JP2002372534A - イメージ化法 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 多分析物アッセイを行うためのデバイスおよ
び装置において、配列上の反応部位を正確に位置決定す
るため、および、誤整列を補正するための方法を提供す
る。 【解決手段】 以下の工程： (ｉ)配列をイメージし、配列に対して既知の位置におい
て固体支持体上に配置された第１分子を検出し； (ii)該第１分子を参照して、該別個の反応部位に合致さ
せて検査窓を整列させ；そして (iii)それぞれの窓における検出可能シグナルの量を測
定する； を含んでなる、固体支持体の表面における、別個の反応
部位の配列中に含まれる分子をイメージするための方法
により、上記課題が解決される。
び装置において、配列上の反応部位を正確に位置決定す
るため、および、誤整列を補正するための方法を提供す
る。 【解決手段】 以下の工程： (ｉ)配列をイメージし、配列に対して既知の位置におい
て固体支持体上に配置された第１分子を検出し； (ii)該第１分子を参照して、該別個の反応部位に合致さ
せて検査窓を整列させ；そして (iii)それぞれの窓における検出可能シグナルの量を測
定する； を含んでなる、固体支持体の表面における、別個の反応
部位の配列中に含まれる分子をイメージするための方法
により、上記課題が解決される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、多分析物アッセイ
を行うためのデバイスおよび装置に関する。
を行うためのデバイスおよび装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】現在、分析物の検出および特性化におい
て、分子の組立て配列を使用することに広く興味が持た
れている。例えば、ポリヌクレオチドの組立て配列が、
ＤＮＡ配列決定法において、ならびに、患者の遺伝的変
異を検出するためのハイブリダイゼーション研究におい
て、現在では広く使用されている。
て、分子の組立て配列を使用することに広く興味が持た
れている。例えば、ポリヌクレオチドの組立て配列が、
ＤＮＡ配列決定法において、ならびに、患者の遺伝的変
異を検出するためのハイブリダイゼーション研究におい
て、現在では広く使用されている。
【０００３】組立て配列は、固体支持体表面に固定化し
た高密度の同一または異なる分子を含むように設計する
ことができる。これにより、使用者が、１つの実験操作
において多くの結果を得ることが可能になる。また、こ
の配列は、分析方法を自動化することができ、これによ
り試料の高処理量の達成を可能にするという利点をも有
する。
た高密度の同一または異なる分子を含むように設計する
ことができる。これにより、使用者が、１つの実験操作
において多くの結果を得ることが可能になる。また、こ
の配列は、分析方法を自動化することができ、これによ
り試料の高処理量の達成を可能にするという利点をも有
する。
【０００４】通常、この配列は、固体支持体上の空間的
に異なる領域に配置された、複数の個々の反応部位を有
するように設計される。空間的に異なる領域に配列を作
成するための最も普通の方法は、写真平板法によるもの
である。固体支持体を、光不安定性リンカーで、即ち、
適当な波長の光を照射した後にのみ結合性リガンドに対
して反応性になるリンカーで被覆する。空間的な分割
は、固体支持体表面に物理的マスクを置くことによって
達成する。このマスク中の穴のパターンが、固体支持体
上の結合領域のパターンを決定する。
に異なる領域に配置された、複数の個々の反応部位を有
するように設計される。空間的に異なる領域に配列を作
成するための最も普通の方法は、写真平板法によるもの
である。固体支持体を、光不安定性リンカーで、即ち、
適当な波長の光を照射した後にのみ結合性リガンドに対
して反応性になるリンカーで被覆する。空間的な分割
は、固体支持体表面に物理的マスクを置くことによって
達成する。このマスク中の穴のパターンが、固体支持体
上の結合領域のパターンを決定する。
【０００５】国際特許出願公開ＷＯ-Ａ-９５／１６２０
４は、アビジンおよび光不安定性分子フォトビオチンを
用いる写真平板法を記載している。空間的な分割は、受
動吸着によって達成されている。例えば、米国特許ＵＳ
-Ａ-５４３２０９９は、イオン相互作用、疎水性相互作
用およびファンデアワールス力による、固体支持体表面
への分子の結合を開示している。
４は、アビジンおよび光不安定性分子フォトビオチンを
用いる写真平板法を記載している。空間的な分割は、受
動吸着によって達成されている。例えば、米国特許ＵＳ
-Ａ-５４３２０９９は、イオン相互作用、疎水性相互作
用およびファンデアワールス力による、固体支持体表面
への分子の結合を開示している。
【０００６】組立て配列の１つの特定の例は、核酸が固
定化された固体支持体材料に関する。通常、これらの配
列は、空間的に異なる領域に固定化されたポリヌクレオ
チドの高密度マトリックスからなる。Fodorら[Trends i
n Biotechnology (1994) 12:19-26]は、マスクにより保
護されているが、規定した領域では適切に修飾したヌク
レオチドホスホルアミダイトの結合が可能であるように
曝露された、化学的に感作したガラス表面を用いて、核
酸を組立てる方法を記載している。Stimpsonら[PNAS (1
995) 92: 6379-6383]は、固体支持体上の予め決めた位
置に既知のポリヌクレオチドを「スポッティング」する
方法による組立て配列の製造を記載している。
定化された固体支持体材料に関する。通常、これらの配
列は、空間的に異なる領域に固定化されたポリヌクレオ
チドの高密度マトリックスからなる。Fodorら[Trends i
n Biotechnology (1994) 12:19-26]は、マスクにより保
護されているが、規定した領域では適切に修飾したヌク
レオチドホスホルアミダイトの結合が可能であるように
曝露された、化学的に感作したガラス表面を用いて、核
酸を組立てる方法を記載している。Stimpsonら[PNAS (1
995) 92: 6379-6383]は、固体支持体上の予め決めた位
置に既知のポリヌクレオチドを「スポッティング」する
方法による組立て配列の製造を記載している。
【０００７】配列法を用いて試料処理量および潜在能力
を最大にするためには、配列の反応部位からのシグナル
処理を完全自動化することが必須である。従って、手に
よる操作を介在させることなく、配列のイメージ化、さ
らに該イメージの数学的処理を行うことが必要である。
完全自動化の系で経験される困難は、それぞれの反応部
位を正確に位置決定するのが時には困難になることであ
る。これは、配列がそれぞれのデバイスにおいて同じ位
置に正確に存在していることができないという、配列製
造方法の性質によるものであろう。また、この問題は、
アッセイ操作において必要な洗浄工程中に引き起こされ
ることがある、装置中のデバイスのわずかな移動による
ものであろう。それぞれ異なる反応部位は、わずか１０
〜５０μｍの距離でしか離れていないことがあるので、
自動化の系が各反応部位を正確に配置するのを確実にす
るのは困難である。例えば、配列の移動は、各反応部位
間の距離と同程度であることがある。このことは、分析
すべき各反応部位のためのイメージ中の予め決めた窓を
容易に使用することができないことを意味する。これ
は、移動により、反応部位の境界を規定する検査窓の内
側に、間違った反応部位が入ってくるであろうためであ
る。また、反応部位が窓から外れることもあり、恐らく
は２つの部位が同じ窓に入ることもある。処理をより容
易にするためには、１つの反応部位だけが、それぞれの
分析物検査窓内全体に入るのを確実にすることが必要で
ある。
を最大にするためには、配列の反応部位からのシグナル
処理を完全自動化することが必須である。従って、手に
よる操作を介在させることなく、配列のイメージ化、さ
らに該イメージの数学的処理を行うことが必要である。
完全自動化の系で経験される困難は、それぞれの反応部
位を正確に位置決定するのが時には困難になることであ
る。これは、配列がそれぞれのデバイスにおいて同じ位
置に正確に存在していることができないという、配列製
造方法の性質によるものであろう。また、この問題は、
アッセイ操作において必要な洗浄工程中に引き起こされ
ることがある、装置中のデバイスのわずかな移動による
ものであろう。それぞれ異なる反応部位は、わずか１０
〜５０μｍの距離でしか離れていないことがあるので、
自動化の系が各反応部位を正確に配置するのを確実にす
るのは困難である。例えば、配列の移動は、各反応部位
間の距離と同程度であることがある。このことは、分析
すべき各反応部位のためのイメージ中の予め決めた窓を
容易に使用することができないことを意味する。これ
は、移動により、反応部位の境界を規定する検査窓の内
側に、間違った反応部位が入ってくるであろうためであ
る。また、反応部位が窓から外れることもあり、恐らく
は２つの部位が同じ窓に入ることもある。処理をより容
易にするためには、１つの反応部位だけが、それぞれの
分析物検査窓内全体に入るのを確実にすることが必要で
ある。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】従って、それぞれ離れ
た反応部位を配列上に正確に配置する改良法が必要とさ
れている。
た反応部位を配列上に正確に配置する改良法が必要とさ
れている。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、配列への個々
の反応部位の正確な配置を、各配列への参照分子の導入
によって行いうるという認識に基づくものである。
の反応部位の正確な配置を、各配列への参照分子の導入
によって行いうるという認識に基づくものである。
【００１０】本発明の第１の態様によれば、固体支持体
の表面における、別個の反応部位の配列中に含まれる分
子をイメージするための方法であって、以下の工程を含
んでなる方法が提供される： (ｉ)配列をイメージし、配列に対して既知の位置におい
て固体支持体上に配置された第１分子を検出し； (ii)該第１分子を参照して、該別個の反応部位に合致さ
せて検査窓を整列させ；そして (iii)それぞれの窓における検出可能シグナルの量を測
定する。
の表面における、別個の反応部位の配列中に含まれる分
子をイメージするための方法であって、以下の工程を含
んでなる方法が提供される： (ｉ)配列をイメージし、配列に対して既知の位置におい
て固体支持体上に配置された第１分子を検出し； (ii)該第１分子を参照して、該別個の反応部位に合致さ
せて検査窓を整列させ；そして (iii)それぞれの窓における検出可能シグナルの量を測
定する。
【００１１】この方法は、検査窓の正確な配置を可能に
し、これにより、通常の自動化した系に改善を与える。
し、これにより、通常の自動化した系に改善を与える。
【００１２】第１分子は、配列に対して固体支持体上の
既知の位置にあるので、検査窓を、配列した反応部位に
合致するように整列させることができる。
既知の位置にあるので、検査窓を、配列した反応部位に
合致するように整列させることができる。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明は、配列させた分子を正確
にイメージ化するために通常の装置を使用する。通常の
イメージ化装置を用いて、固体支持体または「バイオチ
ップ」を、例えば、光学顕微鏡または電荷と組合せたデ
バイスによりイメージ化する。このイメージを、カメラ
電子工学によって１ピクセル(画素)あたり１６ビット
で、例えば５１２×５１２ピクセルにデジタル化し、処
理のために分析機を含むコンピューターに移す。バイオ
チップ上にそれぞれの反応部位を正確に配置するため
に、参照分子(または第１分子)を最初に配置し、分析物
検査窓の配列を、参照分子に対して確立する(図１)。次
いで、配置された検査窓を用いて、バイオチップ上の反
応部位または「分析物スポット」を見つける。
にイメージ化するために通常の装置を使用する。通常の
イメージ化装置を用いて、固体支持体または「バイオチ
ップ」を、例えば、光学顕微鏡または電荷と組合せたデ
バイスによりイメージ化する。このイメージを、カメラ
電子工学によって１ピクセル(画素)あたり１６ビット
で、例えば５１２×５１２ピクセルにデジタル化し、処
理のために分析機を含むコンピューターに移す。バイオ
チップ上にそれぞれの反応部位を正確に配置するため
に、参照分子(または第１分子)を最初に配置し、分析物
検査窓の配列を、参照分子に対して確立する(図１)。次
いで、配置された検査窓を用いて、バイオチップ上の反
応部位または「分析物スポット」を見つける。
【００１４】「検査窓」なる用語は、本明細書において
は、検出可能なシグナルをイメージ化するために使用す
るピクセルの２次元配列を包含する規定された境界を意
味するように使用する。
は、検出可能なシグナルをイメージ化するために使用す
るピクセルの２次元配列を包含する規定された境界を意
味するように使用する。
【００１５】また、参照分子を、チップ上の品質管理チ
ェックとして使用することもでき、これにより、検出可
能シグナルの強度が、例えばバイオチップの製造が原因
で、予め規定した範囲を外れたときに、このバイオチッ
プの結果を拒絶することができる。
ェックとして使用することもでき、これにより、検出可
能シグナルの強度が、例えばバイオチップの製造が原因
で、予め規定した範囲を外れたときに、このバイオチッ
プの結果を拒絶することができる。
【００１６】参照分子は、それぞれのバイオチップ上の
予め規定した位置に配置すべきである。例えば、参照分
子を、バイオチップの１またはそれ以上のコーナーに配
置することができる。従って、１またはそれ以上の検査
窓を、予想される参照分子の位置に対応して、固定位置
に規定することができる。製造時の許容性は、参照分子
が、反応部位または分析物検査窓よりも若干大きい検索
検査窓の中に入ればよいというものであり、配列からの
１またはそれ以上の反応部位が、参照分子検査窓の内側
に入っていてもよい。他の反応部位を無視して検査窓中
のそれぞれの参照分子だけを見つけるために使用する検
索法は、参照分子を最初に発見することを確実にするよ
うに選択しなければならない。例えば、参照分子が各バ
イオチップの最上部左端のコーナーに配置されていると
きには、検査窓の最上部左端のコーナーから出発する対
角線検索は、参照分子に最初に遭遇し、従って、それを
正確に同定することが可能であろう(図２)。他の参照の
配置のためには、検索法をそれに応じて調節することが
できる。通常のソフトウエアーを用いて検索を行って、
固体支持体を横切って検索検査窓を移動させ、参照分子
の位置決定を行い、それに合致させることができる。
予め規定した位置に配置すべきである。例えば、参照分
子を、バイオチップの１またはそれ以上のコーナーに配
置することができる。従って、１またはそれ以上の検査
窓を、予想される参照分子の位置に対応して、固定位置
に規定することができる。製造時の許容性は、参照分子
が、反応部位または分析物検査窓よりも若干大きい検索
検査窓の中に入ればよいというものであり、配列からの
１またはそれ以上の反応部位が、参照分子検査窓の内側
に入っていてもよい。他の反応部位を無視して検査窓中
のそれぞれの参照分子だけを見つけるために使用する検
索法は、参照分子を最初に発見することを確実にするよ
うに選択しなければならない。例えば、参照分子が各バ
イオチップの最上部左端のコーナーに配置されていると
きには、検査窓の最上部左端のコーナーから出発する対
角線検索は、参照分子に最初に遭遇し、従って、それを
正確に同定することが可能であろう(図２)。他の参照の
配置のためには、検索法をそれに応じて調節することが
できる。通常のソフトウエアーを用いて検索を行って、
固体支持体を横切って検索検査窓を移動させ、参照分子
の位置決定を行い、それに合致させることができる。
【００１７】参照分子の位置が同定されたなら、分析物
検査窓を、それに対して配置することができる(図３に
おいて５で示す)。この配置は、既知の位置に配置した
第２の参照分子を使用することによって、あるいは、第
１の参照分子が反応部位の配列に対して固定位置で配置
されているという知識によって助けられる。参照分子の
位置決定は、配列の各反応部位の位置が決定されること
を可能にする。
検査窓を、それに対して配置することができる(図３に
おいて５で示す)。この配置は、既知の位置に配置した
第２の参照分子を使用することによって、あるいは、第
１の参照分子が反応部位の配列に対して固定位置で配置
されているという知識によって助けられる。参照分子の
位置決定は、配列の各反応部位の位置が決定されること
を可能にする。
【００１８】好ましい態様においては、バイオチップは
２つの参照分子を含んでなる。２つの参照分子が含まれ
ているときには、さらなる利点が得られる。即ち、それ
ぞれの座標が決定されたときには、検査窓の整列のため
に調整を行うことができる。これは、図４および図５に
最も明瞭に示されている。第２の参照分子が、第１の参
照分子およびその予想される位置に対して変化している
程度を算出し、それを用いてバイオチップの回転または
誤整列の程度を決定することができる。これにより、分
析物検査窓のさらに正確な配置が可能になる。図４にお
いて、６は、参照分子検査窓内で行われる検索の方向を
示す。
２つの参照分子を含んでなる。２つの参照分子が含まれ
ているときには、さらなる利点が得られる。即ち、それ
ぞれの座標が決定されたときには、検査窓の整列のため
に調整を行うことができる。これは、図４および図５に
最も明瞭に示されている。第２の参照分子が、第１の参
照分子およびその予想される位置に対して変化している
程度を算出し、それを用いてバイオチップの回転または
誤整列の程度を決定することができる。これにより、分
析物検査窓のさらに正確な配置が可能になる。図４にお
いて、６は、参照分子検査窓内で行われる検索の方向を
示す。
【００１９】バイオチップ上の参照分子の座標を用い
て、分析すべき分子を含む別個の反応部位のための検査
窓を配置する。シグナルの処理により、検出可能シグナ
ルの量が決定され、これにより、該部位の反応のレベル
が決定される。処理は、通常の方法[共焦点の顕微鏡ま
たは電荷と組合せたデバイス(ＣＣＤ)]を用いて行うこ
とができる。好ましい態様においては、バイオチップデ
バイスを、電荷と組合せたデバイスを含む系において使
用して、配列を目に見えるようにする。
て、分析すべき分子を含む別個の反応部位のための検査
窓を配置する。シグナルの処理により、検出可能シグナ
ルの量が決定され、これにより、該部位の反応のレベル
が決定される。処理は、通常の方法[共焦点の顕微鏡ま
たは電荷と組合せたデバイス(ＣＣＤ)]を用いて行うこ
とができる。好ましい態様においては、バイオチップデ
バイスを、電荷と組合せたデバイスを含む系において使
用して、配列を目に見えるようにする。
【００２０】イメージは、次のように処理する。イメー
ジ化デバイスを用いてイメージを生成させ、これをプロ
セッサーにコピーする。次いで、これにいくつかの通常
の形態を滑らかにする操作を行って、滑らかに変化する
背景イメージを生成させることができる。次いで、これ
を最初のイメージから差し引いて、背景補正されたイメ
ージを得る。このイメージデータに通常の限界値化操作
を行って、二元イメージを生成させることができる。こ
れは、イメージを、限界値を超える領域については白
に、そして、限界値を下回る領域については黒に区分す
ることによって行う(この際に、限界値を適切なレベル
で選択して、参照分子を見い出す)。
ジ化デバイスを用いてイメージを生成させ、これをプロ
セッサーにコピーする。次いで、これにいくつかの通常
の形態を滑らかにする操作を行って、滑らかに変化する
背景イメージを生成させることができる。次いで、これ
を最初のイメージから差し引いて、背景補正されたイメ
ージを得る。このイメージデータに通常の限界値化操作
を行って、二元イメージを生成させることができる。こ
れは、イメージを、限界値を超える領域については白
に、そして、限界値を下回る領域については黒に区分す
ることによって行う(この際に、限界値を適切なレベル
で選択して、参照分子を見い出す)。
【００２１】区分した参照分子は、別個の隣接した「小
塊(blob)」を形成すべきである。「小塊」分析(これ
は、上記のような別個の区分された領域の処理を記述す
るのに通常使用される用語である)を用いて、予め規定
した検査窓内の参照分子の部分を構成するピクセルを見
つける。通常、「小塊」分析は、輪郭追跡オペレーター
を用いて、区分した領域の輪郭を追跡するので、閉じら
れた境界が形成される。デジタルイメージ処理または輪
郭追跡に共通するのは、連鎖コードまたはFreemanコー
ドである(１９６１年から使用されている)。このコード
およびその修正版を用いて、区分された対象の周囲長さ
およびサイズを算出することができ、このようなパラメ
ーターを用いて、区分した小塊のサイズおよび形状が参
照分子の予想限界の範囲内にあることを確認することが
できる。この「小塊」が小さすぎるか、大きすぎるか、
または不適切な形状(例えば、長さと高さの比、または
円形性)であるときには、これを拒絶することができ
る。これにより、宇宙線人工物、バイオチップ壁からの
迷反射、窓中に侵入する他の分析物スポットの部分など
を無視することが可能になる。
塊(blob)」を形成すべきである。「小塊」分析(これ
は、上記のような別個の区分された領域の処理を記述す
るのに通常使用される用語である)を用いて、予め規定
した検査窓内の参照分子の部分を構成するピクセルを見
つける。通常、「小塊」分析は、輪郭追跡オペレーター
を用いて、区分した領域の輪郭を追跡するので、閉じら
れた境界が形成される。デジタルイメージ処理または輪
郭追跡に共通するのは、連鎖コードまたはFreemanコー
ドである(１９６１年から使用されている)。このコード
およびその修正版を用いて、区分された対象の周囲長さ
およびサイズを算出することができ、このようなパラメ
ーターを用いて、区分した小塊のサイズおよび形状が参
照分子の予想限界の範囲内にあることを確認することが
できる。この「小塊」が小さすぎるか、大きすぎるか、
または不適切な形状(例えば、長さと高さの比、または
円形性)であるときには、これを拒絶することができ
る。これにより、宇宙線人工物、バイオチップ壁からの
迷反射、窓中に侵入する他の分析物スポットの部分など
を無視することが可能になる。
【００２２】「小塊」分析を用いる市販のプログラムに
は、National InstrumentsからのIMAQ Vision Software
およびStemmer ImagingからのCVCが含まれる。他のプロ
グラム(例えば、Data Translation Ltd.からのNeuroche
ck 4.2)は異なる用語を使用するが(小塊よりもむしろ目
的の領域に言及する)、種々の検索法によって見い出さ
れた領域の測定のために、ピクセルデータに本質的に同
じ操作を行う。
は、National InstrumentsからのIMAQ Vision Software
およびStemmer ImagingからのCVCが含まれる。他のプロ
グラム(例えば、Data Translation Ltd.からのNeuroche
ck 4.2)は異なる用語を使用するが(小塊よりもむしろ目
的の領域に言及する)、種々の検索法によって見い出さ
れた領域の測定のために、ピクセルデータに本質的に同
じ操作を行う。
【００２３】バイオチップ分析物配列のコーナーまたは
その近くに配置された参照分子のために、二元化された
参照検査窓の対角線検索(参照分子が最初に見い出され
るのを確実にするのに適切な方向で行う)を用いて、対
角線に沿って限界値を超える最初のピクセルの位置決定
を行い、他の限界値を超えるピクセルに対する関連性
を、このピクセルの周辺において決定することができ
る。それが、十分な数の他の限界値を超えるピクセルに
直接的に関連しているときには、それは、参照分子の境
界部分を構成するものとみなすことができる。検索を続
けて、境界部分を構成する全ての限界値を超えるピクセ
ルの位置決定を行い、連鎖コードを用いて境界を閉じ
る。この際に、最初の境界ピクセルから始めてそこで終
わり、こうして、参照分子を構成するピクセルだけを同
定する。
その近くに配置された参照分子のために、二元化された
参照検査窓の対角線検索(参照分子が最初に見い出され
るのを確実にするのに適切な方向で行う)を用いて、対
角線に沿って限界値を超える最初のピクセルの位置決定
を行い、他の限界値を超えるピクセルに対する関連性
を、このピクセルの周辺において決定することができ
る。それが、十分な数の他の限界値を超えるピクセルに
直接的に関連しているときには、それは、参照分子の境
界部分を構成するものとみなすことができる。検索を続
けて、境界部分を構成する全ての限界値を超えるピクセ
ルの位置決定を行い、連鎖コードを用いて境界を閉じ
る。この際に、最初の境界ピクセルから始めてそこで終
わり、こうして、参照分子を構成するピクセルだけを同
定する。
【００２４】次いで、閉じられた境界上にまたはその中
に入ることがわかったピクセルは、それぞれの参照窓に
ついて算出された中心位置を持つことができ、次いで、
これらの中心位置を用いて、分析物検査窓の位置を規定
することができる。分析物検査窓の位置が決定されたと
きには、これらの中のイメージデータを同じように分析
して、配列された分子の別個の領域(反応部位)を決定す
る別個の試験反応部位(ＤＴＲ)のそれぞれを構成するピ
クセルを決定することができる。次いで、これらの反応
部位区分された「小塊」のそれぞれに対する背景補正し
たイメージ強度をさらに処理して、これらの位置のそれ
ぞれにおけるシグナル、従って、それぞれの反応部位で
起こった生化学反応の程度を算出することができる。
に入ることがわかったピクセルは、それぞれの参照窓に
ついて算出された中心位置を持つことができ、次いで、
これらの中心位置を用いて、分析物検査窓の位置を規定
することができる。分析物検査窓の位置が決定されたと
きには、これらの中のイメージデータを同じように分析
して、配列された分子の別個の領域(反応部位)を決定す
る別個の試験反応部位(ＤＴＲ)のそれぞれを構成するピ
クセルを決定することができる。次いで、これらの反応
部位区分された「小塊」のそれぞれに対する背景補正し
たイメージ強度をさらに処理して、これらの位置のそれ
ぞれにおけるシグナル、従って、それぞれの反応部位で
起こった生化学反応の程度を算出することができる。
【００２５】通常、各反応部位に対して同定したピクセ
ルのシグナルを算出するために、各部位の最大強度を見
つけ、次いで、経験的に決めた範囲(例えば、各最大値
の２０％以下)内の強度を有する全てのピクセルを用い
て、シグナルを測定する。このようなシグナル測定は、
それぞれの反応部位に対する、先の限界値の範囲内にあ
る全ピクセル強度の単純合計、または恐らくはその平均
になるであろう。好ましいイメージ化法の例は、欧州特
許出願公開ＥＰ-Ａ-０９０２３９４に開示されている
(この文献の内容は、本明細書の一部を構成する)。
ルのシグナルを算出するために、各部位の最大強度を見
つけ、次いで、経験的に決めた範囲(例えば、各最大値
の２０％以下)内の強度を有する全てのピクセルを用い
て、シグナルを測定する。このようなシグナル測定は、
それぞれの反応部位に対する、先の限界値の範囲内にあ
る全ピクセル強度の単純合計、または恐らくはその平均
になるであろう。好ましいイメージ化法の例は、欧州特
許出願公開ＥＰ-Ａ-０９０２３９４に開示されている
(この文献の内容は、本明細書の一部を構成する)。
【００２６】別個の反応部位の配列は、常に規則的なパ
ターンで整列している訳ではないであろう。ありうる誤
整列を補正するために、参照分子が位置決定されたとき
に、全ての可能な反応部位が１つの窓の中に配置される
ように(図６の７を参照)、分析物検査窓を整列させるの
が好ましいであろう。「小塊」分析を用いるイメージ化
は、反応部位の閉じられた輪郭を明らかにし、個々の検
査窓を各反応部位に対して整列させることを可能にし、
これにより、次に中心位置を算出することができる。
ターンで整列している訳ではないであろう。ありうる誤
整列を補正するために、参照分子が位置決定されたとき
に、全ての可能な反応部位が１つの窓の中に配置される
ように(図６の７を参照)、分析物検査窓を整列させるの
が好ましいであろう。「小塊」分析を用いるイメージ化
は、反応部位の閉じられた輪郭を明らかにし、個々の検
査窓を各反応部位に対して整列させることを可能にし、
これにより、次に中心位置を算出することができる。
【００２７】別の態様においては、異なるバイオチップ
中の参照分子の相対座標を用いて、回転または誤整列の
程度を算出することができる。このことは、図７におい
て最も簡単に示されている。この図においては、複数の
バイオチップが単一のラックに配置されている。それぞ
れの参照分子の互いに対する位置および参照分子の１つ
から予想される整列の算出により、回転の程度を算出す
ることが可能になる。次いで、検査窓を、それぞれの反
応部位と正確に合致するように整列させることができ
る。
中の参照分子の相対座標を用いて、回転または誤整列の
程度を算出することができる。このことは、図７におい
て最も簡単に示されている。この図においては、複数の
バイオチップが単一のラックに配置されている。それぞ
れの参照分子の互いに対する位置および参照分子の１つ
から予想される整列の算出により、回転の程度を算出す
ることが可能になる。次いで、検査窓を、それぞれの反
応部位と正確に合致するように整列させることができ
る。
【００２８】本発明のデバイスにおいて使用する固体支
持体材料は、例えば、シリコン、プラスチック、膜形成
材料、石英、ガラスまたはセラミック材料(酸化アルミ
ニウム)であってよい。蛍光および化学発光の両検出方
法を成功裏に使用することができるので、セラミック材
料がシリコンの優れた代替物を与える。
持体材料は、例えば、シリコン、プラスチック、膜形成
材料、石英、ガラスまたはセラミック材料(酸化アルミ
ニウム)であってよい。蛍光および化学発光の両検出方
法を成功裏に使用することができるので、セラミック材
料がシリコンの優れた代替物を与える。
【００２９】本発明において使用する固体支持体材料
は、１ｃｍ２未満であってよい。固定化分子の別個の領
域は、２００μｍ未満、好ましくは１００μｍ未満、最
も好ましくは１０〜１５μｍで離れていてよい。
は、１ｃｍ２未満であってよい。固定化分子の別個の領
域は、２００μｍ未満、好ましくは１００μｍ未満、最
も好ましくは１０〜１５μｍで離れていてよい。
【００３０】本発明において使用することができる好ま
しいデバイスは、英国特許出願公開ＧＢ-Ａ-２３２４８
６６に記載されている(この文献の内容は、本明細書の
一部を構成する)。
しいデバイスは、英国特許出願公開ＧＢ-Ａ-２３２４８
６６に記載されている(この文献の内容は、本明細書の
一部を構成する)。
【００３１】本発明において使用する分子は、常法によ
り材料表面に固定化することができる。共有結合による
固定化が好ましい。受動吸着を使用することもできる
が、この形態の固定化は、ｐＨ、温度およびイオン強度
の変化に感受性であり、ある種の場合には、インキュベ
ーションおよび洗浄工程中に弱く結合した分子が遊離す
る結果になることがあり、従って再現性に劣る。勿論、
これら分子は、固定化操作の後に最大活性を保持してい
るのが望ましい。
り材料表面に固定化することができる。共有結合による
固定化が好ましい。受動吸着を使用することもできる
が、この形態の固定化は、ｐＨ、温度およびイオン強度
の変化に感受性であり、ある種の場合には、インキュベ
ーションおよび洗浄工程中に弱く結合した分子が遊離す
る結果になることがあり、従って再現性に劣る。勿論、
これら分子は、固定化操作の後に最大活性を保持してい
るのが望ましい。
【００３２】分子の共有結合による固定化は、常法を用
いて、通常は、規定の条件下で活性化することができる
化学的反応性のリンカー分子を用いて行うことができ
る。適当なリンカー分子の例は、ＧＢ-Ａ-２３２４８６
６に記載されている。
いて、通常は、規定の条件下で活性化することができる
化学的反応性のリンカー分子を用いて行うことができ
る。適当なリンカー分子の例は、ＧＢ-Ａ-２３２４８６
６に記載されている。
【００３３】固体支持体材料に固定化する分子は、分析
物アッセイにおいて使用するのに適するあらゆる分子で
あってよい。例えば、配列させる分子は、ポリヌクレオ
チド、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその官能性類似
体であってよい。また、タンパク質およびペプチド、例
えば、酵素、抗体、受容体またはホルモンを使用するこ
ともできる。さらに、これら分子は、ウイルスまたは有
機化合物であってもよい。
物アッセイにおいて使用するのに適するあらゆる分子で
あってよい。例えば、配列させる分子は、ポリヌクレオ
チド、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその官能性類似
体であってよい。また、タンパク質およびペプチド、例
えば、酵素、抗体、受容体またはホルモンを使用するこ
ともできる。さらに、これら分子は、ウイルスまたは有
機化合物であってもよい。
【００３４】参照分子を、種々の方法によって、例え
ば、測色法、化学発光法、蛍光法または生発光法によっ
て可視化することができる。従って、分子は、検出可能
シグナルの生成が可能であるかまたはそれを容易にする
ことができるあらゆる分子であってよい。１つの態様に
おいては、この分子は蛍光ラベルであり、これをデバイ
スに結合させる。
ば、測色法、化学発光法、蛍光法または生発光法によっ
て可視化することができる。従って、分子は、検出可能
シグナルの生成が可能であるかまたはそれを容易にする
ことができるあらゆる分子であってよい。１つの態様に
おいては、この分子は蛍光ラベルであり、これをデバイ
スに結合させる。
【００３５】適当な蛍光ラベルは、当業者には既知であ
ろう。その例には、ローダミン、ＣＹ-５、フルオレセ
イン、フルオレセインイソチオシアネートおよびオレゴ
ングリーンが含まれる。
ろう。その例には、ローダミン、ＣＹ-５、フルオレセ
イン、フルオレセインイソチオシアネートおよびオレゴ
ングリーンが含まれる。
【００３６】蛍光ラベルは、化学的手段を用いて固体支
持体に直接的に結合させることができる。また、蛍光ラ
ベルを、固定化されたリンカー分子(例えば、タンパク
質または抗体分子)により、あるいは、相補性ポリヌク
レオチドとのハイブリダイゼーションにより、間接的に
結合させることができる。さらに、ラベルされたポリヌ
クレオチドを、ハイブリダイゼーションを必要とするこ
となく使用することもできる。
持体に直接的に結合させることができる。また、蛍光ラ
ベルを、固定化されたリンカー分子(例えば、タンパク
質または抗体分子)により、あるいは、相補性ポリヌク
レオチドとのハイブリダイゼーションにより、間接的に
結合させることができる。さらに、ラベルされたポリヌ
クレオチドを、ハイブリダイゼーションを必要とするこ
となく使用することもできる。
【００３７】別法によれば、分子は、リガンドと相互作
用して検出可能シグナルを生成することができる生物学
的分子であってもよい。適当な生物学的分子の例は、酵
素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラ
ーゼまたはβ-ガラクトシダーゼ)である。これら酵素の
それぞれは、検出可能シグナルを生成する生物学的反応
に関与することができる。別の態様においては、抗体を
参照分子として使用することができ、使用時にこの抗体
は、自体検出可能なリガンドに結合する。例えば、抗体
は、化学発光過程を経て検出可能シグナルを生成するこ
とができる酵素である西洋ワサビペルオキシダーゼに対
して親和性を有することができる。好ましくは、参照分
子は、固体支持体上の配列分子と接触することになる分
析物とは反応しない。さらに、参照分子は、固体支持体
上で行われる他の分析物反応とは無関係に、常に検出可
能であるべきである。従って、参照分子は、分析物アッ
セイにおいて反応する分子とは独立して選択するのが好
ましい。
用して検出可能シグナルを生成することができる生物学
的分子であってもよい。適当な生物学的分子の例は、酵
素(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラ
ーゼまたはβ-ガラクトシダーゼ)である。これら酵素の
それぞれは、検出可能シグナルを生成する生物学的反応
に関与することができる。別の態様においては、抗体を
参照分子として使用することができ、使用時にこの抗体
は、自体検出可能なリガンドに結合する。例えば、抗体
は、化学発光過程を経て検出可能シグナルを生成するこ
とができる酵素である西洋ワサビペルオキシダーゼに対
して親和性を有することができる。好ましくは、参照分
子は、固体支持体上の配列分子と接触することになる分
析物とは反応しない。さらに、参照分子は、固体支持体
上で行われる他の分析物反応とは無関係に、常に検出可
能であるべきである。従って、参照分子は、分析物アッ
セイにおいて反応する分子とは独立して選択するのが好
ましい。
【００３８】本発明の方法は、適切にプログラムされた
コンピューターによって制御された自動化手段によって
行うのが好ましい。
コンピューターによって制御された自動化手段によって
行うのが好ましい。
【００３９】
【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明を説明する。
この実験において、一連の９ｍｍ２の多分析物バイオチ
ップ(ラック中の３×３グリッドに保持される)を、有標
の堆積装置を用いて、５×５グリッドのバイオチップあ
たり１９の独立した位置に１９の抗体スポットを堆積さ
せることによって調製した。このバイオチップを、堆積
後に３７℃でインキュベートして、バイオチップ表面へ
の抗体の共有結合を確実にした。次いで、このバイオチ
ップを、ブロック溶液中に浸漬した。このブロック溶液
は、バイオチップのスポットのない領域に結合し、従っ
て、抗体スポットの外側の領域への非特異的な結合を妨
げる(ＤＴＲ)。
この実験において、一連の９ｍｍ２の多分析物バイオチ
ップ(ラック中の３×３グリッドに保持される)を、有標
の堆積装置を用いて、５×５グリッドのバイオチップあ
たり１９の独立した位置に１９の抗体スポットを堆積さ
せることによって調製した。このバイオチップを、堆積
後に３７℃でインキュベートして、バイオチップ表面へ
の抗体の共有結合を確実にした。次いで、このバイオチ
ップを、ブロック溶液中に浸漬した。このブロック溶液
は、バイオチップのスポットのない領域に結合し、従っ
て、抗体スポットの外側の領域への非特異的な結合を妨
げる(ＤＴＲ)。
【００４０】各バイオチップにおいて使用した分析物ス
ポットのグリッドは、以下に示すようであった(表示し
た短縮形は、後記で説明する)：
ポットのグリッドは、以下に示すようであった(表示し
た短縮形は、後記で説明する)：
【表１】
【００４１】最上部左端のコーナーに配置した参照分子
は、ＦＩＴＣであった。これは、周知の発光物質であ
り、発光量が予め規定した範囲内にあるように、既知の
濃度まで希釈した。カメラ発光量を、相対的な光単位
(ＲＬＵ)で測定した。参照分子のＲＬＵ値が、指定範囲
の外にある場合には、処理に誤りがあると考えられたの
で、このバイオチップを拒絶した。また、ＦＩＴＣのさ
らに４つのスポット(ＦＩＴＣ １〜４)を含有させて、
さらなる参照分子として働くようにした(以下において
は、これらを「補正スポット」と称する)。
は、ＦＩＴＣであった。これは、周知の発光物質であ
り、発光量が予め規定した範囲内にあるように、既知の
濃度まで希釈した。カメラ発光量を、相対的な光単位
(ＲＬＵ)で測定した。参照分子のＲＬＵ値が、指定範囲
の外にある場合には、処理に誤りがあると考えられたの
で、このバイオチップを拒絶した。また、ＦＩＴＣのさ
らに４つのスポット(ＦＩＴＣ １〜４)を含有させて、
さらなる参照分子として働くようにした(以下において
は、これらを「補正スポット」と称する)。
【００４２】使用した短縮形は、次の通りである。
【表２】
【００４３】９つの異なる患者試料を、１つのバイオチ
ップウエルあたり１つで添加し、処理して、分析用のイ
メージを得た。参照分子が、それぞれのバイオチップ上
の予め規定した参照分子検索窓内に見い出され、ＲＬＵ
値、面積(ピクセルの数)およびＸ/Ｙアスペクト比の予
め規定した基準に対してスクリーニングした。全ての参
照分子が、予め規定したＲＬＵ限界値の範囲内にあっ
た。
ップウエルあたり１つで添加し、処理して、分析用のイ
メージを得た。参照分子が、それぞれのバイオチップ上
の予め規定した参照分子検索窓内に見い出され、ＲＬＵ
値、面積(ピクセルの数)およびＸ/Ｙアスペクト比の予
め規定した基準に対してスクリーニングした。全ての参
照分子が、予め規定したＲＬＵ限界値の範囲内にあっ
た。
【００４４】小さな角度のイメージの回転が明らかであ
った。適切な予め規定した窓内に見い出された各バイオ
チップ上の参照分子を用いて、分析物の窓をＤＴＲで自
動的に整列させ、イメージ化を行った。
った。適切な予め規定した窓内に見い出された各バイオ
チップ上の参照分子を用いて、分析物の窓をＤＴＲで自
動的に整列させ、イメージ化を行った。
【００４５】初めに形態的な処理(一連のイメージの開
放および閉鎖操作による)を行うことによって、イメー
ジを自動的に処理して、粗イメージから背景イメージを
算出した。次いで、この算出した背景イメージを、粗イ
メージから差し引いて、背景-差し引きイメージを得
た。これにより、背景の変動によるシグナルレベルのあ
らゆる変動が除去される。最後に、一連の限界値を、背
景-差し引きイメージに対して使用して、どのピクセル
がそれぞれの限界値を超えているかを明らかにし、興味
ある存在物の位置決定を可能にした。最も高い限界値を
最初に試験し、種々の「小塊」分析法によって隣接(別
個)の対象を見つけた。測定可能なＤＴＲの全て(即ち、
ＣＣＤカメラのノイズレベル変動に従って設定した、最
も低い限界値を超えるもの)が同定されるまで、限界値
を徐々に低下させた。それぞれの存在物の図心を算出し
て、該存在物の位置マーカーとして使用した。
放および閉鎖操作による)を行うことによって、イメー
ジを自動的に処理して、粗イメージから背景イメージを
算出した。次いで、この算出した背景イメージを、粗イ
メージから差し引いて、背景-差し引きイメージを得
た。これにより、背景の変動によるシグナルレベルのあ
らゆる変動が除去される。最後に、一連の限界値を、背
景-差し引きイメージに対して使用して、どのピクセル
がそれぞれの限界値を超えているかを明らかにし、興味
ある存在物の位置決定を可能にした。最も高い限界値を
最初に試験し、種々の「小塊」分析法によって隣接(別
個)の対象を見つけた。測定可能なＤＴＲの全て(即ち、
ＣＣＤカメラのノイズレベル変動に従って設定した、最
も低い限界値を超えるもの)が同定されるまで、限界値
を徐々に低下させた。それぞれの存在物の図心を算出し
て、該存在物の位置マーカーとして使用した。
【００４６】全ての検出された存在物のＲＬＵ値を、常
法に従って算出した。各存在物の境界内のピーク光レベ
ルを見つけ、次いで、限界値を、各存在物についてピー
クピクセルＲＬＵ値の２０％下に設定した。この限界値
(存在物ピークＲＬＵの２０％下)を超える存在物のピク
セルだけを、該存在物の平均ＲＬＵ値を後に算出する際
に使用した。このバイオチップのイメージを図８に示
す。
法に従って算出した。各存在物の境界内のピーク光レベ
ルを見つけ、次いで、限界値を、各存在物についてピー
クピクセルＲＬＵ値の２０％下に設定した。この限界値
(存在物ピークＲＬＵの２０％下)を超える存在物のピク
セルだけを、該存在物の平均ＲＬＵ値を後に算出する際
に使用した。このバイオチップのイメージを図８に示
す。
【００４７】それぞれの整列させた分析物窓をチェック
して、存在物の図心が、その境界内にあることを確実に
した。そのようであるとき、該存在物を、該窓に割り当
てられた分析物種に指名した。即ち、各存在物は、１つ
の分析物種であると同定された。次いで、９つのバイオ
チップ上の補正スポットを、参照スポットと同じ基準に
対してスクリーニングし、全ての補正スポットが、予め
決めた限界値内のＲＬＵ値を有することを見い出し、こ
れにより、各チップが、処理に対して許容しうる品質の
ものであると称することが可能になった。次いで、それ
ぞれの整列させた分析物窓の中の同定された存在物の平
均ＲＬＵ値を、それぞれの処理されたバイオチップのた
めに表示させた。
して、存在物の図心が、その境界内にあることを確実に
した。そのようであるとき、該存在物を、該窓に割り当
てられた分析物種に指名した。即ち、各存在物は、１つ
の分析物種であると同定された。次いで、９つのバイオ
チップ上の補正スポットを、参照スポットと同じ基準に
対してスクリーニングし、全ての補正スポットが、予め
決めた限界値内のＲＬＵ値を有することを見い出し、こ
れにより、各チップが、処理に対して許容しうる品質の
ものであると称することが可能になった。次いで、それ
ぞれの整列させた分析物窓の中の同定された存在物の平
均ＲＬＵ値を、それぞれの処理されたバイオチップのた
めに表示させた。
【００４８】ラックの最上部左端の第１バイオチップの
結果を、以下の表３に示す。
結果を、以下の表３に示す。
【表３】
【００４９】これらのＲＬＵ値を、分析物濃度の関数と
して、測定した発光量曲線に対して比較して、各分析物
の濃度を決定することができる。次いで、各分析物の限
界濃度に関する工業規格を、決定した濃度に適用して、
適当なときに陽性または陰性の結果を得ることができ
る。
して、測定した発光量曲線に対して比較して、各分析物
の濃度を決定することができる。次いで、各分析物の限
界濃度に関する工業規格を、決定した濃度に適用して、
適当なときに陽性または陰性の結果を得ることができ
る。
【図１】 参照分子検索窓(１)中にイメージされた各バ
イオチップ(２)を有する、バイオチップ配列の模式図で
ある。
イオチップ(２)を有する、バイオチップ配列の模式図で
ある。
【図２】 参照分子(３)および分析物反応部位の配列
(４)を有する個々のバイオチップ(２)の模式図である。
(４)を有する個々のバイオチップ(２)の模式図である。
【図３】 分析物反応部位(４)と合致させた分析物検査
窓(５)の整列を示す図である。
窓(５)の整列を示す図である。
【図４】 反応部位と正確に合致するように検査窓(５)
を配置するために使用することができる２つの参照分子
(３)を有するバイオチップの模式図である。
を配置するために使用することができる２つの参照分子
(３)を有するバイオチップの模式図である。
【図５】 反応部位と正確に合致するように検査窓(５)
を配置するために使用することができる２つの参照分子
(３)を有するバイオチップの模式図である。
を配置するために使用することができる２つの参照分子
(３)を有するバイオチップの模式図である。
【図６】 参照分子検索窓中の参照分子の対角線検索を
示す図である。
示す図である。
【図７】 各バイオチップ上の単一の参照分子を用いて
算出したラックの回転度を有する、１つのラックにおい
て整列させたいくつかのバイオチップを示す図である。
算出したラックの回転度を有する、１つのラックにおい
て整列させたいくつかのバイオチップを示す図である。
【図８】 参照分子を用いて検査窓を整列させた後、種
々の分析物のアッセイにおいて得られたイメージを示す
図である。
々の分析物のアッセイにおいて得られたイメージを示す
図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジョン・ビクター・ラモント イギリス、ノーザン・アイルランド、ビー ティ29・４キューワイ、カウンティ・アン トリム、クラムリン、ダイヤモンド・ロー ド、アードモア、ランドックス・ラボラト リーズ・リミテッド内 (72)発明者 ロバート・アイバン・マッコネル イギリス、ノーザン・アイルランド、ビー ティ29・４キューワイ、カウンティ・アン トリム、クラムリン、ダイヤモンド・ロー ド、アードモア、ランドックス・ラボラト リーズ・リミテッド内 (72)発明者 スティーブン・ピーター・フィッツジェラ ルド イギリス、ノーザン・アイルランド、ビー ティ29・４キューワイ、カウンティ・アン トリム、クラムリン、ダイヤモンド・ロー ド、アードモア、ランドックス・ラボラト リーズ・リミテッド内 Ｆターム(参考） 2G054 AA06 CA22 EA01 EA02 EA03 GA04 GE01 4B029 AA07 BB16 BB17 CC08 FA10 FA12 GA03 GB02
Claims (16)
- 【請求項１】 固体支持体の表面における、別個の反応
部位の配列中に含まれる分子をイメージするための方法
であって、以下の工程を含んでなる方法： (ｉ)配列をイメージし、配列に対して既知の位置におい
て固体支持体上に配置された第１分子を検出し； (ii)該第１分子を参照して、該別個の反応部位に合致さ
せて検査窓を整列させ；そして (iii)それぞれの窓における検出可能シグナルの量を測
定する。 - 【請求項２】 第１分子の検出を、該第１分子を含む支
持体の領域内に第１検査窓を整列させ、該窓内で該第１
分子のイメージを検索することによって行う請求項１に
記載の方法。 - 【請求項３】 第１検査窓が２次元のピクセル配列を規
定し、検索が、該ピクセル配列の対角線走査およびピク
セルの値の測定によって行われる請求項２に記載の方
法。 - 【請求項４】 第１分子の検出後に、第１検査窓を再配
置するかまたは大きくして、１またはそれ以上の別個の
反応部位も該窓内に位置するようにし、該１またはそれ
以上の部位を検出し、該第１分子および該１またはそれ
以上の部位を参照して、配列の各反応部位に合致するよ
うに更なる検査窓を整列させる請求項２または３に記載
の方法。 - 【請求項５】 反応部位の配列が、第１分子が配置され
ているコーナーを規定する請求項１〜４のいずれかに記
載の方法。 - 【請求項６】 工程(ｉ)が、配列に対して既知の位置に
おいて固体支持体上に配置された第２分子を検出する工
程、および、第１および第２の両分子を参照して検査窓
を整列させる工程、をさらに含んでなる請求項１〜５の
いずれかに記載の方法。 - 【請求項７】 イメージ化を、放射の検出によって行う
請求項１〜６のいずれかに記載の方法。 - 【請求項８】 放射が、化学発光、生発光または蛍光で
ある請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 配列の分子が、分析物と反応しうるもの
である請求項１〜８のいずれかに記載の方法。 - 【請求項１０】 配列の分子が、ポリヌクレオチド、抗
体、タンパク質または有機化合物である請求項１〜９の
いずれかに記載の方法。 - 【請求項１１】 固体支持体が、１ｃｍ２未満である請
求項１〜１０のいずれかに記載の方法。 - 【請求項１２】 固体支持体が、セラミック、シリコン
またはガラス材料である請求項１〜１１のいずれかに記
載の方法。 - 【請求項１３】 配列の分子が、固体支持体の表面に共
有結合している請求項１〜１２のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項１４】 工程(ｉ)において得られるイメージ
が、工程(ii)および(iii)を進めるために、予め規定し
た値を超えるものでなければならない請求項１〜１３の
いずれかに記載の方法。 - 【請求項１５】 請求項１〜１４のいずれかに記載の方
法を行うためにプログラムされたコンピューター。 - 【請求項１６】 請求項１５に記載のコンピューターに
よって制御されるイメージ化デバイス。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0102357 | 2001-01-30 | ||
| GBGB0102357.1A GB0102357D0 (en) | 2001-01-30 | 2001-01-30 | Imaging method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002372534A true JP2002372534A (ja) | 2002-12-26 |
| JP4250365B2 JP4250365B2 (ja) | 2009-04-08 |
Family
ID=9907792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002020331A Expired - Fee Related JP4250365B2 (ja) | 2001-01-30 | 2002-01-29 | イメージ化法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6897026B2 (ja) |
| EP (1) | EP1227311B1 (ja) |
| JP (1) | JP4250365B2 (ja) |
| CN (1) | CN1215334C (ja) |
| AU (1) | AU766920B2 (ja) |
| CA (1) | CA2369173A1 (ja) |
| GB (1) | GB0102357D0 (ja) |
| HK (1) | HK1049882B (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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