JP2000509036A - 安定化された抗ｂ型肝炎ワクチンタブレット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 安定化されたＢ型肝炎ワクチンタブレットおよびその製造方法であって、該タブレットは安定化された抗原性Ｂ型肝炎ウイルス表面蛋白質を含み、哺乳類への投与に際して、該哺乳類をＢ型肝炎感染に対して免疫性にする。この安定化の鍵は、Ｃ₅Ｈ₁₀Ｏ₅またはアラビアゴムである。

Description

【発明の詳細な説明】 安定化された抗Ｂ型肝炎ワクチンタブレット 発明の概要 本発明は、Ｂ型肝炎を撲滅するためにのちに投与されうる表面抗原を安定化す る方法に関する。特定すれば、該抗原は、タブレットの形態であり、冷却を必要 とせず、そしてその舌下の吸着は抗Ｂ型肝炎注射液に関する要求を排除する。こ れは、安定化剤を通して達成される。 Ｂ型肝炎は肝臓の炎症であり、通常はウイルス感染によるが、ときには毒性薬 剤による。特に、Ｂ型肝炎は長い培養期間、通常は５０−１６０日を伴う、Ｂ型 肝炎ウイルスにより引き起こされるウイルス性疾患であり、通常は感染した血液 、血液由来物質の注射によるかまたは汚染した針、ランセットまたは他の器具の 使用により伝染する。Ｂ型肝炎ウイルスは臨床上および病理学上はＡ型肝炎ウイ ルスに類似しているが、交差防御免疫（cross-protective immunity）はない。 通常、Ｂ型肝炎の疾患は、ワクチンの静脈注射または皮下注射を用いて撲滅さ れる。しかしながら、ワクチンはその活性を保持するために冷却されなければな らない。本発明は、安定化され、よって冷却を必要としない抗Ｂ型肝炎タブレッ トからなる。これらの新規なタブレットは安定化されたＢ型肝炎表面抗原からな る。 即ち、適当な冷却の欠如のために通常は注射液を通じてＢ型肝炎ワクチンを入 手できないはずの人が、該抗Ｂ型肝炎ワクチンタブレットを入手するはずである 。これは、第三国の国々に生きる人々に関して特に真実である。 さらに、これらのタブレットは痛みを伴う注射液に関する要求を排除し、そし て肝炎およびＨＩＶを含む様々な疾患の汚染した針により起こり得る感染の危険 性を減じる。 本発明の原理は、舌下のリンパ管叢が表面抗原蛋白質を吸着し、即ち全消化道 （entire digestive tract）および肝臓を効果的に迂回するとの事実を基に発見 された。リンパ管叢は、ホメオスタシスの機構と同時に、表面蛋白質を毛細血管 へと結局は移動させて、次に上大静脈へと移動させて、全身への分配を達成する 。即ち、この方法の達成する効果は皮下注射を通して得られる効果と同一である 。 特定すれば、舌下リンパ管叢に接近可能なあらゆる物質（即ち、その成分の何 れもがリンパ管の毛細血管の直径よりも大きな直径を有さない）が、肝臓に入り 込む静脈門に侵入しないが、結局は胸管内で終結する(win dup)。胸管から、物 質（例えば、抗原性表面蛋白質）は上大静脈を通して血流に侵入し(肝臓を迂回 して)、そして直接右心房へと入り、全身の分配を達成する。 本発明の利点は多く、冷却の要求を排除することを含み、生成物を、熱帯地方 および第三国の環境に送るのに特に適するようにする。 本発明は注射液の要求も排除し、それによりＡＩＤＳなどの疾患の伝染の可能 性を減じる。また、注射の苦痛および不快感を回避する。 最後に、本発明の方法の利用により約６０％の生産コストの低下がある。 好ましい態様の詳細な説明 実施例１ 本発明は、一連の混合工程を包含する。Ｂ型肝炎ワクチンは、安定化された舌 下タブレットの形態であり、２０グラムの凍結乾燥した抗原性Ｂ型肝炎表面抗原 （９７％を越える純度）を２５００ミリリットルの２回蒸留したＨ₂Ｏ；５００ グラムの薬剤グレードの乳糖；および４グラムの高度に精製された（”ＨＰ”） 凍結乾燥アルブミンと混合することから始まる。次に、１２５グラムのＮａ₂Ｈ ＰＯ₄および１１０グラムのＮａＨ₂ＰＯ₄を、４０グラムのチメロサールに加え て上記溶液中に混合する。 この混合物を次に保存溶液と混合する。保存溶液はアルコールを含んでいては ならない。保存溶液は、１２５０グラムの薬剤グレードのＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅；７，８０ ０グラムの薬剤グレードのＮａＣｌ；および８，８００グラムの薬剤グレードの Ａｌ₂ＨＯ₃を蒸留Ｈ₂Ｏで２０倍希釈することにより創製される。この混合は、 約４０°Ｆの温度および約６０％の相対湿度において行われる。混合は、外科手 術上滅菌された環境下で実施されて、自動化された装置により実施されうる。保 存溶液の重要なところは、主に、アラビアゴムとして一般に公知の安定化剤Ｃ₅ Ｈ₁₀Ｏ₅である。 次に、この混合物を、５０％乳糖プラス５０％米澱粉（共に薬剤グレード）８ ８．３５キログラム顆粒の賦形剤上に噴霧スプレーする。希釈物は１１．６５キ ログラムの溶解した固形物を含む。乾燥後、これは全部で１００キログラムであ り、各１００ｍｇの１，０００，０００個の舌下タブレットを圧縮するのに十分 である。圧縮される顆粒のスプレーは、上記の量に関して１００分かそれ以上か けて実施しなければならない。この工程の間、顆粒の全重量を徹底的且つ一定に 撹拌するべきである。タブレットは高密度で圧縮されなければならないが、舌で 壊されつくすのに１０分以上かけるべきである。全工程は、食物製造プラクティ ス（ＧＭＰ）の基準に完全に適合した環境下で実施されなければならない。タブ レットは、次に、６−１０℃の間の温度にて真空乾燥される。 最終生成物は、気泡パッケージされたストリップ中に保存されなければならな い。気泡パッケージ後、最終生成物は冷却を必要とせず、そして２８℃間での室 温において安全に保存されうる。しかしながら、６カ月から５年間の長期間につ いては、温和な冷却（６℃から１２℃）下での保存が薦められる。ワクチンは凍 結されたままであるべきではない。 抗Ｂ型肝炎ワクチンタブレットに関する表面抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスの表面 をコードする遺伝子を組換えＤＮＡ法並びに標準の分子生物学の技術を用いて、 そのゲノムに挿入することにより形質転換された酵母培養液から得られる。精製 された表面抗原は凝集物として得られて、約２２ｎｍの粒子を形成し、そしてチ メロサールが保存剤として添加された（０．５ｍ／２０ｇの投薬量）水酸化アル ミニウムゲル（０．５ｍｇ Ａ／３＋／２０ｇの投薬量）に最後は吸着される。 最終生成物は、透明な上清、本質的に蛋白質を含まず、溶解された安定剤物資を 含むリン酸バッファー塩（ＰＢＳ）、および第２の９８％より多い抗原を吸着し た沈殿水酸化アルミニウムゲルの２つの相を規定するコンテナーの底に沈殿した 白／灰色の物質の外観を有する。撹拌すると、不透明な灰色の懸濁液が生じて数 分間続くが、これは安定化に使用された材料である。発酵および精製の工程は最 適化され、スケールアップされ、そして標準化されて、バッチからバッチの一貫 性および再現性を維持する。 これらのタブレットの効果を試験するために、標準ＥＬＩＳＡを利用して２４ 匹のハムスターが肝炎抗原Ｂを含まないことを証明した。１２匹のハムスターの 舌下の周囲に、タブレット化されたワクチンの溶液を塗ったが、タブレットの質 量はハムスターの体重に対応させ、初日、７日目および１３日目の各ワクチン接 種日に２回行った。対照群は未処理のままとした。最終投与の７日後、標準ＥＬ ＩＳＡ試験を利用して、Ｂ型肝炎抗体がＢ型肝炎処理したハムスターの血液血清 中に検出された。対照群の１２匹は陰性のままであった。次に、全２４匹のハム スターにＢ型肝炎ウイルスを感染させた。タブレット化ワクチンを処理した動物 は何れも疾患を患わなかったが、一方全対照群はＢ型肝炎に感染した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ， ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，Ｎ Ｚ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．抗原性Ｂ型肝炎表面蛋白質をＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅である安定化剤と混合することか らなる、のちに哺乳類に投与されてＢ型肝炎の感染を撲滅することのできる抗原 性表面蛋白質の安定化法。 ２．約７５重量％から８５重量％のＢ型肝炎蛋白質対約１５重量％から２５重 量％のＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅の範囲でＢ型肝炎蛋白質がＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅と存在する、請求項１記 載の方法。 ３．約８０重量％のＢ型肝炎蛋白質対約２０重量％のＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅の範囲でＢ型 肝炎蛋白質がＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅と存在する、請求項２記載の方法。 ４．哺乳類がヒトである、請求項３記載の方法。 ５．混合後に、抗原性Ｂ型肝炎表面蛋白質とＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅を次に舌下タブレット に形成する、請求項４記載の方法。 ６．抗原性Ｂ型肝炎表面蛋白質と混合する前にＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅が保存溶液液中に存 在する、請求項５記載の方法。 ７．２０グラムの抗原性Ｂ型肝炎表面蛋白質を、１，２５０グラムの薬剤グレ ードのＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅を含む保存溶液と混合する、請求項６記載の方法。 ８．２０グラムの抗原性Ｂ型肝炎表面蛋白質を凍結乾燥して水、乳糖およびル ブミンと混合することにより、保存溶液と混合する前に初期混合物を創製する、 請求項７記載の方法。 ９．保存溶液と混合する前に、Ｎａ₂ＨＰＯ₄、ＮａＨ₂ＰＯ₄およびチメロサー ルを初期混合物に加える、請求項８記載の方法。 １０．保存溶液が、２回蒸留した水、ＮａＣｌおよびＡｌ₂Ｏ₃も含む、請求項 ９記載の方法。 １１．初期混合物と保存溶液の混合を約４°Ｆおよび約６０％の相対湿度にて 実施する、請求項１０記載の方法。 １２．初期混合物と保存溶液の混合物を、約５０％の乳糖並びに約５０％の米 澱粉の賦形剤上に噴霧スプレーして最終混合物を創製する、請求項１１記載の方 法。 １３．最終混合物を舌下タブレットに圧縮して、タブレットを６から１０℃の 温度にて真空乾燥する、請求項１２記載の方法。 １４．非感染哺乳類がのちにＢ型肝炎ウイルスに感染したならば該非感染哺乳 類への投与に際してＢ型肝炎を撲滅することが可能であって、抗原性Ｂ型肝炎表 面蛋白質および安定化剤Ｃ₅Ｈ₁₀Ｏ₅を含む、安定化された抗Ｂ型肝炎ワクチンタ ブレット。 １５．約７５重量％から８５重量％のＢ型肝炎蛋白質対約１５重量％から２５ 重量％のＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅の範囲でＢ型肝炎蛋白質が存在する、請求項１４記載のタブ レット。 １６．約８０重量％のＢ型肝炎蛋白質対約２０重量％のＣ₅Ｈ₁₀Ｏ₅の範囲でＢ 型肝炎蛋白質が存在する、請求項１５記載のタブレット。 １７．非感染哺乳類がヒトである、請求項１６記載のタブレット。 １８．舌下タブレットである、請求項１６記載の方法。 １９．哺類の舌の下において溶解するのに最大約１０分かかる、請求項１８記 載のタブレット。