FR3038839A1 - Eau de vichy pour moduler la croissance bacterienne - Google Patents
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Abstract
L'invention appartient au domaine des produits permettant de moduler la croissance microbienne, de préférence pour inhiber la croissance de micro-organismes pathogènes et/ou stimuler la croissance de micro-organismes non pathogènes, et/ou stimuler le métabolisme de micro-organismes. La demande vise plus particulièrement l'utilisation d'eau de Vichy ou de compositions la comprenant dans ces applications.
Description
EAU DE VICHY POUR MODULER LA CROISSANCE BACTERIENNE L’invention appartient au domaine des produits permettant de moduler la croissance microbienne, de préférence pour inhiber la croissance de micro-organismes pathogènes et/ou stimuler la croissance de micro-organismes non pathogènes, et/ou stimuler le métabolisme de micro-organismes. La demande vise plus particulièrement futilisation d’eaux du bassin de Vichy ou de compositions les comprenant dans ces applications.
Les micro-organismes sont présents partout dans l’environnement de l’Homme : à la fois dans son environnement direct et au sein même du corps humain. On appelle microbiote l’ensemble de ces micro-organismes vivants dans un environnement spécifique. Le microbiote humain, aussi appelle flore microbienne, est l’ensemble des micro-organismes présents sur ou dans le corps humain (dont le microbiote intestinal).
La plupart des micro-organismes du microbiote sont soit inoffensifs, soient même bénéfiques pour l’hôte. A titre d’exemple les bactéries lactiques convertissent les sucres en acide lactique dans les intestins et participent ainsi à leur bon fonctionnement. Il a été montré en particulier que l’équilibre du microbiote intestinal est important pour le bon fonctionnement du système immunitaire, et protégerait contre le développement des maladies métaboliques.
Toutefois, la nécessité de contrôler la prolifération des microbes pathogènes, en particulier des bactéries et des levures pathogènes a conduit à la découverte des antibiotiques, qui sont désormais utilisés couramment non seulement en médecine mais aussi dans un grand nombre de produits de la vie courante.
Les antibiotiques connus présentent toutefois plusieurs inconvénients. D’une part, ils conduisent au développement de micro-organismes résistant aux traitements. D’autre part, leur spectre d’action est large, c’est-à-dire qu’ils ne sont pas spécifiques d’une bactérie ou d’une famille de bactéries donnée, mais agissent sur un grand nombre d’entre elles. En conséquence, futilisation thérapeutique d’antibiotiques perturbe l’équilibre de la flore microbienne, entravant sont effet protecteur. L’utilisation au long cours d’antibiotiques est donc difficile, dans la mesure où elle fragilise le patient, favorisant de futures infections microbiennes.
Ces inconvénients peuvent être en partie compensés par l’administration ultérieure de probiotiques et/ou de prébiotiques, qui permettent de reconstituer une flore protectrice. Cette solution reste toutefois imparfaite. En effet, à l’heure actuelle il existe peu de souches bactériennes disponibles sous forme de probiotiques, et de plus elles ne représentent qu’une faible partie de la flore détruite par les antibiotiques.
Il existe donc bien un besoin pour des produits alternatifs plus performants, et de préférence moins délétères que les antibiotiques connus. En d’autres termes, le problème que se propose de résoudre l’invention réside dans la mise au point de produits ou compositions possédant des propriétés antimicrobiennes sans les inconvénients connus.
Dans le cadre de l’invention, le Demandeur a mis en évidence des propriétés jusqu’alors inconnues des eaux de Vichy dans la modulation de la croissance microbienne.
Il a notamment déterminé que les eaux de Vichy ont des propriétés à la fois antibactériennes et antifongiques, et d’autre part facilitent la croissance de certains microorganismes. De façon particulièrement étonnante, les eaux de Vichy possèdent à la fois un effet antibactérien et antifongique sur des bactéries et champignons pathogènes, et en outre, un effet stimulant sur la croissance de bactéries bénéfiques. Ces propriétés s’avèrent particulièrement utiles dans des traitements thérapeutiques, mais aussi dans des utilisations visant simplement à maintenir le bon équilibre de la flore, par exemple de la flore intestinale.
En outre, le Demandeur a établi que les eaux de Vichy sont capables de stimuler le métabolisme de certains microbes, et ainsi la production de produits secrétés par ces microbes. Cette dernière propriété trouve naturellement des applications dans le domaine de la culture de micro-organismes.
On connaissait déjà les propriétés anti-inflammatoires, apaisantes, ou encore drainantes des eaux de Vichy chez l’Homme. Toutefois, ces propriétés ont toutes en commun un effet sur le corps humain en tant que tel, c’est-à-dire sur des cellules eucaryotes. Ainsi, rien n’indiquait ni ne laissait supposer que les eaux de Vichy possèdent en outre d’autres propriétés, celle-ci affectant les micro-organismes. En effet, ceci ne pouvaient nullement être déduit des connaissances existantes, dans la mesure où les micro-organismes ont une structure et un métabolisme très différent des cellules humaines. Ces résultats sont donc très surprenants.
Le Demandeur a en outre démontré les eaux de Vichy diluées ou concentrées conservaient ces propriétés, qui peuvent par conséquent être mises à profit dans des applications jusqu’alors jamais envisagées, par exemple en utilisant des compositions comprenant lesdites eaux de Vichy à diverses concentrations. L’invention vise donc en premier lieu l’utilisation d’eau de Vichy ou d’une composition la comprenant pour moduler la croissance microbienne, de préférence pour inhiber la croissance de microbes pathogènes et/ou stimuler la croissance de microbes non pathogènes, et/ou stimuler le métabolisme de microbes. Autrement dit, l’invention vise l’eau de Vichy ou une composition la comprenant pour moduler la croissance microbienne, de préférence pour inhiber la croissance de micro-organismes pathogènes et/ou stimuler la croissance de micro-organismes non pathogènes, et/ou stimuler le métabolisme de micro-organismes.
Au sens de l’invention, les termes « eau de Vichy » désignent une eau issue de l’une des sources du bassin de Vichy, telles que par exemple les eaux dont la composition est donnée au tableau 1, ainsi que leurs mélanges. De préférence, les termes « eau de Vichy » désignent l’eau de Vichy provenant de la source Chomel, avantageusement ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, l’eau de Vichy provenant de la source Lys, avantageusement ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, et l’eau de Vichy provenant de la source Dôme, avantageusement ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, ainsi que leurs mélanges.
Tableau 1 : composition chimique des eaux de Vichy L’eau de Vichy selon l’invention peut indifféremment être utilisée seule ou dans les compositions la comprenant, sous sa forme naturelle ou reconstituée à partir de sels, ou encore sous une forme diluée ou concentrée. En d’autres termes, l’eau de Vichy peut être sous une forme naturelle ou reconstituée, ou encore sous forme diluée ou concentrée. En outre, les compositions selon l’invention peuvent comprendre de l’eau de Vichy sous les formes susmentionnées.
On utilisera plus particulièrement les termes «eau de Vichy naturelle » ou «eau de Vichy sous une forme naturelle » pour désigner l’eau de Vichy qui n’est ni diluée ni concentrée, et n’a pas subi de transformation. On utilisera par ailleurs les termes « eau de Vichy reconstituée » pour désigner l’eau de Vichy obtenue à partir de la mise en solution de sels obtenus de la déshydratation d’eau de Vichy.
Par « eau de Vichy diluée », on entend une eau de Vichy dont la composition saline est diluée en comparaison avec la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle. Par composition comprenant de l’eau de Vichy diluée, on entend que la composition saline de l’eau de Vichy au sein de la composition est diluée en comparaison avec la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle. La dilution de l’eau de Vichy peut alternativement être caractérisée par le facteur de dilution, qui correspond au rapport de la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle sur la concentration saline de l’eau utilisée, ou de la composition la comprenant. Lorsque la composition selon l’invention comprend de l’eau de Vichy diluée, celle-ci est de préférence présente dans la composition à une concentration saline comprise entre 0, 5 et 0,8 fois la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle, de préférence 0,625 fois. En d’autres termes, lorsque la composition selon l’invention comprend de l’eau de Vichy diluée, celle-ci est de préférence diluée d’un facteur de dilution compris entre 1,25 et 2, de préférence diluée d’un facteur de dilution de 1,6, par rapport à l’eau de Vichy naturelle.
Par « eau de Vichy concentrée », on entend une eau de Vichy dont la composition saline est concentrée en comparaison avec la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle. Par composition comprenant de l’eau de Vichy concentrée, on entend que la composition saline de l’eau de Vichy au sein de la composition est concentrée en comparaison avec la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle. Lorsque la composition selon l’invention comprend de l’eau de Vichy concentrée, celle-ci est de préférence présente dans la composition à une concentration saline d’au moins 1,25 fois, 2 fois, 2,5 fois, 5 fois la concentration saline de l’eau de Vichy naturelle.
Au sens de l’invention, il est possible d’utiliser de l’eau de vichy ou bien des compositions comprenant pour partie seulement de l’eau de Vichy. Ainsi, de préférence, la composition selon l’invention comprend au moins 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% d’eau de Vichy, en poids par rapport au poids de la composition.
Les propriétés remarquables des eaux de Vichy permettent de les utiliser dans différents types d’applications, afin de moduler la croissance microbienne, notamment en remplacement des antibiotiques, des antifongiques, ou des probiotiques et prebiotiques connus, ou bien en combinaison avec ceux-ci.
Selon un premier mode de réalisation, les compositions comprenant de l’eau de Vichy de l’invention sont pour une utilisation pour le traitement thérapeutique des infections bactériennes ou fongiques.
Le Demandeur a notamment démontré que l’eau de Vichy possède des effets antimicrobiens très efficaces sur les bactéries des genres Staphylococcus et Pseudomonas, en particulier Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa, ainsi que des propriétés antifongiques sur les levures des genres Candida et Saccharomyces, en particulier Candida albicans et Saccharomyces cerevisiae. Les compositions de l’invention peuvent donc avantageusement être utilisées dans des traitements thérapeutiques d’infections dues à ces micro-organismes, qu’ils s’agissent de traitement préventifs ou curatifs.
Avantageusement, l’infection bactérienne est une infection à staphylocoque, de préférence Staphylococcus aureus. Au sens de l’invention, les termes « infection à staphylocoque » désignent toute infection dans laquelle au moins un micro-organisme du genre Staphylococcus est surabondant, en comparaison avec une abondance de référence ou avec l’abondance du micro-organisme dans les tissus sains adjacents. L’homme du métier pourra aisément déterminer si une infection est dite « à staphylocoque » selon les tests biologiques de routine bien connus. De manière particulièrement préférée, l’infection à staphylocoque est choisie dans le groupe comprenant les furoncles, le panaris, la folliculite, le sycosis, l’impétigo, les mammites, les myosites aiguës, les ostéomyélites, les pneumonies.
Avantageusement, l’infection bactérienne est une infection h Pseudomonas, de préférence Pseudomonas aeruginosa. Au sens de l’invention, les termes « infection à Pseudomonas » désignent toute infection dans laquelle au moins un micro-organisme du genre Pseudomons est surabondant, en comparaison avec une abondance de référence ou avec l’abondance du micro-organisme dans les tissus sains adjacents. L’homme du métier pourra aisément déterminer si une infection est dite « à Pseudomonas» selon les tests biologiques de routine bien connus. De manière particulièrement préférée, l’infection à Pseudomonas est choisie dans le groupe comprenant les infections oculaires, les infections urinaires, les infections génitales, les infections gastro-intestinales, les infections pulmonaires.
Avantageusement, l’infection fongique est une infection à Candida, de préférence Candida albicans. Au sens de l’invention, les termes « infection à Candida» désignent toute infection dans laquelle au moins un micro-organisme du genre Candida est surabondant, en comparaison avec une abondance de référence ou avec l’abondance du micro-organisme dans les tissus sains adjacents. L’homme du métier pourra aisément déterminer si une infection est dite « à Candida» selon les tests biologiques de routine bien connus. De manière particulièrement préférée, l’infection à Candida est choisie dans le groupe comprenant les candidoses cutanéomuqueuses, en particulier buccales, génitales, oropharyngées ou œsophagiennes.
Avantageusement, l’infection fongique est une infection à Saccharomyces, de préférence Saccharomyces cerevisiae. Au sens de l’invention, les termes « infection à Saccharomyces » désignent toute infection dans laquelle au moins un micro-organisme du genre Saccharomyces est surabondant, en comparaison avec une abondance de référence ou avec l’abondance du micro-organisme dans les tissus sains adjacents. L’homme du métier pourra aisément déterminer si une infection est dite « à Saccharomyces» selon les tests biologiques de routine bien connus. De manière particulièrement préférée, l’infection à Saccharomyces est choisie dans le groupe comprenant les onyxis, les infections génitales, les infections pulmonaires.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention vise les compositions comprenant de l’eau de Vichy pour leur utilisation pour stimuler la croissance de bactéries bénéfiques.
Au sens de l’invention les termes « bactéries bénéfiques » désignent les bactéries connues pour leur effet bénéfique sur la santé humaine.
On citera notamment Bacillus subtilis qui peut produire dans l’intestin de grandes quantités d'enzymes digestives telles que la protéase alcaline, la protéase neutre, la bêta-glucanase et l'alpha-amylase, afin de faciliter la digestion des protéines, de l'orge, du glucane et de l'amidon dans les aliments. D’autres bactéries bénéfiques bien connues sont les bactéries lactiques, telles que par exemple les bactéries du genre Lactobacillus et les bactéries du genre Bifidobacterium.
Le Demandeur a notamment démontré que l’eau de Vichy possède des effets positifs sur la croissance de bactéries bénéfiques, en particulier les bactéries du genre Lactobacillus.
De préférence les bactéries bénéfiques sont du genre Lactobacillus, sont choisies parmi le groupe comprenant les bactéries Lactobacillus acidophilus, L. amylovorus, L. casei, L. crispatus, L. delbruckii subsp. bulgaricus, L. gallinarum, L. gasseri, L. johnsonii, L. paracasei, L. plantarum, L. reuteri et L. rhamnosus, plus préférentiellement Lactobacillus acidophilus.
La stimulation de la croissance de bactéries bénéfiques peut être utile dans le cadre du traitement d’un sujet dont la flore microbienne, aussi appelée microbiote, est déséquilibrée. Il a été montré que les personnes possédant un microbiote intestinal déséquilibré sont plus nombreuses à développer des infections gastro-intestinales mais aussi des maladies inflammatoires chroniques de l’intestin, ainsi que des maladies métaboliques, telle l’obésité ou le diabète.
Dans cette perspective, l’utilisation envisagée peut être considérée comme à visée thérapeutique, qu’il s’agisse de traitement préventif ou curatif. On utilisera de préférence les compositions selon l’invention pour traiter des pathologies contre lesquelles l’administration de bactéries bénéfiques s’est révélée utile, en remplacement de probiotiques ou de prébiotiques classiques, ou en combinaison avec ceux-ci.
De préférence, les compositions comprenant de l’eau de Vichy de l’invention, qui permettent de stimuler la croissance de bactéries bénéfiques, sont utilisées pour le traitement ou la prévention de l’intolérance au lactose, des diarrhées, des ulcères gastro-duodénaux, de la maladie de Crohn.
La stimulation de la croissance de bactéries bénéfiques peut aussi être envisagée chez le sujet sain, à seule fin de maintenir une flore microbienne commensale ou bénéfique. Dans ce cas, l’application peut être considérée comme non-thérapeutique, permettant simplement un mieux-être. En effet, les personnes en bonne santé ne tireront aucun avantage thérapeutique du traitement. L’invention vise donc en outre l’utilisation non thérapeutique d’eau de Vichy ou de composition la comprenant, pour maintenir ou entretenir la flore microbienne, de préférence la flore microbienne intestinale ou vaginale, avantageusement pour un sujet en bonne santé.
Par «sujet en bonne santé» ou «sujet sain» on désigne les sujets manifestement dépourvus de pathologies connues, en d’autres termes chez qui aucune pathologie ne se manifeste par des symptômes connus du milieu médical. De préférence, le sujet sain ou le sujet en bonne santé ne présente pas d’intolérance au lactose, de diarrhée, d’ulcère gastro-duodénal, ni n’est atteint de la maladie de Crohn.
Cette utilisation non thérapeutique se distingue de l’utilisation des eaux de Vichy pour leurs vertus digestives, dont le mécanisme consiste à tamponner, grâce à la composition riche en bicarbonates de ces eaux, les acidités gastriques responsables des dyspepsies hyposthéniques (couramment désignées « digestions difficiles »). L’utilisation des eaux de Vichy pour faciliter la digestion s’apprécie rapidement après l’ingestion desdites eaux, car elle repose sur un mécanisme purement chimique. L’utilisation des eaux de Vichy pour maintenir ou entretenir la flore microbienne procède probablement d’un autre mécanisme, bien que celui-ci ne soit pas connu, car elle tend à s’observer après plusieurs jours d’utilisation des eaux de Vichy. Ainsi, de préférence, l’utilisation des eaux de Vichy pour maintenir ou entretenir la flore microbienne est répétée dans le temps, de manière particulièrement préférée est répétée pendant au moins 48 heures consécutives. Ladite utilisation peut être réalisée par consommation de la composition selon l’invention à intervalles réguliers, cette prise étant espacée par exemple toute les 12 ou 24 heures. L’eau de Vichy ou la composition selon l’invention peut être administrée par toute voie d’intérêt, préférentiellement administrée par voie orale ou rectale, et plus préférentiellement orale. La composition peut être formulée de manière adaptée à l’administration envisagée, par exemple sous la forme d’un gel, d’une crème, d’une lotion, d’une émulsion (huile dans l’eau ou eau dans l’huile), d’un sérum, d’une dispersion de vésicules lipidiques, de comprimés, de gélules, de granules, d’un liquide, d’une pâte, de capsules, de suppositoires, de tampons ou d’ovules gynécologiques.
Avantageusement, la composition selon l’invention se présente sous une forme adaptée à la prise orale, sous la forme d’un produit ou d’un complément alimentaire liquide ou solide, ou encore sous la forme de comprimés, de gélules, de granules.
La composition peut en outre comprendre un ou plusieurs autre principes actifs tels que par exemple des micronutriments, des agents antibactériens, des agents antifongiques, des prébiotiques ou des probiotiques.
La composition selon l’invention peut contenir un ou plusieurs autres constituants choisis parmi les excipients usuels en pharmacie ou en cosmétique, tels que par exemple les agents humectants, agents gélifiants, les conservateurs, les filtres, les agents hydratants, les tensio-actifs, les agents émulsionnants, les agents complexants, les agents neutralisants et les parfums.
De plus, le Demandeur a démontré que, outre l’effet positif sur la croissance des bactéries lactiques déjà décrit, les eaux de Vichy ont aussi un effet sur le métabolisme de certaines bactéries, en particulier les cyanobactéries. Les cyanobactéries, autrefois appelées algues bleu-vert, sont connues pour synthétiser, dans leur milieu de culture, des composés possédant des propriétés antibactériennes vis-à-vis de bactéries impliquées dans l’acné (acné vulgaris), Propionibacterium acnés et Staphyloccocus epidermidis. Pour cette raison notamment, la demande FR 2 977 799 décrit l’utilisation de milieu de culture de ces cyanobactéries utilisé dans la préparation d’agents antibactériens utilisables pour la prévention et le traitement des infections cutanées.
Le Demandeur a démontré que l’ajout d’eau de Vichy au milieu de culture de ces cyanobactéries a pour effet d’augmenter les propriétés antibactériennes du milieu de culture résultant de ladite culture, aussi appelé milieu de culture enrichi. En effet, le Demandeur a observé un effet antibiotique de ce milieu de culture enrichi sur la croissance de la bactérie Staphyloccocus aureus, qui est aussi parfois impliquée dans l'acné vulgaris. L’utilisation d’eau de Vichy dans la culture de micro-organismes, en particulier les cyanobactéries, se révèle par conséquent particulièrement intéressant.
Parmi les cyanobactéries, la classe des cyanophycées est privilégiée. A l’intérieur de cette classe, une micro-algue de l’ordre des Nostocales, en particulier de la famille des
Nostocaceae, et encore plus avantageusement du genre Nostoc, est avantageusement choisie.
Ainsi, l’invention vise Γutilisation d’eau de Vichy pour stimuler le métabolisme de micro-organismes, préférentiellement de l’ordre des Nostocales, en particulier de la famille des Nostocaceae, et encore plus avantageusement du genre Nostoc. De préférence, l’invention vise l’utilisation d’eau de Vichy dans la culture de micro-organismes, préférentiellement de l’ordre des Nostocales, en particulier de la famille des Nostocaceae, et encore plus avantageusement du genre Nostoc. L’invention vise aussi les procédés de cultures de bactéries dans lesquels le milieu de culture comprend de l’eau de Vichy, ainsi que le produit susceptible d’être obtenu par ce procédé, dont notamment le milieu de culture obtenu par ce procédé et les extraits obtenus à partir de ce milieu de culture.
Selon un mode de réalisation, l’invention vise un procédé de culture d’un microorganisme dans lequel le milieu de culture comprend de l’eau de Vichy, de préférence comprend de 5% à 15%, plus préférentiellement 10% d’eau de Vichy dans le milieu de culture, en volume par rapport au volume du milieu de culture, où le micro-organisme est préférentiellement de l’ordre des Nostocales, en particulier de la famille des Nostocaceae, et encore plus avantageusement du genre Nostoc.
De préférence, l’eau de Vichy utilisée est de l’eau de Vichy provenant de la source Chomel ou une eau avantageusement ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, l’eau de Vichy provenant de la source Lys ou une eau avantageusement ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1.
De plus, l’invention vise le milieu de culture enrichi susceptible d’être obtenu par le procédé de l’invention. Par « milieu de culture enrichi » on entend au sens de la demande le milieu de culture obtenu à l’issue du procédé de culture. A la différence du milieu de culture préparé en vue de cultiver le micro-organisme, le milieu de culture enrichi comprend des molécules excrétées par les micro-organismes cultivés.
Ce milieu de culture enrichi peut être plus particulièrement obtenu par un procédé qui comporte avantageusement les étapes suivantes : a) culture de micro-organismes, préférentiellement de l’ordre des Nostocales, en particulier de la famille des Nostocaceae, et encore plus avantageusement du genre N os toc, dans un milieu de culture comprenant de l’eau de Vichy; b) séparation des micro-organismes et du milieu de culture enrichi ; c) récupération du milieu de culture enrichi pour l’obtention de l’extrait.
De préférence, le milieu de culture est un milieu de culture adapté au micro-organisme. Un milieu adapté pour la culture d’une cyanobactérie est avantageusement un milieu BG11, également référencé ATCC Medium 616. Conviennent également les milieux suivants : - ATCC Medium 617 ou BG-11 for Marine Blue-Green Algae : correspond à un milieu ATCC Medium 616 modifié ; ATCC Medium 819 ou Blue-green Nitrogen-fixing Medium: correspond à un milieu ATCC Medium 616 sans N03.
Le milieu BG11 est bien connu et a notamment été décrit dans la demande FR 2 977 799. Sa préparation et, le cas échéant, sa stérilisation préalable à l’utilisation dans le cadre du procédé de l’invention sont bien connues de l’homme du métier.
La culture est réalisée selon les conditions habituelles propices à la croissance des cyanobactéries, et bien décrites dans la demande FR 2 977 799. La durée de la culture du micro-organisme peut varier de plusieurs jours à plusieurs semaines, voire plusieurs mois. Elle est avantageusement menée de 21 jours (3 semaines) à 55 jours (8 semaines). A l’issue du procédé de culture, le micro-organisme peut être séparé du milieu de culture enrichi par toute méthode connue permettant d’assurer la décantation des cyanobactéries, sans toutefois affecter leur structure, de préférence par centrifugation. Le milieu de culture enrichi selon l’invention est ensuite récupéré, par exemple par transvasement ou aspiration. Il peut avantageusement être filtré, concentré, purifié ou lyophilisé.
Le milieu de culture enrichi selon l’invention peut être utilisé dans la prévention et le traitement des infections induites par Staphylococcus aureiis, Propionibacterium acnés et
Staphyloccocus epidermidis, telle que par exemple des infections cutanées ou des dermatoses ayant une composante bactérienne, en particulier l’acné. Pour ces applications thérapeutiques, le milieu de culture enrichi est avantageusement administré par voie topique. Il peut par conséquent être formulé de manière adapté à cette administration, par exemple être intégré à des compositions dont la formulation est de préférence adaptée à cette administration, avantageusement à hauteur de 0,1 à 10% en poids de la composition, encore plus avantageusement de 0,5 à 10%. Il peut alors être mélangé à des excipients classiques acceptables en cosmétique ou en pharmacie. Les compositions comprenant le milieu de culture enrichi selon l’invention peuvent également contenir une ou plusieurs autres substances actives, en plus de l’extrait décrit ci-dessus. A titre d’exemple, on peut associer un agent anti-acnéique connu tel que l’adapalène. On peut également utiliser en association des agents antibactériens tels que le peroxyde de benzoyle, l’érythromycine, ou encore la clindamycine. L’invention et les avantages qui en découlent ressortiront bien des exemples qui suivent, à l’appui des figures annexées. Ceux-ci n’ont toutefois aucune portée limitative.
Exemples de réalisation
Les figures 1, 3 et 5 : cinétique de croissance de L. acidophilus comparativement en absence d’eau de Vichy (courbes représentées en pointillés) et en présence de 10 % d’eau de Vichy (courbes représentées en trait continu ; figure 1 : source Chomel, figure 3 : source du Dôme, figure 5 source du Lys). Les courbes illustrent l’évolution de la valeur de l’absorbance mesurée à 595 nm dans le temps, qui reflète directement la prolifération cellulaire.
Les figures 2, 4 et 6 sont des graphiques qui représentent le pourcentage de croissance de L. acidophilus en présence de 10 % d’eau de Vichy (courbes représentées en trait continu; figure 2 : source Chomel, figure 4 : source du Dôme, figure 6: source du Lys) par rapport au témoin ne contenant pas d’eau de Vichy (courbes représentées en pointillés). Les mesures sont exprimées en pourcentage de croissance par rapport au témoin (100%). Une valeur inférieure à 100 signifie que les bactéries sont moins nombreuses que dans le témoin. A l’inverse, une valeur supérieure à 100 signifie que les bactéries sont plus nombreuses que dans le témoin. 1/ Utilisation de l’eau de Vichy pour inhiber la croissance de bactéries et champignons pathogènes sans destruction de bactéries non pathogènes :
Les tests ont été réalisés avec de l’eau de Vichy provenant de trois sources thermales différentes du bassin de Vichy : la source Chomel, la source du Lys et la source du Dôme.
Plusieurs échantillons contenant ces eaux de Vichy sont préparés à différentes concentrations, par évaporation. Les eaux de Vichy sont réduites à l’état de sels puis reconstituées. On obtient par dilutions successives des échantillons d’eau de Vichy aux concentrations suivantes : 5X, 2,5X, f,25X, 0,625X.
Des milieux de culture TS sont préparés à partir de ces dilutions, puis ensemencés avec 100 000 bactéries par millilitre du genre Staphylococcus aureus, ou du genre Pseudomonas aeruginosa.
Des milieux de culture MRS sont aussi préparés à partir de ces dilutions, puis ensemencés avec 100 000 bactéries par millilitre du genre Latobacillus acidophilus.
Des milieux de culture Sabouraud sont aussi préparés à partir de ces dilutions, puis ensemencés avec 100 000 bactéries par millilitre du genre Sacharomyces cerevisiae, ou du genre Candida albicans.
Les cultures ainsi préparées sont incubées à 37°C pour les bactéries ou à 30°C pour les levures (Sacharomyces cerevisiae et Candida albicans). L’activité antibactérienne ou antifongique est estimée visuellement après soit 16 à 24 heures de culture (pour les bactéries) soit 48 heures de culture (pour les levures).
On considère que leur milieu de culture ne présente pas d’activité antibactérienne ou antifongique lorsque les cultures observées sont troubles.
Au contraire, lorsque les cultures sont claires (identiques au milieu de contrôle sans microorganisme), on considère que leur milieu de culture présente une activité antibactérienne ou antifongique.
On appelle concentration minimale inhibitrice CMI la concentration testée la plus faible permettant d’obtenir une activité antibactérienne ou antifongique, c’est-à-dire, la concentration testée la plus faible avec laquelle la culture obtenue est claire.
Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau suivant :
On constate que toutes les eaux de Vichy provenant des sources testées présentent une activité antibactérienne contre Staphylococcus aureus à partir d’une concentration correspondant à cinq fois celle de l’eau de Vichy naturelle (5X), et contre Pseudomonas aeruginosa à partir d’une concentration correspondant à 2,5 fois celle de l’eau de Vichy naturelle (2,5X).
Les eaux de Vichy testées présentent également une activité antifongique contre Saccharomyces cerevisiae et contre Candida albicans à partir de concentrations correspondant respectivement à 0,625 fois celle de l’eau de Vichy naturelle (0,625X) et à 1,25 fois celle de l’eau de Vichy naturelle (1,25X).
Par contre, ces eaux des sources thermales du Bassin de Vichy n’ont aucun effet antibactérien sur la bactérie non pathogène Lactobacillus acidophilus qui reste préservée et se développe avec toute les concentrations testées et donc jusqu’à une concentration correspondant à cinq fois celle de l’eau de Vichy naturelle. L’effet inhibiteur de croissance de bactéries et de champignons pathogènes de l’eau de Vichy, tout en préservant la survie de bactéries non pathogènes, a ainsi été démontré. 2/ Utilisation de l’eau de Vichy pour stimuler la croissance et/ou augmenter la survie de bactéries bénéfiques :
Des bactéries de l’espèce Lactobacillus acidophilus à une concentration de 105 cfu/mL (unités formant des colonies par millilitre) ont été placées en anaérobie dans un milieu MRS comprenant ou non 10% d’eau de Vichy. Trois sources d’eau de Vichy différentes ont été testées : la source Chomel, la source du Lys et la source du Dôme.
La croissance des bactéries est mesurée dans les différents milieux testés maintenus à 37°C. La croissance de ces bactéries a été mesurée par absorbance de la densité optique à 595 nm pendant 48 heures, à l’aide d’un automate de mesure Fluostar™ (BMG Labtech) qui effectue des mesures toutes les heures.
Les figures 1 à 6 illustrent les résultats obtenus.
On constate que quelle que soit la provenance de l’eau de Vichy (source Chomel, du Dôme ou du Lys) ajoutée à hauteur de 10% dans le milieu de culture de la bactérie modèle Lactobacillus acidophilus, l’ajout de cette eau a permis une survie prolongée des bactéries après une période de 15 à 26 heures, et a donc eu un effet protecteur de survie de ces bactéries non pathogènes, bénéfiques. 3/ Utilisation de l’eau de Vichy pour améliorer l’activité antibactérienne de bactéries non pathogènes L’activité antibactérienne du surnageant de culture de cyanobactéries de type Nostoc a été mise en évidence dans la demande de brevet FR 2 77 799. L’efficacité des substances antibactériennes libérées par ces bactéries dans leur milieu de culture avait été testée en suivant une procédure décrite dans ce brevet antérieur.
La même procédure a été suivie pour réaliser le présent test, afin de déterminer si l’ajout d’eau de Vichy dans le milieu de culture de cette cyanobactérie de type Nostoc a une influence sur l’activité antibactérienne du surnageant obtenu, en particulier sur
Staphylococcus aureus.
Une pré-culture de la souche de cyanobactéries décrite dans la demande de brevet FR 2 977 799 est réalisée en petit volume (10 mL) en milieu BG11. Comme déjà décrit dans la demande de brevet FR 2 977 799, la souche de cyanobactéries utilisée a été préalablement sélectionnée pour son activité antibactérienne contre Staphylococcus epidermidis et contre Staphylococcus aureus.
Le milieu BG11 peut être d’origine commerciale (Sigma) ou être reconstitué comme suit :
avec pour la solution de sels métalliques, la composition suivante :
Le pH a été ajusté à 7,1, puis on a placé en autoclave pendant 20 minutes à 121°C.
Les bactéries sont cultivées dans du milieu de culture comprenant 10% (volume/volume) d’eau de Vichy en complément de milieu BG11 frais. Trois sources différentes ont été testées: la source Chomel, la source du Lys ou la source du Dôme.
Après 5 à 7 semaines de culture, le milieu de culture enrichi a été prélevé et les tubes dans lesquels les cyanobactéries ont été cultivées sont centrifugés.
Les propriétés antibactériennes du milieu de culture enrichi prélevé sont évaluées sur Staphylococcus aureus.
Les milieux de culture enrichi sont ajoutés à du milieu liquide TS contenant 100 000 bactéries du genre Staphylococcus aureus par millilitre.
Les cultures sont incubées à 37°C en condition d’aérobie pendant 16 à 18 heures, puis observées visuellement. Les cultures troubles sont considérées comme contenant un milieu de culture enrichi qui ne présente pas d’activité antibactérienne contre Staphylococcus aureus. Les cultures claires (et ainsi identiques au milieu initial) ont été considérée comme contenant un milieu de culture enrichi qui présente une activité antibactérienne contre Staphylococcus aureus.
Les données de concentration minimale inhibitrice (CMI) des milieux de culture tels que décrits dans le brevet FR 2 997 799 B1 additionnés de 10% d’eau de Vichy provenant alternativement de la source Chomel, du Lys ou du Dôme, ont été regroupées dans le tableau ci-dessous.
On constate que le milieu enrichi obtenu à partir d’un milieu de culture dans lequel on a ajouté 10% d’eau de Vichy provenant de la source Dôme n’inhibe pas la croissance de Staphylococcus aureus.
Par contre, le milieu enrichi obtenu à partir d’un milieu de culture dans lequel on a ajouté 10% d’eau de Vichy provenant de la source Chomel inhibe la croissance de Staphylococcus aureus dès la concentration de 3,125% (volume/volume). On en déduit que la concentration minimale inhibitrice de ce milieu enrichi est de 3,125% (volume/volume), pour Staphylococcus aureus.
En outre, le milieu enrichi obtenu à partir d’un milieu de culture dans lequel on a ajouté 10% d’eau de Vichy provenant de la source Lys inhibe la croissance de Staphylococcus aureus dès la concentration de 12,5% (volume/volume). On en déduit que la concentration minimale inhibitrice de ce milieu enrichi est de 12,5% (volume/volume), pour Staphylococcus aureus.
On peut donc conclure que l’eau de Vichy, en particulier provenant de la source Chomel ou de la source Lys, augmente l’activité antimicrobienne dans les extraits produits selon la demande de brevet FR 2 997 799.
Claims (10)
- REVENDICATIONS1. Eau de Vichy pour son utilisation pour moduler la croissance microbienne, de préférence pour inhiber la croissance de micro-organismes pathogènes et/ou stimuler la croissance de micro-organismes non pathogènes, et/ou stimuler le métabolisme de micro-organismes, où l’eau de Vichy est choisie dans le groupe comprenant l’eau de Vichy provenant de la source Chomel ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, Peau de Vichy provenant de la source Lys ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, et l’eau de Vichy provenant de la source Dôme ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, ainsi que leurs mélanges.
- 2. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite eau de Vichy est utilisée sous une forme naturelle, diluée, concentrée ou reconstituée.
- 3. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l’utilisation est pour le traitement des infections bactériennes ou fongiques.
- 4. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l’infection bactérienne est une infection à staphylocoque, de préférence Staphylococcus aureus, plus préférentiellement choisie dans le groupe comprenant les furoncles, le panaris, la folliculite, le sycosis, l’impétigo, les mammites, les myosites aiguës, les ostéomyélites, les pneumonies.
- 5. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l’infection bactérienne est une infection à Pseudomonas, de préférence Pseudomonas aeruginosa, plus préférentiellement choisie dans le groupe comprenant les infections oculaires, les infections urinaires, les infections génitales, les infections gastro-intestinales, les infections pulmonaires.
- 6. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l’infection fongique est une infection à Candida, de préférence Ccmdida albicans, plus préférentiellement choisie dans le groupe comprenant les candidoses cutanéomuqueuses, en particulier buccales, oropharyngées ou œsophagiennes.
- 7. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l’infection fongique est unè infection à Saccharomyces, de préférence Saccharomyces cerevisiae, plus préférentiellement choisie dans le groupe comprenant les onyxis, les infections génitales, les infections pulmonaires.
- 8. Eau de Vichy pour son utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l’utilisation est pour stimuler la croissance ou augmenter la viabilité de bactéries bénéfiques, de préférence du genre Lactobacillus, plus préférentiellement Lactobacillus acidophilus.
- 9. Eau de Vichy pour son utilisation selon l’une des revendications 4 à 8, caractérisée en ce que ladite composition comprend au moins 10% en poids de ladite eau de Vichy.
- 10. Utilisation d’eau de Vichy dans la culture de micro-organismes, préférentiellement de l’ordre des Nostocales, en particulier de la famille des Nostocaceae, et encore plus avantageusement du genre Nostoc, où l’eau de Vichy est choisie dans le groupe comprenant l’eau de Vichy provenant de la source Chomel ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, l’eau de Vichy provenant de la source Lys ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, et l’eau de Vichy provenant de la source Dôme ayant la composition physico-chimique correspondante dans le tableau 1, ainsi que leurs mélanges.
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| HUGON P: "Action of Vichy water on intestinal bacterial imbalance", CONCOURS MEDICALE, XX, XX, vol. 77, no. 12, 19 March 1955 (1955-03-19), pages 1197 - 1199, XP009187939, ISSN: 0010-5309 * |
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