HUP0400081A2 - Kvantitatív egylépéses immunteszt liofilizált formában - Google Patents
Kvantitatív egylépéses immunteszt liofilizált formában Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0400081A2 HUP0400081A2 HU0400081A HUP0400081A HUP0400081A2 HU P0400081 A2 HUP0400081 A2 HU P0400081A2 HU 0400081 A HU0400081 A HU 0400081A HU P0400081 A HUP0400081 A HU P0400081A HU P0400081 A2 HUP0400081 A2 HU P0400081A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- microtiter plate
- wells
- test
- detecting
- plate
- Prior art date
Links
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 66
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 37
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 36
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 26
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 21
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 20
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 20
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 claims description 18
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 17
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 11
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims description 10
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- -1 polyol Chemical class 0.000 claims description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 5
- CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 2-aminophenol Chemical compound NC1=CC=CC=C1O CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 4
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N cyclohexylamine Chemical compound NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 4
- OKVJCVWFVRATSG-UHFFFAOYSA-N m-hydroxybenzyl alcohol Natural products OCC1=CC=CC(O)=C1 OKVJCVWFVRATSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BVJSUAQZOZWCKN-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=C(O)C=C1 BVJSUAQZOZWCKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 4
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 4
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GTPQXTSQORFWTG-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1NCNC=C1 GTPQXTSQORFWTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WQXNXVUDBPYKBA-YFKPBYRVSA-N ectoine Chemical compound CC1=[NH+][C@H](C([O-])=O)CCN1 WQXNXVUDBPYKBA-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QSAWQNUELGIYBC-OLQVQODUSA-N (1s,2r)-cyclohexane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCC[C@H]1C(O)=O QSAWQNUELGIYBC-OLQVQODUSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- IBTSWKLSEOGJGJ-UHFFFAOYSA-N (3-acetamidophenyl)boronic acid Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC(B(O)O)=C1 IBTSWKLSEOGJGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QBLFZIBJXUQVRF-UHFFFAOYSA-N (4-bromophenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(Br)C=C1 QBLFZIBJXUQVRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 2
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 claims description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 claims description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 claims description 2
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KGUHOFWIXKIURA-VQXBOQCVSA-N [(2r,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]methyl dodecanoate Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCC)O[C@@H]1O[C@@]1(CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 KGUHOFWIXKIURA-VQXBOQCVSA-N 0.000 claims description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 2
- 150000001543 aryl boronic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 claims description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 2
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 claims description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000005428 food component Substances 0.000 claims description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 claims description 2
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 claims description 2
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 2
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 claims description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 2
- HUMMCEUVDBVXTQ-UHFFFAOYSA-N naphthalen-1-ylboronic acid Chemical compound C1=CC=C2C(B(O)O)=CC=CC2=C1 HUMMCEUVDBVXTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 claims description 2
- BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N p-anisidine Chemical compound COC1=CC=C(N)C=C1 BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 claims description 2
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 claims description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229940032085 sucrose monolaurate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 claims description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 claims description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- CQRYARSYNCAZFO-UHFFFAOYSA-N o-hydroxybenzyl alcohol Natural products OCC1=CC=CC=C1O CQRYARSYNCAZFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- PWMWNFMRSKOCEY-UHFFFAOYSA-N 1-Phenyl-1,2-ethanediol Chemical compound OCC(O)C1=CC=CC=C1 PWMWNFMRSKOCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KVZJLSYJROEPSQ-UHFFFAOYSA-N cis-DMCH Natural products CC1CCCCC1C KVZJLSYJROEPSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PFURGBBHAOXLIO-PHDIDXHHSA-N trans-cyclohexane-1,2-diol Chemical compound O[C@@H]1CCCC[C@H]1O PFURGBBHAOXLIO-PHDIDXHHSA-N 0.000 claims 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 21
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 19
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 9
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 9
- 239000000306 component Substances 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 8
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 6
- 239000012897 dilution medium Substances 0.000 description 6
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 5
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 4
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 4
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 4
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001033233 Homo sapiens Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 102000043559 human ICAM1 Human genes 0.000 description 2
- 102000052620 human IL10 Human genes 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000010421 standard material Substances 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
Description
van.
S.B.G.& K. -.7-7%M:^Lás hJ?77
Íélefoií 4 v , J 7 '
Kvantitatív egylépéses inununteszt liofilizált formában
A találmány egy immuntészt-kitre vonatkozik egy próba kvalitatív és kvantitatív meghatározására specifikus kötőpartnerekkel, mint pl. antitestek, antigének, receptorok és ligandumok, egy, nagyszámú mélyedéssel rendelkező hordozó- illetve mikrotiterlemezzel, ahol a hordozó- illetve mikrotiterlemez egy első kötőpartnerrel be van vonva és a kötőpartner liofilizátum formájában fixálva van.
Az immunteszteket, enzim-kapcsolt immunteszteket, fluoreszcensen jelzett immunteszteket, lumineszcens jelzéssel kapcsolt immunteszteket vagy más jelzéssel ellátott immunteszteket a rutindiagnosztikában és a kutatási diagnosztikában fehérjék, így például antigének, ligandok, receptorok, antitestek, valamint kémiai vegyületek detektálásához és mennyiségi meghatározásához használják. A technika állása szerint az ilyen teszt-kitekben a kötőpartnert egy szilárd hordozóhoz kötik, például egy polisztirol-lemezhez, és a további, a kísérlet lefolytatásához szükséges reagenseket a teszt-kit különálló komponenseiként hozzácsatolják. Ezek a reagensek szokásos módon a következők: a kimutatandó fehérje mérhető formában koncentrátumként vagy liofilizátumként (referencia standard), egy standard- és próbahigító-közeg, a második specifikus kötőpartner kapcsolt formában (konjugátum) koncentrátumként vagy munkaoldatként, adott esetben szükség van egy második detektálási rendszerre, valamint enzimjelzés esetében a kimutatáshoz szükséges szunsztrát-reagensre. Az enzimatikus re• · · · · · · ··:· ·..· ·♦.· *akció befejezéséhez egy stop-oldatot mellékelnek, a második specifikus kötőpartner munkaoldatainak előállításához, valamint a második reagenshez egy assay-puffer áll rendelkezésre, amely legtöbbször koncentrátumként van jelen. Mivel a munkalépések között mosási lépésekre is szükség van, a hagyományos immuntesztkit tartalmaz egy mosópuffert, szokásosan koncentrált formában.
A kereskedelemben kapható ELISA-kitek a felhasználó számára érvényesített tesztrendszereket biztosítanak. Ezek a termékek az összes, a teszt kivitelezéséhez szükséges reagenst az optimális koncentrációban és mennyiségben tartalmazzák, valamint egy részletes protokollt a teszt kivitelezéséhez. Az egyes reakciólépéseket szokásosan egymást követően hajtják végre. Az antitesteknek (standard, próba) és a második antitestnek a szilárd fázissal (koktél) történő együttes inkubálása nagyszámú tesztrendszert tesz lehetővé.
Az immuntesztnek egy tipikus példája a szendvics ELISA (enzimkapcsolt immunszorbens assay).
Az ilyen ELISA-kitek tipikus módon az alábbi komponenseket tartalmazzák:
96-mélyedéses mikrotiterlemez, az első antitesttel bevonva, blokkolva, fixálva;
referencia-anyag: analit (standard) meghatározott koncentrációban egy standard-sor előállításához;
enzim (torma peroxidáz) vagy biotinnal konjugált második antitest;
adott esetben szükséges sztreptavidin-enzim (torma peroxidáz);
=“··.:· <-U Λ szubsztrát-oldat (tetrametilén-benzidin);
mosópuffer: sóoldat a lemezek lemosásához a próba inkubálása előtt és a reakciólépések között;
assay-puffer: sóoldat a második antitest és a sztreptavidinenzim koncentráturn hígításához (munkaoldatok előállítása);
próbahigító-közeg: specifikus folyékony médium a referenciaanyag, valamint az ismeretlen próbák hígításához;
stop-oldat az enzimes reakció leállításához.
A felhasználónak a teszt kivitelezéséhez a következő munkalépéseket kell végrehajtania: - munkaoldatok elkészítése
- a standardsorozat előállítása a referencia-anyag hígításával
- a mikrotiterlemez mosása
- a próbahigító-közeg behelyezése
- az egyes referenciahigitások (standardsorozat) felvitele
- az ismeretlen próbák felvitele
- az enzim- vagy biotin-konjugált második antitest hozzáadása
- a mikrotiterlemez mosása
- a sztreptavidin-enzim optimális hozzáadása
- a mikrotiterlemez mosása
- a szubsztrát hozzáadása
- a stop-oldat hozzáadása
- az optikai sűrűség mérése.
A találmány célja abban áll, hogy az ilyen teszt-kitek használatát leegyszerűsítsük és emellett kvalitatív és ugyanakkor kvantitatív meghatározást tegyünk lehetővé. A találmány egy további célja a munkaráfordítás és teszt kivitelelezéséhez szüksé ges idő csökkentése mellett abban áll, hogy a felhasználó részére a kivitelezési munkalépések minimalizálásával a hibalehetőséget csökkentsük. Végül a jelen találmány célja az is, hogy a csomagolási térfogatot, valamint a csomagolási költségeket éppenúgy, mint az előállítási költségeket a kitek jelentős tömeg- és térfogatcsökkentése által leszorítsuk, és egy logisztikai leegyszerűsítést hozzunk létre, amellyel standardizált alapkiteket tudunk a termékek javított eltarthatóságával rendelkezésre bocsátani.
izeknek a feladatoknak a megoldásához a találmány szerinti immunteszt-kit lényegében abban áll, hogy a mikrotiterlemez mélyedéseinek egy részében a meghatározandó próba egy referenciastandardscrozata is növekvő hígításban liofilizált formában jelen van. Azáltal, hogy a hordozó- illetve mikrotiterlemez a meghatározandó próbához már egy referencia-standardsorozatot is tartalmaz, lehetőség nyílik arra, hogy egy tisztán kvalitatív analízis mellett egy kvantitatív kiértékelést és egy kvantitatív meghatározást a meghatározott teszteredmények közötti interpolálással a növekvő szomszédos standardok között elvégezzünk, miáltal a referencia-anyag munkaoldata előállításának felhasználói lépése és a megfelelő higítási sor előállításának lépése a labormeghatározásnál kiesik. Az immunteszt-kit hasonló kialakításával, amelynél a referencia-anyag munkaoldatának előállítása és a standardhigító-közeg felvitele a mikrotiterlemez standardsorához figyelembevett mélyedésekbe, kiesik, lehetővé téve ezál tal az eljárás lényeges racionalizálását és leegyszerűsítését, és különösen egy egzakt módon reprodukálható standardot biztosit, miáltal a hibalehetőség már lényegesen lecsökken.
Különösen előnyös módon lehet azonban az immunteszt-kit előkészítését még lényegesen tovább javítani és a szükséges lépéseket a próbához tovább csökkenteni. Ebből a célból előnyös a kialakítást úgy végezni, hogy a mikrotiterlemez mélyedései továbbá egy második kötőpartner, előnyösen egy antitest enzimmel- vagy biotinnal-kapcsolt konjugátumát tartalmazzák, és a biotinnalkapcsolt konjugátum esetében az enzimet liofilizált formában tartalmazzák. Ezen a módon a meghatározandó fehérje kvantifikálásához szükséges standardsorozat mellett meghatározott fehérje-koncentrációkban a második, specifikus, egy fent-nevezett jelzéssel kapcsolt kötőpartner (konjugátum titrált koncentrációkban, valamint adott esetben a szekunder reagens) a meghatározáshoz a szilárdfázison kötött első kötőpartnerrel együtt már liofilizált formában a szilárdfázisra fel van víve, miáltal ezeknek a komponenseknek liofilizált formában történik az előállítása, azaz ezáltal alacsony hőmérsékleten, kb. -30°C-on dehidráljuk, a reakciókinetikát továbbá befagyasztjuk, hogy a referencia-anyag semmilyen előreakciójától ne kelljen tartani. Mivel a nagyon hígított munkaoldatokat - hasonlóan a oehatárolt stabil oldatokhoz - nem tartják raktáron, hanem többször először közvetlenül a tesztkezdetén az oldószer hozzáadásával, illetve a hordozón rehidrálással állítják elő, további lehetséges hibaforrások ki vannak zárva.
Egy további javításban és a meghatározás során szükséges munkavégzések második csökkentéséhez a kialakítást úgy valósít• · · · · · · 6 juk meg, hogy a mikrotiterlemez mélyedései egy próbahigítóközeget (médium) liofilizált formában tartalmazzanak. Ά specifikus próbahigitó-közeget ennélfogva példaképpen 2 °C hőmérsékleten a szükséges mennyiségben a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe bevihetjük, ahol a második antitest-enzimkonjugátum, illetve a második antitest-biotinkonjugátum-keverék ugyanazon a hőmérsékleten a mikrotiterlemez összes mélyedésébe bevihető, melynek során az igy-bevont mikrotiterlemezt egy fagyasztás! eljárásnak, példaképpen -30°C-ra lehűtött fagyasztóberendezésben liofilizálásnak vetjük alá.
Egy hasonlóképpen előkonfekcionált hordozó illetve hasonlóképpen előkonfekcionált mikrotiterlemez a teszt-kit teljessé tételéhez csak csekélyszámú további komponenst követel meg, ahol a teszt-kit előnyösen az előrebevont mikrotiterlemezhez továbbá csupán mosópuffert, szubsztrát-oldatot és stop-oldatot tartalmaz. A próba meghatározásához ezáltal csupán az szükséges, hogy a mikrotiterlemezt meghatározott térfogatú desztillált víznek a standardsorozat mélyedéseihez, adott esetben a vakpróbák mélyedéseihez és a próbamélyedésekhez történő hozzáadásával rehidráljuk, miután az ismeretlen próbát felvisszük és inkubáljuk. A mikrotiterlemez mosása és a szubsztrát felvitele után a mikrotiterlemez összes, a teszthez felhasznált mélyedésébe meghatározott időközönként stop-oldatot adunk és a teszt kiértékelését közvetlenül el tudjuk végezni. A kialakításokat előnyösen itt úgy valósítjuk meg, hogy a biotin-kapcsolt második antitest-konjugátum esetében második reagensként sztreptavidintormaperoxidázt (HRP) alkalmazunk.
Összességében a találmány szerinti kialakítással a tesztkivitelezés a felhasználó számára az ismeretlen próbának a hozzáadására, valamint az enzimes reakcióra redukálódik, melynek során az összes többi lépést az ELISA-kit gyártója végzi el. A mikrotiterlemezt így a gyártó a specifikus primer antitesttel bevonja, blokkolja és fixálja, miután a lemez példaképpen -20°Cra le lesz hűtve és a fent-leírt további lépéseket, a próbahigító-közeg standardsorának, valamint a második antitestenzim- konjugátum illetve második antitest-biotin-konjugátum és sztreptavidin-enzim meghatározott módon történő felvitelét a gyártó végzi el. A teszt kivitelezése ezáltal arra feladatra korlátozódik, hogy az analizálandó próbát és a szubsztrátszíneződés alapján a teszt kiértékelését elvégezzük.
Különösen előnyös módon az immunteszt-kit a jelen találmány értelmében úgy van kialakítva, hogy a teszt-kit peroxidázstabilizátorokat, illetve általános lioprotektív anyagokat, mint pl. fehérjéket (pl. albuminok, pl. BSA), fehérjehidrolizátumokat (pl. pepton, zselatin, kazein), polimereket (pl. dextrán, PVA, PVP) , cukrokat (pl. szacharóz, trehalóz, laktóz, xilit, szerbit, mannit, maltóz, glükóz, inozit), bakteriosztatikus szereket (pl. thimerosal, proclin), fenolos anyagokat és anilineket, adott esetben szubsztituensekkel (kisszénatomos alkicsoporttal vagy klór-, brómatommal, stb. szubsztituálva, mint pl. o-metoxifenol, o-metil-fenol. p-metil-fenol, o-amino-fenol, o-hidroxibenzoesav, ο-, m- vagy p-hidroxi-benzilalkohol, anilin, p-aminobenzoesav, p-metoxi-anilin, benzilalkohol, benzoesav, p-nitrofenol, benzil-amin, 1-fenil-l,2-etándiol, transz-1,2-ciklohea ·······« · « « 4 a . a · · ·
4.
xándiol, cisz-1,2-ciklohexán-dikarbonsav, ciklohexil-amin); hidrofób vegyületeket és oldószereket (pl. DMF, etilénglikol, DMSO); detergenseket (pl. Tween-20); aril-bórsav-származékokat (pl. fenil-bórsav, 4-bróm-fenil-bórsav, 3-acetamido-fenilbórsav, 1-naftil-bórsav); szubsztrát-analógokat (pl. TMB, luminol); polihidroxi-vegyületeket (pl. poliol, polietilén-glikol, glicerin); ectoint (pl.(S)-2-metil-1,4,5,6-tetrahidropirimidin-4-karbonsav (THP(B)], (S,S)-h-2-metil-5-hidroxi-l,2,4,5,6-tetrahidropirimidin-4-karbonsav [THP)A)J; ionokat ill. többértékű ionokat (pl. fémionok (Al, Zn, Mg, Fe, Cu, stb.)); komplexkötőket (pl. EDTA); aminosavakat (pl. glicin, prolin, 4-hidroxiprolin, szerin, glutamát, alanin, lizin, szarkozin, γ-aminovajsav, fenil-alanin) és/vagy szubsztanciákat, mint pl. TRIS, sók, aminok, Na-kolát, szacharóz-monolaurát, 2-0-h-mannozilglicerát, tartalmaz.
Tekintettel a különösen egyszerű eljárásra, a találmány szerinti immunteszt-kit alkalmas nagyszámú lehetséges felhasználásra. Különösen előnyös módon a találmány szerinti immunteszt-kit alkalmazásra kerülhet a kutatási diagnosztikában és az in vitro diagnosztikában, a kórokozószerológiában, így például HÍV, HepV, EBV, CMV, stb. által okozott fertőzések kimutatására; a tumordiagnosztikában, így például tumormarkerek vagy tumorhoz kapcsolódó fehérjék, ér-károsító markerek, metasztázis markerek, stb. kimutatására; az allergológiában, így például állati allergének, növényi pollenek, táplálékalkotórészek, stb. kimutatására; az immundiagnosztikában, így például auto-antigé-nek kimutatására az ANA/ENA, diabétesz mellitusz/IDDM, pajzsmirigy an
H-.X'V ί.
tigének, autoimmun hepatitisz, APS, stb. területén; gyulladásos folyamatok vagy fertőzések által okozott immunológiai zavarok kimutatására, mint például citokinek, adhéziós molekulák, kemokinek, stb. kimutatására; a hormonháztartás változásainak kimutatására, mint például ovulációs tesztek, terhességi tesztek, stb.; terápia-monitorozáshoz, így például terápiás antitestek és antigének, szerves vagy szervetlen vegyületek kimutatására; apoptózis vagy nekrózrs által okozott sejthalál kimutatására és/vagy genetikai elváltozások, genetikai betegségek kimutatására .
A találmányt az alábbiakban a technika állásával összehasonlítva közelebbről megvilágítjuk, ahol a technika állását a standard-kittel szemléltetjük.
1. Az ELISA-kitek komponensei:
a) közvetlen enzim-kapcsolt konjugátum
| Standard kit | A találmány szerinti egylépéses kit | ||
| 1 | Antitesttel-bevont mikrotiterlemez | 1 | Antitesttel-bevont mikrotiterlemez beleértve a standardsorozatot, próbahigító-közeget és antitest-konj ugátum.ot |
| 2 | Standardanyag | ||
| 3 | Assay-puffer | ||
| 4 | Antitest-konj ugátum | ||
| 5 | Próbahigító-közeg | ||
| 6 | Mosópuf fer | 2 | Mosópuf fér |
| 7 | Szubsztrát-oldat | 3 | Szubsztrát-oldat |
| 8 | Stop-oldat | 4 | Stop-oldat |
w ·«···*;.· ·< * • · - · ♦ ·*
·.> Ο V J.
b) a második antitest biotinra kapcsolt, a második reagens sztreptavidin-tormaperoxidáz (HRP) vagy hasonló
| Standard kit | A találmány szerinti egylépéses kit | ||
| 1 | Antitestte1-bevont mikrotitérlemez | 1 | Antitesttel-bevont mikrotiterlemez beleértve a standardsorozatot, próbahigitó-közeget és biotinilezett antitestet, sztreptavidin-HRP-t v. hasonlót |
| 2 | Standardanyag | ||
| 3 | Assay-puffer | ||
| 4 | Biotinilezett antitest | ||
| 5 | Próbahigító-közeg | ||
| 6 | Mosópuf fer | 2 | Mosópuf fér |
| 7 | Szubsztrát-oldat | 3 | Szubsztrát-oldat |
| 8 | Stop-oldat | 4 | Stop-oldat |
2. Munkalépések a teszt kivitelezéséhez:
a) közvetlen enzim-kapcsolt konjugátum
| Standard kit | A találmány szerinti egylépéses kit | ||
| 1 | Az antitesttel-bevont mikrotiterlemez mosása | ||
| 2 | A referenciaanyag (standard) munkaoldatának előállítása | ||
| 3 | A standardhigító-közeg felvitele a mikrotiterlemeznek a standardsorhoz kiválasztott mélyedéseibe | ||
| 4 | A standard munkaoldatának externális vagy internális (a lemezen) hígítása meghatározott koncentrációkba (standardsorozat) | ||
| 4a | Adott esetben standardhigítások bevitele a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe | ||
| 5 | A próbahigitó-közeg, mint null-érték (vak) bevitele a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe | 1 |
| 6 | A próbahigitó-közeg szükséges térfogatának bevitele a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe | 1 | A mikrotiterlemez rehidrálása (meghatározott térfogatú desztillált víz hozzáadása a standardsorozat mélyedéseihez, a vak- és a próbamélyedésekhez) |
| 7 | Az ismeretlen próba felvitele | 2 | Az ismeretlen próba felvitele |
| 8 | A HRP-konjugátum o.á. munkaoldatának előállítása | ||
| 9 | A HRP-konjugátum (v. hasonló) felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | ||
| 10 | Inkubálás | 3 | Inkubálás |
| 11 | A mikrotiterlemez mosása | 4 | A mikrotiterlemez mosása |
| 12 | A szubsztrát felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | A szubsztrát felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | |
| 13 | A stop-oldat hozzáadása | 5 | A stop-oldat hozzáadása |
| 14 | Tesztkiértékelés | 6 | Tesztkiértékelés |
b) a második antitest biotinra kapcsolt, a második reagens sztreptavidin-torma peroxidáz (HRP) vagy hasonló
| Standard kit | A találmány szerinti egylépéses kit | ||
| 1 | Az antitesttel-bevont mikrotiterlemez mosása | ||
| 2 | A referenciaanyag (standard) munkaoldatának előállítása | ||
| 3 | A standardhigító-közeg felvitele a mikrotiterlemeznek a standardsorhoz kiválasztott mélyedéseibe | ||
| 4 | A standard munkaoldatának externális vagy internális (a lemezen) hígítása meghatározott koncentrációkba (standardsorozat) | ||
| 4a | Adott esetben standardhigítások bevitele a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe | ||
| 5 | A próbahigító-közeg, mint null-érték (vak) bevicele a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe | 1 |
| 6 | A próbahigító-közeg szükséges térfogatának bevitele a mikrotiterlemez megfelelő mélyedéseibe | 1 | A mikrotiterlemez rehidrálása (meghatározott térfogatú desztillált víz hozzáadása a standardsorozat mélyedéseihez, a vak- és a próbamélyedésekhez) |
| 7 | Az ismeretlen próba felvitele | 2 | Az ismeretlen próba felvitele |
| 8 | A biotinilezett antitest munkaoldatának előállítása | ||
| 9 | A biotin-konjugátum felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | ||
| 10 | Inkubálás | ||
| 11 | A mikrotiterlemez mosása | ||
| 12 | A sztreptavidin-HRP o.á. munkaoldat előállítása | ||
| 13 | A sztreptavidin-HRP (v. hasonló) -oldat felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | ||
| 14 | Inkubálás | 3 | Inkubálás |
| 15 | A mikrotiterlemez mosása | 4 | A mikrotiterlemez mosása |
| 16 | A szubsztrát felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | A szubsztrát felvitele a mikrotiterlemez összes teszthez felhasznált mélyedésébe | |
| 17 | A stop-oldat hozzáadása | 5 | A stop-oldat hozzáadása |
| 18 | Tesztkiértékelés | 6 | Tesztkiértékelés |
A találmányt ennélfogva felhasználhatjuk antigének detektálására egy pár antitesttel (szendvics ELISA). Ugyancsak lehetséges antitestek kimutatása a megfelelő antigénekkel. Receptorok illetve ligandumok detektálása a mindenkori kötőpartnerrel egy további lehetősége a jelen találmány alkalmazásának, úgyhogy nagyszámú tesztformátum rendelkezésre áll. Előnyösen felhasználható a teszt fehérjék, szteroidok, kémiai vegyületek, gyógyszerek, nukleinsavak és hasonló anyagok kimutatására.
:.:. :
I · · · · · ·
A reakciókomplexek detektálása egy közvetlenül kapcsolt enzim segítségével történik (pl. torma peroxidáz, alkálikus foszfatáz és hasonlók), egy enzimatikus reakcióval, amelyet egy második lépésen keresztül valósítunk meg (biotin-sztreptavidinHRP, enzim-kapcsolt antitest a detektáló antitesttel szemben és hasonlók). Minden további jelölés, amely egy immunteszt kivitelezésére alkalmas, mint pl. fluorokróm, kemilumineszcens jelölések, radioaktív jelölések és hasonlók, szintén alkalmazható.
Az első kötőpartner immobilizálásához a hordozó előnyösen egy 96-lyukú polisztirol mikrotiterlemez, ahol azonban egyéb hordozó is, amely egy immunteszt kivitelezésére alkalmas, a jelen találmányban felhasználható.
A méréshez elkészített próba minden folyékony próba lehet, amely az analitot tartalmazza, speciális test folyadékokban, mint szérum, plazmakészítmények, lokális folyadékok, teljes vér és hasonlók, valamint sejttenyészet-felülúszó, az analitok pufferolt oldatai és hasonlók lehetnek.
A találmányt az alábbi specifikus alkalmazási példákkal közelebbről megvilágítjuk anélkül, hogy ezekre korlátoznánk az oltalmi kört.
1. Alkalmazási példa
Szendvics ELISA humán ICAM-1 kimutatására
A) Lemezek előállítása kötésben a próbahigító-közeggel, standard-sorozattal, HRP-konj ugátummal
1. lépés:
Bevonás:
• 9 · · « · • * · · · ··
Egy 96-mélyedéses mikrotiterlemezt a technika állásából ismert módon bevonunk 2,5 pg/ml anti-ICAM-1 antitesttel PBSpufferben (100 μΐ mélyedésenként, egy éjszakán át inkubáljuk 4 °C-on) .
2. lépés:
Blokkolás:
A bevonó-oldatot leszívjuk, a lemezt a mosópufferrel egyszer mossuk (PBS/Tween). A polisztirol-felszín telítéséhez (a nemspecifikus kötések gátlásához) a lemezt 300 μΐ/mélyedés PBS/2% BSA-val blokkoljuk (2 óra, szobahőmérséklet).
3. lépés:
Fixálás:
A blokkoló-oldatot leszívjuk, a lemezt kétszer mossuk, mélyedésenként 150 μΐ PBS/15% szacharózt adunk hozzá. Egy órás inkubálás után szobahőmérsékleten a fixáló-oldatot dekantáljuk. A lemezt kb. 20 órán keresztül 28°C-on levegőétfuvásos szárítószekrényben szárítjuk. A lemezt -20°C-on lefagyasztjuk.
4. lépés:
A próbahigító-közeg bevitele:
A bevont lemezt lefagyasztott állapotban alkalmazzuk. A próbahigító-közeget 2°C-ra lehűtjük. A standardsor előállításához a mikrotiterlemez első mindkét sorában minden mélyedésbe 100 μΐ próbahigító-közeget helyezünk. A vak meghatározásához a megfelelő mélyedésekbe 100 μΐ próbahigító-közeget helyezünk. Az ismeretlen próba meghatározásához minden megfelelő mélyedésbe 90 μΐ próbahigító-közeget teszünk.
5. lépés:
A standard-sorozat elkészítése:
A referencia-anyag (rekombináns humán ICAM-1) munkaoldatát (20 ng/ml) (2°C) kettős meghatározásban a mikrotiterlemez bal oldalának mindkét legfelső mélyedésébe bevisszük (100 μΐ/mélyedés). A lemezen 1:2 szériahigítással egy standard-sorozatot állítunk elő (10 ng/ml; 5 ng/ml; 2,5 ng/ml; 1,25 ng/ml; 0,63 ng/ml).
6. lépés·.
HRP-konjugátum bevitele:
A HRP-konjugátum (anti-ICAM-l-HRP) munkaoldatát 2°C-ra lehűtjük és gyorsan a mikrotiterlemez összes mélyedésébe bevisszük ( 50 μΐ/mélyedés) .
7. lépés:
Liofilizálás:
A mixrotiterlemezt közvetlenül az összes komponenssel történő betöltés után fóliával lefedjük és a -3C°C-ra előhűtött fagyasztó berendezésbe helyezzük. A liofilizálást kb. 20 órán keresztül -30°C-on végezzük. A lefagyasztott lemezt közvetlenül a fagyasztóberendezésből való eltávolítás után szárítószerrel együtt egy alumíniumtasakba helyezzük, amelyet lehegesztünk.
B) A teszt kivitelezése:
A lemezt az alumíniumtasakból kivesszük.
A standard-sorozatot, valamint a vakpróbákat mélyedésenként 150 μΐ desztillált víz hozzáadásával, a próbamélyedéseket pedig 140 μΐ víz hozzáadásával rehidráljuk. A próbamélyedésekbe az ismeretlen próba 10-10 μΐ-ét felvisszük. A lemezt egy fóliával le fedjük és egy órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk. A lemezt háromszor mossuk, majd a lemez minden egyes mélyedéséhez 100 μΐ szubsztrát-oldatot adunk. Az enzimreakciót 15 perc múlva 100 μΐ stop-oldattal leállítjuk, és a szín-intenzitásokat az egyes mélyedésekben fotometrikusan kiértékeljük.
2. Alkalmazási példa
Szendvics ELISA humán interleukin-10 (IL-10) kimutatásához
A) Lemezek előállítása kötésben a próbahigító-közeggel, standardsorral, biotin-konjugátummal, sztreptavidin-HRP-vel 1. lépés: Bevonás:
Egy 96-mélyedéses mikrotiterlemezt a technika állásából ismert módon bevonunk 5 μg/ml anti-IL-10 antitesttel PBS-pufferben (100 μΐ mélyedésenként, egy éjszakán át inkubáljuk 4°C-on). 2. lépés: Blokkolás:
A bevonó-oldatot leszívjuk, a lemezt a mosópufferrel egyszer mossuk (PBS/Tween). A polisztirolfelszín telítéséhez (a nemspecifikus kötések gátlásához) a lemezt 300 μΐ/mélyedés PBS/2% BSA-val blokkoljuk (2 óra, szobahőmérséklet).
3. lépés: Fixálás:
A blokkoló-oldatot leszívjuk, a lemezt kétszer mossuk, mélyedésenként 150 μΐ PBS/15% szacharózt adunk hozzá. Egy órás inkubálás után szooahőmérsékleten a fixáló-oldatot dekantáljuk. A lemezt kb. 20 órán keresztül 28°C-on levegcátfuvásos szárító szekrényben szárítjuk. A lemezt -20°C-on lefagyasztjuk.
4. lépés·.
A próbahigitó-közeg bevitele:
A bevont lemezt lefagyasztott állapotban alkalmazzuk. A próbahigitó-közeget 2°C-ra lehűtjük. A standardsor előállításához a mikrotiterlemez első mindkét sorában minden mélyedésbe 100 μΐ próbahigitó-közeget helyezünk. A vak meghatározásához a megfelelő mélyedésekbe 100 μΐ próbahigitó-közeget helyezünk. Az ismeretlen próba meghatározásához minden megfelelő mélyedésbe 50 μΐ próbahigitó-közeget teszünk.
5. lépés:
A standard-sorozat elkészítése:
A referencia-anyag (rekombináns humán IL-10) munkaoldatát (400 pg/ml) (2°C) kettős meghatározásban a mikrotiterlemez bal oldalára mindkét legfelső mélyedésbe bevisszük (100 μΐ/mélyedés). A lemezen 1:2 szériahigífással egy standard-sorozatot állítunk elő (200 - 3,1 pg/ml).
6. lépés:
Biotin-konjugátum és sztreptavidin-HRP bevitele:
Biotin-konjugátumból (anti-IL-10-BT) és sztreptavidrn-HRPből álló keverék munkaoldatát 2°C-ra lehűtjük és gyorsan a mikrotiterlemez összes mélyedésébe bevisszük (50 μΐ/mélyedés). 7. lépés:
Liofilizálás :
A mikrotiterlemezt közvetlenül az összes komponenssel történő betöltés után fóliával lefedjük és a -30°C-ra előhűtött fagyasztó berendezésbe helyezzük. A liofilizálást kb. 20 órán keresztül -30°C-on végezzük. A lefagyasztott lemezt közvetlenül a fagyasztóberendezésből való eltávolítás után szárítószerrel együtt egy alumíniumtasakba helyezzük, melyet lehegesztünk.
B) A teszt kivitelezése:
A lemezt az alumíniumtasakból kivesszük.
A standard-sorozatot, valamint a vakpróbákat mélyedésenként 150 μΐ desztillált víz hozzáadásával, a próbamélyedéseket pedig 100 μΐ víz hozzáadásával rehidráljuk. A próbamélyedésekbe az ismeretlen próba 50-50 μΐ-ét felvisszük. A lemezt egy fóliával lefedjük és három órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk. A lemezt háromszor mossuk, majd a lemez minden egyes mélyedéséhez 100 μΐ szubsztrát-oldatot adunk. Az enzimreakciót 15 perc múlva 100 μΐ stop-oldattal leállítjuk, és a szín intenzitásokat az egyes mélyedésekben fotometrikusan kiértékeljük.
3. Alkalmazási példa Inverz szendvics ELISA humán interferon-alfa (IFN ) elleni antitestek kimutatásához
A) Lemezek előállítása kötésben próbahigító-közeggel, standard-sorozattal, HRP-konjugátummal
1. lépés:
Bevonás:
Egy 96-mélyedéses mikrotiterlemezt a technika állásából ismert módon bevonunk 10 μg/ml sztreptavidinnel PBS-pufferben (100 μΐ mélyedésenként, egy éjszakán át inkubáljuk 4°C-on).
2. lépés:
Specifikus bevonás/blokkolás:
A sztreptavidin-bevonó-oldatot leszívjuk, a lemezt a
;.t.. . < : : ’ • * · ·« ·* * mosópufferre! egyszer mossuk (PBS/Tween). A polisztirolfelszín telítéséhez (a nem-specifikus kötések gátlásához) a lemezt 300 μΐ/mélyedés IFNa-biotin-konjugátummal, 1 gg/ml PBS/2% BSA-val bevonjuk illetve blokkoljuk (2 óra, 37°C).
3. lépés:
Fixálás:
A bevonó/blokkoló-oldatot leszívjuk, a lemezt kétszer mossuk, mélyedésenként 150 μΐ PBS/15% szacharózt adunk hozzá. Egy órás inkubálás után szobahőmérsékleten a fixáló-oldatot dekantáljuk. A lemezt kb. 20 órán keresztül 28°C-on levegőátfuvásos szárítószekrényben szárítjuk. A lemezt -20°C-on lefagyasztjuk.
4. lépés:
A próbahigító-közeg bevitele:
A bevont lemezt lefagyasztott állapotban alkalmazzuk. A próbahigító-közeget 2°C-ra lehűtjük. A standardsor előállításához a mikrotiterlemez első mindkét sorában minden mélyedésbe 100 μΐ próbahigító-közeget helyezünk. A vak meghatározásához a megfelelő mélyedésekbe 100 μΐ próbahigító-közeget helyezünk. Az ismeretlen próba meghatározásához minden megfelelő mélyedésbe 75 μΐ próbahigító-közeget teszünk.
5. lépés:
A standard-sorozat elkészítése:
A referencia-anyag (anti-humán IFNa-antitest) munkaoldatát (200 ng/ml) (2°C) kettős meghatározásban a mikrotiterlemez bal oldalára mindkét legfelső mélyedésbe bevisszük (100 μΐ/mélyedés). A lemezen 1:2 szériahigítással egy standard-sorozatot állítunk elő (100 - 1,6 ng/ml).
0 :.:. . ·.’. ·:: : *;
6. lépés·.
HRP-konjugátum bevitele:
A HRP-kapcsolt IFNa fehérjék munkaoldatát 2°C-ra lehűtjük és gyorsan a mikrotiterlemez összes mélyedésébe bevisszük (50 μΐ/mélyedés).
7. lépés:
Liofilizálás:
A mikrotiterlemezt közvetlenül az összes komponenssel történő betöltés után fóliával lefedjük és a -30°C-ra előhűtött fagyasztó berendezésbe helyezzük. A liofilizálást kb. 20 órán keresztül -30°C-on végezzük. A lefagyasztott lemezt közvetlenül a fagyasztóberendezésből való eltávolítás után szárítószerrel együtt egy alumíniumtasakba helyezzük, melyet lehegesztünk.
B) A teszt kivitelezése:
A lemezt az aluminiumtasakból kivesszük.
A standard-sorozatot, valamint a vakpróbákat mélyedésenként 150 μΐ desztillált víz hozzáadásával, a próbamélyedéseket pedig 125 μΐ víz hozzáadásával rehidráljuk. A próbamélyedésekbe az ismeretlen próba 25-25 μΐ-ét felvisszük. A lemezt egy fóliával lefedjük és két órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk. A lemezt háromszor mossuk, majd a lemez minden egyes mélyedéséhez 100 μΐ szubsztrát-oldatot adunk. Az enzimreakciót 15 perc múlva 100 μΐ stop-oldattal leállítjuk, és a szín intenzitásokat az egyes mélyedésekben fötömetrikusan kiértékeljük.
4. Alkalmazási példa
:.j.. ·.. ·.: ι :
«»··«« ♦··
BioLISA humán tumor nekrózis faktor-alfa (TNFa) kimutatásához (receptor-ligandum kötés)
A) Lemezek előállítása kötésben a próbahigító-közeggel, standardsorral, biotin-konjugátummal, sztreptavidin-HRP-vel
1. lépés: Bevonás:
Egy 96-mélyedéses mikrotiterlemezt a technika állásából ismert módon bevonunk 1,0 pg/ml rekombináns TNF-receptorral PBSpufferben (100 μί mélyedésenként, egy éjszakán át inkubáljuk 4 ° C-on) .
2. lépés: Blokkolás:
A bevonó-oldatot leszívjuk, a lemezt a mosópufferrel egyszer mossuk (PBS/Tween). A polisztirolfelszín telítéséhez (a nemspecifikus kötések gátlásához) a lemezt 300 μΐ/mélyedés PBS/2% BSA-val blokkoljuk (2 óra, szobahőmérséklet).
3. lépés: Fixálás:
A blokkoló-oldatot leszívjuk, a lemezt kétszer mossuk, mélyedésenként 150 μΐ PBS/15% szacharózt adunk hozzá. Egy órás inkubálás után szobahőmérsékleten a fixáló-oldatot dekantáljuk. A lemezt kb. 20 órán keresztül 28°C-on levegőátfuvásos szárítószekrényben szárítjuk. A lemezt -20°C-on lefagyasztjuk.
4. lépés:
Ά próbahigító-közeg bevitele:
A bevont lemezt lefagyasztott állapotban alkalmazzuk. A próbahigító-közeget 2°C-ra lehűtjük. A standardsor előállításé22 u. -,:··.:·1.1 j.
hoz a mikrotiterlemez első mindkét sorában minden mélyedésbe 100 μΐ próbahigitó-közeget helyezünk. A vak meghatározásához a megfelelő mélyedésekbe 100 μΐ próbahigitó-közeget helyezünk. Az ismeretlen próba meghatározásához minden megfelelő mélyedésbe 50 μΐ próbahigitó-közeget teszünk. 5. lépés:
A standard-sorozat elkészítése:
A referencia-anyag (rekombináns humán TNFa) munkaoldatát (2000 pg/ml) (2°C) kettős meghatározásban a mikrotiterlemez bal oldalának mindkét legfelső mélyedésébe bevisszük (100 μΐ/mélyedés). A lemezen 1:2 szériahigítással egy standardsorozatot állítunk elő (1000 - 16 pg/ml). 6. lépés: Biotin-konjugátum és sztreptavidin-HRP bevitele:
A biotin-konjugátum (anti-TNFa-BT) és sztreptavidin-HRP keverék munkaoldatát 2°C-ra lehűtjük és gyorsan a mikrotiterlemez összes mélyedésébe bevisszük (50 μΐ/mélyedés). 7. lépés: Liofilizálás:
A mikrotiterlemezt közvetlenül az összes komponenssel történő betöltés után fóliával lefedjük és a -30°C-ra előhűtött fagyasztó berendezésbe helyezzük. A liofilizálást kb. 20 órán keresztül -30°C-on végezzük. A lefagyasztott lemezt közvetlenül a fagyasztóberendezésből való eltávolítás után szárítószerrel együtt egy alumíniumtasakba helyezzük, melyet lehegesztünk.
B) A teszt kivitelezése:
A lemezt az alumíniumtasakból kivesszük.
* · · « « * ··*·· · · ·· · I • * · ·* V»
A standard-sorozatot, valamint a vakpróbákat mélyedésenként 150 μΐ desztillált viz hozzáadásával, a próbamélyedéseket pedig 100 μΐ víz hozzáadásával rehidráljuk. A próbamélyedésekbe az ismeretlen próba 50-50 μΐ-ét felvisszük. A lemezt egy fóliával lefedjük és egy órán át szobahőmérsékleten inkubáljuk. A lemezt háromszor mossuk, majd a lemez minden egyes mélyedéséhez 100 μΐ szubsztrát-oldatot adunk. Az enzimreakciót 15 perc múlva 100 μΐ stop-oldattal leállítjuk, és a szín intenzitásokat az egyes mé lyedésekben fotometrikusan kiértékeljük.
Claims (7)
- ♦ · · · « « « * ******* WSzabadalmi igénypontok1. Immunteszt-kit egy próba kvalitatív és kvantitatív meghatározására specifikus kötőpartnerekkel, úgymint antitestekkel, antigénekkel, receptorokkal és ligandumokkal, egy nagyszámú mélyedéssel rendelkező hordozó- illetve mikrotiterlemezzel, ahol a hordozó- illetve mikrotiterlemez egy első kötőpartnerrel be van vonva és a kötőpartner liofilizátum formájában a lemezen fixált, azzal jellemezve, hogy a mikrotiterlemez mélyedéseinek egy részében emellett a meghatározandó próba referencia standardsorozata is növekvő hígítással liofilizált formában jelen van.
- 2. Az 1. igénypont szerinti immunteszt-kit, azzal jellemezve, hogy a mikrotiterlemez mélyedései továbbá liofilizált formában egy második kötőpartner, előnyösen egy antitest enzim- vagy biotin-kapcsolt konjugátumát, és biotin-kapcsolt konjugátum esetében egy enzimet tartalmaznak.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti immunteszt-kit, azzal jellemezve, a mikrotiterlemez mélyedései liofilizált formában egy próbahigító-közeget is tartalmaznak.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti immunteszt-kit, azzal jellemezve, hogy a teszt-kit az előrebevont mikrotiterlemezhez csupán mosópuffert, szubsztrát-oldatot és stop-oldatot tartalmaz.
- 5. Az 1-4. igénypont szerinti immunteszt-kit, azzal jellemezve, hogy biotin-kapcsolt második antitest-konjugátum esetében második reagensként sztreptavidin - tormaperoxidáz (HRP) kerül alkalmazásra.« * w * * »·***-* ·· * *
- 6. Az 1-5. igénypont szerinti immunteszt-kit, azzal jellemezve, hogy a teszt-kit a peroxidázhoz stabilizátorokat illetőleg általános lioprotektiv anyagokat, úgyminz fehérjéket (pl. albuminok, pl. BSA) , fehérjehidrolizátumokát (pl. pepton, zselatin, kazein), polimereket (pl. dextrán, PVA, PVP), cukrokat (pl. szacharóz, trehalóz, laktóz, xiliz, szorbit, mannit, maltóz, glükóz, inozit), baktericsztatikus szereket (pl. thimerosal, proclin), fenolos anyagokat és anilineket, adott esetben szubsztituensekkel (kisszénatomos alkicsoporttal vagy klór-, brómatommal, stb. szubsztituálva, mint pl. o-metoxi-fenol, ometil-fenol. p-metil-fenol, o-amino-fenol, o-hidroxi-benzoesav, o-, m- vagy p-hidroxi-benzilalkohol, anilin, p-amino-benzoesav, p-metoxi-anilin, benzilalkohol, benzoesav, p-nitro-fenol, benzil-amin, 1-fenil-l,2-etándiol, transz-1,2-ciklohexándiol, cisz-1,2-ciklohexán-dikarbonsav, ciklohexil-amin); hidrofób vegyületeket és oldószereket (pl. DMF, etilénglikol, DMSO); detergenseket (pl. Tween-20); aril-bórsav-származékokat (pl. fenil-bórsav, 4-bróm-fenil-bórsav, 3-acetamido-fenil-bórsav, 1naftil-bórsav); szubsztrát-analógokat (pl. TMB, luminol); polihidroxi-vegyületeket (pl. poliol, pollenilén-glikol, glicerin); ectoint (pl. (S)-2-metil-l, 4,5,6-tetrahidropirimidin-4-karbonsav [THP(B)], (S,S)-B-2-metil-5-hidroxi-l,2,4,5,6-tetrahidropirimidin-4-karbonsav [THP)A)]; ionokat ill. többértékű ionokat (pl. fémionok (Al, Zn, Mg, Fe, Cu, stb.)); komplexkötőket (pl. EDTA); aminosavakat (pl. glicin, prolin, 4-hidroxiprolin, szerin, glutamát, alanin, lizin, szarkozin, γ-aminovajsav, fenil-alanin) és/vagy szubsztanciákat, mint pl. TRIS,4 »**·« * » te 9·« • · _ · ‘ * 1 T '.V,8 sók, aminek, Na-kolát, szacharóz-monolaurát, 2-O-h-mannozilglicerát, tartalmaz.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti immunteszt-kit alkalmazása kutatási diagnosztikában és in vitro diagnosztikában, kórokozószerológiában, így például HIV, HepV, EBV, CMV és hasonlók által okozott fertőzések kimutatására; tumordiagnosztikában, így például tumormarkerek vagy tumorhoz kapcsolódó fehérjék, ér-károsító markerek, metasztázis markerek, stb. kimutatására; allergológiában, így például állati allergének, növényi pollenek, táplálékalkotórészek, stb. kimutatására; immundiagnosztikában, így például auto-antigének kimutatására az ANA/ENA, diabétesz mellitusz/IDDM, pajzsmirigy antigének, autoimmun hepatitisz, APS, stb. területén; gyulladásos folyamatok vagy fertőzések által okozott immunológiai zavarok kimutatására, mint például citokinek, adhéziós molekulák, kemokinek, stb. kimutatására; a hormonháztartás változásainak kimutatására, mint például ovulációs tesztek, terhességi tesztek, stb.; terápia-monitorozáshoz, így például terápiás antitestek és antigének, szerves vagy szervetlen vegyületek kimutatására; apoptózis vagy nekrózis által okozott sejthalál kimutatására és/vagy genetikai elváltozások, genetikai betegségek kimutatására.A meghatalmazott:Dr. Láng Tivs dárné szabadalmi üg' vivő S.B.G. & K. Szabadalmi Ügyvivői Iroda H-1062 Budapest, Andrássy út 113. Telefon: 461-1000 Fax: 461-1099
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0037001U AT5044U1 (de) | 2001-05-10 | 2001-05-10 | Quantitativer einschritt immuntest in lyophilisierter form |
| PCT/AT2002/000112 WO2002090983A2 (de) | 2001-05-10 | 2002-04-26 | Quantitaver einschritt immuntest in lyophilisierter form |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0400081A2 true HUP0400081A2 (hu) | 2004-04-28 |
| HUP0400081A3 HUP0400081A3 (en) | 2004-05-28 |
Family
ID=3488777
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0400081A HUP0400081A3 (en) | 2001-05-10 | 2002-04-26 | Quantitative single-step immunoassay in lyophilised form |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040171087A1 (hu) |
| EP (1) | EP1388012A2 (hu) |
| JP (1) | JP2004527758A (hu) |
| CN (1) | CN1507565A (hu) |
| AT (1) | AT5044U1 (hu) |
| CA (1) | CA2446345A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ20033209A3 (hu) |
| HU (1) | HUP0400081A3 (hu) |
| IL (1) | IL158393A0 (hu) |
| PL (1) | PL366665A1 (hu) |
| SK (1) | SK13012003A3 (hu) |
| WO (1) | WO2002090983A2 (hu) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080044928A1 (en) * | 2003-12-23 | 2008-02-21 | Bharat Raghunath Char | Method for the Preparation of Ready-to-Use Support for Rapid Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (Elisa) |
| JP4533122B2 (ja) * | 2004-12-16 | 2010-09-01 | キヤノン株式会社 | プローブ担体、ブローブ担体製造用プローブ媒体およびプローブ担体の製造方法 |
| EP3431994B1 (en) * | 2005-12-21 | 2024-03-06 | Meso Scale Technologies, LLC. | Assay modules having assay reagents and methods of making and using same |
| EP1963854B1 (en) | 2005-12-21 | 2021-02-03 | Meso Scale Technologies, LLC | Assay apparatuses, methods and reagents |
| JP5845156B2 (ja) * | 2005-12-21 | 2016-01-20 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法 |
| ITMI20061063A1 (it) * | 2006-05-31 | 2007-12-01 | Mindseeds Lab S R L | Metrodo e apparato pe rla selezione e la modifica di singole cellule e loro piccoli aggregati |
| KR100900985B1 (ko) | 2007-08-28 | 2009-06-04 | 한국기계연구원 | 동결 건조를 이용한 미세 구조물 내부의 효소 고정화 방법 |
| DE102007052281A1 (de) | 2007-11-02 | 2009-05-07 | Zenteris Gmbh | Einschritt-Multiplex-Immuntest |
| US8048868B1 (en) | 2008-09-02 | 2011-11-01 | Scott & White Healthcare | Method of preventing preeclampsia |
| CN101750487B (zh) * | 2008-12-02 | 2013-07-03 | 博阳生物科技（上海）有限公司 | 干法光激化学发光免疫检测试剂盒及其制备与应用 |
| CN101995459A (zh) * | 2009-08-26 | 2011-03-30 | 刘萍 | 包被板封闭液 |
| CN102375056A (zh) * | 2010-08-27 | 2012-03-14 | 烟台赛尔斯生物技术有限公司 | 固定生物大分子的稳定剂及其制备方法和应用 |
| JP4638555B1 (ja) * | 2010-09-08 | 2011-02-23 | 田中貴金属工業株式会社 | 核酸又は免疫クロマトグラフィー用試薬組成物、核酸又は免疫クロマトグラフィー測定方法及び核酸又は免疫クロマトグラフィー測定用キット |
| CN102323403A (zh) * | 2011-07-22 | 2012-01-18 | 武汉科前动物生物制品有限责任公司 | 一种抗原包被板保护剂及制备方法 |
| CN103063829B (zh) * | 2012-12-21 | 2015-01-14 | 杭州茂天赛科技有限公司 | 一种冻存液 |
| CN105628914B (zh) * | 2016-02-04 | 2019-01-08 | 广州科方生物技术股份有限公司 | 一种能使吖啶酯抗原抗体结合物稳定的稀释液及其制备方法 |
| CN106093387A (zh) * | 2016-05-27 | 2016-11-09 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定骨源性碱性磷酸酶的试剂盒 |
| CN106093430A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-11-09 | 上海阿趣生物科技有限公司 | 可用于检测糖尿病的标志物及其用途 |
| CN106226521B (zh) * | 2016-07-25 | 2018-11-06 | 浙江聚康生物工程有限公司 | 一种检测Lp-PLA2的诊断试剂盒 |
| CN106645454B (zh) * | 2016-10-10 | 2019-04-12 | 南京医科大学 | 精浆中特发性男性不育诊断标志物丝氨酸与山梨醇及其检测方法和应用 |
| US10246732B2 (en) * | 2016-11-01 | 2019-04-02 | Precision Laboratories, Inc. | Stabilized test strip for the detection of hydrogen peroxide |
| CN108107210B (zh) * | 2017-12-18 | 2019-01-04 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种髓过氧化物酶冻干校准品的制备方法及冻干保护液 |
| CN108196047A (zh) * | 2017-12-28 | 2018-06-22 | 广东希格生物科技有限公司 | 一种固相抗体双夹心免疫反应体系及其试剂盒与应用 |
| LU100716B1 (en) * | 2018-02-26 | 2019-08-28 | Stratec Biomedical Ag | Assay components for diagnostic in vitro applications |
| CN108398550B (zh) * | 2018-03-07 | 2022-07-26 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种组合物、芯片及其制备方法和包含有该芯片的检测装置 |
| CN108469519B (zh) * | 2018-03-07 | 2020-03-24 | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 | 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及糖尿病抗体谱检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108822204A (zh) * | 2018-06-13 | 2018-11-16 | 广东工业大学 | 一种烷基酚类化合物人工抗原的制备方法及其应用 |
| CN109917134B (zh) * | 2018-12-21 | 2020-07-14 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种校准品稳定剂、测定c肽的检测试剂盒及检测方法 |
| CN109870579B (zh) * | 2019-02-03 | 2022-02-11 | 辽宁迈迪生物科技股份有限公司 | 单克隆抗体保护液及制备方法和应用、应用单克隆抗体保护液的试剂与免疫组化试剂盒 |
| KR102020184B1 (ko) * | 2019-06-27 | 2019-09-09 | 가천대학교 산학협력단 | 화학발광 신호의 증폭 방법 |
| CN111118222B (zh) * | 2020-02-26 | 2023-04-07 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | Hbv检测试剂盒及其使用方法和应用 |
| CN111896730B (zh) * | 2020-04-15 | 2023-09-15 | 青岛汉唐生物科技有限公司 | 一种干式免疫荧光定量法肝素结合蛋白（hbp）检测试剂盒 |
| US20210325380A1 (en) * | 2020-04-20 | 2021-10-21 | EnLiSense, LLC | Disease diagnostics using a multi-configurable sensing array |
| CN111638375B (zh) * | 2020-06-08 | 2022-12-13 | 深圳市国赛生物技术有限公司 | 一种用于测定活化部分凝血活酶时间的体外诊断试剂盒 |
| JP7714329B2 (ja) * | 2020-09-08 | 2025-07-29 | デンカ株式会社 | 偽陰性の抑制により特異性を改善した検査試薬 |
| JP7714330B2 (ja) * | 2020-09-08 | 2025-07-29 | デンカ株式会社 | 偽陽性の抑制により特異性を改善した検査キット |
| CN112098654B (zh) * | 2020-09-15 | 2023-07-18 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法 |
| CN114324882B (zh) * | 2020-10-12 | 2022-12-27 | 广东菲鹏生物有限公司 | 蛋白稳定剂及其应用 |
| EP4330675A1 (en) * | 2021-04-26 | 2024-03-06 | Stark Sarl | Patient side in vitro screening kit for rapid diagnosis of a pathology |
| WO2023142130A1 (zh) * | 2022-01-30 | 2023-08-03 | 皮乐迪有限公司 | 改进的酶小球在目标核酸检测中的应用 |
| CN114674815B (zh) * | 2022-03-09 | 2025-01-07 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种植物油料油脂甾醇含量的速测方法及速测试剂盒 |
| CN116087503A (zh) * | 2023-01-08 | 2023-05-09 | 杭州联科生物技术股份有限公司 | 一种实现elisa简易操作的方法 |
| CN117741138A (zh) * | 2023-12-01 | 2024-03-22 | 深圳市迈科龙生物技术有限公司 | 一种基质液、质控品及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3663374A (en) * | 1970-08-14 | 1972-05-16 | Geomet | Method and apparatus for quantitating enzyme activity |
| IT1006557B (it) * | 1971-09-08 | 1976-10-20 | Bagshawe Kenneth Dawson | Cella di reazione particolarmente utile in prove di radioimmunita |
| DE3071693D1 (en) * | 1979-06-28 | 1986-09-18 | Pasteur Institut | Reagent for detecting parasitoses and allergies, detection process using this reagent and test kit therefor |
| US4351158A (en) * | 1980-01-22 | 1982-09-28 | American Home Products Corporation | Method of producing multicomponent lyophilized product |
| US4446232A (en) * | 1981-10-13 | 1984-05-01 | Liotta Lance A | Enzyme immunoassay with two-zoned device having bound antigens |
| US4828986A (en) * | 1986-09-29 | 1989-05-09 | Scripps Clinic And Research Foundation | Assay method and diagnostic system for determining the ratio of APO B-100 to APO A-I in a blood sample |
| JPS63111467A (ja) * | 1986-10-30 | 1988-05-16 | Tosoh Corp | 免疫測定方法 |
| GB8701432D0 (en) * | 1987-01-22 | 1987-02-25 | Unilever Plc | Assays |
| US5759774A (en) * | 1988-05-18 | 1998-06-02 | Cobe Laboratories, Inc. | Method of detecting circulating antibody types using dried or lyophilized cells |
| US5102788A (en) * | 1988-11-21 | 1992-04-07 | Hygeia Sciences, Inc. | Immunoassay including lyophilized reactant mixture |
| US5200321A (en) * | 1990-09-07 | 1993-04-06 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Microassay on a card |
| JP3290660B2 (ja) * | 1991-10-11 | 2002-06-10 | アボツト・ラボラトリーズ | 特異的結合検定用の使用単位試薬組成物 |
| US7141436B2 (en) * | 1999-11-03 | 2006-11-28 | Science And Technology Corp. | Immunoassay and reagents and kits for performing the same |
| FR2814239B1 (fr) * | 2000-09-21 | 2003-01-03 | Biopep Sa Soc | Test de dosage enzymatique a visee diagnostique a lecture optique |
-
2001
- 2001-05-10 AT AT0037001U patent/AT5044U1/de not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-04-26 PL PL02366665A patent/PL366665A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-04-26 JP JP2002588189A patent/JP2004527758A/ja active Pending
- 2002-04-26 US US10/476,993 patent/US20040171087A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-26 SK SK1301-2003A patent/SK13012003A3/sk unknown
- 2002-04-26 CN CNA028095553A patent/CN1507565A/zh active Pending
- 2002-04-26 EP EP02769103A patent/EP1388012A2/de not_active Withdrawn
- 2002-04-26 CA CA002446345A patent/CA2446345A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-26 CZ CZ20033209A patent/CZ20033209A3/cs unknown
- 2002-04-26 IL IL15839302A patent/IL158393A0/xx unknown
- 2002-04-26 WO PCT/AT2002/000112 patent/WO2002090983A2/de not_active Ceased
- 2002-04-26 HU HU0400081A patent/HUP0400081A3/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1388012A2 (de) | 2004-02-11 |
| IL158393A0 (en) | 2004-05-12 |
| HUP0400081A3 (en) | 2004-05-28 |
| CN1507565A (zh) | 2004-06-23 |
| WO2002090983A2 (de) | 2002-11-14 |
| PL366665A1 (en) | 2005-02-07 |
| JP2004527758A (ja) | 2004-09-09 |
| SK13012003A3 (sk) | 2004-04-06 |
| WO2002090983A3 (de) | 2003-09-12 |
| CA2446345A1 (en) | 2002-11-14 |
| CZ20033209A3 (en) | 2004-04-14 |
| US20040171087A1 (en) | 2004-09-02 |
| AT5044U1 (de) | 2002-02-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUP0400081A2 (hu) | Kvantitatív egylépéses immunteszt liofilizált formában | |
| CN112782156B (zh) | 一种壳多糖酶3样蛋白1试剂盒及其制备方法 | |
| KR20090086231A (ko) | 측정 대상 성분의 면역 측정법 | |
| US11169148B2 (en) | Method for detecting test substance and reagent kit for detecting test substance | |
| KR101233837B1 (ko) | 비특이 반응이 억제된 면역 측정 방법 및 시약 | |
| CN113419059A (zh) | 用于化学发光免疫分析方法的封闭剂 | |
| JPH08503302A (ja) | 尿中における性行為感染症に関連する微生物に対する抗体のイムノアッセイ | |
| CN102687015A (zh) | 用于分析样本中的待分析成分的方法和分析试剂盒 | |
| JPH04233461A (ja) | 同時アッセイ法 | |
| US20170138937A1 (en) | Detection of analytes | |
| JP2000508075A (ja) | 発光特異的結合アッセイ | |
| US8691595B2 (en) | Method for detecting analytes | |
| JP2001289852A (ja) | イムノクロマトグラフィー装置 | |
| CN114113610B (zh) | 吖啶酯标记复合物和检测试剂盒 | |
| Palandra et al. | Application of Immunoaffinity Mass Spectrometry (IA-MS) for Protein Biomarker Quantification | |
| JP4830114B2 (ja) | 汎用的高感度ｅｌｉｓａ法およびその試薬キット | |
| EP1184666A2 (en) | Auxiliary haptens and haptenylated agents in displacement immunoassays | |
| US20090317919A1 (en) | Method for Assaying Antigens | |
| JPH10319017A (ja) | 蛍光エネルギー転移を利用した物質の測定方法およびそのための試薬 | |
| JP3309900B2 (ja) | 抗ｆｋｂｐ１２自己抗体の検出方法 | |
| JP3593384B2 (ja) | 化学発光分析試薬の安定化 | |
| JPH09196922A (ja) | 複数の亜型が存在する抗原の共通抗原決定基に特異的な抗体の測定方法及び測定試薬 | |
| JPH048299A (ja) | アルカリ性フォスファターゼの測定方法 | |
| JP2003254966A (ja) | 抗カルパスタチン抗体の測定法及び測定キット | |
| JP2004020344A (ja) | 微小粒子固相上に固定化された物質の測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FD9A | Lapse of provisional protection due to non-payment of fees |