FR2501692A1 - Nouveau produit d'erythropoietine et procede pour sa preparation - Google Patents
Nouveau produit d'erythropoietine et procede pour sa preparation Download PDFInfo
- Publication number
- FR2501692A1 FR2501692A1 FR8204022A FR8204022A FR2501692A1 FR 2501692 A1 FR2501692 A1 FR 2501692A1 FR 8204022 A FR8204022 A FR 8204022A FR 8204022 A FR8204022 A FR 8204022A FR 2501692 A1 FR2501692 A1 FR 2501692A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- product
- erythropoietin
- concentration
- solution
- per liter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 title claims abstract description 70
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 title claims abstract description 70
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 title claims abstract description 70
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 70
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 58
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 27
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 5
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 claims description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002491 Diethylaminoethyl-dextran Polymers 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 2
- -1 diethylaminoethyl carbohydrate Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 33
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 abstract description 9
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 abstract description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 8
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 73
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 44
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 20
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 16
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 6
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 description 5
- 230000000581 polycythemic effect Effects 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- JDIIGWSSTNUWGK-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazol-3-ium;chloride Chemical compound [Cl-].[NH2+]1C=CN=C1 JDIIGWSSTNUWGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 241000269961 Xiphiidae Species 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 3
- AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=[NH+]C=C1 AOJFQRQNPXYVLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058116 Nephrogenic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910001508 alkali metal halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001615 alkaline earth metal halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000000913 erythropoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/834—Urine; urinary system
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
L'INVENTION CONCERNE UN PROCEDE DE PREPARATION D'UN PRODUIT D'ERYTHROPOIETINE N'AYANT PAS D'EFFET INHIBITOIRE CONTRE L'ERYTHROPOIESE. SELON L'INVENTION, ON ADSORBE UN PRODUIT D'ERYTHROPOIETINE BRUTE OBTENU DE L'URINE D'UN ETRE HUMAIN SAIN, SUR UN ECHANGEUR D'ANIONS FAIBLEMENT BASIQUE, D'UNE SOLUTION AQUEUSE NEUTRE OU FAIBLEMENT ACIDE EN PRESENCE D'UN SEL NEUTRE INORGANIQUE A UNE CONCENTRATION COMPRISE ENTRE 0,1 ET 0,2MOLE PAR LITRE; ET ON ELUE LE PRODUIT D'ERYTHROPOIETINE AINSI ADSORBE AVEC UNE SOLUTION AQUEUSE D'UN ELUANT CONTENANT UN SEL NEUTRE INORGANIQUE A UNE CONCENTRATION COMPRISE ENTRE 0,5 ET 0,7MOLE PAR LITRE; LE DESSIN JOINT MONTRE LA CONCENTRATION EN HEMOGLOBINE DANS LE SANG EN FONCTION DE LA DOSE D'ADMINISTRATION. L'INVENTION S'APPLIQUE NOTAMMENT AU TRAITEMENT DE L'ANEMIE.
Description
La présente invention se rapporte à un nouveau produit d'érythropolétine
provenant de l'urine d'un être
humain sain, ainsi qu'à un procédé pour sa préparation.
Plus particulièrement, la présente invention se rapporte à un nouveau procédé de purification de l'érythropolétine brute obtenue de l'urine d'un être humain sain, par un processus spécifique pour donner un nouveau produit d'érythropoiétine ne présentant pas d'activité inhibitoire
contre l'érythropolèse ainsi qu'au produit d'érythro-
polétine ainsi préparé.
L'érythropolétine est, comme on le sait bien, une hormone ayant une activité pour stimuler l'érythropolèse d'une façon spécifique et qui est un facteur indispensable pour la différenciation des cellules formant le sang en corpuscules rouges du sang et donc sa déficience ou une diminution de sa concentration, dans le sang, provoque l'anémie. Par conséquent, l'érythropolétine est un médicament thérapeutique prometteur dans le traitement clinique de
l'anémie ou, en particulier, de l'anémie rénale. Mal-
heureusement, l'utilisation d'érythropolétine n'est pas prédominante dans la thérapie pratique du fait de sa faible disponibilité. Le procédé entrepris jusqu'à maintenant pour la préparation de produits d'érythropolétine est presque exclusivement la concentration et la purification de l'urine de patients ayant une forte sécrétion en érythropolétine, et qui souffrent d'anémie aplastique et maladies analogues. Du fait de la source limitée de cette urine de patients qui est un obstacle à l'utilisation
pratique de I'érythropoiétine, il est tout-à-fait souhai-
table de préparer des produits d'érythropoiétine à partir de l'urine d'être humain sain, dont on dispose en volumes importants. L'utilisation de l'urine d'un être humain sain pose un problème qui est sa faible teneur en érythropolétine en comparaison à l'urine du patient. De plus, l'urine d'un être humain sain contient un certain facteur d'inhibition de l'érythropolèse à une concentration considérablement élevée, on ne peut donc obtenir d'effet thérapeutique satisfaisant même si le produit d'érythropoiétine préparé à partir de l'urine d'un être humain sain est administré à un patient souffrant d'anémie. Les présents inventeurs ont déjà proposé un procédé réussi de préparation d'un produit d'érythropolétine à partir de l'urine d'un être humain sain (voir brevet U.S. N 4 303 650), mais le produit d'érythropolétine préparé par le procédé proposé pose toujours le problème ci-dessus mentionné de l'inhibition de l'érythropolèse, et n'est pas suffisant pour répondre aux conditions thérapeutiques
de l'anémie.
La présente invention a par conséquent pour objet lmun nouveau produit d'érythropoiétine ayant une forte activité érythropolétique, mais ne présentant pas d'effet inhibitoire contre l'érythropoîèse, et qui provient de l'urine d'un être humain sain et est assez différent des produits conventionnels d'érythropolétine préparés à
partir de l'urine d'un patient.
La présente invention a pour autre objet un nouveau procédé de préparation du produit d'érythropoiétine ci-dessus mentionné utile comme médicament thérapeutique
pour l'anémie.
Le produit d'érythropolétine selon l'invention
peut définitivement être différencié de produits conven-
tionnels d'érythropoiétine par rapport à plusieurs proprié-
tés parmi lesquelles l'activité physiologique. Par exemple, le produit d'érythropolétine selon l'invention a un poids moléculaire de l'ordre de 4.000 à environ 13.000, déterminé par le procédé de filtration sur gel en utilisant un gel de dextrane (Sephadex) tandis que le poids moléculaire des produits conventionnels d'érythropolétïne est compris entre 20.000 et 40.000 et le point iso-électrique du produit d'érythropoiétine selon l'invention est compris entre environ 3,1 et environ 3,6, en déterminant par le procédé de la focalisation iso-électrique tandis que le point isoélectrique des érythropoIétines conventionnelles est
de 4 + 0,1.
Par ailleurs, l'activité du produit selon l'inven-
tion est au moins 20 fois plus forte que celle des produits conventionnels, non seulement par la détermination de l'activité de l'érythropoIétine par le procédé de la culture de la cellule de moelle osseuse mais également dans l'essai in vivo pour l'augmentation de l'hémoglobine corpusculaire rouge quand la base de la comparaison est l'activité de l'érythropolétine par le procédé de la
détermination sur la souris polycythémique.
Le nouveau produit d'érythropolétine ci-dessus défini peut être préparé à partir de l'érythropolétine brute obtenue de l'urine d'un être humain sain, que l'on adsorbe d'abord sur un échangeur d'anions faiblement basique en condition neutre ou faiblement acide en présence d'un sel neutre inorganique à une concentration de 0,1 à 0,2 mole par litre, avec ensuite élution de l'ingrédient effectif ainsi adsorbé avec une solution aqueuse d'un sel neutre inorganique à une concentration de 0,5 à 0,7 mole
par litre.
L'invention sera mieux comprise, et d'autres buts, caractéristiques, détails et avantages de celle-ci
apparaîtront plus clairement au cours de la description
explicative qui va suivre faite en référence au dessin schématique annexé donné uniquement à titre d'exemple illustrant un mode de réalisation de l'invention et dans lequel: - la figure unique est un graphique montrant les résultats d'essaissur des animaux pour l'efficacité du produit d'érythropoîétine selon l'invention, en prenant la dose totale de deux fois l'administration sur l'axe des abscisses et la concentration en hémoglobine dans le sang
sur l'axe des ordonnées.
La matière première utilisée dans le procédé selon l'invention est un produit d'érythropolétine brute que l'on obtient de l'urine d'un être humain sain. Le procédé de préparation d'un tel produit d'érythropolétine brute est décrit en détail dans le brevet U.S. ci-dessus indiqué. En effet, la valeur du pH de l'urine d'un être humain sain est d'abord ajustée à 6 à 8 en ajoutant un acide minéral ou organique ou un alcali tel que de l'ammoniaqueet l'ingrédient érythropolétiquement actif dans l'urine est alors adsorbé sur un adsorbant spécifique qui est une résine adsorbante poreuse à base de polystyrène, du chitosan ou de la diatomite avec ensuite élution avec un solvant organique comme un alcool ou une solution alcaline aqueuse dans le cas du polystyrène adsorbant ou avec une solution alcaline aqueuse dans le cas du chitosan
ou de la diatomite comme adsorbant.
L'érythropolétine ainsi préparée est un produit brut et, comme on l'a mentionné ci-dessus, présente encore une activité inhibitoire contre l'érythropolèse. Aucun effet de purification ne peut être obtenu si ce produit dérythropolétine brute est soumis au processus pour la purification dans la condition connue comme étant efficace pour la purification des produits d'érythropotétine brute que l'on obtient de l'urine d'un patient et l'activité
inhibitoire contre l'érythropolèse ne peut être réduite.
Il est essentiel, dans la mise en pratique du procédé selon l'invention, que l'adsorption de l'ingrédient efficace dans l'érythropoiétine-brute soit accomplie en présence d'un sel neutre inorganique dans la solution de l'adsorbat. Les sels neutres inorganiques appropriés sont représentés par des halogénures de métaux alcalins et alcalino-terreux comme le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, le chlorure de magnésium, le chlorure de calcium, le bromure de sodium et analogues. On préfère le chlorure de sodium pour sa sécurité physiologique. La concentration de ces sels dans la solution de l'adsorbat est de préférence comprise entre environ 0,1 et environ 0,2 mole par litre. Une concentration plus faible du sel n'est pas souhaitable du fait de l'adsorption insuffisante de l'adsorbat. L'effet de l'adsorption sur l'échangeur d'anions est peu affecté par la sorte des sels neutres inorganiques mais le paramètre d'influence et la résistance
ionique du sel dans la solution.
Le contrôle de la valeur du pH de la solution de l'adsorbat dans la gamme souhaitée peut être encore facilité en mélangeant un sel présentant une action de tampon comme le chlorhydrate de pyridine, le chlorhydrate d'imidazole et certains phosphates, afin d'améliorer l'adsorption. Le matériau adsorbant pour l'ingrédient efficace dans le produit d'érythropolétine brute est un échangeur d'anions faiblement basique représenté par des carbohydrates diéthylaminoéthylés comme la diéthylaminoéthylcellulose, le diéthylaminoéthyldextrane, le diéthylaminoéthylagarose et analogues. L'ingrédient effectif dans le produit d'érythropolétine brute est très efficacement adsorbé sur ces échangeurs d'anions en condition neutre à faiblement acide. La gamme appropriée de la valeur du pH de la solution de l'adsorbat est de préférence comprise entre
environ 6,0 et environ 7,5.
L'ingrédient effectif adsorbé à la façon ci-dessus décrite, de la solution aqueuse de l'érythropolétine brute
contenant le sel neutre inorganique spécifié sur l'échan-
geur d'anions faiblement basique est, à la suite d'un lavage avec une solution tampon, élué de l'échangeur d'anions en utilisant une solution d'éluant qui peut être une solution aqueuse d'un sel neutre inorganique à une concentration comprise entre environ 0,5 et environ 0,7 mole par litre. Une concentration supérieure du sel donne une élution des impuretés. Les conditions pour l'élution ou l'adsorption sont à peu près les mêmes que dans
l'adsorption à l'exception de la concentration du sel.
La solution de l'éluat que l'on obtient ainsi peut être utilisée telle quelle dans des buts thérapeutiqoes
mais, si on le souhaite, des produits purifiés d'érythro-
polétine peuvent être séparés et récupérés de cette solution, par un processus conventionnel comprenant une
250 1692
lyophilisation, une dialyse et analogues.
Selon le procédé de l'invention, un produit d'érythropoiétine ayant une forte activité érythropoiétique mais présentant peu d'activité inhibitoire contre l'érythropoièse peut être préparé,à un rendement élevé, de l'urine d'un être humain sain, cela ouvre donc une voie pleine d'espoir pour le traitement thérapeutique des
patients souffrant d'anémie.
On donnera ci-après des exemples illustrant le procédé selon l'invention pour la préparation du nouveau produit d'érythropoiétine ainsi que pour illustrer
l'efficacité du produit d'érythropoîétine selon l'invention.
Dans les exemples qui suivent, la détermination de l'érythropoîétine a été effectuée par le procédé de Goldwasser (voir E. Goldwasser et autres, Endocrinology, volume 97, 2, page 315, 1975), o l'échantillon examiné a été, après dialyse ou dilution appropriée, soumis à la détermination de l'érythropolétine par la quantité de l'isotope Fe59 absorbé dans les cellules mises en culture de moelle d'os du rat. L'unité (U) a été standardisée par la courbe de calibrage préparée en utilisant le standard de travail de l'érythropolétine EPWS 11, qui est un produit d'érythropotétine obtenu de l'urine de patientssouffrant d'anémie aplastique avec ensuite purification selon le procédé d'Espada (voir J. Espada, Biochem. Med., volume 3, page 465, 1970) et on a examiné l'activité par la méthode de Cotesde la détermination sur la souris polycythémique exhypoxique en se référant à la préparation de référence
internationale de l'érythropoiétine (WHO Second Interna-
tional Reference Preparation of Erythropoietin 67/343).
La détermination de la protéine dans le produit d'érythro-
poiétine a été entreprise par le procédé de Lowry (voir 0.B. Lowry et autres, J. Biol. Chem., volume 193, page 265, 1951), en se référant à l'albumine de sérum bovin comme
standard.
Exemple 1
La valeur du pH de 10 litres d'urine recueillie d'un être humain sain a été ajustée à 7,0 en ajoutant un petit volume d'acide chlorhydrique aqueux à 2N et 87 g de chitosan (FLONAC-N, produit de Kyowa Yushi Kogyo Co) ont été ajoutés dans l'urine ayantson pH ainsi ajusté, avec ensuite agitation à la température ambiante pendant une heure et demie. La portion du liquide surnageant a été
retirée par décantation et le chitosan a été recueilli.
Le chitosan ayant ainsi adsorbé l'érythropolétine dans l'urine a alors été dispersé dans 800 ml d'une solution tampon à 0,1M de carbonate de sodium à un pH de 11, contenant 0,5 mole par litre de chlorure de sodium et on a agité pendant 3 heures à 71C avec ensuite filtration pour donner une solution d'un éluat. Un dessalement de cette solution d'éluat avec du sulfate d'ammonium a donné des
précipités sous forme d'un produit d'érythropolétine brute.
Ce produit ayant une activité d'érythropolétine de 54 U/mg protéine est appelé ci-après produit A. Des souris femelles de 7 semaines ont reçu 5,3. yg du produit A ci-dessus obtenu, sur deux jours,à raison d'une fois par jour, avec une demi-dose de la quantité totale dissoute dans une solution saline, par exemple dans une solution de chlorure de sodium à 0,9 poids/volume, %, par injection intrapéritonéale. Les indices d'hématocrite des quatre souris ainsi traitées ainsi que de quatre autres souris ayant reçu le même volume de la solution saline comme groupe témoin, ont été déterminés au bout de 4 jours à partir de la première administration, pour obtenir les résultats indiqués au tableau 1 ci- dessous,
avec une analyse statistique.
Tableau 1 Groupe de souris Indices d'hématocrite Administration d'une solution saline 50,2 + 1,9% Administration du produit A 42,5 + 3,6%
(P < 0,05)
Les résultats ci-dessus indiquent que la diminu-
tion de l'indice d'hématocrite dans les souris appartenant aux groupes ayant reçu le produit A est importante en comparaison au groupe témoin ayant reçu une simple solution physiologique de chlorure de sodium. La dose de l'activité administrée dans ce cas était de 0,57 U par souris ou 27 U par kg de poids corporel, car l'activité spécifique du
produit A était de 54 U/mg de protéine.
Ensuite, on a adsorbé 48 U du produit A sur 2,0 ml de diéthylaminoéthylcellulose (DEAE-Sephacel, produit de Pharmacia Co.) dans une colonne, d'une solution tampon de pyridine-acide chlorhydrique à M/80, à un pH de 6,5 et contenant 0,15 mole par litre de chlorure de sodium, et, après lavage de l'adsorbant avec la même solution tampon, l'ingrédient adsorbé a été soumis à une élution en deux
étapes successives avec une solution tampon de pyridine-
acide chlorhydrique à M/80, à un pH de 6,5, contenant 0,3 mole par litre de chlorure de sodium et une solution tampon de pyridine-acide chlorhydrique à M/80 à un pH de 6,5 contenant 0,7 mole par litre de chlorure de sodium comme solutions d'éluant pour les première et seconde
étapes de l'élution respectivement.
Tandis que l'onn'a pu déterminer aucune activité de l'érythropolétine dans la solution de l'éluat obtenue à la première étape de l'élution, la solution de l'éluat de la seconde étape a présenté l'activité correspondant à 38 U d'érythropolétine. Ce produit, appelé ci-après produit B, a une activité spécifique de 372 U/mg de protéine, indiquant un enrichissement de 6,9 fois par rapport au produit A. Le produit B cidessus obtenu a été soumis au traitement de dialyse avec une solution de chlorure de sodium à 0,9 w/v %,tamponnée à un pH de 7,4, contenant 0,01 mole par litre de Na2HP04 et NaH2PO4. Le produit
d'érythropolétine ainsi dialysé, appelé produit B' ci-
après, a été administré à des souris femelles de 6 semaines, sur 2 jours, à raison d'une fois par jour avec la même dose par injection intrapéritonéale pour donner une dose totale de 1,4 à 47 U/kg de poids corporel. Les résultats de la détermination de la concentration en hémoglobine dans le sang de chacun des animaux d'essai sont indiqués sur la figure jointe par la courbe B'. La figure contient également les courbes P et Q indiquant les résultats obtenus dans les essais témoins entrepris en administrant, aux animaux, le produit d'érythropolétine préparé avec l'urine du patient
ou avec une simple solution saline, respectivement.
Le produit d'érythropolétine préparé à partir de l'urine du patient et utilisé dans l'essai témoin ci-dessus (appelé ci-après produit P) a été préparé par séparation de l'urine de patients souffrant d'anémie aplastique selon le procédé d'Espada, et avec une activité spécifique de 19,4 U/mg protéine. L'administration du produit B' était très efficace pour augmenter la concentration en hémoglobine
dans le sang des animaux sujets en comparaison aux résul-
tats de l'essai témoin avec administration d'une simple solution saline, suggérant que le produit B' avait une activité médicale avec une bonne dépendance de la dose sur l'augmentation de la concentration en hémoglobine ou
la dose de l'administration.
Par ailleurs, quatre souris ont reçu de la même façon que ci-dessus, chacune, 1 ml, correspondant à 200 ml de l'urine brute, de la solution à l'effluent de la colonne dans l'adsorption du produit d'érythropoiétine brute A sur la colonne DEAE-Sephacel, et contenant les ingrédients non
adsorbés et ayant été dialysés avec une solution physio-
logique de chlorure de sodium contenant une solution tampon de Na2HPONaH2PO4 à M/100, à un pH de 7,4, et on a examiné la concentration de l'hémoglobine dans le sang
des animaux. Les résultats sont indiqués au tableau 2 ci-
dessous en même temps que les résultats de l'essai témoin en administrant, à six souris, une solution saline, indiquant que la concentration en hémoglobine était considérablement diminuée par l'administration des
ingrédients non adsorbés en comparaison à la solution saline.
0 1 6 92
Tableau 2
Dans l'essai ci-dessus, la solution contenant les ingrédients non adsorbés n'avait pas d'activité érythropolétique. Exemple 2 L'adsorption de 97 U du produit d'érythropoiétine brute A a été effectuée sur 5 ml de DEAE-Sephacel dans une colonne à partir d'une solution tampon tris-acide chlorhydrique à M/100 à un pH de 6,5, contenant 0,15 mole par litre de chlorure de sodium avec ensuite lavage avec la même solution tampon et élution d'abord avec une solution tampon tris-acide chlorhydrique à M/100à un pH de 6,5 contenant 0,25 mole par litre de chlorure de sodium puis avec une solution tampon tris-acide chlorhydrique à M/100 à un pH de 6,5 contenant 0,55 mole par litre de
chlorure de sodium.
Par suite, l'activité d'érythropolétine a été récupérée uniquement dans la solution de l'éluat avec ce dernier éluant contenant 0,55 mole par litre de chlorure
de sodium. Ce produit d'érythropoiétine est appelé ci-
après le produit C. L'activité érythropolétique récupérée dans le produit C était de 278 U, correspondant à 278% de l'activité dans la matière première, et l'activité spécifique était de 2670 U/mg protéine, indiquant une augmentation de 40 fois par rapport au produit A.
Exemple.3
La purification du produit d'érythropoiétine brute
Groupe de souris Concentration en-
hémoglobine dans le sang, g/dl Administration d'une solution saline 13,8 + 1,0 Administration d'ingrédients non adsorbés 10,9 + 1,6
(P < 0,05)
préparé à partir de l'urine d'un être humain sain de la même façon qu'à l'exemple 1, a été entreprise avec 2310 U du produit brut. Ainsi, le produit brut a été adsorbé sur 94 ml de diéthylaminoéthylagarose (DEAESepharose CL-6B, produit de Pharmacia Co.) dans une colonne, d'une solution tampon d'imidazole-acide chlorhydrique à M/100, à un pH de 6,5, et contenant 0,15 mole par litre de chlorure de sodium avec ensuite élution d'abord avec une solution tampon imidazole-acide chlorhydrique à M/100 à un pH de 6,5 contenant 0,4 mole par litre de chlorure de sodium puis avec une solution tampon imidazole-acide chlorhydrique à M/100 à un pH de 6,5, contenant 0,6 mole par litre de chlorure de sodium. L'activité d'érythropolétine était récupérée dans la solution de l'éluat obtenue avec le dernier éluant contenant 0,6 mole par litre de chlorure de sodium. L'activité du produit d'érythropoiétine ainsi récupéré, appelé ci-après le produit D, était de 3030 U
etson activité spécifique était de 566 U/mg protéine.
L'activité de ce produit après dialyse avec une solution physiologique de chlorure de sodium à un pH de
7,4 contenant Na2HPO4-NaH2PO4 à M/100 était de 169 I.U.
(unité internationale), en déterminant selon la détermina-
tion de la souris polycythémique exhypoxique de Cotes, par rapport à la courbe de calibrage préparée avec le standard de travail sur l'érythropoiétine. Les résultats de comparaison de la détermination d'activité spécifique sont donnés au tableau 3 ci-dessous pour les produits D et P, en déterminant par les procédés de la culture des cellules de moelle osseuse et la détermination de la
souris exhypoxique et polycythémique.
Tableau 3
(U/mg protéine) ) Culture de cellules de moelle osseuse **) Détermination de la souris polycythémique exhypoxique.
Exemple 4
Quatre portions, chacune de 58,0 U du produit d'érythropoiétine brute A, ont été adsorbées sur 2,0 ml de DEAE-Sephacel dans une colonne dans les conditions respectives différentes indiquées au tableau 4 ci-dessous, avec ensuite lavage d'abord avec la solution tampon équilibrée respective puis avec une solution tampon tris-acide chlorhydrique à M/100 à un pH de 6,5, contenant 0,5 M de chlorure de sodium et élution avec la même solution tampon mais contenant 0,55 M de chlorure de sodium. L'activité et l'activité spécifique de chacun des produits d'érythropolétine ainsi obtenus sont indiquées
au tableau 4..
Détermination de l'activité.par la ' Erythropoiétine méthode (a)/(b) (a)) (b) **) Produit D 566 31,5 18,0 Produit P 19,4 11,3 1,7
Tableau 4
Comme cela est clair sur le tableau 4, l'activité spécifique des produits d'érythropolétine ainsi récupérés était remarquablement accrue de 9,3 à 23 fois par rapport à la valeur de 54 U/mg protéine du produit A, bien que la récupération de l'activité soit quelque peu diminuée selon
les conditions de l'adsorption.
Exemple de Comparaison N01 L'adsorption d'un produit d'érythropolétine brute ayant une activité de 113 U, obtenu de l'urine d'un être humain sain par le procédé d'Espada a été effectuée sur 14,3 ml de DEAE-Sephacel à partir d'une solution tampon tris-acide chlorhydrique à M/100, à un pH de 7,0, avec ensuite élution en succession avec des solutions aqueuses de chlorure de calcium à des concentrations de 5,30 et
100 m moles par litre.
La solution d'effluent obtenue à l'étape de l'adsorption contenant les ingrédients non adsorbés et la Activité
N Conditions d'adsorption Activité, spécifi-
U que u/mg protéine 1 M/100 Na2HP04-NaH2P04, 0,1 M NaCl, 47,7 832 pH 6,5 2 M/100 Na2HP04-NaH2P04, 0,15 M NaCl, 29,9 1263 pH 6,0 3 M/100 Na2HPO4NaH2P04, 0,15 M NaCl 62,6 501 pH 7,0 4 M/100 Na2HP04-NaH2P04, 0,15 M NaCl 20,9 759 pH 7,5 solution de l'éluat ayant l'éluant de chlorure de calcium de 100 m moles par litre de concentration présentaient toutes deux l'activité érythropolétique. Les activités des solutions étaient de 48 U dans le premier cas et 52 U dans le dernier, avec des activités spécifiques de 4,5 et
1,8 U/mg de protéine respectivement.
Exemple de Comparaison N 2 L'adsorption de 5,5 U du produit d'érythropolétine
brute A a été effectuée sur 1,5 ml de diéthylaminoéthyl-
dextrane (Diéthylaminoéthyl Sephadex A-50, produit de Pharmacia Co.) d'une solution tampon tris-acide chlorhydrique à M/100, à un pH de 7,0 avec ensuite élution d'abord avec une solution aqueuse de chlorure de calcium à une concentration de 15 m moles par litre puis avec de
l'eau ammoniaquée à 4%.
La solution d'effluent obtenue à l'étape de l'adsorption contenant les ingrédients non adsorbés et la solution d'éluat avec l'eau ammoniaquée à 4%, présentaient toutes deux l'activité érythropolétique. Les activités de ces solutions étaient de 3,3 U dans le premier cas et 3,0 U
dans le dernier, avec des activités spécifiques respective-
ment de 49,7 et 50,6 U/mg.
Exemple de Comparaison N 3 L'adsorption de 185 U du produit d'érythropolétine brute A a été effectuée sur 11 ml de DEAE-Sephacel d'une solution tampon Na2HP04-NaH2P04 à M/100, à un pH de 6,0 avec ensuite élution avec une solution aqueuse de chlorure
de sodium à une concentration de 0,25 mole par litre.
La solution de l'effluent obtenue à l'étape de l'adsorption contenant les ingrédients non adsorbés et la solution de l'éluat avec l'éluant de chlorure de sodium présentaient toutes deux l'activité érythropolétique. Les activités de ces solutions étaient respectivement de 30 U dans la première et de 69 U dans la dernière, tandis que l'activité spécifique dans la dernière solution était de 48,5 U/mg protéine, indiquant quelton n' avait obtenu
presqu'aucun effet de purification.
Claims (7)
1.- Procédé de préparation d'un produit d'érythropolétine n'ayant pas d'effet d'inhibition contre l'érythropolèse, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes de: (a) adsorber un produit d'érythropolétine brute obtenu de l'urine d'un être humain sain sur un échangeur d'anions faiblement basique à partir d'une solution aqueuse neutre ou faiblement acide en présence d'un sel neutre inorganique à une concentration comprise entre 0,1 et 0,2 mole par litre, et (b) éluer le produit d'érythropolétine ainsi adsorbé avec une solution aqueuse d'un éluant contenant un sel neutre inorganique à une concentration comprise
entre 0,5 et 0,7 mole par litre.
2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le sel neutre inorganique précité utilisé à l'étape (a) est choisi dans le groupe consistant en chlorure de sodium, chlorure de potassium, chlorure de
magnésium, chlorure de calcium et bromure de sodium.
3.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'échangeur d'anions faiblement basique précité
est un carbohydrate diéthylaminoéthylé.
4.- Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le carbohydrate diéthylaminoéthylé précité est
choisi dans le groupe consistant en diéthylaminoéthyl-
cellulose, diéthylaminoéthyldextrane et diéthylaminoéthyl-
agarose.
5.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la solution aqueuse neutre ou faiblement acide
précitée a un pH compris entre 6,0 et 7,5.
6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la solution aqueuse de l'éluant a un pH compris
entre 6,0 et 7,5.
7. Produit d'érythropolétine n'ayant pas d'effet inhibitoire vis-à-vis de l'érythropoîèse, caract6risé en ce qu'il a un poids moléculaire de l'ordre de 4000 à environ 13 000 et un point iso-électrique compris entre 3,1 et 3,6.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56034727A JPS57149228A (en) | 1981-03-11 | 1981-03-11 | Novel erythropoietin and its preparation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2501692A1 true FR2501692A1 (fr) | 1982-09-17 |
Family
ID=12422344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR8204022A Pending FR2501692A1 (fr) | 1981-03-11 | 1982-03-10 | Nouveau produit d'erythropoietine et procede pour sa preparation |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4397840A (fr) |
| JP (1) | JPS57149228A (fr) |
| FR (1) | FR2501692A1 (fr) |
| IT (1) | IT1150667B (fr) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2576792A1 (fr) * | 1985-02-06 | 1986-08-08 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition pharmaceutique a base d'erythropoietine humaine pour le traitement de l'anemie de l'arthrite rhumatoide |
| FR2576791A1 (fr) * | 1985-02-06 | 1986-08-08 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition pharmaceutique a base d'erythropoietine humaine pour le traitement de l'anemie de tumeurs malignes |
| FR2587216A1 (fr) * | 1985-06-04 | 1987-03-20 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition pharmaceutique a base d'erythropoietine humaine destinee a etre administree par voie nasale pour le traitement de l'anemie |
| EP0148605A3 (en) * | 1983-12-13 | 1987-06-03 | Kirin-Amgen, Inc. | Production of erythropoietin |
| EP0178665A3 (fr) * | 1984-10-18 | 1989-02-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Préparation stable d'érythropoiétine et procédé pour sa formulation |
| EP0228452A4 (fr) * | 1985-06-20 | 1989-05-16 | Kirin Amgen Inc | Purification de proteines. |
| US4921837A (en) * | 1985-11-27 | 1990-05-01 | Genetics Institute Inc. | Treatment of AIDS-type disease |
| US5198417A (en) * | 1985-11-27 | 1993-03-30 | Genetics Institute, Inc. | Methods of treating pancytopenia and AIDS by co-administering EPO and colony stimulating factors |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR850004274A (ko) * | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
| US4703008A (en) * | 1983-12-13 | 1987-10-27 | Kiren-Amgen, Inc. | DNA sequences encoding erythropoietin |
| US4568488A (en) * | 1984-01-11 | 1986-02-04 | Lee Huang Sylvia | Reverse immunoaffinity chromatography purification method |
| CN1063969C (zh) * | 1984-11-30 | 2001-04-04 | 柯瑞英-艾格公司 | 含多肽的药物组合物的制备方法 |
| JPS62501010A (ja) | 1984-12-04 | 1987-04-23 | ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド | エリトロポエチンの生産方法 |
| US4677195A (en) * | 1985-01-11 | 1987-06-30 | Genetics Institute, Inc. | Method for the purification of erythropoietin and erythropoietin compositions |
| US4965251A (en) * | 1987-04-03 | 1990-10-23 | The Board Of Regents Of The University Of Washington | Pulse treatment of hemoglobinopathies with erythropoietin |
| JP2858752B2 (ja) * | 1987-04-10 | 1999-02-17 | オーソ・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン | 正常な哺乳動物のヘマトクリツト値の増大方法 |
| US7217689B1 (en) | 1989-10-13 | 2007-05-15 | Amgen Inc. | Glycosylation analogs of erythropoietin |
| DE4014654A1 (de) * | 1990-05-08 | 1991-11-14 | Behringwerke Ag | Galenische waessrige formulierungen von erythropoietin und ihre verwendung |
| FR2686899B1 (fr) * | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
| IL116085A (en) * | 1994-12-16 | 1999-12-31 | Ortho Pharma Corp | Spray dried erythropoietin |
| US20020160970A1 (en) * | 1996-04-10 | 2002-10-31 | Gyula Hadlaczky | Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes |
| US7304150B1 (en) | 1998-10-23 | 2007-12-04 | Amgen Inc. | Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia |
| DE69942636D1 (de) | 1998-12-09 | 2010-09-09 | Phyton Holdings Llc | Verfahren zur herstellung von glycoprotein mit menschlichem glycosylierungsbild |
| CA2389217C (fr) | 1999-10-26 | 2016-12-06 | Plant Research International B.V. | Glycosylation du type mammifere sur des plantes |
| ES2529300T3 (es) | 2000-04-12 | 2015-02-18 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Proteínas de fusión de albúmina |
| WO2002057468A2 (fr) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | The Dow Chemical Company | Procede de production secretoire d'une glycoproteine possedant une chaine glucidique de type humain au moyen d'une cellule vegetale |
| EP1401477A4 (fr) * | 2001-05-25 | 2005-02-02 | Human Genome Sciences | Proteines hybrides beta-1 de chimiokine |
| ES2425738T3 (es) | 2001-12-21 | 2013-10-17 | Human Genome Sciences, Inc. | Proteínas de fusión de la albúmina |
| EP1485492B1 (fr) | 2002-03-19 | 2011-12-21 | Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek | Expression de gntiii (udp-n-acetylglucosamine: beta -d mannoside beta (1,4)-n-acetylglucosaminyltransferase iii) dans des plantes. |
| CA2478297C (fr) | 2002-03-19 | 2013-05-14 | Plant Research International B.V. | Optimisation du traitement du glycane chez les plantes |
| CA2513213C (fr) | 2003-01-22 | 2013-07-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Proteines hybrides d'albumine |
| US8615828B2 (en) * | 2003-02-10 | 2013-12-31 | Ferdinand Schermel | Multi-position reclining bed |
| JP2010510794A (ja) | 2006-11-28 | 2010-04-08 | ハナル ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 修飾型エリスロポエチンポリペプチド及びこの治療用用途 |
| KR101426576B1 (ko) | 2007-04-17 | 2014-08-07 | 스티칭 디엔스트 랜드보위쿤디그 온데조에크 | 비-포유동물 글리코실트랜스퍼라제의 발현에 의한 식물에서의 포유동물형 글리코실화 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5653696A (en) * | 1979-10-09 | 1981-05-13 | Ajinomoto Co Inc | Isolation of erythropoietin by adsorption |
-
1981
- 1981-03-11 JP JP56034727A patent/JPS57149228A/ja active Pending
-
1982
- 1982-03-03 US US06/354,302 patent/US4397840A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-03-10 IT IT20087/82A patent/IT1150667B/it active
- 1982-03-10 FR FR8204022A patent/FR2501692A1/fr active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BIOLOGICAL ABSTRACTS, vol. 61, 1976, résumé 59917, J.A.F. NAPIER: "A comparison of methods for the initial concentration of erythropoietin from human urine", & Bio-Chem. Med. 13(4), 312-318, 1975. * |
| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 69, no. 1, 1er juillet 1968, page 35, résumé 377c, COLUMBUS, OHIO (US), P.H. LOWY et al.: "The fractionation of erythropoietin from anemic and normal human urine", & Ann. N.Y. Acad. Sci. 1968, 149(1), 54-62. * |
| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 73, no. 19, 9 novembre 1970, page 44, résumé 94956y, COLUMBUS, OHIO (US), J. ESPADA et al.: "Purification of human urinary erythropoietin", & Acta Physiol. Lat. Amer. 1970, 20(2), 122-9. * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0148605A3 (en) * | 1983-12-13 | 1987-06-03 | Kirin-Amgen, Inc. | Production of erythropoietin |
| EP0178665A3 (fr) * | 1984-10-18 | 1989-02-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Préparation stable d'érythropoiétine et procédé pour sa formulation |
| FR2576792A1 (fr) * | 1985-02-06 | 1986-08-08 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition pharmaceutique a base d'erythropoietine humaine pour le traitement de l'anemie de l'arthrite rhumatoide |
| FR2576791A1 (fr) * | 1985-02-06 | 1986-08-08 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition pharmaceutique a base d'erythropoietine humaine pour le traitement de l'anemie de tumeurs malignes |
| US4732889A (en) * | 1985-02-06 | 1988-03-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical composition for the treatment of the anemia of rheumatoid arthritis |
| US4745099A (en) * | 1985-02-06 | 1988-05-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical composition for the treatment of the anemia of malignant tumors |
| FR2587216A1 (fr) * | 1985-06-04 | 1987-03-20 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composition pharmaceutique a base d'erythropoietine humaine destinee a etre administree par voie nasale pour le traitement de l'anemie |
| EP0228452A4 (fr) * | 1985-06-20 | 1989-05-16 | Kirin Amgen Inc | Purification de proteines. |
| US4921837A (en) * | 1985-11-27 | 1990-05-01 | Genetics Institute Inc. | Treatment of AIDS-type disease |
| US5198417A (en) * | 1985-11-27 | 1993-03-30 | Genetics Institute, Inc. | Methods of treating pancytopenia and AIDS by co-administering EPO and colony stimulating factors |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1150667B (it) | 1986-12-17 |
| IT8220087A0 (it) | 1982-03-10 |
| JPS57149228A (en) | 1982-09-14 |
| US4397840A (en) | 1983-08-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FR2501692A1 (fr) | Nouveau produit d'erythropoietine et procede pour sa preparation | |
| US20180057820A1 (en) | Compositions for Treating Pathological Calcification Conditions, and Methods Using Same | |
| JPH08169899A (ja) | 安定な亜鉛インスリン類似化合物結晶の製造 | |
| JPH0720992B2 (ja) | ヒルディン−ｐａとその誘導体、それらの製造法と応用 | |
| JPS6222799A (ja) | 血液凝固阻害作用を有する新規ポリペプチド | |
| JPWO2000010606A1 (ja) | カルボニルストレス状態改善剤、および腹膜透析液 | |
| US4370317A (en) | Pancreatic spasmolytic polypeptide | |
| US4137307A (en) | Process for preparing haptoglobin aqueous solution using strong anion exchanger | |
| JPS59137417A (ja) | 人尿由来コロニ−形成刺激因子及びカリクレインの製造法 | |
| FR2467214A1 (fr) | Procede de production d'erythropoietine | |
| CN1946290A (zh) | 对镍和铜的亲和力下降了的改良血清白蛋白 | |
| FR2583982A1 (fr) | Produit medicamenteux obtenu a partir du thymus et son procede d'obtention | |
| HU204282B (en) | Process for producing albumine-solutions purified with anionic detergent | |
| US7851441B2 (en) | Water-soluble elastin, process for producing same, and food and medicine containing same | |
| US4104125A (en) | Process for producing human lysozyme | |
| CN100413888C (zh) | 可溶性多肽 | |
| JPS6236040B2 (fr) | ||
| JP4470152B2 (ja) | 新規トリペプチドおよびその製造方法 | |
| DE69431454T2 (de) | Amylase Inhibitoren | |
| JPS5822445B2 (ja) | 安定な固体の人血漿コリンエステラ−ゼ製剤の製法 | |
| CZ289560B6 (cs) | Způsob výroby přípravku obsahujícího hyaluronidázu | |
| JPH0769879A (ja) | 抗糖尿病剤 | |
| JPS60123500A (ja) | 新規カルシトニン及びその採取法 | |
| JP2004059516A (ja) | Ａｇｅ生成阻害剤 | |
| JP4304267B2 (ja) | 機能性蛋白質及びその製造方法 |