FI95654C - Menetelmä veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand-tekijän kompleksin konsentraatin valmistamiseksi kokoplasmasta - Google Patents
Menetelmä veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand-tekijän kompleksin konsentraatin valmistamiseksi kokoplasmasta Download PDFInfo
- Publication number
- FI95654C FI95654C FI904381A FI904381A FI95654C FI 95654 C FI95654 C FI 95654C FI 904381 A FI904381 A FI 904381A FI 904381 A FI904381 A FI 904381A FI 95654 C FI95654 C FI 95654C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mol
- process according
- buffer
- sodium chloride
- chromatography
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 title claims description 16
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 title claims description 13
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 title claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 9
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 title description 27
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 title description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 14
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 11
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 42
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 21
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 13
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 8
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 7
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 6
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 claims description 5
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 5
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 5
- -1 sulfopropyl Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims 3
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims 2
- 229940003169 factor viii / von willebrand factor Drugs 0.000 claims 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000011276 addition treatment Methods 0.000 claims 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 claims 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 abstract description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 6
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 abstract description 5
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 abstract description 5
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 abstract description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108010033683 von Willebrand factor drug combination factor VIII Proteins 0.000 abstract description 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 abstract 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 25
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N N-dimethylaminoethanol Chemical compound CN(C)CCO UEEJHVSXFDXPFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108010012557 prothrombin complex concentrates Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000006076 specific stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
1 95654
Menetelmä veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin konsentraatin valmistamiseksi koko-plasmasta 5 Keksintö koskee menetelmää veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin ominaisaktiivi-suudeltaan korkean konsentraatin valmistamiseksi kokoveri-plasmasta.
Hemofilia A:n hoito injektoimalla tekijää VIII on 10 yleinen käytäntö ja vaatii hyvin puhtaiden valmisteiden käyttöä toisaalta viruskontaminaatioriskien vähentämiseksi ja toisaalta siitä syystä, että injektointeja täytyy toistaa usein ja mahdolliset jäännösepäpuhtaudet voisivat indusoida potilaalle vaarallisia immuunireaktioita.
15 Teollisuudessa on jo käytössä muutamia menetelmiä ihmisplasman käsittelemiseksi tekijä Villin puhditamisek-si. Tällaisiin menetelmiin kuuluvat proteiiniepäpuhtauk-sien seostaminen käyttämällä erilaisia kemiallisia aineita, geelipermeaatiokromatografia, immuuniaffiniteettikro-20 matografia, ioninvaihtokromatografia ja näiden eri menetelmien erilaiset yhdistelmät.
Koska plasmassa on läsnä vain pieni määrä tekijää VIII, on puhdistusprosessin saanto tärkein ratkaistava ongelma. Lisäksi tekijä VIII on epästabiili proteiini ja 25 proteiini, jonka veren muut tekijät voivat aktivoida; aktivoidussa tilassa se kuitenkin menettää terapeuttisen arvonsa, ja puhdistusmenetelmät ja lopullinen annostus tulee siten sopeuttaa tämän ongelman mukaan.
Tämän hakemuksen tekijä on jo kehittänyt puhdis-30 tusmenetelmän, jossa käytetään ioninvaihtokromatografiaa, jota kuvataan FR-patenttihakemuksessa 8 807 530 ja joka mahdollistaa tekijä Villin puhtausasteeltaan korkean konsentraatin valmistuksen.
Tässä menetelmässä, samoin kuin muidenkin valmista-35 jien käyttämissä menetelmissä, käytettävä lähtömateriaali • 2 95654 on plasman kylmäsaostettu fraktio. Tämä kylmäsaostusvaihe johtaa siihen, että tekijästä VIII häviää 30 - 40 %, joka osa jää supernatanttiin.
Siksi olisi edullista kehittää valmistusmenetelmä, 5 jossa lähdetään kokoplasmasta, jota ei ole kylmäsaostettu, jotta rajoitettaisiin tekijä VIII -häviöitä. Lisäksi tällainen menetelmä merkitsisi hyvin edullista yksinkertaistusta riittämättömästi varustetuille tuotantokeskuksille, joissa voi olla vaikea tehdä kylmäsaostusta.
10 Tästä syystä tämän hakemuksen tekijä on kehittänyt yksinkertaisen menetelmän puhtaan tekijä VIII:n erottamiseksi kokoplasmasta, joka antaa mahdollisuuden valmistaa hyvin puhdasta stabiilia konsentraattia ja joka antaa e-rittäin hyvän saannon.
15 Siten keksintö koskee menetelmää tekijän VIII kon sentraatin valmistamiseksi kokoplasmasta. Tämä menetelmä sisältää esipuhdistuksen protrombiinikompleksin rakenneosien (tekijät II, VII, IX ja X) poistamiseksi ja puhdistuksen anioninvaihtokromatografiällä, joka geelin ja elu-20 ointipuskurin valinnan kautta antaa mahdollisuuden valmistaa hyvin puhdasta tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksia.
Tätä menetelmää voidaan, lisäpuhdistusvaiheen jälkeen, käyttää myös muiden plasmaproteiinien, kuten fibri-25 nogeenin, fibronektiinin, albumiinin, immunoglobuliinien ja antitrombiini III:n puhdistettujen liuosten valmistamiseen.
Menetelmä kehitettiin käyttämällä ihmisplasmaa, mutta se on yhtä hyvin sovellettavissa eläinperäiseen 30 plasmaan.
Tämän keksinnön mukainen menetelmä antaa siten mahdollisuuden käyttää lähtöaineena kokoplasmaa, ts. plasmaa, joka on joko tuoretta tai pakastettua sen säilyttämiseksi mutta kylmäsaostamatonta. Tämä plasma on edullisesti otet-35 tu talteen antikoagulantin tai stabilointiliuoksen läsnä 3 95654 ollessa. Tavallisesti käytetään sitraatti-dekstroosi-fos-faattiseosta; siihen voidaan lisätä tai se voidaan korvata millä tahansa tekijän VIII spesifisellä stabilointiaineella.
5 Seosta, joka sisältää 0,2-2 yksikköä/ml heparii- nia, 1-5 mmol/1 EDTAa ja 1 - 10 mmol/1 CaCl2:a, ja johon lisätään mahdollisesti glukoosia pitoisuudeksi 5-60 g/1, voidaan edullisesti käyttää plasmalähtöaineen stabilointi-liuoksena.
10 Tämän keksinnön mukainen menetelmä käsittää ensim mäisen esipuhdistusvaiheen, jossa yhdistetään saostus ba-riumkloridilla ja adsorbointi alumiinihydroksidigeelille.
Bariumkloridikäsittely tehdään edullisesti plasmalle, jonka pH säädetään arvoon 6,5, lisäämällä sekoittaen 15 IM bariumkloridiliuosta, kunnes saavutetaan loppupitoi-suus 0,08 mol/1, jota käsittelyä seuraa sentrifugointi lämpötilassa 5 - 10 eC saostuneiden proteiinien poistamiseksi, ja ottamalla sitten talteen supernatantti. Saostuneet proteiinit voidaan edullisesti ottaa talteen protrom-20 biinikompleksin tai sen rakenneosien valmistamiseksi.
Sitten supernatantti saatetaan kosketukseen 3-%risen alumiinihydroksidigeelin kanssa pH:n ollessa 6,5, joka geeli adsorboi proteiiniepäpuhtausjäännökset; tätä käsittelyä seuraa jäähdytys lämpötilaan 5 - 8 °C kryos-25 taatissa, sentrifugointi lämpötilassa 5 °C ja supernatan-tin talteenotto, joka pidetään lämpötilassa 5 - 8 °C.
Tästä supernatantista täytyy poistaa suolat, mikä voidaan tehdä joko ultrasuodatuksella seuraavaan kromato-grafiavaiheeseen käytettävän täyttöpuskurin läsnä ollessa, 30 johon on lisätty 0,5-2 yksikköä/ml hepariinia, tai kro-matografisesti Sephadex G25:llä samassa puskurissa.
Sitten tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä tehdään erotus anioninvaihtokromatografisesti. Tämän hakemuksen tekijä on jo FR-patenttihakemuksessa 8 807 530 kuvan-35 nut etuja, jotka hän on havainnut olevan hartsityypillä, • 4 95654 jonka ioninvaihtokyky on alhainen ja huokoset kooltaan suuria, joka viimeinen ominaisuus mahdollistaa hyvin suurikokoisten molekyylien pidätyksen. Tämä pitkittynyt pidätys mahdollistaa lievästi hydrofobisten sidosten muodos-5 tumisen hartsin kanssa, ja puskurin ionivahvuuden valinta mahdollistaa kiinnittyneiden molekyylien selektiivisen desorption.
Tämän tyyppisiä hartseja on kaupallisesti saatavana yleisnimellä Fractogel. Siten voidaan käyttää DEAE-Fracto-10 gel 650:ä® ja T- tai D-MAE-Fractogeliä (Merck). Näitä samoja hartseja on nykyisin saatavana muodossa, jota toimittaja kuvaa ilmauksella "lonkeroimaista tyyppiä olevat hartsit". Niiden matriisin rakenne on muunnettu positiivisten varausten kiinnittymispinnan suurentamiseksi, mikä 15 voi suosia geelin kapasiteetin kasvua.
Kromatografiapylvään täyttöpuskuri on natriumsit-raatti- ja natriumkloridipohjäinen puskuri, jonka pH on säädetty arvoon 7 ja sisältää edullisesti kalsiumkloridia pitoisuutena 0,5-6 mmol/1, lysiiniä suunnilleen pitoi-20 suutena 2-4 g/1 ja glysiiniä pitoisuutena 8-11 g/1. Toteutettaessa menetelmää tämän puskurin natriumkloridipi-toisuutta suurennetaan ennalta määrätyllä tavalla.
Keksinnön mukaista puhdistusmenetelmää toteutettaessa injektoidaan edellä kuvattu esipuhdistettu valmiste 25 kromatografiakolonnille. Määrätyissä olosuhteissa (0,11 mol/1 NaCl) kolonni pystyy sitomaan hyvin suurikokoisia molekyylejä, kuten von Willebrand -tekijän ja tekijän VIII kompleksin, ja päästää fibrinogeenin, albumiinin, immuno-globuliinit, antitrombiini III:n ja fibronektiinin virtaa-30 maan ulos suodokseen.
Tämän keksinnön erään edullisen suoritusmuodon mukaisesti, jonka päämääränä on saavuttaa tekijä VIII:n optimaalinen talteenottoteho, kromatografiakolonnin eluoin-tiin käytettävän puskurin ionivahvuutta nostetaan vain 35 kerran, vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,27 mol/1.
• 11 5 95654
Keksinnön erään toisen suoritusmuodon mukaisesti tätä elu-ointivaihetta edeltää esipesu, joka tehdään nostamalla ionivahvuus vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,13 mol/1, jolloin fibronektiini poistuu.
5 Näissä olosuhteissa desorboidun ja eluoidun tekijän VIII ja von Willebrand - tekijän kompleksin ominaisaktii-visuus on vähintään 5-10 yksikköä/mg. Menetelmän kokonaissaanto on vähintään 350 yksikköä/litra kokonaisplasmaa ja voi olla vähintään 500 yksikköä/1, kun alkuperäiseen 10 plasmaan lisätään edellä kuvattua stabilointiseosta.
Myöhemmän käyttötarkoituksena mukaan tälle tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin liuokselle voidaan tehdä lisäpuhdistus ja erityisesti väkevöinti toisella kromatografisella käsittelyllä. Kuten edellinenkin tämä 15 voidaan tehdä DEAE- tai T/D-MAE-Fractogelillä tai muilla hartseilla; muita kantajia, kuten dekstraanisulfaattia, immobilisoitua amino-heksyylikantajaa, immobilisoitua he-pariinia, sulfopropyylihartseja ja affiniteetti- tai im-muunihartseja voidaan myös käyttää.
20 Tämä lisäkromatografiavaihe toteutetaan samassa peruspuskurissa kuin edellinen kromatografiavaihe. Keksinnön erään edullisen suoritusmuodon mukaisesti, jonka päämääränä on mahdollisimman pitkälle konsentroidun tekijän VIII valmistaminen, tämä lisäkromatografiakäsittely toteu-25 tetaan samanlaisissa olosuhteissa kuin ensimmäinen, ts. yhdellä desorptiovaiheella nostamalla puskurin ionivahvuus vastaamaan NaCl-pitoisuutta 0,27 mol/1. Keksinnön erään toisen suoritusmuodon mukaisesti tehdään puskurin ionivah-vuuden ensimmäinen nosto arvoon 0,13 mol/1 proteiiniepä-30 puhtausjäännösten poistamiseksi ja toinen nosto, arvoon 0,27 mol/, jotta saadaan talteen tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin hyvin puhdas konsentraatti, jonka ominaisaktiivisuus on tällöin vähintään 10 - 20 yksikköä/mg.
« 6 95654
Kolonnin ensimmäisen suodoksen muut proteiinit, kuten immunoglobuliinit, albumiini, antitrombiini III, fibrinogeeni ja fibronektiini, voidaan myös puhdistaa ja konsentroida tavanomaisin kromatografisin menetelmin.
5 Tämän keksinnön mukainen menetelmä sisältää myös tavanomaisella menetelmällä tehtävän virusten inaktivoin-nin. Kun käytetään kemiallista ainetta, esimerkiksi tehdään käsittely liuottimella/pinta-aktiivisella aineella, on viisasta tehdä tällainen käsittely ennen yhtäkään kro-10 matografiavaihetta, niin että viimeksi mainittu takaa in- aktivointiaineiden poiston.
Tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin konsentraatit ja muiden plasmaproteiinien konsentraatit, jotka on valmistettu käyttämällä edellä kuvattua menetel-15 mää, ovat myös tämän keksinnön kohteena.
Mainitut konsentraatit formuloidaan farmaseuttisten standardien mukaisesti ja niitä voidaan käyttää terapia-tarkoituksiin .
Seuraavat esimerkit valaisevat keksinnön kahta suo-20 ritusmuotoa sen suojapiiriä kuitenkaan rajoittamatta.
Esimerkki 1 Käytetään tuoretta plasmaa (250 ml) tai pakastettua plasmaa, joka on sulatettu ja saatettu lämpötilaan 22 -25 eC; plasma on kerätty antikoagulantin/stabilointiaineen 25 (esimerkiksi sitraatti-dekstroosi-fosfaattiseoksen) läsnä ollessa ja sen pH on säädetty arvoon 6,5 etikkahapolla.
a) Esipuhdistus
Lisätään 20 ml 1 M bariumkloridiliuosta peristalt-tisella pumpulla pH:n ollessa 6,5, kunnes saavutetaan lop-30 pupitoisuus 0,08 mol/1. Bariumkloridiliuosta lisätään no peudella 4-8 ml/min, ja seosta sekoitetaan sitten huoneenlämpötilassa 15 min.
Sitten seosta sentrifugoidaan 20 min pyörimisnopeudella 2700 min"1 lämpötilassa 8 °C ja otetaan talteen su-35 pernatantti.
< k li 7 95654
Supernatantti adsorboidaan sitten alumiinihydroksi-digeelille [Alhydrogel Eurobio, 3 % Al(OH)3:a], jota käytetään 2,3 g/1 plasmaa. pH säädetään arvoon 6,5 ja lämpötila lasketaan arvoon 5 eC kryostaatissa. Seosta sentrifugoi-5 daan lämpötilassa 5 °C 20 min pyörimisnopeudella 2700 min-1, otetaan talteen supernatantti ja säilytetään se lämpötilassa 5 °C.
Tämä käsittely antaa mahdollisuuden poistaa pro-trombiinikompleksin komponentit (tekijät II, VII, IX ja 10 X), jotka voidaan ottaa talteen ja puhdistaa tunnetuin menetelmin.
Erityisen tyydyttäviä tuloksia voidaan saada aikaan yhdistämällä nämä kaksi käsittelyä, koska pelkkä Alhydro-gel-käsittely ei mahdollista protrombiinin ja muiden 15 PPSB:n komponenttien täydellistä poistamista ja pelkässä bariumkloridikäsittelyssä jää jäljelle jonkin verran tekijää X, protrombiinia ja ennen kaikkea tekijää VII.
Siten talteen otetusta supernatantista poistetaan suolat joko ultrasuodatuksella seuraavan kromatografiavai-20 heen (katso jäljempänä) puskurin läsnä ollessa, johon on lisätty 1 yksikkö/ml hepariinia, tai käsittelemällä kromatografisesta Sephadex G25:llä samassa puskurissa.
Sitten tehdään tavanomainen virusten inaktivointi-käsittely liuottimella/pinta-aktiivisella aineella 6 tun-25 tia lämpötilassa 24 °C. (tätä käsittelymenetelmää kuvataan EP-hakemusjulkaisussa 0 131 740.) b) Kromatografinen puhdistus
Esipuhdistetulle dialysoidulle supernatantille tehdään kromatografiapuhdistusvaihe. Käytetään K26/30-kolon-30 nia (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi), jonka läpimitta on 2, cm ja tehollinen korkeus 30 cm, josta 10 cm täytetään DEAE-Fractogel-TSK 650f® -hartsilla (Merck).
Kolonnin täyttämiseen ja näytteen liuottamiseen käytettävän puskurin koostumus on seuraava: 10 mmol/1 nat-35 riumsitraattia; 1 mmol/1 kalsiumkloridia, 9 g/1 glysiiniä; e 95654 3 g/1 lysiiniä. Tähän puskuriin lisätään natriumkloridia siten, että loppupitoisuudeksi tulee 0,11 mol/1 ja pH-ar-voksi 7.
Näyte ruiskutetaan kolonnille nopeudella 100 ml/h.
5 Kolonni huuhdotaan täyttöpuskurilla adsorboitumat- tomien proteiinien, joita ovat fibrinogeeni, albumiini, immunoglobuliinit, antitrombiini III ja fibronektiini, samoin kuin virusten inaktivointiaineiden poistamiseksi.
Tekijän VIII ja von Willebrend -tekijän kompleksi 10 desorboidaan sitten nostamalla puskurin ionivahvuus vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,27 mol/1.
Tällä menetelmällä saadun tekijän VIII liuoksen ominaisaktiivisuus on 5 - 10 ky/mg ja puhdistushyötysuhde laskettuna kolonnille injektoidun plasman suhteen on 60 -15 80 %.
Kyseisten kahden tekijän, tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän suhteen havaitaan aina olevan lähellä arvoa 1 yksikkö/1 yksikkö, jolloin viimeksi mainitun tekijän määrä ilmoitetaan ristosetiinikofaktoriyksikköinä.
20 Tämän tekijää VIII sisältävän liuoksen puhtausas tetta voidaan parantaa vielä hieman kromatografisella li-säerotusvaiheella, joka mahdollistaa tuotteen väkevöinnin. Käytetään esimerkiksi toista DEAE-Fractogel-kolonnia samoissa täyttöolosuhteissa kuin edellä ja esihuuhtelu teh-25 dään NaCl-pitoisuudella 0,13 mol/1, jolloin proteiniepä- puhtausjäännökset poistuvat. Puskurin ionivahvuus noste taan sitten vastaamaan NaCl-pitoisuutta 0,27 mol/1 hyvin puhtaan ja väkevöidyn tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin desorboimiseksi ja eluoimiseksi.
30 Toinen kromatografinen väkevöintivaihe voidaan kor vata ultrasuodatuksella.
Tämän keksinnön tavanomaisen suoritusmuodon mukaisesti ensimmäinen kromatografinen puhdistusvaihe toteutetaan DEAE-Fractogel-hartsilla. Oikein hyviä tuloksia on 35 kuitenkin saavutettu myös uusilla Merckin markkinoimilla
II
9 95654 hartseilla, kuten TMAE-Fractogelillä (TMAE = trimetyyli-aminoetyyli) tai DMAE-Fractogelillä (DMAE = dimetyyliami-noetyyli), joilla on vastaavat ominaisuuet kuin DEAE-Frac-togelillä. Voidaan myös käyttää uusia "lonkeromaista" 5 tyyppiä olevia hartseja, joita on kehittänyt Merck ja jotka W. Muller esitteli Tukholmassa kesäkuussa 1989 kokouksessa Conference on Liquid Chromatography.
Esimerkki 2
Keksinnön eräs toinen suoritusmuoto mahdollistaa 10 myös fibrinogeenin ja fibronektiinin konsentraattien valmistuksen, samalla kun tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän konsentraattia saadaan heikommalla saannolla ja omi-naisaktiivisuudeltaan hieman parempana.
Menetelmä on samanlainen kuin esimerkin 1 mukainen 15 siihen vaiheeseen asti, jossa tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksi eluoidaan ensimmäisestä DEAE-Fractogel-kolonnista.
Pylväs ei pidätä fibrinogeenia, antitrombiini III:a, albumiinia eikä immunoglobuliineja ja ne voidaan 20 ottaa talteen suodoksen mukana.
Tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksi voidaan puhdistaa ja väkevöidä toisella kromatografisella erotusvaiheella, joka toteutetaan DEAE-Fractogel-kolonnil-la ja käyttämällä täyttöpuskuria, jonka ionivahvuus vastaa 25 natriumkloridipitoisuutta 0,17 mol/1, niin etteivät pro-teiiniepäpuhtausjäännökset jää kolonniin; ionivahvuuden nosto vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,27 mol/1 mahdollistaa tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin desorboinnin ja eluoinnin. Ominaisaktiivisuudeksi saa-30 daan täten 10 - 20 ky/mg.
Fibrinogeeni ja fibronektiini voidaan sitten puhdistaa ja konsentroida käyttämällä tunnettuja kromatogafi-sia menetelmiä, jolloin saadaan liuoksia, jotka ovat laadultaan terapeuttiseen käyttöön soveltuvia ja joita kuva-35 taan FR-patenttihakemuksessa 8 807 530.
ίο 95654
Plasman muut proteiinit voidaan puhdistaa ja väke-vöidä käyttämällä tavanomaisia fraktiointimenetelmiä.
Esimerkki 3
Puhdistustehoa voidaan vielä parantaa stabiloimalla 5 alkuperäinen plasma, kuten sulatettu ja lämpötilaan 25 °C saatettu plasma, lisäämällä seuraavaa seosta: 1 yksikkö/ml hepariinia, 2 mmol/1 eli 0,74 g/l EDTAa, 6 mmol/1 eli 0,67 g/l kalsiumkloridia. Tähän seokseen voidaan vielä lisätä glukoosia pitoisuudeksi 5-60 g/l.
10 pH alennetaan arvoon 6,5 lisäämällä etikkahappoa.
Sitten toteutetaan esimerkin 1 tai 2 mukaiset puh-distusvaiheet.
Näissä olosuhteissa puhdistusprosessin kokonaissaanto on 55 - 65 % tekijän VIII aktiivisuudesta ominais-15 aktiivisuuden ollessa 10 - 30 FVIII:C-yksikköä/mg proteiinia.
II
Claims (16)
1. Menetelmä tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin stabiilin, ominaisaktiivisuudeltaan korkean 5 konsentraatin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että kokoplasma esipuhdistetaan tekemällä kaksoiskäsittely säästämällä bariumkloridilla ja adsorboimalla alumiinihydroksidilla ja supernatantti puhdistetaan kromatografisesti anioninvaihtogeelillä, joka mahdollistaa hyvin suuriko-10 koisten molekyylien pidättymisen ja mahdollistaa fibrino- geenin, albumiinin, immunoglobuliinien, antitrombiini III:n ja fibronektiinin virtaamisen ulos suodokseen, ja mahdollisesti kromatografiasuodoksessa oleville proteiineille tehdään lisäpuhdistus ja konsentrointi, ja mahdol-15 lisesti tehdään tavanomainen virusten inaktivointikäsit- tely käyttämällä liuotinta/pinta-aktiivista ainetta ennen mitään kromatografiavaihetta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kokoplasma on tuore tai 20 pakastettu plasma.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että plasmaan lisätään stabiloin-tiseosta, joka sisältää 0,2 - 2 yksikköä/ml hepariinia, 1-5 mmol/1 EDTAa ja 1 - 10 mmol/1 CaCl2:a.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että stabilointiseos sisältää lisäksi 5-60 g/1 glukoosia.
5. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että esipuhdistus 30 käsittää seuraavat vaiheet: a) saostus bariumkloridilla, jota seuraa sentrifu-gointi ja supernatantin talteenotto, b) adsorbointi alumiinihydroksidigeelille, jota seuraa sentrifugointi kylmässä ja supernatantin talteenot- 35 to, • 12 95654 c) suolanpoistokäsittely.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että saostus bariumkloridilla tehdään lisäämällä sekoittaen liuosta, joka sisältää 1 mol/1 5 bariumkloridia, pH:n ollessa 6,5 ja sitä seuraa sentrifu-gointi lämpötilassa 5 - 10 °C ja supernatantin talteenotto.
7. Patenttivaatimuksen 5 tai 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että adsorbointi alumiinihydroksi- 10 digeelille tehdään käyttämällä 3-%:ista geeliä pH:n ollessa 6,5 ja sitä seuraa nopea jäähdytys lämpötilaan 5 °C, sentrifugointi lämpötilassa 5 °C ja supernatantin talteenotto.
8. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 5-7 mukai- 15 nen menetelmä, tunnettu siitä, että suolanpoisto käsittely tehdään ultrasuodattamalla seuraavassa kromato-grafiavaiheessa käytettävän kolonnintäyttöpuskurin läsnä ollessa, johon on lisätty hepariinia.
9. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 5-7 mukai- 20 nen menetelmä, tunnettu siitä, että suolanpoisto käsittely tehdään kromatografisesti Sephadex G25 -pylväällä seuraavassa kromatografiavaiheessa käytettävässä kolon-nintäyttöpuskurissa, johon on lisätty hepariinia.
10. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-9 mu-25 kainen menetelmä, tunnettu siitä, että kromatograf iageeli on vinyylipolymeerityyppinen geeli, johon on kiinnitetty DEAE- tai T- tai D-MAE-tyyppisiä ryhmiä, edullisesti Fractogel.
11. Patenttivaatimuksen 1 tai 10 mukainen menetel-30 mä, tunnettu siitä, että kromatografiakolonnin täyttöpuskuri on natriumsitraatti- ja kalsiumkloridipoh-jainen puskuri, joka sisältää glysiiniä ja lysiiniä, johon on lisätty natriumkloridia pitoisuudeksi 0,11 mol/1 ja jonka pH on säädetty arvoon 7, jolloin puskuri sisältää 35 edullisesti 8-11 g/1 glysiiniä ja 2 - 4 g/1 lysiiniä. » II 13 95654
12. Patenttivaatimuksen 1, 10 tai 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että puskurin ionivahvuus nostetaan vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,27 mol/1 tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin desor- 5 boimiseksi kromatografiakolonnista.
13. Patenttivaatimuksen 1, 10 tai 11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että puskurin ionivahvuus nostetaan vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,13 mol/1, jolloin fibronektiini poistuu, ja sitten vastaamaan nat- 10 riumkloridipitoisuutta 0,27 mol/1 tekijän VIII ja von Willebrand -tekijän kompleksin desorboimiseksi kromatografiakolonnista .
14. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kromato- 15 grafiakolonnista desorboidulle tekijän VIII ja von Wille brand -tekijän kompleksille tehdään lisäpuhdistus ja kon-sentrointi kromatografisesti, jolloin kromatografinen li-säkäsittely tehdään edullisesti ioninvaihtohartsilla, joka on DEAE- tai T/D-MAE-Fractogel, immobilisoitu amino-hek- 20 syyli-, immobilisoitu hepariini-, dekstraanisulfaatti- tai sulfopropyylihartsi, tai affiniteetti- tai immuuniaffini-teettihartsilla.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lisäkromatografia tehdään 25 puskurilla, jonka natriumkloridipitoisuus on säädetty arvoon 0,11 mol/1, ja ionivahvuutta nostetaan kaksi kertaa peräkkäin, vastaamaan ensin natriumkloridipitoisuutta 0,13 mol/1 ja sitten 0,27 mol/1.
16. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että lisäkromatografia tehdään puskurilla, jonka natriumkloridipitoisuus on säädetty arvoon 0,17 mol/1, ja ionivahvuutta nostetaan kerran vastaamaan natriumkloridipitoisuutta 0,27 mol/1. 14 95654
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8911567A FR2651437A1 (fr) | 1989-09-05 | 1989-09-05 | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
| FR8911567 | 1989-09-05 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI904381A0 FI904381A0 (fi) | 1990-09-05 |
| FI95654B FI95654B (fi) | 1995-11-30 |
| FI95654C true FI95654C (fi) | 1996-03-11 |
Family
ID=9385124
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI904381A FI95654C (fi) | 1989-09-05 | 1990-09-05 | Menetelmä veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand-tekijän kompleksin konsentraatin valmistamiseksi kokoplasmasta |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5679776A (fi) |
| EP (1) | EP0416983B1 (fi) |
| AT (1) | ATE91896T1 (fi) |
| AU (1) | AU627618B2 (fi) |
| BR (1) | BR9004626A (fi) |
| CA (1) | CA2024667C (fi) |
| CZ (1) | CZ277939B6 (fi) |
| DD (1) | DD298110A5 (fi) |
| DE (1) | DE69002427T2 (fi) |
| DK (1) | DK0416983T3 (fi) |
| ES (1) | ES2057475T3 (fi) |
| FI (1) | FI95654C (fi) |
| FR (1) | FR2651437A1 (fi) |
| HR (1) | HRP920768B1 (fi) |
| HU (1) | HU206378B (fi) |
| LT (1) | LT3418B (fi) |
| LV (1) | LV10053B (fi) |
| NO (1) | NO178716C (fi) |
| PL (1) | PL164754B1 (fi) |
| RU (1) | RU2025129C1 (fi) |
| SI (1) | SI9012034B (fi) |
| SK (1) | SK431290A3 (fi) |
| UA (1) | UA26847C2 (fi) |
| YU (1) | YU48356B (fi) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3904354A1 (de) * | 1989-02-14 | 1990-08-16 | Behringwerke Ag | Pasteurisiertes, gereinigtes von willebrand-faktor-konzentrat und verfahren zu seiner herstellung |
| ES2042138T3 (es) * | 1989-05-24 | 1993-12-01 | Miles Inc. | Filtracion en gel del factor viii tratado termicamente. |
| AT403991B (de) * | 1990-04-04 | 1998-07-27 | Atomic Austria Gmbh | Alpinschi |
| AT403992B (de) * | 1991-02-22 | 1998-07-27 | Head Sport Ag | Ski |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| IT1256622B (it) * | 1992-12-04 | 1995-12-12 | Sclavo Spa | Processo per l'estrazione del complesso fattore viii-fattore von willebrand (fviii:c-fvw) da plasma umano totale. |
| DE4430205A1 (de) * | 1994-08-26 | 1996-02-29 | Behringwerke Ag | Zusammensetzungen, die als Gegenmittel für Blut-Antikoagulanzien geeignet sind und deren Verwendung |
| DE4435485C1 (de) * | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| AT403765B (de) | 1996-04-12 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer präparation enthaltend einen hochgereinigten komplex |
| AT406373B (de) * | 1997-02-27 | 2000-04-25 | Immuno Ag | Verfahren zur reinigung von faktor viii/vwf-komplex mittels kationenaustauscherchromatographie |
| CA2308610A1 (en) * | 1997-11-05 | 1999-05-14 | Welfide Corporation | Heparin cofactor ii preparation and process therefor |
| DK0937735T3 (da) * | 1998-02-11 | 2003-06-02 | Zlb Bioplasma Ag | Fremgangsmåde til fjernelse af kausalt agens/kausale agentia for overførbare spongiforme encephalopatier fra proteinopløsninger |
| ES2541470T3 (es) * | 1999-02-22 | 2015-07-20 | University Of Connecticut | Formulaciones de factor VIII libres de albúmina |
| DE19937218A1 (de) * | 1999-08-06 | 2001-02-08 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Reindarstellung der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder eines Gemisches beider Proteine mittels Affinitätschromatographie |
| ES2229931B1 (es) * | 2003-10-03 | 2006-01-16 | Grifols, S.A. | Composicion liquida bilogicamente estable de fviii, de fvw o del complejo fviii/fvw humanos. |
| RU2253475C1 (ru) * | 2004-02-02 | 2005-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Гемоцентр" | Способ получения препарата фактора viii |
| FR2874216B1 (fr) * | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| EP2385825B1 (en) | 2008-11-07 | 2018-10-10 | University of Connecticut | Factor viii formulations |
| WO2013083858A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-06-13 | Novo Nordisk A/S | Compounds suitable for treatment of haemophilia |
| CN105705516B (zh) | 2013-11-08 | 2019-11-01 | 杰特有限公司 | 浓缩von Willebrand因子或其络合物的方法 |
| US9663553B2 (en) | 2014-01-29 | 2017-05-30 | Hemarus Therapeutics Limited | Integrated process for the production of therapeutics (human albumin, immunoglobulins, clotting factor VIII and clotting factor IX) from human plasma |
| CN104231073B (zh) * | 2014-09-25 | 2017-01-25 | 广东双林生物制药有限公司 | 一种人凝血因子viii的制备方法 |
| CN105315365A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-02-10 | 上海洲跃生物科技有限公司 | 一种人抗凝血酶iii的制备方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3803115A (en) * | 1972-05-17 | 1974-04-09 | Baxter Laboratories Inc | Stabilization of ahf using heparin |
| ES471858A1 (es) * | 1977-07-25 | 1979-02-01 | Monsanto Co | Un metodo para separar el factor especifico de coagulacion de la sangre de una mezcla con otras proteinas de la sangre en un medio fluido |
| US4386068A (en) * | 1980-02-26 | 1983-05-31 | Cutter Laboratories, Inc. | Antihemophilic factor concentrate and method for preparation |
| US4359463A (en) * | 1980-11-26 | 1982-11-16 | Rock Gail A | Stabilization of Factor VIII activity in whole blood or blood plasma |
| US4435318A (en) * | 1981-05-22 | 1984-03-06 | Ionics, Incorporated | Electrodialysis preparation of purified AHF concentrate |
| US4361509A (en) * | 1981-12-14 | 1982-11-30 | Scripps Clinic And Research Foundation | Ultrapurification of factor VIII using monoclonal antibodies |
| US4495175A (en) * | 1982-08-05 | 1985-01-22 | University Of Rochester | Preparation of highly purified human antihemophilic factor |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4952675A (en) * | 1985-02-01 | 1990-08-28 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
-
1989
- 1989-09-05 FR FR8911567A patent/FR2651437A1/fr active Granted
-
1990
- 1990-08-30 ES ES90402395T patent/ES2057475T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-30 EP EP90402395A patent/EP0416983B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1990-08-30 AT AT90402395T patent/ATE91896T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-08-30 DK DK90402395.9T patent/DK0416983T3/da active
- 1990-08-30 DE DE90402395T patent/DE69002427T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-04 RU SU904831275A patent/RU2025129C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1990-09-04 UA UA4831275A patent/UA26847C2/uk unknown
- 1990-09-05 DD DD90343869A patent/DD298110A5/de unknown
- 1990-09-05 HU HU905797A patent/HU206378B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 FI FI904381A patent/FI95654C/fi active IP Right Grant
- 1990-09-05 PL PL90286746A patent/PL164754B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 NO NO903865A patent/NO178716C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 CZ CS904312A patent/CZ277939B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 SK SK4312-90A patent/SK431290A3/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-09-05 SI SI9012034A patent/SI9012034B/sl unknown
- 1990-09-05 YU YU203490A patent/YU48356B/sh unknown
- 1990-09-05 US US07/577,368 patent/US5679776A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-05 CA CA002024667A patent/CA2024667C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-06 AU AU62218/90A patent/AU627618B2/en not_active Ceased
- 1990-09-17 BR BR909004626A patent/BR9004626A/pt not_active Application Discontinuation
-
1992
- 1992-10-01 HR HRP-2034/90A patent/HRP920768B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-12-24 LV LVP-92-496A patent/LV10053B/lv unknown
- 1992-12-29 LT LTIP263A patent/LT3418B/lt not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI95654C (fi) | Menetelmä veren hyytymistekijän VIII ja von Willebrand-tekijän kompleksin konsentraatin valmistamiseksi kokoplasmasta | |
| JP3094167B2 (ja) | 免疫血清グロブリンの精製方法 | |
| FI96210B (fi) | Plasmaproteiinien kromatograafinen erottaminen | |
| EP0144957B1 (en) | Process for purifying factor viii:c | |
| AU737986B2 (en) | Purification of von willebrand factor by cation exchange chromatography | |
| US20100305305A1 (en) | Method for purifying factor viii and von willebrand factor | |
| KR20130112031A (ko) | 피브리노겐의 생산 방법 | |
| JPH04234400A (ja) | 抗血友病因子（第ＶＩＩＩｃ因子）をほとんど含まない高純度のフォン・ヴィレブラント因子を生成する方法 | |
| JP4312381B2 (ja) | 濾過によるウイルス的に安全な因子ｖｉｉｉ溶液の調製方法 | |
| CA2017039C (en) | Gel filtration of heat treated factor viii | |
| CN106928344A (zh) | 用于从含有凝血因子的溶液中减少和/或除去FXI和FXIa的方法 | |
| US5356878A (en) | Gel filtration of factor VIII | |
| AU626275B2 (en) | Improvements in or relating to antihemophilic factor (AHF) | |
| HUP9903789A2 (hu) | von Willebrand-faktor származék, valamint eljárás proteinek izolálására | |
| KR0168415B1 (ko) | 전체혈장으로 혈액응고 viii 인자-반 빌레브란트 인자 복합 농축물을 제조하는 방법 | |
| JP2012112930A (ja) | 高分子量物質の精製方法 | |
| JP2931655B2 (ja) | 全血漿から血液疑固▲ｖｉｉｉ▼因子―フオン・ビルブラント因子複合体濃縮物の製造方法 | |
| DK176139B1 (da) | Fremgangsmåde til separation af plasmaproteiner og plasmaproteinkoncentrater opnået ved fremgangsmåden | |
| DK1037923T4 (en) | A process for the filtration to produce a solution with regard to virus-safe factor VIII | |
| de Lille | Burnouf-Radosevich et a |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: CENTRE REGIONAL DE TRANSFUSION SANGUINE DE LILLE |