JP2001318100A - クロマトグラフィー測定方法 - Google Patents
クロマトグラフィー測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 外的環境要因、被検査溶液の性質における要
因、測定操作における誤操作等、の影響を排除し、より
高精度、高信頼性を有する，バイオセンサを用いたクロ
マトグラフィー測定方法を提供する。 【解決手段】 標識試薬測定領域６において、測定に関
与する実質の標識試薬量を測定し、被検査溶液中の測定
対象物との反応を測定する反応結果測定領域７で得られ
た結果に対して、前記実質の標識試薬量を反映させるこ
とにより、測定操作の正確性を向上させることを目的と
する。さらに、測定対象物との反応による測定結果に対
して、実質反応に関与した標識試薬量による補正を行う
ことで、より高精度な測定結果が得られる。
因、測定操作における誤操作等、の影響を排除し、より
高精度、高信頼性を有する，バイオセンサを用いたクロ
マトグラフィー測定方法を提供する。 【解決手段】 標識試薬測定領域６において、測定に関
与する実質の標識試薬量を測定し、被検査溶液中の測定
対象物との反応を測定する反応結果測定領域７で得られ
た結果に対して、前記実質の標識試薬量を反映させるこ
とにより、測定操作の正確性を向上させることを目的と
する。さらに、測定対象物との反応による測定結果に対
して、実質反応に関与した標識試薬量による補正を行う
ことで、より高精度な測定結果が得られる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、クロマトグラフィ
ー測定方法に関するものであり、特に、クロマトグラフ
ィー（以下、クロマトと略す）を利用したバイオセンサ
により、被検査溶液の測定を行う方法の改良を図ったも
のに関する。
ー測定方法に関するものであり、特に、クロマトグラフ
ィー（以下、クロマトと略す）を利用したバイオセンサ
により、被検査溶液の測定を行う方法の改良を図ったも
のに関する。
【０００２】
【従来の技術】バイオセンサは、酵素の有する特異的触
媒作用を利用したもので、体液等の被検査溶液中の測定
成分を検出することにより、臨床分野等に向けての応用
が可能となるものである。従来、クロマトグラフィーを
利用して、被検査溶液（試料）中の測定成分を定性もし
くは定量的に測定できるバイオセンサの代表例として、
イムノ（免疫）クロマトセンサがある。このイムノクロ
マトセンサは、被検査溶液を展開する展開層を備え、前
記展開層はその一部に試薬が固定化された試薬部分と、
他の一部に被検査溶液展開により溶出可能な標識試薬が
乾燥状態で保持された標識試薬部分とを含み、被検査溶
液を展開した時に前記試薬固定化部分において結合が生
じ、その結合量を測定することにより、被検査溶液中の
測定成分を測定できるものである。
媒作用を利用したもので、体液等の被検査溶液中の測定
成分を検出することにより、臨床分野等に向けての応用
が可能となるものである。従来、クロマトグラフィーを
利用して、被検査溶液（試料）中の測定成分を定性もし
くは定量的に測定できるバイオセンサの代表例として、
イムノ（免疫）クロマトセンサがある。このイムノクロ
マトセンサは、被検査溶液を展開する展開層を備え、前
記展開層はその一部に試薬が固定化された試薬部分と、
他の一部に被検査溶液展開により溶出可能な標識試薬が
乾燥状態で保持された標識試薬部分とを含み、被検査溶
液を展開した時に前記試薬固定化部分において結合が生
じ、その結合量を測定することにより、被検査溶液中の
測定成分を測定できるものである。
【０００３】イムノクロマトセンサの一般例としては、
被検査溶液を添加する被検査溶液添加部分を備え、複数
の展開層で構成され、前記展開層の一部である試薬固定
化部分には抗体が固定化されている。さらに、抗体が固
定化されている部分よりも上流側に、標識された抗体が
被検査溶液により溶出可能な乾燥状態で保持されてい
る。
被検査溶液を添加する被検査溶液添加部分を備え、複数
の展開層で構成され、前記展開層の一部である試薬固定
化部分には抗体が固定化されている。さらに、抗体が固
定化されている部分よりも上流側に、標識された抗体が
被検査溶液により溶出可能な乾燥状態で保持されてい
る。
【０００４】このようなセンサに被検査溶液を必要量添
加すると、被検査溶液が多孔質材料中を浸透し測定が開
始される。測定結果は前記抗体固定化部において結合し
た標識抗体により検出される。標識物の一般例として金
コロイド粒子があり、前記抗体固定化部分で生じた結合
が金コロイド粒子により目視可能となり、目視により測
定結果が得られる。即ち、被検査溶液に含まれる抗原
（測定成分）の濃度に応じて抗体固定化部分の呈色度
（色の濃さ）が変化するので、検査者がこれを目視する
ことで、測定が可能となる。
加すると、被検査溶液が多孔質材料中を浸透し測定が開
始される。測定結果は前記抗体固定化部において結合し
た標識抗体により検出される。標識物の一般例として金
コロイド粒子があり、前記抗体固定化部分で生じた結合
が金コロイド粒子により目視可能となり、目視により測
定結果が得られる。即ち、被検査溶液に含まれる抗原
（測定成分）の濃度に応じて抗体固定化部分の呈色度
（色の濃さ）が変化するので、検査者がこれを目視する
ことで、測定が可能となる。
【０００５】なお、ここでは、抗原抗体反応のサンドイ
ッチ反応を測定原理とした場合を述べたが、その他競合
反応を測定原理としても同様に、抗体固定化部における
標識試薬の結合状態で測定結果が得られる。
ッチ反応を測定原理とした場合を述べたが、その他競合
反応を測定原理としても同様に、抗体固定化部における
標識試薬の結合状態で測定結果が得られる。
【０００６】また、前記の例は目視による定性判定を必
要とする場合を述べたが、判定の再現性の低さや個人差
を改善したり、自動判定が必要とされる場合には、特開
平８−３３４５１１号公報に示される、ＣＣＤを用いて
呈色した試験片を撮像する方法がある。また、必要とさ
れる測定結果が半定量もしくはそれよりも精度の高い判
定が必要とされる場合には、特開平１０−２７４６２４
号公報に示される、光学的な読みとり装置を用いて透過
方式により読みとる方法や、特開平１０−２７４６５３
号公報に示される、カメラ等で画像として取り込み、演
算処理する方法がある。
要とする場合を述べたが、判定の再現性の低さや個人差
を改善したり、自動判定が必要とされる場合には、特開
平８−３３４５１１号公報に示される、ＣＣＤを用いて
呈色した試験片を撮像する方法がある。また、必要とさ
れる測定結果が半定量もしくはそれよりも精度の高い判
定が必要とされる場合には、特開平１０−２７４６２４
号公報に示される、光学的な読みとり装置を用いて透過
方式により読みとる方法や、特開平１０−２７４６５３
号公報に示される、カメラ等で画像として取り込み、演
算処理する方法がある。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述し
た，センサ部の抗体固定化部における標識試薬結合量を
検出することにより、被検査溶液内の目的とする測定対
象物の測定がなされる方法では、前記標識試薬の溶出量
が、前記センサの乾燥状態、センサ中の試薬の保存状
況、センサ作製時の温度、湿度、作製時間、作製時から
の経時変化等によるセンサ部における要因、または被検
査溶液の性質における要因、または測定操作における誤
操作、測定操作時の環境等測定操作における要因等によ
り、変化する。
た，センサ部の抗体固定化部における標識試薬結合量を
検出することにより、被検査溶液内の目的とする測定対
象物の測定がなされる方法では、前記標識試薬の溶出量
が、前記センサの乾燥状態、センサ中の試薬の保存状
況、センサ作製時の温度、湿度、作製時間、作製時から
の経時変化等によるセンサ部における要因、または被検
査溶液の性質における要因、または測定操作における誤
操作、測定操作時の環境等測定操作における要因等によ
り、変化する。
【０００８】抗体固定化部分における標識試薬結合量
は、前記標識試薬の溶出量が一定であればより正確、か
つ均一な測定結果が得られるが、前記要因により溶出量
が変化すると、目的とする測定対象物濃度が一定であっ
たとしても、測定毎に抗体固定化部に結合する標識試薬
量は変化する。
は、前記標識試薬の溶出量が一定であればより正確、か
つ均一な測定結果が得られるが、前記要因により溶出量
が変化すると、目的とする測定対象物濃度が一定であっ
たとしても、測定毎に抗体固定化部に結合する標識試薬
量は変化する。
【０００９】従って、例えば、定性の測定結果を求める
測定を実施するとき、前記要因により標識試薬の溶出量
に変化が生じた場合、特に測定限界高感度付近におい
て、誤った結果を与えたり、極端に前記標識試薬溶出量
が少ない場合には、誤った結果を与えることがある。
測定を実施するとき、前記要因により標識試薬の溶出量
に変化が生じた場合、特に測定限界高感度付近におい
て、誤った結果を与えたり、極端に前記標識試薬溶出量
が少ない場合には、誤った結果を与えることがある。
【００１０】さらに、半定量性や定量性の測定が必要と
される測定を実施する場合、前記要因による標識試薬溶
出量の変化によって、抗体固定化部の標識試薬結合量に
変化が生じ、精度が低い測定結果しか得られない、とい
う問題がある。このため、上述の方法では、定性または
半定量測定を実施するのが限界であり、定量測定を実現
できるものではなかった。
される測定を実施する場合、前記要因による標識試薬溶
出量の変化によって、抗体固定化部の標識試薬結合量に
変化が生じ、精度が低い測定結果しか得られない、とい
う問題がある。このため、上述の方法では、定性または
半定量測定を実施するのが限界であり、定量測定を実現
できるものではなかった。
【００１１】本発明は、このような状況に鑑みてなされ
たものであり、より高精度な測定結果が得られ、定量測
定においてもその精度を向上できるクロマトグラフィー
測定方法を提供することを目的とする。
たものであり、より高精度な測定結果が得られ、定量測
定においてもその精度を向上できるクロマトグラフィー
測定方法を提供することを目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するた
め、本発明の請求項１記載のクロマトグラフィー測定方
法は、被検査溶液を展開するための展開層と、前記展開
層の一部に、試薬を固定化することにより形成された試
薬固定化部と、前記展開層の他の一部に、被検査溶液展
開により溶出可能な標識試薬を保持することにより形成
された標識試薬保持部とを備え、クロマトグラフィーを
利用して被検査溶液を測定するバイオセンサ、を用いた
測定方法において、前記試薬固定化部における前記標識
試薬の結合量を測定することにより、被検査溶液中の測
定成分を定性もしくは定量するとともに、前記標識試薬
成分の溶出量もしくは溶出されなかった残量を測定す
る、ことを特徴とするものである。
め、本発明の請求項１記載のクロマトグラフィー測定方
法は、被検査溶液を展開するための展開層と、前記展開
層の一部に、試薬を固定化することにより形成された試
薬固定化部と、前記展開層の他の一部に、被検査溶液展
開により溶出可能な標識試薬を保持することにより形成
された標識試薬保持部とを備え、クロマトグラフィーを
利用して被検査溶液を測定するバイオセンサ、を用いた
測定方法において、前記試薬固定化部における前記標識
試薬の結合量を測定することにより、被検査溶液中の測
定成分を定性もしくは定量するとともに、前記標識試薬
成分の溶出量もしくは溶出されなかった残量を測定す
る、ことを特徴とするものである。
【００１３】本願の請求項１記載の発明は、上述のよう
に、前記試薬固定化部における前記標識試薬結合量によ
り測定対象物の検出をする場合において、その結合量に
影響を及ぼす前記標識試薬成分の実質的な溶出量もしく
は残量を測定することにより、測定操作における前記試
薬固定化部への前記標識試薬成分結合量の妥当性（結合
量データの信頼性）を知ることを可能とするものであ
る。
に、前記試薬固定化部における前記標識試薬結合量によ
り測定対象物の検出をする場合において、その結合量に
影響を及ぼす前記標識試薬成分の実質的な溶出量もしく
は残量を測定することにより、測定操作における前記試
薬固定化部への前記標識試薬成分結合量の妥当性（結合
量データの信頼性）を知ることを可能とするものであ
る。
【００１４】また、本発明の請求項２記載のクロマトグ
ラフィー測定方法は、請求項１記載のクロマトグラフィ
ー測定方法において、前記試薬固定化部における前記標
識試薬の結合量に対し、前記標識試薬成分の溶出量もし
くは溶出されなかった残量に基づき補正を行う、ことを
特徴とするものである。
ラフィー測定方法は、請求項１記載のクロマトグラフィ
ー測定方法において、前記試薬固定化部における前記標
識試薬の結合量に対し、前記標識試薬成分の溶出量もし
くは溶出されなかった残量に基づき補正を行う、ことを
特徴とするものである。
【００１５】本願の請求項２記載の発明は、前記試薬固
定化部における前記標識試薬の結合量が測定時において
実質的に溶出した標識試薬の成分量により変化するた
め、上述のように、実質的な溶出量を測定し、その測定
された溶出量により前記試薬固定化部における前記標識
試薬の結合量に補正を行うことで、より高精度な測定を
可能とするものである。
定化部における前記標識試薬の結合量が測定時において
実質的に溶出した標識試薬の成分量により変化するた
め、上述のように、実質的な溶出量を測定し、その測定
された溶出量により前記試薬固定化部における前記標識
試薬の結合量に補正を行うことで、より高精度な測定を
可能とするものである。
【００１６】また、本発明の請求項３記載のクロマトグ
ラフィー測定方法は、請求項１または請求項２記載のク
ロマトグラフィー測定方法において、前記標識試薬成分
の溶出量もしくは溶出されない残量の測定は、光学的な
検出器を用いる、ものとしたものである。
ラフィー測定方法は、請求項１または請求項２記載のク
ロマトグラフィー測定方法において、前記標識試薬成分
の溶出量もしくは溶出されない残量の測定は、光学的な
検出器を用いる、ものとしたものである。
【００１７】本願の請求項３記載の発明は、上述のよう
に、光学的な検出器を用いることで、前記標識試薬成分
の溶出量もしくは溶出されない残量を、より正確に数値
化することを可能とするものである。
に、光学的な検出器を用いることで、前記標識試薬成分
の溶出量もしくは溶出されない残量を、より正確に数値
化することを可能とするものである。
【００１８】また、本発明の請求項４記載のクロマトグ
ラフィー測定方法は、請求項１ないし請求項３のいずれ
かに記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記
標識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部以外
の部分において行う、ことを特徴とするものである。
ラフィー測定方法は、請求項１ないし請求項３のいずれ
かに記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記
標識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部以外
の部分において行う、ことを特徴とするものである。
【００１９】本願の請求項４記載の発明は、上述のよう
に、前記測定対象物量に影響を受けない試薬固定化部以
外の部分において、標識試薬成分の溶出量を測定するこ
とで、より正確な標識試薬成分の溶出量を測定し、測定
の高精度化を可能とするものである。
に、前記測定対象物量に影響を受けない試薬固定化部以
外の部分において、標識試薬成分の溶出量を測定するこ
とで、より正確な標識試薬成分の溶出量を測定し、測定
の高精度化を可能とするものである。
【００２０】また、本発明の請求項５記載のクロマトグ
ラフィー測定方法は、請求項１ないし請求項４のいずれ
かに記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記
標識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部にお
いて前記標識試薬の結合量を測定するよりも前に行う、
ことを特徴とするものである。
ラフィー測定方法は、請求項１ないし請求項４のいずれ
かに記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記
標識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部にお
いて前記標識試薬の結合量を測定するよりも前に行う、
ことを特徴とするものである。
【００２１】本願の請求項５記載の発明は、上述のよう
に、前記試薬固定化部の標識試薬の結合量を測定するよ
りも前に、前記標識試薬成分の溶出量を測定すること
で、前記標識試薬成分の溶出量を、前記試薬固定化部に
おいて生じる結合の測定に、迅速に反映することを可能
とするものである。
に、前記試薬固定化部の標識試薬の結合量を測定するよ
りも前に、前記標識試薬成分の溶出量を測定すること
で、前記標識試薬成分の溶出量を、前記試薬固定化部に
おいて生じる結合の測定に、迅速に反映することを可能
とするものである。
【００２２】
【発明の実施の形態】（実施の形態１）この実施の形態
１は、バイオセンサの抗体固定化部の標識試薬結合量の
補正を行うことによって、より高精度な測定結果が得ら
れるクロマトグラフィー測定方法の実現を図るものであ
る。
１は、バイオセンサの抗体固定化部の標識試薬結合量の
補正を行うことによって、より高精度な測定結果が得ら
れるクロマトグラフィー測定方法の実現を図るものであ
る。
【００２３】以下に、本発明の実施の形態について、図
１ないし図５を用いて説明する。図１は、本発明の実施
の形態１によるクロマトグラフィー測定方法を実施する
際に使用する，バイオセンサ（イムノクロマトセンサ）
の形態を示した図である。このイムノクロマトセンサ
は、被検査溶液を添加する被検査溶液添加部１、標識試
薬保持部２と抗体固定化部４とを含む抗体固定化膜３、
および、吸水部５で構成される。
１ないし図５を用いて説明する。図１は、本発明の実施
の形態１によるクロマトグラフィー測定方法を実施する
際に使用する，バイオセンサ（イムノクロマトセンサ）
の形態を示した図である。このイムノクロマトセンサ
は、被検査溶液を添加する被検査溶液添加部１、標識試
薬保持部２と抗体固定化部４とを含む抗体固定化膜３、
および、吸水部５で構成される。
【００２４】被検査溶液添加部１は、被検査溶液を添加
する部分であり、被検査溶液が湿潤可能な材料である不
織布からなる。被検査溶液添加部１に用いる材料として
は、不織布以外でも、被検査溶液が湿潤可能な材料であ
れば、ガラス繊維濾紙、メンブレンフィルタ等、任意の
材料を用いて構成できる。
する部分であり、被検査溶液が湿潤可能な材料である不
織布からなる。被検査溶液添加部１に用いる材料として
は、不織布以外でも、被検査溶液が湿潤可能な材料であ
れば、ガラス繊維濾紙、メンブレンフィルタ等、任意の
材料を用いて構成できる。
【００２５】標識試薬保持部２は、抗体固定化膜３の一
部分において、標識試薬を保持する部分である。この標
識試薬は、金コロイド（標識物）により標識された抗体
であり、被検査溶液の浸透により溶出可能なように、標
識試薬保持部２に乾燥状態で保持されている。
部分において、標識試薬を保持する部分である。この標
識試薬は、金コロイド（標識物）により標識された抗体
であり、被検査溶液の浸透により溶出可能なように、標
識試薬保持部２に乾燥状態で保持されている。
【００２６】また、ここでは標識物により標識される試
薬として抗体を用いているが、抗体以外にも、抗原、ハ
プテン、タンパク質等でも同様に実施可能である。ま
た、試薬の標識物としては、金コロイド以外にも、酵
素、タンパク質、色素、蛍光色素、ラテックスなどの着
色粒子等が選択可能である。
薬として抗体を用いているが、抗体以外にも、抗原、ハ
プテン、タンパク質等でも同様に実施可能である。ま
た、試薬の標識物としては、金コロイド以外にも、酵
素、タンパク質、色素、蛍光色素、ラテックスなどの着
色粒子等が選択可能である。
【００２７】抗体固定化部４は、試薬固定化部に対応す
るものであり、抗体固定化膜３の他の一部分において、
抗体を乾燥状態で固定して保持する部分である。この抗
体は、被検査溶液によって溶出するのではなく、前記標
識試薬保持部２の標識試薬と結合する性質を有するもの
である。そのため、前記抗体は、抗体固定化部４におい
て前記標識試薬を結合捕捉することが可能である。
るものであり、抗体固定化膜３の他の一部分において、
抗体を乾燥状態で固定して保持する部分である。この抗
体は、被検査溶液によって溶出するのではなく、前記標
識試薬保持部２の標識試薬と結合する性質を有するもの
である。そのため、前記抗体は、抗体固定化部４におい
て前記標識試薬を結合捕捉することが可能である。
【００２８】なお、本実施の形態１では、被検査溶液中
の測定対象物を抗原としたサンドイッチ反応について例
示したが、競合反応を用いる場合は、標識試薬保持部２
に抗原を設置することにより同様に実施可能である。
の測定対象物を抗原としたサンドイッチ反応について例
示したが、競合反応を用いる場合は、標識試薬保持部２
に抗原を設置することにより同様に実施可能である。
【００２９】抗体固定化膜３は、展開層に対応するもの
であり、標識試薬保持部２と抗体固定化部４とを含み、
ニトロセルロースで構成される。抗体固定化膜３に用い
られる材料は、ニトロセルロース以外にも、前記同様に
被検査溶液が湿潤可能な材料であれば、同様に実施でき
る。
であり、標識試薬保持部２と抗体固定化部４とを含み、
ニトロセルロースで構成される。抗体固定化膜３に用い
られる材料は、ニトロセルロース以外にも、前記同様に
被検査溶液が湿潤可能な材料であれば、同様に実施でき
る。
【００３０】吸水部５は、抗体固定化膜３を通過した被
検査溶液を吸収するものであり、ガラス繊維濾紙からな
る。この吸水部５の材料としては、ガラス繊維濾紙以外
でも、不織布、樹脂多孔質材料等、被検査溶液が湿潤可
能な材料であれば任意の材料で構成可能である。このよ
うに構成したバイオセンサに、被検査溶液を滴下するこ
とにより、被検査溶液に含まれる測定対象を測定するこ
とができる。
検査溶液を吸収するものであり、ガラス繊維濾紙からな
る。この吸水部５の材料としては、ガラス繊維濾紙以外
でも、不織布、樹脂多孔質材料等、被検査溶液が湿潤可
能な材料であれば任意の材料で構成可能である。このよ
うに構成したバイオセンサに、被検査溶液を滴下するこ
とにより、被検査溶液に含まれる測定対象を測定するこ
とができる。
【００３１】本実施の形態１は、バイオセンサを用いて
クロマトグラフィー測定を行う際に、標識試薬成分の溶
出量に変化が生じた場合においても、その溶出量もしく
は残量を検知することで、測定操作の正確性を向上させ
ることが可能になり、また、前記溶出量、もしくは残量
を計測することにより、前記抗体固定化部４における前
記標識試薬結合量に対して、標識試薬成分の溶出量に応
じた補正を加えることで、実際の測定に関与した前記標
識試薬成分量を反映させることが可能になり、より高精
度なクロマトグラフィー測定方法を実現するものであ
る。
クロマトグラフィー測定を行う際に、標識試薬成分の溶
出量に変化が生じた場合においても、その溶出量もしく
は残量を検知することで、測定操作の正確性を向上させ
ることが可能になり、また、前記溶出量、もしくは残量
を計測することにより、前記抗体固定化部４における前
記標識試薬結合量に対して、標識試薬成分の溶出量に応
じた補正を加えることで、実際の測定に関与した前記標
識試薬成分量を反映させることが可能になり、より高精
度なクロマトグラフィー測定方法を実現するものであ
る。
【００３２】図２は、被検査溶液添加部１に被検査溶液
を添加した後のイムノクロマトセンサの状態を示してい
る。図２（ａ）は、被検査溶液を被検査溶液添加部１に
添加して経過時間が比較的早い時点でのイムノクロマト
センサの状態を示し、図において、６は標識試薬溶出量
を測定する領域を示している。
を添加した後のイムノクロマトセンサの状態を示してい
る。図２（ａ）は、被検査溶液を被検査溶液添加部１に
添加して経過時間が比較的早い時点でのイムノクロマト
センサの状態を示し、図において、６は標識試薬溶出量
を測定する領域を示している。
【００３３】被検査溶液添加部１に添加された被検査溶
液は、標識試薬保持部２の標識試薬を溶出しながら吸水
部５に向かって浸透を開始するが、この時点では、被検
査溶液により溶出された標識試薬は抗体固定化部４には
到達していない。
液は、標識試薬保持部２の標識試薬を溶出しながら吸水
部５に向かって浸透を開始するが、この時点では、被検
査溶液により溶出された標識試薬は抗体固定化部４には
到達していない。
【００３４】図２（ｂ）は、抗体固定化部４において標
識試薬結合量を測定する時点でのイムノクロマトセンサ
の状態を示し、図において、７は抗体固定化部４におけ
る標識試薬結合量の測定領域を示す。この状態では、抗
体固定化膜３を通過した被検査溶液は吸水部５に吸収さ
れ、抗体固定化部４に固定されている抗体は、被検査溶
液中の測定対象物量に応じた反応が見られる。
識試薬結合量を測定する時点でのイムノクロマトセンサ
の状態を示し、図において、７は抗体固定化部４におけ
る標識試薬結合量の測定領域を示す。この状態では、抗
体固定化膜３を通過した被検査溶液は吸水部５に吸収さ
れ、抗体固定化部４に固定されている抗体は、被検査溶
液中の測定対象物量に応じた反応が見られる。
【００３５】図２（ｃ）は、前記図２（ｂ）と同時点で
のイムノクロマトセンサの状態を示すものであり、図に
おいて、８は標識試薬溶出残量を測定する領域を示す。
本実施の形態１は、図２（ａ）の状態における標識試薬
溶出量測定領域６で得られた測定値を用いて、図２
（ｂ）の状態における標識試薬結合量測定領域７で得ら
れた測定値を補正することで、より高精度な測定結果を
得るものである。
のイムノクロマトセンサの状態を示すものであり、図に
おいて、８は標識試薬溶出残量を測定する領域を示す。
本実施の形態１は、図２（ａ）の状態における標識試薬
溶出量測定領域６で得られた測定値を用いて、図２
（ｂ）の状態における標識試薬結合量測定領域７で得ら
れた測定値を補正することで、より高精度な測定結果を
得るものである。
【００３６】このように、標識試薬成分の溶出量の測定
を、前記試薬固定化部以外の部分において行うのは、前
記試薬固定化部は、被検査溶液中の測定対象物量により
前記標識試薬結合量が変化するため、測定開始後一定時
間を区切って標識試薬を読みとろうとした場合、測定対
象物の結合反応に起因するものか、前記結合反応に起因
しないものかを判断できないからである。
を、前記試薬固定化部以外の部分において行うのは、前
記試薬固定化部は、被検査溶液中の測定対象物量により
前記標識試薬結合量が変化するため、測定開始後一定時
間を区切って標識試薬を読みとろうとした場合、測定対
象物の結合反応に起因するものか、前記結合反応に起因
しないものかを判断できないからである。
【００３７】また、標識試薬の溶出量の測定を、前記試
薬固定化部における前記標識試薬の結合量を測定するよ
りも前に（上流側で）行うのは、測定操作において被検
査溶液を添加した後、被検査溶液は展開層を展開する
が、前記試薬固定化部を通過する前に、前記指標試薬成
分を溶出させるため、測定部分である前記試薬固定化部
を、前記指標試薬が通過する前に、溶出量を前もって測
定しておけば、前記試薬固定化部における結合の測定に
迅速に反映することが可能となるからである。なお、こ
の様な迅速な補正を行わなくても差し支えない場合は、
標識試薬結合量測定領域７で標識試薬量を測定した後、
その値に、図２（ｃ）の状態における標識試薬溶出残量
測定領域８で得られた測定値を反映させる方法もある。
薬固定化部における前記標識試薬の結合量を測定するよ
りも前に（上流側で）行うのは、測定操作において被検
査溶液を添加した後、被検査溶液は展開層を展開する
が、前記試薬固定化部を通過する前に、前記指標試薬成
分を溶出させるため、測定部分である前記試薬固定化部
を、前記指標試薬が通過する前に、溶出量を前もって測
定しておけば、前記試薬固定化部における結合の測定に
迅速に反映することが可能となるからである。なお、こ
の様な迅速な補正を行わなくても差し支えない場合は、
標識試薬結合量測定領域７で標識試薬量を測定した後、
その値に、図２（ｃ）の状態における標識試薬溶出残量
測定領域８で得られた測定値を反映させる方法もある。
【００３８】以下に、本実施の形態１による，バイオセ
ンサを使用したクロマトグラフィー測定方法の具体例と
して、尿中のｈＣＧ（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン）の
定量を例にとり、図１ないし図６を用いて、さらに詳細
に説明する。なお、本実施の形態１の測定方法は、ｈＣ
Ｇの定量に限定されるものではない。本実施の形態の試
験片（バイオセンサ）として、ニトロセルロース膜中に
抗ｈＣＧ−β抗体固定化ライン、及び抗ｈＣＧ−α抗体
と金コロイドとの複合体の広いバンドを含む免疫クロマ
トグラフィー試験片を製造した。
ンサを使用したクロマトグラフィー測定方法の具体例と
して、尿中のｈＣＧ（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン）の
定量を例にとり、図１ないし図６を用いて、さらに詳細
に説明する。なお、本実施の形態１の測定方法は、ｈＣ
Ｇの定量に限定されるものではない。本実施の形態の試
験片（バイオセンサ）として、ニトロセルロース膜中に
抗ｈＣＧ−β抗体固定化ライン、及び抗ｈＣＧ−α抗体
と金コロイドとの複合体の広いバンドを含む免疫クロマ
トグラフィー試験片を製造した。
【００３９】上記試験片は、図１に示すように、抗ｈＣ
Ｇ−β抗体を固定化した抗体固定化部４と、それよりも
前（上流側）にある抗ｈＣＧ−α抗体と金コロイドとの
複合体が含有された標識試薬保持部２とを含むニトロセ
ルロース膜からなる抗体固定化膜３と、不織布からなる
被検査溶液添加部１と、ガラス繊維からなる吸水部５と
で構成されるものである。
Ｇ−β抗体を固定化した抗体固定化部４と、それよりも
前（上流側）にある抗ｈＣＧ−α抗体と金コロイドとの
複合体が含有された標識試薬保持部２とを含むニトロセ
ルロース膜からなる抗体固定化膜３と、不織布からなる
被検査溶液添加部１と、ガラス繊維からなる吸水部５と
で構成されるものである。
【００４０】本実施の形態１は、ｈＧＣ溶液を、図１に
示す上記試験片に添加し、反射型分光光度計（ＣＳ９３
００；島津製作所）により、図３（ａ）に示すように、
標識試薬溶出量測定領域６に光源１００から検査光を照
射してその反射光を検出器２００で受光することで、標
識試薬溶出量測定領域６の反射吸光度を測定し、次に、
図３（ｂ）に示すように、標識試薬結合量測定領域７の
反射吸光度を、図３（ａ）と同様に反射型分光光度計に
より測定し、さらに、標識試薬溶出量測定領域６の吸光
度を用いて標識試薬結合量測定領域７の吸光度の補正を
行うという、補正方法を使用したものである。
示す上記試験片に添加し、反射型分光光度計（ＣＳ９３
００；島津製作所）により、図３（ａ）に示すように、
標識試薬溶出量測定領域６に光源１００から検査光を照
射してその反射光を検出器２００で受光することで、標
識試薬溶出量測定領域６の反射吸光度を測定し、次に、
図３（ｂ）に示すように、標識試薬結合量測定領域７の
反射吸光度を、図３（ａ）と同様に反射型分光光度計に
より測定し、さらに、標識試薬溶出量測定領域６の吸光
度を用いて標識試薬結合量測定領域７の吸光度の補正を
行うという、補正方法を使用したものである。
【００４１】以下、Ａ.試験片の製造方法、Ｂ.被検査溶
液の調製方法、Ｃ.補正方法の検討、について説明す
る。 Ａ．クロマトグラフィー試験片の調製 リン酸緩衝溶液にて希釈して濃度調製をした抗ｈＣＧ−
β抗体溶液を準備した。この抗体溶液を溶液吐出装置を
用いて、ニトロセルロース膜上に塗布した。これによ
り、ニトロセルロース膜上に検出用の抗体固定化ライン
（抗体固定化部４）が得られた。このニトロセルロース
膜を乾燥した後、１％スキムミルクを含有するＴｒｉｓ
−ＨＣｌ緩衝溶液中に浸漬して３０分間緩やかに振っ
た。３０分後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液槽に膜を移動
し、１０分間緩やかに振った後に、別のＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝溶液槽にてさらに１０分間緩やかに振り、膜の洗
浄を行った。２度洗浄を行った後に、膜を洗浄液から取
り出して、室温で乾燥させた。
液の調製方法、Ｃ.補正方法の検討、について説明す
る。 Ａ．クロマトグラフィー試験片の調製 リン酸緩衝溶液にて希釈して濃度調製をした抗ｈＣＧ−
β抗体溶液を準備した。この抗体溶液を溶液吐出装置を
用いて、ニトロセルロース膜上に塗布した。これによ
り、ニトロセルロース膜上に検出用の抗体固定化ライン
（抗体固定化部４）が得られた。このニトロセルロース
膜を乾燥した後、１％スキムミルクを含有するＴｒｉｓ
−ＨＣｌ緩衝溶液中に浸漬して３０分間緩やかに振っ
た。３０分後、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝溶液槽に膜を移動
し、１０分間緩やかに振った後に、別のＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝溶液槽にてさらに１０分間緩やかに振り、膜の洗
浄を行った。２度洗浄を行った後に、膜を洗浄液から取
り出して、室温で乾燥させた。
【００４２】金コロイドは、０．０１％塩化金酸の還流
中の１００℃溶液に１％クエン酸溶液を加えることによ
って調製した。還流を３０分間続けた後に、冷却した。
０．２Ｍの炭酸カリウム溶液によって、ｐＨ９に調製し
た前記金コロイド溶液に、抗ｈＣＧ−α抗体を加えて数
分間攪拌した後に、１０％ＢＳＡ（牛血清アルブミン）
溶液ｐＨ９を最終１％になる量だけ加えて攪拌すること
で、抗体金コロイド複合体（標識抗体）を調製した。前
記標識抗体溶液を４℃、２００００Ｇで５０分間遠心分
離することによって、標識抗体を単離して、それを洗浄
緩衝液（１％ＢＳＡ・リン酸緩衝液）中に懸濁した後
に、前記遠心分離を行って、標識抗体を洗浄単離した。
この標識抗体を洗浄緩衝液で懸濁して、０．８μｍのフ
ィルタにて濾過した後に、当初の金コロイド溶液量の１
０分の１に調製して、４℃で貯蔵した。
中の１００℃溶液に１％クエン酸溶液を加えることによ
って調製した。還流を３０分間続けた後に、冷却した。
０．２Ｍの炭酸カリウム溶液によって、ｐＨ９に調製し
た前記金コロイド溶液に、抗ｈＣＧ−α抗体を加えて数
分間攪拌した後に、１０％ＢＳＡ（牛血清アルブミン）
溶液ｐＨ９を最終１％になる量だけ加えて攪拌すること
で、抗体金コロイド複合体（標識抗体）を調製した。前
記標識抗体溶液を４℃、２００００Ｇで５０分間遠心分
離することによって、標識抗体を単離して、それを洗浄
緩衝液（１％ＢＳＡ・リン酸緩衝液）中に懸濁した後
に、前記遠心分離を行って、標識抗体を洗浄単離した。
この標識抗体を洗浄緩衝液で懸濁して、０．８μｍのフ
ィルタにて濾過した後に、当初の金コロイド溶液量の１
０分の１に調製して、４℃で貯蔵した。
【００４３】前記標識抗体溶液を溶液吐出装置にセット
して、抗ｈＣＧ−β抗体が固定化乾燥膜上の抗体固定化
部分から離れた位置に塗布した後に、膜を乾燥させた。
これによって、抗体固定化膜３上に標識抗体保持部（標
識試薬保持部２）が得られた。こうして調製された、抗
体固定化ライン，標識抗体保持部を含む抗体固定化膜
を、反応層担体支持体上に貼付け、不織布を被検査溶液
添加部１として、またガラス繊維ろ紙を吸水部５とし
て、付け加えてから０．５ｃｍ幅の細片に切断して、試
験片を作製した。
して、抗ｈＣＧ−β抗体が固定化乾燥膜上の抗体固定化
部分から離れた位置に塗布した後に、膜を乾燥させた。
これによって、抗体固定化膜３上に標識抗体保持部（標
識試薬保持部２）が得られた。こうして調製された、抗
体固定化ライン，標識抗体保持部を含む抗体固定化膜
を、反応層担体支持体上に貼付け、不織布を被検査溶液
添加部１として、またガラス繊維ろ紙を吸水部５とし
て、付け加えてから０．５ｃｍ幅の細片に切断して、試
験片を作製した。
【００４４】Ｂ．被検査溶液の調製 ヒト尿中に既知濃度のｈＣＧ溶液を加えることにより、
さまざまな既知濃度のｈＣＧ溶液を調製した。
さまざまな既知濃度のｈＣＧ溶液を調製した。
【００４５】Ｃ．補正方法の検討 以下に、測定時間を５分とし、標識試薬溶出量測定時間
を、１分後、３分後とした場合の、反射吸光度を使用し
た補正方法について説明する。補正を行なうには、予め
デバイス（試験片）固有の係数を求めていることが必要
である。まず、作製したデバイスの係数を求めるため
に、ｈＣＧ濃度１０００ＩＵ／ｌを含有する尿を調製
し、試験片（試験片数Ｎ＝１０）の被検査溶液添加部１
に２００μｌ以上添加する。前記被検査溶液添加時をス
タート時間として、開始後１分後、３分後における、標
識試薬溶出量測定領域６の反射吸光度を反射型分光光度
計（ＣＳ９３００；島津製作所製）を用いて計測した。
その後、５分後における標識試薬結合量測定領域７の呈
色状況を前記同様反射型分光光度計を用いて計測した。
標識試薬溶出量測定領域６の１分後における吸光度を吸
光度Ａ T、３分後における反射吸光度を吸光度ＢT、標識
試薬結合量測定領域７の計測結果を吸光度ＣTとして、
その測定結果をプロットし、以下に示す関係式（１）を
導き出した。この測定結果は、図４（ｃ）に示されるも
のである。
を、１分後、３分後とした場合の、反射吸光度を使用し
た補正方法について説明する。補正を行なうには、予め
デバイス（試験片）固有の係数を求めていることが必要
である。まず、作製したデバイスの係数を求めるため
に、ｈＣＧ濃度１０００ＩＵ／ｌを含有する尿を調製
し、試験片（試験片数Ｎ＝１０）の被検査溶液添加部１
に２００μｌ以上添加する。前記被検査溶液添加時をス
タート時間として、開始後１分後、３分後における、標
識試薬溶出量測定領域６の反射吸光度を反射型分光光度
計（ＣＳ９３００；島津製作所製）を用いて計測した。
その後、５分後における標識試薬結合量測定領域７の呈
色状況を前記同様反射型分光光度計を用いて計測した。
標識試薬溶出量測定領域６の１分後における吸光度を吸
光度Ａ T、３分後における反射吸光度を吸光度ＢT、標識
試薬結合量測定領域７の計測結果を吸光度ＣTとして、
その測定結果をプロットし、以下に示す関係式（１）を
導き出した。この測定結果は、図４（ｃ）に示されるも
のである。
【００４６】 Ｙ＝１．１２Ｘ＋Ｄ （但し、Ｘ＝ＡT＋ＢTである。） …（１） ここで、Ｙは標識試薬結合量測定領域７の吸光度であ
り、図４では縦軸である。また、Ｘは標識試薬溶出量測
定領域６の吸光度の和を示し、図４では横軸である。ま
た、Ｄは定数である。次に、標識試薬溶出量測定領域６
の測定結果の中心値を求める。本実施の形態１の例では
全測定の中心値は０．２９であった。
り、図４では縦軸である。また、Ｘは標識試薬溶出量測
定領域６の吸光度の和を示し、図４では横軸である。ま
た、Ｄは定数である。次に、標識試薬溶出量測定領域６
の測定結果の中心値を求める。本実施の形態１の例では
全測定の中心値は０．２９であった。
【００４７】この様にして、デバイス（バイオセンサ）
固有の係数、Ｅ＝１．１２、Ｆ＝０．２９を得た。この
デバイス固有の係数Ｅは標識試薬溶出量測定領域６と標
識試薬結合量測定領域７における吸光度の関係式の傾き
であり、またＦは標識試薬溶出量測定領域６で得られた
吸光度の中心値である。
固有の係数、Ｅ＝１．１２、Ｆ＝０．２９を得た。この
デバイス固有の係数Ｅは標識試薬溶出量測定領域６と標
識試薬結合量測定領域７における吸光度の関係式の傾き
であり、またＦは標識試薬溶出量測定領域６で得られた
吸光度の中心値である。
【００４８】次に、実際の試験を行う。ヒト尿中に既知
濃度のｈＣＧ溶液を加えることにより、１００、１００
０、１００００ＩＵ／ｌのｈＣＧを含有する尿を調製し
た。各ｈＣＧ濃度の尿に対して試験片上の被検査溶液添
加部１に前記ｈＣＧを含む尿を２００μｌ以上添加し
て、吸水部５方向へと展開させ、測定を開始する。被検
査溶液添加時をスタート時間として、開始後１分後、３
分後における、標識試薬溶出量測定領域６の反射吸光度
を反射型分光光度計（ＣＳ９３００；島津製作所製）を
用いて計測した。その後、５分後における標識試薬結合
量測定領域７の呈色状況を前記同様反射型分光光度計を
用いて計測した。標識試薬溶出量測定領域６の１分後に
おける吸光度を吸光度ＡT、３分後における反射吸光度
を吸光度ＢT 、標識試薬結合量測定領域７の計測結果を
吸光度ＣTとする。
濃度のｈＣＧ溶液を加えることにより、１００、１００
０、１００００ＩＵ／ｌのｈＣＧを含有する尿を調製し
た。各ｈＣＧ濃度の尿に対して試験片上の被検査溶液添
加部１に前記ｈＣＧを含む尿を２００μｌ以上添加し
て、吸水部５方向へと展開させ、測定を開始する。被検
査溶液添加時をスタート時間として、開始後１分後、３
分後における、標識試薬溶出量測定領域６の反射吸光度
を反射型分光光度計（ＣＳ９３００；島津製作所製）を
用いて計測した。その後、５分後における標識試薬結合
量測定領域７の呈色状況を前記同様反射型分光光度計を
用いて計測した。標識試薬溶出量測定領域６の１分後に
おける吸光度を吸光度ＡT、３分後における反射吸光度
を吸光度ＢT 、標識試薬結合量測定領域７の計測結果を
吸光度ＣTとする。
【００４９】図４は、被検査溶液中の測定対象物である
ｈＣＧ各濃度における吸光度ＡTと吸光度ＢTの和と、吸
光度ＣTの関係を示す図である。図４（ａ）はｈＣＧ濃
度１００ＩＵ／ｌ、図４（ｂ）はｈＣＧ濃度１０００Ｉ
Ｕ／ｌ、図４（ｃ）はｈＣＧ濃度１００００ＩＵ／ｌの
場合の吸光度ＡTと吸光度ＢTの和と、吸光度ＣTの関係
を示している。図４（ａ）ないし図４（ｃ）より、ｈＣ
Ｇ各濃度において吸光度ＡTと吸光度ＢTの和と、吸光度
ＣTに相関があることがわかる。
ｈＣＧ各濃度における吸光度ＡTと吸光度ＢTの和と、吸
光度ＣTの関係を示す図である。図４（ａ）はｈＣＧ濃
度１００ＩＵ／ｌ、図４（ｂ）はｈＣＧ濃度１０００Ｉ
Ｕ／ｌ、図４（ｃ）はｈＣＧ濃度１００００ＩＵ／ｌの
場合の吸光度ＡTと吸光度ＢTの和と、吸光度ＣTの関係
を示している。図４（ａ）ないし図４（ｃ）より、ｈＣ
Ｇ各濃度において吸光度ＡTと吸光度ＢTの和と、吸光度
ＣTに相関があることがわかる。
【００５０】次に、上記測定結果、及び前記デバイスの
係数を使用して、以下の式（２）を用いて標識試薬結合
量測定領域７の計測結果における吸光度ＣTの補正を行
い、補正値ＣHを求める。 補正値ＣH＝ＣT×（１−（（ＡT＋ＢT）−Ｆ×Ｅ） …（２） ここでＣHは補正結果を示す。
係数を使用して、以下の式（２）を用いて標識試薬結合
量測定領域７の計測結果における吸光度ＣTの補正を行
い、補正値ＣHを求める。 補正値ＣH＝ＣT×（１−（（ＡT＋ＢT）−Ｆ×Ｅ） …（２） ここでＣHは補正結果を示す。
【００５１】図５は、各ｈＣＧ濃度における補正前の測
定結果と補正後の測定結果との関係を示す図である。図
５（ａ）は、補正前である図４の結果をｈＣＧ各濃度ご
とにプロットしなおした図で、図５（ｂ）は、前記図４
で示した測定結果に式２を用いて補正した後の測定結果
をｈＣＧ各濃度ごとにプロットした図である。補正前の
ｈＣＧ同一濃度内のＣＶ値（変動係数）はそれぞれ、１
１．１％、１０．８％、１３．８％であるが、補正によ
りＣＶ値（変動係数）はそれぞれ、８．９％、４．１
％、１．９％となり、全濃度領域とも大幅に測定値の精
度が向上していることがわかる。
定結果と補正後の測定結果との関係を示す図である。図
５（ａ）は、補正前である図４の結果をｈＣＧ各濃度ご
とにプロットしなおした図で、図５（ｂ）は、前記図４
で示した測定結果に式２を用いて補正した後の測定結果
をｈＣＧ各濃度ごとにプロットした図である。補正前の
ｈＣＧ同一濃度内のＣＶ値（変動係数）はそれぞれ、１
１．１％、１０．８％、１３．８％であるが、補正によ
りＣＶ値（変動係数）はそれぞれ、８．９％、４．１
％、１．９％となり、全濃度領域とも大幅に測定値の精
度が向上していることがわかる。
【００５２】以上の，本実施の形態１における補正を実
施することにより、測定値の精度が飛躍的に向上するこ
とが確認できた。即ち、標識試薬成分の溶出量に変化が
生じたとしても、ｈＣＧ濃度が同一であれば測定値は変
動の影響をあまり受けなくなり、定量精度が大幅に向上
したクロマトグラフィー測定方法を得ることができる。
施することにより、測定値の精度が飛躍的に向上するこ
とが確認できた。即ち、標識試薬成分の溶出量に変化が
生じたとしても、ｈＣＧ濃度が同一であれば測定値は変
動の影響をあまり受けなくなり、定量精度が大幅に向上
したクロマトグラフィー測定方法を得ることができる。
【００５３】このように、本実施の形態１によれば、セ
ンサの乾燥状態、センサの中の試薬成分の保存状況、セ
ンサ作製時の温度、湿度、作製時間等の外的状況、等の
センサ部における要因、または、被検査溶液の性質にお
ける要因、測定操作における誤操作、測定操作時の環境
等、測定操作における要因等により、標識試薬成分の溶
出量に変化が生じた場合においても、その溶出量もしく
は残量を検知することで、測定操作の正確性を向上させ
ることが可能になり、また、前記溶出量、もしくは残量
を計測することにより、前記試薬固定化部分における前
記標識試薬成分の結合量に対して、溶出量に応じた補正
を加えることで、より高精度なクロマトグラフィ測定方
法を提供できる。
ンサの乾燥状態、センサの中の試薬成分の保存状況、セ
ンサ作製時の温度、湿度、作製時間等の外的状況、等の
センサ部における要因、または、被検査溶液の性質にお
ける要因、測定操作における誤操作、測定操作時の環境
等、測定操作における要因等により、標識試薬成分の溶
出量に変化が生じた場合においても、その溶出量もしく
は残量を検知することで、測定操作の正確性を向上させ
ることが可能になり、また、前記溶出量、もしくは残量
を計測することにより、前記試薬固定化部分における前
記標識試薬成分の結合量に対して、溶出量に応じた補正
を加えることで、より高精度なクロマトグラフィ測定方
法を提供できる。
【００５４】なお、本実施の形態１では、図１に示すよ
うな試験片を用いた場合の補正方法の一例について説明
したが、試験片の形状は図１のものに限定されるもので
はなく、適宜選択可能である。また、前記デバイス固有
の値Ｅ，Ｆは、標識試薬保持濃度、標識試薬保持面積、
標識試薬保持量、標識試薬種類、流速、試料溶媒種、標
識試薬保持領域と固定化試薬との位置等の要因で変化す
るものであり、必要に応じて適宜選択可能である。
うな試験片を用いた場合の補正方法の一例について説明
したが、試験片の形状は図１のものに限定されるもので
はなく、適宜選択可能である。また、前記デバイス固有
の値Ｅ，Ｆは、標識試薬保持濃度、標識試薬保持面積、
標識試薬保持量、標識試薬種類、流速、試料溶媒種、標
識試薬保持領域と固定化試薬との位置等の要因で変化す
るものであり、必要に応じて適宜選択可能である。
【００５５】さらに、本実施の形態１では、標識試薬溶
出量計測を利用して補正を行うようにしたが、標識試薬
の残量を計測して補正を行うようにしてもよく、この場
合、図３と同様の反射型分光光度計により、先に標識試
薬結合量測定領域７の反射吸光度を求め（図６（ａ）参
照）、次に標識試料溶出残量測定領域８の反射吸光度を
求めて（図６（ｂ）参照）、補正を行った後、上述の標
識試薬溶出量計測の場合と同様にしてデバイス固有の値
を算出し、これを用いて、式（２）により補正を行うよ
うにすればよい。その他、溶出量の計測方法、溶出量測
定領域の場所、補正演算式などの選択など、必要に応じ
て適宜選択可能である。
出量計測を利用して補正を行うようにしたが、標識試薬
の残量を計測して補正を行うようにしてもよく、この場
合、図３と同様の反射型分光光度計により、先に標識試
薬結合量測定領域７の反射吸光度を求め（図６（ａ）参
照）、次に標識試料溶出残量測定領域８の反射吸光度を
求めて（図６（ｂ）参照）、補正を行った後、上述の標
識試薬溶出量計測の場合と同様にしてデバイス固有の値
を算出し、これを用いて、式（２）により補正を行うよ
うにすればよい。その他、溶出量の計測方法、溶出量測
定領域の場所、補正演算式などの選択など、必要に応じ
て適宜選択可能である。
【００５６】
【発明の効果】以上のように、請求項１記載のクロマト
グラフィー測定方法によれば、被検査溶液を展開する展
開層と、前記展開層の一部に、試薬を固定化することに
より形成された試薬固定化部と、前記展開層の他の一部
に、前記被検査溶液の展開により溶出可能な標識試薬を
保持することにより形成された標識試薬保持部とを備
え、クロマトグラフィーを利用して被検査溶液を測定す
るバイオセンサ、を用いた測定方法において、前記試薬
固定化部における前記標識試薬の結合量を測定すること
により、被検査溶液中の測定成分を定性もしくは定量す
るとともに、前記標識試薬成分の溶出量もしくは溶出さ
れなかった残量を測定する、ようにしたので、前記試薬
固定化部における前記標識試薬結合量により、被検査溶
液内の測定対象物の検出をする場合において、その結合
量に影響を及ぼす前記標識成分の実質的な溶出量もしく
は残量を測定することにより、固定化における前記標識
試薬成分結合量の妥当性（結合量データの信頼性）を知
ることを可能にし、測定操作の正確性を向上させる効果
があり、また、前記溶出量、もしくは残量を計測するこ
とにより、前記試薬固定化部分における前記標識試薬成
分の結合量に対して、溶出量に応じた補正を加えること
で、実際の測定に関与した前記標識試薬成分量を反映さ
せることが可能になり、より高精度な，バイオセンサを
用いたクロマトグラフィー測定方法が実現できるという
効果が得られる。
グラフィー測定方法によれば、被検査溶液を展開する展
開層と、前記展開層の一部に、試薬を固定化することに
より形成された試薬固定化部と、前記展開層の他の一部
に、前記被検査溶液の展開により溶出可能な標識試薬を
保持することにより形成された標識試薬保持部とを備
え、クロマトグラフィーを利用して被検査溶液を測定す
るバイオセンサ、を用いた測定方法において、前記試薬
固定化部における前記標識試薬の結合量を測定すること
により、被検査溶液中の測定成分を定性もしくは定量す
るとともに、前記標識試薬成分の溶出量もしくは溶出さ
れなかった残量を測定する、ようにしたので、前記試薬
固定化部における前記標識試薬結合量により、被検査溶
液内の測定対象物の検出をする場合において、その結合
量に影響を及ぼす前記標識成分の実質的な溶出量もしく
は残量を測定することにより、固定化における前記標識
試薬成分結合量の妥当性（結合量データの信頼性）を知
ることを可能にし、測定操作の正確性を向上させる効果
があり、また、前記溶出量、もしくは残量を計測するこ
とにより、前記試薬固定化部分における前記標識試薬成
分の結合量に対して、溶出量に応じた補正を加えること
で、実際の測定に関与した前記標識試薬成分量を反映さ
せることが可能になり、より高精度な，バイオセンサを
用いたクロマトグラフィー測定方法が実現できるという
効果が得られる。
【００５７】また、請求項２記載のクロマトグラフィー
測定方法によれば、請求項１記載のクロマトグラフィー
測定方法において、前記試薬固定化部における前記標識
試薬の結合量に対し、前記標識試薬成分の溶出量もしく
は溶出されない残量に基づき補正を行うようにしたの
で、実際の測定に関与した前記標識試薬成分量を反映さ
せることが可能になり、より高精度な，バイオセンサを
用いたクロマトグラフィー測定方法が実現できるという
効果が得られる。
測定方法によれば、請求項１記載のクロマトグラフィー
測定方法において、前記試薬固定化部における前記標識
試薬の結合量に対し、前記標識試薬成分の溶出量もしく
は溶出されない残量に基づき補正を行うようにしたの
で、実際の測定に関与した前記標識試薬成分量を反映さ
せることが可能になり、より高精度な，バイオセンサを
用いたクロマトグラフィー測定方法が実現できるという
効果が得られる。
【００５８】また、請求項３記載のクロマトグラフィー
測定方法によれば、請求項１または請求項２記載のクロ
マトグラフィー測定方法において、前記標識試薬成分の
溶出量もしくは溶出されない残量の測定は、光学的な検
出器を用いるものとしたので、前記標識試薬成分の溶出
量をより正確に数値化することが可能となり、より高精
度な，バイオセンサを用いたクロマトグラフィー測定方
法が実現できるという効果が得られる。
測定方法によれば、請求項１または請求項２記載のクロ
マトグラフィー測定方法において、前記標識試薬成分の
溶出量もしくは溶出されない残量の測定は、光学的な検
出器を用いるものとしたので、前記標識試薬成分の溶出
量をより正確に数値化することが可能となり、より高精
度な，バイオセンサを用いたクロマトグラフィー測定方
法が実現できるという効果が得られる。
【００５９】また、請求項４記載のクロマトグラフィー
測定方法によれば、請求項１ないし請求項３のいずれか
に記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記標
識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部以外の
部分において行うものとしたので、測定対象物量に影響
を受けない試薬固定化部以外の部分における標識試薬成
分溶出量を測定することで、より正確な標識試薬溶出量
を測定でき、より高精度な，バイオセンサを用いたクロ
マトグラフィー測定方法が実現できるという効果が得ら
れる。
測定方法によれば、請求項１ないし請求項３のいずれか
に記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記標
識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部以外の
部分において行うものとしたので、測定対象物量に影響
を受けない試薬固定化部以外の部分における標識試薬成
分溶出量を測定することで、より正確な標識試薬溶出量
を測定でき、より高精度な，バイオセンサを用いたクロ
マトグラフィー測定方法が実現できるという効果が得ら
れる。
【００６０】さらに、請求項５記載のクロマトグラフィ
ー測定方法によれば、請求項１ないし請求項４のいずれ
かに記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記
標識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部にお
いて前記標識試薬の結合量を測定するよりも前に行うも
のとしたので、試薬固定化部分において生じる結合に関
与する標識試薬成分をあらかじめ知ることができ、測定
操作の正確性を高めるとともに、より迅速な判断を可能
にし、より高精度な，バイオセンサを用いたクロマトグ
ラフィー測定方法が実現できるという効果が得られる。
ー測定方法によれば、請求項１ないし請求項４のいずれ
かに記載のクロマトグラフィー測定方法において、前記
標識試薬成分の溶出量の測定は、前記試薬固定化部にお
いて前記標識試薬の結合量を測定するよりも前に行うも
のとしたので、試薬固定化部分において生じる結合に関
与する標識試薬成分をあらかじめ知ることができ、測定
操作の正確性を高めるとともに、より迅速な判断を可能
にし、より高精度な，バイオセンサを用いたクロマトグ
ラフィー測定方法が実現できるという効果が得られる。
【図１】本発明の実施の形態１によるクロマトグラフィ
ー測定方法に使用する，バイオセンサの構成の一例を示
す斜視図である。
ー測定方法に使用する，バイオセンサの構成の一例を示
す斜視図である。
【図２】本発明の実施の形態１によるクロマトグラフィ
ー測定方法におけるバイオセンサの被検査溶液の展開状
況を示す斜視図であり、図２（ａ）は測定初期状態を示
す図であり、図２（ｂ），（ｃ）は反応測定状態を示す
図である。
ー測定方法におけるバイオセンサの被検査溶液の展開状
況を示す斜視図であり、図２（ａ）は測定初期状態を示
す図であり、図２（ｂ），（ｃ）は反応測定状態を示す
図である。
【図３】本発明の実施の形態１によるクロマトグラフィ
ー測定方法におけるバイオセンサの測定すべき領域の順
序の一例を示す斜視図であり、図３（ａ）は最初に測定
すべき領域を示す図であり、図３（ｂ）は次に測定すべ
き領域を示す図である。
ー測定方法におけるバイオセンサの測定すべき領域の順
序の一例を示す斜視図であり、図３（ａ）は最初に測定
すべき領域を示す図であり、図３（ｂ）は次に測定すべ
き領域を示す図である。
【図４】本発明の実施の形態１におけるバイオセンサに
より測定したｈＣＧの各濃度における吸光度ＡT，ＢTの
和と、吸光度ＣTとの関係を示す図である。
より測定したｈＣＧの各濃度における吸光度ＡT，ＢTの
和と、吸光度ＣTとの関係を示す図である。
【図５】本発明の実施の形態１におけるバイオセンサに
より測定した各ｈＣＧ濃度における補正前の測定結果と
補正後の測定結果の関係を示す図である。
より測定した各ｈＣＧ濃度における補正前の測定結果と
補正後の測定結果の関係を示す図である。
【図６】本発明の実施の形態１によるクロマトグラフィ
ー測定方法におけるバイオセンサの測定すべき領域の順
序の他の例を示す斜視図であり、図６（ａ）は最初に測
定すべき領域を示す図であり、図６（ｂ）は次に測定す
べき領域を示す図である。
ー測定方法におけるバイオセンサの測定すべき領域の順
序の他の例を示す斜視図であり、図６（ａ）は最初に測
定すべき領域を示す図であり、図６（ｂ）は次に測定す
べき領域を示す図である。
１ 被検査溶液添加部 ２ 標識試薬保持部 ３ 抗体固定化膜 ４ 抗体固定化部 ５ 吸水部 ６ 標識試薬溶出量測定領域 ７ 標識試薬結合量測定領域 ８ 標識試薬溶出残量測定領域
Claims (5)
- 【請求項１】 被検査溶液を展開するための展開層と、 前記展開層の一部に、試薬を固定化することにより形成
された試薬固定化部と、 前記展開層の他の一部に、前記被検査溶液の展開により
溶出可能な標識試薬を保持することにより形成された標
識試薬保持部とを備え、 クロマトグラフィーを利用して被検査溶液を測定するバ
イオセンサ、を用いた測定方法において、 前記試薬固定化部における前記標識試薬の結合量を測定
することにより、被検査溶液中の測定成分を定性もしく
は定量するとともに、 前記標識試薬成分の溶出量もしくは溶出されなかった残
量を測定する、 ことを特徴とするクロマトグラフィー測定方法。 - 【請求項２】 請求項１記載のクロマトグラフィー測定
方法において、 前記試薬固定化部における前記標識試薬の結合量に対
し、前記標識試薬成分の溶出量もしくは溶出されなかっ
た残量に基づき補正を行う、 ことを特徴とするクロマトグラフィー測定方法。 - 【請求項３】 請求項１または請求項２記載のクロマト
グラフィー測定方法において、 前記標識試薬成分の溶出量もしくは溶出されない残量の
測定は、 光学的な検出器を用いる、 ことを特徴とするクロマトグラフィー測定方法。 - 【請求項４】 請求項１ないし請求項３のいずれかに記
載のクロマトグラフィー測定方法において、 前記標識試薬成分の溶出量の測定は、 前記試薬固定化部以外の部分において行う、 ことを特徴とするクロマトグラフィー測定方法。 - 【請求項５】 請求項１ないし請求項４のいずれかに記
載のクロマトグラフィー測定方法において、 前記標識試薬成分の溶出量の測定は、 前記試薬固定化部において前記標識試薬の結合量を測定
するよりも前に行う、 ことを特徴とするクロマトグラフィー測定方法。
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|---|---|---|---|
| JP2000134342A JP4562854B2 (ja) | 2000-05-08 | 2000-05-08 | クロマトグラフィー測定方法 |
| PCT/JP2001/003840 WO2001086300A1 (en) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | Method of measurement in chromatography |
| DE60137922T DE60137922D1 (de) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | Messverfahren in der chromatografie |
| EP01926150A EP1281965B1 (en) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | Method of measurement in chromatography |
| CNB01801206XA CN1160572C (zh) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | 层析测定方法 |
| US10/019,966 US7192784B2 (en) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | Method of measurement in chromatography |
| KR10-2002-7000158A KR100461889B1 (ko) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | 크로마토그래피 측정 방법 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000134342A JP4562854B2 (ja) | 2000-05-08 | 2000-05-08 | クロマトグラフィー測定方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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ID=18642640
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|---|---|---|---|
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| CN (1) | CN1160572C (ja) |
| DE (1) | DE60137922D1 (ja) |
| WO (1) | WO2001086300A1 (ja) |
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| US7604721B2 (en) | 2003-06-20 | 2009-10-20 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | System and method for coding information on a biosensor test strip |
| US8206565B2 (en) | 2003-06-20 | 2012-06-26 | Roche Diagnostics Operation, Inc. | System and method for coding information on a biosensor test strip |
| US7597793B2 (en) | 2003-06-20 | 2009-10-06 | Roche Operations Ltd. | System and method for analyte measurement employing maximum dosing time delay |
| US7645421B2 (en) | 2003-06-20 | 2010-01-12 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | System and method for coding information on a biosensor test strip |
| US8148164B2 (en) | 2003-06-20 | 2012-04-03 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | System and method for determining the concentration of an analyte in a sample fluid |
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