HU229187B1

HU229187B1 - Method for obtaining oestrogen from mare urine

Info

Publication number: HU229187B1
Application number: HU0402194A
Authority: HU
Inventors: Rasche Heinz-Helmer Dr; Olaf Rupp
Original assignee: Abbott Products Gmbh
Priority date: 2001-12-01
Filing date: 2002-11-27
Publication date: 2013-09-30
Also published as: MXPA04005144A; TW200300693A; NO20042761L; CA2468933C; PT1453527E; AU2002352161A1; HUP0402194A3; RU2004120299A; WO2003048183A3; BR0214607A; PL368904A1; HK1073241A1; IL162229A0; RU2308955C2; AU2002352161B2; DK1453527T3; AR037670A1; CN1286472C; JP2005511703A; DE50208167D1

Description

Találmányunk konjugált öszlrogének természetes keverékének kinyerésére vonatkozik vemhes kancák vizeletéből.

Az öszfrogéneket a gyógyászatban hormonhelyettesítéses terápiában alkalmazzák. Az ösztrogén-keverékeket különösen nőknél változás éveiben bekövetkező természetes vagy mesterséges menopauzás panaszok kezelésére és megelőzésére használják. Ennek során a vemhes kancák vizeletében levő természetes konjugált öszirogén-keverékek különösen hatékonynak és jól elviselhetőnek bizonyultak.

A vemhes kancák vizeletében (a továbbiakban *‘PMU) levő oldott sziláruanyag-tartalom természetesen tág határokon belül változhat és általában 4Ő-9Ö g szárazanyag/llter érték. A vemhes kancák vizelete karbamld és egyéb szokásos vizelettartamanyagok .mellett, a szárazanyag-tártál ómra vonatkoztatva kb. 2-5 tömeg% mennyiségben fenolos komponenseket is tartalmaz. A fenolos komponens közé tartoznak a krezolok és a HPMF néven ismert dihidrt)~3,4-bisz-((3-hidroxi-:feml}-metil]-2(3.H)-ftiranon. Ez a vegyület szabad vagy konjugált formában, lehet jelen., A PMU természetes ösztrogén-keveréket tartalmaz, ameh messzemenően konjugált. formában ~ pl kénsavfelészíer-nátrinmső (a továbbiakban “szülfáíső”) - formában van jelen. A konjugált ösztrogén- tartalom (ösztrogénszulíát-sófean számítva) a szárazanyagra vonatkoztatva 0,3-1 tömeg%.

A WÖ 98/08526 sz. nemzetközi közrebocsátás! iratban ismertetett eljárás szerint szerei no láris, különösen nem-ionos szemipoláris polimer adszorber gyantán végzett szilárdfázisú extrakcióval a fenolos vizeietíariamanyagokban feldúsított, messzemenően krezol- es HPMF-mentes, a PMÜ természetes ösztrogén-tartalmát gyakorlatilag teljes mértékben tartalmazó keveréket nyernek. Ez a keverék gyógysxerkomponensként konjugált osztrogének természetes keverékét tartalmazó gyógyszerek előállításánál kiindulási anyagként alkalmazható,

A gyógyászatban hatőanyagkomponensként felhasználandó kinyert természetes konjugált ösztrogén-keverékeknek bizonyos meghatározott gyógyászati előírásoknak meg keli felelniök, pl. sz Amerikai Egyesült Államok Gyógyszerkönyvében (USP) vagy az Európai

Gyógyszerkönyvben (Buropean Phamiacopeia) rögzített követelményeknek, A száraz$sí φ* ·.· «Φφφ

Ο X >

•V .3 anyagra vonatkoztatott szabad ősztrogének mennyisége bizonyos határértéket nem haladhat meg. A WO 98/08526 sz. nemzetközi közrebocsátás! iratban Ismertetett eljárással előállított konjugált ösztrogén-keverékek a gyógyászati előírásoknak általában megfelelnek.

Azt találtuk azonban, hogy ha a konjugált ősztrogének természetes keverékének kinyerésére um, megöregedett vizeletet alkalmazunk, úgy a gyógyászati követelmények gyakran nem tarthatok be (pl, a szabad ősztrogének maximálisan megengedett mennyisége). Az megöregedett vizelet kifejezésen pl, hosszabb időn át és/vagy adott esetben magasabb hőmérsékleten tárolt vagy szállított PMIJ értendő. A PMU fentsmktett öregedése valószínűleg, .arra vezethető vissza, hogy az alkalmazott tárolási és/vagy szállítási körülményektől függően a konjugált ösztrogén-larialom az idővel vagy magasabb hőmérsékleten csökkenhet, míg a nemkivánt szabad ősztrogének mennyisége növekszik. Az ősztrogének természetes keverékének ereded összetétele ennek, következtében a megöregedett vizeletben a friss vizelethez képest hátrányosan változhat. A WO 98/1)8526 sz. nemzetközt közrebocsátás! iratban ismertetett eljárással nyert természetes konjugált ösztrogén-keverékre megöregedett kiindulási termék felhasználása esetén- a megváltozott összetétel miatt gyakran fennáll az a veszély, hogy a nyert extraktüm a gyógyászati előírásoknak már nem felel, különösen a szabad ősztrogének maximálisan megengedett mennyisége nem tartható be. Ennek jelentős hátránya, hogy a megöregedett PMU-bőI nyert, a konjugált ősztrogén-keverék értékes hatóanyag extrakttunál tartalmazó sarzsok már nem használhatók fel gyógyászati készítmények előállítására és ezért kiselejtezendok. Az értékes természetes gyógyászati hatóanyagban bekövetkezett veszteség gazdaságossági szempont bői messzemenően káros, különösen tekintettel arra, hogy a vemhes kancák vizeletének begyűjtése egyrészről költséges, másrészről, csupán a terhesség bizonyos időszakaiban végezhető el és ezenkívül az ezzel kapcsolatos logisztikai feltételek is jelentősek.

Találmányunk célkitűzése műszakilag és gazdaságossági szempontból optimális eljárás kifejlesztése konjugált ősztrogének fenolos vizelettartamanyagokban feldúsított természetes keverékének PMU-bóI történő kinyerésére, amely eljárásnál kiindulási anyagként megöregeded PMV - azaz hosszabb időn át és/vagy magasabb hőmérsékleten tárolt vagy tárolt, adott esetben nagyobb mennyiségű szabad öszfrogént tartalmazó PMV - is biztonságosan korlátozás nélkül alkalmazható. Találmányunk célkitűzése különösen olyan eljá♦ ϊ * * *♦ tás kidolgozása, amellyel a fenti kiindulási anyagból kinyert természetes konjugált ősztrogén-keverék jó hatóanyagtartalómmal rendelkezik és a gyógyászati előírásoknak - különösen a szabad ősztrogének maximálisan .megengedett mennyiségére vonatkozóan ~ megA fenti célkitűzést a leien találmány segítségével oldjuk meg.

A találmányunk tárgyát képező eljárás segítségével meglepően egyszerű módon konjugált ósArogének keveréke megöregedett - azaz különösen adott esetben nagyobb mennyiségő szabad öszfrogéneket tartalmazó - PMU-ból Is kinyerhető; mimeUett. a kapott, konjugált ösztrogén-keverék kitűnő minőségi tulajdonságokkal rendelkezik és a gyógyászati előírásoknak megfelel különösen a szabad ősztrogének maximálisan megengedett mennyisége tekintetében.

A találmány szerinti eljárás a WO 98/ÖS52Ő sz, nemzetközi közrebocsátás! Iratban ismertetett, konjugált ősztrogének fenolos vizelettartamanyagokban dúsított természetes keverékének PMU-ból történő kinyerésére vonatkozó eljárásból indul ki.

Találmányunk tárgya eljárás konjugált ősztrogének fenolos vizelettartamanyagokban dúsított természetes keverékének kinyerésére vemhes kancák vizeletéből oly módon, hogy

a) egy 'vizeletfolyadékot - amely adott esetben a nyálka·· és szilárdanyagoktöl megszabadított vizeleííbiyadék, e vízeletfolyadék bepárolt koneenírátuma vagy e vizeletfolyadék memhránszűrésével kapott bepárolt vizeletretentátum lefest - valamely szemipolárls polimer adszorber gyantának, a vizeletfolyadékban levő konjugált ösztrogén-keverék adszorpciójához elegendő mennyiségével érintkezésbe hozzuk, és a konjugált ősztrogének keverékét megkötve tartalmazó szemipoláris polimer adszorber gyantát a maradék vizeletfolyadéktól elválasztjuk;

b) a konjugált ősztrogén-keveréket tartalmazó szemipoláris polimer adszorber gyantát legalább 12,0, előnyösen 12,5-14,0 pH-értékre beállított mosóvízzel mossuk;

c) a mosott adszorber gyantát a megkötött konjugált ösztrogén-keverék deszorpclójához elegendő mennyiségű, eluálőfoíyadékkal - éspedig vízzel elegyedő szerves oldószerként valamely vízzel elegyedő éterrel, kis szénatomszámű alkanollal vagy kis szén* φ φ * * ♦ * ♦ X Φ * * * ν«»4 φ*<* »* **» ** atomszámú alifás ketonnal vagy a vízzel elegyedő szerves oldószerek és adott esetben meglúgosított víz elegyével - hozzuk érintkezésbe, és a konjugált ösztrogének természetes keverékét tartalmazó eluátumot az adszorber gyantától elválasztjuk és adott esetben bepároljuk nümellett a találmány szerinti eljárás az irodalomban ismertetett eljárástól abban különbözik, hogy ab) és c) eljáráslépés közé egy közbenső mosást lépést iktatunk be, amelynek során a konjugált Ösztrogének keverékéi tartalmazó szemípoláns adszorber gyantát, vízzel mossuk.

A sarzs-elökészítés, az Önmagában ismert a)₅ b) és e) eljáráslépés, valamint a c) eljárásiépésnél kapott, a konjugált ösztrogének természetes keverékét tartalmazó eluátum felhasználása a WO 98/ÖS526 sz. nemzetközi közrebocsátás! iratból ismert. A WO 9S/Ö8526 sz, nemzetközi közrebocsátás! irat tanaimé a jelen szabadalmi bejelentés tárgyát képezi. Az általános eljárás és a felhasznált anyagok további részletei a szabadalom példáiban kerülnek összefoglalásra. így pl. a WO 98/08526 sz< nemzetközi közrebocsátást Irat szerint szemipolárts, különösen nem-ionos szemipolárts adszorber gyanták alkalmazhatók. Ezen túlmenően a találmány szerinti eljárásnál meglepő .módon más adszorber gyanták is felhasználhatók, a találmány szerinti közbenső mosási lépéssel együtt, a termék minőségének, illetve a betartandó gyógyszeripari elöírásjellemzök romlása nélkül. A találmány szerint felhasználható adszorber gyantákat a továbbiakban a leíró· részben részletesebben ismertetjük.

Találmány értelmében az a) lépésnél a konjugált ösztrogének keverékét tartalmazó szénitpoláris adszorbens-oszlopot egy b) reakciófépés után beiktatott közbenső mosási lépésben vízzel mossuk. A mosóvíz mennyiségét oly módon választjuk meg, hogy az ezután következő c) eljárás-lépésnél kapott eluátum a konjugált ösztrogéneknek a szabad ösztrogéntartalom felső határával kapcsolatos követelményeket kielégítse és Ily módon a gyógyszergyártásban hatóanyagkomponeosként felhasználható legyen. így célszerűen egy ágytérfogat adszorber gyantára vonatkoztatva pl. 2-8, előnyösen 3-5 ágytérfogat mosóvizet alkalmazunk, A mosóvizet célszerűen óránként 3-1Ö téríőgatrész/l liter adszorber gyanta, előnyösen 5-7 térfbgairész/1 térfbgatrész adszorber gyanta sebességgel vezetjük át az adszorber gyantát tartalmazó reaktoron.

*+ * * φ * » *

Kifejezetetten meglepő, hogy a h) és e) eljárás-lépés közé beiktatott egyszerű, vízzel történő adszorhens gyanta-mosási lépés által megöregedett PMU alkalmazása esetén is a konjugált ösztrogének természetes keverékének a gyógyszeripart követelményeket kielégítő kitűnő minőségű hatóanyag-extraktumját nyerjük. Különösen meglepő, hogy' mindenekelőtt a megöregedett PMU-ban adott esetben jelenle vő nagyobb mennyiségű szabad ősztrogén-tartálom oly mértékben csökkenthető. hogy a e) eljárás-lépes szerint az eluátum a konjugált ösztrogének természetes keverékét a szigorú gyógyszeripari előírásoknak megfelelő minőségben adja. így megöregedett FMÜ felhasználása esetén is a o) lépésnél kapott extraktum az USP vagy Európai Gyógyszerköny követelményeit kielégíti. Ennek érteimében megöregedett PMU-bóI is a konjugált ösztrogének. természetes keverékét tartalmazó, kvalitatív és kvantitatív szempontból egyaránt magasértékű hatóanyag-extraktumot nyerünk. A találmány szerinti eljárással nyert hatóanyag-extraktnmok a szabad ösztrogének maximálisan megengedett mennyiségét a felhasznált PMIJ korától és eredetétől függően biztonságosan betartják és a kapott termék gyógyszerek előállításánál előnyösen felhasználható értékes kiindulási anyag. Az értékes gyógyászati nyersanyagok - a konjugált ösztrogének természetes keveréke - terén jelentkező nemkívánatos és gazdaságilag hátrányos veszteségek elkerülhetők.

Á találmányunk tárgyát képező eljárás további előnye, hogy a e) lépésnél nyert eluátum a technika állásával összehasonlítva szárazanyagra vonatkoztatva nagyobb ősszhormon-tartalommal rendelkezik. Ezáltal pl. a hatőanyagtartalom vonatkozásában, lényegesen jobb termékminőség érhető el.

A találmányunk tárgyát képező eljárás előnyös foganatositási módja szerint a közbenső mosási lépést szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékleten, különösen 0-10 'G-on hajtjuk végre. Azt találtuk ugyanis, hogy a külön beiktatott közbenső mosási lépés esetén adott-esetben fellépő hormon- illetve hatőanyagveszteségek ily módon jelentősen csökkenthetők. Szobahőmérsékletnek általában a környezeti hőmérsékletet tekintjük, azaz 20 °C és 30 °C közötti hőmérsékletet. Az eljárást célszerűen 0 °C-on vagy 0 ^cC köröli hőmérsékleten végezhetjük el. A gyakorlatban 0 ^vC-nai valamivel magasabb hőmérsékleten ajánlatos dolgozni, és a fenti hőmérséklet-tartományt megfelelő intézkedésekkel be kell tartani, E célból a hőmérséklet csökkentésére általában használatos módszereket alkai*.«·» ·* mázhatjuk, pl. hűtött reaktorokat, hűtött anyagokat és/vagy hűtött kiindulási anyagot (pl. PMXJ) alkalmazhatunk. A fentiekben használt ”0 °C, illetve 0 ^UC közelében kifejezésen gyakorlati szempontból a 0 °C és kb. 5 °C közötti hőmérséklet-tartomány, különösen a 0 °C és kb. 3 °C közötti hőmérséklet-tartomány értendő.

A közbenső mosási lépésnél lehetséges hormon-veszteségek legalacsonyabb szinten tartása céljából a közbenső lépésnél és/vagy a b) eljáráslépésnél alkalmazott meglágosUott mosóvizet .szobahőmérséklet alatti hőmérsékletre, előnyösen Ö-W °C-ra előhőiiük. További célszerű. Illetve előnyös hőmérséklet-tartomány - a korábbiakban megadottnak megfelelően - a 0 és kb. 5 °C között, különösen a Ö °C és kb. 3 °C közötti hőmérséklet-tartomány. Előnyösen 0 °C-on, illetve 0 °C közelében dolgozhatunk, azaz a közbenső mosási műveletnél és/vagy a b) eljárás-lépésnél alkalmazott meglúgosított mosóvizet előnyösen 0 °€-nál valamivel magasabb hőmérsékletre előhűtjúL A b) eljáráslépésnél alkalmazott lehűtött, meglúgosított mosóíolyadék segítségével egy bizonyos fokú előhűtést érünk el, vagy a már lehűtött adszorber gyanta hűtését fenntartjuk és ily módon pl. elkerüljük. hogy a közbenső lépésnél felhasznált lehűtött mosóvíz nemkívánatos módon újra felmelegedjék. Előnyösen járhatunk el oly módon, hogy a közbenső hűtési lépést és az azt megelőző b) eljárás-lépést ugyanazon, hőmérséklet-tartományban végezzük el, pl, szobahőmérséklet alatti hőfokon, különösen 0 ^,JC és lö ^iJC közötti hőmérsékleten, vagy előnyösen a lentiekben megadott hőmérséklet-tartományokban.

Á találmány szerinti eljárás fentismertetett, szobahőmérséklet alatti hőfokon végzett foganatosítás! módja szerint előnyösen járhatunk el oly módon, hogy valamennyi berendezést (pl. a szemipoláris· adszorber gyanta felvételére szolgáló reaktorokat vagy a szemipoláris adszorber gyantát már tartalmazó reaktorokat és/vagy a betáplált PMU-t) szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékletre, előnyösen ö-lö ^o'C-ra vagy a fentiekben megadott előnyös hőmérséklet-tartományokra előhötjük.

A találmány szerinti el járásnál adszorbensként polimer adszorber gyantákat alkalmazhatnak. Előnyösen szemipoláris, különösen nem-ionos szemipoláris polimer adszorber gyantákat használhatunk, A találmány szerinti eljárásnál adszorbensként felhasználható szemipoláris polimer adszorber gyanták előnyösen porózus, szerves, nem-ionos poümeV Φ

rek, amelyek - a nem-poláris hidrofób polimer adszorber gyantákkal ellentétben közbenső polaritásnak.(pt a gyanta aktív felületének dipólus momentuma 1,0-3,Ö, előnyösen 1,5-2,0 Debve) és hozzávetőlegesen hidrofil szerkezetűek (pl. polikarbonsavészíer-gyanIák). Célszerűen olyan makroporőzus szemípoláris gyantákat alkalmazhatunk, amelyek előnyösen makroretiteláris szerkezetűek és átlagos pórus átmérőjük 50-ISO Angström, előnyösen 70-100 Angström, és fajlagos felületűk 300-900 ní7g, előnyösen 400-500 nT/g. Különösen előnyösen alkalmazhatunk makroporózus térhálósított alifás polikarbonsavészter-gyantákat. különösen térhálósított poliakril észter-gyantákat, pl. a Rohm und ©

Haas cég Ámherlite XAD-7 terméke; ezek nem-ionos szemlpolárls adszorber gyanták.

A. fenti előnyös adszorbenseken kívül más adszorber gyanták is felhasználhatók. így adszorber gyantaként nem-poláris, szentipoláris, valamint poláris adszorber gyanták alkalmazhatók. Az adszorberre felvihető vizelet mennyiségét az adott adszorber kapacitás határozza meg. Adszorber gyantaként kereskedelemben, beszerezhető típusokat alkalmazhatunk, pb sztirol-divinilbenzol alapszerkezetű polimer Amberlít adszorber gyantákat (pl. XAD-1 ISO, XAD-2, XAD-4, XAD-16 típusok), akrllészter-alapvázú gyantákat (pl. XAD-7), vagy nitrogént és oxigént tartalmazó magaspolaritásű alapvázú gyantákat (pl. XAD-12). További alkalmazható adszorber gyanták az alábbiak: Dowex-gyanták (szilről és dívinilbenzol kopolimerek), mint pl, Dowex 112, Dowex öptipore, Dowex Öptipore V 493; Lewatlte (térhálösitott polisztirolok), pl. Lewatit OC 1064, Lewatit OC 1Ö6Ő vagy Lewatit OC 1163, políamm-anioncserélő gyanták, pl. Dowex-gyanlák. Különösen előnyösen alkalmazhatók továbbá az alábbi adszorber gyanták: XAD-7, XAD-16 (HP típus), XAD 1.18 és Dowex Öptipore; előnyösen Dowex öptipore V 493, valamint Lewatlte OC 1064, OC 1666 és ÖC 1163.

Mint arra a korábbiakban már rámutattunk, a találmány szerinti eljárás az irodalomból ismert módszerekkel összehasonlítva számos előnyt és javítást mutat így a találmány szerinti eljárás segítségével szabad ősztiogéneket nagyobb mennyiségben tartalmazó megöregedett PMÜ is felhasználható, a gyógyszeripari termék minőségének csökkenése és a gyógyszerkönyvi követelmények betartásának veszélyeztetése nélkül, A találmány szerinti eljárás gazdaságossági előnyöket is mutat, minthogy az, előállított termék a gyógyszeripari követelményeknek, megfelel (pl, nem lépi a szabad öszirogén-tartalom megenge♦ ** » * ν φ * φ φ * φ χ « φ φ * ♦ΦΦ* *φφφ Φ* * ** deli felső határát) és ezáltal az értékes gyógyászati hatóanyagok terén bekövetkező veszte ségek csökkenthetők, A találmány szerinti eljárással jobb minőségű hatóanyagkomponensek állíthatók elő, amelyeknek a szárazanyag-tartalomra vonatkoztatott hormontartalma nagyobb. A találmány szerinti eljárással előállított hatőanyagkomponens kiválóan alkalmas hatóanyagként konjugált ösztrogének természetes keverékét tartalmazó gyógyszerek előállítására.

Találmányunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül hogy a találmányt a példákra korlátoznánk.

»*

♦ « » > Λ*ν* *·*

Az alábbi példákban hatőanyag-extraktumok kinyerésére szolgáló általános eljárást ismertetünk, a PMU-ban levő konjugált ösztrogének keverékét tartalmazó és fenolos vizelettartamanyagokban messzenenoen dúsított PMU-ból, A példákkal igazoljtik, hogy találmányunk értelmében szabad ösztrogeneket nagyobb mennyiségben tartalmazó megöregedett PMU-ból is magas hatóanyagtartalmú, jő minőségű extraktumok nyerhetők.

WO 98/08526 sz. nemzetközi közrehoesátási irat szerinti eljárás

A találmányunk szerinti eljárásnál - a WO 98/08526 sz. nemzetközi közrebocsátás! irathoz hasonlóan - PMU, annak bepárlásával nyert koncentráltan vagy membranszürésse! nyert refeotátum alkalmazható, Az összegyűjtött vizeletet először és nyálka- és szilárd anyagoktól önmagában ismert módon megszabadítjuk. A szilárd- és nyálkaanyagokaí célszerűen ülepedni hagyjuk, majd önmagukban 'isméit elválasztási módszerekkel (pl. dekantálás, szeparálás és/vagy szűrés) elválasztjuk, így pl. a PMU-t önmagukban Ismert elválasztó berendezéseken vezetjük át (pl, szeparátorok, szűrőberendezések vagy ülepítők).. Elválasztó berendezésként pl, homokágy vagy kereskedelemben beszerezhető szeparátorok (pl. fuvokás vagy kamrás szeparátorok) alkalmazhatók. Kívánt esetben mikroszűrö berendezések, vagy ultaszörő berendezések is félhasználhatók, amelyek segítségével egyidejűleg a szűrt PMU messzemenően cairátlanílható és virusmeníesiíhetö.

A vizelethez adott esetben tartósítószereket germleldeket. anthelminnkumokat adhatunk.

buktericíd anyagokat és/vagy

A PMU helyett erősen beíöményitett PMU-retentátot is alkalmazhatunk, amelyet a PMU-ból önmagában ismeri membránszüféssel nyerhetünk, A reteutátum szilárdanyag-tartalma és összetétele a felhasznált PMU-tól és a membránszűréshez alkalmazott membrántól (pl. annak pórusnagyságától), valamint a szűrési körülményektől függően változhat. így pl. nanoszűrömembrán felhasználása esetén a PMU-retentátunr az ösztrogén-tartalmat közel veszteségmentes koncentrációban tartalmazza, ugyanakkor az alacsony molekulatöme gű PMÜ-íartamanyagok 50 tÖmeg%-ig.terjedő mennyisége eltávolítható. A találmány

Φ ·> χχ * Φ * X φ φ * φ φ Φ**

ΦΦΦ **φ Μ Φ φ φ φ *# φφφ * szerinti eljárásnál olyan PMU-reteniáíumok alkalmazhatók, amelyek hetöményítésí aránya kb. 1:10, pl. kb. 1:7 és térfogata az eredeti PMU térfogat kb. 1/10-e, pl kb. I/7-e.

Az a) eljáráslépésnél felhasznált szemipoláris polimer adszorber gyanták porózus szerves nem-ionos polimerek lehetnek, amelyek - az.apolárís hídrofob polimer adszorber gyantákkal ellentétben - közbenső polaritásnak (pl. a gyanta aktív felületének dipólus momentuma 1,0-3,0, előnyösen 1,5-2,0 Debye) és hozzávetőlegesen hídfőül szerkezettel rendelkeznek (pl. políkarbonsíivészter-gyanták), Célszerűen makroporózus szemipolárís gyantákat alkalmazhatunk, amelyek előnyösen makröreííkuláris szerkezetűek, és átlagos pórusátmérőjük 50-150, előnyösen 70-100 Angsírőm, és. fajlagos felületük 300-900, előnyösen ·*?

400-500 ní7g. Különösen előnyösen makroporózus, térhálósított alifás políkarbonsavészter-gyantákat, célszerűen térhálósított poíiakrílészter-gyantákat alkalmazunk (a Rohm és Haas cég Amberhte XAD-7 terméke),

A konjugált ösztrogéneknek a szemipolárís adszorber gyantán, történő adszorpcióját mind a WO '98/0-8526' sz. közrebocsátást irat, mind a találmány szerinti eljárás esetében oly módon végezhetjük el, hogy a PMU-t vagy retentátumát az adszorber-gyantával érintkezésbe hozzuk. Ennek során a vizeletfolyadékot az adszorber gyantát tartalmazó reaktorba bevezetjük és ott. -az ősztrogén-tartalomnak az adszorber gyantán történő adszorpciójához elegendő ideig tartjuk. A konjugált ösztrogéneknek a szemipolárís adszorber gyantán történő adszorpciója -után a konjugált ösztrogének. keverékét megkötve tartalmazó adszorber gyantát. a maradék vízefetfolyadéktől -Önmagában ismert módon elválaszthatjuk. A vizeletfolyadékot célszerűen olyan átfolyási sebességgel vezetjük át az adszorber gyantát tartalmazó oszlopon, hogy az-érintkezési ide az ösztrogén-tartalom adszorpciójához elegendő legyen. Áz. átfolyási sebesség pl, 3-lö, előnyösen 5-7 térfogatrész PMV/I térfogatrész adszorber gyanta/óra átfolyásnak felel meg. A vizeletfolyadéknak a reaktoron történő átfolyási sebességét enyhe túlnyomás vagy az atmoszférikusnál alacsonyabb nyomás alkalmazásával szabályozhatjuk. A felhasználandó szemipolárís adszorber gyanta mennyisége az adszorber gyanta jellegétől és a vizeletfolyadék szilárdanyagtartalmáíől függően változhat.. PMU felhasználása esetén 1 térfogatrész adszorber gyantára (pl. térhálósított alifás polítebonsavészter-astezorber gyanta) .80 térfogatrész mennyiségig vihetünk fel előkezelt PMU-t anélkül, hogy az átfolyó vízeletfolyadékban észrevehető mennyiségű Ösztrogén kimutatható lenne. PMU-koneentrátum vagy PMU-retentátum felhasználása esetén az adszorber gyanta felvevő kapacitása természetesen. a beföményítés: mértékének megfelelően csökken. így pl, I térfogatrész térhálósított alifás pollkarbon^vészter-aászorber gyantára 20-80, előnyösen 30-50 tértbgaírész PMU-nak megfelelő mennyiségű vizeletfoÁ konjugált ösztrogének keverékét tartalmazó szemipoláris adszorber gyantát a h) eljáráslépésben legalább 12,0 pH-értékre, előnyösen 12,5-14 pH-értékre, különösen előnyösen kb. 12,5-13,5 pH-értékre beállított mosóvízzel mossuk. Mosófolyadékként a vizeletfólyadékban oldható ínért bázíkus anyagok vizes oldatait .alkalmazhatjuk, amelyek legalább 12,5· pH-érték eléréséhez elegendően erősek. A szemipoláris polimer adszorber gyantával szemben ínért, vízoldható bázíkus anyagként előnyösen vízoldható szervetlen bázisokat (pl. alkáiifém-hidroxidokat. vagy alkaliföldfém-hidroxídokst, különösen nátrium-bidroxidot) alkalmazhatunk. A mosóvíz előnyösen a kívánt pH-érték - előnyösen kb. p.H 13 - eléréséhez elegendő mennyiségű bázíkus- anyagot tartalmaz. A mosóvíz mennyiségét oly módon választjuk meg. hogy a fenoios vizelettartamasyagok messzemenő eltávolításához elegendő legyen anélkül, hogy a konjugált ösztrogének észrevehető mennyiségét kimosná. Célszerűen 2-10, különösen előnyösen 4-6 ágytéríőgat mosőfoiyadékot alkalmazunk.

1. agytérfogat adszorber gyantára vonatkoztatva. Ennek során a mosóvizet célszerűen 3-1Ö, előnyösen 5-7 térfogaírész mosóvíz/1 térfogaírész-adszorber gyanta/úm sebességgel vezetjük át az adszorber gyantái tartalmazó reaktoron.

A e) eljáráslépésben a konjugált ösztrogének keverékét tartalmazó, mosott adszorber gyantát valamely eluálőfolyadéknak a konjugált ösztrogén-keverék duálisához elegendő mennyiségével kezeljük és a PMÜ ebáíumhan levő konjugált ösztrogének természetes keverékét kinyerjük. A találmányunk szerint alkalmazott eluálófolyadék valamely vízzel elegyedő szerves oldószer, éspedig valamely vízzel elegyedő éter, kis szénatomszámú alkartól vagy kis szénatomszárnú alifás keton vagy az ilyen vízzel elegyedő oldószerek és adott esetben meglúgosítoít víz elegye lehet. Áz eluálófolyadék éter-komponense valamely vízzel elegyedő gyűrűs éter (pl. tetrahídroíurán vagy diö-xáu) vagy vízzel elegyedő nyílt láncú észter (pl. etílénglíkotdímeűléier ~ monoglim, dietiléngtíkoldimetileíerdigilm, vagy etoxi-etoxietanol ~ karóitól) lehet. Kis szénatomszárnú alkanolkéni vízzel elegye0 0 ** 0 0 00» » « 00 *

Φ X WS0 * 0 » χ χ * 0 <►**« «*»* *0 «8*0 ** • -»

1.·^ dó 1-4 szénatomos, előnyösen 1-3 szénatomos aikanolokat, különösen etanoit vagy izopropanolt alkalmazhatunk. His szénatomszámú alifás ketonként vízzel elegyedő 3-5 szénatomos ketonokat (előnyösen acélon) alkalmazhatunk. Különösen előnyösen alkalmazhatunk szerves oldószerként etanoit tartalmazó ebáiófolyadékokat. Eiuálöfolyadékként célszerűen valamely fentemlftert vízzel elegyedő szerves oldószer és adott esetben meglűgosított víz eiegyét alkalmazhatjuk. Λ. víztartalmú eluálószer pH-j:a semlegestől pH - 13 értékig terjedő lúgos tartomány között változhat és előnyösen kb. 10-12 érték. A víztartalmú eluálőfolyadék oldószerkomponense az alkalmazott pH-tartományban stabil oldószer lehet. A kb, 10-12 pH-értékű lúgos víztartalmú eluálőfolyadék oldőszerkomponenskeot kis szénaíomszámű aikanolokat, előnyösen etanoit tartalmazhat. A víztartalmú eluálószer kívánt pH-értékét valamely vízoldhatö ínért, bázikos anyag (előnyösen szervetlen bázisok, pl. alkálifém-hidroxidok vagy alkálífoldfém-hldroxidok, különösen előnyösen nátrlnm-hldroxid) megfelelő mennyiségének hozzáadásával állítjuk, he. A víztartalmú eluálófolyadékban a vízzel elegyedő szerves oldószer és a víz térfogat aránya 40:őÖ - 20:80, előnyösen kb, 3Ö;?0. Az eluálószer hozzáadott mennyisége 1 agytérfogat adszorber gyantára vonatkoztatva kb, 3- lö, előnyösen kb. 4-6 agytérfogat. Az elnálőfolyadékot célszerűen olyan átfolyási sebességgel vezetjük, át sz ösztrogén-tartalmú adszorber gyantát tartalmazó reaktoron, hogy az érintkezési idő a konjugált ösztrogén-keverék teljes eluálásához elegendő legyen. így 30:70 térfogatarányö. etanokvíz elegy alkalmazása esetén az átfolyási sebesség pl. 3-10, előnyösen 5-7 férfogaírész eluáíőszer/I iérfogaírész adszorber gyantapora, Az elítélést célszerűen szobahőmérséklet és kb. óÖ °C közötti hőm érsekiét-tartományban, előnyösen kb. 40-50 °C~on végezhetjük el. Az átío-lyási sebességet kívánt esetben enyhe túlnyomás (pl, 0,2 bar értékig terjedő túlnyomás) alkalmazásával szabályozhatjuk és az elnátumot több frakcióban foghatjuk fok Az egyes eluáíum-frakelők koniugált öszírogen-tartalmát és fenolosvízeleítartamany^ak (pl, krezol és HFMF) tartalmát önmagában Ismert módon nagyteljesitőképességű folyadékkromatograíálással (HPLC) határozhatjuk meg.

Az eluálásnál eleinte gyengén színezett-színtelen, gyakorlatilag ösztrogénmenies előfrakciókat kapunk, amelyek mennyisége általában kb, 1 agytérfogatnak felel meg. A koniugáit ösztrogének fotömegét (pl. a kiindulási PMU-fean levő komugáli ösztrogének 80-90 %-át) az. ezután levert sötétsárga-baraa színű íoeluátum-irakefo tartalmazza, amelynek a

XX χχ X XX

XX χχ* χ «* A X XXx

Η mennyisége általában 2-4 agytérfogat Az ezután levett utófrakoiók általában csupán nyomnyi konjugált ösztrogént tartalmaznak, A szárazanyagra vonatkoztatva lö tömeg%-nál több konjugált ösztrogént és 0,6 iömegóü-nál kevesebb krezolt és HPMF-t tartalmazó utófrakeiókat az ösztrogénban dús főeluátumwal egyesítve dolgozhatjuk fék

PMÜ ösztrogéntartal adszorpciója szemipolárfe r-adszorber gyantán

220 mm magas és 40 mm átmérőjű oszlopot 300 ml vízben duzzasztott szemipoláris poliakri lészíer-adszotber gyantával megtöltünk (= a Rohm és Haas cég Amberlite XAD-7 terméke, szemcsenagyság OJ-1,2 mm, dipólus momentum 1,8 Debye, átlagos pórusátmérő 80 Angström, fajlagos felület kb. 450 m '/g szárazon). Az oszlopon 10,5 liter 35 ágytérfogaí)ullrasz&ö berendezésen szűrt PMU-t (a HPLC szerint meghatározott SsztronszuL fát-só- és krezol-tadalmat a példákban- levő táblázatban adjuk meg) szobahőmérsékleten 24 mi/pere.(« 4,8 ágytérfegaifora} átfolyási sebességgel vezetünk,. A PMÜ ösztrogéntartalma a szexnlpoiáris adszorber gyanta oszlopon teljes mértékben megkötődik. Az. átfolyó vizdeifoiyadékoí konjugált ösztrogéntartalomra (ösztronszulfátsóban számítva) megvizsgáljuk; az átfolyó vizeleifolyadék gyakorlatilag ösztrogénmentesnek bizonyult. Az átfolyó vizel etfoly adékot elönti ük.

b) A töltött adszorber gyanta-oszlop mosása

Áz adszorber gyanta-oszlopot: 1,5 liter vizes nátrium-hidroxíd oldattal (pH 13): mossuk. Ennek során az oszlopon átlag 24,6 ml/perc 4,9 ágytérfogat/óra) átfolyási sebességgel lúgos mosóvizei vezetünk, át Áz áthaladó niösófolyaáék öszlrogónszulíáiso- és krezol-tartalmát HPLC módszerrel határozzuk meg. A vizsgálatok szerint az oszlopra lél vitt teljes ösztrogén mennyiségnek kevesebb mint 5 %-a mosódott ki.

1,5 liter eluálófolyadékot (30:70 arányú efanol/Mz elegy) 25 ml/perc. átfolyási sebességgel (~ 5,0 ágytétfogat/őra) vezetünk át a példákban levő táblázatban megadott eiuálási hőmérsékletre elöhevhett oszlopon. Áz átfolyó eluámmoí 5 frakcióban fogjuk fok A frakci*♦» * ** φφ «Λ ν

Φ Φ X * β ΦΦ «» Φ Φ X 9 **ΦΧ *» «Β§ ók térfogata minden esetben 300 ml {= 1 agytérfogat) és e frakciók ösztrogénszuilátső- és krezoí-tartalmái HPLC úton határozzuk meg.

Az 1. frakció csupán nyomokban tartalmaz öszírogénszuliár-sőt; ez a frakció színtelen-gyengén sárga színű. A következő 2-4. frakció az oszlopon megkötött konjugált öszirogének teljes mennyiségének kb. 80-98 %-át tartalmazza. Ezek az eluámmok Intenzív sötétbarna színűek. A.z utolsó frakció csupán csekély mennyiségű öszirogénsznlísi-sót tartalmaz, amely a színintenzitás csökkenéséből ís látható.

A konjugált ösztrogének íő mennyiségét tartalmazó frakciókra az alábbi táblázatban a TS-tartalmat százalékban, és a HPLC úton meghatározott öszlronszuifotsö- és krezokíartal· mát adjuk meg. Ezek a frakciók a galenikus tovább feldolgozásra alkalmas extraktumok.

d) Az adszorber gyanta-oszlop regenerálása

Az oszlopot regenerálás céljából előbb 600 ml pH 12 értékre beállított 50 % etanoltartalmó eíanol/viz eleggyel, majd óOÖ mi pH 12 értékre beállított 70 % eíanoltartaltnú etanol/víz eleggyel, -utána. 600 ml 10 %-os vizes nátrium-nitrát oldattal, végül 600 ml desztillált vízzel mossuk. A regenerálás teljes műveletét 45 °C hőmérsékleten végezzük el, Áz oszlopot többször (pl. akár 4Ö-szer is) felhasználhatjuk és újraregenerálhatiuk.

Az I. példában ismertetett eljárást a találmányunk szerinti, a b) és c) eljáráslépés között beiktatott közbenső mosási művelettel megismételjük.

Közbenső mosási művelet

Az ösztrogén-keveréket tartalmazó adszorber gyanta-oszlopot 900 ml vízzel mossuk, Ennek során az oszlopon semleges mosóvizet átlagosan 25,0 ml/perc 5,0 ágytérfogat/óra) átfolyási sebességgel vezetünk.

Az áthaladó mosó-folyadék ösztrogénsznlíatső- és krezol-tartalmát HPLC úton határozzuk meg. A vizsgálatok azt mutatják, hogy ennél a mosási fázisnál az oszlopra felvitt összes ösztrogéfí mennyiségnek csupán csekély része (legfeljebb kb. néhány %) mosódik ki. A «* «φ

- » ν X' * * 5 * φφ találmány szerinti eljárás elvégzésékor azonh ken (lásd 4. példa), tn a szabad dsztrogének mennyisége is esők

Az 1. Összehasonlító példa és a találmány szerinti 2< példa eredményei

Példa sorszáma	1,	2.
a) eljáráslépés
Kiindulási PMO Ösztron mg/i Ekvilin mg/1 Krezol mg/1	86,4 57.0 1191,1	92,3 57,0 877,6
b) élj árás lépés
Mosóvíz - vizes NaÖH-oidat	pH 13	pH 13
Közbenső mosási műveletek
Mosóvíz - víz h mosó frakció Ösztron mg/1 Ekvilin mg/l Krezol mg/i 2. mosó frakció Ösztron mg/1 Ekvilin mg/1 Krezol mg/1 3, mosó fetóo ösztron mg/1 Ekvilin mg/1 Krezol mg/1	Összehasonlítás: nem végeztünk közbenső mosási	0,0 20,9 18,0 125,0 0,0 0,0 290,6 138,0 31,5
c) eijárásiépés
Eluálófblyadék	etanol/víz 30:70	etanol/viz 30:70
Eluálási hőmérséklet	45 °C	45 °C
1. eluátum frakció tömeg% TS Ösztron mg/1 <tömeg% TS) Ekvilin mg/1 (tömegH TS)	4,3 0,0 <0,00) 24,8 (0,06)	0,2 342,7 (17,14) 182,6 (9,13)

* * 44 va ~· 4v~ x

- 4 <. * « χχ χ

V χ *4* « »

Ά, sí., SS 4, * ' '

Zeluátum frakció tömeg% TS ösztron mg/1 (tömeg%· TS) Ekvílin mg/1 (tömeg% TS)	1,9 2788,6 1523,0	(14,68) (8,04)	0,9
2053,5 1120,1	(22,81) (12,45)
3. eluátum frakció
tőmeg% TS	0,2		0,2
Öszlron mg/1 (tömeg%-TS)	193,2	(9,66)	38,9	(1,95)
Ekvílin mg/1 (tömeg% TS)	99,8	(4,99)	19,8	(0,99)
4, eluátum frakció
tőmeg% TS	0,1		0,1
Ösztron mg/1 (tőmeg% TS)	7,1	(0,71)	0,0	(0,00)
Ekvilin mg/1 (tömeg% TS)	9,3	(0,93)	0.0	(0,00)

3. példa (találmány szerint» eljárás hűtéssel)

Mermonveszteség csökkentése a semleges mosási művelet alatt

Az 1. és 2. példa szerint dolgozunk, azonban hűtés alkalmazunk. A hűtés a közbenső mosási művelet alatt bekövetkező hormonveszteség minimalizálására szolgát Ha a közbenső mosási műveletet szobahőmérséklet helyett jegesvízzel végezzük el, úgy a hormon veszteség kb. 50 %-ig csökkenthető, különösen ö °C vagy kb, 0 °C körüli hőmérséklet alkalmazása mellett. Minthogy aiegesvíz a szobahőmérsékletű oszloptartalom miau viszonylag gyorsan felmelegedhet, előnyösen járhatunk ei oly módon, hogy a teljes oszlopot 0 °Ora hűd ük.

Az eljárás elvégzése

A mosási művelethez szükséges 0 ^u€-os osziophömérsékletet oly módon biztosítjuk, hogy a hűtést a megelőző lúgos mosási művelet alatt Is elvégezzük (azaz. a. lúgos rnosát 0 °C-on hajtjuk végre). Á lúgos mosási műveletnél 5 0 °C-os ágytérfógat felvitele elegendő az oszlop tartalmának szobahőmérsékletről 0 °C-ra való lehűtéséhez. Az ezután történő közbenső mosási művelet 0 C-on játszódik le. A hormonveszteség minimalizálása mellett vizsgálj uk a hőmérséklet hatását a lúgos mosás alatt történő krezol^elválasztásra.

Közvetlen összehasonlításként két kísérletet végzünk ek

XX Φ φ

3a, példa

Lúgos mosás és közbenső mosási műveletek szobahőmérsékleten.

50. példa

Lúgos mosás és közbenső mosási műveletek 0 °C-on.,

A többi lépést a standard eljárással kapcsolatban a WO 98/08526 sz. nemzetközi közrebocsátás! iratban vagy az 1. és 2. példában leírt módon végezzük el.

Kísérleti eredmények

A III. táblázatban a szobahőmérsékleten és Ö °C~on végzett példák kísérleti paramétereit és kísérleti eredményeit adjuk meg.

A kísérleti eredmények világosan igazolják az alábbiakat:

a) A lúgos mosást (azaz a krezoi-eltávoh'tást) a hőmérséklet 0 ^uC-ra történő csökkentése nem befolyásolja. A krezol-elválasztás kvantitativen játszódik le. Az eredményeket a HL táblázat tartalmazza,.

b) A hőmérsékletcsökkentés segítségével a közbenső mosási műveletnél fellépő hormonveszteségek kb. 50 %-ra csökkenthetők. Ezeket az eredményeket a II, táblázat tartalmazza.

It táblázat

Bormonveszteségek és minimalizálásaik a Ö'°C-on elvégzett műveleteknél mosási

Példa sorszáma	\| 3a.	3b,
	szobahőmérsékleten (Ϊ kb. 25 °C.	jegesví'Z (T - kb. 0 °C)
Ösztron	J 2,7 tömegűk	.1,8 tÖmeg%
Ekviiin	\| 3,4 tÖmeg%·	1,4 tömeg%

φφ *

Ha a lúgos mosási műveletnél a kb. 0 °C-ra temperált nátrium-hídroxid oldatot visszük fel, úgy a közbenső mosási műveletnél a hormonveszteségeket a krezol-elválasztás befolyásolása nélkül egyszerű módon csökkentjük. illetve a közbenső mosási műveletet kb.

Ö C hőmérsékleten végezhetjük el.

A közbenső mosási művelet hőmérsékletének kb. 0 ^űC-ra történő csökkentése .a közbenső mosási műveletnél fellépő elkerülhetetlen hormonveszteségeket kb. 50 %-kal csökkenti.

A közbenső mosási műveletnél az mzloptemperálást egyszerűen végezhetjük ei oly módon, hogy a közbenső mosási műveletek előtt végrehajtott lúgos mosást szintén kb. 0 ^u€~ ~on végezzük el. A hőmérséklet csökkentése a bázíkus mosási műveletnél lejátszódó krezol-elválasztást hátrányosan nem befolyásolja.

III, táblázat Találmány szerinti eljárás elvégzése szobahőmérsékleten és hűtés közb
Példa sorszáma	3a.	3b.
	: szobahőmérsékleten :(T~kb. 25 °C.	jegesvíz (T - kb. Ö °C)
a) eljáráslépés
Kiindulási PMU Ösztron mg/1 : Ekviiin mg/1 i Krezol mg/1	64.9 57.9 329,0	65,4 57,6 333,0
; b) élj árás lépés
Mosóvíz — vizes NaOH-oídat	pH 13	pH 13
1, mosó frakció : Ösztron mg/1 Ekviiin mg/1 Krezoi mg/I 2. mosó frakció ösztron mg/1 Ekviiin mg/i Krezol mg/l 3. mosó frakció Ösztron mg/1 Ekvihn mg/1 Krezol mg,4	4,4 0,0 55,1 28,8 31.5 6942.5 0,0 11.5 2215,2	1,7 1,6 51,6 27,9 24,8 7011,0 9,0 18,3 2774,0

*44» »«»„

4. mosó frakció Ösztron mg/1	' 0,0	0,6
Ek vilin mg/i	0,0	2 í
Krezol mg/1	280,6	268,6
5. mosó frakció Öszfron mg/1	0,0	0,0
Ekvilin mg/1	0,0	0.0
Krezol mg/1	76,6	44,1
Hormonveszteség 1-5. mosó frakció Ösztron	1,5%	1,3%
Ekvilin	2,1 %	2,4 %
Közbenső mosások
Mosóvíz ~ víz
1. mosó frakció Öszfron mg/1	0,0	0,0
Ekvilin rng/1 Krezol mg/1	0.0 22,8	0,0 19,4
2. mosó frakció Osztton mg/1	13,3	8,2
Ekvilin mg/1	9,7	5,9
Krezol mg/1	33,2	11,8
3., mosó frakció Ösztron rng/1	48,0	32,0
Ekvilin mg/1	58,3	23,3
Krezol mg/1	76,0	0,0
Hormonveszteség 1-3. mosó frakció Ösztron	2,7 %	1,8 %
Ekvilin	3,4 %	1,4 %
c) eljáráslépés
Eluálómlyadék	etanel/víz	etanol/víz
	30:70	30:70
Eluálásí hőmérséklet	45 °C	45 °C
E el üstöm frakció
tömegéi TS	0,2	0,2
Öszfron mg/1 (tömegéi TS)	76,0 /3,80)	58,0 (2,90)
Ekvilin mg/1 (tömeg% 'ÍS)	65,8 (3,29)	48,2 (2,4 i)
: 2. eiuátnm frakció
tömegéi TS	1,0	0,9
Öszfron mg/1 :(tömeg%: TS)	1237,0 (12,37):	1145,6 (12,73)
Ekvilin mg/1 (tömegéi TS)	1093,8 (10,94)	1125,0 (12,61)

«φ* «

3. eluátum frakció tömeg% TS Ösztron mg/1 (tömeg% TS) Ekvilin mg/1 (tömeg% TS)	0,4 6073 (15,20) 524,7 (13,12)	0,5 840.0 748,4	(16,80) (14,97)
4. eluátum frakció tömeg⁰/® TS ösztron mg/1 (tömeg% TS) Ekvilin mg/1 (tömeg% TS) Krezol mg/1 (tömeg.% TS)	0,1 84,6 58,2 0,0	(8,46) (5,82) (0,00)	0,1 i 144,60 107,4 0,0	(14,46) (10,74) (0,00)
5. eluáinm frakció tömeg% TS Ösztron mg/1 (tömeg% TS) Ekvilin mg/I (tömeg% TS)	0,1 21,1 7,5	(Ti n (0,75)	0,1 34,3 17,9	(3,43) (1,79)
6. duámm frakció Ösztron mg/1 Ekvilin mg/1	9,0 0,0		15,2 3,4

4. példa (Szabad hormontartalem csökkenése)

Az 1. es 3. példa szerinti eljárásvezctésnél vizsgáljuk, hogyan csökken a .szabad barmontartalom a találmány szerinti eljárás alkalmazásakor. Az eredményeket a IVa. táblázatban (összehasonlító vizsgálatok, közbenső mosási műveletek nélkül) és a IVb. táblázatban (ta lálmány szerinti eljárás, közbenső mosási műveletekkel) tüntetjük fel.

Szabad bormontartalosn minimalizálása * * •γ-?

X Φ Α φ Φ X

Φ * »»·♦♦ Χ*φφ

Összehasonlító kísérletek közbenső mosási műveletek nélkül

	Koneeatrátmn szabad ősztrogéntartalma	Koneentrátu összes őszire koztatva)	nt konjugált géntartalma pm vonat-
	tömes%	tömegH
1, kísérlet	3,21	3,2
2. kísértet	3,67	4.4

3, kísértet	2,38	9,2
4. kísérlet	4,14	ía a X .j™
5, kísérlet	4,03	9.9

.1 Vb, táblázat

Közbenső mosási műveleteket tartalmazó kísérletek (találmány szerinti eljárás)

	Koncentrálni» szabad ö sz £ regé n ta rla 1 m a	Koneenlráíum konjugált összes őszére géntartalma (szárazanyagra vonatkoztatva)
	tömeg%	tömegéé
1. kísérlet	03)	ac a A»· J
2, kisértet	0,77	17,2
3. kisértet	0,35	23,9
4, kísérlet	0,20	29,3
5. kísérlet	0,0	27,7

*♦ Φ* X* * Φ Λ φ φ νΦ * φ >> «

Claims

Sza ba da hu í igény pon tok

1. Eljárás konjugált ősztrogének fenolos vizelettartamanyagokban dúsított természetes keverékének kinyerésére vemhes kancák vizeletéből oly módon, hogy

a) egy vizeletfolyadékot - amely adott esetben a nyalka- és szilárdanyagoktöl megszabadított vízeletfolyadék, e vizeletfolyadék bepárolt koneenírátuma vagy e vizeletfolyadék memhránszürésével kapott bepárolt vizeletretentátum lehet ~ valamely polimer adszorber gyantának a vizeletfolyadékban levő konjugált ösztrogén-keverék adszorpciójához elegendő mennyiségével érintkezésbe hozzuk, és a konjugált ősztrogének keverékét megkötve tartalmazó polimer adszorber gyantái a .maradék vizelet-folyadéktól elválasztjuk;

b) a konjugált ösztrogén -keveréket tartalmazó polimer adszorber gyantát legalább 12,0 pH-ériékre beállított mosóvízzel mossuk; és

c) a mosott adszorber gyantát a megkötött konjugált ösztrogén-keverék deszorpdójához elegendő mennyiségű eluálófolyadékkal - éspedig vízzel elegyedő szerves oldószerként. valamely vízzel elegyedő éterrel, kis szénatomszámú, alkanollal vagy kis szénatomszámú all lás ketonnal vagy a vízzel elegyedő szerves oldószerek és adott esetben meglúgoskoíí víz elegyével - érintkezésbe hozzak, és a konjugált ősztrogének természetes keverékét tartalmazó eluátumot az adszorber gyantától elválasztjuk és adott esetben hepároijuk, özzo/ye/Zemezve, ángy a b) és c) eljárás-lépés közé egy közbenső mosási lépést iktatunk be, amelynek során a konjugált ősztrogének keverékét tartalmazó polimer adszorber gyantái vízzel mossuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, ozznZ/elemezve, /mgy a közbenső mosási müvekleket szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékleten, előnyösen 0-10 'C-on, különösen előnyösen valamivel Ö ^bC fölötti hőmérsékleten végezzük eh
3. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, nzzn/jfo/fomezve, hogy a közbenső mosási műveleteknél szobahőmérséklet alatti hőmérsékletre, előnyösen 0-1Ö °C-ra, különösen előnyösen (>^vC-nál valamivel magasabb hőmérsékletre előhűtött mosóvizei, alkalmazunk

X «ϊ * * «ί,
4, Az 1.. igénypont szerinti eljárás. oamHe/femezve, fe>gy ab) eljárás-lépésnél szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékletre, előnyösen O-IÖ ^cC-ra, különösön előnyösen 0 ^GC-n.ál valamivel magasabb hőmérsékletre előhűtött, meglűgosított mosóvizet alkalmazunk.
5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzű/jeí/etnezve, hogy a közbenső mosási műveleteket és az azokat megelőző b) eljárás-lépést szobahőmérsékletnél alacsonyabb hőmérsékleten, előnyösen ö-l ö °C-on, különösen előnyösen 0 ^uC-nál valamivel magasabb hőmérsékleten végezzük el.

ő, Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ozzu/ye/Zemezve, hogy a felhasznált berendezéseket, pl. a polimer adszorber gyanta felvételére szolgáló reaktort vagy a polimer adszorber gyantát már tartalmazó reaktort és/vagy a felhasznált PMIJ-t .szobahőmérséklet alatti hőmérsékletre, előnyösen 0-10 ^vC-ra, különösen, előnyösen 0 ^vC-nál valamivel magasabb hőmérsékletre elöhüijük.
7. Az elózó. Igénypontok bármelyike szerinti eljárás, nzza/jefleátezve. hogy polimer adszorber gyantaként valamely szemipoláris adszorber gyantát, előnyösen nem-ionos szemipoláris adszorber gyantát alkalmazunk.

A bejelentő helyen a meghatalmazott: