JP2005110502A - Ｃｙｐ２ｃ１９＊３アレルの検出法およびそのための核酸プローブ - Google Patents
Ｃｙｐ２ｃ１９＊３アレルの検出法およびそのための核酸プローブ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005110502A JP2005110502A JP2003344588A JP2003344588A JP2005110502A JP 2005110502 A JP2005110502 A JP 2005110502A JP 2003344588 A JP2003344588 A JP 2003344588A JP 2003344588 A JP2003344588 A JP 2003344588A JP 2005110502 A JP2005110502 A JP 2005110502A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- fluorescent dye
- mutation
- base sequence
- acid probe
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 102000019057 Cytochrome P-450 CYP2C19 Human genes 0.000 title description 6
- 108010026925 Cytochrome P-450 CYP2C19 Proteins 0.000 title description 6
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 title description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 39
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000011880 melting curve analysis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 101150003340 CYP2C19 gene Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 11
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 abstract 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 41
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 22
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 22
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 15
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 15
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【課題】 CYP2C19遺伝子のcDNAの636位の変異（G636A変異）を検出する方法を提供する。
【解決手段】 G636A変異を含む領域をPCRで増幅し、末端が蛍光色素で標識され、ハイブリダイゼーションしたときに蛍光色素の蛍光が減少する核酸プローブであって、特定の塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列を有し、３’末端が蛍光色素で標識されている、または、別の特定の塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有し、５’末端が蛍光色素で標識されている前記核酸プローブを用いて、蛍光色素の蛍光を測定することにより融解曲線分析を行い、融解曲線分析の結果に基づいて変異を検出する。
【選択図】 図３
【解決手段】 G636A変異を含む領域をPCRで増幅し、末端が蛍光色素で標識され、ハイブリダイゼーションしたときに蛍光色素の蛍光が減少する核酸プローブであって、特定の塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列を有し、３’末端が蛍光色素で標識されている、または、別の特定の塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有し、５’末端が蛍光色素で標識されている前記核酸プローブを用いて、蛍光色素の蛍光を測定することにより融解曲線分析を行い、融解曲線分析の結果に基づいて変異を検出する。
【選択図】 図３
Description
本発明は、シトクロムP450の分子種CYP2C19の遺伝子の変異の検出法およびそのための核酸プローブに関する。
CYP2C19は、さまざまな薬剤を代謝する酵素であり、たとえば、抗てんかん薬であるメフェニトイン、消化性潰瘍用剤であるオメプラゾール、マラリア薬であるプログアニル、抗うつ剤であるクロミプラミン、等の薬物を代謝する。
CYP2C19の遺伝子のcDNAの636位のGがAに置換する変異（G636A変異）が存在すると、翻訳の際に終止コドンに変化しタンパク質の構造が異常になり、したがって、G636A変異がホモで存在すると、様々な薬剤の代謝効率が減少し副作用等のリスクが上昇する(非特許文献１)。G636A変異を有する遺伝子はCYP2C19*3アレルと呼ばれている。
G636A変異が存在するとその部分の制限酵素の認識部位が消失するため、PCRで変異部分を含むように増幅を行い、制限酵素で切断し、その後電気泳動で切断されたかどうかを検出するという方法（PCR-RFLP）で検出を行うことが出来る。
PCRは数分子の鋳型から数10億倍もの分子を増幅するため、増幅産物がほんの少し混入した場合でも偽陽性、偽陰性の原因になり得る。PCR-RFLPはPCR反応後に増幅産物を取り出して制限酵素処理を行うという必要があるため、増幅産物が次の反応系に混入する恐れがある。よって、偽陽性、偽陰性の結果が得られてしまうことがある。さらに、PCR終了後、制限酵素で処理を行い、その後電気泳動を行うため、検出に必要な時間も非常に長くかかってしまう。また、操作が複雑なため、自動化が困難である。
一方、一般に、変異を含む領域をPCRで増幅した後、蛍光色素で標識された核酸プローブを用いて融解曲線分析を行い、融解曲線分析の結果に基づいて変異を解析する方法が知られている（非特許文献２、特許文献１）。
モレキュラー・ファーマコロジー(Molecular Pharmacology)、1994年、第46巻、ｐ．５９４−５９８
クリニカルケミストリー(Clinical Chemistry)、2000年、第４６巻、第５号、ｐ．６３１−６３５
特開２００２−１１９２９１号公報
本発明の課題は、G636A変異を検出するのに有効な消光プローブを特定し、G636A変異を検出する方法を提供することを課題とする。
上述のプローブを用いる方法に関する文献においては、プローブの設計に関し、末端部が蛍光色素により標識された消光プローブが標的核酸にハイブリダイゼーションしたとき、末端部分においてプローブ−核酸ハイブリッドの複数塩基対が少なくとも一つのGとCの
ペアを形成するように設計するという教示があるのみである。本発明者らは、G636A変異に関し、上記条件を満たす消光プローブを設計し、検出を試みたが、容易に検出を可能とする消光プローブは得られなかった。
ペアを形成するように設計するという教示があるのみである。本発明者らは、G636A変異に関し、上記条件を満たす消光プローブを設計し、検出を試みたが、容易に検出を可能とする消光プローブは得られなかった。
本発明者らは、G636A変異を含む特定の領域に基づいて消光プローブを設計することにより、消光プローブを用いる融解曲線分析によりG636A変異を検出できることを見出し、本発明を完成した。
本発明は、以下のものを提供する。
本発明は、以下のものを提供する。
（１）末端が蛍光色素で標識され、ハイブリダイゼーションしたときに蛍光色素の蛍光が減少する核酸プローブであって、配列番号１に示す塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列を有し、３’末端が蛍光色素で標識されている、または、配列番号２に示す塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有し、５’末端が蛍光色素で標識されている前記核酸プローブ。
（２）核酸プローブが、配列番号８または９に示す塩基配列を有する（１）の核酸プローブ。
（３）一塩基多型の部位を有する核酸について、蛍光色素で標識された核酸プローブを用いて、蛍光色素の蛍光を測定することにより融解曲線分析を行い、融解曲線分析の結果に基づいて変異を検出する方法であって、一塩基多型は、CYP2C19遺伝子のcDNAにおける636位の変異であり、核酸プローブは、（１）または（２）の核酸プローブである前記方法。
本発明によれば、G636A変異を検出するのに有効な消光プローブが提供され、さらに、それを用いるG636A変異を検出する方法およびそのためのキットが提供される。G636A変異はCYP2C19*3アレルはG636A変異を含むので、本発明の消光プローブならびに方法およびキットは、CYP2C19*3アレルの検出に使用できる。
Tm解析は数十秒で完了するため、検出に必要な時間が大幅に短縮出来る。プローブの存在下での核酸の増幅とTm解析を組み合わせる本発明の好ましい態様によれば、核酸の増幅後にプローブのTmを解析するだけなので、反応終了後増幅産物を取り扱う必要がない。よって、増幅産物による汚染の心配がない。また、さらに、増幅に必要な機器と同じ機器で検出することが可能なので、容器を移動する必要すらない。よって、自動化も容易である。
本発明プローブは、末端が蛍光色素で標識され、ハイブリダイゼーションしたときに蛍光色素の蛍光が減少する核酸プローブであって、配列番号１に示す塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列を有し、３’末端が蛍光色素で標識されている、または、配列番号２に示す塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有し、５’末端が蛍光色素で標識されていることを特徴とする。
本発明プローブは、配列番号１に示す塩基配列（G636A変異における正常型の塩基を有する配列）において配列番号１に示す塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列、または、配列番号２に示す塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有する他は、特許文献１に記載された消光プローブと同様でよい。本発明に使用される消光プローブの塩基配列の例としては、配列番号８または９に示すものが挙げられる。蛍光色素としては、特許文献１に記載されたものが使用できるが、具体
例としては、FAM(商標)、TAMRA(商標)、BODIPY(商標) FL等が挙げられる。蛍光色素のオリゴヌクレオチドへの結合方法は、通常の方法、例えば特許文献１に記載の方法に従って行うことができる。
例としては、FAM(商標)、TAMRA(商標)、BODIPY(商標) FL等が挙げられる。蛍光色素のオリゴヌクレオチドへの結合方法は、通常の方法、例えば特許文献１に記載の方法に従って行うことができる。
本発明検出方法は、一塩基多型の部位を有する核酸について、蛍光色素で標識された核酸プローブを用いて、蛍光色素の蛍光を測定することにより融解曲線分析を行い、融解曲線分析の結果に基づいて変異を検出する方法であって、一塩基多型は、G636A変異であり、核酸プローブは本発明プローブであることを特徴とする。
本発明検出方法は、G636A変異を含む領域を増幅すること、および、本発明プローブを用いることの他は、通常の核酸増幅および融解曲線分析（Tm解析）の方法に従って行うことができる。
核酸増幅の方法としては、PCRポリメラーゼを用いる方法が好ましく、その例としては、PCR、ICAN、LAMP等が挙げられる。PCRポリメラーゼを用いる方法により増幅する場合は、本発明プローブの存在下で増幅を行うことが好ましい。用いるプローブに応じて、増幅の反応条件等を調整することは当業者であれば容易である。これにより、核酸の増幅後にプローブのTmを解析するだけなので、反応終了後増幅産物を取り扱う必要がない。よって、増幅産物による汚染の心配がない。また、増幅に必要な機器と同じ機器で検出することが可能なので、容器を移動する必要すらない。よって、自動化も容易である。
以下、PCRを用いる場合を例として、さらに説明する。PCRに用いるプライマー対は、本発明プローブがハイブリダイゼーションできる領域が増幅されるようにする他は、通常のPCRにおけるプライマー対の設定方法と同様にして設定することができる。プライマーの長さおよびTmは、通常には、12mer〜40merで40〜70℃、好ましくは16mer〜30merで55〜60℃である。プライマー対の各プライマーの長さは同一でなくてもよいが、両プライマーのTmはほぼ同一（通常には、相違が２℃以内）であることが好ましい。なお、Tm値は最近接塩基対(Nearest Neighbor)法により算出した値である。プライマー対の例としては、配列番号３および４に示す塩基配列を有するプライマーからなるものが挙げられる。
PCRは、本発明で使用される本発明プローブの存在下で行うことが好ましい。これにより、増幅反応終了後に増幅産物を取り扱う操作を行うことなくTm解析を行うことができる。用いるプローブに応じて、プライマーのTmやPCRの反応条件を調整することは当業者であれば容易である。
代表的なＰＣＲ反応液の組成を挙げれば、以下の通りである。
また、代表的な温度サイクルを挙げれば、以下の通りであり、この温度サイクルを通常25〜40回繰り返す。
(1) 変性、90〜98℃、1〜60秒
(2) アニーリング、50〜70℃、10〜60秒
(3) 伸長、60〜75℃、10〜180秒
(2) アニーリング、50〜70℃、10〜60秒
(3) 伸長、60〜75℃、10〜180秒
アニーリングおよび伸長を一ステップで行う場合には、50〜70℃、10〜180秒の条件が挙げられる。
Tm解析は、本発明プローブの蛍光色素の蛍光を測定する他は通常の方法に従って行うことができる。蛍光の測定は、蛍光色素に応じた波長の励起光を用い発光波長の光を測定することに行うことができる。Tm解析における昇温速度は、通常には、0.1〜1℃／秒である。Tm解析を行うときの反応液の組成は、プローブとその塩基配列に相補的な配列を有する核酸とのハイブリダイゼーションが可能であれば特に制限されないが、通常には、一価の陽イオン濃度が1.5〜5 mM、pHが７〜９である。PCR等のDNAポリメラーゼを用いる増幅方法の反応液は、通常、この条件を満たすので、増幅後の反応液をそのままTm解析に用いることができる。
Tm解析の結果に基づくG636A変異の検出は通常の方法に従って行うことができる。本発明における検出とは、変異の有無の検出の他、変異型DNAの定量、正常型DNAと変異型DNAの割合の測定も包含する。
本発明プローブを用いて、本発明の検出方法に用いるためのキットを提供することができる。このキットは、末端が蛍光色素で標識され、ハイブリダイゼーションしたときに蛍光色素の蛍光が減少する核酸プローブ（消光プローブ）であって、配列番号１に示す塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列を有し、３’末端が蛍光色素で標識されている、または、配列番号２に示す塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有し、５’末端が蛍光色素で標識されている核酸プローブを含むことを特徴とする。
この検出キットは、消光プローブの他に、本発明の検出方法における核酸増幅を行うのに必要とされる試薬類、特にDNAポリメラーゼを用いる増幅のためのプライマーをさらに含んでいてもよい。
この検出キットにおいて消光プローブ、プライマーおよびその他の試薬類は、別個に収容されていてもよいし、それらの一部が混合物とされていてもよい。
以下に、本発明を実施例により具体的に説明する。
CYP2C19遺伝子のcDNAの636位のＡ→Ｇ変異（G636A変異）の部位を含む塩基配列（配列番号１、塩基番号302がCYP2C19遺伝子のcDNAの636位に相当）に基づき、G636A変異を含む部分を増幅できるように表２に示すプライマーを設計した。表２中、位置は、配列番号１に示す塩基配列における塩基番号を示す。
次に、表３に示す、末端部にCを有するプローブを設計した。表３中、位置は、配列番号１に示す塩基配列における塩基番号を示す。また、塩基配列中の大文字は、G636A変異の部位を示し、3'末端の(P)は、リン酸化されていることを示す。TAMRA(商標)による標識は、常法に従って行った。
精製ヒトゲノム（GFX Genomic Blood DNA Purification Kitダイレクト法にて全血から抽出）をサンプルとして、Smart Cycler System（Cephied)を用い、以下の条件でPCRおよびTm解析を行った。Tm解析における励起波長および検出波長は、それぞれ527〜555 nmおよび565〜605 nm（TAMRA）であった。
各プローブを用いてPCRおよびTm解析を行った結果、プローブ5T-mt-F1-18および3T-wt-F2-15を用いたときのみ、Tm解析で解析の可能な蛍光強度の変化が認められた。なお、各プローブのG636A変異を含む塩基配列に対する配置を図１および２に示す。図中、Wild配列およびmutant配列は、それぞれ配列番号１および２の塩基配列の塩基番号278〜317である。また、図中、Ｆは蛍光色素を示す。プローブがTm解析で使用できるかどうかは、蛍光色素を結合させたCの位置に依存すると考えられ、プローブの長さは、多型部位を含む限り、あまり重要でないと考えられる。
サンプルとして、0.01μlの血液から抽出したＤＮＡ（３サンプル）ならびに変異型配列および正常型配列を有するDNA（それぞれ、mt/mtおよびwt/wt）ならびに変異型配列および正常型配列の両方を有するDNA（wt/mt）を調製し、プローブ3T-wt-F2-15を用いて定量を行った。結果を図３に示す。また、血液の量を変えて（0.01〜１μl）定量を行った結果を図４に示す。これらの結果から、この定量方法は再現性がよく、感度が高いことが分かる。プローブ5T-mt-F1-18を用いた場合も同様の結果が得られた。
なお、図３及び４において縦軸は、蛍光強度の一次導関数の逆符号の値（-dF/dt）、横軸は温度（℃）である。
Claims (3)
- 末端が蛍光色素で標識され、ハイブリダイゼーションしたときに蛍光色素の蛍光が減少する核酸プローブであって、配列番号１に示す塩基配列において塩基番号306で終わる10〜30塩基長の塩基配列を有し、３’末端が蛍光色素で標識されている、または、配列番号２に示す塩基配列において塩基番号296から始まる10〜30塩基長の塩基配列を有し、５’末端が蛍光色素で標識されている前記核酸プローブ。
- 核酸プローブが、配列番号８または９に示す塩基配列を有する請求項１記載の核酸プローブ。
- 一塩基多型の部位を有する核酸について、蛍光色素で標識された核酸プローブを用いて、蛍光色素の蛍光を測定することにより融解曲線分析を行い、融解曲線分析の結果に基づいて変異を検出する方法であって、一塩基多型は、CYP2C19遺伝子のcDNAにおける636位の変異であり、核酸プローブは、請求項１または２に記載の核酸プローブである前記方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003344588A JP5047450B2 (ja) | 2003-10-02 | 2003-10-02 | Ｃｙｐ２ｃ１９＊３アレルの検出法およびそのための核酸プローブ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003344588A JP5047450B2 (ja) | 2003-10-02 | 2003-10-02 | Ｃｙｐ２ｃ１９＊３アレルの検出法およびそのための核酸プローブ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005110502A true JP2005110502A (ja) | 2005-04-28 |
| JP5047450B2 JP5047450B2 (ja) | 2012-10-10 |
Family
ID=34538173
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003344588A Expired - Fee Related JP5047450B2 (ja) | 2003-10-02 | 2003-10-02 | Ｃｙｐ２ｃ１９＊３アレルの検出法およびそのための核酸プローブ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5047450B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008066162A1 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Arkray, Inc. | Primer set for amplification of cyp2c19 gene, reagent for amplification of cyp2c19 gene comprising the same, and use of the same |
| EP2615182A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-17 | ARKRAY, Inc. | Method for detecting PON1 gene polymorphism (Q192R) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001017185A (ja) * | 1999-03-19 | 2001-01-23 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 薬物代謝酵素遺伝子多型の簡易検出法 |
| JP2001286300A (ja) * | 1999-04-20 | 2001-10-16 | Japan Bioindustry Association | 核酸の測定方法、それに用いる核酸プローブ及びその方法によって得られるデータを解析する方法 |
| JP2002119291A (ja) * | 2000-08-03 | 2002-04-23 | Japan Bioindustry Association | 核酸の測定方法、それに用いる核酸プローブ及びその方法によって得られるデータを解析する方法 |
-
2003
- 2003-10-02 JP JP2003344588A patent/JP5047450B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001017185A (ja) * | 1999-03-19 | 2001-01-23 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 薬物代謝酵素遺伝子多型の簡易検出法 |
| JP2001286300A (ja) * | 1999-04-20 | 2001-10-16 | Japan Bioindustry Association | 核酸の測定方法、それに用いる核酸プローブ及びその方法によって得られるデータを解析する方法 |
| JP2002119291A (ja) * | 2000-08-03 | 2002-04-23 | Japan Bioindustry Association | 核酸の測定方法、それに用いる核酸プローブ及びその方法によって得られるデータを解析する方法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008066162A1 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Arkray, Inc. | Primer set for amplification of cyp2c19 gene, reagent for amplification of cyp2c19 gene comprising the same, and use of the same |
| JPWO2008066162A1 (ja) * | 2006-11-30 | 2010-03-11 | アークレイ株式会社 | Ｃｙｐ２ｃ１９遺伝子増幅用プライマーセット、それを含むｃｙｐ２ｃ１９遺伝子増幅用試薬およびその用途 |
| EP2615182A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-17 | ARKRAY, Inc. | Method for detecting PON1 gene polymorphism (Q192R) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP5047450B2 (ja) | 2012-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20120276533A1 (en) | Method for Simultaneously Detecting Polymorphisms of Acetaldehyde Dehydrogenase 2 and Alcohol Dehydrogenase 2 | |
| Cassinari et al. | A simple, universal, and cost-efficient digital PCR method for the targeted analysis of copy number variations | |
| JP2018528780A (ja) | 短いホモポリマー反復の改良された検出 | |
| JP4505838B2 (ja) | Ｎａｔ２＊６の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP4454366B2 (ja) | Ｍｄｒ１遺伝子の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP4437207B2 (ja) | Ｃｙｐ２ｄ６の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP5047448B2 (ja) | Ｃｙｐ２ｃ１９の変異の検出法およびそのための核酸プローブ | |
| JP4336877B2 (ja) | β３アドレナリン受容体変異遺伝子の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP2005261354A (ja) | 核酸の蛍光検出法 | |
| JP4505839B2 (ja) | Ｃｙｐ２ｄ６＊４の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP5047450B2 (ja) | Ｃｙｐ２ｃ１９＊３アレルの検出法およびそのための核酸プローブ | |
| JP4437206B2 (ja) | Ｃｙｐ２ｃ９の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP4517175B2 (ja) | Ｎａｔ２＊７の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP4454249B2 (ja) | 膵ラ氏島アミロイドタンパク質変異遺伝子の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| US7625723B2 (en) | Method of detecting or quantitatively determining mitochondrial DNA 3243 variation, and kit therefor | |
| JP4517176B2 (ja) | Ｎａｔ２＊５の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP4454365B2 (ja) | Ｃｙｐ２ｄ６＊２の変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| CN1427007A (zh) | 利用发夹结构产生信号的核酸扩增及检测方法 | |
| JP4454377B2 (ja) | チオプリンメチルトランスフェラーゼの変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP4276874B2 (ja) | ミトコンドリアｄｎａ３２４３変異の検出法ならびにそのための核酸プローブおよびキット | |
| JP3974557B2 (ja) | 変異解析方法及びそのためのシステム | |
| JP5860667B2 (ja) | Ｅｇｆｒエクソン２１ｌ８５８ｒ遺伝子多型検出用プライマーセット及びその用途 | |
| Enwere et al. | A novel pharmacogenetic testing panel for CYP2C19 genetic polymorphisms | |
| JP2007143420A (ja) | 塩基配列の判別方法 | |
| JP2006271288A (ja) | チトクロームｐ４５０２ｃ１９遺伝多型の検出方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060830 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090623 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090824 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20091027 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100127 |
|
| A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20100323 |
|
| A912 | Removal of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20100423 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20120319 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20120409 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20120409 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120718 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150727 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |