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JP2003521685A - 生物学的材料層の一部を単離する方法 - Google Patents

生物学的材料層の一部を単離する方法

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JP2003521685A
JP2003521685A JP2001555785A JP2001555785A JP2003521685A JP 2003521685 A JP2003521685 A JP 2003521685A JP 2001555785 A JP2001555785 A JP 2001555785A JP 2001555785 A JP2001555785 A JP 2001555785A JP 2003521685 A JP2003521685 A JP 2003521685A
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layer
biological material
isolated
stabilizing layer
tissue
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レクラーク，ノールベルツ
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エスエル マイクロテスト ビッセンシャフトリケ ゲレーテ ゲーエムベーハー
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    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Abstract

(57)【要約】 組織切片（１０）を有するフィルム（１４）が、前記組織切片（１０）を下にして顕微鏡スライド（１８）上に置かれる。次に、顕微鏡スライド（１８）が倒立顕微鏡の目標面内に置かれる。接着テープ（２０）が、結合剤（２２）を下にして、フィルム（１４）上方に、したがって組織切片（１０）の上方に配置される。次の段階において、単離されるべき組織（３６）は、集束されたレーザビームにより切除される。これによりフィルム（１４）も切断される。次に、接着テープ（２０）が顕微鏡から取り去られる。この際に、切除された組織片（３６）は接着テープ（２０）に付着している。フィルム（１４）および組織切片（１０）の残部は顕微鏡スライド（１８）に付着したまま残る。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生物学的材料層の一部を単離する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
疾病の分子的原因を見つけるため、いわゆる遺伝子発現研究が行われる。これ
らの研究は、実際に細胞において発現させられている遺伝子を決定しようとする
ものである。なぜならば、付属する蛋白質が細胞の病理発生の原因となるからで
ある。どの蛋白質が実際に存在しているかを決定する１つの方法は、細胞内で合
成されるｍＲＮＡを決定することである。なぜならば、蛋白質はそれから形成さ
れるからである。
【０００３】 しかしながら、ｍＲＮＡは非常に短命な細胞産物であり、したがって、細胞内
のｍＲＮＡ濃度は非常に低い。例えば腫瘍細胞のｍＲＮＡを決定しようとするの
であれば、できるだけ多数の腫瘍細胞を集める必要がある。そのためには、腫瘍
分子を病変組織から単離する必要がある。これを行うには、例えば、腫瘍細胞を
組織切片から切除し、単離して集め得る。続いて、単離された腫瘍細胞は粉砕さ
れる。適切な精製段階を経て、ｍＲＮＡが細胞から単離される。次にこれは逆転
写酵素によりｃＤＮＡに転写される。原則として、これはリニアＰＣＲを用いて
行われる。このようにして得られたｃＤＮＡを、適切なＤＮＡチップを用いて定
性的または定量的に分析される。
【０００４】 この関連において、本発明は、調査すべき細胞の単離、または抽出に関する。
これの重要な局面の１つは、極めて清潔に、すなわち特にＲＮアーゼがないよう
に作業することである。なぜならば、これらの酵素はｍＲＮＡを劣化させるから
である。素手との接触さえも避けるべきである。
【０００５】 公知の組織切り取り方法（例えば、the American Journal of Pathology, Vol
. 151 (1997), pages 63-67 参照）においては、組織切片はスライド上で作製さ
れる。レーザーを用いて、病変組織の周囲に閉曲線を描く。この曲線上の組織が
切除され、その結果、単離されるべき病変組織が残りの組織から分離される。切
除された組織片は、例えばピペットを用いて吸引できる。公知の方法に伴う欠点
は、非常に時間がかかることである。１回の分析に必要な量のｍＲＮＡを集める
ため、１人が組織の切り取り作業に数日間従事しなければならない。
【０００６】 改良された方法がＤＥ１９６ １６ ２１６ Ａ１に記載されている（Cell.
Mol. Bio., Vol. 44 (1998), pages 735-746も参照）。スライド上に作製された
組織切片は、倒立または正立顕微鏡に置かれる。密封可能チューブ容器のシール
部材はスライド上の組織切片の上に配設される。シール部材の底部すなわち内側
はオイルコートされている。ＵＶレーザーによる切除は、スライド上の組織の一
部を切除するために用いられる。組織の切除部分は、ＵＶ光パルスによってスラ
イドから引き離される。その際に、切除部分は、オイルコートされたシール部材
にぶつかり、オイルに付着する。これにより、時間がかかるピペットによる吸引
は行われない。しなしながら、欠点は、引き離された組織片の動きが制御しにく
いことである。組織片は常にシール部材に達するわけではない。さらに、調査さ
れるべきその当の組織がＵＶ光パルスにより損傷を受ける。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、より大量の組織をできるだけ無菌的かつ迅速に採取できる方
法および付属の保持部を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
この目的は、本発明に従い、請求項１の特徴を有する方法により達成される。
【０００９】 生物学的材料層の一部を分離するための本発明による方法においては、生物学
的材料層は最初に安定化層の１つの面に塗布される。基板は、基板の少なくとも
１つの面に結合層を設けることにより成形される。この場合、結合層の材料は、
安定化層と基板との間の接着を促進できるものが選択される。続いて、基板はそ
の結合層により、生物学的材料層から安定化層の他方の面の安定化層と接触させ
られる。次に、レーザビームの焦点は、単離されるべき生物学的材料層の部分の
周囲に閉曲線を描き、生物学材料ならびに曲線上の安定化層も切除する。これに
よって、単離されるべき部分は、生物学的材料層の残部から分離される。続いて
、単離されるべき生物学的材料層の部分と接触していない安定化層の部分が基板
と分離される。単離された部分は基板に付着する。
【００１０】 代わりに、単離されるべき部分を最初に、層の残部から分離することができる
。そうして初めて、基板はその結合層により、生物学的材料層から安定化層の他
方の側の安定化層と接触させられる。次に、再度、分離されるべき生物学的材料
層の部分と接触してない安定化層の部分と基板が続いて分離される。単離された
部分は、再度基板に付着する。
【００１１】 さらに、レーザビームの焦点は、単離されるべき生物学的材料層の部分の周囲
に完全に閉じた曲線を描く必要はない。ほぼ閉じた曲線を描けば十分である。例
えば単離されるべき部分がその上に保持されている１つ以上のブリッジ部を、単
離されるべき部分と残部との間に残しておくことができる。基板と、単離されな
い部分とを分離する時には、ブリッジ部が切断され、単離されるべき部分が切り
離される。次に、それらは要望どおりに、基板に再度付着する。
【００１２】 生物学的材料層は、例えば、組織切片、細胞スミアまたは接種細胞とし得る。
【００１３】 フィルムは、例えば、安定化層用に用い得る。本発明による方法の実行後、単
離されるべき断片の部分、例えば腫瘍細胞は、基板に付着するのに対し、切片の
残部、例えば健康な組織は、残っている安定化層に付着したままである。単離さ
れるべき切片の部分は、かくして単離される。
【００１４】 目的は、請求項２の特徴を有する方法によってさらに達成される。
【００１５】 生物学的材料層の一部を分離するための本発明による方法において、生物学的
材料層は、最初に安定化層の一方の面に塗布される。安定化層は、捕捉装置上方
に懸装された生物学的材料層と共に配置され、安定化層と捕捉装置との間に間隙
が残される。続いて、レーザビームの焦点は、単離されるべき生物学的材料層の
部分の周囲に閉曲線を描き、曲線上の生物学的材料ならびに安定化層を切除する
。これによって、単離されるべき部分は、生物学的材料層の残部から分離される
。単離されるべき生物学的材料の部分、例えば腫瘍細胞は、捕捉装置上に直接落
ちて容易に単離され、例えば、さらに搬送され得る。
【００１６】 安定化層と捕捉装置との間の間隙は、例えば空隙とし得るが、適切なガスで満
たすか、減圧とすることができる。
【００１７】 安定化層と捕捉装置との間の間隙は、捕捉装置としての凹部を備えたスライド
を用い、単離されるべき部分をスライド中の凹部上に置くことによって直接的に
作製し得る。
【００１８】 代わりに、安定化層と捕捉装置との間の間隙は、安定化層と捕捉装置との間に
スペーサを配置することによって作製し得る。
【００１９】 一般に、組織試料は最初に薄いウエハにカットされ、次にスライドに塗布され
、任意に染色され、続いて透明なマウンティング媒体（アルコール、キシレン）
が付与され、最後にカバーガラスで覆われる。そのようにして作製された組織切
片は、顕微鏡下で良好な結像品質で観察できる。もし組織から個々の切片または
細胞を切り取り（顕微解剖）、それらを他のなんらかの方法でさらに処理する必
要があれば、マウンティング媒体およびカバーガラスはあきらめねばならない。
この結果、顕微鏡における結像品質が劇的に低下する。なぜならば、試料、空気
および光学系の間の屈折率の差が大きく、かつ試料表面が粗いため、光が強く屈
折および散乱されるからである。
【００２０】 光拡散器、例えば散乱スクリーン、つや消しスクリーンまたはつや消しガラス
を、照明装置と試料との間に配置することができる。これにより結像品質がはる
かに改善され、その結果、光拡散器を用いた場合の結像品質が、マウンティング
媒体とカバーガラスを用いた場合に近い品質を有していることが明らかにされて
いる。
【００２１】 そのために、平らな底部を有する保持部を備えることができ、これが光拡散器
として働く。この底部の上には縁部が立ち上がっている。底部から外方へ向けら
れているハンドリング装置が、底部からの縁部の他方の側に連結されている。
【００２２】 ハンドリング装置は、例えば、単純な取っ手または密封可能チューブ容器との
連結部とし得る。
【００２３】 したがって、保持部は、一方では単離された組織を集め、他方では光拡散器と
して働き、さらにハンドリング装置により容易に操作できる。
【００２４】 光拡散器は、生物学的材料層からせいぜい２ｍｍ離して配置するのが有利であ
る。それゆえ、シール部材の底は、光拡散器の範囲における厚みがせいぜい２ｍ
ｍである。
【００２５】 もし保持部が下方から生物学的材料層まで達しているなら、縁部はハンドリン
グ装置とは反対側の底部から０．１ｍｍ〜２ｍｍ突出すべきである。このように
、必要な間隙が自動的に設定される。しかしながら、もし底部を生物学的材料層
または安定化層と直接接触させる必要があれば、保持部の底部のそのようなデザ
インは使えない。
【００２６】 生物学的材料層の単離された部分を捕捉または収集するため、保持部の底部に
はハンドリング装置と反対の側に結合層が設けてある。
【００２７】 本発明の改良においては、保持部は、可撓性連結帯を介して密封可能チューブ
容器に一体的に連結されており、チューブ容器のシール部材として働く。可撓性
連結帯により旋回させることにより、チューブ容器を密封できる。組織を捕捉ま
たは収集した後、シール部材で簡単に閉鎖し得る。単離された組織切片は無菌チ
ューブ容器内に封入される。
【００２８】 そのようなチューブ容器は簡単に、試料の下で旋回させるか、旋回させて光お
よび／または操作パスから外すことができる。このようにして、組織切片は、種
々の操作、例えば試料を機械的に除去するためにアクセスできる。
【００２９】 保持部は、捕捉装置としてまたは単離された組織片を収集するための基板とし
て用い得る。
【００３０】 本発明による方法により、非常に小さく、時には個別の、組織切片中の腫瘍細
胞を、通常の作業段階で単離し、それらを通常の捕捉装置で収集することも可能
である。
【００３１】 本発明のさらに有利な改良は、従属請求項において特徴付けられている。
【００３２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を、図面（尺度に忠実ではない）中で概要的に表した代表的実施
例を用いてより詳細に説明する。これらの図面中では、個々の図中の同じ参照番
号は同等の部材を示す。
【００３３】 以下、図１Ａを参照する。
【００３４】 凍結、またはパラフィン包埋した組織を、スライサで薄い組織切片１０に薄切
する。概して、これらの切片は巻いた状態になる。
【００３５】 顕微鏡スライド１２にアルコールを噴霧する。サイズが数平方センチメートル
で紙層で裏打ちしてある１片のフィルム１４を、アルコール噴霧した顕微鏡スラ
イド１２の面上に載せる。このフィルム１４は、例えば厚みが２μｍのＵＶ吸収
ＰＥＴまたはＰＥＭで構成される。続いて、紙を取り去る。次に、接着剤１６、
例えばマウント接着剤で、フィルム１４をその縁部において顕微鏡スライド１２
に固定する。
【００３６】 次に、巻いた状態の組織切片１０をフィルム１４上に載せる。フィルム１４と
組織切片１０とを有する顕微鏡スライド１２を６０℃まで加熱することにより、
パラフィンが溶融して組織切片１０が展開する。
【００３７】方法１ 以下、図１Ｂを参照する。現在好まれている代表的実施形態においては、組織
切片１０を有するフィルム１４を、続いて顕微鏡スライド１２から取り去り、組
織切片１０を下向きにして第２の顕微鏡スライド１８上に載せる。この第２の顕
微鏡スライド１８上で、フィルム１４をその縁部において接着剤１６で再度固定
する。次に第２の顕微鏡スライド１８を倒立顕微鏡の目標平面内に設置する。
【００３８】 １つの代表的実施形態においては、底面に結合剤２２が配置された接着テープ
２０をフィルム１４表面、したがって組織切片１０の上部に置き得る。接着テー
プ２０、２２の代わりに、種々の結合フィルム、例えば結合剤２２としてシリコ
ン樹脂を用いる半導体産業用のものを使うことも可能である。光拡散器２４は接
着テープ２０上に置かれる。続いて、組織は上方から照明装置により照明される
。接着テープ２０自身が光拡散器として働くことも可能である。
【００３９】 以下、図１Ｃを参照する。続いて、単離されるべき組織３６は、倒立顕微鏡内
において、集束されたビーム、例えば波長が３３７ｎｍで出力密度が約１０8 〜
１０9 Ｗ／ｃｍ2 の窒素レーザ、で切除される。これにより、ＵＶ吸収フィルム
１４も切断される。次に、光拡散器を取り去る。
【００４０】 以下、図１Ｄを参照する。次に、接着テープ２０を顕微鏡から取り去る。その
際に、切除された組織片３６は接着テープ２０に付着している。フィルム１４と
組織切片１０の残部は、接着剤１６により第２の顕微鏡スライド１８に固定され
ており、それに付着したまま残る。
【００４１】 以下、図２Ａおよび図２Ｂを参照する。しかしながら、現在好まれている代表
的な実施形態においては、密封可能プラスチック製チューブ容器２８のシール部
材２６は、結合剤２２、例えばシリコン樹脂がその片面に塗布されている。この
目的のため、チューブ容器をシール部材で密封する場合に、チューブ容器の内側
と接触しているシール部材２６の側が選ばれる。
【００４２】 このシール部材２６は平らな底部３０を有し、これは光散乱性材料で構成され
ている。底部３０の上方に、円周状縁部３２が立ち上がっている。縁部３２は、
可撓性連結帯３４を介してチューブ容器２８と一体的に接続されている。可撓性
片３４によってシール部材２６を旋回することにより、チューブ容器２８を密封
できる。シール部材２６は、結合剤２２を下に向けて、フィルム１４上方、した
がって組織切片１０上方に配置される。組織切片１０は、照明装置により光散乱
性シール部材２６を通して照明される。
【００４３】 以下、図２Ｃを参照する。続いて、単離されるべき組織３６は、倒立顕微鏡内
において、集束されたビーム、例えば波長が３３７ｎｍで出力密度が約１０8 〜
１０9 Ｗ／ｃｍ2 の窒素レーザ、で切除される。これにより、ＵＶ吸収フィルム
１４も切断される。
【００４４】 以下、図２Ｄを参照する。次に、シール部材２６を顕微鏡から取り去る。その
際に、切除された組織片３６はシール部材２６の底部３０に付着している。安定
化層１４と組織切片１６の残部は接着剤１６により２番目の顕微鏡スライド１８
に固定されており、それに付着したまま残る。
【００４５】 以下、図２Ｅを参照する。プラスチック製チューブ容器２８はシール部材２６
により密封される。したがって、切除された組織片３６は、チューブ容器２８の
無菌空間内に置かれる。したがって、この組織片は非常に純粋な方法で単離され
た。
【００４６】方法２ 以下、図３Ａおよび図３Ｂを参照する。代替的方法において、組織切片１０を
備えたフィルム１４が顕微鏡スライド１２から取り去られ、組織切片１０を上向
きまたは下向きにして、第２の顕微鏡スライド１８上に載せられる。このケース
では、高さが約０．１ｍｍのスペーサ３８が第２の顕微鏡スライド上に配置され
ている。したがって、組織切片１０を有するフィルム１４の下方には空隙４０が
形成される。
【００４７】 以下、図３Ｃを参照する。代わりに、フィルム１４と第２のスライド１８との
間の間隙４０は、スペーサ３８の代わりに、第２のスライド１８中の凹部４１に
より作り出すこともできる。
【００４８】 そのようにして作製された第２のスライド１８が、倒立顕微鏡の目標面内に置
かれる。上部に延びる倒立顕微鏡の照明路内に拡散器２４が導入される。これは
、試料１０の約０．１ｍｍ〜０．２ｍｍ上方に置かれる。
【００４９】 以下、図３Ｄを参照する。続いて、単離されるべき組織３６を、集束されたＵ
Ｖレーザビームで切除する。これによりＵＶ吸収フィルム１４も切断される。し
たがって、単離されるべき生物学的材料の部分３６は、第２のスライド１８上に
落ち、その結果、より簡単に搬送できる（図３Ｅ参照）。
【００５０】方法３ 以下、図４Ａおよび図４Ｂを参照する。さらなる代替的方法においては、フィ
ルム１４と組織切片１０とを下側に有する顕微鏡スライド１２が、正立顕微鏡の
目標面内に置かれる。
【００５１】 この代表的実施形態においては、密封可能プラスチック製チューブ容器２８の
シール部材２６には、結合剤２２、例えばシリコン樹脂、が設けてある。チュー
ブ容器２８のシール部材２６は、試料１０の下方に置かれる。シール部材２６は
平らな底部３０を有している。部材２６の、試料１０と同じ側で、円周状縁部４
６が底部３０から０．１〜２ｍｍ上方へ立ち上がっている。底部３０の反対側に
は、さらなる縁部３２が立ち上がっている。この第２の縁部３２は、可撓性連結
帯３４を介してチューブ容器２８に一体的に接続されている。可撓性連結帯３４
によりシール部材２６を旋回することにより、チューブ容器２８を密封できる。
【００５２】 シール部材２６は、結合剤２２を上向きにして、試料１０の下方に置かれる。
組織１０は、光拡散器として働くシール部材２６を通して、照明装置により下方
から照明される。
【００５３】 以下、図４Ｃを参照する。単離されるべき組織３６は、集束されたビーム、例
えば波長が３３７ｎｍで出力密度が約１０8 〜１０9 Ｗ／ｃｍ2 の上方から入射
する窒素レーザで再度切除される。これにより、ＵＶ吸収フィルム１４も切断さ
れる。
【００５４】 したがって、単離されるべき生物学的材料の部分３６は、シール部材２６上に
落ちる。プラスチック製チューブ容器２８は、シール部材２６により密封される
（図４Ｄ参照）。したがって、切除された組織片３６は、チューブ容器２８の無
菌空間内に置かれる。したがって、この組織片は非常に清浄な方法で単離された
。
【図面の簡単な説明】
【図１】 生物学的材料層の一部を単離する方法の概略を示す。
【図２】 生物学的材料層の一部を単離する代替的方法の概略を示す。
【図３】 生物学的材料層の一部を単離するさらなる代替的方法の概略を示す。
【図４】 生物学的材料層の一部を単離するさらなる代替的方法の概略を示す。
【符号の説明】
１０ 組織切片 １２ 顕微鏡スライド １４ フィルム １６ 接着剤 １８ 第２の顕微鏡スライド ２０ 接着テープ ２２ 結合剤 ２４ 光拡散器 ２６ シール部材 ２８ 密封可能プラスチック製チューブ容器 ３０ 底部 ３２ シール部材２６の縁部 ３４ 可撓性接続部材 ３６ 単離されるべき組織 ３８ スペーサ ４０ 空隙 ４１ 凹部 ４６ 縁部
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 1/28 Ｖ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 AA24 BA14 BB21 BB60 CB01 FA16 2G052 AA33 AD34 DA05 EC17 FA05 GA32 4B029 AA09 BB11 BB20 CC02 HA02 HA10

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 生物学的材料層（１０）の一部（３６）を単離する方法であ
    って、 ａ）生物学的材料層（１０）は安定化層（１４）の一方の側に塗布され、 ｂ）基板（２０）は、該基板の少なくとも一方の側に結合層（２２）を設けて
    形成され、安定化層（１４）と基板（２０）との間の接着を促進するように前記
    結合層の材料が選択され、 ｃ）基板（２０）は、その結合層（２２）により、生物学的材料層（１０）か
    ら、安定化層（１４）の他方の側で安定化層と接触させられ、 ｄ）レーザビームの焦点により、単離されるべき生物学的材料層（１０）の部
    分（３６）の周囲に、閉じた曲線またはほぼ閉じた曲線が描かれ、曲線上の生物
    学的材料ならびに安定化層（１４）が切除され、 ｅ）次に、基板（２０）および分離されるべき生物学的材料層（１０）の部分
    （３６）と接触していない安定化層（１４）の部分が分離される方法。
  2. 【請求項２】 生物学的材料層（１０）の一部（３６）を単離する方法であ
    って、 ｆ）生物学的材料層（１０）が安定化層（１４）の一方の側に塗布され、 ｇ）生物学的材料層（１０）を有する安定化層（１４）は、捕捉装置（１８、
    ２６）上方に懸装して配置され、安定化層と捕捉装置との間に間隙（４０）が設
    けられ、 ｈ）次に、レーザビームの焦点により、単離されるべき生物学的材料層（１０
    ）の部分（３６）の周囲に閉じた曲線が描かれ、曲線上の生物学的材料ならびに
    安定化層（１４）が切断され、その結果、単離されるべき部分（３６）が生物学
    的材料層（１０）の残部から分離され、 ｉ）次に、単離されるべき部分（３６）が、捕捉装置（１８、２６）上へ落下
    してこれにより捕捉される方法。
  3. 【請求項３】 凹部を有するスライド（１８）が捕捉装置として用いられる
    こと、および 単離されるべき部分（３６）がスライド（１８）の凹部（４１）上方に置かれ
    ることを特徴とする請求項２記載の方法。
  4. 【請求項４】 安定化層（１４）と捕捉装置（１８、２６）との間の間隙（
    ４０）は、安定化層と捕捉装置との間にスペーサ（３８）を配置することによっ
    て作り出されることを特徴とする請求項２記載の方法。
  5. 【請求項５】 光拡散器として働く平らな底部（３０）と、 底部（３０）の上方に立ち上がっている縁部（３２）と、および 底部（３０）からの縁部（３２）の他方の側と連結されているハンドリング装
    置（３４）と、 を備える保持部（２６）が、基板（２０）として用いられることを特徴とする
    請求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】 光拡散器として働く平らな底部（３０）と、 底部（３０）の上方に立ち上がっている縁部（３２）と、および 底部から外方に向けられかつ底部（３０）からの縁部（３２）の他方の側と連結
    されているハンドリング装置（３４）と、 を備える保持部（２６）が、捕捉装置（１８）として用いられることを特徴と
    する請求項２記載の方法。
  7. 【請求項７】 ハンドリング装置から反対側の底部を超えて縁部が０．１〜
    ２ｍｍ突出している保持部（２６）が用いられることを特徴とする請求項６記載
    の方法。
  8. 【請求項８】 光拡散器の近傍で底部（３０）がせいぜい２ｍｍの厚みを有
    する保持部（２６）が用いられることを特徴とする請求項５〜７のいずれか記載
    の方法。
  9. 【請求項９】 ハンドリング装置（３４）の反対側で底部（３０）に結合層
    （２２）が設けられた保持部（２６）が用いられることを特徴とする請求項５〜
    ７のいずれか記載の方法。
  10. 【請求項１０】 保持部は、可撓性連結帯（３４）を介して密封可能チュー
    ブ容器（２８）に一体的に接続されており、前記連結帯は、可撓性連結帯により
    旋回させることによってチューブ容器を密封できるのでチューブ容器用のシール
    部材（２６）として働くことを特徴とする請求項５〜７のいずれか記載の方法。
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Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002202229A (ja) * 2000-10-31 2002-07-19 Fuji Photo Film Co Ltd 生体試料の切断方法およびそれに用いる装置
JP2004506892A (ja) * 2000-08-16 2004-03-04 ペー．アー．エル．エム．マイクロレーザー　テヒノロギース　アーゲー レーザー照射によって標本から個々の対象物を分離するための標本用支持装置
JP2012507275A (ja) * 2008-10-31 2012-03-29 モレキュラー マシーンズ アンド インダストリーズ アクチエンゲゼルシャフト 細胞の培養及び鏡検のためのペトリ皿
WO2012161069A1 (ja) * 2011-05-20 2012-11-29 オリンパス株式会社 基板シートの製造方法
WO2013077337A1 (ja) * 2011-11-25 2013-05-30 オリンパス株式会社 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法
WO2013077297A1 (ja) * 2011-11-24 2013-05-30 オリンパス株式会社 細胞分取装置および細胞分取方法
US9304068B2 (en) 2010-05-28 2016-04-05 Olympus Corporation Cell collection apparatus, cell collecting system, and cell collecting method
JP2016522900A (ja) * 2013-05-15 2016-08-04 コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェＫｏｎｉｎｋｌｉｊｋｅ Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｎ．Ｖ． 試料からの組織分離
WO2016163385A1 (ja) * 2015-04-06 2016-10-13 国立大学法人名古屋大学 レーザーマイクロダイセクション装置、レーザーマイクロダイセクション装置を含む分析装置、試料採取方法、及レーザーマイクロダイセクション装置に用いられるデバイス
US9530204B2 (en) 2010-11-19 2016-12-27 Olympus Corporation Method of preparing biological specimen
WO2020096031A1 (ja) * 2018-11-09 2020-05-14 株式会社Ｌｓｉメディエンス 遺伝子検査用標本スライド

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT410729B (de) * 2000-04-27 2003-07-25 Qsel Quantum Solar Energy Linz Photovoltaische zelle mit einer photoaktiven schicht aus zwei molekularen organischen komponenten
US10156501B2 (en) 2001-11-05 2018-12-18 Life Technologies Corporation Automated microdissection instrument for determining a location of a laser beam projection on a worksurface area
US8715955B2 (en) * 2004-09-09 2014-05-06 Life Technologies Corporation Laser microdissection apparatus and method
US8722357B2 (en) * 2001-11-05 2014-05-13 Life Technologies Corporation Automated microdissection instrument
WO2004025569A2 (en) 2002-09-13 2004-03-25 Arcturus Bioscience, Inc. Tissue image analysis for cell classification and laser capture microdissection
WO2005033668A1 (de) * 2003-10-01 2005-04-14 Norbert Leclerc Mikrodissektion
DE10346130B4 (de) * 2003-10-01 2006-10-05 Leclerc, Norbert, Dr. Vorrichtung und Verfahren zum Isolieren eines Teils einer Schicht biologischen Materials oder eines Präparats
DE102005061561A1 (de) * 2005-12-22 2007-06-28 P.A.L.M. Microlaser Technologies Ag Laser-Mikrodissektionsverfahren, Steuersystem für eine Laser-Mikrodissektionsvorrichtung und Trägervorrichtung
DE102006045620B4 (de) 2006-09-25 2009-10-29 Roland Dr. Kilper Vorrichtung und Verfahren für Aufnahme, Transport und Ablage mikroskopischer Proben
CN101859022B (zh) * 2009-04-09 2012-07-25 上海中晶科技有限公司 玻片及其形成方法
CN101806955B (zh) * 2010-03-04 2012-02-29 重庆天海医疗设备有限公司 一种显微检测中检测板的高度定位方法及所使用的压片装置
DE202010017281U1 (de) 2010-04-15 2011-06-22 Mmi Ag Probengefäßträger für die Ablage von Einzelzellen unter einem Mikroskop
DE102012207240A1 (de) 2012-05-02 2013-11-07 Leica Microsystems Cms Gmbh Laser-Mikrodissektionsgerät und -verfahren
DE102016110750A1 (de) * 2016-06-10 2017-12-14 Leica Microsystems Cms Gmbh Trägermembran für die Lasermikrodissektion einer auf die Trägermembran aufgebrachten Probe, Lasermikrodissektionseinrichtung und Lasermikrodissektionsverfahren unter Verwendung einer solchen Trägermembran
CN106706902B (zh) * 2016-11-18 2018-12-18 百奥森（江苏）食品安全科技有限公司 一种猪圆环病毒抗体快速金标检测卡
CA3045227A1 (en) 2016-12-30 2018-07-05 Stefan Seeger Method and apparatus for the isolation and treatment of particulate targets
CN106918467A (zh) * 2017-04-14 2017-07-04 长庆石油勘探局技术监测中心 一种逐层采集铁基材料腐蚀产物的方法
CN114072666B (zh) * 2019-06-28 2024-07-26 旭化成株式会社 用于质谱分析仪的成像用试样及其制法
CN111412860B (zh) * 2020-03-25 2022-03-22 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 激光共聚焦显微镜生物被膜观察载物台
CN115219308B (zh) * 2022-08-31 2025-12-09 复旦大学附属中山医院青浦分院(上海市青浦区中心医院) 一种用于完整厚生物组织高分辨成像的制片方法及成像方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5942885A (ja) * 1982-07-29 1984-03-09 ミシガン・ステ−ト・ユニバ−シテイ 生細胞選別方法及び生細胞選別装置
WO1997029355A1 (de) * 1996-02-05 1997-08-14 P.A.L.M. Gmbh Verfahren und vorrichtung zur berührungslosen mikroinjektion sowie zum sortieren und zur gewinnung von planar ausgebrachten biologischen objekten mit laserstrahlen
WO1998035216A1 (en) * 1997-02-07 1998-08-13 Arcturus Engineering, Inc. Laser capture microdissection method and apparatus
JPH11148887A (ja) * 1997-11-17 1999-06-02 Japan Science & Technology Corp 生体サンプルの切断方法および切断片回収方法、 並びにそのための装置

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4624915A (en) * 1982-07-29 1986-11-25 Board Of Trustees Of Michigan State University Positive selection sorting of cells
US5843657A (en) * 1994-03-01 1998-12-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Isolation of cellular material under microscopic visualization
DE19616216A1 (de) * 1996-04-23 1997-10-30 P A L M Gmbh Verfahren und Vorrichtung zur Gewinnung von laserdissektierten Partikeln wie biologische Zellen bzw. Zellorganellen, Chromosomenteilchen etc.
DE19603996C2 (de) * 1996-02-05 2002-08-29 P A L M Gmbh Mikrolaser Techno Sortierverfahren für planar ausgebrachte biologische Objekte mit Laserstrahlen
US5859699A (en) * 1997-02-07 1999-01-12 Arcturus Engineering, Inc. Laser capture microdissection analysis vessel
US6495195B2 (en) * 1997-02-14 2002-12-17 Arcturus Engineering, Inc. Broadband absorbing film for laser capture microdissection
US5985085A (en) * 1997-10-01 1999-11-16 Arcturus Engineering, Inc. Method of manufacturing consumable for laser capture microdissection
DE19818425A1 (de) * 1997-10-18 1999-07-15 Malte Dr Med Boehm Vorrichtung zur Handhabung von Proben für die membrangestützte Mikrodissektion
US6743601B1 (en) * 1998-12-10 2004-06-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Non-contact laser capture microdissection
AU4812600A (en) * 1999-04-29 2000-11-17 Arcturus Engineering, Inc. Processing technology for lcm samples
US6690470B1 (en) * 1999-11-04 2004-02-10 Arcturus Engineering, Inc. Automated laser capture microdissection

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5942885A (ja) * 1982-07-29 1984-03-09 ミシガン・ステ−ト・ユニバ−シテイ 生細胞選別方法及び生細胞選別装置
WO1997029355A1 (de) * 1996-02-05 1997-08-14 P.A.L.M. Gmbh Verfahren und vorrichtung zur berührungslosen mikroinjektion sowie zum sortieren und zur gewinnung von planar ausgebrachten biologischen objekten mit laserstrahlen
JP2000504824A (ja) * 1996-02-05 2000-04-18 ペー・アー・エル・エム・ゲーエムベーハー レーザー照射を用いる平坦に配置される生物学的対象への非接触顕微注射、分別及び採取方法並びに装置
WO1998035216A1 (en) * 1997-02-07 1998-08-13 Arcturus Engineering, Inc. Laser capture microdissection method and apparatus
JP2001526795A (ja) * 1997-02-07 2001-12-18 アークテュラス エンジニアリング インコーポレイテッド レーザー捕捉顕微解剖法と装置
JPH11148887A (ja) * 1997-11-17 1999-06-02 Japan Science & Technology Corp 生体サンプルの切断方法および切断片回収方法、 並びにそのための装置

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MALTE BOHM ET AL.: "Technical Advance / Microbeam MOMeNT / Non-Contact Laser Microdissection of Membrane Mounted Native", AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY, vol. 151, no. 1, JPN7010003473, July 1997 (1997-07-01), pages 63 - 67, ISSN: 0001762201 *

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004506892A (ja) * 2000-08-16 2004-03-04 ペー．アー．エル．エム．マイクロレーザー　テヒノロギース　アーゲー レーザー照射によって標本から個々の対象物を分離するための標本用支持装置
JP2002202229A (ja) * 2000-10-31 2002-07-19 Fuji Photo Film Co Ltd 生体試料の切断方法およびそれに用いる装置
JP2012507275A (ja) * 2008-10-31 2012-03-29 モレキュラー マシーンズ アンド インダストリーズ アクチエンゲゼルシャフト 細胞の培養及び鏡検のためのペトリ皿
US9304068B2 (en) 2010-05-28 2016-04-05 Olympus Corporation Cell collection apparatus, cell collecting system, and cell collecting method
US9530204B2 (en) 2010-11-19 2016-12-27 Olympus Corporation Method of preparing biological specimen
WO2012161069A1 (ja) * 2011-05-20 2012-11-29 オリンパス株式会社 基板シートの製造方法
JPWO2012161069A1 (ja) * 2011-05-20 2014-07-31 オリンパス株式会社 基板シートの製造方法
US9274033B2 (en) 2011-05-20 2016-03-01 Olympus Corporation Substrate-sheet fabricating method
WO2013077297A1 (ja) * 2011-11-24 2013-05-30 オリンパス株式会社 細胞分取装置および細胞分取方法
JPWO2013077297A1 (ja) * 2011-11-24 2015-04-27 オリンパス株式会社 細胞分取装置および細胞分取方法
US9291534B2 (en) 2011-11-24 2016-03-22 Olympus Corporation Cell collection apparatus and cell collecting method
WO2013077337A1 (ja) * 2011-11-25 2013-05-30 オリンパス株式会社 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法
JPWO2013077337A1 (ja) * 2011-11-25 2015-04-27 オリンパス株式会社 組織分割装置、細胞分取装置、細胞分取システム、組織表示システム、基板、伸展部材、組織分割方法および細胞分取方法
JP2016522900A (ja) * 2013-05-15 2016-08-04 コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェＫｏｎｉｎｋｌｉｊｋｅ Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｎ．Ｖ． 試料からの組織分離
WO2016163385A1 (ja) * 2015-04-06 2016-10-13 国立大学法人名古屋大学 レーザーマイクロダイセクション装置、レーザーマイクロダイセクション装置を含む分析装置、試料採取方法、及レーザーマイクロダイセクション装置に用いられるデバイス
JPWO2016163385A1 (ja) * 2015-04-06 2018-02-22 国立大学法人名古屋大学 レーザーマイクロダイセクション装置、レーザーマイクロダイセクション装置を含む分析装置、試料採取方法、及レーザーマイクロダイセクション装置に用いられるデバイス
WO2020096031A1 (ja) * 2018-11-09 2020-05-14 株式会社Ｌｓｉメディエンス 遺伝子検査用標本スライド
CN112969803A (zh) * 2018-11-09 2021-06-15 美迪恩斯生命科技株式会社 基因检测用标本载玻片

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