ITMI981311A1 - Estratti di hypericum perforatum e formulazioni che li contengono - Google Patents

Description

Descrizione dell'invenzione industriale avente per titolo: "ESTRATTI DI HYPERICUM PERFORATUM E FORMULAZIONI CHE LI CONTENGONO"

La presente invenzione riguarda un estratto di Hypericum perforatum (iperico)ottenibile per frazionamento di estratti idroalcolici alcolici o acetonici della pianta con esteri di alcoli da 1 a 5 atomi di carbonio non miscibili con acqua e le formulazioni che lo contengono.

Le sommità fiorite di Hypericum perforatum contengono numerose classi di sostanze strutturalmente diverse dotate, direttamente o indirettamente,di attività a livello del sistema nervoso centrale.

E' noto infatti che l'Hypericum perforatum contiene una serie di composti attivi quali ipericina, iperforina e i flavoni dimerici che esplicano negli animali e nell'uomo un'attività antidepressiva ed ansiolitica. Diversi sono i meccanismi di azione di questi composti: azione anti-MAO, azione sul release della serotonina, come sarà più avanti descritto nel dettaglio, ed attività a livello dei recettori benzodiazepinici. L'attività dell'ipericina è stata discussa a lungo a causa dei dati contrastanti riportati in letteratura.

La controversa attività antidepressiva dell'Ipericina è stata recentemente confermata in modelli farmacologici in vivo. E' stato infatti dimostrato che 1'ipericina risulta essere attiva se somministrata in presenza di procianidine dimeriche contenute negli estratti di Hypericum perforatimi (45th Annual Congress of thè Society for Medicinal Plant Research, September 7th-12th, 1997, Regensburg, Germany,V. Butterwecke et al.,Abstract No.Oli).

L'iperforina è stata oggetto di numerosi studi recenti attraverso i quali è stato possibile stabilirne il suo inportante ruolo come antidepressivo; studi effettuati dalla Richiedente hanno dimostrato che questa molecola possiede attività serotonino-mimetica. Altri componenti ritenuti importanti sono i flavoni dimerici derivati dall'apigenina che sono considerati delle benzodiazepine naturali, come riportato in "Naturally Occurring Benzodiazepines Structure, distribution and function", I. Izquierdo and J.Medicina Eds., 1993,pag. 33.

Questi prodotti, ed in modo particolare l'iperforina, in condizioni normali di estrazione e conservazione sono poco stabili; secondo WO 97/13489 (Schwabe), il contenuto di iperforina in un estratto idroalcolico di iperico scende praticamente a zero già dopo poche settimane.

Secondo WO 97/13489 per ottenere estratti stabili a contenuto costante di iperforina, l'estrazione, la purificazione e la conservazione devono essere effettuate in presenza di antiossidanti quali vitamina C e suoi esteri,amminoacidi solforati, etc..

EP0599307 (Schwabe) descrive l'eliminazione di ipericina, responsabile di indesiderati effetti fotosensibilizzanti, per mezzo di polivinilpirrolidone ed altri agenti chimici; tale brevetto descrive estratti con un contenuto di iperforina di almeno il 5% ottenuti senza l'impiego di antiossidanti.

Non sono disponibili dati farmacologici e clinici comparativi fra estratti metanolici convenzionali o quelli in accordo con la monografia della Commissione E, e gli estratti preparati secondo i brevetti EP 0599307 e WO 97/13489. E' d'altra parte noto che l'estratto convenzionale di Hypericum perforatimi contiene grandi quantità di flavonoidi, che sono potenti radicai scavengers e quindi stabilizzanti naturali di sostanze facilmente ossidabili, unitamente ad altre sostanze che possono contribuire in modo significativo all'attività dell'estratto.

Si è ora trovato che è possibile ottenere estratti di Hypericum perforatimi stabili e particolarmente attivi, contenenti i principali composti responsabili dell'attività farmacologica, in particolare ipericina, iperforina, flavonoidi e xantoni, attraverso un processo che conprende:

a) estrazione di sommità fiorite di Hypericum perforatimicon metanolo o acetone;

b) filtrazione degli estratti e loro concentrazione;

c) diluizione dei concentrati ottenuti al punto b) con acqua o miscele acqua/metanolo;

d) estrazione della miscela acquosa ottenuta al punto c) con esteri alitatici;

e) filtrazione ed evaporazione a secco degli estratti esterei ottenuti al punto d);

f) solubilizzazione in una soluzione di un acido organico in etanolo acquoso e evaporazione del solvente a temperatura inferiore a 40“C.

Il processo dell'invenzione viene preferibilmente condotto effettuando la prima estrazione (stadio a) con metanolo, con rapporti peso/volume droga:solvente compresi fra 1:2 e 1:20, preferibilmente fra 1:2 e 1:10, a temperature comprese tra la temperatura ambiente e la temperatura di riflusso del solvente.

Per esteri alifatici da inpiegarsi nello stadio c), si intendono esteri quali acetato di etile,acetato di metile,acetato di bufile.

L'uso dell'acetato di etile è particolarmente preferito.

L'estrazione con tali esteri è effettuata dopo trattamento dell'estratto metanoiico o acetonico concentrato con pari volume di acqua o con miscele metanolo/acqua in rapporti in volume conpresi fra 1:2 e 1:5.

Il rapporto in volume tra miscela acquosa ed estere non è critico e può variare entro ampi limiti,ma è di norma compreso tra 1:0,5 e 1:2.

L'estrazione viene preferibilmente ripetuta più volte, generalmente almeno tre volte,utilizzando aliquote fresche di solvente.

Lo stadio f) è effettuato sciogliendo il concentrato ottenuto in e) in una soluzione di un acido organico quale acido citrico, malico, acetilaspartico o trifluoroacetico in etanolo al 95%.

L'estratto ottenuto secondo l'invenzione contiene iperforina in quantità comprese fra il 5 e il 20% in peso impiegando biomasse vegetali spontanee, mentre si ottengono valori di iperforina fra il 10 e il 50% in peso impiegando biomasse vegetali selezionate. In entrambi i casi, il contenuto in ipericine totali è dell'1-3% mentre i flavoni dimerici sono presenti in quantità dall'l al 2%, sempre in peso. Questa ampia variabilità di contenuti è legata al periodo di raccolta della pianta, al contenuto in semi nelle sommità fiorite e alla quantità di steli legnosi presenti nella biomassa.

Questo estratto, paragonato all'estratto totale in rapporto alla relativa parte estratta dal solvente organico, presenta sorprendentemente una maggiore attività in vari modelli farmacologici utilizzati per la valutazione dell'effetto anti-depressivo ed ansiolitico ed è stabile nel tempo senza manipolazioni.

Estratti di Hypericum perforatimi preparati secondo quanto riportato in letteratura ed eliminando l'ipericina secondo le modalità riportate perdono la pseudoipericina nonché la quasi totalità dei flavonoidi oligomerici e polimerici con una conseguente riduzione dell'attività biologica.

Il processo dell'invenzione consente inoltre di ottenere estratti stabili senza necessità di ulteriori manipolazioni. Gli estratti vanno comunque conservati al riparo dalla luce per evitare fotodegradazioni.

L'estratto così ottenuto presenta la seguente attività sull'inibizione dell’uptake della serotonina(5-HT) e della dopamina (DA)..

Tabella T - Effetto dell’estratto di Hypericùm peforatum preparato secondo 1 ' esempio 1 nell' inibizione dell'uptake di

Come risulta chiaro da questi dati, l'estratto secondo l'invenzione presenta una potenza molte volte superiore all'iperforina e ad altri estratti noti, in particolare all'estratto esanico che può essere considerato l'estratto più vicino a quello dell'invenzione.

Nei test in vivo, l'estratto secondo l'invenzione ha mostrato una superiore attività rispetto ai prodotti noti costituiti prevalentemente da estratti alcolici, metanolici, esanici, con o senza ipericina; l'estratto ha dimostrato inoltre una maggior riproducibilità e stabilità di azione nel tempo. Come test in vivo per verificare l'effetto antidepressivo sono stati scelti il test del tempo di fuga e l'inibizione dell'assunzione di etanolo in ratti bevitori secondo noti modelli della letteratura.

Nel test del tempo di fuga 1'estratto secondo l'invenzione ha mostrato sorprendentemente una superiore attività rispetto agli estratti noti ed un'attività confrontabile con quella di noti farmaci quale imipramina. In questo test i ratti vengono immobilizzati e sottoposti a lievi e brevi scariche elettriche inevitabili per 50 min. (pre test). Ventiquattro ore dopo gli animali vengono testati per la loro capacità di sottrarsi agli stessi stimoli sulla coda, in una situazione in cui la fuga è consentita. Un ratto attua in media 26 fughe su 30 stimoli (controlli naive), mentre un animale sottoposto al pre test ne attua soltanto 1-3 (controlli ED). L'iporeattività indotta dal pre test non si instaura in ratti pretrattati per 1-3 settimane con antidepressivi quali imipramina o fluoxetina. Gli estratti di Iperico somministrati ai ratti per via orale un'ora prima dell'esposizione allo stress inevitabile producono un'aumentata reattività al test di fuga che si esalta se il pretrattamento viene effettuato per 1-2 settimane.

Tabella II: Effetto antidepressivo di estratti di Hypericum perforatimie loro frazioni nel ratto sul test di fuga con 2 settimane di pre test.

Nel test della riduzione del consumo di alcol nei Sardinia rats (Test che è un indice di depressione e di ansia) secondo note modalità di letteratura, gli estratti dell'invenzione dopo tre giorni di somministrazione danno luogo ad una diminuzione del consumo di alcol a favore dell'acqua del 75% rispetto ai controlli, mentre la riduzione del consumo di alcol dopo trattamento con l'estratto metanolico o esanico è rispettivamente del 30 e del 40%.

L'estratto dell'invenzione si presta ad essere inserito in formulazioni per uso orale quali soluzioni pronte, capsule di gelatina molle o dura,compresse e conpresse a rilascio controllato. I dosaggi di estratto nelle formulazioni vanno da 10 a 100 mg pro dose nelle formulazioni normali e fino a 300 mg nelle formulazioni a rilascio controllato essendo in questo caso la dose consigliata di 300 mg prò dose pro die.

Gli esempi più sotto riportati illustreranno l'invenzione in maggior dettaglio.

Esempio 1: Preparazione di un estratto secco di Hypericum perforatimistandardizzato nelle componenti attive.

In un impianto di estrazione da 25 L di capacità vengono estratti 4 kg di sommità fiorite di Hypericum perforatimi con 15 L di metanolo per 4 volte. Gli estratti metanolici riuniti vengono concentrati sotto vuoto fino a 2,5 L; il concentrato,dopo diluizione con pari volume di acqua è controestratto per tre volte con 1,5 L di etile acetato. La fase organica filtrata è concentrata a secco sotto vuoto. Il residuo viene sciolto in una soluzione di 2 g di acido citrico in 1,31 di etanolo al 95%. La fase organica è quindi evaporata a secco sotto vuoto a tenperatura non superiore a 4Q“C. si ottengono kg 0,32 di un estratto marrone-giallo contenente il 20% di iperforina, lo 0,9% di ipericine totali (ipericina più pseudoipericina)e 1% di diapigenina.

Esempio 2: Preparazione di un estratto di Hypericum perforatimi standardizzato nelle componenti attive.

60 kg di sommità fiorite di Hypericum perforatum essiccati meccanicamente dopo la raccolta ad una temperatura non superiore a 60”C, vengono estratti a debole riflusso con 20 volumi di acetone ripartiti in quattro estrazioni. Gli estratti, riuniti dopo filtrazione per l'eliminazione dei residui di biomassa, vengono concentrati sotto vuoto fino a secco. Si ottengono 3 kg di estratto contenente lo 0,4% di ipericina e circa il 25% in iperforina.Questo estratto viene sospeso in 10 L di una miscela di metanolo/acqua 3:7 ed il tutto controestratto con acetato di butile fino al completo esaurimento in sostanze polifenoliche, controllando l'esaurimento per cromatografia su strato sottile su gel di silice e con eluente etile acetato/metanolo/I^O 100:13,5:10. La fase acquosa viene eliminata mentre quella organica dopo disidratazione su Na2S04 è concentrata a secco sotto vuoto ad una temperatura non superiore a 40°C.Si ottengono 1,6 kg di estratto secco contenente il 3,5% di ipericine totali, circa il 40% di iperforina e l'l,4% di flavoni dimerici.

Esempio 3: Preparazione di un estratto multicomponente di Hypericum perforatimi,standardizzato nelle componenti attive.

60 kg di sommità fiorite di Hypericum perforatum essiccati meccanicamente dopo la raccolta ad una temperatura non superiore a 60*C vengono estratti in continuo con metanolo 98% fino all'esaurimento in sostanze estraibili; l'estratto metanolico è concentrato fino a 30 L ed il concentrato diluito con pari volume di acqua filtrando ai materiali insolubili che si separano nel corso della diluizione; la soluzione chiara è estratta per 3 volte con 30 L per volta di etile acetato saturo di acqua, quindi disidratata su Na2S04 e il solvente è eliminato sotto vuoto. Si ottengono kg 3,8 di estratto giallo-verde contenente il 25% di iperforina, l'l,2% di ipericina e l'l,2% di diflavoni dimerici.

Esempio 4: Soluzione contenente l'estratto lipofilo di Hypericum perforatimi preparato secondo 1'Esempio 1.

Esempio 5: Conpresse rivestite contenenti l'estratto Hypericum perforatimipreparato secondo l'Esempio 2.

Esempio 6:Capsule di gelatina molle.

Claims (9)

1. RIVENDICAZIONI 1. Un processo per la preparazione di estratti di Hypericum perforatum che comprende: a) estrazione di sommità fiorite di Hypericum perforatum con metanolo o acetone; b) filtrazione degli estratti e loro concentrazione; c) diluizione dei concentrati ottenuti al punto b) con acqua o miscele acqua/metanolo; d) estrazione della miscela acquosa ottenuta al punto c) con esteri alifatici; e) filtrazione ed evaporazione a secco degli estratti esterei ottenuti al punto d); f) solubilizzazione in una soluzione di un acido organico in etanolo acquoso e evaporazione del solvente a temperatura inferiore a 40‘C.
2. 2. Processo secondo la rivendicazione 1 in cui l'estrazione dello stadio a)è effettuata con metanolo.
3. 3. Processo secondo la rivendicazione 1 in cui l'estrazione dello stadio a) è effettuata con acetone.
4. 4. Processo secondo una delle rivendicazioni da 1 a 3, in cui gli esteri alifatici utilizzati nello stadio d) sono scelti fra acetato di etile,acetato di metile,acetato di butile.
5. 5. Processo secondo la rivendicazione 4 in cui si utilizza acetato di etile.
6. 6. Estratti di Hypericum perforatum ottenibili dai processi delle rivendicazioni 1-5.
7. 7. Estratti secondo la rivendicazione 6 aventi un contenuto in iperforina compreso tra il 10 e il 50% in peso, un contenuto in ipericina tra l'1 e il 31 in peso e un contenuto in flavoni dimerici tra l'1 e il 2% in peso.
8. 8. Composizioni farmaceutiche contenenti come principio attivo un estratto delle rivendicazioni 6 o 7.
9. 9. Uso degli estratti delle rivendicazioni 6 o 7 per la preparazione di medicamenti antidepressivi.