JP2001510778A

JP2001510778A - スキンケア組成物

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Publication number: JP2001510778A
Application number: JP2000503810A
Authority: JP
Inventors: ピライ，スリークマー; サンサナム，ウーマ; バラツト，マリーアン; ボスコ，キヤロル・アネツト
Original assignee: ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ
Priority date: 1997-07-25
Filing date: 1998-07-07
Publication date: 2001-08-07
Also published as: KR100602963B1; CA2299457C; US6030620A; CZ295087B6; WO1999004748A3; US6548072B1; EP1003470A2; DE69812367T2; EP1003470B1; AU8858598A; CA2299457A1; KR20010022183A; CN1121852C; CZ2000284A3; ZA986043B; CN1264290A; ID26999A; WO1999004748A2; BR9811113A; AU730852B2

Abstract

(57)【要約】少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するエストロゲン活性を付与する量において存在する場合に、有機ヒヨコマメ抽出物はフィトエストロゲンである。有機ヒヨコマメ抽出物を含有する化粧組成物は、シワのある、線のある、乾燥した、薄片状の、老化した、または光損傷した皮膚の外観を向上させ、ならびに、皮膚の厚み、弾力性、柔軟性、およびふくらみを向上させるのに有効である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）ヒヨコマメの有機抽出物を含有する化粧組成物、およびそのような組成物を皮
膚に適用することによって皮膚のコンディションを整える化粧方法。

【０００２】（背景技術）ヒトの皮膚は、２つの主要な層、すなわち、下部の厚い層である真皮、および
、上部の薄い層である表皮、から成る。真皮は、皮膚に、強さ、弾力性、および
厚みを付与する層である。

【０００３】真皮の主要細胞型は、コラーゲン、エラスチン、およびグリコサミノグリカン
のような全ての皮膚マトリックス成分の合成および分泌に関わる繊維芽細胞であ
る。コラーゲンは皮膚に強さを付与し、エラスチンは弾力性を付与し、グリコサ
ミノグリカンは潤いおよびふくらみを付与する。加齢とともに、皮膚層の厚みが
減少し、これが、老化する皮膚におけるシワの形成に部分的に関係すると考えら
れる。皮膚に弾力性およびバリヤー性を付与するヒトの皮膚の上部層、または表
皮層は、ケラチノサイト、メラノサイト、およびランゲルハンス細胞を含む多く
の種々の細胞型から成る。ケラチノサイトは、表皮の主要細胞型である（ヒト表
皮における合計細胞数の７５％〜８０％）。Ｒｉｃｈａｒｄｓらは、エストロゲ
ンが、ヒト皮膚繊維芽細胞による、タンパク質、プロラクチンの分泌を刺激し、
および、プロラクチンが次にケラチノサイトの増殖を刺激することを報告してい
る。Ｒｉｃｈａｒｄｓら、ＨｕｍａｎＤｅｒｍａｌＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓＥｘｐｒｅｓｓＰｒｏｌａｃｔｉｎＩｎＶｉｔｒｏ．，Ｊ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０６：１２５０，１９９６。

【０００４】エストロゲン、およびエストロゲンと同様に機能する合成化合物が、皮膚層の
厚みを増加させ、老化する皮膚におけるシワの形成を減少させることが既知であ
る。閉経後に起こる皮膚乾燥、皮膚弾力性およびふくらみの損失ような皮膚にお
ける変化は、エストロゲン産生の不足に起因する。エストロゲン療法は、老化す
る皮膚に関係するこれらの変化の多くを予防するかまたは遅らせる（Ｃｒｅｉｄ
ｉら、Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｃｏｎｊｕｇａｔｅｄｅｓｔｒｏｇｅｎｃ
ｒｅａｍｏｎａｇｉｎｇｆａｃｉａｌｓｋｉｎ，Ｍａｔｕｒｉｔａｓ
，１９，Ｐ．２１１，１９９４）。皮膚におけるエストロゲンの効果のい
くつかは下記のものを包含する：皮膚の厚みの増加および小皺の消失、表皮の有
糸分裂速度の増加、皮脂腺の大きさおよび活性の減少、毛髪成長速度の低下、コ
ラーゲン・ターンオーバーの刺激、ならびに繊維芽細胞のヒアルロン酸の産生お
よびグリコサミノグリカン合成の増加（Ｐｕｇｌｉｅｓｅ，Ｍｅｎｏｐａｕｓ
ａｌｓｋｉｎ，ＳｋｉｎＩｎｃ．，３月／４月１９９４年：ｐ．６９
〜７７）。

【０００５】近年、フィトエストロゲン（即ち、エストロゲン様活性を有し、植物に見い出
される天然化合物）が、治療目的に益々使用されている。報告されている使用の
いくつかは、低コレステロール血症および抗粥状動脈腫剤としての使用、特に閉
経後の女性における心血管疾患の治療、年配者における骨粗鬆症の治療、および
特に女性における乳癌、子宮内膜および頸癌に対する抗癌剤としての使用である
（Ｋｎｉｇｈｔら、Ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ − ａｓｈｏｒｔｒｅ
ｖｉｅｗ，Ｍａｔｕｒｉｔａｓ，２２：１６７〜７５，１９９５）。

【０００６】「天然」に基づく製品に対する消費者の要求が、近年、高まっている。消費者
は、化学合成は、環境的に安全でないと考えている。化学合成成分は、非常に強
い（ｈａｒｓｈ）化学物質を含有する場合がある。天然製品は純粋で穏やかであ
り、化学合成製品より優れていると考えられている。しかし、植物源から化粧的
利益を引き出すことは容易ではない。「天然」源から実際的利益を引き出すため
には、特定の活性を有する植物または植物の一部を同定する必要があるだけでな
く、化粧的利益を実際に付与するその植物の最少濃度および／または特定の抽出
物を同定する必要がある。

【０００７】植物中に存在する５００以上の化合物がエストロゲン活性を有することが報告
されている。集合的にフィトエストロゲンと称されるこれらの化合物は、穀類、
マメ科植物（ヒヨコマメを含む）、およびイネ科植物を包含する多くの植物に見
い出される（Ｐｒｉｃｅら、Ｎａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇｅｓｔ
ｏｒｏｇｅｎｉｎｆｏｏｄｓ− ａｒｅｖｉｅｗ．，Ｆｏｏｄａｄｄ
ｉｔｉｖｅｓａｎｄｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ．，２，ｐ．７３〜１０
６，１９８５）。それらの濃度は、植物の種々の部分、地理的位置、成長年な
どにおいて変化する。フィトエストロゲン活性を有する植物化合物の２つの主要
な種類は、フラボノイドおよびクメスタンである。一般に報告されているいくつ
かのフィトエストロゲン化合物は、ゲニステイン、ビオカニンＡ、ホルムオノネ
チン、ダイゼイン、およびそれらのグリコシド誘導体である（Ｋｎｉｇｈｔら、
Ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ−ａｓｈｏｒｔｒｅｖｉｅｗ．，Ｍａｔｕ
ｒｉｔａｓ，Ｊ．Ｃｌｉｍａｃｔｒｅｉｃａｎｄｐｏｓｔ−ｍｅｎｏｐ
ａｕｓｅ，２２，ｐ．１６７〜７５，１９９５）。

【０００８】一般的食用ヒラマメであるヒヨコマメまたはスパニッシュ・ピー（Ｃｉｃｅｒａｒｉｅｔｉｎｕｍ）は、ダイゼイン、ホルムオノネチン、ビオカニンＡ、プ
ラテンセイン、ホモフェレイリン（ｈｏｍｏｆｅｒｒｅｉｒｉｎ）、メディカル
ピン、マッキアイン（ｍａａｃｋｉａｉｎ）、メチルクメストロール、メディカ
ゴール、ホルムオノネチングルコシド、およびビオカニンＡグルコシドを包含す
るフラボノイドを含有する（Ｉｎｇｈａｍら、ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＯｒｇａｎｉｃｎａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃ
ｔｓ，ｖｏｌ．４３：Ｗ．Ｈｅｒｚら編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
，Ｗｉｅｎ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８３）。ヒヨコマメからのフラボノ
イドは、ラットの血液および肝臓において脂質を減少させる効果を有することが
報告されている。いくつかの栄養学研究は、栄養サプリメントとしての使用のた
めのヒヨコマメからのタンパク質、およびヒヨコマメのタンパク質の質を向上さ
せる方法について報告している。Ｖａｓｉｌｉｏｕの米国特許第４７６１２８５
号は、食餌サプリメントとして、または痔の内部または局所治療のために、ヒヨ
コマメを使用することを開示している。インドにおいて、水と混合したヒヨコマ
メ粉末から作られる化粧用マスクまたはスキントリートメントは、一般的美容ト
リートメントである。

【０００９】前記文献は、スキンケアまたは化粧用途のための有機ヒヨコマメ抽出物につい
て記載していない。前記文献は、特定のエストロゲン活性を有するフィトエスト
ロゲンとしての、有機ヒヨコマメ抽出物の局所適用について記載していない。

【００１０】（発明の開示）本発明は、（ｉ）少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するエストロゲン活性で
あって、該エストロゲン活性が本明細書に記載される試験によって測定されるエ
ストロゲン活性を付与する量の、ヒヨコマメの有機抽出物；（ｉｉ）化粧的に許容される賦形剤；を含んで成るスキンケア組成物を包含する。

【００１１】本発明は、本発明組成物を皮膚に適用することを含んで成る、シワのある、線
のある（ｌｉｎｅｄ）、乾燥した、薄片状の（ｆｌａｋｙ）、老化した、または
光損傷した皮膚の状態を向上させるかまたは予防し、および皮膚の厚み、弾力性
、柔軟性、およびふくらみ（ｐｌｕｍｐｎｅｓｓ）を向上させる方法も包含する
。本発明の組成物は、既に乾燥した、薄片状の、線のある、シワのある、老化し
た、光損傷した、哺乳動物の皮膚に局所適用することを意図し、または、本発明
組成物を正常な健康な皮膚に予防的に適用して、衰える変化を予防または減少さ
せることができる。

【００１２】本発明は、本発明組成物を皮膚に適用することによってヒトの皮膚における繊
維芽細胞および表皮皮膚細胞を増加させる化粧方法も包含する。

【００１３】（発明を実施するための最良の形態）ヒヨコマメヒヨコマメは、有機抽出物の形態において、本発明組成物に使用するのに好適
である。ヒヨコマメ抽出物は、本発明に使用するために、乾燥ヒヨコマメから製
造される。乾燥ヒヨコマメは、ＡｒｒｏｗｈｅａｄＭｉｌｌｓ、健康食品店、
またはスパーマケットから入手し得る。

【００１４】有機ヒヨコマメ抽出物は、１部の乾燥ヒヨコマメを２〜５部の溶媒と一緒に室
温で４〜２４時間攪拌することによって、乾燥ヒヨコマメを溶媒で抽出すること
によって製造される。好適な溶媒が下記に記載される。抽出物を濾過および／ま
たは遠心分離によって清澄にし、次に、蒸発によって乾燥して（任意に、真空に
おいて）、有機ヒヨコマメ抽出物を得る。

【００１５】本発明に使用されるヒヨコマメ抽出物の製造に好適な溶媒は、限定されないが
、エタノール、メタノール、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、および
酢酸エチルを包含する。活性を最適化するのに好ましい溶媒は、ジクロロメタン
、メタノール、またはエタノールである。例えば、有機溶媒抽出またはクロマト
グラフィーによって、抽出物をさらに濃縮し、分別し、再抽出し、または精製す
ることができる。

【００１６】本発明の一部として、有機ヒヨコマメ抽出物を、エストロゲン活性を付与する
特定の最少限の量において使用しなければならないことが見い出された。

【００１７】少なくとも１ｎＭ、一般に１ｎＭ〜１００ｎＭのエストラジオールに相当する
エストロゲン活性を付与する限り、ヒヨコマメ抽出物または粉末が０．０００１
〜５０％の量において使用される。下記実施例１に記載のようなサイド−バイ−
サイド実験（ａｓｉｄｅｂｙｓｉｄｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ）において
ＺＲ−７５細胞を使用して、１ｎＭエストラジオールの活性と比較することによ
って、ヒヨコマメ抽出物のエストロゲン活性が測定される。少なくとも２ｎＭの
エストロジオールに相当するエストロゲン活性を付与する量において、ヒヨコマ
メ抽出物を使用するのが好ましい。

【００１８】化粧的に許容される賦形剤本発明の組成物は、ヒヨコマメ抽出物のための希釈剤、分散剤、または担体と
して機能する化粧的に許容される賦形剤も含んで成り、それによって、組成物が
皮膚に適用される際に、それの分配を促進する。

【００１９】水以外の、または水に付加される賦形剤は、液体または固体皮膚軟化剤、溶剤
、湿潤剤、増粘剤、および粉末を包含する。特に好ましい非水性担体は、ポリジ
メチルシロキサンおよび／またはポリジメチルフェニルシロキサンである。本発
明のシリコーンは、２５０℃において約１０〜１０，０００，０００ｍｍ^２／秒
（センチストークス）の範囲の粘度を有する。特に望ましいのは、低粘度および
高粘度シリコーンの混合物である。これらのシリコーンは、商標Ｖｉｃａｓｉｌ
，ＳＥおよびＳＦとしてＧｅｎｅｒａｌＥｌｅｃｔｒｉｃＣｏｍｐａｎｙか
ら入手可能であり、ならびに、２００および５００シリーズとしてＤｏｗＣｏ
ｒｎｉｎｇＣｏｍｐａｎｙから入手可能である。本発明の組成物に使用し得る
シリコーンの量は、組成物の重量の５％〜９５％、好ましくは２５％〜９０％で
ある。

【００２０】化粧的に許容される賦形剤は一般に、組成物の重量の５％〜９９．９％、好ま
しくは２５％〜８０％を占め、および、他の化粧添加剤の不存在においては、組
成物の残余部分を占める。好ましくは賦形剤が、賦形剤の重量の少なくとも８０
重量％の水である。好ましくは、水が、本発明組成物の少なくとも５０重量％、
最も好ましくは組成物の重量の６０〜８０重量％を占める。

【００２１】任意の皮膚有益物質および化粧添加剤油および油状物質が乳化剤と一緒に存在して、使用される乳化剤の平均親水性
−親油性バランス（ＨＬＢ）に主に依存して油中水エマルジョンまたは水中油エ
マルジョンを得ることができる。

【００２２】本発明組成物が日焼け止め剤を含有するのが好ましい。日焼け止め剤は、紫外
線をブロックするために一般に使用される物質を包含する。そのような化合物の
例は、ＰＡＢＡ、シンナメート、およびサリチレートの誘導体である。例えば、
オクチルメトキシシンナメートおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェ
ノン（オキシベンゾンとしても既知）を使用することができる。オクチルメトキ
シシンナメートおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、それぞ
れ、商標ＰａｒｓｏｌＭＣＸおよびＢｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３として商業
的に入手し得る。乳化剤中に使用される日焼け止め剤の正確な量は、日光の紫外
線からの所望される保護の程度に依存して、変化させることができる。

【００２３】皮膚軟化剤が、本発明の化粧組成物に組み込まれることが多い。そのような皮
膚軟化剤のレベルは、合計組成物重量の０．５％〜５０％、好ましくは５％〜３
０％である。皮膚軟化剤は、一般的化学種において、エステル、脂肪酸およびア
ルコール、ポリオールおよび炭化水素として分類することができる。

【００２４】エステルは、モノ−またはジ−エステルである。許容される脂肪酸ジエステル
の例は、ジブチルアジペート、ジエチルセバケート、ジイソプロピルジメレート
、およびジオクチルスクシネートを包含する。許容される分岐鎖脂肪酸エステル
は、２−エチル−ヘキシルミリステート、イソプロピルステアレート、およびイ
ソステアリルパルミテートを包含する。許容される三塩基性酸エステルは、トリ
イソプロピルトリリノレエートおよびトリラウリルシトレートを包含する。許容
される直鎖脂肪酸エステルは、ラウリルパルミテート、ミリスチルラクテート、
およびステアリルオレエートを包含する。好ましいエステルは、ココ−カプリレ
ート／カプレート（ココ−カプリレートおよびココ−カプレートのブレンド）、
プロピレングリコールミリスチルエーテルアセテート、ジイソプロピルアジペー
ト、およびセチルオクタノエートを包含する。

【００２５】好適な脂肪アルコールおよび酸は、１０個〜２０個の炭素原子を有する化合物
を包含する。セチル、ミリスチル、パルミチン、ステアリルアルコールおよび酸
のような化合物が特に好ましい。

【００２６】皮膚軟化剤として機能するポリオールは、線状および分岐鎖アルキルポリヒド
ロキシル化合物を包含する。例えば、プロピレングリコール、ソルビトール、お
よびグリセリンが好ましい。ポリ−プロピレングリコールおよびポリエチレング
リコールのようなポリマーポリオールも有用である。ブチレンおよびプロピレン
グリコールも、浸透促進剤として特に好ましい。

【００２７】皮膚軟化剤として機能する炭化水素の例は、１２個〜３０個の炭素原子を有す
る炭化水素鎖を有する炭化水素である。特定の例は、鉱油、石油ゼリー、スクア
レン、およびイソパラフィンを包含する。

【００２８】本発明の化粧組成物中の機能成分の他の種類は、増粘剤である。増粘剤は一般
に、組成物に対して０．１〜２０重量％、好ましくは約０．５〜１０重量％の量
で存在する。増粘剤の例は、商標ＣａｒｂｏｐｏｌとしてＢ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉ
ｃｈＣｏｍｐａｎｙから入手し得る架橋ポリアクリレート物質である。キサン
タン、カラゲーニン、ゼラチン、カライア、ペクチンおよびイナゴマメガムの
ようなガムを使用することもできる。ある場合においては、シリコーンまたは皮
膚軟化剤としても機能する物質によって、増粘機能が得られる場合がある。例え
ば、１０センチストークスを上回るシリコーンガム、およびグリセロールステア
レートのようなエステルが、２重の機能を有する。

【００２９】本発明の化粧組成物に粉末を組み込むことができる。これらの粉末は、白亜、
タルク、カオリン、スターチ、スメクタイトクレー、化学的修飾珪酸アルミニウ
ムマグネシウム、有機的修飾モントモリロナイトクレー、水和珪酸アルミニウム
、ヒュームドシリカ、アルミニウムスターチオクテニルスクシネート、およびそ
れらの混合物を包含する。

【００３０】他の補助少量成分も、化粧組成物に組み込むことができる。これらの成分は、
着色剤、不透明剤、および香料を包含する。これらの他の補助少量成分の量は、
組成物に対して０．００１〜２０重量％である。

【００３１】本発明組成物の使用法本発明の組成物は、ヒトの皮膚に局所適用される製品として、特に、皮膚を整
え、潤いを与え、滑らかにし、皮膚の厚み、柔軟性、および弾力性を増加させ、
および、シワのある、線のある、または老化した皮膚の外観を予防しまたは減少
させる薬剤として、使用することを主として意図している。

【００３２】使用に際して、少量の、例えば１〜１００ｍＬの組成物を、好適な容器または
アプリケーターから皮膚の露出面に適用し、および、必要であれば、手または指
または好適な器具を使用して、皮膚に拡げ、および／または擦り込む。

【００３３】製品形態および包装本発明の局所スキンケア組成物は、ローション、クリーム、またはゲルとして
製剤化することができる。組成物を、それの粘度および消費者の意図する使用に
適した容器に包装することができる。例えば、ローションまたはクリームは、ボ
トルまたはロール−ボールアプリケーター、または噴射剤駆動エアゾールデバイ
ス（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ−ｄｒｉｖｅｎａｅｒｏｓｏｌｄｅｖｉｃｅ）ま
たは指での操作に好適なポンプ付き容器に包装することができる。組成物がクリ
ームの場合は、非変形性ボトルまたはスクィーズ容器、例えば、チューブまたは
蓋付き広口瓶に入れるだけでよい。引用によりここに援用する米国特許第５０６
３５０７号に開示されるようなカプセルに、組成物を入れることもできる。従っ
て、本発明は、前記に規定される化粧的に許容される組成物を含有する密閉容器
も提供する。

【００３４】下記の特定の実施例は本発明をさらに説明するものであるが、本発明はそれら
に限定されるものではない。スチューデントｔ−試験を使用して、全てのｐ値を
算出した。

【００３５】（実施例）実施例１この実施例は、少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するフィトエスト
ロゲン活性を付与する濃度の有機ヒヨコマメ抽出物が、本発明に使用するのに適
していることを示すものである。

【００３６】ヒヨコマメ抽出物の製造乾燥ヒヨコマメをＡｒｒｏｗｈｅａｄＭｉｌｌｓ（Ｈａｒｅｆｏｒｄ，Ｔ
Ｘ）から入手し、乾燥粉砕器で粉末にした。このようにして得られるヒヨコマメ
粉末を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）またはメタノール（１：３ｗ／ｖ）を用い
て、乾燥粉末を室温で２０時間にわたって溶媒と混合することによって抽出した
。抽出物を、濾過および遠心分離によって清澄にした。次に、抽出物を真空下に
蒸発によって乾燥させて、乾燥抽出物を得た。乾燥物質１．４７ｇを溶解したＤ
ＣＭによるヒヨコマメ乾燥粉末６３ｇの抽出；乾燥物質２．４３４ｇを溶解した
メタノールによるヒヨコマメ粉末６０ｇの抽出。これは、ＤＣＭによる２．３１
％の抽出、およびメタノールによる４．０６％の抽出である。次に、この乾燥抽
出物を、細胞に投与するために、５０μｇ／μＬの濃度においてジメチルスルホ
キシドに再溶解した。

【００３７】細胞におけるＤＮＡ合成率を測定するために使用される方法培養細胞による^３Ｈ−チミジンの組み込みを、細胞増殖のアッセイとして使用
した（ＺＲ７５またはケラチノサイト）。チミジンは、ＤＮＡのモノマー単位で
ある４つのデオキシヌクレオシドの１つである。体細胞の細胞分裂の前に、細胞
分裂を受ける細胞の完全なゲノムを複製する。これは、細胞による大規模なＤＮ
Ａ合成を含み、および、両娘細胞が遺伝物質の同一の複製を受け取るのを可能に
する。細胞分裂に備えてＤＮＡを合成する細胞の培地に^３Ｈ−チミジンを含有さ
せ、標識チミジンを新たに合成されるＤＮＡに組み込ませる。細胞集団への^３Ｈ
−チミジンの組み込みの程度は、この細胞集団によるＤＮＡ合成率に比例し、従
って、それらの細胞増殖の指標である。

【００３８】有機ヒヨコマメ抽出物がフィトエストロゲン活性を有するかどうか、および、
その活性が少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するかどうかを判断する
ために、下記の試験を使用した。

【００３９】ＺＲ７５細胞系は、６３才の白色人種の女性の悪性乳房上皮から最初に単離さ
れた管乳癌細胞系（ｄｕｃｔａｌｂｒｅａｓｔｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌ
ｌｌｉｎｅ）である（Ｅｎｇｅｌら、Ｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｒｃｉ
ｎｏｍａｃｅｌｌｓｉｎｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｕｌｔｕｒｅ：Ａｒ
ｅｖｉｅｗ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，３８：４３２７−４３３９，１９７８
）。この細胞系は、エストロゲン、プロゲステロン、および他のステロイドホル
モンの受容体を有するが、増殖の増加の間にエストロゲンだけに反応する。この
細胞系は、高親和性エストロゲン特異的受容体を有する。従って、この細胞系が
、エストロゲン様活性の試験に使用される（Ｍａｒｋｉｅｗｉｃｚら、Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｂｉｏａｓｓａｙｓｏｆｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌｐｈｙｔ
ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ，Ｊ．ＳｔｅｒｏｉｄＢｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．
Ｂｉｏｌ．，４５：３９９−４０５，１９９３）。

【００４０】１．ＺＲ７５細胞（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭａｒｙｌａｎｄのＡｍｅｒｉｃ
ａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）を、１０％
ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００単位ペニシリン／ｍＬ、および１００単位スト
レプトマイシン／ｍＬを含有するＲＰＭＩ１６４０培地（ＧｉｂｃｏＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手）において増殖させた。該培地は、フェノ
ールレッドを含有しなかった（弱いエストロゲン擬似体）。７５ｃｍ^２フラスコ
当たり１００万の密度において細胞を接種した。実験のために、１００，０００
細胞／ｍＬ／穴において、２４穴皿に細胞を接種した。

【００４１】２．２４時間の増殖後、培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、血清を含有
しない（ストレプトマイシンおよびペニシリンは含有する）１ｍＬのＲＰＭＩ１
６４０を加えた。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中のヒヨコマメ抽出物、お
よび水中のエストラジオールの原液を製造した。次に、下記の表１に示される種
々の濃度の有機ヒヨコマメ抽出物およびエストラジオールを、各穴に直接に加え
た。２４時間後に、１μＣｉの［メチル−３Ｈ］チミジンを各穴に加えた。２４
時間後に培地を除去した。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ＰＢＳを完全に除去し、
細胞を氷の上に置き、１ｍＬ／穴の１０％ＴＣＡ（トリクロロ酢酸）で３０分間
培養した。その皿を５％ＴＣＡで３回洗浄して、細胞に組み込まれなかったチミ
ジンの全痕跡を除去した。５００μＬの０．１Ｍ水酸化ナトリウムを各穴に加え
、その皿を室温で少なくとも３０分間培養した。各サンプル２５０μＬをシンチ
レーションバイアルに移し、５ｍＬの計数液（ｃｏｕｎｔｉｎｇｆｌｕｉｄ）
を加えた後、バイアルをトリチウムのための各設定において５分間計数した。３
重穴からのデータを、ヒヨコマメ抽出物またはエストラジオールを加えなかった
対照穴に対しての、ＤＮＡへのチミジン組み込みの％として算出した。数値を、
３重穴の平均±標準偏差として表した。

【００４２】得られた結果を、表１に示す。

【００４３】

【表１】表１に示す結果から分かるように、１ｎＭ（０．２７４ｎｇ／ｍＬ）またはそ
れ以上の濃度のエストラジオールが、ＺＲ７５細胞のＤＮＡ合成を増加させた。
ヒヨコマメのこの特定の抽出物と同様の活性が、０．１μｇ／ｍＬまたはそれ以
上の濃度において得られた。

【００４４】有機ヒヨコマメ抽出物は、少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するエ
ストロゲン活性を付与する量において、本発明組成物に使用するのに適している
。この特定の抽出物に関して、０．１μｇヒヨコマメ／１ｍＬ培地の濃度で、そ
の必要な活性が付与された。

【００４５】実施例２表２に示す種々の濃度のヒヨコマメ抽出物を使用して、実施例１を２回行った
。

【００４６】得られた結果を表２にまとめる。

【００４７】

【表２】３つの異なる継代のＺＲ７５細胞を使用する３日の別々の日に行われた３つの
別々の実験において、有機ヒヨコマメ抽出物がＺＲ７５細胞の増殖を有意に刺激
したことが、表１（実験１を表す）および表２の結果から分かる。

【００４８】実施例３この実施例は、有機ヒヨコマメ抽出物で処理したケラチノサイトが、繊維芽細
胞の増殖を刺激する物質を排出したことを示すものである。

【００４９】ケラチノサイトの細胞培養分割ケラチノサイトコロニーを確立するために、トリプシン処置によって新生
児包皮から単離したヒトケラチノサイトを、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変イーグル培地
（ＤＭＥ）ＨａｍｓＦ１２（３：１）培地／５％子牛胎児血清中において、マ
イトマイシンＣ処置３Ｔ３マウス繊維芽細胞の存在下に増殖させた。細胞を、そ
れらの第二継代まで前記条件下に増殖させ、後の使用のために凍結して維持した
。凍結第二継代ケラチノサイトを解凍し、前記培地に蒔き、５日間増殖させた。
細胞が７０％〜８０％の集密であった５日めに、それらをトリプシン処理し、０
．１５ｍＭカルシウムを含有する無血清ケラチノサイト増殖培地（ＫＧＭ、Ｃｌ
ｏｎｅｔｉｃｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏＣＡから入手）において２０，０００
〜３０，０００細胞／穴において２４穴皿に蒔いた。実験前に、細胞を５日間に
わたって８０％集密に増殖させた。

【００５０】繊維芽細胞の細胞培養ＣｌｏｎｅｔｉｃｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ
）から入手された新生児ヒト包皮繊維芽細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有する
ＤＭＥＭ（両方ともＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＧｒａｎｄＩｓ
ｌａｎｄ，ＮＹから入手）において培養した。５〜１５継代の細胞において実
験を行った。細胞を、７，０００〜１０，０００細胞／穴において２４穴皿に蒔
き、実験前に５日間にわたって８０％集密に増殖させた。

【００５１】ケラチノサイトならし培地の製造ヒヨコマメ抽出物での処理に対する反応における、ケラチノサイトおよび繊維
芽細胞の相互作用を検査する実験のために、ケラチノサイトならし培地を下記の
ように製造した：前記のように製造される８０％集密ケラチノサイトを、種々の
濃度（表３に示される）のヒヨコマメ抽出物によって、血清およびフェノールレ
ッドを含有しないＲＰＭＩ培地において２４時間にわたって処理した。皿から採
集した培地を「ケラチノサイトならし培地」と称する。

【００５２】試験方法ケラチノサイトおよび繊維芽細胞に別々に、血清およびフェノールレッドを含
有しないＲＰＭＩ培地１ｍＬ中の種々の濃度のヒヨコマメ抽出物を投与した。繊
維芽細胞に、１ｍＬのケラチノサイトならし培地も投与した。２４時間後、^３Ｈ
チミジンを１μＣｉ／穴において加え、細胞を２４時間培養した。細胞ＤＮＡ
に関係する^３Ｈチミジンの量を、実施例１のステップ２に記載のように評価し
た。

【００５３】得られた結果を表３にまとめる。

【００５４】

【表３】表３の結果は、ヒヨコマメ抽出物が、ケラチノサイトおよび繊維芽細胞の増殖
のいずれにも直接的効果を有さなかったことを示している。しかし、ヒヨコマメ
抽出物に暴露されたケラチノサイトからのならし培地が繊維芽細胞の増殖を有意
に増加させたので、ヒヨコマメ抽出物が、繊維芽細胞のための増殖促進物質を分
泌するようにケラチノサイトを誘発したと考えられる。

【００５５】実施例４この実施例は、有機ヒヨコマメ抽出物が、子豚の皮膚の表皮部分の細胞の増殖
を増加させることを示すものである。この実施例においては、エストラジオール
、純粋フィトエストロゲン化合物及びヒヨコマメ抽出物を、表皮細胞増殖におけ
るそれらの効果に関して試験した。

【００５６】子豚の皮膚器官培養ブタの皮膚は形態学的および生化学的にヒトの皮膚に似ており、従って、ヒト
への局所使用のための物質の効果を試験するために一般に使用される。子豚から
新たに剃った皮膚を、地方の屠殺場から入手し、Ｄｏｖｅ（登録商標）Ｓｏａ
ｐで洗浄し、２００μの厚みにおいて皮膚採取して、上部表皮および真皮層を得
た。皮膚採取したブタ皮膚の均一パンチバイオプシーを、７ｍｍパンチを使用し
て採取した。バイオプシーを高抗生物質／抗真菌物質混合物（Ｇｉｂｃｏからの
カナマイシンおよびペニシリンおよびストレプトマイシン）を含有する培地で洗
浄し、トランスウェル皿（ｔｒａｎｓｗｅｌｌｐｌａｔｅｓ）中、３バイオプ
シー／穴において、血清の不存在において、ヒドロコルチゾン、Ｌ−グルタミン
、抗生物質、および抗真菌物質を含有する高グルコースＤＭＥＭ培地中で３日間
培養した。培地をトランスウェルの底部から供給し、それによって、バイオプシ
ーの表皮面を空気と接触させた。３日めに、培地を新しい培地に交換し、バイオ
プシーを、表４に示されるＤＭＳＯ１μＬ中の種々の濃度の種々の活性物質に暴
露した。３日後、培地を交換し、活性物質を再添加し、バイオプシーを^３Ｈチミ
ジン１０μＣｉ／穴によって標識した。バイオプシーをＰＢＳで洗浄した後、バ
イオプシーを２Ｍ臭化ナトリウム溶液中において攪拌しながら２４時間培養する
ことによって表皮を真皮から分離させた。ピンセットを用いて表皮を真皮から剥
がし、１ｍＬの０．５ＮＮａＯＨに溶解し、６０℃において一晩培養した。２
００μＬの溶解表皮をシンチレーション計数のために使用して、表皮への^３Ｈチ
ミジンの組み込み量を測定した。データを少なくとも４反復の平均ｃｐｍとして
算出し、活性物質を与えなかった対照バイオプシーに対する％としても算出した
。得られた結果を表４にまとめる。

【００５７】

【表４】２つの別の実験において、１０ｎＭのエストラジオールが子豚表皮細胞の増殖
を増加させたことが、表４に示す結果から分かる（実験２において、その増加が
統計的に有意であった）。ダイゼインもこの効果を示し、ダイゼインは天然ホル
モンエストラジオールより効果的であった。他のイソフラボン、ホルムオノネチ
ンは、ブタ表皮において有意な増殖刺激効果を有さなかった。ヒヨコマメのメタ
ノールおよびジクロロメタンの両抽出物も、増殖促進効果を有し、ジクロロメタ
ン抽出物がメタノール抽出物より効果的であった。ヒヨコマメのジクロロメタン
抽出物は、純粋イソフラボンまたはエストラジオールよりさらに効果的であった
。これらの結果は、ヒトの皮膚に非常に類似しているモデル系において、皮膚細
胞における有機ヒヨコマメ抽出物の有益な効果を示している。

【００５８】実施例５〜１０は、本発明のスキンケア組成物を例示するものである。該組成
物は、通常法によって製造することができる。それらは化粧用途に好適である。
特に、該組成物は、シワのある、線のある、粗い、乾燥した、薄片状の、老化し
た、および／または紫外線損傷した皮膚に適用して、その外観および触感を向上
させ、ならびに健康な皮膚に適用して、その低下を予防するかまたは遅らせるの
に好適である。

【００５９】実施例５この実施例は、本発明組成物を含有する高分散相油中水エマルジョンを例示す
るものである。

【００６０】

【表５】

【００６１】実施例６この実施例は、本発明組成物を含有する水中油クリームを例示するものである
。

【００６２】

【表６】

【００６３】実施例７この実施例は、本発明の組成物を含有するアルコールローションを例示するも
のである。

【００６４】

【表７】

【００６５】実施例８この実施例は、本発明組成物を含有する別のアルコールローションを例示する
ものである。

【００６６】

【表８】

【００６７】実施例９この実施例は、本発明の組成物を含有するサンケアクリームを例示するもので
ある。

【００６８】

【表９】

【００６９】実施例１０この実施例は、本発明組み合わせを含有する非水性スキンケア組成物を例示す
るものである。

【００７０】

【表１０】本明細書に例示し、説明した本発明の特定の形態は、代表的的なものにすぎな
いと理解すべきものとする。明確な開示の教示から逸脱することなく、本明細書
において提案した変更を含むがそれらに限定されない変更を、例示された実施態
様に加えることができる。従って、本発明の完全な範囲を決めるために、請求の
範囲を参照すべきものとする。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年１月２４日（２０００．１．２４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００８】一般的食用ヒラマメであるヒヨコマメまたはスパニッシュ・ピー（Ｃｉｃｅｒ
ａｒｉｅｔｉｎｕｍ）は、ダイゼイン、ホルムオノネチン、ビオカニンＡ、プ
ラテンセイン、ホモフェレイリン（ｈｏｍｏｆｅｒｒｅｉｒｉｎ）、メディカル
ピン、マッキアイン（ｍａａｃｋｉａｉｎ）、メチルクメストロール、メディカ
ゴール、ホルムオノネチングルコシド、およびビオカニンＡグルコシドを包含す
るフラボノイドを含有する（Ｉｎｇｈａｍら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＯｒｇａｎｉｃｎａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃ
ｔｓ，ｖｏｌ．４３：Ｗ．Ｈｅｒｚら編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
，Ｗｉｅｎ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８３）。ヒヨコマメからのフラボノ
イドは、ラットの血液および肝臓において脂質を減少させる効果を有することが
報告されている。いくつかの栄養学研究は、栄養サプリメントとしての使用のた
めのヒヨコマメからのタンパク質、およびヒヨコマメのタンパク質の質を向上さ
せる方法について報告している。Ｖａｓｉｌｉｏｕの米国特許第４７６１２８５
号は、食餌サプリメントとして、または痔の内部または局所治療のために、ヒヨ
コマメを使用することを開示している。インドにおいて、水と混合したヒヨコマ
メ粉末から作られる化粧用マスクまたはスキントリートメントは、一般的美容ト
リートメントである。ＷＯ９６／３８１６２は、シワのある皮膚の外観を修復することを包含する、
特にヒヨコマメに由来するレクチンの種々の用途を開示している。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００９

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１０】（発明の開示）本発明は、（ｉ）少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するエストロゲン活性で
あって、該エストロゲン活性が本明細書の実施例１に記載される試験によって測
定されるエストロゲン活性、を付与する量の、ヒヨコマメの有機抽出物；（ｉｉ）化粧的に許容される賦形剤；を含んで成るスキンケア組成物を包含する。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正内容】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者サンサナム，ウーマアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07020、エツジウオーター、リバー・ロード・45、ユニリーバー・リサーチ・ユー・エス・インコーポレイテツド気付 (72)発明者バラツト，マリーアンアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07020、エツジウオーター、リバー・ロード・45、ユニリーバー・リサーチ・ユー・エス・インコーポレイテツド気付 (72)発明者ボスコ，キヤロル・アネツトアメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07649、オラデル、セコンド・ストリート・428 Ｆターム(参考） 4C083 AA111 AA112 AA122 AB362 AB442 AC012 AC072 AC102 AC122 AC182 AC212 AC342 AC422 AC472 AC542 AC852 AD152 AD352 AD492 AD591 AD592 AD662 CC02 CC04 CC05 CC19 DD23 DD31 DD32 EE07 EE12 EE17

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ｉ）少なくとも１ｎＭのエストラジオールに相当するエス
トロゲン活性を付与する量の、ヒヨコマメの有機抽出物；（ｉｉ）化粧的に許容される賦形剤；を含んで成るスキンケア組成物。
【請求項２】請求項１に記載の組成物を皮膚に適用することを含んで成る
、フィトエストロゲンをヒトの皮膚に送達する化粧方法。
【請求項３】請求項１に記載の組成物を皮膚に適用することを含んで成る
、シワのある、線のある、乾燥した、薄片状の、老化した、または光損傷した皮
膚の外観を向上させ、ならびに、皮膚の厚み、弾力性、柔軟性、およびふくらみ
を向上させる化粧方法。
【請求項４】請求項１に記載の組成物を皮膚に適用することを含んで成る
、ヒトの皮膚における繊維芽細胞の増殖を高める化粧方法。
【請求項５】請求項１に記載の組成物を皮膚に適用することを含んで成る
、表皮皮膚細胞の増殖を高める化粧方法。