JP2001508061A - キトサン−ゼラチンａ微粒子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 粘膜面から治療物質をより良好に取り込むために使用される医薬組成物が提供される。本医薬組成物は、キトサンおよびタイプＡ陽イオン性ゼラチンの混合物を治療物質とともに含む。本組成物は、好ましくは微粒子（例えば微小球）の形態である。

Description

【発明の詳細な説明】 キトサン−ゼラチンＡ微粒子 本発明は、粘膜面からの治療物質の摂取を改善する新規な薬剤送達組成物に関 する。 極性薬剤（高分子ペプチド、蛋白および多糖類を含む）は、典型的には粘膜（ 例えば胃腸管、眼、膣、鼻腔または直腸）から効果的に吸収されない。したがっ て、そのような分子は通常は注射によってのみ投与されるが、このことは、潜在 的に有害な影響（例えば静脈炎および注射の痛み）の他に患者のコンプライアン スに付随する周知の問題、治療コストを必然的に生じる。 粘膜を通過する極性分子の吸収は、いわゆる“吸収促進剤”と併用して投与さ れる場合は極めて改善されるであろうということは文献でよく知られている。文 献に記載されている吸収促進剤の例には、非イオン性界面活性剤、シクロデキス トリン、リン脂質および朋汁塩が含まれる(Davisら編、“Delivery Systems for Peptide Drugs”,Plenum Press刊、ニューヨーク(1987);およびLee編、“Pepti de and Protein Delivery”,Marcel Dekker Inc.刊、ニューヨーク(1991)を参照 されたい)。 欧州特許出願公開第０２３，３５９号明細書および同第１２２，０２３号明細 書には、鼻粘膜に適用される粉末状医薬組成物の他にそのような組成物の投与方 法が記載されている。当該医薬組成物は、ポリペプチドおよびその誘導体を鼻粘 膜から効果的に吸収させる。同様に、米国特許第４，２２６，８４９号明細書は 鼻粘膜に粉末状医薬物を投与する方法を開示するが、この場合、好ましい組成物 は粘膜吸着性を有する。 粘膜への薬剤送達のための微小球による製剤はＷＯ８８／０９１６３号ＰＣＴ 公報に記載されている。当該製剤はある種の促進剤を含み、この薬剤によって粘 膜の効果的な浸透を促進する。ＷＯ８９／０３２０７号ＰＣＴ公報は促進剤を必 要としない微小球製剤を開示している。 キトサンはキチンまたはポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの誘導体で、 Ｎ−アセチル基の大部分が加水分解によって除去されている。これは、プロノバ (Pronova)、ドラメン(Drammen)、ノルウェー(Norway)を含む幾つかの販売業者か ら入手可能で、選択されるグレードにしたがって水および／または酸性水（ｐＨ ６．０から７．０）に溶解する。 キトサンは以前には蛋白性物質の沈澱および外科手術の縫合のために用いられ た。キトサンは、さらにまた難溶性薬剤を溶け易くするために(Sawayanagiら、C hem.Pharm.Bull.,31:2062-2068(1983))、または水和圧縮マトリックスから緩徐 な崩壊過程によって薬剤を持続的に遊離させるために(Nagaiら、Proc.Jt.US Jpn ．Semin．Adv.Chitin Chitosan Relat．Enzymes，21-39，J.P.Zikakis(編)、Aca demic Press刊、Orlando(1984))経口薬製剤に用いられてきた。 ＷＯ９０／０９７８０号ＰＣＴ公報は、薬剤および当該薬剤の粘膜浸透を促進 するポリカチオン性物質（例えばキトサン）を含む組成物を開示する。当該組成 物はまたポリカチオン性微小球を含むことができる。 ＷＯ９６／０５８１０号ＰＣＴ公報は、薬理学的に活性な化合物およびキトサ ンまたはキトサンの誘導体もしくは塩で構成された粒子（好ましくは粉末または 微小球）を含む組成物を記載している。この場合、当該粒子は＋０．５から＋５ ０ｍＶのゼータ電位をもつように凝固または部分的に架橋されている。凝固粒子 は、水溶性キトサン塩から製造された粒子を、酸を含まない水の中でアルカリ性 薬剤（例えば水酸化ナトリウム）で処理して不溶性にすることによって製造され る。 キトサン微小球はまた、強カクロマトグラフィーによる分離に使用するため(Q . Liら、Biomater.Artif．Cells Immobilization Biotechnology，21:391-398(199 3))、局所の薬剤送達のため(Y.Machida,Yakugaku Zasshi,113:356-368(1993))、 薬剤の注射後の標的誘導のため(Y.Ohyaら、Microencap.,10:1-9(1993))、遊離制 御薬剤送達系として(Jameela ＆ Jayakrishman,Biometerials,16:769-775(1995) )、および薬剤の遊離制御のために(R．Bodmeierら、Pharm．Res.，6:413-417(19 89);Chithambaraら、J.Pharm.Pharmacol.,44:283-286(1992))製造された。 欧州特許第４５４０４４号明細書および同４８６９５９号明細書は、薬剤の遊 離制御で使用する高分子電解質微小球または多糖類微小球（キトサン微小球を含 む）を記載している。グルタルアルデヒドで架橋したキトサン微小球はまた日本 国特許第５３−９１４９号公報で開示された。 ゼラチンは、動物のコラーゲンを部分的に酸加水分解するか(タイプＡ)、また は部分的にアルカリ加水分解（タイプＢ）することによって得られる精製蛋白質 である。タイプＡゼラチンは、等電点がｐＨ７から９の陽イオン性で、一方、タ イプＢゼラチンは等電点がｐＨ４．７から５の陰イオン性である。ゼラチンは冷 水に浸漬したとき膨潤し軟化して、最終的にはそれ自体の重量の５から１０倍の 水を吸収することが知られている。ゼラチンはまた熱湯に溶解し、冷却時にゲル を形成する。ゼラチンはまた吸収性フィルムまたはスポンジとして外科手術時に 止血剤として用いられるが、これらはそれ自体の重量の何倍もの血液を吸収する ことができる。ゼラチンはまた血漿代替物として用いられ、さらにペースト、香 剤、座薬、錠剤、並びに経口製剤用硬および軟カプセルの外殻の調製に用いるこ とができる。 ゼラチン微小球の製造は文献に広く記載されてきた。ゼラチン微小球は、グル タルアルデヒドの架橋を必要とする乳化法によって製造され、直径が２μｍ末満 の微小球が得られている(Tabata ＆ Ikada,Pharm.Res.,6:422-427(1989))。い くつかの文献(Cortesiら、Int．J．Pharm.，105:181-186(1994);NatruzziらJ．M icroencapsulation，11:294-260(1994);およびEspositoら、Int．J．Pharm.，11 7:151-158(1995))では、コアセルベーション乳化法を用いた平均直径が２２μｍ の微小球の製造が報告されている。後者の方法で製造される微小球は架橋されて いない。より小さなサイズの微小球が同じ方法でエスポシトら（Espositoら、Ph arm.Sci.Commun.,4:239-246(1994)）によって製造された。これらの実験で用い られたゼラチンのタイプ（ＡまたはＢ）は指定されなかった。 陰性荷電物質（例えばアルギン酸塩）と陽性荷電キトサンとの間で複合体を形 成することによる微小球製造は文献に報告された。例えば、ポルクら（Polkら、 J.Pharm.Sci.,83:178-185(1994)）は、アルギン酸塩溶液をキトサンおよびカル シウムイオン溶液に添加することによるキトサン−アルギン酸塩微小球の製造を 報告している。微小球製剤で用いられる最も高濃度のキトサンは５．２重量％で あった。同様に、反対に荷電した多価イオン（すなわち陽性荷電キトサンおよび 陰性荷電タイプＢゼラチン）間での複合コアセルベートの形成が文献に報告され た(Remunan-Lopez ＆ Bodmeier,Int.J.Pharm.，135:63-72(1996))。これらの研 究者は最適なキトサン：ゼラチン比が１：１０から１：２０の範囲であることを 見出した。このコアセルベートは、遠心後上澄をデカントし６０℃で乾燥させる ことによって乾燥形で得られた。 我々は、驚くべきことにキトサンと陽イオン性タイプＡゼラチンの組み合わせ で製造した微小球は特に有利な特性を有することを見出した。この特性は、極性 薬剤を含む治療薬の粘膜面（例えば鼻腔）の浸透を改善することができる。 したがって本発明の第一の特徴では、治療物質と一緒にキトサンおよびタイプ Ａ陽イオン性ゼラチンの混合物を含む組成物（以下“本発明の組成物”と称する ）が提供される。 “キトサンおよびタイプＡゼラチンの混合物”には、キトサン（以下で定義） およびタイプＡゼラチン（以下で定義）を含む一切の組成物が含まれ、これら２ つの成分間に物理的および／または化学的結合が存在するとしないにかかわらな い。 “キトサン”という用語は、全てのキチン誘導体またはポリ−Ｎ−アセチル− Ｄ−グルコサミン（一切のポリグルコサミンおよび異なる分子量のグルコサミン 物質のオリゴマーを含む）を含むことは当業者には理解されよう。ポリ−Ｎ−ア セチル−Ｄ−グルコサミンでは、Ｎ−アセチル基の大部分は加水分解によって除 去されている。キトサンは陽性荷電を有することが好ましい。 キトサン、キトサン誘導体またはキトサンの塩（例えば硝酸塩、リン酸塩、硫 酸塩、塩酸塩、グルタミン酸塩、乳酸塩または酢酸塩）を用いることができる。 我々はキトサン誘導体という用語を用いて、アシルおよび／またはアルキル基と キトサンのＯＨ基（ＮＨ₂基ではない）との結合によって形成されるエステル、 エーテルまたは他の誘導休を包含する。キトサンのＯ−アルキルエーテルおよび キトサンのＯ−アシルエステルが例である。修飾キトサン（特にポリエチレング リコールと共役させたもの）はこの定義に含まれる。低および中等度の粘度のキ トサン（例えばＣＬ１１３、Ｇ２１０およびＣＬ１１０）は以下を含む種々の供 給源から得ることができる：プロノバ・バイオポリマー社(Pronova Biopolymer ，Ltd.，イギリス)；セイガガク・アメリカ社(Seigagaku America Inc.，アメリ カ合衆国メリーランド州)；メロン（インド）プライベート社(Meron(India)Pvt ，Ltd.，インド)；バンソン社(Vanson Ltd.，アメリカ合衆国バージニア州)；お よびＡＭＳバイオテクノロジー社(AMS Biotechnology Ltd.，イギリス)。適切な 誘導体には成書（Roberts,“Chitin Chemistry”,MacMillan Press Ltd.,刊、ロ ンドン(1992)）に記載されたようなものが含まれる。 好ましく用いられるキトサンまたはキトサン誘導体もしくは塩は、分子量が４ ０００ダルトンまたはそれ以上、好ましくは２５，０００から２，０００，００ ０ダルトン、最も好ましくは約５０，０００から３００，０００ダルトンの範囲 である。キトサナーゼを用いるキトサンの酵素的分解または亜硝酸の添加によっ て、低分子量の種々のキトサンを調製することができる。これら両方法は当技術 分野で周知であり、最近の刊行物に記載されている(Liら、Plant Physiol．Bioc hem.，33:599-603(1995);Allan ＆ Peyron，Carbohydrate Research 277:257-27 2(1995);Damard ＆ Cartier，Int．J．Biol．Macromol.，11:297-302(1989))。 好ましくは当該キトサンは水溶性で、４０％以上、好ましくは５０％から９８ ％最も好ましくは７０％から９０％脱アセチル化することによってキチンから製 造することができる。特に脱アセチル化されたキトサンを挙げれば、ロタン・バ イオポリマー社（Protan Biopolymer A/S，Drammen，ノルウェー）から入手可能 なキトサングルタメートの“シー・キュア”（Sea Cure，登録商標）シリーズが 含まれる。 “タイプＡゼラチン”という用語は、動物性コラーゲンの部分的酸加水分解に よって得られる（または得ることもできる）全ての陽イオン性蛋白を含み、タイ プＢゼラチンは除外される。 本発明の組成物は、当業者に周知の技術を用いて多様な物理的形状で調製でき るが、微粒子形組成物が好ましい。“微粒子”という用語には微小球、マイクロ カプセルおよび粉末が含まれるが、微小球が好ましい。 驚くべきことに、本発明の組成物を微粒子形で提供した場合、そのような微粒 子は陽性荷電を保持し、極性薬剤の粘膜面（例えば鼻腔）の浸透の改善またはワ クチンの粘膜面（例えば鼻腔）への暴露の改善をもたらす。改善の程度は、その 効果がキトサン溶液またはキトサンもしくはタイプＡゼラチン単独で製造され微 小球（例えば可溶性（噴霧乾燥）キトサン微小球およびゼラチン微小球）につい て得られるものを越えるようなものである。当該効果はまた、部分的にアルデヒ ド架橋したキトサン微小球について得られるものと同じで、しかも本発明の組成 物は架橋を必要としないほど十分に硬質で堅固である。さらに、これらキトサン ／タイプＡゼラチン微小球の流動性は噴霧乾燥キトサン微小球および架橋キトサ ン微小球の流動性より優れていることが判明した。 本微小球は、噴霧乾燥、乳化、溶媒蒸発、沈澱または当業者にとって周知の他 の方法によって製造できる。治療物質は、微小球製造時に当該微小球に混合する か、または微小球製造後に当該微小球に吸着させてもよい。 本発明の組成物が微小球形のとき、当該組成物は、例えば乳化法または噴霧乾 燥法のいずれかを用いて製造できる。 微小球を噴霧乾燥によって製造するとき、キトサンおよびタイプＡゼラチンの 温混合物を噴霧乾燥し得られた微小球を即時冷却する。治療物質は、当該物質と ともに微小球懸濁液を凍結乾燥させるかもしくは噴霧乾燥させることにより、ま たは物理的もしくは機械的に当該乾燥微小球と治療物質を混合することにより微 小球表面に吸着させることによって混合することができる。 しかしながら、タイプＡゼラチン混合キトサン溶液を温め、これを続いて冷却 して乳化およびゲル化させることによって製造するのが便利であることが見出さ れた。特に、本技術にしたがって製造した微小球は前述した有利な特性を示すこ とが判明した。 乳化法では、キトサンを水に溶解し、４０℃に加熱しながらタイプＡゼラチン と混合してゼラチンを溶解させることができる。この混合物をゼラチンの融点よ り高い温度で有機溶媒（例えばヒマワリ油、ダイズ油、綿実油またはココナッツ 油のような植物油）中で、低い親水性親油性バランス（ＨＬＢ）値をもつ乳化剤 の存在下で乳化させることができる。油中水型乳濁液を安定化させるために有用 な前記乳化剤は当業者には周知である(例えばスパン８０)。続いて、攪拌しなが ら乳濁液の温度を１０℃以下に下げることによって微小球を凝固させることがで きる。さらに、通常の手段を用いて、例えば医薬的に許容できる有機溶媒（例え ば冷アセトンまたは石油エーテル）を乳濁液に添加して遠心し、洗浄して乾燥さ せることによって当該微小球を採集することができる。治療物質は、乳化前に当 該物質をキトサン／ゼラチン混合物に添加することによって微小球に混合するこ とができる。また別には、微小球懸濁液を当該治療物質とともに凍結乾燥もしく は噴霧乾燥するか、または乾燥微小球と治療物質とを物理的もしくは機械的に混 合することによって、当該治療物質を微小球表面に吸着させることができる。 したがって、本発明の別の特徴では粘膜投与に適した形態の薬剤送達用組成物 が提供される。本組成物は、治療物質並びにキトサンおよびタイプＡゼラチンの 混合物から製造された微粒子を含み、当該治療物質は製造時に当該粒子内に取り 込まれるか、または混合物として存在する。 マイクロカプセルおよび粉末は、当業者に周知の技術にしたがってその工程を 本明細書に規定したように改変することによって製造するか、または当業者に周 知の他の方法（二重乳化法を含む）にしたがって製造することができる。 本発明のさらに別の特徴では本発明の組成物の製造方法が提供される。本方法 は、噴霧乾燥法によるか、または乳化によるタイプＡゼラチン／キトサン微粒子 （すなわちタイプＡゼラチンおよびキトサンの混合物を含む微粒子）の調製を含 む。後者の乳化は、タイプＡゼラチン混合キトサン溶液の加温、乳化および冷却 によるゲル化を含むことができるであろう。 当該微粒子の流動性は当業者に周知の方法で測定することができる。可能な方 法の１つはハウスナー比(Hausner Ratio)の測定を含む。ハウスナー比の場合は 、既知の重さの物質を測定シリンダーに注入し、その容積を記録する。続いてシ リンダーを指定された回数だけ面に対して軽く打ちつけ、さらに再び容積を記録 する。注入時の密度および打ちつけ後の密度を続いて求め、ハウスナー比＝打ち つけ後密度／注入時密度を計算する。比が＜１．２５の場合は自由流動性物質で あ ることを示し、一方比が＞１．５の場合は低流動性（粘着性）物質であることを 示す。別の可能な方法は、固定された高さに保持された漏斗から方眼紙上に円錐 が形成されるまで物質を落として安息角を測定することを含む。高さ（Ｈ）およ び円錐の半径（Ｒ）を求め、角度を計算する(ｔａｎθ＝Ｈ／Ｒ)。安息角θが＜ ３００の場合は良好な流動性を示し、一方、安息角θが＞４００の場合は流動性 が極めて低いことを示す(James I．Wells，Pharmaceutical Preformulation，El lis Horwood Series in Pharmaceutical Technology，1988)。 微粒子（マイクロカプセル、特に微小球を含む）のサイズは、例えば光学顕微 鏡または篩分け分画によて測定したとき好ましくは１から２００μｍ、より好ま しくは１から１００μｍの範囲である。 微粒子は、最終組成物中のゼラチンおよびキトサンの総量（すなわち治療用薬 剤および他の含有される可能性がある他の成分を除く）に対して測定したとき、 好ましくは５０から９５％、より好ましくは７０から９０％、最も好ましくは７ ５から８５％のタイプＡゼラチン、およびそれに対応して５０から５％、好まし くは３０から１０％、最も好ましくは２５から１５％のキトサンからなるであろ う。 “治療用薬剤”という用語は、薬剤、遺伝子（ＤＮＡ）または遺伝子構築物、 ワクチンおよびおよびその成分（例えば単離された抗原またはその部分）、並び に単クローン性（モノクローナル）抗体を含む。遺伝子、遺伝子構築物、ワクチ ンおよびモノクローナル抗体のような物質を用いる場合には、治療効果の強化の ために当該治療物質の粘膜組織への送達（例えば下層の類リンパ組織への抗原の 暴露および／または粘膜内層の細胞へのトランスフェクション）を高めることを 目的として当該微粒子を用いることができる。 好ましくは当該治療物質は極性薬剤である。“極性薬剤”とは、分配係数（オ クタノール：水系）が５０未満の分子を意味する。 当該組成物は、以下の非限定的リストから選ばれる治療物質とともに用いるこ とができる：インスリン、ＰＴＨ(上皮小体ホルモン)、ＰＴＨ類似体、ＰＴＨｒ Ｐ(ヒト上皮小体ホルモンペプチド)、カルシトニン（例えばブタ、ヒト、サケ、 ニワトリまたはウナギ）およびそれらの合成改変物、エンケファリン、ＬＨＲＨ （黄体形成ホルモン遊離ホルモン）および類似体(ナファレリン、ブセレリン、 ロイプロライド、ゴゼレリン)、グルカゴン、ＴＲＨ(甲状腺刺激ホルモン遊離ホ ルモン)、バゾプレッシン、デスモプレッシン、成長ホルモン、ヘパリン、ＧＨ ＲＨ(成長ホルモン遊離ホルモン)、ＣＣＫ(コレシストキニン)、ＴＨＦ(胸腺液 性因子)、ＣＧＲＰ(カルシトニン遺伝子遊離ペプチド)、心房性ナトリウム排泄 増加ペプチド、ニフェジピン、メトクロピラミド、エルゴタミン、ピゾチジン、 ペンタミジン、およびワクチン(特にエイズワクチン、麻疹ワクチン、ライノウ イルス１３型および呼吸系合胞体形成ウイルスワクチン、インフルエンザワクチ ン、百日咳ワクチン、髄膜炎菌ワクチン、破傷風ワクチン、ジフテリアワクチン 、コレラワクチンおよびＤＮＡワクチン（例えば適切な抗原をコードするプラス ミドＤＮＡを含むワクチン）であるが、これらに限定されない)。 さらに別の治療物質には以下が含まれる(ただしこれらに限定されない)：抗生 物質および抗菌剤、例えばテトラサイクリン塩酸塩、ロイコマシン、ペニシリン 、ペニシリン誘導体、エリスロマイシン、サルファチアゾールおよびニトロフラ ゾン；抗片頭痛化合物、例えばナラトリプタン、スマトリプタン、アルニチダン または他の５−ＨＴ１作動薬；血管収縮薬、例えばフェニルエフェドリン塩酸塩 、テトラヒドロゾリン塩酸塩、ナファゾリン硝酸塩、オキシメタゾリン塩酸塩お よびトラマゾリン塩酸塩；強心剤、例えばジギタリスおよびジゴキシン；血管拡 張剤、例えばニトログリセリンおよびパパベリン塩酸塩；骨代謝制御剤、例えば ビタミンＤおよび活性ビタミンＤ３；性ホルモン；血圧降下剤；抗腫瘍剤；ステ ロイド性抗炎症剤、例えばヒドロコルチゾン、プレドニゾン、フルチカゾン、プ レ ドニゾロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン 、ベタメサゾン、ベクロメタゾンおよびベクロメタゾンジプロピオネート；非ス テロイド性抗炎症剤、例えばアセトアミノヘン、アスピリン、アミノピリン、フ ェニルブタゾン、メファン酸(mefanic acid)、イブプロフェン、ジクロフェナッ クナトリウム、インドメタシン、コルヒチンおよびプロベネシド；酵素性抗炎症 剤、例えばキモトリプシンおよびブロメラインセラチオペプチダーゼ；抗ヒスタ ミン剤、例えばデフェンヒドラミン塩酸塩、クロロフェニラミンマレイン酸塩お よびクレマスチン；鎮咳去痰剤、例えばコデインリン酸塩およびイソプロテレノ ール塩酸塩；鎮痛剤、例えばオピオイド（ジアモルフィン、モルヒネおよびその 極性代謝物(例えばモルフィン−６−グルクロナイドおよびモルフィン−３−ス ルフェート）のようなもの)；鎮吐薬、例えばメトクロプラミド、オンダンセト ロン、クロルプロマジン；癲癇治療薬、例えばクロナゼパム；睡眠障害治療薬、 例えばメラトニン；喘息治療薬、例えばサルブタモール。 上記に述べた治療物質を組み合わせて用いてもよい。 本発明の組成物は、医薬的に許容可能な当業者が周知の多様な投与形態で経口 的、経鼻的に、膣、口腔、直腸から、眼または肺臓経由で投与できる。例えば、 組成物は、鼻用粉末散布装置を用いて経鼻的に、粉末吸入器もしくは用量計測吸 入器を用いて肺臓経由で、粉末散布装置を用いて粉末としてまたは膣用座薬もし くはペッサリーもしくは膣用錠剤もしくは膣用ゲルに製剤化して膣経由で、座薬 に製剤化して直腸経由で、粉末もしくはドライ軟膏の形態で眼経由で、および錠 剤、カプセルもしくはペレットの形態（これらの組成物では胃、小腸または結腸 経由で薬剤は投与される）で経口ルートで投与できる。これら組成物は全て当業 者の周知の技術にしたがって製剤化できる。当該組成物は少なくともある程度ま で粘膜上でゲル化させ、これによって粘膜上での組成物の保持を助長することが できる。 好ましい投与ルートは経鼻投与である。本発明の組成物を経鼻的に体内供給す るために用いることができる装置には、ダイレクト・ハーラー(Direct Haler)( 登録商標)、ベスパック(Bespak)粉末装置(登録商標)、モノプーダ(Monopoudre) （登録商標）(Valois)、およびインサフレータ(Insufflator)（登録商標）(Teij in)が含まれる。 経口的に投与できる本発明の組成物は、胃腸管の小腸または結腸領域、特に近 位部結腸領域に治療薬を供給するために用いることができる。 好ましくは、製剤が小腸または結腸に到達する前に治療物質が遊離するのを防 止する手段が提供される。小腸に到達する前に遊離するのを防止するために用い ることができる手段は当業者には周知である。例えば、胃で認められる酸性条件 では溶解しないが哺乳類の小腸で認められるアルカリ性条件で溶解する、いわゆ る腸溶ポリマーで被覆された投薬形を参照されたい。適切な腸溶皮物質には、修 飾セルロースポリマーおよびアクリルポリマー、特に商標名Eudragitとして販売 されているものが含まれる。結腸に到達する前に遊離するのを防止するために用 いることができる手段は当業者には周知である。そのような物質には、セルロー スアセテートトリメリテート(ＣＡＴ)、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフ タレート(ＨＰＭＣＰ)、ポリビニルアセテートフタレート(ＰＶＡＰ)、セルロー スアセテートフタレート（ＣＡＰ）およびシェラック（ヒーリー(Healy)がその 論文、“Enteric Coatings and Delayed Release”(“Drug Dehvery to the Gas trointestinal Tract”、Hardyら編、第７章、Ellis Horwood刊、Chichester(19 89)より)で述べている)が含まれる。特に好ましい物質はメチルメタクリレート またはメタクリル酸とメチルメタクリレートのコポリマーである。そのような物 質はEudragit（登録商標）腸溶ポリマー（Rohm Pharma，Darmstadt，ドイツ）と して入手できる。そのような被覆はまたレドックス感受性である物質（例えばア ゾポリマー）を適切に含むことができる。アゾポリマー は、例えば、遊離ラジカル重合化によって合成されたジビニルアゾベンゼンで架 橋されたスチレンとヒドロキシエチルメタクリレートのランダムコポリマー、ま たはジスルフィドポリマーからなるであろう(ＰＣＴ／ＢＥ９１／００００６、 およびVan den Mooter,Int.J.Pharm.，87:37(1992)を参照)。さらに、ＷＯ９７ ／０５９０３号ＰＣＴ公報を参照されたい。 薬剤送達部位はまた、上記のポリマー被覆のいくつかの厚さを変えることによ って選択的に制御できることは当業者には理解されよう。 本発明の組成物を含む製剤中にさらに別の賦形剤を用いることができることは 当業者には理解されるところであろう。例えば、固形投薬形態の場合、利用でき るまた別の賦形剤には、希釈剤、例えば微晶質セルロース(例えばAvicel(登録商 標)、FMC)、乳糖、燐酸二石灰および澱粉；崩壊剤、例えば微晶質セルロース、 澱粉および架橋カルボキシメチルセルロース；潤滑剤、例えばステアリン酸マグ ネシウムおよびステアリン酸；顆粒化剤、例えばポビドン；および遊離調節剤、 例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシセルロースが含ま れる。そのような賦形剤の適量は、活性成分の本体および使用される具体的な投 薬形によって左右される。 所望の場合は、他の物質（例えば吸収促進剤）を当該組成物中に包含させるこ とができる。適切な吸収促進剤には、非イオン性界面活性剤、シクロデキストリ ン、胆汁塩、および好ましくはリン脂質（例えばリゾホスファチジルコリン、リ ゾホスファチジルグリセロールおよび一般的にＷＯ８８／０９１６３号ＰＣＴ公 報に記載されたもの）が含まれる。 本発明の別の特徴では、粘膜面への投与に適した形態の医薬製剤が提供される が、本医薬製剤は医薬的に許容される投薬形を有する本発明の組成物を含む。 本発明の組成物は、極性薬剤の粘膜面（例えば鼻腔）の浸透を改善し、改善さ れた流動性を有し、さらに化学架橋剤を使用する必要がないという利点を有する ことが判明した。 本発明のまた別の特徴にしたがえば、治療物質の哺乳類粘膜面の（または粘膜 面内への）浸透（これは粘膜面にワクチンを暴露することを含む）を改善する方 法、およびヒトまたは他の哺乳類を治療する方法が提供される。これらの方法は 、前述の組成物を好ましくは当該ヒトまたは他の哺乳類の粘膜面（例えば膣、口 腔、直腸、肺、眼、結腸、小腸、胃または鼻腔）に投与することを含む。 本発明の組成物中に用いることができる治療物質の量は使用される治療物質に よって左右される。しかしながら、治療物質の適切な用量は常套的に容易に決定 できる。適切な用量の範囲は、使用される治療物質および投与ルートにしたがっ て１μｇから１ｇである。 本発明は、下記の如き参考図面とともに以下の非限定的な実施例によって詳述 される。 図１は、ゼラチン微小球中、およびゼラチン／キトサン微小球（Ｇ２１０キト サングルタメートを９．６％または１９．２８％含む）中の２ＩＵ／ｋｇのイン スリンをヒツジに投与した後の平均血漿グルコース／時間曲線を示す。 図２は、ゼラチン微小球中、およびゼラチン／キトサン微小球（Ｇ２１０キト サングルタメートを９．６％または１９．２８％含む）中の２ＩＵ／ｋｇのイン スリンをヒツジに投与した後の平均血漿インスリン／時間曲線を示す。 図３は、ゼラチン微小球中、およびゼラチン／キトサン微小球(３９．９％の Ｇ１１０キトサングルタメートまたは１９．９％のＧ２１０キトサングルタメー トを含む）中の２０ＩＵ／ｋｇのサケカルシトニンをヒツジに投与した後の平均 血漿カルシウム／時間曲線を示す。 図４は、０．５％キトサン溶液（Ｇ２１０）中、およびゼラチン／キトサン微 小球（１９．２８％のＧ２１０キトサングルタメートを含む）中の２ＩＵ／ｋｇ のインスリンをヒツジに投与した後の平均血漿インスリン／時間曲線を示す。 図５は、キトサン粉末（Ｇ２１０）とともに２ＩＵ／ｋｇのインスリン、およ びゼラチン／キトサン微小球（１９．２８％のＧ２１０キトサングルタメートを 含む）中の２ＩＵ／ｋｇのインスリンをヒツジに投与した後の平均血漿インスリ ン／時間曲線を示す。 図６は、食塩水中にＰＴＨ（単独）を含む製剤(PTH Sol)およびキトサングル タメートとともにＰＴＨを含む製剤(PTH CHI Sol)と比較した、ＰＴＨ／ゼラチ ン／キトサン微小球製剤(PTH CHI/GER)についての血漿ＰＴＨ濃度における平均 変化を示す。 図７は、種々の量のインスリンを含むゼラチン／キトサン微小球の血漿グルコ ースレベルに対する影響を示す。 図８は、血漿インスリンレベルに対するゼラチン／キトサン微小球の反復投与 の影響を示す。 実施例１ ３．６％（ｗ／ｗ）のインスリン、８６．７％（ｗ／ｗ）のゼラチンＡおよび９ ．６％（ｗ／ｗ）のキトサングルタメート(Sea Cure G210)を含む微小球の調製 １９３ｍｇのキトサングルタメートを５０ｍｌのビーカーに量り入れ、１５ｍ ｌの水を加えて溶解するまで攪拌した。１７３５ｍｇのゼラチンＡ(Sigma)をこ のキトサン溶液に添加し、溶解するまで４０℃で攪拌した。適量の１ＭＨＣｌを 添加することによってこの溶液のｐＨを４に調節した。７２ｍｇのヒト亜鉛イン スリン（４０ｍｇ／ｍｌのインスリンストック溶液で１．８ｍｌ）をこのゼラチ ン／キトサン溶液に添加し、これを２０ｍｌのメスフラスコに移して水をその容 積まで加えた。 ２ｇのスパン８０を金属ビーカーに量り入れ、２００ｍｌのヒマワリ油を加え て混合物を４０℃に加温した。４０℃のインスリン／ゼラチン／キトサン溶液を 加え、４枚羽攪拌アームを取りつけたヘイドルフ(Heidolph)攪拌機を用い、温度 を４０℃に維持しながら１０００ｒｐｍで５分間乳化させた。ビーカーを氷浴に 移し、温度が１０℃以下に降下するまで１０００ｒｐｍで攪拌を継続した。攪拌 速度を５００ｒｐｍに低下させ、１５０ｍｌの冷アセトンを５ｍｌ／分でこの乳 濁液に加え、続いて混合物を遠心管中で２５００ｒｐｍで１０分遠心した。上清 を捨て、ペレットを５０ｍｌのアセトンに再懸濁させた。真空ろ過によって微小 球を回収し、さらに５０ｍｌの冷アセトンで洗浄した。フィルターケーキを乾燥 させ、磁石攪拌棒の入ったネジ蓋付き壜の中の５０ｍｌアセトンに微小球を入れ て一晩攪拌した。微小球を真空ろ過し、デシケーターで乾燥させた。 実施例２ ３．６％（ｗ／ｗ）のインスリン、７７．１２％（ｗ／ｗ）のゼラチンＡおよび １９．２８％（ｗ／ｗ）のキトサングルタメート(Sea Cure G210)を含む微小球 の調製 ３８６ｍｇのキトサングルタメートを５０ｍｌのビーカーに量り入れ、１５ｍ ｌの水を加え、得られたものを溶解するまで攪拌した。１５４２ｍｇのゼラチン Ａをこのキトサン溶液に添加し、続いてこれを溶解するまで４０℃で攪拌した。 適量の１ＭＨＣｌを添加することによってこの溶液のｐＨを４に調節した。７２ ｍｇのヒト亜鉛インスリン（４０ｍｇ／ｍｌのインスリンストック溶液で１．８ ｍｌ）をこのゼラチン／キトサン溶液に添加し、これを２０ｍｌのメスフラスコ に移して水をその容積まで加えた。 ２ｇのスパン８０を金属ビーカーに量り入れ、２００ｍｌのヒマワリ油を加え て混合物を４０℃に加温した。４０℃のインスリン／ゼラチン／キトサン溶液を 加え、４枚羽攪拌アームを取りつけたヘイドルフ攪拌機を用い、温度を４０℃に 維持しながら１０００ｒｐｍで５分間乳化させた。ビーカーを氷浴に移し、温度 が１０℃以下に降下するまで１０００ｒｐｍで攪拌を継続した。攪拌速度を５０ ０ｒｐｍに低下させ、１５０ｍｌの冷アセトンを５ｍｌ／分でこの乳濁液に加え 、続いてこれを遠心管中で２５００ｒｐｍで１０分遠心した。上清を捨て、ペレ ットを５０ｍｌのアセトンに再懸濁させた。真空ろ過によって微小球を回収し、 さらに５０ｍｌの冷アセトンで洗浄した。フィルターケーキを乾燥させ、磁石攪 拌棒の入ったネジ蓋付き壜の中の５０ｍｌアセトンに微小球を入れて一晩攪拌し た。微小球を真空ろ過し、デシケーターで乾燥させた。 実施例３ ０．２％（ｗ／ｗ）のサケカルシトニン(ＳＣＴ)、５９．９％（ｗ／ｗ）のゼラ チンＡおよび３９．９％（ｗ／ｗ）のキトサングルタメート（Sea Cure G110） を含む微小球の調製 ７９８ｍｇのキトサングルタメート（Ｇ１１０）を５０ｍｌのビーカーに量り 入れ、１５ｍｌの水を加え、得られたものを溶解するまで攪拌した。１１９８ｍ ｇのゼラチンＡをこのキトサン溶液に添加し、続いてこれを溶解するまで４０℃ で攪拌した。適量の１ＭＨＣｌを添加することによってこの溶液のｐＨを４に調 節した。２００００ＩＵのＳＣＴ（４ｍｇ／ｍｌのＳＣＴストック溶液で０．９ １ｍｌ）をこのゼラチン／キトサン溶液に添加し、これを２０ｍｌのメスフラス コに移して水をその容積まで加えた。 ２ｇのスパン８０を金属ビーカーに量り入れ、２００ｍｌのヒマワリ油を加え て混合物を４０℃に加温した。４０℃のＳＣＴ／ゼラチン／キトサン溶液を加え 、４枚羽攪拌アームを取りつけたヘイドルフ攪拌機を用い、温度を４０℃に維持 しながら１０００ｒｐｍで５分間乳化させた。ビーカーを氷浴に移し、温度が１ ０℃以下に降下するまで１０００ｒｐｍで攪拌を継続した。攪拌速度を５００ｒ ｐｍに低下させ、１５０ｍｌの冷アセトンを５ｍｌ／分でこの乳濁液に加え、続 いて これを遠心管中で２５００ｒｐｍで１０分遠心した。上清を捨て、ペレットを５ ０ｍｌのアセトンに再懸濁させた。真空ろ過によって微小球を回収し、さらに５ ０ｍｌの冷アセトンで洗浄した。フィルターケーキを乾燥させ、磁石攪拌棒の入 ったネジ蓋付き壜の中の５０ｍｌアセトンに微小球を入れて一晩攪拌した。微小 球を真空ろ過し、デシケーターで乾燥させた。 実施例４ ０．２％（ｗ／ｗ）のＳＣＴ、７９．９％（ｗ／ｗ）のゼラチンＡおよび１９． ９％（ｗ／ｗ）のキトサングルタメート(Sea Cure G210)を含む微小球の調製 ３９８ｍｇのキトサングルタメート（Ｇ２１０）を５０ｍｌのビーカーに量り 入れ、１５ｍｌの水を加え、得られたものを溶解するまで攪拌した。１５９８ｍ のゼラチンＡをこのキトサン溶液に添加し、続いてこれを溶解するまで４０℃で 攪拌した。適量の１ＭＨＣｌを添加することによってこの溶液のｐＨを４に調節 した。２００００ＩＵのＳＣＴ（４ｍｇ／ｍｌのＳＣＴストック溶液で０．９１ ｍｌ）をこのゼラチン／キトサン溶液に添加し、続いてこれを２０ｍｌのメスフ ラスコに移して水をその容積まで加えた。 ２ｇのスパン８０を金属ビーカーに量り入れ、２００ｍｌのヒマワリ油を加え て混合物を４０℃に加温した。４０℃のＳＣＴ／ゼラチン／キトサン溶液を加え 、４枚羽攪拌アームを取りつけたヘイドルフ攪拌機を用い、温度を４０℃に維持 しながら１０００ｒｐｍで５分間乳化させた。ビーカーを氷浴に移し、温度が１ ０℃以下に降下するまで１０００ｒｐｍで攪拌を継続した。攪拌速度を５００ｒ ｐｍに低下させ、１５０ｍｌの冷アセトンを５ｍｌ／分でこの乳濁液に加え、続 いてこれを遠心管中で２５００ｒｐｍで１０分遠心した。上清を捨て、ペレット を５０ｍｌのアセトンに再懸濁させた。真空ろ過によって微小球を回収し、さら に５０ｍｌの冷アセトンで洗浄した。フィルターケーキを乾燥させ、磁石攪拌棒 の入 ったネジ蓋付き壜の中の５０ｍｌアセトンに微小球を入れて一晩攪拌した。微小 球を真空ろ過し、デシケーターで乾燥させた。 実施例５ 実施例１および２のインスリン−キトサン／ゼラチン微小球をヒツジの鼻腔に 投与し、当該製剤の効果をゼラチンＡ微小球インスリンを投与した場合の効果と 比較した。 インスリン−ゼラチン微小球は以下のように調製した： １９２８ｍｇのゼラチンＡを５０ｍｌビーカー中の水１４ｍｌに添加し、ゼラチ ンが溶解するまで４０℃で攪拌しながら加熱した。１ＭのＨＣｌを用いて、この ゼラチン溶液のｐＨを４に調節し、７２ｍｇのヒト亜鉛インスリン同等物（４０ ｍｇ／ｍｌのインスリンストック溶液で１．８ｍｌ）をこの溶液に添加した。こ の溶液を２０ｍｌのメスフラスコに移してその容積にした。２ｇのスパン８０を 金属ビーカーに量り入れ、２００ｍｌのヒマワリ油を加えて混合物を４０℃に加 温した。４０℃のインスリン／ゼラチン溶液を加え、４枚羽攪拌アームを取りつ けたヘイドルフ攪拌機を用い、温度を４０℃に維持しながら１０００ｒｐｍで５ 分間乳化させた。ビーカーを氷浴に移し、温度が１０℃以下に降下するまで１０ ００ｒｐｍで攪拌を継続した。撹拌速度を５００ｒｐｍに低下させ、１５０ｍｌ の冷アセトンを５ｍｌ／分でこの乳濁液に加えた。この乳濁液を遠心管中で２５ ００ｒｐｍで１０分遠心した。上清を捨て、ペレットを５０ｍｌのアセトンに再 懸濁させた。真空ろ過によって微小球を回収し、さらに５０ｍｌの冷アセトンで 洗浄した。フィルターケーキを乾燥させ、磁石攪拌棒の入ったネジ蓋付き壜の中 の５０ｍｌアセトンに微小球を入れて一晩攪拌した。微小球を真空ろ過し、デシ ケーターで乾燥させた。 ブルーラインシリコン処理チユーブを用い、インスリン投与量２ＩＵ／ｋｇお よび微小球投与量２．０ｍｇ／ｋｇで各々の微小球製剤を各群５匹のヒツジの鼻 腔に投与した。特定した時点でカニューレ挿入外側頸静脈から血液サンプルを採 取し、血漿グルコースおよびインスリン濃度を測定した。３種の製剤についての 血漿グルコース濃度の時間による平均変化は図１に示す。ゼラチン微小球と組み 合わせて鼻腔に投与されたインスリンは血漿グルコースレベルの顕著な低下を全 く生じなかったが(Ｃ_min＝９５．９％)、一方、９．６％キトサンおよび１９． ２８％キトサン含有製剤はそれそれ基準レベルのＣ_min＝７４．６％およびＣ_min ＝５３．８％のグルコース減少効果をもたらしたことが分かる。これら３種の製 剤の対応する血漿インスリンレベルは図２に示す。両キトサン／ゼラチン微小球 製剤のＣ_max（９．６／８６．７％および１９．２８／７７．１２％キトサン／ ゼラチン微小球についてそれぞれ１３１．６ｍＵ／ｌおよび４３９．７ｍＵ／ｌ ）は、ゼラチン微小球で認められたＣ_max（５３．５ｍＵ／ｌ）より極めて高か った。 実施例６ 実施例３および４で述べたカルシトニン−キトサン／ゼラチン微小球をヒツジ の鼻腔に投与し、当該製剤の効果をゼラチンＡ微小球カルシトニンを投与した場 合の効果と比較した。 カルシトニン−ゼラチン微小球は以下のように調製した： １９９６ｍｇのゼラチンＡを５０ｍｌビーカー中の水１５ｍｌに添加し、ゼラチ ンが溶解するまで４０℃で攪拌しながら加熱した。１ＭのＨＣｌを用いて、この ゼラチン溶液のｐＨを４に調節し、２００００ＩＵのサケカルシトニン同等物( ４ｍｇ／ｍｌのＳＣＴストック溶液で０．９１ｍｌ)をこの溶液に添加した。こ の溶液を２０ｍｌのメスフラスコに移してその容積にした。２ｇのスパン８０を 金属ビーカーに量り入れ、２００ｍｌのヒマワリ油を加えて混合物を４０℃に加 温した。 ４０℃のインスリン／ゼラチン溶液を加え、４枚羽攪拌アームを取りつけたヘ イドルフ攪拌機を用い、温度を４０℃に維持しながら１０００ｒｐｍで５分間乳 化させた。ビーカーを氷浴に移し、温度が１０℃以下に降下するまで１０００ｒ ｐｍで攪拌を継続した。攪拌速度を５００ｒｐｍに低下させ、１５０ｍｌの冷ア セトンを５ｍｌ／分でこの乳濁液に加えた。乳濁液を遠心管で２５００ｒｐｍで １０分遠心した。上清を捨て、ペレットを５０ｍｌのアセトンに再懸濁させた。 真空ろ過によって微小球を回収し、さらに５０ｍｌの冷アセトンで洗浄した。フ ィルターケーキを乾燥させ、磁石攪拌棒の入ったネジ蓋付き壜の中の５０ｍｌア セトンに微小球を入れて一晩攪拌した。微小球を真空ろ過し、デシケーターで乾 燥させた。 ブルーラインシリコン処理チューブを用い、ＳＣＴ投与量２０ＩＵ／ｋｇおよ び微小球投与量２．００４ｍｇ／ｋｇで各々の微小球製剤を各群５匹のヒツジの 鼻腔に投与した。特定した時点でカニューレ挿入外側頚静脈から血液サンプルを 採取し、血漿カルシウム濃度を測定した。３種の製剤について血漿カルシウム濃 度の時間による平均変化を図３に示す。ゼラチン微小球と組み合わせて鼻腔に投 与されたＳＣＴは血漿カルシウムレベルのごくわずかな低下（Ｃ_min＝９１．１ ％）を生じただけであるが、一方、３９．９％Ｇ１１０キトサンおよび１９．９ ％Ｇ２１０キトサン含有製剤はそれそれ基準レベルのＣ_min＝７３．６％および Ｃ_min＝７４．７％のカルシウム減少効果をもたらしたことが分かる。ゼラチン 微小球の３９．９％Ｇ１１０と１９．９％Ｇ２１０キトサンレベルについて得ら れた効果間では顕著な違いは認められなかった。 実施例７ 実施例１および２で述べたインスリン−キトサン／ゼラチン微小球をヒツジの 鼻腔に投与し、当該製剤の効果を単純なキトサン溶液でインスリンを投与した場 合の効果と比較した。 ブルーラインシリコン処理チューブを用い、インスリン投与量２ＩＵ／ｋｇお よび微小球投与量２．０ｍｇ／ｋｇで当該微小球製剤を５匹のヒツジ群の鼻腔に 投与した。比較として、５ｍｇ／ｍｌのＧ２１０キトサングルタメート溶液中の ２００ＩＵ／ｍｌインスリン溶液を４匹のヒツジ群の鼻腔に２ＩＵ／ｋｇで投与 した。特定した時点でカニューレ挿入外側頸静脈から血液サンブルを採取し、血 漿インスリン濃度を測定した。２種の製剤についての血漿インスリン濃度の時間 による平均変化を図４に示す。キトサン溶液製剤（Ｃ_max＝１００ｍＵ／ｌ）と 比較したとき、ゼラチン／キトサン微小球製剤の場合の血漿インスリンレベルは 極めて高い（Ｃ_max＝４５０ｍＵ／ｌ）ことが分かる。 実施例８ 実施例２で述べたインスリン−キトサン／ゼラチン微小球をヒツジの鼻腔に投 与し、当該製剤の効果をキトサン粉末製剤とともにインスリンを投与した場合の 効果と比較した。 ブルーラインシリコン処理チューブを用い、インスリン投与量２ＩＵ／ｋｇお よび微小球投与量２．０ｍｇ／ｋｇでゼラチン／キトサン微小球製剤を５匹のヒ ツジ群の鼻腔に投与した。比較として、８００ｍｇのＧ２１０キトサングルタメ ートを含む６４０ＩＵのインスリン混合物を４匹のヒツジ群の鼻腔に２ＩＵ／ｋ ｇで投与した。特定した時点でカニューレ挿入外側頸静脈から血液サンプルを採 取し、血漿インスリン濃度を測定した。２種の製剤についての血漿インスリン濃 度の時間による平均変化を図５に示す。キトサン粉末製剤（Ｃ_max＝２５０ｍＵ ／ｌ）と比較したとき、ゼラチン／キトサン微小球製剤の場合の血漿インスリン レベルは極めて高い（Ｃ_max＝４５０ｍＵ／１）ことが分かる。この２種の製剤 で投与されたキトサンの量は、ゼラチン／キトサン微小球製剤の場合よりもキト サン粉末製剤ではるかに多いこともまた特記されるべきであろう。 実施例９ ０．４％（ｗ／ｗ）のＰＴＨ、１９．９２％（ｗ／ｗ）のキトサングルタメート (Sea Cure G210)および７９．６８％（ｗ／ｗ）のゼラチンＡを含む微小球の調 製 ４００ｍｇのキトサングルタメートおよび１．６ｇのゼラチンＡを含む溶液２ ０ｍｌに９．２８ｍｇのＰＴＨを添加し、５０−６０℃で維持した。２ｇのスパ ン８０をビーカーに量り入れ、２００ｍｌのダイズ油を加えた。得られたものを 混合し、４０℃に加温した。ＰＴＨ／キトサン／ゼラチン溶液を加え、４枚羽攪 拌アームを取りつけたヘイドルフ攪拌機を用い、温度を４０℃に維持しながら１ ０００ｒｐｍで１０分間乳化させた。ビーカーを氷浴に移し、温度が１０℃以下 に降下するまで１００ｒｐｍで攪拌を継続した。攪拌速度を５００ｒｐｍに低下 させ、１５０ｍｌの冷アセトンを５ｍｌ／分でこの乳濁液に加え、その後３００ ０ｒｐｍで１０分遠心した。上清を捨てペレットをアセトンに再懸濁させた。真 空ろ過によって微小球を回収し、さらに５０ｍｌの冷アセトンで洗浄した。フィ ルターケーキを乾燥させ、磁石攪拌棒の入ったネジ蓋付き壜の中の５０ｍｌアセ トンに微小球を入れて一晩攪拌した。微小球を真空ろ過し、デシケーターで乾燥 させた。ヒツジ試験 ブルーラインシリコン処理チューブを用い、ＰＴＨゼラチン／キトサン微小球 製剤をＰＴＨ投与量４μｇ／ｋｇで６匹のヒツジ群の鼻腔に投与した。比較とし て、食塩水中および０．５％キトサングルタメート含有食塩水中に同じ投与量の ＰＴＨを含むものをまた同じヒツジ群に投与した。特定した時点でカニューレ挿 入外側頸静脈から血液サンプルを採取し、血漿ＰＴＨ濃度を測定した。３種の製 剤についての血漿ＰＴＨ濃度の時間による平均変化は図６に示す。キトサン溶液 製剤（Ｃ_max＝０．２５ｎｇ／ｍｌ）およびコントロールＰＴＨ溶液（Ｃ_max＝０ ｎｇ／ｍｌ）と比較したとき、キトサン中ゼラチン微小球製剤の場合の血漿ＰＴ Ｈは極めて高い（Ｃ_max＝２．５ｎｇ／ｍｌ）ことが分かる。 実施例１０ キトサン／ゼラチンＡ微小球および噴霧乾燥 キトサン微小球(Sea Cure G210)のハウスナー比の決定 既知重量（下記参照）のキトサン／ゼラチン微小球（実施例２のように調製） を注意して１０ｍｌのメスシリンダーに注ぎ入れ、容積を記録する(注入時容積) 。このメスシリンダーを実験台に５０回軽く打ちつけて再度キトサン／ゼラチン 微小球の容積を記録した（打ちつけ後容積）この測定は３回実施した。 既知重量（下記参照）の噴霧乾燥キトサン微小球（Sea Cure G210;Pronova） を注意しながら１０ｍｌのメスシリンダーに注ぎ入れ、容積を記録する(注入時 容積)。このメスシリンダーを実験台に５０回軽く打ちつけて再度キトサン／ゼ ラチン微小球の容積を記録した（打ちつけ後容積）この測定は３回実施した。 実施例１１ キトサン／ゼラチンＡ微小球および噴霧乾燥 キトサン微小球(Sea Cure G210)の安息角の決定 約３ｇのキトサン／ゼラチン微小球（実施例２のように調製）を漏斗（高さを 固定）から円錐が形成されるまで方眼紙上に落とすことによって安息角（θ）を 求めた。円錐の高さ（Ｈ）および半径（Ｒ）を求め、角度を計算した(θ＝Ｈ／ Ｒ)。この測定は３回実施した。 平均の高さ＝１０ｍｍ、平均半径＝１８ｍｍ、 安息角（キトサン／ゼラチン微小球）＝２９°（良好な流動性） 約３ｇの噴霧乾燥キトサン微小球(Sea Cure G210;Pronova)を漏斗（高さを固 定）から円錐が形成されるまで方眼紙上に落とすことによって安息角（θ）を求 めた。円錐の高さ（Ｈ）および半径（Ｒ）を求め、角度を計算した(θ＝Ｈ／Ｒ) 。この測定は３回実施した。 平均の高さ＝２５ｍｍ、平均半径＝２４ｍｍ、 安息角（キトサン／ゼラチン微小球）＝４６°（極めて低い流動性） 実施例１２ インスリン吸収に対する微小球の投与量の影響決定 微小球中のインスリンの最終濃度（ｗ／ｗ）が２．０％、４．０％、５．３％ 、７．７％および１４．４％の微小球を実施例２のように調製した。 これらの微小球を固定投与量のインスリン(１ＩＵインスリン／ｋｇ)、並びに ２．０、１．０、０．７５、０．５および０．２５のゼラチン／キトサン微小球 として１群４匹のヒツジの鼻腔に実施例８で述べたように投与した。ＡＵＣとし て表される血漿グルコースレベルの平均変化を図７に示す。ＡＵＣに対するゼラ チン／キトサン微小球の効果は、一定投与量のインスリンとともに２．０ｍｇ／ ｋｇから０．２５ｍｇ／ｋｇの微小球が投与された場合は違いはないことが分か る。 実施例１３ 血漿インスリンレベルに対するゼラチン／キトサン微小球の反復投与の影響 ゼラチン／キトサン／インスリン微小球は実施例２のように調製した。この微 小球およびキトサン溶液製剤（実施例８のように調製）を１日１回５日間連続し て１群４匹のヒツジ群の鼻腔に投与した。インスリン溶液の皮下注射を第３群の ヒツジに５日間連続して与えた。ＡＵＣとして表した血漿インスリンレベルを図 ８に示す。毎日得られるＡＵＣは、キトサン溶液製剤と比較した場合ゼラチン／ キトサン微小球製剤で常に高いことが分かる。さらにまた、５日間連続して得ら れたＡＵＣは鼻腔製剤では同じで、したがって定常的で再現性のある効果を示し ていることが分かるが、一方ある種の蓄積効果が反復皮下注射について認められ る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 イルム、リズベス イギリス国 ノッティンガム、ザ パー ク、カベンディッシュ クレセント ノー ス、19

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 治療物質と一緒にキトサンおよびタイプＡ陽イオン性ゼラチンの混合 物を含む組成物。 ２． 前記組成物が微粒子形である請求項１に記載の組成物。 ３． 前記治療物質が製造時に粒子中に混合されるか、粒子の表面に吸着さ れるか、または混合物として存在する請求項１または２に記載の組成物。 ４． 前記微粒子が微小球である請求項２または３に記載の組成物。 ５． 前記組成物が治療物質を粘膜面から体循環中に送り込むために適して いる、請求項１から４のいずれか１項に記載の組成物。 ６． 前記キトサンが４０００ダルトンより大きい分子量を有する、請求項 １から５のいずれか１項に記載の組成物。 ７． 前記キトサンが２５，０００から２，０００，０００ダルトンの範囲 の分子量を有する請求項６に記載の組成物。 ８． 前記キトサンが５０，０００から３００，０００ダルトンの範囲の分 子量を有する請求項７に記載の組成物。 ９． 前記キトサンが誘導体であって、その誘導体がキトサンのヒドロキシ ル部分とのアシルまたはアルキル基の結合によって生成される、請求項１から８ のいずれか１項に記載の組成物。 １０． 前記キトサンが、硝酸塩、リン酸塩、硫酸塩、塩酸塩、グルタミン 酸塩、乳酸塩、または酢酸塩の群から選ばれる塩の形態である請求項１から８の いずれか１項に記載の組成物。 １１． 前記微粒子が噴霧乾燥、乳化、溶媒蒸発、または沈澱によって製造 される請求項２から１０のいずれか１項に記載の組成物。 １２． 前記キトサンが４０％より大きい脱アセチル化度を有する請求項１ から１１のいずれか１項に記載の組成物。 １３． 前記脱アセチル化度が５０から９８％である請求項１２に記載の組 成物。 １４． 前記脱アセチル化度が７０から９０％である請求項１３に記載の組 成物。 １５． 前記微粒子が１−２００μｍの直径を有する請求項２から１４のい ずれか１項に記載の組成物。 １６． 前記直径が１−１００μｍである請求項１５に記載の組成物。 １７． 前記組成物が５０から９５％のタイプＡゼラチンを含む、請求項１ から１６のいずれか１項に記載の組成物。 １８． 前記組成物が７５から８５％のタイプＡゼラチンを含む請求項１７ に記載の組成物。 １９． 前記治療物質が極性薬剤である、請求項１から１８のいずれか１項 に記載の組成物。 ２０． 前記治療物質がポリペプチドである、請求項１から１９のいずれか １項に記載の組成物。 ２１． 前記治療物質が、インスリン、カルシトニン、黄体形成ホルモン遊 離ホルモン、成長ホルモンまたは成長ホルモン遊離因子の群から選ばれる請求項 ２０に記載の組成物。 ２２． 前記治療物質が鎮痛剤または片頭痛治療薬である請求項１から１９ のいずれか１項に記載の組成物。 ２３． 前記治療物質が粘膜免疫を志向する抗原である請求項１から１９の いずれか１項に記載の組成物。 ２４． 前期治療物質が、粘膜表面の細胞のトランスフェクションを志向す る遺伝子または遺伝子構築物（ＤＮＡ）である請求項１から１９のいずれか１項 に記載の組成物。 ２５． さらに吸収促進剤を含む、請求項１から２４のいずれか１項に記載 の組成物。 ２６． 前記吸収促進剤がリン脂質である請求項２５の組成物。 ２７． 請求項１から２６のいずれか１項に規定された組成物を含む粘膜面 ヘの投与に適した形態の医薬製剤であって、医薬的に許容できる投薬形状の前記 医薬製剤。 ２８． 前記粘膜面が鼻の中にある請求項２７に記載の製剤。 ２９． 前記粘膜面が口腔内にある請求項２７に記載の製剤。 ３０． 前記粘膜面が膣内にある請求項２７に記載の製剤。 ３１． 前記粘膜面が胃腸管内にあり、前記製剤が口から投与される請求項 ２７に記載の製剤。 ３２． 前記粘膜面が直腸内にある請求項２７に記載の製剤。 ３３． 前記粘膜面が眼の中にある請求項２７に記載の製剤。 ３４． 前記粘膜面が肺臓内にある請求項２７に記載の製剤。 ３５． 哺乳類の粘膜面から治療物質を輸送するための改良された方法であ って、本方法が請求項１から２６のいずれか１項で規定した組成物、または請求 項２７から３４のいずれか１項に規定した製剤を当該哺乳類の粘膜面に投与する ことを含む前記治療物質の輸送改良方法。 ３６． 請求項１から２６のいずれか１項で規定した組成物、または請求項 ２７から３４のいずれか１項で規定した製剤を投与することを含む哺乳類の患者 または患畜を治療する方法。 ３７． 前記組成物または製剤が粘膜面に送達される請求項３６に記載の方 法。 ３８． 前記組成物または製剤が、治療物質を粘膜面から体循環に送り込む ために用いられる請求項３５から３７のいずれかに記載の方法。 ３９． 噴霧乾燥工程によるタイプＡゼラチン／キトサン微粒子の製造。 ４０． キトサンおよびゼラチンの温混合物を噴霧乾燥し、得られた微粒子 を即時冷却することによって前記微粒子を製造することを特徴とする請求項３９ に記載の製造。 ４１． 乳化よるタイプＡゼラチン／キトサン微粒子の製造。 ４２． タイプＡゼラチンと混合したキトサン溶液の加温、乳化および冷却 によるゲル化によって前記微粒子を製造することを特徴とする請求項４１に記載 の製造。 ４３． キトサンを水に溶解し、４０℃で加熱しながら混合することを特徴 とする請求項４２に記載の製造。 ４４． 前記混合物をゼラチンの融点より高い温度で乳化剤の存在下で有機 媒体中で乳化させることを特徴とする請求項４２または４３に記載の製造。 ４５． 前記乳化物の温度を１０℃より低下させることによって前記微粒子 を凝固させることを特徴とする請求項４２から４４のいずれか１項に記載の製造 。 ４６． 冷アセトンを前記乳化物に添加し遠心し洗浄しさらに乾燥させるこ とによって前記微粒子を採集することを特徴とする請求項４２から４５のいずれ か１項に記載の製造。 ４７． 前記微粒子がさらに治療物質を含み、本治療物質を乳化前に混合物 に添加することによって本治療物質が前記微粒子に混合されることを特徴とする 請求項４１から４６のいずれか１項に記載の製造。 ４８． 前記微粒子がさらに治療物質を含み、本治療物質とともに微粒子懸 濁物を凍結乾燥または噴霧乾燥することによって本治療物質が前記微粒子の表面 に吸着されることを特徴とする請求項３９から４６のいずれか１項に記載の製造 。 ４９． 前記微粒子がさらに治療物質を含み、本治療物質とともに前記乾燥 微粒子を物理的または機械的に混合することによって本治療物質が前記微粒子の 表面に吸着されることを特徴とする請求項３９から４６のいずれか１項に記載の 製造。 ５０． 哺乳類粘膜面からの治療物質の改善輸送で使用される医薬の製造に おける、請求項１から２６のいずれかで規定した組成物または請求項２７から３ ４のいずれか１項に規定した製剤の使用。