JP2000239180A

JP2000239180A - カルシウム結晶化抑制作用を有する細菌の菌体から得られるタンパク質を有効成分とするカルシウム結晶化抑制・吸収促進剤及びこれを含有してなる飲食物並びに飼料

Info

Publication number: JP2000239180A
Application number: JP11040700A
Authority: JP
Inventors: Hitoshi Obata; 斉小幡; Satoko Fukumoto; 聡子福元; Kazuhiro Yamade; 和弘山出; Hidehisa Kawahara; 秀久河原; Jiro Nishikawa; 二郎西川; Yoji Saeki; 洋二佐伯
Original assignee: Lotte Co Ltd
Current assignee: Lotte Co Ltd
Priority date: 1999-02-18
Filing date: 1999-02-18
Publication date: 2000-09-05

Abstract

(57)【要約】【課題】体内でのカルシウムの結晶化を抑制し、カル
シウムの腸管内での吸収を促進させるカルシウム結晶化
抑制・吸収促進剤及びこれを含有してなる飲食物並びに
飼料を提供する。【解決手段】カルシウム結晶化抑制作用を有する細
菌、特に南極のヴァンダ湖に生息している生命工学工業
技術研究所に寄託されている４種類の新規な細菌の菌体
から得られるタンパク質を有効成分とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、細菌の菌体から得
られるタンパク質の新規な用途に関し、より具体的に
は、カルシウム結晶化抑制作用を有する細菌の菌体から
得られるタンパク質を有効成分とするカルシウム結晶化
抑制・吸収促進剤及びこれを含有してなる飲食物並びに
飼料に関する。

【０００２】

【従来の技術】人体を構成する無機質の中で最も多く存
在するのはカルシウムといわれており、その９９％が骨
や歯の構成に利用されており、残りの１％は各種酵素の
活性の発現、筋肉の収納、細胞の興奮の沈静あるいは血
液凝固作用等の生命活動にとって重要な役割を演じてい
る。

【０００３】例えば、人間の膵臓で作られ消化作用を助
ける膵液の中には、高濃度のカルシウム成分が含まれて
いるが、何らかの理由で生体のバランスが崩れると、炭
酸カルシウムの結晶化が起きて結石ができる。また、膵
臓以外にも体内では種々の臓器にカルシウム結石が生
じ、それが人体に悪影響を及ぼすことから、結石の予防
及び治療に利用し得るカルシウムの結晶化を抑制する物
質の開発が待たれている。

【０００４】このように重要なカルシウムではあるが、
その摂取量を見てみれば、日本人に必要とされる所要量
は成人１日当たり６００ｍｇといわれているが、厚生省
保健医療局による平成６年国民栄養調査の結果報告によ
れば、実際の摂取量は５４５ｍｇと必要量を下回ってい
るのが実状である。カルシウムの摂取不足は、骨粗鬆
症、高血圧等の重大な疾病を引き起こすことが知られて
おり、カルシウムの摂取不足は、社会的問題となってい
る。さらに、食物として胃腸管内で摂取されるカルシウ
ムは、複雑な機構で腸管から血液内に吸収されるが、カ
ルシウム塩やカルシウム剤の腸管内における吸収率は５
０％以下であり、半分以上が吸収されずに体外に排出さ
れるという報告もある。そのため、腸管内でのカルシウ
ムの吸収性を高める物質の開発も行われている。

【０００５】その１つとして、カゼインホスホペプチド
（ＣＰＰ）が開発されている。ＣＰＰは、カゼインにト
リプシンを作用させ、加水分解した分解物中に得られる
ホスホペプチドであり、カルシウムと結合して可溶性複
合体を形成する。このため、水溶液中でカルシウムが沈
殿するのを抑制することでカルシウムを可溶化し、カル
シウムの吸収率を高めると考えられている（ジャパンフ
ードサイエンス、第１巻、第２１〜３２頁［1990年］；
特開昭５８−１７０４４０号公報；特開平７−２４１１
７２号公報）。しかしながら、ＣＰＰは、カゼインの酵
素分解物であるため、原料であるカゼインを酵素反応さ
せる必要があり、また酵素分解の副産物であるペプチド
が苦味を呈するため、飲食品へ混合する場合にはこの苦
味ペプチドを十分に分離する必要がある等幾つかの問題
点を有しており、また価格も大変高価である。

【０００６】ポリ−Ｌ−グルタミン酸も腸管内でカルシ
ウムの吸収率を高める作用（Biosci. Biotech. Bioche
m., 第58巻, 第1662〜1665頁［1994年］）を有すること
が知られているが、これは合成品であるため食品添加物
として許可されておらず、安全性等のため利用されてい
ない。また、微生物により産生されるポリ−γ−グルタ
ミン酸（特開平３−３０６４８号公報）は、カルシウム
結晶化抑制活性が低く、かつ溶液の粘度が極めて高いた
め、取扱いが不便である。

【０００７】さらに、カルシウムの吸収を促進する物質
としては、骨由来のペプチド（特開平４−１６１６５号
公報）、酪酸を基本成分とするもの（特開平４−１０８
３６０号公報）があるが、これらは製造上並びに利用上
の問題があり実用化には至っていない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記従来技
術の問題点を解決し、体内でのカルシウムの結晶化を抑
制し、カルシウムの腸管内での吸収を促進するカルシウ
ム結晶化抑制・吸収促進剤及びこれを含有してなる飲食
物並びに飼料の提供を目的とするものである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意研究を重ねた結果、細菌、特に南極
のヴァンダ湖に生息している生命工学工業技術研究所に
寄託されている４種類の新規な細菌の菌体から得られる
タンパク質が、カルシウムの結晶化を抑制し、これによ
りカルシウムの吸収を促進する効果を有することを見出
し、その知見に基づいて本発明を完成させた。

【００１０】すなわち本発明に係るカルシウム結晶化抑
制・吸収促進剤は、カルシウム結晶化抑制作用を有する
細菌、特に生命工学工業技術研究所に寄託されている４
種類の新規な細菌の菌体から得られるタンパク質を有効
成分とするものである。

【００１１】本発明の飲食物及び飼料は、上記カルシウ
ム結晶化抑制・吸収促進剤を含有するものである。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明を詳細に説明すれば、本発
明者らは、一年中３０メートルの厚さの氷に覆われてい
る南極大陸の太平洋側の岸付近に位置し、カルシウム濃
度が非常に高いヴァンダ湖から、カルシウム結晶化抑制
作用を有するグラム陽性細菌４株を分離した。それら４
株の細菌の中で、カルシウム結晶化抑制効果が最も高い
細菌の分類学的諸性質を調べた結果、Bacillus属と同定
し、Bacillus species２０−１株とした。その細菌を含
め、本発明のカルシウム結晶化抑制作用を有する細菌
は、Bacillus species ２０−１（受託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１７１９３）、Strain１９（受託番号ＦＥＲＭＰ
−１７１９４）、Strain ２０（受託番号ＦＥＲＭＰ
−１７１９５）及びStrain ２５Ｗ（受託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１７１９６）として、通産省工業技術院生命工学
工業技術研究所に上記受託番号で寄託されている。

【００１３】その菌学的性質を下記の表１に示すが、そ
れらの菌株の菌学的諸性質の試験及び分類は、下記の文
献に従って実施した。バージェイズマニュアルオブシステマティック
バクテリオロジー[Bergey’s Manual of Systematic
Bacteriology]、第２版（1986年）医学細菌同定の手びき[Manual for the Identificati
on of Medical Bacteria]、第２版（1983年）

【００１４】その結果は、Bacillus species ２０−１
株は胞子を形成するグラム陽性桿菌であり、運動性があ
り、好気条件下で発育、カタラーゼ活性陽性、グルコー
スから酸生成することからバチルス[Bacillus]属である
と同定された。また、オキシダーゼ活性陰性、嫌気条件
下で発育、Voges−Proskauerテスト陰性、アラビノース
から酸を生成するが、キシロースやマンニトールから酸
を生成しない、５℃では発育しないが１０℃及び３０℃
で発育、ｐＨ６．８で発育、デンプンの分解能があり、
クエン酸塩を利用しない。以上の様な菌学的諸性質を示
した。

【００１５】さらに、他の３菌株（Strain １９、Stra
in ２０、Strain ２５Ｗ）の菌学的諸性質を以下に示
すと、上記細菌は、胞子を形成するグラム陽性菌で、好
気条件下で発育、カタラーゼ活性陽性、嫌気条件下で発
育、Voges-Proskauerテスト陰性、グルコースから酸を
生成するが、アラビノース，キシロース，マンニトール
から酸を生成せず、クエン酸塩を利用しない。オキシダ
ーゼ活性においては、Strain ２０株は陽性であるが、
Strain １９株とStrain ２５Ｗ株は陰性であった。し
かしながら、これらの諸性質からでは上記３菌株の属、
種を同定することができず、未だ不明である。

【００１６】

【表１】

【００１７】本発明の細菌の菌体から得られるタンパク
質を抽出する方法としては、一般的に行われている菌体
破砕方法を用いることができる。例えば、フレンチプレ
スやＸ−プレス等の加圧型細胞破壊装置を用いる方法、
ボールミルやダイノーミル等を用いる機械的磨砕法、超
音波処理法、ホモジナイザーを用いる方法、凍結融解
法、浸透圧処理法、リゾチーム等を用いる酵素処理法が
挙げられるが、それらを組み合わせて菌体からタンパク
質を抽出することもできる。タンパク質の安定性、抽出
効率を考慮すれば、好ましくは加圧型細胞破壊、機械的
磨砕、超音波処理、ホモジナイザー等の物理的破砕方法
を用いることが望まれる。上記タンパク質の抽出物は、
必要に応じ、硫酸プロタミンやストレプトマイシン硫酸
塩等による核酸の除去、硫酸アンモニウム等の塩析やエ
タノール等の有機溶剤による沈澱、等電点沈殿法による
分画、イオン交換、吸着、ゲル濾過、疎水もしくはアフ
イニティー等のクロマトグラフィーを用いて精製した
り、透析や濃縮過程を施しても良い。

【００１８】上記の方法によって得られた本発明のタン
パク質の抽出物は、０．０４〜３．０μｇ／ｍｌのタン
パク質濃度でカルシウムの結晶化を抑制することが認め
れた。また、抽出物をProteinase Kで処理すると、活性
の低下が認められたことから活性の中心はタンパク質で
あることも確認されている。

【００１９】本発明のカルシウム結晶化抑制・吸収促進
剤は、上記の方法で調製した抽出物をそのまま使用して
もよいが、一般には適当な液体担体に溶解するかもしく
は分散させ、または適当な粉末担体と混合するかもしく
はこれに吸着させ、所望する場合にはさらにこれらに乳
化剤、分散剤、懸濁剤、展着剤、漫透剤、湿潤剤、安定
剤等を添加し、液剤、注射剤、カプセル剤、錠剤、粉剤
等の製剤の形で、カルシウムの結晶化の抑制を目的とし
て膵臓結石の予防や治療に使用したり、カルシウムの吸
収促進を目的として骨粗鬆症の予防や治療に使用するこ
とができる。

【００２０】また本発明のカルシウム結晶化抑制・吸収
促進剤を含有してなる飲食物としては、各種飲食物、例
えば、清涼飲料水、果汁飲料、醗酵飲料並びに牛乳等の
飲料、チューインガム、キャンディ、錠菓、グミゼリ
ー、ビスケット並びにチョコレート等の菓子、アイスク
リーム、氷菓等の冷菓、ヨーグルト、チーズ等の乳製
品、ハム、ソーセージ等の畜肉製品、カマボコ、チクワ
等の魚肉練り製品、パン、ホットケーキ、各種惣菜類、
プリン、スープ等があげられる。

【００２１】さらには、本発明のドックフード、キャッ
トフード等のペットフード、家畜の餌等の飼料は、上記
カルシウム結晶化抑制・吸収促進剤を含有してなる飼料
である。

【００２２】本発明のカルシウム結晶化抑制・吸収促進
剤を、特にカルシウムの吸収促進を目的として使用する
場合には、カルシウムを含有する原料、例えば、牛乳、
ヨーグルト、チーズ等の乳製品に配合し、カルシウムを
含有しない場合には、カルシウムと共に配合すること
で、カルシウムの吸収促進効果を一層促進することがで
きる。いずれの場合においても、その割合は、カルシウ
ムの結晶化抑制タンパク質抽出物／カルシウム（重量／
重量）の比率を０．００５以上にすることが好ましい。

【００２３】本発明のカルシウム結晶化抑制・吸収促進
剤の有効量としては、一概に規定することは困難である
が、経□的に摂取する場合には特に制限はなく、腸管内
においてカルシウムの吸収促進効果を発揮するには、
０．０８ｍｇ／ｋｇ／日以上が適当であり、好ましくは
０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。

【００２４】また、体内の結石予防並びに治療を目的と
する場合も同様に、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日で
摂取するのが好ましい。

【００２５】以下に実施例を示し、本発明をさらに詳細
に説明する。

【００２６】

【実施例】

【実施例１】カルシウム結晶化抑制タンパク質の調
製 Bacillus species ２０−１株は、トリプチケースソイ
ブロス（ＴＳＢ）培地で１８℃、２４時間前培養し、Ｔ
ＳＢ培地に０．５％（ｗ／ｖ）ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏを
添加した液体培地で２５℃、４８時間本培養した。菌体
を集菌し、１０ｍＭのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．
７）で２回洗浄し、約２倍量の０．５ＭのＥＤＴＡ（ｐ
Ｈ８．０）水溶液中に懸濁させ、フレンチプレス（加圧
型細胞破壊装置）で３０秒サイクルで１５分間破砕し
た。その後、細胞抽出液のタンパク質濃度の１．５倍の
ストレプトマイシン硫酸塩を添加し、超遠心分離（１０
０，０００×ｇ、４℃、２時間）を行い、核酸を除去し
た。上澄みを蒸留水で透析（４℃）し、ＰＥＧ６０００
を用いてタンパク質として６００μｇ／ｍｌ以上まで濃
縮し、さらに硫安塩析を行い、Bacillus species ２０
−１株抽出タンパク質を得た。

【００２７】

【実施例２】カルシウム結晶化抑制タンパク質の調
製実施例１で得られたBacillus species ２０−１株抽出
タンパク質をさらに精製した。ＰＥＧ６０００を用い
てタンパク質濃度として２１．４ｍｇ／ｍｌ以上まで濃
縮した２０−１株抽出タンパク質に、−２０℃に冷却
したエタノールを全容量の６０％になるよう添加した
後、３０分間放置、次いで遠心分離（２７，７００×
ｇ、４℃、３０分間）を行った。さらに、上澄みに−２
０℃に冷却したエタノールを全容量の８０％になるよう
添加した後、３０分間放置、次いで遠心分離（２７，７
００×ｇ、４℃、３０分間）を行った。少量の１０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．７）に懸濁後、蒸
留水（４℃）に対して透析し、ＰＥＧ６０００でタンパ
ク質濃度として１．９９ｍｇ／ｍｌまで濃縮することに
より、さらに精製したBacillus species ２０−１株抽
出タンパク質を得た。

【００２８】

【実施例３】カルシウム結晶化抑制効果の測定ＮａＨＣＯ_３水溶液とＣａＣｌ_２水溶液との反応からＣ
ａＣＯ_３が析出する反応（ＮａＨＣＯ_３＋ＣａＣｌ_２→
ＣａＣＯ_３＋ＨＣｌ＋ＮａＣｌ）を利用して、カルシウ
ム結晶化抑制効果を判定した。

【００２９】すなわち、２０ｍＭ、ｐＨ８．７に調整し
た炭酸水素ナトリウム水溶液（１．５ｍｌ）に、タンパ
ク質抽出液を３０μｌ添加し、スターラーで良く攪拌
した。その後、２０ｍＭ、ｐＨ８．７に調整した塩化カ
ルシウム水溶液（１．５ｍｌ）を添加し、２５℃におい
て反応させた。反応過程中、波長５７０ｎｍにおける吸
光度を経時的に測定した。

【００３０】最終タンパク質濃度としてBacillus speci
es ２０−１株抽出タンパク質を０．５μｇ／ｍｌ、
２．０μｇ／ｍｌ含むもの、対照として蒸留水を添加し
たものについてカルシウム結晶化抑制効果を試験し、そ
の結果を図１に示す。

【００３１】蒸留水の場合、約２００秒迄に急激な吸光
度の上昇が観察され、約２５０秒後に最大値を示し、反
応が完了した。２０−１株抽出タンパク質（最終タン
パク質濃度２．０μｇ／ｍｌ）を添加した場合、吸光度
の上昇が認められず、完全にカルシウムの結晶化を抑制
した。２０−１株抽出タンパク質（最終タンパク質濃
度０．５μｇ／ｍｌ）を添加した場合、カルシウム結晶
の核形成の遅れが認められた。

【００３２】

【実施例４】カルシウム結晶化抑制効果の測定実施例３のカルシウム結晶化抑制効果測定方法に準じ、
Bacillus species ２０−１株抽出タンパク質につい
て、波長５７０ｎｍにおける吸光度を経時的に測定する
ことによりカルシウム結晶抑制効果を試験し、その結果
を図２に示す。なお、２０−１株抽出タンパク質の最
終濃度を０．０４μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌとし
た。

【００３３】２０−１株抽タンパク質（最終タンパク
質濃度０．１μｇ／ｍｌ）の場合、吸光度の上昇は認め
られず、完全にカルシウムの結晶化を抑制した。また、
２０−１株抽出タンパク質（最終タンパク質濃度０．
０４μｇ／ｍｌ）の場合、カルシウム結晶の核形成の遅
れが認められた。

【００３４】

【実施例５】カルシウム結晶化反応阻害効果の測定次に、実施例３の測定方法に準し、カルシウム結晶化反
応が進んでいる際のBacillus species ２０−１株抽出
タンパク質の反応阻害効果を試験した。試験は、最初
にカルシウム結晶化を進行させ、６０秒後に２０−１株
抽出タンパク質を最終タンパク質濃度２．０μｇ／ｍ
ｌになるように添加し、波長５７０ｎｍにおける吸光度
を経時的に測定した。その結果を図３に示す。

【００３５】２０−１株抽出タンパク質を添加する
と、その後の吸光度の上昇は認められず、完全にカルシ
ウム結晶化が阻害されていることを確認した。

【００３６】

【実施例６】他の物質とのカルシウム結晶化抑制効果
の比較実施例３の結果より、蒸留水の場合、約２００秒後迄に
急激な吸光度の上昇が見られ、約２５０秒後に最大値を
示して反応が完了した。従って、Bacillus species ２
０−１株抽出タンパク質（２．０μｇ／ｍｌ）と他の
物質、すなわちカゼインホスホペプチド（ＣＰＰIII）
（２μｇ／ｍｌ）、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（２μｇ／
ｍｌ）、ポリ−γ−グルタミン酸（２μｇ／ｍｌ）、Ｅ
ＤＴＡ（１．５×１０^−４Ｍ）、クエン酸（０．４×１
０^−４Ｍ）、ホスビチン（１５μｇ／ｍｌ）、ヘパリン
（１５μｇ／ｍｌ）、コンドロイチン硫酸Ｃ（１５μｇ
／ｍｌ）、アルブミン（１０μｇ／ｍｌ）、ラクトフェ
リン（１０μｇ／ｍｌ）、リパーゼ（１０μｇ／ｍ
ｌ）、トリプシノーゲン（１０μｇ／ｍｌ）、α−キモ
トリプシノーゲンＡ（１０μｇ／ｍｌ）、α−アミラー
ゼ（１０μｇ／ｍｌ）、エステラーゼ（１０μｇ／ｍ
ｌ）について、以下に示す式１により、反応２００秒後
の吸光度から阻害率を算出し。他の物質とのカルシウム
結晶化抑制効果を比較検討した。その結果を表２に示
す。

【００３７】

【式１】

【００３８】

【表２】

【００３９】表２に示すように、実施例１の方法に準じ
調製したBacillus species ２０−１株抽出タンパク質
（最終タンパク質濃度２．０μｇ／ｍｌ）を添加した
場合、結晶化阻害率は１００％であり、他の物質と比較
してみると、カルシウム可溶化剤として知られるカゼイ
ンホスホペプチド（ＣＰＰIII）で６２．８％、ポリ−
Ｌ−グルタミン酸（シグマ社製；No.P-4886，ナトリウ
ム塩）で５９．４％、納豆より抽出しエタノール沈澱し
て精製されたポリ−γ−グルタミン酸で４９．０％の阻
害率であった。ＥＤＴＡやクエン酸のようなキレート剤
ではそれぞれ１４．４％と２４．５％の阻害率であり、
また、炭酸カルシウムの結晶化を阻害すると報告されて
いるホスビチンは３０．１％の阻害率であった。その
他、リンタンパク質や酵素類を添加しても大きな結晶化
阻害効果は観察されなかった。本発明のBacillus speci
es ２０−１株より抽出した菌体タンパク質は低濃度
で著しくカルシウムの結晶化を阻害した。

【００４０】

【実施例７】他の細菌とのカルシウム結晶化抑制効果
の比較実施例６の方法に準じ、Bacillus species ２０−１株
以外に、本発明のStrain １９、Strain ２０、Strain
２５Ｗの菌体タンパク質、並びに他の細菌であるBaci
llus属のBacillus subtilis、南極大陸のヴァンダ湖か
ら分離したStrain ２、Strain ４−１、Strain ５、Str
ain １５、Strain １７について、比較試験を実施し
た。尚、タンパク質の調製は、実施例１に準じて行っ
た。その結果を表３に示す。

【００４１】

【表３】

【００４２】表３に示すように、南極大陸のヴァンダ湖
から分離した細菌の中で、Bacillusspecies ２０−１
株以外に、Strain １９、Strain ２０及びStrain ２
５Ｗの菌体タンパク質もカルシウム結晶化抑制効果を有
することが確認された。しかしながら、同じ南極由来の
Strain ２、Strain ４−１、Strain ５、Strain１５
並びにStrain １７やBacillus subtilisでは、カルシ
ウム結晶化抑制効果は認められなかった。

【００４３】また、本発明の４種類の細菌（Bacillus s
pecies ２０−１株、Strain １９、Strain ２０、St
rain ２５Ｗ）は新規であり、そのカルシウム結晶化抑
制効果が従来公知のものより顕著に優れていることか
ら、これらの菌体から得られるタンパク質も新規なタン
パク質であると予想される。

【００４４】

【実施例８】下記の処方に従ってチューインガムを調製
した。ガムベース２０．０％砂糖５５．０％ブドウ糖２３．７％軟化剤１．０％抽出タンパク質０．３％

【００４５】

【実施例９】下記の処方に従ってチューインガムを調製
した。ガムベース２０．０％キシリトール７５．０％還元麦芽糖３．８％軟化剤１．０％抽出タンパク質０．２％

【００４６】

【実施例１０】下記の処方に従って錠菓を調製した。砂糖７５．０％乳糖２０．０％グリセリン脂肪酸エステル０．２％香料０．４％抽出タンパク質０．１％精製水４．３％

【００４７】

【実施例１１】下記の処方に従ってチョコレートを調製
した。砂糖４１．０％カカオマス１５．０％全脂粉乳２５．０％ココアバター１８．０％乳化剤０．３％香料０．４％抽出タンパク質０．３％

【００４８】

【実施例１２】下記の処方に従って飲料を調製した。果糖ブドウ糖液糖５．００％砂糖４．５０％酸味料１．２８％香料０．２０％抽出タンパク質０．０２％精製水８９．００％

【００４９】

【実施例１３】下記の処方に従って飲料を調製した。オレンジ果汁８５．２５％砂糖１１．７０％クエン酸２．００％香料１．００％抽出タンパク質０．０５％

【００５０】

【実施例１４】下記の処方に従ってアイスクリームを調
製した。果糖ブドウ糖液糖０．５％砂糖８．７％酸味料１．２％香料０．３％精製水８９．０％安定剤０．２％抽出タンパク質０．１％

【００５１】

【実施例１５】下記の処方に従ってドックフードを調製
した。トウモロコシ３３．０％小麦粉３５．０％大豆粕２１．０％米ぬか（脱脂）５．５％ミートミール５．０％ミネラルミックス０．２％抽出タンパク質０．３％

【００５２】

【実施例１６】下記の処方に従ってカプセル剤を調製し
た。抽出タンパク質５０．０％乳糖４８．０％ステアリン酸マグネシウム２．０％

【００５３】上記成分を均一に混合し、その混合末をハ
ードカプセルに充填した。

【００５４】

【実施例１７】下記の処方に従って注射剤を調製した。抽出タンパク質０．０５％ブドウ糖１．００％注射用水９８．９５％

【００５５】上記混合溶液をメンブランフィルターで濾
過後に再び除菌濾過を行い、その濾過液を無菌的にバイ
アルに分注し、窒素ガスを充填した後、密封して注射剤
とした。

【００５６】

【実施例１８】下記の処方に従って錠剤を調製した。抽出タンパク質２０．０％直打用微粒No.209（富士化学社製）４８．０％結晶セルロース３０．０％ステアリン酸マグネシウム２．０％

【００５７】上記成分を均一に混合し、その混合未を打
錠して、１錠２００ｍｇの錠剤とした。

【００５８】直打用微粒No.209（メタケイ酸アルミン酸
マグネシウム２０％、トウモロコシデンプン３０％、乳
糖５０％）

【００５９】

【実施例１９】下記の処方に従ってシロップ剤を調製し
た。抽出タンパク質０．１％単シロップ３０．０％精製水６９．９％

【００６０】抽出タンパク質を、精製水で完全に溶解
し、単シロップを加えて混合し、シロップ剤とした。

【００６１】

【実施例２０】下記の処方に従ってキャンディを調製し
た。抽出タンパク質０．２％砂糖５０．０％水飴３５．３％香料０．５％精製水１４．０％

【００６２】

【実施例２１】下記の処方に従ってビスケットを調製し
た。抽出タンパク質０．５％小麦粉５０．６％コーンスターチ５．１％砂糖１２．７％マーガリン６．５％食塩０．３％炭酸ナトリウム１．３％炭酸アンモニウム０．５％大豆レシチン０．３％全卵４．１％香料０．３％精製水１７．８％

【００６３】上記材料を混合してドウを形成し、延展後
これを成型してオーブンで焙焼し、ビスケットを製造し
た。

【００６４】下記に、カルシウム吸収促進を目的とし
て、カルシウムと共に本発明のカルシウム結晶化抑制・
吸収促進剤を含有した飲食物及び飼料の実施例を記載す
る。

【００６５】

【実施例２２】下記の処方に従ってチューインガムを調
製した。ガムベース２０．０％砂糖５５．０％ブドウ糖２３．０％軟化剤１．０％炭酸カルシウム０．５％抽出タンパク質０．５％

【００６６】

【実施例２３】下記の処方に従ってチューインガムを調
製した。ガムベース２０．０％砂糖７５．０％還元麦芽糖３．６％軟化剤１．０％第二リン酸カルシウム０．２％抽出タンパク質０．２％

【００６７】

【実施例２４】下記の処方に従って錠菓を調製した。砂糖７４．０％乳糖２０．０％グリセリン脂肪酸エステル０．２％香料０．４％炭酸カルシウム０．８％抽出タンパク質０．３％精製水４．５％

【００６８】

【実施例２５】下記の処方に従ってチョコレートを調製
した。砂糖４１．０％カカオマス１５．０％全脂粉乳２５．０％ココアバター１８．０％炭酸カルシウム０．３％乳化剤０．３％香料０．２％抽出タンパク質０．２％

【００６９】

【実施例２６】下記の処方に従って飲料を調製した。果糖ブドウ糖液糖５．００％砂糖４．５０％酸味料１．２７％香料０．２０％抽出タンパク質０．０２％塩化カルシウム０．０１％精製水８９．００％

【００７０】

【実施例２７】下記の処方に従って飲料を調製した。オレンジ果汁８５．２０％砂糖１１．７０％クエン酸２．００％香料１．００％塩化カルシウム０．０５％抽出タンパク質０．０５％

【００７１】

【実施例２８】下記の処方に従ってアイスクリームを調
製した。果糖ブドウ糖液糖０．３％砂糖８．７％酸味料１．０％香料０．２％精製水８９．０％安定剤０．３％塩化カルシウム０．２％抽出タンパク質０．３％

【００７２】

【実施例２９】下記の処方に従って産卵鶏用飼料を調製
した。トウモロコシ５１．０％マイロ１５．３％大豆粕１７．０％魚粉３．３％米ぬか８．２％食塩０．２％動物性油脂３．０％ビタミンミックス０．２％乳酸カルシウム１．０％抽出タンパク質０．８％

【００７３】

【実施例３０】下記の処方に従ってカプセル剤を調製し
た。抽出タンパク質５０．０％乳糖４７．０％第二リン酸カルシウム１．０％ステアリン酸マグネシウム２．０％

【００７４】上記成分を均一に混合し、その混合末をハ
ードカプセルに充填した。

【００７５】

【実施例３１】下記の処方に従って注射剤を調製した。抽出タンパク質０．０５％ブドウ糖１．００％第二リン醸カルシウム１．００％注射用水９７．００％

【００７６】上記混合溶液をメンブランフィルターで濾
過後に再び除菌濾過を行い、その濾過液を無菌的にバイ
アルに分注し、窒素ガスを充填した後、密封して注射剤
とした。

【００７７】

【実施例３２】下記の処方に従って錠剤を調製した。抽出タンパク質２０．０％直打用微粒No.209（富士化学社製）３７．０％結晶セルロース３３．０％ＣＭＣカルシウム８．０％ステアリン酸マグネシウム２．０％

【００７８】上記成分を均一に混合し、その混合末を打
錠して、１錠２００ｍｇの錠剤とした。

【００７９】直打用徹粒No.209（メタケイ酸アルミン酸
マグネシウム２０％、トウモロコシデンプン３０％、乳
糖５０％）

【００８０】

【実施例３３】下記の処方に従ってシロップ剤を調製し
た。抽出タンパク質０．１％単シロップ３０．０％精製水６９．８％炭酸カルシウム０．１％

【００８１】抽出タンパク質を、精製水で完全に溶解
し、シロップを加えて混合し、シロップ剤とした。

【００８２】

【発明の効果】本発明の細菌の菌体から得られるタンパ
ク質は、カルシウム結晶化抑制・吸収促進作用が、従来
技術で得られた物質と比較して顕著に優れており、前記
タンパク質を有効成分とする本発明のカルシウム結晶化
抑制・吸収促進剤及びこれを含有してなる飲食物並びに
飼料は、優れたカルシウムの結晶化抑制・吸収促進効果
を奏する。

【図面の簡単な説明】

【図１】カルシウム結晶化に対するBacillus species
２０−１株抽出タンパク質濃度の影響を検討したグラ
フである。

【図２】カルシウム結晶化に対するBacillus species
２０−１株抽出タンパク質濃度の影響を検討したグラ
フである。

【図３】カルシウム結晶成長に対するBacillus species
２０−１株抽出タンパク質の阻害効果を検討したグ
ラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 3/00 Ａ６１Ｋ 31/00 ６０３ 43/00 ６４３ＤＡ６１Ｋ 35/74 35/74 ＤＣ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者河原秀久大阪府枚方市長尾元町７丁目11番34号 (72)発明者西川二郎千葉県東葛飾郡沼南町塚崎1035の１ (72)発明者佐伯洋二埼玉県大宮市春野１丁目４番アーバンみらい東大宮３の806号Ｆターム(参考） 2B150 AA01 AA06 AB01 AB20 AC02 DC23 DD11 DD26 DD61 DH04 4B018 LB01 LB08 MD04 MD20 MD85 ME05 MF01 4B065 AA15X AC20 BA22 BB02 BC02 BC03 BD01 BD15 CA41 CA43 4C084 AA02 BA03 BA44 CA04 DC50 MA02 MA17 MA23 MA35 MA37 MA52 MA66 ZC212 4C087 AA01 AA02 BC64 CA16 MA02 MA52 ZC21

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】カルシウム結晶化抑制作用を有する細菌
の菌体から得られるタンパク質を有効成分とすることを
特徴とするカルシウム結晶化抑制・吸収促進剤。
【請求項２】前記細菌が、生命工学工業技術研究所に
寄託されている下記４種類の細菌のいずれか一つである
請求項１記載のカルシウム結晶化抑制・吸収促進剤。 Bacillus species ２０−１（受託番号ＦＥＲＭＰ−
１７１９３） Strain １９（受託番号ＦＥＲＭＰ−１７１９４） Strain ２０（受託番号ＦＥＲＭＰ−１７１９５）及
び Strain ２５Ｗ（受託番号ＦＥＲＭＰ−１７１９６）
【請求項３】請求項１または２記載のカルシウム結晶
化抑制・吸収促進剤を含有してなる飲食物。
【請求項４】請求項１または２記載のカルシウム結晶
化抑制・吸収促進剤を含有してなる飼料。
【請求項５】さらにカルシウムが配合されていること
を特徴とする請求項３記載の飲食物。
【請求項６】さらにカルシウムが配合されていること
を特徴とする請求項４記載の飼料。