HUP0300651A2 - Nátrium-hidrogén-cserélő 1-es típusú inhibitor (NHE-1) alkalmazása gyógyszerkészítmények előállítására és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents

Abstract

A találmány tárgya (I) képletű NHE-1 inhibitor, ennek alkalmazásagyógyszer előállítására és gyógyászati készítmény, amely az NHE-1inhibitort tartalmazza. Az NHE-1 inhibitorral szövet iszchémiábóleredő szövetkárosodás csökkenthető. Ó

Description

P05 00 6b1

Nátrium-hidrogén-cserélő 1-es típusú inhibitor (NHE-1) t'dkj.J Mci-CtS, cc j -_{v i;},s t v vite. w p elő dili -to Sc· (ΊΧ _{( (} . . , KCZZÜTTOJ PÉLDÁNY kc v^wbUx^L

A találmány tárgya nátrium-hidrogén-cserélő 1-es típusú NHE-1 inhibitor.

A miokardiális iszchémiás sérülés előfordulhat járóbetegeknél és operáció előtti helyzetekben egyaránt, és hirtelen halálhoz, miokardiális infarktushoz vagy szívszélhűdéshez vezethet. Fennáll tehát az a kielégúletlen igény, hogy megelőzzük vagy minimalizáljuk a miokardiális iszchémiás sérülés, különösen a perioperatív miokardiális infarktus előfordulásának veszélyét. Az ilyen terápia várhatóan életmentő, és csökkentheti a kórházi kezelések számát, fokozhatja az életminőséget és csökkentheti az ossz egészségügyi kiadásokat a magas rizikójú páciensek esetében.

A farmakológiai szívvédelem csökkentheti a miokardiális infarktus előfordulását és előrehaladását, és az ilyen sebészeti állapotok esetében előforduló működési zavarokat (perioperatív módon). Azon kívül, hogy csökkenthető a miokardiális károsodás, és javítható az iszchémiás szívbetegségben szenvedő páciensek poszt-iszchémiás miokardiális működése, a szívvédelem csökkenti továbbá a szív-morbiditás előfordulását, és a miokardiális infarktusnak betudható mortalitást, és a rizikós páciensek működési zavarait (pl. 65 év feletti betegek esetében, testmozgás intoleranciában, koronária érbetegségben, diabetes mellitus-ban, magas vérnyomásban szenvedő betegeknél), amelyek nem szíveredetű sebészetet igényelnek.

Az iszchémia és reperfúzió után megfigyelt miokardiális sérülésért felelős mechanizmusokat nem teljesen értjük.

Aktaszám: 97618-4185A KY/hzs

-2Különbözö publikációkat tettek közzé, amelyekben leírták a guanidinszármazékok alkalmazását pl. aritmia kezelésénél.

Egy nem régen publikált szabadalmi bejelentésben (PCT/IB99/00206, WO 99/43663 számon tették közzé 1999. szeptember 2-án) leírnak számos NHE-1 inhibitort, többek között az [5-ci klop rop i I-1-(ki no I i n-5-i I)-1 H-p i razo l-4-ka rbon i I ]guanidint. A publikációban továbbá azt állítják, hogy „előnyösek a közvetlenül megelőző vegyület sói, mégpedig a mono- vagy dimezilát-sók”. Az egyik előnyös vegyületcsoporthoz tartoznak a hidroxi-kinolin vegyületek, ezek a publikált bejelentés 102. igénypontjában szerepelnek. Természetesen ezen hidroxikinolin vegyületek közül néhány több tautomer formában előfordulhat, pl. a szabadalmi bejelentés szerint leírt kinolinformában. Ezenkívül az 1999. október 29-én bejelentett 60/162,374 sz. átmeneti USA szabadalmi bejelentésben szerepelnek a fent leírt NHE-1 inhibitor kristályformái.

Az 1998. június 25-én publikált PCT/JP97/04650 sz. szabadalmi bejelentésben leírják az N-[(szubsztituált 5-tagú heteroaril)]-guanidin vegyületeket, amelyek Na⁺/H⁺ cserélő inhibitorként használhatók, és ennek megfelelően hatékonyak különböző betegségek kezelésére, pl. magas vérnyomás, aritmia, angina pectoris, miokardiális infarktus, arterioszklerózis és diabéteszes szövődmények kezelésére.

Nyilvánvalóan szükség van tehát olyan vegyületekre, amelyekkel a perioparatív miokardiális iszchémia kezelhető, és ezen a területen folyamatos kutatás szükséges.

A találmány (I) képletű vegyületre, prodrugjára vagy gyógyászatilag elfogadható sójára vagy a prodrug sójára vonatko

-3zik, azzal a megkötéssel, hogy az [5-ciklopropil-1 -(ki η ο I i n-5-i I )1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidint kizárjuk.

A „prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója” kifejezés is magában foglalja azt a feltételt, hogy kizárt az [5-ciklopropil-1 -(kinolin-5-il)-1 H-pi rázol-4-karbonil]guanidin.

A találmány kiterjed a lényegében tiszta [5-ciklopropi 1-1 -(2k i η ο I ο n-5-i I) -1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidinre is, vagy ennek gyógyászatilag elfogadható sójára.

Más néven a fenti vegyület elnevezése [5-cikiopropiI-1 -(2ki no I ο n-5-i I) -1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidin. Előnyös só a hidroklorid-, és legelőnyösebb a monohidroklorid-só.

A találmány kiterjed továbbá az (I) képletű vegyület prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazására gyógyszer előállítására, amellyel emlős, pl. ember NHE-1-gyel közvetített állapota vagy betegsége kezelhető.

A találmány kiterjed továbbá az (I) képletű vegyület vagy prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazására gyógyszer előállítására, amellyel szövetkárosodás csökkenthető, pl. lényegében megelőzhető a szövetkárosodás, és ezáltal védhető a szövet, amely károsodás az iszchémiából ered.

Előnyös iszchémiás szövetek, amelyeket egyénileg vagy csoportként veszünk, lehetnek szív-, agy-, máj-, vese-, tüdő-, bél-, vázizom-, lép-, hasnyálmirigy-, ideg-, gerincvelő-, retinaszövet, erezet vagy bélszövet.

Különösen előnyös iszchémiás szövet a szívszövet.

-4Különösen előnyös, ha az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját perioperatív miokardiális iszchémiás sérülés megelőzésére adagoljuk.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját előnyösen megelőzően adagoljuk.

Az iszchémiás károsodás előfordulhat szervátültetésnél a szervben vagy a páciensnél.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját előnyösen a szívműtét vagy nem szívműtét előtt, alatt és/vagy röviddel utána adagoljuk.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját, gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját adagolhatjuk lokálisan.

Előnyös dózis az (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója esetében kb. 0,01 - 100 mg/kg/nap. Különösen előnyös dózis az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója esetében kb. 0,01 - 50 mg/kg/nap között mozog.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel csökkenthető a miokardiális szövetkárosodás, pl. lényegében megelőzhető a szövet károsodása, amivel védhető a szövet a műtét alatt, pl. koronária ér bypass beültetésnél (CABG), érsebészeti műtétnél, perkután transzluminális koszorúér angioplasztikánál (PTCA),

-5szervátültetésnél vagy más, nem szívsebészeti műveletnél emlősöknél, pl. férfinél vagy nőnél.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására miokardiális szövetkárosodás csökkentésére (pl. lényegében megelőzhető a szövetkárosodás, ezáltal megvédhető a szövet) olyan pácienseknél, akik folyamatos szív-iszchémiás eseményt mutatnak (akut koszorúér szindróma, pl. miokardiális infarktus vagy instabil angina), vagy agyi iszchémiás eseményeknél, pl. stroke-nál, emlősöknél, pl. nőnél vagy férfinél.

A találmány tárgya továbbá az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel krónikusan csökkenthető a miokardiális szövetkárosodás (pl. lényegében megelőzhető a szövetkárosodás, és ezáltal megvédhető a szövet) olyan páciensnél, akinél koszorúér betegséget diagnosztizáltak, pl. előzetes miokardiális infarktus vagy instabil angina esetében, vagy olyan pácienseknél, akiknél nagy a rizikója a miokardiális infarktusnak, pl. 65 év felettiek vagy koszorúér szívbetegség kettő vagy több rizikófaktora áll fenn, emlősöknél, pl. nőnél vagy férfinél.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amelyet emlősöknek krónikusan orálisan lehet adagolni.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug

-6sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel szívérrendszeri betegség kezelhető emlősöknél, pl. nőnél vagy férfinél.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. nő vagy férfi arterioszklerózisa kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősöknél, pl. férfinél vagy nőnél a magas vérnyomás kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő aritmiája kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő angina pectorisa kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel szívhipertrófia kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő vesebetegsége kezelhető.

-7A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására diabéteszes komplikációk kezelésére.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő resztenózisa kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő sejtburjánzásos betegsége kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő rákbetegségei kezelhetők.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő fibrózisos betegségei kezelhetők.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő érgomoly vesezsugorodása kezelhető.

A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatiig elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő tüdőfibrózisa kezelhető.

-8A találmány további tárgya az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel agyi iszchémiás rendellenességek kezelhetők.

A találmány kiterjed továbbá az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazására gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő miokardiális stunning betegsége kezelhető.

A találmány kiterjed továbbá az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazására gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő miokardiális működési zavara kezelhető.

A találmány tárgya továbbá az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő agyérbetegségei kezelhetők.

A találmány tárgya továbbá az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója alkalmazása gyógyszer előállítására, amellyel emlősök, pl. férfi vagy nő szervnagyobbodása (hipertrófiája) vagy hiperpláziája kezelhető.

A találmány tárgya továbbá az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját és gyógyászatilag elfogadható hordozót, oldószert vagy hígítót tartalmazó gyógyászati készítmények.

A találmány tárgya továbbá gyógyszerkészítmény iszchémiából eredő szövetkárosodás csökkentésére, amely az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható

-9sója vagy a prodrug sója gyógyászatilag hatékony mennyiségét és gyógyászatilag elfogadható hordozót, oldószert vagy hígítót tartalmaz.

A „csökkentés” kifejezés magában foglalja a részleges megelőzést vagy a teljes megelőzést, amely bár annál nagyobb, mint ami abból származna, ha a beteg egyáltalán nem szedne gyógyszert vagy placebót szedne, de kevesebb, mint 100 %, és ezenkívül kiterjed a teljes megelőzésre is.

Az „iszchémiából eredő károsodás” kifejezés olyan állapotokra vonatkozik, amelyek közvetlenül függnek a szövetek irányába történő csökkent véráramlástól, pl. egy rög vagy véredény elzáródás következtében, ami a szóban forgó szövetet ellátja vérrel, és ami többek között eredményezi, hogy kevesebb oxigén jut az ilyen szövethez, romlik a szövet teljesítménye, működési zavar és/vagy nekrózis lép fel a szövetben. Ezenkívül ahol a véráramlás vagy a szerv perfúzió kvantitatív megfelelő, a vér vagy a szerv perfúziós közeg oxigénhordozó kapacitása csökkenhet, pl. hipoxiás környezetben úgy, hogy a szövet oxigénellátása csökken, romlik a szövet teljesítménye, szövet működési zavar és/vagy szövet nekrózis lép fel.

A „kezelés” kifejezés magában foglalja a megelőző és gyógyító kezelést is.

A „gyógyászatilag elfogadható só” kifejezés nem toxikus, anionos sókat jelent, amelyek olyan anionokat tartalmaznak, mint pl. klorid, bromid, jodid, szulfát, biszulfát, foszfát, acetát, maleát, fumarát, oxalát, laktát, tartarát, citrát, glükonát, metánszulfonát, azaz mezilát, vagy 4-toluol-szulfonát. Minthogy több mint egy bázikus csoport létezik, a kifejezés magában

-lefoglalja a többszörös sókat, pl. disókat is. A kifejezés kiterjed a nem toxikus kationos sókra is, pl. nátrium-, kálium-, kalcium-, magnézium-, ammonium- vagy protonált benzatin- (N,N’dibenzil-etilén-diamin), kolin-, etanol-amin-, dietanol-amin-, etilén-diamin-, meglamin- (N-metil-glükamin), benetamin- (Nbenzil-fenetil-amin), piperazin- vagy trometamin- (2-amino-2hidroxi-metil-1,3-propán-diói)-sókra.

A „prodrug” kifejezés olyan vegyületekre utal, amelyek gyógyszer prekurzorok, amelyek az adagolást követően in vivo a gyógyszert szabadítják fel kémiai vagy fiziológiai úton, pl. a prodrug a fiziológiás pH-η vagy enzimes működés következtében a kívánt gyógyszerformává alakul. Itt is fennáll az a megkötés, hogy az [5-ciklopropi I-1 -(ki η ο I i n-5-i I) -1 H-pirazol-4karbonilj-guanidint kizárjuk.

A „gyógyászatilag elfogadható” kifejezés azt jelenti, hogy a hordozónak, hígítónak, segédanyagnak és/vagy sónak kompatibilisnek kell lennie a készítmény további komponenseivel, és a páciens számára sem szabad károsnak lenni.

A „reakció-inert oldószer” vagy „inért oldószer” olyan oldószerre vagy oldószerek elegyére vonatkozik, amely nem reagál a kiindulási anyagokkal, a reagensekkel, az intermedierekkel vagy a termékekkel oly módon, hogy károsan befolyásolná a kívánt termék termelését.

A találmány szerinti vegyület radiojelzett formában is létezhet, azaz a vegyület tartalmazhat egy vagy több olyan atomot, amelynek atomtömege vagy tömegszáma eltér a természetben szokásosan előforduló atomtömegtől vagy tömegszámtól. A híddrogén és szén radioizotópjaihoz tartozik a ²H, ³H és ¹⁴C. A ta

-11 lálmányhoz tartozik az a vegyület is, amely ilyen radioizotópokat és/vagy más atomok más radioizotópjait tartalmazza. Különösen előnyös a tríciumozott, azaz ³H, és szén-14, azaz ¹⁴C radioizotóp az előállítás egyszerűsége és a kimutathatóság szempontjából. A radiojelzett (I) képletü vegyületet általában a szakember számára jól ismert módszerrel lehet előállítani. A radiojelzett vegyületek előnyösen úgy állíthatók elő, hogy a reakcióvázlatokban és/vagy példákban bemutatott eljárásokat hajtjuk végre, és a könnyen hozzáférhető radiojelzett reagenst használjuk a nem radiojelzett reagens helyett.

A találmány további részleteit az alábbiakban közöljük.

Az (I) képletű vegyület 5-ciklopropil-1 -(ki η o l i n-5-i I) -1 Hpirazol-4-karbonil]-guanidin humán anyagcsereterméke. Az 5ciklopropil-1 -(kinolin-5-il)-1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidin humán egyedeknek történő intravénás adagolása után kapott humán plazmamintákból azonosították. A vegyület szerkezetét egymástól függetlenül kémiai szintézissel igazolták. Egy más vonatkozásban az [5-ciklopropil-1 -(2-kinolon-5-il)-1 H-pirazol-4karbonilj-guanidint úgy állíthatjuk elő, hogy embernek adagolunk [5-ciklopropil-1 -(kinolin-5-il)-1 H-pi rázol-4-karbonilJguanidint, és a kívánt metabolitot a plazmából izoláljuk. Egy másik változat szerint nem szükséges a metabolitot az emberből izolálni, mert in vivo termelődik.

Általában a találmány szerinti vegyületet a kémiai szakember számára ismert eljárások analógiájára állíthatjuk elő, különösen az itt található leírás fényében. Bizonyos gyártási eljárásokat adunk meg a találmány szerinti vegyület előállítására, és

-12- * * az alábbi reakciósémákkal ábrázoljuk. További eljárások találhatók a kísérleti részben.

A szintézist az 1. reakcióvázlat szemlélteti.

Az 1. reakcióvázlat szerint egy (IA) képletű vegyületet, melyet Capps, J.D.; Hamilton, C.S. J. Am. Chem. Soc. 1938, 60, 2104 irodalom szerint állítunk elő, feloldunk protikus oldószerben, pl. etanolban, és megfelelő redukáló szerrel, pl. ónkloriddihidráttal redukálunk. A kapott elegyet keverés közben kb. 0 °C-tól kb. 115 °C-ig melegítjük kb. 30 perctől kb. 24 óráig. A kapott elegyet kb. 23 °C-ra hűtjük és leszűrjük. A kapott szilárd anyagot megfelelően tisztítjuk, pl. sósavval, pl. 1 mólos vizes sósavval eldörzsöljük kb. 100 °C-on kb. 1 óra hosszat, majd kb. 23 °C-ra lehűtjük, leszűrjük és hidroklorid sója formájában kapjuk a (II) képletű vegyületet. Egy másik változat szerint a (II) képletű vegyületet az elegyből izolálhatjuk szabad bázis formájában, szervetlen bázissal meglúgosítva, és megfelelő szerves oldószerrel extraháljuk. A (II) képletű vegyületet más sók formájában is izolálhatjuk. A szakember számára ismeretes más redukciós módszereket is alkalmazhatunk, pl. katalitikus hidrogénezést is használhatunk.

A (II) képletű vegyületet sósavban és vízben diazotáljuk nátrium-nitrit alkalmazásával, kb. 0 °C-on, kb. 15 perctől kb. 2 óra hosszat. A kapott diazóniumsó oldatot megfelelő redukáló szerrel, pl. ónklorid-dihidráttal sósavban és vízben redukáljuk kb. 0 °C-tól kb. 23 °C-ig, kb. 30 perctől 6 óra hosszat. A kapott szilárd anyagot leszűrjük, alkalmas módon tisztítjuk, pl. sósavval eldörzsöljük (pl. 1 mólos vizes sósavval), kb. 23 °C-on kb. 30 percig. A (III) képletű vegyületet hidroklorid só formájában ’··« ···: /*. ϊ*“

-13- ^; ’ **’”* leszűrjük. A (III) képletű vegyületet a reakcióelegyből szabad bázisként is izolálhatjuk szervetlen bázissal meglúgosítva, és megfelelő szerves oldószerrel extrahálva. A (III) képletű vegyületet más sók formájában is izolálhatjuk. Más redukáló szert is alkalmazhatunk a szakember számára ismert módon.

A (IV) képletű vegyületet ismert módon állítjuk elő, pl. egy N, N-dialkil-formamid-dialkil-acetált, pl. N, N-dimetil-formamiddimetil-acetált reagáltatunk 3-ciklopropil-3-oxo-propánsavészterrel, kb. 23 °C-tól 115 °C-ig, kb. 1 órától 4 óráig, adott esetben savkatalizátor alkalmazásával. Az R¹ és R² lehet bármelyik alkil-, cikloalkil-, cikloalkil-alkil- vagy aril-alkil-csoport. Ezenkívül két R² együtt ciklusos csoportot is képezhet.

A (IV) képletű vegyületet a (III) képletű vegyülettel alkoholos oldószerben, pl. etanolban kb. 23-115 °C-on reagáltatjuk kb. 15 perctől 12 órát. Ha a (III) képletű vegyületet hidrokloridsója formájában alkalmazzuk, akkor előnyös, ha a reakciót nem nukleofil bázis, pl. trietil-amin feleslegében hajtjuk végre. Az (V) képletű vegyületet szűréssel izoláljuk, vagy az (V) képletű vegyületet más módszerrel is izolálhatjuk, pl. bepároljuk, vizet adunk hozzá, és megfelelő szerves oldószerrel extraháljuk. Az (V) képletű vegyületet előállíthatjuk úgy is, hogy a (IV) képletű vegyület helyett (III) általános képletű vegyületet használunk, pl. olyan vegyületet, amelyben az (R²)₂N csoport helyett R²O csoport szerepel.

Az (V) képletű vegyületet bázissal, pl. nátrium- vagy lítiumhidroxiddal hidrolizáljuk oldószerben, pl. vízben és/vagy metanolban és/vagy THF-ben, kb. 23 °C-on vagy magasabb hőmérsékleten, pl. reflux hőmérsékleten, kb. 30 perctől 12 óráig. A

(VI) képletű savat ezután úgy izoláljuk, hogy pl. a szerves oldószert eltávolítjuk, megsavanyítjuk és leszűrjük. A (VI) képletű vegyületet izolálhatjuk a reakcióelegyböl úgy is, hogy eltávolítjuk a szerves oldószert, megsavanyítjuk, és megfelelő szerves oldószerrel extraháljuk.

A (VI) képletű savat guanidinnel kondenzáljuk megfelelő kondenzáló szer jelenlétében. Kondenzáló szerként használhatunk olyat, amely a karbonsavat reakcióképes anyaggá alakítja, amely a reakció során amidkötést képez egy aminnal.

Kondenzáló szerként olyan reagenst használhatunk, amely egyedényes eljárással teszi lehetővé a kondenzációt karbonsavval és guanidinnel összekeverve. Kondenzáló szerként használhatunk például 1 -(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidroklorid-hidroxi-benzotriazolt (EDC/HBT), diciklohexilkarbodiimid (DCC)/hidroxi-benzotriazolt (HBT), 2-etoxi-1-etoxikarbonil-1,2-dihidro-kinolint (EEDQ) és dietil-foszforil-cianidot. A kondenzációt inert oldószerben, előnyösen aprotikus oldószerben végezzük kb. -20 °C-tól 50 °C-ig, kb. 1-48 óra hosszat, guanidin, mint bázis feleslegének jelenlétében. Oldószerként használhatunk pl. acetonitrilt, diklór-metánt, dimetil-szulfoxidot, dimetil-formamidot, kloroformot és ezek elegyét.

A kondenzáló szer lehet olyan szer, amely a karbonsavat aktivált intermedierré alakítja, amelyet az első lépésben izolálunk és/vagy képezünk, és a második lépésben reagáltatunk guanidinnel. Kondenzáló szerként és aktivált intermedierként használhatunk pl. tionil-kloridot vagy oxalil-kloridot savklorid képzéséhez, vagy használhatunk cian-fluoridot savklorid képzésére, vagy klórhangyasav-alkilésztert, pl. klórhangyasav-

izobutil- vagy -izopropenil-észtert vagy propánsav-foszfonsavanhidridet (propán-foszfonsav-anhidrid, PPA), amely tercier aminbázissal a karbonsav vegyes anhidridjét képezi, vagy karbonil-diimidazolt, amely acil-imidazolt képez. Ha a kondenzáló szer oxalil-klorid, akkor előnyös, ha kis mennyiségű dimetil-formamidot használunk társoldószerként egy másik oldószerrel, pl. diklór-metánnal együtt, a savklorid képzésének katalizálására. Ez az aktivált savszármazék kondenzálható intermedierrel összekeverve megfelelő oldószerben, egy megfelelő bázissal együtt. Oldószer/bázis kombinációként alkalmazható pl. diklór-metán, dimetil-formamid vagy acetonitril vagy ezek elegye guanidin-bázis feleslegének jelenlétében. Más megfelelő oldószer/bázis kombináció lehet víz vagy 1-5 szénatomos alkohol vagy ezek elegye társoldószerrel, pl. diklórmetánnal, tetrahidrofuránnal vagy dioxánnal, és egy bázissal, pl. nátrium-, kálium- vagy lítium-hidroxiddal, amelynek elegendő mennyiségben kell jelen lenni ahhoz, hogy a reakció során felszabaduló savat elnyelje. Az ilyen kondenzáló szerek és oldószerek megfelelő megválasztása, valamint a hőmérséklet meghatározása a szakember számára ismert feladat, vagy könnyen meghatározható a leírás alapján az irodalomból. Ezek és más körülmények, amelyek a karbonsav kondenzációnál használhatók, megtalálhatók a Houben-Weyl, XV. kötet, II. részben (E. Wunsch, Ed., G. Thieme Verlag, 1974, Stuttgart; M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin 1984; és The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology (E. Gross és J. Meienhofer), 1-5. kötet (Academic Press, NY 1979-1983)).

A (VI) képletű savat tionil-klorid feleslegével aktiválhatjuk kb. reflux hőmérsékleten kb. 15 perctől 3 óráig, és a tionilklorid feleslegét bepárlással távolítjuk el. A kapott savkloridot guanidin-hidroklorid feleslegével egyesítjük szervetlen bázissal, pl. nátrium-hidroxiddal együtt tetrahidrofuránban és vízben. A reakcióelegyet előnyösen 23 °C-on vagy emelt hőmérsékleten, pl. reflux hőmérsékleten keverjük kb. 30 perctől kb. 6 óra hosszat. Az (I) képletű vegyületet a reakcióelegyből különbözőképpen izolálhatjuk. így például az elegyet bepárolva eltávolítjuk a tetrahidrofuránt; a vizes fázist pH 9-re savanyítjuk, és a szilárd anyagot leszűrjük. Egy másik változat szerint az (I) képletű vegyületet szerves oldószerrel extrahálva izolálhatjuk. Az (I) képletű vegyületet megfelelő a megfelelő hidroklorid-sóvá alakíthatjuk, ha az oldatát metanolban sósavas éterrel kezeljük, és a kapott szilárd anyagot leszűrjük vagy bepároljuk. Analóg módszerrel más sókat is előállíthatunk.

Szakember számára nyilvánvaló, hogy az (V) képletű vegyületet közvetlenül átalakíthatjuk (I) képletű vegyületté, ha az (V) képletű vegyületet inert oldószerben, pl. alkoholos oldószerben guanidin felesleggel kezeljük, pl. etanolban vagy oldószer nélkül, kb. 60 °C-tól 150 °C-ig terjedő hőmérsékleten.

A szakember számára nyilvánvaló, hogy az (I) képletű vegyület több tautomer formában fordulhat elő. A találmányhoz tartozik az összes ilyen tautomer forma, pl. az (I) képletű vegyület karbonil-guanidin-csoportjának az összes tautomer formája a találmányhoz tartozik. Az (I) képletű vegyület 2-kinolincsoportjának az összes tautomer formája, pl. a 2-hidroxi-kinolin forma is a találmányhoz tartozik.

-17A fent leírt vegyületek kiindulási anyagai és reagensei könnyen hozzáférhetők, vagy a szakember számára könnyen szintetizálhatok a szerves szintézis szokásos módszereivel.

Ezenkívül, ha a találmány szerinti vegyület metabolitokat, hidrátokat vagy szolvátokat képez, akkor ezek is a találmányhoz tartoznak.

A találmány szerinti néhány vegyület, pl. prodrug savas, és ezért gyógyászatilag elfogadható kationnal sót képez. A legtöbb találmány szerinti vegyület bázikus, és gyógyászatilag elfogadható anionnal sót képez. Az összes ilyen só, beleértve a disókat is, a találmányhoz tartozik, és ismert módon állítható elő. így például előállíthatok egyszerűen úgy, hogy savas és bázikus egységeket hozunk érintkezésbe vizes vagy vízmentes vagy részben vizes közegben. A sók kinyerése szűréssel, kicsapással történhet, melynek során oldószert használunk, majd leszűrjük, az oldószert lepároljuk, vagy vizes oldat esetében liofilizáljuk szükség szerint.

Az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója gátolja a nátrium/proton (Na⁺/H⁺) cserélő transzport rendszert, és ezért hasznos gyógyászati és megelőző szerként olyan betegségek ellen, amelyeket a nátrium/proton (Na⁺/H⁺) cserélő transzport rendszer felgyorsulása idéz elő. Ilyen betegség pl. a szív-érrendszeri betegség, pl. arterioszklerózis, magas vérnyomás, aritmia, pl. iszchémiás aritmia, miokardiális infarktus következtében fellépő aritmia, PTCA vagy trombolízis utáni aritmia stb.; angina pectoris, szívnagyobbodás, miokardiális infarktus, szívelégtelenség, pl. szívszélhűdés, akut szívelégtelenség, szívnagyobbodás stb.; PTCA

-18utáni resztenózis, sokk, pl. vérzéses sokk, endotoxin sokk stb.; vesebetegség, pl. diabetes mellitus, diabéteszes nefropátia (vesebaj), iszchémiás akut veseelégtelenség stb.; iszchémiával vagy iszchémiás reperfúzióval kapcsolatos szervi rendellenességek, pl. szívizom iszchémiás reperfúzióval kapcsolatos rendellenességek, akut veseelégtelenség vagy sebészeti kezelés által, pl. koszorúér bypass beültetéssel (CABG) előidézett rendellenességek, érsebészettel, szervátültetéssel, nem szíveredetű sebészeti művelettel vagy perkután transzluminális koszorúér angioplasztikával (PTCA) előidézett rendellenességek, agyérbetegségek, pl. iszchémiás szélütés, vérzéses sokk stb.; agyi iszchémiás rendellenességek, pl. agyi infarktussal kapcsolatos rendellenességek, agyi szélhűdés által előidézett rendellenességek, pl. következmények, vagy agyi ödéma. Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját használhatjuk koszorúér bypass beültetési (CABG) műtétek során miokardiális védelemre, érsebészet során, perkután transzluminális koszorúér angioplasztikánál (PTCA), szervátültetésnél vagy nem szíveredetű sebészeti műveleteknél.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját használhatjuk miokardiális védöszerként koszorúér bypass beültetési (CABG) műtétek előtt, alatt vagy után, érműtétnél, perkután transzluminális koszorúér angioplasztikánál (PTCA), szervátültetésnél vagy nem szíveredetű sebészeti műveletnél.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját, gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját

-19elönyösen olyan páciensek miokardiális védelmére használhatjuk, akiknél folyamatos szívesemények (pl. akut koszorúér szindróma, pl. miokardiális infarktus vagy instabil angina) vagy agyi iszchémiás események lépnek fel, pl. szélütés.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját, gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját használhatjuk krónikus miokardiális védőszerként olyan pácienseknél, akiknél diagnosztizáltak koszorúér szívbetegséget, pl. előzetes miokardiális infarktust vagy instabil anginát, vagy olyan pácienseknél, akiknél nagy a miokardiális infarktus rizikója, pl. 65 évnél idősebbek, vagy két vagy több rizikófaktor áll fenn koszorúér betegségre.

Ezenkívül az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját alkalmazhatjuk erős gátló hatásuk miatt sejtburjánzás ellen, pl. fibroblaszt sejtek burjánzása ellen és a véredények simaizomsejtjeinek burjánzása ellen. Ezért az (I) képletü vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója értékes gyógyszernek tekinthető olyan betegségek esetében, amelyeknél a sejtburjánzás primer vagy szekunder kiváltó ok, és ezért alkalmazhatók anti-ateroszklerotikus szerként is diabéteszes utószövődmények ellen, rákbetegségek, fibrózisos betegségek, pl. tüdőfibrózis, májzsugor vagy vesefibrózis, érgomoly vesezsugorodás, szerv hipertrófia vagy hiperplázia, különösen prosztata hiperplázia vagy hipertrófia, tüdőfibrózis, diabéteszes szövődmények vagy PTCA utáni újra előforduló szűkület vagy endoteliális sejtsérülés által előidézett betegségek esetében.

-20Az (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója alkalmazható gyógyszerként olyan betegségek kezelésére, amelyeket itt részletezünk, emlősök esetében, pl. embernél, pl. miokardiális műtét alatt, vagy miokardiális védelemre olyan pácienseknél, akiknél folyamatos szív- vagy agyi iszchémiás esemény lép fel, vagy krónikus szívvédelemre olyan pácienseknél, akiknél koszorúér betegséget diagnosztizáltak, és az (I) általános képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sójának ezt a hatását in vitro mutatjuk ki vagy egyéb preklinikai, kardioprotektív kísérlettel (lásd az in vivo kísérletet: Klein, H. és tsai, Circulation 92:912-917 (1995); az izolált szívkísérletet: Scholz, W. és tsai, Cardiovascular Research 29:260-268 (1995); az anti-aritmiás kísérletet: Yasutake M. és tsai, Am. J. Physiol., 36:H2430-H2440 (1994); az NMR kísérletet: Kolke és tsai, J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 112: 765-775 (1996)). Az ilyen kísérletek szolgálnak arra, hogy kimutassuk az (I) képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója hatását, összevetve más, ismert vegyületek hatásával. Az összehasonlító eredmények révén meghatározhatjuk a dózisszinteket emlősöknél, ideértve az embert, az ilyen betegségek kezelésére.

Humán NHE-1 gátló hatás mérése

A humán NHE-1 hatás és inhibitor hatás mérésének módszere Watson és tsai módszerén alapul (Am. J. Physiol., 24:G229-G238, 1991), ahol az i n trace 11 u I ári s pH NHE-által közvetített visszanyerésének mérését a sejten belül végzett savanyítás után végezzük. így a humán NHE-1-et stabilan

-21 expresszáló fibroblasztokat (Counillon L. és tsai, Mól. Pharmacol., 44:1041-1045 (1993)) 96-üregű, kollagénnel bevont lemezekre helyezzük (50.000/üreg), és összefolyásig tenyésztjük DMEM hosszú glükózt, 10 % marha magzati szérumot és 50 u/ml penicillint és sztreptomicint tartalmazó táptalajon. Az összefolyó lemezeket 30 percig inkubáljuk 37 °C-on a pHérzékeny fluoreszkáló BCECF mintával (5 μιηόΙ; Molecular Probes, Eugene, OR). A BCECF-fel töltött sejteket 30 percig 37 °C-on savtöltésü közegben inkubáljuk (70 mmól kolín-klorid, 50 mmól ammónium-klorid, 5 mmól kálium-klorid, 1 mmól magnézium-klorid, 1,8 mmól kalcium-klorid, 5 mmól glükóz, 10 mmól HEPES, pH 7,5), majd fluoreszkáló leképező lemezolvasóra helyezzük (Molecular Devices, CA). A BCECF fluoreszcenciát gerjesztéssel követjük nyomon, és az emissziós hullámhossz 485 nM, illetve 525 nM. A sejten belüli megsavanyítást a savtöltő közeg gyors helyettesítésével iniciáljuk, visszanyerő közegként 120 mmól nátrium-kloridot, 5 mmól kálium-kloridot, 1 mmól magnézium-kloridot, 1,8 mmól kalcium-kloridot, 5 mmól glükózt, 10 mmól HEPES-t használunk pH 7,5 értéken, ± tesztvegyületet, és az intracel I ul áris pH NHE által közvetített visszanyerését az ezt követő időfüggő BCECF fluoreszcencia növekedéseként követjük nyomon. A humán NHE-1 inhibitorok hatását abban a koncentrációban számítjuk ki, amely az intraceIluIáris pH visszanyerését 50 %-kal csökkenti (IC₅o)· Ilyen körülmények között a referenciaként használt amilorid és HOE-642 NHE inhibitorok IC₅o értéke humán NHE-1-re 50, illetve 0,5 pmól. Az (I) képletű vegyület a fenti kísérletben 200 nmól IC₅o értéket mutat.

-22Beszámoltak arról, hogy a miokardiális iszchémia rövid periódusai, amelyeket koszorúér reperfúzió követ, megvédik a szívet az ezt kővető súlyos miokardiális iszchémiától (Murry és tsai, Circulation 74:1 124-1136, 1986). Ez a jelenség iszchémiás előkészítésként ismert.

A találmány szerinti vegyületek gyógyhatását, azaz a szívszövet károsodás megelőzését iszchémiás sérülés után, in vitro mutathatjuk ki Liu és tsai szerint (Cardiovasc. Rés., 28:10571061, 1994). Az infarktusos miokardium csökkentésével jelzett szív-védelmet farmakológiailag válthatjuk ki, ha adenozin receptor agonistákat használunk izolált, visszamenőlegesen perfuzionált nyúlszíveken, mint a miokardiális iszchémiás előkészítés in vitro modelljén (Liu és tsai, Cardiovasc. Rés., 28:1057-1061, 1994). Az alábbiakban leírt in vitro teszt demonstrálja, hogy egy aktív tesztvegyület is farmakológiailag előidézhet szív-védelmet, azaz csökkentheti a miokardiális infarktus méretét, ha egy nyúl izolált szívébe adagoljuk. A tesztvegyület hatását összevetjük az iszchémiás előkészítéssel és az A1/A3 adenozin agonistával (APNEA, N6-[2-(4-amino-fenil)etil]-adenozin), amelyről kimutatták, hogy farmakológiailag szívvédelmet idéz elő a nyúl izolált szívén (Liu és tsai, Cardiovasc. Rés., 28:1057-1061, 1994). A pontos módszert az alábbiakban írjuk le.

Ezen kísérletekhez használt protokoll szigorúan követi Liu és tsai módszerét (Cardiovasc. Rés., 28:1057-1061, 1994). Hímnemű, 3-4 kg-os új-zélandi fehér nyulakat 30 mg/kg nátriumpentobarbitállal érzéstelenítünk intravénásán. Miután mély érzéstelenítést érünk el (egy szemhunyorgási reflex hiányával **·χ ··*· ·**· «··· -23- ^{: :} meghatározva), az állatot intubáljuk és 100 %-os oxigénnel levegőztetjük pozitív nyomású ventilátor alkalmazásával. Baloldali gégemetszést végzünk, a szívet kivesszük, és egy 2-0 selyemhálót helyezünk lazán a koszorúér prominens ága köré, a szív csúcsa felől kb. 2/3-nyi távolságra. A mellkasból a szívet eltávolítjuk, és <30 mp alatt gyorsan Langendorff készülékre helyezzük. A szívet visszafelé perfúzionáljuk nem újracirkuláló módon egy módosított Krebs oldattal (118,5 mmól nátriumklorid, 1,2 mmól magnézium-szulfát, 1,2 mmól kálium-hidrogénfoszfát, 24,8 mmól nátrium-hidrogén-karbonát, 2,5 mmól kalcium-klorid és 10 mmól glükóz), állandó 80 Hgmm-es nyomáson és 37 °C-os hőmérsékleten. Az átáramló elegy pH-ját 7,4-7,5-ön tartjuk úgy, hogy 95 % oxigénből és 5 % széndioxidból álló elegyet buborékoltatunk rajta keresztül. A szív hőmérsékletét szorosan ellenőrizzük fiziológiás oldathoz való melegített rezervoárok alkalmazásával, és mind az áramló cső, mind az izolált szív körül vízköpenyt alkalmazunk. A szívfrekvenciát és a baloldali kamranyomást latex gömbbel határozzuk meg, amelyet a bal kamrába iktatunk be, és rozsdamentes acélcsővel kapcsoljuk egy nyomás transzduktorhoz. Az intraventrikuláris gömböt felfújjuk, és így 80-100 Hgmm-es szisztolés nyomást és <10 Hgmm-es diasztolés nyomást kapunk. Folyamatosan nyomon követjük az ossz koszorúér áramlást is egy in-line áramlási cső segítségével, és a szív tömegére normalizáljuk.

percig hagyjuk kiegyensúlyozni a szívet, ezalatt a szívnek stabil bal kamrai nyomást kell mutatni a fenti paramétereken belül. Ha a szívfrekvencia a regionális iszchémia 30 perces periódusa előtt bármikor 180 bpm alá esik, akkor a kísérlet hát-24ralevö idejére a szív frekvenciáját kb. 200 bpm-re növeljük. Az iszchémiás előkészítést úgy váltjuk ki, hogy teljesen megszüntetjük a szív átáramlást 5 percre (globális iszchémia), majd 10 percig reperfúziót alkalmazunk. A regionális iszchémiát úgy idézzük elő, hogy a koszorúér ág körüli hálót megszorítjuk. 30 perces regionális iszchémiát követően a hálót kiengedjük, és további 120 percig reperfúziót alkalmazunk a szíven.

A farmakológiai szív-védelmet úgy idézzük elő, hogy a tesztvegyületet előre meghatározott koncentrációban a 30 perces regionális iszchémia előtt 30 perccel infúzióban alkalmazzuk, és ezt folytatjuk a 120 perces reperfúziós periódus végéig. A tesztvegyületet kapó szív nem megy keresztül ilyen iszchémiás előkészítési perióduson. Az 500 nmól APNEA referenciavegyülettel a szíveken keresztül történő átáramlást idézünk elő (ezek a szívek tesztvegyületet nem kapnak) 5 perces periódusig, amely 10 perccel a 30 perces regionális iszchémia előtt végződik.

A 120 perces reperfúziós periódus végén megszorítjuk a koszorúér hálót, és a szíven keresztüláramoltatunk fluoreszkáló cink-kadmium-szulfát részecskékből álló 0,5 %-os szuszpenziót (1-10 prnól) (Duke Scientific Corp., Palo Alto, CA), ez megfesti az összes miokardiumot, kivéve az infarktus kifejlődése szempontjából rizikós területet (rizikós terület). A szívet a Langendorff készülékből eltávolítjuk, szárazra itatjuk, becsomagoljuk alumíniumfóliába, és éjszakára -20 °C-on tároljuk. A következő nap a szívet a kamrák teteje irányába a csúcsponttól kiindulva 2 mm-es átlós szekciókra szeljük. A szeleteket megfestjük egy foszfátpufferezett fiziológiás sóoldatban 1 %-os

-25trif en i I-tét rázó I i u m-kl or i d d a I (TTC) 20 percig 37 °C-on. Minthogy a TTC az élő szövettel, amely NAD-függő dehidrogenázokat tartalmaz, reagál, ez a megfestés különbözteti meg az élő (pirosra festett) szövetet az elhalt szövettől, amely nem színezett, infarktusos szövet. A festéket nem tartalmazó infarktusos területet és a fluoreszkáló részecskéket nem tartalmazó rizikós területet a baloldali kamra minden szeletére kiszámítjuk előre kalibrált képanalizátor segítségével. Annak érdekében, hogy az iszchémiás sérülést normalizáljuk a szívek közötti rizikós területek különbségeire, az adatokat az infarktusos terület és a rizikós terület arányában fejezzük ki (%IA/AAR). Az összes adatot ±SE-ként fejezzük ki, és statisztikailag Mann-Whitney nem paraméteres teszt alkalmazásával vetjük össze egy többszörös összehasonlítást szolgáló Bonferroni korrekcióval. Szignifikancia: p < 0,05.

A fenti in vitro teszt eredményeit használhatjuk annak kimutatására, hogy a találmány szerinti vegyületek jelentős kardioprotektív hatást fejtenek ki a kontrollcsoporthoz viszonyítva.

Az (I) képletű vegyület, prodrugja, vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója bármilyen módszerrel adagolható, amelynek révén a kívánt szövethez, pl. máj- és/vagy szívszövetekhez jut el az (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója. Ezek a módszerek lehetnek orális, parenterális, intraduodenális utak stb. Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját adagolhatjuk egyszerre, pl. naponta

-26egyszer, vagy többszörös dózisban vagy állandó infúzió útján, pl. izotóniás fiziológiás oldatban.

Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját például arra használhatjuk, hogy csökkentsük vagy minimalizáljuk azt a káros hatást, amely közvetlenül lép fel bármilyen szövetben, amely érzékeny az iszchémiás vagy reperfúziós sérülésre, pl. szív, agy, tüdő, vese, máj, bél, vázizom, retina szöveteinek esetében, pl. NHE-1 közvetítés útján, iszchémiás esemény, pl. miokardiális infarktus eredményeképpen. Ezért a hatóanyagot alkalmazhatjuk megelőzően, azaz prospektív vagy profilaktikus úton, hogy tompítsuk vagy megállítsuk a szövetkárosodást (pl. miokardiális szövetnél), olyan páciensek esetében, akiknél az iszchémiás rizikó fennáll (pl. miokardiális iszchémia).

Általában az (I) képletű vegyületet, prodrugját, gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját orálisan vagy parenterálisan, pl. intravénásán, intramuszkulárisan, szubkután vagy csontvelőbe adva adagolhatjuk. Adagolható topikálisan is, pl. ha a páciens gyomor-bél rendellenességektől szenved, vagy ha a gyógyszert leginkább a szövet vagy szerv felületére alkalmazzuk az orvos meghatározásától függően.

Az (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója adagolt mennyisége és az adagolás időpontja függ a kezelendő pácienstől, az állapot súlyosságától, az adagolás módjától és a felíró orvos megítélésétől. így, mivel mindezek páciensről páciensre változhatnak, az alábbi dózisok csak útmutatásul szolgál • ·«I ··♦· »**· J·”*

-27- ^{: :} ··*·-* nak, és az orvos változtathatja a gyógyszer dózisát, hogy a páciensnek a legkedvezőbb kezelést biztosítsa. A kívánt kezelés fokát figyelembe véve az orvosnak egyensúlyoznia kell a különböző tényezők között, mint például a páciens kora, az előzetes betegség megléte, valamint más betegségek megléte között (pl. szív-érrendszeri betegség).

Tipikusan egy (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója olyan mennyiségben adagolható, amely az iszchémiás védelemhez hatékony. Előnyös dózis kb. 0,01 - 100 mg/kg/nap (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója, különösen előnyös dózis a kb. 0,01 - 50 mg/kg/nap (I) képletű vegyület, prodrugja, gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója.

Az egyik adagolási módszer szerint az (I) képletű vegyületet, prodrugját, gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját közvetlenül a szívsebészet előtt adagoljuk, pl. 24 órán belül a sebészeti beavatkozás előtt, vagy a szívsebészet alatt vagy azt követően, pl. a sebészeti beavatkozás után 24 órán belül, ahol fennáll a miokardiális iszchémia rizikója. Egy különösen alkalmas adagolás az infúzió, ezt kb. 1 - 300 mg terhelő dózis mellett kell adagolni, kb. 1 perctől kb. 1 óráig az operáció előtt, majd állandó infúziót kell adagolni kb. 1 mg/kg/nap-tól kb. 100 mg/kg/nap-ig a fennmaradó elősebészeti, sebészeti és posztsebészeti periódusok alatt, ideértve a kb. 2-7 napot a sebészeti kezelés után. A találmány szerinti vegyület adagolható krónikus napi adagolással is.

···: ···: .··. :·*· -28- ^{: :}

Az (I) általános képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug sója általános adagolása olyan gyógyszerkészítmény formájában történik, amely (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug sóját tartalmazza gyógyászatilag elfogadható közeggel, hordozóval vagy hígítóval együtt. így az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját bármilyen ismert orális, parenterális, rektális vagy transzdermális dózisformában adagolhatjuk.

Orális adagolásra a gyógyszerkészítmény lehet oldat, szuszpenzió, tabletta, pirula, kapszula, por formájú. A tabletták különböző segédanyagokat tartalmaznak, pl. nátrium-citrátot, kalcium-karbonátot és kalcium-foszfátot, ezeket különböző szétesést elősegítő szerekkel alkalmazzuk, pl. keményítő és előnyösen burgonya- vagy tapiókakeményítő formájában, és bizonyos komplex szilikátok formájában, amelyek kötőanyagokkal együtt, pl. polivinil-pirroIidonnái, szacharózzal, zselatinnal és gumiarábikummal együtt alkalmas kötőanyagok. Ezenkívül csúszást elősegítő szerként használhatunk pl. magnéziumsztearátot, nátrium-lauril-szulfátot és talkumot tablettázási célokra. A hasonló típusú szilárd készítményeket töltőanyagként alkalmazzuk kemény- és lágyzselatin kapszulákban. Ebben a vonatkozásban előnyös anyag még a laktóz és a tejcukor is, valamint a nagy molekulatömegű polietilén-glikolok. Amikor orális adagoláshoz vizes szuszpenzióra és/vagy elixírre van szükség, a találmány szerinti vegyületeket összeönthetjük különböző édesítőszerekkel, ízesítőszerekkel, színezőanyagokkal,

-29emulgeáló és/vagy szuszpendáló szerekkel, valamint hígítószerként vizet, etanolt, propilén-glikolt, glicerint és különböző kombinációit adagolhatjuk.

Parenterális adagoláshoz használhatunk oldatot, pl. szezám- vagy mogyoróolajban vagy vizes propilén-glikolban, valamint használhatjuk a megfelelő vízoldékony sók steril vizes oldatát. Az ilyen vizes oldatok alkalmasint pufferezhetők szükség esetén olyan folyékony hígítóval, amelyet először elegendő fiziológiás só- vagy glükózoldattal izotóniássá alakítottunk. Ezek a vizes oldatok különösen alkalmasak intravénás, intramuszkuláris, szubkután és intraperitoneális injekciós célokra. Ebben az összefüggésben a steril vizes közeg könnyen hozzáférhető standard, szakember számára ismert módszerekkel.

Transzdermális, pl. topikális adagolásra híg steril, vizes vagy részben vizes oldatot használunk, amely rendszerint kb. 0,1-5 %-os, különben hasonló a fenti oldatokhoz.

Ismeretesek bizonyos mennyiségű hatóanyagot tartalmazó különböző gyógyászati készítmények előállítási módszerei, vagy a leírás fényében a szakember számára ez nyilvánvalóvá válik, így például a gyógyszerek előállítását illetően módszer található a Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15. kiadásában (1975).

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények pl. 0,001-95 (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját tartalmazhatják. A készítmény, amelyet beadagolunk, hatékony mennyiségben tartalmazza a hatóanyagot a páciens betegségének vagy állapotának kezelésére.

-30Az (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját általában a szokásos készítmény formájában adagoljuk. Az alábbi kiszerelési példák csak illusztráció célját szolgálják, és nem korlátozzák a találmány oltalmi körét.

A hatóanyag (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját jelenti.

1. kiszerelési példa: zselatinkapszula

A keményzselatin kapszulákat a következő komponensekből állítjuk elő:

Komponens	Mennyiség (mq/kapszula)
hatóanyag	0,25-100
keményítő, NF	0-650

keményítő folyékony por formájában 0-50 szilikon fluidum 350 centistoke 0-15

A tablettát a következő komponensekből állítjuk elő:

2. kiszerelési példa: tabletta

Komponens	Mennyiség (mq/tabletta)
hatóanyag	0,25-100
mikrokristályos cellulóz	200-650
füstölő szilícium-dioxid	10-650
sztearátsav	5-15

A komponenseket összekeverjük, tablettákká préseljük, vagy a következőképpen állítjuk elő az egyenként 0,25-100 mg hatóanyagot tartalmazó tablettákat:

3. kiszerelési példa: tabletta

Komponens Mennyiség (mq/tabletta)

-31 hatóanyag 0,25-100 keményítő45 mikrokristályos cellulóz35 %-os vizes oldat formájú polivinil-pirrolidon4 nátrium-karboxi-metil-cellulóz4,5 magnézium-sztearát0,5 talkum1

A hatóanyagot, a keményítőt és a cellulózt 45 mesh U.S. szitán engedjük keresztül, és alaposan összekeverjük. A polivinil-pirrolidon oldatot összekeverjük a kapott porokkal, melyeket ezután 13 mesh részecskeméretű U.S. szitán engedünk keresztül. Az így kapott granulákat 50-60 °C-on szárítjuk, és 18 mesh U.S. szitán engedjük keresztül. A nátrium-karboximetil-keményítőt, a magnézium-sztearátot és talkumot, melyeket előzőleg 60 mesh méretű U.S. szitán engedtünk keresztül, hozzáadjuk a granulákhoz, melyeket kezelés után tablettázógépben tablettákká préselünk.

Az egyenként 5 ml dózisra 0,25-100 mg hatóanyag-tartalmú szuszpenziót a következőképpen állítjuk elő:

4. kiszerelési példa: szuszpenzió

Komponens Mennyiség (mq/5 ml) nátrium-karboxi-metil-cellulóz 0,25-100 mg

szirup	50 mg
benzoesav oldat	1,25 mg
ízesítőanyag	tetszés szerint
színezőanyag	tetszés szerint
tisztított víz	5 ml-ig

-32A hatóanyagot 45 mesh méretű U.S. szitán engedjük keresztül, összekeverjük a nátrium-karboxi-metil-cellulózzal és a sziruppal, így sima pépet kapunk. A benzoesav oldatot, az ízesítő- és színezőanyagot bizonyos mennyiségű vízzel keverve adjuk hozzá keverés közben. Elegendő vizet adagolunk hozzá, hogy a kívánt térfogatot kapjuk.

Aerosol oldatot állítunk elő a következő komponensekből:

5. kiszerelési példa: aerosol

Komponens Mennyiség (tömeq%) hatóanyag0,25 etanol25,75 felhajtógáz 22 (klór-difluor-metán)74,00

A hatóanyagot összekeverjük etanollal, és az elegyet a 22es felhajtógáz egy részéhez adjuk, 30 °C-ra lehűtjük, és egy töltökészülékbe visszük át. A kívánt mennyiséget ezután rozsdamentes acéltartályba visszük, és a fennmaradó felhajtógázzal hígítjuk. A szelepegységeket ezután a konténerhez illesztjük.

A kúp előállítása a következőképpen történik:

6. kiszerelési példa: kúp

Komponens Mennyiség (mg/kúp) hatóanyag 250 telített zsírsav-glicerid 2,000

A hatóanyagot 60 mesh U.S. szitán engedjük keresztül, és telített zsírsav-gliceridekben szuszpendáljuk, melyeket előzőleg minimális szükséges hőmennyiséggel megolvasztottunk. Az elegyet ezután a 2 g nominális kapacitású kúp öntőformába öntjük, és hagyjuk lehűlni.

Intravénás készítményt állítunk elő az alábbi módon:

<»·£ »♦·· ,·* ·*♦* 4 V *-Ί·* ♦·* -33- ^:

7. kiszerelési példa: intravénás oldat

Komponens Mennyiség hatóanyag 25 mg izotóniás konyhasóoldat 1.000 ml

A fenti komponensek oldatát intravénásán adagoljuk a páciensnek.

Általános kísérleti eljárások

300 és 400 MHz-es ¹H-NMR spektrumokat regisztráltunk egy Varian Unity+ 300 vagy 400 spektrométeren (Varian Co., Palo Alto, CA), amely két RF csatornával, közvetett detektálással és impulzusos mezőgradiensekkel van felszerelve (csak Ztengelyek). A spektrumokat közel szobahőmérsékleten mértük (21 °C), és standard „auto-lock” és „auto-shim” módszert alkalmaztunk a „shimming” mintákhoz. A kémiai eltolódásokat a trimetil-szilántól lefelé ppm-ben fejeztük ki. A csúcsokat a következőképpen jegyezzük fel: s, szingulett; d, duplett; t, triplett; q, kvartett; m, multiplett; bs, széles szingulett. A rezonanciákat cserélhetönek jelöljük, és ezek nem jelennek meg a külön NMR kísérletben, ahol a mintát több csepp D₂O-val rázzuk ki, ugyanabban az oldószerben. Az atmoszférikus nyomású kémiai ionizációs tömegspektrumot (APCIMS) Fisons Platform ll-ből vagy Micromass ZMD spektrométerből kapjuk (Micromass, Manchester, UK). Ahol a klór- vagy brómtartalmú ionok intenzitását írjuk el, a várt intenzitási arányt figyeltük meg (kb. 3:1 a ³⁵CI/³⁷CItartalmú ionokra, és 1:1 a ⁷⁹Br/⁸¹Br-tartalmú ionokra), és M ³⁵CIen és ⁷⁹Br-en alapszik. Bizonyos esetekben csak a reprezentatív ¹H-NMR és APCIMS csúcsokat adjuk meg.

-34Az oszlopkromatográfiát Baker szilikagélen (40 pmól) (J.T. Baker, Phillipsburg, N.J.) vagy szilikagél 60-on végezzük (EM Sciences, Gibbstown, N.J.) üvegoszlopokban vagy Flash 12, 40 vagy 75 (Biotage) (Charlottesville, VA) oszlopokon, alacsony nitrogénnyomás mellett. A radiális kromatográfiát Chromatotronon végezzük (Harrison Research, Palo Alto, Kalifornia). Egyéb megjegyzés hiányában a reagenseket a kereskedelmi forrásból kapott formában használjuk. Dimetil-formamid, 2-propanol, metanol, dimetil-szulfoxid, 1,2-diklór-etán, tetrahidrofurán, toluol, diklór-metán vagy egyéb oldószerek megfeleltek a vízmentes foknak, ahogy az Aldrich Chemical Company-tól beszerezzük (Milwaukee, Wisconsin). A mikroanalízist Schwarzkopf Microanalytical Laboratory végezte (Woodside, NY). A „vákuumban koncentráljuk” és „vákuumban eltávolítjuk” kifejezések arra vonatkoznak, hogy az oldószert rotációs bepárlón csökkentett nyomáson 90 °C-nál alacsonyabb fürdöhömérsékleten távolítjuk el. A „0-20 °C-on” vagy „0-25 °Con” végzett reakciót úgy végezzük, hogy az edényt kezdetben izolált jégfürdön hűtjük, melyet hagyunk több órán keresztül felmelegedni szobahőmérsékletre.

1. példa

5-Amino-2-kinolin-hidroklorid

12,37 g, 65 mmól 5-nitro-2-kinolin (előállítása Capps, J.D.; Hamilton, C.S., J. Am. Chem. Soc. 1938, 60, 2104 szerint történik) 176 ml etanolos oldatát nitrogénatmoszférában 73,4 g, 325 mmól SnCI₂*2H₂O-val kezeljük. A heterogén reakcióelegyet 23 °C-on 2 órát keverjük, és reflux alatt 2 órát melegítjük. A kapott heterogén elegyet lehűtjük 23 °C-ra, és leszűrjük. A szilárd

-35anyagot 1 mól vizes, 78 ml, 78 mmól sósavval eldörzsöljük visszafolyató hűtő alatt 1 óra alatt, lehűtjük 23 °C-ra, leszűrve 10,08 g kívánt terméket kapunk 78 %-os termeléssel.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,42 (d, J = 10, 1H), 6,71 (d, J=7,6, 1H), 6,81 (d, J = 8, 1H), 7,27 (d, J = 8, 1H), 8,04 (d, J = 10, 1H), 11,71 (bs, 1H).

APCIMS 161 [M + 1 ] ⁺ .

2. példa

5-Hidrazino-2-kinolon-hidroklorid

10,8 g, 51,2 mmól 5-amino-2-kinolin-hidroklorid 42,7 ml koncentrált sósavval és 18,2 ml vízzel készített 0 °C-os oldatához 3,53 g, 51,2 mmól nátrium-nitrit 26,4 ml vizes oldatát csepegtetjük, miközben a hőmérsékletet 5 °C alatt tartjuk. A kapott piros szuszpenziót 0 °C-on 1 órát keverjük.

Egy mechanikus keverővei ellátott, különálló 3-nyakú gömblombikban 25,41 g, 112,6 mmól ón-diklór-dihidrát 34,2 ml koncentrált sósavval és 93,9 ml vízzel készített szuszpenzióját 0 °C-ra hűtjük. A szuszpenzióhoz a fent előállított piros diazónium-só szuszpenzióját csepegtetjük, miközben a hőmérsékletet 5 °C alatt tartjuk. Az elegyet felmelegítjük 23 °C-ra, és 3 óra hosszat keverjük. A kapott szuszpenziót leszűrjük. Az összegyűjtött szilárd anyagot 61,4 ml, 61,4 mmól 1 mólos vizes sósavval eldörzsöljük 23 °C-on 30 perc alatt. A szilárd anyagot leszűrve 7,88 g, 73 % kívánt terméket kapunk.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 6,43 (d, J = 10, 1H), 6,63 (d, J = 8, 1H), 6,88 (d, J = 8, 1H), 7,38 (t, J = 8, 1H), 7,98 (d, J = 10, 1H), 8,97 (bs, 1H), 10,40 (bs, 1H), 11,77 (bs, 1H).

APCIMS 176 [M + 1 ]⁺.

3. példa

Metil-5-ciklopropil-1 -(2-kinolin-5-il)-1 H-pirazol-4-karboxilát

7,85 g, 39,8 mmól 3-ciklopropil-2-(dimetil-amino-metilén)-3oxo-propánsav-metilészter 257 ml etanolos oldatát 7,77 ml, 55,8 mmól trietil-aminnal, majd 7,88 g, 37,2 mmól 5-hidrazino-2kinolon-hidrokloriddal kezeljük nitrogénatmoszférában. A kapott heterogén reakcióelegyet reflux alatt 4 órát melegítjük, 23 °C-ra lehűtjük. Halványsárga szilárd anyag csapódik ki, amelyet leszűrve 5,06 g kívánt terméket kapunk 44 %-os termeléssel.

¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 0,59-0,73 (m, 4H), 1,87 (m, 1H), 3,79 (s, 1H), 6,54 (d, J = 10, 1H), 7,17 (d, J = 10, 1H), 7,34 (d, J = 7,5, 1H), 7,49 (d, J = 8, 1H), 7,66 (t, J = 8, 1H), 8,08 (s, 1H), 12,10 (bs, 1H).

APCIMS 310 [M + 1 ]⁺.

4. példa

5-Ciklopropil-1-(2-kinolin-5-il)-1H-pirazol-4-karbonsav

5,06 g, 16,4 mmól 5-ciklopropil-1 -(2-ki η ο I i n-5 - i I)-1Hpirazol-4-karbonsav-metilészter 81,8 ml THF-fel és 40,9 ml metanollal készített szuszpenzióját 81,8 ml, 81,8 mmól, vizes 1 mólos lítium-hidroxiddal kezeljük, és reflux alatt 2,5 órát melegítjük. A kapott heterogén elegyet lehűtjük 23 °C-ra. A metanolt és tetrahidrofuránt vákuumban eltávolítjuk. A kapott szuszpenziót 0 °C-ra hűtjük, és koncentrált sósavval pH 3-4-re savanyítjuk. Az elegyet leszűrjük, a szilárd anyagot szárítva 4,94 g kívánt terméket kapunk 100 %-os termeléssel.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 0,58 (d, J=4,4, 2H), 0,64 (d, J = 8, 2H), 1,82 (m, 1H), 6,50 (d, J = 10, 1H), 7,12 (d, J = 10, 1H),

-37 7,27 (d, J=7,6, 1H), 7,44 (d, J = 8,4, 1H), 7,60 (t, J = 8, 1H), 7,97 (s, 1H), 12,03 (bs, 1H), 12,38 (bs, 1H).

APCIMS 296 [M + 1 ]⁺.

5. példa r5-Ciklopropil-1-(2-kinolin-5-il)-1H-pirazol-4-karbonill-quanidin-hidroklorid

13,27 g, 45,0 mmól 5-ci ki o p rop í I -1 -(2 - ki no I i n-5-i I)-1 Hpirazol-4-karbonsav 60 ml tionil-kloridos oldatát reflux alatt 1 órát melegítjük. A tionil-klorid feleslegét vákuumban eltávolítjuk. A maradékot vízmentes toluollal kezeljük, és vákuumban bepároljuk. A szilárd maradék 50 ml THF-es oldatát 15,47 g, 162 mmól guanidin-hidroklorid 162 ml, 324 mmól 2 mólos vizes nátrium-hidroxidos oldatával kezeljük nitrogénatmoszférában. A kapott elegyet 23 °C-on 2 órát keverjük, majd vákuumban bepárolva a THF-et eltávolítjuk. A vizes fázist 0 °C-ra hűtjük, pH 9re savanyítjuk. A halványsárga, szilárd, kivált terméket izoláljuk, 11,41 g szabad bázis formájú kívánt vegyületet kapunk. 700 ml metanolban oldott szilárd anyagot 84,9 ml, 84,9 mmól, 1 mólos éteres sósavval kezeljük. Az oldószer térfogatát vákuumban csökkentjük. A kapott halványbarna csapadékot izolálva 8,49 g, 51 % cím szerinti vegyületet kapunk. További terméket kaphatunk szabad bázis formájában, ha a vizes fázist etil-acetát és THF 1:1 arányú elegyével extraháljuk.

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 0,51 (m, 2H), 0,70 (dd, J=2, 8,4, 2H), 1,92 (m, 1H), 6,53 (dd, J = 1,6, 10, 1H), 7,17 (d, J = 10, 1H), 7,32 (d, J = 7, 1H), 7,48 (d, J = 8,4 1H), 7,64 (t, J=8,2, 1H), 8,34 (bs, 2H), 8,60 (bs, 3H), 11,64 (s, 1H), 12,10 (s, 1H).

APCIMS 337 [M + 1 ]⁺.

6. példa

[5-Ciklopropil-1 -(2-kinolon-5-il)-1 H-pi rázol-4-karboni II-quanidin azonosítása humán plazmamintákon folyadékkromatográfiás(LC)/tőmeqspekt rósz köpi ás módszerrel (MSVMS és LC/NMR

Humán egyedeknek 5-ci ki op ro p i I-1 -(ki no I i n-5-i I)-1 H-p i rázol 4-karbonil]-guanidin-monohidroklorid-monohidrátot adunk intravénásán. A humán plazmamintákat összeöntjük, és a proteineket két térfogat acetonitrillel kicsapjuk. Centrifugálás után a felülúszót vízfürdőn nitrogénnel bepároljuk 40 °C-on.

100 μΙ vagy 50 μΙ koncentrált minta alikvótot injektálunk egy Zorbax Rx-C8 4,6 x 160 mm-es oszloppal felszerelt LC/MS/MS műszerre, PE Sciex API 2000 vagy Finnigan LCQ tömegspektrométeren analizáljuk, és UV detektorral követjük nyomon 254 nm-nél. Az oszlopról elfolyó folyadékot megosztjuk úgy, hogy 5 % eluáló szert a tömegspektrométerre vezetünk, és a maradékot ultraibolya detektoron engedjük keresztül. Az analíziseket 1 ml/perc mobil fázis áramlási sebességnél végezzük, ahol a mobil fázis 5 mmól ammónium-formiátból (pH 3,0), mint A oldószerből, és acetonitrilből, mint B oldószerből áll. A gradiens 5/95 - 40/60 arányú B/A-t tartalmaz 20 perces periódus alatt, egy kezdeti 3 perces tartózkodás után. Ilyen LC körülmények között 11,8 perces retencióidőnél mutatunk ki egy metabolitot ([6-ciklopropil-1 -(kinolin-5-il)-1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidint mutatunk ki 13,7 percnél). Az 5-ciklopropil-1 -(kinolin-5-iI)-1 Hpirazol-4-karbonil]-guanidin (m/z 321) és a metabolit (m/z 337) közötti 16 tömegegységnyi különbség a humán plazmában azt jelzi, hogy oxidáción keresztül keletkezik. A protonált metabolit

-39LC/MS/MS termékion spektruma m/z-nél 337 ([M + H]⁺) nem mutat fragmens iont m/z 278, 260, 250, 236, 223 és 208 értéknél.

A sókat a fenti koncentrált mintából szilárd fázisú extrahálással távolítjuk el. A mintát bepárolva kb. 5-10 gg metabolitot kapunk. A mintából 50 μΙ-t LC/NMR műszerre injektálunk, amely Zorbax Rx-C8 4,6 x 150 mm-es oszloppal van felszerelve, és ezt Bruker 500 MHz NMR spektrométeren analizáljuk, UV detektorral követjük nyomon 235 nm-nél. Az analízist 1 ml/perc áramlási sebességű mobil fázis alkalmazásával végezzük, ahol a mobil fázis 15 mmól deutériumozott vizes hangyasavból áll, amelyet pH 3,3-ra igazítunk deutériumozott ammónium-hidroxiddal D₂Oben (C oldószer) és acetonitril-d₃-ban (D oldószer). A gradiens egy kezdeti 3 perces tartózkodás után 17 perc alatt 5/95 20/80 D/C. A kívánt metabolitot NMR kémcsőbe helyezzük a stop áramlási technikát alkalmazva a csúcson 13,6 percnél. A humán metabolit NMR és COSY spektrumai két duplettet tartalmaznak (6,64 és 7,41 ppm), amelyeket egymáshoz kapcsolunk, de más csúcshoz nem. A lefelé irányuló csúcs hiánya 8,92 ppm-nél, amely [5-ciklopropil-1 -(k i no I i n-5-i I)-1 H-pirazol-4karbonil]-guanidinben van jelen, azt mutatja, hogy a kinolingyűrű 2-es helyzetében ment végbe az oxidáció. Az adatok alapján a metabolit szerkezete [5-ciklopropi 1-1 -(2-kinolin-5il)-1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidin. A metabolit és a szintetikus standard [5-ciklopropi 1-1 -(2-kinolin-5-il)-1 H-pi rázol-4-kar bon il]guanidin-hidroklorid, amelyet az 5. példa szerint állítottunk elő, összehasonlítása megerősíti a feltételezett szerkezetet.

Claims (31)

1. -40SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. (I) általános képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyá- szatiig elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója, azzal a megkötéssel, hogy az [5-ciklopropiI-1 (kinolin-5-il)-1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidin kizárt.
2. 2. [5-C i klopropi 1-1 -(2-kinolon-5-il)-1 H-p i rázol-4-karbonil]- guanidin vagy gyógyászatilag elfogadható sója.
3. 3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója alkalmazása gyógyszer előállítására iszchémiából vagy hipoxiából eredő szövetkárosodás csökkentésére emlősnél.
4. 4. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet lehet szív-, agy-, máj-, vese-, tüdő-, has-, vázizom-, lép-, hasnyálmirigy, ideg-, gerincvelő, retinaszövet, erezet vagy bélszövet.
5. 5. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az alkalmazott (I) képletű vegyület, prodrugja vagy gyógyászatilag elfogadható sója vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sója mennyisége kb. 0,01 mg/kg/nap-tól kb. 50 mg/kg/nap.
6. 6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az emlős nő vagy férfi.
7. 7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet szívszövet.
8. 8. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet agyszövet.
9. 9. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet májszövet.
10. 10. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet veseszövet.
11. 11. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet tüdőszövet.
12. 12. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet hasszövet.
13. 13. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet vázizom szövet.
14. 14. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet lépszövet.
15. 15. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet hasnyálmirigy szövet.
16. 16. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a szövet retinaszövet.
17. 17. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyületet megelőzőleg alkalmazzuk.
18. 18. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása a sebészet előtt történik.
19. 19. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása szívoperáció előtt történik.
20. 20. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása műtét közben történik.
21. 21. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása szívsebészet alatt történik.
22. 22. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása műtét után 24 órán belül történik.
23. 23. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása szívsebészet utáni 24 órán belül történik.
24. 24. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az iszchémiából eredő szövetkárosodás iszchémiás károsodás, és szervátültetés során lép fel.
25. 25. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása a perioperatív miokardiális iszchémiás sérülés megelőzését szolgálja.
26. 26. Gyógyszerkészítmény, amely egy (I) képletű vegyületet, prodrugját vagy gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját és gyógyászatilag elfogadható hordozót, oldószert vagy hígítót tartalmaz.
27. 27. Gyógyszerkészítmény iszchémiából vagy hipoxiából eredő szövetkárosodás csökkentésére, amely gyógyászatilag hatékony mennyiségű (I) képletű vegyületet, prodrugját, gyógyászatilag elfogadható sóját vagy a prodrug gyógyászatilag elfogadható sóját és gyógyászatilag elfogadható hordozót, hígítót vagy oldószert tartalmaz.
28. 28. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása az operáció előtt, alatt vagy után történik.
29. 29. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyület adagolása a szívműtét előtt, alatt vagy után történik.
30. 30. Eljárás [5-cikiopropiI-1 -(2-kinolon-5-il)-1 H-pirazol-4karbonil]-guanidin előállítására azáltal, hogy embernek [5ciklopropil-1 -(kinolin-5-il)-1 H-pirazol-4-karbonil]-guanidint adagolunk.
31. 31. Lényegében tiszta [5-cikiopropiI-1 -(2-kinolon-5-il)-1 Hpirazol-4-karbonil]-guanidin vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

    A meghatalmazott:

    DANUBIA

    Szabadalmi és Védjegy Iroda Kft.

    /17

    K^róny/Judit szab^d^hini ügyvivő »/