JP2002526430A - 水不溶性基材と結合した活性タンパク質を含有するパーソナルケア組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、水不溶性基材、複数の活性タンパク質、及び高分子鎖を含み、各酵素と前記基材を永久的に付着させる結合手段を含み、ここで前記基材に対して前記酵素を約０．０１μｇ／ｃｍ²〜約１０００μｇ／ｃｍ²含むパーソナルケア組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、高分子鎖を介して水不溶性基材と結合した活性タンパク質を含むパ
ーソナルケア組成物に関する。本パーソナルケア組成物の実施態様にはパーソナ
ルケアワイプ及びパーソナルケアスキンマスクが挙げられる。本発明の組成物は
、ユーザーが活性タンパク質とアレルギー反応を起こす危険性を最小限にしなが
ら、活性タンパク質の活性によるクレンジング及びスキンコンディショニングの
改善を提供する。

【０００２】

【従来の技術】

入手できる、活性タンパク質を含有する市販製品の数が増加してきている。こ
のような製品の大部分は活性タンパク質として酵素を利用している。酵素は、化
合物又は基質と反応してその化合物を分解するタンパク質である。酵素は、その
酵素が反応する基質の種類に基いて非常に多くの種類に分けられる。それぞれの
種類の酵素は通常、活性の特異的選択の結果として異なった化学結合の切断を触
媒する。リパーゼという種類の酵素は、これに限定されるわけではないが、炭化
水素及びポリアルコール主鎖基質間で形成されるエステル結合の加水分解能があ
ることが知られている。このような基質の例はモノ−、ジ−及びトリグリセリド
ポリグリセロールエステルである。プロテアーゼという種類の酵素はタンパク質
の加水分解能があることが知られている。天然に存在する、及び生物工学的に作
られたプロテアーゼ酵素は、タンパク質からなる汚れやしみを加水分解するため
の家庭用掃除用洗浄剤、皮膚の汚れや垢を取り除くためのパーソナルケア製品、
口中のプラークを除去しやすくする口内洗浄製品、及び体内の所望でないタンパ
ク質に作用する医薬品に混合されている。

【０００３】 現在の市販クレンジング製品はプロテアーゼ酵素を混合することにより、更に
効果的になっていることが知られている。ホーラ（Hora）等の米国特許第４，２
６１，８６８号、タイ（Tai）の米国特許第４，４０４，１１５号、レットン（L
etton）等の米国特許第４，３１８，８１８号、欧州特許出願１３０，７５６（
１９８５年１月９日発行）及びヴェネガス（Venegas）の米国特許第５，０３０
，３７８号はすべてクレンジング又は洗浄剤製品のプロテアーゼ酵素の使用につ
いて開示している。

【０００４】 しかし、酵素を含む多くの活性タンパク質は抗原となる可能性があり、ある種
の条件下でヒトにアレルギー反応を起こす可能性があることもわかっている。ヒ
トの免疫系は、活性タンパク質に暴露されることにより特異的抗体を産生するこ
とができる。この特異的抗体の産生過程は、臨床的に有用な反応が得られる時は
「免疫化」という。しかし、その反応が過敏症を誘導する時は「感作」と表現さ
れる。活性タンパク質に対するアレルギー感作は、ヒトが定期的にタンパク質に
暴露される環境下で見られる。このような環境としては、管理されずに活性タン
パク質を含有する塵又はエアゾールに従業員がさらされ得る製造施設、又は時折
アレルギー反応を引き起こす活性タンパク質を含有する製品を消費者が繰り返し
使用する市場が挙げられる。

【０００５】 現在、活性タンパク質に対するアレルギー反応は、製品に使用されるこのよう
なタンパク質の選択をヒト由来のものに限定することにより最小限にすることが
できる。この試みはアレルゲン性の問題を最小限にするが、所望の活性特性も併
せ持つような活性タンパク質を発見する可能性があまりないので完全な解決とは
言えない。

【０００６】 アレルギー反応を減少させるもうひとつの方法は、タンパク質分子の大きさを
小さくすることである（日本特許公報第４，１１２，７５３号参照）。しかし、
大きさを小さくすることは、生物学的活性の明らかな減少の原因となる可能性も
ある。

【０００７】 アレルゲン性を減少させる３番目の案は、アレルゲン性を減少させたタンパク
質を送達するようなエピトープのマッピング及びタンパク質アミノ酸配列の変化
によるものである。この試みは、普通、開発時間と資金の大量の投入を必要とす
る。

【０００８】 医療分野においては、更に別の方法によりタンパク質の免疫原性を減少させる
提案が出されている。この方法は、非反応性ポリマーのタンパク質への付着を伴
なう。デイビス（Davis）らの米国特許第４，１７９，３３７号は、実質的には
直鎖ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ
）ポリマー部分に結合する酵素に関する。ＰＥＧ又はＰＰＧとの結合は酵素のア
レルゲン性を緩和し、生理学的活性の１５％のみが維持されることが明らかにな
った。オルセン（Olsen）らのＰＣＴ特許出願ＷＯ９６／１７９２９（１９９６
年６月１３日発行）は、好適なポリマーとの共役による酵素の修飾に関する。オ
ルセンの出願は、アレルゲン性は親酵素と比較して約２５％〜６６％減少し、一
方親酵素の活性を３９％〜１００％維持されることを示す修飾された酵素を記載
している。

【０００９】 米国特許出願０８／９０３，２９８号は、高い酵素活性を示しながらアレルゲ
ン性を減少させるために一対のポリエチレングリコールポリマー部分を加えるこ
とにより修飾された酵素の使用を開示している。そこでは、修飾された酵素は繊
維性基材と組み合わせてワイプとして用いられる。修飾された酵素は基材と付着
しない。アレルゲン性の減少は、酵素の修飾を介して達成される。

【００１０】 米国特許出願０９／０８８，９１２号は、酵素の免疫原性決定基を遮蔽するこ
とがわかった３つの特異的エピトープ領域の１つ又はそれ以上でのサブチリシン
酵素の重合化学修飾について開示した。

【００１１】 活性タンパク質のアレルゲン性を減少させるもうひとつの試みは、活性タンパ
ク質が空気中に散乱するのを防ぐために顆粒状にする、コーティングする、又は
溶解することによる。カルボ（Calvo）の米国特許第４，５５６，５５４号は、
重合体基材の粒子との付着により固定化した酵素を含む化粧品組成物について開
示している。この酵素と付着した粒子は、化粧品用ビヒクルに分散される。この
ビヒクルを皮膚に適用するとこの酵素が基材から放出され、それにより再活性化
される。このような方法は消費者が空中に散乱しているタンパク質に暴露される
ことに取り組んでいるが、このような方法には、皮膚に沈着した酵素が放出され
て組織との接触が延長することに関連する実質的な危険性が依然残っている。

【００１２】 カナダ特許第１，２２９，８０８号（１９８７年１２月１日発行）は、セルロ
ース性基材上で酵素、具体的にはβ−ガラクトシダーゼ及びβ−グルコシダーゼ
が固定化されることを教え、その際酵素は基材をコーティングするアガロースゲ
ルに吸着されることにより固定化される。

【００１３】 英国特許出願ＧＢ２，２４０，０４０（１９９１年７月２４日発行）は、基材
上の酵素の固定化について教えている。酵素は薬用包帯を提供するためにその中
で基材と共有結合する。

【００１４】 バイオセンサー、バイオセパレーター及びバイオリアクターのような生物学的
器材に用いられる酵素の活性は、器材表面に酵素の部位特異的付着を用いること
により増強される。フアン（Huang）らの「表面部位特異的付着による固定化サ
ブチリシン活性の改善（"Improving the Activity of Iｍｍobilized Subtilisi
n by Site-specific Attachment to Surface"）」、Analytical Chemistry第６
９巻２２号（１９９７年１１月１５日）を参照されたい。フアンは、セリン２４
９又はセリン１４５のシステインへの突然変異、そしてアミノ基で機能化したシ
リカビーズとの結合を介してサブチリシン酵素の不動化について教えている。

【００１５】

【発明が解決しようとする課題】

タンパク質活性のレベルの改善と、活性タンパク質の暴露に対する低アレルギ
ー反応の維持を提供する組成物を開発することが非常に好ましい。もしこれが達
成できたなら、タンパク工学の利点を利用する安全な方法を消費者に提供するこ
とになる。

【００１６】 本発明の目的は、免疫系の刺激及び結果として起こる活性化の減少を維持しな
がらこの活性を送達するパーソナルケア布組成物を提供することである。本発明
の目的はまた、アレルギー反応の危険性を減少させながら、この生物学的活性を
パーソナルケアワイプ又はパーソナルケアスキンマスクの形態で提供することで
ある。

【００１７】

【課題を解決するための手段】

本発明は、水不溶性基材、複数の活性タンパク質、及び前記各タンパク質と前
記基材を永久的に付着させる高分子鎖を含む結合手段を含み、前記基材に対して
前記タンパク質を約０．０１μｇ／ｃｍ²〜約１０００μｇ／ｃｍ²含むパーソナ
ルケア組成物に関する。

【００１８】 （発明の詳述） 本発明のパーソナルケア組成物は、高分子鎖で水不溶性基材に永久的に結合し
た活性タンパク質を含む。本組成物は、皮膚からの汗、皮脂、死んだ皮膚細胞、
脂肪及び油の洗浄、及び皮膚のモイスチャライジングに非常に有効である。本組
成物は、酵素及びその他の活性タンパク質の特定の活性を利用する便利な方法を
提供する。本活性タンパク質は基材と結合し、それにより何らかのアレルギー反
応の危険性を最小限にする。活性タンパク質と基質が高分子鎖を介して付着する
ことにより、活性タンパク質は基材表面上でより動きやすくなり、それによりそ
のタンパク質が汚れ及び死んだ皮膚細胞に更に簡単に近付きやすくなる。

【００１９】 理論によって限定されるものではないが、活性タンパク質と基材が永久的に結
合することにより、複数のタンパク質が使用の際に皮膚に接触してその表面に作
用すると考えられている。その後、拭取り布を皮膚から取り除くと、すべてのそ
のタンパク質は皮膚表面から取り去られ、そして用いた拭取り布で除去及び処理
され、それによりエアロゾル化及び皮膚への暴露の延長の危険性を減少させる。
活性タンパク質は化合物と反応し、これは皮膚と接触している間特異的反応性を
有し、使用後免疫系を刺激してその後アレルギー反応を担当する抗体を形成する
ものを皮膚に何も残さない。

【００２０】 本明細書で使用する「アミノ酸配列」という言葉はタンパク質を構成するアミ
ノ酸の特異的立体配置を表す。以下に本明細書で用いられるアミノ酸を表す略語
の一覧を示す：

【００２１】

【表１】

【００２２】 本明細書で使用する「突然変異」という用語は生物の遺伝的変化を表し、その
生物体によって生産される酵素のアミノ酸配列が同様に変化する。生物体の突然
変異では酵素の特性の変化がよく見られる。 本明細書で使用する「野生型」という用語は突然変異を起こしていない宿主に
よって産生される酵素を表す。 本明細書で使用する「変異型」という用語は、その酵素を産生する宿主の遺伝
的突然変異のために野生型酵素のアミノ酸配列と異なったアミノ酸配列を有する
酵素を意味する。 本明細書で用いられているパーセンテージや比率は特に記述がない限り、すべ
て重量によって表され、特に指定がない限り測定はすべて２５℃で行う。本発明
は、本明細書に記載されている必須の素材や成分並びに任意の素材や成分をも含
み、それからなり、又はそれらから本質的になることができる。 本発明のパーソナルケア組成物の必須成分並びに好ましい任意の成分の非排他
的リストを以下に詳細に記載する。

【００２３】水不溶性基材 本発明の製品は水不溶性基材を含む。「水不溶性」という用語は、基材は水に
溶解しない、又は水に浸してもバラバラにならないことを意味する。水不溶性基
材は、洗浄及びモイスチャライジング、及び実質的に皮膚からのすべてのタンパ
ク質を除去するために、本発明の活性タンパク質を皮膚に送達するための器材又
はビヒクルである。

【００２４】 多種多様な物質が基材として用いられている。以下の特徴が望ましいが、これ
に限定されない：（ｉ）使用に対する充分な湿潤強度、（ｉｉ）充分な摩滅性、
（ｉｉｉ）充分なかさ高性及び多孔性、（ｉｖ）充分な厚さ、及び（ｖ）適切な
大きさ。

【００２５】 上記の基準を満たす、適切な不溶性基材の例には、不織布基材、織布基材、湿
式からみ合わせ基材、乾式からみ合わせ基材、天然の海綿、合成スポンジ、高分
子網状メッシュ及び類似のものが挙げられるが、これらに限定されない。経済的
で、さまざまな材料が容易に手にいるために、好ましい実施様態は、不織布基材
を用いる。不織布とは、層が、布地に織り上げられた繊維ではなく、シートやマ
ットやパッド層に形成された、繊維で構成されていることを意味する。繊維はラ
ンダムにすることができ（すなわち、無作為に並べる）又はそれらを梳くことが
できる（すなわち主として一方向に向けて梳く）。更に、不織布基材は、ランダ
ムの繊維の層と梳いた繊維の層を組合せて構成することもできる。

【００２６】 不織布基材は天然及び合成されたさまざまな材料で構成してもよい。天然とい
う用語によって、材料が植物、動物、昆虫、又は植物、動物、及び昆虫の副産物
に由来することを意味する。合成という用語によって、材料が主として人工のさ
まざまな材料又は変性された天然材料から得られることを意味する。従来の基礎
出発物質は通常、任意の一般の合成又は天然の織物長の繊維又はその混合物を含
む繊維状の織物である。

【００２７】 本発明で有用な、天然素材の例としては、絹繊維、ケラチン繊維、及びセルロ
ース性繊維であるが、これらに限定されない。ケラチン繊維の例としては、羊毛
繊維、ラクダの毛繊維などから成る群から選択されたものが挙げられるが、これ
らに限定されない。セルロース性繊維の例には、木材パルプ繊維、綿繊維、大麻
繊維、ジュート繊維、亜麻繊維、及びこれらの混合物から成る群から選択された
ものが挙げられるが、これに限定されない。

【００２８】 本発明で有用な合成素材の例としては、アセテート繊維、アクリル繊維、セル
ロースエステル繊維、モダクリル系繊維、ポリアミド繊維、ポリエステル繊維、
ポリオレフィン繊維、ポリビニルアルコール繊維、レーヨン繊維、ポリウレタン
発泡体及びこれらの混合物から成る群から選ばれるものが挙げられるが、これら
に限定されない。このような合成素材のいくつかの例として、アクリラン、クレ
スラン及びアクリロニトリル由来の繊維、オルロンのようなアクリル；セルロー
スアセテート、アルネル及びアセレのようなセルロースエステル繊維；ナイロン
のようなポリアミド（たとえば、ナイロン６、ナイロン６６、ナイロン６１０な
ど）；フォルトレル、コデル及びポリエチレンテレフタレート繊維、ダクロンの
ようなポリエステル；ポリプロピレン、ポリエチレンのようなポリオレフィン；
ポリビニルアセテート繊維；ポリウレタン発泡体及びこれらの混合物が挙げられ
る。このような及びその他の好適な繊維及びそこから製造される不織材料は、通
常リーデル（Riedel）の「不織結合法と材料（Nonwoven Bonding Methods and M
aterials）不織布の世界（Nonwoven World）（１９８７年）、「アメリカーナ百
科事典（The Encyclopedia Americana）」（第１１巻１４７〜１５３頁及び第２
６巻５６６〜５８１頁（１９８４年）、ターマン（Thaman）等の米国特許第４，
８９１，２２７号（１９９０年１月２日発行）、及び米国特許第４，８９１，２
２８号に記載されており、これらはすべて参考として本明細書に組み入れる。

【００２９】 天然素材から作られる不織布基材は、繊維の液状懸濁液でできた細かなワイヤ
ースクリーン上に最も普通に形成された布地又はシートで構成されている。Ｃ．
Ａ．ハンペル（C.A. Hampel）等の「化学百科事典（The Encyclopedia of Chemi
stry）第３版、１９７３年、７９３〜７９５頁（１９７３年）、「アメリカーナ
百科事典（The Encyclopedia Americana）第２１巻３７６〜３８３頁（１９８４
年）、及びＧ．Ａ．スムーク（G.A. Smook）の「パルプと紙の技術ハンドブック
（Handbook of Pulp and Paper Technologies）」パルプ製紙工業技術協会（Tec
hnical Association for the Pulp and Paper Industry）（１９８６年）、これ
らはすべて参考として本明細書に組み入れ、参照する。

【００３０】 本発明で有用な天然素材からできた基材は、多種多様な市販品から得ることが
できる。本明細書で有用な好適な市販紙層の例としては、ジェイムズ・リバー（
James River）（ウィスコンシン州グリーンベイ（Green Bay）から市販されてい
る基本重量約７１gsyを有する型押しされた、乾式形成のセルロース性化合物層
エアテックス（Airtex）（登録商標）、及びウォーキソフトＵ．Ｓ．Ａ．（Walk
isoft U.S.A.）（ノースカロライナ州マウントホリー（Mount Holly））から市
販されている基本重量約７５gsyを有する型押しされた、乾式形成のセルロース
性化合物ウォーキソフト（Walkisoft）（登録商標）が挙げられるが、これらに
限定されない。

【００３１】 不織布基材を作る方法は、本技術分野で周知のことである。通常、このような
不織基材は、繊維又はフィラメントを最初に所望の長さに切断し、水流又は気流
に通し、そして繊維の入った空気又は水を通すスクリーン上に堆積させる乾式層
形成、湿式層形成、融解ブロー成形、コフォーミング、スパンボンド、又はカー
ディングの工程により作成することができる。でき上がった層は、生産法又は組
成法の如何に関わらず、それ自体で支え合う織物を形成するような個々の繊維を
共につなぎ止めるための、いくつかの接合作用の型の少なくともひとつの処理を
受ける。本発明では、さまざまな方法、たとえば不織布層は、水力で巻き込む方
法、熱接合、及びそれらの組合せによって作成できる。更に本発明の基材は、単
一層又は複数層で構成することが可能である。更に、複数層の基材ではフィルム
やその他の非繊維性の素材を含めることができる。

【００３２】 本発明で有用な、合成素材でできた不織布基材は多種多様な市販品から入手す
ることもできる。ここで有用な、好適な不織布層素材の例としては、ＨＥＦ４０
−０４７（約５０％レーヨンと５０％ポリエステルを含み、水で巻き込んだ孔の
ある素材で、平方ヤード当たり約４３g（gsy）の基本重量を有し、ベラテック社
(Veratech. Inc.マサチューセッツ州ワルポール（Walpole））から販売されてい
る）、ＨＥＦ１４０−１０２（約５０％レーヨンと５０％ポリエステルを含み、
水で巻き込んだ孔のある素材で、約５６gsyの基本重量を有し、上記ベラテック
社から販売されている）；ノボネット（Novonet）（登録商標）１４９−６１６
（約１００％ポリプロピレンを含み、熱で接合した格子模様の素材で、約５０gs
yの基本重量を有し、上記ベラテック社から販売されている）、ノボネット（登
録商標）１４９−８０１（約６９％レーヨン、約２５％ポリプロピレン、及び約
６％の綿を含み、熱接合した格子模様の素材で、約７５gsyの基本重量を有し、
上記ベラテック社から販売されている）、ノボネット（登録商標）１４９−１９
１（約６９％レーヨン、約２５％ポリプロピレン、及び約６％の綿を含み、熱接
合した格子模様の素材で、約１００gsyの基本重量を有し、上記ベラテック社か
ら販売されている）、ＨＥＦナブテックス（Nubtex）（登録商標）１４９−８０
１（約１００％ポリエステルを含み、叩いて水で巻き込んだ孔のある素材で、約
７０gsyの基本重量を有し、上記ベラテック社から販売されている）、キーバッ
ク（Keybak）（登録商標）９５１Ｖ（約７５％レーヨン、約２５％アクリル繊維
を含み、乾燥有孔の素材で、約４３gsyの基本重量を有し、チコピー（Chicopee,
ニュージャージー州ニューブランズウィック（New Brunswick））から販売され
ている）、キーバック（登録商標）１３６８（約７５％レーヨン、約２５％ポリ
エステルを含み、有孔の素材で、約３９gsyの基本重量を有し上記のチコピーか
ら販売されている）、デュラレース（Duralace）（登録商標）１２３６（約１０
０％レーヨンを含み、水で巻き込んだ有孔の素材で、約４０gsy〜約１１５gsyの
基本重量を有し、上記のチコピーから販売されている）、デュラレース（登録商
標）５９０４（約１００％ポリエステルを含み、水で巻き込んだ孔のある素材で
、約４０gsy〜約１１５gsyの基本重量を有し、上記のチコピーから販売されてい
る）、ソンタロ（Sontaro）８８６８（約５０％セルロース及び約５０％ポリエ
ステルを含み、水で巻き込んだ素材で、約６０gsyの基本重量を有し、デュポン
ケミカル社（Dupon Chemical Corp.）から市販されている）などが挙げられるが
、これらに限定されない。

【００３３】 あるいは、水不溶性基材は、１９９６年３月２７日に公告された欧州特許第Ｅ
Ｐ７０２５５０Ａ１号に記載のポリマーの網目状スポンジでもよく、本明細書で
はすべて参考文献として引用している。ポリマーのスポンジは、オレフィン単量
体の付加ポリマー及びポリカルボン酸のポリアミドのような強い、柔軟性のある
ポリマーから作られた、押し出して管状の網目加工した網目の多数の層を含む。
このようなポリマーのスポンジは、液状の洗剤と組合せて使われるように設計さ
れているけれども、このタイプのスポンジは本発明の水不溶性基材としても用い
ることができる。

【００３４】 基材は、数平方インチから数百平方インチの範囲の表面部分を持つ、平たいパ
ッド、厚いパッド、薄いシート、球状のもの、不定型なものを包含する多種多様
な形態にすることができる。正確な大きさは、望ましい使用法と製品の特徴に依
存している。特に都合がよいのは、正方形、円形、長方形、又は楕円型のパッド
で、表面部分が約１平方インチ（２．５４ｃｍ）から約１４４平方インチで、好
ましくは約１０平方インチから約１２０平方インチ、更に好ましくは約３０平方
インチから約８０平方インチで厚さが約１mil（０．０２５４ｍｍ）から約５０
０mil、好ましくは約５milから約２５０mil、より好ましくは約１０milから約１
００milのものである。

【００３５】 本発明の水不溶性基材は、それぞれ異なった織り目と摩損性を持つ２つ以上の
層を含むことができる。異なった織り目は、異なった素材の組合せ、又は異なっ
た製造工程又はその組み合わせによって作ることができる。二重の織り目構造を
持つ基材は、剥離するために研磨効果を持つ面、及び優しく洗浄するために軟ら
かく、吸収性のよい面を提供するために作ることができる。更に、別々の層を持
つ基材は、別々の色に加工することができ、それによってユーザーは表面をうま
く区別することができる。

【００３６】活性タンパク質 本発明の必須成分は複数の活性タンパク質である。活性タンパク質は、水不溶
性基材の表面に約０．０１μｇ／ｃｍ²〜約１０００μｇ／ｃｍ²、好ましくは約
０．０５μｇ／ｃｍ²〜約１００μｇ／ｃｍ²、そして最も好ましくは約０．１μ
ｇ／ｃｍ²〜約１０μｇ／ｃｍ²の範囲のレベルで存在する。

【００３７】 活性タンパク質は、その化合物に暴露されることによりヒトの免疫反応を誘導
することができるアミノ酸を基本とした任意の化合物である。活性タンパク質は
生物学的機能、分解活性、又は化粧品有用性、又はそれらのいずれかの組み合わ
せのどれかを示す。活性タンパク質の例としては、抗体、抗体の一部、コラーゲ
ン、及び大豆、乳清、又は小麦タンパク質のような動物性及び植物性タンパク質
、クロテイン（Crotein）Ｑ（登録商標）（ステアリルトリモニウムヒドロキシ
エチル加水分解コラーゲン）のような修飾された動物性及び植物性タンパク質、
及び酵素があるが、これらに限定されない。

【００３８】 任意の活性タンパク質も本発明のパーソナルケアワイプ組成物に用いることが
できる。好ましい活性タンパク質は酵素である。本発明のパーソナルケアワイプ
に使用される酵素は、スキンケアに使用されることが知られているいずれの活性
を有していてもよい。これらには、ラッカーゼ及びスーパーオキシドジスムター
ゼのような酸化還元酵素；プロテアーゼ及びリパーゼを含む加水分解酵素；トラ
ンスグルタミナーゼのような転移酵素、及びタンパク質二硫化物イソメラーゼの
ような異性化酵素が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましい
酵素は、リパーゼ及びプロテアーゼ酵素及びこれらの混合物からなる群から選択
される。

【００３９】 リパーゼ酵素は、国際生化学・分子生物学連合（International Union of Bio
chemistry and Molecular Biology：ＩＵＢＭＢ）の勧告（１９９２年）に従っ
て酵素分類番号（Enzyme Classification number）Ｅ．Ｃ．３．１．１（カルボ
ン酸エステル加水分解酵素）に分類されている。リパーゼの例としては下記の生
物体由来のリパーゼが挙げられる。ここに示された特許公報は参考として本明細
書に組み入れる： フミコラ（Humicola）、（米国４，８１０，４１４） シュードモナス（Pseudonomas）（ＷＯ８９／０４３６１、米国４，９５０，４
１７、欧州２１８ ２７２、ＷＯ８８／０９３６７、米国５，３８９，５３６） フサリウム（Fusarium）（欧州１３０ ０６４、ＷＯ９０／０９４４６） ムコール（Mucor）（欧州２３８ ０２３） クロモバクテリウム（Chromobacterium） アスペルギルス（Aspergillus） カンジダ（Candida）（ＷＯ８８／０２７７５、ＷＯ９４／０１５４１、ＷＯ８
９／０２９１６） ジオトリカム（Geotricum） ペニシリウム（Penicillium） ライゾパス（Rhizopus） バチルス（Bacillus）（ＷＯ９１／１６４２２）

【００４０】 市販のリパーゼの具体例としては、リポラーゼ（Lipolase、登録商標）、リポ
ラーゼ（登録商標）ウルトラ（Lipolase Ultra）、リポザイム（Lipozyme、登録
商標）、パラターゼ（Palatase、登録商標）、ノボザイム（Novozym）４３５、
レシターゼ（Lecitase、登録商標）（すべてノボノルディスクＡ／Ｓ（Novo Nor
disk A/S）より市販）、ルマファスト（Lumafast、登録商標）及びリポマックス
（Lipomax）（ジェネンコアインターナショナル社（Genencor Int., Inc.）より
市販）が挙げられる。

【００４１】 プロテアーゼ酵素は、国際生化学・分子生物学連合の勧告（１９９２年）に従
って、酵素分類番号（Enzyme Classification number）Ｅ．Ｃ．３．４（カルボ
ン酸エステル加水分解酵素）に分類されている。有用なプロテアーゼはまたＰＣ
Ｔ公報：プロクターアンドギャンブルカンパニー（The Procter & Gamble Compa
ny）のＷＯ９５／３００１０（１９９５年１１月９日公開）、プロクターアンド
ギャンブルカンパニーのＷＯ９５／３００１１（１９９５年１１月９日公開）、
プロクターアンドギャンブルカンパニーのＷＯ９５／２９９７９（１９９５年１
１月９日公開）にも記載されている。本明細書のパーソナルケアワイプに使用す
るのに好ましいプロテアーゼ酵素は、サブチリシン、キモトリプシン、及びエラ
スターゼ型プロテアーゼ酵素である。

【００４２】 本発明で用いるのに特に好ましいのは、サブチリシン型プロテアーゼ酵素であ
る。サブチリシン酵素は、微生物バチルス・アルカロフィリウス（Bacillus alc
alophilus）、バチルス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amyloliquefaci
ens）、バチルス・アミロサッカリウス（Bacillus amylosaccharicus）、バチル
ス・ライケニフォルミス（Bacillus licheniformis）、バチルス・レンタス（Ba
cillus lentus）及びバチルス・サブチルス（Bacillus subtilis ）から天然に
産生される。

【００４３】 特に好ましいサブチリシン型酵素は、バチルス・アミロリクエファシエンス（
Bacillus amyloliquefaciens）、バチルス・ライケニフォルミス（Bacillus lic
heniformis）及び／又はバチルス・サブチルス（Bacillus subtilis）から得ら
れる細菌セリンプロテアーゼ酵素及びその変異型で、ノボインダストリーＡ／Ｓ
（Novo Industries A/S、デンマーク、コペンハーゲン）のAlcalase(登録商標),
エスペラーゼ（Esperase、登録商標）、サビナーゼ（Savinase、登録商標）、ジ
スト−ブロケード（Gist-brocades、オランダ、デルフト）のマクサターゼ（Max
atase、登録商標）、マクサカル（Maxacal、登録商標）及びマクサペム１５（Ma
xapem 15、登録商標）（設計タンパク質合成マクサカル（登録商標）、及びサブ
チリシンＢＰＮ及びＢＰＮ’が挙げられ、これらは市販されている。

【００４４】 特に好ましいのは、バチルス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amyloli
quefaciens）から得られるプロテアーゼ酵素及びその変異型である。１つの既知
の酵素はＢＰＮ’である。バチルス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amy
loliquefaciens）由来の野生型ＢＰＮ’は、次のアミノ酸配列により特徴付けら
れる。

【００４５】

【化１】

【００４６】 ＢＰＮ’変異型もまた本発明のパーソナルケアワイプに有用である。いくつか
の関連する変異型は、これ以降すべて「プロテアーゼＡ」と表現するが、ヴェネ
ガス（Venegas）の米国特許第５，０３０，３７８号（１９９１年７月９日発行
）に開示されており、下記の ａ．）Ｇｌｙ１６６の位置のＧｌｙがＡｓｎ、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ
、Ｇｌｎ、Ａｌａ又はＧｌｕで置換、Ｇｌｙ１６９の位置のＧｌｙがＳｅｒで置
換、Ｍｅｔ２２２の位置のＭｅｔがＧｌｎ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、
Ｇｌｕ、Ａｌａ、又はＴｈｒで置換されており、；又は、 ｂ．）Ｇｌｙ１６６の位置のＧｌｙがＬｙｓで置換、及びＭｅｔ２２２の位置の
ＭｅｔがＣｙｓで置換されており、；又は、 ｃ．）Ｇｌｙ１６０の位置のＧｌｙがＡｌａで置換、及びＭｅｔ２２２の位置の
ＭｅｔがＡｌａで置換されている 突然変異を伴なうＢＰＮ’アミノ酸配列により特徴付けられている。

【００４７】 ＢＰＮ’の追加の変異型は以前は「プロテアーゼＢ」と表されていたが、ジェ
ネンコアインターナショナル社（Genencor International, Inc.、カリフォルニ
ア州サンフランシスコ）の欧州特許ＥＰ−Ｂ−２５１，４４６（１９９４年１２
月２８日許可、１９８８年１月７日公開）に開示され、以下のアミノ酸Ｔｙｒ２
１、Ｔｈｒ２２、Ｓｅｒ２４、Ａｓｐ３６、Ａｌａ４５、Ａｌａ４８、Ｓｅｒ４
９、Ｍｅｔ５０、Ｈｉｓ６７、Ｓｅｒ８７、Ｌｙｓ９４、Ｖａｌ９５、Ｇｌｙ９
７、Ｓｅｒ１０１、Ｇｌｙ１０２、Ｇｌｙ１０３、Ｉｌｅ１０７、Ｇｌｙ１１０
、Ｍｅｔ１２４、Ｇｌｙ１２７、Ｇｌｙ１２８、Ｐｒｏ１２９、Ｌｅｕ１３５、
Ｌｙｓ１７０、Ｔｙｒ１７１、Ｐｒｏ１７２、Ａｓｐ１９７、Ｍｅｔ１９９、Ｓ
ｅｒ２０４、Ｌｙｓ２１３、Ｔｙｒ２１４、Ｇｌｙ２１５、及びＳｅｒ２２１の
１つ又はそれ以上が、又は上述のアミノ酸及びＡｓｐ３２、Ｓｅｒ３３、Ｔｙｒ
１０４、Ａｌａ１５２、Ａｓｎ１５５、Ｇｌｕ１５６、Ｇｌｙ１６６、Ｇｌｙ１
６９、Ｐｈｅ１８９、Ｔｙｒ２１７、Ｍｅｔ２２２のアミノ酸の２つ又はそれ以
上が突然変異を起こした野生型ＢＰＮ’アミノ酸により特徴付けられ、ここで両
方の突然変異はＡｓｐ３２、Ｓｅｒ３３、Ｔｙｒ１０４、Ａｌａ１５２、Ａｓｎ
１５５、Ｇｌｕ１５６、Ｇｌｙ１６６、Ｇｌｙ１６９、Ｐｈｅ１８９、Ｔｙｒ２
１７、及びＭｅｔ２２２のアミノ酸上で起こることはできない。

【００４８】 もうひとつの好ましいＢＰＮ’変異型プロテアーゼは、これ以降「プロテアー
ゼＤ」と表すが、ジェネンコアインターナショナル社のＷＯ９５／１０６１５（
１９９５年４月２０日公開）に記載されており、野生型ＢＰＮ’アミノ酸のＡｓ
ｎ７６の位置の突然変異と、Ａｓｐ９９、Ｓｅｒ１０１、Ｇｌｎ１０３、Ｔｙｒ
１０４、Ｓｅｒ１０５、Ｉｌｅ１０７、Ａｓｎ１０９、Ａｓｎ１２３、Ｌｅｕ１
２６、Ｇｌｙ１２７、Ｇｌｙ１２８、Ｌｅｕ１３５、Ｇｌｕ１５６、Ｇｌｙ１６
６、Ｇｌｕ１９５、Ａｓｐ１９７、Ｓｅｒ２０４、Ｇｌｎ２０６、Ｐｒｏ２１０
、Ａｌａ２１６、Ｔｙｒ２１７、Ａｓｎ２１８、Ｍｅｔ２２２、Ｓｅｒ２６０、
Ｌｙｓ２６５、及び／又はＡｌａ２７４からなる群から選択される１つ又はそれ
以上の他のアミノ酸位置の突然変異と組み合わせたものとして特徴付けられてい
る。

【００４９】 別の好ましいＢＰＮ’変異型プロテアーゼは、これ以降「プロテアーゼＦ」と
表すが、エステル（Estell）等の米国特許番号第４，７６０，０２５号（１９８
８年７月２６日発行）に記載されており、Ａｓｐ３２、Ｓｅｒ３３、Ｈｉｓ６４
、Ｔｙｒ１０４、Ａｓｎ１５５、Ｇｌｕ１５６、Ｇｌｙ１６６、Ｇｌｙ１６９、
Ｐｈｅ１８９、Ｔｙｒ２１７、及びＭｅｔ２２２からなる群から選択される１つ
又はそれ以上のアミノ酸位置で突然変異を起こした野生型ＢＰＮ’アミノ酸とし
て特徴付けられている。

【００５０】 好ましいタンパク質分解酵素は、アルカラーゼ（Alcalase、登録商標）、ＢＰ
Ｎ’、プロテアーゼＡ、プロテアーゼＢ、プロテアーゼＤ、プロテアーゼＦ、及
びそれらの混合物からなる群から選択される 活性タンパク質の追加の種類は「単一置換タンパク質」であり、このようなタ
ンパク質は、親アミノ酸配列がアミノ酸残基の１つにおいて親アミノ酸のどこに
も存在しない置換アミノ酸で置換されている。単一置換タンパク質はまた、親ア
ミノ酸に存在しない１つのアミノ酸がそのアミノ酸配列内に挿入されたこのよう
なタンパク質を包含する。置換又は挿入されたアミノ酸は、タンパク質の特異的
な部位で本発明の基材と結合するのに好適な部分を提供する。

【００５１】 好ましくは、置換又は挿入は、タンパク質の活性部位から離れたタンパク質の
地点にあたるエピトープ領域の位置で行なわれるべきである。このような単一置
換タンパク質（これ以降はプロテアーゼＧと表す）の１つの実施態様は、サブチ
リシンＢＰＮ’酵素及びその誘導体の修飾である。サブチリシンＢＰＮ’型酵素
の活性部位は、Ａｓｎ３２、Ｈｉｓ６４、及びＳｅｒ２２１の空間的三つ組によ
り特定される。プロテアーゼＧ酵素では、システインは上記の三つ組から離れた
地点で置換又は挿入される。置換されるのに好ましいエピトープ領域は、Ａｓｐ
１４０〜Ｖａｌ１５０及びＡｌａ２３０〜Ｌｅｕ２５０領域である。システイン
が置換される例としてはＳｅｒ１４５、Ａｓｎ２４０又はＳｅｒ２４９のいずれ
かの可能性があるが、これに限定されない。所望のエピトープ領域での置換は野
生型サブチリシンＢＰＮ’又はその誘導体には起こらないので、システインは最
も好ましい置換アミノ酸である。

【００５２】結合手段 活性タンパク質は、高分子鎖を含む任意の好適な結合手段により水不溶性基材
と結合される。結合手段としては、活性タンパク質を基材と永久的に結合する任
意の化学的方法が挙げられる。

【００５３】基材上の高分子ゲルコーティングと結合したタンパク質 タンパク質は基材上の高分子コーティングと結合する高分子鎖により基材と結
合させてよい。タンパク質は高分子コーティングと共有結合する高分子鎖と結合
する。１つの実施態様は、ポリ−２−ヒドロキシエチルアクリレートコーティン
グと結合する高分子鎖としてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドの使用である。

【００５４】

【化２】

【００５５】 高分子鎖のもうひとつの実施態様は、シアウォーターポリマー社（Shearwater
Polymers, Inc.）より販売されているポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−マ
レイミドである。ＰＥＧ−マレイミドはシステインアミノ酸とともに使わなけれ
ばならず、そのため活性タンパク質がプロテアーゼＧの時に用いられる可能性が
ある。ＰＥＧ−マレイミドはまたポリ−２−ヒドロキシエチルアクリレートコー
ティングとの結合に用いてもよい。好ましいアクリレート−ＰＥＧ−マレイミド
鎖の一般構造は次の式によって表される：

【００５６】

【化３】

【００５７】 ワイプ基材上の高分子コーティングと結合するシステイン含有タンパク質の更
にもうひとつの実施態様は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）によって
ポリエチレンイミンコーティングと共有結合するＰＥＧ−マレイミドを含み、次
の式によって表される：

【００５８】

【化４】

【００５９】 結合タンパク質からなる結合手段は、結合されるタンパク質はより動きやすく
、そして高分子コーティングによるカバーが少なく、そのどちらもタンパク質の
更なる活性を提供するので、物理的捕捉及び直接的共有付着よりも好ましい

【００６０】高分子鎖を介して器材表面と共有結合するタンパク質 本発明のパーソナルケアワイプの基材の活性タンパク質と結合する更にもうひ
とつの方法は、基材表面の活性化部位と共有結合する高分子鎖である。好ましい
結合はエチレンジアミン／ポリエチレングリコール−マレイミドである。エチレ
ンジアミン／ＰＥＧ−マレイミド結合が直接結合する一般構造は次の式で表され
る：

【００６１】

【化５】

【００６２】任意成分 本発明のワイプ組成物は広い範囲の任意成分を含むことができる。ＣＴＦＡ国
際化粧品成分事典（CTFA International Cosmetic Ingredient Dictionary）第
６版（１９９５年）にはスキンケア産業で一般的に用いられている多種多様な化
粧品及び薬用成分が記載されており、すべて参考として本明細書に組み入れ、本
発明の組成物に用いるのに好適であるがこれに限定されない。この書籍の５３７
ページに成分の機能的分類についての例が記載されているが、これに限定されな
い。このような機能的分類の例は以下のものが挙げられる：研磨剤、抗にきび剤
、抗圧塗り剤、抗微生物剤、酸化防止剤、結合剤、生物学的添加物、増量剤、キ
レート化剤、化学的添加物、着色剤、化粧品用収斂剤、化粧品用殺生物剤、変性
剤、薬品収斂剤、乳化剤、外用鎮痛剤、膜形成剤、芳香成分、保湿剤、柔軟増強
剤(カチオン系及び非イオン系ポリマー、助界面活性剤、脂質保湿剤、炭化水素
油、シリコーン油、ろう）、不透明化剤、可塑剤、保存剤、噴射剤、還元剤、皮
膚漂白剤、皮膚コンディショニング剤（皮膚軟化剤、保湿剤、その他、及び吸蔵
剤）、皮膚保護剤、溶媒、起泡増進剤、向水性物質、可溶化剤、安定剤、懸濁剤
、日焼け止め剤、界面活性剤（アニオン系、カチオン系、両性、双極性）、紫外
線光吸収剤、及び増粘剤（水性及び非水性）。本発明で有用な材料のその他機能
的種類の当該分野での普通の技術の１つとして周知の実施例としては、可溶化剤
、金属イオン封鎖剤、及び角質溶解剤などが挙げられる。

【００６３】使用方法 本発明のパーソナルケア組成物は、パーソナル洗浄剤、化粧用皮膚処置及び／
又は皮膚コンディショニングに有用である。本発明は、パーソナルケアワイプ又
はパーソナルケアスキンマスクの形態をとり得る。典型的には、ワイプは洗浄さ
れる範囲を比較的短時間活性酵素に暴露するために用いられる。使用に際しては
、ワイプは処置を必要とする皮膚と接触させる、又はその皮膚を拭い、その後除
去される。洗浄に有用な本ワイプの典型的な量は、１回の使用あたり約１〜約４
枚のワイプ、好ましくは約１〜約２枚のワイプである。スキンマスクは処置をす
る範囲を比較的長時間暴露するために用いられる。洗浄に有用な本スキンマスク
の典型的な量は、１回の使用あたりマスク約１〜約２枚、好ましくはマスク１枚
である。

【００６４】

【実施例】

（実施例及び製造方法） 以下の実施例は本発明の範囲内の実施態様を更に記載し、説明する。以下の実
施例では、成分はすべて活性レベルで記載する。これらの実施例は単に説明の目
的だけで示されており、そして本発明の精神及び範囲から逸脱することなく本発
明の多数の改変が可能であるので、本発明を限定するものとして解釈すべきでは
ない。成分は化学名、すなわちＣＴＦＡ名により識別される。 本発明の結合活性タンパク質ワイプの実施例を以下に示すが、これに限定され
るものではない。

【００６５】実施例１−高分子コーティング結合プロテアーゼＦ プロテアーゼＦを１０ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ５．５）におよそ２．５
ｍｇ／ｍｌとなるように精製、濃縮する。アクリレート−ＰＥＧ₃₄₀₀−Ｎ−ヒド
ロキシスクシンイミド（シアウォーターポリマー社）をモル比１５：１以上加え
る。希水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）で溶液のｐＨを７に上げる。プロテアーゼ
Ｆ及びアクリレート−ＰＥＧ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを室温で１〜２時
間反応させる。希リン酸（Ｈ₃ＰＯ₄）で溶液のｐＨを５．５に下げる。２−ヒド
ロキシエチルアクリレート（ＨＥＡ）をプロテアーゼＦ−ＰＥＧ−ヒドロキシス
クシンイミド溶液に最終モル濃度が１．３Ｍになるように加える。５０ｍＭのＨ ₂ Ｏ₂溶液をプロテアーゼＦ−ＰＥＧ／ＨＥＡ溶液に最終モル濃度２．５ｍＭのＨ ₂ Ｏ₂が存在するように加える。前記溶液をレーヨン／ＰＥＴシート上にシートが
飽和になるまでスプレーする。別に、５０ｍＭの硫酸鉄（ＩＩ）七水和物（Ｆｅ
ＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ）溶液を全表面が均一にスプレーされるまでシートにスプレーす
る。シートを５分間静置する。その後シートを連続する０．０１ＭのＫ₂ＰＯ₄の
溶液槽に遊離プロテアーゼＦがすべて取り除かれるまで完全にすすぐ。シートを
乾燥する。

【００６６】実施例２−高分子コーティング結合プロテアーゼＧ プロテアーゼＧを１０ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ５．５）におよそ２．５
ｍｇ／ｍｌとなるように精製、濃縮する。アクリレート−ＰＥＧ₃₄₀₀−マレイミ
ド（シアウォーターポリマー社）をモル比１５：１以上加える。希水酸化ナトリ
ウム（ＮａＯＨ）で溶液のｐＨを７に上げる。プロテアーゼＧ及びアクリレート
−ＰＥＧ−マレイミドを室温で１〜２時間反応させる。希釈したリン酸（Ｈ₃Ｐ
Ｏ₄）で溶液のｐＨを５．５に下げる。２−ヒドロキシエチルアクリレート（Ｈ
ＥＡ）をプロテアーゼＧ−ＰＥＧ−マレイミド溶液に最終モル濃度が１．３Ｍに
なるように加える。５０ｍＭのＨ₂Ｏ₂溶液をプロテアーゼＧ−ＰＥＧ／ＨＥＡ溶
液に最終モル濃度２．５ｍＭのＨ₂Ｏ₂が存在するように加える。前記溶液をレー
ヨン／ＰＥＴシート上にシートが飽和になるまでスプレーする。別に、５０ｍＭ
の硫酸鉄（ＩＩ）七水和物（ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ）溶液を全表面が均一にスプレ
ーされるまでシートにスプレーする。シートを５分間静置する。その後、シート
を連続する０．０１ＭのＫＨ₂ＰＯ₄の溶液槽に遊離プロテアーゼＧがすべて取り
除かれるまで完全にすすぐ。シートを乾燥する。

【００６７】実施例３−高分子鎖を介した活性化器材表面と共有結合するプロテアーゼＧ レーヨン／ＰＥＴシートを１０％（ｗ／ｖ）ＮａＯＨ水溶液に浸し、シート１
ｃｍ²あたり１ｍｌの溶液を用いて自動振とう器で１０〜１５分間振とうする。
シートを吸引下にて３回脱イオン水で洗う（１回の洗浄あたり〜１ｍｌ／ｃｍ²
）。吸引下にてシートを５回アセトンで洗う。洗浄と洗浄の間にシートをアセト
ンに１分間浸す。シートを１０％（ｗ／ｖ）パラ塩化トルエンスルホニル／アセ
トン溶液で２５〜３０分間振とうしながら反応させる（〜１ｍｌ／ｃｍ²）。余
分なパラ塩化トルエンスルホニルを取り除くために吸引下にてシートを３回アセ
トンですすぐ。シートを２．２Ｍエチレンジアミン／アセトン溶液（ｐＨ１３〜
１４）で２時間振とうしながら反応させる。余分なＥＤＡを取り除くために吸引
下にてシートを３回アセトンですすぐ。シートを吸引下にて０．２Ｍのホウ酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ８．５）で５回すすぐ。すすぎとすすぎの間に緩衝液に１
分間シートを浸す。シートを３〜５％（ｗ／ｖ）マレイミド−ＰＥＧ₃₄₀₀−ＮＨ
Ｓ（シアウォーターポリマー社）／０．２Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．
５）で１〜２時間振とうしながら反応させる（〜１ｍｌ／ｃｍ²）。シートを吸
引下にて１０ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ７）で５回すすぎ余分なＰＥＧを取
り除く。シートを３ｍｇ／ｍｌのプロテアーゼＧ／１０ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液
（ｐＨ７）（〜１ｍｌ／ｃｍ²）でおよそ１〜２時間反応させる。シートを０．
０１ＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ５．５）で３回すすぐ。シートを乾燥する。

【００６８】実施例４−高分子鎖を介した活性化器材表面と共有結合するプロテアーゼＡ レーヨン／ＰＥＴシートを１０％（ｗ／ｖ）ＮａＯＨ水溶液に浸し、シート１
ｃｍ²あたり１ｍｌの溶液を用いて自動振とう器で１０〜１５分間振とうする。
シートを吸引下にて３回脱イオン水で洗う（１回の洗浄あたり〜１ｍｌ／ｃｍ²
）。吸引下にてシートを５回アセトンで洗う。洗浄と洗浄の間にシートをアセト
ンに１分間浸す。シートを１０％（ｗ／ｖ）パラ塩化トルエンスルホニル／アセ
トン溶液で２５〜３０分間振とうしながら反応させる（〜１ｍｌ／ｃｍ²）。吸
引下にてシートを３回アセトンですすぎ、余分なパラ塩化トルエンスルホニルを
取り除く。シートを２．２Ｍエチレンジアミン／アセトン溶液（ｐＨ１３〜１４
）で２時間振とうしながら反応させる。吸引下にてシートを３回アセトンですす
ぎ、余分なＥＤＡを取り除く。シートを吸引下にて０．２Ｍのホウ酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ８．５）で５回すすぐ。すすぎとすすぎの間に緩衝液に１分間シー
トを浸す。シートを３〜５％（ｗ／ｖ）ヒドロキシスクシンイミド−ＰＥＧ₃₄₀₀ −ＮＨＳ（シアウォーターポリマー社）／０．２Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ８．５）で１〜２時間振とうしながら反応させる（〜１ｍｌ／ｃｍ²）。シー
トを余分なＰＥＧを取り除くために吸引下にて１０ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐ
Ｈ７）で５回すすぐ。シートを３ｍｇ／ｍｌのプロテアーゼＡ／１０ｍＭのＫＨ ₂ ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ７）（〜１ｍｌ／ｃｍ²）でおよそ１〜２時間反応させる。
シートを０．０１ＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ５．５）で３回すすぐ。シートを
乾燥させる。

【００６９】実施例５−高分子鎖結合を介してコーティングされた器材表面と共有結合したプ ロテアーゼＧ レーヨン／ＰＥＴシートをポリエチレンイミン５００ｐｐｍの溶液槽に振とう
しながら室温で１時間浸す（シート１ｃｍ²あたり〜１〜２ｍｌ）。レーヨン／
ＰＥＴシートを２つの連続する０．２Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１２）溶
液槽ですすぐ（〜５〜１０ｍｌ／ｃｍ²）。シートを２つの連続した０．２Ｍホ
ウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．５）溶液槽ですすぐ。シートを５ｍｇ／ｍｌの
ＮＨＳ−ＰＥＧ−₃₄₀₀マレイミド／０．２Ｍホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．
５）で振とうしながら室温で反応させる。シートを４つの脱イオン水溶液槽です
すぐ（〜５〜１０ｍｌ／ｃｍ²）。シートを、２つの０．０１ＭのＫＨ₂ＰＯ₄緩
衝液（ｐＨ７〜７．５）溶液槽ですすぐ。別に、プロテアーゼＧを０．０１Ｍの
ＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ７〜７．５）に１〜２ｍｇ／ｍｌに精製、濃縮する。「
ＰＥＧと結合させた（PEGylated）」シートを、プロテアーゼＧ溶液（ｐＨ７〜
７．５）で１時間室温で振とうしながら反応させる。未反応の非結合プロテアー
ゼＧを除去するために、シートを５つの連続した０．０１ＭのＫＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ
５．５）溶液槽で完全にすすぐ。シートを乾燥させる。

【００７０】実施例６〜９ パーソナルケアワイプ組成物製品は以下のように製造される。

【００７１】

【表２】

【００７２】水不溶性基材 基本重量が約６０gsyで５０％レーヨン及び５０％ポリエステルを含み、およ
そ６インチ×７．６インチ、厚みが約２０milであり、実施例１〜５によって示
された結合活性タンパク質を有する、流体により孔形成された不織布基材。

【００７３】 適切な容器中で、相Ａの成分を室温で混合し、分散を形成して、撹拌しながら
６５℃まで加熱する。相Ｂの成分を別の適切な容器中で混合し、６５℃まで加熱
する。温度が同じになったらすぐに、相Ｂの成分を相Ａの成分を含有する容器に
入れて混合し、次いで４５℃まで冷却する。相Ｃの成分を別の容器中で室温で混
合する。次に、相Ｃの混合物を相Ａ及びＢの混合物を入れた容器に室温で加える
。得られた溶液１．５gを各基材上にスプレーする。別の方法では、得られた溶
液に基材を軽く浸してもよい。処理した基材を一定の重量になるまでオーブンで
乾燥する。別の方法では、処理した基材を一定の重量になるまで、対流式オーブ
ンで４５℃で乾燥する。 別の実施例では、織物基材、湿式からみ合わせ基材、天然の海綿、合成スポン
ジ又は高分子製の網目状のメッシュといった他の基材。別の実施態様としてはパ
ーソナルケアスキンマスクの形態でもよい。

【００７４】実施例１０〜１３ パーソナルケアワイプは以下のように製造される。

【表３】

【００７５】水不溶性基材 基本重量が約６０gsyで５０％レーヨン及び５０％ポリエステルを含み、およ
そ６インチ（２．５４ｃｍ）×７．６インチの厚みが約２０milであり、実施例
１〜５によって示された結合活性タンパク質を有する、流体により孔形成された
不織布基材。

【００７６】 適切な容器中で、相Ａの成分を室温で混合し、分散を形成して、撹拌しながら
６５℃まで加熱する。相Ｂの成分を別の適切な容器中で混合し、６５℃まで加熱
する。温度が同じになったらすぐに、相Ｂの成分を相Ａの成分を含有する容器に
入れて混合し、次いで４５℃まで冷却する。次に、相Ｃの混合物を相Ａ及びＢの
混合物を入れた容器に室温で加える。得られた溶液１．５gを各基材上にスプレ
ーする。あるいは、基材は得られた溶液に軽く浸すこともできる。処理した基材
を一定の重量になるまでオーブンで乾燥する。別の方法では、処理した基材を一
定の重量になるまで、対流式オーブンで４５℃で乾燥する。 別の実施例では、織物基材、湿式からみ合わせ基材、天然の海綿、合成スポン
ジ又は高分子製の網目状のメッシュといった他の基材。別の実施態様としてはパ
ーソナルケアスキンマスクの形態でもよい。

【００７７】実施例１４〜１７

【表４】

【００７８】水不溶性基材 基本重量が約６０gsyで５０％レーヨン及び５０％ポリエステルを含み、およ
そ６インチ×７．６インチの厚みが約２０milであり、実施例１〜５によって示
された結合活性タンパク質を有する、流体により孔形成された不織布基材。

【００７９】 適切な容器中で、相Ａの成分を室温で混合し、分散を形成して、撹拌しながら
６５℃まで加熱する。相Ｂの成分を別の適切な容器中で混合し、６５℃まで加熱
する。温度が同じになったらすぐに、相Ｂの成分を相Ａの成分を含有する容器に
入れて混合し、次いで４５℃まで冷却する。相Ｃの成分を別の容器中で室温で混
合する。次に、相Ｃの混合物を相Ａ及びＢの混合物を入れた容器に室温で加える
。得られた溶液１．５gを各基材上にスプレーする。別の方法では、得られた溶
液に基材を軽く浸す。処理した基材を一定の重量になるまでオーブンで乾燥する
。別の方法では、処理した基材を一定の重量になるまで、対流式オーブンで４５
℃で乾燥する。 別の実施例では、織物基材、湿式からみ合わせ基材、天然の海綿、合成スポン
ジ又は高分子製の網目状のメッシュといった他の基材。別の実施態様としてはパ
ーソナルケアスキンマスクの形態でもよい。

【００８０】実施例１８〜２１

【表５】

【００８１】水不溶性基材 基本重量が約６０gsyで５０％レーヨン及び５０％ポリエステルを含み、およ
そ６インチ×７．６インチの厚みが約２０milであり、実施例１〜５によって示
された結合活性タンパク質を有する、水が通る孔のある不織布基材。

【００８２】 適切な容器中で、相Ａの成分を室温で混合し、分散を形成して、撹拌しながら
６５℃まで加熱する。相Ｂの成分を別の適切な容器中で混合し、６５℃まで加熱
する。温度が同じになったらすぐに、相Ｂの成分を相Ａの成分を含有する容器に
入れて混合し、次いで４５℃まで冷却する。次に、相Ｃの混合物を相Ａ及びＢの
混合物を入れた容器に室温で加える。得られた溶液１．５gを各基材上にスプレ
ーする。別の方法では、得られた溶液に基材を軽く浸す。処理した基材を一定の
重量になるまでオーブンで乾燥する。別の方法では、処理した基材を一定の重量
になるまで、対流式オーブンで４５℃で乾燥する。 別の実施例では、織物基材、湿式からみ合わせ基材、天然の海綿、合成スポン
ジ又は高分子製の網目状のメッシュといった他の基材。別の実施態様としてはパ
ーソナルケアスキンマスクの形態でもよい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 ＯＮＥ ＰＲＯＣＴＥＲ ＆ ＧＡＮＢＬ Ｅ ＰＬＡＺＡ，ＣＩＮＣＩＮＮＡＴＩ， ＯＨＩＯ，ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ (72)発明者 オールコック，アンドリュー キャンベル アメリカ合衆国オハイオ州、シンシナチ、 ドレイク、アベニュー 3837 Ｆターム(参考） 4B033 NA02 NA27 NA30 NB34 NB36 NB37 NB45 NB57 NB60 NC03 ND14 4B050 CC02 CC07 GG03 LL10 4C083 AD071 AD072 AD091 AD092 AD411 AD412 AD471 AD472 CC02 CC24 DD12 EE12 EE28

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）水不溶性基材、 （ｂ）複数の活性タンパク質、及び （ｃ）各酵素と前記基材を永久的に付着させる、高分子鎖を含む結合手段 を含み、前記基材に対して前記酵素を０．０１μｇ／ｃｍ²〜１０００μｇ／ｃ
   ｍ²含むことを特徴とするパーソナルケアワイプ組成物。
2. 【請求項２】 （ａ）水不溶性基材、 （ｂ）複数の活性タンパク質、及び （ｃ）各酵素と前記基材を永久的に付着させる、高分子鎖を含む結合手段 を含み、前記基材に対して前記酵素を０．０１μｇ／ｃｍ²〜１０００μｇ／ｃ
   ｍ²含むことを特徴とするパーソナルケアスキンマスク組成物。
3. 【請求項３】 前記水不溶性基材が、絹、ケラチン、セルロース、アセテー
   ト、アクリル、セルロースエステル、モダクリル、ポリアミド、ポリエステル、
   ポリオレフィン、ポリビニルアルコール、木材パルプ、綿、大麻、ジュート、亜
   麻、アクリル、ナイロン、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ
   ビニルアセテート、ポリウレタン、レーヨン及びこれらの混合物からなる群から
   選ばれる１つ又はそれ以上の材料を含む請求項１又は２に記載のパーソナルケア
   組成物。
4. 【請求項４】 前記水不溶性基材が、レーヨン繊維、セルロース繊維、ポリ
   エステル繊維及びこれらの混合物からなる群から選ばれる繊維の不織シートを含
   む請求項１〜３のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
5. 【請求項５】 前記水不溶性基材が、交互に異なった織り方を有する２つ又
   はそれ以上の繊維シートを含む請求項１〜４のいずれかに記載のパーソナルケア
   ワイプ組成物。
6. 【請求項６】 前記活性タンパク質が、プロテアーゼ酵素、リパーゼ酵素、
   及びそれらの混合物からなる群から選ばれる酵素である請求項１〜５のいずれか
   に記載のパーソナルケアワイプ組成物。
7. 【請求項７】 前記酵素が、サブチリシン、キモトリプシン、及びエラスタ
   ーゼ型酵素、及びそれらの混合物からなる群から選ばれる請求項１〜６のいずれ
   かに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
8. 【請求項８】 前記酵素が、アルカラーゼ（Alcalase、登録商標）、ＢＰＮ
   ’、プロテアーゼＡ、プロテアーゼＢ、プロテアーゼＤ、プロテアーゼＦ、及び
   それらの混合物からなる群から選ばれる請求項１〜７のいずれかに記載のパーソ
   ナルケアワイプ組成物。
9. 【請求項９】 前記酵素が、単一置換タンパク質である請求項１〜８のいず
   れかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
10. 【請求項１０】 前記単一置換タンパク質が、そのタンパク質の活性部位か
    ら空間的に離れた地点で置換されてなる請求項１〜９のいずれかに記載のパーソ
    ナルケアワイプ組成物。
11. 【請求項１１】 前記単一置換タンパク質が、プロテアーゼＧである請求項
    １〜１０のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
12. 【請求項１２】 前記高分子鎖が、ポリエチレングリコール−マレイミドを
    含む請求項１〜１１のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
13. 【請求項１３】 前記高分子鎖が、ポリエチレングリコール−Ｎ−ヒドロキ
    シスクシンイミドを含む請求項１〜１２のいずれかに記載のパーソナルケアワイ
    プ組成物。
14. 【請求項１４】 前記結合手段が、高分子鎖及び高分子コーティングを含む
    請求項１〜１３のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
15. 【請求項１５】 前記高分子鎖がポリエチレングリコール−マレイミドを含
    み、高分子コーティングがポリ−２−ヒドロキシエチルアクリレートを含む請求
    項１〜１４のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
16. 【請求項１６】 前記高分子鎖がポリエチレングリコール−マレイミドを含
    み、高分子コーティングがポリエチレンイミンを含む請求項１〜１５のいずれか
    に記載のパーソナルケアワイプ組成物。
17. 【請求項１７】 前記高分子鎖がポリエチレングリコール−Ｎ−ヒドロキシ
    スクシンイミドを含み、高分子コーティングがポリ−２−ヒドロキシエチルアク
    リレートを含む請求項１〜１６のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物
    。
18. 【請求項１８】 前記高分子鎖がポリエチレングリコール−Ｎ−ヒドロキシ
    スクシンイミドを含み、高分子コーティングがポリエチレンイミンを含む請求項
    １〜１７のいずれかに記載のパーソナルケアワイプ組成物。
19. 【請求項１９】 請求項１〜１８のパーソナルケアワイプ組成物を、皮膚の
    状態を改善する処置を必要とする皮膚へ接触させることからなる皮膚の状態を改
    善する方法。