユキセンダングサ煮沸抽出物の灌注を１２
回行ったもの。
滅菌蒸留水：滅菌蒸留水の灌注を１２回行ったもの。
各作物の栽培を３５日間（２００５年１１月２６日〜１２月３１日）行った後、生育量（草丈、地上部重、根長および根重）を調査した。実験は５反復行った。それらの結果を表８（ナス）、表９（インゲン）および表１０（ツルレイシ）に示した。
なお、各作物の栽培期間中には、うどんこ病対策としてチオファネートメチル水和剤１,５００倍（商品名：トップジンＭ水和剤、成分：チオファネートメチル７０.０ ％、日曹達株式会社製）、ハモグリバエ対策としてエマメクチン安息香酸塩乳剤、殺菌剤としてＴＰＴ水和剤１,０００倍（商品名：ダコニール１,０００、成分：ＴＰＮ４０.０％、エス・ディー・エス株式会社製）、斑点細菌病としてカスガマイシン・銅水和剤、殺菌剤としてアゾキシストロビン水和剤２,０００倍（商品名：アミスター２０フロアブル、成分：アゾキシストロビン２０.０％、シンジェンタ株式会社製）を用い肩掛け敷き式噴霧器 で散布した。
アワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）の１／１０希釈液（１２回）、１／２０希釈液（１２回）で草丈、地上部重、根長および根重の全てにおいてインゲン、ツルレイシでおよびナスでほとんど影響は認められなかった。以上のことからネコブセンチュウが寄生可能な主要作物に対してアワユキセンダングサ煮沸抽出物（乾燥）は無害であり、ネコブセンチュウに対してのみ駆除効果を発揮することが明らかとなった。
本発明のネコブセンチュウ防除剤は、優れた抗センチュウ作用と安全性を有しているので、種々の作物に対する環境保全型防除技術として用いることができる。
Claims (9)
- キク科植物の抽出物を有効成分とすることを特徴とするネコブセンチュウ防除剤。
- キク科植物が、キク科センダングサ属、キク科ヒメジョオン属およびキク科ムカシヨモギ属からなる群から選ばれる植物の１種または２種以上である請求項１記載のネコブセンチュウ防除剤。
- キク科センダングサ属植物が、アワユキセンダングサ（Bidens pilosa.var.radiata Scherff）である請求項２記載のネコブセンチュウ防除剤。
- キク科ヒメジョオン属植物が、ヒメジョオン（Stenactis annuus (L.) Cass.）である請求項２記載のネコブセンチュウ防除剤。
- キク科ムカシヨモギ属植物が、オオアレチノギク（Erigeron sumatrensis Retz.）である請求項２記載のネコブセンチュウ防除剤。
- キク科植物が、アワユキセンダングサ（Bidens pilosa.var.radiata Scherff）である請求項１記載のネコブセンチュウ防除剤。
- 土壌中に、請求項１ないし６の何れかの項記載の防除剤を灌注することを特徴とするネコブセンチュウ防除方法。
- 植物の根を、請求項１ないし６の何れかの項記載の防除剤に浸漬することを特徴とするネコブセンチュウ防除方法。
- 植物の種子を、請求項１ないし６の何れかの項記載の防除剤に浸漬することを特徴とするネコブセンチュウ防除方法。
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