HK1066489A - 减少体脂和调节脂肪酸代谢的方法、化合物和组合物 - Google Patents

Description

减少体脂和调节脂肪酸代谢的方法、化合物和组合物

                       相关申请的相互参照

本申请要求2001年10月31日提交的美国专利申请第60/336,289号和2001年3月27日提交的美国专利申请第60/279,542号的优先权。它们的内容分别并入这里以供参考。

关于由联邦政府资助研究和开发的发明权利的申明

本发明在由政府支持第DA12653号资助下进行的，是由国家卫生研究院授予的。政府在本发明中具有一定的权利。

                          发明的领域

本发明涉及脂肪酸乙醇胺，它们的同系物和类似物，以及它们作为药理学活性剂在减少体脂、减少食物消费和调节脂类代谢中的应用。

                          发明背景

肥胖是世界范围的健康挑战，在美国和其他的发达国家已经到了警戒水平。在美国大约97,000,000的成年人是超重的。其中40,000,000是肥胖的。肥胖和超重增加了许多疾病的危险。高血压、2型糖尿病、异常脂血症、冠心病、中风、胆囊疾病、骨关节炎、睡眠呼吸暂停、和其他的呼吸问题以及子宫内膜、乳房、前列腺、结肠癌都和较高的体重有关。体重较高的人也饱受较高的所有原因死亡率的折磨。根据国家卫生研究院，在美国每年会大约有280,000的成年人的死亡部分归因于肥胖。

对于肥胖和超重的人来说体重减轻是所希望的。体重减轻可以帮助防止许多这样的后果，尤其是糖尿病和心血管疾病(CVD)。体重减轻还可以降低超重型高血压患者和非高血压患者的血压，降低血清甘油三酸酯水平和提高有益的高密度脂蛋白(HDL)形式胆固醇。体重减轻也通常略微降低总血清胆固醇和低密度脂蛋白(LDL)胆固醇的水平。体重减轻也可以降低超重和肥胖的人的血糖水平。

虽然体重减轻是理想的，但很难达到。存在许多治疗超重和肥胖以及维持体重减轻的方法。然而，反弹是严重的。大约40％的女性和24％的男性正尽最大努力在任何特定的时间积极减肥。这些治疗的方法包括低热量和低脂肪饮食；增加体育锻炼；致力于减少食物摄入的行为疗法；药物治疗；手术以及以上方法的联合。

体重减轻的药物相对缺乏。药物如西布曲明、右芬氟拉明、奥利司他、去甲麻黄碱、酚妥拉明或氟苯丙胺在应用较长时间时能促进肥胖成年人的体重减轻。通常地，然而，长时间施用药物治疗体重减轻的药剂的安全性还不清楚。例如，最近，由于关注到病人中发现的瓣膜性心脏病，氟苯丙胺和右芬氟拉明被撤出了市场。面对无价值的药物和高度流行的肥胖和超重，就有需要有新的药理方法和组合物来提高和维持体重减轻。

脂肪酸乙醇胺(FAE)是动植物脂类的不寻常的组成成分，它们在未激活细胞中的浓度通常是低的。(Bachur等，J.Biol.Chem.，240：1019-1024(1965)；Schmid等，Chem.Phys.lipids，80：133-142(1996)；Chapman，K.D.，Chem.Phys.Lipids，108：221-229(2000))。然而，FAE的生物合成能根据多种类的生理和病理刺激而迅速提高，包括接触烟草细胞中的真菌病原(Chapman等，Plant Physiol.，116：1163-1168(1998))，大鼠大脑神经员中的神经递质受体的激活(Di Marzo等，Nature，372：686-691(1994)；Giuffrida等，Nat.Neurosci.，2：358-363(1999))以及接触小鼠表皮细胞中代谢应激物(Berdyshev等，Biochem.J.，346：369-374(2000))。哺乳动物组织中刺激依赖的FAE的产生机制被认为包含两个协同的反应：膜磷脂的裂解，N-酰基磷脂酰乙醇胺(NAPE)，由未知的磷脂酶D催化；和NAPE的合成，由钙离子和环状AMP控制的N-酰基转移酶(NAT)活性催化(Di Marzo等，Nature，372：686-691(1994)；Cadas等，J.NeuroSci.6：3934-3942(1996)；Cadas等.，H.，J.Neurosci.，17：1226-1242(1997))。

植物和动物细胞都在刺激依赖的状态释放FAEs表明这些化合物也许在细胞交流中扮演重要的角色。对于这一观点的进一步的支持来自于发现聚不饱和FAE，anandamide(花生四烯酸乙醇胺)是大麻酯(cannabinoid)受体的内源配体(Devane等，Science，258：1946-1949(1992))-在神经原细胞和免疫细胞中表达的G蛋白偶联的受体，被认为是大麻成分Δ⁹-四氢大麻醇(Δ⁹-THC)(作为回顾，见参考(Pertwee，R.G.，Exp.Opin.Invest.Drugs，9：1553-1571(2000))。

两项观察资料使其他FAEs也参与大麻酯神经传递变得不可能。FAE家族包含大部分的饱和和单不饱和的种类，如棕榈酰乙醇胺和油酰乙醇胺它们不明显的和大麻酯受体作用(Devane等，Science，258：1946-1949(1992))；Griffin等，J.pharmacol.Exp.Ther.，292：886-894.(2000))。第二，当详细研究FAEs的药理学性质时，如棕榈酰乙醇胺，发现这些性质和Δ⁹-THC的那些是不同的，并且独立于已知的非典型大麻酯受体的激活(Calignano等，Nature，394：277-281(1998))。因此，FAEs的生物学意义仍是难以捉摸的。

油酰乙醇胺(OEA)是内源大麻酯anandamide的天然类似物。和anandamide一样，OEA在激素依赖的细胞中产生，并被酶解而迅速消除，表明在细胞信号传导中有作用。然而，和anandamide不同的是，OEA不激活大麻酯受体，它的生物功能到目前为止基本上还是一无所知。

和维持体重减轻一样，也需要有另外的方法和药剂治疗肥胖和超重。本发明通过提供新的方法和药物组合物，迎合了这种需要，它们和我们现在的发现有关，就是油酰乙醇胺(OEA)和其他的脂肪酸乙醇胺化合物(例如棕榈酰乙醇胺，反油酰乙醇胺)能降低食欲，食物摄入，体重以及体脂和改变脂肪代谢。

                          发明概述

本发明提供了减少哺乳动物体脂和治疗或预防肥胖和超重以及和这些健康问题相关联的疾病的化合物、组合物和方法。一方面，本发明提供方法来减少体脂或体重，治疗或预防肥胖或超重以及通过施用包含脂肪酸链烷醇酰胺化合物、它的同系物或类似物的药物组合物来减少食物摄入，以足够的剂量给药来减少体脂、体重或预防体脂或体重增加。另一方面，本发明设计生产脂肪酸胺化合物、它的同系物、类似物以及它们的药物组合物和这些方法的应用。

在其他实施方案中，脂肪酸链烷醇酰胺或乙醇胺化合物、它的同系物、类似物的脂肪酸部分可以是饱和的或不饱和的，如果是不饱和的可以是单不饱和或多不饱和的。

在一些实施方案中，脂肪酸链烷醇酰胺或乙醇胺化合物、它的同系物、类似物的脂肪酸部分选自油酸、棕榈酸、反油酸、不饱和十六碳烯、亚油酸、α-亚麻酸和γ-亚麻酸。在特定的实施方案中，脂肪酸部分有12至20个碳原子。

其他的实施方案通过变化脂肪酸酰胺化合物、它的同系物或类似物的脂肪酸部分来提供。这些实施方案包括引入链烷醇酰胺或乙醇胺部分羟基上的饱和或不饱和的低级(C₁-C₃)烷基以形成相应的低级烷醚。在另外的实施方案中，链烷醇酰胺或乙醇胺部分的羟基和C₂至C₆取代或未取代羧酸的羧基结合形成相应的脂肪酸胺脂基。这样的实施方案包括脂肪酸链烷醇酰胺和脂肪酸乙醇胺和有机羧酸脂化，如醋酸、丙酸和丁酸。在一个实施方案中，脂肪酸链烷醇酰胺是油酸链烷醇酰胺。在进一步的实施方案中，脂肪酸链烷醇酰胺是油酰乙醇胺。

仍在另一个实施方案中，脂肪酸乙醇胺化合物、它的同系物或类似物还包括和脂肪酸乙醇胺氮原子共价结合的取代或未取代的低级(C₁-C₃)烷基。

在另一方面，本发明提供了一种药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和化合物或其药学上可接受的盐，具有化学式：

在该式中，n是0-5，a和b的和为0-4。Z成分选自-C(O)N(R⁰)-；-(R⁰)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR⁰和S，其中R⁰和R²独立选自取代或未取代的烷基、氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基、均烷基(homoalkyl)和芳基。化合物脂肪酸部分和乙醇胺部分两者或其一最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。另外，碳c和d之间的分子键可以是不饱和或饱和的。在一些实施方案中，如上面分子式的脂肪酸乙醇胺是自然产生的化合物。

在本发明的其他方面，此方法和组合物运用脂肪酸乙醇胺和脂肪酸链烷醇酰胺化合物、它的同系物和类似物来减少体重，当对实验动物给药时，它们能减少其体重(例如大鼠、小鼠、兔、仓鼠、几内亚猪)。

仍在其他方面，本发明设计方法应用芳基噻唑烷二酮化合物，杂芳基和芳基羟乙酸型化合物减少体脂、体重和食欲。

本发明的其他方面提出方法给于受试者应用和施用化合物和组合物来减少体重或减低食欲或减少食物摄入或引起哺乳动物(例如人类、猫或狗)hypophagia。受试的组合物可通过各种途径给药，包括口服。

                          附图简述

图1饥饿增加了大鼠体内循环的油酰乙醇胺的水平：(a)禁食对于血浆油酰乙醇胺(油酰乙醇胺OEA)水平影响的时间进程；(b)禁水(18小时)对血浆油酰乙醇胺水平的影响；(c)禁食(18小时)对脑脊液(CSF)中油酰乙醇胺水平的影响；(d)禁食对于血浆anandamide(花生四烯酸乙醇胺，AEA)水平影响的时间进程；(e)禁水(18小时)对血浆anandamide水平的影响；(f)禁食(18小时)对脑脊液(CSF)中anandamide水平的影响。结果表达为平均值s.e.m.；(*)，P＜0.05；(**)，P＜0.01，每组的n＝10。

图2脂肪组织是循环油酰乙醇胺的主要来源：饥饿引起大鼠的各种组织中酰基转移酶(NAT)和脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)活性的变化。(a)脂肪(b)脑(c)肝(d)胃(e)小肠。空栅栏，自由喂养的动物；充满栅栏，18小时禁食的动物。活性是pmol/mg蛋白质/分。(*)，P＜0.05，n＝3。

图3脂肪组织是循环油酰乙醇胺的主要来源：饥饿引起的NAPE和油酰乙醇胺(油酰乙醇胺OEA)的变化在脂肪和肝组织中实现。(a)油酰乙醇胺前体的结构是碱-1-palmitoenyl-2-花生四烯酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(左边一组，NAPE1)和碱-1-棕榈酰-2-花生四烯基酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(右边一组，NAPE2)；(b)自由喂养(顶)和18-小时禁食的大鼠(底)中的NAPE1(左边一组，m/z＝987，去质子的分子，[M-H]^-)NAPE2(右边一组，m/z＝1003，[M-H]^-)特征性的选择性离子的代表性HPLC/MS描绘图(c)禁食(18小时)提高了脂肪中NAPE物质的容量但降低了它在肝脏中的容量。对所有可确认的NAPE物质定量，包括油酰乙醇胺前体NAPE1和NAPE2以及PEA的前体NAPE3；(d)禁食(18小时)提高了脂肪和肝脏中油酰乙醇胺的容量。空栅栏，自由喂养的动物；充满栅栏，18小时禁食的动物。(*)，P＜0.05，斯氏t检验；n＝3。

图4油酰乙醇胺/pranamide选择性的抑制食物摄入：(a)油酰乙醇胺(油酰乙醇胺/OEA/pranamide)(如空方图)、反油酰乙醇胺(空圆图)、PEA(三角图)、油酸(实方图)和anandamide(实圆图)对禁食24-小时的大鼠食物摄入的剂量依赖性效应。赋形剂(盐中70％的DMSO，1ml/kg)单独对于短期的事物摄入没有明显的作用；(b)油酰乙醇胺(20mg/kg)(方图)或赋形剂(菱形图)对食物摄入hypophagic效应的时间进程；(c)赋形剂(V)，氯化锂(LiCl，0.4M，7.5ml/kg)或油酰乙醇胺(20mg/kg)在有条件的抽样排斥测定中的效应。空栅栏，摄入水；充满栅栏，摄入糖精。赋形剂(V)或油酰乙醇胺(5或20mg/kg)的效应对于：(d)水的摄入(表示为ml/4h)；(e)体温；(f)在热盘无痛实验中跳跃的能力；(g)在抬高加迷惑焦虑实验中打开手臂所花费的百分比时间；(h)在开放领域活性实验中交叉点的数量；(i)对食物动作反应的数量。(*)，P＜0.05，各组n＝8-12。

图5亚慢性(subchronic)油酰乙醇胺给药对食物摄入和体重的作用：(a)油酰乙醇胺(油酰乙醇胺OEA)(5mg/kg每天一次)(空栅栏)或赋形剂(5％Tween80/5％丙烯乙二醇在灭菌的盐中；充满的栅栏)对累积的食物摄入的作用；(b)油酰乙醇胺(三角图)或赋形剂(方图)对体重变化影响的时间进程；(c)油酰乙醇胺或赋形剂对净体重变化影响的时间进程；(d)油酰乙醇胺(5mg/kg)或赋形剂对累积水摄入的影响。(*)，P＜0.05；(**)，P＜0.01，每组的n＝10。

图6油酰乙醇胺引起的厌食症中外周感觉纤维的作用。赋形剂(V)，油酰乙醇胺(油酰乙醇胺/OEA/pranamide)(5mg/kg)，CCK-8(10μg/kg)和CP-93129(1mg/kg)，一种中枢激活5-HT_1B受体的激动剂，对食物摄入的影响，a是对照大鼠，c是给予辣椒素的大鼠。(b)对照大鼠和(d)给予辣椒素的大鼠摄入水。(*)，P＜0.05；每组的n＝8-12。

图7油酰乙醇胺/pranamide增加了c-fos mRNA在不连续的大脑部位的表达，这些部位和能量的体内平衡和喂养行为相关：(a)放射自显影照片的伪彩色图象显示油酰乙醇胺(右面部分)引起室旁(PVN)和视上(SO)下丘脑核中c-fos mRNA标记显著和选择性的增长，正如原位杂交评估的那样。从用赋形剂处理过的大鼠来的代表性的部分在左边显示。标记的密度通过颜色来显示：蓝＜绿＜黄＜红。(b)对用赋形剂、油酰乙醇胺、油酸处理过的大鼠的前脑部位[PVN，SO，弓形(Arc)，层II梨形皮层(pir)，腹外侧丘脑(VI)和S1前分支层(S1FL)]中的c-fos cRNA标记进行定量(c)射自显影照片显示经过油酰乙醇胺处理的大鼠的孤束核(NST)中35Sc-fos mRNA表达增加；插入，在NST(表示为红的)中的c-fos cRNA标记通过它的定位和传出神经核(迷走神经的舌下神经核和背核)相对较近而被确认了，它们表达乙酰胆碱转移酶mRNA(ChAT)(显示为紫色)(d)油酰乙醇胺提高了c-fos mRNA在NST中的表达，但不提高它在舌下神经核(HgN)中的表达。(**)，P＜0.0001，每组的n＝5。

图8 OEA，油酸(OA)，AEA，PEA和甲基-OEA对比目鱼肌中脂肪酸氧化的影响。

                            发明详述

本发明涉及一项惊奇的发现就是OEA和其他的脂肪酸链烷醇酰胺化合物能减少食物摄入，体重和体脂并能调节脂肪酸氧化。已经惊奇的发现油酰乙醇胺(OEA)，到目前为止在哺乳动物中还不知道其生物功能的一种天然脂，当对实验动物给药时，它是一种有效的减少体脂和控制体重的化合物。美国专利申请60/279,542，提交于2001年3月27日，由相同的代理人代理并在这里完整的引入作参考，它揭示了OEA和OEA-相似的化合物药剂能减少哺乳动物的体脂和食欲。

除了发现原型的OEA外，其他的脂肪酸链烷醇酰胺化合物和同系物也发现有活性。

OEA可以作为发展其他的脂肪酸链烷醇酰胺类似化合物的模型，用他们来减少脂肪治疗肥胖，包括体重减轻，降低食欲或食物摄入。本发明提供了这样的其他化合物如下面所述。

发现OEA给药能降低食欲，食物摄入和体重，能应用这个发现来确定其他脂肪酸乙醇胺化合物、它的同系物或类似物作为控制体重和食欲的药剂。本发明提供这样的药剂。

                             定义

这里应用的缩写词有他们在化学和生物文章中通常的意义。

取代基通过他们普通的化学式来区分，从左到右写，它们同样包含化学上相同的取代物，是从右到左写结构，例如-CH₂O-也可以表述为-OCH₂-。

术语“组合物”如药物组合物，意思是包含一种产物包括活性成分和惰性成分组成载体，就象任何产物，直接或间接由任何两种或更多成分组合、络合或聚合生成，或由一种或多种成分分解生成，或由一种或更多的成分进行其他的反应或相互作用而生成。相应的，本发明的药物组合物包含任何由本发明的化合物和药学上可接受的载体混合而成的组合物。术语“药物组合物”表示适合受试者作为药物应用的化合物，包括动物或人类。一种药物组合物通常包括有效量的活性药剂和药学上可接受的载体。

本发明的化合物包含一种或多种不对称的中心，因此就会产生外消旋体和外消旋的混合物，单个对映体，非对映混合物和独立的非对映体。本发明意味着包含发明化合物所有这样的同分异构形式。

这里描述的化合物包含烯式双键，除非特别指出，否则意味着包含E和Z几何异构体。

这里描述的一些化合物会在不同部位联结氢原子，归于互变异构体。这样的例子可以是酮和它的烯醇形式，称为酮-烯醇互变异构体。本发明的分子式也包括单独的互变异构体和它们的混合物。

本发明的化合物包括成对对映体的非对映异构体。非对映异构体例如，甲醇或乙酸乙酯或它们的混合物。因此获得的成对对映体可以通过常规的方法，例如应用光学活性酸作为溶剂，来分解成单个立体异构体。

或者，任何发明化合物的对映体可以通过应用光学纯净的原始物质或已知结构的试剂进行立体定向合成来获得。

如这里所应用的，术语“杂原子”意思包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。

这里应用的“烷醇”是指一种饱和或不饱和，取代或未取代，有分支或无分支的烷基团，它们有羟基取代物或由羟基部分衍生出来的取代物，例如乙醚、酯。烷醇也更适合以氮、硫或氧-位取代物来取代，它包含在Z键中(式I)，在“脂肪酸”和烷醇之间。

这里应用的“脂肪酸”是指饱和或不饱和，取代或未取代的，分支或无分支的烷基团，它们有羧基取代物。理想的脂肪酸是C₄-C₂₂酸。脂肪酸也包含的种类是羧基取代物被-CH₂-部分所代替。

术语“烷基”自己或作为另一取代物的一部分，除非另有说明，都是一直链或支链，或环状烷基或它们的化合物，它们可以是完全饱和的，单-或多不饱和的，会包含2-和多价的基团，拥有指定的碳原子数。(例如C₁-C₁₀指1到10个碳原子)。饱和的烷基团例子包括，但不局限于基团如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、叔-丁基、异丁基、仲-丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙甲基、它们的同系物和同分异构体，例如正-戊基、正-己基、正-庚基、正-辛基及相类似的。不饱和的烷基包含一个或多个双键或三键。不饱和烷基的例子包括但不局限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基以及更高的同系物和同分异构体。术语“烷基”除非特别注明，也包含那些下面具体定义烷基的衍生物，如“杂烷基”。烷基局限于碳氢基团的叫做“均烷基(homoalkyl)”。

术语“亚烷基”自己或作为另一取代物的一部分是指从烷烃衍生出来的二价基团，这种烷烃例如但不局限于-CH₂CH₂CH₂CH₂-进一步包括下面描述为“杂亚烷基”的那些基团。典型的，一种烷基(或亚烷基)会含有1-24个碳原子，在本发明中理想的是那些基团含有10个或更少的碳原子。一种“低价烷基”或“低价亚烷基”是较短链的烷基或亚烷基，通常含有8或更少的碳原子。

术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(硫烷氧基)以它们习惯的意义应用，并且指那些和分子残基相结合的烷基，分别经氧原子、氨基或硫原子。

术语“杂烷基”自己或和其他术语一起，除非另有说明，指稳定的直或支链，或环烷基，或它们的化合物，包含所述数量的碳原子和至少一种杂原子选自O、N、Si和S，其中氮和硫原子可任选的氧化，氮杂原子可任选的季铵化。杂原子O、N、Si和S可以存在于杂烷基内部的任何位置或在烷基和分子残基结合的部位。例子包含，但不局限于-CH₂-CH₂-O-CH₃，-CH₂-CH₂-NH-CH₃，-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃，-CH₂-S-CH₂-CH₃，-CH₂-CH₂，-S(O)-CH₃，-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃，-CH＝CH-O-CH₃，-Si(CH₃)₃，-CH₂-CH＝N-OCH₃和-CH＝CH-N(CH₃)-CH₃。两种杂原子可以是连续的，例如-CH₂-NH-OCH₃和-CH₂-O-Si(CH₃)₃。相似的，术语“杂亚烷基”自己或作为另一取代物的一部分是指从杂烷基衍化而来的二价基团，例如但不局限于-CH₂-CH₂-S-CH₂-CH₂-和-CH₂-S-CH₂-CH₂-NH-CH₂-。对于杂亚烷基，杂原子也可以占据所有链的末端或其中之一(例如亚烷基氧基、亚烷基二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基及相似物)。进一步来说，对于亚烷基和杂亚烷基联系的基团，联系基团的定位不包含它所写的化学式的方向。例如，式-C(O)₂R’-同时代表-C(O)₂R’-和-R’C(O)₂-。

术语“环烷基”和“杂环烷基”，它们自己或和其他术语结合在一起，除非另有说明，分别代表“烷基”和“杂烷基”环状形式。另外，对于杂环烷基，杂原子可以占据杂环和分子残基结合的部位。环烷基的例子包括，但不局限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基及相似的基团。杂环烷基的例子包括，但不局限于1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-烷基、四氢呋喃-3-烷基、四氢噻吩-2-烷基、四氢噻吩-3-烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基及诸如此类的。

术语“卤”或“卤素”，它们自己或作为另一取代物的一部分，除非特别声明，指氟、氯、溴、碘原子。另外，术语如“卤化烃”包括单卤化烃和多卤化烃。例如，术语“卤化烃(C₁-C₄)”包括但不局限于三氟甲烷、2，2，2-三氟乙烷，4-氯丁烷，3-溴丙烷等等。

除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和的、芳香的烃取代物，可以是单环或多环(理想的是1-3个环)，它们融合在一起或共价结合。术语“杂芳基”指芳基团包含1-4个杂原子，选自N、O和S，其中氮和硫原子任选的氧化，氮原子任选的季铵化。杂芳基可以通过一杂原子和分子残基结合。非限制的芳基和杂芳基例子包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上面注明的芳基和杂芳基环体系的取代基选自下面描述的可接受取代基。

简单的说，术语“芳基”包含上面定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意味着包含那些由芳基和烷基结合的基团(例如苯甲基、苯乙基、吡啶甲基及诸如此类的)包含那些烷基团其中的碳原子(如亚甲基)被例如氧原子所取代(例如苯氧甲基、2-吡啶氧甲基、3-(1-萘氧基)丙基等等)。

上面的每一个术语(如“烷基”、“杂烷基”、“芳基”、“杂芳基”)指包括所述基团的取代和未取代形式。下面提供了每种基团的理想的取代基。

烷基、杂烷基的取代基(包括那些经常提到的基团，如亚烷基、链烯基、杂亚烷基、杂链烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环链烯基、杂环链烯基)可以是一个或多个选自但不局限于：-OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、-卤素、-SiR’R”R、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO₂R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R、-NRC(O)₂R’、-NR-C(NR’R”R)＝NR””、-NR-C(NR’R”)＝NR、-S(O)R’、-S(O)₂R’、-S(O)₂NR’R”、-NRSO₂R’、-CN、-NO₂数值可以是从O-(2m’+1)，其中m’是这样基团中碳原子的总数。R’，R”，R，R””都分别优选的指氢、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的杂芳基如被1-3个卤素取代的芳基、取代或未取代的烷基、烷氧基或硫烷氧基或芳烷基。如果本发明的化合物包含不止一个R基团，每个R基都单独选择如不止一个这些基团出现R’，R”，R，R””可供选择。当R’和R”与相同的氮原子结合时，它们可以和氮原子结合形成一个5-，6-或7-原子的环。例如，-NR’R”指，但不局限于，1-吡咯基和4-吗啉基。从上面取代基的讨论中，此文章中一项技术意味着，术语“烷基”指那些碳原子结合的基团而不是氢原子基团如卤化烃(例如-CF₃和-CH₂CF₃)以及酰基(例如-C(O)CH₃，-C(O)CF₃，-C(O)CH₂OCH₃等等)。

和所描述的烷基取代基相似，芳基和杂芳基取代基也是变化的，选自如：卤素、-OR’、＝O、＝NR’、＝N-OR’、-NR’R”、-SR’、卤素、-SiR’R”R、-OC(O)R’、，-C(O)R’、-CO₂R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R、-NRC(O)₂R’、-NR-C(NR’R”R)＝NR””、-NR-C(NR’R”)＝NR、-S(O)R’、-S(O)₂R’、-S(O)₂NR’R”、-NRSO₂R’、-CN、-NO₂、-R’、-N₃、-CH(Ph)₂、氟(C₁-C₄)烷氧基和氟(C₁-C₄)烷基，数值从0至芳香环体系上所有开放的化合价之间变化；其中R’、R”、R和R””优选的独立选自氢、(C₁-C₈)烷基和杂烷基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-(C₁-C₄)烷基和(未取代的芳基)氧基-(C₁-C₄)烷基。当本发明的化合物包含多种R基团时，每个R基都单独选择如不止一个这些基团出现R’、R”、R、R””可供选择。

术语“体脂减少”指减去部分的体脂。

计算身体质量指数的公式(BMI)是[体重(磅)/身高(英寸)/身高(英寸)]×703。BMI对于成人的区分点是一固定数值，不考虑年龄和性别，使用以下的规则：超重的成人个体的BMI是在25.0-29.9。肥胖成人的BMI是30.0或更高。体重较轻的成人的BMI低于18.5。正常体重范围成年人的BMI是在18.5和25之间。对16岁以下儿童BMI的区分点定义按照的百分比为：超重是同年龄中BMI大于85％的，肥胖是同年龄中BMI大于95％。体重较轻是同年龄中BMI小于5％。正常体重范围儿童的BMI大于5％低于85％。

术语“脂肪酸氧化”和脂肪酸(如油酸盐)转化为酮体有关。

术语“肝细胞”指原始的从肝脏组织产生的细胞。肝细胞可以从肝脏组织新鲜的分离出来或建立细胞索。

术语“调节”是指诱导任何变化，包括增加或减少(如脂肪酸氧化的调节剂增加或减少脂肪酸氧化率)。

术语“肌细胞”是指由肌肉组织主细胞衍生而来的细胞。肌细胞可以从肌肉组织新鲜的分离出来或建立细胞索。

术语“肥胖”表示体重通过体重指数的测定超过理论体重的20％。

油酰乙醇胺(OEA)是指下面结构的天然脂：

这里的式中“Me”代表甲基。

术语“体重减轻”指指减去部分的体重。

术语“药学上可接受的载体”包括任何标准的药物载体、缓冲液、赋形剂，包括磷酸缓冲盐溶液、水和乳状液(如油/水或水/油乳状液)，已经各种类型湿剂和/或佐剂。合适的药物载体和他们的配方在REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES中描述(Mack Publishing Co.，Easton，19th ed.1995)。理想的药物载体依赖于活性药剂的给药方式。特征性的给药方式描述如下。

术语“有效量”是指一定的剂量足够产生想要的结果。想要的结果包括受试者客观或主观的改善。客观的改善可以是食欲或渴求食物的欲望下降。主观的改善可以是体重、体脂或食物的减少或食物消耗的减少或觅食行为的减少。

“预防性的治疗”是一种施用于受试者的疗法，这种受试者，没有表现出疾病的体征或只表现出疾病的早期体征，这种治疗的目的是为了降低和体重或体脂增加相关联疾病的发病危险。本发明的化合物可以用作预防性治疗来预防不理想或不想要的体重增加。

“治疗性的处理”是指施用于表现出病理学体征的受试者的一种治疗，其中这种治疗的目的是为了减少或消除那些病理体征。

术语“控制体重”包含体重的减少或一段时间体重增加的减少。

本发明的方法、化合物和组合物通常对于减少或控制哺乳动物的体脂和体重是有效的。例如，本发明的方法、化合物和组合物对于降低哺乳动物食欲或减少hypophagia是有帮助的。本发明的方法、化合物和组合物也通过提高体重和体脂的减少而有助于预防或减轻和超重或肥胖相关的疾病。

本发明的方法、化合物和组合物包括脂类代谢的调节剂，特别是脂肪和脂肪酸代谢。

本发明的化合物

本发明特定的化合物会不对称的碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个同分异构体都包括在本发明的范围之内。

本发明这样的化合物会被分离为非对映异构的成对对映体，通过从合适的溶剂中部分重结晶，溶剂可为甲醇或乙酸乙酯或它们的混合物。这样获得的成对对映体可以通过常规的方法分解为立体异构体，例如应用一种任选的活性酸作为溶剂。

或者，本发明化合物的对映体可以通过使用任选不知结构的纯净原始材料进行立体定向合成而获得。

本发明的化合物在它们一个或多个原子处有异常比例的原子同位素。例如，化合物会被同位素放射性的标记，如氚或C-14。本发明化合物的所有同位素变化，不管是放射性的或不是，都在本发明的范围之内。

即时的化合物可以以它们药学上可接受的酸添加剂盐的形式分离，如从应用无机或有机酸衍生出来的盐。这样的酸包括盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、蚁酸、乙酸、三氟醋酸、丙酸、马来酸、琥珀酸、丙二酸等等。另外，含有酸功能的特定化合物可以以它们无机盐的形式存在，其中的补偿离子可选自钠、钾、锂、钙、镁和其他，也可以来自有机碱。术语“药学上可接受的盐”指从药学上可接受的无毒的碱或酸配制得到的盐，包括无机碱或酸和有机碱或酸。

本发明也包括所述化合物的前体药物，它们如果给药就会在变为活性药物之前通过代谢过程而进行化学转化。大体上，这样的前体药物是所述化合物的衍生物，它们在活体中稳定的转化为本发明的有效化合物。选择和配置合适的前体药物衍生物的传统步骤，例如在“Design of Prodrugs”中描述，H.Bundgaard编，Elsevier，1985。本发明也包含这个化合物的活性代谢物。

A脂肪酸链烷醇酰胺化合物、同系物和类似物

本发明的化合物包括减少体脂的脂肪酸链烷醇酰胺化合物，包括脂肪酸乙醇胺化合物，以及它们的同系物和脂肪酸链烷醇酰胺的特定的类似物。这样的化合物通过对活体的实验动物给药而表现出降低食欲、食物摄入、和或减少体重或体脂的能力来确认和定义。

这样的脂肪酸链烷醇酰胺化合物，同系物和类似物多样性是预期的。本发明的化合物具有下面一般的分子式：

在这个式中，n是0-5，a和b的和为0-4。Z成分选自-C(O)N(R⁰)-；-(R⁰)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR⁰和S，其中R⁰和R²独立选自取代或未取代的烷基、氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基、均烷基和芳基。该化合物脂肪酸部分和链烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分这两者或其一最多有四个氢原子也可被甲基或双键取代。另外，碳c和d之间的分子键可以是不饱和或饱和的。在一些实施方案中，如上面分子式的脂肪酸乙醇胺是自然产生的化合物。

本发明还包括下面式子的化合物：

在一个实施方案中，式Ia化合物的n是0-5，a和b的和为0-4；其中R¹和R²独立选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基、均烷基和取代或未取代的芳基。在这个实施方案中，化合物脂肪酸部分和链烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。另外，碳c和d之间的分子键可以是不饱和或饱和的。在一些有酰基的实施方案中，酰基可以是丙酸、乙酸或酪酸并通过酯化连接如R²或酰化连接如R¹。

在另一个实施方案中，上面的化合物包含特征性的那些脂肪酸基团部分如油酸、反油酸、棕榈酸。这样的化合物包括油酰乙醇胺、反油酰乙醇胺、棕榈酰乙醇胺。

                          油酰乙醇胺

在另一实施方案中，式Ia化合物的n是1-3，a和b的和为1-3；其中R¹和R²独立选自取氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基。在这个实施方案中，以上式化合物脂肪酸部分和链烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分的最多四个氢原子也可被甲基或双键取代。另外，碳c和d之间的分子键可以是不饱和或饱和的。在进一步的实施方案中，碳c和d之间的分子键可以是不饱和的并且没有其他的氢原子被取代。仍在它们进一步的实施方案中，R¹和R²独立选自氢、取代或未取代的C₁-C₃烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₃)酰基。

典型的化合物提供单甲基取代的化合物，包括式Ia的乙醇胺。这样的化合物包括：

(R)1’-甲基

(S)1’-甲基

(R)2’-甲基

(S)2’-甲基

(R)1-甲基

(S)1-甲基

上面分子式的甲基取代化合物特征性的包括那些化合物R¹和R²都是H：(R)1’-甲基脂肪酸乙醇胺，(S)1’-甲基脂肪酸乙醇胺，(R)2’-甲基脂肪酸乙醇胺，(S)2’-甲基脂肪酸乙醇胺，(R)1-甲基脂肪酸乙醇胺，(S)1-甲基脂肪酸乙醇胺。

反式OEA-式的化合物

本发明的化合物也包括多种OEA类似物。这些化合物包括反式OEA化合物，一般分子式为：

在一些实施方案中，本发明提供了式II的化合物。典型的式II的化合物的n是1-5，a和b的和为0-4。在这种实施方案中，R²选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基、均烷基和芳基。另外，上式化合物脂肪酸部分和链烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

典型的式II的化合物包含那些化合物，它们的链烷醇酰胺位置是乙醇胺，R²是H，a和b都是1，n是1。

式II的化合物的一个实施方案是

                               反式OEA

在另一实施方案中，式II的化合物的n是1-5，a和b的和为1-3。在这个实施方案中，R²选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基。另外，上式化合物脂肪酸部分和链烷醇酰胺(例如乙醇胺)部分两者或其一最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

                      油酸烷醇酯化合物

本发明的化合物也包括油酸烷醇酯，一般化学式为：

在一些实施方案中，式III的化合物的n是1-5，a和b的和是0-4。R²选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基、均烷基和芳基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分两者或其一最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

在一些实施方案中，式III的化合物的n是1-3，a和b的和是1-3。R²选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

式III的化合物包含那些化合物，它们的R²是氢，a和b都是1，n是1。式III的化合物的例子包括油酸乙醇酯：

式III的化合物也包含单甲基取代的油酸乙醇酯，如(R或S)-2’-甲基油酸乙醇酯；(R或S)-1’-甲基油酸乙醇酯；(R或S))-1’-甲基油酸乙醇酯；分别是：

油酸烷醇醚

本发明的化合物也包括油酸烷醇醚，一般化学式为：

在一些实施方案中，式IV的化合物的n是1-5，a和b的和为0-4。R²选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基、烷基和取代或未取代的芳基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分两者或其一最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

在另外的实施方案中，式IV的化合物的n是1-3，a和b的和为1-3。R²选自氢、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的低级(C₁-C₆)酰基。上式化合物脂肪酸部分和烷醇(例如乙醇)部分两者或其一最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

式IV的化合物包含那些化合物，它们的R²是氢，a和b都是1，n是1。式IV的化合物的实例包括下面(R或S)-1’-油酸乙醇酯和(R或S)-2’-油酸乙醇酯：

有极性头变体的脂肪酸链烷醇酰胺类似物

本发明的化合物也包括多种OEA极性头类似物。这些化合物包括含有脂肪酸部分的化合物，一般化学式如：

在一些实施方案中，式IV的化合物a和b的和为0-4。在另外的实施方案中，a和b的和为1-3。在这些实施方案中，上式化合物最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。另外，碳c和d之间的分子键可以是不饱和或饱和的。特别优选的实施方案是油酸脂肪酸部分：

上面结构的R³基团可以从下面任何一个选择：

HO-(CH₂)_z-NH-其中z是从1-5，它的烷基部分是不分支的亚甲基链。例如：

H₂N-(CH₂)_z-NH-其中z是从1-5，它的烷基部分是不分支的亚甲基链。例如：

HO-(CH₂)_x-NH-其中x是从1-8，它的烷基部分是分支的或环状的。例如：

其他R³极性头基团包括例如有呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃功能基团的化合物：

以上结构中，z可以是1-5。

本发明的化合物包括，例如，那些有R³极性头基团的，以吡咯(pyrole)、吡咯烷和吡咯环为基础：

以上结构的化合物中，z可以是1-5。

其他典型的极性头基团包括多种咪唑和唑，例如：

以上结构的化合物中，z可以是1-5。

唑嘧啶极性头基团也是典型的：

具有无极性尾部变化的脂肪酸链烷醇酰胺

本发明的化合物包括多种链烷醇酰胺和乙醇胺化合物，它们都有多种能变形的非极性的尾巴。这些化合物包括下面式的化合物，其中R代表乙醇胺部分，链烷醇酰胺部分或它稳定的类似物。是乙醇胺时，乙醇胺部分优选的经过它的氨基而不是氧来结合。

在上面的结构中，m是1-9，p单独是1-5。

典型的化合物是：

另一典型的化合物是乙醇胺类似物，带有下面结构式的非极性尾巴：

典型的化合物包括脂肪酸链烷醇酰胺的类似物。这样的类似物包括在美国专利第6,200,998中所讲授的那些化合物(这里引入作参考)。这个参考讲授化合物的一般分子式：

在上式中，如在美国专利第6,200,998中所阐述的，Ar¹是(1)亚芳基或(2)杂芳基，其中亚苯基和杂亚苯基被从R^a中选择的1-4个基团任选取代；Ar²是(1)正-取代芳基或(2)正-取代杂芳基，其中所述正取代基选自R；芳基和杂芳基都近一步任选的被独立选自R^a的1-4个基团所替代。X和Y分别是O，S，N-R^b或CH₂；Z是O或S；n是0-3；R是(1)被选自卤素的1-4个基团任选取代的C_3-10烷基以及C_3-6环烷基，(2)C_3-10链烯基或(3)C_3-8环链烯基；R^a是(1)C_1-15烷醇基(2)C_1-15烷基(3)C_2-15链烯基(4)C_2-15炔基(5)卤素(6)OR^b(7)芳基或(8)杂芳基，其中所述的烷基、链烯基、炔基、烷醇基都是被选自R^c的1-5个基团所任选替代，所述的芳基和杂芳基被选自R^d的1-5个基团所任选替代；R^b是(1)氢(2)C_1-10烷基(3)C_2-10链烯基(4)C_2-10炔基(5)芳基(6)杂芳基(7)烷基C_1-15杂烷基(8)杂芳基C_1-15烷基(9)C_1-15烷醇基(10)C_3-8环烷基，其中烷基、链烯基、炔基都是被独立选自R^c的1-4个基团所任选替代，环烷基、芳基、杂芳基都是被独立选自R^d的1-4个基团所任选替代；或R^c是(1)卤素，(2)芳基，(3)杂芳基，(4)CN，(5)NO₂，(6)OR^f，(7)S(O)_mR^f，m＝0，1或2如果R^f不是H时m是1或2，(8)NR^fR^f，(9)NR^fCOR^f，(10)NR^fCO₂R^f，(11)NR^fCON(R^f)₂，(12)NR^fSO₂R^f如果R^f不是H，(13)COR^f，(14)CO₂R^f，(15)CON(R^f)₂，(16)SO₂N(R^f)₂，(17)OCON(R^f)₂或(18)C_3-8环烷基，其中所述的环烷基、芳基、杂芳基被1-3个卤素基或C_1-6烷基所任选替代；R^d是(1)从R^c中选择的基团，(2)C_1-10烷基，(3)C_2-10链烯基，(4)C_2-10炔基，(5)芳基C_1-10烷基或(6)杂芳基C_1-10烷基，其中烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基都是被独立选自R^e的基团所任选替代；R^e是(1)卤素，(2)氨基，(3)羧基，(4)C_1-4烷基，(5)C_1-4烷氧基，(6)羟基，(7)芳基，(8)芳基C_1-4烷基或(9)芳氧基；R^f是(1)氢，(2)C_1-10烷基，(3)C_2-10链烯基，(4)C_2-10炔基，(5)芳基，(6)杂芳基，(7)烷基C_1-15杂烷基，(8)杂芳基C_1-15烷基，(9)C_1-15烷醇基，(10)C_3-8环烷基，其中烷基、链烯基、炔基、芳基、杂芳基、烷醇基、环烷基都是被选自R^e的1-4个基团所任选替代。

美国专利第5,859,051号中讲授的类似物也是优选的。这些类似物有下面一般的化学式：

在式VII的实施方案中，如美国专利第5,859,051号中所阐述的那样，R¹选自H，C_1-6烷基，C_5-10芳基和C_5-10杂芳基，所述的烷基、芳基或杂芳基任选的被1-3个R^a基团替代；R¹选自H、C_1-15烷基、C_2-15链烯基、C_2-15炔基、C_3-10环烷基，所述的烷基、链烯基、炔基、环烷基任选的被1-3个R^a基团替代；R³选自H、NHR¹、NH芳基、C_1-15烷基、C_3-10环烷基、C_2-15链烯基、C_1-15烷氧基、CO₂烷基、OH、C_2-15炔基、C_5-10芳基、C_5-10杂芳基，所述的烷基、环烷基、链烯基、炔基、芳基和杂芳基任选的被1-3个R^a基团替代；(Z-W-)是Z-CR⁶R⁷-，Z-CH＝CH-，或：

R⁸选自CR⁶R⁷，O，NR⁶和S(O)_P；R⁶和R⁷独立选自H、C_1-6烷基；B选自：1)5和6元的杂环包含0-2个双键，1个杂原子选自O，S，N，杂原子在5或6元杂环的任何位置被取代，杂环任选的被1-3个R^a基团取代或不取代；2)5和6元的碳环包含0-2个双键，碳环任选的被在5和6元碳环的任何部位的1-3个R^a基团替代或不取代；3)5和6元的杂环包含0-2个双键，3个杂原子选自O，S，N，在5或6元杂环的任何位置被取代，杂环任选的被1-3个R^a基团取代或不取代；X¹和X²独立选自：H、OH、C_1-15烷基、C_2-15链烯基、C_2-15炔基、卤素、OR³、ORCF₃、C_5-10芳基、C_5-10芳烷基、C_5-10杂芳基和C_1-10芳基，所述的烷基、链烯基、炔基、芳基和杂芳基任选的被1-3个R^a基团替代；R^a代表一组成元素选自卤素、酰基、芳基、杂芳基、CF₃、OCF₃、-O-、CN、CO₂、R³、OR³；SR³、＝N(OR)、S(O)R³、SO₂R³、COR³、CO₂R³、CON(R³)₂、SO₂N(R³)₂、OCON(R³)₂，所述的芳基和杂芳基任选的被1-3个卤素或C_1-6烷基替代；Y选自S(O)_P、-CH₂-、-C(O)-、-C(O)NH-、-NR-、-O-、-SO₂NH-、-NHSO₂；Y¹选自O和C；Z选自CO₂R³、R³CO₂R³、CONHSO₂Me、CONHSO₂、CONH₂和5-(1H-四唑)；t和v各自是0或1，这样t+v＝1 Q是包含2-4个碳原子的直链饱和或不饱和烃，p是0-2，条件为Z是CO₂R³和B是包含O的5元杂环，R³不代表甲基。

适合实施本发明方法和组合物的另外的类似物包括美国专利第5,847,008号、6,090,836号和6,090,839号中所讲授的化合物。这里都以不与现在发明冲突的程度完整的引入作参考。

在美国专利第6,274,608号中讲授了另外多种合适的类似物。例如在美国专利第6,160,000号中讲授了芳基和杂芳基乙酸及羟乙酸类似物；在美国专利第6,200,998号中讲授了取代的5-芳基-2，4-噻唑烷二酮类似物；其他可能的类似物如聚不饱和脂肪酸和二十烷酸已经知道了(见例如，Forman，BM，Chen，J，和EvansRM，PNAS)94：4312-4317。这些出版物以不与现在发明冲突的程度完整引入作参考，他们的化合物可以通过下面的方法筛选检查来提供例如根据本发明对减少体脂和体重，调节脂肪代谢和降低食欲的有用化合物。

脂肪酸链烷醇酰胺的合成

有效的实施本发明的化合物使用本文中所认识到的方法来稳定合成和提纯。在典型的合成图解中(图解1)，一种羧酸和一种乙醇胺(或一种它的O-受保护的衍生物)在脱水剂存在的条件下反应，例如在一合适的溶剂中的二环己基碳二亚胺。脂肪酸链烷醇酰胺通过如提取、重结晶、沉淀、色谱法等来分离。如果终产物是O-受保护的加合物，典型的用文章所知道的方法来使之去保护，提供有自由羟基的脂肪酸加合物。

文中的那些技术会认识到以上图解给出的许多变体是有用的。例如，一种有活性的衍生物，例如，可以应用的酸的卤化芳基和活性酯。相似的，乙二醇(优选单O-受保护的)可以来取代氨基乙醇，结果是分子两组分之间酯键相联系。

反式酯和反式酰胺也通过知道的方法稳定合成。例如，一种羟基羧酸在脱水剂存在的条件下和长链烷基(例如C₄-C₂₂)胺或羟基衍生物反应。在特定的反应途径中，理想的保护了羟基羧酸的羟基部分。

乙醚和硫醇通过文中那些技术熟知的方法来配制，例如Williamson合成。例如，一种长链的烷基乙醇或硫醇被一种碱去质子化，例如NaH，活性的乙醇衍生物，如卤素、甲苯磺酰基、甲磺酰基乙醇或它们的受保护的衍生物和所得的阴离子反应而形成乙醚或硫醇。

上面所述的方法和它的变化能在以下找到如RECENT DEVELOPMENT IN THESynthesis OF FATTY ACID DERIVATIVES，Knothe G编，Amer.Oil Chemists Society1999；COMPREHENSIVE NATURAL PRODUCTS CHEMISTRY AND OTHER SECONDARYMETABOLITES INCLUDING FATTY ACIDS AND THEIR DERIVATIVES，Nakanishi K编，Pergamon Press，1999；ORGANIC SYNTHSIS COLLECTED VOLUMES I-V，John Wiley和Sons；COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS，卷1-6，Wiley，Interscience，1984；ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATION，卷I-III，Academic Press有限公司1983；Greene T，PROTECTING GROUPSIN ORGANIC SYNTHSIS，第二版，Wiley，Interscience，1991。

应用方法、药物组合物及其用药

应用方法

本发明的化合物、组合物和方法(如脂肪酸链烷醇酰胺、脂肪酸乙醇胺化合物、类似物和同系物)被应用来防止哺乳动物体重或体脂增加，包括狗、猫尤其是人。体重减轻是为了美容和治疗的目的。这些化合物也被应用来降低食欲或引起hypophagia。

本发明的化合物、组合物和方法也被应用来预防体重在正常范围内的个人的体重增加和体脂的增长。这种化合物也应用于其他健康的个人，他们不需要任何药物的介入来治疗和糖尿病或高血压或癌症相关的疾病。在一些实施方案中，受治疗的个人免于和糖或脂类水平异常或代谢异常相关的疾病，或免于心血管和脑血管疾病的威胁。这样的个人也许无糖尿病并且血糖在正常水平，也可能血脂(如胆固醇)或甘油三脂在正常水平。这样的个人免于动脉硬化症，也可能免于其他疾病如癌症或其他肿瘤、紊乱包括胰岛素抵抗，X综合症以及胰腺炎。

在其他的实施方案中，受试者是超重或肥胖的人，他们需要减少体重或体脂。在这些实施方案中，可以施用这项本发明的方法、化合物和组合物来提高减轻体重也来预防体重增加，只要达到对于一个人的性别、年龄和身高来说正常的体重范围。这种化合物也应用于其他健康的个人，他们不需要任何药物来治疗和糖尿病或高脂血症或癌症相关病症。这样的个人也可能免于心血管和脑血管疾病的危险因素。在一些实施方案中，接受治疗的个人免于和糖(如葡萄糖)或脂类代谢相关的疾病。这种个人没有糖尿病以及血糖范围在正常水平，他们的血脂(如胆固醇、HDL、LDL、总胆固醇)或甘油三脂水平在正常范围。这样的个人不需要治疗动脉硬化症。

可以施用本发明的化合物、方法和组合物来抑制哺乳动物的胃口包括猫、狗和人。在一些实施方案中，这种化合物应用于其他健康的个人，他们不需要任何药物的介入来治疗任何疾病。在一些实施方案中，个人不需要预防性或缓解性治疗任何疾病，包括癌症、糖尿病或高脂血症。在一些实施方案中，受治疗的个人免于和异常血糖或脂类水平相关的疾病。在另外的实施方案中，受治疗的个人免于心血管和脑血管疾病的威胁。这种个人没有糖尿病以及血糖范围在正常水平，他们的血脂(如胆固醇)或甘油三脂水平在正常范围。这样的个人免于动脉硬化症。

可以施用本发明的化合物、方法和组合物来调节哺乳动物，包括猫、狗和人的脂类代谢(例如增加脂肪的分解代谢)。在一些实施方案中，应用这种化合物降低其他健康个人的食欲。在一些实施方案中，接受治疗的个人免于和血糖或脂类代谢相关的疾病(如糖尿病、高胆固醇血症、低HDL水平或高LDL水平)。这种个人没有糖尿病以及血糖范围在正常水平。他们的血脂或甘油三脂水平在正常范围。这样的个人免于动脉硬化症。

用本发明的化合物和组合物来进行治疗，可以根据一段时间达到的体重降低的程度或量来规定，或个人达到BMI在正常范围。用这项本发明的化合物和组合物来进行治疗，在达到了规定的量和程度的体重降低或个人达到BMI在正常范围时，要减少。

可以单独施用本发明的化合物和组合物来达到降低体重或食欲的目的。

药物组合物

本发明在另一方面提供了药物组合物，它包括本发明的化合物和药学上可接受的载体。

本发明的药物组合物包括本发明的化合物，作为活性成分或其药学上可接受的盐，也包括药学上可接受的载体和任选的其他治疗成分。

所述组合物包括适合口服、直肠、局部、胃肠外(包括皮下、经肌肉和静脉内)、眼睛(眼科的)、肺部(鼻或口腔吸入)，或鼻腔给药，但是特定情况最合适的给药方式部分依赖于所治疗疾病的性质和严重性，以及活性成分的性质。典型的给药途径是口服。可以方便的以单位剂量的形式给出组合物，并用药学文章中任何熟知的方法来配制。

在实际的应用中，本发明的化合物可以根据常规的药物化合物技术合成，作为和药物载体亲密混合的活性成分。载体可表现出多种形式，这依赖于想要给药的配方形式，例如口服或胃肠外(包括经静脉内)。在配制用来口服剂量形式的组合物时，任何通常的介质都可以运用，如水、乙二醇、油、乙醇、调味剂、防腐剂、色素等等，以及以口服液体配方，如悬浮液、酏剂和溶液；或载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释液、粒化剂、润滑剂、粘合剂、分解剂等，以及以口服固体的形式，如粉末、硬和软的胶囊和片剂，固体配方要优于液体配方。

由于它们和容易给药，片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下，载体明显是要用的。如果需要，片剂会通过标准的含水或不含水的技术来包衣。这样的组合物能含有至少0.1％的活性化合物。这些组合物中的活性化合物的百分比当然会变化，并大约在2％-60％单位体重左右。在这种治疗应用的组合物中的活性化合物的量是这样的，这样就能获得治疗有效剂量。所述活性化合物也可以鼻腔内给药，如以液滴或喷雾的形式。

片剂、药丸、胶囊等等也包含一种粘合剂如胶、黄芪胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；分解剂如玉米淀粉、土豆淀粉、褐藻酸；润滑剂如硬脂酸镁；甜剂如蔗糖、乳糖或糖精。当一剂量单位形式是胶囊时，它除了含有上面类型的物质外，还含有液态的载体如脂肪油。

许多其他的物质会存在，作为包衣或修饰剂量单位的物理形式。例如，片剂可以用虫胶、糖或两者都用来加上包衣。一种糖浆或酏剂除了活性成分外，可包含作为甜剂的蔗糖，作为防腐剂的木精和丙对苯，染料和调味剂如樱桃红或橙味。为了防止在经过GI途径上部运输时降解，组合物可是肠包衣的配方。

给药

本发明的化合物也可以胃肠外给药。这些活性化合物的溶液或悬浮液可以在水和表面活性剂如羟丙酯纤维素的合适混合物中配制。胶体溶液也可以在甘油、液态的聚乙烯乙二醇和它们在油中的混合物来配制。在普通的存储和使用环境下，这些配方包含用来防止微生物滋生的防腐剂。

适合注射应用的药物形式包括无菌的注射溶液或胶体溶液。在所有的情况中所述形式必须是无菌的，并且必须是流动的，到方便注射的程度。它在生产和存储的环境下必须是稳定的，并且来防止微生物的污染作用如细菌和真菌。载体可以是溶剂或胶体溶液介质包含例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙烯乙二醇和液态的聚乙烯乙二醇)以及它们合适的混合物和植物油。

本发明的化合物在一广泛的剂量范围有效。例如，在治疗成年人时，剂量大概为10-1000mg，需要大概100-500mg或1-100mg。每天使用大概0.05-100mg，更优选的0.1-100mg。最优选的剂量是每天使用0.1-70mg。在为病人选择规则时，通常一开始必要的将剂量定为每天使用2-70mg，当疾病得到控制时，尽量低的减少剂量大概从每天0.1-10mg开始。例如，在治疗成年人时，可每天大约使用0.05-100mg，优选的用大约每天0.1-100mg。确定的剂量将依赖于给药的方式，治疗所希望的给药方式，被治疗的受试者及他的体重，和负责医生或兽医的喜好和经验。

一般的，本发明的化合物可以以单位剂量的形式配制，优选的包含0.1-100mg的活性成分和每单位剂量的药学上可接受的载体。通常的，适合口服、鼻腔、肺部、或经皮肤给药的剂量形式包括大概0.001-100mg，更优选的0.01-50mg和药学上可接受的载体和稀释液混合的化合物。作为存储和使用，这些配方优选的包含一种防腐剂来防止微生物的滋生。

候选化合物合适剂量的施用可以通过任何文中所知的方法，例如口服或直肠、胃肠外、腹膜内、静脉内、皮下、真皮下、鼻腔内或肌肉内给药。在一些实施方案中，给药方法是经真皮。候选化合物的合适的剂量可以根据文中所知经验性的决定。合适的或治疗的剂量是指在一段时间能足够使动物的体脂和体重减轻的剂量。候选化合物可以根据减少体脂和体重的需要来给药，例如每小时、每6，8，12或18小时，每天或每周。

适合口服给药的配方包括(a)溶液，如有效剂量的悬浮在稀释液中的小包核酸，如水、盐水或PEG400；(b)胶囊、香囊或片剂，各自都包含规定量的活性成分，如液体、固体、颗粒或明胶；(c)合适液体中的悬浮液；和(d)合适的乳剂。片剂形式包含一种或多种乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、磷酸钙、玉米淀粉、缓冲试剂、润湿剂、防腐剂、调味剂、染料、分解剂以及药学上相容的载体。菱形形式包含调味剂中的活性成分，例如蔗糖，正如糖锭包含惰性碱基中的活性成分，例如明胶和丙三醇或蔗糖和阿拉伯树胶乳剂、凝胶及类似的，除了文中所知的活性成分和载体。

注射溶液和悬浮液可从前面描述过的那种无菌粉末、颗粒及片剂来配制。适合胃肠外给药的配方，例如关节内给药(在关节内)，经静脉内、肌肉内、真皮内、腹膜内和皮下途径，包括水和非水的，等渗无菌注射液。它包含可使配方和受试者血等渗的抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂及溶质，以及水和非水无菌悬浮液，它包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。

关于真皮内给药的途径，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版(Gennaro等编，Mack Publishing Co.，1985)中揭示了真皮内给药的方法。真皮或皮肤斑是皮内给予本发明化合物的优选途径。斑块优选的提供一种吸收增强剂，如DMSO来增加化合物的吸收。美国专利第5,962,012和第6,261,595号揭示了皮内药物传输的其他途径。每一项都完整引入作参考。

优选的斑快包括那些控制药物传输进皮肤率的。斑块会提供多种剂量体系，分别包括蓄积体系或单一体系。蓄积体系设计例如可有4层：直接接触皮肤的粘性层，控制性膜，它控制药物分子的分散，药物分子的蓄积以及抗水的底。这样的一种设计在特定的时间段内传输了统一剂量的药物，传输率必须低于不同类型皮肤的饱和界限。

单一设计，特征性的只有三层：粘性层、包含化合物的基质聚合体及防水的底。

这样的设计带来了皮肤饱和量的药物。因此，皮肤控制了传输。当药物量在斑块中降低到低于饱和水平时，传输率下降。

本发明的化合物可以和本发明其他的化合物或其他药物联合使用，它们在饮食或治疗、预防、抑制或减少体脂方面是有用的。因此这样的化合物可以以通常使用的途径和剂量和本发明的化合物同时或连续给药。当本发明的化合物和其他一种或多种药物同时应用时，包含这样的其他药物和化合物的单位剂量形式的药物组合物是优选的。当和一种或多种其他活性成分联合应用时，本发明的化合物和其他活性成风会比单一应用时使用较低的脊梁。相应的，本发明的药物组合物包括包含那些除了上面揭示的化合物外的一种或多种其他活性成风的组合物。

本发明化合物的鉴定

候选化合物如上面所述的那样，可以通过文中所知的方法筛选。例如减少体脂的化合物可以应用为文中的那些普通技术人员所熟知的动物生物测定技术，在活体中辨认。实验性的化合物和合适的赋形剂或能量的控制，可以通过许多途径来施用(如口服途径、胃肠外途径)于实验受试者，在治疗的过程中监测受试者的体重。实验的受试者是人类或实验动物(如大鼠、小鼠)。

所述化合物对于食欲或引起hypophagia或减少食物摄入的影响可以通过例如监测实验受试者的食物消耗来评估。(例如以食物重量或能量内容物来测定吃掉或未吃的量)。所述化合物对于食欲的影响也通过主观的方法包括使用受试者对食欲或对食物渴望水平的问卷调查来评估。实验化合物对于脂类代谢的影响可以通过监测血脂和脂肪酸氧化来评估。这些评估的技术对于文中的普通技术人员来说都是熟知的。这项考察可能是急性、亚急性、慢性或亚慢性的，这要根据给药的持续时间和或给药的效果。

体重的减少，例如，可以通过直接测定动物体脂或体重的变化来测定。所述动物可选自小鼠、大鼠、几内亚猪或兔子。所述的动物可以是ob/ob小鼠、db/db小鼠或Zucker小鼠或其他体重相关疾病的动物模型。也在人类中实施临床研究。

组合的化学库

近来，关注集中在应用组合化学库来帮助生产新的化学化合物例子。组合化学库是由化学合成或通过组合许多的构造块如试剂的生物合成而产生的各种化合物的集合。例如，线性的组合化学库如多肽库通过组合一系列被称为氨基酸的化学构造块形成，通过每种可能的方法以特定的化合物长度(例如多肽化合物中的氨基酸数量)。成百上千万的化学化合物可以通过这样的化学构造块的组合性混合来合成。例如，某一评论员已发现100个可转换的化学构造块的系统性，组合性混合会导致1亿四聚体化合物或100亿五聚化合物的理论合成(Gallop等.J.Med.Chem.37(9)：1233(1994))。

配制和筛选组合化学库对于文中的那些技术员来说是熟知的。这样的组合化学库包括，但不局限于苯并二氮卓类(美国专利第5,288,514号)，diversomers？如乙内酰脲，苯并二氮卓类和二肽(Hobbs等.PNAS USA 90：6909(1993))，类似的小化合物库的有机合成(Chen编)J.Amer.Chem.Soc.116：2661(1994)，少氨基甲酸盐(Cho等.，Science261：1303(1993))，和/或肽基膦酸酯(Campbell等J.Org.Chem.59：658(1994))以及小有机分子库(见如苯并二氮卓类(Baum C&EN，Jan 18，页33(1993))，噻唑烷二酮和metathiazanones(美国专利第5,549,974号)，四氢化吡咯(美国专利第5,525,735号和第5,519,134号)，苯并二氮卓类(美国专利第5,288,514号)等等。

配制组合库的设备是商业上应用的(见，如357MPS，390MPS，Advanced ChemTech，Louisville KY，Symphony，Rainin，Wobum，MA，433A Applied Bio-systems，Foster City，CA，9050 Plus，Millipore，Bedford，MA)。

许多熟知的自动系统也已经被用来发展液相化学。这些系统包括自动工作站，就象Takeda化工有限公司生产的自动合成设备一样(Osaka，日本)以及许多使用自动手臂的自动系统(Zymate II，Zymate公司，Hopkinton，Mass；Orca，Hewlettpackard，Palo Alto，CA)，它模仿化学家进行的人工合成操作。以上任何一种设备都适合这项发明的应用。对这些设备进行修改的性质和执行对于相关文章中的技术人员都是显而易见的，这样他们就能按照这里讨论的来操作。另外，许多组合库它们本身自己是商业应用的(见例如ComGenex，Princeton，N.J.，Asinex，Moscow，Ru，Tripos，Inc.St.Louis，MO，ChemStar，Ltd.，Moscow，RU，3D Pharmaceuticals，Exton，PA，Martek Biosciences，Columbia，MD等)。

化学库的高生产量测定

这里描述的化合物测定必须服从高生产量的筛选。因此优选的测定发现了通过实验化合物转录的激活(例如mRNA产物的激活)，通过实验化合物蛋白质表达的激活，或通过实验化合物和基因产物的结合；或如下面描述的对脂肪酸调节的影响。

对于存在、不存在或特定蛋白质产物的定量的高产量测定或结合测定对于文中那些技术员来说是熟知的。因此，例如美国专利第5,559,410号揭示了蛋白质高产量的筛选方法，美国专利第5,576,220号和5,541,061号揭示了配体/抗体结合的高产量的筛选方法。

另外，高产量筛选系统是商业应用的(见例如Zymark Corp.，HopkintonMA；Air技术公司，Mentor，OH；Beckman Instruments，Inc.Fullerton，CA；Pre-cisionSystems，Inc.，Natick，MA等)。这些系统典型的自动执行整个步骤包括所有的样本和试剂的移液，液体的调配，一定时间的温浴和在适合测定的检定器微盘读数。这些结构系统提供了高产量和快速启动，还有高度的灵活性和专用化。这项系统的制造者为各种高生产量提供了详细的规定。这样，例如Zymark公司提供了描述发现基因转录调节、配体结合等筛选系统的技术公告。

测定化合物是否影响食物摄入、体重、体脂、食欲、觅食行为或调节脂肪酸氧化

本发明的化合物，可以给予动物来测定它们是否影响食物摄入和体重、体脂、食欲、觅食行为或调节脂肪酸氧化。

动物可以是，例如肥胖或正常的几内亚猪、大鼠、小鼠或兔子。合适的大鼠包括例如Zucker大鼠。合适的大鼠包括，例如平常的大鼠，ALS/LtJ，C3.SW-H-2b/SnJ，(NON/LtJxNZO/HlJ)Fl，NZO/HlJ，ALR/LtJ，NON/LtJ，KK.Cg-AALR/LtJ，NON/LtJ，KK.Cg-Ay/J，B6.HRS(BKS)-Cpefat/+，B6.12P2-Gcktm/Efr，B6.V-Lepob，BKS.Cg-m+/+Leprdb和C57BL/6J食物引起的肥胖。

施用合适量的候选化合物可通过文中所知的任何方法，例如口服或直肠，胃肠外例如腹膜内、静脉内、皮下、真皮下、鼻腔内或肌肉内。优选的给药方法可是腹膜内或口服。如文中所知的那样，合适有效量的候选化合物可经验性的测定。合适有效量就是在一段时间能使动物的体脂或体重减少或食物消耗减少的足够量。候选化合物可以根据减少体脂和体重的需要来给药，例如每小时、每6，8，12或18小时，每天或每周。

适合口服给药的配方包括(a)溶液，如有效剂量的悬浮在稀释液中的候选化合物，如水、盐水或PEG400；(b)胶囊、香囊或片剂，各自都包含规定量的活性成分，如液体、固体、颗粒或明胶；(c)合适液体中的悬浮液；和(d)合适的乳剂。片剂形式包含一种或多种乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、磷酸钙、谷物淀粉、土豆淀粉、微结晶纤维素、明胶、胶状二氧化硅、云母、硬脂酸镁、硬脂酸和其他赋形剂、色素、填充剂、结合剂、稀释剂、缓冲试剂、润湿剂、防腐剂、调味剂、染料、分解剂以及药学上相容的载体。菱形形式包含调味剂中的活性成分，例如蔗糖，正如糖锭包含惰性碱基中的活性成分，例如明胶和丙三醇或蔗糖和阿拉伯树胶乳剂、凝胶及类似的，除了文中所知的活性成分和载体。

注射溶液和悬浮液可从前面描述过的那种无菌粉末、颗粒及片剂来配制。适合胃肠外给药的配方，包括例如水或非水的，等渗无菌注射液，它包含可使配方和受试者血等渗的抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂及溶质，以及水和非水无菌悬浮液，它包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。

动物的的给药剂量足够经过一段时间使得体重、体脂和/或脂肪酸氧化发生变化。这样的剂量可根据运用的特定候选化合物的功效及动物的状况来决定，同样也考虑动物体重或表面部分。剂量的大小也由伴随着施用候选化合物而产生的副作用的存在、性质和程度来决定；还有取决于候选化合物的LD₅₀；以及候选化合物在各种浓度时的副作用。通常，剂量在0.1-50mg/kg，优选的是1-25mg/kg，最优选的是1-20mg/kg体重。剂量反应关系的测定对于文中的一个普通技术员来说是熟知的。

体脂的减少

体重的减少可以特征性的通过直接测定体脂的变化或体重丢失来决定。动物的体脂和体重在施用候选化合物前、中、后测定。体脂的变化通过任何文中的方法测定，例如，用测径器、生物电阻抗、流体静力称重或双x-线吸收谱来测量脂肪褶。优先的动物表现出至少2％、5％、10％或15％体重的减少。体重的减少在候选化合物施用前测定，并在治疗期间和以后，隔一定的时间测量。优选的，体重每5天测量一次，更优选的每4天测量一次，更优选的每3天测量一次，更优选的每2天测量一次，更优选的每1天测量一次。

脂肪酸代谢的变化

脂肪酸代谢的变化可以通过，例如，观察主要脂肪燃烧组织细胞中的脂肪酸氧化来测定，这些组织如肝(Beynen等Diabetes 28：828(1979))，肌肉(ChiassonLab.Anat of Rat(1980))，心脏(Flink等J.Biol.Chem.267：9917(1992))和脂细胞(Rodbell J.Biol.Chem.239：375(1964))，细胞可以来自初级培养物或细胞索。细胞可以通过文中所知的方法来配制为初级培养物，包括例如酶消化和解剖。合适的细胞索对于那些文中的人说是知道。合适的肝细胞索包括，例如Fao，MH1C1，H-4-II-E，H4TG，H-4-II-E-C3，McA-RH7777，McA-RH8994，N1-S1 Fudr，N1-S1，ARL-6，Hepa1-6，Hepa-1c1c7，BpRcl，tao BpRcl，NCTC克隆1469，PLC/PRF/5，Hep 3B2.1-7[Hep 3B]，Hep G2[HepG2]，SK-HEP-1，WCH-17。合适的骨肌肉细胞索，例如是L6，L8，C8，NOR-10，BLO-11，BC3H1，G-7，G-8，C2C12，P19，Sol8，SJRH30[RMS 13]，QM7。合适的心脏细胞索是H9c2(2-1)，P19，CCD-32Lu，CCD-32Sk，Girardi，FBHE。合适的脂细胞索是NCTC克隆929[Strain L的衍生物；L-929；L细胞]，NCTC2071，L-M，L-M(TK-)[LMTK-；LM(tk-)]，A9(APRT和HPRT StrainL的阴性衍生物)，NCTC克隆2472，NCTC克隆2555，3T3-L1，J26，J27-Neo，J27-B7，MTKP97-12 pMp97b[TKMp97-12]，L-NGC-5HT2，Ltk-11，L-α-1b，L-α-2A，L-α-2C，B82。

脂肪酸氧化率可以通过¹⁴C油酸氧化成酮体(Guzman和GeelenBiochem.J.287：487(1982))和/或¹⁴C油酸氧化成CO₂(Fruebis PNAS98：2005(2001))；Blazquez等J.Neurochem71：1597(1998))来测定。可以通过使用合适的标记前体或分光光度测定(Serradeil-Le Gal FEBS Lett475：150(2000))来获得脂肪酸或丙三醇的释放来测定lypolysis。为了分析¹⁴C油酸氧化成酮体，新鲜独立的细胞或培养细胞索可以用油酸保温一段合适的时间，如30、60、90、120或180分钟。可以测量¹⁴C在保温媒介中放射量来测定它们的油酸氧化率。油酸氧化可以表达为在x分钟/g细胞中产生的油酸纳摩尔数。为了分析lypolysis/丙三醇的释放，可以洗涤新鲜独立的细胞或培养细胞索，然后将它们保温一段合适的时间。释放入保温媒介的丙三醇的量可以提供lypolysis的系数。

                              实施例

下面的实施例是用来阐述而不是限制的。那些技术员会逐渐认识到许多不重要的参数可以被变换或修改而产生相似的结果。

实施例1：合成脂肪酸乙醇胺化合物、同系物和类似物。

从乙醇胺和相应的脂肪酰基配制脂肪酸乙醇胺的方法是相对简单的并为文中的一个普通技术员所知。例如，可以通过将脂肪酸或氯化脂肪酸和乙醇胺反应合成脂肪酸乙醇胺，如Abadjj等所描述的那样(Abadjj，V.，Lin，S.Y.Taha，G.，Griffin，G.，Stevenson，L.A.Pertwee，R.G.& Makriyannis，A.J.Med.Chem.37，1889-1893(1994))。脂肪酸可以用与Serdarevich和Carroll相似的步骤来配制(Serdarevich，B.& Carroll，K.K.J.Lipid Res.7，277-284(1966))。放射标记的脂肪酸乙醇胺可以通过酰基氯(Nu-Check Prep，Elysian，MN)和[³H]乙醇胺(10-30Ci/mmol；American Radiolabeled Chemicals.St.Louis)反应来配制，正如Desarnaud，F.，Cadas，H.&Piomelli，D.(1995)J.Biol.Chem.270，6030-6035所描述的。化合物可以通过闪光柱色谱法或HPLC来提纯。化合物的同一性，可以通过使用NMR和/或气体色谱-质谱法和薄层色谱法来建立。

原始试剂和材料可以从Avanti Polar Lipids，Cayman Chemicals(Ann Arbor，MI)，Nu-Check Prep，Research Biochemicals或Sigma购买。简要的说，根据Giuffrida，A.等(见Lipid Second Messenger(Laycock，S.G.和Rubin，R.P.Eds.113-133页，CRC Press LLC，Boca Raton，Florida)中的Giuffrida，A和Piomelli，D.)和Devane等(Devane W.，Hanus，L.等Science 258，1946-1949(1992))，未标记或标记的脂肪酰基乙醇胺可以通过相应的脂肪酰氯和未标记或标记的乙醇胺反应合成。脂肪酸氯可以溶解在二氯甲烷(10mg/ml)中并和乙醇胺在0.4℃条件下反应15分钟。加入纯净水后反应停止。在积极的搅拌后，物相才可以被分离。丢弃上层的水相物质。用水清洗有机相物质两次。这些清洗去除了未反应的乙醇胺。这个方法提供了脂肪酰基乙醇胺的量化配制。在氮气流下将乙醇胺浓缩干燥，并在有机溶剂如浓度为20mM的二氯甲烷中重组。所得的脂肪酰基乙醇胺溶液可在-20℃条件下存储直到需要使用的时候。

脂肪酸羧酸基，主要和次要的氨基以及主要的乙醇胺对于文中的一普通技术员来说是熟知的。脂肪酸乙醇胺在乙醇胺位置有许多的取代基，因此能用许多方法配制，但最优选的是用相应的取代乙醇胺和脂肪酸部分来开始配制。这样的取代乙醇胺会包括烷基氨基乙醇酯和酰基氨基乙醇酯，还有次级烷基乙醇胺。或者，特定的脂肪酸乙醇胺可以在相应的脂肪酸乙醇胺中加入合适的取代基来合成。

实施例2：筛选活体中脂肪酸乙醇胺和本发明其他化合物的方法

动物.使用雄性Wistar大鼠(200-350g)。程序必须符合NIH规定，它在实验动物的管理和使用指导以及欧共体指导性86/609/EEC管理动物研究中详述。

化学物质.FAEs和[²H₄]FAEs在实验室合成(Giuffrida等，”Lipid SecondMessengers”(Laychock，S.G.&Rubin，R.P.编)113-133(CRC Press LLC，Boca Raton，FL，1998))；1，2-二油基-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油基从Avanti PolarLipids(Alabaster，AL)购买；SR141716A由RBI(Natick，MA)提供，它是NIMH(N01MH30003)化学合成项目的一部分；SR144528是Sanofi Recherche的慷慨的赠品；其他所有的药物都来自于Tocris(Ballwin，MO)或Sigma(Saint Louis，MO)。FAE溶解在二甲亚砜(DMSO)中，以70％的DMSO无菌盐溶液(急性治疗)或5％的Tween80/5％的丙烯乙二醇无菌盐溶液(慢性治疗)(1mg/kg)来给药。辣椒素以10％的Tween80/10％乙醇/80％盐溶液给药；SR141716A，SR144528，CCK-8和CP-93129在5％的Tween80/5％的丙烯乙二醇盐溶液中(1mg/kg)。

酶测定.在所有的生化实验中，大鼠在各种长时间的禁食后，被杀死，组织在1400和1600h之间被收集。微粒体部分根据上面描述的配制(Desarnaud等，J.Biol.Chem.，270：6030-6035(1995))。使用1，2-[¹⁴C]棕榈酸-sn-甘油磷酸胆碱作为底物(108mCi/mmol，Amersham，Piscataway，NJ)(Cadas等H.，J.Neurosci.，17：1226-1242(1997))进行NAT测定。FAAH根据(Desarnaud等，J.Biol.Chem.，270：6030-6035(1995))进行测定，除了[³H]anandamide(花生四烯基-[1-³H]乙醇胺)；60Ci/mmol；ARC，St.Louis，MO)包括在底物之内，放射活性在经氯仿提取后的水相中进行测定。

HPLC/MS分析.血浆是采用由心脏穿刺而得到的血来配制(Giuffrida等.，Anal.Biochem.，280：87-93(2000))CSF使用一27G1/2的针(Precisionglide，美国)采自大池。用甲醇/氯仿将FAEs和NAPE从组织中提取，并使用柱色谱柱将它们分离(Giuffrida等.，“Lipid Second Messengers”(Laychock，S.G.&Rubin，R.P.编)113-133(CRC Press LLC，Boca Raton，FL，1998))。FAEs通过HPLC/MS定量，应用同位素稀释液方法(Giuffrida等.，Anal.Biochem.，280：87-93(2000))。单独的NAPE种通过HPLC/MS确认和定量，应用一种外部的标准方法(Calignano等.，Nature，408：96-101(2000))。

血液化学.血浆β-羟基丁酸和丙三醇应用商业工具来测定(Sigma，St，Louis，MO)。血浆催乳素、肾上腺酮和黄体激素通过放射免疫测定来定量(Navarro等，J.Neuroreport.，8：491-496(1997))。

喂养实验.急性实验.测定24-h禁食的大鼠食物摄入量(Navarro等，J.Neurochem.，67：1982-1991(1996))，在给予食物前15分钟给药。亚急性实验。Ad libitum喂养的大鼠接受赋形剂注射3天。在第4天，将动物分为相同的两组，连续7天每天给它们注射赋形剂或OEA(1900h时5mg/kg)，同时测体重、食物摄入和水的摄入。

有条件的味道的转变.大鼠禁水24-h，然后习惯于在30分钟实验期间从分级瓶中饮水，这样持续4天。在第5天，用0.1％的糖精溶液替代水，30分钟后给动物注射赋形剂，OEA(20mg/kg)或氯化锂(0.4M，7.5ml/mg)。在接下来的两天中，经过30分钟的实验时间记录水的消耗量。然后给与动物水、糖精和再测得饮用量。

对于食物的动作反应.训练大鼠根据一设定的比实施例1(FR1)补充时间表按杠杆来饮食，然而在每天每只大鼠限制20g食物(Rodriguez de Fonseca等.，ActaPharmacol.Sin.，20：1109-1114(1999))。一旦获得稳定的反应，训练动物获得FR5，休息2分钟食物补充，并保持它们能有限的获得食物。当获得的一稳定的基准时，用这些动物来测试在杠杆给食15分钟前施用的赋形剂或OEA(1，5或20mg/kg)的效果。测试时间是60分钟。

其他行为的测定。在施用赋形剂或OEA(20mg/kg)后，如所描述的那样实施举重和迷宫实验(elevated plus maze test)(Navarro等，J.Neuroreport.，8：491-496(1997))。在开放领域的水平活性(Beltramo等.，Neurosci.，20：3401-3407(2000))和在热盘实验中(55℃)的疼痛界限(Beltramo等.，Scinece，277：1094-1097(1997))于注射赋形剂或OEA(20mg/kg)15分钟后测定。使用一数字测温计来测定直肠温度(Martin-Calderon等.，Eur.J.Pharmacol.，344：77-86(1998))。

原位杂交.通常将大鼠处理和进行注射5天。在第6天，施用赋形剂或药物OEA(10mg/kg)或油酸(10mg/kg)。60分钟后在麻醉下通过断头将大鼠杀掉。使用来c-fos^3 5的S标记的cRNA探针(Guthrie等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，90：3329-3333(1993))和乙酰胆碱转移酶(ChAT)(Lauterborn等，Brain Res.Mol.BrainRes.，17：59-69(1993))进行原位杂交分析。通过每只大鼠的至少3个组织部分来测定平均杂交密度。使用变化的一种分析(ANOVA)，接着用Tukey-Kramer后面的测定成对的对照物来评价统计学意义。

数据分析.结果表达为平均值±n个不同实验的s.e.m。使用(ANOVA)，接着用Student-Newman-Keuls后面的实验，除非另外表示，来评价各组间的差异的显著性。

实施例3：饥饿对于大鼠OEA和其他FAE水平的影响

在某一实施方案中，本发明提供了治疗的方法，其中个人是需要减少体重和/或体脂，并在禁食前和/或期间测试OEA水平的。在禁食前或对于禁食反应后OEA水平低的个人特别是本治疗的目标。

当定期的通过高效液态色谱法(HPLC)和电喷质谱法(MS)测定心脏血液中FAE水平时，大鼠被禁食。在禁食的头12小时，血浆OEA保持在基准水平，在18-24小时显著上升，在30小时时又回降到正常(图1a)。在禁水(图1b)或应用抑制剂如制动剂和脂多糖(LPS)给药后[pmol/ml；10.3±0.8；在15分钟制动后的60分钟，8.4±1.6；注射LPS后的60分钟(1mg/kg)，7.0±0.7；n＝6-9]没发现这样的效应。血浆PEA的浓度不明显受任何这些治疗的影响(数据未显示)，然而当食物去除后，anandamide迅速下降，保持在低于整个实验持续时间的基准水平(图1d)。在制动后，(以pmol/ml；控制，3.6±0.4；制动，1.1±0.5；n＝7-8；P＜0.01)，LPS治疗(控制，2.0±0.5；LPS，0.2±0.2；n＝6；P＜0.01)以及不明显的禁水(图1e)，anandamide水平也下降。这些结果表明，循环OEA的水平在禁食期间瞬间的提高。这一反应是有选择性的对于OEA来说的，anandamide和其他FAEs不出现，并且同时发生血中甘油和β-羟基丁酸(表1)的上升，这表明能量的代谢从以碳水化合物为主要燃料转变为以脂肪酸为主要燃料(Cahill，G.F.，Clin.Endocrinol.Metab.，5：397-415(1976))。

表1.  禁食大鼠体内血浆β-羟基丁酸(β-HBA)水平

                 β-HBA         甘油

自由喂养         1.2±0.4       4.6±0.9

禁食2小时        1.2±0.2       5.3±0.6

禁食4小时        0.8±0.1       9.1±1.8

禁食8小时        1.3±0.2       6.3±0.4

禁食12小时       4.6±0.8*      7.6±1.0*

禁食18小时       6.8±0.4*      8.4±0.4*

禁食24小时       9.1±1.2*      8.4±0.3*

浓度是以mg/dl单位  每一组*P＜0.05，n＝3

脑脊液中OEA的水平不明显的受禁食的影响(图1c)，意味着血浆OEA是猛升是在CNS之外产生的。为了测试这个假设，研究禁食对于大鼠各种组织中OEA代谢的影响。动物细胞产生和降解OEA和其他FAEs的生化途径被认为包括三个主要的酶促应步骤。钙离子激活的NAT活性，将脂肪酸基从供体磷脂的sn-1部位转移到磷脂酰乙醇胺的主氨基部位，这样产生NAPE2(Schmid等，Chem.Phys.Lipids，80：133-142(1996)；Piomelli等，Neurobiol.Dis.，5：462-473(1998))，它最终会被细胞内的脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)分解为脂肪酸和乙醇胺(Schmid等，J.Biol.Chem.，260：14145-14149(1985)；Cravatt等.，Nature，384：83-87(1996))。禁食(18h)伴随发生白色脂肪组织中的NAT活性的显著增加(图2a)，但脑、胃和肾中的不增加(图2b，d，数据没显示)。在肝脏、肠和骨骼肌中，NAT的活性由于禁食而降低(图2c，d，数据没显示)。这些酶促的变化伴随着相应的NAPE组织内容物的变化。大鼠组织中出现许多分子种类的NAPE，包括OEA前体碱-1-palmitoenyl-2-花生四烯酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(NAPE1；图3a)和碱-1-棕榈酰-2-花生四烯基酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-油酸基(NAPE2；图3a)；以及PEA前体碱-1-棕榈酰-2-花生四烯基酰-sn-甘油-磷酸乙醇胺-N-棕榈酸基(没显示)。和NAT活性测定一致，禁食增加了脂肪中的NAPE含量，减少了肝脏中含量(图3b，c)。

由于NAPE的生物合成和FAE形成是紧密结合的过程(Cadas等，H.，J.Neurosci.，17：1226-1242(1997))，人们就期望禁食会提高脂肪中OEA和其他FAEs的水平，但其他组织不是。相应的，饥饿的大鼠要比自由喂养大鼠的脂肪中包含更多的OEA和PEA(图3d，数据没显示)，然而，在大脑、胃和肠中没见到这种不同(数据没显示)。和我们所期待的相反，然而，禁食大鼠肝脏中含有的OEA和PEA也比自由喂养大鼠的要高(图3d数据没显示)。这个不一致也许是由于FAE在肝脏中积聚造成的，这和这个器官在FAE重摄取和代谢中推测的作用是一致的(Bauchur等，J.Biol.Chem.，240：1019-1024(1965)；Schmid等J.Biol.Chem.，260：14145-14149(1985))。

由酶FAAH催化水解为脂肪酸和乙醇胺是FAE降解过程中的一关键步骤(Bauchur等，J.Biol.Chem.，240：1019-1024(1965)；Schmid等J.Biol.Chem.，260：14145-14149(1985)；Cravatt等.，Nature，384：83-87(1996)；Desarnaud等，J.Biol.Chem.，270：6030-6035(1995))。禁食大大的降低了脂细胞膜中FAAH的活性，但对于大脑、肝、胃、肠、肾和骨骼肌中的FAAH活性没影响(图2a-e没显示数据)。因此，禁食以两种互相促进方法提高了白脂肪中OEA和其他FAEs的水平，这两种方法在机制上和脂解期间发生的其他反应不一样：NAT活性的激活会导致NAPE和FAEs生物合成的增加，然而抑制FAAH的活性会延长新合成FAEs的生存时间。虽然许多组织对于血流中正常水平的OEA有作用，但是在脂肪中观察到的动态生化改变强调了这个组织在饥饿期间产生OEA的关键作用。

实施例4.OEA和其他FAEs对食物摄入的抑制

可以应用24小时禁食来评价系统性的施用OEA对大鼠食物摄入的影响。在这个系统中，OEA导致了一种剂量-和时间-依赖的食物摄入的抑制(图4a，b)。为了阐述这个反应的选择性，测定各种各样的OEA类似物他们产生hypophagia能力。

Anandamide和油酸没有效果。

棕榈酰乙醇胺有活性但明显弱于OEA。

反油酰乙醇胺(一种不寻常OEA类似物)和OEA的能力相似(图4a)。

这些结果表明，OEA以一种结构选择的方式来减少饮食，并且其他脂肪酸乙醇胺似的化合物也可以根据本发明应用而辨认。

实施例5.大麻酯受体激动剂的专一性

OEA hypophagia的必需分子和那些参与Anandamide及其已知的大麻酯目标反应的分子不同(Khanolkar等，Life Sci.，65：607-616(1999))。大麻酯受体激动剂不影响活体中的OEA hypophagia，并且在活体中OEA不替代大麻酯结合到大鼠的细胞膜上。因此，虽然它和Anandamide有结构和生物基因上的关系，但OEA不依靠内源的大麻酯体系来产生厌食症。

实施例6.持续的体重减少

在一些实施方案中，现在的发明所述的化合物在延长对哺乳动物给药的基础上提供了持续的体脂或体重的减少。在急性给药后许多药物抑制饮食时，但治疗延长而失效时，这种作用是有利的(Blundell，J.，Trends Pharmacol.Sci.，12：147-157(1991))。

OEA亚急性的施用于大鼠。每天注射OEA(5mg/kg)，持续7天产生逐渐的食物摄入较小但明显的下降，伴随着的是体重增加的明显的抑制(图5b，c)。OEA不影响水的摄入(图5d)。OEA对于体重的影响仅仅部分的解释为它适度的减少了食物消耗，表明其他因素，如能量消耗的刺激或能量累积的抑制也对这个效应有作用。

实施例7.FAEs有外周的作用位点

在本发明的的一个方面，它提供了有外周作用位点的化合物。如有利于减少中枢神经系统副作用的位点。

虽然外周给药是有用的，但OEA在直接注射入脑室后就没效果(表2)，表明这种化合物起作用的主要位点是在CNS外面。进一步阐述，对成年的大鼠在施用神经毒剂、辣椒素后，它们迷走神经中的感觉纤维和其他外周神经都被化学性的破坏了(Kaneko等，Am.J.Physiol.，275：G1056-G1062(1998))。辣椒素处理过的大鼠，不会对外周施用的胆囊收缩素-8(CCK-8)有反应(图6a，c)，比控制的组饮更多的水(图6b，d)，丢失了角膜的化学感应反射(数据没有显示)，表明神经毒素毁掉了传入的感觉神经(MacLean，D.B.，Regul.Pept.，11：321-333(1985)；Ritter等，Am.J.Physiol.，248：R501-R504(1985)；Curtis等，Am.J.Physiol.，272：R704-R709(1997))。接受治疗的动物也不会对OEA反应(10mg/kg)，但通常能对化合物CP-93129有反应，它的目标是CNS中的5-HT_1B受体(图6a，c)(Lee等，Psychopharmacology，136：304-307(1998))。这些发现支持OEA通过作用于外周位点而产生hypophagia并且这个作用是需要感觉纤维的假说。

表2.  脑室内的pranamide对于食物摄入的影响

                 60分钟        120分钟      240分钟

赋形剂           5.8±0.6      8.0±0.5     9.5±0.5

prana 0.4μg     4.8±0.4      6.6±0.4     8.4±0.4

prana 2μg       4.9±0.4      6.6±0.6     8.7±0.5

prana10μg       5.9±0.2      8.1±0.4     9.6±0.7

在给予食物前15分钟对24小时禁食的大鼠施用pranamide/OEA(prana，μg/动物)或赋形剂(DMSO，5μl)每组n＝12

本发明的化合物应用外周感觉输入来抑制食欲。和食欲抑制相关的外周感觉输入和许多CNS结构相联系，包括脑干中的孤束核(NST)和在视丘下部的弓形室旁核(PVN)(Schwarts等，Nature，404：661-671(2000))。为了弄清在OEA引起的hypophagia中参与的大脑通路，在系统性施用OEA、油酸或赋形剂后通过原位杂交来描绘活性控制基因c-fos(Curran等，Oncogene，2：79-84(1987))的mRNA水平。和控制组相比较，OEA(10mg/kg)引起PVN、视上核(图7a)和NST(图7c)中c-fosmRNA水平高度局限性的增加。这种提高对于这些区域来说是有特异性的，在这种情况下，c-fos在大脑其他区域的表达受OEA治疗影响不明显(图7b，d)。发现OEA促进了c-fosmRNA在NST(它传输迷走神经感觉到CNS)和PVN(中枢能量信号合成的主要位点)中的表达(Schwartz等，Nature，404：661-671(2000))，这和这种脂作为厌食症的外周递质而有的生理作用是相一致的。

OEA通过引起一种非特异的行为抑制状态来减少饮食是可能的。如过这是事实，那OEA一定引起特定味道的转变，这可以由许多毒性物质(Green等，Science，173：749-751(1971))包括氯化锂(图4c)，在大鼠中逐渐引起。然而，最大剂量的OEA(20mg/kg)在这项测定中效果很小(图4c)，表明化合物没有被转化。许多另外的观察值都支持OEA的行为特性。OEA不改变水的摄入、体温、痛阈(图4d-f)或视丘下部-垂体-肾上腺(HPA)轴的活性(表3)。而且，OEA不产生焦虑症(图4g)以及它虽然抑制运动和对于食物的动作反应，但它产生这样作用的剂量要比那些产生hypophagia的要高得多(图4h-i)。这种药学特点使得OEA和其他的食欲抑制剂不同，如安非他明和胰高血糖素样的肽1(它们的作用都经常包括厌食、活动过度、焦虑和HPA轴的激活)，还有如内源大麻酯anandamide(它刺激了半饱动物的食物摄入，提高了痛阈、降低了体温和HPA轴的活性)(Pertwee，R.G.，Exp.Opin.Invest.Drugs，9：1553-1571(2000))。

表3.OEA对血浆荷尔蒙水平的影响

              B            PRL            LH

赋形剂        212±24      10.8±2.7      5.3±0.9

prana20       280±61      8.2±3.2       6.2±1.5

在表3中，血浆肾上腺酮(B)、催乳素(PRL)和黄体生成素(LH)的水平是通过血浆样品的放射免疫测定来测定的，这种血浆样品是在注射赋形剂或pranamide(prana mg/kg)60分钟后收集的，并单位为ng/ml，n＝6-9/组。

OEA在生理相关剂量时引起hypophagia。在施用最大有效剂量(5mg/kg)一半1小时后，循环中OEA的水平(16.1±2.6pmol/ml)明显高于基准水平(10.1±1.1；P＜0.05，斯氏t检验；n＝5)，但低于那些在禁食18小时动物中水平(图1a)。因此，在禁食期间血中达到的OEA水平足够产生明显的行为反应。

实施例8.  辨认本发明减少体脂的化合物

以下的实施例阐明了使用OEA作为正对照时如何来辨认食欲抑制剂。特别讨论了OEA的合成，体脂减少和脂肪酸氧化的测定。

OEA的合成

油酰氯从Nu-Check Prep(Elysian，MN)购买或按照标准步骤配制。油酰氯溶解在二氯甲烷中(10mg/ml)，在4℃条件下让它和五种乙醇胺的等价物反应15分钟。加入纯水终止反应。在积极搅拌和分离各相后，丢弃上层水相物质并用水将有机相物质洗涤两次来去除没反应的乙醇胺。所得OEA在N₂气中浓缩干燥，重组为20mM的氯化形式，存储在-20℃下直到使用。

测定候选化合物引起的体脂的减少

化合物减少体脂的能力可用许多方法来评价。例如，通过腹膜内注射来给予大鼠合适剂量的OEA和/或候选化合物。OEA和候选化合物可在70％的DMSO的无菌盐溶液，5％的Tween 80/5％的丙烯乙二醇无菌盐溶液，或10％的Tween 80/10％乙醇/80％盐溶液。5mg/kg的OEA可以作为正对照。施用的候选化合物的量可在1-25mg/kg变化。将典型的1，2，5，10，15和20mg/kg剂量的每种候选化合物施用于不同组别的大鼠来测定哪一剂量是最佳的。在动物主食之前30分钟进行注射，持续7-14天。

测定候选化合物对于总体重的影响可以通过使用皮肤褶测径器直接测量体脂。大鼠背上、腹部、胸部、前后腿的皮肤可以用测径器夹紧，在施用OEA和/或候选化合物前以及施用期间和施用后每48小时进行测量。至少两个夹紧部位的测得值不同反应出大鼠总体脂的变化。

测定由候选化合物引起的脂肪酸氧化

也可以测定化合物对于脂肪酸氧化的影响。候选化合物对脂肪酸代谢的影响可以通过测定肝细胞原始培养物中的脂肪酸氧化来测定。可以应用肝细胞来测定油酸氧化成酮体和二氧化碳的率。这样的细胞可以通过酶消化从成年大鼠肝脏中分离出来，由Beynen等在Disbetes28：828(1979)中描述。细胞典型的用悬浮液培养，在Krebs-Henseleit’s碳酸氢盐介质中保温，这种介质由牛血清和葡萄糖组成，由Guzman&Geelen，Biochem.J.287：487(1992)描述。可以测定培养细胞的蛋白质浓度并将细胞接种在2ml的介质中，这样反应混合物中就出现4-6mg蛋白质/ml。在37℃条件下细胞和[¹⁴C]-油酸(Amershamy)起保温10分钟，10μmOEA存在或不存在，用200μl 2M高氯酸和从氯仿/甲醇/水(5∶1∶1，体积∶体积∶体积)提取的酸溶性的产物来终止反应。水相物质被去除，洗涤两次以上。用Lowry测定法来测定蛋白质浓度。油酸转化为酮体的率可以表达为每小时每mg蛋白质氧化的油酸的nmol数，并可以应用液态闪烁粒计数来测定。相应的，OEA增加了21+-6％油酸的氧化(n＝4，p＜0.01和斯氏t检验的对照保温)。

实施例9.OEA对于脂肪酸代谢的影响

油酰乙醇胺(OEA)降低体重，不仅仅通过抑制食欲，还通过可能性的提高体脂的代谢。调查了OEA对于主要体脂燃烧组织(比目鱼肌、肝脏、培养的心肌细胞和星形细胞)中脂肪酸氧化。OEA明显的激发了在原始肝细胞培养物、骨骼肌(比目鱼肌)和心脏细胞中的脂肪酸氧化，然而，它对脑起源的星形细胞培养物无效。另外，OEA引起了主要白色脂肪组织细胞中存储的甘油三脂的动员。表4详述了方法和OEA对这些细胞中脂肪酸氧化的影响。结构-活性关系实验提供了一个事实，那就是OEA对于骨骼肌脂肪酸氧化的影响是特异的(图8)。因此，OEA的效应被抗水解的同系物甲基-OEA所模仿，仅部分的被棕榈酰乙醇胺(PEA)模仿，但花生四烯酸乙醇胺(AEA)或油酸(OA)却不是的。简要的说，这些结果表明OEA增加了脂类的氧化和动员，OEA的效应局限在外周部位。

表4

细胞/组织	肝细胞	比目鱼肌	心肌细胞	星形细胞	脂细胞
						原始	成年大鼠肝脏	成年大鼠后肢	新生大鼠心脏	新生大鼠大脑皮层	成年大鼠副睾
分离步骤	酶消化(Beynen等1979)	解剖(Chiasson1980)	酶消化(Flink等1992)	酶消化(McCarthy&De Vellis，1980)	酶消化(Rodbell，1964)
						培养物的类型	细胞悬浮液	组织悬浮液	细胞单层	细胞单层	细胞悬浮液
保温介质	Krebs-Henseleit’s碳酸氢盐加BSA和葡萄糖(Guzman&Geelen，1992)	Krebs-Henseleit’sHepes加BSA和葡萄糖(Fruebis等，2001)	高-葡萄糖DMEM加BSA(Wu等2000)	Hams F12/DMEM加胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和亚硒酸盐(Blazquez等，1998)	Krebs-Henseleit’sHepes加BSA和葡萄糖(Rodbell，1965)
						代谢参数					脂化(甘油释放)(Serradeil-LeGal等2000)
保温时间(分钟)	10	30	30	30	30
						10μM OEA的激活效应	21±6(＝4)	36±10(n＝4)	37±9(n＝3)	2±6(n＝3)	38±16(n＝3)
统计学意义对对照	P＜0.01	P＜0.01	P＜0.01	无意义	P＜0.01

应用的参考：Beynen AC等，Disbetes 28：828-835(1979)；Blazquez C等，J.Neurochem 71：1597-1606(1998)；Chiasson RB“白鼠的实验室解剖”WBC，Dubu-Que，Iowa(1980)；Funk IL等，J.Biol.Chem267：9917-9924(1992)；FruebisJ等，ProcNatl Acad Sci USA 98：2005-2010(2001)；Guzman M等，BiochemJ287：487-492(1992)；McCarthy KD等，J Cell Biol 85：890-902(1980)；RodbellM J.Biol.Chem239：375-380(1964)；Rodbell M Ann NY Acad Sci 131：302-314(1965)；Serradeil-Le Gal C等，FEBS Left 475：150-156(2000)；Wu W等J.Biol.Chem275：40133-40119(2000)。

实施例10.肠道中内源OEA的作用

考查了进食对于肠道OEA生物合成的影响。高质的液相色谱法/质谱分析揭示了自由喂养的大鼠的小肠组织包含了相当数量的OEA(354±86pmmol

/g，n＝3)。肠道OEA是水平在禁食后显著下降，但在重新进食后又回到了基准水平。相比之下，胃中没有发现这种变化(pmol/g；对照210±20，饥饿，238±84饥饿/重新进食，239±60，n＝3)。肠道OEA水平的变化伴随着NAT活性平行的平行改变，这参与了OEA的形成，但催化OEA水解的脂肪酸酰胺水解酶的活性没有改变。这些发现表明，饥饿和进食相反的调节小肠中OEA的生物合成。和腹内OEA的来源一样，发现饥饿大鼠血浆中的OEA水平在门静脉时要比在腔静脉高(pmol/ml，门静脉，14.6±1.8；腔静脉，10.3±2.8；n＝5)。现在，其他腹腔组织对于OEA的形成的作用是不能排除的。这些结果建议许多介入应用OEA系统来喂养。根据这个模型，进食会激活NAT活性来提高小肠中也可能其他腹腔组织中OEA的生物合成。新产生OEA会激活局部的感觉纤维，而它作为反馈会通过介入大脑结构如NST和PVN来抑制进食。

我们的结果揭示了OEA在进食的外周调节中的未预料到的作用，并提供了一种开发新药的框架，用它们来治疗减少体重和体脂，来预防体重或体脂的增加，来抑制食欲或减少觅食行为或食物的摄入，来治疗饮食的失调、超重或肥胖。这些药物不仅仅包括OEA类似物和同系物，也包括那些如上面所述的通过作用于OEA形成和水解系统和酶来控制OEA水平的药物。

这一详述中所引用的所有出版物和专利申请，这里引入作为参考，到和现在发现不矛盾的程度，好象明确的和单独的表明每个单独的出版物或专利申请是引入作参考的。

虽然先前为了清楚的理解，用阐述和实施例来详细的描述了这项发明，但是在这项发明的指导之下，对于它特定的变化和修改不会离开附加的权利要求的主旨和范围，这一点对于文中那些普通的技术员来说是显而易见的。

Claims (48)

1.一种减少哺乳动物食物摄入的方法，其特征在于，所述方法包括对所述哺乳动物施用脂肪酸链烷醇酰胺，其中，所述施用是以减少所述哺乳动物食物摄入的有效剂量进行的。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸链烷醇酰胺是油酰乙醇胺。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸链烷醇酰胺包括通过酰胺键共价连接到乙醇胺部分的脂肪酸部分。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸部分是单不饱和或多不饱和的。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述给药是通过透皮贴进行的。

6.如权利要求4所述的方法，其中，所述脂肪酸部分是油酸。

7.如权利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸部分含有12-20个碳原子。

8.如权利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸选自反油酸、棕榈油酸、棕榈酸、亚油酸、α-亚麻酸和γ-亚麻酸。

9.如权利要求3所述的方法，其中，所述乙醇胺部分的羟基被低级(C₁-C₃)烷基所取代而形成相应的酯。

10.如权利要求3所述的方法，其中，所述乙醇胺部分的羟基和低级(C₂-C₆)烷基羧酸的羧基结合而形成相应的酯。

11.如权利要求3所述的方法，其中，所述脂肪酸乙醇胺进一步包含和脂肪酸乙醇胺的氮原子共价结合的低级(C₁-C₃)烷基。

12.如权利要求1所述的方法，其中，所述哺乳动物是人。

13.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸链烷醇酰胺是棕榈酰乙醇胺。

14.如权利要求1所述的方法，其中，所述脂肪酸链烷醇酰胺不激活大麻酯CB2或大麻酯CB1受体。

15.如权利要求1所述的方法，其中，所述所述脂肪酸链烷醇酰胺和一种药学上可接受的载体通过口服、直肠、局部或非胃肠途径给药。

16.一种减少或控制哺乳动物体脂或体重的方法，其特征在于，所述方法包括对所述哺乳动物施用可有效减少体脂或体重剂量的具有结构式

的化合物或其药学上可接受的盐，其中，n是0-5，a和b的和可为0-4；Z成分选自-C(O)N(R⁰)-；-(R⁰)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR⁰和S；其中R⁰和R²独立选自未取代或未取代的烷基、氢、C₁-C₆的烷基和低级(C₁-C₆)酰基，其中，其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四个氢原子被甲基或双键取代，碳c和d之间的键可以是不饱和或饱和的。

17.如权利要求16所述的方法，其中，所述化合物的式为：

或其药学上可接受的盐，其中，n是0-4，a和b的和为1-3；其中R¹和R²独立选自取氢、C₁-C₆烷基、低级(C₁-C₆)酰基，其中，其脂肪酸部分和链烷醇胺部分最多有四个氢原子被甲基或双键取代，碳c和d之间的键可以是不饱和或饱和的。

18.如权利要求17所述的方法，其中，R¹和R²独立选自取氢、C₁-C₃烷基和低级(C₁-C₃)酰基。

19.如权利要求17所述的方法，其中，a＝1，b＝1。

20.如权利要求17所述的方法，其中，n＝1。

21.如权利要求17所述的方法，其中，R¹和R²都是H。

22.如权利要求17所述的方法，其中，碳c和d之间的键是双键。

23.如权利要求17所述的方法，其中，所述化合物是油酰乙醇胺。

24.如权利要求17所述的方法，其中，所述化合物是棕榈酰乙醇胺。

25.如权利要求17所述的方法，其中，所述给药途径是胃肠外、口服、经皮、直肠或鼻腔内。

26.如权利要求17所述的方法，其中，所述哺乳动物是人。

27.如权利要求16所述的方法，其中，所述所述化合物为下式之一：

其中，n是1-5，a和b的和是0-4；R²选自氢、C₁-C₆烷基和低级(C₁-C₆)酰基；且其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四个氢原子可被甲基或双键取代。

28.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有药学上可接受的赋形剂和式：

的化合物或其药学上可接受的盐，其中，n是0-5，a和b的和为0-4；Z成分选自-C(O)N(R⁰)-；-(R⁰)NC(O)-；-OC(O)-；-(O)CO-；O；NR⁰和S，其中R⁰和R²独立选自未取代或未取代的烷基、氢、C₁-C₆烷基和低级(C₁-C₆)酰基，其中，其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四个氢原子被甲基或双键取代，碳c和d之间的键可以是不饱和或饱和的。

29.如权利要求28所述的组合物，其中，所述化合物式为：

或该化合物的药学上可接受的盐，其中，n是1-3，a和b的和为1-3；其中R¹和R²独立选自取氢C₁-C₆烷基和低级(C₁-C₆)酰基，其中，其脂肪酸部分和烷醇部分最多有四个氢原子被甲基或双键取代，碳c和d之间的键可以是不饱和或饱和的。

30.如权利要求29所述的组合物，其中，所述组合物是单位剂量的形式，所述单位剂量包含有效减少或控制体重的量的化合物。

31.如权利要求29所述的组合物，其中，所述剂量大约是10-1000mg。

32.如权利要求29所述的组合物，其中，所述剂量大约是1-100mg。

33.如权利要求29所述的组合物，其中，所述剂量大约是100-500mg。

34.如权利要求29所述的组合物，其中，所述化合物是棕榈酰乙醇胺。

35.如权利要求29所述的组合物，其中，所述组合物是局部、口服、胃肠道外给药的组合物。

36.如权利要求29所述的组合物，其中，R¹和R²独立选自取氢、C₁-C₃烷基和低级(C₁-C₃)酰基。

37.如权利要求29所述的组合物，其中，a＝1，b＝1，n＝1。

38.如权利要求29所述的组合物，其中，所述化合物是油酰乙醇胺。

39.如权利要求29所述的组合物，其中，R¹和R²都是H。

40.如权利要求30所述的组合物，其中，碳c和d之间的键是双键。

41.如权利要求30所述的组合物，其中，所述化合物是棕榈酰乙醇胺。

42.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括药学上可接受的赋形剂和式：

的化合物，其中，a和b的和为0-4，上式脂肪酸部分最多有四个氢原子也可被甲基或双键取代，碳c和d之间的键可以是不饱和或饱和的。R代表选自直链或支链烷基胺、环烷基胺、呋喃、四氢呋喃、吡咯、吡咯烷和嘧啶的基团；其中，所述化合物以减少食物摄入的有效剂量来对哺乳动物给药。

43.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有药学上可接受的赋形剂和有效量的脂肪酸链烷醇酰胺，以在对哺乳动物给药后减少体重

44.如权利要求46所述的组合物，其中，所述脂肪酸部分是油酸。

45.如权利要求46所述的组合物，其中，所述脂肪酸部分有12-20个原子。

46.如权利要求46所述的组合物，其中，所述脂肪酸部分选自反油酸、棕榈油酸、棕榈酸、亚油酸、α-亚麻酸和γ-亚麻酸。

47.如权利要求46所述的组合物，其中，所述链烷醇酰胺的链烷醇胺是乙醇胺。

48.如权利要求46所述的组合物，其中，所述组合物是带有肠衣的口服制剂。