JP2001112470A - アンギオテンシン変換酵素阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 色相がよく摂取しやすく、強いアンギオテン
シン変換酵素阻害活性を示すアンギオテンシン変換酵素
阻害剤を提供すること。 【解決手段】魚肉をサーモリシン酵素で分解して得られ
るペプチド含有組成物であり、かつ分子量が５０００以
上のポリペプチド成分の含有量を１０重量％以下とした
アンギオテンシン変換酵素阻害剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品、食品、健
康食品、特定保健用食品などに使用することができる魚
肉をサーモリシン酵素で分解して得られるペプチド含有
組成物よりなるアンギオテンシン変換酵素阻害剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】アンギオテンシン変換酵素は、主として
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンＩ（Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ−Ｌｅｕ）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を有する
アンギオテンシンＩＩを生成させる酵素である。また、
この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破壊し
不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与してい
る。従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻害
すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治療
に有効であると考えられている。

【０００３】最近ではプロリン誘導体であるカプトプリ
ルが合成され、降圧活性が確認されて以来、種々のアン
ギオテンシン変換酵素阻害物質の合成研究が盛んであ
り、又天然物からの取得も試みられているところであ
る。天然物由来のアンギオテンシン変換酵素阻害剤は食
品あるいは食品原料から得られるので低毒性で安全性の
高い降圧剤となることが期待されるからである。本出願
人も先に、特開平４−６９３９７号公報でＬｅｕ−Ｌｙ
ｓ−Ｐｒｏ骨格をもつ新規ペプチドを開示した。また、
特開平４−１４４６９６号公報で蛋白質をサーモライシ
ン（サーモリシン）で加水分解するアンギオテンシン変
換酵素阻害剤含有組成物の製造方法を開示し、更に特開
平５−２４４９７９号公報では、肉類を５０℃以上の水
中で加熱処理し、水不溶性蛋白質を抽出除去して得られ
る水不溶性の蛋白質を主体とする残渣をプロテアーゼで
加水分解するアンギオテンシン変換酵素阻害剤含有組成
物の製造方法を開示した。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記特
開平４−６９３９７号公報に開示の新規ペプチドの阻害
活性は非常に強いものではあるが、実用的に該ペプチド
のみを単離するには非常に労力を要し、コストアップと
なる。また、特開平４−１４４６９６号公報や特開平５
−２４４９７９号公報に開示の製造方法では、ある程度
阻害活性の強い組成物が得られるものの、該組成物を摂
取して効果を得るための摂取量がやや多く、毎日手軽に
摂取するためには更に摂取量を低減することが望まれ、
更に上記組成物は蛋白質としてかつお節を用いた場合、
ペプチド特有の苦みは少ないものの、後味の点で更に改
良の余地があった。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者は、かかる課題
を解決すべく鋭意検討した結果、魚肉をサーモリシン酵
素で分解して得られるペプチド含有組成物であり、かつ
分子量が５０００以上のポリペプチド成分の含有量を１
０重量％以下としたアンギオテンシン変換酵素阻害剤
（以下阻害剤と称する）が強い阻害活性を示し、色相も
よく、苦みが全くなく、後味がさっぱりして、摂取し易
いことを見いだし本発明を完成した。

【０００６】

【発明の詳細な説明】以下に本発明を詳細に述べる。本
発明におけるペプチド含有組成物は、魚肉をサーモリシ
ン酵素で分解して得られるもので、かかる魚肉として
は、かつお、さば、いわし、たら、さけ、さんま、はま
ち、あじ等の生身、及びこれらの乾燥物、これらを熱水
抽出した残渣、これらの魚節（熱水抽出残渣を乾燥し必
要に応じて黴付けしたもの）、更にはかかる魚節の熱水
抽出残渣等が挙げられ、好ましくは魚節の熱水抽出残渣
が用いられる。また、該魚節の中では、かつお節が好ま
しい。また、分解酵素として用いられるサーモリシン酵
素は精製品でも、多少の他の酵素が混合されている粗酵
素液でもよく、市販品の『サモアーゼ』（大和化成社
製）を用いてもよい。

【０００７】魚肉をサーモリシン酵素で分解するに当っ
ては、魚肉に水とサーモリシン酵素を加えて、加水分解
を実施する。該加水分解を行うにあたっては、魚肉の性
状により前処理をおこなってもよく、その場合魚肉に水
あるいは熱水を加えて混合し強力な撹拌でホモジナイズ
する。加水分解を行う際のサーモリシン酵素の添加量
は、魚肉と水の合計量に対して、０．０５〜５．０重量
％が好ましく、更には０．１〜１．０重量％である。添
加量が０．０５重量％未満では、加水分解が十分進行せ
ず、また、５．０重量％を越えても、サーモリシン酵素
を浪費するだけで好ましくない。

【０００８】加水分解時の反応温度は１０〜８５℃が好
ましく、更には４０〜８０℃である。反応温度が１０℃
未満では、加水分解が十分進行せず、８５℃を越える
と、サーモリシン酵素の失活が激しくなり好ましくな
い。加水分解時のｐＨは６〜８が好ましい。ｐＨが６未
満あるいは８を越えると、加水分解率が低くなり好まし
くない。加水分解反応開始前の液は通常ｐＨが４〜５．
５であるので、アルカリ水溶液（例えば水酸化ナトリウ
ム水溶液）でｐＨを６〜８程度に調整するのが好まし
い。反応時間は１０分〜３０時間が好ましく、更には３
〜２０時間である。反応時間が１０分未満では、分解物
の収率が悪く、３０時間を越えると生産効率が悪くなり
好ましくない。

【０００９】加水分解率は特に制限はされないが、最終
の加水分解率が１０〜６０％となるように調整するのが
好ましく、更には２０〜５０％である。該分解率が１０
％未満のときは、得られるペプチドが少なく生産効率が
悪く、６０％を越えるためには、長時間の加水分解が必
要で、更にサーモリシン酵素が多量に必要になるので好
ましくない。なお該分解率は、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ、第２４巻、第６号、第１０９０〜１０９
３頁（１９７６）に基づいて測定することができる。

【００１０】本発明では上記酵素で分解して得られたペ
プチド含有組成物中に含まれる分子量５０００以上のポ
リペプチド成分の含有量を、該組成物の固形分に対して
１０重量％以下とすることを最大の特徴とし、具体的に
は分子量５０００以上のポリペプチド成分を１５〜３０
重量％程度含む上記分解物から、分子量５０００以上の
ポリペプチド成分を含有量が１０重量％以下、好ましく
は０．１〜５重量％になるまで取り除く。分子量５００
０以上のポリペプチド成分の含有量が１０重量％を越え
ると、色相が黄色〜褐色となり、苦みが少し残存し、味
がさっぱりとせず、味の薄いものに添加すると後味がい
つまでも残存するという欠点があり、更に阻害活性の向
上も見られず不適当である。

【００１１】なお、本発明での分子量は試料をゲル濾過
クロマトグラフィーにより測定する。具体的には分子量
既知のペプチド、蛋白質〔Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔ
ｙｒ−Ｐｒｏ（分子量５６３）、ニューロテンシン（分
子量１６３７）、リボヌクレアーゼ（分子量１３７０
０）〕を標準物質として、以下の条件で抽出物を溶出さ
せて、溶出時間を測定し、対数グラフの縦軸に分子量、
横軸に溶出時間をプロットした検量線に基づいて分子量
を求める。また、本発明では、分子量５０００以上のポ
リペプチド成分の重量％は得られた溶出チャートの分子
量５０００の位置でピークを分割し、５０００以上のポ
リペプチド成分に相当するピーク面積の面積％で求める
こととする。

【００１２】 （分画条件） カラム ：Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐａｋ６０（Ｗａｔｅｒｓ社製） ５×２５０ｍｍ 移動相 ：０．１容量％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）含有５０容量％アセト ニトリル水溶液 流速 ：０．７ｍＬ／ｍｉｎ 検出器 ：ＲＩ サンプル量：１ｍｇ

【００１３】 （標準物質の分子量と溶出時間の関係） 標準物質 分子量 溶出時間（分） Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ ５６３ ３１ ニューロテンシン １６３７ ２６リボヌクレアーゼ １３７００ １９ 上記条件では分子量５０００の物質は２９分に溶出され
るので、本発明では２９分以前に溶出する物質を分子量
５０００以上のポリペプチド成分とする。

【００１４】分子量５０００以上のポリペプチド成分を
取り除く方法としては、ゲル濾過クロマトグラフィー
により、分子量５０００以上の画分を取除く方法、膜
処理により、分子量５０００以上の画分を除く方法、
該抽出物をメタノール、エタノール、プロパノール、ブ
タノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキ
サン、ベンゼンなどの極性有機溶媒を用いた溶媒分画法
で高分子画分を取除く方法等を単独あるいは適宜組合わ
せて実施する。かかる〜の方法について簡単に説明
する。

【００１５】の方法は前記分子量の分析法として述べ
た方法を工業的なスケールで実施する方法である。の
方法は、分解液を分画分子量が５０００程度の膜（ＵＦ
膜）、例えばミリポア社製ＵＦ膜「ＰＬＣＣ（分画分子
量５０００）」、アドバンスドメンブランテクノロジー
社製ＵＦ膜「ＡＥＳ−５（分画分子量５０００）」、ア
ブコ社製ＵＦ膜「ＨＦＫ−１３１（分画分子量５００
０」、旭化成社製ＵＦ膜「ＳＥＰ１０１３（分画分子量
３０００）」を通過させて、通過画分を分取して実施す
る方法である。の方法は、分解液を析出物が出ない程
度に濃縮して、そこに５〜１００倍程度の有機溶剤を添
加して、系内の有機溶剤の濃度を６０〜９９容量％とす
ることにより、高分子物質を沈殿させる方法である。

【００１６】かくして得られた阻害剤は、各種のオリゴ
ペプチドや若干の核酸、部分分解した蛋白質等の混合物
であり、該オリゴペプチドとして、具体的には下記のペ
プチドの少なくとも１種が含まれる。Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、
Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、Ｉ
ｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、Ｌｅ
ｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ
−Ａｓｐ Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ、Ｉｌｅ−Ｔ
ｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒ
ｏ−Ｈｉｓ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ
−Ａｓｎ−Ｔｙｒ、Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−
Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ

【００１７】上記でいうＬｅｕはロイシン、Ｌｙｓはリ
ジン、Ｐｒｏはプロリン、Ａｓｎはアスパラギン、Ｍｅ
ｔはメチオニン、Ｉｌｅはイソロイシン、Ｔｒｐはトリ
プトファン、Ｐｈｅはフェニルアラニン、Ｇｌｎはグル
タミン、Ｔｙｒはチロシン、Ｇｌｙはグリシン、Ｈｉｓ
はヒスチジン、Ｔｈｒはスレオニン、Ａｌａはアラニ
ン、Ｖａｌはバリン、Ａｒｇはアルギニン、Ａｓｐはア
スパラギン酸を意味し、かかるアミノ酸はいずれもＬ−
体である。

【００１８】本発明の阻害剤は加水分解して得られた分
解液を上記のような組成に調整した水溶液や水を取り除
いて粉末としたものである。水を取り除く際の脱水手段
としては、濃縮乾固、フリーズドライ、スプレードラ
イ、真空乾燥等の方法が用いられる。本発明の阻害剤は
製剤にして、医薬品、健康食品（健康補助食品）として
用いられたり、そのまま食品に添加して用いられる。

【００１９】製剤して医薬品として用いられる場合、阻
害剤は単独あるいは製剤用担体と混合して調製した製剤
の形で使用される。製剤用担体としては、製剤分野にお
いて常用され、かつ本発明の阻害剤と反応しない物質が
用いられる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。

【００２０】剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、注射剤等が挙げられ
る。これらの製剤は常法に従って調製される。上記で製
剤された医薬品や健康食品は、血圧降下、心筋肥大防
止、脳卒中防止の目的で用いられる。

【００２１】また、本発明の阻害剤は苦みがなく後味も
よいので農水産加工品、乳製品、菓子、調味料、飲料、
フリーズドライ食品、レトルト食品等の食品や健康食品
や健康補助食品、食品添加物用途に使用される。食品と
しては、特に制限はされないが、具体的に対象となる食
品としては、以下のものが挙げられる。 （１）農水産加工品 はるさめ、こしあん、こんにゃく、パン、麺類（即席め
ん、パスタ、生めん、乾めん）、餅、シリアル食品、大
豆加工品（豆腐、豆乳、納豆、凍豆腐）、水産加工品
〔練り製品、（かに風味）蒲鉾、（魚肉）ハム、（魚
肉）ソーセージ、（魚肉）ウィンナー、ふりかけ、お茶
づけのり〕、缶詰（ シーチキン、オイルサーディン、
焼鳥）、レトルト食品（カレー、シチュー、スパゲティ
ー）

【００２２】 （２）乳製品 牛乳、加工乳、乳酸菌飲料、バター、チーズ、練乳、粉
乳 （３）菓子 ケーキ、ムース、（粉末）デザート、アイスクリーム、
飴、チョコレート、グミ、キャンディー、クッキー、ウ
エハース、ゼリー （４）調味料 味噌、醤油、うま味（風味）調味料、（粉末）天然調味
料、ソース、ドレッシング、焼き肉のたれ、みりん、カ
レー、シチュー、香辛料、スパイス、ヨーグルト （５）飲料 清涼飲料（炭酸飲料、果実飲料、スポーツドリンク、栄
養飲料）、嗜好飲料（コーヒー、ココア、麦汁）、みそ
汁、スープ

【００２３】（６）健康食品 イ）サポニン含有食品（オタネニンジン根含有食品、エ
ゾウコギ含有食品） ロ）糖含有食品〔オリゴ糖（フラクトオリゴ糖含有食
品、イソマルトオリゴ糖含有食品、ガラクトオリゴ糖含
有食品）、多糖類（シイタケ含有食品、ムコ多糖、蛋白
含有食品、コンドロイチン硫酸含有食品、マンネンタケ
（霊芝）含有食品、キチン、キトサン含有食品 ハ）ミネラル含有食品（カルシウム含有食品、アルファ
ルファ含有食品、プルーンエキス食品、β−カロチン含
有食品 ニ）油脂含有食品 ビタミンＥ含有油脂〔麦（小麦、鳩麦）胚芽油、大豆胚
芽油、米胚芽油〕エイコサペンタエン酸含有食品、大豆
レシチン含有食品、γ−リノレン酸含有食品（月見草
油、ボラージ油）、ドコサヘキサエン酸含有食品 ホ）蛋白質含有食品 大豆蛋白含有食品、カゼイン、ホエー蛋白、鯉加工食品 ヘ）タウリン 牡加工食品、シジミ加工食品、緑イ貝加工食品 （７）その他 スッポン加工食品、アミノ酸代謝異常用食品、流動食
（病食）

【００２４】本発明の阻害剤の投与量（摂取量）は、投
与方法、患者の症状、年令等により異なるが、通常１回
０.００１〜３０００ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０
００ｍｇを１日当たり１〜３回である。これらの製剤あ
るいは食品は、本発明の阻害剤を０.０１重量％以上、
好ましくは０.５〜８０重量％の割合で含有することが
できる。これらの製剤あるいは食品は、治療上価値ある
他の成分を含有していてもよい。

【００２５】

【実施例】以下本発明について具体的に説明する。尚、
以下の記述で「部」、「％」とあるのはそれぞれ「重量
部」、「重量％」を意味する。 実施例１ かつお節１２０部に水１０００部を加えて、９０℃で１
時間熱水抽出した後、ざるで濾過して得られた残渣５０
０部（固形分２０％）に、サーモリシン酵素５部、水９
００部を加えて、１％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを
７．５とし、６０℃で１５時間、分解率４０％まで加水
分解し、濾過後、濃縮液１００部（Ｅ−１）〔固形分４
０％〕を得た。該濃縮液を下記の条件で膜処理して、膜
濃縮画分（Ｅ−２）５０部〔固形分４０％〕を取除い
て、膜通過画分（Ｅ−３）５０部〔固形分４０％〕を得
た。

【００２６】 （膜処理条件） 装置 ：クロスフローＵＦ膜試験機（ミリポア社製） 膜 ：ＳＥＰ１０１３（分画分子量３０００、旭化成社製） 加圧条件：窒素ガスにより１．５ｋｇ／ｃｍ²に加圧 線速度 ：１ｍ／ｓｅｃ

【００２７】上記膜通過画分（Ｅ−３）には、Ｉｌｅ−
Ｔｙｒ、Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔ
ｙｒ、Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒ
ｐ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ
−Ａｒｇ−Ａｓｐ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−
Ｍｅｔ、Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ、Ａ
ｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｌｙ
ｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ、Ａｓｐ−Ｔｙｒ
−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏなるオリゴペプチド
がいずれも確認された。確認法としては、まず上記オリ
ゴペプチドを少量ペプチド合成し、標品とした。次にＨ
ＰＬＣで、逆相カラムにより、その標品と同じ保持時間
の画分を分取した。この操作を３回繰り返して最後に同
じ保持時間のピークをプロティンシークエンサーにより
ペプチド配列を決定した。本発明の方法で分子量５００
０以上のポリペプチド成分を測定したところ含有量は３
％であった。

【００２８】それぞれの画分（Ｅ−１、Ｅ−２、Ｅ−
３）のアンギオテンシン変換酵素阻害活性を以下のよう
に測定した。 （アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定）アンギオ
テンシン変換酵素阻害活性の測定は、ＣｈｅｕｎｇとＣ
ｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａ
ｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７（１９７１）〕
に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素 ；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社
製）（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕
した後、遠心分離した上澄液）

【００２９】上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を
１２μｌ及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水
で全体を２５０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を
行った。反応は１Ｎ−ＨＣｌ ２５０μｌを用いて終了
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌを取り出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ₂₂₈）を
測定した。阻害率は阻害剤なしで反応したときのＯＤ
₂₂₈を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ₂₂₈を０
％として求め阻害率５０％の時の阻害剤の濃度ＩＣ
₅₀（μｇ／ｍｌ）で表示した。

【００３０】更に得られた阻害剤について以下の濃縮乾
固時の色相、１％水溶液の苦みと風味の評価を以下のよ
うに行った。 （色相） ◎・・・純白色である。 ○・・・ほどんど白色である。 △・・・やや黄色である。 ×・・・黄色である。 （苦み） ◎・・・苦みがまったくしない。 ○・・・苦みが少しする。 △・・・苦みがする。 ×・・・苦みをかなり感じる。

【００３１】（風味） ◎・・・後味が全く無く、さっぱりとした味である。 ○・・・後味がほとんど残らない。 △・・・後味が残るもののそれほど違和感はない。 ×・・・違和感のある後味が残る。

【００３２】

【表１】 分画成分 収量＊ ＩＣ₅₀ 色相 苦み 風味 （％） （μｇ／ｍｌ） Ｅ−１ ３３．３ ８０ △ △ × Ｅ−２ １６．７ ３００ △ × × Ｅ−３ １６．７ ３０ ◎ ◎ ◎ ＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対 する値とした。 尚Ｅ−１中の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は２０％であっ た。

【００３３】実施例２ 実施例１で得られた濃縮液（Ｅ−１）１００部〔固形分
４０％〕に、エタノールを９５容量％となるように添加
して室温で一晩放置して、析出した画分（Ｅ−４）８５
部〔固形分４０％〕を濾過して取除き、濾液からエタノ
ールを減圧留去して、画分（Ｅ−５）１５部〔固形分４
０％〕を得た。該画分（Ｅ−５）中には実施例１で確認
されたオリゴペプチドを全て含んでいた。該画分（Ｅ−
５）の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量
は５％であった。実施例１と同様に阻害活性を測定し、
色相、苦み、風味を評価し表２に示した。

【００３４】

【表２】 分画成分 収量＊ ＩＣ₅₀ 色相 苦み 風味 （％） （ μｇ／ｍｌ） Ｅ−１ ３３．３ ８０ △ △ × Ｅ−４ ２８．３ ２００ × △ × Ｅ−５ ５．０ ４０ ○ ◎ ◎ ＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対 する値とした。

【００３５】実施例３ 実施例１において、かつお節１２０部に水１０００部を
加えて、ホモジナイズしたものにサーモリシン酵素５部
を加えて実施例１と同様に加水分解を行い、濃縮液（Ｅ
−６）１００部〔固形分４５％〕を得た。該濃縮液を実
施例１と同じ条件で膜処理して、膜濃縮画分（Ｅ−７）
５０部〔固形分４５％〕を取除いて、膜通過画分（Ｅ−
８）５０部〔固形分４５％〕を得た。該画分（Ｅ−８）
中には実施例１で確認されたオリゴペプチドを全て含ん
でいた。該画分（Ｅ−８）の分子量５０００以上のポリ
ペプチド成分の含有量は４％であった。実施例１と同様
に阻害活性を測定し、色相、苦み、風味を評価し表３に
示した。

【００３６】

【表３】 分画成分 収量＊ ＩＣ₅₀ 色相 苦み 風味 （％） （μｇ／ｍｌ） Ｅ−６ ３７．５ １１０ × × × Ｅ−７ １８．８ ３１０ △ × × Ｅ−８ １８．８ ３５ ◎ ◎ ◎ ＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対 する値とした。 尚Ｅ−６中の分子量５０００以上のポリペプチド成分の含有量は２５％であっ た。

【００３７】実施例４ 実施例３において得られた濃縮液（Ｅ−６）１００部
〔固形分４５％〕にエタノールを９５容量％となるよう
に添加して室温で一晩放置して、析出した画分（Ｅ−
９）８０部〔固形分４５％〕を濾過して取除き、濾液か
らエタノールを減圧留去して、画分（Ｅ−１０）２０部
〔固形分４５％〕部を得た。該画分（Ｅ−１０）中には
実施例１で確認されたオリゴペプチドを全て含んでい
た。該画分（Ｅ−１０）の分子量５０００以上のポリペ
プチド成分の含有量は２％であった。実施例１と同様に
阻害活性を測定し、色相、苦み、風味を評価し表４に示
した。

【００３８】

【表４】 分画成分 収量＊ ＩＣ₅₀ 色相 苦み 風味 （％） （μｇ／ｍｌ） Ｅ−６ ３７．５ １１０ × × × Ｅ−９ ３０．０ ２００ △ × × Ｅ−１０ ７．０ ５０ ◎ ◎ ◎ ＊それぞれの分画成分を濃縮乾固して重量を求め、原料（かつお節）の重量に対 する値とした。

【００３９】

【発明の効果】本発明の阻害剤は、魚肉をサーモリシン
酵素で分解して得られるペプチド含有組成物であり、か
つ分子量が５０００以上のポリペプチド成分の含有量を
１０重量％以下としたので、強い阻害活性を示し、尚か
つ色相が良く、苦みがなく後味もよいので摂取しやす
い。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 魚肉をサーモリシン酵素で分解して得ら
   れるペプチド含有組成物であり、かつ分子量が５０００
   以上のポリペプチド成分の含有量を１０重量％以下とし
   たことを特徴とするアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
2. 【請求項２】 ペプチド含有組成物が下記のオリゴペプ
   チドの少なくとも１種を含むことを特徴とする請求項１
   記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。 Ｉｌｅ−Ｔｙｒ、 Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ、 Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、 Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ、 Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、 Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、 Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ、 Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ、 Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ、 Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ａｌａ、 Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ、 Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、 Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈ
   ｉｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ
3. 【請求項３】 魚肉が魚節である請求項１あるいは２記
   載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
4. 【請求項４】 魚肉が魚節の熱水抽出残渣である請求項
   １あるいは２記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
5. 【請求項５】 魚節がかつお節である請求項３あるいは
   ４記載のアンギオテンシン変換酵素阻害剤。